FI89169C - Foerfarande foer framstaellning av 3-propenylcefemderivat - Google Patents

Description

-1- 891(59

Me ne telmä 3-propenyylikefeemijohdannaisen valmistami seksi

Esillä oleva keksintö kohdistuu menetelmään 3-propenyyli-Jcefeemijohdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia antibakteerisina aineina, 3-propenyylikefeemi-johdannaisen välituotteeseen sekä menetelmään välituotteen valmistamiseksi.

Tunnetun tekniikan tason kuvaus

Kefeemijohdannaisia, joissa on ammonioryhmä, tunnetaan ennestään julkisista japanilaisista hakemusjulkaisuista 174,378/83; 198,490/83; 130,295/84; 172,493/84; 219,292/84; 97,983/85; 197,693/85, 5,084/86, jne.

Julkisissa japanilaisissa hakemus julkaisuissa 172,493/84 ja 5,084/86 on erityisesti kuvattu kefeemijohdannaisia joilla on ammoniopropenyyliryhmä 3-asemassa, siis läheisiä yhdisteitä esillä olevan keksinnön mukaisille yhdisteille.

I..' Yhteenveto keksinnöstä ·· Esillä olevat keksijät ovat osoittaneet, että sellaiset kefeemijohdannaiset, joilla on ammoniopropenyyliryhmä 3-asemas-“sa ja fluorisubstituoitu alempialkoksi-iminoryhmä tai syano-substituoitu alempialkoksi-iminoryhmä 7-aseman sivuketjussa omaavat erinomaisen antibakteerisen aktiviteetin, mikä johti :tämän keksinnön loppuunsaattamiseen.

'Yksi tämän keksinnön tarkoituksista on täten tarjota menetelmä uusien kefeemijohdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat käyttökelpoisia antibakteerisina aineina, johdannaisten välituotteita, sekä menetelmä välituotteiden valmistamiseksi. Tämä saavutetaan patenttivaatimuksissa esitetyin keinoin.

( -2- 89169

Keksinnön yksityiskohtainen selitys ja edullisia suoritusmuotoja

Esillä oleva keksintö kohdistuu kaavan (I) mukaisiin 3-prope-nyylikefeemijohdannaisiin: N-^r-C -CONIK—rS^ Ä |-1^CH=CHCH1-A (I) vO-Ri° COO- jossa on fluorisubstituoitu alempialkyyliryhmä tai syano-substituoitu alempialkyyliryhmä, ja A on syklinen tai asyklinen ammonioryhmä, ja näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttäviin suoloihin.

Esimerkkinä f luor isubst i tuoidusta alempialkyyliryhmästä, jota edustaa kaavassa (I) voidaan mainita fluorimetyyli, di-fluorimetyyli, 2-fluorietyyli, 2,2-difluorietyyli, 2,2,2-tri-fluorietyyli, 1-fluorietyyli, 2-fluoripropyyli, l-(fluorimetyyli )-2-f luorietyyli, 3-fluoripropyyli ja vastaavat, jolloin . fluorimetyyli on erityisen edullinen.

' Koskien syanosubstituoitua alempialkyyliryhmää, jota edustaa kaavassa (I) voidaan mainita syanometyyli, 2-syanoetyyli, 3-syanopropyyli jne.

Asyklinen ammonioryhmä, jota edustaa A kaavassa (I), on seuraa-van kaavan mukainen ryhmä: + '2 --N-R.

I 4 R3 jossa R2, R3 ja R4 ovat samanlaiset tai erilaiset ja tarkoittavat erikseen ryhmää joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat .-alempialkyyli, hydroksisubstituoitu alempialkyyli, karbamoyyli-: substituoitu alempialkyyli, syanosubstituoitu alempialkyyli, amino, (alempialkyyli) karbonyyliaminosubstituoitu alempialkyy- -3- 89169 li, aminosulf onyyliaminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, (alempialkyyli) sulfonyyliaminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, (alempialkyyli) aminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, hydroksi- ja karbamoyylisubstituoitu alempialkyyli, hydroksi- ja hydroksi(alempialkyyli) aminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, (alempialkoksi) aminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, hydroksiaminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, karbamoyyli(alempialkyyli) aminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, hydroksi(alempialkyyli) aminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, (alempialkyyli) aminosubstituoitu alempialkyyli, karboksylaatti (alempialkyyli )di (alempialkyyli )ammo-niosubstituoitu alempialkyyli, di(alempialkyyli)aminosubstituoitu alempialkyyli, di(alempialkyyli)ainino- ja hydroksisubstituoitu alempialkyyli, ureido, hydroksyyli, karboksyylisubstituoitu alempialkyyli, hydroksi- ja karbonyylisubstituoitu alempialkyyli, alempi alkyylioksisubstituoitu alempialkyyli, di(alempi-alkyyli)aminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, dikarbamoyy-lisubstituoitu alempialkyyli, bis(hydroksi(alempialkyyli))-aminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, dihydroksisubsti-tuoitu alempialkyyli, trihydroksisubstituoitu alempialkyyli, _bis{hydroksi(alempialkyyli))aminosubstituoitu alempi alkyyli, '· ’· aminosubstituoitu alempialkyyli, oksosubstituoitu alempialkyy-: li, di-alempialkyylisubstituoitu alempi alkyyli, 5-renkainen .heterosyklisubstituoitu alempialkyyli missä mainittu hetero-_ sykli tarkoittaa pyratsolyylia, imidatsolyylia, oksadiatsolyy-· ·.. lia tai tetratsolyylia.

Syklinen ammonioryhmä, jota edustaa A kaavassa (I) on joku seu-raavien kaavojen mukaisista ryhmistä: -«. 89169 R, R, R» ^ "O "O™, -O -ö

tCvnh tO

-Ό λ • · \j> R5 / \ / \ / \ -— N > +M^\ „ R. / \ ,0 + S N / - ".'V," _L> N S'{ ? . N—/ *\_/vo Π * 9 R5 / \ v-R, -, N - N N C 3 O .

jossa Rg tarkoittaa ryhmää# joka on valittu ryhmästä johon kuuluvat alempi alkyyli, karbamoyylisubstituoitu alempialkyyli, aminosubstituoitu alempialkyyli, hydroksisubstituoitu alempialkyyli, karboksisubstituoitu alempialkyyli, syanosubstituoitu alempialkyyli, dihydrokisubstituoitu alempialkyyli ja ureido-substituoitu alempialkyyli, -s- 89169 jolloin mainittu syklinen ammonioryhmä vaihtoehtoisesti renkaassa sisältää yhden tai useamman substituentin valittuna ryhmästä; hydroksisubstituoitu alempialkyyli, hydroksi, formyy-li, sulfoni, karboksisubstituoitu alempialkyyli, karbamoyyli» sulfamoyyli, karboksyyli, hydroksi-iminosubstituoitu alempialkyyli, iminosubstituoitu alempialkyyli, bis(hydroksi(alempi-alkyyli ) Jaminokarbo n yyli, hydroksi(alempialkyyli)aminokarbo-nyyli, amino, morfoliinokarbonyyli, karboksi(alempialkyloksi)-substituoitu alempialkyyli, karboksi(alempialkyylitio), sulfoni-substituoitu alenpialkyyli ja alempialkyyli.

Esimerkkeinä alempialkyyliryhmistä A:n {R2 - R5) määritelmissä kaavassa (I) voidaan mainita 1-4 hiiliatomia sisältävät al-kyyliryhmät kuten metyyli, etyyli, n-propyyli, i-propyyli, n-butyyli, i-butyyli, sek-butyyli ja t-butyyli.

Kaavan (I) mukaisista myrkyttömistä suoloista voidaan mainita niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat kuten esimerkiksi alkalimetallisuolat kuten natrium- ja kaliumsuolat; ammonium-suolat; kvaternaariset suolat kuten tetraetyyliammoniumsuolat ja betaiinisuolat; maa-alkalimetallisuolat kuten kalsium- ja magnesiumsuolat; epäorgaanisten happojen suolat kuten hydroklo-ridit, hydrobromidit, hydrojodidit, sulfaatit, karbonaatit ja bikarbonaatit; orgaaniset karboksylaatit kuten asetaatit, maleaatit, laktaatit ja tartraatit; orgaaniset sulfonaatit kuten metaanisulfonaatit, hydroksimetaanisulfonaatit, hydroksi-etaanisulfonaatit, tauriinisuolat, bentseenisulfonaatit ja tolueenisulfonaatit; aminohapposuolat kuten arginiinisuolat, lysiinisuolat, seriinisuolat, aspartaatit ja glutamaatit; amii-... nisuolat kuten trimetyyliamiinisuolat, trietyyliamiinisuolat, pyridiinisuolat, prokaiinisuolat, pikoliinisuolat, disyklo-heksyyliamiinisuolat, Ν,Ν-dibentsyylietyleenidiamiinisuolat, N-metyyliglukamiinisuolat, dietanol iamiinisuolat, trietanoli-amiinisuolat, trisihydroksimetyyliaminoimetaanisuolat ja fen-·.*.. etyylibentsyyliamiinisuolat, jne.

Jokainen kaavan (I) mukaisista yhdisteistä, jotka kuuluvat tähän keksintöön, voi esiintyä joko syn-isomeerinä (Z) tai anti-isomeerina (E) suhteessa stereoskooppiseen konfiguraatioon 89169 seuraavan ryhmän kohdalla: -c- n

N

V0-R,

Vaikkakin molemmat isomeerit sisältyvät esillä olevaan keksintöön, syn-isomeerit ovat edullisempia johtuen niiden anti-bakteerisesta aktiviteetista.

Tämän keksinnön yhdisteet voidaan valmistaan seuraavalla menetelmällä.

Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan nimittäin valmistaa yksitellen antamalla kaavan (II) mukainen yhdiste: Ν_^Γ-Ο-00ΝΗ'η—

H tfV* >T^CH=CHCH,X (ΠΙ S0-R, COOH

jossa Ri on fluorisubstituoitu alempialkyyliryhmä tai syano-substituoitu alempialkyyliryhmä ja X on halogeeniatomi, tai vastaava yhdiste, jossa amino ja /tai karboksyyliryhmät on suojattu suojaryhmillä, tai vastaava suola, reagoida yhdisteen kanssa, jolla on kaava (III): A' (III) jossa A' on amiini joka vastaa A:ta, yhdisteen kanssa jossa funktionaaliset ryhmät on suojattu suo jaryhmillä, tai niiden suolojen kanssa; minkä jälkeen haluttaessa poistetaan suojaryh-mät.

Halogeeniatomeina voidaan X:n kohdalla kaavassa (II) mainita jodiatomi, bromiatomi ja klooriatomi.

Reaktio voidaan suorittaa reaktiolämpötilassa -10°C - 60°C, -7- 89169 parhaiten OeC - 40eC. Liuottimena jokin vedetön orgaaninen liuotin on suositeltavin. Esimerkkeinä orgaanisista liuottimista voidaan mainita alemmat alkyylinitriilit kuten asetonitriili ja propionitriili; halogenoidut alemmat alkaanit kuten kloori-metaani, dikloorimetaani ja kloroformi; eetterit kuten tetra-hydrofuraani, dioksaani ja etyylieetteri; amidit kuten dime-tyyliformamidi; esterit kuten etyyliasetaatti; ketonit kuten asetoni; hiilivedyt kuten bentseeni; alkoholit kuten metanoli ja etanoli; ja sulfoksidit kuten diraetyylisulfoksidi; kuten myös näiden seoksia.

Suojaryhmien poisto voidaan suorittaa millä tahansa tunnetulla tavalla,kuten hydrolyysillä tai pelkistyksellä, riippuen käytetyistä suojaryhmistä.

Kaavojen (II) ja (III) mukaisetn yhdisteiden suoloina ja näiden yhdisteiden suojaryhminä voidaan käyttää tavanomaisia yhdisteitä, jollei ne häiritse reaktiota.

Esimerkkeinä aminoryhmän suojaryhmistä voidaan mainita formyyl, asetyyli, klooriasetyyli, diklooriasetyyli, t-butoksikarbonyy-li, bentsyylioksikarbonyyli, trityyli, p-metoksibentsyyli, di-f enyylimetyyli, bentsylideeni, p-nitrobentsyl ideeni ja m-klooribentsylideeni. Karboksyyliryhmän suojaryhminä voidaan esimerkkeinä mainita p-metoksibentsyyli, p-nitrobentsyyli, t-butyyli, metyyli, 2,2,2-trikloorietyyli, difenyylimetyyli ja pivaloyylioksimetyyli. Silylointiaineen kuten N,0-bis(trimetyy-lisilyyli)asetamidi, N-metyyli-N-(trimetyylisilyyli)asetamidi, N-metyyli-N-(trimetyylisilyyli)trifluoriasetamidi tai N-(tri-metyylisilyyli)asetamidi käyttö on tässä käytännöllistä, koska sama silylointiaine pystyy suojaamaan sekä amino- että karbok-syyliryhmät samanaikaisesti.

Kaavan (II) ja (III) mukaisten yhdisteiden suolat voidaan valita ryhmästä johon kuuluvat; alkalimetallisuolat kuten natrium-ja kaliumsuolat; maa-alkalisuolat kuten kalsium- ja magnesium-suolat; ammoniumsuolat; kvaternaariset ammoniumsuolat kuten trietyyliammoniumsuolat ja betaiinisuolat; epäorgaanisetn happojen suolat kuten hydrokloridit, hydrobromidit, sulfaatit, karbonaatit, hydrojodidit ja bikarbonaatit; orgaaniset karbok- -8- 89169 sylaatit kuten asetaatit, trifluoriasetaatit, maleaatit, lak-taatit ja tartraatit; orgaaniset sulfonaatit kuten metaani-sulfonaatit, hydroksimetaanisulfonaatit, hydroksietaanisulfo-naatit, tauriinisuolat, bentseenisulfonaatit ja tolueenisulfo-naatit; amiinisuolat kuten trimetyyliamiinisuolat, trietyyli-amiinisuolat, pyridiinisuolat, prokaiinisuolat, pikoliinisuo-lat, disykloheksyyliamiinisuolat, N,N-dibentsyylietleenidiamii-nisuolat, N-metyyliglukamiinisuolat, dietanoliamiinisuolat, trietanoliamiinisuolat, tris(hydroksimetyyliamino)metaanisuolat ja fenetyylibentsyyliamiinisuolat; aminohapposuolat kuten argi-niinisuolat, aspartaatit, lysiinisuolat, glutamaatit, seriini-suolat ja glysiinisuolat; jne.

Tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä on voimakas antibaktee-rinen aktiviteetti sekä gram-positiivisia että gram-negatiivi-sia bakteerejä vastaan ja ovat siksi käyttökelpoisia antibak-teerisinä aineina. Yhdisteitä käytetään bakteerien aiheuttamien sairauksien hoidossa.

Käytettäessä tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä injektioissa, niitä annostallaan yleensä 100 mg - 10 g päiväannoksina 1-4 osassa, joko suonensisäisesti tai lihaksensisäisesti. Annosta voidaan luonnollisesti suurentaa tai pienentää iästä ja sairauden luonteesta johtuen.

Injektioliuokset voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla tavalla. Jokainen tämän keksinnön yhdisteistä voidaan esimerkiksi valmistaa injektioliuokseksi liuottamalla sitä tislattuun veten, tarvittaessa isotoonisen aineen, solubilisaattorin ja/tai vastaavan läsnäollessa. Niitä voidaan täyttää jauheena ampullissa tai vastaavassa, mahdollistaen sellaisten injektioliuosten valmistamisen, jotka edellyttävät liuotusta juuri ennen käyttöä. Nämä injektiojauheet liuotetaan tislattuun veteen injektiota varten, fysiologista suolaliuosta, glukoosi-injektiota, aminohappoinfuusiota tai vastaavaa annosteltaessa.

Kaavan (II) mukainen yhdiste, joka on väliaine; aine, jossa amino- ja/tai karboksyyliryhmä(t) on suojattu suojaryhmällä tai tämän yhdisteen suolat ovat kaikki uusia yhdisteitä. Näitä yhdisteitä voidaan valmistaa seuraavan menetelmän avulla. Yh-

II

89169 disteitä voidaan toisin sanoen valmistaa antamalla kaavan (IV) mukainen yhdiste:

N -n- C - COOH

A * N <IV>

HjN ' ''O - B

jossa Reillä on sama merkitys kuin edellä, sen reaktiivinen happojohdannainen, yhdiste, jossa aminoryhmä on suojattu suoja-ryhmällä, tai yhdisteen suola, reagoida kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa:

H-N

N— Γ (v)

0 Γ CH * CHCH2X

COOH

jossa X:llä on sama merkitys kuin edellä, yhdisteen, jossa karboksyyliryhmä on suojattu suojaryhmällä, tai sen suolan kanssa, minkä jälkeen poistetaan mahdollisesti suojaryhmä, ja/tai muutetaan symbolin X mukainen halogeeniatomi toiseksi halogeeniatomiksi.

Yllämainittu reaktio voidaan suorittaa tavanomaisen N-asyloin-nin reaktio-olosuhteissa. Reaktio voidaan esimerkiksi suorittaa -50°C - 50°C:een lämpötilassa inertissä liuottimessa kuten esimerkiksi tetrahydrofuraanissa, etyyliasetaatissa, asetonissa, Ν,Ν-dimetyyliformamidissa, asetonitriilissä, dioksaanissa tai näiden liuottimien seoksessa.

Esimerkkeinä kaavan (IV) mukaisen yhdisteen reaktiivisesta happojohdannaisesta voidaan mainita happohalidi kuten happoklo-ridi, happobromidi, jne., symmetrinen happoanhydrid, seoshappo-anhydridi, aktiivinen esteri, aktiivinen happoamidi tai vastaava.

Käytettäessä kaavan (IV) mukaista vapaata karboksyylihappoa tai sen suolaa, reaktio suoritetaan edullisesti tavanomaisen kon- -10- 89169 densointiaineen kuten Ν,Ν-disykloheksyylikarbodi-imidin, p-tolueenisulfonihapon tai vastaavan läsnäollessa.

Symbolin X mukaisen halogeeniatomin muuttaminen toiseksi halo-geeniatomiksi suoritetaan tavanomaisella tavalla. Voidaan esimerkiksi valmistaa kaavan (II) mukainen yhdiste, jossa X on jodiatomi, kun kaavan (II) mukainen yhdiste, jossa X on kloori-atomi saatetaan reagoimaan alkalimetallijodidin kanssa.

Alla olevan kaavan (VI) mukaiset välituotteet ovat myös uusia yhdisteitä, kuten kaavan (VI) mukainen yhdiste: f, r~»— / N (VI)

H2N OCH2F

jossa Rg on karboksyyliryhmä, halogeenikarbonyyliryhmä, karba-moyyliryhmä, syanoryhmä, yhdiste, jossa amino ja/tai karboksyy-liryhmä(t) on suojattu suojaryhmällä, tai näiden suola.

Amino- ja karboksyyliryhmien suojaryhminä tulevat kysymykseen samat ryhmät, joita jo mainittiin kaavan (II) mukaisten yhdisteiden yhteydessä.

Yllämainitut yhdisteet voidaan valmistaa seuraavan menetelmän avulla.

i.

-11- 89169 MC - C - CONH, I 1 •""oh <vii)

N-n— C — COOH

1 O ^ J

Y H \ (XIV)

H2N OH

NC - C - CONH, H 1 ""•OCHjP <VIII>

* N-ir- C — COX

U N '1

NC - C - CN S^S'' N

J (IX) H2N \cH2F

^OCHjF . (χ: halogen atom) / (XV) Ψ /

V N -π— C — COOH

H2N\ A n * ^ C - C - CN H,N \ (XIII)

m' l <*) 0CH2F

XOCH2F ^ N n— C—CONH.

I ,Λ^Ι

H2N OCH2F

N -jr- C—CN |uTTt J I I <X1I)

H,N S' N

^OCHjF

(XI) -12- 89169

Kaavan (VIII) mukainen yhdiste voidaan valmistaa saattamalla kaavan (VII) mukainen yhdiste reagoimaan halogeenifluorimetaa-nin kanssa inertissä liuottimessa.

Esimerkkeinä halogeenifluorimetaanista voidaan mainita bromi-fluorimetaani, jodifluorimetaani ja vastaavat.

Reaktio suoritetaan lämpötila-alueelle -30 eC - 100°C.

Kaavan (IX) mukainen yhdiste voidan valmistaa saattamalla kaavan (VIII) mukainen yhdiste reagoimaan dehydratoivan aineen kanssa inertissä liuottimessa. Reaktiolämpötilana käytetään edullisesti huoneenlämpötilaa tai sen korkeampaa lämpötilaa. Dehydratoivana aineena voidaan käyttää oksofosforikloridia, tionyylikloridia jne.

Kaavan (X) mukainen yhdiste voidaan valmistaa saattamalla kaavan (IX) mukainen yhdiste reagoimaan ammoniakin ja/tai ammo-niumsuolan kanssa inertissä liuottimessa kuten vedessä, alemmassa alkoholissa, asetonissa, kloroformissa jne. Sopiva reak-tiolämpötila-alue on -20°C ja huoneenlämmön välillä. Ammonium-suoloina voidaan käyttää ammoniumkloridia, ammoniumasetaattia, ammoniumsulfaattia ja vastaavia.

Kaavan (XI) mukainen yhdiste voidaan valmistaa saattamalla kaavan (X) mukainen yhdiste reagoimaan halogenointiaineen kuten kaasumaisen bromin, kaasumaisen kloorin, jne. kanssa haloge-noinnin tehostamiseksi, jonka jälkeen se saatetaan reagoimaan alkalimetallitiosyanaatin kanssa, edullisesti emäksen läsnäollessa.Sopiva raektiolämpötila-alue on -20°C ja huoneenlämmön välillä. Alkalimetallitiosyanaattina voidaan käyttää kaliumtio-syanaattia, natriumtiosyanaattia ja vastaavaa.

Kaavan (XII) mukainen yhdiste, sellainen yhdiste jossa amino-ryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suola voidaan valmistaa hydrolysoimalla kaavan (XI) mukainen yhdiste, yhdiste, jossa aminoryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suola, hapettavan aineen tai emäksen läsnäollessa, jonka jälkeen sujaryhmät haluttaessa poistetaan.

Reaktio voidaan suorittaa 0eC - 70°C:een lämpötilssa vedessä, puskuriliuoksessa tai edellisten sekaliuottimessa alemman alkoholin kanssa.

li -13- 89169

Hapettavana aineena voidaan käyttää vetyperoksidia, happea jne.; sekä natriumhydroksidia, kaliumhydroksidia jne. emäksenä. Kaavan (XIII) mukainen yhdiste, yhdiste, jossa aminoryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suola voidaan valmistaa hydrolysoimalla kaavan (XII) mukainen yhdiste, yhdiste, jossa aminoryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suola, emäksen läsnäollessa, jonka jälkeen suojaryhmät haluttaessa poistetaan. Emäkset, liuottimet, reaktiolämpötilat, jne. voivat olla samoja kuin reaktiosekvenssin, kaava (XI) - kaava (XII), yhteydessä. Kaavan (XIII) mukainen yhdiste, yhdiste, jossa aminoryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suola voidaan lisäksi valmistaa saattamalla kaavan (XIV) mukainen yhdiste, jossa amino- ja/tai karboksyyliryhmät on suojattu suojaryhmillä, reagoimaan halo-geenifluorimetaanin kanssa, jonka jälkeen suojaryhmä voidaan haluttaessa poistaa.

Esimerkkeinä halogeenifluorimetaanista voidaan mainita bromi-fluorimetaani, jodifluorimetaani ja kloorifluorimetaani.

Reaktio voidaan suorittaa inertissä liuottimessa - 30°C -100°C:een reaktiolämpötilassa.

Esimerkkeinä inertistä liuottimesta voidaan mainita sulfoksidit kuten dimetyylisulfoksidi jne., amidit kuten N,N-dimetyyliase-tamidi, formamidi, heksametyylifosforyylitriamidi jne., ketonit kuten asetoni jne., tai näiden liuottimien seos.

Kaavan (XV) mukainen yhdiste, yhdiste, jossa aminoryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suola voidaan valmistaa saattamalla kaavan (XIII) mukainen yhdiste, yhdiste, jossa aminoryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suola reagoimaan halogenoin-tiaineen kanssa.

Esimerkkeinä halogenointiaineesta voidaan mainita fosforipent-oksidi, tionyylikloridi, tionyylibromidi, oksifosforikloridi ja vastaavat.

Yllä kuvattu reaktio voidaan suorittaa inertissä liuottimessa kuten esimerkiksi dikloorimetaanissa, tetrahydrofuraanissa, etyyliasetaatissa, kloroformissa tai näiden liuottimien seoksessa, reaktiolämpötilan ollessa -50°C - 50°C.

Esillä olevaa keksintöä valaistaan yksityiskohtaisemmin seuraa- -14- 89169 vien kokeiden ja esimerkkien avulla.

Koe 1 (Lähtöaineen valmistus)

Etyyli 2-(5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluo-rimetoksi-iminoasetaatti ο^-ξτΓ000·"· O ^

Etyyli 2-(5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-hyd-roksi-iminoasetaattia (60,4 g) liuotettiin dimetyylisulfoksi-diin (210 ml), jonka jälkeen lisättiin kaliumkarbonaattia (96,48 g) jäillä jäähdyttäen. Liuosta sekoitettiin 10 minuutin ajan. Tämän jälkeen lisättiin bromifluorimetaania (19 g) ja liuosta sekoitettiin 3 tunnin ajan huoneenlämmössä. Reaktio-liuokseen lisättiin etyyliasetaattia (1 litra) ja liuos pestiin vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella, jonka jälkeen se kuivattiin lisäämällä vedetöntä magnesiumsulfaattia. Liuotin tislattiin pois ja jäännökseen lisättiin etanolia (120 ml). Muodostuneet kiteet kerättiin suodattamalla ja niitä pestiin etanolilla jolloin saatiin otsikon tuotetta (58,2 g).

Koe 2 (Lähtöaineen valmistus) 2-(5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluori-metoksi-iminoetikkahappo V n-π—c-coort li -15- 89169

Seokseen, joka koostui natriumhydrkosidista (2,04 g), etanolista (146 ml) ja vedestä (29 ml) lisättiin kokeessa 1 valmistettua yhdistettä (17,87 g), jonka jälkeen liuosta sekoitettiin 20 minuutin ajan refluksiolämpötilassa. Liuos konsentroitiin alipaineessa jonka jälkeen siihen lisättiin etyyliasetaattia (200 ml) ja 1 N kloorivetyhappoa (77 ml). Etyyliasetaattikerros erotettiin ja pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, jonka jälkeen seurasi kuivattaminen lisäämällä vedetöntä magnesium-sulfaattia. Liuos tislattiin pois kiteiden saamiseksi. Kiteet rikottiin lisäämällä petrolieetteriä ja kerättiin talteen suodattamalla jolloin saatiin otsikon tuotetta (16,55 g)

Koe 3 (lähtöaineen valmistus) p-metoksibentsyyli 7β-(2-(5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((Z)-3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti Q ,ξ|Γ?-ΟΟΝΗΤί^α

OrN >OCH2F iora*2-(3-OCH,

Dimetyyliformamidia (348 ui) ja tetrahydrofuraania (4,1 ml) jäähdytettiin - 10°C:een ja siihen lisättiin fosforioksiklori-dia (418 ui), jonka jälkeen sekoitettiin 90 minuutin ajan samalla jäähdyttäen. Tähän liuokseen lisättiin kokeessa 2 valmistettua yhdistettä (1,73 g) tetrahydrofuraanissa (5,5 ml) samalla jäähdyttäen - 10°C:een, ja saatua liuosta sekoitettiin 90 minuutin ajan jäillä jäähdyttäen. Reaktioliuosta jäähdytettiin - 20°C:een ja siihen lisättiin seos, joka koostui p-metoksibentsyyli 7 -amino-3-( (Z)-3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti hydrokloridia (1,78 g), N-(trimetyyli-silyyli)asetamidia (2,95 g), etyyliasetaattia (18 ml) ja tetra-hydrofuraania (5,5 ml), ja saatua liuosta sekoitettiin tunnin -16- 89169 ajan - 10°C:ssa. Reaktioliuokseen lisättiin etyyliasetaattia (100 ml) ja saatua liuosta pestiin useaan otteeseen vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin pois ja jäännöstä puhdistettiin silikageelikolonnikromatografialla jolloin saatiin otsikon tuotetta (2,65 g)

Koe 4 (lähtöaineen valmistus) p-metoksibentsyyli 7β- ( 2-( 5-tr ityy liamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(2)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-jodi-l-pro-pen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti sOCHjF COOCHj-^-OCH,

Kokeessa 3 valmistettua yhdistettä (10,11 g) liuotettiin asetoniin (212 ml) ja siihen lisättiin natriumjodidia (9,03 g) jäillä jäähdyttäen. Saatua liuosta sekoitettiin 15 minuutin ajan jäillä jäähdyttäen ja tämän jälkeen 90 minuutin ajan huoneenlämmössä. Liuotin haihdutettiin pois ja jäännöstä uutettiin etyyliasetaatilla (500 ml). Uute pestiin kyllästetyllä natriumtiosulfaatin vesiliuoksella ja kyllästetyllä suolaliuoksella, jonka jälkeen seurasi kuivaus vedettömällä magnesium-sulfaatilla. Kuiva uute konsentroitiin alennetussa paineessa ja siihen lisätttiin n-heksaania. Saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin otsikon tuotetta (10,92 g).

Koe 5 (lähtöaineen valmistus) p-metoksibentsyyli 7/5-( 2-( 5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z )-difluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((Z)-3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti -n- 89169 Λ 'OCHF, COOCH,-0-OCH,

Samalla tavalla kuin kokeessa 3 saatettiin 2-(5-trityyliamino- 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-difluorimetoksi-iminoetikkahappo (2,00 g) reagoimaan p-metoksibentsyyli 7 -amino-3-((Z)-3-kloo-ri-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti hydrokloridin (1,795 g) kanssa, jolloin saatiin otsikon tuotetta (3,17 g).

Koe 6 (lähtöaineen valmistus) p-metoksibentsyyli 7(2-(5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(2)-2-difluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-jodi-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti XOCHF, COOCHj-^-OCH,

Samalla tavalla kuin kokeessa 4 saatettiin kokeessa 5 valmistettu yhdiste (3,00 g) reagoimaan natriumjodidin (2,62 g) kanssa, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (2,92 g).

Esimerkki 1 7fr-(2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(karbamoyylimetyyli-etyylimetyyliammo-nio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti n-^-C-CONH'-_yS-1 CHjCH, H.N-VÄ N^-CONH, nO-CH,F COO- ch, 89169

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (550 mg) liuotettiin seokseen, joka koostui etyyliasetaatista (20 ml) ja etyylieetteristä (10 ml) jonka jälkeen siihen lisättiin etyylimetyyliasetamidia (117 mg). Saatua liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä 4 ja puolen tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin isopropyylieetteriä ja saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla, jonka jälkeen se kuivattiin antamaan kellertävänruskeata jauhetta (400 mg). Jauhetta sekoitettiin trifluorietikkahappo (4,5 ml) - anisoli (4 ml)- liuoksessa yhden tunnin ajan jäillä jäähdyttäen, jonka jälkeen siihen lisättiin etyylieetteriä. Saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla ja pestiin etyylieetterillä. Sakka sus-pendoitiin veteen (5 ml). Suspension pH säädettiin 5,5 - 6,5 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (849 mg).

Esimerkki 2 7^>- ( 2 - ( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3(l-(2-hydroksietyyli)-4-karbamoyyli-l-piperidiini)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

OH

Η,Ν-^S^ no-ch9f C00‘

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (700 mg) liuotettiin di-metyyliformamidiin (3 ml) ja siihen lisättiin l-(2-hydroksietyyli ) isonipekotamidia (194 mg) dimetyyliformamidissa (0,5 ml). Liuosta sekoitettiin yön yli. Reaktioliuos lisättiin etyy-lieetteriin (120 ml) ja saatu sakka kerättiin talteen jolloin saatiin keltaista jauhetta (680 mg).

Tähän jauheeseen lisättiin anisolia (4,5 ml) ja trifluorietik-kahappoa (5,3 ml) lisättiin tipoittain 30 minuutin ajan jäillä jäähdyttäen. Lisäyksen jälkeen seosta sekoitettiin vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin isopropyyli- -19- 89169 eetteriä (50 ml) ja saatu sakka kerättin talteen suodattamalla. Sakka suspendoitiin veteen (30 ml) ja suspension pH säädettiin arvoon 7,0 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikkoyhdisteen kahta isomeerityyppiä:

Isomeeri (2-1) 21 mg

Isomeeri (2-2) 20 mg 1:1 kahden isomeerin seos 50 mg

Esimerkki 3 lf>-( 2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z )-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(lS-karbamoyylietyyli)dimetyyliammo-nio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (3-1)

c CHj CHS

vj—n-C-CONH*s—J /H

J ^N>jA^s^N^CONH2 nOCH,F COO* <Ju *3 7^-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-f luorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-((lR-karbamoyylietyyli Jdimetyyliammo-nio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (3-2)

xOCH,F COO- CHS

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (600 mg) liuotettiin seokseen, joka koostui etyyliasetaatista (20 ml) ja etyylieetteris-tä (10 ml) ja siihen lisättiin 2-dimetyyliaminopropyyliamidia (150 mg). Saatua liuosta sekoitettiin 3 tunnin ajan huoneenlämmössä. Reaktioliuokseen lisättiin isopropyylieetteriä ja saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla, jonka jälkeen sitä kui- - 20 - 8 91 69 vattiin jollon saatiin kellertävänruskeata jauhetta (50 mg). Tätä jauhetta sekoitettiin seoksessa, joka koostui trifluori-etikkahaposta (5,5 ml) ja anisolista (5 ml) yhden tunnin ajan jäillä jäähdyttäen, ja tämän jälkeen siihen lisättiin etyyli-eetteriä. Saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla ja sitä pestiin etyylieetterillä. Sakka suspendoitiin vedessä (5 ml) ja suspension pH säädettiin 5,5 - 6,5 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografialla, jolloin saatiin 8 mg yhdistettä (3-1), 7 mg yhdistettä (3-2) ja 4 mg yhdisteiden (3-1) ja (3-2) seosta (1:1).

Esimerkki 4 7f- (2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-((2-hydroksipropyyli)dimetyyliammo-nio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti CH, sOCH2F coo- CH, CH,

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (550 mg) liuotettiin seokseen, joka sisälsi etyyliasetaattia (20 ml) ja etyylieetteriä (10 ml), jonka jälkeen siihen lisättiin 3-dimetyyliamino-2-propanolia (0,124 ml). Saatua liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä puolentoista tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin isopropanolia. Saostumat kerättiin talteen suodattamalla ja ne kuivatettiin, jolloin saatiin kellertävänruskeata jauhetta (530 mg) .

Tätä jauhetta sekoitettiin seoksessa, joka sisälsi trifluori-etikkahappoa (5,5 ml) ja anisolia (5 ml) tunnin ajan jäillä jäähdyttäen. Tämän jälkeen siihen lisättiin etyylieetteriä. Saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla ja pestiin - 2i - 39169 etyylieetterillä. Saostumat suspendoitiin vedessä (5 ml). Suspension pH-arvo säädettiin 5,5 - 6,5 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (70 mg).

Esimerkki 5 7^)-(2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-(E)-3-((lR-karbamoyyli-2-hydroksietyyli)di-metyyliammonio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

Ntj-C-CONH-^-ySn .f"» oh

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (1,00 g) liuotettiin di-metyyliformamidiin (2 ml). N,N-dimetyyli-D-serinamidiliuosta valmistettiin liuottamalla N,N-dimetyyli-D-serinamidotrifluori-asetaattia (590 mg) metanoliin (5 ml), lisäämällä IN natrium-hydroksidin vesiliuosta (2,4 ml), tislaamalla liuotin pois alennetussa paineessa ja uuttamalla jäännös asetonitriilillä (2 ml) N,N-dimetyyli-D-serinamidiliuos lisättiin kokeessa 4 valmistetun yhdisteen dimetyyliformamidiliuokseen jäillä jäähdyttäen. Saatua liuosta sekoitettiin 30 minuutin ajan. Reaktio-liuos lisättiin etyylieetteriin ja saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla jolloin saatiin keltaista jauhetta (1,1 g).

Tähän jauheeseen lisättiin anisolia (8 ml) ja tr ifluorietikka-happoa (9 ml) lisättiin tiputtaen 30 minuutin ajan samalla sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen, minkä jälkeen jatkettiin sekoitusta vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin etyylieetteriä ja saadut saostumat otettiin talteen suodattamalla. Saostumat suspendoitiin veteen (10 ml). Suspension pH-arvo säädettiin 7:ään natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin - 22 - 89169 käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografialla, jolloin saatiin otsikon tuotetta (30 mg).

Esimerkki 6 7^-(2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E )-3-(4R-hydroksi-2R-hydroksimetyyli-l-metyyli-l-pyrrolidinio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksy-laatti

,ν^-conh^s. \H/—f°H

nOCH,F COO- j

CHjOH

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (700 mg) liuotettiin asetoniin (4 ml) ja N-metyyli-cis-4-hydroksi-D-prolinolia (89 mg) asetonissa (2 ml) lisättiin siihen. Saatua liuosta sekoitettiin yön yli. Reaktioliuos lisättiin etyylieetteriin (100 ml) ja saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin keltaista jauhetta (700 mg).

