FI89059B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara dipeptidiska fosfinsyraderivat - Google Patents

Description

1 89059

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten dipeptidisten fosfiinihappojohdannaisten valmistamiseksi Tämä keksintö koskee fosfiinihappojohdannaisten 5 valmistusmenetelmää.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavat fosfii-nihappojohdannaiset ovat yhdisteitä, joilla on yleinen kaava 10 12 3 4

R1 0 R R R

x-ch-p-ch9-ch-co-nh-ch-co-nh-ch-r5 I

I ‘

OH

15 jossa R1 on vetyatomi, tai C^_g-alkyyli tai fenyyli-(C^ ^-al- kyyli)ryhmä; 2 R on C2_g-alkyyliryhmä; 20 R^ on luonnon a-aminohapon sivuketju, jossa oleva jokin funktionaalinen ryhmä on mahdollisesti suojattu tai jossa oleva jokin aminoryhmä on mahdollisesti asyloitu asyyli-ryhmällä, joka on johdettu _g-alkaanihaposta, bentsoe-haposta tai luonnollisesta a-aminohaposta tai sulfonyloi- 3 25 tu, sillä ehdolla, että R ei ole vetyatomi tai metyyli- ryhmä ; 4 R on vetyatomi tai metyyliryhmä tai 3 4 R ja R yhdessä muodostavat ryhmän, jolla on kaava -(CH2>n-, jossa n on luku 4-11 päätepisteet mukaan lu-30 kien; 5 R on vetyatomi tai C^g-alkyyli-, karboksyyli-, C^g-al-koksikarbonyyli- tai C^_g-alkyyliaminokarbonyyliryhmä; ja X on joko syklinen imidoryhmä, joka on johdettu alifaat-tisesta tai aromaattisesta dikarboksyylihaposta, N-karb-35 oksiaminohaposta, atsadikarboksyylihaposta tai O-karbok- 2 89059 sihydroksihaposta tai ryhmä, jolla on kaava Rd Rc Rb Ra

ell II

R -N-CH-CO-N-CH-CO-NH- (a) 5 (L) (L) 0 jossa R on luonnon α-aminohapon sivuketju, jossa oleva jokin funktionaalinen ryhmä on mahdollisesti suojattu tai jossa oleva jokin aminoryhmä on mahdollisesti asyloitu asyyliryhmällä, joka on johdettu C16-alkaanihaposta, 10 bentsoehaposta tai luonnollisesta α-aminohaposta tai sul-fonyloitu, on vetyatomi tai Ra ja R*3 yhdessä muodosta-vat trimetyleeniryhmän, R on luonnon α-aminohapon sivu-ketju, jossa oleva jonkin funktionaalinen ryhmä on mahdollisesti suojattu tai jossa oleva jokin aminoryhmä on 15 mahdollisesti asyloitu asyyliryhmällä, joka on johdettu C1_g-alkaanihaposta, bentsoehaposta tai luonnollisesta a-aminohaposta tai sulfonyloitu, R^ on vetyatomi, tai Rc ja d 0 R yhdessä muodostavat trimetyleeniryhmän ja R on pepti-dikemiassa tavanomainen N-suojaryhmä tai asyyli-, g-20 alkyylisulfonyyli- tai fenyylisulfonyyliryhmä, jolloin 3 a 0 R :n, R :n ja R :n määritelmissä mainitut luonnon a-ami-nohapot on valittu ryhmistä väliini, leusiini, fenyyli-alaniini, tyrosiini, seriini, kysteiini, treoniini, meti-oniini, aspargiinihappo, glutamiinihappo, arginiini, ly-25 siini, glysiini ja alaniini ja niiden farmaseuttissti hyväksyttävät suolat.

Tässä käytettynä termi "C^_g-alkyyli", joko yksin tai yhdistelmissä, tarkoittaa suoraketjuista tai haarautunutta aikyyliryhmää, jossa on yhdestä kuuteen hiiliato-30 mia, kuten metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n- butyyli, isobutyyli, sek-butyyli, tert-butyyli, n-pentyy-li, n-heksyyli jne. Termi "C2_g-alkyyli" tarkoittaa suoraketjuista tai haarautunutta alkyyliryhmää, jossa on 2 -5 hiiliatomia. Termi "C^g-alkoksi", joko yksin tai yh-35 distelmässä, tarkoittaa alkoksiryhmää, jossa on 1 - 6 3 89059 hiiliatomia, jolloin esimerkkejä g-alkoksiryhmistä ovat metoksi, etoksi, n-propoksi, isopropoksi, n-butoksi, tert-butoksi jne. Termi "asyyli" tarkoittaa asyyliryhmää, joka on johdettu alifaattisesta karboksyylihaposta (esim.

5 Cj._g-alkaanihaposta, kuten etikkahaposta, propionihapos-ta, voihaposta jne.), aromaattisesta karboksyylihaposta (esim. bentsoehaposta tai bentsoehaposta, joka on substi-tuoitu yhdellä tai useammalla substituentilla, joka voi olla C^_g-alkyyli, C^_g-alkoksi, karboksyyli, halogeeni, 10 trifluorimetyyli jne.) tai aryylialifaattisesta karboksyylihaposta [esim. aryyli(C1_g-alkaani)haposta, kuten fenyylietikkahaposta jne.].

Termi "luonnon α-aminohapon sivuketju" tarkoittaa ryhmää R luonnossa esiintyvässä kaavan H_N-CH(R)-COOH mu- ^ 3 15 kaisessa α-aminohapossa. Siten, ottaen huomioon R :een liittyvän ehdon, sivuketju voi olla jokin seuraavista, joita vastaavat aminohapot on esitetty suluissa: vety (glysiini), metyyli (alaniini), isopropyyli (väliini), isobutyyli (leusiini), bentsyyli (fenyylialaniini), p-20 hydroksibentsyyli (tyrosiini), hydroksimetyyli (seriini), merkaptometyyli (kysteiini), 1-hydroksietyyli (treeniini), 2-metyylitioetyyli (metioniini), karboksimetyyli (asparagiinihappo), 2-karboksietyyli (glutamiinihappo), 3-guanidinopropyyli (arginiini) tai 4-aminobutyyli (ly-25 siini).

Mikä tahansa ryhmissä Ra, Rc ja R^ oleva funktionaalinen ryhmä voidaan suojata peptidikemiassa sinänsä tunnetulla tavalla. Esimerkiksi hydroksiryhmä voidaan suojata helposti lohkaistavan eetterin muodossa, kuten 30 tert-butyyli-, bentsyyli- tai tetrahydropyranyylieette rinä tai helposti lohkaistavan esterin muodossa, kuten asetaattina. Merkaptoryhmä voidaan suojata esimerkiksi tert-butyylillä, bentsyylillä tai muulla sellaisella ryhmällä. Aminoryhmä voidaan suojata esimerkiksi tert-butok-35 sikarbonyyli-, bentsoyylioksikarbonyyli-, formyyli-, tri- 4 89059 tyyli-, trifluoriasetyyli-, 2-(bifenylyyli)isopropyyli-oksikarbonyyli- tai isobornyylioksikarbonyyliryhmällä tai ftaali-imidoryhmän tai muun sellaisen ryhmän muodossa. Karboksyyliryhmä voidaan suojata esimerkiksi helposti 5 lohkaistavan esterin, kuten metyyli-, etyyli-, tert-bu- tyyli- tai bentsyyliesterinä tai muuna sellaisena esterinä.

3 c 3 R :ssa, R :ssa ja/tai R :ssa oleva aminoryhmä voidaan asyloida asyyliryhmällä, joka on johdettu C^_g-al-10 kaanihaposta tai bentsoehaposta tai luonnon a-aminoha- poista kuten on määritelty aikaisemmin. Vaihtoehtoisesti

g 0 O

R :ssa, R :ssa ja/tai R :ssa oleva aminoryhmä voidaan sulfonyloida esimerkiksi C^g-alkaanisulfonihapolla (esim. metaanisulfonihapolla) tai aryylisulfonihapolla 15 (esim. bentseenisulfonihapolla tai p-tolueenisulfoniha- polla).

0

Silloin kun R kaavan (a) mukaisessa ryhmässä on suojaryhmä, se voi olla jokin aminoryhmän suojaryhmä, joka on peptidikemiassa sinänsä tunnettu (esim. aikaisemmin 20 mainitut aminoryhmän suojaryhmät).

Kaavan I mukaiset yhdisteet muodostavat farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja emästen, kuten alkalimetal-lihydroksidien (esim. natrium- ja kaliumhydroksidin), maa-alkalimetallihydroksidien (esim. kalsiumhydroksidin 25 ja magnesiumhydroksidin) ja ammoniumhydroksidin kanssa jne. Ne kaavan I mukaiset yhdisteet, jotka ovat emäksisiä, muodostavat farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja happojen kanssa. Tällaisina suoloina tulevat kysymykseen eivät ainoastaan suolat epäorgaanisten happojen, kuten 30 vetyhalidihappojen (esim. vetykloridihappo ja vetybromi-dihappo), rikkihapon, typpihapon ja fosforihapon kanssa jne., vaan myös suolat orgaanisten happojen kanssa, kuten etikkahapon, viinihapon, meripihkahapon, fumaarihapon, maleiinihapon, omenahapon, salisyylihapon, sitruunahapon, 35 metaanisulfonihapon ja p-tolueenisulfonihapon kanssa jne.

5 89059

Kaavan I mukaisissa yhdisteissä on ainakin kaksi asymmetristä hiiliatomia ja ne voivat siten esiintyä optisesti aktiivisina enantiomeereinä, diastereoisomeerei-nä tai rasemaatteina.

