FI89495B

FI89495B - Foerfarande foer framstaellning av cytostatiskt verkande antracyklinderivat

Info

Publication number: FI89495B
Application number: FI875353A
Authority: FI
Inventors: Peter Hermentin; Cenek Kolar; Manfred Gerken; Hans Peter Kraemer; Michael Paal; Dieter Hoffmann; Hans Gerd Berscheid; Dirk Boettger
Original assignee: Behringwerke Ag
Priority date: 1986-12-08
Filing date: 1987-12-04
Publication date: 1993-06-30
Also published as: FI89495C; AU613327B2; ATE106890T1; PT86314A; DK170752B1; EP0270992B1; FI875353A; DE3641833A1; PT86314B; EP0270992A2; US4948880A; FI875353A0; CA1340422C; AU8213487A; JPS63145295A; EP0270992A3; JP2579654B2; DE3750025D1; ES2056808T3; DK640587D0

Description

1 89495

Menetelmä sytostaattisesti vaakuttavien antrasykliinijohdannaisten valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää uusien, sytostaattisesti 5 vaikuttavien antrasykliinijohdannaisten valmistamiseksi.

Antrasykliinien aineluokka on jo kauan ollut tunnettu. Siitä saakka kun rodomysiinien, adriamysiinin ja daunomysiinin rakenne on pystytty määrittämään ja tämän antrasykliiniluokan tiettyjen edustajien sytostaattinen 10 vaikutus on tullut tunnetuksi, on lukuisia antrasyklii-nejä eristetty biologisella menetelmällä sädesienien Streptomyces-suvun edustajista ja niiden vaikutusta on tutkittu.

Tiedetään, että joitakin antrasykliinejä, kuten 15 esimerkiksi adriamysiiniä, daunomysiiniä, aklasinomysii- niä, 4'-epi-adriamysiiniä, 4'-metoksiadriamysiiniä tai 4’-desoksiadriamysiiniä käytetään jo kasvainten hoidossa.

Näille yhdisteille on yhteistä, että ne sisältävät kulloisenkin aglykonin 7-asemassa joko sokeri-a-L-20 daunosamiinin - (esimerkiksi antrasykliineissä adriamy- siini, daunomysiini ja 4-demetoksiadriamysiini) tai so-keri-a-L-rodosamiinin (esim. antrasykliineissä N,N-dime-tyylidaunomysiini, aklaviini tai β-rodomysiini I). Edelleen tunnetaan antrasykliinit, jotka sisältävät kulloi-25 senkin aglykonin 7-asemassa 3’-aminoryhmään substituoidun α-L-daunosamiini-rakenneosan (esim. antrasykliineissä N-trifluoriasetyyliadriamysiini, N-bentsyyliadria-mysiini, N, N-dibentsyyliadriamysiini, morfolinodaunomysiini, sya-nomorfolinodaunomysiini tai syanomorfolinoardia-mysiini). 30 Edelleen tunnettuja ovat antrasykliinit, jotka si sältävät aglykonin 7-asemassa trisakkaridi-yksikön, kuten esimerkiksi aklasinomysiini A, sekä antrasykliinit, jotka sisältävät aglykonin 7-asemassa trisakkaridi-yksikön ohella myös monosakkaridi- tai trisakkaridiyksikön aglykonin 35 10-asemassa, kuten on laita esimerkiksi sytorodiini S:n tai sytorodiini P:n kohdalla.

2 89495 Näille yhdisteille on yhteistä, että se sokeriyk-sikkö, joka on sitoutunut aglykonin 7-asemaan tai 10-ase-maan, on aina α-L-rodosamiini.

US-patenttijulkaisusta 4 591 637 tunnetaan vielä 5 seuraavan kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R1 = H, R2 = H, OH tai -OCH3, R3 = R4 = OH, R5 = H, etyylin tilalla 9-asemassa voi olla myös metyylikarbonyyli, hydroksimetyyli-karbonyyli, alkyylihydroksi tai alkyylidihydroksi, R7 = H ja R8 on syanometyyliryhmä.

10 Käytettäessä näitä tunnettuja antrasykliinejä kas vainten hoidossa, on oleellisena ongelmana, että ne aiheuttavat toivotun sytostaattisen eli solujen jakautumista ja kasvua estävän vaikutuksen ohella ei-toivottuja sivuvaikutuksia, kuten esimerkiksi verenkuvaan tai sydämeen 15 kohdistuvaa toksisuutta.

Tästä tekniikan tasosta lähtien on esillä olevan keksinnön tehtävänä aikaansaada uusia antrasykliinijohdannaisia, joilla ei mahdollisesti ole ristiresistenssiä ad-riamysiiniä kohtaan, ja joilla on uusi vaikutusspektri 20 sekä adriamysiiniin verrattuna alhaisempi toksisuus ja, joita voidaan käyttää paremmalla menestyksellä kasvainten hoidossa.

Keksinnön kohteena on menetelmä yleisen kaavan I mukaisten sytostaattisesti vaikuttavien antrasykliinijoh-25 dannaisten valmistamiseksi, jotka esiintyvät mahdollisesti epäorgaanisen tai orgaanisen hapon suolana, R1 O R3 r5 30 rfVVYVr5 R2 O R4 o

h3c^0 J

35 'n^ch R70 l8CH3 Rö 3 89495 jossa kaavassa R1 on vety tai hydroksiryhmä, R2 on vety tai hydroksi- tai metoksiryhmä, R3 on vety tai hydroksiryhmä, 5 R4 on vety tai hydroksiryhmä, R5 on vety, hydroksiryhmä tai ryhmä, jolla on yleinen kaava II, R8a 15 jossa R8a on vety tai ryhmä, jolla on kaava III, - ch3 R7 on vety tai ryhmä, jolla on kaava IV,

30 I

. 35 ch3 ja R11 on vety.

r 4 89495

Esillä olevan keksinnön mukaisissa erittäin edullisissa aglykonijohdannaisissa R5 on vety tai hdyroksiryhmä, R7 on vety ja R8 on vety.

Kaavan (I) mukaisia antrasykliinijohdannaisia val-5 mistetaan keksinnön mukaisesti siten, että kaavan I mukaisesta yhdisteestä, jossa ryhmillä Rx-R7 on edellä ilmoitettu merkitys ja R8 ja/tai R8a merkitsevät metyyliryhmää, lohkaistaan fotolyyttisellä menetelmällä valon vaikutuksella halogenoidun alkaanin ja alkoholin liuotinseoksen läsnäol-10 lessa kulloinkin toinen molemmista typpeen sitoutuneista metyyliryhmistä ja mahdollisesti reaktiotuote muutetaan sinänsä tunnetulla tavalla epäorgaanisen tai orgaanisen hapon suolaksi.

Keksinnön mukainen menetelmä uusien sytostaattises-15 ti vaikuttavien antrasykliinijohdannaisten valmistamiseksi lähtee biologisella menetelmällä saatavista antrasykliini-yhdisteistä (T. Oki in Antracycline Antibiotics, H.S. El Khadem, ed. Academic Press 1982, s 75)., jotka esiintyvät joko suoraan rodosamiinijohdannaisen muodossa tai joita 20 voidaan saada N,N-dimetyloimalla vastaava daunosaminyyli-antrasyklinoni (Tong et. ai. J. Med. Chem. (1979), 22, 912), tai myös antamalla vastaavan antrasyklinoniyhdisteen reagoida rodosamiinin kanssa yksinkertaisella tavalla. Biologisella menetelmällä saadun antrasyklinonin ja rodos-25 amiinin välinen liittyminen voi tällöin tapahtua julkaisussa "Essery und Doyle" (Can. J. Chem. (1980), 58, 1869) kuvatun menetelmän mukaisesti. Tällöin rodosaminyyliryhmä liitetään antrasyklinonin 7-asemaan.

On sinänsä tunnettua, että daunomysiini (7-0-a-L-30 daunosaminyyli-daunomysinoni) tai adriamysiini (7-0-a-L- daunosaminyyli-adriamysinoni) voidaan hajottaa fotolyytti-sesti valon vaikutuksesta (Tavoloni et ai., J. Pharmacol. (1980), 32 860); jolloin muodostuu ilmeisesti polymeerejä (Williams & Tritton, Photochem. Photobiol. (1981), 34, 35 131).

I: , 5 89495

Toisaalta on tunnettua, että aklasinomysiini A, eräs antrasykliini, jossa aglykonin 7-asemassa aklavinoni on sitoutunut trisakkaridiin, [L-sineruloosi A]-a-(l-*4)-[ 2-deoksi-L-fukoosi] -a- (l->4 ) - [α-L-rodosamiini] , voidaan 5 samoin hajottaa fotolyyttisesti pienemmässä mittakaavassa. Hajoamistuotteina eristettiin tällöin tarkoituksenmukaisissa seoksissa 3'-N-monodemetyloitu aklasinomysiini A 3,5 %:isella saannolla ja 3'-didemetyloitu aklasinomysiini A 5,5 %:isella saannolla, jolloin ensimmäisessä ta-10 pauksessa käytettiin etyylieetteriä ja jälkimmäisessä tapauksessa käytettiin kloroformia liuottimena (Oki et ai., J. Antibiotics (1979), 32 801).

Lievällä happohydrolyysillä onnistui lopuksi saada 3'-N-metyyli-daunosaminyyli-aklavinoni, jossa R1 = H, R2 = 15 OH, R3 = H, R4 = OH, R5 = C00CH3 ja R7 = R® = H.