Tähän jauheeseen lisättiin anisolia (4,5 ml) ja tr ifluorietik-kahappoa 85,3 ml) lisättiin tipoittain 30 minuutin ajan samalla sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen, minkä jälkeen sekoitusta jatkettiin vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin isopropyylieetteriä (50 ml). Saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla. Saostumat suspendoitiin veteen (30 ml) ja suspension pH-arvo säädettiin 7:ään natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteis f aasi silikageeli kolonnikromatografialla, jolloin saatiin seuraavat kaksi isomeeriä (suhteessa pyrroli-diinin typpiatomiin):

Isomeeri (6-1) 27 mg

Isomeeri (6-2) 100 mg li - 23 - 89169

Esimerkki 7 7β~ (2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E )-3-( 4R-hydroksi-l-(2-hydroksietyyli)-2S-hydroksimetyyli-l-pyrrolidinio )-l-propen-l-yyli )-3-kefeemi-4-karboksylaatti h-b-c-conh-w S (/~t''oh

xOCHjF COO- A

CHjOH

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (2,0 mg) lisättiin liuokseen, joka sisälsi (R)-4-hydroksi-l-(2-hydroksietyyli ) — (S )-2-hydrok-simetyylipyrrolidiinia (450 mg) dimetyyliformamidissa (5 ml). Saatua liuosta sekoitettiin yön yli. Reaktioliuos lisättiin etyyliasetaattiin. Saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin keltaista jauhetta (1,65 g).

Jauheeseen lisättiin anisolia (10 ml) ja tämän jälkeen lisättiin tr ifluorietikkahappoa (11,7 ml) tipoittain 30 minuutin ajan samalla sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen, minkä jälkeen sekoitusta jatkettiin vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktio-liuokseen lisättiin isopropyylieetteriä ja saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla. Saostumat suspendoitiin veteen (4,5 ml) ja suspension pH-arvo säädettiin 7:ään natriumasetaa-tilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatogarfiällä, jolloin saatiin otsikkoyhdisteen kahta isomeeriä (suhteessa pyrrolidiinin typpiatomiin):

Isomeeri (7-1) 96 mg

Isomeeri (7-2) 207 mg - 2« - 89169

Esimerkki 8 7ji- (2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(4R-hydroksi-2S-hydroksimetyyli-l-metyyli-l-pyrrolidinio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksy-laatti CH) oh m-jt-C-CONH^-yS-, |/~-γ·'υΗ H,N^S^ ft

'OCH.F COO- CHjOH

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (700 mg) liuotettiin asetoniin (4 ml) ja N-metyyli-trans-4-hydroksi-D-prolinolia (89 mg) asetonissa (2 ml) lisättiin siihen. Saatua liuosta sekoitettiin yön yli. Reaktioliuos lisättiin etyylieetteriin (100 ml) ja saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin keltaista jauhetta (700 mg).

Tähän jauheeseen lisättiin anisolia (4,5 ml) ja trifluorietik-kahappoa (5,3 ml) lisättiin tipoittain 30 minuutin ajan samalla sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen, minkä jälkeen sekoitusta jatkettiin vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin isopropyylieetteriä (50 ml). Saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla. Saostumat suspendoitiin veteen (30 ml) ja suspension pH-arvo säädettiin 7:ään natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografialla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (92 mg).

Esimerkki 9 7β- (2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-f luorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(l-karbamoyylimetyyli-3-hydroksi-l-pyrrolidinio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti - 25 - 891 69 /CONH, noch1f coo-

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (1 g) liuotettiin dimetyyli-formamidiin (4 ml) ja N-karbamoyylimetyyli-3-hydroksipyrroli-diinia (186 mg) dimetyyliformamidissa (2 ml) lisättiin siihen. Saatua liuosta sekoitettiin yön yli. Reaktioliuos lisättiin etyylieetteriin (200 ml) ja saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin keltaista jauhetta (970 mg). Tähän jauheeseen lisättiin anisolia (9,0 ml) ja trifluorietik-kahappoa (10,6 ml) lisättiin tipoittain 30 minuutin ajan samalla sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen, minkä jälkeen sekoitusta jatkettiin vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin isopropyylieetteriä (80 ml). Saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla. Saostumat suspendoitiin veteen (50 ml) ja suspension pH-arvo säädettiin 7:ään natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteis f aasi silikageeli kolonnikromatografialla, jolloin saatiin otsikkoyhdisteen kahta isomeeriä (suhteessa pyrrolidiinin typpiatomiin ja 3-aseman hiiliatomiin, ja niitä on neljä tyyppiä korkeapainenestekromatografiässä):

Isomeeri (9-1) 71 mg (kahden tyypin seos)

Isomeeri (9-2) 70 mg (yksi aine)

Isomeeri (9-3) 54 mg (yksi aine)

Esimerkki 10 Ίβ-{ 2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(1-metyyli-4-sulfo-l-piperatsinio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti -2«- 89169

CH

»rrC-comK—feN \Αλ

η,νΛ* J

nOCHjF coo-

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (2,0 mg) lisättiin seokseen, joka sisälsi 4-metyylipiperatsinosulfonihapposulfaattia (718 mg), N-metyyli-N-(trimetyylisilyyli)trifluoriasetamidia (2 ml) ja dimetyyliformamidia (6 ml). Saatua liuosta sekoitettiin yön yli. Reaktioliuos lisättiin metanolia (2 ml). Saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla. Suodos lisättiin seokseen, joka sisälsi etyyliasetaattia (50 ml) ja etyylieetteriä (50 ml) ja muodostuneet saostumat kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin keltaista jauhetta (1,79 g).

Jauheeseen lisättiin anisolia (10,9 ml) ja tämän jälkeen lisättiin tr ifluorietikkahappoa (12,7 ml) tipoittain 30 minuutin ajan samalla sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen, minkä jälkeen sekoitusta jatkettiin vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktio-liuokseen lisättiin isopropyylieetteriä (100 ml) ja saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla. Saostumat suspendoi-tiin veteen (4,5 ml) ja suspension pH-arvo säädettiin 7:ään natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolon-nikromatogarfiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (50 mg).

Esimerkki 11 7/3-( 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido}-3-((E)-3-(l-karbamoyylimetyyli-4-hydroksi-l-piperidinio )-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti /CONH, noch2f coo-

Il - 27 - 891 69

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (1 g) liuotettiin asetoniin (9 ml) ja N-karbamoyylimetyyli-4-hydroksipiperidiiniä (206 mg) lisättiin siihen. Saatua liuosta sekoitettiin yön yli. Reaktio-liuos lisättiin seokseen (100 ml), joka sisälsi etyylieetteriä ja isopropyylieetteriä (2:1) ja saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin keltaista jauhetta (1,0 g) · Tähän jauheeseen lisättiin anisolia (9,0 ml) ja trifluorietik-kahappoa (10,6 ml) lisättiin tipoittain 30 minuutin ajan samalla sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen, minkä jälkeen sekoitusta jatkettiin vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin isopropyylieetteriä (80 ml). Saadut saostumat kerättiin talteen suodattamalla. Saostumat suspendoitiin veteen (5 ml) ja suspension pH-arvo säädettiin 7:ään natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteis f aasi silikageeli kolonnikromatografialla, jolloin saatiin otsikon tuotetta (166 mg).

Esimerkki 12 7/^-(2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z )-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(5-atsa-l-metyyli-2,8-dioksabisyk-lo(3.3.1)nona-5-io)-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

N-'p-C-CONH'vj—s S

H2N*^S' n ^ vOCH2F qqq.

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä liuotettiin dimetyyliform-amidiin (10 ml), minkä jälkeen lisättiin 5-atsa-l-metyyli-2,8-dioksabisyklo(3.3.1)nonaania (800 mg) huoneenlämmössä. Saatua liuosta sekoitettiin 20 minuutin ajan. Reaktioliuos laimennettiin etyyliasetaatilla (25 ml) ja liuos lisättiin etyylieette-riin, jolloin saatiin ruskeita saostumia (3,85 g).

Saostumat liuotettiin anisoliin (23 ml) ja trifluorietikkahap- - 28 - 89 1 69 poa lisättiin siihen jäissä jäähdyttäen. Liuosta sekoitettiin 30 minuutin ajan samassa lämpötilassa. Reaktioliuokseen lisättiin etyylieetteriäja muodostuneet saostumat otettiin talteen suodattamalla. Saostumat suspendoitiin veteen (40 ml) ja suspension pH säädettiin arvoon 7,0 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografialla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (408 mg).

Esimerkeissä 1-12 selostetulla tavalla valmistettiin seuraa-vat esimerkkien 13 - 113 yhdisteet:

Aj XOCH2F COOCHj-^-OCH, + (kokeen 4 yhdiste) A' ^ f A:ta vastaava amiini) xOCH,F COO'

Riippuen ammonioryhmästä A saattaa muodostua useampia isomeerejä. Kun näitä isomeerejä eristettiin, vastaavien isomeerien saannot ilmoitetaan erikseen.

Seuraavia lyhenteitä käytettiin:

Boc: t-butoksikarbonyyliryhmä tBu: t-butyyliryhmä

Bh: bentshydryyliryhmä

Tr: trityyliryhmä '29' 89169 2 3 9 i σ> co co m

CM CO —< CM CO

O

«J /"N /*N

« «-h CM »-h CM

5 I 1 S. Il c co co -h o uo m 41 C CD * '

W _, 4) .H

V *" ,H *h C L *H M.

§ m S 9·ϊ S S S

- I i is «> i* s 0)

JJ

CD

•H

c *"* e e ^ ^ * £ o o o o cc O O ^ ^

φ ·φ* OC

0: ec .* .* O 5

* E

·« ^-N

u- :co

« 'E

• Ψ* c « E Ä Ok Ok Ok « » e e s £ •h CO C~ Oi c— « ^ 00 o <o 00

4J

, Ai_________

-‘ X

X te o < ίο 2o Ai Ksoi A· Ά sAW §ai

a? * * I I

o

Ji

V ^ ^ ^ LO CO

0 25 ”* ·“< f—i _« • · e M___ - 30 . 891 69 u . C t) e ·»* <u j « ·* s

% ^ O

• 4> w e 3 C > S « 2 u: e w V y o » a a a a

3 * K R 8 R

H I co co m o ^ t co dj oo σ> io 0>

4J

0 •r* * » R e Ä < C O o o o c c -: o o ^ ί .2 id in

l 0 JC

o z * i g" ^ 1 = 3 5<Ί 3 3 3 t e S X ^ o co: ® * 2 j Ν ~ —

•S O J

-C

______ tc * t-Qf-Qs Lo^g Ig -|Vo .*v„ 5-*·

Ji

5 ^ ^ 22 01 o —I

B Z -1 *-» CVJ CO

m h?__I_j_ ll - 31 - 89169

S? S

ro CO

ψ^ *-H

o *2

« Ή N

2 I I

C CO CO

ί CO CO

* v

4-» 7Z

o et u J- et 9 et 3 « Oi J K M β H o 8 I <o C4 ^ o s CO -« — « i CO — Φ

4J

• M.

·* o» S> et et et *e

f; o O o o O

<r c ^ ° ™ ~ ^ 4) e c 01 -H · 01 « JC .* O 3 S* E____ ΐ " ? O g g g S 1 •5 «2 N(Z ri o* tj« σ>° E C ^ / CO Ti* o- cm .* c ;: CO *— in co cm o

* 'e £ -S

e * K x « 1

:2 w O

- O

.-f CQ .

;.: V- ^_____ cb —· s y d Ϊ g 3 ^x < iJ5 o *p fp „p I OA^ | u | O-,·

X

* H

.*

JC

rn Ö CM CO m CD

g Z CM CO CO CO CO

. . · M _I_I_I_I_ - 32 - 89169 0 u e « m 9 Z * * m n * § m to e·» o o HO I ro y—t

V

JJ

® au B Ä °* °* ·= O -h — -< ~

CO

i e r- « e c «j a; « .* jc £j_____ * /—^ g » C* S» ^ :® β B Ö S 6

E c SS O O O O

oo m o cm o

C ._ C\> CM CM CM CM

«·' E

Φ 9 C •H

:? - A* |____

** t-r? H M

rc k s kk o z % z 2 < * ? ί ? j . g gj? . 0 0 10 °~|- o~y O^· a^Y"^· V*.

° S

••M ———“ — "

JK

Jt « ei t- 00 σ> o «-<

i * CM CM CM CO CO

m te |_]_|_· I; - 33 - 89169 o

4J

e « «

OS

c t> c u | B B S § e

CM O O tO CM

CM CP ID LO CM

_ —___s_____ c • Ä B & ** °*

2 *-· O O —< -H

id m s» c *- ^

V

c c c 4, « J* .* o 2 Äi i , _____ ^—"s

3 PQ

« I

» /-> I O

.£ o o e c ° 9

„ 0> 3> \ Ok V. O* O

S g β e)e> e e

Ci ts O O *7 O *7 O O

c o to r'^s ’-h co o

— CM CM Ti- f η CM CM

5 ~ l2J [2J

S < 11

EC E

—— ^ voy 1*8 § 8 8 < *" I > ^ x ij? <0 .0 |0 i 0 I * Ö^v ci^,» z^V'21·

I I I | I

— - — — -- . ___ . . . »rt ——i^—- " — 1 1 11— I— — -

M

M

V £i £J CO U0 LO

a z co co co co co - - · fc2 1_ • 34 - 89169

^ i \—i—^—I

0

4J

c m m m e 4 Φ 1 5 S S ? 8 H S 8 S? 2 8 0)

4J

® • w Ό £·. e 01 04 °* «

'“S’ C . »—-< «~H CD

^ 4> 5 o E .5 S oo ¢. « «A* ,* 0 3

* E

3 8 B g g f

' Z § I s 8 S

E g ^ - CO - *> «

C

»H

:2 ^

4J

Λι___

K

* o

® I

2 *2 1 < ° O 2

* 0 ή * c°i SfS J

°~r g^i' Ύ~Τ' '1 o o a a •M ~ ' ' ~ ' '--“-----— --.-.-- je

M

S ^ rn 2S 2 o ^ fi ^ ^ CO CO ^ ^ li 6C_ - Js - 89169 ) c u c « m

C

«I

«I

4J

O Ok 0*0*0* s £ £ £ e H UD O CD tr>

CO 00 —I

V

4J

»

» H

•a € ok - e* o» i ^ e ** e e i * g o —1 o o C c ο io m

' ft; .-. 00 VJD \_D

tt. « i * -* £j_____ w Ok Ok » Ok ;« £ e e t=

E 'C O ^ O O

.5 ID t- O CD

E .- CO CO ^ —< «· E e, te c :c ^ a.

x :: ΛΙ____l__ a o : . I ~ λ a v ^. £ o a < C V o 2 Λ a Π SJ g δ/ £ a S^v^2* U^ru ^2—0

0^1* I * * I* * I

— j<

*W Ö CO CO Tf ID

Z rj· ^ Tf • p4

. . B

r ; ; K____ - 36 - 89 1 69 I ' "Ί "" “ ------- I ...

«C

c 01 2 ΜΪ £ S2 S 6 9 * >

• « .H

4> V ^ 13 9 3 3?

H to o> ΙΟ CO CO

CM —I 'S' CM

rH

4> m

Cfc Λ O* T3 £ — CO C<l — ^ c I C c 1 4) -- a. cc * ·* i

o = I

x ε' :£ ^ ^X^

:2 - ' O

E -ί \ ffi ΐ C .-, / *7 1 e o> \ r> 2 2c 2 4> 9 is \ Cj Ei Es .5 o ^ 2^ O oo co -* o

:S ~ S O^ ^ 8 S ! S

£ X___V £ :® :> “i

~1 I

X £ ^ S5 S 2 9 2 § 2

a" i_J a" _5 £ (j °xls° \^JP

ν—Ζ~> O —2—1 0—2—1 ^2T Sz^

I I I * I * I

• p4 — — · ί- ί .

* ^ ^ S 28 σ> o «_J_f_ ll - 37 - 89 1 69 * o u

C

9 9 9 c 4)

V

L·*

^ Ofc Λ O O

§ e § b b *

h co % 00 - S

^ cg --T“

<D

AJ

e •c ►.O» » O· » O*

<T C _, O ·—' —1 CO

0) O

E .f s 4 <t Jt J*

c s * E

ies e B B g 6 £ 'c 2 ^ to m ^ - -S Ξ: <° ci co C E ^ C cc c T v_^ :;::! Jk

• I

XXX

O O O -Γ K

8 \ / i 8 < K ^ S R 2 i

x Z- x X ^ x κ tr P

\<Y ><Y S I s s I s a < X

ϋ—2—O o — Z—1U o—2—O

X I I i ' i ' i • M “ __r" 1 1 ' i --- - __ äi

. ' . JC

S -2 ^ co co ^ m

Z LO lO LO LO LO

bi__ . 3B - 89169 /

0 u C

m m 9 c * i 1 g 2 8 8 Ϊ H t'· ro zZ J{? 00 CD LT5 4) 4-> tt * g g g g <r c o o O o co * o o m jn £ .£ in oo c- t" ' C * ! ΐ -s i " j (----------------- :<c e e e Λ

:<c _ e 6 e B

E c r- lo c :: r s ^ 2 3 C. c ^

&> Q

c PC . .

:c w

X

Ail____l__ ψ% *** η η (fH im

S EC .-O O X

" \ /° g 2 2 O g < § 5 8 „ a8 - b8 Yxg o 5--1 g_v g_> ^ r? V E E K E ' E £ ' £ £ ffi °_T:|: u 0—2—O 0—2—O 0—2—O 0—2—0 _ ~ ~~' 1 ' ~ .

x

X

8 -S? £; oo σ> o .2 z 10 10 m m to » li fc?___ - 39 - 89169 o jj c « m 9 c 4)

V

u c Ä Ok S e e 3 β ^ 6 β 6 H oo cm ·** ^ £~.

tO t}· 1—i O N

CM ^ .

V

4-1 e ►- o1 a e e e

ci S § S S

... g> c ^ r-

Zj\__ ί Z 1 1 s -5 s ε c lo σ> o .—i o

.-TT 00 C 00 LO

£ 6 ^ CO N j - c m c «

4J

;;:: Ai_____

. ‘ . I

K

o *· " ίυ ffi

CM (g . . O

o g ex S 5 0 2 O ~ 2 ° Z = < ; ITS I K 8 s \- i Aj/ AA ° k»V-o *? . 1? . 1? I r> n I n n / λ « \ r>

M-5 g-i-δ S-i-S g-4-S sA-S

1 1 1 1 ' I

* «M “ · —e»—·1—»—», 1 " 1 “^— -- " —~· I —' i-

It

It S g r? w co m

z LO LO LO LO LO

· ' '' — I —^^———^— * -- - - --- ----» - · k: - 40 - 891 69 "" " ί 1 ' r — —. , „ ——I—- — , Ο υ

C

m « « c φ φ 1 t t & Β * Η 0 CO lf> ΙΛ S N CM CO — ^ Φ >

iJ

0D

• pH

•c f, g » O* o* » ^ C f—\ —< *—< ' ' ^ ei _·

CC

I C - . Γ— a. cc

O C

* E

·« e e S 5 » :* e e e e e H ’c 9? o O o —

.5 £ O o O

* ε 4, « c

* M

:S ^

±J

£.

e

+T* O K |_l HH

j-. v O ^ K «J-<

O \ T KEEqO

< =>-§ gV *jd gjjj Oj w \ mm \ « « n n I n 0-2-0 0-2-0 0-2-0 0-2-0 0—2—0 I I .1 I Ί •M — ——————— - - - —. __________

M

M

! £ s ε $ s g m cc

Il .

- *1 - 89169 I-—η---1-1-1- o

4J

c * « m c 4) 4)

4J

O Ok 04 Ck Ck Ck 3 b * if b * to io co oo CO tO t"·· 4)

4J

OD

»W

T3 f. a a a » »

£ 6 β 6 B

^ £ o o o o o

c c O O O O O

* —I m oo oo m m <C * J* 8 §--—----- ' u'' E-1 ϊ " §

.(B

·" ck c* ä Ck Ck Ob

E c B B O B B B

- *-< O o o o

a c C- O / in —I ID

4 « CO C —< —< CO

·; 2 5 ~ /\ ·£ η

-- 5 < DC X

M

DU rr Z § " Q 55 DU \

8 § < \ ξ X

DU DC £ \> 5 < z z z z ^ ^ o o o o o o u ö O u K ( Ϊ I ( ζκ(κζ\κρυίζ ο—z—υ o—z—Ο o—z—o o—z—o o—z—o

Ί I I I I

... ·Η “ ~ ::: ί S d r-^ CO CO J£5 g Ä t- f- t- t- t-

• H

**/. m • ·· w |_ I__ - « - 89169 0

VI

C

« m m e 1 sr sr s & ϊ

C <o 00 «5 CM TT

= r-i 00 CO CD

0) .5 9 9 » a a •O K K e E 6 £ o o o o r~) ^ co o o o o

'ie 00 CO LO LO

a e e 4 — 4 S .* Jt O 3 ÄC E__ /”T\ / « , I u ϊ ~ O ® g o t 1 § sX-5 s s g g .5 «2 <> co 00 LO o w ‘ eo ' 12 12 ^ t- xj #2 g · / \

I < X X

—i— n Λ Λ Λ

• KK X X

O O U O Ό s”4~s~ s $-% £i) h a" < s ® \ a a" \ a" v >/ k ) o—z—o o—z—o o—z—o '-z/ z

Ί Ί Ί I I

• m4 ~ ~

M

a 1 li ö CO t- 00 O» o

g Z t~- t~- t— CO

**4 m te__I I_I___ -« - 89169

O

4J

C

« 4 «5 c 0) 0)

4J

C Λ a s g »

3 β β IS β H

H o o e- in cm ro f- cd co co oi

4J

CD »W

•u

"E Ok Ok Ok C* CJ

^ e e b b e I ^ 5 o o o o o I cc o m m m m ! o. ·- LO c— f— c— c~

I 1 X

-X X

o z * E

3 S λ Ok »

e e B B B

ε Έ X £ m co o

·- S2 CO CD CM

C - ^ CO ro CM CM

C. E

0. q; c

* V__V

*c ; Ai_____

X

x ac o O O \

§ X X

X l X o O o

< s s z v V

P 8v0 6 Φ b

I il I I

•H ^^—- Ml —m 1^—— — Ji

Ji

Sj *3? CsJ CO TJ· lO

^ * 00 00 00 00 00 e . te?_ I_ - ** - 89169 i i Β β

00 CO CM CO

O

U . /—V

g CM

• I I

c σ> σ> 4) , 00 00 4) ‘ ' v__' ·> ·Η Ή o I Λ Λ Ok W ν-ι 2> § , Β Β Β 0) 01 Β Η c~~ o co |e £τ σ> co οο ο ο ο ^ m « Η Μ 1 " - 1 - ' Γ Φ ‘ ® *Τ3

Ok Ok Ok Ok Ö> «a· c in t-h f—t m to

41 · O

CC —< *-( .

4) 4' OS .* .* o = * e

o S

:*j ^ P

i \ / 1 t „ z

il o CO / CM O CO

C * O CM \ σ> cO lO

ro co —. —i cm — i ~ /\ n n

•g . XX

- j < \Oj~y

XX

O o M K

CX K / 5* O

ti? .4«-.-H toi Λ U—Z-U O—Z-O K/Z ° s z I I I ° \ ° |' •W ~ ' ' I —— I I I M.

Jtf S ^ 5S EX S o> o 0 z 00 00 00 00 o> 4!_

II

-« - 89169

O

u e « m m c 4! 4> O » S g S e

§ e β β *» E

^ tn f'· t""· lO O

in S σ> oa tn o> ® •h f» β* O* » B Λ

<ί C V—< -H O

Φ O

CC

φ *mJ

a; cc S 8,___ * e e b Be e c o o co o X LO LO o 00 C .,- CO —I CM -h

a- E

Φ ec

C

• | cc . .

:c u

-C

Jjv________ *T-* W4 o

/ K

( «, £ E X

>—j—I HiH tC O O O

o 5 Z Oli

* Λ 1 f Λ V

o-ί-ΰ o-i-B B-z-B

I I i u^i i λ;

5 CM CO rr lO

en σ> σ> en en 5 _____ - 46 - 891 69 0

4J

e <o <0 m c

V

4J

n O* C* Ok Cfc Cfc § § e e e 6 ** 00 t- i> 05 o <j> —« 01 i ·= ; >, Λ g g «» »

<f C CM O O —« CM

CC ° ° £ .5 <£> «o

W CC

.* .* O 3 * e " ^ k S> 2» 2> o» :«o k e e g g

E "l O O O CM O

c CM 05 05 ΓΟ Γ~

c ~ ^ T—' "S' I

01 E

0) 9 c :? - imi

•C

AI______ _ Λ *»

a XX

O O O jj* £ s w E 2

< 2 2 2 K « O O

_ o « O O O E / ,Ε O

g ö g w w o Ö-<^ kj j_C_| x\xx\xx\ xx <£ ,2— 0—2—o 0 — 2—0 0—2—0 0—2—0 , ^ - - - r — - - '— — ‘

M

Jtf £ c3 CD C~ 00 05 2 a sb o> en σ> ο·> 5

·* v-H

CD

u:___ li 89169 c

4J

c (0 m m

C

4> 4» 1 & s a 8 = " S 8 8 S 2 4) 4-> ® ·*-< p- Cfc Ok ^ Ok •o'* e * <* e >, —· o o —< o o o o

-» C LO LO LO

4> < c c <l· · H 4 «5 I .* .* 0 3

I * E

( ---1·1· ' ' ' -" ' ....... . 1.-- ;v /—s u :<o :<c ε c c .- * E Ok ÖI Ok Ot Ok * * e e e e? e •5 I —« o o o o

as . 0> CO LO O lO

:c CO -h «—< co —I

,, Λϊ__j__|_ ! ' ! cw rr 2 0 5 o o

·: S CO CO

i O 5r X K

< I L?= z 8 8 ( £ a \ a Ό a" ( a" a” ( a” a^v-z. O—Z—O 2 0—2—0 0—2—0

® I I I I I

H

M

t ^ CO CO LO

S3 o o o o o Ä .—I — T—I ·—< .-.

“ ·ρ4

B

a:_J_I_I_I_I_ - «e - 89169 o u

C

m m m

C

4; 4> u

S M β β B K

H O ΙΛ —' CO CO

CO ^ CM Ti* CO

| i 4)

U

'•S e °· e ** «* ! "►> o 1 o »—< -—1 o o ! C LO (30 4) c e i 4’ ·*

4 cc X X

il_____ * ^ :w ? t c .r a; E ä n o» Ok ot «» £ e e e e e •^0000 10 * . CM O O CM ^

:c —' CM Tf· LO

h_____ λ § 1 t < < 2;^ o O >_ < 1 zn: « 9 f ω Λ*- ά ö 6 o—2—o \z/ 2; 2; z Ί · 1 ' 1 Ί Ί nM -- -- ————— ——-———— ——————— * *

Su o ID 00 Oi O

z O O O O ’-I

i «5 J_____ - 49 - 89169

O

u c « m m e 4)

4J

O Ok O Cft 3 K β β *""* ! *-h 00 CO 04 0)

4J

tt

•H

* S g ^ £ — O o

cc o O

ϊ ·- m m £J___

/^c§^'N

:«j r-v * | ._

:<« J. .X

··* O ·- u

Ec»0 S o » ° C::E o e2 “ * a E o \ en e O e « <* t" \ CO L cc £

C CD < '-ι Ό CNJ T

i - ö ; :

X

O χ

O O

\ 8 " Q lo V) i i

• ·.’ _ -H

JC

M

... U ^ ^ OJ CO

g ;§ ’-i ’“i *-< .2 — — — k___ - so - 89169

Esimerkki 114 7fb-(2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z )-2-dif luor imetoksi-iminoasetamido )-3-((E )-3-(dimetyylikarbamoyylimetyyliammonio ) - 1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

CH

N —w—C —CONH-^ J 3 h,,AJ { X°CHF> Joo- CH>

Kokeessa 6 valmistettua yhdistettä (500 mg) liuotettiin seokseen, joka sisälsi etyyliasetaattia (10 ml) ja etyvlieetteriä (10 ml). Liuokseen lisättiin dimetyyliglysiiniamidia (160 mg), minkä jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä 30 minuutin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin isopropyylieetteriä. Muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin kellertävänruskeata jauhetta (400 mg).

Tätä jauhetta sekoitettiin seoksessa, joka koostui trifluori-etikkahappca (5 ml) ja aniselia (4,5 ml) yhden tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Reaktioliuokseen lisättiin etyylieetteriä ja muodostunut saostuma otettiin talteen suodattamalla, minkä jälkeen seurasi pesu etyylieetterillä. tämä saostuma suspendoi-tiin veteen (5 ml), minkä jälkeen suspension pH-arvo säädettiin 5,5 - 6,5 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi siliksgeeli kromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (55 mg). Esimerkissä 114 selostetulla tavalla valmistettiin seuraavien esimerkkien 115 - 117 yhdisteet.

li - si - 89169 W* ‘ N—nr—C“CCNH^|—['"Sv.

Q) N0CHF' koCH.-0-OCH, (kokeen 6 mukainen yhdiste) A* (A:ta vastaava amiini) N —π— C —CON H"t—< S n.

Η,Ν ΆςΓ i /nJ^^a ''OCHF, e00- - 52 - 891 69 - -S I--(-- t 0 u c m m m

C

Φ

V

4J

1 g S S

° I 1 — —-- — ' ~~

O

! I » s s —· o o :*S S £ ! c c

S S

•g 2

* E

·« & a g e *

E ·? g> O O

c 22 co c.—' 02 —· cg e; E e < « :c 4J ^

X

:cb

.J

<

X

o 0 , 9 a <7 x o x & Φ v 1 '1 ‘ l J* ^ w LO <o fN- e as a Ξ ' •H *-» «0 M____ li - 53 - 89169 ί 'n £ - ~ a; »n s S ^ * ^ ^ ^ ^ ® -j . - .

• * ^ s^s · O

^ X ti . „ te i -ri n . X · «n ~ X »^ >»< », t* ® ^ ς Λ ΐ ΰ l - ^ X ^ ^ oo tn “*r £ Xcn^t^ci n X ,? ,· —> ® m e— 2 w /-n »n /-n n * af - ^ s x . 9 ^ x ^ a n - 5 - T 5 X ? T . s - Ό N o —Γ tr χ* . X t- ^ σι n w t- . 5 X ® κι f x - Λ X cg *j X Z-^ll ·** _ m . σ> .

·¥ cm ^ ^ <s · f} ^ Ί?·1^

Cl. w CO . N Λ, O ^-v 5T ^ f - <Ί «>. % X % ^ ^ S · -

1 ^ co ^ m ,-; co *E m ^ E

* n.' n tn g .

Ct . ^ ^ ^ H X x 5 £ K X ^ T3 x '•s te . -o ^ ^ ^ X .« .ω·ο .t-i-' ~r »n — · X — XT1 •X'^·^·

"O J J »-^ V-/ J J

** W to JJ n ^ o to co 'n co ►,ί X* ηί >—* m tn o j ° κι X r^ X X X ^ ~ — X tn ir CO ~ CU —· ”- - *ί* — - — N*»/ W * /*N · S»/ · /-V . /—- σο^ϊηχΧ,βΝ^Μχ^χ • o ••oocNjCMXilc^oo'0 — X m CO I, — ^ooenoo — « — ►, il ^ I h n Ji ti - “o . Ό *o "-> ~ -o /—V · J^N .

te <—\ ✓—\ Ό - ^ · · · ** * • . * Ό Ό CO *o ·ο -a ts • · Ό -f -O Ό Λ £ Λ Λ ~ x 1 te ~ s te x' x 0^-00 — -- ^ 04 —< — —< » * · *Z CO tw* CO CO v—^ S*' >«/ w >w S«/ >w/

> SoSSm^m^QcO^^O

: s O^QOOj^oot^cjojC'}-*© ...; ^ wf^wwroiomo'^roiOtDf^ e .... e i = o

. - 4-1 .M

o mm o m o .,- 2 ~ m m r- m h-«c _ Z_ —i cc ® °, ~ --,-. - - * 3 ...

.-^ * z tn o m o o in * 3 CO CU tO 00 f» 00 £ · £ r* *- t-t~to e- to e £ ΐ 8 - - - φ e a.'-' - - - o M ·

«H

.\\ V ----------

. . . W

' * · •w 2 g 5 —1 o* on » - 54 ' 89169 --- ---- --- vs

. N

O 3C ^ a* co « - ^ c ^ ί 3 ^ = ä «Λ X X g rt °9 . oö 9 —· . . 9

D ^ JJ /S · W

X 'i Έ ^ ^ 1 ift · M „ <6 t *“ Ό !· ·Τ3ητι»0»Λ^.Λο I*

/-s 00-0* CM Λ t- . JO

— «5 .·ν.ν*«0*Ρ . W “5 o tn - . _ X o ^ "° O rt © 9 co • O) ·* Il t*· . * (Ä \o V 5¾ *·» w "O *** si"®? e. · '''-ot-^-s'O-r-eoj0 * ” S ? οέ E « . — Q£ 4? O - W . ci> *j ^ w "5 C, 3- CO ^ lO T3 S^ Ä ΤΓ .

5 9 m “ ™ oo <o s -» r- © - · 7 - —* N |V ·- ». 17 ^ » t· n w 7 » - * — ? ~ir n f- ’ ^ n tn

Tt, “ cc tn tn-- — — -α“?—·~ γο·ο“οο ^••oou, ^ · αο n- ^ f» tn © ^ k - X * ~ S n tj ΐ /s “1 <“·> v *·«

W~£XX42W4!X.£X

Ό ;>Α· O *· —· " 00 — O

rt II tn II 00 rt CO II 00 — -3 II -9 II II II -5 II « ^ . *-5 *-> “3 *“3 *”5 Ό - -O T3

Ό TJ O .·* O O O Ό "C

k* ‘k a-ta tel-· «Ja* aaC HH ' HM «k* sC

t„ _T —' — — - M e N M -I

- U '— s—/ ν' Q >-< ν' v/ v-/ > Q cococm—<©Qco©oo© ^,- Qt^ — oioocoQcnaDf^o e v^romtnvDf^vxpotocef^ S ....... - _ — __ C.

e I

- e ^ ^ * * V e. tn o o o S g CM - CM- - I ~ t~ te f- © S · Ä “ “ - - m jE z tn o o o * S f· O' oo o>

7 m £ 7* ^ ® r- <D

V « - e IU ( u Ϊ: e o.'-' a m · v__ VJ. . -----1--- ~ --------- " —- cc •O. rf e s * 1/5 ® r m li a - 55 - 891 69 Λ • rf'—s

Q

» . ° x - S' . x*

S C· *· O CM

w -* E - E w . — S . >Λ · fc ^ O ™ X II X ™

« __ tr ’-J CM ·» O

* cm w . ί X

X * . · τΓ -o ^ <» i * M-k 00 ΙΛ Μ ΙΛ “ .

« n . - χ . cm · -X · ^ Ϊ3

, * ® · ^ I c ^ / A

o 7 'e X “ g " " s - ~ - *> x ~ ® -e- ” a; x* ^ _cm to ‘ * Tt —.

w 2> w ^ E'S'X b w ® -* « t- fcEi e ^ t- « * ^ N-' . w —* 2 °? . c ® ~ Ξ s s- : ^ « ^ « l £ - £» °Ϊ - ) T o c° <o 1“ n ^ 1 ^ ίί ——i·® 00 CJ oo Ό" n *-> w in . · . co . «-^ ar _ 12 cm · ,-. cm · —

£ ^ ΐ ς " f . s * . ^ X

_ ^ oi E S c4 E 4 £ X “ If X* 'J - s* Λ . X* ^J* " 2 S “ ^ £ ΐ n 0 ^ ^ 2 t^ ^ w ^ E m E ^ Ϊ ·« * *· = - ; 5 * 5 5"»Ξ - 3C ^ •w ) ^ w ) =:

w ^ ^ ( V / wJ W

3 w ^ Ό* S ιλ co SS co tn cm I

X to n : — σ> . t·- 0 COt*· ~* X , Μ* ΙΟ N OO^f- ^ ή « ^ - I x i 3 c3 - in""®^ -

-P*E4^-EE®^E^E

fc ^ o> ^ n m n -: . »r a- — ^ *-·-*·£ ac^-no* CSJ -* "-N *** CO if ^ S-* · %✓ - . CS) w Λ « —irs*0 ΓΛ _

• ·« v-/ 5 0 CD

' cc ^ - x °9 P -* «?-*«? .---. O ~ ~ ^ t, fn<o= « * ® ί ' in o n ·. ro m· c- - m σ> σ>

Qtrot^-rjQr-ojOQcocooi ^ m *3· inoO'-'rou'it^v-'focoift - . » : \. o

C. ιό O OO OO

£ CM lO CM ID CM

e ~ to m <0 m to m -50-- —I — — — *> 1— . 3 · . .

