FI91258B - Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten 2-(heterosyklyylitio)karbapeneemijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

91258

Menetelmä lääkeaineina käyttökelpoisten 2-(heterosyklyylitio)-karbapeneemijohdannaisten valmistamiseksi Förfarande för framställning av 2-(heterocyklyltio)karbapenem-5 derivat användbara som läkemedel

Keksinnön kohteena on menetelmä sellaisten lääkeaineina käyttökelpois-10 ten 2-(heterosyklyylitio)karbapeneemin johdannaisten, jotka voidaan esittää kaavalla (I): HO H R1

15 \ / I

C C-H

/ \ / \ H3C CH_CH C-S-(CH2)£-Ra I I II (I)

C_N_C

/ \ 2o 0 C00“ [missä

Ra tarkoittaa ryhmää, jolla on jokin seuraavista kaavoista I-la, I-25 2a. I-3a, I-4a, I-6a tai I-7a; 30 -Crt" \ ' -- 35 V* 2 - a Nait I I (I-2a)

Oiz /rj—^

V V

(CH2) / \ -CH N+-r3 \ / \ d-3a) CH2C) 24 z CU^— cu \vz L I ^ "c\ V/ + Nl: <«i 1 Cu 0 o -cu.7 ~ CV< Νς^? \ */ (I-6a)

Ολζ - W - RH

l (1.7,) V / tu^ u, 3 91258 ja missä: R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; 5 R2 on vetyatomi, metoksikarbonyyliryhmä, tai kaavan-CONReR7 mukainen ryhmä, jossa kaavassa R6 ja R7 ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi, 0Χ-10 C6-alkyyliryhmä, C3-C6-sykloalkyyliryhmä tai R6 ja R7 muodostavat yhdessä morfoliino- tai pyrrolidiinoryhmän, R3 ja R* ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on C1-C^-alkyyli-ryhmä tai substituoitu C^-C^-alkyyliryhmä, jossa on vähintään yksi 15 substituentti valittu joukosta, johon kuuluu fluoriatomit ja hydroksi-ryhmät; j a i on nolla tai kokonaisluku 1; 20 Z on vetyatomi tai C^C^-alkyyliryhmä sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden valmistamiseksi.

25 Penisilliinit muodostavat antibioottien hyvin tunnetun luokan, jonka jäseniä on käytetty laajasti jo useiden vuosien ajan ihmis- ja eläinlääketieteessä. Kemiallisesti tarkastellen penisilliineillä on yhteinen β-laktaamirakenne, jota nimitetään yleisesti "penaamiksi", ja joka voidaan esittää seuraavalla kaavalla: 30

S

/ \ M I (A) 35

O

4

Vaikka penisilliineillä on edelleenkin tärkeä asema farmaseutiikassa, niin kuitenkin uusien patogeenisten, penisilliinille usein vastustuskykyisten bakteerikantojen kehittyminen on tehnyt yhä suuremmassa määrin välttämättömäksi uusien antibioottityyppien etsimisen.

5

Viime vuosina huomattavasti mielenkiintoa on kohdistettu yhdisteisiin, joilla on karbapeneemirakenne, toisin sanoen sellaisiin yhdisteisiin, joiden 1-asemassa on hiiliatomi rikkiatomin paikalla, ja joissa on kaksoissidos alkuperäisessä penaamirakenteessa 2- ja 3-asemissa si-10 jaitsevien hiiliatomien välissä. Tämä karbapeneemirakenne voidaan esittää seuraavalla kaavalla: 15 1 • / \ 6·—·5 ·2

I I H

7·-Ν-·3.

// 4.

20 ° Nämä penaami- ja karbapeneemirakenteet muodostavat perustan puolisynteettisten penisilliinijohdannaisten nimityksille, jotka noudattavat IUPAC-järjestön (International Union of Pure and Applied 25 Chemistry) suosituksia. Alan asiantuntijat kautta maailman ovat yleisesti hyväksyneet nämä nimitykset, joita käytetään myös ohessa. Ohessa käytetty numerointijärjestelmä on edellä esitetyn kaavan (B) mukainen.

Tunnetuista karbapeneemijohdannaisista tunnetuin on "tienamysiiniksi" 30 nimitetty yhdiste, jonka puolisynteettinen nimi on 2-(2-aminoetyyli-tio)-6-(l-hydroksietyyli)karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo. Vaikka tienamysiinillä tiedetäänkin olevan huomattavan voimakasta ja laajaa bakteereja tappavaa aktiivisuutta, niin sen kemiallinen stabiilisuus ihmiselimistössä on kuitenkin huono, mikä rajoittaa sen käytännön 35 sovellutuksia. Näin ollen alalla ollaan tehty lukuisia yrityksiä tie-namysiinin kemiallisen rakenteen muokkaamiseksi, jotta sen stabiilisuus saataisiin paremmaksi sen erinomainen aktiivisuus kuitenkin 5 91258 säilyttäen tai sitä parantaen. Alalla vallitsee kuitenkin edelleen jatkuva tarve kehittää uusia, ominaisuuksiltaan parantuneita karbape-neemiantibioottej a.

5 Oheisessa keksinnössä saadaan aikaan uusi ryhmä karbapeneemijohdan-naisia, joiden imeytyminen ja aineenvaihdunnallinen stabiilisuus ovat erinomaiset (mikä todetaan suuremmista virtsasta talteensaaduista määristä), ja jotka ovat lisäksi laajaspektrisiä bakteerien tappamista ajatellen ja hyvin vähän myrkyllisiä. Keksinnön avulla voidaan myös 10 aikaansaada mainittuja johdannaisia sisältäviä farmaseuttisia valmisteita, joita voidaan antaa ihmisille ja eläimille.

Tekniikan nykytasoa kuvaavista, hakijoiden tiedossa olevista julkaisuista seuraavien uskotan olevan lähimpänä oheista keksintöä: 15 US-patenttijulkaisuissa 4 640 799 ja 4 665 170 kuvataan karbapeneemi-yhdisteet, joiden 2-asemassa on ryhmä -S-A-N+. "A" voi tarkoittaa erilaisia ryhmiä ja N+ tarkoittaa kvaternisoidun typen sisältävää heterosyklistä ryhmää, joka on kiinnittynyt ryhmään A kvaternäärisen 20 typpiatominsa välityksellä. Nämä yhdisteet eroavat oheisen keksinnön mukaisista yhdisteistä siinä suhteessa, että mikäli oheisen keksinnön mukaisissa yhdisteissä on kvaternisoidun typen käsittävä heterosyk-linen ryhmä, jossa on kvaternäärinen typpiatomi, niin tämä ryhmä ei ole kiinnittynyt molekyylin loppuosaan tämän kvaternäärisen typpiato-25 min välityksellä vaan se on kiinnittynyt molekyylin loppuosaan hetero-sykliseen ryhmään kuuluvan hiiliatomin välityksellä.

Eurooppalaisessa patenttijulkaisussa 126 587 kuvataan joukko karba-peneemiyhdisteitä, joiden 2-asemassa on pyrrolidinyylitioryhmä. Nämä 30 yhdisteet eroavat keksinnön mukaisista, kvaternäärisen typen käsittävistä yhdisteistä siinä suhteessa, että nämä alalla jo tunnetut yhdisteet eivät ole kvaternäärisen typen käsittäviä yhdisteitä, ja ne eroavat niistä oheisen keksinnön mukaisista yhdisteistä, joissa ei ole kvaternääristä typpeä, heterosyklisessä renkaassa olevien substituent-35 tien luonteen suhteen. Tiettyjen, näissä tekniikan nykytasoa kuvaavissa julkaisuissa kuvattujen yhdisteiden aktiivisuus voi olla hyvä, mutta niiden uskotaan imeytyvän huonommin in vivo oheisen keksinnön 6 mukaisiin yhdisteisiin verrattuna.

Tekniikan tasona käsitellään vielä seuraavia julkaisuja 5 EP-170073 esittää karbapeneemijohdannaisia, joilla on ulkoisesti alky- loitu mono- tai bisyklinen 2-kvaternäärinen heteroaryylialkyyli-tiosubstituentti. Yhdisteet eroavat tämän keksinnön mukaisista yhdisteistä siinä, että karbapeneemiytimen 2-asemassa oleva substituentti käsittää heteroaryyliryhmän, jossa on yksi kvaternäärinen typpiatomi, 10 kun taas esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet käsittävät hete-rosyklyylialkyyliryhmän, jossa on kvaternäärinen typpiatomi tässä asemassa.

EP-242134 esittää N-amino kvaternisoituja heteroaryylikarbapeneemijoh-15 dannaisia. Yhdisteillä on ryhmä 2-asemassa, joka käsittää heteroaryyliryhmän, jossa on kvaternisoitu typpi. Nämä eroavat esillä olevan keksinnön mukaisista yhdisteistä, koska viimeksi mainituilla on hete-rosyklyyliryhmä, jossa on kvaternisoitu typpiatomi tässä asemassa.

20 EF-184844 esittää karbapeneemijohdannaisia, joista jotkut käsittävät heteroaryyliryhmän 2-asemassa, jossa on kvaternisoitu typpiatomi. Erot näiden yhdisteiden ja esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden välillä on silloittavan ryhmän läsnäolo, R4, karbapeneemiytimen ja tioryhmän välillä ja myös heteroaryyliryhmän läsnäolo (esillä olevan 25 keksinnön mukaisilla yhdisteillä on heterosykliryhmä tässä asemassa).

EP-186057 esittää karbapaneemejä, joilla on substituentti 2-asemassa, johon sisältyy heteroaryyliryhmä, jossa on kvaternisoitu typpiatomi, joka on liitetty alkyleeniheteroatomisillan kautta. Tämä julkaisu 30 muistuttaa julkaisua EP-184844 ja eroaa esillä olevan mukaisista yhdisteistä samoista syistä.

EP-184843 esittää karbapeneemijohdannaisia, joilla on ulkoisesti alky-loitu mono- tai bisyklinen 2-kvarternäärinen heteroaryylialkyylisubs-35 tituentti. Tämä julkaisu muistuttaa julkaisua EP-170073 ja eroaa keksinnöstä samoista syistä.

7 91258 EP-126587 esittää karboksyylisiä tiopyrrolidinyyli-E-laktaamikarba-peneemijohdannaisia. Nämä yhdisteet eivät muistuta tämän keksinnön mukaisia, koska niistä puuttuu täysin kvaternisoitu typpiatomi, joka sisältää heterosyklyyliryhmän karbapeneemiytimen 2-asemassa.

5 EP-182213 esittää karbapeneemijohdannaisia, joilla on substituoitu 2-pyrrolidinyylitioryhmä. Tämä julkaisu muistuttaa julkaisua EP-126587 eikä muistuta tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä samoista syistä.

10 EP-160876 esittää karbapeneemijohdannaisia, joilla on erilaisia subs- tituentteja 1-asemassa. Tämä julkaisu ei mainitse heterosyklyyliryh-miä, joilla olisi kvaternisoitu typpiatomi tässä asemassa, vaikkakin esitetään heteroaryyliryhmiä, joissa on kvaternisoitu typpiatomi sekä 1- että 2-asemassa.

15 EP-167139 esittää karbapeneemejä, joilla on ulkoisesti alkyloity mono-tai bisyklinen 2-kvaternäärinen heteroaryylialkyylitiosubstituentti, Tämä julkaisu muistuttaa julkaisua EP-170073 ja tämän keksinnön yhdisteet eroavat näistä yhdisteistä samoista syistä.

20 GB-2128187 (FI-78094) esittää karbapeneemejä, joilla on seuraavan kaavan mukainen substituentti 2-asemassa 25 -S-A^V-R5 jossa ryhmä ^3* on typpi, joka sisältää aromaattisen heterosyklin.

Nämä yhdisteet eroavat esillä olevan keksinnön mukaisista siinä, että mainittu ryhmä on aromaattinen eikä alifaattinen heterosykli, kuten 30 esillä olevassa keksinnössä.

EP-72710 (FI-76339) esittää karbapeneemijohdannaisia, joilla on hete-rosyklyylitioryhmä 2-asemassa. Tämä ryhmä ei käsitä kvaternääristä typpiatomia eikä siten muistuta läheisesti esillä olevan keksinnön 35 mukaisia yhdisteitä.

EP-160391 (FI-83419) esittää karbapeneemijohdannaisia, joilla on va- 8 linnaisesti substituoitu heterisyklyylitioryhmä 2-asemassa. Tämä julkaisu muistuttaa julkaisua EP-72710 ja eroaa tästä keksinnöstä samoista syistä.

5 EP-102239 (FI-80887) esittää erilaisia atsetidinonijohdannaisia, jotka ovat välituotteita tiettyjen karbapeneemijohdannaisten valmistuksessa. 2-aseman ryhmä voi käsittää heterosyklyylitioryhmän, mutta se on ilman kvaternisoitua typpiatomia ja on myös liitetty karbapeneemirakentee-seen ryhmän -C(R2) (R3)C(0) - välityksellä.

10 EP-1986525 (FI-81576) esittää karbapeneemejä, joissa on substituoitu pyrrolidinyylitioryhmä 2-asemassa. Kvaternisoitua typpiatomia ei ole ja yhdisteet muistuttavat enemmän julkaisua EP-182213.

15 EP-165384 (FI-84826) esittää karbapeneemijohdannaisia, joilla on 2- asemassa substituoitu heterosyklyylitioryhmä. Nämä yhdisteet eivät sisällä kvaternisoitua typpiatomia ja muistuttavat enemmän julkaisuja EP-160391 ja EP-72710.

20 EP-202048 (FI-81577) esittää karbapeneemijohdannaisia, jotka valinnai sesti käsittävät heterosyklyyliryhmän sivuketjun 2-asemassa. Mainitussa sivuketjussa on silloittava ryhmä tioryhmän ja valinnaisen hetero-syklin välillä, joka on kaavan -CH2-C(NH)- mukainen. Yhdisteissä ei ole kvaternisoitua typpiatomia eikä siten muistuta esillä olevan kek-25 sinnön mukaisia yhdisteitä.

EP-235823 (FI-843446 + 861721) esittää karbapeneemijohdannaisia, joilla on seuraavan kaavan mukainen substituentti 2-asemassa 30 Rx5/~\.

f) jossa on ei-aromaattinen heterosykli. Yhdisteet eroavat esillä olevasta keksinnöstä siinä, että ei-aromaattinen heterosykli 35 on liitetty tioalkyyliryhmään kvaternäärisen typpiatomin kautta.

EP-280771 (FI-875135) esittää substituoituja 2-pyrrolidinyylitiokarba- 9 91258 peneemijohdannaisia. Yhdisteet muistuttavat enemmän julkaisuja EP-182213 ja EP-186525 ja eroavat esillä olevan keksinnön yhdisteistä samoista syistä.

5 Keksinnön avulla voidaan saada aikaan farmaseuttinen valmiste, joka käsittää tehokkaan määrän antibioottia sekoitettuna farmaseuttisesti hyväksyttävään kantajaan tai laimentimeen, mainitun antibiootin ollessa vähintään jokin kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ja näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden joukosta 10 valittu yhdiste.

Edelleen, keksinnön avulla voidaan saada aikaan menetelmä mikrobi-infektion käsittelemiseksi tai estämiseksi nisäkkäässä, joka voi olla ihminen, antamalla sille tehokas määrä antibioottia, joka antibiootti 15 on vähintään jokin kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ja näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden joukosta valittu yhdiste.

Keksinnön mukaiset menetelmät yhdisteiden valmistamiseksi kuvataan 20 jäljempänä.

Oheisen keksinnön mukaisissa yhdisteissä, joissa R3, R*, R6 tai R7 mainitun alkyleeniryhmän substituentti tarkoittaa alkyyliryhmää, tämä alkyyliryhmä voi olla 1-6 (R6, R7) tai 1-4 (R3, R*. alkyleeniryhmän 25 substituentti) hiiliatomia käsittävä suora-tai haaraketjuinen alkyyliryhmä, ja esimerkkeinä niistä voidaan mainita metyyli, etyyli, propyy-li, isopropyyli, butyyli, isobutyyli, sek.-butyyli, t-butyyli, pentyy-li, isopentyyli, 2-metyylibutyyli, heksyyli, isoheksyyli ja 2-metyyli-pentyyli, joista metyyli, etyyli, propyyli ja butyyli ovat edullisia, 30 metyyliryhmän ollessa yleensä kaikkein edullisin.

Ryhmien R3 ja R* tapauksessa substituoitumattomista alkyyliryhmistä edullisimpia ovat metyyli- ja etyyliryhmät, joista kahdesta metyyli-ryhmä on edullisin. Ryhmien R6 ja R7 tapauksessa substituoitumattomis-35 ta alkyyliryhmistä edullisimpia ovat metyyli, etyyli ja propyyli, joista erityisen edullisia ovat metyyli- ja etyyliryhmät.

10

Mikäli R6 ja/tai R7 tarkoittaa sykloalkyyliryhmää, niin se käsittää renkaassaan 3-6 hiiliatomia, ja esimerkkeinä voidaan mainita syklo-propyyli, syklobutyyli, syklopentyyli ja sykloheksyyli, joista syklo-propyyli-, syklopentyyli- ja sykloheksyyliryhmät ovat kaikkein edul-5 lisimpia.

Oheisen keksinnön mukaiset yhdisteet voivat sisältää emäksisen ryhmän ja näin ollen ne voivat muodostaa happoadditiosuoloja. Samoin mikäli R* tarkoittaa mainittua ryhmää (II), niin anioni on välttämätön ryh-10 mässä (II) läsnäolevan typpiatomin positiivisen varauksen tasapainottamiseksi. Tämä anioni voidaan saada aikaan hapolla, joista esimerkkejä esitetään jäljempänä. Näiden suolojen ja happojen luonne ei ole kriittinen keksinnölle, edellyttäen, että mikäli yhdistettä käytetään lääkinnällisiin tarkoituksiin, niin suolan on oltava farmaseuttisesti 15 hyväksyttävä, mikä alalla hyvin tunnetusti tarkoittaa sitä, ettei sen aktiivisuus ole pienempi (tai merkittävästi pienempi) tai ettei sen toksisuus ole suurempi (tai merkittävästi suurempi) kuin vapaan emäksen aktiivisuus tai toksisuus. Mikäli yhdistettä on kuitenkin tarkoitus käyttää muissa sovellutuksissa, esimerkiksi välituotteena muita 20 yhdisteitä valmistettaessa, niin tällöin tämäkään rajoitus ei päde.

Esimerkkeinä hapoista, jotka voivat muodostaa tällaisia suoloja tai joilla voidaan saada aikaan tasapainottava anioni, mainittakoon epäorgaaniset hapot kuten kloorivetyhappo, bromivetyhappo, jodivetyhappo, 25 fosforihappo, rikkihappo tai typpihappo; orgaaniset sulfonihapot kuten metaanisulfonihappo, etaanisulfonihappo, bentseenisulfonihappo tai p-tolueenisulfonihappo; sekä organiset karboksyylihapot kuten oksaalihappo, viinihappo, sitruunahappo, maleiinihappo, meripihkahappo, etik-kahappo, bentsoehappo, mantelihappo, askorbiinihappo, maitohappo, 30 glukonihappo ja maliinihappo.

Oheisen keksinnön mukaisista yhdisteistä edullisia ovat seuraavat: ne kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa Ra tarkoittaa mainittua kaavan (I-7a) mukaista ryhmää.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voivat esiintyä erilaisina isomeereinä asymmetristen hiiliatomien läsnäolosta johtuen. Oheinen keksintö kat- 35 11 91258 taa sekä yksittäiset isomeerit että kahden tai useamman isomeerin seokset. Tällaisia seoksia voidaan valmistaa synteesireaktioilla tai sekoittamalla. Mikäli erillinen isomeeri on toivottu tuote, se voidaan valmistaa stereospesifisellä synteesimenetelmällä tai se voidaan val-5 mistaa erottamalla isomeerien seos alalla hyvin tunnettuja erotus- tekniikoita käyttäen. Edullisina pidetään erityisesti niitä yhdisteitä, joissa 6-peneemiasemassa oleva 1-hydroksietyyliryhmä on samassa konfiguraatiossa kuin tienamysiini, eli se on 1(R)-hydroksietyyli.

Samoin, kun R1 tarkoittaa vetyatomia, niin (5R,6S)-konfiguraatiota 10 pidetään edullisena, ja kun R1 tarkoittaa metyyliryhmää, niin (1R, 5S>, 6S) -konfiguraatiota pidetään edullisena.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden erityisiä esimerkkejä esitetään seu-raavissa kaavoissa (I-la)-(I-4a) ja (I-6a)-(I-7a), joissa substituen-15 tit ovat vastaavissa taulukoissa 1-7 esitettyjen määritelmien mukaisia [siis: taulukko 1 liittyy kaavioon (I-la), taulukko 2 liittyy kaavioon (I-2a) ja niin edelleen]. Taulukossa 4 typpiatomiin kiinnittynyt atomi esitetään ensimmäiseksi. Taulukossa 6 typpiatomiin kiinnittynyt atomi esitetään lopuksi. Taulukoissa käytetään seuraavia lyhenteitä: 20

Ac asetyyli

Ada adamantyyli

Ali allyyli

Azr atsiridinyyli 25 Azt atsetidinyyli

Bu butyyli cBu syklobutyyli sBu sek.-butyyli tBu t-butyyli 30 Byr butyryyli iByr isobutyryyli

Bz bentsyyli

Car karbamoyyli

Dix 2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli 35 Dox (5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyli

Et etyyli

Etc etoksikarbonyyli 12 cHp sykloheptyyli cHx sykloheksyyli

Me metyyli

Mec metoksikarbonyyli 5 Men mentyyli

Mor morfolino

Pdox (5-fenyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yyli)metyyli

Ph fenyyli

Phth ftalidyyli 10 Pip piperidyyli

Piv pivaloyyli

Piz piperatsinyyli cPn syklopentyyli

Pr propyyli 15 cPr syklopropyyli iPr is op ropyy1i

Prg propargyyli (» 2-propynyyli)

Prn propionyyli

Pyrd pyrrolidinyyli 20 Tfm trifluorimetyyli

Thz perhydro-1,4-tiatsin-4-yyli (- tiomorfolino) 13 91258 -cm'' I J (I-la) C4j. —- isi+-ir

A

-a Noti

I I

oii (I'2s) V > 14 (CH2) I ' , -CH N+-R3 (I-3a) \ / \ (H2C) r4 cw*-cu \u L I ' \ x/ + Nt (I-4a> X/ v /

CU-, I C

CW u LH3 Ö o -cu, / V ’ " CW U, ^ \{ (I‘6a) eft, — ^ l R* CU,-ett,.

<r V

Λ / k - R' -*· a, 1 (I-7a)

Wi Vu< C Uj 15

Taulukko 1 91258

Yhd. n: o R1 R2 R3 R* £ 5 _ 1-1 Me Car Me Me 0 1-2 H Car Me Me 0 1-3 Me Car 2-FEt Me 0 1-4 H Car 2-FEt Me 0 10 1-5 Me MeCar Me Me 0 1-6 H MeCar Me Me 0 1-7 Me Car All Me 0 1-8 H Car All Me 0 1-9 Me Car Et Me 0 15 1-10 H Car Et Me 0 1-19 Me MeCar 2-FEt Me 0 1-20 H MeCar 2-FEt Me 0 1-21 Me MeCar Et Me 0 1-22 H MeCar Et Me 0 20 1-23 Me diMeCar Me Me 0 1-24 H diMeCar Me Me 0 1-25 Me diMeCar Et Me 0 1-26 H diMeCar Et Me 0 1-27 Me diMeCar 2-FEt Me 0 25 1-28 H diMeCar 2-FEt Me 0 1-29 Me diMeCar All Me 0 1-30 H diMeCar All Me 0 1-44 H -CONMe(-CH2) Me Me 0 1-49 Me Car 2-HOEt Me 0 30 1-50 H Car 2-HOEt Me 0 1-51 Me H Me Me 0 1-52 H H Me Me 0 1-55 Me H 2-FEt Me 0 1-56 H H 2-FEt Me 0 35 1-65 Me H 2-HOEt Me 0 1-66 H H 2-HOEt Me 0 1-75 Me H All Me 0

Taulukko 1 (jatk.) 16

Yhd. n:o R1 R2 R3 R* I

5 _ 1-76 H H Ali Me 0 1-85 Me H Et Me 0 1-86 H H Et Me 0 1-91 Me H Me Me 1 10 1-92 H H Me Me 1 1-95 Me H Et Me 1 1-96 H H Et Me 1 1-101 Me H All Me 1 1-102 H H All Me 1 15 1-117 Me H 2-HOEt Me 1 1-118 H H 2-H0Et Me 1 1-137 Me Me Me Me 0 1-138 H Me Me Me 0 1-143 Me Ac Me Me 0 20 1-144 H Ac Me Me 0 1-169 Me H 2-FEt Me 0 1-170 H H 2-FEt Me 0 1-173 Me H 3-FPr Me 0 1-174 H H 3-FPr Me 0 25 1-181 Me H 2-CiEt Me 0 1-182 H H 2-CfEt Me 0 1-185 Me 1-Pyrd-CO- Me Me 0 1-186 H 1-Pyrd-C0- Me Me 0 1-189 Me Mor-CO- Me Me 0 30 1-190 H Mor-CO- Me Me 0 1-195 Me H 3-FPr Me 0 1-196 H H 3-FPr Me 0 1-199 Me H Et Me 0 1-200 H H Et Me 0 35 1-203 Me -CH2Car Me Me 0 1-204 H -CH2Car Me Me 0 1-209 Me H -CH2CF3 Me 0 91258 17

Taulukko 1 (jatk.)