Edelleen tiedetään julkaisusta "Tanaka et ai., J. Antibiotics (1982); 35, 312", että myös antrasykliini, jossa edellä mainittu trisakkaridi-ketju on sitoutunut aglykonin 7-asemassa daunomysinoniin, voidaan hajottaa 20 fotolyyttisesti auringonvalon vaikutuksesta. Hajoamistuotteina eristettiin vähäisinä saantoina 3 '-N-monodemetyloitu antrasykliini (15-%:isella saannolla) ja 3'-N-didemetyloi-tu antrasykliini (8-%:isella saannolla), jolloin fotolyyt-tinen hajotusreaktio suoritettiin kloroformissa, sen toi-25 miessa liuottimena.

Havaittiin, että 7-0-a-L-rodosaminyyli-antrasykli-noni-yhdisteet, joilla on kaava I, jossa R^R4 merkitsevät samaa kuin edellä, R5 on vety tai hydroksi (tai metoksikar-bonyyliryhmä), R7 on vety ja R8 on metyyliryhmä, voidaan 30 muuttaa päinvastoin kuin kirjallisuudessa on todettu, tarkoituksenmukaisesti ja saannon ollessa hyvä niiden vastaaviksi 3'-N-monodemetyloiduiksi analogeiksi, ilman että havaitaan mainittavaa didemetylointia.

Täten tarjoutuu hyvä ja yksinkertainen tapa päästä 35 uuteen yhdisteluokkaan, 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosami- 6 89495 nyyli)-antrasyklinoneihin, joita ei voida saada pelkistävällä alkyloinnilla formaldehydin ja natriumsyanoboori-hydridin kanssa, kuten osoitettiin daunomysiinin ja adria-mysiinin esimerkissä (Tong et ai. , J. Med. Chem. ( 1979), 5 22, 912).

Edelleen todettiin yllättäen, että myös antrasykli-nonit, jotka sisältävät aglykonin 10-asemassa a-L-rodos-aminyyli-ryhmän ja 7-asemassa α-L-rodosaminyyli-ryhmän, jossa R7 on yleisen kaavan IV mukainen ryhmä, voidaan de-10 metyloida tarkoituksenmukaisesti sekä saannon ollessa hyvä vastaaviksi antrasykliineiksi, jotka sisältävät aglykonin 10-asemassa 3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli-ryhmän.

Edelleen todettiin, että antrasykliinit, jotka sisältävät sekä aglykonin 7-asemassa että myös 10-asemassa 15 sokeriryhmän rodosamiinin, voidaan demetyloida tarkoituk senmukaisesti sekä saannon ollessa hyvä vastaaviksi antrasykliineiksi, jotka sisältävät sekä aglykonin 7-asemassa että myös 10-asemassa ryhmän 3'-N-metyyli-a-L-daunosamii-ni.

20 Näissä tutkimuksissa todettiin myös lopuksi, että antrasykliinit, jotka sisältävät aglykonin 7-asemassa so-keri-rodosamiinin, ja joissa R5 on (aglykonin 10-asemassa) kaavan III mukainen rakenne, voidaan demetyloida tarkoituksenmukaisesti ja samoin saannon ollessa hyvä vastaavik-25 si antrasykliineiksi, jotka sisältävät aglykonin 7-asemas sa ryhmän 3'-N-metyyli-a-L-daunosamiini.

Edelleen todettiin, että nämä kaikki rodosaminyyli-antrasyklinonien totolyyttisessä demetyloinnilla saadut 3'-N-metyyli-daunosaminyyli-antrasyklinonit voidaan subs-30 tituoida tai modifioida selektiivisesti yksinkertaisella ja sinänsä tunnetulla tavalla niiden metyyliaminofunktios-sa, minkä johdosta saadaan edelleen lukuisia uusia sytos-taattisesti vaikuttavia antrasykliineja.

Yllättäen todettiin myös, että 7-0-a-L-rodosaminyy-35 li-antrasyklinonien fotolyyttinen demetylointi voi johtaa li 7 89495 sivureaktiona kaavan I mukaisiin yhdisteisiin, joissa R1-R4 merkitsevät samaa kuin edellä, R5 on vety tai hydroksi (tai metoksikarbonyyliryhmä), R7 on vety ja R8 on formyyli-ryhmä.

5 Keksinnön mukaisessa menetelmässä on osoittautunut erittäin edulliseksi, erityisesti mitä tulee saavutettuun saantoon, jos metyyliryhmän fotolyyttinen lohkaisu suoritetaan liuotinseoksen läsnäollessa, joka koostuu 10-30 tilavuusosasta kloroformia ja 1 tilavuusosasta alkoholia 10 konsentraation ollessa 0,1-1 millimoolia/litra 0°C:n ja liuotinseoksen kiehumislämpötilan välisessä lämpötilassa voimakkaan valon vaikutuksen alaisena. Hyviä tuloksia saadaan myös käyttämällä hiilitetrakloridia kloroformin sijasta. Erittäin hyviä tuloksia saavutetaan, jos alkoholina 15 käytetään metyylialkoholia.

Fotolyyttisessä demetylointireaktiossa on osoittautunut erittäin edulliseksi, jos liuotinseoksella ja siihen sisältyvällä antrasykliini-yhdisteellä on mahdollisimman suuri pinta-ala, mikä voidaan saavuttaa siten, että liuos 20 asetetaan laakeisiin astioihin tai kastelulaitteistoihin, jolloin sitä voidaan säteilyttää auringonvalolla tai keinovalolla, edullisesti hehkulampun näkyvällä valolla, esimerkiksi valokuvauslampulla tai 500 watin säteilyttäjällä, lyhyeltä, esimerkiksi 20-30 cm etäisyydeltä, jolloin valoa 25 heijastetaan fotolyyttisen saannon kohottamiseksi tarkoi tuksenmukaisesti alumiinifoliolla.

Yhdiste eristetään poistamalla liuotin ja uutetaan ravistelemalla useita kertoja hapanta vesipitoista liuosta, esim. vesipitoista suolahappoa sisältävää liuosta, 30 jonka pH on 2-4, sopivan orgaanisen liuottimen, esimerkiksi kloroformin kanssa ja vesipitoinen faasi lyofilisoidaan vastaavan happoadditioyhdisteen eristämiseksi tai vesipitoinen faasi saatetaan esimerkiksi natriumvetykarbonaatil-la neutraaliksi tai emäksiseksi, esimerkiksi pH-arvoon 8 35 ja uutetaan uudelleen sopivalla orgaanisella liuottimena.

s 89495 esimerkiksi kloroformilla, jolloin muodostunut 3'-N-metyy-liaminoyhdiste siirtyy orgaaniseen faasiin, josta se voidaan eristää liuottimen poistamisen jälkeen, mahdollisesti muita sinänsä tunnettuja puhdistusmenetelmiä, esimerkiksi 5 silikageelillä tapahtuvaa kromatografointia käyttäen puhtaassa muodossa.

Tällä tavoin saatu kaavan I mukainen yhdiste voidaan sopivalla ja sinänsä tunnetulla tavalla derivoida edelleen metyyliaminoryhmässä. Tämä voi tapahtua esimer-10 kiksi antamalla yhdisteen reagoida jodiasetonitriilin tai bromiasetonitriilin kanssa sopivassa liuottimessa, esimerkiksi dimetyyliformamidissa, sopivan emäksen, esimerkiksi trietyyliamiinin läsnäollessa, jolloin saadaan yhdiste, jossa 15 a) siinä tapauksessa, että R5 oli lähtöyhdisteessä vety tai hydroksi ja R7 oli vety, R*-R4 merkitsevät samaa kuin edellä, R5 on vety tai hydroksi ryhmä, R7 on vety ja R8 on syanometyyli tai b) siinä tapauksessa, että R5 oli lähtöyhdisteessä 20 α-L-rodosaminyyliryhmä ja R7 oli vety, R*-R4 ja R6 merkitsevät samaa kuin edellä, R5 on kaavan II mukainen rakenne, jolloin R8a = syanometyyli, R7 on vety ja R8 taas on syano-metyyli tai c) siinä tapauksessa, että R5 oli lähtöyhdisteessä 25 α-L-rodosaminyyliryhmä ja R7 oli kaavan IV mukainen rakenne, R:-R4 merkitsevät samaa kuin edellä, R5 on kaavan II mukainen rakenne, jolloin R8a = syanometyyli, R7 on kaavan IV mukainen rakenne ja Rb on metyyliryhmä tai d) siinä tapauksessa, että R5 oli lähtöyhdisteessä 30 kaavan III mukainen ryhmä ja R7 oli vety, R^R4 merkitsevät samaa kuin edellä, R5 on kaavan III mukainen rakenne, R7 on vety ja R8 on syanometyyli.

Antamalla yhdisteen (I) reagoida asylointiaineen, esimerkiksi asetanhydridin tai asetyylikloridin tai tri-35 fluoriasetanhydridin kanssa tai muurahaishaposta ja etik- li i 9 89495 kahaposta koostuvan seosanhydridin kanssa sopivassa liuot-timessa, esim. metanolissa, saadaan yhdiste, jossa edellä-mainituissa tapauksissa a)-d) R8 tai R8a on syanometyyliryh-män sijasta substituentti, jolla on yleinen kaava COR9, 5 jolloin R9 voi olla vety, CH3, CF3 tai CC13.