5 Edellä esitetyssä kaavassa I R1 on edullisesti vetyatomi tai C^g-alkyyliryhmä, eritysiesti vetyatomi tai metyyliryhmä. R^ on edullisesti C^- tai C^-alkyyli- ryhmä, erityisesti n-propyyli-, isobutyyli- tai sek-bu- 3 4 tyyliryhmä. RJ on edullisesti isobutyyliryhmä ja R4 on 3 4 10 vetyatomi tai R ja R yhdessä muodostavat ryhmän, jolla on kaava -(CH„) jossa n on luku 5-9 päätepisteet Δ n5 3 mukaan lukien, R on vetyatomi tai R on isobutyyliryh-4 5 mä, R on metyyliryhmä ja R on karboksyyli- tai C-^g-alkoksikarbonyyliryhmä, erityisesti karboksyyli- tai 15 etoksikarbonyyliryhmä. Kun X on syklinen imidoryhmä, yksi sen edullinen muoto on ryhmä, jolla on kaava

O

20

V

O

’! 25 jossa P ja Q yhdessä muodostavat ryhmän, jolla on kaava -CH(Rf)-CH(Rf)-, -CH(Rf)-CH(Rf)-CH(Rf)-, -O-CH(Rf)-, -N(Rf)-CH(Rf)-, 30 -N(Rf)-N(Rf)-, -N=N- tai -C(Rf)=C(Rf)-, joissa kukin R^ on vetyatomi tai C^_g-alkyyli-, aryyli-, aryyli(C^_g-alkyyli)-, C^_g-alkanoyyliaminoryhmä tai 35 asyyliaminoryhmä, jossa asyyliosa on johdettu luonnon 6 89059 of-aminohaposta, jonka aminoryhmä on mahdollisesti suojattu, tai P ja Q yhdessä muodostavat mahdollisesti substituoi-dun aromaattisen systeemin, jossa mahdollinen substituoin-5 ti koostuu yhdestä tai useammasta substituentista, joka voi olla C^_g-alkyyli, Cj_g-alkoksi, halogeeni, hydrok-si, aryyli(C^_g-alkoksi), nitro, amino, Cj_g-alkanoyyli-amino, mono(C^_g-alkyyli)amino, di(C^_g-alkyyli)amino ja C^_6~alkyylisulfonyyliamino. Toisessa edullisessa muodos-10 sa syklinen imidi X on ryhmä, jolla on kaava jossa A on mahdollisesti substituoidun aromaattisen systeemin jäännös, jossa mahdollinen substituointi koostuu 20 yhdestä tai useammasta substituentista, joka voi olla C^_g-alkyyli, C^_g-alkoksi, halogeeni, hydroksi, aryyli-(C^_g-alkoksi), nitro, amino, C^_g-alkanoyyliamino, mo-no(C^_g-alkyyli)amino, di(C1_g-alkyyli)amino ja C1_g-al-kyylisulfonyyliamino ja Y on -O-, -NH- tai NRg-, jossa 25 Rg on vety tai C^_g-alkyyli.

Mahdollisesti substituoitu aromaattinen systeemi, jota on merkitty P:llä ja Q:lla yhdessä kaavassa (b) voi olla monosyklinen (esim. 1,2-fenyleeni tai tienyleeni) tai polysyklinen (esim. 1,2-naftyleeni, 2,3-naftyleeni, 30 1,8-naftyleeni, 2,3-antryleeni jne.). Merkintä A kaavas sa (c) voi olla mahdollisesti substituoidun monosyklisen aromaattisen systeemin (esim. bentseenin) tai valinnaisesti substituoidun polysyklisen rengassysteemin (esim. naftaleenin, antraseenin jne.) jäännös.

35 Erityisen edullinen syklisen imidiryhmän X muoto on ryhmä, jolla on kaava (b), jossa P ja Q yhdessä muo- 7 89059 dostavat ryhmän, jolla on kaava -C(R^)=C(R^)-, jossa toinen Rf on aryyliryhmä, erityisesti fenyyliryhmä ja toinen R^ on vetyatomi tai aryyliryhmä, erityisesti fenyyliryhmä. Toinen erityisen edullinen syklisen imidoryhmän X muoto on 5 ryhmä, jolla on kaava (b), jossa P ja Q yhdessä muodostavat 1,2-fenyleeni- tai 2,3-naftyleeniryhmän, joka on mahdollisesti substituoitu yhdellä tai useammalla substituen-tilla, joka voi olla C^_g-alkoksi, halogeeni, hydroksi, amino ja C^_g-alkanoyyliamino. Vielä yksi erityisen edul-10 linen syklisen imidoryhmän X muoto on ryhmä, jolla on kaava (b), jossa P ja Q yhdessä muodostavat 1,8-naftylee-niryhmän, joka on mahdollisesti substituoitu yhdellä tai useammalla substituentilla, joka voi olla C. ,-alkoksi,

i"D

halogeeni, hydroksyyli, amino, C^_6~alkanoyyliamino.

15 Edelleen yksi erityisen edullinen syklisen imidiryhmän X muoto on ryhmä, jolla on kaava (c), jossa A on bentsee-nirenkaan jäännös ja Y on -NR^-.

Kun X on edellä esitetyn kaavan (a) mukainen ryhmä, Ra on edullisesti luonnon ^-aminohapon sivuketju, 20 jossa oleva jokin funktionaalinen ryhmä on mahdollisesti suojattu tai jossa oleva jokin aminoryhmä on mahdollisesti asyloitu tai sulfonyloitu tai jossa oleva jokin karbok-syyliryhmä on mahdollisesti amidoitu, erityisesti isobu-tyyliryhmä ja Rb on vetyatomi, Rc ja Rd yhdessä muodosta-25 vat trimetyleeniryhmän ja Re on suojaryhmä, erityisesti bentsyylioksikarbonyyliryhmä tai asyyliryhmä, erityisesti asetyyliryhmä.

Edellä esitetyistä kaavan I mukaisista yhdisteistä erityisen edullisia ovat: 30 jf(3-aminoftaali-imido)metyyli7^'(RS)-4-metyyli-2-/T'(S)- 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen-tyylijfosfiinihappo, /"(RS)-4-metyyli-2-//‘(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyli7pentyyli7(1,8-naftaleenidikarboksimi-35 dometyyli)fosfiinihappo, β 89059 ^(R tai S)-4-metyyli-2-//"(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotri-dekyyli7karbamoyyli7pentyyli7(1,8-naftaleenidikarboksimi-dometyyli)fosfiinihappo, N-Z'N-Z'iR tai S)-2-/Y7Y/N-^l - (bentsyylioksi) karbonyyli7—L-5 prolyyli7-L-leusyyli7amino7metyyli/hydroksifosfinyyli/me-tyyli/-4-metyylivaleryyli7-L-leusyyli7-L-alaniini ja [[l,4-dihydro-2,4-diokso-3(2H)-kinatsolinyyli7metyyli/-/”(R tai S)-4-metyyli-2-/T‘(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotri-dekyy1 ij karbamoyy117 pentyy117 fos f i in ihappo.

10 Tämän keksinnön esittämän menetelmän mukaan edellä esitetyn kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat valmistetaan käsittelemällä yhdistettä, jolla on yleinen kaava 15 r1 o R2 R3 R4 I il I i I 5 X-CH-P-CH--CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-R τγ I 6

OR

2 3 4 5 2 20 jossa merkinnöillä R , R , R , R , R ja X on sama merkitys kuin edellä ja R® on C^_g-alkyyliryhmä, hapolla tai halogeenitrimetyylisilaanilla, modifioiden funktionaalisesti, jos halutaan, saadun kaavan I mukaisen yhdisteen X:llä merkityssä syklisessä imidoryhmässä oleva 25 reaktiivinen substituentti ja myös, jos halutaan, muuttaen saatu kaavan I mukainen yhdiste farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

3

Kaavan II mukaisen yhdisteen, edullisesti sellaisen, jossa R® on metyyli tai etyyli, käsittely hapolla 30 tai halogeenitrimetyylisilaanilla voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla. Siten esimerkiksi kaavan II mukaista yhdistettä voidaan käsitellä vetybromidilla etik-kahapossa huoneen lämpötilassa tai trifluorietikkahapol- 4

la inertissä orgaanisessa liuottimessa (esim. halogenoi-35 dussa hiilivedyssä, kuten dikloorimetaanissa jne.) noin huoneen lämpötilassa. Edelleen esimerkiksi kaavan II

9 89059 mukaista yhdistettä voidaan käsitellä halogeenitrialkyy-lisilaanilla, edullisesti bromitrimetyylisilaanilla, inertissä orgaanisessa liuottimessa (esim. halogenoidus-sa hiilivedyssä, kuten dikloorimetaanissa jne.) noin huo-5 neen lämpötilassa.

Kaavan I mukaisessa yhdisteessä X:llä merkityssä syklisessä imidoryhmässä oleva reaktiivinen substituent-ti voidaan modifioida funktionaalisesti, jos halutaan. Siten esimerkiksi nitroryhmä voidaan pelkistää aminoryh-10 mäksi tunnetulla tavalla, esimerkiksi hydraamalla katalysaattorin, kuten palladiumkatalysaattorin, läsnä ollessa. Edelleen esimerkiksi aryyli(C^_g-alkoksi)ryhmä, kuten bentsyylioksi, voidaan muuntaa hydroksiryhmäksi tunnetulla tavalla, esimerkiksi hydraamalla katalysaattorin, 15 kuten palladiumkatalysaattorin, läsnä ollessa. Edelleen esimerkiksi aktivoitu aromaattinen vetyatomi voidaan korvata halogeeniatomilla halogenoimalla tunnetulla tavalla.

Saatu kaavan I mukainen yhdiste voidaan muuntaa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi tunnettujen me-20 netelmien mukaisesti. Siten kaavan I mukainen yhdiste voidaan muuntaa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi käsittelemällä emäksellä, kuten yhdellä aikaisemmin mainituista emäksistä. Kaavan I mukainen yhdiste, joka on emäksinen, voidaan muuntaa farmaseuttisesti hyväksyt-25 täväksi happoadditiosuolaksi käsittelemällä hapolla, kuten yhdellä aikaisemmin mainituista hapoista.

Kaavan II mukaiset yhdisteet, joita käytetään lähtöaineina tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä, ovat uusia ja myös muodostavat osan tästä keksinnöstä.