Yhd. n:o R1 R2 R3 R* 1 5 _ 1-210 H H -CH2CF3 Me 0 1-211 Me 1-Piz-C0- Me Me 0 1-212 H 1-Piz-C0- Me Me 0 1-213 Me 4-Ac-l-Piz-CO- Me Me 0 10 1-214 H 4-Ac-l-Piz-CO- Me Me 0 1-215 Me 4-Me-l-Piz-CO- Me Me 0 1-216 H 4-Me-1-Piz-C0- Me Me 0 1-221 Me l-Azt-CO- Me Me 0 1-222 H l-Azt-CO- Me Me 0 15 1-223 Me 1-Azr-CO- Me Me 0 1-224 H l-Azr-CO- Me Me 0 1-247 Me H 2-MeOEt Me 0 1-248 H H 2-Me0Et Me 0 1-249 Me Car Et Me 0 20 1-250 H Car Et Me 0 1-253 Me 3-Me-l-Pyrd-C0- Me Me 0 1-254 H 3-Me-l-Pyrd-CO- Me Me 0 1-255 Me 2-oxo-l-Pyrd-CO- Me Me 0 1-256 H 2-oxo-l-Pyrd-C0- Me Me 0 25 1-259 Me 2-Car-l-Pyrd-C0- Me Me 0 1-260 H 2-Car-1-Pyrd-CO- Me Me 0 1-261 Me 3-MeO-l-Pyrd-CO- Me Me 0 1-262 H 3-Me0-l-Pyrd-C0- Me Me 0 1-263 Me 3-oxo-l-Pyrd-C0- Me Me 0 30 1-264 H 3-oxo-l-Pyrd-CO- Me Me 0 1-267 Me EtCar Me Me 0 1-268 H EtCar Me Me 0 1-269 Me EtCar Et Me 0 1-270 H EtCar Et Me 0 35 1-271 Me iPrCar Me Me 0 1-272 H iPrCar Me Me 0 1-273 Me iPrCar Et Me 0

Taulukko 1 (jatk.) 18

Yhd. n:o R1 R2 R3 R4 £ 5 1-274 H iPrCar Et Me 0 1-275 Me cPrCar Me Me 0 1-276 H cPrCar Me Me 0 1- 277 Me cPrCar Et Me 0 10 1-278 H cPrCar Et Me 0

Taulukko 2 15 _

Yhd. n:o R1 R3 R4 £ 2- 1 Me Me Me 2-2 H Me Me 20 2-9 Me 2-FEt Me 2-10 H 2-FEt Me 2-11 Me 2-HOEt Me 2-12 H 2-H0Et Me 2-21 Me Et Me 25 2-22 H Et Me 2-29 Me Et Et 2-30 H Et Et

Taulukko 3 19 91258

Yhd. n:o R1 R3 RA

5 __ 3-1 Me Me Me 3-2 H Me Me 3-3 Me 2-FEt Me 3-4 H 2-FEt Me 10 3-5 Me Et Me 3-6 H Et Me 3-11 Me Me Me 3-12 H Me Me 3-13 Me Me Me 15 3-14 H Me Me 3-17 Me Et Me 3-18 H Et Me 3-19 Me 2-FEt Me 3-20 H 2-FEt Me 20 3-21 Me Et Et 3-22 H Et Et 20

Taulukko 4

Yhd. n:o R1 Z

5 _ 4-1 Me -(CH2)3- 4-2 H -(CH2)3- 4-3 Me - (CH2)i,- 4-4 H -(CH2)a- 10 _

Taulukko 6 15 Yhd. n: o R1 R3 R* 6-1 Me Me Me 6-2 H Me Me 6-3 Me Me Me 20 6-4 H Me Me 6-9 Me Me Me 6-10 H Me Me 6-11 Me Me Me 6-12 H Me Me 25 6-13 Me Me Me 6-14 H Me Me 30 21

Taulukko 7 91258

Yhd. n:o R1 R3 5 _ 7-1 Me Me 7-2 H Me 7-3 Me Me 7-4 H Me 10 7-5 Me Me 7-6 H Me 7-7 Me Et 7-8 H Et 7-9 Me 2-FEt 15 7-10 H 2-FEt

Edellä luetelluista yhdisteistä edullisia ovat yhdisteet, joilla on numero 1-1, 1-2, 1-9, 1-23, 1-267 ja 1-275, joista seuraavat ovat 20 kaikkein edullisimpia: 1-1. 2-(2-karbamoyyli-l,l-dimetyylipyrrolidinium-4-yylitio)-6-(1- hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti sen (lR,5S,6S)-2-[(2S.4S)-2-karbamoyyli-l,1-dimetyylipyrroli-25 dinium-4-yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi- 3-karboksylaatti- isomeeri; 1-2. 2-(2-karbamoyyli-l,l-dimetyylipyrrolidinium-4-yylitio)-6-(1- hydroksietyyli)-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti sen 30 (5R,6S)-2-[(2S,4S)-2-karbamoyyli-l,l-dimetyylipyrrolidinium-4-yyli- tio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti-isomeeri; 1-23. 2-(1,l-dimetyyli-2-dimetyylikarbamoyylipyrrolidinium-4-yyli- 35 tio)-6-(1-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaat-ti, erityisesti sen (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-1,l-dimetyyli-2-dimetyyli-karbamoyylipyrrolidinium-4-yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyy- 22 li-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti-isomeeri; 1-267. 2-(1,l-dimetyyli-2-etyylikarbamoyylipyrrolidinium-4-yylitio)- 6-(1-hydroksietyyli)-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, 5 erityisesti sen (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-1,l-dimetyyli-2-etyylikarba-moyylipyrrolidinium-4-yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti-isomeeri; 1-275. 2-(2-syklopropyylikarbamoyyli-l,l-dimetyylipyrrolidinium-4- 10 yylitio)-6-(1-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy-laatti, erityisesti sen (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-syklopropyylikarbamo-yyli-1,1-dimetyylipyrrolidinium-4-yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti-isomeeri; 15 sekä näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

Keksinnön mukainen menetelmä on pääasiassa tunnettu siitä, että tämän menetelmän käsittämissä vaiheissa 20 (a) kaavan (IV):

HO H R1 \ / I

C C-H

25 / \ / \ H3C CH—CH C-R27 I I Π (IV)

C-N-C

// \ 0 COOR2 8 30 [missä R1 on edellä esitetyn määritelmän mukainen, R27 tarkoittaa kaavan -OR29 tai -SO-R30 mukaista ryhmää, joissa kaavoissa R29 tarkoittaa alkaanisulfonyyliryhmää, aryylisulfonyyliryhmää, dial-35 kyylifosforyyliryhmää tai diaryylifosforyyliryhmää; ja R30 tarkoittaa alkyyliryhmää, halogeenialkyyliryhmää, 2-asetyyli- 23 91258 aminoetyyliryhmää, 2-asetyyliaminovinyyliryhmää; aryyliryhmää tai heteroaryyliryhmää; ja R28 tarkoittaa karboksyylihappoa suojaavaa ryhmää]; 5 mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (Va): HS-CCH^e-R11 X‘ (Va) 10 [jossa kaavassa R11 tarkoittaa jotakin kaavojen I-la, I-2a, I-3a, I-4a, I-6a tai I-7a mukaista ryhmää, jossa tarvittaessa mikä tahansa aktiivinen ryhmä voi olla suojattu, 2 on edellä esitetyn määritelmän mukainen ja X* on tasapainottava anioni], 15 mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (VI): HO H R1

\ / I

C C-H

t \ i \ h H3C CH—CH C-S- (CH2 ) 2.-R“ I I II (VI)

C-N_C

// \ 25 O COOR28 [missä R1, R28 ja 2 ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia ja Rb tarkoittaa mainitun kaavan I-la, I-2a, I-3a, I-4a, I-6a tai I-7a mu-30 kaista ryhmää, jossa tarvittaessa mikä tahansa aktiivinen ryhmä voi olla suojattu, ja joka sisältää tarvittaessa tasapainottavan anionin], (b) minkä jälkeen tarvittaessa suojaavat ryhmät poistetaan ja/tai tuloksena oleva yhdiste esteröidään ja/tai muutetaan suolakseen, .jol-35 loin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

24 (b) minkä jälkeen tarvittaessa suojaavat ryhmät poistetaan ja/tai tuloksena oleva yhdiste esteröidään ja/tai muutetaan suolakseen, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

5

Keksinnön edullisilla suoritusmuodoilla on alivaatimusten mukaiset tunnusmerkit.

Edellä mainituissa kaavoissa R29 voi olla: alkaanisulfonyyliryhmä ku-10 ten metaanisulfonyyli, etaanisulfonyyli, propaanisulfonyyli, isopro-paanisulfonyyli tai butaanisulfonyyli; aryylisulfonyyliryhmä kuten fenyylisulfonyyli, tolyylisulfonyyli, erityisesti p-tolyylisulfonyyli, tai naftyylisulfonyyli; dialkyylifosforyyliryhmä kuten dimetyylifosfo-ryyli, dietyylifosforyyli, dipropyylifosforyyli, diisopropyylifosfo-15 ryyli, dibutyylifosforyyli tai dipentyylifosforyyli; tai diaryylifos-foryyliryhmä kuten difenyylifosforyyli tai ditolyylifosforyyliryhmä; R30 tarkoittaa alkyyliryhmää kuten metyyliä, etyyliä, propyyliä tai isopropyyliä; halogeenialkyyliryhmää kuten fluorimetyyliä, kloorime-20 tyyliä, fluorietyyliä, difluorimetyyliä, difluorietyyliä, dikloori- etyyliä, trifluorimetyyliä tai trifluorietyyliä; 2-asetyyliaminoetyy-liryhmää; 2-asetyyliaminovinyyliryhmää; aryyliryhmää kuten fenyyliä tai naftyyliä.

25 R26 tarkoittaa karboksyylihapon suojaavaa ryhmää, joista esimerkkeinä voidaan mainita alkyyliryhmä kuten metyyli, etyyli tai t-butyyli; aralkyyliryhmää kuten bentsyyliä, difenyylimetyyliä, 4-nitrobentsyyliä tai 2-nitrobentsyyliä; alkenyyliryhmää kuten allyyliä, 2-klooriallyy-liä tai 2-metyyliallyyliä; halogeenialkyyliryhmää kuten 2,2,2-trikloo-30 rietyyliä, 2,2-dibromietyyliä tai 2,2,2-tribromietyyliä tai 2-trime-tyylisilyylietyyliryhmää.

Yksityiskohtaisemmin esittäen nämä yhdisteet voidaan valmistaa seu-raavissa menetelmissä A ja B kuvatuilla tavoilla.

35 25 91258

Menetelmä A

Tätä menetelmää voidaan havainnollistaa seuraavana reaktiokaaviona A: 26 REAKTIOKAAVIO A: OH R1

Vaihe 41 ' ___L isr <r

IVIII

OH R1 Λ Ay* ch3 1 1 I Vaihe A2 J-R-1 (+(Ya| . (Vb)] .-r " \ ,. tai 0 COOR28 (VIII) OH R1 y^^s-(CH2irRb CH*l I I Vaihe A3 J-M-\ 28 0 COOR28 iVl) OH R1 C«3 f j 05^ 11 koOR5

III

27 91258

Edellä esitetyissä kaavioissa R1, R5, Ra, Rb, R28, R29 ja 1 ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Kaavan (Va) mukaisessa yhdisteessä X' tarkoittaa tasapainottavaa anio-5 nia, joka on edullisesti halogeeniatomi (esim. kloori, bromi tai jodi) tai alkyylisulfonyylioksi-, aryylisulfonyylioksi- tai halogeenisul-fonyylioksiryhmä (esim. metaanisulfonyylioksi, p-tolueenisulfonyyliok-si, trifluorimetaanisulfonyylioksi tai fluorisulfonyylioksi).

10 Tämän reaktiokaavion vaiheessa Ai lähtömateriaalina toimiva kaavan (VII) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan emäksen läsnäollessa al-kaanisulfonihapon, aryylisulfonihapon, dialkyylifosforihapon tai dia-ryylifosforihapon R290H aktiivisen johdannaisen, esimerkiksi al-kaanisulfonihappo- tai aryylisulfonihappoanhydridin tai dialkyyli-15 fosforyyli- tai diaryylfosforyylihalogenidin kanssa. Vaiheessa A2 tuloksena oleva kaavan (VIII) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan sitä eristämättä kaavan (Va) tai (Vb) mukaisen merkaptaanijohdannaisen kanssa emäksen läsnäollessa, jolloin saadaan kaavan (VI) mukainen yhdiste. Sitten toivottu, kaavan (I) mukainen yhdiste voidaan valmis-20 taa poistamalla tarvittaessa suojaava ryhmä R28 kaavan (VI) mukaisen yhdisteen karboksyyliryhmästä.

Esimerkkeinä vaiheessa Ai käyttökelpoisista, kaavan R290H mukaisen reagenssin reaktiivisista johdannaisista voidaan mainita: alkaani-25 sulfonihappoanhydridit kuten metaanisulfoni- tai etaanisulfonihappo- anhydridi; aryylisulfonihappoanhydridit kuten bentseenisulfoni- tai £-tolueenisulfonihappoanhydridi; dialkyylifosforyylihalogenidit kuten dimetyylifosforyyli- tai dietyylifosforyylikloridi; diaryylifosforyy-lihalogenidit kuten difenyylifosforyylikloridi tai difenyylifosforyy-30 libromidi. Näistä reagensseista edullisia ovat j>-tolueenisulfonihappoanhydridi tai difenyylifosforyylikloridi. Käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta erityisiä rajoituksia, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti reaktioon eikä siinä käytettyihin reagensseihin. Esimerkkeinä sopivista liuottimista voidaan mainita halogenoidut hiilive-35 dyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten mety- leenikloridi, 1,2-dikloorietaani tai kloroformi; nitriilit kuten ase-tonitriili; amidit kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidi tai N,N-dimetyyli- 28 asetamidi. Myöskään käytettävän emäksen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti molekyylin muihin osiin, erityisesti 0-laktaamirenkaaseen. Edullisia emäksiä, joita voidaan käyttää tässä reaktiossa, ovat sellaiset orgaaniset 5 emäkset kuten trietyyliamiini, diisopropyylietyyliamiini tai 4-dime-tyyliaminopyridiini.

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleisesti tarkoituk-10 senmukaisena pidetään reaktion toteuttamista suhteellisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden välttämiseksi, tavallisesti -20 - +40®C:n lämpötilassa. Samoin reaktion tarvitsema aika voi vaihdella suuresti riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta ja rea-genssien luonteesta. Kuitenkin edellyttäen, että reaktio toteutetaan 15 edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 5 tuntiin, on tavallisesti riittävä.

Tuloksena olevaa kaavan (VIII) mukaista yhdistettä ei tarvitse eristää ennen reaktiokaavion seuraavaa vaihetta. Täten vaiheessa A2 reaktio-20 seos voidaan käsitellä kaavan (Va) tai (Vb) mukaisella merkaptaani-johdannaisella emäksen läsnäollessa. Reaktiossa käytettävän emäksen luonne ei ole kriittinen, mutta edullisia emäksiä ovat kuitenkin orgaaniset emäkset kuten trietyyliamiini tai diisopropyyliamiini sekä epäorgaaniset emäkset kuten kaliumkarbonaatti tai natriumkarbonaatti. 25

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Kuitenkin yleensä pidetään parhaana toteuttaa reaktio suhteellisen alhaisessa lämpötilassa, joka on esimerkiksi -20°:sta huoneen lämpötilaan. Samoin reak-30 tioon tarvittava aika voi vaihdella laaajasti riippuen monista tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta. Mikäli kuitenkin reaktio toteutetaan edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, niin tällöin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 30 minuutista 5 vuorokauteen.

35

Sen jälkeen, kun reaktio on edennyt täydellisesti loppuun, toivottu kaavan (VI) mukainen yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta 29 91258 perinteisellä tavalla. Esimerkiksi eräs sopiva tapa tuotteen talteen-ottamiseksi käsittää yksinkertaisesti liuottimen poistamisen tislaamalla reaktioseoksesta. Tuloksena oleva yhdiste voidaan puhdistaa tarvittaessa edelleen tavanomaisella tavalla, esimerkiksi uudestaanki-5 teyttämällä, uudestaansaostamalla tai lukuisalla erilaisella kromatografisella tekniikalla, kuten pylväskromatografiällä tai preparatiivi-sella ohutkerroskromatografiällä.

Ennen tällaista lisäpuhdistusta tai sen jälkeen karboksia suojaava 10 ryhmä voidaan poistaa toivottaessa. Tämä toteutetaan edullisesti siten, ettei kaavan (VI) mukaista yhdistettä eristetä.

Menetelmän A viimeinen reaktiovaihe käsittää karboksia suojaavan ryhmän R1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 poistamisen kaavan (VI) mukaisesta yhdisteestä, jolloin saa-15 daan vastaava kaavan (I) mukainen karboksyylihappo, sekä toivottaessa tuloksena olevan vapaan hapon muuntamisen toiseksi suolaksi tai esteriksi. Tämä vaihe on valinnainen, ja on selvää, ettei karboksia suo-jaavan ryhmän poistaminen ole aina välttämätöntä tai toivottavaa, esimerkiksi mikäli kaavan (VI) mukainen yhdiste on oheisen keksinnön 20 puitteisiin kuuluva, farmaseuttisesti hyväksyttävä esteri. Mikäli on toivottavaa poistaa karboksia suojaava ryhmä, niin se voi tapahtua perinteisillä menetelmillä, joiden valinta riippuu käytetyn suojaavan ryhmän luonteesta.

Mikäli suojaava ryhmä voidaan poistaa pelkistämällä, esimerkiksi mikä 2 li se on halogeenialkyyliryhmä, aralkyyliryhmä tai bentshydryyliryhmä, 3 niin se voidaan poistaa saattamalla se kosketukseen pelkistävän aineen 4 kanssa. Halogeenialkyyliryhmien kuten 2,2-dibromietyylin tai 2,2,2- 5 trikloorietyylin tapauksessa edullinen pelkistävä aine on sinkin ja 6 etikkahapon yhdistelmä. Mikäli suojaava ryhmä on aralkyyliryhmä (kuten 7 bentsyyli- tai E‘nitr°bentsyyliryhmä) tai bentshydryyliryhmä, niin se 8 poistetaan edullisesti joko katalyyttisesti pelkistämällä käyttäen 9 vetyä ja sopivaa katalyyttiä kuten platinaa tai hiileen sidottua pal 10 ladiumia; tai pelkistämällä alkalimetallisulfidillä kuten natriumsul- 11 fidillä tai kaliumsulfidillä. Olipa pelkistämistekniikka mikä tahansa, pelkistäminen toteutetaan edullisesti liuottimen läsnäollessa, jonka liuottimen luonne ei ole kriittinen, kunhan se vain ei vaikuta haital- 30 lisesti reaktioon. Sopivia liuottimia ovat esimerkiksi alkoholit (kuten metanoli tai etanoli), eetterit (kuten tetrahydrofuraani tai diok-saani), alifaattiset karboksyylihapot (kuten etikkahappo) tai yhden tai useamman tällaisen orgaanisen liuottimen seos veden kanssa. Reak-5 tiolämpötila ei ole kriittinen, mutta se on normaalisti 0 °C:sta huoneen lämpötilaan. Reaktioon tarvittava aika vaihtelee riippuen lähtö-materiaalien ja pelkistävien aineiden luonteesta sekä reaktiolämpöti-lasta, mutta normaalisti riittää ajanjakso, jonka pituus on 5 minuutista 12 tuntiin.

10

Sen jälkeen, kun reaktio on edennyt loppuun, toivottu, vapaan karb-oksiryhmän sisältävä yhdiste voidaan ottaa talteen perinteisin menetelmin reaktioseoksesta. Sopivissa tekniikoissa tuotteen talteenotta-miseksi esimerkiksi: mahdollinen liukenematon materiaali erotetaan, 15 minkä jälkeen liuotin poistetaan tislaamalla, jolloin saadaan toivottua tuotetta. Tuote voidaan tarvittaessa puhdistaa edelleen perinteisillä menetelmillä, esimerkiksi uudestaankiteyttämällä tai erilaisilla kromatografisilla tekniikoilla, kuten preparatiivisella ohutkerroskro-matografiällä tai pylväskromatografiällä.

20

Edellä kuvatulla tavalla valmistetussa yhdisteessä oleva karboksi-ryhmä voidaan muuntaa toivottaessa esteriryhmäksi, joka hydrolysoituu fysikaalisissa olosuhteissa. Tämä voidaan toteuttaa perinteisillä menetelmillä. Mikäli R5 tarkoittaa esteriä, joka hydrolysoituu fysio-25 logisissa olosuhteissa, esimerkiksi pivaloyylioksimetyyliä, asetoksi-metyyliä, ftalidyyliä, indanyyliä, metoksimetyyliä tai 2-okso-5-metyy-li-1,3-dioksolen-4-yylimetyyliä, niin kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan hydrolysoida iji vivo fysiologisissa olosuhteissa. Näin ollen tällaista yhdistettä voidaan antaa suoraan potilaalle ilman, että 30 suojaava ryhmä olisi poistettu.

Menetelmä B

Tätä menetelmää voidaan havainnollistaa seuraavalla reaktiokaaviolla 35 B: 31 91258 REAKTIOKAAVIO B: 1 0 OH R1 i a aJ-r3° C H |-1 II Vaihe B1 3 J-N-L „ I+CVal (Vb)l r coor28 tai (IX) OH R1 A^s-(CH2,i-Rb CH3 T-f | Valhe B2 0 N COOR28 (VI] OH R1 S-lCHj^-R* CH3 j f J-»-k , 0 COOR5 (I) 32

Edellä esitetyissä kaavoissa R1, Ra, Rb, R28, R30 ja 1 ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Tässä reaktiokaaviossa lähtömateriaaleina käytettävät, kaavan (IX) 5 mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa japanilaisessa patenttihakemuksessa Kokai No. Sho 62-30781 kuvatulla tavalla.

Vaiheessa B1 kaavan (VI) mukainen yhdiste voidaan valmistaa siten, että kaavan (IX) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (Va) tai 10 (Vb) mukaisen merkaptaaniyhdisteen kanssa emäksen läsnäollessa iner-tissä liuottimessa. Käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti reaktioon eikä siinä käytettäviin reagensseihin. Esimerkkeinä sopivista liuottimista voidaan mainita eetterit kuten tetrahydrofuraani; 15 nitriilit kuten asetonitriili; rasvahappoamidit kuten dimetyyliform-amidi; sulfoksidit kuten dimetyylisulfoksidi; vesi; tai minkä tahansa kahden tai useamman tällaisen liuottimen seos. Reaktiossa käytettävä emäs ei ole myöskään kriittinen, kunhan se vain ei vaikuta molekyylin muihin osiin, erityisesti ei j£?-laktaamirenkaaseen. Esimerkkeinä sopi-20 vista emäksistä voidaan mainita orgaaniset emäkset kuten diisopropyy-lietyyliamiini, trietyyliamiini, N-metyylipiperidiini tai 4-(N,N-dime-tyyliamino)pyridiini; sekä epäorgaaniset emäkset, erityisesti alkali-metallikarbonaatit kuten kaliumkarbonaatti tai natriumbikarbonatti. Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella, ja täsmällinen 25 lämpötila ei ole kriittinen keksinnölle, vaikka edullisena pidetäänkin reaktion toteuttamista suhteellisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden estämiseksi. Yleisesti, reaktio toteutetaan tarkoituksenmukaisesti alueella -20 - +40 °C olevassa lämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, eri-30 tyisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta. Mikäli kuitenkin reaktio toteutetaan edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, niin tällöin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 5 minuutista 5 vuorokauteen.

35 Sen jälkeen, kun reaktio on edennyt loppuun, kaavan (VI) mukainen toivottu yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta perinteisillä menetelmillä. Samoin kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa 33 91258 toivottaessa poistamalla suojaava ryhmä kaavan (VI) mukaisesta yhdisteestä käyttäen menetelmässä A kuvattua toimenpidettä. Tuloksena oleva yhdiste voidaan edelleen erottaa ja puhdistaa menetelmässä A kuvatulla tavalla.

5

Kaavan (Va) ja (Vb) mukaisia yhdisteitä, joita käytetään myös lähtö-materiaaleina edellä esitetyissä reaktiokaavioissa, voidaan myös saada perinteisillä ja hyvin tunnetuilla tavoilla tämän tyyppisen yhdisteen valmistamiseksi. Niiden kaavan (Vb) mukaisten yhdisteiden tapauksessa, 10 joita ei ole muutoin saatavilla, ne voidaan valmistaa seuraavalla tavalla:

Ensiksi yhdiste, jolla on kaava (X): 15 L-Rc (X) [missä L tarkoittaa irtoavaa ryhmää kuten hydroksiryhmää, halogeeni-atomia (kuten klooria, bromia tai jodia) tai sulfonyylioksiryhmää 20 (esim. metaanisulfonyylioksi-, propaanisulfonyylioksi-, trifluorime-taanisulfonyylioksi- tai tolueenisulfonyylioksiryhmää) ja Rc tarkoittaa kaavan (III) mukaisen ryhmän yhteydessä määriteltyä 2-oksopyrrol-idinyyliryhmää] 25 muunnetaan vastaavaksi suojatuksi tioyhdisteeksi, jolla on kaava (XI):

Rd-Rc (XI) 30 [missä Rd tarkoittaa tioryhmää suojaavaa ryhmää kuten alkanoyyliryhmää (esim. asetyyli- tai propionyyliryhmää) tai aralkyyliryhmää (esim. 4-metoksibentsyyli-, 3,4-dimetoksibentsyyli-, bentshydryyli-, trifenyy-limetyyli- tai di(4-metoksifenyyli)metyyliryhmää)].