*ro© 0 0 0 0 •s * 10 o> m σ> m σ> V u r‘ *" ® *" *0 t-«n c-λ g — — — — . - · vt-ι « w c aw * · * . ·Η --- - —- ____ --- -_ ·___ M " t -

ϊ ί I I

; CM CM

u_L—-_1—___^___L__________ - 56 - 891 69 ~ ε ε -o κ . as -Τ' N -O' — Λ v^/ β w —, · ^ ^ “e K n . X n N rr C "β· _- ^ TE'-' - ® N < . ·— * •aC’-r i2 ϊ ^ 'n'm

Ewoo X oo K* ,-4 - £ .4 * ~ . - p? ® " £ ® ~ " - «? ~ " «ui X w / X £ > - 33 >~3 * Λ co ιλ m a; ro / 33 co *o^» ^ w ·ο Κ •o eo ^ ui ^ £ X, ui w S k-o- R ) o R C p- 9 fc® « ti. ~ ® ^ « ai ® 05 n p- on·— *“ * *-3 •••r * · «p * pj I ^ • " “ ~ ° ~ * - S -o- x , = ~ ® x = ^ ® * χ ä 5 s a S I 2 £ ä S =*xS 2 “ . « = ϊ .A o “' ττ · o — — _ C- O O · Il OP·· Il O —I M · i —i in " · —i iti " . il *r O ^ • ^ Il II -3 w II II ^ Λ o E o> - ^ . o -> - . Z: o; — ^ . . ^ ~ x * 43 Ό T> ‘ ,-v £ Ό Ό ^ " II CM ® 33 -o X n X ό X n X - " ® S -* X * =? x _- c 5 ‘T * ^ W a

Z P" — -3- T*- — ^3 R<E>N_i,.gP;cM

n —' —1 ^£2 oo il —' —· ® ® u ® w "o id ^ ~ Il "o rr ^ ^ II O £ t-’ , ^ <£> t£> Γ— *-> VD ^ . ·“* 'Oi e ö “? . . ti « «? . . T» M - «? 00 - WT^-vT?. ΙΛ X ^ . 43 · 33 ^4 . ·£ - X o « ^4

CO K X CO n ^ X co 43 ^ ^ N

w a; Ν1ί?~ ^χ ν“?-η^·^ ν:ε aor-Xui'~'<ocMXiO'—'.—iR ° X ® •«•ovn0Tf-ovno~1 P- ^ o ·

It II ^ 05 II II ^ 05 "5 m Il K

"o *0 - “0 Ό - R *"5 Ό Ό * "is · Ί0 <>"X · · ^ ><**s ^ · · U ^ ^ k· ^ · * ^ "C "O -O e? # T? ·« JD f> β*° *Τ3 T3

'XXXX'XXXX'X cXX

O — — CM — O - - N - o N _ ~ -

Cw s_· s^· s-' CC ^ ·*»✓ \^s CO s»-' ^ %».✓ w

S OC C— ® lO 2 050505tt2cmCO<D(C

Q TT O C-- CM Q T»OP;®QCM®0 — -—'rou5if5®wromir5®wc0(rii/jpl c

•«H

X O U5 O O O LO

U P- — t— CM CO CM

2~cou; to m ® ld -£ o —' — — — —

-»-S

3 · · * » · · JS z o o o o ®o

3 CD 05 ® 05 OO

B· Vi N Ifi f- K) t—CD

(β *J __ _, _. _.

g — — — — — — in * υ c o.'-' t-l ·

«M—M- - -- - ---------1--, ,-,^ „, _ M

JC

JS — CM

S ä 1 1

'3 CO CO

V

L u M_I-1_J

(1 Λ - 57 - 89169 » Λ /-S /·Ν

• /-S » N N

- E . a a ►r a * ^ n I ^ 2 * £ t- C CS1 ® "n R w n /-C *' m ^ * X "> - ’“i M 1-3 00 OD ÄN .

S ·«« - S -° 3 E

^ -· i ^ s » a Sk a* ^ H dj ^ χ en . m O, - w •O ^9 . ^ — . tJ 1? CO . ^ “Ä -» ^ o 2 w ~ . X - t- X — * a ^ ^ g e - - - * *ϊ . ~ a ^ i -s a'»-

3 - 9 ^ - - S ^ E - £ ^ E

w § 23 . M* i3 o ” "O f σ> « -e *r u · X τ 23 a to — m ~

Ji ro u-, “ K ^ · * -,· f*3 · - ,—* co a. —' oo n-^Xw O- . ιο s~^ · ie )*—

* '“τ II Dl ^ — ' ^-1 s—' «O (Ä \—' OQ

I »J1. -IIM Ti dj ,_ ro®.· . ^ γ 4 4 ««>53

« a -e f . . N ; ui I ™ r ^ J

ro -e _ Ό Ό II ^ K

TS -—' "O

2 ~ £ K * 5 E * E « 5 * ,* 6“ « 5

CO w O ^ ^ CO hfT * . · q6 m - . - CO

t- 4* ^ — Il ^ X X 9 » ^ K K U il ~c?£s~^3--x^3--x^> ® ro 3 ^ o- . co ^ ^ ^ - r> ^ ooin -o“ftr,co--TS^«>to_;nc •Τ' . » ^ ^ ^ 00 . ^ ^ ro ^ N^-C'iiXTrO'^ n SC T ro n ΓΠ w X X *2 X — l X -H / X - oo n in * owro** — ^ r~ * * — w ^t^t^Pi/ip^EE^g^E E ie P ro — || ΙΛ m —< Il — n ^ 1 I Λ 05 i af *> 05 as x o> 03 ^ ~ ~ ΙΛ C* * · Λ N · .

^ · *S · - ✓—T /—S W S-/ T3 >—s /—N W T-X *T3 ^•o-e-e-e.^ -e·^ ^-e»

: ;: I K K K K K I ^ ^ K K ' pj ^ K K

,‘". O^- — ^-CNJ^Q.T—«C^O. . — CN3 • * CO V»/ 'w' N»' S~S N»/ CC ( / >W CO ( ( V/ V-/ Q^oot^inQ^oioroQCOOjtor^ ---- wrorfininoo’^co^iiooo^'oocoinoo .... | :*. e » «* »^ ’. . £. oo oo oo : : : w t— ro ie — ie — * " i ~ vd ie ie ie id ie •2 o — — — —· — -1 _, 3 · · ·· *· « z ie o oo oo 3 id o te o ie en a.w_*t~iD r-ιο r- ie V 4J * u B ^ *" ^ IM D υ : e m m - ’ - , »— — - ------ - - — - - - — -

* . M

*2 — c>»

..!:' S 5 « I I

'" -Jj ID ID

W - --- • 58 - 89169

E

' a n E * « ^ a ” a e — T CM C-

w * f * ^ x E

— ^ o S' - c*

0 N X °?XN w X

, ·ν a to co *- oo «o·-· °9 «5 CO «5 w ~ -V >η ^ . _; ro » Ε η " Λ E ii J2 ) - ^ * - . a ϊ ® ^ ‘ ι ~ -o -O Tf _ 'Τ (Λ · ^ * •Ο —< ” — Μ — . CON — — * ,_Γ 00 — 1 „ Λ X - W w X X „ w -ο g οό r~ o> — cm^o> .^> c -ρ ”· ^ ^ · -ο Ε ^ 7 N CO fl· 7 τ 13 * - " -

• r- rr ιη ιΟ _.**? X X wiO

ι- cö “ c0 — — J5w"°a

i-> --1 J ^ n . "Z

•Ϊ - ^ 9 'T' - «5 _ MOXC

a 9 .£ E £ 9 ^ X J ^ - to 1 . -· ® ®* . ^ / O ^ x a — χ ro o

os - C ~ ~ ^ 9 ~ ^ ^ J

w «J “ w X fc CO —' -~.

S - 2^-cnoo - — co ^ tn X oo · X £ - Ο ιλ a Z CM ^ oj (I — «9 ^ ~~!

* ,-C 9 cm - σ> __ χ* a ^ II

ε I 5 c6 ε - ^ ~ ~ - X · 00 - X a - ^ S ® « 3C · ^ — --v r^j · « ^_τ -^xx-^x^f a - m.oo^toXtc—tn c ‘ oo '—' CM · || — ro 1/1 U-. QC — ^- || ^

<—3 II . I! II v £ k, O

^ ? S ·«· ^ I ^ ^ 3 ^ 1 ϊ Ϊ * c : s * ό : 3 * *

Ww^-wW^Civ^to" *2 co in tt IS tcoo — Σ cm co in cm

Q — CC — Q’^f-t'-QC^OtOCM

'Ό'ΐοί^'-^ττιηεΓ) —' n v λ oo ι C • ^ ^ mm mo o o u o r>3 o r; m .

2 “ to in ic lo ic m go-- -- -- • f-v 3 · .

zoo oo oo 3 ,M «505 tO 05 1005 cl vj _ t— to t— m r- to

u I

* m n -- -- -- M-l 41 ϋ c o.— — · . *f* _____ . I — —1 — - _ I — I .1 ι

JC

u «* S £ ; I I ® ·" I b- t-

• I

L u_|l-1--- ι ι * - 59 - 891 69 • · »

/"S

N N N

x te κ o» 0*0* • . · » /-S · m. ^ ID «5 z-n <D ^-s» 7 E V E x V E af ^ i - -> x - ^ x - ° C ϊ ^ g C Λ ^ C ® tn }C oö te . oo οό te S οό C * in " C Ϊ « . · C .ui 5 e“ 1 'J» . S ^ f *· ig'i'J'» ^ σι -e ^ — o . cm

^ **> »r ·® X n ^ ^ a w ^ I

•o . ii 10 —i tC ^ ^ λ „ . * « - /-N Sm/ ^ ^ /-S ^ N-/ N-/ ^ ^ w Eoz-^^o'-'E'^r-Cjo E cm z-2 »n m n <o o 6 »J in n o X^tCt^t^jj.* X t- χ' tj ^ f- z. ® ® : x ® - °9 „ ν-'-ττ^ ^ cm ^ ^ w ^ £ n ε 4 a ΐ 5 N « i S E »i te Ϊ esi «* = » e. ) ^ . in S ) ^ · »ft > Tl · in a « N qo (sj ( . 00 — IN©·- • o ^ il n ^ o / n i '— n n ^So^cm^Tco-jo ^ JS ^

Ct CM ~ NN" CM ^ T3 T3 0Ö '»•β'β,—ν ^tJ -Oz-v

«ς*-3 ' Ό K * TT N

<*N - » /-S * VJ- .. .

_ E - J I ^ E ^ J tt * E^v-·!3- z <» te _ 'm m x ^ ~ « te _ —

Ϊ33'-'οΧχΚν-'οΙΙ ~tCwc II

er o in " 2! ie λ *c ® tr ιή -r·']

— - ie w. o e I

T ^ «-e 'ίϊ ·** “ ^ zC ΐ a 7^^-κ rx i f 42 tr 0 / *5 s - / »si- io ^ ax 0 f-'aXf^^xc^-x 0 wz — -cm — TT in ^ — ττιτ1^ —* il il _* il n ci _* n n e — Ο "O ~ -1" *-5 “0 — — — in oo in - in .

z~. 'w' - _- /-s / - · z-v Z-S M-z . > z-^ • · - Ό "O «, *C "C ej . _ tJ -C e) • · ·£ e -o in -a £2 T IT* e I · SC !E Ä t , >,. v *»- * * CO / -w -w CO / s»/ w s«-^ CO ) '—-· w ^ S o te σι o 2E gidocmSooocm;

··· q inor-— QiDOt^eMQinct^CM

---- ^c0ini0oö'-^cöiöiric6'—'cöini/ioo t e • · · .*4 • • a oo oo oo * · · l- tP ·— m ~ <o m KO m <x> m nD-- - - - -

« -r-N

3 · · ·»

*200 OO OO

-.^mci in o in o C. i* -" m t~-in p— m

Il Jl g . — ~ iu « w C o.'-' e · ‘71 » *H - — -, . .1 .1 — — . .. ... -—. I - .11 —

- · X

JJ — CM PO

S £ I I I

... I ·" Ci Ci Cl :...: I «S_I_____ - βο - 89169 !

H

X

Λ M

g w * • H . W l X /-v ►— <rj E ·

co ^ ^ *J . X

w N - iL. »— . «m _ X *T* * O “ O N_/ m”"3' ,—. N · CM n - °9 ~ — N X κ* t- w X σ> 9- in ® ^ ä — ^ 7 o «? x ί " s 3 ^ « ""o^ * έ . " Ξ s . ° ^ N- ^

co ^ Ό · H O' - · "° * X N

-i m · *^>-1 ·Ε^\®

> . x* i ; . . e . x e ® S

ΐ ϊ ; s ·« ϊ c c * . ij ΐ ^ 7 ϊ^ο'*ΐν$^®ΰη»:β ” -· X M e ^ - . oo m ^ ν' 7 * = N ^ X s ~ " O' C w „ CO E ^ x ^ 10 9 .* E —' O w 9 w NT*'-'. t- rc ί γμγο ΰ «r oo rj ._< X - o9^ .11 * X cc -° 9 - co ?* «? li? Ρ χ n .-, • co 10 „· 1,1 «r ai - ^ Il co o ^ n* in —. rc co ^ 9 - o 9 ^~·τ#9 w E JS ~ e «Λ ^ ^ . „· 3 II K jn χ* •XX..; ^X* I *? . . i ^ co'w'w . “ 2 v n ·< w H . . * c~ to o ς m —i '•''m'oXX σι * o — f” * r— · f- — * /-v . . t . X . ^ O * 3" t- *>,_; Ξ, r- m9r~-«ww~, 9 «n w ^ ; n n " ui

Χ·'Χ. - · — ID O

ro n ncmXio Μ<ο^Ν(θθοΐΛ^:χ '^XX'^ro^X'-'NXw · — m σ> co 'i w οοιη^-οΟ-Γ* ^ -e >~nC0 H II ^ e II II II x‘ x* E co * χ "Ο^ϊ eo — T* - ^ o • T3-Ö · « — 't? · Q » •o . -e w .Ό . ·σ 9 r; w • X X 1 X oo X I X X I · · oo x’ o o ", • oXXoro·^·.·** 9—< — >s co m — y co co , . m co C/D '·— -—- CC , CO —. CO ^ ^ —' 2 ic rr 2 cj * xr 2 c id 2 mm < ro 09909990990999^ -—'toc-wTrint-^wrrin^coTy in 06 0 4J · ·

c. o m 00 00 OO

q r~ co in co cco f- co jB _, cc m id in vein tom ® -2~ ~ — —. ~ " _ 3 . . . .

£ z m m 00 00 0 0 3 ·<* «so «so m — «ο a> ^ 7* c- m t- in c~cd c- in 9 ·* fi " “ —1 ~ - — —1 — IM U υ c a.'-' >-> m • ft- — _ - ^^ ^ ^

M

k> —

v d o — CM I

.a s - ** d l«s_l___ ^ li a . si - 89169 »" — — f» --- - — - - -' — I 1 1 —

» N

Λ 00 ' X * ^ . t « x o ^ ε ^ e -: X, E _T © . n n 2 - ^ -: *° as = x = t ϊ * f- E -· o n. o °? ne». * w o n ,_ V_e 00 * wi — w © r~ . n e» w o> 11 e» 11 •O O M E ^ S °? ^ «? ^ ^ ^ _« CO · CO * = . s 2 ^ l „ 5e. « a Ιΐ . ; i ! .ei

•e · ϊ t ΐ’ Ta © X _ Ta © X

- -o . .^^^B^co^E^co

^ - w - E ς· f ~ E ® « » E 00 «Λ II

fc M C w . ^ a n ,-n - x il /-n · 1 = E ^ ^ E ^ — a ® « i 5 # v τι » ϊ n τι ».· x

f. e * --T^w^^aCXrixCX

s- ^2?s4ig>_*i£s®fcs® ' <'’opS'i"Si88»0’8s»e‘

& Ϊ - f f IT* ” . ^ N © / X ^ © f -C

n — n il a /->>12 © ®> Γ» ® ^ E II -j _ ^ n . ^ to X t-~

to-5 _ . ^ e — ^ P O U5 a E O ΙΛ E

2a«0.-0-00 °? . b CM fc i» li ~° . ^ «-·-« -Tr rr* · * w —* * ^ © _- E E σ> = Il ;S = B'm-“Em' — ,-»SiE'“·». 2®8® . s k ώ .

en ^ © © E C3 E nT*0, k Ta . Ό- k Ti

^ « - ? — χ / EE l EX

© ‘oooofo^coco — E ^ N ^ n ” 11-- n - - X X 00 ^ “5 a‘ ^ JL E- Λ E — — . e» - ~ oj - -—. m w ^ ·· _? © © -?co

λ ® ~ ® X E E £ 2 E E £ ^ E X

:.: : S - J f - o - C I > ~ C 2 * 3 C

S < m e f» „ro©2 ©©©«£©©© -;- QinrsJf'.C'JQC'-CDQ©© — QC© — - - - - ^ en -rj- in oo w n m s—- tt m r-~

.. I

• · o — m . · » - ^ o m m© o o o o u cc e» © c» m— © — O— ©m © © © © © © ® -2, as 2 in o in in o o o© c © o © © © © © © S.u t— © e-© r- © r~© • ij 'l. — — —. — . . i- g ... 14 tl u c o.w — «e • H _Μ_μ_ ~ 1 ‘ _ Γ _ J< f» — O*

s I 2 I I

... .5 w λ j2 « _^_._ • 62 - 89169 *

'm H

X

X ' ' 9 : N 00

* ^ ΐ ΐ O N

. o £ · E jS .X

E. ce o K x « E® ! X = -1 cm in h *

i ip * · ^ <«✓ m " C

»E /-v ,-J *~s _. _ M S, ·-> *2

CM ^ »3 KE?J £ . 1 m . X

M/ 00 x CM · ^1 \ ^ w ·« CM

co «^ «? w .eo w " · r* *e «e ΙΛ tn Oi “ ) ® ^ * a , ΪΞ cm — - *oo. «*» »r n

tt'-'· 5 ^ S o j h O

~ *- «T < ^ X " o ^ K ^ » -o

«e 0> m tj X tn _ . σ> 05 CO

_ **> . - · . ^ Λ O ^ β . « f . -C X —X E . " 1 ί -< ~ 43 ~ - 43 “? .K . ^ -

E ~ - ΐϊ*'· X — ^ - CM 43 CM

^ „ E X '*WE^-:XX'S

X® . ® ~ ^ S . —· — 00 x h ~ - aNX » 9 x* K I ^ o tJ -mo σ> y 3* ^τιλ ^ι-^ K * * <w m ^ cc* 1 ^ ^ w *2 n £ ^ ^ ^ X · f> { to ~ -e .Xl • γ II CD T II II o E ^ σ. ~' · l ^ f ^ -s ^ · *? * « S * « X - *~ « . . " * I ^ ^ i il „ S ^ ^ r m % V 'S * ^ § " £ w ^ ~

._ - _- <= · ,τ I ^ E !S Λ ϊ ή O TJ V

2 -p X „ ^ X _ X **? CM w T; t O

E—irt E — v e «· cr · w iOÄr- - w co ^ -CT II 5 . N n ς . -- O»

I Ϊ r - Xco~)-5vT3’*trcM?’/-vX

! ^ c- ^^^ -oe5o0-2«^ ^ u·, ^ m -c S · . X ^ e

co - co - X

^ ~ ^ u cm 3C · n' t. e*"» k-*.

CM /— N ^ CM ^ N 2. , ΝΝΌ'Χ - I

) 4: X 43 , 43 X — / C X X ^ cm ^ ro ' X CO X ‘ - in'-'N-Tfooio^' '—-

·— LO LO tt· —- ty in X — ‘ Il — CM "T E CM

H II II II II en »-Il ·« 00 r> ό x> af /—v _r * * ""i TS -ο τί το -a 'w 0¾ E *e tj 'X 'm ^ 'm "O . ..·=.. . T3 . . . "O . m .

ΛΧΧΧΙΧΧΧ'ΧΧΧ'Χ^Χ v- — cm— Ο — — c\iO — _._Ocm —.

zr. — w- ^_- cc '—. n—' UZ v rJZ — f ^

Sr-enoSt-co^StCcocMSinintc QCc~;Xqoc~.cmq<jdic-;qoicio '^'loiocnwiotooo'—'coiot^w^ior- t c AJ · . * o. c o 00 u rj· to in cm e ~ 1 <d x 10 in X o - - - - 3 . . .

• zoo 00 00 τ’·® ιησ> to o O- w _ t— m t— tn c— to ^ j< 8 — — — 1*J V u C CL.—' H» · • »N - -- - » 1 1 II — —» 1. -— ' — — ^ ' 1 I — . ..-11-, - J£ Λ

U

A) e5 O t-» 00 C> .a * m

l U2 — I - f - I -J- i - M I

i I: . 63 - 891 69 ' ** 1 1 1 · -¾ — _ ^^^ _!

C N

s a * ^ * * · E .

® · I ^

. w /~s >-3 wT C

-V W * JJ . K e E - · ; < 3 ΐ s x 2 X I Ϊ ,i ,· * I «ξ -

a n jL -s ^ n S

~ I ® ^ . *-3 O) ►_ g »ΙΛ tO *** · β · . ift ~ I -v, M? > ~ π t -.· ·«*": « * ** s ^ ^ ^ ^ ^ ^ * sc 5 ~ sc ^ ^ **: a CO v ιΛ s—^ m N O S · * tA λ» — ^ ^ «3 in S a* w ^ ε* — * * SC « ui 10 ΰ fc =3=00 00 °? ro ^ ^ ’“I a · CO kf> «m £ - * £ ^ ^ ^ ^ ^ ~ ~ *j 4^ν® . a: 5 E 's ® ΐ ϊ -¾ ~ — in Ecn-'.^r^ro*1'® & tj * · h ."“ to 2; 3- oo »r / - in ® ς ic " w—‘M-SC©--E«in —· • ji E I ^ S 11 Ϊ ^ C 7 ® n 11 " Z. · -o - "’’Bint!®··’’1 OC "“a cv . 2 © *n ~ m . .

. cm το * ~o 7 H rö · n -6-6 2 _* . " ^ I ^ z « “ sc ^ E Ϊ . i ΐ E ϊ Ϊ ~ 1 ~ z = « -° a ” c sc = - « “ cc TT r- ^ ID · _, * t— _ ID — **·.-. a n ~ n . * · cv - ,-v V N ~ y-. , N ID . ,-v N ^ ^aNR»4ii.«owN < n a * m oo id m n> «τ cc ^ cn^ p d ~ f c ^ d - " ^ ε^-ιη-τ cv —’ in " co —' —- C" cv «· cv m in oo

Il II “Ϊ II II E OO II * Il II II

-s - -ϊ ►o.z “s *“ “s “o -o Έ . a c- ~ ^ -β -β Xä TS* ^ TS* — -o TS* 'Z ^ TS* TS* TS* ··· T3 _ Ό . '—' „ ϋ« TJ . . .

*· 1 f f s f i a oo c a · i i ϊ a .·;·. O — — cm — O — d * λ —* ^ O _. cv — - - K v v ^ ^ W v q w \ CC w w w 2mirooc:2if;<in«a>oSooo3— eCilCOt^f'Q'Wip — QrOCQOt~;C^ '«-'co in m o^wroinc— '«-'inm '«—/ m m σ> » c

* ’ * · H

o. ® . . . u m ° - · «o ® -< _ •S o | ~

* I

5 z do 9 - m oo a. ij t~~ m e ±j __ „ M g VW 41 w ... c o.'-' M · ...

M

«! ö o — cv I

9® * cv cv cv I

en • w

Im — m---—L-- - 64 - 891 69

* * N

x * °9

Tj ^ - rv X n /-s n «? ^ ^ X ^ - 2 :» ti N e .

" “aRia^· =' . . S - i . E .

Oi ^ -a n w S .

g 5 s ^ * =' a S g B. -j - 7 3 s 1 - * = 3 * 5 st •s l n JO X r> w g > <4 ^ ™ ro - t— w ft; σι ~7 ( Oi

pö ^ to e u^, CO CO ^ CM

af - S - . ^ I 00 ζ-Γ 7 E . i , 'C E ~ -· · ϊ ί Ϊ . ΐ “5 ί

£ .joi "P · i cm χ X Λ K

J: N in v . „ CO v,^/ * * G» w »rt M * 4S3 C* ^ l/> '* o-^s ^xe®o?b* r j « ° ε 7 « * · ^ N *! * ^ s ZÄ 00 cm · -r / Il -> * E wi S *

Oi^m^-L-s^X X oo X

2*^ CO ·> . · CM CM · — i— —· in —i P CO OS · .° v_z >E w ^ - ^'n'II oo 2 in ^ —· 7 ) ^^ςΐι^'-'^ίο^ 6-1-^ . w oo — ro · c- _- P oö 73 _- — o ^

X · ~ tr t* -P cm ^ -/-C

OO^Nj-rOcocoN , N ,-h N ^

X — '-'••X/X-XN

oo-oo'—'u> oo m id ►** co ·*· “s E •’tr {{? ^ * · ui ^ c> Ί λ " CM II ^Μ'Ρ'Ρ-Ν-ΙΛΛΦ

-τΓ — σ> E E II n II II II

“ *O O O O O

V "2 z-v ^ ^·“ - Z~N · - ·

« "CT 05 *-<r—«tJ β O T3 -a -O

CT g Ό '—z s—' . "CT

•^χχ'οοοχίχχχχ rr ) — r,; n; •ct· tn —'K —' — cm« U- ( W W j V} . . WVV'W S»rZ· -W 's-τ'

SecccoSi'cMSoocMOco | Q CT) CO CM Q iniOCMQ-"» — f-t- ! v^ooinoo^zcninc-wcoinino) I______ II c • ·» ^ o o m o o c- m m cm m oo a ~ tn to m to in •Sä- - - - - 3 » * - * 2 o o min o o § m eo to cd in cm o. w. _- t— m c~in c~co "jtii - " ~~ ~ ~

v*_< 4) V

c aw »-» · •PM 1 —' ..... ' — —» I - ' " -- . — .11»· I .—.mmm»t

M

u **

S g I S S

• 5 CD

s ™ M .___—-- Λ - 65 - 8 91 69 /“s . “M * * ►j3 x »» . τ * S cm χ 9 'n n ~ 7 2 «? S 2

^ x ^ 7 ^ « T

*»* 2 ® £ - • tn % ac ^ ** ^

1 C s C o “ as as 7 - x E

«> E C ^ ^ ^ ^ C _* 2 λ T Ιϊ !; s - ®ί-,β,®'ϊβϊ ^ E ^ n E *Λ ^ 9 .N'e "c‘i a* x x ^ x ? ® ε ^ x S 9 ^ ε o « w C -e C S ui = «* C se* ® t ® S ® K ί . Ϊ5 ^ ® o ^ » a: ^ S 5 » c « s ^ s; ~ ^ E S c e £ s - £ / ~ -o « o - x* s ^ ^ • " x x 05 ^ a: «η·"ε^'Εσ>«" _ x °? ~ - M A ΰ « . a ® . . *? ^ v w „ „ O T5 r- N .H V_^ cm S 2 4. 4 a E « « 1 9 oo g 9 ^ x* o* x‘ z CM —K "TE-^RE^cmE — CO .-Γ —T w X — - OO II CO „ lO "-' '—' « iS ^ ν' 11 X Λ / x > <m χ t-

* -·Γ0 <Ο·τ!--)Χ,~ I Tl I N * OI

m tl, fv, ® li-, · — . ^ -« · — · CO — IT> “ O O: /C ri . . ._,* ® X ^ ^ ^ ~ —

COlOt^- N , ^ N I ΓΟ _.^rt ^N-3-N K

^ « rti I 1 x x Z 1 ^ x 1 x x 1 - x 00 TTen-r-oow( _·^ ‘ x oo ( cm -? CM . .^^CO^oCO^OOOJ^^lO^^ CM — — ~ CM ID II 9 co · «· co m —« CO ID — E E li n -5 σ> *” n n n n n -Ϊ— . -5 “o -5 “o “o ^ X X . _ . -ri ^ 9 . _ . . ..

. 00 — TJ „ Ό "O 0) C T3 . -O "O T3 Ti ; ·.; -ra w w ό το

1 — 00 X I x‘ X x’ X X* I x‘ X* X* X

·"- S ΙΛ — SCO — CM ^ CM — g — — ^CM — ·.· - W w OT w V-/ w c S-, w W w ^ 0 w w ^ * o x x * x c |

QtCtO.CVaQ-jXC^QCOOJQO^COCri wro ior-Iw^T x x w x w x f- w m r>~ *.. c ·— * » ^ o o o o o o • u r- co x cn3 x x

C X LO XX X X

5"-*^— _ _ _ —- CO -S> « ^ in o ©o oo oo x σ> x σ> x co to cc aw..* t- m to c^ to t-x ® «—* ·— —4 1—1 *-H «-H «-4 ^- ^ M Ά

... w il W

c tn «o f- oo o> o

---- B * CM CM cm CM CO

* · · »S

ύύ — 1U ------- -- l-1-1-»-1 - 66 - 89 1 69

1 I

..- O

g

N

*r* + /-n

£ re E

. 3 . —· n -(¾ — * — ^ X in as w

E -o' «1 S

3 ϊ « ϊ ® s » Π . * » " » .

-> as w ^

. n> ι-s, . /-s · J O

o-«C *? E -e £ ^ £ ^ ä -· g 1/5 - a - as ^ * *° ^ * 2 - » - II £ 7 oi ' tj· J£ 1-5 ^ S -cm 4 «7 9 a ® 3 . e ^ 06 . »«<£> .-° a.

>H * '' ^ E Jr* ^ *H — t =· ^ ς? ° «· ® c ^ e j* _, e e · e · 77 "" t*‘ £ ^ C- 77 · "; ? 3 co 9 2 co in £ O. CO 00 O· < CO w m · w ~ 1 °? n n S'® 77 o> r; . n ^’-s'-s JL oi - . S — ^ rv^ ^ ^ /—- · * • ΐ ΐ . ^Ε'η^Λτί 2 9-. -:73 ......

c E E E — EE— EE

Z Hrt* CM —' ·£ E CM CM E 00 — X V W t-S CNJ v-/ V V»/ 2 co e- ΐ ^ E* t» ·« E t- o

7 Λ tt z, 00 Q O CM " O CM

— rj aö ^ Tr g = CO ^ w • * * · M- - - Ti - - ^ v ^ /—K /—v · /—V. f—>.

v N N N ,^-vNPONKrONM^ ί E E E l NE »EE > E E *3 Λ ^ N 00 «Λ ^ h < CN3 CO < N lO * f-. · · iO S * 00 · · 00 * * eo . Φ ^ IT3 - ro — m — ro Ti — n ^ « n _ Λ ®

Il II II II II II Π II II II

“1 ~5 “O T “5 *0S "0 *·"5 Ό Ό* TO T3 tJ fl ^ ΐ ei ^ fl ΐ . . "O . . Ό E E* E ΕΕ'ΕΕ'ΕΕΕ .-s — CM — ^-r-O — r- O — CM — > s—' -v_' ^ ν' w C0 w w CO %-✓ v w o m m ,.c~ec2cooScMeccT> QCOCSCQCJOQlDCMQlcr-- co ^Trmr^^tno-^coO'»—'coincn » e » *4 ^ o o o o o o u. m T» cc co «o oo J ~ cc cd cc in cc in o ^ — — — *—1 « Z O O o o © o © © §.^ m oo in oo m cm en cm 0. i* _· r- m o- m t—co e— cd

1. jc M

i* i υ e aw l-l ·

JC

J*

Cd “ CM n ^ g * CO co ro co

1*1 _1,-------I

I; - 67 - 8 91 69 a * _______ (

N

· a ~ a' . ^ . ®? a 3 3 9 E E T r * ^ E . fc J, oo

-7 n - B . ~ . H

2^*® i 5 ~ i33 £ -° ^ “a - E* ~ a X a . "7 " as *? ®? «3 a

. II ^ ^ X ) “ f *j? I « Z

a^jn L ^ Jg Λ **? * r- s ,- r r e s ,- 57 « . 5 ^ » „. ·> IS * . .

^00® ·0 C> ίτ*^Χ <0 ^ nf e C E® a °? 5 S II -c 5 . . “ £ *" 3oi "» e 't tf> /-3 S - T3 Λ ^ x w a ^ a ^ a ^ ~ a o 60 £ Π J Oo ^ (Ο ΐ ) N ί

Sr ™ f^ai®?*®--^ I ^ n S ) cd ο ιλ oo —· -^ ro - .»ra ί ^ ^ i « α; o» . «n · ^> ^ E · ^ -o f ^ w . «· . II . II . tR - 2 - j; £ -’r^-~'ö^i'o^0 = ^" 2 C - _· 7 E I n ^ ϊ «' · ϊ ^ v ^ ^

Ew’^’oc ΟΟν_/_,*Γ>ί .a— CD _* TJ

• t-~ n — £2“*’H*Ss®-Cs?--Ta:'3 ^ w -e ^ ‘« S ιή cc ° ui f- T —

0C - -· C2 C .· O C CM W

. _T · · ^ CO . ’ ro · * _ ‘ ΙΛ « ro n · *— ro ^ κ v^n^“ , ^ ^ ^ t- ., > a ^ ~ a i * i « ^ ^ - ε - _ n - E\fCTr- nv cott — -p·

Il o li li II _- Il _- _- E C

"—, _" —» _<i- ·—. “- -i- CSJ

' ·*· . - - J _ J —i _· ^ _- N /—> ^-N V_/ * l' :···ι f 3 » ;. f 33 3 s ;sf i = ’ ... o ^ C ~~ ~ cc “‘-(T'Q^-.

··· ^ΟΙΛ^-^ — 00%. — o “ CO in ^ Λ 1 CC

Q oototsjo ~ -fQ C Q ro 03 Q 00^0-7 w^iooo ^mr~'— lovpwi/jirj'—^romi^ ! * . i • ·. c • h :’ £ o o o o w cc σ-. en c> e Ä to in o in λ o ^ —· — — « 3 * * ·

«200 O O

5 in ro io —« ö. w .* r— o t- o m 4-» · __ _ R ^ ^ ^ —

... IM 41 U

’ * c o.'-' ^ m

M

— « ö m o oo o

I Z CO CO ro CO CO

L K — _i- I -_I_ J_I

- 60 - 891 69 ! /»S β " /->

• . N

χ K

es» σ> <“s v-' to _ * ΕΤΓ ^ ^ cm Τ «·/-*· . m . *3 ^ ι «o ^ sa * κ C'J * · CN3 w * ~ /-^ w · 00 Ν—' 00 Ν * X 00 — .ΙΟ . Ο -1 . Ο «-5 C1 ·*· ί" 2C ί (6 ^ - |g - . Ε ~ί s-^ιοΠ · 2C . K R Ν _ 00 ^ η£>^£χ*^χ •a , ν ^ „ . '~/ e^ 3 ι/j _ ? K . ε " a ® t- ^ " « ^ ~ * „· S ^ « i * ^ Η ~ ® .σ»«· .2^·ο •r ε -- t-: Ξ - ·" κ ε - “? κ »- ~ . ^ “· ^S|0 « — . οθ — . — — M —· jii K — · eo “w K a Ϊ — — e --Eo^oo^oo « r; w fc o ^ ^ ^ ^ E ~ • § in *r E Ϊ ® S i t"

Qu ΙΓ5 «W1 *“ u ^ y—s . , ^ y—s «OJ3oe)(*»s^e>/-> S — -¾ ^ . ^ . γμ - m . 45 E ι <£ gKmx^xcoK® κ ^ L ~ ^ a ^ * " ; w ?

— K σ> o» n — c f~ * oo II

3 n a ^οο^^Ε0?00·^ — w et? «rörroo^ro^ic - rl . -r" . 00 . _ . ^ . "° v *** /->» · y*s y—S » ,*^s. *

» ^ N ^ro N N N CN3 k ^ N X

i , K * ^ X X X ^ X n X - ΙΛ'ΓΟ^-ΓΟσίΟΟΟΟ—‘CS»·3-— v-' σ> — · — tv- · · ·νο · — · —

E uo id vf in -o- . rj O

-* in co ^ - ι —1 r» — lt> i/·. o~ — II H II -5 II II II II ej> n ^ ^ ^ <—s ''—' · * /> * *0 » /> · · · e,-,^3T3 „TJ-a*O eTJTJt?» I w- fcf* I *r* **" ·"»“ I ►** »r- *** *r+ r^. ^ — f-. — i W , CO «— — U f\) fs) *Λ / 'W W CO *W *W N—.' CO ^ v-y- w w 2 ccrjoS'riOT'S^t^o» —

Dct^r^Qroic— Qrpor-rsj '-'β·ιησ>ν-'Γ»οιηι~^ΓθΐΛνήοό » c CO o c u rc es» to m o — te m to ie λ o - — — - « -»-.

«zOO o o oo

E ._ ICO» LO 00 LD CO

5. l. _* e- ίο r~ LO r-io 2^ j “ - -- - -

Uj t) u c I—I e je ""

M

td O ή N

g a£ ·» ^j· Tr e te __L---- - 69 - 891 69 1« «

Im K k a 3 ~ ~ - S ~ « ä •2 M S O . fC ™ a “ f o /-s V μ !£:«. ε . 5 . *> ΐί ; » -· * 'S· g -v s -s "E _; *rS^ >pfc*Ti

—* X * Ä II /-S ΐ «O /-N |A

_ί w ro V N n M *; ~ UD w 3 K* ^ a w af a 7 •e a <= σ> SN-p'9-wg^ . id f~; ^'-'feoo^'-'rr w __ in fo co K « n f τ’ t- ~ . . . «> a * . « JL .

^ S ,-t ^ _ m ~ ^ rt· ' x

n * K ” - 'l' ^ * - "O C

μ * * - se .-; a^SSasM·-·^ ut 'P* oo ·-< ® * h ~ ^ i *0N^S/-s^tA *Ors3^w * - 2E^cs>NO>!£-.t>^^^- » ^ t' ^ Ϊ N 11 E O) to II -2 w · in csj ·“? **o M-jinc

Di ^ 2 » d ^ ® - - z: ^ . . - m E-, N 00 II N 13 M « NTS^a- ) · Um Ϊ m ^ β 2m e "—* ‘ a -a o - n I in a ^ a — ^

Z ^ CM "® 00 03 -Ό ^ CM — °? "T

Γθ W' „ —« β II V lf> S-^ Il -w' m c- a H a* a -s m ) if ί n II ) ^ cd — _ ID « CM CC-;* ro ^ ._ _ « co **? cö »* cö ^ id -c . m . — id a ^ ^ . * * a ^ a _- cm N^a . *jro k n n T: a ~ a - Λ o^aNa^a-* — id ^ w ° T-oi^-ocmcM'' — CM —

Il *· f- *: r II II II II m II

-o “ ^ ^ -3-5-0 -o -O

N - t- σ> • · ^-V . lv/ ^ /-s · · · * v ··* e Ό Λ τ- «, Ό "C T) Tit • " O . § . Ό t3 . . . ...