30 Kaavan II mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa esimerkiksi kondensoimalla yhdiste, jolla on yleinen kaava R1 O R2

35 il H I

X -CH-P-CH -CH-COOH

| 2 III

OR6 10 89059 12 6 jossa ryhmillä R , R ja R on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu ja X1 on joko syklinen imidoryhmä, kuten aikaisemmin on määritelty tai ryhmä, jolla on kaava 5 RdV RbV’

e. I i I I

R -N-CH-CO-N-CH-CO-NH- (a · ) (L) (L) 10 jossa R on luonnon o£-aminohapon sivuketju, jossa oleva jokin funktionaalinen ryhmä on suojattu ja Rb on ve-a1 b1 tyatomi tai R ja R yhdessä muodostavat trimetyleeni- ryhmän, Rc on luonnon «-aminohapon sivuketju, jossa ole- d' va ]okm funktionaalinen ryhmä on suojattu ja R on ve-c1 d1 15 tyatomi tai R ja R yhdessä muodostavat trimetyleeni-0 * ryhmän ja R on suojaryhmä, yhdisteen kanssa, jolla on yleinen kaava „30 „4

R R

20 I J so

h2n-ch-co-nh-ch-r IV

jossa R3^ on luonnon «-aminohapon sivuketju, jossa oleva 4 jokin funktionaalinen ryhmä on suojattu ja ryhmällä R 25 on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu tai R30 ja 4 R yhdessä muodostavat ryhmän, jolla on kaava -(CH2)n-, jossa n:llä on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu ja ryhmällä R on sama merkitys kuin ryhmällä R aikaisemmin, paitsi että jokin karboksyyliryhmä on suojattu, 30 jolloin saadaan yhdiste, jolla on yleinen kaava R1 O R2 R30 R4 i I II I I I 50

X -CH-P-CH2-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-R HA

35 OR6 n 89059 jossa ryhmillä , R^, R^, R^®, R^ ja X* on sama merkitys kuin on annettu aikaisemmin, ja vaadittaessa muuntamalla mahdollinen suojattu karbok-syyliryhmä R3 karboksyyliryhmäksi, jos halutaan, loh- G * 5 kaisemalla suojaryhmä R ja sopivasti asyloimalla tai sulfonyloimalla saatu yhdiste, jos halutaan, lohkaise- a · ς · 30 maila mahdollinen R :ssa ja/tai R :ssa ja/tai R :ssa oleva suojaryhmä ja myös jos halutaan, asyloimalla tai sulfonyloimalla mahdollinen saatu aminoryhmä sopivasti 10 tai amidoimalla mahdollinen saatu karboksyyliryhmä.

Kaavan III mukaisen yhdisteen kondensointi kaavan IV mukaisella yhdisteellä voidaan suorittaa peptidikemias-sa sinänsä tunnetulla tavalla. Siten esimerkiksi kondensointi voidaan suorittaa happohalogenidi-, happoanhydri-15 di-, aktivoitu amidi-, sekahiilidioksidi- tai aktivoitu esteri -menetelmän mukaisesti. Edullisessa menettelyssä kondensointi suoritetaan aktivoitu esteri -menetelmän mukaisesti, erityisesti käyttäen hydroksibentsotriatsolia kondensoimisaineen, kuten Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-20 imidin läsnä ollessa.

Seuraavat vaiheet, jotka voidaan suorittaa kaavan IIA mukaiselle kondensoimistuotteelle, ovat peptidikemias-sa sinänsä tunnettuja ja niin ollen käytetyt menetelmät ja järjestys, jossa vaiheet voidaan suorittaa, ovat tun-25 nettuja alaa tunteville.

Edellä esitetyn kaavan III mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa antamalla yhdisteen, jolla on yleinen kaava

30 R1 O

1 I II

X-CH-P-H

I 6

OR

' : 35 jossa ryhmillä R*, R^ ja X* on sama merkitys kuin aikai- : semmin on annettu, 12 89059 reagoida yhdisteen kanssa, jolla on yleinen kaava R2

5 /\ 7 VI

H2C coop 2 jossa ryhmällä R on sama merkitys kuin aikaisemmin on an- . 7 nettu ja R on suojaryhmä (esim. bentsyyli), joka voidaan 10 selektiivisesti lohkaista R^:n läsnä ollessa, 7 ja lohkaisemalla pois suojaryhmä R saadusta yhdisteestä, jolla on yleinen kaava R1 O R2 15 i I II I 7

X -CH-P-CH,-CH-COOR VII

I 6

OR

1 2 6 7 1 jossa ryhmillä R , R , R , R ja X on sama merkitys kuin 20 on annettu aikaisemmin.

Kaavan V mukaisen yhdisteen reaktio kaavan VI mu-kaisen yhdisteen kanssa ja suojaryhmän R lohkaiseminen saadusta kaavan VII mukaisesta yhdisteestä voidaan suorittaa yleisesti tunnetuilla menetelmillä.

25 Kaavan III mukaiset yhdisteet, joissa X* on sykli nen imidoryhmä, kuten aikaisemmin on määritelty, voidaan valmistaa myös antamalla yhdisteen, jolla on yleinen kaava R1 30 2 I vt ti X -CH-Br VI11 jossa ryhmällä R* on sama merkitys kuin on annettu aikai-2 semmin ja X on syklinen imidoryhmä, kuten aikaisemmin on määritelty, 35 reagoida yhdisteen kanssa, jolla on yleinen kaava 13 89059 0 R2

Il I 7

H-P-CH-.-CH-COOR

1 z Ia OR6 5 2 6 7 jossa ryhmillä R , R ja R on sama merkitys kuin on annettu aikaisemmin, 7 ja lohkaisemalla pois suojaryhmä R saadusta yhdisteestä, 10 jolla on yleinen kaava R1 0 R2 2 I H I 7

X -CH-P-CH -CH-COOR Y

le

15 0R

1 2 6 7 2 jossa ryhmillä R , R , R , R ja X on sama merkitys kuin on annettu aikaisemmin.

Kaavan VIII mukaisen yhdisteen reaktio kaavan IX

7 20 mukaisen yhdisteen kanssa ja suojaryhmän R lohkaiseminen saadusta kaavan X mukaisesta yhdisteestä voidaan suorittaa yleisesti tunnetuilla menetelmillä.

Edelleen yksi menetelmä edellä esitettyjen kaavan II mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi sisältää sykli-25 sen imidoryhmän, jolla on yleinen kaava

RdV RbV*

e. II I I

Re -N-CH-CO-N-CH-CO- (d) 30 a' b' c' d' e' jossa ryhmillä R,R,R,R ja R on sama merkitys kuin on annettu aikaisemmin, liittämisen yhdisteeseen, jolla on yleinen kaava 35 R1 O R2 R30 R4 III I I 50 H.N-CH-P-CH -CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-R (XI ) Z | l ' * OR6 14 89059 jossa ryhmillä R*, R^, R^, R^, R^ ja R^® on sama merkitys kuin on annettu aikaisemmin, ja vaadittaessa suojatun karboksyyliryhmän, jota on mer- 50 kitty R :llä, muuntamisen karboksyyliryhmäksi, jos halu- 0 ' 5 taan, suojaryhman R lohkaisemisen ja saadun yhdisteen asyloimisen tai sulfonyloimisen sopivasti, jos halutaan, g I q t 30 mahdollisen R :ssa ja/tai R :ssä ja/tai R :ssa olevan suojaryhmän lohkaisemisen ja myös jos halutaan, mahdollisen saadun aminoryhmän asyloimisen tai sulfonyloimisen so-10 pivasti tai mahdollisen saadun karboksyyliryhmän amidoi-misen.

Syklisen imidoryhmän tai kaavan (d) mukaisen ryhmän liittäminen kaavan XI mukaiseen yhdisteeseen voidaan suorittaa peptidikemiassa sinänsä tunnetulla taval-15 la. Esimerkiksi syklinen imidoryhmä voidaan liittää antamalla kaavan XI mukaisen yhdisteen reagoida alifaatti-sesta tai aromaattisesta dikarboksyylihaposta, N-karbok-siaminohaposta, atsadikarboksyylihaposta tai O-karboksi-hydroksihaposta johdetun anhydridin kanssa tunnettujen 20 menetelmien mukaisesti. Kaavan (d) mukainen ryhmä voidaan liittää kondensoimalla kaavan XI mukainen yhdiste sopivan dipeptidin kanssa tai, edullisesti kahdessa vaiheessa, kondensoimalla kaavan XI mukainen yhdiste sopivasti suojatun luonnon (^-aminohapon kanssa, poistamalla kondensoi-25 mistuotteen suojaus sopivasti ja sitten kondensoimalla saatu yhdiste, josta suojaus on poistettu, edelleen sopivasti suojatulla luonnon ct-aminohapolla. Luonnollisesti havaitaan, että tässä edullisessa menetelmässä käytetyt suojatut luonnon o£-aminohapot voivat olla samoja 30 tai erilaisia.

Seuraavat vaiheet, jotka voidaan suorittaa tuo-teelle, joka on saatu syklisen imidoryhmän tai kaavan (d) mukaisen ryhmän liittämisen jälkeen, ovat peptidikemiassa sinänsä tunnettuja ja niin ollen käytetyt mene-35 telmät ja järjestys, jossa vaiheet voidaan suorittaa, ovat tunnettuja alaa tunteville.

is 89059

Kaavan XI mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa käsittelemällä kaavan IIA mukaista yhdistettä, jossa X1 on ftaali-imidoryhmä, hydratsiinilla tunnetulla tavalla, esimerkiksi käyttäen hydratsiinihydraattia inertissä or-5 gaanisessa liuottimessa, kuten alkanolissa (esim. metano-lissa, etanolissa jne.) noin huoneen lämpötilassa.

Kaavan XI mukaiset yhdisteet voidaan myös valmistaa antamalla yhdisteen, jolla on yleinen kaava 10 R1 o I H.