35 Mikäli L tarkoittaa hydroksiryhmää, niin se on voitu saada aikaan

Mitsunobu-reaktiolla, joka voidaan toteuttaa sinänsä tunnetuissa olosuhteissa dietyyliatsodikarboksylaatin, trifenyylifosfiinin ja tio- 34 etikkahapon läsnäollessa.

Mikäli L tarkoittaa halogeeniatomia tai sulfonyylioksiryhmää, niin reaktio voidaan toteuttaa saattamalla kaavan (X) mukainen yhdiste 5 reagoimaan yhdisteen Rd-SH natrium- tai kaliumsuolan kanssa.

Toisena vaiheena on tavanomainen hydrolyysireaktio ja se voidaan toteuttaa sinänsä tunnetuissa tavanomaisissa olosuhteissa. Esimerkiksi mikäli Rd on alkanoyyliryhmä, niin se voidaan poistaa aikalisissä tai 10 happamissa olosuhteissa esimerkiksi natriumhydroksidillä vesipitoisessa metanolissa. Mikäli Rd on aralkyyliryhmä, se voidaan poistaa esimerkiksi trifluorimetaanisulfonihapolla trifluorietikkahapon ja anisolin läsnäollessa.

15 Kaavan (Va) mukainen merkaptaaniyhdiste voidaan valmistaa seuraavassa reaktiokaaviossa C kuvatulla tavalla: 35 91258 REAITIOKAAVIO C: R2 Y -1-(CHplm R31-HCH2)#-- T7--

11 R3-L liCHO

(CH2]n-HH

(XII) R2 -(-{a2]m •"-HOA-j- '^rf"

(CH2I„-N

(XIII) K

R2 Y -1— (CH2)m R31-S-(CH2)|-- Vaiii—iLL.

"A—*«-«’ .

I, χΘ (XIV) r‘ R2 Y -1-(CH2lm HS-S-( CH2)4-- CCH2l„-~R R3 .

I I X® (Vai R1 36

Edellä olevissa kaavoissa R31 tarkoittaa merkaptoa suojaavaa ryhmää kuten aralkyyliryhmää [joista esimerkkeinä voidaan mainita 4-metoksi-bentsyyli, trifenyylimetyyli, bentshydryyli, 3,4-dimetoksibentsyyli tai di(4-metoksifenyyli)metyyli], alkanoyyliryhmää (esim. asetyyli, 5 propionyyli tai pivaloyyli) tai aromaattista asyyliryhmää (esim. o-tai j>-toluoyyliryhmä tai bentsoyyliryhmä); L tarkoittaa irtoavaa ryhmää kuten halogeeniatomia (esim. kloori, fluori tai jodi) tai sul-fonyylioksiryhmää (esim. metaanisulfonyylioksi, tolueenisulfonyyliok-si, trifluorimetaanisulfonyylioksi tai fluorisulfonyylioksi); ja R2, 10 R3, R*, i, m, n ja X' ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Tässä reaktiokaaviossa lähtömateriaalina käytetty, kaavan (XII) mukainen yhdiste voidaan valmistaa tunnetuilla menetelmillä, joista esimerkki on kuvattu japanilaisessa patenttihakemuksessa Kokai No. Sho 15 60-233076.

Vaiheessa Cl kaavan (XIII) mukainen yhdiste valmistetaan saattamalla kaavan (XII) mukainen yhdiste reagoimaan kaavan R3-L (XV) mukaisen yhdisteen kanssa emäksen läsnäollessa. Vaihtoehtoisesti, mikäli R3 on 20 metyyliryhmä, kaavan (XII) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan formaldehydin (joka on tavallisesti formaliinina tai paraformaldehydinä) ja sitten natriumsyanoboorihydridin kanssa; tai se voidaan saattaa reagoimaan formaldehydin kanssa ja tämän jälkeen reaktiotuote hydra-taan katalyyttisesti hiileen sidotulla palladiumilla; tai se voidaan 25 saattaa reagoimaan formaldehydin ja muurahaishapon kanssa reaktioseos-ta kuumentaen.

Reaktio toteutetaan edullisesti inertin liuottimen läsnäollessa. Käytettävän liuottimen luonteelle ei aseteta erityisiä rajoituksia, edel-30 lyttäen, ettei se vaikuta haitallisesti reaktioon tai siihen osallistuviin reagensseihin. Esimerkkeinä sopivista liuottimista mainittakoon amidit, erityisesti rasvahappoamidit kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidi tai Ν,Ν-dimetyyliasetamidi; halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halo-genoidut alifaattiset hiilivedyt kuten metyleenikloridi, 1,2-dikloo-35 rietaani tai kloroformi; eetterit kuten tetrahydrofuraani, dioksaani tai dietyylieetteri; nitriilit kuten asetonitriili; sekä minkä tahansa yhden tai useamman tällaisen liuottimen seos veden kanssa.

37 91258

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleisesti tarkoituksenmukaisena pidetään reaktion toteuttamista alueella -20 - +100 °C olevassa lämpötilassa, mutta reaktio toteutetaan edullisesti suhteel-5 lisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden välttämiseksi. Reaktioon tarvittava aika voi myös vaihdella laajasti monista tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta, riippuen.

Mikäli reaktio toteutetaan kuitenkin edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, niin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 10 10 minuutista 2 vuorokauteen.

Tämän reaktiokaavion vaiheessa 2 kaavan (XIII) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan R*-X (XVI) mukaisen yhdisteen kanssa. Tämä reaktio toteutetaan edullisesti inertin liuottimen läsnäollessa. Käy-15 tettävän liuottimen luonteelle ei aseteta mitään erityisiä rajoituksia, kunhan se vain ei vaikuta haitallisesti reaktioon tai siinä käytettyihin reagensseihin. Esimerkkeinä sopivista liuottimista voidaan mainita aromaattiset hiilivedyt kuten bentseeni, tolueeni tai ksylee-ni; halogenoidut hiilivedyt, erityisesti halogenoidut alifaattiset 20 hiilivedyt kuten metyleenikloridi, 1,2-dikloorietaani tai kloroformi; amidit, erityisesti rasvahappoamidit kuten N,N-dimetyyliformamidi tai Ν,Ν-dimetyyliasetamidi; eetterit kuten tetrahydrofuraani, dioksaani tai dietyylieetteri; nitriilit kuten asetonitriili; sekä yhden tai useamman tällaisen liuottimen seos veden kanssa.

25

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleisesti tarkoituksenmukaisena pidetään reaktion toteuttamista alueella -20 - +180 °C olevassa lämpötilassa, mutta reaktio toteutetaan edullisesti suhteel-30 lisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden välttämiseksi. Reaktioon tarvittava aika voi myös vaihdella laajasti monista tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta, riippuen.

Mikäli reaktio toteutetaan kuitenkin edellä kuvatuissa edullisissa olosuhteissa, niin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 35 10 minuutista 3 vuorokauteen.

Tämän reaktiokaavion vaiheessa C3 kaavan (XIV) mukaisesta yhdistees- 38 tä, joka on valmistettu vaiheessa C2 kuvatulla tavalla, poistetaan suojaava ryhmä, jolloin saadaan kaavan (Va) mukainen yhdiste.

Menetelmä suojaavan ryhmän poistamiseksi vaihtelee riippuen suojaavan 5 ryhmän R31 luonteesta. Täten mikäli R31 on aralkyyliryhmä, niin suojaa-van ryhmän poistaminen voidaan toteuttaa tarkoituksenmukaisesti saattamalla kaavan (XIV) mukainen yhdiste reagoimaan trifluorimetaanisul-fonihapon kanssa trifluorietikkahapon ja anisolin läsnäollessa.

10 Toisaalta, mikäli R31 on alkanoyyliryhmä tai aromaattinen asyyliryhmä, niin suojaava ryhmä voidaan poistaa tarkoituksenmukaisesti käsittelemällä kaavan (XIV) mukaista yhdistettä kloorivedyllä tai bromivedyllä sopivassa liuottimessa kuten alkoholissa (esim. metanolissa tai etanolissa), vedessä tai vesipitoisessa eetterissä (esim. vesipitoisessa 15 tetrahydrofuraanissa tai vesipitoisessa dietyylieetterissä).

Reaktio voidaan toteuttaa laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleisesti tarkoituksenmukaisena pidetään reaktion toteuttamista alueella -20 - +200 eC 20 olevassa lämpötilassa, mutta reaktio toteutetaan edullisesti suhteellisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden välttämiseksi. Reaktioon tarvittava aika voi myös vaihdella laajasti monista tekijöistä, erityisesti reaktiolämpötilasta ja reagenssien luonteesta, riippuen. Mikäli reaktio toteutetaan kuitenkin edellä kuvatuissa edullisissa 25 olosuhteissa, niin tavallisesti riittää ajanjakso, jonka pituus on 10 minuutista 24 tuntiin.

Sen jälkeen, kun reaktio on edennyt loppuun, kaavan (Va) mukainen toivottu yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomai-30 sella tavalla, esimerkiksi poistamalla liuotin reaktioseoksesta yksinkertaisesti tislaamalla. Toivottu yhdiste voidaan puhdistaa tarvittaessa edelleen tavanomaisella tavalla kuten uudestaansaostamalla tai monella erilaisella kromatografisella menetelmällä kuten pylväskroma-tografiällä tai preparatiivisella ohutkerroskromatografiällä.

35

Kaavan (Va) mukaisessa yhdisteessä vastaioni X" vaihtelee riippuen vaiheessa C3 käytetyn reagenssin luonteesta.

39 91258

Oheisen keksinnön mukaisilla yhdisteillä on bakteereja erinomaisesti torjuvaa aktiivisuutta ja niiden aktiivisuusspektri on laaja. Samoin ne kykenevät vastustamaan /9-laktamaasia. Agarmaljalla toteutetulla laimennosmenetelmällä määritettynä nämä yhdisteet on voitu osoittaa 5 aktiivisiksi monia erilaisia patogeenisiä mikro-organismeja vastaan, joihin mikro-organismeihin kuuluu sekä Gram-positiivisia bakteereita (kuten Staphylococcus aureus ja Bacillus subtlis) että Gram-negatii-visia bakteereita (kuten Escherichia coli, Shigella flexneri.

Klebsiella pneuminiae. Proteus vulgaris. Serratia-lai it. esim.

10 Serratia marcescens. Enterobacter-laiit. esim. Enterobacter cloacae.

Salmonella enteritidis ja Pseudomonas aeruginosa), ja näin ollen niitä voidaan käyttää tällaisten mikro-organismien aiheuttamien sairauksien hoitamiseen ihmisissä ja muissa eläimissä. Dehydropeptidaasi I inakti-voi tienamysiinin ja sen analogit in vivo nisäkkäissä, kun taas ohei- 15 sen keksinnön mukaiset yhdisteet ovat paljon stabiilimpia tämän entsyymin läsnäollessa ja niiden tapauksessa virtsasta talteensaadut määrät ovat suuria, joten niiden biologinen aktiivisuus on hyvä. Samoin niiden toksisuus on pieni laboratorioeläimissä testattuna.

20 Taulukossa 10 esitetään lukuisan oheisen keksinnön mukaisen yhdisteen aktiivisuus pienimpänä inhiboivana pitoisuutena ^g/ml) erilaisia bakteereita vastaan.

40

Taulukko 10

Yhdiste Mikro-organismi

esimerkistä_A_B_C

5 1 0,01* 0,05 1,5 4 0,05 0,1 0,8 16 0,01* 0,05 1,5 20 0,02 0,1 0,8 36 0,01 0,01* 25 10 _ A: Staphylococcus aureus 209 B: Escherichia coli NIHJ C: Pseudomonas aeruginosa 1001 15 0,01*: korkeintaan 0,01.

Edellä esitetyt tulokset osoittavat, että oheisen keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää lukuisten erilaisten patogeenisten baktee-reiden aiheuttamien sairauksien hoitamiseen tai torjumiseen.

20

Esimerkeissä 39,40 ja 41 kuvatulla tavalla tuotettuja estereitä inku-boitiin 37 eC:ssa 1 tunnin ajan hevosen seerumin kanssa, minkä jälkeen määritettiin MC-arvot (pienin inhiboiva pitoisuus). Nämä arvot olivat täsmälleen samat kuin esimerkissä 36 saadut ja edellä esitetyt arvot. 25 Tämä tarkoittaa sitä, että nämä esterit pilkkoutuvat helposti esteraa-sin vaikutuksesta ohutsuolessa suun kautta tapahtuneen antamisen jälkeen, ne imeytyvät hyvin ruuansulatuskanavan läpi, ja että niillä saavutetaan täydellisesti vapaan hapon aktiivisuus.

30 Oheisen keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa joko suun kautta tai ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta hoidettaessa patogeenisten mikro-organismien aiheuttamia sairauksia ihmisissä ja muissa eläimissä. Yhdisteestä voidaan muodostaa mitä tahansa perinteisiä käyttömuotoja. Sopivia, suun kautta annettavia käyttömuotoja ovat esimerkiksi 35 tabletit, rakeet, kapselit, jauheet ja siirapit, kun taas ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta annettavia käyttömuotoja ovat esimerkiksi lihaksen sisään tai edullisemmin suonen sisään injektoitavat liuokset.

41 91258

Oheisen keksinnön mukaisia yhdisteitä annetaan edullisesti ruuansulatuskanavan ulkopuolisesti, erityisesti suonen sisään injektoimalla.

Keksinnön mukaisen yhdisteen annos vaihtelee riippuen potilaan iästä, 5 ruumiin painosta ja tilasta sekä antotavasta ja antokertojen tiheydestä. Aikuisen vuorokausiannos on kuitenkin yleensä 100-3000 mg yhdistettä ja se voidaan antaa yhtenä annoksena tai osiin jaettuna.

Esimerkki 1 10 (1R. 5S . 6S-2-f(2S ,4S) -2-karbamovvli-l. 1-dimetvvlipvrrolidinium-4-vvlitiol -6- f (1R) -1-hvdroksietvvli 1 -l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 15 (1) 5,14 ml trifluorietikkahappoa ja 0,13 ml trifluorimetaanisul- fonihappoa lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 520 mg (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)- 1.1- dimetyylipyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 1” esitetyllä tavalla) 1,45 ml:ssa anisolia, ja tätä seosta 20 sekoitettiin samassa lämpötilassa 40 minuuttia. Tämän ajan päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännös pestiin useaan kertaan dekantoimalla käyttäen dietyylieetteriä ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 420 mg (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-merkapto- 1.1- dimetyylipyrrolidiniumsuolaa öljynä. Tämän suolan anionia ei tun-25 nistettu; sama pätee seuraavassa.

(2) 0,20 ml diisopropyylietyyliamiinia ja 0,24 ml difenyylifosfo- ryylikloridia lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 400 g 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksi-30 etyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 4 mlrssa kuivaa asetonitriiliä, ja seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn reaktioseokseen lisättiin 0,46 ml diisopropyylietyyliamiinia ja edellä vaiheessa (1) valmistetun suolan liuosta 3 mlrssa asetonitriiliä,.

35 minkä jälkeen seosta sekoitettiin 7 tuntia ja sitten sen annettiin seisoa 2 vuorokautta samassa lämpötilassa. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dekan- 42 toimalla käyttäen dietyylieetteriä ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin raakatuotetta. Tämä raakatuote liuotettiin seokseen, joka sisälsi 30 ml tetrahydrofuraania ja 30 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2,5 5 tuntia siten, että läsnä oli 555 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla käyttäen suodatuksen apuaineena Celite-tuotetta (tavaramerkki) ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Sitten vesikerros väke-vöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös adsorboitiin 10 Diaion HP-20AG-kolonniin (yhtiön Mitsubishi Chemical Industries, Ltd. tavaramerkki) ja asetonin 5 til.-% vesiliuoksella eluoidut fraktiot väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös lyofilisoi-tiin, jolloin raakatuotteena saatiin keltaista jauhetta. Tämä raaka-tuote puhdistettiin kromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck 15 Co., LiChroprep RP-8, koko B). Metanolin 5 ja 10 til.-% vesiliuoksilla eluoidut fraktiot kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 100 mg otsikon mukaista yhdistettä.

20 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Äroax nm: 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 25 1,10 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 2,20-2,31 (1H, multipletti); 2,87-3,22 (2H, multipletti); 3,10 (3H, singletti); 3,14 (3H, singletti); 30 3,28 (1H, duplettien dupletti, J — 6,05 & 2,78 Hz); 3,67-3,73 (1H, multipletti); 3,86-4,08 (4H, multipletti); 4,22 (1H, duplettien dupletti, J - 9,35 & 7,50 Hz).

35 43 91258

Esimerkki 2 (lR.5S.6S)-2-f (2S ,4S) - 2-karbamovvli-l- (2-fluorietvvli') -1-metyyli-ovrrolidinium-4-vvlitio1-6-f(1R)-1-hvdroksietvvlil-1-metyyli-1-karba-5 pen-2 -eemi- 3-karboksvlaatti (1) 10,0 ml trifluorietikkahappoa ja 0,25 ml trifluorimetaanisul-fonihappoa lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 1,11 g (2R.4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)- 10 1-(2-fluorietyyli)-1-metyylipyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmis tettu kohdassa "valmistus 2" kuvatulla tavalla) 2,83 ml:ssa anisolia, ja sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin tislattiin pois ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja kui-15 vattiin sitten alennetussa paineessa, jolloin saatiin 927 mg (2S, 4S)-2-karbamoyyli-4-merkapto-1-(2 - fluorimetyyli)-1-metyylipyrrolidinium-suolaa.

(2) 0,37 ml diisopropyylietyyliamiinia ja 0,44 ml difenyylifosfo-20 ryylikloridia lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 720 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksi-etyyli]-1-metyyli-2-okso-1-karbapenaami-3-karboksylaattia 7 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn 25 reaktioseokseen lisättiin 0,88 ml di-isopropyylietyyliamiinia ja edellä vaiheessa (1) valmistetun suolan liuosta 5 ml:ssa asetonitriiliä, minkä jälkeen sen annettiin seisoa 2 vuorokautta samassa lämpötilassa. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dekantoimalla käyttäen dietyylieetteriä ja se 30 kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin raakatuotetta. Tämä raakatuote liuotettiin seokseen, joka sisälsi 55 ml tetrahydrofuraania ja 55 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia siten, että läsnä oli 1 g 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä liukenematon materiaali 35 poistettiin suodattamalla käyttäen suodatuksen apuaineena Celite-tuotetta ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Sitten vesikerros väkevöi-tiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös adsorboitiin Diaion 44 HP-20AG-kolonniin (Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.). Asetonin 5 til.-% vesiliuoksella eluoidut fraktiot väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin raakatuotteena saatiin keltaista jauhetta. Tämä raakatuote puhdistettiin kromatografi-5 sesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck Co., LiChroprep RP-8, koko B). Metanolin 2 til.-% vesiliuoksilla eluoidut fraktiot kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 40 mg otsikon mukaista yhdistettä.

10 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 1,03 (3H, dupletti, J = 7,33 Hz); 15 1,10 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 2,27-2,35 (1H, multipletti); 2,92-3,12 (2H, multipletti); 3,19 (3H, singletti); 3,29 (1H, duplettien dupletti, J - 6,05 & 2,75 Hz); 20 3,67-3,78 (2H, multipletti); 3,91-4,09 (5H, multipletti); 4,37 (1H, duplettien dupletti, J - 10,81 & 7,50 Hz); 4,69-4,91 (2H, multipletti).

25 Esimerkki 3 (lR.5S.6S)-2-f (2S . 4S) -1. l-dimetvvli-2-nietvvlikarbaniovvlipvrrolidinium-4-vvlitiol -6- f (1R) -1-hvdroksietvvli 1 -l-metwli-l-karbat>en-2-eemi-3-karboksvlaatti 30 (1) 2,64 ml trifluorietikkahappoa ja 0,132 ml trifluorimetaanisul- fonihappoa lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 280 mg (2S,4S)-1,l-dimetyyli-2-metyylikarbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu.

35 kohdassa "valmistus 3" kuvatulla tavalla) 0,744 ml:ssa anisolia, ja sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 2 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin tislattiin pois ja jäännös pestiin 45 91258 kahteen kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja kuivattiin sitten alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteena saatiin 230 mg (2S,4S)-1,l-dimetyyli-2-metyylikarbamoyyli-4-merkaptopyrrolidinium-suolaa öljynä.

5 (2) 108 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 129 /xl difenyylifosforyyli- kloridia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 225 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R.6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyy1i]-1-metyyli-2 -okso-1-karbapenaami-3-karboksylaattia 3 10 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn reaktioseokseen lisättiin 118 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja edellä vaiheessa (1) valmistetun suolan liuosta 2 mltssa asetonitriiliä. Sitten seoksen annettiin seisoa 2 tuntia 0-5 °C:n lämpötilas-15 sa ja 48 tuntia jääkaapissa. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla ja jäännös pestiin moneen kertaan dekantoimalla käyttäen dietyylieetteriä ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin raakatuotetta. Tämä raakatuote liuotettiin seokseen, joka sisälsi 20 ml tetrahydrofuraania ja 20 ml 0,1 M fosfaattipuskuria 20 (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia siten, että läsnä oli 254 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla käyttäen suodatuksen apuaineena Celite-tuotetta ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Sitten vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alen-25 netussa paineessa. Tuloksena ollut jäännös adsorboitiin Diaion HP-20AG-kolonniin (Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.). Asetonin 5 til.-% vesiliuoksella eluoidut fraktiot väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin jauhemaista raakatuotetta. Tämä raakatuote puhdistettiin 30 kromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck Co., LiChroprep RP-8, koko B). Metanolin 10 ja 15 til.-% vesiliuoksilla eluoidut fraktiot kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 9,0 mg otsikon mukaista yhdistettä .

35 46

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) ima3( nm: 297,5.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 5 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 2,19-2,31 (1H, multipletti); 2,63 (3H, singletti); 2.82- 3,23 (2H, multipletti); 10 3,05 (3H, singletti); 3,12 (3H, singletti); 3,29 (1H, duplettien dupletti, J - 6,22 & 2,93 Hz); 3,70 (1H, duplettien dupletti, J - 12,46 & 5,13 Hz); 3.83- 4,20 (5H, multipletti).

15

Esimerkki 4 (lR.5S.6S)-2-f(2S.4S^-1.l-dimetvvli-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-pvrrolidinium-4-vvlitiol-6-f(1R)-1-hvdroksietvvlil-1-metvvli-l-karba-20 pen-2-eemi-3-karboksvlaatti (1) 3,3 ml trifluorietikkahappoa ja 0,12 ml trifluorimetaanisul- fonihappoa lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 350 mg (2S,4S)-1,l-dimetyyli-2-(N,N-dimetyylikarbamoyy-25 li)-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 4" kuvatulla tavalla) 0,669 ml:ssa ani-solia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin tislattiin pois ja jäännös pestiin kahteen kertaan heksaanilla ja dietyylieetterillä, tässä jär-30 jestyksessä, välillä dekantoiden ja kuivattiin sitten alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteena saatiin 316 mg (2S,4S)-1,1-dimetyyli-2 -(N,N-dime tyyli)karbamoyy1i-4-merkaptopyrrolidiniumsuolaa ölj ynä.

Sitä käytettiin seuraavassa reaktiossa tätä enempää puhdistamatta.

35 (2) 164 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 196 μΐ difenyylifosforyyli- kloridia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 326 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1- 47 91258 hydroksietyyli]-1-metyyli - 2 -okso-1-karbapenaami- 3-karboksylaattia 4 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn reaktioseokseen lisättiin 248 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 5 edellä vaiheessa (1) valmistetun suolan liuosta 3 ml:ssa asetonitriiliä. Sitten seoksen annettiin seisoa 1 tunnin ajan 0-5 °C:n lämpötilassa ja tämän jälkeen edelleen 2 vuorokautta jääkaapissa. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseosta käsiteltiin esimerkissä 1 - (2) kuvatulla tavalla. Tuloksena saatu raakatuote liuotettiin seokseen, joka 10 sisälsi 20 ml tetrahydrofuraania ja 20 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia siten, että läsnä oli 400 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän jälkeen pelkistäminen ja puhdistaminen toteutettiin esimerkissä l-(2) kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 101 mg otsikon mukaista yhdistettä.

15

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 298.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 20 1,03 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1.11 (3H, dupletti, J - 6,22 Hz); 2,19 (1H, kvintetti, J = 7,20 Hz); 2,83 (3H, singletti); 2,90-3,18 (2H, multipletti); 25 3,01 (3H, singletti); 3,10 (3H, singletti); 3.12 (3H, singletti); 3,29 (1H, duplettien dupletti, J - 6,23 & 2,56 Hz); 3,74-3,91 (2H, multipletti); 30 3,96-4,11 (3H, multipletti); 4,76 (1H, tripletti, J - 7,70 Hz).

48

Esimerkki 5 (lR.5S.6S)-2-f(3S)-l. 1-dimetvvlipvrrolidinium- 3 -vvlitiol -6-i(1R)-1-hvdroksietvvlil-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 5 (1) 4,97 ml trifluorietikkahappoa ja 0,249 ml trifluorimetaanisul-fonihappoa lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 453 mg (3S)-1,1-dimetyyli-3-(4-metoksibentsyylitio)pyr-rolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 5" 10 kuvatulla tavalla) 1,40 ml:ssa anisolia, ja sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 2 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin tislattiin pois ja jäännös pestiin kahteen kertaan dietyyli-eetterillä välillä dekantoiden ja kuivattiin sitten alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteena saatiin 250 mg (3S)-l,l-dimetyyli-3-15 merkaptopyrrolidiniumsuolaa öljynä.