Antamalla yhdisteen (I) reagoida kaavan R10CHO mukaisen alifaattisen tai aromaattisen aldehydin kanssa, joka voi mahdollisesti olla substituoitu sopivalla tavalla, jolloin substituentin täytyy olla sellainen, että se 10 on aldehydifunktion suhteen inertti, kuten esim. metyyli, etyyli, hydroksi, metoksi, etoksi, nitro, syano, fluori, kloori tai bromi, sopivan pelkistimen, kuten esim. nat-riumsyanoboorihydridin läsnäollessa, saadaan yhdiste, jossa edellä mainituissa tapauksissa a)-d) R8 tai R8a on syano-15 metyyliryhmän sijasta yleisen kaavan CH2R10 mukainen substituentti, jolloin R10 on määritelty käytetyn aldehydin rakenteella .

Antamalla yhdisteen (I) reagoida alifaattisen tai substituoidun alifaattisen jodi-, tosyyli- tai trifluori-20 metaanisulfonyyli-yhdisteen kanssa, mahdollisesti lisäten sopivaa emästä, esim. trietyyliamiinia, saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa edellämainituissa tapauksissa a)- d) R8 tai R8a on syanometyyliryhmän sijasta substituentti, jolla on yleinen kaava CH2R10, jossa R10 on määritelty käy-25 tetyn jodidin, tosylaatin tai trifluorimetaanisulfonaatin rakenteella.

Keksinnön mukaisen menetelmän mukaan saaduilla uusilla antrasykliinijohdannaisilla on sytostaattinen eli solujen jakautumista ja kasvua estävä aktiviteetti ja ne 30 voidaan tämän johdosta formuloida yhdessä tavanomaisten farmaseuttisten valmistus- ja/tai laimennusaineiden kanssa lääkeaineiksi, joita käytetään syövän hoidossa. Annostus-ja käyttötapa vastaavat tällöin pääasiallisesti tunnettujen aineiden adriamysiinin, daunomysiinin, aklasinomysii-35 nin, 4’-epi-adriamysiinin, 4'-metoksiadriamysiinin tai 4'-deoksiadriamysiinin vastaavia annostus- ja käyttötapoja.

10 89 495 Tällä tavoin valmistetut lääkeaineet voivat vielä lisäksi sisältää myös muita vaikuttavia aineita, mikäli nämä eivät aiheuta yhdessä keksinnön mukaisten yhdisteiden kanssa mitään ei-toivottuja sivuvaikutuksia.

5 Keksinnön mukaisten yhdisteiden sytostaattista eli solujen jakautumista ja kasvua estävää vaikutusta tutkittiin hiiren L1210 -leukemiasolujen avulla. Tätä varten käytettiin apuna L1210 -leukemiasolujen kasvupesäkkeiden muodostumista agar-levyille. Tätä menetelmää käytetään 10 osoittamaan testiaineiden vaikutus solujen kasvuun 1 tunnin aikana tai useamman sukupolven aikana. Solujen jakau-tumiskierron eli syklin ollessa 10-12 tuntia tarkkaillaan tällöin 7 päivän testiaikana suunnilleen 14 peräkkäistä sukupolvea. Keksinnön mukaiset, sytostaattisesti vaikutta-15 vat aineet saavat aikaan tässä testissä tarkkailtavien kasvupesäkkeiden lukumäärän alenemisen käsittelemättömään kontrollinäytteeseen verrattuna.

Testimenetelmän yksityiskohdat käyvät ilmi seuraa-vasta kasvupesäkkeiden muodostumisen määrittämiseksi käy-20 tettävästä menetelmätavasta:

Menetelmä L1210 -leukemiasolujen kasvupesäkkeiden muodostumisen määrittämiseksi pehmeä-agarilla 500 leukemiasolua/levy inkuboitiin 1 tunnin ajan 37°C:ssa käyttäen testiaineen 1 eri konsentraatioita. Lo-25 puksi solut pestiin kaksi kertaa McCoy5A-väliaineella ja lopuksi kaadettiin petrimaljoihin, sen jälkeen kun oli ensin lisätty 0,3 % agaria. Kontrollinäytteitä inkuboitiin käyttäen ainoastaan vasta valmistettua väliainetta. 1 tunnin kestävän inkuboinnin sijasta sekoitettiin monissa ta-30 pauksissa testiaineiden eri konsentraatioita ylimpään agar-kerrokseen, jotta solut näin saatettaisiin koko inkuboinnin ajan alttiiksi testiaineiden vaikutukselle. Agarin jähmetyttyä levyjä inkuboitiin lämpökaapissa 7 päivän ajan 37°C:ssa (5 tilavuus-% C02:ta, 95-%:inen suhteellinen il- 35 man kosteus). Lopuksi laskettiin niiden kasvupesäkkeiden lukumäärä, joiden läpimitta oli yli 60 pm. Tulokset ilmoi- I : il 89 495 tettiin kasvupesäkkeiden lukumääränä käsitellyillä agar-levyillä prosentteina kontrollista. Näin saadusta annos-vaikutuskäyrästä määritettiin IC50 aineen vaikutuksen mittana. Tässä kuvattujen yhdisteiden tulokset adriamysii-5 niin verrattuna ovat yhteenkoottuina seuraavassa taulukossa 1.

12 89495

Taulukko la^, osa 1 Kaavan I mukainen yhdiste

Aine nro r1 r2 r5_R7 R8_R8a (esimerkki)

Adriamysiini H OH OH H H (1 ) H OH OH -H - H (2) OH OH OH H H (3) OH OH OH H H (4) OH OH COOCH3 H - H (5)1) H OH OH H CHO (6)1) H OH OH H CH2CN (7)1) OH OH OH H CH2CN (8)1) H OH OH H bentsyyli (9)1) OH OH OH H - bentsyyli (10)1) H OH OH H CH2CH3 O1)1) H OH OH H propyyli (12)1> H OH OH H butyyli (13)1) OH OH COOCHj H - COCH-j (14)1) H OH II H H H (15) H OH II IV H CH3 (16)1) H OH III H - H (17) 3 4 a) Mainittujen yhdisteiden kohdalla pätee R = R = OH.

I ; ei keksinnön mukainen yhdiste

Taulukko la^ , osa 2 1 7 ς o o q Aine nro R R R R R (esimerkki) 13 89 495 H OH OH - pentyyli (18)*> H OH OH _ heksyyli H OH OH - heptyyli H OH OH _ oktyyli H OH OH _ 4-klooribentsyyli (22) ) H OH OH _ 4-bromibentsyyli (23) ) H OH OH - 4-nitrobentsyyli (24) ) H OH OH _ 4-syanobentsyyli (25) ) H OH OH _ sykloheksyylimetyyli (26) ) OH OH OH _ pentyyli (27) ) H OH ^ bentsyyli bentsyyli (28) ) H OH U pentyyli pentyyli (29) ) li r\i_r TT f 3 0 )

n un 11 syancmetyyli sy anone tyyli v J

H OCH3 H COCH3**) _ H (31)*) H 0CH3 H CHOHCHj**1 _ H (32)*) 14 89495

Taulukko 1, osa 3

Aine nro R^-arvot3^ Kesto-inku- 1 tunnin (esimerkki) eluointiaine bointi inkubointi 1 2 3 IC50 (Mg/ml) IC50 (ug/ml) 0,02 0,04 (1) 0,86 0,60 0,29 0,02 0,038 (2) 0,86 0,60 · 0,02 0,026 (3) 0,78 0,48 0,11 0,13 (4) 0,78 0,48 0,1 0,11 0,13 (5) 1> 0,87 0,20 0,13 0,28 > 1 (6) 1> 0,88 0,65 0,66 0,044 0,15 (7) 1> 0,82 0,68 0,53 0,013 0,021 (8) 1> 0,83 0,69 0,48 0,042 0,2 (9) 1> 0,78 0,50 0 ,46 0,028 0,32 (10) 1) 0,78 0,49 0,45 (11) 1) 0,53 0,30 0,09 0,007 0,08 (12) 1) 0,65 0,38 0,18 0,026 0,1 (13) 1) 0,75 0,45 0,29 0,018 0,125 (14) 1) 0,5 > 1 (15) 0,43 0,20 0,13 >1 >1 (16) 1) 0 (52b·^ 0,0033 0;025 (17) 0,38b) 0,0024 0,06 ei keksinnön mukainen yhdiste is 89495

Taulukko 1, osa 4

Aine nro Rf-arvot Kesto-inku- 1 tunnin kestävä (esimerkki) eluointiaine bointi inkubointi 1 2 3 ICS0 (ug/ml) IC50 (Mg/ml) ( 1 8)*) 0,78 0,52 0 7 30 0,075 0,48 ( 19)*) 0,81 0,59 0 r32 0,13 1 ,2 (20)*) 0,68 0,48 0,31 0,38 1,9 ( 21 )*) 0,65 0,49 0,28 .. 0,46 2,8 (22) *) 0,67 0,41 0,61 0,026 0,95 (23) *) 0,74 0,47 0,70 0,08 > 1 (24) *) 0,69 0,52 0,83 0,16 2,5 (25) *) 0,66 0,49 0,81 0,11 - > 1 (26) *) 0,73 0,48 0,39 (27) *) 0,68 0,45 0,20 0,06 > 1 (28) *) 0,60 0,40 0,40 0,0065 0, 1 2 (29) *) 0,57 0,36 0,08 0,1 0,6 (30) *) 0,79 0,68 0,51 (31) *) 0,50 0,29 0,01 (32) *) 0,35 0,16 0,009 0,5 1,3 *) ei keksinnön mukainen yhdiste Huomautuksia taulukkoon 1 a) Eluointiaine 1: Kloroformi/metanoli/etikkahappo/vesi/-trietyyliamiini (80/20/10/4/0,2)

Eluointiaine 2: Eluointiaine 1/dikloorimetaani (2/1)

Eluointiaine 3: Dikloorimetaani/metanoli (9/1) b) Kloroformi/metanoli/etikkahappo/vesi (8/1/1/0,2)

Lukuarvojen kohdalla on kyse tilavuussuhteista. 1 ie 89495

Keksinnön mukaisen valmistusmenetelmän selventämiseksi esitetään seuraavassa esimerkit 1-4, 15 ja 17, jotka koskevat kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistusta. Muut esimerkit koskevat kaavan (I) mukaisten yhdisteiden 5 johdannaisten valmistusta.