.··· I a.ca c c 1 aa'a aaa ::: O - ^ , *ΟΖ.ΖΠ^η^± W w I * W ^ w W 0 W W- —' IE f- C 00 — O. 5 ID CD t" « OC CM C* ---- Q co -σ -? cc in q rro — Qr-r-c .:. w m m co c- c^mint-·— rirrin

C * . I

: ·· c

•H

: : : o. ° o o o c

‘ ‘ g cc c CM ID CM

« ~ <D CO ID ID ID

s s, - -- -- _, 3 * * . . p

«ZOO OO CO

3 .- ID 00 CD O CD o g-£-*t-in t- CD t-co fc. .* g — — — — — — • . . 1U II u • · c a.'-' • . ·Ρ* - -________________ X ~

M

... μ ·---*> ö co « in .3 * ^ ^ ^ « w___ -70- 89169 'ti ^ s E !

00 N

^ ' X * ® {

^ Ϊ M ® O

«7^3: · 1 X χ X N- ^ ^ ^ ^ «N>*« _* X <f I 7 ^ S ^ t^wi2 s ® I ί " S °? 23 r s T ,. ' . ,· ’ -: s ^ 5 .

“= ID ^ -3 ^ .¾ * ^ JL E S ^ . nco -►r ,_. m*-5 id

-o •'βϊν_·ϊ®ι-·ΝΪ Ti l> K

^ * ,£ »f* « Ow^ · -* c* ESC-Eco-.^cxiwtOO.v^-w «e - p ~ n ? x £ co ;£ « x r, ^ ~ w f- _ i ·-> co <£> D "o —1 tc - p 'w' Ms II ^ s*/ Oi H N^/ X ^ 2 II MH .ro to · m _. co

.-^ . T5 in O ”t3CO C^J

cö ^-fi0?'^'»»··-^·.^-''·'*

ti . X

- . o ‘ *r X *r -* X · "^ m »f- N n^/ C1 * X * ^ X v · — lO m p w 3- *r* w /-s r<j ® —m <""-t CD Ju S * S r s = £ S r jf = S ε 4 „ c r w . h.·. · ^ “ 00 1 iZ ^ i ^ * n ~ w -¾ X t- ex 03 * --1 1-3 'To X o- . - s-iw* ΐ r k c ·γε-::χΧγοζ,ο>'ν *253-”7"«”2 «-7

_. o °°· -τ --.οο. n II

3 o cocn^*.^ *~· . χ -; —- ^ * 09 * * £ ✓—*.

cc w ^ m β .c w E ^ td V N 5 X rt ~ ~ TO x‘ * x n x n x' ^ oesj ^o^-^c-^ — '-'po^oO'^'3· - ^ - f'-a?S'^t-^TrPt-^op ^- C-r^^^foP-rcsjO,, Poo

Il C cc II ^ Ti 10 00 TS· _ t- Il ^ - -* fr · ^ *—Γ*

<~N _· -*- y—s /—N, _- C /~N ^ y^-N “ /«-«S

*. T3 ro w β T3 c ^ 0) C BO e to "C «0 “O

"C ^ -ο *Ό T3 ' x C> X I x* x I x" x* x* I x‘ x x* x \J —«iti—« C* — — O *-* —« O — —« —

CC W> V' CC «ν' »ν' CO tv W ν' CO ν' ν' V V

S cr i roSooco5oOTS._2TicvDcs2 Q LDIOLDQ—'OQOir- — q oo ie o ir: ·>—· ro id f- · uo <r> ^ ^uioO'vroiftf-CT) t

O

*H

o o o o o in o o k. O 03 U5 —' 0003 f- —.

2 ~ o uo <c uo sous to ie "S 5, ~— — 3-· . - .

«zoo o o iom min g.w lf>0> ID O 003 tD 03 O- t· _ o- m c-o t-uj t~- m m *-> > k jt K ^ ~ —— — — —,— in II “ C Cl'-' M · » - - - - — --- — - - - - -

X

X

u rt) Ö O t— oo O) B i TJ> Tf

•H

m

L Ui 1-1-1---1- I

- 71 - 89169

N

- x ^ ? 'h' ^ - » - X m * Ό . o m " 00 ,-v s -h ^ e - T3 *J _ ^ -3 S 'n “ν' . ® X ^ϊ* I).

“? f s x x r <m x ^

c*5 t» o CM ® n-' O

1 yj ^ Ui ^ n «? © "O = o in II Cf -X '»f toin-, Λ* ~ ... )” X ^ . ig m y v j m » n Tf » r- ^ X G - m = 2 = -* CO ~ ® «o ~

w -f w X £5 II ^ M OT ΰ .E

* S ^ T s f X ® S j X

‘S * f "’ ^ = - S * S ~ E: 5 £ ro ro — ΞΓιο3· o ir ^ l fr * ^ h H: h .s · O k^ tt - ^ ^ v/ ' ° S.»/ - . ^ 1 - 1/5 ,_ o· · ^ O σ, οι <o ·°ιή

~ *> X· O ^. · Ό - · · * X -3 ^ X

°~ E N CO K Ϊ ^ „ N _ ,— >5 ° . "O = J "O E CO T3 = v_^ ~ 'n

^ ** X “? lO . */-^WXO ^ O' y-, X

z tj· X in in χ χ EO>~inXc-in;^oo }£ ^ CO T CO —· —, U5WCO—iTrjTfoö

cocsi^jl, W^X )- Λ II

— "in ’ J CC ifi _ 1 n J to ~ ‘ ~ τ .

/ in ^ in co - in in ^ ^ -o c x -· x io * x' a-- x -

* o-^-'co^^co/^mpo^ZccHX

N W N N . N *T* W N ^ w _ ^ CO ,_^ X OI X X ^ X 00 eeX'T eNJ ^

CO

— o.cit^ifNiii-n®-n'C- _· Il ^ Il II II II II ^ σ> ~ ~3 -0-3 -3-S —3 - '. ' 1 -e E -e -o ^ -ο o" -o’ E ^ E "m oc . y ..·«..

·-.-· ^ X x X X i X X X X ' X X

— _C\3 — w—*^*_ — .— l_I CM CM

---- .. LO 00 CM *.CMf-*ir--lO~—'οϋο·—'

pCDCOOQCOOJpO — p CM CO p O' CM

s—' CO LO CO '—' TT lO ^ lO C— LO in '—' TT oc

* ’ I

c

* * . * . * H

» * · * . * · • Cl o o O O O o

£ _ m CO CM 00 CO CO

(t ~ to lO O- LO CO LO

-£o— — — — — — _ 3 . . .

»ZOO oo oo •3 ίο — in in in —« ^ 7* c- co t^co r- cd : : : S Ji g - - - - - - v*-c ») u .·.·. C O.-' ... »— · * * H --- — —-- ----- ----- -

JK

M

"... if _ö O *-* CSi CO 'fl* g z in m m tr> in ·: I _ U - ------- - 72 - 89169

. . /"V

* M

^ ac λ

E - X

°ϊ ® » ·= s . 4 ^ a- n ^ *

*** ” M · · M

i » ,· * - £ » e M* oo “ . oo jft - E af N- ^ 'n' g «Xeo —c jr o af O· «-j - ^ TT ^ __ t"; tn ’"s

S ^ Il 'e 2 ^ m ® "O

ro 00 -, —I Ό T3 ~ ^ ~ . 3* «.1^1!..

«o » -o £ x ^ ^ -s x x I - i » v o» * . . - - iw n n „· n <r w ^ = -e w w O SE CM .TT CM - © 00 ~ τί - οό K «·? K w * "ί ® l > w to ·*»· .Z tt tn cd I .-CO - w ^ CM >—' I £ 'n 'n 2 ^ n °° S ^ o

! o ^X^XdtXncD ^ N N

f wcsj . Tf^cor^ -coaia;

SL

* « 7 Vco'wV'pOo'mTT

- ~=> X ^ 1 -» e tn - -5 -S

Oi *~~v . ^ x _ · x _ e *J-Cv_^-e . ro -α X Il ® tj ·β 5 * TT ~° ^ -h —5 ^ _ ^ X* oo X* · ;£ χ’ ^ ® X £ Z ^T^ir,-T^°?CMt'rn0 . cm —<

11 w . 'T fsj ^ Lf) CO

’“i m ' c^ w o ) 2C to oo cd^--—< cm < —, * n a "Crö^r^^^TT^^Tn^u-'. tr. o id t* X * * X X x‘

~T /-N · /*^· * ^ · ' ^ /-V /-V

CO N ^ N^fON^r-VDN N N

'^SSNXN'-'XN ^ X x x cm S. TT^ooo^-Tc-tncMoc CD · 00 · TT oo — - oo r» · to · cd e t^xrin

CM-TTlDTTCM—<ID —- — toll I! Il II II I! _· Π II II

“Ό Ό "O Ό ^ ~5 ~ Ό Ό> Ό 3 ^ 3 ·« *e w « « -ö

C0wwwwWww f QWWW

, Soot^oooScoto — *, f-* CO

! QTTOt^-^QVDOt^-QOOCnO

j v-/ ro io to s-»' co to to co to c— : c ·*_·· - * o o o o o o t. t~- O'- to cm c— cm

ί ~ CC tO CD tO CD IO

«2000 OO too

— .— CD TT CM CD O CD O

ct. it .' d cd in t— cd m e 4J · _.

t- JC M ^ ^ -.— -1-.

tu f) w c aw — · « w4 . -- ^ . Il II I . I I --- _

Jrf

M

U

O ö tn tO t- g 2 to to in

L

I *

L u__I__1_ί I

Λ - 73 · 891 69 • » * e "· Β . SC . S - s* ~

- S u - · C

„· n = S ai o x

~ l “ . ~ 1 - O CM

§ο.5ς? § °? ν' E<x? —•ex · ro a* r~

ro ^ o ·** n i X

Ti ... CJ> .

~ ΐ ” 3 « 3 ΐ « 2-5^3 ~ i S ’ I äS x "S”5 « ? 2 3 ^ ° * 15 S » 2 tr *« · tr _ cm w - '., — ~ Π n ^ « n ^ - 4 - » ^ * x* ^ ^ ^ s . jg •e -O w e -o ^ ιή ® e ^ ^r Ό* /-» - s x jj? E: ϊ a i 9 ® * “ a ξ.

5 ^ C Λ - s - * « - Ä e 2

* S en ^ g CO ui * CM «9 O II

O. g CD N ,-v “? CD . X ·~· · TP Cm ® ro ' I N po ‘ o ® ti · I ^ CO *7* fO ja I H C“- · ° o _ x·^» af * *^ 06 o ,.tn n O o . —* ® »o e e *r

►2 n II “ή 5" ,5 N — te u C *ö ® X

__ ·Τ“ — _ CDU-JCp-, ti _c w -o _

2 X, — - Il O o * Il · CO X C

*9 o Ρ,-Ρο^,Χ-οΧ-Χ^

2 cD^-r^^t-t^^-X^cME-cM

il — . _,· JL n — —-w — — •o II X ” ^ Ό II . cc ^ . o ^ ti en

-e \ w K x! -e . - μ ^ E ti g e- _T

•o oc _. . -o w o» . m cc t* CD ~ "E - ΪΓ — - oo _, . •e p». ~ · ro X uo ro X — N ^ CM N N — w_ • ^'—-;XN'^X»aX__ CD ^ ^ J3 M· '— o £ CJ} X o w 'T o 9 ^ ^ o · « ^ ^ ui “? «n ?; _.cr. “ ° -h g en CD CM P- M· ID '·?

ro E ro E 11 II II H II CD

— - ~ Ό -S “5 “O "O

' - /~.<p^n_pXu/-n,tX . - PN - - · ^ «. ro _ — -O.eeMOtS.OTStfle) Ό gw _ -O w _ _ -O ...

.·-.-. 'x-coxixcoxar'xxxx ·· wco.i/5·—— ro — cm — O — — cmcm W | . Nw CO 'w' . w S»' CO >*✓ W M-

2 CC CO I ro Σ cd < CD *— p£ CC 00 CT. CM

---- QOCMr-p-QOror~r^QCCor-CM

wrotiLnaiwcoticncjiwcocDtDaD

I *. i . .. ^ ::: ^ cd cd o m o en w CD CM t~~ CM C- — ^ ~ Dm cd en cd m O mm —m *—i ~

eo X

3 · · * * * * ®z en o m o o en § cc o eoo cd o> o. w _- r~ cd r~ cd t-in β U 1 ^ Ji M ^ ^ -M-.

. - <w D ^ e »-< e mm f —- Il — . ' —1-'— ~ 1 · ~ ~ I ' 1-^^—— 11 Bill

>L

• M I

a! h CO O) o g £ to to tO 1 w_I-- ---1-} - 7* - 89169 ac 'S'

en . X

2 «- °i ^ 'v - vo O u II H E Λ , “S 3- -5 .

— * XX

-M .W .

" i s .:- a ^ . --

Ξ · «^ « Ξ ~ S S

S^ w^K^s^jiai 5 a - 1 .

- ” = “ ϊ « ί , : V ~ ε ° · •o . · ΙΛ II -Ϊ ro X 10 »r

f- C 32 . co O ·ί* X

~ :. 4^2 * - = c s » « «· Ξ ^ ^ 5 » ~ ΐ ' “ = « - .“ . ~ c - ^ “ w c g ^ S 00 : δκ®ΐ-5-.“>* s « i ” .

t: ^ “} n o-

i ro ° ^ ^ ~ X

C. - r^-'ιησ> VO . ε N „ £ ^ °: tj· B - « » " =5 f ® « K· ~ 7 » “ « E ΐ t· S « ? ® ^ ς « - M- ^ ^ _ Sx_-a:w2a iftS ω I: ^ -

Z ή N ^ 2 · -* — *"? i VO X

^ ·— ·—' ΓΟ -JJ » -—' CO l -rf —> — O w '-D ® Φ I ν' 1C LO -i w w -r — — ' oo “ χ t- * co , t- ._ ' jc^-'-fr^^Birt·—. t-1 »ri/^o 1 1 . »O K · . VO lO ’ jx _; _: . x ^ . _; x ^ n.

|CJ N N X CO N N N H λ "Π N - —

^XNXCNJ'-'XXXXMS-'X n ^ N

I t- σ> *“ oo'—'t— σ>σ> — coXt—o ^ X τ X

tcXtcSii'HtDioinio't’^r- E °? m ® f1- —i ir. λ , n « li μ —t co oo — o· m oo

Il I! Il CC 11-3 —. 11 II II Il II n

Ό “ Ό _ “* . '. “5 O. ~ “5 Oi O

- * - ^ --> · 5 5 _· - — v_/ ...

«,-β-σ-em «, Ό -O -ö T3 Ό „ TJ t) Ό ·« o . ... 7.....-o . JQ . . .

j_ χχχχ'χχχχχ'χ-χχχ JW- — ' W W W CO W'w V N—' 'w/ CO Nw' ( v S_' >«✓ !Σ r^crcrcoISt— ooc— cooeEr-ococn —1 D trcrt'-ocQcpcco—-c-Qto—·οι— r— >—· ro to te t— —'(OO'vor—CT)'—'corrvoiook c

C. uo uo O VO

t (— CO 00 CM

ί ~ tr tn tr vo o · · . ·

® 2 VO VO VO O

3 .„ te cr? to o>

Ö· *- -* t— ΙΛ f- lO

« M _ _ i- j< B — —

VM tl U

e o.w r* m • M -- —M—-.β.

X

X

u t> & ca ro B ^ m to <o m l te_I_I_ - - - 75 - 89169

<-S

m m

X X

CM CM

. h* N

^-s . evj . csa N mJL mJ.

<-r n co n co t x x X oö “ U ® ^

·*· 4J t*- JS

0¾ · X —* X

^ ^ II CO ^ II 00

CO W^^IO

^ ^ x* ^ x I sc "* x " Λ : X 4, CO - O ^ CO - Ο a n ^ n © w " 0 w «

- ή m ^ X ^ co ^ X

'w' —'V CD . — CD . — CD ^ ^ ^ · W ^ ~ ^

^ . w 00 ^ _· CD ^ - CO

po^ ► 2- — · — -7 , «U ^ · . /—V ^ . - /—N ^ ' μ . ^ 'ί n: n w «- x " w ^ t “ cc · « J cc 4 ε s . cc ~ f? ° ^ ~ 2 ® « • S E v « " · "? w » - **? _ - ^-4 . ^ ^ ^ 1? £ q; 10 en ~ * - 1. „ * . e

s ^ * e * « ’ A J -° -° A

i * x £ a « * * ,* " = = ,,· Z ^-CM^-h f w w ^

! CD CD " CD CD

Ξ * <c - Tr cn3 I-. ~ rr co ,~r 00 o *— * *** ·

cnco^f-l -e' c^ ^ CM T3* ^ CM

CD ^ ^ rf - — es -f-* — — σ.

zZ —s - /-v ~ n n r-~ ~ N N t"

wX N X N w "j" “ W N ^ X 10 N

CO — ΤΤΙΛΟΟ — " J* E CO — Λ Λ coo

Il II II II ^ ^ Il ^5 -? H

"> ^ ^ ^ -e -o· X ^ t» « X ^ ^ -o -α -o* -σ-ο i ^ -ö ^ ä .0 ^ *a T - - - -Γ-- T 3-· - « - T - - £ - ! o — — CM — C* CM CJ vr; — O cm CM tfj — j Ό >-^ w S-»· W CO 'w' s»/· W ί CO w' W . 'w S'S’CDCC — 2 CM CD ' —· 2 CM CD < — ---- QCDOC~C--QCMOCDC~QCMOCDC-; .1. '^roincocrj^coTj-mcDwcoTriftoi * · » ‘ * Λ * · r« : : . e. o ir> o tn

ς _ CD CM CC CM

e _ CC ID CC ID

·£ o - - - - <c .

* i - -

C 2 ID O ID O

3 — CD O CD O

S- £ 7* f- CD t- CD

. — — — —

Um l| w • - e Cl^ 1— m . - . ·Ρ4---- - ___^_________ X----

M

Wi

S Ä TT ΙΛ ID

B * (O φ • L w ___L__I_I_____ ' 76 · 89169 m χ c\> ^ W E C·

CO

n τ'

CO = X

W ·“*

* * · + W

-'Ts'n'n · n jn ^XXX 'e x ui x ^ . o o eo .n.. o X f £ * E: i 'S' pC f χ

ro 7* H , co τ — tj »n X

^ '—- h '— *i LO | χ io N

•o CO ^ ^ J£ .ro o n iri ^ w rs» •’β . 73 N ^ 4J τ -β II _* ^ χ X · χ ·** cm . -3 n cc

* X — X * X o · T K

"CC " C f — t t - -P tt O 00 τ <C5 pv ,. χ ^ t u x IE · — X CD ~ N Jc X . “*-

j_. ro · · co * - K ^ cm N 'C

x w’CO f" v^co^,^ ro w X u; 4 co — co...· o c? — * pv n pv °? pv X — · o ui r . S -? S . S ^ ^ . T - IV _ .t— · —N · SC “ ,N f-~ || JO *3^0^“ CD 'ö) 03_ _- T -lv „ Ό ,,· X „ CO ·—' "C —

S “5 4 v 4 “? 4 - X 5 X* x C

Z <o « (C pv -v °9 cm X ^

«TXT » T E ^ CM w -- T

“3 X “O (E O

τ' CM g-* X X 1 J ^ i " : ; J 3 z 5 3 3 ” « ~ i X co x 05 Tuot-vpC ·** pC . t

corr',,'r~/~.corrc)Npv<r' κ T

w · ,· n v-/ · · χ nv—-χ k c: n c\j * α.ζ\3 o ^ to o ^ tr: ^

cr - Ä o to „ * ^ CC * G TT

• * C ΙΠ · f-" · I· *i — C" Occ-QCinco·— -tn *· oc

E - E n c E n n II o *o H I

- r; - T ..*ot o t> - o p <M i— 1—1— "3

Pv w Α · p * ^ · · pn - - U

cm -e * — co t t β -e -o — -r "° W CD ^ .-O'— V— . .03 1 ΙΟ X 00 X 1 ID CC X K ί ΧΧΧΧ 0 X ,' ιό —1 5 ή r n - £; — — cm— ί 2 ^ id ^ ο 2 ^ ^ αο o 2 co cc o. c QTlECOt^QTrv-t^tv-QlDOt·-!- v^eocöino·—'cocoinoiv-^coiiiiroi r

C

^ o cr o in o o *- cc r- ro g co S ~ c m ecu: cc lo -sS-- - - - - 3·* « » · * * z tn O m o ©m = .,< cc © cc o <005 o.u_*t-<c t- co r~ io ί- λ: B “ ~ — — — c aw >-l · - . -- ----- - ---- . ._ _ *

Jrf u

|> d N CO O

| z to <o 1C

Ci l te \-_I_ — - 77 - 891 69 ^ *

• . E E

χ'

W

s-/ 2 m X 2J « T? cc ΙΛ · N Tl <^*n m Cv * ΙΛ «3- * ^ . m to ^ ^

II M ' /^S — X

N " K »n N H

X ^ CM N X -> · tN) . - '-'"-S CM CO.

*£ g . u S * *: * « Λ n * * X CO « af S x - ^ ^ ^ - ® * w « £ ® * w » w 4 -*

~ .CO 05 ~ CM

X _ *" . x ^ X r^ _- oö - .-O COIO ~ ^ 'w' - .-N . w u o 1 E E co * t- 1? *c 1*

5 ^ C . - «? £ - X ΐ X

f ” ^ X co^w00 e. o — — _ . .TfOOlfi 1 <« ^ O 05 « W«lÖ» * «s · i ^ CSi X-k ^X-5-X . * . ^ cc E ( n cm 4- n ·ο ^ ό u S ^ ^ ^ ~ . X . *> z «*“>53 X ^«3*5* s CO ^ CO ΓΊ il CO w il n—' —· uo ^ —· w^. r- >_ co - co^csj * tv > - r- ^ © <* ^“*V “ /"N K. /*N · > w ττ tt cc oo^. w ro .^- r~ — se tt - af _r sd - —· /** . /*^ · se _ ^ se **** .

CD N K M(C^x _ CC N N y-v

'- xxX'-'NC^xCXiJ

«M CM — CO CD * in N - (O 1 — - m J - oo • f- m ie · · cc . t» o m .

ro — I, — coin^ro— -icco

Il — Il II ^ Il 10 Il II

-5 ' Ό “-5 -5 . “5 -5 ^ -o -o -n ts E O "o E τί o’ -o . -o 'XXX X X I X X* X x‘ O — - -^ — - O- CVJCM- * - - Wv w -w 'w' ^ 'w U; W w’ •W' 'w' S t— cc o> % o o S co cm σ< cm

QtDlDOQ-^COQlD — c~r- wrsmtr-'-^iDus'—'rSTiicoi

____ I

e

£. o ID o O

. . . W t— CM cc CC

J ~ <C ID cc CD

« ® “ ~

«2 O ID OO OO

_ cc o in cd m oo E.v._-c~«n c~us r~ m m lj i __ ^ n - ^ - - - — m i υ .·.*. e o.*-' ►-* »H _____ _ I _ I ..I .M- I —— I I I I —— : «*

• M

e! ö o n g £ r- f- r- ... e :L κ — (__I--„ - 7β - 89169

/—N

N

ac

CM

' ' t

^ H

« X

C ^ ^ ^ E. *.·=. 2 X 2G . 'J* Il N - x x ·~5 w * w -h -*r ^ - i s r «o .¾ - * *: s ί . . ? ; 2 e’ i ^ » S · * - af 2 ^ ~ ^ * " S 4 ac s s C s i ·* ^ = = «j e e e ® . - w 3 Ji, 3 © £ o »« 13“ ® oo n >-5 cm c^ . o ) a: n x°x . ^ S -e* s ® « i £ ^ ."^·Ϊγ0 <— - ,κη*π·β

Co-— rc'-'^T ^ * en ^ u S - - = οέ ~ S, ^ E ^ Il -

t ^ ^ O " cd ·« °? a °? ί · C

«c ^criD.—t-^a,*»- ^ —< . . r" “llllr- COT,'e« © H V? X ^ C* * . . ^: i ^ O „- . « . ^ ^ .

co-eTStn eofciE-e , t3 od /-^

2 w.·®. > .-. ( . Ό t- N

^aa - x X ‘ x ^ x n x - ui3· z = nti1"-

CC ’w' ^ s-/ w CO W iO s-/ CO s-/ · 1C

— w r» . cd / cm «e· ^ 'n H

" t-~t-0-~x - O ’ CT) * CO CO T· "" ° : ;

f ID -D CO . ID · -O

! . . —·. oo ' ” ,«». » - - ^ ^ ^ Jm ^ » i .γον^μΕΕγον^μ^,'ΟΟηλνΧ ι-a^x — ^ xnxn^xnx- I v ο?3· oo ocm-C ro3- n ο E — ^ ; j CC — lD CD 00 —. ίο lO OO CO — t- ti O?

Il H II σ> Il II II Π II II ^ to j “C O “n _ ~0> ”0 “O ~0> *"3 *"5 ( *v /S, * · · · Λ · » 10 e ·0 -o Ό n e Ό -¾ -Q -ö _ "ö T3 T3 w -e . ti nj i a a s x i x x x ac i x x x x I ~ — — CO ra w — ~4 esi Ό — CS3 — CS3 i i 00 w w w CO 'w' s»^· w CO w/ w \^/

licrr^OD — Sf-cDOOCoSoOCDtDOM Cl CC Of-CMQ cc o t- t- Q Tf -. to N

^ CD UOlftOOwcDCDCDOi —' M ^ Iti OO

i

C

a. o o o o o

£ UO ID 05 CD CM

et ~ CD CC CD CD ID

e ° - - - - - JS ZOO o o o oo 3·- CD ΌΟ CD CM CM ID 00

^^-‘ c-cn t— CD ID f* CD

l-Jig—— — — -1 —

Cfc. tl u c o.^

I— «D

• r* -- _ —*—w—— .*

M

U

4> ö co m e * *- r- ^ ‘»>4 m l k---- I-_ -_ ______1 _

II

4 - 79 - 89 1 69

N

s M * * k* τ x ^ 'Π τ *ϊΐ

" oo N . a . H

X* ·*< λ »o ac "“j · H o «n · τ' o> ” ^ W «·— -< ^ O"0.

m—^ i /-C cm 05 E - a: N-eH 3 n N m * . x n 33 eo 3S χ cm '—' ^K . g ti - co --n ςϊ w n Ϊ . H g oo ^ οό "ζ-Χ^ ^,Μχ . com ^ m ® ^ ^ co . ^ - _ ^m^—jocsjoo· ^ - ς> - ; ^ f i - Π s ϊ e E * ~ £ -j ^ ^ ac t: - = !£ « # = 3 li H ~ 5 E £ Z " x Z ~ 2 i ^ i3 E o * ΐ N c1 Ϊ H ^ -c - m ^ ^ -co— —« ^ n . · .

i E J * Il ^ o x ^ . E

* ^ f · » . · E t1 *t ® - m m K ^ . . - £ £ - 5 ^ co "^τ 1 J S s J 2 ϊ * (C cr < ® S f -3 . £ C £ . w e - -n o - 2 S " " *' c CM lO *-< 'w' ^ "O s-x Ό ^ —* oC ^ - cö II w Ν <£ ·°· e- —-

3Skco^ . *η X X <=: X

^ co X ™ u . «n ^ ro — — t- — <cw — oo -° 'X m ^ __J s 00 _· C . —- T “- — T —

! = - . fJ ® · X ,-C “* C « IC S *C

Ο^ΝΝΓΜα-_Μ.>-«<0-. _ —' W * - - Λ c O cr> r~> 10 · —' « .^ *> *> 2 ^ “ F ·*ί ι_ο · K — Ό· · ·ιη o ro u — — r? ^ ιλ 00 CJ ^ w ^ ^ II co ^ Il il ” cc oo ^ r- “; “o -~*o . ® ~ - *3 ^c· ^ ^~ ro m ^-- en

^ ^ ti ti ^ 'w S o* ti ^ E -c ~ E

.1 Tl “3 . . TS . . . . -O . ^ ~ . -o ! *^«-r* | t-r-^-H-*r- I *r- CC·^ :.. c7-«o«nn“On r * - ' : : ; j c~ / — —· co w >—- ^ co >-· | S ec t'· σ> 2 ·—* ro O n Σ Tric-^ ~ t* [

Qmm — Q--oc^c~Q<Mcc ~c:t^; ... wcomc—wro^mo^-'rocommoi

..." I

C

·. »^4 *-y » · * c» o o o o

- - - ^ —< to tO

£ co lt. tr -£ o —i — — —< _ s «roc oo oo ;.wmcr m oo moo J· h -* t' ift t- m c~ m β tl · ^ M Ά — — — — — — vu 4t w c aw »-( ·

Jt M U

tl Ö ID E— 00 B * n- r- r- »rt m L u -_L____|_L -___ - βο - 89169 * * i

«-“s ' · I

£ Β S 2/-s 9 2 - 9 E " X 3 n . w x . . x ^ 9 © £ ai e 9 ^ * £ · „ — w βο tj r; f'- » ^ #_*ii : ^ ) “s * — — -» a - e c n «? .54° ^ ~ cm ^ x κ· £ ^ ^ a 3 i Q* ä fi af 2 a Λ p i p -τ>* •-'ti £ 45 00 — i ~ © w f- o 9 ^“»^^©a'-'.w ! lit-* * * . ^ -¾ oo u ^ ε u? ί w ^ ^ 9 °?^X » . ^ ^ O λ .oi n; -y — «r: n -s ^ *r t π « g ~ ^ Ξ a ^ ί : -- S e <r, % f E w £

I X.vr> · ^ to cd . I Λ vcS

·- — ^ Il P O . X — — «_Γ — m *-> ^ ^ M-f li / ^ !E W Λ ^ '4®«^

l.a cc il ·*« w Oi w)H

t ? £ ’ s«s ^ ; 8 J „· ö i ί . r x 2 7 " ' E ; i . i ί » ΐ “ S-’S-s-T-a SS?*S"S"- s ® ·» «i * ΐ s· S g S af a' ® “ » X s z ^ χ ~ » x - 7 -S «s Ϊ S Γ ’ - = 5 ^±-ϊ»5χ4 .) ~ ·.·*_· -s » " ^ - g ~ ™ g « - * a -t

c T! S m 1Λ w · E

I «^ · EC P . w7 CO _« —► CC

'f- . <rr «. *t** ·** . ^ ^ *

;— N X , — _ C5 * <-n H — N N X

' w · *τ· «^ / N /-«· N T” w- «Λ *T* *5" _ ^ — 1 — 'w/ n «o — α,α.— ICO e — w ©*“_,_— •t**1' — © ©CC'-' ; ^ E^oo^Pg I - - © li 40 -- il il il — n © - ~ ^ ^ ^ ^ X ^ .

I ·''“N '-' ^ ^ * r“ '•w' y-N · · · /—V N 5 * /—V

I r _ *C OT Ό C _ r -Ö « T3 * w *^3 *t3 CT) I *C ' ö5 ^ 1 X X X X ® X X X · p x' x’ x" , I w **' " n ^ ^ C — CNi_0^_* — —

f * ·—- >- ' -W \ CO W w w 00 , S^,· S-O W

:2 L9uot-^t^ccr^Sf>j^-t^2 * \r. ~ o j Q^^c.r^Qco—ioCQmcNJtCQCNJ^ — r: I ^ ttlcco—'^Lotct— ·—' fomto s—/ ^ m cd j-1--1-1-- j .

t; o o © o i x 0 - Λ~ I j " C ir © vrj i 5. ~ “ ~ ~

« £ © c O O

Ξ m oo ie oo c. w _* c- m t— m t- jx B — — c o.'-' — · »^ . 1,1 I ' |'« — ™ ——., 1 I — . ·. >—“ ιβ“·^“

M

ij ö © o — cn> g i r- oo © © « L u _X-1-1----*- li . Θ1 - 89169 * /"V » 7 . 3 £ n-

= ”»? " tO . O

«λ *r · ^ ς* tn . · 7 9 » O K I Τ JL r~ -» Ε a 2 ~s 4> Λ τί *Τ CM ® • ^ ^ 2J w , "Ο *ϋ ^ _ — Μ • -β a ^ m t» s a a* Χ · CM U0 * ή 9 „ ^ cm χ ^o> ^ m w w w CM l£3 >C5 00 * II Tf tc ' & w 9 } II 'S ^ *» 2 ^ £ «O^^ffi .ooo ^ οό^Ν'^Χ-ο'^'0 - .'ν' « - = 31°¾ . £.^-3 = w a * to I II = . .2

w O N OO 0O ^ n _ < «τ« »τ' OO

«? £ tc « ^^A^^-==b 7 rr 9 ^ H o - H S ^ ^

1 to '“S .· Ό . 0> CO

_ ^ in 7 ^ - in .c^a^-CM-e v- n 7 "° n a . — t- oo - *j ^->--. .,-5CM/-v'-'-~· 32 ji . - a '^Nco^ä--'-

S “ -S -^TOtC^^-^CN

a — -cn·^ « O cn 9 e χ — I w a **" ^ 2 K ® “» 7 rr ° ^ m 7 CT> 7 O *r ^-- 2 . 7 2 42 ~ 7 * ** ® ^ § a » z e .°e 7 a E: a ^ ^ a *— O N π ·*ι ^ n-*' 'w-' ” >w/ i K k-r- 1’ -- N CO ~ O ^

O CO CO

oc £ ^ S οό . 05 =* 1/5 ·° ® C7 K imU i K N /-v *—* /—s N ^ ,·—·

r r J

OC ^ w © 00 00 I - I w V/ I

Γ2-,;ί£97^97Ρ^σ>9 rr )· , —: ro i; — <0 co ιλ vn p to - Λ ^ Il H II II 00 Π *. * . 1 ^ ^ ^ ^ ^ -3 /«“Ν "C «"“Ν /—s ^ · * /**>\ * · · e Ό “C B^r5*C*O^T»*« WT3 1 l ►*- ·γΗ M I M fcvrf NpT m * Cr λ wy CO W Sv/ S»_^ CO 'w' S-/ w w'

i ΣγΜ!Τ·—‘S'-S’OCoS^t-CMCO

XqqrjQtccM»-Qqt~-oqcD '— LO LO QD w* iO t*^ O* w m m 00 ... , c • ^ ^ 00 00 in o w r- cn to γό © n 5 ~ Ό ΙΛ to m to m ® -Hs 3 · ► . . · «zoo m o 00 £.w o ro too too t^ to t^in e 4J · _ _ _ _ w j< I ^ ^

IM I U

C aw ►* · • H ^- - - - - ^_________________ . .

jt * u o ö co tj· tn g z 00 00 00

• H C

l u: — I____1 _ - 82 - 89 1 69

N

X

f- E

ϊ A X

X g 1 I

CM 3-. _ ^ - S'? ° 2 ^ 'm f'» as « ~ h x ~ 3 y "W -s o CM “· / cm -e· o ,_; • ,· N ^ « CM o' <rj id 1-5 · « n 43-11 . 1° . 33 ίΕ^’-3'β «e . s «o O fsj w c 1 Tl · *0 —< CO 3- · 1 , Π » 11 - -1 N 1 ~ x 2 -> p "" ^ ^ p, w 3-:.^¾

ΓΜ — '-'CO ^•WajcM

-T3 - P Γ3 °? °? — / . ΓΟ ^ . P £’ a= « λ levoKui-

X X · ) O — 10 CM

7 — co P Λ, P o TT Il CD

« ^ P . 43 C· ^ 42 -> --5 -1 ID H O ““ 3! n ® /r <e . 1 ;r ro J . m · ^~. -r ~ g 2 O - 33J3 1 . -o = 77 ® 7 ^ p °? 1> = ® 3 rv n -r —' -1 ^ ~ ~4 · mm4 s-^ ^ 0¾ £ _ t- CC . Il Ό II q CO tl 11 3: D: Cr-O’t,^'^-5e^.D:'-310) CD cö - - g - . rt . 4/5 in

2 —< o - I . 2 Ό "O Ό -¾ "O

li ’ 1 —1 H ^ N 1 <r> . c ^ “o ^ P ^ '-'Χοχ^'Ζχχ - r ί ί ; S; - w - x ~ ~ -e 7; «ς· “ ^ κ ^ _ — = - 1 . . i = . 9 S « ° tt ; « - - - i p! c K ^ « % 1 ds 1 ; " § “ i I : 1 “ : : ro V r- -m cm n Z. Il ^ ^

G J_ M l X ° X ^ - S

^ 9 -C '- ' '. : r> n C Ti ^ ® -o ~ ~ 7 2 T? -0 £ . 1 ·° I X — — x X ~ I e ^ X C <= .cprnr^rfc11?-.1 « I i cc w w I p w / w l — I Σ — r: f- r : \ c o Z. — m ir. σ> — XTj-CDr-Ti-X-CGQlDOlDOt-·; 'xrm ccooM^-mco^commc^o 7 o en o in c e— ro m cm ϊ ~ I G m ; cd m x 0 — — — —·

Z ID ID CO

§ c σ> m σ> a. i~ _- r— lp t— m « Cl 1 _, 1. J< — — - ~ K c u C cl'-'

L-i C

l b: 1____1-1- ψ4 . --- — . I .1 - — —ilii

JC

X

Wi _

tl e CD t~- CO

g Z CD CO CO

• H C

Λ - 83 - 891 69

E

_* * *» Η X ^ X χ — .S σ> -»τ s^/ JU · _ οο 10 αο ® · — - g . ui 2 “ ΐ ^ £ ι » ^ « 3 f. «? ^ ·β· - = π: w tn . 3- cnj *r σ> . X — οο w ~ **» ^ χ c ® *i g ^ .tse ^ ~ s CN3 οο "* ρ « <ί 2 « . » * Λ· Ε ~ ^ . ΐ A s ε χ ,-: •Ο /—ν ^ /-s e c*J <ο ^ ® 03 · β ^ ♦ s^> \»/ * ^ ^ · ϊ ? ν ϊ eo η ϊ X · X X ^ - —< ^ X γν3 co X ^ co ^ ro w — » w «? — E ' oö ^5-

Tf ' K CO — w - . N ΙΟ 3; N

T ^ JQ II ^^io’n' ϊ ή ifi II 00 £ co 9 .-, CO to X * to -3 10 ^ uö 00 c? w ^ ^ c. ~ . ~ E U3 X N N * i e E ~ E ro — X - — • 95 X »T e II «-p* 1 N N I -<f

= 3* S = W . ^ N 1 N C S

-—'"OO'-'W — **'·® . ro H II CD B

X- ^ £. n _ g — Jr ^ t- uo i£ no *** to · _ X ' ^ . .no

2 03 ^ ~ C^ T ~ »T3-0 -B

o· '00 ( m ^ - ν' ii - uo ; c- ~ x x x ^ x x-cx^^^i-r ε co ~ - x - E c _ . E ro C' -° o- : ^.- . oc. ^ _· . ^ . „· - - - o6 - — X _- — ~ y— — «lift . * —a N .—. — N — K CO . . . N *-‘ w ~ A~ _ — N *τ· Ν'—' ^ _ in.B'-' CCi-ii:" - . ° — _ a- 05 ,- ro —. · —· t— ^ ^ r ^ - 2 « δ*----?-' ^ -L σ> I II II II JO n no ^ c - 03 CD O ^ CS3 —Γ - - .... oj co ιό · Γ~ . e — y—s .—. - - - - y—N 2 -Ε-Οβ,Ό-βΌΌ'* Ό . . ό *c . . ·σ r t "® . o 'XX'x*'XXXXlcc=Xe ox — — a^ — O ie n w — * . : . 1C w s_y w CO w w ^ w W V_-

’'' Scoro— Sror-sccrS·'? — tccoo^I

q C'^Dcg^-x ^r-*t^QO>«:o^c·^ w TfLOCO^r^mirC) 'w' c^3 r? id lo

' C

" %. o io e no- o o . ·.'. a no c^3 it. rx no co '. ' ® ~ Ό tr co no co uo s I ! - - -- -- - 3 : · - - 9 Z ; to o mo oo ιησ> vd cx> h- uo «5 4J ' _„ __ _ * M g ~ — — — —

Ui C U

c »— e λ ~ — — ΐ - « -. g £ I I §

o> O

«00 oo t u_I_I____ ____________ - 8* - 89169

• /-N

• ^ «

x-s N

E * S X

"e **? - cm * -p x E ·« 1? w 9“ CO - 7 KK e * -r ^.—-0 9oö X -S X - 00 ^ 00 CM “* — w ® «? 73 - N ^ «n _· ς · ϊ h ^ . r? ί - ; e 2 ϊ 7 A £

Eio'-' °? ^ ( . oo _T

-ui® 2 * A - **? * W " ao - r~ “ ^ ---3 X ►-> oo ! ^ «? X ,-C --«?« w -o r ’ ΓΟΟΟΜ 73 -J -f . ® 11 o* " ^ ~ C e - -e r® ^ -v vo .