(2) 126 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 150 μΐ difenyylifosforyyli-kloridia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 250 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1- 20 hydroksietyyli]-1-metyyli - 2-okso-1-karbapenaami- 3-karboksylaattia 2 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn reaktioseokseen lisättiin 145 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja edellä vaiheessa (1) valmistetun suolan liuosta 4 ml:ssa asetonit-25 rilliä. Tämän jälkeen reaktioseoksen annettiin seisoa 2 tuntia 0-5 °C:nlämpötilassa ja 2 vuorokautta jääkaapissa. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin dietyylieetteriin ja dekantoitiin. Täten saatu raakatuote liuotettiin seokseen, joka sisälsi 20 ml tetrahydrofuraania 30 ja 20 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia siten, että läsnä oli 300 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla käyttäen suodatuksen apuaineena Celite-tuotetta ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Sitten vesiker-35 ros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös adsorboitiin Diaion HP-20AG-kolonniin (Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.). Asetonin 5 til.-% vesiliuoksella eluoidut fraktiot väkevöitiin 49 91258 haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin jauhemaista raakatuotetta. Tämä raakatuote puhdistettiin kromato-grafisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck Co., LiChroprep RP-8, koko B). Metanolin 10 ja 15 til.-% vesiliuoksilla eluoidut fraktiot kerät-5 tiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 90 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 297,3.

10

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 8 ppm: 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1.09 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 1,96-2,14 (1H, multipletti); 15 2,52-2,70 (1H, multipletti); 3,00 (3H, singletti); 3.09 (3H, singletti); 3,04-3,18 (1H, multipletti); 3,28 (1H, duplettien dupletti, J - 6,05 & 2,75 Hz), 20 3,38-3,67 (3H, multipletti); 3,80 (1H, duplettien dupletti, J - 12,46 & 7,70 Hz); 3,91-4,11 (3H, multipletti).

Esimerkki 6 25 (5R.6S)-2-f(3S)-1.l-dimetvvlipvrrolidinium-3-vvlitiol-6-f(1R)-1-hvdroksietvvli1-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 183 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 218 μΐ difenyylifosforyyliklori-30 dia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 348 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6!S)-6-[ (1R)-1-hydrok-sietyyli]-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia liuotettuna 4 ml:aan kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä tähän jäissä jäähdytettyyn 35 seokseen lisättiin 209 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia ja sekä liuosta, joka sisälsi 338 mg esimerkissä 5-(l) kuvatulla tavalla valmistettua raakaa (3S)-1,1-dimetyyli-3-merkaptopyrrolidiniumsuolaa 4 ml:ssa ase- 50 tonitriiliä. Tämän jälkeen seoksen annettiin seisoa 1 tunnin ajan tässä samassa lämpötilassa ja sitten kaksi vuorokautta jääkaapissa. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos pestiin dekantoimalla käyttäen dietyylieetteriä. Täten saatu raakatuote liuotettiin seokseen, joka 5 sisälsi 30 ml tetrahydrofuraania ja 30 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia siten, että läsnä oli 400 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Sitten vesikerros väkevöitiin 10 haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin pylväskroma-tografisesti käyttäen Diaion HP-20AG-kolonnia (Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.). Otsikon mukaisen yhdisteen raakatuote valmistettiin vedellä eluoiduista fraktioista. Tätä raakatuotetta puhdistettiin edelleen kromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck Co., 15 LiChroprep RP-8, koko B) . Metanolin 5 til.-% vesiliuoksilla eluoidut fraktiot kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 60 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 20 298.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1.09 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 2,01-2,18 (1H, multipletti); 25 2,53- 2,72 (1H, multipletti; 2,89-3,04 (2H, multipletti); 3,01 (3H, singletti); 3.09 (3H, singletti); 3,23 (1H, duplettien dupletti, J - 6,05 & 2,75 Hz); 30 3,36-3,67 (3H, multipletti; 3,85 (1H, duplettien dupletti, J - 12,64 & 8,24 Hz); 3,93-4,09 (3H, multipletti).

51 91258

Esimerkki 7 (1R. 5S .es1) - 2- [ 1 l-dimetvvlipiperidinium-4-Yvlitiol - 6- f (1R)-1-hvdroksi-etvvlil-l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvTaarri 5 7-(1) 31,6 ml trifluorietikkahappoa ja 1,6 ml trifluorimetaanisul- fonihappoa lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 3,0 g 1,l-dimetyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-(2-fluo-rietyyli)piperidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valio mistus 6" kuvatulla tavalla) 8,9 ml:ssa anisolia. Sitten seosta sekoitettiin 3 tuntia, minkä jälkeen siitä poistettiin liuotin tislaamalla alennetusa paineessa. Jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieetteril-lä välillä dekantoiden ja jäännös kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteenä saatiin 2,4 g 1,l-dimetyyli-4-merkaptopiperi-15 diniumsuolaa öljynä.

7-(2) 126 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 150 μΐ difenyylisulfo- nyylikloridia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 250 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-20 [(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksy- laattia liuotettuna 2 ml:aan kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä tähän seokseen lisättiin 288 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja liuosta, joka sisälsi 245 mg edellä vaiheessa (1) valmistettua suolaa 25 4 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, minkä jälkeen sen annettiin seisoa 2 vuorokautta jääkaapissa. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Sitten reaktioseos kaadettiin dietyylieetteriin ja tuloksena ollut sakka pestiin dekantoimalla. Täten saatu raakatuote liuotettiin sitten 20 ml:aan 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrat-30 tiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia siten, että läsnä oli 331 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos jatkokäsiteltiin esimerkissä 5-(2) kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 11,3 mg otsikon mukaista yhdistettä.

35 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 298.

52

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 1,02 (3H, dupletti, J - 6,96 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 1,70-1,93 (2H, multipletti); 5 2,03-2,20 (2H, multipletti); 2,97 (6H, singletti); 3,11-3,48 (7H, multipletti); 4.01- 4,12 (2H, multipletti).

10 Esimerkki 8 (5R. 6S)-2-f 1,l-dimetvvlipiperidinium-4-vvlitiol-6-f(1R)-1-hvdroksi-etvvlil-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 15 Tässä esimerkissä noudatetaan esimerkissä 6 kuvattua menetelmää käyttäen kuitenkin 368 mg esimerkissä 7-(l) kuvatulla tavalla valmistettua raakaa 1,l-dimetyyli-4-merkaptopiperidiniumsuolaa ja 363 mg 4-nitro-bentsyyli-(5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-2-okso-1-karbapenaami-3-karboksylaattia, jolloin saatiin 24 mg otsikon mukaista yhdistettä.

20

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 299.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 25 1,09 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 1,74-1,93 (2H, multipletti); 2.02- 2,16 (2H, multipletti); 2,86-3,43 (8H, multipletti); 2,96 (6H, singletti); 30 3,97-4,08 (2H, multipletti).

53 91258

Esimerkki 9 (1R. 5S . 6S) -2- f f 2S .48Ί -2- (N.N-dimetvvlikarbamovvli) -1-etvvli-l-metvvli-pvrrolidinium-4-vvlitiol-6-f(1R>-1-hvdroksietvvli1-1-metvvli-l-karba-5 pen-2-eemi-3-karboksvlaatti 9-(l) 4,94 ml trifluorietikkahappoa ja 248 μΐ trifluorimetaanisul- fonihappoa lisättiin pisaroittaan jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 560 mg (2S,4S)-2-(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-1-etyyli-l-10 metyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 7" kuvatulla tavalla) 1,39 ml:ssa anisolia, ja sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 2 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin tislattiin pois ja jäännös pestiin kahteen kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden 15 ja kuivattiin sitten alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteena saatiin 460 mg (2S,4S)-2-(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-1-etyyli-l-metyy-li-4-merkaptopyrrolidiniumsuolaa öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 20 1,21 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 2,14 (1H, triplettien dupletti, J - 14,29 & 7,15 Hz); 2,82 (3H, singletti); 2,98 (3H, singletti); 3,00 (3H, singletti); 25 2,86-3,94 (6H, multipletti); 4,69 (1H, tripletti, J - 7,15 Hz).

9-(2) 152 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 181 μΐ difenyylifosfo- ryylikloridia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytet-30 tyyn liuokseen, joka sisälsi 310 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksy-laattia liuotettuna 4 ml:aan kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin jäissä jäähdyttäen tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä tähän seokseen lisättiin 174 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 35 liuosta, joka sisälsi 366 mg edellä vaiheessa (1) valmistettua suolaa 4 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, minkä jälkeen seoksen annettiin seisoa 1 tunnin ajan 0-5 °C:n lämpötilassa ja sitten 2 vuorokautta jääkaapis- 54 sa. Tämän jälkeen reaktioseos kaadettiin dietyylieetteriin ja pestiin dekantoimalla. Täten saatu raakatuote liuotettiin sitten seokseen, joka sisälsi 25 ml tetrahydrofuraania ja 25 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia siten, 5 että läsnä oli 340 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos jatkokäsiteltiin ja puhdistettiin esimerkissä l-(2) kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 127 mg otsikon mukaista yhdistettä.

10 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) imax nm: 297,0

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,02 (3H, dupletti, J 6,96 Hz); 15 1,10 (3H, dupletti, J - 6,22 Hz); 1,22 (3H, tripletti, J - 7,32 Hz); 2,12-2,25 (1H, multipletti); 2,82 (3H, singletti); 2,83-3,50 (5H, multipletti; 20 3,00 (3H, singletti); 3,05 (3H, singletti); 3,65 (1H, duplettien dupletti, J - 12,45 & 5,13 Hz); 3,85 (1H, dublettien dupletti, J - 12,45 & 8,42 Hz); 3,91-4,12 (3H, multipletti); 25 4,68-4,75 (1H, multipletti).

Esimerkki 10 (5R.6S)-2-f(2S.4S)-l-ctvvli-l-metvvli-2-(N.N-dimetvvlikarbamowli)-30 pvrrolidinium-4-vvlitio)-6-f(1R)-1-hvdroksietvvli1-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 6 kuvattua menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 459 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)-6-[(IE)-1* 35 hydroksietyyli]-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia ja 580 mg raakaa (2S,4S)-2-(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-l-etyyli-l-metyyli-4-merkaptopyrrolidiniumsuolaa [valmistettu esimerkissä 9-(1) kuvatulla 55 91258 tavalla], jolloin saatiin 55 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 298.

5

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,10 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 1,23 (3H, tripletti, J - 7,15 Hz); 2,17-2,30 (1H, multipletti); 10 2,83 (3H, singletti); 2,83-3,07 (2H, multipletti); 3.00 (3H, singletti); 3.01 (3H, singletti); 3,05 (3H, singletti); 15 3,24 (1H, duplettien dupletti, J - 6,04 & 2,75 Hz); 3,27-4,18 (7H, multipletti); 4,72 (1H, tripletti, J - 8,06 Hz).

Esimerkki 11 20 (5R.6S)-2-f(23.45)-1.1-dimetvvli- 2 -(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-pvrrolidinium-4-vvlitiol-6-f(1R)-1-hvdroksietvvlil-l-karbaoen-2-eemi-3-karboksvlaatti 25 126 /il diisopropyylietyyliamiinia ja 132 μΐ difenyylifosforyyliklori- dia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 218 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)-6-[(1R)-1-hydrok-sietyyli]-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia liuotettuna 3 ml:aan kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin sitten tässä samas-30 sa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä tähän seokseen lisättiin 144 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja liuosta, joka sisälsi 243 mg raakaa (2S,4£)-2-(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-1,l-dimetyyli-4-merkaptopyrrolidiniumsuolaa [valmistettu esimerkissä 4-(1) kuvatulla tavalla] 2 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä. Tämän jälkeen seoksen annet-35 tiin seisoa 5 tunnin ajan tässä samassa lämpötilassa ja sitten 2 vuorokautta jääkaapissa. Tämän jälkeen reaktioseosta käsiteltiin esimerkissä 6 esitetyllä tavalla. Täten saatu raakatuote liuotettiin 56 sitten seokseen, joka sisälsi 15 ml tetrahydrofuraania ja 15 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia siten, että läsnä oli 200 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos jatkokäsiteltiin ja 5 puhdistettiin esimerkissä 6 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 56 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) ÄmiUC nm: 299.

10

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 1.10 (3H, dupletti, J = 6,23 Hz); 2,17-2,28 (1H, multipletti); 2,79-3,04 (3H, multipletti); 15 2,83 (3H, singletti); 3,00 (3H, singletti); 3.11 (3H, singletti); 3.12 (3H, singletti); 3,24 (1H, duplettien dupletti, J - 6,05 & 2,75 Hz); 20 3,76-3,96 (2H, multipletti); 3,97-4,12 (3H, multipletti); 4,76 (1H, tripletti, J - 7,33 Hz).

Esimerkki 12 25 (lR.5S.6S)-2-F(2S.4S)-1.l-dimetvvli-2-(4-morfolinokarbonvvli)-pvrro-lidinium-4-wlitiol-6-f(1R)-1-hvdroksietvvlil-l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 30 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 4 kuvattua menetelmää käyttäen kuitenkin vaiheessa (1) 446 mg (2S,4S)-1,l-dimetyyli-4-(4-metok-sibentsyylitio)-2-(4-morfolinokarbonyyli)-pyrrolidinium-fluorisul-fonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 8" esitetyllä tavalla) ja vaiheessa (2) 192 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydrok-35 sietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia, jolloin saatiin 16 mg otsikon mukaista yhdistettä.

57 91258

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Xmax nm: 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 5 1,02 (3H, dupletti, J - 7,23 Hz); 1.10 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 2,16-2,28 (1H, multipletti); 2,90-3,18 (2H, multipletti); 3.10 (3H, singletti); 10 3,15 (3H, singletti); 3,29 (1H, duplettien dupletti, J - 6,23 & 2,93 Hz); 3,43-3,65 (8H, multipletti); 3,76-3,93 (2H, multipletti); 3,96-4,12 (3H, multipletti); 15 4,76 (1H, tripletti, J - 7,69 Hz).

Esimerkki 13 (lR.5S.6S)-2-f(2S.4S)-1.l-dimetvvli-2-(1-pvrrolidinokarbonvvli)-pvrro-20 lidinium-4-vvlitiol-6-f(lR)-l-hvdroksietvvlil-1-metvvli-l-karba-pen-2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 4 kuvattua menetelmää käyttäen kuitenkin vaiheessa (1) 472 mg (2S,4S)-1,l-dimetyyli-4-(4-metok-25 sibentsyylitio)-2-(1-pyrrolidinokarbonyyli)-pyrrolidinium-fluorisulfo-naattia (valmistettu kohdassa "valmistus 9" esitetyllä tavalla) ja vaiheessa (2) 220 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydrok-sietyyli]-1-metyyli-2-okso-1-karbapenaami- 3-karboksylaattia, jolioin saatiin 24 mg otsikon mukaista yhdistettä.

30

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 298.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 5 ppm: 35 1,02 (3H, dupletti, J - 6,96 Hz); 1.10 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 1,65 1,84 (4H, multipletti); 58 2,14-2,24 (1H, multipletti); 2,92-3,04 (1H, multipletti); 3,10 (3H, singletti); 3,12 (3H, singletti); 5 3,20-3,57 (5H, multipletti); 3,74-4,11 (6H, multipletti); 4,47-4,63 (1H, multipletti).

Esimerkki 14 10 (lR,5S.6S)-2-f(2S.4S) -2^3^3Πΐονν1ΐ-1-6Γνν1ϊ-1-πΐ6ίνν1ϊρνΓΓθ1ϊά1ηίιιπι-4-vvlitiol-6-Γ(1R)-1-hvdroksietvvli1-l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 15 14-(1) 4,2 ml trifluorietikkahappoa ja 0,11 ml trifluorimetaanisul- fonihappoa lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 450 mg (2S ,4S.)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio) -1-etyyli-1-metyylipyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 10" kuvatulla tavalla) 1,2 ml:ssa anisolia. Sitten 20 seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 90 minuuttia, minkä ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös pestiin dietyylieetterillä dekantoiden ja kuivattiin sitten alennetussa paineessa, jolloin saatiin 370 mg (2S.4S)-2-karba-moyyli-4-merkapto-1-etyyli-1-metyylipyrrolidiniumsuolaa öljynä.

25

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1699, 1247, 1169.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 30 1,20 (3H, tripletti, J - 7,32 Hz); 2,13-2,25 (1H, multipletti); 2,80-3,92 (6H, multipletti); 2,98 (3H, singletti); 4,11-4,17 (1H, multipletti).

14-(2) Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 9 kuvattua menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 300 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R, 35 59 91258 6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-kar-boksylaattia ja 340 mg vaiheessa (1) kuvatulla tavalla valmistettua suolaa, jolloin saatiin 120 mg otsikon mukaista yhdistettä.

5 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (Dz0, 270 MHz) 6 ppm: 1,02 (3H, dupletti, J - 6,96 Hz); 10 1,10 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 1,23 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 2,21-2,35 (1H, multipletti); 2,88-3,25 (2H, multipletti); 3,04 (3H, singletti); 15 3,26-4,08 (8H, multipletti); 4,22 (1H, duplettien dupletti, J - 10,26 & 7,32 Hz).

Esimerkki 15 20 (5R.6S)-2-f(2S.4S)-2-karbamovvli-l-etyvli-l-metvvliPvrrolidinium- 4-wlitiol - 6- f (1R) -1-hvdroksietvvli 1 -l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 11 kuvattua menetelmää, 25 jossa käytettiin kuitenkin 450 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)-6-[(1£)-1-hydroksietyyli]-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia ja 530 mg esimerkissä 14-(1) kuvatulla tavalla valmistettua suolaa, jolloin saatiin 205 mg otsikon mukaista yhdistettä.

30 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (Hz0) Ämax nm: 298.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (DzO, 270 MHz) S ppm: 1,09 (3H, dupletti, J - 6,60 Hz); 35 1,24 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 2,26-2,38 (1H, multipletti); 2,84-3,07 (2H, multipletti); 60 3,03 (3H, singletti); 3,24 (1H, duplettien dupletti, J - 6,05 & 2,93 Hz); 3,27-4,06 (8H, multipletti); 4,22 (1H, duplettien dupletti, J - 10,26 & 7,33 Hz).

5

Esimerkki 16 (5R.6S)-2-f(2S.4S) -2 -karbamovvli -1, l-dimetyvlipyrrolidinium^-wli-tiol-6-f (1R)-1-hvdroksietvvli1-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 10 210 μλ diisopropyylietyyliamiinia ja 250 μΐ difenyylifosforyyliklori-dia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 400 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)-6-[(1R)-1-hydrok-sietyyli]-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia liuotettuna 5 ml:aan 15 kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin jäissä jäähdyttäen tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn reak-tioseokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 447 mg edellä esimerkissä 1-(1) raakatuotteena saatua (2S,4S)-2-karbamoyyli-l,l-dimetyyli-4-merkaptopyrrolidiniumsuolaa 5 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, minkä 20 jälkeen seoksen annettiin seisoa 4 tuntia samassa lämpötilassa ja sitten 2 vuorokautta jääkaapissa. Sitten reaktioseos kaadettiin die-tyylieetteriin ja tuloksena ollut sakka pestiin moneen kertaan dekan-toimalla. Tämä raakatuote liuotettiin seokseen, joka sisälsi 30 ml tetrahydrofuraania ja 30 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä 25 hydrattiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia siten, että läsnä oli 450 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla käyttäen suodatuksen apuaineena Celite-tuotetta. Sitten vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös adsorboitiin Diaion HP-30 20AG-kolonniin (Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.). Vedellä eluoi-tuneet fraktiot otettiin talteen ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin jauhemaista raakatuotetta. Tätä raakatuotetta puhdistettiin edelleen kromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck Co., LiChroprep RP-8, koko B) ja metanolin 5 til.-% vesiliuoksilla eluoidut fraktiot 35 kerättiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 208 mg otsikon mukaista yhdistettä .

61 91258

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Aroax nm: 297,7.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 8 ppm: 5 1,09 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 2,23-2,36 (1H, multipletti); 2,86-3,04 (3H, multipletti); 3,10 (3H, singletti); 3,15 (3H, singletti); 10 3,23 (1H, duplettien dulpetti, J - 5,86 & 2,57 Hz), 3,73 (1H, duplettien dupletti, J - 12,09 & 5,50 Hz); 3,90-4,08 (4H, multipletti); 4,22 (1H, duplettien dupletti, J - 9,16 & 7,69 Hz).

15 Esimerkki 17 (1R.5S.6S)-2-Γ(2S,4S)-2-etvvlikarbamowli-l-etvvli-l-metvvli-pvrro-lidinium-4-wlitiol -6- i (1R)-1-hvdroksietvvli1 -l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 20 17-(1) 10,86 ml trifluorietikkahappoa ja 544 μΐ trifluorimetaani- sulfonihappoa lisättiin jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 1,23 g (2S,4S)-2-etyylikarbamoyyli-l-etyyli-l-metyyli-4-(4-metoksi-bentsyyylitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa 25 "valmistus 11" kuvatulla tavalla) 3,06 ml:ssa anisolia ja sitten seosta sekoitettiin samoissa olosuhteissa 2 tunnin ajan. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin kolmasti di-etyylieetterillä välillä dekantoiden ja kuivattiin sitten alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteena saatiin 0,96 g (2S,4S)-2-etyylikar-30 bamoyyli-1-etyyli-1-metyyli-4-merkaptopyrrolidiniumsuolaa.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 0,96 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 1,21 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 35 2,13-2,26 (1H, multipletti); 2,95 (3H, singletti); 2,73-4,16 (9H, multipletti).

62 17-(2) Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 1 kuvattua menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 250 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R, 6S)-6-[(IE)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-kar-boksylaattia ja 304 mg vaiheessa (1) kuvatulla tavalla valmistettua 5 suolaa, jolloin saatiin 69 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 296,6.

10 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (Dz0, 270 MHz) 6 ppm: 0,95 (3H, tripletti, J - 7,32 Hz); 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 1,22 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 15 2,12-2,34 (1H, multipletti); 2,76-2,97 (1H, multipletti); 2,99 (3H, singletti); 3,03-4,18 (12 H, multipletti).

20 Esimerkki 18 (5R.6S)-2-f(2S,4S)-2-etwlikarbamovvli-l-etvvli-l-metvvlipvrrolidi-nium-4-vvlitiol-6-f(1R)-1-hvdroksietvvlil-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-svlaatti 25 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 16 kuvattua menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 348 mg 4-nitrobentsyyli-(5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia ja 440 mg esimerkissä 17-(1) kuvatulla tavalla raakatuotteena saatua (2S.4S)-30 etyylikarbamoyyli-1- etyyli -1-metyyli-4-merkaptopyrrolidiniumsuolaa, jolloin saatiin 80 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (Hz0) Amax nm: 298,2.

35

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (Dz0, 270 MHz) S ppm: 0,95 (3H, tripletti, J - 7,32 Hz); 63 91258 1.09 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 1.23 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 2,13-2,37 (1H, multipletti); 2.76- 3,05 (3H, multipletti); 5 2,98 (3H, singletti); 3.09 (2H, kvartetti, J - 7,33 Hz); 3.23 (1H, duplettien dupletti, J - 6,05 & 2,75 Hz); 3,22-4,18 (8H, multipletti).

10 Esimerkki 19 (lR.5S.6S)-2-f(2S.4S)-l-etvvli-l-metvvli-2-metvvlikarbamovvli-pVrro-lidinium-4-vvlitiol-6-f QR)-1-hvdroksietvvlil-1-metyyli-l-karhappn-2-eemi-3-karboksvlaatti 15 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 1 kuvattua menetelmää, jonka vaiheessa (1) käytettiin kuitenkin 986 mg (2S,4S)-1-etyyli-l-metyyli-2-metyylikarbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 12" kuvatulla ta-20 valla) ja vaiheessa (2) 362 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-2-okso-1-karbapenaami- 3-karboksylaattia, jolloin saatiin 74 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) imax nm: 25 296,6.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1.10 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 30 1,21 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 2,11-2,33 (1H, multipletti); 2,62 (3H, singletti); 2.77- 2,90 (1H, multipletti); 2,98 (3H, singletti); 35 3,00-4,23 (10H, multipletti).

Esimerkki 20 64 f 1R. 5S . es1) - 2- i (2S ,4S) -1. l-dimetvvli-2-etvvlikarbamovvlipvrrolidinium-4-wlitio1 -6- f (lR1) -1-hvdroksietvvlil -l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-5 karboksvlaatti 20-(1) 11,56 ml trifluorietikkahappoa ja 580 μΐ trifluorimetaani- sulfonihappoa lisättiin pisaroittain jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 1,27 g (2S,4S)-1,l-dimetyyli-2-etyylikarbamoyyli-4-10 (4-metoksibentsyylitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 13" kuvatulla tavalla) 3,26 ml:ssa anisolia, ja sitten seosta sekoitettiin samoissa olosuhteissa 2 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa ja jäännös pestiin kolmeen kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden 15 ja kuivattiin sitten alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteena saatiin 802 mg (2S,4S)-1,l-dimetyyli-2-etyylikarbamoyyli-4-merkapto-pyrrolidiniumsuolaa öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 20 0,96 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 2,18 (1H, triplettien dupletti, J - 14,66, 7,33 Hz); 2,79-2,98 (1H, multipletti); 3,03 (3H, singletti); 3.06 (3H, singletti); 25 3,10 (2H, kvartetti, J - 7,33 Hz); 2,46-3,92 (3H, multipletti); 4.06 (1H, tripletti, J - 7,33 Hz).