Valmistetun yhdisteen rakenne määritettiin :H- ja 13C-NMR- sekä MS-spektroskopian avulla. Reaktioiden kulkua sekä tulokseksi saatavia yhdisteitä tutkittiin ohut-kerroskromatografisesti tai HPLC-tekniikkaa käyttäen.

10 Ohutkerroskromatografiointi tapahtui, mikäli toisin ei ole mainittu, silikageeli-valmislevyillä käyttäen elu- ointiainetta 1: metanoli (20 osaa)/kloroformi (80 osaa)/-etikkahappo (10 osaa)/vesi (4 osaa)/trietyyliamiinia (0,2 osaa). Pylväskromatografiointi tapahtui, - mikäli ei toi-15 sin ole mainittu käyttäen silikageeli 60:tä, jonka halkaisija oli 20-45 pm tai 0,063-0,200 nm. Edullisena pidetyt osat ovat tilavuusosia. Saantoja ei ole optimoitu.

Esimerkki 1 7-0-( 3 ' -N-metyyli-a-L-daunosaminyyli )-B-rodomysino-20 ni (yhdiste 1) (Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R1=H, R2=R3=R4=R5= OH ja R7=R8=H)

Liuos, jossa oli 500 mg = 0,92 mmol 7-0-a-L-rodos-aminyyli-3-rodomysinonia, joka oli saatu tunnettujen me-25 netelmien mukaisesti, esimerkiksi kuten on kuvattu julkaisussa "Yoshimoto et ai., 1984, J. Antibiot. (1984) 37, 920", seoksessa, joka koostui kloroformista (1200 ml) ja metanolista (50 ml) jaettiin 8 petrimaljaan, joiden läpimitta oli 19 cm ja säteilytettiin heijastavalla alustalla 30 kevyesti sekoittaen noin 25 cm:n etäisyydeltä kahdella 500 watin säteilyttäjällä 5 tunnin ajan, jolloin reaktiota seurattiin ohutkerroskromatografisesti. Sitten liuokset yhdistettiin ja liuotin poistettiin rotaatiohaihduttimes-sa. Jäännös liuotettiin mahdollisimman pieneen määrään me-35 tanolia, lisättiin vettä, saatettiin pH l-%:isella suola- li t 17 8 9 4 9 5 hapolla arvoon 4 ja uutettiin useita kertoja kloroformilla, jolloin haluttu tuote jäi jäljelle vesipitoiseen faasiin. Tämä "kloroformi-faasi I" haihdutettiin ja käsiteltiin edelleen vastaavasti kuin esimerkissä 6 on kuvattu.

5 Vesipitoisen faasin pH saatettiin kyllästetyllä, vesipitoisella natriumvetykarbonaatti-liuoksella arvoon 7-8 ja haluttu tuote uutettiin kloroformilla. Saanto: 264 mg (0,50 mmol) = 54 %.

Esimerkki 2 10 7-0-( 3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-B-rodomysino- ni-hydrokloridi (yhdiste 2) (Kaavan I mukaisen yhdisteen HCl-addukti, jossa R1 = H, R2 = R3 = R4 = R5 = OH ja R7 = R8 = H) 500 mg 7-0-a-L-rodosaminyyli-B-rodomysinonia 15 demetyloitiin vastaavasti kuten esimerkissä 1 ja käsiteltiin edelleen. l-%:isella suolahapolla pH-arvoon 4 saatettu vesipitoinen liuos lyofilisoitiin sen jälkeen kun oli ensin uutettu useita kertoja kloroformilla. Saanto: 282 mg (0,50 mmol) = 54 %.

20 Esimerkki 3 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-isorodo-mysinoni (yhdiste 3) (Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R1=R2=R3=R4=R5=OH ja R7=R8=H) 25 280 mg (0,50 mmol) 7-0-a-L-rodosaminyyli-B-isorodo- mysinonia, joka oli saatu kirjallisuudesta tunnetun beta-isorodomysiini-II:n lievällä happohydrolyysillä (Brockmann et ai.. Tetrahedron Letters 1969, 415) vastaavasti kuin 7-O-a-L-rodosaminyyli-B-rodomysinonin B-rodomysiini-II:sta 30 tapahtuvassa valmistuksessa, liuotettiin 60 ml:aan metano-lia, lisättiin 100 ml kloroformia ja säteilytettiin 90 min ajan kuten esimerkissä 1. Sitten liuotin poistettiin ro-taatiohaihduttimessa, jäännös liuotettiin pieneen määrään metanolia, pH saatettiin l-%:isella suolahapolla arvoon 1, 35 laimennettiin vedellä noin 400 ml:ksi ja uutettiin useita 18 89 495 kertoja kloroformilla, jolloin haluttu tuote jäi jäljelle vesipitoiseen faasiin. Lopuksi pH saatettiin kyllästetyllä, vesipitoisella natriumvetykarbonaattiliuoksella arvoon 7 ja haluttu tuote uutettiin kloroformilla. Saanto: 234 mg 5 (0,43 mmol) = 86 %.

Mahdollisesti tuote voidaan puhdistaa kromatografi-sesti silikageeli 60-pylväällä käyttäen eluointiaineena dikloorimetaani/metanolia (4/1).

Esimerkki 4 10 7-0-( 3’-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-B-isorodo- mysinoni-hydrokloridi (yhdiste 4) (Kaavan I mukaisen yhdisteen HCl-addukti, jolloin R1 = R2 = R3 = R4 = R5=OH ja R7=R8=H) 50 mg (0,09 mmol) 7,O-a-L-rodosaminyyli-B-isorodo-15 mysinonia demetyloitiin vastaavasti kuten esimerkissä 3 ja käsiteltiin edelleen. l-%:isella suolahapolla happameksi saatettu vesipitoinen liuos lyofilisoitiin sen jälkeen kun oli ensin uutettu useita kertoja kloroformilla. Saanto: 41 mg (0,07 mmol) = 78 %.

20 Esimerkki 5 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-c-isorodomy- sinoni (yhdiste 5) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R3=R2=R3=R4=OH, R5 = COOH3 ja R7 = R8 = H) 25 62 mg (0,10 mmol) 7-0-a-L-rodosaminyyli-ε-isorodo- mysinonia demetyloitiin vastaavasti kuten esimerkissä 1 ja reaktiota seurattiin ohutkerroskromatografisesti. Sen jälkeen kun lähtöyhdiste oli käytetty loppuun, liuotin poistettiin rotaatiohaihduttimessa ja reaktiotuote erotettiin 30 uudelleen pylväskromatografisesti (10 g silikageeli 60:tä HPLC:tä varten, 25-40 pm, Merck; eluointiaine: dikloori-metaani/metanoli/vesi (80/8/1). Silikageelijäännösten poistamiseksi uutettiin puhdistettu kiinteä tuote useita kertoja kloroformilla ja saatiin takaisin yhdistetyistä 35 kloroformifaaseista. Saanto: 27 mg (ei-optimoitu). Fab- i 19 89495 massaspektrin (M+H*= 588 moolipiikki on yhtäpitävä lasketun moolimassan 587,6 (C29H33N012) kanssa.

Esimerkki 6 7-0-(3'-N-formyyli-3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyy-5 li)-B-rodomysinoni (yhdiste 6) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1=H, R2=R3=R4=R5= OH, R7 = H, R®=CH0)

Erilaiset "kloroformi-faasin I" tuoteseokset, jotka on saatu vastaavasti kuten esimerkissä I, yhdistettiin 10 (390 mg) ja erotettiin silikageelipylväällä (halkaisija 3.5 cm, täyttökorkeus 10 cm; eluointiaineena käytettiin dikloorimetaani/metanolia (19/1)) lievässä paineessa (käyttäen apuna paineilmaa). Fraktiot, jotka sisälsivät puhdasta ainetta, jonka Rf=0,29 dikloorimetaani/metanolissa 15 (19/1), otettiin talteen. Saanto: 80 mg. Fab-massaspektrin (M+H*=588) moolipiikki on yhtäpitävä lasketun moolimassan 57.5 (C28H31NOn) kanssa.

Esimerkki 7 7-0-(3'-N-syanometyyli-3'-N-metyyli-a-L-daunos-20 aminyyli)-β-rodomysinoni (yhdiste 7) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R3=H, R2 = R3 = R4=R5 = OH, R7 = H ja R8=CH2CN)

Liuokseen, jossa oli 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunos-aminyyli)-6-rodomysinonia (200 mg = 0,38 mmol) ja trietyy-25 liamiinia (1,14 mmol) 10 mlrssa kuivaa dimetyyliformamidia lisättiin 630 mg (3,8 mmol = 10 ekviv. ) jodiasetonitriiliä ja sekoitettiin yön ajan huoneen lämpötilassa. Sitten haihdutettiin rotaatiohaihduttimessa. Jäännös liuotettiin kloroformiin, liuos uutettiin kolme kertaa vedellä, kui-30 vattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ja liuotin poistettiin. Jäännös erotettiin silikageeli-pylväällä käyttäen dikloorimetaani/metanolia (9575) (Rf 0,28). Saanto: 105 mg (0,18 mmol) = 47 %.