1 - co m · S o, o- ^ ~ -

w _· Il ·» , · o o> k m X

*- *^-5 ^ ® · · s vc _ ? Λ ^ . CT uo w

ε. t “ -e E r - o CC

f - _- r . a: 'n ® τ' ^ “ tr _ x a: od k . " g *“ cc ** * " =' S ^ ® 9 £ - * | 2 " ^ i e N - g f - = z ~ w - ^ ^ ΐ N - ^ - l <o _T 00 ^ < · -o ·-, ^ m ^ so ; e 9 l* Λ K ^ - CO ; ee !· S « X r ~ 9 - x ^ 9 «? i - r _- - oo “ _· . S - ~ . « . “ , I CM C Κ^Γθ Ν^(~-·~'θθΝ^~ K ' K m ^ 12 ^ t^r^Tco·-! j -l/Tu?co!£E~^cMh^Sr:, I . * ~s . o o o ,—. · ~ a- p ,·—*s e w '*- .—s. * w *** t- * /—v efc^w © “e _ — -e »O-rr-ctr ! -e . „ . -e . w _ -¾ ( M W ~ V. M w i 7 - £ w » W , .«i o ie o 1 c^i/>t~co— ! ¢2 — vocsjpiryot^-csjQTror-c-: wtt moo^coTfiocnN-'roifDinac ! i. o o m o c !

: '~ m CO' 1C ΓΜ 1C

e ~ ie m ie m id _ 3 - - 5 z o o oo om

" — 1C 0> ID O ID O

~ ^ 7* c~ m r~ in t~- m ujig— — — — —_ U> II » C O.w *- * - . hi

t) Ö —« CM CO

6 * σ> en en

•W

c li L u: ^ I_ 1 --1 - es - 89169 . * · /s

• ‘ _ ^ N

U 42 42 x χ X X 0 - p .- “? Λ ~ /“-> /—s .-1 <n s O tfi ift ·* E « *fN-« - n 3=

χ' N X ^ P Ό = o CD

n Ϊ N _,* m — -o* il 2 - ~ f ‘«'em ·« .·=>

σ> oo S - χ" —j * o jr _* X

^ n ® - a » « - £ .

X £ ^ ® ^ ™ w^ooX

e i £ - ° 5 » £ 2 ' ; ^ “ - "5 » ” * ” ? χ ” " . f* i- o ^ 05 ^ - ( _ * . /-^ · S -e - . e P CO O ^ 'n ^ E ^ ? Il Ό m II e tfi O) X X . .

~' - “ X . *> . P * m x -S

m — ® — w n ό ® U n £ v λ

: i » X 5 2 “ s ? Ϊ 9 ^ 4 s S

*j P O — · ^ CO —* CO -j X -O m — ·* ® m w ® ^ ) Il c -q ) ^ i o - n c ’ — ^ >r >co * » 'g ® E - ti ή „· j ” _ P oo • ^ - - 1/5 ’“S v_/ 1/5 IX Χ—--Γ — X II /-C -C x . p m . -4 CO-J-tT fOTt-jinK.-e^-roTT·»—.« «ς- , _/ VV *£ Κ ·Ν

cd w χ ^·ο-οχο χΧ. 1 X

Z P P oa P^^Nt^o-rO - - ro n in ^ co , .-'ll./.'-'OOC'P'inw > m < X - 1/5 to II ε II — < p ^ - p . - - *^ a . -o p <r. . tr o? m w co -» <p t- .roX .cc

tr. . <c . c -e ^ es: ο I

χ" X_^p^X ^ t-~ —' *^j

cnj^T n — co'tsUo^sicX'iiXropX κ | w 42 X 42 w X X ' Γ4 X cn3 i n - I

oo X ro — NpjJoO’i^'iO^ * ) ''ττΙ P P i/i - P ^ E 1/2 P g OÖ P P r, c ^ · —<<—ι^ΐΛ'^ΓΌ. . — 11 li 11 H ^ 11 ^ I! ro tn |* ^"0^7 /-N · _· _- /-s · *w^ · __· /N, v r-"· Λν

r Ό Ό <-i «, Ό T> φ OJ TJ β) β ff! « TO

.·. : ό . . . y . § . ·β . . . -σ *“ “ — ! r-, ““ \Si “ —n ^ ·* "^"i o, *** χ —- i — — r: — i >— — . — i—'c^pjcsji—^rcc·; — ; ; C' ^ C'. _ ( CC· ^ W j CC W —· w S t- σ> c 2 t- m ir. 2 o o: — 2 oo t- cr.

Qor--t^-Qinm--Qcj5t'r^Qa5a5 — 'tninci'—-coint— '—'roinoo^CMfnt-

. * . I

c

o. oo oo tn o O

;; - g ooj jtCCN: o no to • - cc ~ ·— m o o vc m id -So-- - - - - •zoo o tn o in oo g.- o σ> teo VD o too o- v. _* f- m t— m t- m t— id • 4J ' *- J* R —i—. —' ^ -4 U-I iJ v> ... e CL^ “. *.' ** m

Jt

•M

41 ö ^ tn ID f- E Ä O 05 05 05 » ' · - ·Ρ* ;l U I_I----- - — - - 66 - 89 1 69 m **·«,

E

• N

X X

CN> CM

• s:

‘ „ " * N

w ^ ^ /-v - ac r-s N N /-v • N "Τ' * »Τ' N ^ ΐ S 5 r Ϊ ® ” οό X οό 2 „· * ««N ~ 45 * £ s ^ x oo _: x . n> ~

cm OO ^ 'f N -: X . r iri I

<=>·**" co X m " X ^ M « Ä - « -· -f . o M χ· ^ X Λ ®

_ 3-, '“S J- * f- "“S -1* N ·** _i ^ II

'CM CM II .CM CM — S . ” ^ 10 -¾ S ^ ΓΟ T3 ! CT, *CT — -° Τ3 r- in X . - I χ °? - ™ - °? 1 x ^ I^roloc = _xoo ^cow_ - i w . c * w x - . . . «ο w i i · ✓—*«, r«s ro /“-, 5“ rv X v ,

I U CT5 N ry N 5 w ^ *2 ^ N ’ O

it. · x ιο X ^ m χ en x *n · ^

Cnj ·*- ro · ·*· Γ— h—

Ϊ cm ie 'P 2; ι/s ^ O

w —, · te · rD

e X - i2 - rr . « C t- ^ ! " EV'pii ^ . 9 11 ^ 7 e ~ fc -3 C -3 -3 °9 .«

Oi X . χ . s ϊ „· . ~ . « X .

CM -ö T2 CO -C — Ό N T3 II —H X

S w — ---.-. 3-.-5^- C^x“wX CM X w X °?X CT) — Z «?_eo„ ^ <m ^ - m - -o ^ C'J'w'lT)'—' CO w LO ^ Il . J , 1.0)0 cc j t-~ — X ' cc I ' CD ‘ — *t^<— .CC — cc ^cö ^r- 'm' cö ^ r- "β p; w in ^." 1 lTt cT . h- v> = I ►£ . ^ . o

CO — x Tir-T^Nr^C^'ii^TiE

Ees» ^cnjX x-— cr> c\j — r- ©o—Tow 00 * 00 · ^* 05 — r? CO · — ·—- p- cc · · :— - ie. r- E cr.ri I CM — O-ieoCiCM — lemoD — —< ie1? , Il II II H , I! Il II II II x || 00 “s Ό X Ό ro · "7 "O “σ *T5 -o ^ no -o -o ^ -e ^ -o *» no . ... .... T> .

^CC-3;KCw-t3CwC I wC! 2 cc r- cc o I 2 ie e- e. — S oococt r: OTTCt'-f-XlCOt^f-Q'T — t~- co 'ceieieCT wcoieieCT^coT»cnr— \_____

[ I

I '-

; T O O X O O

1 ^ x x ro r- ro

! i Ä x XX XX

5 I - - - - _ 3 * _ -* - * T co cm oo

E .„ CC O CC CT, CD CT

a.u_*p-cc t~m t-- ie « t 1 _ w Jt g — — — —

IM tl U

e e*'-'

H- B

. «rt 1 1 —- 1 — I - — I — - 1 I I ——a^— fc rt CO CD g g S. <y> ai 2 β l b:_L1-1- *

II

- 87 - 891 69

/"S

N

x ' CO .

S 'm O

• m X E

* 'JJ * 5< o * * CO X 00 t» C ►*" - ^ -e oi * w * ja . “2 . n ^ s t- ‘

E - ~ i, £ . -C- X

S £ · * *» si 5 f 5 Ϊ 7 s 2 » 5 . * 20^. ,: · - - Ϊ 5 2 3 S “ « ä

•o l ^ · 00®*° ..00 -sOX

^ ^ ~ 4 x - S ^ «· “> S

X. n in Po . ·*·.· * —i Ό X.· n * -o — -o tn /s 1Λ *β ΙΛ M tO vv P'-' - ^ X *-9 m .

w fc m X u> «* . /-s « X - X ~ *-· .x © — —· X N k ^ — oj ,2 2- yj W' Il 5J S W' ΓΟ 'm-' mm ϊ. 1 f- -T ^ ^ 00 ^ ^ ^ ^ • oi- - 2 “ « - ® - "^^x U S-· * ·» ^ 8 s - X - 4 _ , CO — /-v " T3 tr, r~ N rOK-“i

2 (-. w 0} T3 . ^ t- X '- , T= V

owx 00 . . X - ui t- ~ X - " Z o®* ^ X X ~ ~ ^ *? £ ® ^ CO LO w CO N w* C · CO 'w' C'O · ) TT ^ w (O · N 11 ^ w * < o *o — σ> se «r τ *σ>—’«_'

O ld c iD - , *** O* ^ o T

®.<£? P5 . . f— CO O W fC · lf> 1}· CC v-' · -n 1 ex" • ._* __* CO · * w-

X . X _ _ ^ CO _ — r^-PO

C^/-^Nr^CX^C^MfÖ»iX Co'icr^O

Ο"~1Χ“-Γ0®*ΕτΤ f «h ' o O ^ - - X - - ® - E n N - • OJinmccfOpTTj·— ronc7 ro — tj· -~-

i II II II II II II X p- X |> 1' E

“3 “3 ·”5 -3 “3 *0> ' f, "3 “3 .

• · Cn 2 . . ^ "O -C Ό* 0 0 0^-0^^ Ί3 -C — : ·.: -s ...»..!£ «- " * i ►— m- m- mm» ·—· | »M- M m- *Jn *«, ,»« A t*< ·» K *— **- fw«· — CNJ-^^r^—*C\3,_—< — tr ' N-. 'm' ^ ’w' •w' 'w' CO v^/ W' f i ,—. W 'w „ j

SvooDO^-roo^S-^-roin^Tro 1 QOP^ t^Q-.OJOpCOt^OQOC 'crO ' LO ΙΟ σ> w Tf ΙΟ Γ» 'w' to KD 00 *w' CO to vc ... , +-> · · »

- - =L O O C O O

C _ to O te to C5 x lc to to te tr -E o — — _ _ _ <t -r~ _ 3 . .

£z©o o o o o 5 -< co ro co σ> m n , i r‘ © p-io p-co I- JC R — — — — — ^ tl ϋ

* ' C CLW

nm m JX -

g I O g o S

• M

tt> : L te__\._l _J_1_ - ae - 89169

N

χ ^ 9 « χ ? - S £ . υ ^ χ 5 ΐ ^"5 μ * a 5 ^· χ ^ “· χ 9 η ^

~ η ν · 2 «*» t- mS

η Π · TJ — — ,ν CM

“3 1-5 - II 9Γ * II II οό a: = ,* g · « Ϊ . «? x -Ce -5Ϊ s" 2 7 x 9 0 O» af 35 ^ ^ ^ C 4 ΰ ? 9 (O —' - ro w. ,«~V-yn ^ ro1"-' n iä ^ 5. 9-0 9 •o . — 00 B Γ- · x « . m -o ^ C* l£> fO ^ „ ·* osE) ^ — — * χ - - · λ"® “O r» N ' n cm X X 9 E 9 = ;£ X ^ 1 n cm vc X.9 m 9 9 oo o j '—' •s N T3 |2 X f~ ΙΛ ^ ro l_ i — C' Γ 7 <-^ Il . .00 9 ^ .n — = n J2 4 — « —

.* ; ro , X Il — χ m X ^>mX*N

t| ^ ^ ^ £ 9 ro · i ^ 9 I

a ! - 9 lo . go ^ .00 = 9 « sv”. = " A 5 i * * ! ’ S i CO <n -= — — *-T ^ ^ "C Π ^ w w *9 >e "ö “ ^ to t ^ -3 cse ιλ . . “ ^ ή · . ·

Z 9m- 9 X X E'X^^ X-tsX

roww roro— E—<· - — . — cc x w w ^ ^ ^ ^ X ^ • σι c * r- r- xm-Puro — o

'f VT 9} ‘-^ 1/5 — · LO — (J

:=_;_: Λ = ... 9 ^ x‘ = 9 Ιγο'ν'ν s ιο — ^ X ro — 5§ ro ^ — f~ — i ^-' X X X ‘—' N N _ , N · ν—' Ν n

|ct>cmcm-?ldXX>-/ « X ^ r- = * X

— ^ ^ 9 ro oo cm r- ro 9 o 9 lc I ro — ii;-iON^®(o^,'(Ont' «o

! I; i! :: 1’ Il t~- Il E . Il _· n I

j -0-0-: “0-5 -o. /-ϊ “o “** “o j ... . - - . x ^ E . C .

I _· _- =- - _- - _- ~ f _- 9 ,- i I - — — — i — O0 — — — — ^ o CO ro ^ ro j i ir,-'^wi0>-wwcwi^w'''‘w - lc r» -c f. ir. lo ir. „ oo < lc co ιτ. ·ο· ^999123091.00900^^09-- w-ro ιΛ w rr LO r- ^— LO town LO LO o 1 i

‘ * · I

c. ~ o O LT

^ -<T m r- ro I

® ~ : ό <x> LO m S o ! - - - - *c ^ _ D * · J5 z 00 00 mo

2 LO O LO O LOCO

e->-_‘r-io t— m r~LO

% L·) · i· j< B — — «ο ti 0 c — *

Jt

M

h jn «o r- 00 S S o o o o E * — — — — . u: __L-»-1 .. ----— i li - B9 - 89169 m • 1 1

ν' "m 1r 1J

• s ^ Ϊ 5 = _ C- tn 03 ^ “? 12

E ^ ~ 42 S

. K 1 3C »H u"5 X n1 Γ5 12 -3 =? o · ^ ώ coX^ji t- hr 'n' . Il ^ooxgoo^-u . o ® 1 ^ ^ » i f . ΐ Ϊ ' 1 ' S s a S · ' ^ 12 _ χ t- - h-. σ> cm o ~, }i? 41 _ί ® 1β © CM H “? ^ UO w ^ ΰ X o x 1 ^ ? ^ X X — _ .<0 i-r _ ^ - CM Π w CD . ^ 1 1? < . ^ » ^ ^ ^ e jH X o ^ x “3 -o 000 to·1·. o w X cm ^ XCM 00 _· O —v W.010· -rf T· 0’ ~ tn - tn w m t-·. ir, 3.

cm <£> cc. . <° co · ί . cm —: - w X - . T- 0111 w -1· l ° 'n “n C £ 1 ™ ” χ ~ ^ E £ ~ •Ϊ tn X X „ £ ^ · 5 J? t· χ w £j

i I . ® ^ « S £ ^ £ S S

X ^ v 10 n ,| .. 02 X —' ~; χ w 1 ' w II II Λ I o II f i o, 9

« S . . ί T .· ΐ V - ^ O 7 X J

CO "Ό Ό EC W1 1T3 1-r« 1t3 . ) 1E .C

S- . o ^ O ^ CN3

„ © X X «J - X1 Γ; 1; X - _: X X

2 _ ro — X ^ ^ ^· X ©©_ ^'w/m^HCMw11 χ w ·— . tn ^ r- ^ ^ ^ co ^ n cc v E C' > cd * a> CO <D iv J 2 ( fn

KioocO - m to ro · -° · f- m to m X tr.

WXX^NX N X N X N 'w' N X

tntoochrXr-^X^o^cr^ — ^r- C3tT> — CD^ym^OC -Γ —» t— 11 ^ CO Tf —

It n Η II II ^ I: H ^ 11 II II J

-? -5 ^ "5 I -¾ 1“5 1 te • · /1s · · w · I 1 · /1% · · T? 1T3 r -^J 1o X> φ X> T φ-t?^ . \ ; .. tj t? .

1^ co 1— O — co — —< O —-1 co — e; I C — — W V Ον V •w- N1 ' S-.' rJZ W Nw· >w' ί ifZ \—' V--- 'V.tDroSt-comr-.S o oc cc — Σ cr -e- QO^OQOf^rrr-Qhr—-oc ocq — o wuor~wmmt~o;M^fomtnaD'-'vnr~

- - - I

C

o. e tn 00 m o

^ UT t~- te C: m CM

x ~ id tn· te tr te in •S S. - - - - - - _ 3 - ^ 2 o o o o tn 00 = .rt te — CM ID —1 tO_rt °-v·-' f— te m e- te t^ te « 1> _ _ kjiR - -- --

Urt tl υ ·'.1- e o.'-' h- « ' « M . -- - ----

- JC

ί O 2 s s ... »m . . «

L u__ί_L---I_I_I

- 90 - 891 69 i x » 5 = o

a g i ΐ ^-®V=-V

S „ »· = - a w . 4^1.-5 ~xs2 = I ^ c ’ ; f : d nwji- (0-0¾¾ £c--5§_*i· ~ ^ ^ 7 _· - ^ ΰ 9 « ,i ^ ^ to · - E "IS — t~ - ._* .

*® ^ - -. · 5 s . = -» ^ “4 - . CD -o TT 43 ^ ^ ΰ ΐ ^- -r ^ ^ E ^ ^ ^ "" o ® X ® ^ w - - (Λλν·ο;^«£μ = e S ^ ~^^7:Η£-.*.Γ? ΰ Cc®= ®scs^o^k1?S« ·* co ^ .— «moOT^ccHEaSt^*1’^' * 'T to ~ ^ - II o t- Y <2 * * to τ co <—·— tirc^-rooto'*-·1"

^ ,5S " 4 ^ 4 4 ° 4 S

“ = C f ^ ö ._* · x a: EE . x z - = - «- -? - C . g ” 1 £ cm « °? II CM ^ t— rOv-z^/^OOlO^-^wH*'-' C- ^ ~ " . w ® £ ® .^t-Ssx" CO — ·-; * c —' ro σ> — —2 -e « - . m ^ ^ ^ ^ ® 7 ^ - . i

_. «* 7 t ^ w ^ _- ® o £ -r I

~ Y ~ = ϊο ν' s ti S ^ Y 1Ϊ 7 ^ ^ = ! — t -— -o· oo ^--10 - Otoo^4—- 4 N ^ 1C ί CT> *~T *~T ci °- ci? ro U-. £ ^ co — ‘I n ro Tr ® ro — ®r

Il . OC Il CO I1 II Il ·*·' O | "S E —' “5 * "2-5 -5 a ·*" - 0) "O . . y c^.

/"N · ^ /—N _* U- ** /—s - „ -—N · %-✓ -“*· φ Ό β «e e *X3 -O ~ W r T3 _ (T> 7-to--7-.-. . . 7 . ° - j "T C^. ^ ^ | ^ “ t· »— It- I · *— r* ·γ:*“ο !Γ. — ± — ir> — i w *“ in ^ ·“ I V — C^3 ·" *— ^^ — ·—I w C\J i

CC W . N- C0 W W \»r' V»--' w C7 Nw · ( J

*E rt < c. r-i !Σ to t-~ c -'C Y- r- o Σ cj c: c: QOOOCMt-QLO — C'-tDQOOQtDlOr'; ^1010000^00^10(-----10(-^(01000 c

•H

«o o c ίο to u to σ> cr o- o ^ — to to to to to S I ^ - <0 z O to oo oo E to t— r~ ro t" co Q. L. _- (— to o~to c- to «J ‘ — — — — _ — ^ M 8 in i) u c c.'-' t— c • #M ___ _ · .....—» I -— - - — m II. I· —ii

JK

JC

►• CO -M· to to ·) β -X —I ·—I —· E * — — — — •pj li &: _ I-. ........— I---—- - 91 · 89169 »

/»-N

N

x * .

0 /“N O

2 M f

Jo X N

"o 1 00 ιο . "

W N

ίο X K

00 o — ei ιλ w

Il ^ * 4 ^ "" 'n . t" •O X Ό - 2 * τ £ x x I! — «? “3 w m (£) —

·- -TD «? H

u in -3

X

o; _ - ta £ ^ 'ίϊ T c E x t-- o — ryi ri ιή w H 2 ~

Έ. ^ "5 N

^ t- E

2 -o . ^ — σο

“ = JS II

- -o ! w oc I ? | ί rrr · * ; Λ n = 2 - 00 w T C ro en V" ® * '

CO

y-s w «-· -y-s -- J· in “ 05 r oj - - «r1 — ! i? T - « ! i2 / V-' w

«£Oint-Q — CSJ

s—' Tf VC CO

, . t t k. r- | = - s ° “ *C 2 O ΙΠ % - ^ °

Q. k- „* t— VD

« 4J » _

^ R

lw I v e ·

- , . . «Pri--- Il ...I

- * M

M

k- r- g m - •h ‘... L U2 -- |-1 -92 - 891 69

Koe 7 (lähtöaineen valmistus) ! p-metoksibentsyyli 7 -(2-(5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-(2,2,2-tr ifluorietyyli)oksi-iminoasetamido)-3-( (Z)- 3-kloori-1-propen-l-yyii)-3-kefeemi-4-karboksylaatti £jl N-t-C-CONH—τ-ΐ'0'! f® fy chJ's^ k 0CH^ WO0®·

Seos, joka koostui dimetyyliformamidista (0,247 ml) ja tetra-hydrofuraanista (3 ml) jäähdytettiin -10°C:een ja siihen lisättiin fosforioksikloridia (0,297 ml), jonka jälkeen sekoitettiin 40 minuutin ajan jäissä jäähdyttäen. Saatuun liuokseen lisättiin tetrahydrofuraaniliuos (4 ml), joka sisälsi 2-(5-trityyli-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli) — (Z)—2—(2,2,2-tr ifluorietyyli)-oksi-iminoetikkahappoa (1,36 g), minkä jälkeen sekoitusta jatkettiin yhden tunnin ajan samassa lämpötilassa. Saatu reaktio-liuos lisättiin seokseen, joka koostui p-metoksibentsyyli 7 -amino-3-((Z)-3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefem-4-karboksylaat-tihydrokloridistä (1,145 g), N-(trimetyylisilyyli)asetamidista (2,09 g) ja etyyliasetaatista (10 ml), samalla jäähdyttäen -20°C:een, jonka jälkeen lämpötilaa nostettiin 0°C:een ja sekoitettiin yhden tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin etyyliasetaattia, jonka jälkeen liuos pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin tislattiin pois ja jäännös puhdistettiin silikageeli kolonnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (1,43 g).

li - 93 - 891 69

Esimerkki 118 7^-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(z . . . , , ' *-fluonmetoksi- lmmoasetamido )-3-( (E)-3-(karbamoyylimetwi ,· , . ryi-x )dimetyyliammonio)- 1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (3 2) N-vrc-c0NH',—CH, coo" CH»

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (500 mg) iiuotettiin seokseen, joka koostui metanolista (3 ml) ja dimetyyliformamidista (1 ml) ja siihen lisättiin N,N-dimetyyligiysinan,idia (71f3 mg) jäissä jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyyliasetaatista (50 ml) ja etyy1ieetteristä (50 ml) ja saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla, jonka jälkeen sitä kuivattiin jollon saatiin keltaista jauhetta (382 mg).

Tämä yhdiste lisättiin seokseen, joka koostui trifluorietikka-haposta (2,7 ml) ja anisolista (2,3 ml), jonka jälkeen seosta sekoitettiin 2 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyylieetteristä (25 ml) ja : isopropyylieetteristä (25 ml) ja muodostunut saostuma kerättiin raiteen suodattamalla ja sitä pestiin etvylieetterillä. Sakka suspendcitiin veteen (4,5 ml) ja suspension pH säädettiin 5,5 - 6,5 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodcs puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kclonnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (94 mg).

Esimerkki 119 7/2>-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi- iminoasetamido)-3-((E)—3 —(l-metyyli-4-sulfamoyyli-l-piperatsi- nio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti - 94 - 891 69

CH

Ν-τΟ-ΟΟΝΗ-γ-^

COO

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (500 mg) liuotettiin seokseen, joka koostui metanolista (3 ml) ja dimetyyliformamidista (1 ml) ja siihen lisättiin N-sulfamoyyli-N-metyylipiperatsiinia (116 mg) jäissä jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyyliasetaatista (50 ml) ja etyylieetter istä (50 ml) ja saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla, jonka jälkeen sitä kuivattiin jolloin saatiin keltaista jauhetta (402 mg).

Tämä yhdiste lisättiin seokseen, joka koostui trifluorietikka-haposta (2,8 ml) ja anisolista (2,5 ml), jonka jälkeen seosta sekoitettiin 2 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyylieetteristä (25 ml) ja isopropyylieetteristä (25 ml) ja muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla ja sitä pestiin etyylieetterillä. Sakka suspendoitiin veteen (4,5 ml) ja suspension pH säädettiin 5,5 - 6,5 natriurr.asetaati 1 la. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi siiiksg-eli kolonnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (58 mg) .

Esimerkki 120 Ίβ- ( 2 -5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli) -(2 )-2-fluor imetoksi-iminoasetamidc)-3-((E > — 3 —((1,3,4-oksadiatsol-2-yylijmetyyiidi-metyvliammonio)-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

CH

N-rC-GONn^S. * fQ

COO CH,

II

- »s - 89169

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (500 mg) liuotettiin seokseen, joka koostui metanolista (1 ml) ja etyyliasetaatista (4,8 ml) ja siihen lisättiin 2-dimetyyliaminometyyli-l,3,4-oksadi-atsolia (88,8 mg) etyyliasetaattiliuoksessa (1 ml) jäissä jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reak-tioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyyliasetaatista (50 ml) ja etyylieetteristä (50 ml) ja saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla, jonka jälkeen sitä kuivattiin jolloin saatiin keltaista jauhetta (443 mg).

Tämä yhdiste lisättiin seokseen, joka koostui tr ifluorietikka-haposta (3,1 ml) ja anisolista (2,7 ml), jonka jälkeen seosta sekoitettiin 2 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyylieetteristä (25 ml) ja isopropvylieetteristä (25 ml) ja muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla ja sitä pestiin etyylieetterillä. Sakka suspendoitiin veteen (4,5 ml) ja suspension pH säädettiin 5,5 - 6,5 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kclor.nikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (92 mg).

Esimerkki 121 ~ f; - i 2 - 5 — a m i no—1,2,4 -1 i a di a t s o 1 - 3-yy 1 i ) - (2 ) - 2-fluor imet oksi-iminoasetamido )-3- ( (E )-3- (l-metyyli-4-karbamoyyli-l-piperatsi-nio )-l-propen-l-yyli )-3-kefeemi-4-karboksylaatti N -jr— C-CONH-~^—x-S v.

As* L „ J-

H,N XiCHjP O T

cocf

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (500 mg) liuotettiin seokseen, joka koostui metanolista (3 ml) ja dimetyyliformamidista (1 ml) ja siihen lisättiin N-metyyli-N-karbamoyylipiperatsiinia (100 mg) jäissä jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin yön yli . 96 - 891 69 t huoneenlämmössä. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui ! etyyliasetaatista (50 ml) ja etyylieetteristä (30 ml) ja saatu ! sakka kerättiin talteen suodattamalla, jonka jälkeen sitä kuivattiin jolloin saatiin keltaista jauhetta (425 mg).

Tämä yhdiste lisättiin seokseen, joka koostui trifluorietikka-haposta (3,0 ml) ja anisolista (2,6 ml), jonka jälkeen seosta sekoitettiin 2 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyylieetteristä (25 ml) ja isopropyylieetteristä (25 ml) ja muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla ja sitä pestiin etyylieetterillä. Sakka suspendoitiin veteen (4,5 ml) ja suspension pH säädettiin 5,5 - 6,5 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ia sucdos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (107 mg).

Esimerkki 122 lp- {2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iir.inoasetamido )-3 - ( ( E )-3 - (1,2-dimetyyli-l-pyratsolidinio )-l-proper.-i-yyli )-3-kefeemi-4-karboksylaatti (isomeerit A ja B) o CH, \r\ H,/'3' N'OCH,F(f-NJ ' COO ch,

Kokeessa 4 valmistettua yhdistettä (783 mg) liuotettiin seokseen, joka koostui metanolista (1,5 ml) ja etyyliasetaatista (7,1 ml) ja siihen lisättiin N,N-dimetyylipyratsolidiinia (103 mg) etyyliasetaatti1iuoksessa (1,5 ml) jäissä jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyyliasetaatista (50 ml) ja etyylieetter istä (50 ml) ja saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla, jonka jälkeen sitä kuivattiin jolloin saatiin kel- l! - 97 - 891 69 täistä jauhetta (631 mg).

Tämä yhdiste lisättiin seokseen, joka koostui trifluorietikka-haposta (4,5 ml) ja anisolista (3,8 ml), jonka jälkeen seosta sekoitettiin 2 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyylieetteristä (25 ml) ja isopropyylieetteristä (25 ml) ja muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla ja sitä pestiin etyylieetterillä. Sakka suspendoitiin veteen (4,5 ml) ja suspension pH säädettiin 5,5 - 6,5 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografiällä, jolloin saatiin haluttua isomeeriä A (37 mg) ja isomeeriä B (27 mg).

Esimerkki 123 ΐβ-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli) - (Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E) — 3 —(l-metyyli-4-formimidoyyli-l-piperat-sinio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti hydrokloridi Ν-π-C-CONH^—r'"®'!

„ /s'! S

“* °W<> U

Kokeessa 4 valmisteltua yhdistettä (7 50 mg) liuotettiin seokseen, joka koostui metanolista (4,5 ml) ja dimetyyliformamidis-ta (1,5 ml) ja siihen lisättiin N-metyyli-N-formimidoyylipipe-ratsiinia (158 mg) jäissä jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyyliasetaatista (50 ml) ja etyylieetteristä (30 ml) ia saatu sakka kerättiin talteen suodattamalla, jonka jälkeen sitä kuivattiin jolloin saatiin keltaista jauhetta (485 mg).

.·.' Tämä yhdiste lisättiin seokseen, joka koostui tr if luorietikka-haposta (3,4 ml) ja anisolista (3,0 ml), jonka jälkeen seosta sekoitettiin 2 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Reaktioliuos . lisättiin seokseen, joka koostui etyylieetteristä (25 ml) ja - 98 - 891 69 isopropyylieetteristä (25 ml) ja muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla ja sitä pestiin etyylieetterillä. Sakka suspendoitiin veteen (4,0 ml) ja liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käänteisfaasi sili-kageeli kolonnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (58 mg).

Esimerkkien 118 - 123 mukaisesti valmistettiin esimerkkien 124 - 140 mukaiset yhdisteet.

Esimerkki 124 ifi-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi- iminoasetamido )-3-( (E 5-3- {1-metyyli-1-piperat s inic }-i-proper.-1-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

CH

N-pC-CONH^/S^ χ '

/3 N LL Jv/nA F

H’N S OCH,F 0 N | ^N— COO“

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (75C mg) saatettiin reagoimaan '.s-metyylipiperatsiinin (116 ug) kanssa, minkä jälkeen suojaryh-mä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (16 mg).

Esimerkki 125 l(b- (2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido )-3-((E)-3-( 4-karboksipyr idinio )-l-propen-l-yy-li)-3-kefeemi-4-karboksylaatti N-j-C-CONH--✓Sv.

A* f* n ! I J. /V VAhxoh

H.N S N och,F O NtYX/ W

coo l! - 99 - 891 69

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (750 mg) saatettiin reagoimaan isonikotiinihapon (198 mg) kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (143 mg).

Esimerkki 126 7β-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(1-roetyylipyrrolidinio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

PH

N-rr-C-CONH^_/S Vs

,ΛΗ TTJwO

OCHjF 0 N \—! COÖ"

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan N-metyylipyrrolidinin (55,8 ug) kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (21 mg).

Esimerkki 127 lp - ( 2-5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - (Z )-2-fluorimetoksi-:'-.j iminoasetamido )-3-( (E ) — 3 — ( 4-karbamoyylipyridinio)-l-propen-l- yyli' - 3-ker eerr.i-4-karboksylaatti N-vtC-CONH^-^Sv.

AsK

HjN OCH,F ö T .

coo

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan 4-karbamoyylipyridiiniä (131 mg) kanssa, minkä jälkeen suoja-v.: ryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (42 mg).

Esimerkki 128 - 100 - 891 69 7/)-( 2-5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - (Z )-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E) —3—(trimetyyliammonio)-l-propen-l-yyli )- 3-kefeemi-4-karboksylaatti N^-C-CONH^/Sv, CH, /S"NN J i xk >-CH, H?N "OCH»F (f~ N ^ COO" 5

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan trimetyvliamiinin (57 mg) kanssa ( jolloin käytettiin neutraloitua trimetyyliamiinihydrokloridia), minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (79 mg).

Esimerkki 129 7£-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatscl-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetcksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(l,4-diatsabisyklo-(2,2,2)oktan-l-io)- 1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

Nit-C-CONH^-/Sv _t il in nj vr\, M c - N J—NM M V yv H:N s OCH.F O [ ^X '—' 000“

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan 1,4-diatsabisyklo(2,2,2)oktaanin (72 mg) kanssa, minkä jälkeen suciarvhiT.ä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (61 mg 5 .