R8-NH-CH-P-H xi i I 6

OR

15 jossa ryhmillä R^- ja R8 on sama merkitys kuin aikaisem- g min on annettu ja R on suojaryhmä, reagoida edellä esitetyn kaavan VI mukaisen yhdisteen 7 kanssa, lohkaisemalla suojaryhmä R saadusta yhdisteestä, jolla on yleinen kaava 20 R1 O R2 8 I A I 7 R -nh-ch-p-ch2-ch-coor xiii L6 25 12 6 8 jossa ryhmillä R , R , R ja R on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu, kondensoimalla saatu yhdiste, jolla on yleinen kaava 30 R1 O R2

8 Ml I

R -NH-CH-P-CIU-CH-COOH XIV

I 6 2 ... OR6 35 jossa ryhmillä R*, R^, R8 ja R8 on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu, ie 89059 edellä esitetyn kaavan IV mukaisen yhdisteen kanssa ja

O

lohkaisemalla pois suojaryhmä R ja muuntamalla mikä ta-hansa suojattu karboksyyliryhmä R karboksyyliryhmäksi näin saadussa yhdisteessä, jolla on yleinen kaava 5 r1 o R2 R30 r4 o | Il I I I 50

R-NH-CH-P-CH,-CH-C0-N1I-CH-C0-NH-CH-R XV

10 jossa ryhmillä R*, R2, R*, R^, R®, R^® ja R^^ on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu.

Tämä viimeinen kaavan XI mukaisten yhdisteiden valmistusmenetelmä voidaan suorittaa myös yleisesti tunnet-15 tujen menetelmien mukaisesti.

Edelleen yksi menetelmä sellaisten kaavan III mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joissa X1 on ryhmä, jolla on kaava (b), jossa P ja Q yhdessä muodostavat ryhmän, jolla on kaava -N(Rf)-CH(Rf)-, sisältää kaavan VII 20 mukaisen yhdisteen, jossa X* on ftaali-imidoryhmä, käsittelyn hydratsiinilla, saadun yhdisteen, jolla on yleinen kaava R1 0 R2 25 I H f 7

H2N-CH-P-CH2-CH-COOR XVI

Ir6 12 6 7 jossa ryhmillä R , R , R ja R on sama merkitys kuin 30 aikaisemmin on annettu, kondensoimisen sopivasti suojatulla aminohapolla, konden-sointituotteen, jolla on yleinen kaava

Rf Rf R1 0 R2 35 M | H |

P-N-CH-CO-NH-CH-P-CH--CH-COOR XVII

17 89059 I 2 6 7 f jossa ryhmillä R , R , R , R ja R1 on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu ja P on suojaryhmä, käsittelyn suojaryhmän P poistamiseksi, saadun yhdisteen, jolla on yleinen kaava 5

RfRf R1 O R2 · II Ml I 7 HN-CH-CO-NH-CH-P-CIU-CH-COOR XVI11

Ir‘ 10 jossa ryhmillä R^, R^, R^, R7 ja R^ on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu, reaktion fosgeenin kanssa ja suojaryhmän R7 lohkaisemisen saadusta yhdisteestä, jolla on yleinen kaava

15 O

Rf 11 R1 o R2 I II I 7

I h-ch-p-ch2-ch-coor X1X

f/N>/

20 R II

o jossa ryhmillä R^, R^, R^, R7 ja R^ on sama merkitys kuin aikaisemmin on annettu.

25 Tämä menetelmä sellaisen kaavan III mukaisen yh disteen valmistamiseksi, jossa on ryhmä, jolla on kaava (b), jossa P ja Q yhdessä muodostavat ryhmän, jolla on kaava -N(R^)-CH(R^)-, voidaan suorittaa tunnettujen menetelmien mukaisesti.

30 Edellä esitetyt kaavojen IV, V, VI, VIII, IX ja XII mukaiset yhdisteet ovat tunnettuja yhdisteitä tai tunnettujen yhdisteiden analogeja, jotka voidaan valmistaa samalla tavalla tunnettujen yhdisteiden kanssa tai kuten tämän jälkeen esitettävissä esimerkeissä on esi-35 tetty.

is 89059

Edellä esitetyt kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat estävät kol-lagenaasientsyymiä ja niitä voidaan käyttää nivelten rappeutumissairauksien, kuten nivelreuman ja luu-niveltuleh-5 duksen hillitsemiseen ja ennaltaehkäisyyn.

Kyseisten yhdisteiden in vitro estävä vaikutus voidaan osoittaa kollagenaasilla, joka on saatu ihmisen nivelvoidesidekudossoluviljelmästä, Dayerin et al:n menetelmän mukaan Proc. Natl. Acad. Sei. USA 73 (1976) 945, 10 seuraten prokollagenaasin aktivaatiota vakioidussa väliaineessa käsittelemällä trypsiinillä. Kollagenaasiaktii- 14 visuus mitattiin käyttäen substraattina C-asetyloitua kollageenityyppiä I, joka oli saatu rotan häntäjänteestä ja käyttäen Johnson-Wintin mikrotiitterilevymääritysmene-15 telmää, B. anal. Biochem. 104 (1980) 175. IC^q on se tämän keKsinnön mukaisen yhdisteen pitoisuus entsyymin hajottamisessa, joka vähentää substraatin jakautumisen ja liukoisuuden 50 %:iin siitä arvosta, joka on saatu entsyymillä yksin.

20 Edellä esitetyn kokeen tulokset ja vastaavat tämän keksinnön mukaiset yhdisteet on koottu seuraavaan taulukkoon I.

Taulukko I

^ Kaavan I mukainen yhdiste IC50 A 5,6 x 10-8 B 6 X 10-7 C 1,6 X 10“7 30 D 1,1 X ΙΟ"7 E 2,2 X 10"7

Yhdiste A: N-/to-/'(R tai S)-2-/7777n-/'1-(bentsyyli-35 oksi)karbonyyli7-L-prolyyli/-L-leusyyli7aminpymetyyli7- is 89059 hydroksifosfinyyli7metyyli7-4-metyylivaleryyli7-L-leu-syyli7-L-alaniini.

Yhdiste B: /'(3-aminoftaali-imido)metyyli.7/(RS)-4-metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/-5 karbamoyyli./pentyyli/fosf iinihappo.

Yhdiste C: /"(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/pentyyli/(1,8-naftaleenidikarboksimidometyyli)fosfiinihappo.

Yhdiste D: /f(R tai S)-4-metyyli-2-/T"(R tai S)-2-10 okso-3-atsasyklotridekyyli7karbamoyyli7pentyyli/(1,8-naf-taleenidikarboksimidometyyli)fosfiinihappo.

Yhdiste E: //1,4-dihydro-2,4-diokso-3(2H)-kinat-solinyyli/metyyli//V(R tai S) -4-metyyli-2-//"(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli7karbamoyyli/pentyyli7fosfiini-15 happo.

Näiden yhdisteiden in vivo -aktiivisuus voidaan osoittaa käyttäen seuraavaa koemenettelyä. Naarasrotta-ryhmät saivat ihonalaisesti ajellulle alueelle selässä injektiona 10 x 0,1 ml tyypin II kollageeniemulsiota/ 20 Freundin epätäydellinen adjuvantti. 10 vuorokautta myöhemmin testattavaa yhdistettä annosteltiin kahdesti päivittäin 20 mg/kg annoksina kaulalaskimokatetrin kautta; annostelua jatkettiin 12 vuorokautta. Rottaryhmät, jotka saivat ihonalaisen injektion, mutta joita ei hoidettu 25 testattavilla yhdisteillä, toimivat verrokkeina. Mahdollista takajalan tulehdusta arvioitiin visuaalisesti tietyin välein kokeen kuluessa ja se ilmaistiin niiden osuutena koko ryhmästä, joilla oli merkkjä ihon punotuksesta ja/tai turvotuksesta. Radiologiset muutokset takajalan 30 nilkan alueella määritettiin kokeen päättyessä ja ne kvantifioitiin käyttäen mielivaltaista asteikkoa arvosta 0 = normaali arvoon 6 = voimakas muutos ja ilmoittaen tulokset ryhmän keskiarvoina. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen Mann-Whitneys "U" -testiä.

20 89059

Taulukko II

Tulehdus Reologiset tulokset_ _päivä 4_Telaluu_Kinner_ 5 Vertailuaine 8/11 2,28 ± 0,53 1,75 ± 0,45

Yhdiste D 3/12 0,86 ± 0,34 0,64 ± 0,37 Tässä taulukossa esitetty yhdiste D on nimetty ai-10 kaisemmin taulukon I yhteydessä.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan käyttää lääkkeinä farmaseuttisten valmisteiden muodossa, jotka sisältävät niitä yhdessä niiden kanssa sopivan kantaja-aineen kans-15 sa. Tämä kantaja-aine voi olla orgaaninen tai epäorgaaninen kantaja-aine, joka soveltuu enteraaliseen tai paren-teraaliseen annosteluun, kuten vesi, laktoosi, tärkkelys, magnesiumstearaatti, talkki, arabikumi, gelatiini, poly-alkyleeniglykolit, vaseliini jne. Farmaseuttiset valmis-20 teet voidaan valmistaa kiinteässä muodossa (esim. tabletteina, pulvereina, rakeina, peräpuikkoina, kapseleina jne.) tai nestemäisessä muodossa (esim. liuoksina, emulsioina, suspensioina jne.).

Jos on tarpeen, farmaseuttisille valmisteille voi-25 daan suorittaa tavanomaisia farmaseuttisia toimenpiteitä, kuten sterilointi ja muut sellaiset ja ne voivat myös sisältää farmaseuttisia lisäaineita, kuten säilytysainei-ta, stabilointiaineita, kostutusaineita, suoloja osmoottisen paineen vaihteluun jne. Kyseiset farmaseuttiset 30 valmisteet voivat sisältää myös muita terapeuttisesti vaikuttavia aineita.

Farmaseuttiset valmisteet voidaan valmistaa sekoittamalla kaavan I mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa ja, jos halutaan, yhtä 35 tai useampaa muuta terapeuttisesti vaikuttavaa ainetta 2i 89059 terapeuttisesti inertin kantaja-aineen kanssa ja saattamalla saatu seos galeeniseen annostelumuotoon.

Kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat voidaan annostella aikuisille 5 annoksina, jotka vaihtelevat välillä noin 5 - 30 mg, edullisesti välillä 10 - 15 mg, vuorokaudessa. Tietenkin ymmärretään, että tämä annosalue on annettu vain esimerkkinä ja että se voi vaihdella ylöspäin ja alaspäin riippuen eri tekijöistä, kuten yksityisen annosteltavan yh-10 disteen tai sen suolan voimakkuudesta, yksittäisestä hoidettavasta tilasta ja potilaan yksilöllisistä vaatimuksista, jotka määrittää hoitava lääkäri.

Seuraavat esimerkit kuvaavat tätä keksintöä. Näissä esimerkeissä saatujen yhdisteiden rakenteet varmistet-15 tiin ydinmagneettisilla resonanssitiedoilla, massaspek-treillä ja/tai mikroanalyysillä.

Esimerkki 1 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) Seosta, jossa oli 7,98 g (0,12 mol) kiteistä 20 fosfiinihappoa ja 15,96 g (0,15 mol) trimetyyliortofor-miaattia, sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpikehässä yhden tunnin ajan. Saatu seos lisättiin sitten pisaroit-tain sekoitettuun seokseen, jossa oli 7,98 g (0,037 mol) bentsyyli-isobutyyliakrylaattia ja 3,14 g (0,027 mol) 25 1,1,3,3-tetrametyyliguanidiinia, sellaisella nopeudella, että lämpötila pysyi välillä 0 - 8°C käyttäen ulkoista jäähdytyshaudetta. Kun lisäys oli suoritettu loppuun, jäähdytyshaude poistettiin ja seoksen lämpötilan annet-: tiin nousta huoneen lämpötilaan ja sitten sitä sekoitet- : '· 30 tiin kaksi tuntia. Seosta laimennettiin 250 ml :11a di- kloorimetaania ja liuosta pestiin 200 ml:11a vettä ja 200 ml:11a 10-%:ista rikkihappoa. Yhdistettyjä vesipi-toisia uutteita uutettiin kahdella 50 ml:n annoksella di-kloorimetaania ja yhdistetyt dikloorimetaaniuuttoliuok-- 35 set pestiin natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedet- : ' tömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin 22 89059 saatiin 12,62 g väritöntä öljyä, joka sisälsi bentsyyli-2-1(metoksifosfinyyli)metyyli7-4-metyylivalerianaattia.

(ii) 6,0 g raakatuotetta bentsyyli-2-7(metoksifos-finyyli)metyyli7-4-metyylivalerianaattia liuotettiin 30 5 ml:aan dikloorimetaania ja seosta jäähdytettiin jäähau-teessa samalla sekoittaen typpikehässä. Lisättiin 9 ml bis(trimetyylisilyyli)asetamidia ja 2,6 g di-isopropyyli-etyyliamiinia, seosta sekoitettiin viisi minuuttia ja sitten lisättiin 4,8 g N-bromimetyyliftaali-imidiä. Jääh-10 dytyshaude poistettiin ja seoksen lämpötilan annettiin tasaantua huoneen lämpötilaan, sitä sekoitettiin viisi tuntia ja sitten lisättiin lisää 20 ml dikloorimetaania. Liuosta pestiin 50 ml:lla 10-%:ista rikkihappoa ja 50 ml:11a natriumkloridiliuosta, kuivattiin vedettömällä 15 natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 8,6 g keltaista öljyä, joka puhdistettiin flash-kromatografi-sesti käyttäen silikageeliä ja eluointiin asetaatti/n-heksaania (3:1). Tällöin saatiin 4,22 g bentsyyli-2(RS)- f.C(RS) - (metoksi) (ftaali-imidometyyli) fosfinyyli/metyy-20 li.7-4-metyylivalerianaattia värittömänä öljynä.

(iii) 4,5 g bentsyyli-2(RS)-//(RS)-(metoksi)(ftaali-imidometyyli) fosfinyyli7metyyli/-4-metyylivalerianaat-tia liuotettiin 200 ml:aan metanolia ja liuosta hydrat-tiin 3,5 tuntia käyttäen 1,9 g 10-%:ista palladioitua 25 hiiltä. Suodatuksen ja suodoksen haihdutuksen jälkeen saatiin 3,0 g valkoista vaahtoa, joka sisälsi 2(RS)-[[. (RS) - (metoksi) (ftaali-imidometyyli) fosf inyyli_/metyyli/- 4-metyylivaleriaanahappoa.

(iv) 3,0 g 2 (RS)-/Z”(RS) - (metoksi) (ftaali-imidome-30 tyyli)fosfinyyli7metyyli/-4-metyylivaleriaanahappoa liuotettiin 50 ml:aan tetrahydrofuraania ja lisättiin 1,65 g L-leusiini-N-metyyliamidia ja 2,2 g hydroksibentsotriat-solia samalla sekoittaen. Kun kaikki kiinteät aineet olivat liuenneet, lisättiin 2,02 g N,N'-disykloheksyylikar- 35 bodi-imidiä ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Tetrahydrofuraani poistettiin haihduttamalla 23 89059 ja jäännös hierottiin hienoksi 100 ml etyyliasetaatin kanssa ja seos suodatettiin disykloheksyyliurean poistamiseksi. Suodosta pestiin kahdesti käyttäen kummallakin kerralla 50 ml kylläistä natriumvetykarbonaattiliuosta, 5 kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin keltaista hartsia. Tämä hartsi puhdistettiin flash-kromatografisesti käyttäen silikageeliä ja eluointiin 5-%:ista metanolia etyyliasetaatissa. Tällöin saatiin 3,32 g /f(RS)-4-metyyli-2-/Y (S)-3-metyyli-l-10 metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/-4-metyylipentyy- li.7 (ftaali-imidometyyli) fosfiinihapon metyyliesteriä valkoisena vaahtona.

(B) Menetelmä 123 mg /"(RS)-4-metyyli-2-/T(S)-3-metyyli-l-(me-15 tyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli7-4-metyylipentyyli7-(ftaali-imidometyyli)fosfiinihapon metyyliesteriä liuotettiin seokseen, jossa oli 3 ml etikkahappoa ja 3 ml 48-%:ista vetybromidin etikkahappoliuosta ja seos jätettiin seisomaan huoneen lämpötilaan 18 tunniksi. Liuotin 20 poistettiin haihduttamalla, jäännös liuotettiin seokseen, jossa oli 10 ml tolueenia ja 5 ml asetonia ja liuosta haihdutettiin. Tämä menettely toistettiin kahdesti ja jäännös liuotettiin sitten seokseen, jossa oli 5 ml di-kloorimetaania ja 3 ml asetonia ja liuosta haihdutettiin. 25 Kovassa alipaineessa (0,1 mmHg) kuivaamisen jälkeen saatiin 115 mg /(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyyli-karbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/pentyyli7(ftaali-imidometyyli) fosf iinihappoa likaisen valkoisena vaahtona. Esimerkki 2 30 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) 2,5 g /"(RS)-4-metyyli-2-/'/T(S)-3-metyyli-l-(me-tyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7-4-metyylipentyyli7-(f taali-imidometyyli) fosf iinihapon metyyliesteriä, joka oli valmistettu kuten esimerkissä 1(A)(v) on esitetty, 35 liuotettiin 30 ml:aan 0,33-M hydratsiinihydraatin meta-: noliliuosta. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 24 89059 18 tuntia ja sitten se haihdutettiin. Jäännös suspendoi-tiin 50 ml:aan dikloorimetaania ja lisättiin 0,7 g jää-etikkaa. Kun seos oli seissyt huoneen lämpötilassa tunnin ajan, saostunut ftaalihydratsidi poistettiin suodattamal-5 la ja suodos haihdutettiin, jolloin saatiin väritöntä hartsia, joka puhdistettiin kromatografisesti käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa kloroformi/metanoli/etikka-happo/vesiseosta (60:18:2:3). Tällöin saatiin 1,84 g (ami-nometyyli) / (RS) -4-metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyyli-10 karbamoyyli)butyyliykarbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia värittömänä hartsina.

(ii) 0,4 g (aminometyyli) /"(RS)-4-metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli.7pen-tyylijfosfiinihapon metyyliesteriasetaattia liuotettiin 15 15 ml:aan dikloorimetaania ja lisättiin 0,12 g maleiini- happoanhydridiä ja 0,12 g trietyyliamiinia. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan ja sitten sitä laimennettiin 20 ml:11a dikloorimetaania. Liuosta pestiin 5 ml:11a 10-%:ista rikkihappoa, kuivattiin vedet-20 tömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,31 g väritöntä hartsia, joka liuotettiin 5 ml:aan dimetyyliformamidia. Dimetyyliformamidiliuokseen lisättiin 0,135 g hydroksibentsotriatsolia ja 0,15 g Ν,Ν'-di-sykloheksyylikarbodi-imidiä ja seosta sekoitettiin huo-25 neen lämpötilassa yön yli. Dimetyyliformamidi poistettiin haihduttamalla, jäännös hierottiin hienoksi 30 ml etyyliasetaatin kanssa ja seos suodatettiin disykloheksyyli-urean poistamiseksi. Suodosta pestiin kahdesti käyttäen kummallakin kerralla 30 ml kylläistä natriumvetykarbonaat-30 tiliuosta, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin väritöntä hartsia. Tämä hartsi puhdistettiin flash-kromatografisesti käyttäen silikageeliä ja eluointiin 10 % metanolia dikloorimetaa-nissa. Tällöin saatiin 0,155 g (maleiini-imido) /"(RS)-4-35 metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7 25 89059 karbamoyyli.7pentyyli7fosfiinihapon metyyliesteriä värittömänä hartsina.