20 89495

Esimerkki 8 7-0-(31-N-syanometyyli-31-N-metyyli-a-L-daunos-aminyyli)-β-isorodomysinoni (yhdiste 8) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1=R2=R3=R4=R5=OH, 5 R7 = H, R8=CH2CN) 30 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-isorodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 7 jodiasetonitriilin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli 60-pylväällä käyttäen 10 eluointiaineena dikloorimetaani/metanolia (99/1). Saanto: 8 mg.

Esimerkki 9 7-0-(3'-N-bentsyyli-31-N-metyyli-a-L-daunosaminyy-li)-β-rodomysinoni (yhdiste 9) 15 (Yhdisteen I johdannainen, jossa R3=H, R2=R3=R4=R5= OH, R7=H ja R8=bentsyyli)

Liuokseen, jossa oli 52 mg (0,09 mmol) 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-rodomysinonia ja 190 μΐ (1,8 mmol = 20 ekvivalenttia) bentsaldehydia 3 ml:ssa ase-20 tonitriili/vettä (3/1) lisättiin 6 μΐ (0,1 mmol) jääetik-kaa. 4 tunnin kuluttua lisättiin liuos, jossa oli 20 mg (0,6 mmol) natriumsyanoboorihydridiä 900 pl:ssa asetonit-riili/vettä (3/1) ja sekoitettiin edelleen pimeässä 3 päivän ajan. Sitten lisättiin 15 ml vettä ja liuosta ravis-25 teltiin kolme kertaa kulloinkin 20 ml:n kloroformia kanssa. Yhdistetyt kloroformifaasit uutettiin takaisin peräkkäin vedellä ja kyllästetyllä natriumvetykarbonaatti-liuoksella, liuotin poistettiin vakuumissa ja saatu tuote kromatografioitiin silikageeli 60-pylväällä käyttäen 30 eluointiaineena dikloorimetaani/metanolia (99/1). Saanto: 30 mg (0,05 mmol) = 56 %.

Esimerkki 10 7-0- ( 3 1 -N-bentsyyli-3'-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-isorodomysinoni (yhdiste 10) 35 (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1=R2=R3=R4=R5=0H, R7 = H ja R8 on bentsyyli) 2i B 9 4 9 5 30 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-isorodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 9 bentsaldehydin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointi-5 aineena dikloorimetaani/metanolia (99/1). Saanto: 5 mg. Esimerkki 11 7-0-(31-N-etyyli-31-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-rodomysinoni (yhdiste 11) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R^H, R2 = R3=R4=R5 = 10 OH, r7 = H ja R8=CH2CH3) 52 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-rodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 9 asetaldehydin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiaine-15 gradientteina dikloorimetaani/metanolia (99/1) - (8/2).

Saanto: 14 mg.

Esimerkki 12 7-0-( 3 ' -N-metyyli-3 ' -N-propyyli-a-L-daunosaminyy-li)-β-rodomysinoni (yhdiste 12) 20 (Yhdisteen I johdannainen, jossa R^H, R2=R3=R4=R5= OH, R7=H ja R8=propyyli) 52 mg:n 7-0-(31-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-rodomysinonin annettiin reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 9 propionialdehydin kanssa ja käsiteltiin edelleen 25 ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointi-ainegradientteina dikloorimetaani/metanolia (99/1) -(9/1). Saanto: 18 mg.

Esimerkki 13 7-0-( 3'-N-butyyli-3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-30 β-rodomysinoni (yhdiste 13) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R^H, R2=R3=R4=R5= OH, R7=H ja Re=butyyli) 52 mg:n 7-0-(31-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-rodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esimer-35 kissä 9 butyraldehydin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja 22 89495 puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiaine-gradientteina dikloorimetaani/metanolia (99/1) - (9/1).

Saanto: 20 mg.

Esimerkki 14 5 7-0- ( 3 ' -N-asetyyli-3 ' -N-metyyli-a-L-daunosaminyy- li)-β-isorodomysinoni (yhdiste 14) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1=R2 = R3=R4=OH, R5 = COOCH3, R7 = H ja R8 = COCH3) 15 mg 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-iso-10 rodomysinonia N-asetyloitiin 3 ml:ssa metanolia 100 pl:lla asetanhydridiä. Sitten haihdutettiin rotaatiohaihduttimes-sa, liuotettiin kyllästettyyn natriumvetykarbonaattiliuok-seen ja reaktiotuote uutettiin kloroformilla. Saanto: 11 mg.

15 Esimerkki 15 7,10-0-bis-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-fi-ro-domysinoni (yhdiste 15) (Kaavan I mukainen yhdiste, jossa R3=H, R2=R3=R4=OH, R5=kaavan II mukainen rakenne, jolloin R8a=H ja 20 R7=R8=H) 120 mg 7,10-0-bis-a-L-rodosaminyyli-B-rodomysinonia (australialainen patenttihakemus AU 84/30823) säteilytet-tiin kolmen tunnin ajan vastaavasti kuten esimerkissä 1. Sitten liuotin poistettiin rotaatiohaihduttimessa. Jään-25 nös liuotettiin pieneen määrään metanolia, lisättiin vettä ja uutettiin peräkkäin kloroformilla pH:n ollessa 2, 4, 6 ja 8. pH-arvossa 6 ja 8 saatujen kloroformi-uutteiden tuote kromatografioitiin silikageelipylväällä käyttäen eluointiainetta 1, johon oli lisätty suhteessa 1:1 dikloo-30 rimetaania ja sen jälkeen kun oli uudelleen ravisteltu vesipitoisen natriumvetykarbonaatti/kloroformin kanssa eristettiin puhtaassa muodossa. Saanto: 66 mg.

Esimerkki 16

Monodemetyloitu sytorodiini S 35 (Yhdiste 16) 23 8 9 4 9 5 (Yhdisteen I johdannainen, jossa RX=H, R2=R3=R4=OH, R5=kaavan II mukainen rakenne, jolloin R8a=H, R7=kaa-van IV mukainen rakenne ja R8=CH3) 400 mg (0,425 mmol) syrorodiini S:ää (AU 84/30823 5 mukaan) säteilytettiin vastaavasti kuten esimerkissä 1. Vaihtoehtoisesti liuos pantiin Duran-50-fotolyysilasilait-teistoon, jossa oli jäähdytysvaippa ja uppoputki. Säteily-tys tapahtui uppolampulla 3 tunnin ajan ja reaktion kulkua seurattiin ohutkerroskromatografisesti. Reaktion päätyttyä 10 aineesta poistettiin liuotin ja kuivattiin. 100 mg reaktiotuotetta erotettiin 18 g:11a silikageeliä käyttäen eluointiaineseosta: kloroformi/metanoli/99 % etikkahappo/ vesi = 8/1/1/0,2. Saanto: 47,5 mg.

Esimerkki 17

15 Monodemetyloitu sytorodiini T

(Yhdiste 17) (Kaavan I mukainen yhdiste, jossa Rx-H, R2=R3=R4=OH, R5=kaavan III mukainen rakenne, ja R7 ja R8=H) Sytorodiini T:lle (AU 84/30823 mukaan) suoritettiin 20 fotolyysi vastaavasti kuten esimerkissä 1. Vaihtoehtoisesti liuotettiin 50 mg (0,053 mmol) sytorodiini T:tä 5 ml:aan kloroformia ja annettiin seistä huoneen lämpötilassa päivänvalossa. Reaktiota seurattiin ohutkerroskromatograf isesti. 7 päivän kuluttua liuotin poistettiin ja 25 jäännös puhdistettiin suorittamalla preparatiivinen ohutkerroskromatograf ia systeemissä kloroformi/metanoli/99 % etikkahappo/vesi = 8/1/1/0,2), Saanto: 16 mg.

Esimerkki 18 7-0- ( 3 ' -N-metyyli-3 ' -N-pentyyli-a-L-daunosaminyy-30 li )-β-rodomysinoni (yhdiste 18) (Yhdisteen I johdannainen, jossa RX=H, R2=R3 = R4 = R5= OH, R7 = H ja R8=pentyyli) 52 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-B-rodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esi-35 merkissä 9 pentanaalin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja 24 8 9 4 9 5 puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiai-neena dikloorimetaani/metanolia (95/5). Saanto: 25 mg (48 %).

Esimerkki 19 5 7-0-(31 - N-heksyyli-3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyy- li )-β-rodomysinoni (yhdiste 19) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1=H, R2=R3=R4=R5 = OH, R7=H ja R8=heksyyli) 52 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-10 rodomysinonia annettiin reagoida heksanaalin kanssa vastaavasti kuten esimerkissä 9 ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiai-neena dikloorimetaani/metanolia (9/1). Saanto: 25 mg (48 %).

15 Esimerkki 20 7,0- ( 3 ' -N-heptyyli-3 ' -N-metyyli-a-L-daunosaminyy-li)-β-rodomysinoni (yhdiste 20) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1=H, R2=R3=R4=R5= OH, R7=H ja R8=heptyyli) 20 58 mg:n 7-0-(3’-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β- rodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 9 heptanaalin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiaineena dikloorimetaani/metanolia (9/1). Saanto: 34 mg 25 (59 %) .