20-(2) 340 mg diisopropyylietyyliamiinia ja 405 μΐ difenyylifosfo- 30 ryylikloridia lisättiin samanaikaisesti pisaroittain jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 674 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksy-laattia liuotettuna 10 ml:aan kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson pää-35 tyttyä reaktioseokseen lisättiin 390 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 790 mg edellä vaiheessa (1) valmistettua suolaa 8 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, minkä jälkeen seoksen annettiin seisoa 2 tunnin ajan 0- 65 91258 5 eC:n lämpötilassa ja sitten 2 vuorokautta jääkaapissa. Tämän jälkeen reaktioseos kaadettiin dietyylieetteriin ja pestiin dekantoimalla.

Täten saatu raakatuote liuotettiin sitten seokseen, joka sisälsi 30 ml tetrahydrofuraania ja 30 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä 5 hydrattiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia siten, että läsnä oli 650 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos jatkokäsiteltiin ja puhdistettiin esimerkissä 1-(2) kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 289 mg otsikon mukaista yhdistettä.

10 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 297,0

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 0,95 (3H, tripletti, J - 7,15 Hz); 15 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1.10 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 2,17-2,30 (1H, multipletti); 2,81-3,18 (2H, multipletti); 3,05 (3H, singletti); 20 3,10 (2H, kvartetti, J - 7,33 Hz); 3.11 (3H, singletti); 3,28 (1H, duplettien dupletti, J - 6,05 & 2,76 Hz); 3,69 (1H, duplettien dupletti, J - 12,09 & 5,49 Hz); 3,84-4,16 (5H, multipletti).

25

Esimerkki 21 (1R. 5S . 6S)-2- f ^S^l-l-dimetyvlipyrrolidiniummetwlitiol -6- f (1R)-1-hvdroks ie tvvli1 -1-me tvvli-1-karbaoen-2-eemi-3-karboksvlaat ti 30 21-(1) Esimerkissä 7-(l) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 1,1 g (2S)-1,l-dimetyyli-4-(4-metoksibentsyylitiometyyli)-pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 14" kuvatulla tavalla), 3,3 ml anisolia, 11,6 ml trifluorietikkahappoa ja 35 581 μΐ trifluorisulfonihappoa, jolloin raakatuotteena saatiin 666 mg (2S)-1,l-dimetyyli-4-merkaptometyylipyrrolidiniumsuolaa öljynä.

66 21-(2) 76 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 90 μΐ difenyylifosfo- ryylikloridia lisättiin samanaikaisesti jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 150 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 5 liuotettuna 3 ml:aan kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn reaktioseokseen lisättiin 87 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 148 mg edellä vaiheessa (1) saatua suolaa 2 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä, minkä jälkeen seoksen 10 annettiin seisoa 2 tuntia 0-5 ®C:n lämpötilassa ja sitten vuorokauden jääkaapissa. Sitten reaktioseos kaadettiin dietyylieetteriin, joka oli jäähdytetty -78 °C:n lämpötilaan, ja se pestiin dekantoimalla. Täten saatu raakatuote liuotettiin seokseen, joka sisälsi 13 ml tetrahydro-furaania ja 13 ml 0,1 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja sitä hydrattiin 15 huoneen lämpötilassa 2 tuntia siten, että läsnä oli 210 mg 10 % w/w hiileen sidottua palladiumia. Liukenematon materiaali poistettiin suodattamalla käyttäen suodatuksen apuaineena Celite-tuotetta ja suo-dos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin kromatografisesti käyttäen CHP-20P-kolonnia (Mitsubishi 20 Chemical Industries, Ltd.) ja asetonin 5 til.-% vesiliuoksella eluoi-tuneet fraktiot otettiin talteen, haihdutettiin alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin. Täten saatu raakatuote käsiteltiin pylväskromato-grafisesti käyttäen Dowex S0W-X5-täytteellä pakattua kolonnia (Dow Chemicals Co.) ja vedellä eluoituneet fraktiot kerättiin, väkevöitiin 25 haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin. Tuloksena saatu raakatuote puhdistettiin edelleen Lobar RP-8-kolonnilla (Merck), jolloin 45 mg otsikon mukaista yhdistettä saatiin fraktioista, jotka oli eluoitu metanolin 8 til.-% vesiliuoksella.

30 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,04 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 35 1,11 (3H, dupletti, J - 6,60 Hz); 1,70-2,08 (3H, multipletti); 2,35-2,56 (1H, multipletti); 67 91258 2,70 (1H, duplettien dupletti, J = 13,18 & 10,99 Hz); 2,77 (3H, singletti); 3,04 (3H, singletti); 3,08-3,60 (6H, multipletti); 5 4,04-4,09 (2H, multipletti).

Esimerkki 22 C1R.5S.6S)-2-f(2S,4S)-1.l-dimetvvli-2-Dvrrolidiniummetwlitiol-6-10 f C1R)-1-hvdroksietvvlil-l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 21 kuvattua menetelmää, jonka vaiheessa (1) käytettiin kuitenkin 0,94 g (2S)-1,l-dimetyyli-4-(4-metoksibentsyylitiometyyli)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (val-15 mistettu kohdassa "valmistus 15" kuvatulla tavalla) ja vaiheessa (2) 470 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyy-li-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia, jolloin saatiin 70 mg otsikon mukaista yhdistettä.

20 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,01 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 25 1,10 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 1,69-2,08 (3H, multipletti); 2,28-2,45 (1H, multipletti); 2,79 (3H, singletti); 2,94-3,12 (2H, multipletti); 30 3,07 (3H, singletti); 3,18-3,64 (5H, multipletti); 4,01-4,11 (2H, multipletti).

68

Esimerkki 23 (lR.5S.6S)-2-r (2S,4S) -2-karbamovvli-l - (2-hvdroksietvvli)-1-metyyli-pvrrolidinium-4-wlitiol -6- f flR') -hvdroksietwlil -1-metvvli-l-karbapen-5 2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 7 kuvattua menetelmää, jonka vaiheessa (1) käytettiin kuitenkin 0,37 g (2S,4S)-2-karbamoyy-li-1-(2-hydroksietyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipyrroli-10 dinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 16" kuvatulla tavalla) ja vaiheessa (2) 260 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli - 2-okso-1-karbapenaami-3-karboksy-laattia, jolloin saatiin 17 mg otsikon mukaista yhdistettä.

15 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 298.

Esimerkki 24 20 (1R.5S.6S)-2-Q-metvvlikinuklidinium-3-vvlitio)-6-f(1R)-1-hvdroksi- etvvlil-l-metvvli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti 24-(1) Esimerkissä 7- (1) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 1,08 g 3-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylikinuklidinium-25 fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 17" kuvatulla tavalla), 3,12 ml anisolia, 15 ml trifluorietikkahappoa ja 278 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa, jolloin raakatuotteena saatiin 880 mg 3-merkapto-l-metyylikinuklidiniumsuolaa öljynä.

30 24-(2) 135 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 160 μΐ difenyylifosfo- ryylikloridia lisättiin samanaikaisesti liuokseen, joka sisälsi 268 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyy-li-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia liuotettuna 3 ml:aan kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 35 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseokseen lisättiin 185 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 271 mg edellä vaiheessa (1) saatua suolaa liuotettuna 2 ml:aan kuivaa asetonitrii- 69 91258 liä. Tämän jälkeen toistettiin esimerkissä 21-(2) kuvattu käsittely, jolloin saatiin 35 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Xmax nm: 5 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,02 (3H, dupletti, J - 7,32 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J - 6,60 Hz); 10 1,66-2,32 (5H, multipletti); 2,80 (3H, singletti) 2,98-3,36 (7H, multipletti); 3,57-3,73 (2H, multipletti); 4,00-4,12 (2H, multipletti).

15

Esimerkki 25 (lR.5S.6S~)-2-f (6S.8S)-1.4-dimetvvli-5-okso-4-atsa-l-atsoniabisvklo-f4 . 3 .01non-8-vvlitiol-6-Γ(1R)-1-hvdroksietvvlil-1-metyyli-l-karbaoen-20 2-eemi-3-karboksvlaatti 25-(1) Esimerkissä 7-(1) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 841 mg (6S,8S)-1,4-dimetyyli-8-(4-metoksibentsyylitio)-5-okso-4-atsa-1-atsoniabisyklo[4,3,0]nonaani-fluorisulfonaattia (val-25 mistettu kohdassa "valmistus 18" kuvatulla tavalla), 2,17 ml anisolia, 7,70 ml trifluorietikkahappoa ja 386 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa, jolloin raakatuotteena saatiin 700 mg (6.S, 8S)-1,4-dimetyyli-8-merkap-to-5-okso-4-atsa-l-atsoniabisyklo[4,3,0]nonaanisuolaa öljynä.

30 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 2,18 (1H, triplettien dupletti, J - 13,92 & 9,16 Hz); 2,85 (3H, singletti); 2,86-3,04 (1H, multipletti); 3,16 (3H, singletti); 35 3,51-3,90 (6H, multipletti); 3,98 (1H, duplettien dupletti, J - 12,09, 7,69 Hz); 4,26 (1H, tripletti, J - 8,61 Hz).

70 25-(2) 183 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja 218 μΐ difenyylifosfo- ryylikloridia lisättiin samanaikaisesti jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 362 mg 4-nitrobentsyyli-(1R,5R,6S)-6-[(1R)-1-hyd-roksietyyli]-1-metyyli-2-okso-1-karbapenaami-3-karboksylaattia liuo-5 tettuna 5 ml:aan kuivaa asetonitriiliä, ja tätä seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä jäissä jäähdytettyyn reaktioseokseen lisättiin 209 μΐ diisopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 420 mg edellä vaiheessa (1) saatua suolaa 3 ml:ssa kuivaa asetonitriiliä. Tämän jälkeen toistet-10 tiin esimerkissä 20-(2) kuvattu käsittely, jolloin saatiin 195 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 295,2.

15

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J - 6,59 Hz); 2,23-2,37 (1H, multipletti); 20 2,86 (3H, singletti); 2,96-3,14 (2H, multipletti), 3,20 (3H, singletti); 3,31 (1H, duplettien dupletti, J - 5,86, 2,93 Hz); 3,74-3,80 (4H, multipletti); 25 3,83-4,12 (5H, multipletti); 4,34 (1H, tripletti, J - 7,88 Hz).

Esimerkki 26 30 (1R. 5S . 6S~) - 2- f (2RS .431) -1.1-dimetwli-2-metoksikarbonvvlinvrrolidinium- 4-wlitio1 - 6- f (1R) -1-hvdroksietvvli 1 -1-metyyli - l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 1 kuvattua menetelmää, 35 jossa käytettiin kuitenkin (2S,4S)-1,l-dimetyyli-4-(4-metoksibents-yylitio)-2-metoksikarbonyylipyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdissa "valmistukset 1-4" kuvattujen menetelmien kaltaisesti), 71 91258 jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 298.

5

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 5 ppm: 1,02, 1,03 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1.10 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 2.27- 2,45 (1H, multipletti); 10 2,83-3,32 (3H, multipletti); 3,01, 3,14 (3H, singletti); 3,19, 3,22 (3H, singletti); 3,53-3,77 (1H, multipletti); 3,69 (3H, singletti); 15 3,88-4,12 (4H, multipletti); 4,48 (0,5H, duplettien dupletti, J - 11,35 & 7,69 Hz); 4,65 (0,5H, duplettien dupletti, J = 10,44 & 8,61 Hz).

Esimerkki 27 20 (lR.5S,6S)-2-f(2R.4S)-l.1-dimetyyli-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-pvrrolidinium-4-vvlitiol-6-f(1R)-1-hvdroksietvvlil-1-metyyli-1-karba-pen-2-eemi-3-karboksvlaatti 25 Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 4 kuvattua menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin (2R,4S)-1,l-dimetyyli-2-(N,N-dimetyyli-karbamoyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 23" kuvatulla tavalla), jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

30

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Xmax nm; 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 35 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 1.10 (3H, dupletti, J - 6,22 Hz); 2.28- 2,41 (1H, multipletti); 72 2,68-2,80 (1H, multipletti) ; 2,82 (3H, singletti) ; 3.01 (3H, singletti); 3.03 (3H, singletti); 5 3,05-3,16 (1H, multipletti); 3,18 (3H, singletti); 3,29 (1H, duplettien dupletti, J - 6,23 & 2,94 Hz); 3,50-3,58 (1H, multipletti); 4,01-4,18 (4H, multipletti); 10 4,91 (1H, duplettien dupletti, J - 7,69 & 6,23 Hz).

Esimerkki 28 (lR.5S.6S)-2- f (2R.4S)- 2 -karbamovvli -1. l-dimetyvlipyrrolidinium^-15 vvlitio1-6-f(1R)-1-hvdroksietyyli 1 -1-metyyli -1-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 1 kuvattua menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin (2R,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibents-20 yylitio)-1,1-dimetyylipyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 22" kuvatulla tavalla), jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 25 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1.03 (3H, dupletti, J - 6,96 Hz); 1,10 (3H, dupletti, J - 6,22 Hz); 30 2,28-2,41 (1H, multipletti); 2,74-2,88 (1H, multipletti); 3.02 (3H, singletti); 3,07-3,18 (1H, multipletti); 3,22 (3H, singletti); 35 3,29 (1H, duplettien dupletti, J = 6,23 & 2,57 Hz); 3,52-3,63 (1H, multipletti); 3,98-4,17 (4H, multipletti); 73 91258 4,39 (1H, tripletti, J - 8,06 Hz).

Esimerkki 29 5 (1R. 5S. 6S) -2- f (2S .4S1) -2-svklopropvvlikarbamovvli-l. 1-dimetvvli-pvrro- lidinium-4-vvlitiol-6-Γ(1R)-1-hvdroksietvvli1 -1-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 3 kuvattua menetelmää, 10 jossa käytettiin kuitenkin (2S,4S)-2-syklopropyylikarbamoyyli-l,1-dimetyyli-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaattia (valmistettu kohdassa "valmistus 24” kuvatulla tavalla), jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

15 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 297.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 0,37-0,42 (2H, multipletti); 20 0,59-0,64 (2H, multipletti); 1,01 (3H, dupletti, J - 7,32 Hz); 1.09 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 2,17-2,29 (1H, multipletti); 2,47-2,55 (1H, multipletti); 25 2,80-3,13 (2H, multipletti); 3,05 (3H, singletti); 3.09 (3H, singletti); 3,28 (1H, duplettien dupletti, J - 6,05 & 2,75 Hz); 3,69 (1H, duplettien dupletti, J - 12,09 & 6,05 Hz); 30 3,84-4,10 (5H, multipletti).

Esimerkki 30 CIR. 5S . 6S~) - 2- (1. l-dimetvvliatsetidinium-3-wl itio')-6-f(lR')-l-35 hvdroksietyyli)-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 5 kuvattua menetelmää, 74 jossa käytettiin kuitenkin 1,l-dimetyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-atsetidinium-fluorisulfonaattia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

5 Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 297.

Esimerkki 31 10 (lR,5S.6S)-2- (4.4-dimetvvlimorfolinium-2-vvlimetwi itiö) - 6 - f(1R)- 1-hvdroksietvvlil-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi- 3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 5 kuvattua menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin 4,4-dimetyyli-2-(4-metoksibentsyylitio)-15 metyylimorfolinium-fluorisulfonaattia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Amax nm: 298.

20

Esimerkki 32 (lR.5S.6S)-2-f(6S.8S)-5-okso-l-metvvli-4-atsa-l-atsoniabisvklo-Γ4,3,01non-8-vvlitio1-6-f(1R)-1-hvdroksietvvlil-1-metvvli-l-karbapen-25 2-eemi-3-karboksvlaatti Tässä esimerkissä noudatettiin esimerkissä 25 kuvattua menetelmää, jossa käytettiin kuitenkin (6S,8S)-5-okso-8-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyyli-4-atsa-l-atsoniabisyklo[4,3,0]nonaani- fluorisulfonaattia 30 (valmistettu kohdassa "valmistus 25" kuvatulla tavalla), jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä.

Ultraviolettisäteilyn absorptiospektri (H20) Ämax nm: 296.

35

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,02 (3H, dupletti, J - 7,33 Hz); 75 91258 1,09 (3H, dupletti, J - 6,23 Hz); 2,23-2,37 (1H, multipletti); 2,94-3,27 (2H, multipletti); 3,19 (3H, singletti); 5 3,30 (1H, duplettien dupletti, J - 6,23 & 2,94 Hz); 3,45-3,93 (5H, multipletti); 3.96- 4,13 (4H, multipletti); 4,32 (1H, tripletti, J - 8,24 Hz).

10 Valmistus 1 (2S,4S)- 2-karbamowli-4 -(4-metoksibentsvylitio)-1.1-dimetvvlipvrro-lidinium-fluorisulfonaatti 15 1-(1) (2S.4R)-1-t-butoksikarbonvvli)-4-hvdroksi-2-pvrrolidiinikar- bokswlihappo 27,3 g natriumhydroksidia liuotettiin 380 ml:aan vettä ja tähän liuokseen lisättiin 3-5 °C:n lämpötilassa 85 g (2S,4R)-4-hydroksi-2-pyrro-20 lidiinikarboksyylihappoa, ja sitten samassa lämpötilassa 570 ml tetra-hydrofuraania. Reaktioseokseen lisättiin 3-5 °C:n lämpötilassa liuos, joka sisälsi 141,5 g di-t-butoksikarbonaattia 190 ml:ssa tetrahydrofu-raania, ja sitten seosta sekoitettiin 50-55 °C:n lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos jäähdytettiin ja sitten sen pH 25 asetettiin alueella 3-4 olevaan arvoon lisäämällä väkevää kloorivety-happoa ja sitten ammoniumkloridia. Sitten seos uutettiin tetrahydrofu-raanilla ja uute kuivattiin. Sitten liuotin poistettiin uutteesta tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 128 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

30

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,44 (9H, singletti); 1.96- 2,45 (2H, multipletti); 2,36-2,72 (2H, multipletti); 35 4,24-4,66 (2H, multipletti); 5,04-5,60 (2H, leveä singletti).

76 1- (2) (2S .4R) -l-t-butoksikarbonvvli-2-karbamovvli-4-hvdroksipvrro- lidiini 58 g (2S,4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-hydroksi-2-pyrrolidiinikarbok-5 syylihappoa [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] liuotettiin 850 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania ja sitten tähän seokseen lisättiin -15 - -20 °C:n lämpötilassa 38,2 ml trietyyliamiinia. Sitten tähän seokseen lisättiin -15 - -20 °C:ssa pisaroittain liuos, joka sisälsi 26,3 ml etyylikloroformaattia 240 ml:ssa kuivaa tetrahydrofu-10 raania, ja sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 35 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä seokseen lisättiin -15 --20 “C:n lämpötilassa 258 ml ammoniumhydroksidin 28 w/v-% vesiliuosta ja seoksen annettiin seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Sitten reak-tioseokseen lisättiin ammoniumkloridia ja se uutettiin tämän jälkeen 15 tetrahydrofuraanilla. Uute kuivattiin ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena ollutta jäännöstä hierottiin dietyylieetterin kanssa kiteytymisen käynnistämiseksi. Kiteet otettiin talteen suodattamalla ja ne pestiin dietyylieetterillä, jolloin saatiin 49,7 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden 20 sulamispiste oli 146-148 eC.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfok-sidi, 60 MHz) S ppm: 1,38 (9H, singletti); 1,65-2,24 (2H, multipletti); 25 3,00-3,66 (2H, multipletti); 3,76-4,49 (3H, multipletti); 6,78 (1H, leveä singletti); 7,23 (1H, leveä singletti).

30 1-(3) (2S.4R)-1-(t-butoksikarbonvvli)-2-karbamovvli-4-metaanisul- fonvvlioksipvrrolidiini 1,85 ml metaanisulfonyylikloridia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 5,0 g (2S,4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-2-karbamo-35 yyli-4-hydroksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (2) kuvatulla tavalla] 250 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, minkä jälkeen siihen lisättiin 3,31 ml trietyyliamiinia. Sitten seosta sekoitettiin 77 91258 0-5 eC:n lämpötilassa tunnin ajan, minkä jälkeen se kaadettiin nat-riumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa pai-5 neessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 9:1), jolloin saatiin 5,5 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 8 ppm: 10 1,43 (9H, singletti); 2.10- 2,68 (2H, multipletti); 3,12 (3H, singletti); 3.10- 3,40 (1H, leveä singletti); 3,73 (2H, dupletti, J - 4,0 Hz); 15 4,32 (1H, tripletti, J - 7,0 Hz); 5,26 (1H, tripletti, J - 4,0 Hz); 6,68 (1H, leveä singletti); 7,30 (1H, leveä singletti).

20 1-(4) (2S ,4R) -1- (t-butoksikarbonvvli) -2-karbamowli-4 - (4-metoksi- bentsvvlitiö)pyrrolidiini 330 mg natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 1,18 g 25 p-metoksibentsyylimerkaptaania 25 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajan päätyttyä seokseen lisättiin 2,14 g (2S,4R)-1-(t-butoksikarbonyy-li)-2-karbamoyyli-4-metaanisulfonyylioksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (3) kuvatulla tavalla], ja sitten seosta sekoitettiin 30 huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Sitten reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin 35 sykioheksäänin ja etyyliasetaatin seoksella (tilavuussuhde 2:3), jolloin saatiin 1,94 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

78

Ydininagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1.43 (9H, singletti); 1,80-3,42 (5H, multipletti) ; 3,70 (2H, singletti); 5 3,78 (3H, singletti); 4,18 (1H, tripletti, J - 7,0 Hz); 5,96 (1H, leveä singletti); 6,35 (1H, leveä singletti); 6,79, 7,21 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

10 1- (5) (2S.4S) -2-karbamovvli-4- (4-metoksibentsvvlitio)Dvrrolidiini 1,92 g (2S,4S)-1-(t-butoksikarbonyyli)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksi-bentsyylitio)pyrrolidiiniä [valmistettu edellä vaiheessa (4) kuva-15 tulla tavalla] liuotettiin 25 ml:aan etyyliasetaattia ja tähän liuokseen, jota jäähdytettiin jäissä, lisättiin 26,2 ml kloorivedyn 4N dioksaaniliuosta. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 2 tuntia ja huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen sen 20 tekemiseksi heikosti happamaksi ja sitten se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,36 g otsikon mukaista yhdistettä jauheena, jonka sulamispiste oli 120-121 °C.

25

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfok-sidi, 60 MHz) δ ppm: 1,58-3,40 (7H, multipletti); 1,67 (2H, singletti); 30 1,78 (3H, singletti); 6.43 (1H, leveä singletti); 6,78 (7,22 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,31 (1H, leveä singletti).

35 79 91258 1- (53) (2S.4S) -2-karbamovvli-4- (4-metoksibentsvvlitio)pvrrolidiini-hvdrokloridi 620 ml kloorivedyn 4N liuosta etyyliasetaatissa lisättiin jäissä jääh-5 dytettyyn liuokseen, joka sisälsi 91 g (2S,4S)-1-t-butoksikarbonyyli- 2- karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (4) kuvatulla tavalla] 2 litrassa etyyliasetaattia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4,5 tuntia. Saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, ne pestiin dietyyli- 10 eetterillä ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 63 g otsikon mukaista yhdistettä, jonka sulamispiste oli 192-195 eC.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) i>max cm'1: 1706, 1584, 1512.

15

Ydirunagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,75-1,90 (1H, multipletti); 2,54-2,62 (1H, multipletti); 3,04-3,11 (1H, multipletti); 20 3,28-3,41 (2H, multipletti); 3.64 (2H, singletti); 3.65 (3H, singletti); 4,22 (1H, tripletti, J - 8,06 Hz); 6,80, 7,15 (4H;, A2B2, J - 8,79 Hz).

25 1-(6a) (2S,4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-l-metwli- pvrrolidiini

Liuos, joka sisälsi 0,29 g natriumbikarbonaattia 3 ml:ssa vettä, ja 30 0,34 ml 35 % formaliinia, lisättiin pisaroittain tässä järjestyksessä jäissä jäähdytettyyn suspensioon, joka sisälsi 1 g edellä vaiheessa 1-(5a) saatua yhdistettä 20 ml:ssa asetonitriiliä, ja tämän jälkeen seosta sekoitettiin 10 °C:n lämpötilassa 20 minuuttia. Sitten tähän seokseen, jota jäähdytettiin jäissä, lisättiin 0,25 g natriumsyano-35 boorihydridiä ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 minuuttia. Tähän seokseen lisättiin jäissä jäähdyttäen 0,5 ml etikkahapoa ja sitten sitä sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 minuuttia. Tämän 80 ajanjakson päätyttyä seos laimennettiin 100 ml:11a etyyliasetaattia ja se pestiin peräkkäin natriumhydroksidin IN vesiliuoksen ja natrium-kloridin kylläisen vesiliuoksen seoksella (tilavuussuhde 1:1) ja sitten natriumkloridin kylläisellä vesiliuoksella. Sitten orgaaninen 5 faasi kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pyl-väskromatografisesti silikageelillä (Wakogel C-100, Wako Junyaku), jota eluoitiin kloroformin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 95:5), jolloin saatiin 0,92 g otsikon mukaista yhdistettä. Tämän yh-10 disteen sulamispiste, infrapunasäteilyn absorptiospektri ja ydinmag-neettisen resonanssin spektri olivat samat kuin seuraavassa kohdassa l-(6) kuvatulla tavalla saadun yhdisteen tapauksessa.