Esimerkki 130 7/i- (2-5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yy li)- (Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(1,5-diatsabisyklo-(3,3,0)oktan-l-io)- 1-propen-1-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti li -ιοί- 89169 N—r-C-CONH-,—/S. /\

Η,/s^ N 0CHjF

coo"

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan 1,5-diatsabisyklo(3,3,0)oktaanin (120 mg) kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (32 mg).

Esimerkki 131 l(i>- ( 2-5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )- (Z )-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E )-3-(4-metyylitiomorfOliini-1,1-dioksidi- 4-io)-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti N —n—C-CONHv. /Sv CH, h^s" n-och?f J^Yii%Avy+C3^o

COO

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (250 mg) saatettiin reagoimaan 4-metyyiiticnorfoliini-l, 1-dioksidin (52 mg) kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuo-tetta (17 ma).

Esimerkki 132

Ifs- ( 2-5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yv li ) - (Z )-2-f luor ime toksiini inoa set am ido )-3-((E) — 3—(1,4-dimetyyli-l-piperatsinio)-l-pro-pen-l-yyli )-3-kefeemi-4-karboksylaatti h Ν-χ-C-CONK--^Hs ::: Äs^n Η,Ν S ^CH^Ö

:Y: COO

- 102 - 89169

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan 1,4-dimetyylipiperatsiinin (94 ui) kanssa, minkä jälkeen suoja-ryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (35 mg).

Esimerkki 133

Ifh- ( 2-5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - (Z )-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E) — 3—((2-aminoetyyli)dimetyyliammonio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti N-rr-C-CONH^-CH, h/s'N %ch,f coo" CHj

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (750 mg) saatettiin reagoimaan N,N-dimetyylietyleenidiamiinin (115 ui) kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (15 mg ) .

Esimerkki 134 ip~(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yvli)-(Z) — 2—fluorimetoksi- imir.casetamido )-3- ( (E )-3- ' r-etrat scl-5-yyli )roetyyli-dimetyyli-ammonie}-l-propen-l-yvli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

N-TT-C-CONH--.-r-S 'f5’ N—N

V £ aXIh^ H,N S OCH,F 6 Y '^/ lV H ' J fcoCT CH»

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan 5-dimetyyliaminometyylitetratsolin (150 mg) kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (37 mg).

- m3 - 89169

Esimerkki 135 7¢-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsoi-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E )-3-(3-sulfopyridinio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

N-rpC-CONH^__^SOjH

coo

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (750 mg) saatettiin reagoimaan 3-pyridiinisulfor.i hapon (384 mg) kanssa, minkä jälkeen suoja-ryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (68 mg).

Esimerkki 136 lb-(2-5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-lminoasetam id o · -3 - ( : E ) -3- (( 2-di met yy 1 iaminoetyyli ) dimetyyliam-monio)-l-propen-i-yvli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti N-t-C-CONH^_CH, CH, LK Tljy, 4 ' H,N S "OCH,F rf-v' i v/NN ·: * 0 I _ CK, ! COO CH,

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan Ν,Ν,Ν,Ν-tetrametyylietyleenidiamiinin (105 ui) kanssa, minkä jälkeen suciaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (22 mg).

Esimerkki 137 7f;-( 2-5-amino-l, 2,4-t iadiatsol-3-yy li ) - (Z )- 2-f luor ime toksi-;:· iminoasetamido )-3- ((E) — 3— {( 2-oksopropyyli Jdimetyyliammonio )-l- propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti - 104 - 89169

Π-J

N-v-C-COM^—/S-. . * h,/s" ^och.f ch, coo ^

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan (dimetyyliamino)asetonin (80 ui) kanssa, minkä jälkeen suoja-ryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (60 mg).

Esimerkki 138 7£-(2-(5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluor imetoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(4-karbamoyylikinuklidinio)-l-propen- 1-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti N-tt-C-CONH^_ li " f l~\ ^mh

/L ™ n Lv- Y /'N

H?N ^ 'OCH?Fö | ^ v 6oo

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 rrc1 saatettiin reagoimaan 4-karbamoyylikinuklidiinin (107,6 mg) kanssa, minkä jälkeen sucjaryhir.s poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (77 mg ) .

Esimerkki 139 7f}- ( 2-5-amino-l ,2,4-tiadiatsol-3-yyli )- ( Z )-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E )-3-(1-metyyli-2-(2-nydroksietyyli)pyrro-lidinio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (isomeerit A ja B) <f· h/3' %ch,f

^00 CHjCHjOH

li - 105 - 89169

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan l-metyyli-2-(2-hydroksietyyli)pyrrolidiinin (83,3 mg) kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin halutun tuotteen isomeeriä A (24 mg) ja isomeeriä B (26 mg).

Esimerkki 140 7β-(2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((E) — 3 —(4-karboksimetyylipyridinio)-1-propen-1-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti K-^C-CONHv—^

I N / Lx, J. - tL VcH,COOH H,N S OCRrFO T _ W

COO

Kokeessa 4 valmistettu yhdiste (500 mg) saatettiin reagoimaan 4-pyr idyylietikkahappohydroklcr idin ( 250 mg! kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (5 mg).

; Esimerkki 141 2 - ( 5-arr.ino-l, 2,4-t iadiatscI-3-yy li ) - (Z ) -2-f luor imet oksi-; iminoasetamiäc)-3-( (E 5 - 3- (1,4,4-triiretyyli-l-piperatsinio ) -1 -propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksvlaatti-jodidi

PH

rjcfcomrrs^ \^ch,_ H,N S' N0CH!P Ö ^ CH,1

COO

Kokeessa 4 saatua yhdistettä (1,0 g) suspendoitiin etyylieette-riin (100 ml) ja 1,4-dimetyylipiperatsiinia 8189 ui) etyyliase-taattiliuoksessa (40 ml) lisättiin siihen tipoittain, jonka ;;; jälkeen liuosta sekoitettiin yön yli. Muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla ja se uudelleensaostettiin - 106 - 89 1 69 tetrahydrofuraanista/etyyliasetaatista ja pestiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin keltaista jauhetta (492 mg). Tämä jauhe liuotettiin dikloorimetaaniin (2 ml) ja siihen lisättiin metyy-lijodidia (4 ml) jäissä jäähdyttäen, jonka jälkeen liuosta sekoitettiin yön yli samassa lämpötilassa. Reaktioliuos kaadettiin etyyliasetaattiin ja muodostunut saostuma kerättiin taiten suodattamalla, jolloin saatiin kellertävänruskeata jauhetta (190 mg).

Tämä yhdiste lisättiin seokseen, joka sisälsi tr ifluorietikka-happoa (1,35 ml) ja anisolia (1,16 ml) ja liuosta sekoitettiin 2 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui etyylieetteristä (25 ml) ja isopropyylieet-teristä '25 ml) ja muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla ia sitä pestiin etyylieetterillä. Saatu saostuma suspendoitiin veteen (4,5 ml) ja liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla. Suodos puhdistettiin käänteisfaasi silika-geeli kolonnikromatorafiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (23 mg).

Esimerkki 142 7^-(2-( 5-arr.ino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - (Z )-2-fluorimetoksi -iminoasetamido)-3-((E) — 3 —(karbamoyylimetyyli dimetyylliammonio)- 1-prorer.-l-yyli )-3-kef eemi-4-karboksylaatti ς CH3 m —t— C — CONH——/ +! AS*Ä TiyUV® H,N b ' OCH rr O | _ CHj

COO

Kokeessa 7 saatu yhdiste (1,43 g) liuotettiin asetoniin (20 ml) ja siihen lisättiin natriumjodidia (0,927 g) jäissä jäähdyttäen ja liuosta sekoitettiin 10 minuutin ajan samassa lämpötilassa ja edelleen puolentoista tunnin ajan huoneenlämmössä. Liuotin haihdutettiin pois, jonka jälkeen etyyliasetaattia lisättiin jäännökseen, jota pestiin laimealla natriumtiosulfaattiliuok- li -107- 89169 sella ja kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivattiin natrium-sulfaatilla. Suolaliuos haihdutettiin pois ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (40 ml). Saatuun liuokseen lisättiin dimetyyliglysiiniamidia 8237 mg) ja liuosta sekoitettiin yhden tunnin ajan huoneenlämmössä. Saatuun liuokseen lisättiin iso-propyylieetteriä ja muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin kellertävänruskeata jauhetta (1,07 g).

Tämä yhdiste lisättiin seokseen, joka koostui tr ifluorietikka-haposta (8 ml) ja anisolista (6 ml) ja liuosta sekoitettiin yhden tunnin ajan jäissä jäähdyttäen, Reaktioliuokseen lisättiin etyylieetteriä ja muodostunut saostuma otettiin talteen suodattamalla. Saostuma suspencoitiin veteen (10 ml), minkä jälkeen suspensio pH säädettiin arvoon 5,5 - 6,5 natriumasetaa-tilla, ja liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla. Suo-dos puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatogra-fialla, jolloin saatiin otsikon tuotetta (268 mg).

---1-1 89169 - 108 -

JJ

© e 7 Ϊ w · 35

'— Λ Ό H

«0 M w

® j 5 eo *° S W T

1 v 10 **

IÖ m H

“ίο®'' " » · . s 3 ΐ|Η

f-* ** T

t 7 J! ^ ϊ n a ;

.-. *o *0 S I

kl - · «ί .

*J D TJ ® l··

Ji . . «

& 3 3V

• o r - £ 2 ® = £

c£ » w ^ T

z a a 5 ;

on X

t-* co ~ N

** . 3 T9 ^ ®

-J tÖ M

«m M ~ h w JJ N

w „ s cc 2 - » 3 - 4 ?

^ J

^ β "β ti M ·-? #®-7 *** ks MM M4 ϋ n — -·

3 Q W W

5 r_j ^ tD

- ^ t- to to ·-; ^ pj tri to ft 0 -- C -

C I

5 C

<1-1

U

u a * u V) 0 z » z * « o

w Z

J* ® z ·- C z cn 3 a ^ .-

*— « u T

- ·- Λ R

c n o y w c a'-' “ M «

* W

V _ _ _

4J

® 1 9 £ £ ! £

*- - I

(I

-109- 89169 Γ~ [ί [ϊ Ι~Ζ Λ ~ ~ ~ 5 e ; ; s -α^ ~ s . a Sc ^ ® X S'® W X ffi*jX 1 ® -> -* 1 σ> Γί, m aa® . ιο m . a ~· « i τ C s 7 s - ä HS® ~J *3 ^.Se> ^ - CO ^ ^ eo h w ^ * ί* *o <o *9 Η-Γ *3 n loi'1 . . ä i ' oS~ S g "o s 3;ϊ: »33 B. s

^Zz a Ϊ S Α;5 ΐ,·2 δ - f S

jj 2 m· "^Λ "° 2 X n: - Λ χ ~ 4 χ· S - * ^ 10 Ί. K - n 5 s ^ S g * ° ~ n *® . ’j-f w ®. jg X a s . * *=> -j«o^ ffiS* ^10^5 “ig-H ^ n a * ^ ^ ~ Ξ· a' χ S ~ a 7"» sXC.® “f· ~ f τ - £ - £7S! ·: ; ί ,· -“-r i= ^ -=· ; ϊ ; =; s ^ s 1 ^ * = ; a * a i 5 x ,· a ^ ^ s ^

e «^w S®w * i3 w ^ ► w « Μ II M

l ®V_-® ^ v_x W ^ a t- - J3 -3 .ΰ

Oi n o Sw® to*- n -* to ° - 7. ~ w m 7 n w «o ; ir ^ w 2- ii 3> Λ ' “o eo m ,· -^ g ^ z " Ϊ S SN w' ? | ” "· I « ^ ί M Z g 3 ~ 7 11 7? ~ — 7 "" s 11 i^Si! -io- « Ji -s J; «B - n ^ -3 : B _. -5 I ·** -¾ -rr ·* lO -¾ >2- tX 1 ^ ^ ^ ! 32 ^ v 3 s I· " ® I- ® =* ; 7 X - ; X ® a f- ^ N ^ ^ 1 — m O) N i — *^ N lO . —^ ο . 0*wÄ|0—* ^

• I · —1 ^ ^ 1 . “ <^*S a M ha IA

^togc!®^- ” 43 2 i' ' ^ ^ j ^ E t £ -< .t-j -.m a. Ei ^i .E r- co in _ V ^ oJ ^ *° t-! ®®eo! - ® ® — H m

^ ^ Il ^ ^ Il n β n I! -3 II

•O ~ C -i => . '-ί ·® . X . ·® a X . Ό . 13 .

I β H β | 13 B |TjB-0 le^BTJ I TJ T) 3 o a* a‘ a* o a* a* o a* a a* σ X a* a‘ o a a a*

k n -j n k - n w«-<-iB»;-i-n-“-|N

2 — ^ ^12 w ^ 2 w w '-''s 7 ^ s w ^ w

Qioe^;.—\(co^tco»cc H O h M O H — w 7» ui ci ^ w h·* w f' w o> ri id o> ^ ri t· id .S * * - *j o o m o o

CL

u t·— ^ cc m o O —>

e: cc CD to O CO

-g O - g s - oo m o o in mo m in β·£-*«©σ> i «o o ίο σ> to σ> to o> ^ -J 8 t— in r~«o t-m in t~ in C O.'-' —' —< — — -1 «4 -4»-l >- · • R ^m ' 1 “ ' * 111,1 ~i ιι.ι . ι· » ι i ί « U ® o·. O ή 1

s £ ^ -H CM CM <N

B * >-* r-i r-t ·—I <M

"m l w ^ I- --1- - no - 89169 - 3 i I ^ n i - s a a 7 a s . ·. ? . t J » _; · Q ~ S £ « « °. tj ® . Λ a 's a 5 Ϊ - 1 «ri I ? ö -ci S e· J .5 o |^2 5 5 ’, 5 a s f | 5 "i i „· ’ s 3 3 5 Φ :· · 55 3 ä a § - "-e .3a s t -S « ä 2 C ·. ·.

a *j ” ~ ® a ^ * g 2$*° 2«°β SS» G =* ^ o "J . «ίίο. *° m ~ S 2 ^ *· * s § S ä f|g w *° a a e*1;*0 *K*X ί -e a* · " ® ~ V = « « g ?-!!· £ a* ^ 3 4 B *o ^ »o .h · - 3 ΐ I S ° -n 3 ? ® ® ΐ = 7 r.'ra»_*®t'ae7a2 « g a -* Λ ·°. a . 2 ® a* S ^ 2 -i 10 • · 5 e. E *- s s ^*^32··®^^» 0C a J “ *· S i · sS * s * Λ · “ S ä s ®. 5-2 5 Ϊ s 1 Ϊ S -°. I» s ? 2 2 S π σ> ~ . -'•ί,'οβΛίϊ ^ΐΒίΝ _ £ o®^. f- , n £ ** a °» o> -s 2 - · - “1 .a1—— cj . - ~ 3 " 0 ? θ. -¾ ® -o* “ · 3 s ^ «. 3 *€θ . «r C ►»* _ +r* Ä ·- ^“5 Ä«W»eH·-# " ^ · M *“· · _ ·*< m · ·< u «M k_( ·** OM Ift

go-NM'2'-,-<~.'r'-<aN_ia*^t- h m S

/ _ - C4 n <W« - ._, w _ -w - JL . _ H

— e^WJ-i- CCOi-^O&W3-^ M J — o ~ w CO . CO I w Ό . w ^ , CO w · *2 ^ w CO ^ —* t-· -*- e E m a eo B e B o 2 t~® -<® — -x . n ^ • n n h .ani) . « n n . n « . n m ^'OO^-o^r^O-o^o^oOtJ-o . -a -o I -s o* ·© 1 ιο T3 -a I -α *e ·ο I -a 3 "e | ·« ä

Q *-»-i <—«" O * 5^ *"H O **-i M Q »-4 fcyi *«Γ φ M

τ: — -- — S iN-S-i-Sfl-NS-a

Getcci-^iocn—*oe*^ t~n«Hh-o/—. ·~* uso-^ eot^f-^er» ^ ro o cj *~1 ve ^ ri n n ' c*J «s o! ^ ri ιό »·' ^ e a o w n in

C

'n * * m * *

i_i ιΠ O O O O

c. ! u i — c© h- e m 0 _ e o o ;e e o ΐ £ - - - - « I .

g.h o o o o inio mm m o J· ^ r* ° φ cocn e cxj e o ιησ> 1 -J δ r~ in f' m t~to r- m t— m ca-~~ - - - - -- M a μ I ΙΊ ^ ΙΠ φ

i) Ö <N fM CM CM CM

8 * CM Ή rM »H rH

.

k_L-—---------- li - 111 - 89169

N

s I 5 is i i 3 ” 3 «e *o S *2 w io * 2! JL | w fl - 5 i . -i ä^o . :· 3 i 3

Z· s 2 äM 5 «i I B 5 B 2 ~ B

a * ^ » o a ^ o ~ . S 3

- Ϊ « ^ S »“ϊ^* ~ oo X ^ X

S « ·« g ^ . s « ^ ^ a. Λ 2 » S ΐ ad 2 ai g S s ^ * g 3 -

^A i:3^ 5 S ζ 7 a | S B S

^ « ΙΟ σ> O Ϊ * f- ί * _ S-Owh*. - Η « | N i Π ~ in N. -* S Ä X a B Ί ^ *i 3- »o 7®*? W h-· X M. 2 ^ . ·» N «O (on

"* S 00 Λ 2 2· H .-e . . CO B « Λ ’"S

il n o o a c- - a c? _· *-* ® T ® ^ rt t~, -V E a pb B *? . ro - ~° ·« “i s3 «; 2 7 1? a« a* o Z* . 4* s t a ^· « » g i A S g «1 s «-g iS a 5 5 ; s *» 5 » 3 «2® » w ~ s - 2 o. 5 * Λ I . B η ~ 3 « S ^ B B «o ’ ° s -o n : 2“ c. < a s λ s . n - Ä rti e s O ^ § S “ S 2 8 2 ? *. *1 0 “ (JJ T S. 2 2 ΐ ® "VT - T 5 5 2 B* Z ·ο Γ· 5 . « 0 « ·ο E -o ^ rtrt 5 — o « _* . ” _.· s saa aa^.a n n , 's ^ rtrt ^ -rt a CS. tD M rt <rt |Λ ΙΟ n I rt . —* N —I »rt ^ Vrt/WW WWl-irti_’t~a o'-'a-w'»'^«o oMh- h- -<r > 7 » m1 7 “ * ·· ^ S °' ® ricot^ j n ri ® ^ - e - ^ 3 « K- ® S. “» i j j e “» -o « a 2 -* ! —4 * · C> · ^ O ^ ΙΟ -·Ν _ · tfi Γϊ · »e rn O J3 o N M M N ^ m H H CO ^ • N ® N · N ^ . 2 ϊ « X N —, . . . —* ® a «i a N a S « s; £ ™£x'~'n*ji'-' =» - ® «ui «o* «o* to -; o s B - ! -s irt „ o ^ _ _-iio ^. -< m •'z ^ V 7 · i , » -s n . n li _ li ti _iib®.J1JL® - “5 . *”5 -e T5^-J ·« “3 ►? ' - ^ ^ .

! I -O ^ -σ | 15 1) | T3* T3 I -o* -o 'o | I§ ΐ ' ^ s !E ""’O rt »H O a a O "τ' —* ~* O ·τί “τ<* ·—r 2 N H N w N N w ^ e* CO^^c^CO^^es, ]2wwn^2ww Sww ! I (2.. 4Λ 00 r: Q 00 CO qoo — | ' r> cc r μ ei h ^ ^ o c>3 cnj o ro ! ^ m ie co ^ eri t’-* ^ ri ιτί ^oioco^^iecc

C

♦ f- * * ϊ- ^ io m in o e.

i- o σ» σι 05 f~ o _ e _ io m in in m ΐ ° - « i * · · . .

3 .-, o in m o o in o e- rt _· 0 oi o %o to «no ^ -J 8 m t_ t— r~io ££·^-- - - - -- · - « K.

w 1 CD 0> | g ^ «N ° m •S ^ Ή M ^ m

Ik_1·*-—1—-1-1-'

- 112 - 891 69 I

- -- | —| 3 3 ξ ΐ ί·3 5 Υ s .18 ι ΐ « « ν " 3 1 ί 5 4 ® 4» » s ·* Τ -* 5 ί 2 a ® 5 s ·°.

- Γ* t- β . '"'-«ο»

« >£» Ξ· 93 X S *9 9 »I® -COW

» Ο · ^ Ν * J] O ^ fj Π ?s) μ ι Μ · Ο *Τ* φ Μ Ο _ί 2* · * βο . · 2* μ ιο μ ϊ w: S 2¾ » · μ ίο o CO *1 -«toto . TS 2 £t 5 fj ^ Jr 'ίί ® ^ Λ JJ K JS. 9 M* . mm·* •o 2 = 9 2 S :2 a S a 51 = 3

.«= « b S I- ^ ro O n i S

~ -» £ c-lx -o » a - °ϊ *i . -o -* θ * n B ^ —< » ^ i ro co *3 9 _,* n . ® A . _r — -e . x *9 a τ» Ji «“2* · a . fc 9 m .-i ^ ® s *« 35 •r S 5 -e. Iti a °· aa*»· - 5 -9 ? ® « « t ^ x = i<n x ^ r ·? = S s 4 *» r "» v h· !Z m i t·^ —^ , O W * H * · ~ ft *

·* · O ” · O ^ i/) K w» iO tD * , H

4- n j ^ ^ m · * n S w *ö n 1 ^ fc ^ CO -43 o .f a fi m i* · ^ - a . ΙΛ·** TS S? IO U m £ 0 9 ro a - *·« ^ s H n o —- 0 —> —-, cc _- B ^ JS 43 * ti jö ^5 . ? « . a « 2 » B B. i"“T s o. ΐ =S^.®tiT® -_ o -5 23 I ro *9 ·-} O 10 *9 κ3β2 . "β1 *9 2 ro. a ro . . ro . Jr 2 ^ 9 «» . 9 cö "O ci "3 .-» oi -ia „ . - ® »,* -e E _ «i O» M ” . TS N JU ro a - M X . 9 .aroa . a ._·*♦* ^ x a . a a a 9 —* to ro i -2* c-* 1 *“. 5 ^ a, -—' «4 co » - 1/5 H | ® '—' — | ® N C ^tB*Owewwi| a* S ^ a S » ! a X « a -S 2 s. = S S *» 2- <9 .£ · ro ! ® ^ <=; ; « ® 2 C -‘ ® 2 « ro -9* N ί 5 oh 5 3 lN i = 3i" ° ® = N' = = ^ t~ ro |2 i f- ~ — tc_, «aro® roro? -- Il · , —· -* ro -v l·- w tt —' ro — ro e li *o ® ! , n o . r i; π n _ . li il _ n il o» ro -9 ^ .,-0*9*9 :-=-9-9-9-39^^-3-9-9 1 -a ro 9 I I roro li ro ro ro | Ja ti ro | -o -a 9 O 3* 2ί 1 ^ K Ä ^ O —. »τ- O -** »->-«* O »r* *r^ i Sy “ r* ι y ^ « ;;2wnhWNh-whnn ;G2Sii'QS5 iC^^^iQrooeoQ^ro — ro cs_ | - co ro i ror-f^-^oesro-^rot-c» -''rjroroj—'riro j^riui e^iose^o ro cc i i......

£. o : o ro oooo £ _ f- jt~ ro t- σ> m· r^ ®-.ro ro ro ! ro ro ro m C _ ! «e 2 i C I* - I . .

3-w roro ro o o ro ro o o ro ro o o. u _- f «*ji roo> ; ro o ro cr. rococo—«roo

L. W

>κ » ® ro ; t— ro n ro !r-roroc^t~ro

c o.—' _ 1 I

ί·4 · »H I «-H ·μ| M

- .H-- ! ji :----

M

v- ca ; m *t ro »o S ^ ro ; ro ro ri m .5 Ή j r-l ·“* i—ι —< ι u:_L------_ - 113 - 89169 ! i 5 ·=> ~ 3 !ä ί ä ~ 3 ? i2 = rf Λ 5 N *7. JS £

· . ·1 S ** 7* Ä Ό «o E

Ti T» O 11 10 _r 1 vo . · ** E S* * 4 . “5 B S T ®

,-£ i— οο τ . S w * ^ «-< " U

E ^ T jj 3 -o w * -o o · "l -s-ä ^ *2 n E^g * ? ·° n “? 55 ^ f 2 " 2 » »5® E* = *3 tl vo . >-j ® ^'E. 5£ ri . E*^ • * Π *** · . 7 — ^ * — ® w • ^ 2 ς> o 3 « w 3

- ^ w Ό B .. ·Μ «D°J

3 B* 5 s E - “ S ΐ “ N « “ ~ -§E S H H e ^ r . ^

40 -2- -«S a ä 5 S ä 2 «S

e » »- r« ^ b ® 2 ^ -ί . « t- . h >"5 * L; -5 Ti a>25 sf " Ti E Λ B E ί ä ί -°. S ^ 4 ~ x E S = ? . - 2 ” * - 2 = 7 ·« -e 7 t X E « Λ Ό E V ^ E II E A - 2 e. r» r JJ -e 2 g 3 1? R ·*» « o -o - E ·« > - e s 10 e s 2 3 s s; m rj e

Ϊ B E ^ E oo^;'-' J3 —; ^ vo^jE

01 m<* -3 . o w Ti «O © ,3 2 O N o O

2 ” ® ’'l ® 2 » t>’ « ? *- rf v ^ !“£* _ O) T " “il «-j *-} . ! 00 · .

i S · 5 3 E B -o 5 ? - § 7 = 5 ^ E «> E ! E S 3; E g Sf = S “» ® p* j ® E 10 E ; vo E E > vc> E II I o E II —‘ vo 'p

—ίο . n i ^ h r o> ^ 1 x «o “3 ^ JL

- - Λ N :o O M .0_* . t— - _ =

4 - m 1 I ® 4 C\J _: ^3 OJ ' O — . * I

— “ —* © : ( «fr* i.fo _ . ro „ — in TS

t- ® Ivo10 '( E j» E 'N _* ί —; —; , ^ 1 n ^ vo^cs !<o-m ; o - —

γί J2 2i J?!co —ϊ >? — m *3 ' I E n — 1 ui n E

E E E JJ S *3 E ® I E o EX 1

t-iool m 10 E I t-t— 1 i^t-* 10S I

-ΙΓΛΤι^ν'ίΓΤΐ-Τ*” i'Z 7 ” 7 7 « i -®~ .^i-s-oO-si-s-s^ ^ I r ? -o j I o* -e a I -¾ θ I 1 -a E j 1 TS ΐ O E e* e' j o e* e* a* g e* a* ί g a* a* g e' e*

Or2'^rg,Q000'Qi0f~ 1-1(-0 1 v— 00 — λο J «c cc !‘—(-cs ri 10 (-' w rs 10 ci j w «o >o’ ' o 10 j - ui ed j 1 <

.S - . . I

^ VO ΙΟ O 1 o ί

Cl I I

u co 10 10 ! 10 I

C — I

te _ CO CD CO j CO

•5 £ - - - L· i « i 3.h ovo 00 00 j o o

Cl Li * I

A3 4j 7 o {o σ> kd σ> jvoo ΐ ί 6 t— vo t— vo t— 10 it-vo e a— _ _ — —. _ _ i

- ·« - - j I

ί r* oo 1 “ o I

*-* s S 2 ^ <4 ! ^ ® ! • .5 *"* f· pv m ·~· i

* -· ! M I

...: u_L·--------- - 11« - 89169 A ^ ·· s s a f s 1 «* Λ te

5 ·« N

_ S *-« —<

Te» h- ^ —' us

to CO M ^ US

*“3 £ · *- - ^ ^ * I ^ *° S ? 3· s* χ '—' n * » -w- , -5 K S to 2 -o ~ ~ T « . to M / *"5 « f· O) — m , w, σ> * t - «s o»

^ S X

1 N CO ρΛ w ·

e- ^ X _- Θ to T

a us 23 | - ^ Il • -C li N x ^ "3

^ TJ

K as -e w t-

2 ” =· * 7 s S

CC ^ < M w Z -h w ^ o r; t- «o N £ ,Ο ~ “Ϊ Ί us eo °» -C w T ~ «n .

β II i o . ,-£ * _; ό ( » X g - X T is tn c -3 e a .

w' » „ , ·>*-« - - ·** ® rs X I o . ~

O M | —1 —» W

^ H i tö 2 2 *> 5 I S 5

--V ^ f». ! —S lO

- ! · ^ ~ ^ ; -o -s *

I .o e | -e JS

1 o a =· ό -* af

“ S “ :w X S

I *£ w S '-' 2 R n ; <3 e h- — co eo "-1 e. —i rs us ^ -v et? e • ψ4 · m

u C5 O

t t- CO

e —.

cc ^ O XD

-e O

te X ^ —* S * 3 o tn N o O. μ *

« μι > «5 OS tr» OS

tu "ϊ δ t~ tn t— us e o-'-' _ _ _ _

t-l · — -H

» ··* —_ —— — _ JK ’

JK

U —1 (N

4» Ä O· O- E * iH r-t • w4 m l bC _L —--- -115- 89169

Esimerkki 143 70-( 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido )-3-((E )-3-( tris(2-hydroksietyyli)ammonio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

N-tC-CONH\ /°H

HjN-^s-^N N^oh

''O-CHjF'J c00- C

OH

Kokeessa 4 saatu yhdiste (400 mg) liuotettiin etyyliasetaattiin (4 ml) ja siihen lisättiin 96 mg trietanoliamiinia 4 ml:ssa etyy1iasetattia. Liuosta sekoitettiin 6 tunnin ajan huoneenlämmössä. Saatuun liuokseen lisättiin 24 ml isopropyylieetteriä ja muodostunut saostuma kerättiin talteen suodattamalla. Tämä saostuma lisättiin seokseen, joka koostui trifluorietaikka-haposta ja anisolista (1:1) jäissä jäähdyttäen. Reaktioiluokseen lisättiin 16 ml di-isopropyylieetteriä.Muodostunut saostuma otettiin talteen suodattamalla ja sitä pestiin di-isopropyylieetter iliä. Saostuma suspendoitiin veteen (3 ml), minkä jälkeen suspensio pH säädettiin arvoon 6,0 natriumasetaatilla. Liukenemattomat osat poistettiin suodattamalla ja suodos puhdistettiin käMr.teisf aasi silikageeli koi cnnikromatog ra f ia 1 la , jolloin saatiin otsikon tuotetta (17 mg).

Esimerkki 144 ( 2- ( 5-amino-l, 2,4-ti a diat soi-3-yy li ) - ( 2 )-2-fluor imet oksiini incaset am ido )-3-((E)-3-(bis(2-hydroksietyyli)metyyliammonio)-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

/OH

N-ttC-CONH-—.—r'S^'i no-ch2f coo- -m- 891 69 !

Esimerkissä 143 selostetulla tavalla saatettiin 500 mg kokeessa 4 valmistettua yhdistettä reagoimaan 150 mg N-metyylidietanoli-amiinin kanssa, minkä jälkeen suojaryhmä poistettiin jolloin saatiin 15 mg otsikon yhdistettä.

- 117 - 89169

/•N

ja IA · *} ^ X * • eo

O II X

X "3 CM

Z“ - v_/ O

7 *. «3 i 5 ^ s ® .2 5

• rt —I · CO

w ^ II O 5 - f~ h rt £ Ύ

x *o x . 5 A

^ in ie ·β λ W 1-4 ^ · Λ σ> - N g; B ^ o «? i? ^ 5 ^ -· - ” s ·»· ^ -· 5 ϊ ί ; 5 *' s ^ ^ N *

£1 «O ^ «A

— IA O f- t i a a m ^

Ji -Ϊ - f- . ^ J3 4) w x ~ O- t r. 4 • ~ χ e S £ X IA ~ O “ Il Ä Ξ, ID h . * f.

rv; Tj . ia · χ rt· ~ ~ n 7 Ξ . « S ^ x ^ ί ~ ^ I! J; ϊ . o m · ^ *7 *0 t"· ·« · MM w ^ Il U Z ^ S * ^ -O W ^ i* -e o - _* * -4 ID ~* “ M r"*V · r*i — - .DJ -V 7 -

*— 'w' . W

i m fg CD m ^ β Γ0

VT w fr Λ N /-s O

rt — N rt ID ·— rt C~ co rt —< T- C-

E li π II E

o - “3 rt rt —4, 05 ·— mm • «O ^ Ό *t3 ^ m A af a? x‘ s* s -

Soin-i-i-c

^ V_ ) W O ^ ^ J

^ -o ' o to o <

Qajr^r-.Qcor^cr

'-'rtlAoi'^WlAID

c 4» ·

a O

o — *“

Ϊ ID

•2 O - « z o o E ^ ID o

S. U _* r~ ID

C *J ’ -H -4 u 8

ViM 1) VJ

. . C O.^ • . - M 0

JL

• - .* i* _ ro ^ S £ * 5 .5 -i rt L u 1 _ - 118 - 89169

Koe 8 (lähtöyhdisteen valmistus) 2-(5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-syanometoksi- iminoetikkahappo

O N—ir-C-COOH

VTJ™ "O-CH.CN

8,00 g N-syanometoksiftalimidia suspendoitiin 50 ml:aan etanolia ja 1,93 ml hydratsiinimonohydridiä lisättiin siihen huoneenlämmössä. Saatua liuosta sekoitettiin 1 tunnin ja 45 minuutin ajan. Tämän jälkeen siihen lisättiin kyllästettyä suolaliuosta ja etyylieetteriä. Seos tehtiin emäksiseksi väkevällä ammoniakilla ja uutettiin etyylieetterillä. Etyylieetterikerros pestiin kyllästetyllä suoialicuksella ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Lopuksi liuotin haihdutettiin pois. Jäännökseen lisättiin 350 mi metanolia ja 650 g 2-{5-trityyli-aminc-i,2,4-tiadiatsol-3-yyli)glyoksyylihappoa ja saatua liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä yhden tunnin ajan. Liuotin haihdutettiin pois, jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin 0,1 N kloorivetyhapolia sekä kyllästetyllä suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutettiin pois. Saatiin 7,64 g otsikon yhdistettä.

Koe 9 (lähtöyhdisteen valmistus) p-metoksibentsyyli 7/J-( 2-(5-tr ityyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((Z)-3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti l! - 119 - 89169 ν/η' o-ch,cn υ I _ X COOCHi^J-OCH, 1,51 ml dimetyyliformamidia ja 18 ml tetrahydrofuraania jäähdytettiin -10°C:een jonka jälkeen lisättiin 1,82 ml fosforyyli-klooridia. Saatua liuosta sekoitettiin 40 minuutin ajan jäissä jäähdyttäen, tämän jälkeen siihen lisättiin 7,64 g kokeen 8 mukaista yhdistettä 24 mljssa tetrahydrofuraania ja saatua liuosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Seos joka koostui 6,00 g p-metoksibentsyyli 7 -amino-3-( (Z )-3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaati hydroklori-dia, 12,8 g N-trimetyylisilyyliasetamidia ja 60 ml etyyliasetaattia jäähdytettiin -25°C:een. Tämän jälkeen siihen lisättiin yllämainittu reaktioseos ja saatua seosta sekoitettiin 40 minuutin ajan, jolloin lämpötila kohosi 0°C:een. Tämä reaktio-seos uutettiin etyyliasetaatilla ja orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin pois ja jäännös puhdistettiin käänteisfaasi silikageeli kolonnikromatografiällä. Saa-·: niin 7,80 ? otsikon yhdistettä.

• » « 1 » · * · • · i -no- 89169

Koe 10 (lahtöyhdisteen valmistus) p-metoksibentsyyli 7^-(2-(5-trityyliamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((Z)-3-jodi-l-pro-pen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti O N—rC-CONH--- Λ COOCHrO^501·

Liuokseen, joka koostui 7,80 g:sta kokeessa 9 valmistettua yhdistettä 120 mlsssa asetonia lisättiin 6,9 g natriumjodidia jäissä jäähdyttäen. Saatua seosta sekoitettiin 10 minuutin ajan sekä vielä puolentoista tunnin ajan huoneenlämmössä. Liuotin haihdutetttiin pois ja jäännös uutettiin etyyliasetaatilla.

Uutetta pestiin laimealla natriumtiosulfaatin vesiliuoksella sekä kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuos väkevöitiin ja lisättiin pisaroittain iscpropyylieetterir. ja etyylieetterin seokseen, muodostunut saostuma suodatettiin erilleen, jolloin saatiin 6,50 g otsikon tuotetta.

Esimerkki 145 7^-(2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((E)—# — i(lS-karbamoyyli-2-hydroksietyyli)-dimetyyliammonio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksvlaatti ^Τ?"οονηΎ-Τ8Ί iH1 /-oh

Ας u H

HjN νν-ιυ «κι I \CÖNH

OCH,CN (jjoo“ CH1 H/UNH1 121 - 89169 1.0 g kokeessa 10 valmistettua yhdistettä liuotettiin 2 ml:aan dimetyyliformamidia ja 210 mg (1 S-karbamoyyli-2-hydroksi-etyyli)dimetyyliamiinia lisättiin huoneenlämmössä. Saatua seosta sekoitettiin yhden tunnin ajan, jonka jälkeen se laimennettiin lisäämällä siihen 10 ml etyyliasetaattia. Saatu liuos lisättiin pisaroittain 100 ml:aan etyylieetteriä, jolloin saatiin 710 mg ruskeata sakkaa.