(B) Menetelmä 60 mg (maleiini-imido)/7RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-5 metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyy-li/fosfiinihapon metyyliesteriä liuotettiin 5 ml:aan di-kloorimetaania ja lisättiin 0,5 ml bromitrimetyylisilaa-nia. 1,5 tunnin sekoituksen jälkeen huoneen lämpötilassa liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä haihdu-10 tettiin uudelleen kahdesti käyttäen kummallakin kerralla 20 ml asetonia. Sitten jäännös liuotettiin 5 ml:aan asetonia ja 0,25 ml:aan vettä. Kun liuos on seissyt huoneen lämpötilassa 15 minuuttia, liuotin poistettiin haihduttamalla, jäännös liuotettiin 10 mlraan dikloorimetaania ja 15 lisättiin 50 mg trietyyliamiinia. Kahden tunnin kuluttua liuos pestiin 10 ml :11a natriumkloridiliuosta ja haihdutettiin, jolloin saatiin 75 mg (maleiini-imidometyyli)-/'(RS) -4-metyyli-2-/7 (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyli/pentyyli./fosf iinihapon trietyyliamii-20 nia valkoisena vaahtona.

Esimerkki 3 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,36 g (aminometyyli)/'(RS)-4-metyyli-2-/7 (S)-3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/pen-25 tyyli/fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia, joka oli valmistettu, kuten esimerkissä 2(A)(i) on esitetty, liuotettiin 10 ml:aan dikloorimetaania ja lisättiin 0,17 g meripihkahappoanhydridiä ja 0,17 g trietyyliamiinia. Kun seosta oli sekoitettu huoneen lämpötilassa kaksi tuntia, 30 lisättiin 0,2 g hydroksibentsotriatsolia ja 0,2 g N, N ' -disykloheksyylikarbodi-imidiä. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia, minkä jälkeen se suodatettiin disykloheksyyliurean poistamiseksi. Suodosta pestiin kahdesti käyttäen kummallakin kerralla 15 ml kyl-35 Iäistä natriumvetykarbonaattiliuosta. Vedettömällä nat-riumsulfaatilla suoritetun kuivauksen jälkeen liuotin 26 89059 poistettiin haihduttamalla, jolloin saatiin väritöntä hartsia. Tämä hartsi puhdistettiin flash-kromatografi-sesti käyttäen silikageeliä ja eluointiin asetaatti/me-tanoliseosta (8:1). Tällöin saatiin 0,23 g /(RS)-4-metyy-5 li-2-CL (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karba-moyyli7pentyyli/(sukkinimidometyyli)fosfiinihapon metyy-liesteriä valkoisena vaahtona.

(B) Menetelmä 60 mg /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyy-10 likarbamoyyli)butyylijkarbamoyyli/pentyyliy(sukkinimidometyyli) fosf iinihapon metyyliesteriä liuotettiin 5 ml:aan dikloorimetaania ja lisättiin 0,5 ml bromitrimetyylisi-laania. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä haih-15 dutettiin sitten uudelleen kahdesti käyttäen kummallakin kerralla 20 ml asetonia. Jäännös liuotettiin 5 ml:aan asetonia ja 0,25 ml:aan vettä. Kun liuos oli seissyt huoneen lämpötilassa 15 minuuttia, liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännös liuotettiin 20 ml:aan asetoni/di-20 kloorimetaaniseosta (1:2). Sitten liuosta haihdutettiin, jolloin saatiin 56 mg [(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/(sukkinimidometyyli) fosf iinihappoa valkoisena vaahtona.

Esimerkki 4 25 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,7 g:sta (aminometyyli)/(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyy li./ fosf iinihapon metyyliesteriasetaattia ja 0,29 g:sta fenyylimaleiinihappoanhydridiä saatiin analogisella ta-30 valla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,21 g /~(RS)-4- metyyli-2-/'/ (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli./-karbamoyyli7pentyyli7/' (2-fenyylimaleiini-imido) metyyli/-fosfiinihapon metyyliesteriä vaaleankeltaisena vaahtona.

(B) Menetelmä 35 0,1 g L (RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyy likarbamoyyli) butyyli/karbamoyyliy pentyyli/ /'(2-fenyyli- 27 89059 maleiini-imido)metyyli./fosfiinihapon metyyliesteriä liuotettiin 1 ml:aan dikloorimetaania ja lisättiin 2 ml tri-fluorietikkahappoa. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia ja sen jälkeen liuotin poistettiin 5 haihduttamalla. Jäännös vietiin 30 ml:aan asetoni/dikloo-rimetaaniseosta (1:1) ja liuosta haihdutettiin, jolloin saatiin 95 mg /(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyy-likarbamoyyli)butyylijkarbamoyyli/pentyyli/(2-fenyyli-maleiini-imidometyyli)fosfiinihappoa ruskeaksi värjäyty-10 neenä vaahtona.

Esimerkki 5 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,4 g:sta (aminometyyli) /(RS)-4-metyyli-2-/7 (S)-3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/pentyy-15 li/fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia ja 0,178 g:sta 3-metoksiftaalihappoanhydridiä saatiin analogisella ta-vala esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,1 g /'(3-metoksi-ftaali-imido)metyyli7if(RS) -4-metyyli-2-/7 (S) -3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli./pentyyli7fos-20 fiinihapon metyyliesteriä värittömänä vaahtona.

(B) Menetelmä 0,1 g /'(3-metoksiftaali-imido)metyyli7/'(RS)-4-me-tyyli-2-/'/’(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli7-karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteriä käsi-25 teltiin esimerkissä 3(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg [(3-metoksiftaali-imido)metyyli/-[(RS) -4-metyyli-2-/"/ (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa valkoisena vaahtona.

30 Esimerkki 6 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,45 g:sta (aminometyyli)/(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen-tyyli/fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia ja 0,185 g:sta 35 4-metoksiftaalihappoanhydridiä saatiin analogisella tavalla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,274 g /"(4-metok- 28 89059 siftaali-imido)metyyli//(RS) -4-metyyli-2-// (S) -3-metyyli-1- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fos-fiinihapon metyyliesteriä värittömänä vaahtona.

(B) Menetelmä 5 0,1 g /(4-metoksiftaali-imido)metyyli//(RS)-4- metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/-karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 3(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 94 mg /(4-metoksiftaali-imido)metyyli/-10 /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)- butyyli/karbamoyyli/pentyyli./fosfiinihappoa värittömänä vaahtona.

Esimerkki 7 (A) Lähtöaineen valmistaminen 15 0,285 g:sta (aminometyyli)/(RS)-4-metyyli-2- /TT(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli_/karbamoyy-li/pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia ja 0,15 g:sta 1,8-naftaalihappoanhydridiä saatiin analogisella tavalla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,195 g 20 /(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyy li) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/(1,8-naftaleenidikarboks-imidometyyli)fosfiinihapon metyyliesteriä vaaleankeltaisena vaahtona.

(B) Menetelmä 25 0,16 g /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(me tyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/(1,8-naf-taleenidikarboksimidometyyli)fosfiinihapon metyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 3(B) kuvatun menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 155 mg /(RS)-4-metyyli-2-//(S) -30 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ (1,8-naftaleenidikarboksimidometyyli)fosfiinihappoa vaaleankeltaisena vaahtona.

Esimerkki 8 (A) Lähtöaineen valmistaminen 35 0,41 g:sta (aminometyyli)/(RS)-4-metyyli-2-// (S)- 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen- 29 89059 tyyli/fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia ja 0,21 g:sta 3-metyyli-6-metoksiftaalihappoanhydridiä saatiin analogisella tavalla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,245 g /'(3-metoksi-6-metyyliftaali-imido)metyyli_7/ (RS) -4-metyy-5 1Ϊ-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/kar- bamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteriä valkoisena vaahtona.

(B) Menetelmä 0,1 g /’(3-metoksi-6-metyyliftaali-imido) metyyli/-10 /’(RS) -4-metyyli-2-/’/f (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) - butyyli./karbamoyyli/pentyyli/fosf iinihapon metyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 3(B) kuvatun menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg /”(3-metoksi-6-metyyliftaa li-imido) me tyyli./ [ (RS) -4-metyyli-2-//"(S) -3-metyyli-l-15 (metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfii-nihappoa valkoisena vaahtona.

Esimerkki 9 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) Liuos, jossa oli 0,53 g N-/(bentsyylioksi)kar-20 bonyyli/-L-leusiinia 10 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, jäähdytettiin lämpötilaan -30°C ja siihen lisättiin 0,23 g N-etyylimorfoliinia ja sen jälkeen 0,27 g isobutyyliklo-roformiaattia. Viiden minuutin sekoituksen jälkeen lämpötilassa -30°C lisättiin liuosta, jossa oli 0,6 g (ami-25 nometyyli)/(RS)-4-metyyli-2-//T(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli./ fosf iinihapon metyyliesteriä, joka oli valmistettu niin kuin on esitetty esimerkissä 2(A)(i) ja 0,23 g N-etyylimorfoliinia. Seoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä 30 sekoitettiin tässä lämpötilassa 3,5 tuntia. Sitten seosta laimennettiin 50 ml:11a dikloorimetaania, pestiin 20 mlrlla 10-%:ista rikkihappoa, 20 ml:lla natriumklo-ridiliuosta ja 20 ml:11a kylläistä natriumvetykarbonaat-: tiliuosta, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla 35 ja haihdutettiin, jolloin saatiin väritöntä hartsia. Tä-mä hartsi puhdistettiin flash-kromatografisesti käyttäen 30 89059 silikageeliä ja eluointiin 10 % metanolia etyyliasetaatissa, jolloin saatiin 0,645 g bentsyyliAs)-l-//7metok-si/(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyy-li) butyyli7karbamoyyli/pentyyli/fosfinyyli./metyyli/kar-5 bamoyyli7-3-metyylibutyyliykarbamaattia valkoisena vaahtona .