1-(6) (25.45^-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1-metyyli- 15 pvrrolidiini 0,07 ml metyylijodidia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 0,6 g (2S.,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrro-lidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (5) kuvatulla tavalla] liuotet-20 tuna 4,5 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia. Sitten tätä seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 5 minuuttia ja huoneen lämpötilassa 20 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja se kui-25 vattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja sitten jäännös käsiteltiin pylväs-kromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck, LiChroprep Si60, koko B), jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 9:1), jolloin saatiin 252 mg otsikon mukaista yhdistettä 30 kiteinä, joiden sulamispiste oli 113-114 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) uroax cm'1: 1636, 1609, 1512.

35 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,58-3,36 (6H, multipletti); 2,35 (3H, singletti); 81 91258 3.68 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 5,95 (1H, leveä singletti); 6,84, 7,23 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 5 7,20 (1H, leveä singletti).

1-(7) (25.451) - 2-karbatnovvli-4- (4-metoksibentsvvlitio)-l.l-dimetwli- pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 10 0,123 ml metyylisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuok seen, joka sisälsi 320 mg (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyyli-tio) -1-metyylipyrrolidiiniä [valmistettu edellä vaiheessa (6) tai (6a) kuvatulla tavalla] liuotettuna 7 ml:aan kuivaa metyleenikloridia.

Sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 20 minuuttia ja 15 huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin useaan kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja sitten se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 525 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

20

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 2,01-3,68 (5H, multipletti) ; 3.02 (3H, singletti); 3.03 (3H, singletti); 25 3,65 (3H, singletti); 3.68 (2H, singletti); 4,07 (1H, duplettien dupletti, J - 8,43 & 7,70 Hz); 6,81, 7,16 (4H, A2B2, J - 8,79 Hz).

30 82

Valmistus 2 (2S.4S) -2-karbamowli-4- (4-metoksibentsvvlitio) -1- (^-fluorietvvli) -1-metwlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 2- (11 (2S .43) -2-karbamowli-4- (4-metoksibentswlitio) -1- C2-fluori- etvvlDDvrrolidiini 0,4 ml l-bromi-2-fluorietaania, 3,83 g natriumjodidia ja 0,38 g nat-10 riumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1,2 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrro-lidiiniä liuotettuna 12 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia, ja tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 minuuttia ja sitten 40 eC:n lämpötilassa 20 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos 15 kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin kylläisellä vesi-liuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti silikageelillä (Katayma Chemicals 20 Industries Co., Silikageeli 60K070). Etyyliasetaatilla eluoiduista fraktioista saatiin 838 mg otsikon mukaista yhdistettä jauheena, jonka sulamispiste oli 122-123 ”C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm-1: 25 1636, 1610, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 5 ppm: 1,55-3,40 (8H, multipletti) ; 3,69 (2H, singletti); 30 3,79 (3H, singletti); 4,47 (2H, triplettien dupletti, J - 47,0 & 6,0 Hz); 4,78 (1H, leveä singletti); 7,02 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 6,95-7,50 (1H, leveä singletti).

35 83 91258 2- (2) (2S.4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-1-(2-fluori-etwli)-1-metvvlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 0,17 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn li-5 uokseen, joka sisälsi 630 mg (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibent-syylitio)-1-(2-fluorietyyli)-pyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] liuotettuna 12 mlraan kuivaa metyleenik-loridia. Seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä 10 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin useaan kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 850 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

15 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,84-4,73 (10 H, multipletti); 3,18 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 20 6,79-7,19 (4H, multipletti).

Valmistus 3 (25.45)-1.l-dimetvvli-2-metvvlikarbamovvli-4 - (4-metoksibentswlitio)-25 pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 3- (1) (2S,4R) -1- (t-butoksikarbonvvli) -2-metvvlikarbamowli-4-hvdr-oksipvrrolidiini 30 9,91 ml trietyyliamiinia lisättiin -40 °C:n läämpötilassa liuokseen, joka sisälsi 15,03 g (2S.4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-hydroksi-2-pyrrolidiinikarboksyylihappoa liuotettuna 250 mlraan kuivaa tetrahyd-rofuraania, ja tämän jälkeen saatuun liuokseen lisättiin -30 --40 °C:n lämpötilassa liuos, joka sisälsi 6,81 ml etyylikloroformaat-35 tia 30 mlrssa kuivaa tetrahydrofuraania. Sitten reaktioseosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Reaktioseokseen lisättiin sitten -20 eC:n lämpötilassa 16,82 ml metyyliamiinin 84 40 til.-%:sta vesiliuosta, ja sitten sen lämpötilan annettiin nousta huoneen lämpötilaan; reaktion annettiin jatkua vielä tunnin ajan.

Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseokseen sekoitettiin pieni määrä natriumkloridin vesiliuosta ja se uutettiin kolmasti etyyliasetaa-5 tiliä. Yhdistetyt uutteet pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 12,76 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

10 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,44 (9H, singletti); 1,89-2,45 (2H, multipletti); 2.81 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,23-3,71 (3H, multipletti); 15 4,12-4,68 (2H, multipletti); 6,70 (1H, leveä singletti).

3- (2) (2S .4R) -1- f t-butoksikarbonvvli) -4-metaanisulfonwlioksi-2- metyvlikarbamovvli-Dyrrolidiini 20 7,11 ml trietyyliamiinia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 11,29 g (2S,4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-2-metyylikarba-moyyli-4-hydroksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] liuotettuna 120 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja 25 täten saatuun seokseen lisättiin 3,93 ml metaanisulfonyylikloridia ja sitä sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten 15 ®C:n lämpötilassa 30 minuuttia. Sitten seos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesium-30 sulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 11,58 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,46 (9H, singletti); 35 2,00-2,85 (2H, multipletti); 2.81 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,03 (3H, singletti); 85 91258 3,41-5,42 (4H, multipletti); 6,75 (1H, leveä singletti).

3- (3^ (25.45)-1-( t-butoksikarbonwli-) - 4- (4-metoksibentsvvlitio^ - 2-5 metwlikarbamovvlipvrrolidiinl 1,80 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 5,70 ml 4- metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 100 ml:aan kuivaa tetrahyd-10 rofuraania ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajan päätyttyä seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 11,00 g (2S,4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-metaanisulfonyyli-oksi-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (2) kuvatulla tavalla] 80 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten 15 seosta sekoitettiin 34 °C:n lämpötilassa 4,5 tuntia. Sitten reaktio-seos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti 20 silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja heksaanin seoksella (tilavuussuhde 5:1), jolloin saatiin 4,35 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 25 1,42 (9H, singletti); 1,80-4,40 (6H, multipletti); 2,81 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,70 (2H, singletti); 3,79 (3H, singletti); 30 6,39 (1H, leveä singletti); 6,87, 7,26 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

3- (4) (2S.4S) -4- (4-metoksibentsvvlitio) -2-metwlikarbamowlipvrro- lidiini 35 52,5 ml kloorivedyn 4N dioksaaniliuosta lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 4,00 g (2S.4S)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-(4- 86 metoksibentsyylitio)-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (3) kuvatulla tavalla] liuotettuna 50 ml:aan etyyliasetaattia. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 2 tuntia ja huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä se 5 kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen sen tekemiseksi heikosti happamaksi ja sitten se uutettiin etyyliasetaatilla. Vesikerros kyllästettiin ammoniumkloridilla ja uutettiin sitten tetra-hydrofuraanilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin 10 tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskroma-tografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja meta-nolin seoksella (tilavuussuhde 5:1), jolloin saatiin 2,34 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 53-54 °C.

15

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 8 ppm: 1,42-3,89 (6H, multipletti); 2,74 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,66 (2H, singletti); 20 3,76 (3H, singletti); 6,79, 7,17 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,03-7,75 (2H, multipletti).

3-(5) (2S.4S)-4-(4-metoksibentsvvlitio)-l-metvvli-2-metvvlikarba- 25 mowlipyrrolidiini 244 μΐ metyylijodidia ja 300 mg natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1,00 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio) - 2 -metyylikarbamoyylipyrrolidiiniä [valmistettu edellä vai-30 heessa (4) kuvatulla tavalla] liuotettuna 6 ml:aan kuivaa dimetyyli-formamidia. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa tunnin ajan ja sen annettiin seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesi-35 liuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin 87 91258 etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 10:1), jolloin saatiin 222 mg otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 82-84 °C.

5 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm-1: 1655, 1512, 1251.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6ppm: 1,45-3,91 (6H, multipletti); 10 2,31 (3H, singletti); 2,80 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,66 (2H, singletti); 3,77 (3H, singletti); 6,81, 7,20 (4H, A2B2, J « 9,0 Hz); 15 6,85-7,60 (1H, multipletti).

3 - (6) (2S .4S) -1. l-dimetwli^-metwlikarbamovvli^ - (4-metoksibent- svvlitio)pvrrolidinium-fluorisulfaatti 20 280 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdyttäen liuok seen, joka sisälsi 210 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyy-li-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (5) kuvatulla tavalla] liuotettuna 30 ml:aan metyleenikloridia. Seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten huoneen 25 lämpötilassa 5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin useaan kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 281 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

30

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) i>max cm*1: 1681, 1512, 1248.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) 8 ppm: 35 1,95-2,43 (2H, multipletti); 2,62 (3H, singletti); 2,61-3,88 (3H, multipletti); 88 3,03 (3H, singletti); 3,10 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 5 4,12 (1H, tripletti, J - 8,06 Hz); 6,83, 7,12 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

Valmistus 4 10 i2S.4S)-1.1-dimetyyli-2-(N.N-dimetwlikarbamovvli)-4-(4-metoksibent- syylitio^pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 4-(1) (2S.4R)-1- (t-butoksikarbonvvli) -2 - (N. N-dimetvvlikarbamowli) - 4-hvdroksipvrrolidiini 15 3,84 ml trietyyliamiinia lisättiin -15 - -20 °C:n lämpötilassa liuokseen, joka sisälsi 5,8 g (2S.,4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)-4-hydroksi-2-pyrrolidiinikarboksyylihappoa liuotettuna 85 ml:aan kuivaa tetra-hydrofuraania, ja sitten tuloksena olleeseen seokseen lisättiin tässä 20 samassa lämpötilassa liuos, joka sisälsi 2,63 ml etyylikloroformaattia 25 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania. Sitten reaktioseosta sekoitettiin 2 tuntia, minkä jälkeen siihen lisättiin -20 - -25 °C:n lämpötilassa 19,75 ml dimetyyliamiinin 50 til.-%:sta vesiliuosta. Sitten seosta sekoitettiin 3 tuntia jäissä jäähdyttäen, minkä jälkeen sen annettiin 25 seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän ajanjakson kuluttua seos kaadettiin seokseen, joka sisälsi 30 ml väkevää kloorivetyhappoa ja jäätä, ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti 30 silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 9:1), jolloin saatiin 429 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 35 1,42 (9H, singletti); 1,86-2,34 (2H, multipletti); 2,58-2,95 (1H, multipletti); 89 91258 2.97 (3H, multipletti); 3,10 (3H, singletti); 3,43-3,74 (2H, multipletti); 4,36-5,00 (2H, multipletti).

5 4-(21) (2S .4111) -1- (t-butoksikarbonvvli) -2- (N.N-dimetvvlikarbamowli) - metaanisulfonvvlioksipvrrolidiini 297 μΐ metaanisulfonyylikloridia ja sitten 537 μΐ trietyyliamiinia 10 lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 993 mg (2S,4g)-1-(t-butoksikarbonyyli)-2*(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-4-hydroksipyrro-lidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] liuotettuna 20 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania. Seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa tunnin ajan ja sitten huoneen lämpötilassa tunnin ajan.

15 Tämän ajan päätyttyä seos jatkokäsiteltiin kohdassa "valmistus l-(3)" kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 1,05 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 5 ppm: 20 1,43 (9H, singletti); 2.15- 2,60 (2H, multipletti); 2.97 (3H, singletti); 3,07 (3H, singletti); 3,10, 3,13 (yhdessä 3H, kukin singletti); 25 3,83 (2H, dupletti, J - 4,0 Hz); 4,63-5,03 (1H, multipletti); 5.15- 5,46 (1H, multipletti).

4-(3) (2S.4S)-1- (t-butoksikarbamovvli) -2 - (N.N-dimetvvlikarbamowli) - 30 4-(4-metoksibentsvvlitiö)pyrrolidiini 151 mg natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 532 mg 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 10 ml:aan kuivaa dimetyy-35 liformamidia. Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia, minkä jälkeen seokseen lisättiin 1,05 g (2S.4R)-1-(t-butoksikarbonyyli)- 2-(Ν,Ν-dimetyylikarbamoyyli)-4-metaanisulfonyyli- 90 oksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (2) kuvatulla tavalla], Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten 40 °C:ssa 6 tuntia. Tämän ajanjakson kuluttua reaktioseos käsiteltiin ja puhdistettiin kohdassa "valmistus l-(4)" kuvatulla tavalla, 5 jolloin saatiin 385 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm-1: 1690, 1660, 1605, 1585, 1515.

10 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,35 ja 1,38 (9H, singletti); 1,55-3,37 (5H, multipletti); 2,93 (3H, singletti); 3,00 (3H, singletti); 15 3,68 (2H, singletti); 3,77 (3H, singletti); 4,30-4,75 (1H, multipletti); 6,85, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

20 4- (4) (2S.4S)-2- (N.N-dimetvvlikarbamovvli)- 4- (4-metoksibentswli- tio)pvrrolidiini 1 ml kloorivedyn 4N dioksaaniliuosta lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 385 mg (2S ,4S)-1-(t-butoksikarbonyyli)-2-25 (N,N-dimetyylikarbamoyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (3) kuvatulla tavalla] liuotettuna 1 ml:aan etyyliasetaattia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen sen tekemiseksi heikosti 30 happamaksi ja sitten se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 35 1:2), jolloin saatiin 163 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

91 91258

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 3300, 1640, 1605, 1590, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 5 1,21-1,78 (2H, multipletti); 2,09-3,98 (5H, multipletti); 2,94 (6H, singletti); 3,64 (2H, singletti); 3,74 (3H, singletti); 10 6,81, 7,21 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

4-(51) (2S.4S)-2-(N. N-dimetvvlikarbamovvli,> - 4- (^-metoksibentswli - tio') -1-metvvlipvrrolidiini 15 41 μΐ metyylijodidia ja 84 mg natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 163 mg (2S,4S)-2-(N,N-dimetyy-likarbamoyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiiniä [valmistettu edellä vaiheessa (4) kuvatulla tavalla] liuotettuna 1,5 mlraan kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpöti-20 lassa 4 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläisen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti 25 Lobar-kolonnilla (Merck, LiChroprep Si60, koko A). Fraktioista, jotka oli eluoitu etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 3:1), saatiin 45 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) vmax cm*1: 30 1640, 1607, 1580, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,56-2,18 (2H, multipletti); 2,20-3,60 (4H, multipletti); 35 2,34 (3H, singletti); 2,96 (3H, singletti); 3,10 (3H, singletti); 92 3.70 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,82, 7,22 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

5 4-(6) Metwli-1-(t-butoksikarbonvvlioksi)-4-hvdroksiprolinaatti 2.2 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraaliöljyssä) lisättiin 0-5 ®C:n lämpötilassa liuokseen, joka sisälsi 1,15 g 1-(t-butoksikarbonyyli)-4-hydroksiproliinia liuotettuna 100 ml:aan 10 kuivaa dimetyyliformamidia. Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia, minkä jälkeen se jäähdytettiin 0-5 °C:n lämpötilaan ja siihen lisättiin 3,42 ml metyylijodidia. Sitten reaktioseoksen annettiin seisoa yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktio-seos kaadettiin natriumkloridin kylläiseen vesiliuokseen ja se uutet-15 tiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin, ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (tilavuussuhde 1:1), jolloin saatiin 6,1 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

20

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 3430, 1750, 1700, 1670.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 25 1,41 (9H, singletti); 1,78-2,84 (3H, multipletti); 3,58 (2H, dupletti, J - 4,0 Hz); 3.71 (3H, singletti); 4,18-4,62 (2H, multipletti).

30 4-(7) (2S.4R)-1-(t-butoksikarbonvvli)-4-metaanisulfonvvlioksi-2- metoks ikarbonvvljpvrrolidi ini 2.02 ml metaanisulfonyylikloridia ja sitten 3,65 ml trietyyliamiinia 35 lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 6,1 g l-(t- butoksikarbonyyli)-4-hydroksiprolinaattia [valmistettu edellä vaiheessa (6) kuvatulla tavalla] liuotettuna 120 ml:aan kuivaa tetrahyd- 93 91258 rofuraania. Sitten seosta sekoitettiin ensin 0-5 °C:n lämpötilassa tunnin ajan ja tämän jälkeen huoneen lämpötilassa tunnin ajan, minkä jälkeen se kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivat-5 tiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 8,13 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 10 1,47 (9H, singletti); 1,74-2,85 (2H, multipletti); 3,08 (3H, singletti); 3,79 (3H, singletti); 3,81 (2H, dupletti, J - 4,0 Hz); 15 4,15-4,65 (1H, multipletti); 5,12-5,41 (1H, multipletti). 1 - (8) (2S,4S)-1- (t-butoksikarbonvvli) - 4- (4-metoksibentswlitio) -2- metoksikarbonvvlipvrrolidiini 20 1,11 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 3,51 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 60 millilitraan kuivaa dimetyyliformamidia ja sitten seosta sekoitettiin huoneen läm-25 pötilassa 30 minuuttia. Tämän ajan päätyttyä seokseen lisättiin pisa-roittain liuos, joka sisälsi 8,13 g (2S.4S)-1-(t-butoksikarbonyyli)- 4-metaanisulfonyylioksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (7) kuvatulla tavalla] 20 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 15 minuuttia ja sen jälkeen 30 40 °C:n lämpötilassa 4 tuntia. Sitten reaktioseos kaadettiin natrium kloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellä, kuivattiin ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (tilavuussuhde 35 15:1), jolloin saatiin 6,89 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

94

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm’1: 1745, 1690, 1605, 1580, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 5 1,40 (9H, singletti); 1,71-3,48 (5H, multipletti); 3.71 (3H, singletti); 3.78 (2H, singletti); 4,01-4,45 (1H, multipletti); 10 6,85, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

4-(9) (2S,4S)-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2-metoksikarbonvvlipvrro- lidiini 15 27,3 ml kloorivedyn 4N etyyliasetaattiliuosta lisättiin jäissä jäähdy tettyyn liuokseen, joka sisälsi 5,22 g (2S,4S)-1-(t-butoksikarbonyy-li)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbonyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (8) kuvatulla tavalla] liuotettuna 14 ml:aan etyyliasetaattia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen 20 lämpötilassa 1 tunti. Tämän ajanjakson päätyttyä se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 3,3 g otsikon mukaista 25 yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm’1: 3250, 1735, 1610, 1580, 1510.

30 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,56-3,32 (6H, multipletti); 3,67 (2H, singletti); 3.72 (3H, singletti); 3.78 (3H, singletti); 35 3,70-3,99 (1H, multipletti).

95 91258 4-(10) (2S.4S)-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2-roetoksikarbonvvli-l- metwlipvrrolidiini 1,18 g natriumbikarbonaattia ja 0,876 ml metyylijodidia lisättiin 5 jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 3,3 g (2S,4S)-4-(4-metok-sibentsyylitio)-2-metoksikarbonyylipyrrolidiiniä [valmistettu edellä vaiheessa (9) kuvatulla tavalla] liuotettuna 30 ml:aan kuivaa dimetyy-liformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5 tunnin ajan. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin nat-10 riumbikarbonaatin kylläisen vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografi-sesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja bentseenin 15 seoksella (tilavuussuhde 1:2), jolloin saatiin 968 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1740, 1730, 1605, 1580, 1510.

20

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,64-3,34 (6H, multipletti; 2,37 (3H, singletti); 3,70 (2H, singletti); 25 3,81 (3H, singletti); 3,88 (3H, singletti); 6,83, 7,23 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

4-(11) (2S.4S)-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-4-(4-metoksibentsvvli- 30 tio) -1-metwlipvrrolidiini 1,92 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 378 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbonyyli-1-metyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä kohdassa (10) kuvatulla 35 tavalla] liuotettuna 3,84 ml:aan metanolia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos neutraloitiin lisäämällä siihen 1,92 ml kloorivedyn IN vesiliuosta. Sitten 96 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös kuivattiin, jolloin raakatuotteena saatiin (2S,4S)-2-karboksi-4-(4-metok-sibentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia.

5 Tämä raakayhdiste suspendoitiin kokonaisuudessaan 7,3 ml:aan aseto-nitriiliä ja tähän suspensioon lisättiin 318 mg N,N'-karbonyylidi-imidatsolia, minkä jälkeen tuloksena ollutta seosta sekoitettiin 40 °C:n lämpötilassa 1 tunti. Tämän ajanjakson päätyttyä seoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan ja sitten seokseen lisättiin li-10 uos, joka sisälsi 559 mg dimetyyliamiinia 3,7 ml:ssa tetrahydrofurääniä. Seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa yön yli. Liuotin ja liiallinen dimetyyliamiini poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös sekoitettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaa-15 tiliä ja liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin Viite-esimerkissä 4-(5) kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 382 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

4-(12) (2S.4S)-2- (N.N-dimetvvlikarbamovvli) -4 - (4-metoksibentswli- 20 tio)-1.1-dimetvvlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 139 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 190 mg (2S,4S)-2-(N,N-dimetyylikarbamoyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia [valmistettu edellä vai-25 heessa (5) tai (11) kuvatulla tavalla] liuotettuna 3,8 ml:aan mety-leenikloridia, ja tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös pestiin moneen kertaan heksaanilla välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin 30 saatiin 356 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (Dz0, 60 MHz) 5 ppm: 1,58-4,58 (12H, multipletti); 3,07 (6H, singletti); 35 3,84 (3H, singletti); 3,90 (2H, singletti); 6,90, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

97 91258

Valmistus 5 (3S)-1.1-dimetvvli- 3- (4-metoksibentsvvlitiö')pyrrolidinium -fluorisulfo-naatti 5 5-(11 (310 -l-t-butoksikarbonvvli-3-metaanisulfonvvlioksipvrrolidiini 16,91 ml trietyyliamiinia ja 9,36 ml metaanisulfonyylikloridia lisättiin tässä järjestyksessä jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 10 25 g (3R)-l-t-butoksikarbonyyli-3-hydroksipyrrolidiinia liuotettuna 250 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa 30 minuuttia ja sen jälkeen 15 °C:ssa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos kaadettiin natriumkloridin vesi-liuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin 15 vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 3,10 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 20 1,48 (9H, singletti); 1,91-2,45 (2H, multipletti); 3,04 (3H, singletti); 3,26-3,82 (4H, multipletti); 6,1-6,44 (1H, multipletti).

25 5-(2) (3S)-l-t-butoksikarbonvvli-3-(4-metoksibentsvvlitio)pvrro- lidiini 5,32 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-30 öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 316,86 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 200 millilitraan kuivaa dimetyyliformamidia ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajan päätyttyä seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 31,0 g (3R)-1-t-butoksikarbonyyli-3-metaanisulfonyyli-35 oksipyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (1) kuvatulla tavalla] 50 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia. Sitten seosta sekoitettiin 30 minuuttia jäissä jäähdyttäen, minkä jälkeen sen annettiin seisoa 98 yön yli huoneen lämpötilassa. Sitten reaktioseos kaadettiin natrium-kloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa painees-5 sa. Jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota elu-oitiin heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (tilavuussuhde 5:1), jolloin saatiin 28,0 g otsikon mukaista yhdistettä vaalean ruskeana öljynä.

10 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,46 (9H, singletti); 1,50-2,35 (2H, multipletti); 2,81-3,88 (5H, multipletti); 3,70 (2H, singletti); 15 3,79 (3H, singletti); 6,83, 7,27 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz.

5-(3) (3S)- 3 -(4-metoksibentsvvlitio)pvrrolidiini-hvdrokloridi 20 106 ml kloorivedyn 4N etyyliasetaattiliuosta lisättiin jäissä jääh dytettyyn liuokseen, joka sisälsi 27,50 g (3R)-1-t-butoksikarbonyyli-3-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (2) kuvatulla tavalla] liuotettuna 100 ml:aan etyyliasetaattia, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia ja sit-25 ten 25 °C:ssa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos laimennettiin 200 ml :11a di-isopropyylieetteriä ja saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 20,84 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 125-126 °C.