Tätä sakkaa sekoitettiin seoksessa, joka koostui 6 ml:sta ani-solia ja 6,5 mlrsta tr ifluorietikkahappoa jäissä jäähdyttäen, yhden tunnin ajan. Reaktioseokseen lisättiin tämän jälkeen etyylieetteriä, jolloin saatiin 430 mg ruskeata sakkaa. Tämä sakka suspendoitiin 10 ml:aan vettä ja suspension pH-arvo säädettiin 7,0 natriumasetaatilla. Liukenemattoamat osat suodatettiin pois, jonka jälkeen suodos puhdistettiin käänteisfaasi silkageeli koionnikromatografiällä, jolloin saatiin 50 mg otsikon yhdistettä.

Esimerkki 146 7/^-(2-( 5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yy li) - (Z )-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-({E)—3—((l-metyyli-2R-hydroksimetyvli-4R-hydroksi-l-pyrrtlidinio)-l-propen-l-yvli)-3-kefeemi-4-karboksv-laatti OCH.CN iocr ch,oh 1.0 g kokeessa 10 valmistettua yhdistettä liuotettiin 10 ml:aan etyyliasetaattia ja 8 ml:aan etyylieetteriä.167 mg N-metyyli-4R-hydroksi-D-prolinolia lisättiin siihen ja saatua seosta sekoitettiin yön yli, jonka jälkeen reaktioseos lisättiin 100 mlraan etyylieetteriä ja muodostunut sakka suodatettiin eril-leen, jolloin saatiin 840 mg keltaista jauhetta. Tähän jauheeni. seen lisättiin 6 ml anisolia ja 8 ml tr ifluorietikkahappoa - 122 - 89169 jäissä jäähdyttäen, puolen tunnin ajan.Seosta sekoitettiin vielä puolentoista tunnin ajan. Reaktioseokseen lisättiin tämän jälkeen 100 ml etyylieetteriä ja muodostunut sakka suodatettiin ja suspendoitiin 4 mitään vettä ja suspension pH-arvo säädettiin 7,0 natriumasetaatilla. Liukenemattoamat osat suodatettiin pois, jonka jälkeen suodos puhdistettiin käänteisfaasi siika- | geeli kolonnikromatografialla, jolloin saatiin 24 mg otsikon yhdistettä. * >

Esimerkkien 147 - 154 mukaiset yhdisteet saatiin esimerkkien 145 ja 146 kohdalla selostetulla tavalla.

V ^Τ?-°ΟΝΗ'-Γγδ^

^ I sOCHtCN

CΧΧΧΧϊ{\<ΧΧ + \=/ ^kokeen 10 yhdiste) A’ ...» (Aita vastaava amiini) > * H,N ® J— OCHjCN U I _

COO

Sellaisessa tapauksessa, että ryhmän A ammonioryhmästä johtuen muodostui useampia isomeerejä, jokaisen eristetyn isomeerin saanto ilmoitetaan.

I! - 123 - 891 69 ' ‘ ' r» • o tl • rH • · o ^ iJ \w/ li i i

et- O CO

Ji CO LO *-· ϋ o s t- t>

4J

(C

•H

s! O Oö Ob e* ~ \ O O o ei .— · · · S cc ΓΟ -H *-4 * J* c r * ε :<r

^ /-N

;« :<c

E

/-V

f C

~ %\ 4J

C E : M E «e .5 < : O O °* i *c i Φ

- w I <o o S

:c, i CJ» ΙΟ O V- ►- %»✓ < -1 . 1 I· 4 - - '' — j .

n , . EC se < a a?o o - κοκ Ö ϊ i \ a o X o \U >—o \S S' aja a \ a a o-a-o o-a-o +l +l +l .. ·; - “

U ^ CD

* Γ* φ ö it V ^

“** E ^ H

•·. ·Η i—* Γ ®

J w _ I I

_r ' 124 89169 p — — Ί I __

C

u f * * ί S* 8* * 1 CO ^ S « Ξ

2 ' * CM N W N

" τ-t y-f

O

3 H

«I

u ® I 8* <* «*>

Sc ^ O o o si ° ® ** cj 4! <C h 00

ί I

:co •M « :3 ffi

E Z

1 = :i 8 ~ , J ΐ ϊ o I ί ί ? "8 1 :| O \4 Jo O ** ' Jj ^ ΙΛ J 1 CM t- m

CO J2 5 r-i ^ O

j < ~ I * n 0t

f.—— X X

** JT

£C K

Z Z ., ►»? < g?Y a"aV ° a -cL § \ °ψ> *ψ MS Γ a* lx a 1 X 'x >° a’ T a a" \ a" 0-2—0 0—2—0 2 0-2—0 0-2-0 +l +l Ί "Ί Ί - .H - ------' " “

JC

Jt U o ·“· fM «f SÄ in “* «λ in it.

Z .-1 Ή r-t -H (—* m _l_______ ί • 125 - 89169 —

J

X

. S’ • ct> Λ A · ® £ · 5 *· a} 2 8 j C* I «D w e h ·». a} 5 3 h " ’ B ί a ; « »-· » fl. f

^ . y* * ϊ I

S Λ Ä ft « « « ® Co® ΰ * 5 » ί * T a * a ^ n C « a a5 ~ if ~ S « « S- w a ® -^ · w . 2 . a; 1 -i £ "1 b * *ι e «·> ct ^ ® . ε £. ί 2 “ 7 » 2 -* -* » m I w 5C t-

Zrf- Ο · β 8“ m •o 2 Ί H n ϊ· *4 P) « . ___ W M <Q to .» IH*

S ; 5 . :} 0 S

-· B. Ϊ 3 V a » » o g o a ** e* ** to “? h- w «5 • φ · · · tP * s 1 s i s 1 $ «D IfJ O _C O lO o * « a *s » w *

>-s . ^ ’-J

Λ ·β 5 ·β *β ^ . 'Ή .

·» «MMM · Μ

R H Ä Α lii S A

. <- Ο Γ> ( *-4 ·—< Ο ·—*

C Q X w ^ ^ W

·:· = O 8 g g g ϋ g

tt ^ ^ «5 » φ v V

3-- — c - - ........ — — — — " - '

C I

s o .H „ - . ‘. jj e. io U5 £ C — o — Ϊ - f- «5 * *5 o — - X ns ·5 c z - “ s ·-* o »o ^ «ui t'. t— w 8 C I*- 0) w t» to * c a'-'

“ M a *H *-H

- . * o _____ AJ — ’ 1 — — — — " —

05 H

£ i ® S 00 O' ®

... P O pH

: ! BC

- 126 - 89169 m m ^ £ 3“ •J CO ® X j Ί JS . ^ 0 7 ^ e SC . m t» JL JS B « e· 0 Ä

^ S -i j? · S*T

•i ’ s 5? -rf ~ i \ ss-: •d*r äsi a «i-i a S ä - S- ®. * T o » ΐ ° Ξ *? i 2 t- *° k Λ »' ^i·?- i o ^ ? «o'g'w Ό ^ . X ^ n ? , . . B. s a ε K s ^ . " . -e

SS·'* e*0* - s 3 ^ ~ 'S 2 K

- o S _< 5 5 S « S a "- - ίΓ " • s o ^5 tw* · w es w rc to _ w 1Γ 7 £ r 3 · ί “ί S s » . · 1 i 5 ' i * s ί 5 ' 2 "”-i.

^leTaj^eas-B . ~7χτ B ^ 5 ”* S B 4 ~ -* 3 ~ «o w 35 t S ς 1 s 5 S . S e « v ® B λ m · 5i in e “ us «*< j e ·?. "f · 1«. 5 « n o ^ rt . to rt e. rt S ^ ® 4 * * Ί H ^ ν' * « * · ~ . 2 9 ^ ~ . » g Λ .

40 · M »o »E t*· · «^ N 5 e ~ * - J · -· J . ί · Ϊ . «O ®. 23 ^ ffi ® ® M W 40 CO ΪΤ? K · ^ 5? ^ « 1 H. ΐ e s ® ; S3 2 v « ® “ Λ ft. r Λ rt « X ^ "5 2 2 2 °. js* x ". 2 S . 0 H 2 ^ -d T3 « - ’ j e N T jf V f ai as ^ . S C- Ό . >~5 ^ X T3 ΐ J * ^ S ·® i ^ o Ϊ ^ -drtrtX* X ” . X X ~ rt w ® X eo ui ^ ;®:ι;3ϊ^ = η*7§2 s " s S Jf » a 5 S ®. s 5 ® N SS3·-' !« 5 " ” - « ^ g -* S S ^ CÖSiS *»n β kJ «o t* β w ® rt ~ 2 f~ . *T X n .

_A»®ÄBio-; a A n ^ x ^ ^ t- ^ ^ ^ A * ί -i 2 ^ -i a x tJ w ♦{ T? * *2 w I Ό V β I M B I m ^ I T3 ^ 40 O »r-* m O e ►—<** O ^ t-* O T* *r* (tW zS^CSv 3> < ^ 2 ^ ' (« N O Λ π <©γ:·Ο©ι0 ^ ift

's-''rtrtt2'-/rtrtt2'—'Wrt W rt TT lO

f e • r" ....

*- LO o o o o oo e.

t. coco to rt r— to cm e _

«e _ tO lO LO LO CO tOtO

"« .£, **< -+ ·“< —' —< >-< « i e z *" ** * ** -.„ OO LO LO LO o o o

Ji; r‘ t-o too too to o -¾ C t^to Lo t~to r~ io a O. 1—1 '—i »—» ^ ^ · IS ; je

Jm ^ CD

») Ä <* tr tr tr

E * <-* r-t γΊ —I

·#« m l ui —_L1--- * " " " " ..... 1 - 127 - 89 1 69 • · ^ 3 ΐί ^ ·. 3 -g 3

t- . «O · X

.·?. T s ί j J · sd S

ΐ i S ä S ^ 5 -: 7 * =»s § as S- * * ai te ^ tj 2 « £ f - E h ? ^ ä ^ s *β fcf «ö f <=° 4

S 3 ä ί 5 ää S ai * ^ST

- ä ^ si « “* T Φ s c-· S ~ Ξ ~ Γ * ϊί ^ c ί ä J' « · “a — 8 w. s «ή S | S a' ^ ®. S ~ ”0 τί Ä ** ® o S J* Ξ- S τ § δ a- 5 * ^ 4 » - « i S ΐ « 4 · « S » f a * ~ af

S X* ^ « β ® ^ Ϊ M S S

^ c*^wj x * λ *- w ^ w Μ* x * ^ ί . * w M* ^ S ^ ^ ® S a 55 i o s ® — 53 coo

* P3i‘N«wB^n I r- 5 ^ 5 ^ B

ο- ι-0ρ4®«οθ2<Χί'»*,>10 Γ?(*ϊ©χ*-ΐ X * £ 10 S -r ®i "s Ιί as r* X - ® 10 'S' “ί T *3“ 8 «n 3 B "I o> 3 «n -«

'j "J η · ή S j ) « s ί»· co * · * O » II

2 s S T * S · a * s rf a ΐ 2 a o- ^ z ® t S 4 » w ®. 5 ® v i h j I h »·, <

t3 -o .* C ^ < V S S a S K

TSW^STji^c’OiJIcdOjgVS·

-· *R - c. m ® as c- . ^ ώ j X

CO * CD CO · 'ϊ' » CO Ji ^ ί Ä O * <0 ^ . X -I ~ . β · w -β* i ® -1 03 ™ H ^ K S 0 · Μ Λ 'O M* M* iO ♦ * 0 -; Λ ^ ^ Λ »8 5 a3£o*°iw 4} ** - 3 § ^ - s s - - i ~ s· - ^ ^ s _ r-ioS ί£Τ^ *® «o e5 ® B jr n .a «Λ«οΛιι»οβ> χχ^χ

• . · *^ β Ti . * _J “ . - Jww-I

. - . «Η . U v *β * 13 hi *0 · hi hi *0 w Id | -Ö -° ΙΟ |·β·0«|13ββ I m © -a o a x’ 5 g s af a: o x* x‘ x‘ g 5 5 s g S'-"'-'* « f w ·—i^Miow«0«or»'”^,tc*~i«e,"H'iC>«D«-i w ai V id w n e e w ri te t» ^ n n id t-

-- C

4j . o o m o o o o o o : o.

u t— ta t- ta coco m o τΓ c _ e _ com to «n «o «n «o o «n Λ _ *1 <H 1—< 1-1 fl »1 1-1 1-1 1-1 _ d * Z . . * » · ...

5 «no in«n «n«n «noo £ r" «n o «no» «no «ocoe> £ ·“ 8 t- «o r>- in t- «n r- «o «n _ « s_/

C ft «H ^ H ^ H H pH fH «H

h- m N «sa^a,

:· ΐ <* o £ DJ

4) d Tr «n ‘Λ 1/1

... 8 * M rH ^ -H

2_L--L--- - 128 - 891 69 s sä ~

2 £ N S

oi r S

T ·» ® . T

4 ^32 3 * n s 2 *» 5 x t e «

σ» w ^ » .S

r 5 k ^ ^ cj Λ « c ό a 2 ^ . 2 a ~ t-*

e «T* . »H «A

/-S - " t- w o .

a ►J «) uj O

•a n 5 · -2- «r E

— Μ [Τ' S ί « ς |5 ci λ . 2 " ^ 5 ® ΐ s v ^ T ^ 4 s “ “ » US ^ - >ft ^ , M Λ *0 V lO ) £ o’ ^ si 2 ^ Λ λ Σ2- ® a ^ <o o. o λ —^ ^ vo f ° £ £ . »j ez ,-i *"*. ^ «S · f) n a ® ·» 5

Cd . o» a ·** r- X

et- K » - X H *-< 2 ^ ^ 00 · w ^ «5 Z Ό N tE o ^ ,*j <— I! = ?3 ^ ^ 3 - a **. C « £ . 53 ® - Ό 1C Ji « · N J* ? ro>*^ . »—I *~> 1’ a « · x · -2 i3 -Sts -S -e

O ~ -i «O ^ ~J »H

i « j — s . a? a a --cömscc

►J *0 < »· ro «H

J; n», « j; <d k H U3 0O | ie et) ^ T> ^ -i

Jf - . J ^ T5 · >*“n ^ ^ #·* J t3 & e } Ό © tt ί S a a a S a* ai a* W _l N W J f) P) 2J> w» w v 5 v v v

G<>* O CO O CO © tO

φ H φ W φ H C4 ΓΟΙΛί~^Ι*01000

C

*- U0 O o o

Ck.

U VD C-J VD CSJ

• -< vo m id to £ 0 • i g · · » · g -h o o o o o. w _* « 4j I vo en «o o> «M © O t— LO h U) C Cl'-' t-ι m —« »-i «-« T-i •H — - , JK-- 4tf i* Ό J £ ^ ΙΛ •S ^ - L w — Il—--- 1 - —i - 129 - 891 69

Esimerkki 155 7 -(2-(5-amino-l,2,4-tiadiatspl-3-yyli)-(Z)-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-karbamoyylimetyylidimetyyliammonio)-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti ν-ttC-conik^s ch, u /S'* N J- N^^WC0NH'

Dirr.etyyliglysiiniamidia (64 mg) lisättiin liuokseen, joka koostui kokeessa 10 valmistetusta yhdisteestä (39G mg) etyyliasetaatissa (15 ml) ja tätä seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin etyylieetteriä ja muodostunut sakka suodatettiin erilleen ja kuivattiin, jolloin saatiin kellertävänruskeata jauhetta (260 mg).

Tähän jauheeseen lisättiin trifluorietikkahapon (2 ml) ja ani-solir, '1,5 ml) seos, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Saatuun liuokseen lisättiin etyyiieet-teriä ja muodostunut sakka suodatettiin erilleen ja pestiin etyylieetterillä. Sakka suspendoitiin veteen (5 ml) ja suspen-sion pH-arvo säädettiin 5,5 - 6,5, minkä jälkeen liukenematto-mat osat suodatettiin pois. Suodos puhdistettiin käänteisfaasi kromatografiällä, jolloin saatiin haluttua tuotetta (37 no).

Esimerkki 156 7 - ; 2-' 5-arrdno-l, 2,4-tiadiatscl-3-yyli )-(Z )-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(1-metyyli-4-sulfamoyyli-l-piperatsi-nio)-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti CH, N—rC—CONH^—.—\ ^

Jr J^-SOaNH, 'O-CH^N0 »00-

• · I

- 130 - 89 1 69

Kokeessa 10 valmistettua yhdistettä (500 mg) liuotettiin di-kloorimetaanin (5 ml) ja metanolin (1 ml) seokseen ja tähän lisättiin N-sulfamoyyli-N-metyylipiperatsiinia (145 mg), minkä jälkeen seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 4 tunnin ajan. Muodostunut liuos väkevöitiin ja siihen lisättiin etyylieette-riä. Muodostunut sakka suodatettiin erilleen ja kuivattiin, jolloin saatiin kellertävänruskeata jauhetta (450 mg).

Tähän jauheeseen lisättiin trifluorietikkahapon (3,5 ml) ja anisolin (3 ml) seos, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Saatuun liuokseen lisättiin etyyiieetteria ja muodostunut sakka suodatettiin erilleen ja pestiin etyyiieetterillä. Sakka suspendoitiin veteen (5 ml) ja suspension pH-arvo säädettiin 5,5 - 6,5, minkä jälkeen liukenemattomat osat suodatettiin pois. Suodos puhdistettiin käänteis-faasi kromatografiällä, jolloin saatiin haluttua tuotetta (39 mg).

Esimerkki 157 7/3--(2-( 5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - (Z )-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((E) - 3-(1,4-diatsabisyklo(2,2,2)oktaani-l-io )-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksvlaatti n-^-c-conh—

COO

Kokeessa 10 valmistettua yhdistettä (500 mg) liuotettiin etyyliasetaatin (6 ml) ia metanolin (0,5 ml) seokseen ja tähän lisättiin 1,4-diatsabisyklo(2,2,2 )oktaania (90 mg), minkä jälkeen seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 20 minuutin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin etyylieetteriä ja muodostunut sakka suodatettiin erilleen ja kuivattiin, jolloin saatiin kellertävänruskeata jauhetta (330 mg).

Tähän jauheeseen lisättiin trifluorietikkahapon (3 ml) ja ani- - 131 - 89169 solin (2,5 ml) seos, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 1 tunnin ajan jäissä jäähdyttäen. Saatuun liuokseen lisättiin etyylieet-teriä ja muodostunut sakka suodatettiin erilleen ja pestiin etyylieetterillä. Sakka suspendoitiin veteen (5 ml) ja suspension pH-arvo säädettiin 5,5 - 6,5, minkä jälkeen liukenemattomat osat suodatettiin pois. Suodos puhdistettiin käänteisfaasi kromatografiällä, jolloin saatiin haluttua tuotetta (48 mg).

Esimerkkien 158 - 161 mukaiset yhdisteet saatiin esimerkeissä 155 - 157 selostetulla tavalla.

Esimerkki 158 7fS- ( 2- ( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yy li )- {Z )-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-( (E)-3-(4-karbairoyylipvridinio)-1-propen-i-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti N—ipC-CONH—1—r' ^'Ί + “O-CHjCN f _ C00

Kokeessa 10 valmistettu yhdiste (600 mg) saatettiin reagoimaan 4-karbamoyylipyridiinin (235 mg' kanssa *a suojaryhmä pcistet-tiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (37 mg).

Esimerkki 158 (2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((E)—3—(1,3,4-oksadiatsol-2-yyli)metyylidime-: tyyliammonio)-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti

N-irC-CONH--r—sS'-. °H’ N-W

::: H^S^n O—CHjCN (Iqq- CH.

- 132 - 89169

Kokeessa 10 valmistettu yhdiste (600 mg) saatettiin reagoimaan 2-dimetyyliaminometyyli-l,3,4-oksadiatsolin (163 mg) kanssa ja suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (54 mg).

Esimerkki 160 7^-(2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((E)-3-(1,2-dimetyyli-1-pipertsinio)-1-pro-pen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (isomeerit A ja B) K-r.-COHH-^S CH.

h/S' COO" CHj

Kokeessa 10 valmistettu yhdiste (510 mg) saatettiin reagoimaan 1,2-dimetyylipyratsolidiinin (0,4 ml) kanssa ja suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua isomeeriä A (20 mg) j= isomeeriä B (20 mg).

Esimerkki 161 Ίβ- i 2-{5-arino-l,2,4-tiadiatsol-3-vyli)-(Z)-2-syanometoksi-iminoasetamido)-3-((E) - 3-(1,5-diatsabisyklo(3,3,0)oktaani-l-io)-l-propen-l-yvli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti N—frc — C°NH-1—i^Svi M N (fXfJ'VN/f"? O-CHjCN υ I ί ) COO"

Kokeessa 10 valmistettu yhdiste (600 mg) saatettiin reagoimaan 1,5-diatsabisyklo(3,3,0)oktaanin (220 mg) kanssa ja suojaryhmä poistettiin, jolloin saatiin haluttua tuotetta (39 mg).

(f “ .133- 89169

* - — » ·*— “ » /"N

/-n rt * 4J s ~ - *» ε . .in

i2 ^ T

V * e s

K c rt CO

rt ^ g . . ‘ vJ

.•9 . Λ ^ < cd cr> /-n . ro . . — . _· 2 B- '"S S οό .-v — *Ρ .ro *? ·* n B'-'^ 5o>*J t o o Q ^ —· 0° -a S O Jg t ί v

Z 2 Λ N *ί ^ ««S

3 f- _,* CO® « 9 '-' S · - n *2® •o · ^ ^ ·ε <^0 4J u " _ Tai. m c - a X rt i . S ^ = ^ .a =? - -a ® ~ % : -co ^ . .

ro co'-' JL — X

- ^ 4 O ® ^ '•'to ~ rt S * 2 S ® f 8 S? ’Ϊ; X · f CO ΙΟ *τ·Γ>ί.

a? m, —: o ^ ,c? ~ ^ o ^ - C ^ ^ rt" ^ • ___' CO · /"Ί fT) * s * t “ ^ ro - n o) C* a O' rt CD rt S?®. *em -»r -o 5 -«r — 03 rt — r; oS® - s — rt rt - rt CM ^ . CM Ji C CJ — Z ^ O '-'to — ^ ^ = ^ ? s * ςτ S 5 2 s * =91 __. rt _* _· rt ^ rt _· rt Y oo rt * rt S-·-' ^J. * — W /-s w ^ ^ K ΓΟ /—s N^/ * |0 '“N <^v

'w'' N wNi: J N _ ro ^ »q N

0 = 2 O S o un S g I.SS

a · Op.· ^ oo · rt /-v o o rt crj rt ^ rt Tf co 3 ό cc

Il li H II . Il II

“J ς rt rt rt rt a rt rt β 03 ΛΝ * i; /—s k * /rt, » W /rt, M · · . . · *β -O · «O *0 # O Λ e N-/ -o T3 * * * Ό # . Ό . Ό , # *β ς*5 1 a s I a* s i a s 1 ^ a" s .·;·. O — Oco— O . cj Ocrjco — ... CO w- v-^ CO %»✓ ' CO n-/ \—/ CO j w' 'w- 2 c· cd 2cm 2 c o 2 m r- cn ... a q in q c — q c ro c - rn rt w ιό r-1 W ΙΛ t-1 ^ T* CO w ui ό o> * £ :Y I o in • - o. c σ> & in m c _ —1 ^

QC

1e 2, o co ® o _ t— σι οι r- m 4 o in m id c z — — — —i £. u _- * - · · < u ' o m m o

• . . U M CD ID CD CD

• u, ti ^ r- r— t- t- - c e.'-' :.:►-· •m — . ___ - . -------

4tT

Jt —.

u in vo r- <*> ... i d in to m tn : : .3 Ä r-π <-h «h *h «

. . L U2 --___ __1.. I J

- 134 - 89169

• «"-N

^ a

M o /-N

s . «

t'· S * S

m ° «5 ·£ 9 — '-'S «3 N S in . . —

»ä N t» «r* /-> H

^ «S a ^ -o S i ^ .s “» 9 5 2 w ~ * I a· cvj •°2 " ί γ _ . w ^ . »n o In S ^ 2 B -i m ^ ^ Ν* B 1? .n ro ^ «a _ ^ = o.^ o ^ -* S-iJ o ~ - -o .S3 " » ” S * e a ^wC? - t: a ^ ~ -r n _ g m oo a oo « 9 w a u 9 n *-«, - ® o 2 9 *-> -τ<ιη"ο — o * a <o '—' m t S i * = ’ i ~ 3 " S » 7 8- = lii g 5 f i - ~ a: ? -£ w . . li .« Ν "£ a _ m. a ^ a "o 1-3 —" - .9 2 9a· EN- ε - psj c-a®

_ NN®1 ^ c-e^i E N II

2 ~ - a £ -* a* - o - ~ *> ^ J3 N·^ N ~ — SO- ib o o v_' s_z »h ^ ® · is-- v_^ co a · . « · un ‘ _ in _ w m · a — n S 2 m ® ma ~ ^ , ro t— ^ *5 ^ s_y

m __ I n l a N N

ώ a j£ in. .a ®. m i a P

® n · 9 ^ ^ © 9^- "™o^* ro m 05 — E E oo —< E 2 Nm®*

Il . . Il .11 II

a -a· a a -s a ό -o a· /-> . E r-v ID CM ^ CM “ o 13 -D 9 'S 'S "Π » ^ O «-ΟΛ f 7 m in ? m 7..

1¾¾ I t*· ** f n *▼* *f« -f· w *-n r-3 ^ ro 10 w ^ ^ m

Www to . f w w 7 ^ 1 cc w w Σ c C «E lo lo o S lo ro !Sr*o Q Ci -» Q CD Cj O Q CC ^ O Γ0 ! ^ ^ cö ^ n in oi wcot^ w tn co

C

4-i LO

CL CT.

w> m J - Ä fs »

« ^ LO lO O O

- O Cl o o c 7 o m m m e —< —· —< o --- ci u .· - - - .

« *j · o m o m l- K ID ID (O to

Ui tl <-> f- t- t» ^- c o.w —* —· «-H «-) ►H « . ·ν4 e—^^ _

JM < OD

s «. σ' I I ^ Ϊ £ m o O io

.5 -H VO ID -H

• I ·—f • cc____ 1--*-1---1- li

Koe 11 (lähtöaineen valmistus) -135- 89169 2-(5-trityyliamino-1, 2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluori-metoksi-iminoasetyylihappokloridin hydrokloridi V n-*—c - coa OCHN-^ Ν * -HC1

Q » "''OCH.F

Fosforipentakloridia (395 mg) liuotettiin dikloorimetaaniin (2,9 ml) ja jäähdytettiin -5°C:een. Liuokseen lisättiin kokeessa 2 valmistettu yhdiste (627 mg) ja liuosta sekoitettiin kahden ja puolen tunnin ajan yllä mainitussa lämpötilassa. Reaktioliuos lisättiin seokseen, joka koostui n-heksaanista (9,4 ml) ja n-oktaanista (9,4 mi). Muodostunut kiteinen aine otettiin taiteen suodattamalla ja pestiin n-oktaanilla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (325 mg).

Sulamispiste: 139 - 140°C (hajoaa'

Massaspektri (m/e): M ..... 480 ( Cl), 482 ( Cl)

Inf rapuna-absorptiospektr i ( cm-^-, Nujol): 1795, 1780, 1740, 1630 NMR-spektri ( £> , DMS0-d6): 5,79 (2H, d, J= 54 Hz), 7,31 ( 15 H, s), 10,09 (1 H, s) • · Koe 12 ( lähtöaineen valmistus) 2-(5-trityyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z) - 2-fluorimet-oksi-iminoetikkahapon etvyliesteri :Y: N~h-C” COOCjH» H*N^C"N n • · · i -ne- 89169

Kokeessa 1 valmistettua yhdistettä (2,00 g) sekoitettiin tri-fluorietikkahapossa huoneenlämmössä 30 minuutin ajan. Liuotin haihdutettiin pois ja jäännös puhdistettiin silikageeli kolon-nikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (405 mg).

Sulamispiste: 172 - 173°C

Infrapuna-absorptiospektri ( cm-1, Nujol): 1730, 1615 NMR-spektri (^/ DMSO-d6): 1,28 (3H, t, J= 7,0 Hz), 4,34 ( 2 H, q, J= 7,0 Hz), 5,83 (2 H, d, J= 54,5 Hz), 8,27 (2H, brs)

Koe 13 ( lähtöaineen valmistus) 2-i5-aminc-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)—(Z)-2-fluorimetcksi-imino-etikkahappo

Ν-τ—C-COOH

H|N V* N^OCH:P

Kokeessa 12 valmistettua yhdistettä (200 mg) suspendoitiir. etanolin (6 ml) ia veden (2 ml) seokseen. Siihen lisättiin 1 N natriumhydroksidin vesiliuosta (1,75 ml) ja seosta sekoitettiin 60°C:ssa 1 tunnin ajan. Etanoli tislattiin pois reaktioliuok-sesta ja liuoksen pH säädettiin arvoon 2 käyttäen 1 N kloori-vetyhappoa. Saatu liuos puhdistettiin käyttämällä "Dia-Icn SP207" (ei-ionisen adsorptiohartsin tavaramerkki, jota hartsia valmistaa Mitsubishi Chemical Industries, Ltd.), jolloin saatiin otsikon tuotetta (30 mg).

Infrapuna absorptiospektri (citi*·1, Nujol): 1720, 1620 NMR-spektri ($, DMSO-dg): 5,74 (2H, d, J= 55 Hz), 8,24 (2H, br) li -137 - 891 69

Esimerkki 14 (lähtöaineen valmistus) p-metoksibentsyyli 7β-( 2-( 5-trityy liamino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminoasetamido)-3-((Z)-3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti O N-T C-CONH^-^S . α

0^Hi/s'NNOCH!Foi- N

Λ COOCH,-^-OCH,

V N

Etyyliasetaatin (37 ml), tetrahydrofuraanin (5 ml) ja dikloori-metaanin (15,7 ml) seokseen lisättiin N-(trimetyylisilyyli)ase-tamidia (8,17 g) ja p-metoksibentsyyli 7 -amino-3-((Z)-3-kloo-ri-l-propen-l-yyli) -3-kefem-4-karboksylaatti hydrokloridia (3,33 g), liuos jäähdytettiin -20°C:een, minkä jälkeen siihen lisättiin kokeessa 11 valmistettu yhdiste (3,80 g) ja sekoitettiin 10°C:ssa 1 tunnin ajan. Reaktioliuokseen lisättiin etyyliasetaattia (500 ml), seos pestiin useampaan otteeseen vedellä, kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, 1 N kloori-vetyhapolla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, minkä jälkeen • - lisättiin vedetöntä magnesiumsulfaattia seoksen kuivaamiseksi.

Liuotin haihdutettiin pois ja jäännös puhdistettiin silikageeii kolcnnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (4,33 g)·

Tuotteen infrapuna absorptiospektri ja NMR-spektri olivat yhtäläiset kokeessa 3 valmistetun yhdisteen arvojen kanssa.

. . Koe 15 ( lähtöaineen valmistus) 2-syano-2-f luorimetoksi-iminoasetamidi NC-C-CONH,

N

! ^OCHjP

- 138 - 89 1 69 2-syano-2-hydroksi-iminoasetamidia (22,6 g) liuotettiin dime-tyylisulfoksidiin (100 ml), minkä jälkeen lisättiin kaliumkarbonaattia (55,2 g) sekoittaen huoneenlämmössä, ja sekoitusta jatkettiin 20 minuutin ajan. Fluoribromimetaania (27 g) liuotettiin dimetyyliformamidiin (20 ml) ja lisättiin liuokseen, minkä jälkeen liuosta sekoitettiin 20 tunnin ajan huoneenlämmössä, jonka jälkeen se annettiin jäähtyä. Reaktioliuos lisättiin jääveteen ( 1 litra) ja uutettiin kahdesti etyyliasetaatilla (150 ml). Orgaaninen kerros pestiin kahdesti kyllästetyllä suolaliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla , minkä jälkeen liuotin tislattiin pois. Jäännös pestiin etyylieetterillä ja kuivattiin, jolloin saatiin otsikon tuotetta (14,4 g).

Sulamispiste: 124 - 125°C

Infrapuna absorptiospektri ( cm“^, Nujol): 3410, 3290, 3150, 1690, 1590 NMR-spekt r i DMS0-d6): 5,94 (2H, d, J* 54,0 Hz), 7,85 - 9,40 2 H, r).

Koe 16 ( lähtöaineen valmistus) 2-f lue r im. et oksi-imin cprepaar.idinitr iili

NC- C-CN

II

N

'^och2f

Seos, joka koostui kokeessa 14 valmistetusta yhdisteestä (14,0 g), asetonitriilisä (15 ml), natriumkloridistä (15 g) ja fosfo-rvylikloridistä (14 ml) refluksoitiin 2 tunnin ajan. Seokseen lisättiin fosforyylikloridia (5 ml) ja lämmitystä jatkettiin 2 tunnin ajan. Reaktioliuos jäähdytettiin ja lisättiin jääveteen (200 ml), minkä jälkeen liuosta sekoitettiin huoneenlämmössä yhden tunnin ajan. liuos uutettiin kahdesti metyleenikloridilla I: - 139 - 89 1 69 (50 ml). Uute pestiin 5 %:lla natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja kyllästety118 suolaliuoksella ja kuivattiin tämän jälkeen vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin pois. Saatu öljymäinen tuote tislattiin alipaineessa, jolloin saatiin väritöntä öljymäistä otsikon tuotetta ( 9,1 g).

Kiehumispiste: 69 - 70°C/ 25 mmHg NMR-spektri (6, CDC13): 5,85 (2H, d, J= 52,0 Hz)

Koe 17 (lähtöaineen valmistus) 2-syano-2-fluorimetoksi-iminoasetamidiini h2n C - C- CN HN ||

N

^ och2f

Seos, joka koostui 28 % ammoniakkia (50 ml), ammoniumkloridia :6 g' ja etanolia {5 G ml) jäähdytettiin -5°C:een ja siihen lisättiin sekoittaen kokeessa 16 valmistettua yhdistettä (9,1 g), minkä jälkeen jatkettiin sekoitusta samassa lämpötilassa 3 tunnin ajan. Reaktiolluokseen lisättiin vettä (100 ml). Liuos uutettiin kolmesti metyleenikloridilla (50 ml). Uute kuivattiin : vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois.

: Jäännös pestiin etyylieetrerillä ja kuivattiin, jolloin saatiin otsikon tuotetta (3,4 g).

Osa tuotteesta liuotettiin etanoliin ja siihen lisättiin jää-etikkaa pisaroittain samalla sekoittaen. Muodostunut saostuma otettiin talteen suodattamalla ja pestiin etanolilla sekä kuivattiin, jolloin saatiin tuotteen asetaattia. Seuraavat fysikaaliset tunnusluvut kuuluvat asetaatille.

Sulamispiste: 125 - 127°C

Infrapuna absorptiospektri ( cm"^·, Nujol): 3200, 1670, 1570 NMR-spektri (£, DMSO-d6): 1,90 (3H, s), 5,95 (2H, d, J= 54,0 Hz), 7,40 (3H, b)

Koe 18 ( lähtöaineen valmistus) - 140 - 89169 2-(5-amino-l ,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(E)-2-fluorimetoksi-imino-asetonitriili

N--Π- c -CN

11 il

N N

h2n-^\s/ \

ö xOCH2F

Kokeessa 17 valmistettu yhdiste {3,0 g) liuotettiin metanoliin (50 ml) ja siihen lisättiin trietyyliamiinia (4,2 g). Liuos jäähdytettiin - 5°C:een ja siihen tiputettiin bromia (3,5 g).Tämän jälkeen liuokseen lisättiin kaliumtiosyanaattia (2,1 g) metanolissa - 3°C ja - 5°C lämpötilassa ja liuosta sekoitettiin tässä lämpötilassa 2 tunnin ajan. Muodostunut sakka otettiin talteen suodattamalla ja pestiin vedellä ja metanolilla. Sakka uudelleenkiteytettiin asetonissa, jolloin saatiin otsikon tuotetta (3,4 c ).

Sulamispiste: 236 - 238°C

Infrapuna absor pt iospekt r i ( Nujol): 3450, 3250, 3075, 1610, 1520 NMP-spektri (<5, DMSO-dg): 6,02 (2H, d, J= 54,0 Hz), 8,32 (2H, b >

Koe 19 ( lähtöaineen valmistus) 2 -( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z)-2-fluorimetoksi-iminc-asetarr.idi N-n-c-CONHo

ΓΊ II

Ann H?N \ / \ 2 Ns' och2f li -141- 89169

Natriumhydroksidin (0,23 g) vesiliuokseen (18 ml) lisättiin 35 % vetyperoksidin vesiliuosta (7,4 ml). Siihen lisättiin kokeessa 18 valmistettua yhdistettä (2,0 g) sekoittaen huoneenlämmössä. Liuosta sekoitettiin vielä 8 tunnin ajan lämpötilassa 25°C - 30°C. Muodostuneet saostumat kerättiin talteen suodattamalla, pestiin vedellä ja asetonilla ja kuivattiin, jolloin saatiin otsikon tuotetta (1,3 g).

Sulamispiste: 210 - 211eC

Infrapuna absorptiospektri ( cm"^·, Nujol): 3450, 3260, 3180, 1690, 1610 NMR-spektri (<$, DMSO-dg): 5,73 (2H, d, J= 55,0 Hz), 7,69 (2H, br), 7,98 (1H, br), 8,10 (lH,br).