Esimerkki 21 7-0-( 3'-N-oktyyli-3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)- β-rodomysinoni (yhdiste 21) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1=H, R2=R3 = R4=R5 = 30 OH, R7=H ja R8=oktyyli) 58 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-B-rodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 9 oktanaalin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiaineena 35 dikloorimetaani/metanolia (9/1). Saanto: 40 mg (69 %).

i 25 89495

Esimerkki 22 7-0-(3'-N-(4-klooribentsyyli)-3'-N-(4-klooribents-yyli)-3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-B-rodomy-sinoni (yhdiste 22) 5 (Yhdisteen I johdannainen, jossa R^H, R2=R3=R4 = R5= OH, R7 = H ja R8=4-klooribentsyyli) 52 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-fi-rodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 9 4-klooribentsaldehydin kanssa ja käsiteltiin edel-10 leen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiaineena dikloorimetaani/metanolia (975/25). Saanto: 31 mg (60 %).

Esimerkki 23 7-0-(3'-N-(4-bromibentsyyli)-3'-N-metyyli-a-L-dau-15 nosaminyyli)-β-rodomysinoni (yhdiste 23) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R3 = H, R2=R3=R4 = R5= OH, R7=H ja R8=4-bromibentsyyli) 52 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli-β-rodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esi-20 merkissä 9 4-bromibentsaldehydin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiaineena dikloorimetaani/metanolia (95/5). Saanto 30 mg (58 %).

Esimerkki 24 25 7-0-(3'-N-(4-nitrobentsyyli)-3'-N-metyyli-a-L-dau- nosaminyyli)-β-rodomysinoni (yhdiste 24) (Yhdisteen I johdannainen, jossa RX=H, R2=R3=R4=R5 = OH, R7=H ja R8=4-nitrobentsyyli) 58 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-30 rodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 9 4-nitrobentsaldehydin kanssa ja käsiteltiin edelleen, sitten puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiaineena tolueeni/etanolia (965/35). Saanto: 30 mg (52 %).

35 Esimerkki 25 7-0-(3'-N-(4-syanobentsyyli)-3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli )-β-rodomysinoni (yhdiste 25) 26 b 9 4 9 5 (Yhdisteen I johdannainen, jossa RX=H, R2=R3=R4=R5= OH, R7 = H ja R8=4-syanobentsyyli) 58 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-rodomysinonia annettiin reagoida 4-syanobentsaldehydin 5 kanssa vastaavasti kuten esimerkissä 9 ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä käyttäen eluointiaineena dikloorimetaani/metanolia (975/25). Saanto: 49 mg (84 %).

Esimerkki 26 10 7-0-(3'-N-sykloheksyylimetyyli-3'-N-metyyli-a-L- daunosaminyyli )-β-rodomvsinoni (yhdiste 26) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1=H, R2=R3=R4=R5= OH, RV=H ja R8=sykloheksyylimetyyli) 20 mg 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-6-rodo-15 mysinonia sekoitettiin 4,6 μ1:η etikkahappoa läsnäollessa 170 mg:n kanssa sykloheksaanialdehydia (184 μΐ = 40 ekviv.) liuotinseoksessa, joka koostuu asetonitriili/ve-destä (4/1) 10 min. ajan huoneen lämpötilassa. Sitten lisättiin uudelleen 4,6 μΐ etikkahappoa ja reaktioseosta 20 sekoitettiin edelleen, kunnes lähtöyhdiste oli hävinnyt.

Sitten reaktioliuos kaadettiin 0,1N suolahappoon, pestiin kaksi kertaa n-heksaanilla, vesipitoisen faasin pH saatettiin kiinteällä natriumvetykarbonaatilla arvoon 11, reaktiotuote uutettiin kloroformilla ja puhdistettiin si-25 likageeli-pylväällä eluointiaineessa, joka koostui eluoin-tiaineesta 1 ja dikloorimetaanista suhteessa 1/2. Loppu etikkahappo poistettiin ravistelemalla uudelleen kloro-formi/natriumvetykarbonaatti-liuoksen kanssa. Saanto: 11 mg (47 %).

30 Esimerkki27 7-0 - (3 ' -N-metyyli-3'-N-pentyyli-a-L-daunosaminyy-li)-β-isorodomysinoni (yhdiste 27) (Yhdisteen I johdannainen, jossa Rx=R2=R3=R4=R5=OH, R7 = H ja R8=pentyyli) 35 20 mg:n 7-0-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β- isorodomysinonia annettiin reagoida vastaavasti kuten esi- 27 89 49 5 merkissä 9 pentanaalin kanssa ja käsiteltiin edelleen ja puhdistettiin silikageeli-pylväällä eluointiaineessa: di-kloorimetaani/metanoli (9/1). Saanto: 6 mg (30 %). Esimerkki 28 5 7,10-0-bis-( 3'-N-bentsyyli-3'-N-metyyli-a-L-daunos- aminyyli)-β-rodomysinoni (yhdiste 28) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R1 = H, Rz=R3=R4=OH, R5=kaavan II mukainen rakenne, jolloin R8a=bents-yyli, R7=H ja R8=bentsyyli) 10 122 mg (0,18 mmol) 7,10-0-bis-(3’-N-metyyli-a-L- daunosaminyyli)-β-rodomysinonia (yhdistettä 15) sekoitettiin 1,01 g: n kanssa (9,5 mmol) bentsaldehydia 22 mg: n etikkahappoa ja 288 mg:n natriumsyanoboorihydridiä läsnäollessa asetonitriili/vedessä (3/1) (8 ml) yön ajan. Sit-15 ten lisättiin 40 ml vettä, pH saatettiin suolahapolla arvoon 1 ja pestiin kloroformilla. Vesipitoisen faasin pH saatettiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaatti-liuoksella arvoon 8 ja uutettiin kloroformilla. Uutettu tuoteseos (110 mg) erotettiin 20 g:11a silikageeliä käyttäen eluoin-20 tiaine 1/dikloorimetaani (1/1). (Saanto: 24 mg) ja edelleen puhdistettiin 5 g:11a silikageeli-pylvästä käyttäen eluointiaineena dikloorimetaani/metanolia (20/1). Saanto: 13 mg.

Esimerkki 29 25 7,10-0-bis-(3'-N-metyyli-3'-N-pentyyli-a-L-daunos- aminyyli)-β-rodomysinoni (yhdiste 29) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R3=H, R2=R3=R4=OH, R5 on kaavan II mukainen rakenne, jolloin R8a on pentyyli, R7=H ja R8=pentyyli) 30 61 mg:n (0,9 mmol) 7,10-0-bis-(3'-N-metyyli-a-L- daunosaminyyli)-β-rodomysinonia (yhdiste 15) annettiin reagoida 288 mg:n kanssa (3,34 mmol) valeraldehydia 11 mg:n etikkahappoa ja 144 mg:n natriumsyanoboorihydridiä läsnäollessa asetonitriili/vedessä (3/1) (3 ml) vastaavas-35 ti kuten esimerkissä 29. 1 tunnin kuluttua lisättiin 50 ml 28 89 4 95 vettä ja uutettiin useita kertoja kloroformilla. Uutettu tuoteseos erotettiin 10 g:11a silikageeli-pylvästä käyttäen eluointiainetta 2 ja haluttua tuotetta ravisteltiin dikloorimetaanin ja vesipitoisen natriumvetykarbonaatin 5 liuoksen kanssa. Saanto: 27 mg (37 %).

Esimerkki 30 7,10-0-bis- ( 3 ' -N-syanometyyli-3 ' -N-metyyli-a-L-dau-nosaminyyli)-β-rodomysinoni (yhdiste 30) (yhdisteen I johdannainen, jossa R^H, R2=R3=R4=OH, 10 kaavan II mukainen rakenne, jolloin R8a=syanometyy- li, R7=H ja R8=syanometyyli) 84 mg:n (0,125 mmol) 7,10-0-bis-(3'-N-metyyli-a-L-daunosaminyyli)-β-rodomysinonia (yhdiste 15) ja 175 μ1:η (2,5 mmol) jodiasetonitriiliä annettiin reagoida kuivassa 15 dimetyyliformamidissa (5 ml) 400 μ1:η trietyyliamiinia läsnäollessa vastaavasti kuten esimerkissä 7. Tuoteseos eluoitiin 30 g:11a silikageeli-pylvästä, käyttäen aluksi kloroformia ja sen jälkeen kloroformi/metanolin (9/1) seosta. Saanto: 49 mg (52 %).

20 Esimerkki 31 3'-N-metyyli-daunomysiini (yhdiste 31) (Yhdisteen I johdannainen, jossa R^H, R2=OCH3, R3=R4=OH, R5=H, C2H5:n tilalla on COCH3 ja R7=R8=H) 95 mg (0,17 mmol) N,N-dimetyylidaunomysiiniä [Tong 25 et ai., J. Med. Chem. (1979), 22, 912] demetyloitiin ja käsiteltiin edelleen vastaavasti kuten esimerkissä 1. Saanto: 29 mg (31 %).