30 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 1510, 1246, 1174.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,52-2,53 (2H, multipletti); 35 2,91-3,70 (5H, multipletti); 3,63 (2H, singletti); 3,67 (3H, singletti); 99 91258 6,80, 7,16 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

5- (4) OS') -3- (4-metoksibetnsvvlitio') -1 -metvvlipvrrolidiini 5 750 mg (3S)-3-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia [valmistettu neut raloimalla 900 mg edellä kohdassa (3) kuvatulla tavalla valmistettua (3S) - 3-(4-metoksibentsyylitiö)pyrrolidiini-hydrokloridia natriumbikarbonaatilla] liuotettiin 15 ml:aan kuivaa asetonitriiliä ja tähän liuokseen lisättiin 1,44 ml formaldehydin 35 til.-% vesiliuosta. Reak-10 tioseosta sekoitettiin sitten 15 minuuttia, minkä jälkeen se neutraloitiin lisäämällä etikkahappoa; sitä sekoitettiin edelleen 2,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin 200 ml:aan etyyliasetaattia ja seos pestiin kaliumhydroksidin 2N vesiluoksella ja natriumkloridin vesiliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin kalium-15 karbonaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 3:1), jolloin saatiin 349 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,40-3,49 (7H, multipletti); 2,33 (3H, singletti); 3,69 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 25 6,86, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

5-(5) (3S) -1. l-dimetvvli-3 - ^-metoksibentsvvlitio'lpvrrolidinium- fluorisulfonaatti 30 118 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuok seen, joka sisälsi 340 mg (3S)-3-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipyr-rolidiinia [valmistettu edellä vaiheessa (4) kuvatulla tavalla] liuotettuna 20 ml:aan metyleenikloridia. Sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 30 minuuttia ja sen jälkeen huoneen lämpötilassa 35 3,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin useaan kertaan dietyylieette-rillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, 100 jolloin saatiin 500 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena .

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 5 1,86-2,05 (1H, multipletti); 2,34-2,56 (1H, multipletti); 2,90 (3H, singletti); 3,01 (3H, singletti); 2,98-3,73 (5H, multipletti); 10 3,65 (3H, singletti); 3,67 (2H, singletti); 6,82, 7,17 (4H, A2B2, J - 8,62 Hz).

Valmistus 6 15 1,1-dimetvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)piperidinium-fluorisulfonaatti 6-(1) 4-metaanisulfonvvlioksi-1-metvvlipiperidiini 20 13,3 ml trietyyliamiinia ja sitten 7,4 ml metaanisulfonyyliklorisia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 10 g 4-hydrok-si-1-metyylipiperidiiniä liuotettuna 100 ml:aan kuivaa tetrahydrofu-raania. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 2 tuntia ja sitten huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia, minkä jälkeen se kaadettiin 25 natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 12,74 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

30

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,74-2,90 (8H, multipletti); 2,28 (3H, singletti); 3,00 (3H, singletti); 35 4,73 (1H, multipletti).

101 91258 6-(2) 4- (4-metoksibentsvvlitio) -l-metvvlipjperidiini 10.9 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettiin 55 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia ja tähän liuokseen lisättiin jäissä jäähdyttäen 5 3,4 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttinen suspensio mineraaliöljys sä). Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia.

Tämän ajanjakson päätyttyä seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 12,6 mg 4-metaanisulfonyylioksi-l-metyylipiperidiiniä 63 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten sen annettiin seisoa yön yli huoneen 10 lämpötilassa. Sitten reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyy-15 liasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 1:4), jolloin saatiin 9,01 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,40-3,05 (9H, multipletti); 20 2,23 (3H, singletti); 3,69 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,82, 7,23 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

25 6- (3) 1. l-dimetvvli-4- (4-metoksibentswlitio)piperidinium-fluori- sulfonaatti 2.9 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 8,95 g 4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipiperi- 30 diiniä liuotettuna 300 ml:aan kuivaa metyleenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa 20 minuuttia ja sen jälkeen huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja se kui-35 vattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 12,76 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä jauheena.

102

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) δ ppm: 1,75-1,93 (2H, multipletti); 2,02-2,15 (2H, multipletti); 2,70-2,84 (2H, multipletti); 5 3,05 (3H, singletti); 3,06 (3H, singletti); 3,24-3,97 (4H, multipletti); 3,74 (3H, singletti); 3,78 (2H, singletti); 10 6,88, 7,26 (4H, A2B2, J - 8,79 Hz).

Valmistus 7 (2S.4S)-2 -(Ν.Ν-dimetvvlikarbamowli)-1-etvvli-1-metyyli-4-(4-metoksi-15 bentsvvlitiö)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 7-(1) (2S,4S)-l-etvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2-metoksikarbon- wlipvrrolidinium-fluorisulfonaatti 20 1,2 g (2S,4S)-l-etyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)- 2-metoksikarbonyyli- pyrrolidiinia [valmistettu kohdassa "valmistus 4-(9)" kuvatulla tavalla] liuotettiin 12 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia, ja tuloksena saatuun liuokseen lisättiin jäissä jäähdyttäen 358 mg natriumbikarbonaattia ja 0,4 ml etyylijodidia. Sitten seosta sekoitettiin huoneen 25 lämpötilassa 6 tuntia ja sen jälkeen 45-50 °C:n lämpötilassa 3 tuntia. Sitten se kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin 30 pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja bentseenin seoksella (tilavuussuhde 1:4), jolloin saatiin 904 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) i>max cm'1: 35 1740, 1615, 1590, 1515.

103 91258

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13> 60 MHz) 6 ppm: 1,03 (3H, tripletti, J - 7,0 Hz); 2,72-3,43 (8H, multipletti); 3,70 (5H, singletti); 5 3,78 (3H, singletti); 6,84, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

7 - (2) (25.45)-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-l-etvvli-4-f4-metoksi- bentsvvlitiö)pyrrolidiini 10 883 mg (2S,4S)-l-etyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbon-yylipyrrolidiinia liuotettiin 8,6 ml:aan metanolia ja tällä tavalla saatuun liuokseen lisättiin 4,3 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta. Seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 2 tuntia, minkä jäl-15 keen se neutraloitiin lisäämällä 4,3 ml kloorivetyhapon IN vesiliuosta. Reaktioseos haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa, jolloin saatiin raakatuote.

Tämä raakayhdiste suspendoitiin 18 ml:aan kuivaa asetonitriiliä ja 20 tähän suspensioon lisättiin 694 mg N,N'-karbodi-imidatsolia. Sitten tuloksena ollutta seosta sekoitettiin 40 °C:n lämpötilassa 1 tunti, minkä jälkeen seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 1,89 ml dimetyy-liamiinia 10 ml:ssa tetrahydrofuraania. Seoksen annettiin seisoa huoneen lämpötilassa yön yli, minkä jälkeen se väkevöitiin haihduttamalla 25 alennetussa paineessa. Jäännös sekoitettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla ja kuivattiin sitten vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck, LiChroprep Si60, koko B). Otsikon mukaista yhdistettä saatiin 30 öljynä fraktioista, jotka oli eluoitu etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 10:1).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1640, 1610, 1585, 1515.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 6 ppm: 1,01 (3H, tripletti, J - 7,0 Hz); 35 104 1,57-3,73 (8H, multipletti); 2,91 (3H, singletti); 3,16 (3H, singletti); 3,70 (2H, singletti); 5 3,78 (3H, singletti); 6,83, 7,27 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

(3)-(2S.4S)-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-1-etvvli-l-metyyli-4-(4- metoksibentswlΐ ti o)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 10 128 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 438 mg (2S,4S)-2-(N,N-dimetyylikarbamoyyli)-l-etyyli-4-(4-metoksibentsyy-litio)pyrrolidiinia liuotettuna 10 ml:aan metyleenikloridia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjak- 15 son päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,12 (3H, tripletti, J - 7,15 Hz); 1,96-2,08 (1H, multipletti); 2,62-3,51 (6H, multipletti); 2,79 (3H, singletti); 25 2,93 (3H, singletti); 2,95 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 4,55-4,60 (1H, multipletti).

30

Valmistus 8 105 91258 (2S. 4S) -1,1-dime tyyli-4- (4-metoksibentsvvlitio') - 2- (4-morfolinokar-bonvvli)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 8- (1) (2S ,4S) -4- (4-metoksibentsvvlitio') - 2-metoksikarbonvvli-l-metw- lipvrrolidiini 3,43 ml 35 % formaliinia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 2,25 g 10 (2S.4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbonyylipyrrolidiinia liuotettuna 42 ml:aan asetonitriiliä. Tämän jälkeen 804 mg natrium-syanoboorihydridiä jaettiin kolmeen osaan ja lisättiin tähän seokseen 5 minuutin aikana. Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos jäähdytettiin, siihen 15 lisättiin 1,3 ml etikkahappoa ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 40 minuuttia. Sitten reaktioseokseen lisättiin 40 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta ja natriumkloridin vesiliuosta, minkä jälkeen se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsul-20 faatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kohdassa "valmistus 4-(10)" kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 1,31 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä. Tämän yhdisteen infrapunasäteilyn spektri, ydinmagneettisen resonanssin spektri ja ohutkerroskromatogrammi olivat samanlaiset kuin kohdassa 25 "Valmistus 4-(10)" valmistetun yhdisteen tapauksessa.

8-(2) (2S.4S>-4 - (4-metoksibentsvvlitio’) -1-metyyli -2 - (4-morfolino- karbonvvli^pvrrolidiini 30 5,32 ml natriumhydroksidin IN vesiliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,31 g (2S.4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metoksikarbonyyli-1-metyylipyrrolidiinia liuotettuna 11 ml:aan metanolia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos neutraloitiin 1,92 ml:11a kloorivetyhapon IN vesiliuosta. Sitten 35 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös kuivattiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin raakatuotteena saatiin 1,5 g (2S.,4S.)-2-karboksi-4-(4-metoksibentsyyli- 106 tio)-1-metyylipyrrolidiinia.

500 mg tätä raakaa (2S,4S)-2-karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia suspendoitiin 10 ml:aan asetonitriiliä ja tähän 5 suspensioon lisättiin 278 mg JJ.N'-karbonyylidi-imidatsolia, minkä jälkeen tuloksena ollutta seosta sekoitettiin 40 °C:n lämpötilassa 1 tunti. Tämän ajanjakson päätyttyä seoksen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan, minkä jälkeen lisättiin 187 μΐ morfoliinia. Sitten reak-tioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia ja sen annettiin 10 tämän jälkeen seisoa yön yli. Liuotin ja liiallinen morfoliini poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin pylväskromatografises-15 ti käyttäen Lobar-kolonnia (Merck, LiChroprep Si60, koko B), ja otsikon mukaista yhdistettä saatiin öljynä fraktioista, jotka oli eluoitu sykloheksaanin, etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 3:1:1).

20 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1639, 1610, 1511.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,50-3,33 (6H, multipletti); 25 2,31 (3H, singletti); 3,64 (8H, leveä singletti); 3,70 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,82, 7,21 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

30 8-(3) (2S.4S)-1.1-dimetvvli-(4-metoksibentsvvlitio)-2-(4-morfolino- karbonvvli^Dvrrolidinium-fluorisulfonaatti 106 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 35 392 mg (2S.4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyyli-2-(4-morfolino- karbonyyli)pyrrolidiinia liuotettuna 8 ml:aan metyleenikloridia, ja tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajan- 107 91258 jakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieetterillä välillä dekantoi-den ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 446 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

5

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,80-2,03 (1H, multipletti); 2,67-3,90 (12H, multipletti); 2,98 (3H, singletti); 10 3,07 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 4,61 (1H, duplettien dupletti, J - 8,06, 6,23 Hz); 6,82, 7,17 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

15

Valmistus 9 (28.45^-1.1-dimetvvli-4- (4-metoksibentsvvlitio') - 2- (l-pvrrolidinokar-bonvvlilpvrrolidinium-fluorisulfonaatti 20 9- (1) (2S ,4S) -4- (4-metoksibentswlitio) -l-metvvli-2- (1-pvrrolidino- karbonwli) pyrrol idi ini

Edellä kohdassa "valmistus 8-(2)" kuvattu menetelmä toistettiin käyt-25 täen kuitenkin 500 mg raakaa (2S,4S)-2-karbooksi-4-(4-metoksibentsyy-litio)-1-metyylipyrrolidiinia [valmistettu kohdassa "valmistus 8-(2)" kuvatulla tavalla], 278 mg N,N'-karbonyylidi-imidatsolia ja 178 μ\ pyrrolidiinia morfoliinin sijasta, jolloin saatiin 440 mg otsikon mukaista yhdistettä.

30

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) Amax cm*1: 1640, 1611, 1511, 1444.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 5 ppm: 35 1,58-2,78 (6H, multipletti); 2,30 (3H, singletti); 2,90-3,80 (8H, multipletti); 108 3,70 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,84, 7,24 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

5 9-(2) (2S,4S)-1. l-dimetvvli-4- (4-metoksibentsvvlitio') - 2- (1-pvrro- lidinokarbonvvl ΐ1) pyrrol idinium-fluorisulfonaatti

Kohdassa "valmistus 8-(3)" kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 418 mg (2S,4£3)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyyli-2-(Ι-ΙΟ pyrrolidinokarbonyyli)pyrrolidiinia ja 118 μΐ metyylifluorisulfonaat-tia, jolloin saatiin 472 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 1.68- 1,85 (4H, multipletti); 15 1,94-2,10 (1H, multipletti); 2.69- 3,85 (7H, multipletti); 2,99 (3H, singletti); 3,03 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 20 3,67 (2H, singletti); 4,41 (1H, duplettien dupletti, J - 8,06, 6,60 Hz); 6,81, 7,17 (4H, A2B2, J - 8,62 Hz).

Valmistus 10 25 (23.481) -2-karbamowli-4- (4-metoksibentsvvlitio') -l-etwli-l-metyyli -pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 10- (11 (2S.4S)-2-karbamovvli-l-etwli-4-(4-metoksibentsvvlitiol-30 pvrrolidiini 0,362 ml etyylijodidia ja 315 mg natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1000 mg (2£,4S)-2-karbamoyy- 11- 4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 10 ml:aan kuivaa 35 dimetyyliformamidia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätytttyä reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliase- 109 91258 taatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin pylväskromato-grafisesti silikageelillä (Katayama Chemicals Co., Silica Gel 60K070).

5 560 mg otsikon mukaista yhdistettä saatiin kiteinä, joiden sulamis piste oli 124-125 °C:n lämpötilassa, etyyliasetaatilla eluoiduista fraktioista.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 10 1632, 1509.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13 + D20, 270 MHz) 6 ppm: 1,08 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 15 1,86-1,96 (1H, multipletti); 2,38-2,76 (4H, multipletti); 2,99-3,18 (3H, multipletti); 3,70 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 20 6,84, 7,21 (4H, A2B2, J - 8,79 Hz).

10- (2) (2S .US) -2-karbamovvli-4- (4-metoksibentsvvlitio) -l-etwli-l- metvvlipvrrolidiniuni-fluorisulfonaatti 25 0,43 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn li uokseen, joka sisälsi 1,44 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibent-syylitio)-1-etyylipyrrolidiinia liuotettuna 30 ml:aan kuivaa mety-leenikloridia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla 30 alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieette-rillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,0 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) i>roax cm'1: 35 1698, 1610, 1512.

110

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 1,12 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 2,06-2,18 (1H, multipletti); 2,63-3,83 (6H, multipletti); 5 2,92 (3H, singletti); 3.64 (3H, singletti); 3.65 (2H, singletti); 4,02-4,09 (1H, multipletti); 6,82, 7,16 (4H, A2B2, J - 8,42 Hz).

10

Valmistus 11 (2S .4S) - 2-etwlikarbamowli-l-etvvli-l-metvvli-4 - (4-metoksibentsyyli_^ tio)pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 15 11- f 11) (2S ,4S) -l-tbutoksikarbonvyli^-etyvlikarbamovvli-l-etwli- 4-hvdroksipvrrolidiini 15,25 ml trietyyliamiinia ja sitten liuos, joka sisälsi 10,48 ml etyy-20 likloroformaattia 50 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin -25 °C:n lämpötilassa liuokseen, joka sisälsi 23,13 g (2£ ,4S.)-1-t-butoksikarbonyyli-4-hydroksi-2-pyrrolidiinikarboksyylihappoa liuotettuna 350 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja seosta sekoitettiin sitten samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä 25 seokseen lisättiin -22 eC:n lämpötilassa etyyliamiinin 70 til.-% vesi-liuosta, reaktiolämpötilan annettiin nousta vähitellen ja reaktio päätettiin, kun lämpötila oli noussut arvoon 10 °C. Sitten reaktioseos sekoitettiin pieneen määrään natriumkloridin vesiliuosta, minkä jälkeen se uutettiin kolmeen kertaan etyyliasetaatilla. Yhdistetyt uut-30 teet pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 23,60 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

35 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,10 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,44 (9H, singletti); 91258 m 1,80-4,65 (10H, multipletti); 6,64 (1H, leveä singletti).

11-(2) (2S.45)-l-t-butoksikarbonvvli-2-etvvlikarbamovvli-4-metaani- 5 sulfonwlioksipvrrolidiini 13,81 ml trietyyliamiinia ja sitten 7,65 ml metaanisulfonyylikloridia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 23,20 g (2S,4S)-1-t-butoksikarbonyyli-2-etyylilarbamoyyli-4-hydroksipyrroli-10 diinia liuotettuna 250 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia. Reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaa-15 maila alennetussa paineessa, jolloin saatiin 26,54 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 138-140 eC.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 1675, 1548, 1348.

20

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,12 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,48 (9H, singletti); 2,05-4,59 (7H, multipletti); 25 3,03 (3H, singletti); 5,07-5,43 (1H, multipletti); 6,58 (1H, leveä singletti).

11-(3) (2S.4S) -l-t-butoksikarbonwli-2-etvvlikarbamowli-4- (4-metok- 30 s ibents wl itiö) ovrrol idiini 3,57 g natriumhydridiä (55 w/w-prosenttisena dispersiona mineraali-öljyssä) lisättiin jäissä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 11,31 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania liuotettuna 150 millilitraan 35 kuivaa dimetyyliformamidia ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa 30 minuuttia. Sitten seokseen lisättiin liuos, joka sisälsi 26,0 g (2S,4S)-1-t-butoksikarbonyyli-2-etyylikarbamoyyli-4-me- 112 taanisulfonyylioksipyrrolidiinia 100 ml:ssa kuivaa dimetyyliformami-dia, ja tämän jälkeen koko seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natrium-kloridin vesiliuokseen ja se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin 5 natriumkloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (tilavuussuhde 1:1), jolloin saatiin 17,0 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä 10 kiteinä, joiden sulamispiste oli 92-94 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) lmax cm"1: 1700, 1655, 1406.

15 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,10 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,43 (9H, singletti); 1,85-3,96 (7H, multipletti); 3,69 (2H, singletti); 20 3,78 (3H, singletti); 4,18 (1H, tripletti, J - 7,5 Hz); 6,35 (1H, leveä singletti); 6,86, 7,24 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

25 11-(4) (2S ,4S) - 2-etvvlikarbamovvli-4- (4-metoksibentsvvlitio)pvrro- lidiini 41,19 ml kloorivedyn 4N etyyliasetaattiliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 13,00 g (2S,4S)-l-t-butoksikarbonyyli-2-etyylikarbamoyy-30 li-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 100 ml:aan etyy liasetaattia, ja tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläiseen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Vesikerros kyllästettiin ammoniumkloridilla ja uutettiin tetrahydro- 35 furaanilla. Yhdistetyt uutteet pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin 113 91258 pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 87:13), jolloin saatiin 8,00 g otsikon mukaista yhdistettä vaalean ruskeina kiteinä, joiden sulamispiste oli 67-68 °C.

5

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) vmax cm'1: 1649, 1512, 1240.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 10 1,10 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,50-2,20 (1H, multipletti); 2,16 (1H, singletti); 2,23-3,96 (7H, multipletti); 3,69 (2H, singletti); 15 3,78 (3H, singletti); 6,86, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,53 (1H, leveä singletti).

11-(5) (25.45)-2-etvvlikarbamovvli-l-etwli-4 - (4-metoksibentsvvli- 20 tio)pvrrolidiini 301 μΐ etyylijodidia ja 314 mg natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1,00 g (2S,4S)-2-etyylikarba-moyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 8 ml:aan 25 kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla.

Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, minkä jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla 30 alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 982 mg otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 60-61 eC.

35 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 1651, 1512, 1252.

114

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,06 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,14 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1.56- 3,90 (10H, multipletti); 5 3,69 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 6.82, 7,20 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,30 (1H, leveä singletti).

10 11-(6) (2S,4S)-2-etvvlikarbamovvli-l-etyvli-l-netvvli-4-(4-metoksi- bentsvvlitio)Dvrrolidinium-fluorisulfonaatti 233 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 910 mg (2S.4S)-2-etyylikarbamoyyli-l-etyyli-4-(4-15 metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 35 ml:aan kuivaa mety-leenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3,5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin dietyylieetterillä dekantoi-den ja kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,20 g otsi-20 kon mukaista yhdistettä vaalean ruskeana öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) vmax cm'1: 1680, 1513, 1250.

25 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 60 MHz) δ ppm: 0,93 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 1,12 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 1,95-2,26 (1H, multipletti); 2.56- 4,50 (9H, multipletti); 30 2,88 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,69 (2H, singletti); 6.83, 7,18 (4H, A2B2, J - 8,80 Hz).

35 115 91258

Valmistus 12 (2S,4S)-l-etvvli-l-metvvli-2-metvvlikarbamovvli-l-etvvli-4-(4-metoksi-bentsvvlitiö)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti 5 12-(1) (2S . 4S)-l-etwli-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2-metvvlikarbamo- vvlipvrrolidiini 0,71 g etyylijodidia ja 742 mg natriumbikarbonaattia lisättiin liuok-10 seen, joka sisälsi 2,25 g (2S ,4S.)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metyy-likarbamoyylipyrrolidiinia liuotettuna 20 ml:aan kuivaa dimetyylifor-mamidia, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa 1 tunnin ajan ja sitten huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutet-15 tiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, minkä jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti etyyliasetaatilla eluoiden, jolloin saatiin 1,87 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sula-20 mispiste oli 68-70 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1657, 1511, 1252.

25 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 8 ppm: 1,02 (3H, tripletti, J - 7,0 Hz); 1,58-3,91 (8H, multipletti); 2,80 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,67 (2H, singletti); 30 3,78 (3H, singletti); 6,85, 7,21 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,10-7,60 (1H, leveä singletti).

12-(2) (25.45) -l-etwli-l-metwli-2-metvvlikarbamowli-4- (4-metoksi- 35 bentswlitio)pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 187 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuok- 116 seen, joka sisälsi 700 mg (2S,4S)-1-etyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-metyylikarbaraoyylipyrrolidiinia liuotettuna 30 ml:aan kuivaa mety-leenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla 5 alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieet-terillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 950 mg otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) vmax cm"1: 10 1683, 1565, 1280.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 60 MHz) δ ppm: 1,12 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 2,20-2,20 (1H, multipletti); 15 2,58-4,50 (7H, multipletti); 2,60 (3H, singletti); 2,87 (3H, singletti); 3,65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 20 6,82, 7,17 (4H, A2B2, J - 8,80 Hz).

Valmistus 13 (2S . 4S3 -1.1 - dimetvvli-2 - etvvlikarbamovvli-4 - (4-metoksibentswlitio) -25 nvrrolidinium-fluorisulfonaatti 13- (1) (2S ,4S^ -2-etvvlikarbamovvli-4- (4-metoksibentsvvlitio') -1- metvvlipvrrolidiini 30 3,43 ml 35 % formaliinia ja 804 mg natriumsyanoboorihydridiä lisättiin liuokseen, joka sisälsi 2,36 g (2S,4i3)-2-etyylikarbamoyyli-4-(4-metok-sibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 42 ml:aan asetonitriiliä, ja sitten reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 40 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseokseen lisättiin natriumhydroksi-35 din IN vesiliuosta ja seos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin pois- 117 91258 tettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pyl-väskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 1,93 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä.

5

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 1655, 1513, 1252.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 10 1,12 (3H, tripletti, J - 7,5 Hz); 1,50-2,20 (1H, multipletti); 2,31 (3H, singletti); 2,36-3,88 (7H, multipletti); 3,67 (2H, singletti); 15 3,78 (3H, singletti); 6,83, 7,21 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,20 (1H, leveä singletti).

13-(2) <,2S.4S)-l.l-dimetvvli-2-etvvlikarbamovvli-4-(4-metoksibents-20 wlitio)pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 264 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 987 mg (2S,4S)-2-etyylikarbamoyyli-4-(4-metoksi-bentsyylitio)-1-metyylipyrrolidiinia liuotettuna 40 ml:aan kuivaa 25 metyleenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin moneen kertaan dietyylieette-rillä välillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,332 g otsikon mukaista yhdistettä värittömänä öljy-30 nä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (CHC13) υηβχ cm'1: 1680, 1510, 1240.

35 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (Dz0, 270 MHz) δ ppm: 0,94 (3H, tripletti, J - 7,33 Hz); 1,95-2,20 (1H, multipletti); 118 2,60-2,98 (1H, multipletti); 2.96 (3H, singletti); 3,00 (3H, singletti); 3,02-3,70 (5H, multipletti); 5 3,64 (3H, singletti); 3,67 (2H, singletti); 3.97 (1H, tripletti, J - 7,88 Hz); 6.81, 7,01 (4H, A2B2, J - 8,80 Hz).

10 Valmistus 14 (231-1.1-dimetvvli-4-(4-metoksibentsvvlitiometvvli)pvrrolidinium-fluo-risulfonaatti 15 14-(1) (2S)-1-t-butoksikarbonvvli-2-(4-metoksibentsvvlitiometvvli)- pvrrolidiini

Esimerkissä 5-(2) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 12,16 g (2S)-l-t-butoksikarbonyyli-2-metaanisulfonyylioksimetyyli-20 pyrrolidiinia [valmistettu metaanisulfonyloimalla (2S)-1-t-butoksikar-bonyyli-2-hydroksimetyylipyrrolidiinia], 7,3 ml 4-metoksibentsyylimer-kaptaania ja 2,3 g natriumhydridiä (55 w/w-% suspensio mineraaliöljyssä) 100 ml:ssa kuivaa dimetyyyliformamidia, jolloin saatiin 13,93 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

25

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1690, 1615, 1590, 1518.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 30 1,20-4,15 (9H, multipletti); 1,45 (9H, singletti); 3,70 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6.82, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

35 119 91258 14- (2) (2S) -2- (^-metoksibentsvvlitiometvvli^pvrrolidiini

Esimerkissä 5-(3) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 5 g (2S)-l-t-butoksikarbonyyli-2-(4-metoksibentsyylitiometyyli)pyrro-5 lidiinia , jolloin saatiin 2,51 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 124-126,5 eC.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (Nujol- tavaramerkki) umax cm'1: 1615, 1585, 1520.