Koe 20 ( lähtöaineen valmistus) 2-'5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-(Z )-2-fluorimetoksi-imino- eti kka.-iappo

N-n- C -COOH

ft I II

N N

f \ S ^OCH2F

H2N

Seosta, joka koostui kokeessa 19 valmistetusta yhdisteestä (1,1 g) ja 2N natriumhydroksidin vesiliuoksesta (10 ml) sekoitettiin 5 00 C:s s s 5 tunnin ajan. Reaktioseos jäähdytettiin, sen pH sää-- detriin arvoon 1,0 väkevällä kloorivetyhapolla ja se uutettiin kolmesti etyyliasetaatilla (20 ml). Uutteeseen lisättiin vedetöntä magnesiumsulfaattia, se kuivattiin ja liuotin haihdutettiin pois. Jäännös pestiin isopropyylieetterillä, jolloin saatiin raakaa tuotetta (0,8 g). Raakatuote puhdistettiin kään-teisfaasi silikageeli kolonnikromatografiällä, jolloin saatiin otsikon tuotetta (0,4 g).

Tuotteen infrapunaspektri ja NMR-spektri olivat identtiset kokeessa 13 valmistetun yhdisteen arvojen kanssa.

• ·

Esimerkki 162 (injektioliuoksen valmistus) - 142 - 89169

Esimerkissä 1 valmistettu yhdiste (10 g) liuotettiin tislattuun veteen (50 ml). Liuos jaettiin ja infuusioitiin siten, että ampulli tuli sisältämään 5 ml liuosta. Tämä liuos lyofilisoi-tiin injektioliuoksen aikaansaamiseksi.

Esimerkki 163 (injektioliuoksen valmistus)

Esimerkissä 151 valmistettu yhdiste (10 g) liuotettiin tislattuun veteen (50 ml). Liuos jaettiin ja infuusioitiin siten, että ampulli tuli sisältämään 5 ml liuosta. Tämä liuos lyofili-soitiin injektioliuoksen aikaansaamiseksi.

Kyseessä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden akuutti myrkyllisyys ja antibakteerinen aktiviteetti määritettiin seuraavasti : (1) Akuutti myrkyllisyys hiiressä: Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet liuotettiin fysiologiseen suolaliuokseen ja annosteltiin suonensisäisesti viidelle, kuuden viikon ikäiselle ICR uroshiirelle.Tuloksena saatiin, että seuraavissa esimerkeissä valmistettujen yhdisteiden akuutti myrkyllisyys kaikissa tapauksiisa oli yli 2 g/kg.

Esimerkkien numerot: 1, 2-1, 2-2, 3-1, 3-2, 5, 6-1, -6-2, 7-1, 7-2, 9-1, 9-2, 9-3, 10, 11, 12, 13-1, 13-2, 96, 121, 137, 145, 146, 150, 151, 154 ja 155.

(2) Antibakteerinen aktiviteetti (MIC) - 143 - 89169 MIC-arvot (ug/ml) määritettiin agaari-laimennusmenetelmällä (Chemotherapy (Japan), 29, 76 - 79, 1981). Yön yli viljeltyjä bakteerikantoja Mueller-Hinton liemessä laimennettiin lopulliseen konsentraatioon 10®, ja 5 ui jokaista bakteerisuspensiota laitettiin Mueller-Hinton agaarilevyille, jotka sisälsivät antibioottien kahdet sarjalaimennukset. MIC-arvot mitattiin 18 tunnin inkuboinnin jälkeen 37°C:ssa.

Vertailuaineina käytettiin kefatatsimia (CAZ) ja kefotiamia (CTM).

__ · · 891 69 _ n . s - •ne o to <o to g h i oo tn lo oo m oo oo ® o· o r-J —! o ·—< o o «o ω cl u . o» <v <e

r-t *H r-ί H

»o m m in m E , cm tn cm cm oo m cm

Su cL 999999° u o to oooooöö

* e \Λ VI M VI VI

*e « c to m \ 0» lO O) lO 03

\ · U ir, —I o O O —I —I O

Ui V) Γ- _ « · · « · .

__ 0» oj i ooooooo a w u to

51 Ij L3 VH

rt!

^ E

- u

” HJ

r \ . -j m ininminm

7 (LC* 03 m 03 03 CM CM OO

a; ^ | x ooooooo 1' V ω oooooöö

^ S· VI VH VII VI! VI VI

- s 1 * "tr. o j in m m m mi C ϋ! CM m 03 03 CM m 03 Ϊ li^) ooooooo ΰ tl X ööööööö

l ij s VI VII VI VII VH

JC L3

(C

n c rt! U) 3 C 4) G; li 'C sa <0 i

$ £0 CM Ό< CM CM CM

tt a rsi ÖÖÖÖÖÖ Ö £ « S " £ w v « y^ -

3 4) , * jf ^ CM ^ CM

a i * ^y^ * ·* « i I I i m

£ Q* y"^ »S J CM CM CO CO

H * * 2 I: --, - us -_891 69 _ Λ» V) •D c ° 3*1 00 00 00 00 00 00 00 00 D nt il · .... _.

g Ui o O O O O O O O

CL· W .

41 rt) 10

H -M r-ί H

Z wioloioloioiolo m S' i CMCO04CSICnJCJCMCN> u a oooooooo ^ o ω oöööööö o * * MIMIMIMIMIMIMIMIj * ________ β w ! c lololololololoio! \ 4) COC'JCMOJC'JCMCMC'l' \ juin qqqoooooi Λ 4)4)1 o OÖÖOO O o i **· 1/3 £ « Mi Mi VH VH VII Ml Ml Ml ^ e ---1 - 4) •c rr)

o M

K -Qc LO m m LO m to ίο un Γ 4'0^ CMCVJCMCMOJCOCMCN) “ [ = ^ qqqooqqo - i iL· öööööööö

ί ~ * VII VI VII VI VII Ml VII VII I

Λ-: - - - . _ - ---—---------—i

.Ί S I

Z\

0 LO LO LO LO LO LO LO

: c: lOCSiCMCMOf^^^ O00oqqqq; 4) i dödödöoc ’** υ £ VH VH VII Ml VI VI M! i .. *- <n 1 .-ji ω i : 'κ.

£. ; .‘τ'.------ ‘•V----- ; (C (/) 3 f ®

£ M

Ό 3 a <0 1 <d · & £sj *-< C<1 .

•*«f. a S ddddddoo ’#* « .5.

•f,' ®» •*jf *“ 4)

. g . * tl -H CN3 I CS) ·—I CO CO

* ί s S f 1 1 1 I °° I 1 1 •2*: g·® / *2 x LO ld r- σ> en σ>

_ - its - 891 69_ I

* « .

. o ^ TJ C ° to to to to to 3 Hi moOmcOmOOmm S 3 u «-hÖ^Ö^Ö*-i —· CL Vi .

0) H ! J® . tom m mmm PZ Z cMOJmcg m cm cm cm «C-» oooooooo

CrtJ-H OOOOOOOO

21¾ έ VIIVI VI V1VIVI

O E Σ

—J

β |2 p mmm mm

j \ . ® CM CM CM m m CM CM

]N OO-IOOOOO

!ck 0) Oi I öööööööö i ? to υ to i * £ ω V» VI VI VI \Λ

; ^ E

i ___ ? mmmmmmmm

, . . \ CMCMCMCMCMCMCMCM

w Ώ c oooooooo ® |i * öööööööö

2lS u VIVIViVlVBVBVIVI

•—I c a

S

p. mm mmm m

cMCMmcMCMCMmcM

Uh-, oooooooo 4»I öööööööö

Is Vll Ml VI VI VI VI

ω 10 3 ω jjj ^ OO^Tt CMCMCMTj··^ «i öööööööö <T>

£ O

a. in « li to V 41

5 « «h —' CO —I CM

,ϊ Ϊ.5 | 2 2 2 I I2| I

Il I I_^2 2 2 li ___- 147 -_ b91 69_ n

w M

J c ο CO CD CO CD ID

g.^i oocoootoiD’-jtnio

4) O' a ooo*^»-ico»-^«-H

« 3 ω WWW

CL· U .

« <9 <0

«—I M H

VC TT ID ID CO CO ID ID

c <4 ^ COCOCOCOCOlDCOlD

«ρ ι OOOOOOOO

U ο ω oooooo o o

£6 VS VI VK VI VI VI

j _______

"3 J2 ; ID ID ID ID

“ CO CO ID ID CO CO i

\ . 5 m OOOO-HCOOO

U « r- © 0*000000 a *2 a \Λ \Λ \Λ V» «

^ E

V

<0 HI

% O Q 2 ID ID ID ID ID ID ID

·- ΐ o VC COCOCOCOCOlDCOCO

D _( g i OOOOOOOO

1 * 3 W ÖÖÖÖÖOÖd

S. VI VI VI VI VI VI VI

-H I

D --.--I

:--3 S 1

o ID ID ID ID ID ID

.¾ U CO CO CO CO CO ID CO ID

*:« pooooooo «X o’ ö ö ö ö ö ö d

::-¾ uS VI VI VI VI M VI

•V Λ • Λί ω o? H —^__ 4J ---- c >C 10 3 C φ

Oi ui tJ 3 a .•.*4» *·σ> corfcocococococo a S dodddddd

• *CJ 4J

• <C w • tr' .'•"•S ΐ · -. jc « ti a ·—i co

.*-2 * · ** ECO o o h CO I I

• a ·* / £. (Ct-< »-t co co co I I

•’•S ' 5 / X CO CO

5 g »S w co co --p Ί«Β - 891 69_ 5 Λ n • ο ·”*

« c o (O <0(0 tD LO LD

3 h i looomiooomiom «O' Q* *«—·>—! w D ω au.

41 « f

<8 LO LO LO LO

^ CO LO LO CO LO CO CO

«c^· O—JOOOOOO

cm r-ι ööoööööö

S·? ά VH Ml Ml VH

u o to t e S to

\ ei co LO

\ · υ in Οτί··—tco»—«coi—<o _ ^ S *7 oddddddd ? «o u w v« u ω Ml m

w E

V ID LO LO LO LO

(0 CO CO LO CO LO CO CO

-H 0»-i000000 oiqvc oddddddd * | * Mi Mi Mi Ml Ml

41 UJ

— c a

S

H <—I

O to LO LO

U CO LO LO CO LO LO CO

^ o-toooooo oil oddddddd

; υ 2 Ml Ml VI

! td i ! ! — — - --* — , , - ; m o

U COCOTt^rfTfriCO

2a oddddddd m i • o> G O Q. ro <0 10 C φ

AI

S / « -* Z / a tJ< LO t— oo o> o *-« co λ / »; Eco co co co co co co co 1 · / ti.« « il _a_ _ -149—· 891 69_ 1« m *£o co <o <o co <o 3 ^ I oomtninmootooo X £ £ CL U V <β -- OOO-.SS”'5 »CV .."^°Ooo SS.^ oooodddd

£ VK VH VH

O E r β 5 ID ID »n ^ u « £

r» 0»4»l OOOOÖOÖO

? vj υ io

S “ VI \Λ VI

E

s υ . S ggggSs^s « ^ r>c .Ppooooc £ * £ * oooddddc

S “SS «I VI VI VI VI VI

£ “ S.

----- - * S -- §·-: ί l”: S S S S S S £ S !

•H. u r> .^S^OOOO

S"’ n £ ©©OÖdddd 5·:· « 2 \λ vt vi v·· ω % aa · - a->: :---—---—_____ K · <0 vj 3 e o» 0) u !S 2^ doöddddd «J · σ> « £ °

-*·. CL CM

Ό ij «· I » J:· ΐ « •2"· £ < * 9· in co t- co σ> o oj £2 -¾. S X «j jjj co ca co co co ^ *· ^

jo. «x _χ^ ►»•j K

: 6- - o X g £ ω * ►> ...... ..- 150 -_891 69_ Λ « .

• Ο ^ _ τι c ° ΙΟ «Ο «Ο ΙΟ 3 w I ΙΛ 00 m ΙΟ 00 ^ W 00 S5S ^ ο -ΐ <=> θ' ^ 0 α b .

« * •L 10 in m

j j incMinwmcMincM

12 „ oopo o o o o cm-» ÖÖÖÖÖÖÖÖ i vi vi vi

O E X

"β « c in \ · in cm

N ·0ιΛ »-«T-iCMOrHO—<CM

U V) h· · · · · · · · · [- Φβ)ι oooooooo ir w υ to

51 b u VB

Λ ¥

^ E

® in in in ,. * CMCMinmtncMinin U> 1 £ oooooooo a> o to öööööööö

: 2i g VI VI VI

*-> *—1 £ > i s '

H

«Ή ° in m u m cm m in in cm mm b "j oooooooo ΦΙ ÖÖÖÖÖÖÖÖ

ij S VI VII

ω - ιο 3 ί 41

0 30, ^'^^^OOCM’^CM

-1 «I ÖÖÖÖÖÖÖÖ V . o\ m £ ° « α «m * m 1 w >, w O —^--—7- - -Si t) <-t s « / · a a , *5 ^ m m m m m in ie «x / ►. T3 * E- O X »f I «

* K I

- __ - 151 - öyiöy_ i *1 .

. o ** Ό C ° ID (O tO (O i 3 ** · m m in in oo.oo oo j VO1 · · · · · - · | U [i] *-H r-4 O O O Ci au.

« <e * . min mmmm m CM CM cm co co co Φ c ^ O O O »h o o o o C rt ööö öööo ö

S'? έ Ml Ml VI V« V« VII

O E Σ

/--N

~ö m c mm mm \ * m cm co m co cm m N C % £ oooooooo r- t)0>l ÖÖOOÖÖÖÖ 3* w u w * S “ VI VI VI \l

M-' E

a» ie ro m mmm

*-> f -> · u mcommcMmcocM

“ ^ Xl C oooooooo 4J J_1EI oooooooo S * l « Vi VII VII VI! > a Ή 4J-- « 2 -- ·? Zl t! o - - -S; u mmm mmmm

: : R · CM cm CM CM CM CM CM

U^ oooooooo ..:¾ *5 öddddddd

-;S « 2 VH Ml VH Ml Ml Ml M

... CjO

<c

: *-C

Ή -'.‘4-'----- •-‘.Π <c «n 3 c v T3 3ά CM'-iCM^CMrtCM^ ·* <oi ddöddddö oi · σ> * £ o

. . oi a CM

'•‘-’o " :Y& w . 0 —-----7----‘ ~ f* h I Mj : >2 « J, “ Q. co en o rl cm co ^ 10 ... 9 m / £; .3 e m m m m to to co 10 .·:.£ g2 s . . £.X*^ S ►. td -1-1-- is; -_89169__ to

M

. o ^ v C ©

X I to (O

« σ CL cooooooooooo. m m ω oööooö—Ι—ί

Ob U

« <o * * m m m m m m

-t H CM CM CM CM CM CM

V C 'f O O O O O O »“i *—<

So, OÖÖÖOÖÖÖ

SSSVIVIVIVIVIVI

O E Σ

/—V

£ to in io in \ . * cm cm cm m cm in N uwr- OO OO^-iOOt}-

cv 0)4)1 OOOOOOOO

ir V) 1/3

* S “ VI VI VI VI

^ E

S in in in in in to

r >. . -H CMCMCMCMCMCMLOlO

M-' jQ C oooooooo oooooooo

* ä 5 VI VI VI \Λ \Λ VI

' c a) s

H

H

S tn m m m in to

CM CM CM CM CM CM tO

bi>^ O O O O O O O —<

® ^ OOOOOOOO

£ 2 VI VI VI VI VI VI

ω «n 3 0)

a T^r-iCMCM^^^CO

mi öööoo’oöö • σ> .c o Cl γμ *

iJ

tn *·ι •f* "* ^ · Φ AI ✓ w

1 Φ V H

-) t «· 9" o t>- oo σ> o cm co 1 , "5 M ID o O ID t— f— t— t·—

\ %* »S K

** ►» w li I-1- - 153 - 8 9169- «9 ill ? s 2 2 S S 2 8 8 • Oio. ^dco-J ^co-- a, u .

« * «o in m m in Ή -H ^ CV3 CS> CN> in -in g^wooooo cm 3 ©dddddoo S' u ο. W Ml Ml ^ u o u O E Σ

/-N

"S 2 m 10 \ .5 (M m g * ·2 7 odd dodo©

«I W,K 12 V| VI

m

^ E

5 m ίο in m m m in « υ nc o^cSgggg '5 3| 2 o d d d d d d d

3^*1“ W VI VII VI VII

- g.

... ί 2 '

- -flj H

... v -J

• £ u in in uo ...:'·-« «2 o cg cvj o o o o o .:.¾ n m °°oddddo

:.-3 « 2 VI VII VII

u VII

<e . ·. · .n

- * -«H

‘ ----------- C ------ <c m 3 C 0) ai u !S 2 ^ d d d d d d d d

7 m I

. . 0 · (Tn : :*! no - - w a in F v) >1 -.:0 '—5---^ · ® ϋ 1 * 2* in c* oo *”1 cn co 3! *n • r* H / v · ε £- t~- oo oo oo oo oo

• - Λ ύ> 2 / >>·0 X

' 6h 5 g £ u ..... fci® ►» I-1- - ,sa -_89169__ « « • 0 £

Ό C ° ID

2 £ ci. coopoooouioooooo

W 3 td O o O O »-» O ’ Ö O

CL· U .

4» J? . iiniom inintnio

,H OlOJCaujCvJMCMCO

DC v OOOO OOO O

öööööööo Γο s νινινι νινινινβ o e Σ """ - ---- —J ' e n c ininioinmioinm

\ . * CVJCVJOJCVJCNJCOCOCVJ

oo oooooo

Ok 4)4)1 OOOOOOOO

* Ϊ 2 ««VIMVIVIVIVI

^ E

4) m loinioininininin

f) --< C^JCOCOCMCNJCOCNJCM

-Q C OOOOOOOO

ej O <X> · ··.....

E i OOOOOOOO

_ * S S VII VI νϊ VII VII \Λ Ml Ml oi 2 ~ --

•H

Ή o υ m in m in in m

CNJC9C0inmC9C9CN3 U >-} OOOOOOOO

OOOOOOOO

« 2 VI VI VI VI W VI

ω V) 3 «

k COC^C^C^OJCOCOCVJ

ooöööoöö

• ON

c o Q. CM «0 4J V) *"h w u

J tl Ή ·—I C'J

L·) /— ' " α 00 I I o N-) C9 CO 3" , ·ϊ * .2 1 00 I I 0> C> O 0> Oi st a °° ”_ -1- - 16ΓΤ- - 89 1 £Q_ Λ « .

. o ^

Ό c ° «O LO «Ο LO LO

ρπ > 000000—» W LO LO ΙΟ (I 17 α . . . . , n?u o o o ro *—< ι—ι au.

« Λ3 «o -tn ιοιοιοιηιοιηιηιη

-tn CS(MCM<MCMCMCslCVJ

0> C oooooooo 5S>^ öööööööö ?o S νΐ\ί\Ι\1\Ι\Λ\Λνΐ o e Σ

/"-S

* c v 2 LO m m io m \ ·υιη CNJCMC^lOCNJLOCNlLn

u tfl r- O O O O O O OO

Ä *5^ döddöööö

n ω VB VB Ml VH VH

w E

* v

f® Tl LO un LO LO LO lO LO

,r f) · * C^CMCOLOCMCOOOCM

2 £ Jr oooooooo ” 4J O Ό ........

•£j -I E ' OOOOOOOO

i _ * l “ VII VII VH M VH VII VII

> a

•f-J

1 s --

Jj —I

ζτ· * · O

/- - · u io m io lo io J ' ‘ LOCOOJIOCMC^ looo

—: : u <-> OOOOOOOO

φ ' . OM dddddddd 5 · « 2 VH Ml Ml VII Ml JC ω tl..

o..

-H" 4> "-- c · *- : ; w 3 g ai

T-j 3a NNOO ^NOINN

r! <0 i dddddddd a» . o m £ o

® O. IN

«- · * 2 : "

: M

1 : 1 · *2’": M M £ tn LO t- 00 CD g -< g

S../ i! ** · °» °> °» CDOOOO

*\\ 2£ “ --P - 156 -_891 69 _ m • o ^ TJCO CO CO «5 CO co to to 3*· ^ ^ * oo *-i m m

O 3 U fOi'O’-'COOCO -H^H

a. u .

4» ra « m m m m m to -< ^ cmiocmiocmcmcmcm el cv oooooooo COrH öoööoöoo

S·??· VI VI VIVIVIVI

Li o td

0 E X

i 1 -'“n — Λ β w c m to \ ei cm in in tn cm

\ 'Uin 0—^0—'OOOCM

Li </) f" . · . · _· _· __ οι o I oooooooo

^ ti u \41 VM

ra

^ E

® m in in in in in , . CMinCMCMCMCMCMin ö> oooooooo 4) p '•c ÖÖÖÖÖÖÖÖ

* Ml VI VI VH VII VI

' c ai s "

-H

•—i ° in in in to υ cMCMintnincMCMin J _J oooooooo 4)1 ÖÖÖÖÖÖÖÖ 1 5 M VI VII VI! ω I s i 4)

Li ^H^fCMTTCMOOCMrf ÖOÖÖOÖOO o> c o a «m ra

4J

tn

• H

Li 41

S / c -H

ϋ / i 2 a co to t«- oo rf in to t—

^ V · E O O O O H i-l t-l >H

I (g W |Q iH »H ^ ^ *H rH

S ·“ / »S X

δ/ Sf, « ----—r- - 157 - 891 69 <0 « * O £ «o to § S i ^rcooooooocomcomcooowoo JJ ^ Sj döödöö-^ö-Jodoö

Oi u Φ <0 id !

H

r—4 H

vc^ m io in m m io m in un uni

Jjj ^ c^CNjtvjc^c^rominNCMNinoj σ> U a, oooooooooooo o

Li O [t] _» ···«··«···* · ' 0 e ooooooooooooo 1 \Λ V» \Λ \Λ ΝΛ VS VII VII M! Vt ; i -«O ! e g i x 4j in m 1 \ · u in mun c^a in c^min mj 014)^ -*00—i00C\J—'000 — 0 a. 10 u i2 d o o d d d d d d d d d d

- I VII VII

— . --------- —-i to ^ ! v , x . .h un m m m m m un m un m mi “ ^ -Q c ΜΝΝΝΝΝΛΝΝΝΝΛΝ ooooooooooooo o) ω d d d d d d d d d d d d d .

£ ~ S. VT VK Vt \Λ \* VII vt: VT VII 'Vt vt !

. -J

- - -V n—· 1 — ..... - —— -- <0 «3 ·"< ^ mmmmmm mmm mi £ ;. υ CNaevjcvJCJCvjcsjmmcsic^csmoo; x : : : ooooooooooooo; -r- U, f-3 .............

^ 1 <l· X ooooooooooooo * I f S Ml Ml Ml VII Ml Ml Ml Ml Ml Mi

5 ...! ω I

!C . .

*T . .

Γ-Ι 0-* 1 — I - I —— — — - . ,-.- .-I I —........

r * I

τ VI

3 S Φ ^ Li **···»·«.··., ~3 D cl ooooooooooooo H <0 1 v · o>

m -CO

* a <m ^::: *

>. Λ- : W

O ·-Ξ5---“ V w e> < ej S “ *> ^ CD o. O rl I Irn—miOr^OD^ - : S »S 9-2-22 S N in cv 2 2 - : St £_ - 15B - 89169 Λ

M

1 0 λ Ό C ° 00 00 o ·Η I * · « σ α. ο ο m3 cd ο. .

« <β *!. ΙΛ ΙΟ 'Λ * Cd Cd —* * O o <υ c <τ Zj ζί

C rt» -4 O O

* σ> 1 ..

o"- q. \Λ vf

Vj o ω » YI

o e Σ •>«4 et <n c \ °

\ · U IT) *-1 TH

'-ΙΛ f" O o o* V v i ο σ -7 w «o ^ u to o» ^ ε

« J lO

3 ,* Cd lO

^ a 2 0 9

" vo O O

’r· —· E t

v * 3 * \A

Λ 4» ω V* >—1 c > « ί S ~

ro H

iJ —4

tn o lO

OJ υ lO CJ

« ‘ ^ o o — ^ ^ -· —*

u K X O O

U -C M

<l· υ z \Ä jj <n y* to <o j2 Ή U----- c «J to c 5 -S O O. 9 ‘ 9

? <0i O O

Φ · o\

* -CO

« a cm d «o jc w .2 *’C «> 3 S . a e , * 2.2 * 2 ^ * sf. “

II

----n_- 159 ·_89169_ <0 W .

• O ^ (0<0<0l0(0<0<0<0<0 *§ .5 wiftiowtninwioinoo O' CL 1—41—ί.-<ι—li-ii—<1—ϊι—<1—<d W 3 ω CL U .

α> n <0

^ * ift ΙΛ 10 m LO

φ c « »—»00»—<o»—«oo»—'«—<

Jj ^ dddddddddd

O' L| CL

U 0 U

O E

Σ -—> e » c to m in tn m \ *U»n iOC^OO^OO·—ti—1 φ φ ^ dddddddddd 2* to υ to

^ u UI

m

'S E

0) 3 m

- CJ ä £ LO LO LO IO LO LO

ς.: o *-< O O O O *—> O O *—* »—< 2 I äc dddddddddd ' 0) ILi ; ~ S.

I S ’-:-

m · «H

r, ... O

',::: u

-f Li Ό N r-l ri rH iH C9 rH 1—1 C9 iH

V X ..........

‘" OM OOOOOOOOOO

υ z ; «n

.. UJ

" w 3 “ 41

Li - 3 CL _ ·} 'O' —* · · · ......

J . . 00 OOOOOOOOOO

5 : : : a cm 1 · - « 2 ' j-> i, · -: w 3 ;Γ~^ —^ “ “ ii - · S v ^‘r>V0P»®0'OMfNC0^‘ ” * I 4J Q.'9, V 1J> ^ ^ UOiDUOUO L/Ί s jtf *· E*-1 μμμμΉμΉ*-· <“< » I fl W »H 5

2 :V:g-“x^ 5*3 S

• * κ ω I-1-r · 'i° ·_891 69_ « W .

^0o<£> © © «O © d h t moommmoocom «työ* .

10310 «·Η©«"Η·-*·—|©©~Ή CL U .

« m ^ h

H H

DC A _

cm i—l in 1C

g, S' oi. — -«OO^ q ° ω odööoöoö Σ a » \ ·υ»Λ ro*-‘Co—*»—'-~^c\3C^ u m ^ voi o o o o o © o o

ir CO U CO

^ Li to

(O

^ E

0) « a mm trO ^ £ 1/5 co m co m m "~. a> o ^ o-^ — coooo

Jr1 -161 & ies ϊ d o © © d © © © , e> to

t ~ g. ^ VI

·.* 4-' Ί - - —~T" " » _k •c S mm te H co m co m m —1 O *-* *““^ C ^3 ^3 © C> ς υ ........

u; ©ooooooc ί Is VII Vi α: υ z U 10

to (C X

• I-. _^— x-- c

CO VI

c ty 'C'^'^J'COTy*—C—lOJ

(U Li ........

T3 30, OOOOOOOO

‘71 <0 1 a; . σ*

m X O

® a cm r! « m ** >, 10 0 — * v ij < <n 1 · ί ϊ ·: S S S 2 2 2 SS» ί |5^ Si ^_ li I-1-p61 · 8916¾

.5 H

v c ° £ a h I 4/1 9> o· &· : _ tn 3 to © Q. U . ® « ^ " Λ — ---1 <0 *4 Ή

~t ψ4 I

« c « I

5 d> ~ι Ί ™ i

£ <=> ° I

o e i r · - 8 ! \ * 1 \ · U »n u tn t" vn ,

tk i) I» I <n <N

? w U w · ^ Li U O VO i « ^ e

~; ' I

2 * I

« υ Λ· ΐ j T, 4) 0 VO _< t —I ε 1 . .

Si ^ o o 1 ft * ω £ *-« c > « •w i I 2S ’ Ί m ^ 1 /, t g j - · · οι u i K ’ ! •H 1« *3 Γ4 -4 ; h. «* = ’ i

4) £ M O O

Qj V z *j n m ω £--1 c «c tn 3 C « ai u •H m Α «n

S " cA " N

m £ ° VO O

w a ex - - £ * *·; * 10 -- o —5---*3^--- M U *2 5 £ I ® O N Σ O M X ·· fi < F· 5 fc-S "ου h S / »X o ^ ν' 8B ►* * - 162 - 89169 3. Antibakteerinen aktiviteetti (MIC):

Antibakteerisen aktiviteetin vertailukokeita suoritettiin keksinnön mukaisten yhdisteiden ja vastaavien vertailuyhdisteiden, joissa on metyyli, välillä. MIC-arvot määritettiin samalla tavlla kuin edellä kuvattiin kohdassa (2). Tulokset käyvät ilmi seuraavasta taulukosta.

N n-C CONHv S ^ jy! tr i

H2tr ^ \ J CHsCHCHp-A

0-Rx T

coo" li - 163 - 89169 π m -r* m <—i C H -T O -C o g d o in m o o Tr · in 4_J 4J o (N o c ^-t r-^ o vo © m o m o ίο ω om m (Nm (n o x ε η* Λ m

« H N

3 ij m — 4)(0o m m «Nro m /H +j O'® o m o *""( «Nm i—i (n 0^0 · · ·

\ u Ui 3 O ·-( O m O (N OIO

rji ® öi > U '-i Ä S v» — «d________ Λ ~-- U g

- * U

Σ (D

-u υ (ON· m X) a) ^ m (N m omi o —i o -cr <» -m ·ή <n i-i u ω · · · * * ·

φ(0 O O O O O m O O

*J O

C *—l VII

ω u m • in o r 3 h vo mmm m mm

Q.. (D —I m (N *H (SJ (Nm (N

(0 Vj m · · · · · i-j 3) /—( vo m vo vD(N m vo

10 Π3 IO —I

« . » _ /«—V

• · ^ ^ 00 ® (" . irv rj (N (N c esi n* *“4 pm ·"! *H § -oi jc ~ j«: .* ~ jc m o * m —~ m .*m<-i «—t v. av m tJ on ro v. on -* on m (X tu Ϊ <N Ci- % (N m Cu Of <N ^ Cu ti C2 ovi ® mo( v Λΐ E —— i—1 -j E -v H (N ovi ® mo( *“ .Τ'1 -M Γ?ιη OH ™ — Sm * -Γ* ·- τιηοι •T'1 E 4?m m

X e *^t^*CN «e f-- * ‘H

u a» o 4? . o υ ί u n· · υ m u·# · ...__,_|1_5s__51 ~ 51 » . Ο Λ Λ f

..:.: X-Z+ Γ 1 X

:.: x° k > L- -J °-+2-υ L.______L_____Li__I f 1

Claims (3)

164 8 9 1 69 l. Menetelmä seuraavan kaavan mukaisen lääkeaineena käyttökelpoisen 3-propenyy1ike f eem i j ohdanna i sen: 10 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, jossa Rj on fluorisubstituoitu alempialkyyli tai syano-substituoitu alempialkyyli ja ryhmä A tarkoittaa seuraavan 15 kaavan mukaista asyklistä ammonioryhmää: *2 -+N-R4 K3 20 jossa R2, R3 ja R4 ovat samanlaiset tai erilaiset ja tarkoit tavat erikseen ryhmää, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat alempialkyyli, hydroksisubstituoitu alempialkyyli, karba-moyylisubstituoitu alempialkyyli, syanosubstituoitu alempialkyyli, amino, (alempialkyyli) karbonyyliaminosubstituoitu 25 alempialkyyli, aminosulfonyyliaminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, (alempialkyyli) sulfonyyliaminokarbonyylisubs-tituoitu alempialkyyli, (alempialkyyli) aminokarbonyylisubs-tituoitu alempialkyyli, hydroksi- ja karbamoyylisubstituoitu alempialkyyli, hydroksi- ja hydroksi(alempialkyyli) aminokar-30 bonyylisubstituoitu alempialkyyli, (alempialkoksi) aminokar- bonyylisubstituoitu alempialkyyli, hydroksiaminokarbonyyli-substituoitu alempialkyyli, karbamoyyli(alempialkyyli) amino-karbonyylisubstituoitualempialkyyli, hydroksi(alempialkyyli) aminokarbonyylisubstituoitu alempialkyyli, (alempialkyyli) 35 aminosubstituoitu alempialkyyli, karboksylaatti(alempialkyy li) di (alempialkyyli) ammoniosubstituoitu alempialkyyli, di-(alempialkyyli)aminosubstituoitu alempialkyyli, di(alempialkyyli) amino- ja hydroksisubstituoitu alempialkyyli, ureido, hydroksyyli, karboksyylisubstituoitu alempialkyyli, hydroksi- 165 891 69 ja karbonyylisubstituoitu alempialkyyli, alempi alkyylioksi-substituoitu alempialkyyli, di(alempialkyyli)aminokarbonyy-lisubstituoitu alempialkyyli, dikarbamoyylisubstituoitu alempialkyyli,bis (hydroksi(alempialkyyli))aminokarbonyylisubsti-5 tuoitu alempialkyyli, dihydroksisubstituoitu alempialkyyli, trihydroksisubstituoitualempialkyyli, bis(hydroksi(alempialkyyli)) aminosubstituoitu alempi alkyyli, aminosubstituoitu alempialkyyli, oksosubstituoitu alempialkyyli, dialempialkyy-lisubstituoitu alempi alkyyli, 5-renkainen heterosyklisubsti-10 tuoitu alempialkyyli missä mainittu heterosykli tarkoittaa pyratsolyylia, imidatsolyylia, oksadiatsolyylia tai tetraso-lyylia, tai A tarkoittaa jotakin seuraavien kaavojen mukaisista syklisistä ammonioryhmistä: *i R, Ri ?* JO J£> X) -X • · > t R, :Ό" -'Ό :Ό Ό . tp _ ^ :··: RS /--v _ -'' + Λ \ R / \ Λ 0 I ··; ^ n / - Ν/\ΛΝ __L> N H V_y r;-: / p5 r\^r5 166 89169 jossa R5 tarkoittaa ryhmää, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat alempi alkyyli, karbamoyylisubstituoitu alempialkyy-li, aminosubstituoitu alempialkyyli, hydroksisubstituoitu alempialkyyli, karboksisubstituoitu alempialkyyli, syanosubs-5 tituoitu alempialkyyli, dihydroksisubstituoitu alempialkyyli ja ureidosubstituoitu alempialkyyli, jolloin mainittu syklinen ammonioryhmä vaihtoehtoisesti renkaassa sisältää yhden tai useamman substituentin valittuna ryhmästä; hydroksisubstituoitu alempialkyyli, hydroksi, for-10 myyli, sulfoni, karboksisubstituoitu alempialkyyli, karba- moyyli, sulfamoyyli, karboksyyli, hydroksi-iminosubstituoitu alempialkyyli, iminosubstituoitu alempialkyyli, bis(hydroksi-(alempialkyyli))am inokarbonyy1i, hydroksi(alempialkyyli)a- minokarbonyyli, amino, morfoliinokarbonyyli, karboksi(alem-15 pialkyloksi)substituoitualempialkyyli, karboksi(alempialkyy- litio), sulfonisubstituoitu alempialkyyli ja alempialkyyli, tunnettu siitä, että saatetaan seuraavan kaavan mukainen yhdiste: 20 Ν-γ C -CONH^S. N i-N-(A-cH=CHCH X S0-R, 0 c00H 25 jossa R2:llä on sama merkitys kuin yllä ja X on halogeeniato-mi, yhdiste, jossa mainitut amino ja/tai karboksyyliryhmät on suojattu suojaryhmillä, tai näiden yhdisteiden suola, reagoimaan seuraavan kaavan mukaisen yhdisteen kanssa: 3° A' jossa A' on A:ta vastaava amiini, yhdisteen, jossa funktionaaliset ryhmät on suojattu suojaryhmillä, tai sen suolan 35 kanssa, minkä jälkeen haluttaessa poistetaan suojaryhmät.

2. Seuraavan kaavan mukainen yhdiste: li 167 891 69 N—r-Q—CONH-v^Sx

5 H^S-" I 0J~ ^CHt* CHCH2X O—Rx COOK jossa Rj on fluorisubstituoitu alempialkyyli tai syanosubsti-10 tuoitu alempialkyyli ja X on halogeeniatomi, yhdiste, jossa mainitut amino ja/tai karboksyyliryhmät on suojattu suojaryh-millä, tai näiden yhdisteiden suolat.

3. Menetelmä seuraavan kaavan mukaisen yhdisteen: 15 s^S_C0NHYrsi N Ln y^H-CHCH2X * \0-Rx ϋ C00H 20 jossa Rj on fluorisubstituoitu alempialkyyli tai syanosubsti-tuoitu alempialkyyli ja X on halogeeniatomi, yhdisteen, jossa mainitut amino ja/tai karboksyyliryhmät on suojattu suojaryh-. . millä, tai näiden yhdisteiden suolojen valmistamiseksi, tun- 25 nettu siitä, että saatetaan seuraavan kaavan mukainen yhdis te: N—rr-C -COOH // i IL N N >0 h2n ^O—»1 jossa R1:llä on sama merkitys kuin yllä, sen reaktiivinen : 35 johdannainen, yhdiste, jossa mainittu aminoryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suola, reagoimaan seuraavan kaavan mukaisen yhdisteen kanssa: 168 89 1 69 i ”"VA NVii^VVN‘CH= CHCH2X 5 C00H jossa X:llä on sama merkitys kuin yllä, yhdisteen jossa mainittu karboksyyliryhmä on suojattu suojaryhmällä tai sen suolan kanssa, minkä jälkeen haluttaessa poistetaan suojaryh-10 mä ja/tai muutetaan halogeeniatomi toiseksi halogeeniatomik- si. J > i j t li 169 891 69