Esimerkki 32 3'-N-metyyli-13-dihydrodaunorubisiini (yhdiste 32) 30 (Yhdisteen I johdannainen, jossa R7=H, R2=OCH3, R* = R4=0H, Rb=H, C2Hs:n tilalla on CHOHCH, ja R7 = R8=H) 50 mg (0,09 mmol) N,N-dimetyyli-13-dihydrodaunoru-bisiinia (Tong et ai., J. Med. Chem. (1979), 22 912) demetyloitiin ja käsiteltiin edelleen vastaavasti kuten esi-35 merkissä 1. Saanto: 6,5 mg (13 %).

29 3 9 4 9 5

Seuraavassa taulukossa 2 ovat yhteenkoottuina edel-läkuvattujen yhdisteiden 1-17 NMR-arvot ja taulukossa 3 ovat yhteenkoottuina edellä kuvattujen yhdisteiden 18-32 NMR-arvot.

5 Taulukko 2

Eri kaavan I mukaisten yhdisteiden 400 MHz ^-NMR-arvot

Ensimmäisen rivin aine-numerot vastaavat kulloinkin esimerkkien numeroita. Merkkejä a)-u) käytetään lähem-10 pää karakterisointia varten:

Lyhennykset: s: singletti d: dupletti t: tripletti 15 q: kvartetti dd: dupletin dupletti bs: leveä singletti

a) Spektri mitattu CDC13/D6-DMS0:ssa vertailuna TMS

b) 300 MHz-spektri

20 c) spektri mitattu CDCl3:ssa vertailuna TMS

d) molempien rotameerien kohdalla havaitaan eristetyt signaalit e) CHO: 8,12 s; 8,01 s f) NCH2CN: 3,59 dd 25 g) NCH2Ph: 8: 3,62 d; a: 3,40 d h) arvo CD2OD:ssä i) ei yksiselitteisesti identifioitavissa k) OH-ryhmien järjestäytyminen ei yksiselitteistä l) arvot otettu toisesta spektristä 30 m) 270 MHz-spektri; C00CH3: 3,72 s n) NCOCHj: 2,04 s COOCHj: 3,71 s o) NCH2CN: 3,60 dd p) butyyli-CH3: 0,87 t 35 q) NCH2Ph: fl: 3,66 d; a: 3,45 d r) N-etyyli-CH3: 1,04 t 30 89 495 s) N-propyyli-CH^: 0,84 t t) eivät esiinny mittausolosuhteissä u) 270 MHz-spektri, mitattu lisäten D^Orta ja Na0CO^:a

Tau1 u kko 2, osa_1 Aine nro protoni ^a) 2a) 4a) gin) H-1 7,90 d 7,87 d H~2 7f73 1 1,19 t 7 ,35 s 7,30 s H-3 7,35 d 7,35 d H-7 5,12 m 5,00 d 5,01 d 5,25 d H-8a 2 20 m 1,9-2,2 m 1,85-2,14 m H-88 ’ 2,18 dd 2 Γ19 dd H-10 4,81 s 4,72 s 4,73 s 4,28 s H_13a 1,7-2,0 m V° m M9 m H-138 1 ,76 m 1,77 m H3-14 1 ,10 t 1 ,05 t 1,06 t 1,13 t H-1’ 5,43 bs 5,43 bs 5,44 d 5,49 d H2-2’ 1,7-2,0 m 1,9-2,2 m 1,85-2,14 m H-3’ 2,67 m 3,49 mh) i) 2,81 bd H-4’ 3,88 bs 3,86 bs 3,86 bs H-5’ 4,10 q 4,18 q 4,18 q 4,10 q

Hj-6’ 1 ,35 d 1 ,27 d 1,28 d 1 ,37 d N-CH3 2,33 s 2,51 s 2,52 t 2,39 bs 0H-1 * 12,28 s

OH-4 - 12,12 bsiJ

OH-6 - 12,88 bs1) 12,99k) OH-11 - 13,69 bs15 13,03k) OH-9 3,85 s 3,63 s 3,84 s p 31 8 9 4 9 5

Taulukko 2, osa 2

Aine ,c,d,e) ?ct£) gC,o) qc>g) nro υ protoni H-1 7,88 d; 7,85 d 7,88 dd - 7,87 dd H-2 7,72 t; 7,69 t 7,71 t 7 28 s 7,71 t H-3 7,33 d; 7,27 d 7,31 dd ' 7,32 dd H-7 5,15 m; 5,12 m 5,14 m 5,13 m 5,17 m H-8a - „ , 2,12 dd 2,12 dd 2,13 dd 2 , U - L , o m ' ’ ' Η-8β 2,25 d 2,25 d 2,28 d H-10 4,92 d;4,90 d 4,94 d 4,94 s 4,92 s H-13a 1,76 m 1,77 m 1,77 m 1,79 m H-13β 1,86 m 1 , 79-1 ,94m 1,80-1 , 94m 1,87 m H3-14 1 ,12 t 1,12 t 1 ,13 t 1,14 t H-1’ 5,55 s; 5,54 s 5 r 5 2 d 5,52 d 5,54 bs H2-2’ 2,0-2,6 m 1,79-1,94m 1,80-1,94m 1,91 m H-3 * 3,56 bd; 2,0-2,6m 2,66 m 2,68 m 2,60 dt H-4 ’ 3,86 d; 3,70 d 3,70 bs 3,71 bs 3,82 bs H-5 ’ 4,4 q; 4,2 q 4,16q 4,17q 4,13 q H3-6’ 1,32 d; 1,30 d 1,39 d 1,39 d 1,43 d N-CH3 3r 00 s; 2,92 s 2,42 s 2,42 s 2,09 s 0H'1 " “ 12,26 bs OH-4 2,08 s; 12,06 s 12,10 s 12,11 bs OH-6 12,85 s; 12,82 s 12,85 s 12 y 8 7 bs 12,82 bs OH-1 1 13,58 s; 13,52 s 13,59 s 12,93 bs 13,62 bs OH-9 3,75 s; 3,66 s 3,77 s 3,78 s 32 8 9 4 9 5

Taulukko 2, osa 3

Aine 10C,C^ 11C,r^ 12C,S^ 13c,p) nro protoni H-1 7,87 dd 7,87 dd 7,88 dd H-2 7,71 t 7,71 t 7,71 t H-3 7,32 dd 7,31 dd 7,32 dd H-7 5,19 m 5,15 m 5,14 m 5,15 m H-8a i) 2,12 dd 2,12 dd 2,12 dd Η-8β 2,28 2,25 d 2,25 d 2,25 d H-10 4,93 4,90 d 4,90 s 4,91 s H"13a i) 1,7-1,93 m 1,7-2,0 m 1,7-2,0 m

H-1 3B

Hj-14 1 ,13 t 1 ,12 t 1 ,12 t 1 ,12t H-1’ 5,55 bs 5,53 bd 5,52 bd 5,52 d H-2’ i) i) i) 1,7-2,0 m H-3’ 2,65 m 2,6-2,8 m 2,59 m i) H-4 ’ 3,84 bs 3,81 bs 3,77 bs 3,76 bs H-5’ 4,12 q 4,09 q 4,09 q 4,09 q H3-6’ 1,43 d 1,39 d 1,40 d 1(40 d N-CH3 2,13 s 2,34 s 2,29 s 2,29 s 0H-1 12,35 bs OH-4 t) t) 12,12 bs OH-6 12i98 bs O t) 12,82 bs OH-11 t) t) 13,58 bs OH-9 i) t) t) i) I:

Taulukko 2, osa 4 33 8 9 4 9 5 ,,ο,η) ice) itc) 17C)

Aine 14’' 15' 16' 1/' nro protoni H-1 - 7,91 dd 7,89 d 7,92 d H-2 7,31 t 7,72 t 7,72 t 7,72 t H-3 7,32 dd 7,32 d 7,31 t H-7 5,24 bs 5,51 m 5,18 m 5,09 m H~8a 2,1-2,4 m 2,25 m 1 ^ l) H-8β i) i) H-10 4,30 s 4,99 s 4,98 s 5,02 s H-13α 1 ,47 m 1,63 m i) i) H-13B 1 ,84 m 1,74 m i) i) H3-14 1 ,13 t 1 ,12 t i) i) H-1’ 5,55 bs 5,44d; 5,41 d 5,41 5,43 H-2’ 1,85 m i) i) H-3’ 2,71 ra; 2,68 m i) i) H-4’ 3,81 bs 3,60 bs; 3,57 bs 3,76 bs 3,71 bs H-5’ 4,17 q 4,07 q; 3,93 q 3,93 q 3,88 q H3-6 ’ 1 ,28 d 1,39 d; 1 ,33 d i) i) N-CH3 2,99 s 2,34 s; 2,33 s 2,32 s 2,31 s OH-1 12,31k)bs OH-4 12,34k)bs t) t) t) OH-6 12,84 bs t) t) t) t) OH-11 13,00 bs t) t) t) t) OH-9 3,65 bs t) t) 34 89495

Taulukko 3

Kaavan I mukaisten eri yhdisteiden 400 MHz H-NMR-arvot tetrametyylisilaanin toimiessa sisäisenä standardina 5 Ensimmäisen rivin aine-numerot vastaavat kulloi- siakin esimerkkinumeroita. Merkkejä a)-p) käytetään lähempää karakterisointia varten:

Lyhennykset: s: singletti 10 d: dupletti t: tripletti q: kvartetti dd: dupletin dupletti bs: leveä singletti 15 a) N-pentyyli-CH-j: 0,84 t b) N-heksyyli-CH^: 0,83 t c) N-heptyyli-CH^: 0,84 t d) N-oktyyli-CH^: 0,84 t e) NCH^hCl:^ : 3,58 d; at : 3,38 d; Ph: 7,24 d (2H) ; 20 7,14 d (2H) f) NCH2PhBr:/3: 3,56 d;o£: 3,36 d; Ph: 7,39 d (2H) ; 7,08 d (2H) g) NCH2PhN02: β : 3,70 d;^: 3,56 d; Ph: 8,14 d (2H) ; 7,40 d (2H) 25 h) NCH2PhCN: β: 3,66 d: 3,49 d; i) ravisteltu natriumvetykarbonaatin/dikloorimetaanin kanssa k) pentyyli-CH^: 0,84 t l) Ph-CH2/3 : 3,65 d, 3,64 d; Ph-CH^: 3,45 d, 3,42 d 30 m) pentyyli-CH^: 0,84 t; 0,80 t n) NCH-CN: 3,51 o) OCH : 4,07 s (3H) p) 13-epimeeriseos; ilmoitetut arvot viittaavat etupäässä muodostuneeseen epimeeriin 35 q) vaillinaisen 13-epimeerin 14-H^: 1,28 d i: < 35 894 95

Taulukko 3, osa 1

Aine 18a^ 19b^ 20C^ 21d-* nro protoni H-1 7,87 dd 7,86 dd 7,88 dd 7,87 dd H-2 7,71 t 7,70 t 7f71 t 7,71 t H-3 7,32 dd 7,31 dd 7,32 dd 7,32 dd H-7 5,14 m 5,13 ra 5,14 m 5,14 m H-8a 2,11 dd 2 r11 dd 2,13 dd 2,11 dd Η-8β 2,26 d 2,26 d 2,26 d 2,26 d H-10 4,90 s 4,90 s 4,91 s 4,90 s Η”13α 1,72-1,94 m 1,72-1,94 m 1,72-1,94 m 1,72-1,94m

H-1 3B

Hj-14 1,12 t 1 ,12 t 1 ,12 t 1,12 t H-1’ 5,50 d 5,49 bs 5,50 bs 5,50 bs H-2’ 1,72-1,94 m 1,72-1,94 m 1,72-1,94 m 1,72-1,94m H-3’ H-4’ 3,71 bs 3,67 bs 3,67 bs 3,67 bs H-5 * 4,08 q 4,07 q 4,07 q 4,07 q H3-6’ 1,40 d 1,41 d 1,41 d 1,41 d N-CH3 2,23 s 2,18 s 2,18 s 2,18 s OH-4 12r18 bs 12,13 bs 12,1 bs OH-6 12,81 bs 12,8 bs 12,8 bs OH -11 13,6 bs 13,5 bs OH-9 4,01 bs 4,05 s 4,05 s 4,05 s

Taulukko 3, osa 2 36 89495

Aine 22e ^ 23f^ 24® ^ 25h^ nro protoni H-1 7,87 dd 7,87 dd 7,88 dd 7,89 dd H-2 7,71 t 7,71 t 7,72 dd 7,72 t H-3 7,32 dd 7,32 dd 7,32 dd 7,33 d H-7 5,16 m 5,16 m 5,17 m 5,17 m H-8a 2,13 dd 2,13-dd 2,13 dd 2,14 dd Η-8β 2,27 d 2,27 d 2,27 d 2,26 d H-1 0 4,92 s 4,92 s 4,92 s 4,92 s H-13a 1,81 m 1,79 m T,79 m 1,79 m H-1 3β 1 ,84-1 «98 m 1,85-1 ,95 m 1 ,84-1 ,98 m 1 ,84-1 ,98 m H3-14 1,13 t 1,13 t 1,13 t 1 ,13 t H-1’ 5,53 m 5,53 m 5,55 bs 5,54 bs H-2’ 1,84-1,98 m 1,85-1,95 m 1,84-1,98 m 1,84-1,98 m H-3’ 2,60 dt 2,59 dt 2,65 dt 2,63 dt H-4’ 3,80 bs 3,80 bs 3,82 bs 3,80 bs H-5' 4,12 q 4,12 q 4,14 q 4,13 q H3-6’ 1,42 d 1,42 d 1 ,42 d 1,42 d N-CH3 2,08 s ' 2,07 s 2,12 s 2,10 s OH-4 12,10 bs 12,10 bs 12,10 bs 12,12 bs OH-6 12,82 bs 12,82 bs 12,83 bs 12,85 bs OH-11 13,60 bs 13,60 bs 13,60 bs 13,61 bs OH-9 4,01 bs 4,01 s 3,98 s 3,98 s I; .·

Taulukko 3, osa 3 37 89495

Aine 26 27i,k^ 281^ 2 9ra^ nro protoni H-1 7,87 d 7,91 dd 7,91 dd

H-2 7,71 t 7 32 s 7>71 1 7,72 Z

H-3 7,32 d ’ 7,31 dd 7,32 dd H-7 5,14 m 5,16 m 5 ?19 m 5,15 m H-8a Η-8β H-1 0 4,90 s 4,91 s 5f03 s 5,00 s H-13a 1 ,74 m H-13β 1 ,80-1 ,94 m H3-14 1 ,12 t 1 ,12 t 1,13 t 1 ,12 t H-1 ’ 5,50 bs 5,52 d 5,54 bs; 5,50 d 5,48 bs; 5,44d H-2’ 1,80-1 ,94 m H-3’ 2,58-2,70 m H-4’ 3,66 bs 3,73 bs 3,81 bs; 3.76bs 3,66bs; 3,60bs H- 5 ’ 4,07 q 4,07 q 4,10 q; 3,94 q 4,04 q; 3,90q H3-6’ 1,41 d 1,40 q 1,43 d; 1,36 d 1,39 d; 1,35d N-CH3 2,13 s 2,25 bs 2,13 s; 2,10 s 2,17 s; 2,16s OH-1 12,32 bs OH-4 12,13 bs 12,12 bs 12,14. bs OH-6 12,81 bs 12 g2 bs 12,90 bs 12,89 bs OH-11 13,59 bs ' 13,74 bs 13,71 bs OH-9 4,06 3,66 bs

Taulukko 3, osa 4 38 89 495

Aine 3Qn) 31o) 32°’P) nro protoni H-1 7,90 dd 8,02 d 8,02 d H-2 7,71 t 7,77 t 7,76 t H-3 7,32 dd 7,38 d 7?37 t H-7 5,16 in 5,29 m 5,28 s H-8a Η-8β H-10 5,01 s 3'22 d ί10β^ 3,19 d (10B) H-13a 2/97 d i10a) H-1 3β

Hj-14 1,12 t 2,41 s 1,32dq) H-1’ 5,49 bd; 5;46 bd 5,50 bs 5,51 bd H-2’ H-3’ 2,73 m H-4 ’ 3,62 bs 3,61 bs H-5 ’ 4,10 q; 3,96 q 3,69 q H3-6’ 1,37 d; 1,34 d 1,37 d 1,37 d N-CH3 2,40 s; 2,36 s 2,36 s 2;34 s OH-4 12,14 bs OH-6 12,89 bs OH-11 13,75 bs li

Claims

39 8 9 4 9 5

1. Menetelmä yleisen kaavan I mukaisten sytostaat-tisesti vaikuttavien antrasykliinijohdannaisten valmista-5 miseksi, jotka esiintyvät mahdollisesti epäorgaanisen tai orgaanisen hapon suolana, R1 0 R3 R5 R2 0 R4 o 15 R70 l8“3 Rö jossa kaavassa

20 R1 on vety tai hydroksiryhmä, R2 on vety tai hydroksi- tai metoksiryhmä, R3 on vety tai hydroksiryhmä, R4 on vety tai hydroksiryhmä, R5 on vety, hydroksiryhmä tai ryhmä, jolla on yleinen kaava 25 II, 0 11 30 Η<ίΓ"™3 R8a jossa R8a on vety tai ryhmä, jolla on kaava III, 40 ft Q A Q ft I N (ofr)? 0 5 h39^v.___J y^°y m

10 CH3 R7 on vety tai ryhmä, jolla on kaava IV, „

20 CH3 ja R8 on vety, tunnettu siitä, että kaavan I mukaisesta yhdisteestä, jossa ryhmillä Rx-R7 on edellä ilmoitettu 25 merkitys ja R8 ja/tai R8a merkitsevät metyyliryhmää, lohkaistaan fotolyyttisellä menetelmällä valon vaikutuksella halogenoidun alkaanin ja alkoholin liuotinseoksen läsnäollessa kulloinkin toinen molemmista typpeen sitoutuneista metyyliryhmistä ja mahdollisesti reaktiotuote muute-30 taan sinänsä tunnetulla tavalla epäorgaanisen tai orgaanisen hapon suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että metyyliryhmän fotolyyttinen loh-kaisu suoritetaan liuotinseoksen läsnäollessa, joka koos-35 tuu 10-30 tilavuusosasta kloroformia ja 1 tilavuusosasta alkoholia konsentraation ollessa 0,1-1 mmol/litra, 0° C:n I; . 4i 89 495 ja liuotinseoksen kiehumislämpötilan välisessä lämpötilassa voimakkaalla valon vaikutuksella.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että metyyliryhmän fotolyyttinen loh-5 kaisu suoritetaan liuotinseoksen läsnäollessa, joka koostuu 10-30 tilavuusosasta kloroformia ja 1 tilavuusosasta metanolia konsentraation ollessa 0,1-1 mmol/litra, 0° C:n ja liuotinseoksen kiehumislämpötilan välisessä lämpötilassa voimakkaalla valon vaikutuksella. 10 42 89495