10

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) δ ppm: 1,45-2,20 (4H, multipletti); 2,25-3,96 (6H, multipletti); 3,76 (5H, singletti); 15 6,85 & 7,32 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

14-(3) (2S)-2-(4-metoksibentsvvlitiometvvli)-l-metwlipvrrolidiini

Esimerkissä 5-(4) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 20 2 g (2S)-2-(4-metoksibentsyylitiometyyli)pyrrolidiinia, 35 % formalii nia ja 848 mg natriumsyanoboorihydridiä siten, että läsnä oli myös 44 ml asetonitriiliä, jolloin saatiin 883 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

25 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) uraax cm'1: 1610, 1585, 1510.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) 5 ppm: 1,40-3,22 (9H, multipletti); 30 2,26 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); 6,83, 7,25 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

35 120 14- (41 (23)-1.l-dimetvvli-2-(4-metoksibentsvvlitiometvvli)pvrro-lidinium-fluorisulfonaatti

Esimerkissä 5-(5) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 5 740 mg (2S)-2-(4-metoksibentsyylitiometyyli)-1-metyylipyrrolidiinia ja 243 μΐ metyylifluorisulfonaattia siten, että läsnä on myös 22 ml mety-leenikloridia, jolloin saatiin 1,0 g otsikon mukaista yhdistettä kiteinä, joiden sulamispiste oli 150-153 °C.

10 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (Nujol) umax cm'1: 1610, 1585, 1518.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 5 ppm: 1,60-2,02 (3H, multipletti); 15 2,26-3,51 (6H, multipletti); 2.64 (3H, singletti); 2,85 (3H, singletti); 3.64 (5H, singletti); 6,82, 7,19 (4H, A2B2, J - 8,79 Hz).

20

Valmistus 15 (2R)-1,1-dimetvvli-4-(4-metoksibentsvvlitiometvvli)pvrrolidiniuni-fluorisulfonaatti 25 15- (1) Esimerkeissä 14-(1), (2), (3) ja (4) kuvatut menetelmät toistettiin käyttäen kuitenkin lähtömateriaalina (2R)-1-t-butoksikarbon-yyli-2-hydroksimetyylipyrrolidiinia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

30

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1610, 1585, 1512.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) S ppm: 35 1,64-2,00 (3H, multipletti); 2,25-3,48 (6H, multipletti); 2.64 (3H, singletti); 121 91258 2,85 (3H, singletti); 3,,64 (5H, singletti); 6,28, 7,18 (4H, A2B2, J - 8,79 Hz).

5 Valmistus 16 ^25.45) -2 -karbamowli-1- (2-hvdroksietvvli) - 4- (4-metoksibentswlitio) -1-metwlipvrrolidinium-f luorisulfonaatti 10 16- (1) (2S .4S) - 2-karbamowli-l- (2-hvdroksietvvli) - 4- (4-metoksibent- svvlitio) pyrrolidiini 0,175 ml 2-jodietanolia ja 0,16 g natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 0,5 g (2S,4S)-2-karbamo-15 yyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia [valmistettu esimerkissä 1-(5) kuvatulla tavalla] liuotettuna 5 mlraan kuivaa dimetyyliformami-dia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin tässä samassa lämpötilassa tunnin ajan, huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia ja 40 °C:n lämpötilassa 19 tuntia. Sitten reaktioseos kaadettiin natriumbikarbonaatin kylläi-20 seen vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin nat-riumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös käsiteltiin pylväskromatografisesti silikageelillä (Wako Pure Chemicals, Ltd.; Wako Gel C-100). 0,465 g otsikon mukaista yhdis-25 tettä saatiin kiteinä fraktioista, jotka eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 95:5).

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 1625, 1510, 1243.

30

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) S ppm: 1,69 (1H, leveä singletti); 1,92-1,99 (1H, multipletti); 2,55-2,72 (3H, multipletti); 35 2,82-2,92 (1H, multipletti); 3,12-3,18 (3H, multipletti); 3,67 (2H, tripletti, J - 4,03 Hz); 122 3,71 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 5,42 (1H, leveä singletti); 6,85, 7,21 (4H, A2B2, J - 8,8 Hz); 5 7,35 (1H, leveä singletti).

16- (21¾ (2S .4S) - 2-karbamovvli-l- (2 -hvdroksietvvli) - 4- (4-metoksibent-swlitio) -1-metvvliovrrolldinium-fluorisulfonaatti 10 0,108 ml metyylifluorisulfonaattia lisättiin pisaroittain huoneen lämpötilassa liuokseen, joka sisälsi 0,38 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-l-(2-hydroksietyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidiinia liuotettuna 7,5 ml:aan kuivaa metyleenikloridia, ja sitten seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä liuotin 15 poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin die-tyylieetterillä dekantoiden ja se kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 0,396 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Valmistus 17 20 3-(4-metoksibentsvvlitio)-1-metvvlikinuklidinium-fluorisulfonaatti 17- (1) 3-(4-metoksibentsvvlitio)kinuklidiini 25 Esimerkissä 6-(2) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 3,7 g 3-metaanisulfonyylioksikinuklidiinia (valmistettu metaanisul-fonyloimalla 3-kinuklidinolia), 3,0 ml 4-metoksibentsyylimerkaptaania ja 0,942 g natriumhydridiä (55 w/w-% suspensio mineraaliöljyssä), jolloin saatiin 1,74 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

30

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1620, 1590, 1510, 1247.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 35 1,02-2,31 (5H, multipletti); 2,33-3,41 (7J, multipletti); 3,67 (2H, singletti); 123 91258 3,82 (3H, singletti); 6,86, 7,26 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz).

17- (2) 3-(4-metoksibentsvvlitio)-1-metvvlikinuklidinium-fluorisul-5 fonaatti

Esimerkissä 6-(3) kuvattu menetelmä toistettiin käyttäen kuitenkin 756 mg 3-(4-metoksibentsyylitio)kinuklidiinia ja 271 μΐ metyylifluo-risulfonaattia site, että läsnä oli myös 5 ml metyleenikloridia, jol-10 loin saatiin 1,078 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1609, 1590, 1512, 1490, 1467.

15 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 1,63-2,16 (5H, multipletti); 2,70 (3H, singletti); 2,76-3,77 (7H, multipletti); 3,63 (5H, singletti); 20 6,80, 7,15 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

Valmistus 18 (6S.8S)-1.4-dimetvvli-8-(4-metoksibentsvvlitio)-5-okso-4-atsa-l-as-25 toniabisvklof 4.3.Olnonaani-fluorisulfonaatti 18- (1) (2S.4S)-1-(2-hvdroksietvvli)-4-(4-metoksibentsvvlitio)-2-metvvlikarbamovvlipvrrolidiini 30 934 μΐ 2-jodietanolia ja 1,01 g natriumbikarbonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 2,80 g (2S,4S)-4-(4-metoksi-bentsyylitio)-2-metyylikarbamoyylipyrrolidiinia liuotettuna 18 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin 40 °C:n lämpötilassa 24 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos kaadet-35 tiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla.

Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla 124 alennetussa paineessa, ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 15:1), jolloin saatiin 2,22 g otsikon mukaista yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 88-89,5 "C.

5

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm'1: 1637, 1510, 1240.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) δ ppm: 10 1,66-2,05 (2H, multipletti); 2,50-2,91 (4H, multipletti); 2,82 (3H, dupletti, J = 4,77 Hz); 3,07-3,21 (3H, multipletti); 3,56-3,75 (2H, multipletti); 15 3,69 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 6,84, 7,20 (4H, A2B2, J - 8,79 Hz); 7,42 (1H, leveä singletti).

20 18- (2) (2S.4S)-1-(2-metaanisulfonvvlioksietvvin-4-(4-metoksibents- vvlitio)-2-metvvlikarbamovvlipvrrolidiini 1,06 ml trietyyliamiinia ja sitten 584 μΐ metaanisulfonyylikloridia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 2,13 g (2S.4S)-25 1-(2-hydroksietyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)- 2-metyylikarbamoyyli- pyrrolidiinia liuotettuna 45 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä saostuneet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja ne pestiin tetrahydrofuraanilla. Suodos ja pesuliuokset yhdistet-30 tiin ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,50 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 35 1664, 1510, 1350.

125 91258

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 60 MHz) S ppm: 1,55-4,10 (8H, multipletti); 2,81 (3H, dupletti, J - 5,0 Hz); 3,05 (3H, singletti); 5 3,70 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 4,18-4,49 (2H, multipletti); 6,87, 7,26 (4H, A2B2, J - 9,0 Hz); 7,55 (1H, leveä singletti).

10 18-(3) (6S.8S)-8-(4-metoksibentsvvlitio)-4-metvvli-5-okso-l.4-diat- sabisvklo f 4,3.01nonaani 347 mg natriumhydridiä (55 w/w-% suspensio mineraaliöljyssä) lisättiin 15 jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 2,64 g (2S,4S)-1-(2-me- taanisulfonyylioksietyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)- 2-metyylikarbamo-yylipyrrolidiinia liuotettuna 30 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia, ja sitten seosta sekoitettiin 0-5 °C:n lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten 30 °C:n lämpötilassa 2 tuntia. Sitten reaktioseos kaadettiin nat-20 riumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja siitä poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelil-lä, jota eluoitiin asetonitriilin ja metanolin seoksella (tilavuussuh-25 de 5:1), jolloin saatiin 1,75 g otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (CHC13) umax cm"1: 1637, 1508, 1240.

30 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) δ ppm: 1,88-2,01 (1H, multipletti); 2,59 (1H, triplettien dupletti, J - 13,18, 8,06 Hz); 2,75-2,98 (3H, multipletti); 2,94 (3H, singletti); 35 3,00-3,24 (3H, multipletti); 3,30 (1H, tripletti, J - 8,06 Hz); 3,48-3,62 (1H, multipletti); 126 3,70 (2H, singletti); 3.80 (3H, singletti); 6,84, 7,33 (4H, A2B2, J - 8,80 Hz).

5 18-(4) (6S.8S)-1.4-dimetvvli-8-(4-metoksibentsvvlitio)-5-okso-4- atsa-l-astoniabisvklo f 4.3.Olnonaani-fluorisulfonaatti 461 μΐ metyylifluorisulfonaattia lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 1,71 g (6S,8S)-8-(4-metoksibentsyylitio)-4-metyyli-10 5-okso-1,4-diatsabisyklo[4.3.0]nonaania liuotettuna 60 mlraan mety-leenikloridia, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Tämän ajanjakson päätyttyä seos laimennettiin dietyylieetterillä ja tuloksena olleet kiteet otettiin talteen suodattamalla ja ne kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,09 g otsikon mukaista 15 yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 208-210 °C.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) uroaJ( cm'1: 1651, 1512, 1295.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfok-sidi, 270 MHz) δ ppm: 2,16-2,33 (1H, multipletti) ; 2,79-2,95 (1H, multipletti); 2,89 (3H, singletti); 25 3,23 (3H, singletti); 3,38 (1H, leveä singletti); 3,56-4,02 (6H, multipletti); 3,74 (3H, singletti); 3.80 (2H, singletti); 30 4,37 (1H, tripletti, J - 8,30 Hz); 6,90, 7,26 (4H, A2B2, J - 8,79 Hz).

Valmistus 19 35 3-merkapto-2-pvrrolidinoni-trifluorimetaanisulfonaatti 20 ml trifluorietikkahappoa ja 0,41 ml trifluorimetaanisulfonihappoa 127 91258 lisättiin jäissä jäähdytettyyn liuokseen, joka sisälsi 949 mg 3-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidin-2-onia 4 ml:ssa anisolia, ja sitten tätä seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän ajanjakson päätyttyä reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alenne-5 tussa paineessa, jolloin saatiin jäännös, joka puhdistettiin pylväs-kromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 10:1), jolloin saatiin 728 mg otsikon mukaista yhdistettä öljynä.

10 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (60 MHz, CDC13) 6 ppm: 1,75-3,05 (3H, multipletti); 3,30-4,04 (3H, multipletti); 8,12 (1H, leveä singletti); 9,32 (1H, leveä singletti).

15

Valmistus 20 4-merkapto-2-pvrrolidinoni 20 20-(1) 15,6 g trifenyylifosfiinia lisättiin suspensioon, joka sisäl si 3 g 4-hydroksi-2-pyrrolidinonia 200 ml:ssa tetrahydrofuraania, ja sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 5 minuuttia, minkä jälkeen se jäähdytettiin -20 eC:n lämpötilaan. Tähän liuokseen lisättiin -12 - -20 “C:n lämpötilassa jäähdyttäen pisaroittain liuos, joka 25 sisälsi 9,3 ml dietyyliatsodikarboksylaattia 9 ml:ssa tetrahydrofuraania. Sitten seosta sekoitettiin 0-5 eC:n lämpötilassa 5 minuuttia, minkä jälkeen se jäähdytettiin jälleen -20 °C:n lämpötilaan. Seokseen lisättiin sitten pisaroittain 4,2 ml tioetikkahappoa -18 - -20 eC:n lämpötilassa jäähdyttäen. Seos lämmitettiin 0-5 eC:n lämpötilaan, 30 jossa sitä sekoitettiin 2 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin ensin pylväskromatografisesti silikageelillä, jota eluoitiin etyyliasetaatin ja metanolin seoksella (tilavuussuhde 10:1), ja sitten pylväskromato-grafisesti silikageelillä, jota eluoitiin asetonitriilin ja bentsee-35 nin seoksella (tilavuussuhde 2:1), jolloin saatiin 2,45 g 4-asetyyli-tio-2-pyrrolidinonia värittöminä kiteinä.

128

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 90 MHz) S ppm: 2,00-4,44 (5H, multipletti); 2,31 (3H, singletti); 7.13 (1H, leveä singletti).

5 20-(2) 1,82 vaiheessa (1) saatua tuotetta liuotettiin 30 ml:aan metanolia. Tähän liuokseen, jota jäähdytettiin jäissä, lisättiin pisa-roittain 2,3 ml natriummetoksidin 28 % (w/v) metanoliliuosta ja sitten seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Jäissä jäähdytettyyn reaktioseokseen 10 lisättiin sitten 12 ml IN kloorivetyhappoa, minkä jälkeen seos väke-vöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin jauhemainen jäännös. Jäännös uutettiin 50 ml :11a etyyliasetaattia ja uute kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, Uute väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,35 g otsikon mukaista 15 yhdistettä värittöminä kiteinä.

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1687, 1681, 1250.

20 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (CDC13, 270 MHz) S ppm: 1,95 (1H, dupletti, J - 7,0 Hz); 2.30 (1H, duplettien dupletti, J - 17,2 & 6,6 Hz); 2.80 (1H, duplettien dupletti, J - 17,2 & 7,1 Hz); 3.31 (1H, duplettien duplettien dupletti, J - 9,9, 5,2 & 25 0,8 Hz); 3,59-3,73 (1H, multipletti); 3.80 (1H, duplettien duplettien dupletti, J - 9,9, 7,3 & 0,7 Hz); 6.13 (1H, leveä singletti).

30

Valmistukset 21-25

Seuraavat yhdisteet valmistettiin noudattaen edellä kohdissa "valmistukset 1-4" kuvattujen kaltaisia menetelmiä.

35 129 91258

Valmistus 21 (2S.4S)-1.1-dimetvvli-4-(4-metoksibentsvvlitio) - 2-metoksikarbonvvli-pvrrolidinium-fluorisulfonaatti 5

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) vmax cm'1: 1747, 1512.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 2,16-2,29 (1H, multipletti); 10 2,74-2,92 (1H, multipletti); 3,05 (3H, singletti); 3,12 (3H, singletti); 3,38-3,73 (3H, multipletti); 3,65 (3H, singletti); 15 3,66 (3H, singletti); 3.68 (2H, singletti); 4,32 (1H, duplettien dupletti, J - 10,99 & 7,69 Hz); 7,16, 7,82 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

20 Valmistus 22 (2R.4S)-2-karbamovvli-4-(4-metoksibentsvvlitio^-1.1-dimetvvlipvrro-lidinium-fluorisulfonaatti 25 Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) umax cm"1: 1698, 1512.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 2,19-2,30 (1H, multipletti); 30 2,57-2,70 (1H, multipletti); 2,93 (3H, singletti); 3,15 (3H, singletti); 3,30 (1H, duplettien dupletti, J - 12,09 & 7,51 Hz); 3,47-3,60 (1H, multipletti); 35 3,66 (3H, singletti); 3.69 (2H, singletti); 3,77 (1H, duplettien dupletti, J - 12,09 & 8,06 Hz); 130 4.26 (1H, tripletti, J - 8,43 Hz); 6,82, 7,18 (4H, A2B2, J - 8,61 Hz).

Valmistus 23 5 (2R.4S)-1.1-dimetvvli-2-(N.N-dimetvvlikarbamovvli)-4-(4-metoksibents-wlitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 10 1652, 1511.

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) δ ppm: 2,17-2,29 (1H, multipletti); 2,46-2,58 (1H, multipletti); 15 2,78 (1H, singletti); 2,94 (3H, singletti); 2,98 (3H, singletti); 3,10 (3H, singletti); 3.26 (1H, duplettien dupletti, J - 12,09 & 6,96 Hz); 20 3,51-3,63 (1H, multipletti); 3,65 (3H, singletti); 3,69 (2H, singletti); 3,84 (1H, duplettien dupletti, J = 12,09 & 8,62 Hz); 4,75 (1H duplettien dupletti, J - 7,69 & 6,96 Hz); 25 6,82, 7,17 (4H, A2B2, J - 8,78 Hz).

Valmistus 24 (2S ,4S) -2-svklopropwlikarbamoyyli-1, l-dimetvvli-4- (4-metoksibent-<;-30 vvlitio)pyrrolidinium-fluorisulfonaatti

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (nestekalvo) umax cm'1: 1685, 1532, 1512.

35 Ydinmagneettisen resonanssin spektri (Dz0, 270 MHz) δ ppm: 0,26-2,66 (4H, multipletti); 2,00-3,65 (6H, multipletti); 131 91258 2,96 (3H, singletti); 2,98 (3H, singletti); 3.65 (3H, singletti); 3,68 (2H, singletti); 5 3,92 (1H, tripletti, J - 7,86 Hz); 6.81, 3,17 (4H, A2B2, J - 8,80 Hz).

Valmistus 25 10 (6S.8S)-5-okso-8-(4-metoksibentsvvlitio)-l-metvvli-4-atsa-1-atsoni- abisvklo[4,3.Olnonaani-fluorisulfonaatti

Infrapunasäteilyn absorptiospektri (KBr) uroax cm'1: 1680, 1609, 1512, 1246.

15

Ydinmagneettisen resonanssin spektri (D20, 270 MHz) 6 ppm: 2,10-2,24 (1H, multipletti); 2,73-2,90 (1H, multipletti); 3.65 (3H, singletti); 20 3,67 (2H, singletti); 3,36-3,85 7H, multipletti); 4,18 (1H, tripletti, J - 8,43 Hz); 6.82, 7,17 (4H, A2B2, J = 8,79 Hz).

Claims (6)

132

1. Menetelmä sellaisten lääkeaineina käyttökelpoisten 2-(heterosyklyy-litio)karbapeneemin johdannaisten, jotka voidaan esittää kaavalla (I): 5 EO E a1 \ / I c c-a / \ / \

10 E3C CE—CH C-S-(CE2)i-aa I I H (i) C— .N_C // \

0 COO” 15 [missä Ra tarkoittaa ryhmää, jolla on jokin seuraavista kaavoista I-la, I-2a. I-3a, I-4a, I-6a tai l-7a;

20 CAz. -C-fl (I-la) 1 1 25 CZ 30 ^cAl (1-2.) I I Oli .fj*— l* x0[/ V 133 91258 (CH2) / \ -CH N*-R3 \ / \ (h2cj a4 (I-3a) cu X(.VZ - L 1 ; ·* / CU^ l \ (I-4a) CW3 Ö o -cuz " CW \ + / cftz - ^ _f>4 1 (I-6a) R3 CUj — c-wrLAKfjtR3 v / Cu__a-’*) 134 ja missä: R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä;

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reagenssit ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan 10 valmistetuksi: 2-(2-karbamoyyli-l,l-dimetyylipyrrolidinium-4-yylitio)-6-(1-hydrok-sietyyli)-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti 15 (1R,5S,6S)-2-[(2S.4S)-2-karbamoyyli-l,l-dimetyylipyrrolidinium-4- yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri. 20

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reagenssit ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan valmistetuksi: 25 2-(2-karbamoyyli-l,l-dimetyylipyrrolidinium-4-yylitio)-6-(1-hydrok sietyyli) -l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti (1E.51.6S)-2-[(2£,4£)-2-karbamoyyli-1,l-dimetyylipyrrolidinium-4-yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti; 30 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reagenssit ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan 35 valmistetuksi: 2 -(1,1-dimetyyli-2-dimetyylikarbamoyylipyrrolidinium-4-yylitiö)-6-(1- 137 91258 hydroksietyy1i)-1-metyy1i-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityisesti (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-1,l-dimetyyli-2-dimetyylikarbamoyylipyrrolidi-5 nium-4-yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reagenssit ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan valmistetuksi: 2-(1,l-dimetyyli-2-etyylikarbamoyylipyrrolidinium-4-yylitio)-6-(1-15 hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, erityi sesti (1R,5S,6S)-2-[(2S.4S)-1,l-dimetyyli-2-etyylikarbamoyylipyrrolidinium- 4-yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-20 karboksylaatti; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

5 R2 on vetyatomi, metoksikarbonyyliryhmä, tai kaavan-CONR6R7 mukainen ryhmä, jossa kaavassa R6 ja R7 ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi, Cx-10 C6-alkyyliryhmä, C3-C6-sykloalkyyliryhmä tai R6 ja R7 muodostavat yhdessä morfoliino- tai pyrrolidiinoryhmän, R3 ja R4 ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on Cj-C^-alkyyli-ryhmä tai substituoitu C1-C4-alkyyliryhmä, jossa on vähintään yksi 15 substituentti valittu joukosta, johon kuuluu fluoriatomit ja hydroksi-ryhmät; ja i on nolla tai kokonaisluku 1; 20. on vetyatomi tai C^C^-alkyyliryhmä seka näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden valmistamiseksi, 25 tunnettu siitä, että tämän menetelmän käsittämissä vaiheissa (a) kaavan (IV): 1 2 3 4 5 6 HO H R1 2 \ / I 3 C C-H 4 / \ / \ 5 S3C CH_CH C-R27 I I II (IV) C_N-c // \ 6 o COOR28 135 91258 [missä R1 on edellä esitetyn määritelmän mukainen, R27 tarkoittaa kaavan -OR29 tai -SO-R1 mukaista ryhmää, joissa kaavoissa R29 tarkoittaa alkaanisulfonyyliryhmää, aryylisulfonyyliryhmää, dial-5 kyylifosforyyliryhmää tai diaryylifosforyyliryhmää; ja R1 tarkoittaa alkyyliryhmää, halogeenialkyyliryhmää, 2-asetyyli-aminoetyyliryhmää, 2-asetyyliaminovinyyliryhmää; aryyliryhmää tai heteroaryyliryhmää; j a 10 R28 tarkoittaa karboksyylihappoa suojaavaa ryhmää]; mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (Va):

15 HS-iCHjjj-R11 X' (Va) [jossa kaavassa R11 tarkoittaa jotakin kaavojen I-la, I-2a, I-3a, I-4a, l-6a tai I-7a mukaista ryhmää, jossa tarvittaessa mikä tahansa aktiivinen ryhmä voi olla suojattu, i on edellä esitetyn määritelmän 20 mukainen ja X" on tasapainottava anioni], mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (VI): 25 ΞΟ H Rl \ / I C C-H / \ / \ H3C CH—CH C-S-(CH2)i-Rb

30. I II (VI)

30 C-N_C // \ O COOR28 35 [missä R1, R28 ja £ ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia ja Rb tarkoittaa mainitun kaavan I-la, I-2a, I-3a, I-4a, I-6a tai I-7a mukaista ryhmää, jossa tarvittaessa mikä tahansa aktiivinen ryhmä voi 136 olla suojattu, ja joka sisältää tarvittaessa tasapainottavan anionin], (b) minkä jälkeen tarvittaessa suojaavat ryhmät poistetaan ja/tai tuloksena oleva yhdiste esteröidään ja/tai muutetaan suolakseen, jol-5 loin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunne ttu siitä, 25 että reagenssit ja reaktio-olosuhteet valitaan siten, että saadaan valmistetuksi: 2-(2-syklopropyylikarbamoyyli-l,l-dimetyylipyrrolidinium-4-yylitio)-6 -(1-hydroksietyyli)-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti, 30 erityisesti (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-syklopropyylikarbamoyyli-l,1-dimetyylipyrro-lidinium-4-yylitio]-6-[(1R)-1-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti; 35 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola tai esteri. 138