(ii) 0,75 g bentsyyli/(S)-l-///metoksi/(RS)-4-metyyli-2-/·/ (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli7-karbamoyyliVpentyyli/fosfinyyli/metyyli/karbamoyyli7-3-10 metyylibutyyli/karbamaattia liuotettiin 60 ml:aan metanolia, joka sisälsi 1,4 ml 1-M vetykloridihappoa. Liuosta hydrattiin neljä tuntia käyttäen 0,1 g 10 % palladoi-tua hiiltä. Suodatuksen ja haihdutuksen jälkeen jäännöstä haihdutettiin uudelleen kolme kertaa veden poistamiseksi 15 käyttäen joka kerta 30 ml tolueenia. Saatu valkoinen jäännös liuotettiin 10 ml:aan dimetyyliformamidia ja liuos jäähdytettiin lämpötilaan 0°C. Lisättiin 0,375 g N-bent-syylioksikarbonyyli-L-proliinia, 180 mg N-etyylimorfolii-nia ja 0,4 g hydroksibentsotriatsolia ja sen jälkeen kun 20 kaikki kiinteät aineet olivat liuenneet lisättiin 0,345 g N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä. Sen jälkeen kun seosta oli sekoitettu huoneen lämpötilassa 18 tuntia, liuotin poistettiin haihduttamalla, jäännös hierottiin hienoksi 30 ml etyyliasetaatin kanssa ja seos suodatettiin 25 disykloheksyyliurean poistamiseksi. Suodosta pestiin kahdesti käyttäen kummallakin kerralla 30 ml kylläistä nat-riumvetykarbonaattiliuosta, kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin väritöntä hartsia, joka puhdistettiin flash-kromatografises-30 ti käyttäen silikageeliä ja eluointiin 15 % metanolia etyyliasetaatissa. Tällöin saatiin 0,98 g bentsyyli(S)-2-/Y (S) -l-/Y/metoksi/'’(RS) -4-metyyli-2-//f (S) -3-metyyli-l-metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pentyyli7 fosfi-nyy1i7metyy1i7karbamoyy1 i7 -3-metyy1ibutyy1i/karbamoyy1i7-35 1-pyrrolidiinikarboksylaattia valkoisena vaahtona.

3i 89059 (iii) 0,53 g bentsyyli (S)-2-[t (S)-l-//Ymetoksi-C(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-butyyliYkarbamoyyli/pentyyli/fosfinyyli/metyyli/karbamo-yyli/-3-metyylibutyyH/karbamoyyli/-l-pyrrolidiinikarbok-5 sylaattia liuotettiin 50 mitään metanolia, joka sisälsi 0,8 ml 1-M vetykloridihappoa. Liuosta hydrattiin neljä tuntia käyttäen 0,1 g 10 % palladoitua hiiltä. Suodatuksen ja suodoksen haihdutuksen jälkeen jäännöstä haihdutettiin uudelleen kolme kertaa veden poistamiseksi käyt-10 täen joka kerta 30 ml tolueenia. Saatu valkoinen jäännös liuotettiin seokseen, jossa oli 3 ml diemtyyliformamidia ja 10 ml dikloorimetaania. Liuosta käsiteltiin 0,15 g:11a etikkahappoanhydridiä ja 0,2 g:11a trietyyliamiinia ja seosta sekoitettiin kaksi tuntia. Sen jälkeen liuotin 15 poistettiin haihduttamalla, jäännös vietiin 30 ml:aan etyyliasetaattia ja seos suodatettiin trietyyliamiini-hydrokloridin poistamsieksi. Suodos haihdutettiin ja jäännös puhdistettiin flash-kromatografisesti käyttäen eluointiin asetaatti/metanoliseosta (5:2), jolloin saa-20 tiin 0,43 g ///N-(1-asetyyli-L-prolyyli)-L-leusyyli/ami-no/metyyli//(RS)-4-metyyli-2-/7 (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteriä valkoisena vaahtona.

(B) Menetelmä 25 0,1 g Z77N- (1-asetyyli-L-prolyyli)-L-leusyyli/ami- nq/metyyli/Y(RS)-4-metyyli-2-//'(S)-3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyliykarbamoyyli/pentyyli./ fosf iinihapon metyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 3(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg 7/7n-(1-30 asetyyli-L-prolyyli)-L-leusyyli7amino7metyyH7 / (RS)-4- metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/-karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihappoa likaisen valkoisena vaahtona.

Esimerkki 10 35 0,11 g bentsyyli (S)-2-//~(S)-l-7/7metoksi/~(RS)-4- metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli7- 32 89059 karbamoyyli.7pentyyli7fosfinyyli/metyyli/karbamoyyli/-3-metyylibutyyli/karbamoyyli/-l-pyrrolidiinikarboksylaat-tia liuotettiin 4 ral:aan dikloorimetaania ja lisättiin 0,5 ml bromitrimetyylisilaania. Seosta sekoitettiin huo-5 neen lämpötilassa 1,5 tuntia ja liuotin poistettiin haihduttamalla. Jäännös liuotettiin 5 ml:aan asetonia ja siihen lisättiin 1 ml vettä ja 0,5 g natriumvetykarbonaat-tia ja sen jälkeen 50 mg bentsyylikloroformiaattia. 2,5 tunnin sekoituksen jälkeen huoneen lämpötilassa liuotin 10 poistettiin haihduttamalla, jäännös liuotettiin 15 ml:aan 1-M natriumhydroksidiliuosta ja saatua liuosta uutettiin kolme kertaa 15 ml :11a dietyylieetteriä kullakin kerralla. Vesiliuos tehtiin happamaksi 10-%:isella rikkihapolla, kyllästettiin natriumkloridiliuoksella ja uutettiin 15 viisi kertaa 20 ml :11a 5 % metanolin dikloorimetaaniliuok-sella kullakin kerralla. Orgaaniset uuttoliuokset kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin ///'N-/1-/(bentsyylioksi)karbonyyli_7-L-prolyyli7-L-leusyyli/amino./metyyli/ C(RS) -4-metyyli-2-20 //(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyy- li/pentyyli/fosfiinihappoa valkoisena vaahtona.

Esimerkki 11 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) 1,06 g L-Leusyyli-L-alaniinietyyliesterihydro-25 kloridia ja 1,46 g 2 (RS)-//’(RS) - (metoksi) (ftaali-imido-metyyli)fosfinyyli/metyyli/-4-metyylivaleriaanahappoa, joka oli valmistettu niin kuin on kuvattu esimerkissä 1(A) (iii), liuotettiin 12 ml:aan dimetyyliformamidia.

Liuos jäähdytettiin lämpötilaan 0°C. Lisättiin 1,08 g 30 hydroksibentsotriatsolia ja 0,46 g N-etyylimorfoliinia ja sen jälkeen kun kaikki kiinteät aineet olivat liuenneet, lisättiin 0,88 g N,N'-disykloheksyylikarbodi-imi-diä. Sen jälkeen kun seosta oli sekoitettu huoneen lämpötilassa 18 tuntia, liuotin poistettiin haihduttamalla, 35 jäännös hierottiin hienoksi 50 ml etyyliasetaatin kanssa, ja seos suodatettiin disykloheksyyliurean poistamiseksi.

33 89059

Suodosta pestiin kahdesti käyttäen kummallakin kerralla 50 ml kylläistä natriumvetykarbonaattiliuosta, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin keltaista hartsia. Tämä hartsi puhdistettiin 5 flash-kromatografisesti käyttäen eluointiin etyyliasetaattia. Tällöin saatiin 1,06 g 7(R tai S)-2-/7 (S)-1-l/ (S) -1- (etoksikarbonyyli) etyyli.7karbamoyyli/-3-metyyli-butyyli7karbamoyyli./-4-metyylipentyyli/ (ftaali-imidome-tyyli)fosfiinihapon metyyliesterihydrokloridia valkoise-10 na vaahtona.

(ii) Kappaleessa (i) valmistettu neljän isomeerin seos erotettiin toistuvalla flash-kromatografiällä käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa etyyliasetaattia ja sen jälkeen jakokiteyttämällä rikastetut fraktiot dietyyli-15 eetteri/n-heksaanista. Neljästä isomeeristä käytettiin esimerkkejä A, B, C ja D siinä järjestyksessä kuin ne eluoituivat kolonnista.

Isomeeri A: sp. 149 - 150°C;

Isomeeri B: sp. 164 - 165°C; 20 Isomeeri C: sp. 174 - 176°C;

Isomeeri D: sp. 93 - 95°C.

(B) Menetelmä (a) Seosta, jossa oli 0,1 g isomeerejä A ja B, jotka oli valmistettu niin kuin on esitetty kappaleessa (ii), 25 käsiteltiin esimerkissä 3(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg 7(R tai S)-2-//(S)-l-//(S)-l-(etoksikarbonyyli)etyyli7karbamoyyli/-3-metyylibutyy- li./karbamoyyli/-4-metyylipentyyli7 (ftaali-imidometyyli)-fosfiinihappoa valkoisena vaahtona.

30 (b) Seosta, jossa oli 0,1 g isomeerejä C ja D, jotka oli valmistettu niin kuin on esitetty kappaleessa (ii), käsiteltiin esimerkissä 3(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg /(R tai S)-2-/7~(S)-1-77(S)-1-(etoksikarbonyyli)etyyli7karbamoyyli/-3-metyyli-35 butyyli/karbamoyyli/-4-metyylipentyyli/(ftaali-imidometyyli) fosf iinihappoa valkoisena vaahtona.

34 89059

Esimerkki 12 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) Seosta, jossa oli 0,65 g isomeerejä C ja D, jotka oli valmistettu niin kuin on esitetty esimerkissä 5 11(A)(ii), käsiteltiin analogisella tavalla esimerkissä 2(A) (i) esitetyn kanssa, jolloin saatiin 0,47 g N-/"N-/(R tai S)-2-/7(aminometyyli)metoksifosfinyyli7metyyli/- 4-metyylivaleryyli7-L-leusyyli/-L-alaniinietyyliesteri-asetaattia värittömänä hartsina.

10 (ii) 0,45 g N-/N-/(R tai S)-2-//(aminometyyli)~ metoksifosfinyyli7metyyli/-4-metyylivaleryyli/-L-leusyy-li/-L-alaniinietyyliesteriasetaattia käsiteltiin analogisella tavalla esimerkissä 9(A)(i) kuvatun kanssa, jolloin saatiin 0,6 g N-/'N-/'(R tai S)-2-/77/"/N-/(bentsyylioksi) -15 karbonyyli7-L-leusyyli7amino/metyyli/metoksifosfinyyli/-metyyli/-4-metyylivaleryyli/-L-leusyyli7-L-alaniinietyy-liesteriä valkoisena vaahtona.

(iii) 0,6 g N-7n-7(R tai S)-2-/////N-A(bentsyyIloksi) karbonyyliZ-L-leusyyli/amino/metyyli/metoksifosfi-20 nyyli7metyyli/-4-metyylivaleryyli7-L-leusyyli/-L-alanii-nietyyliesteriä käsiteltiin analogisella tavalla esimerkissä 9(A)(ii) kuvatun kanssa, jolloin saatiin 0,52 g N-/N-/(R tai S)-2-/777/N-/rl-/(bentsyylioksi)karbonyyli/-L-prolyyli7-L-leusyyH/amino/metyyli/metoksifosf inyyli/-25 metyyli7~4-metyylivaleryyli/-L-leusyyli/~L-alaniinietyy-liesteriä valkoisena vaahtona.

(B) Menetelmä 0,11 g N-/N-/(R tai S)-2-/7///’n-A-/(bentsyylioksi) karbonyyli7-L-prolyyli/-L-leusyyli7amino/metyyli7-30 metoksifosfinyyli/metyyli/-4-metyylivaleryyli/-L-leusyy-li/-L-alaniinin etyyliesteriä käsiteltiin analogisella tavalla esimerkissä 10 kuvatun kanssa, jolloin saatiin 70 mg N-/N-/(R tai S)-2-/7///N-/l-/(bentsyylioksi)kar-bonyyli7-L-prolyyli/-L-leusyyli7amino/metyyli/hydroksi-35 f os f inyyli7n\etyyli/-4-metyylivaleryyli/-L-leusyyli7-L-alaniinia valkoisena vaahtona.

35 8 9 059

Esimerkki 13 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) 0,6 g L (-)-1-/1-(bentsyylioksi)formamido/etyy-li/fosfiinihappoa liuotettiin 7 ml:aan kuivaa tetrahydro-5 furaania, joka sisälsi 0,126 g etanolia ja lisättiin 0,54 g Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidiä ja 0,03 g di-metyyliaminopyridiiniä. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa neljä tuntia, suodatettiin ja suodos haihdutettiin. Jäännös liuotettiin 50 ml:aan etyyliasetaattia ja 10 liuosta pestiin 20 ml:11a 5-%:ista kaliumvetysulfaatti-liuosta, sen jälkeen 20 ml:11a kylläistä natriumvetykar-bonaattiliuosta ja lopuksi 20 ml:11a natriumkloridiliuos-ta. Liuosta kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja sitten sitä haihdutettiin, jäännös liuotettiin 20 ml:aan dietyyli-15 eetteriä, liuos suodatettiin ja suodosta haihdutettiin, jolloin saatiin 0,4 g öljymäistä ainetta: = 0,55 (2 % metanolin etyyliasetaattiliuos). Tähän öljyyn sekoitettiin 0,136 g 1,1,3,3-tetrametyyliguanidiinia ja 0,322 g bentsyyli-isobutyyliakrylaattia ja seosta sekoitettiin 20 huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Seosta laimennettiin 25 ml :11a etyyliasetaattia ja liuosta pestiin peräkkäin 10 ml:lla 10-%:ista vetykloridihappoa, 10 ml:lla vettä ja 10 ml:11a natriumkloridiliuosta. Kuivauksen jälkeen liuotin poistettiin haihduttamalla, jolloin saatiin öl-25 jyä, joka puhdistettiin flash-kromatografisesti käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa etyyliasetaattia. Tällöin saatiin 0,446 g bentsyyli(RS)-2-/7/(R tai S)-1-/1-(bentsyylioksi) formamido/etyyli/etoksifosfinyyli/metyyli/-4-metyylivalerianaattia värittömänä öljynä.

30 (ii) 0,446 g bentsyyli(RS)-1-///(R tai S)-l-/l- (bentsyylioksi)formamido_/etyyli7etoksifosfinyyli/metyy- li7-4-metyylivalerianaattia liuotettiin 4 ml:aan etanolia, joka sisälsi 0,91 ml 1-M natriumhydroksidiliuosta. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia ja 35 sitten laimennettiin 25 ml:11a vettä. Liuosta pestiin kahdesti 25 ml:11a dietyylieetteriä kummallakin kerralla 36 89059 ja sen jälkeen se tehtiin happamaksi lisäämällä pisaroittaan väkevää vetykloridihappoa. Vesiliuosta uutettiin kolme kertaa käyttäen 15 ml etyyliasetaattia kullakin kerralla ja yhdistetyt orgaaniset uuttoliuokset pestiin 5 15 ml:11a natriumkloridiliuosta, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 0,246 g väritöntä hartsia. Tämä hartsi liuotettiin 5 ml:aan dikloorimetaania ja lisättiin 0,087 g L-leusiini-N-metyy-liamidia. Liuos jäähdytettiin lämpötilaan 0°C ja lisät-10 tiin 0,089 g hydroksibentsotriatsolia. Sen jälkeen kun kaikki kiinteä aine oli liuennut, lisättiin 0,149 g N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla, jäännös hierottiin hienoksi 25 ml etyyliasetaa-15 tin kanssa ja seos suodatettiin disykloheksyyliurean poistamiseksi. Liuosta pestiin 10 ml:11a kylläistä natriumve-tykarbonaattiliuosta, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin hartsia, joka puhdistettiin flash-kromatografisesti käyttäen silikagee-20 liä ja eluointiin 3 % metanolia etyyliasetaatissa. Tällöin saatiin 0,16 g bentsyyli/'tR tai S)-l-/etoksi-/(RS)- 4-metyyli-2-/C(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyy-li.7karbamoyyli7 pen tyyli./ fosf inyyldjetyyli/karbamaattia värittömänä hartsina.

25 (iii) 0,16 g bentsyyli/'lR tai S)-l-/etoksi-/(RS)- 4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyy-liykarbamoyyli/pentyyli/fosfinyyli/etyyli/karbamaattia liuotettiin 0,28 ml:aan etanolia, joka sisälsi 1-M vetykloridihappoa ja 0,015 g 5 % palladoitua hiiltä ja seosta 30 hydrattiin 2,5 tuntia. Suodatuksen jälkeen suodosta haihdutettiin ja jäännöstä haihdutettiin uudelleen kaksi kertaa veden poistamiseksi käyttäen kummallakin kerralla 25 ml dikloorimetaania. Tuote liuotettiin 5 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania ja lisättiin 0,057 g trietyyliamiinia 35 ja 0,046 g ftaalihappoanhydridiä. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia ja sitten lisättiin 37 8 9 059 0,076 g hydroksibentsotriatsolia ja 0,064 g N,N'-disyk-loheksyylikarbodi-imidiä. Sen jälkeen kun seosta oli sekoitettu huoneen lämpötilassa 18 tuntia, liuotin poistettiin haihduttamalla, jäännös hierottiin hienoksi 20 ml 5 etyyliasetaatin kanssa ja seos suodatettiin disyklohek-syyliurean poistamiseksi. Suodosta pestiin kahdesti 10 ml:11a kylläistä natriumvetykarbonaattiliuosta kummallakin kerralla, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin hartsia, joka puhdis-10 tettiin flash-kromatografisesti käyttäen silikageeliä ja eluointiin 1 % metanolin etyyliasetaattiliuosta. Tällöin saatiin 0,078 g /f (RS) -4-metyyli-2-// (S)-3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli7pentyyli//(R tai S)-l-ftaali-imidoetyyli_7fosfiinihapon etyyliesteriä värit-15 tömänä vaahtona.

(B) Menetelmä 78 mg /"(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli/pentyyli7>nR tai S)-l-ftaali-imidoetyyli7fosfiinihapon etyyliesteriä käsitel-20 tiin esimerkissä 1(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 73 mg /'(RS)-4-metyyli-2-/7'(S)-3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli7pentyyli7/(R tai S)-l-ftaali-imidoetyyli7fosfiinihappoa valkoisena vaahtona.

25 Esimerkki 14 (A) Lähtöaineen valmistaminen

Analogisella tavalla esimerkissä 13(A) esitetyn kanssa 0,6 g:sta /"( + )-1-/1-(bentsyylioksi) formamido7etyy-li7fosfiinihappoa saatiin 0,15 g /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-30 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pen-tyyli7/(R tai S)-1-ftaali-imidoetyyli7fosfiinihapon etyyliesteriä valkoisena vaahtona.

(B) Menetelmä 0,1 g /"(RS)-4-metyyli-2-/"/(S)-3-metyyli-l-(metyy-35 likarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli7pentyyli//(R tai S)-l-ftaali-imidoetyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä käsiteltiin 38 89059 esimerkissä 1(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg [(RS)-4-raetyyli-2-/Y(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/Z^R tai S)-1-ftaali-imidoetyyli/fosfiinihappoa valkoisena vaah-5 tona.

Esimerkki 15 (A) LähtSaineen valmistaminen (i) Raseeminen 3-amino-2-atsasyklotridekanoni jaettiin optisiksi isomeereikseen muodostamalla dibentsoyyli- 10 tartraattisuola ja sen jälkeen peräkkäisillä kiteytyksillä etanolista. 13,2 g:sta raseemista amiinia ja 23,4 g:sta (-)-dibentsoyyliviinihappoa saatiin, kolmen etanolista suoritetun kiteytyksen jälkeen, 6,04 g tartraattisuolaa, jonka = -115,3° (c = 1 % metanolissa) .

15 Analogisella menetelmällä käyttäen (+)-dibentso- 2 0 yyliviinihappoa saatiin tartraattisuolaa, jonka = +115,0° (c = 1 % metanolissa).

20,0 g tartraattisuolaa, jonka /*7^° = -115,3° suspendoitiin 400 ml:aan kloroformia ja suspensiota ra-20 visteltiin kylläisen natriumvetykarbonaattiliuoksen (400 ml) kanssa, kunnes saatiin kirkas liuos. Orgaanisen kerroksen erottamisen jälkeen vesiliuosta uutettiin 100 ml:11a kloroformia. Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saa-25 tiin 7,85 g (-)-3-amino-2-atsasyklotridekanonia, jonka sulamispiste on 128 - 130°C ja = -63,6° (c = 1 % metanolissa).

(ii) Analogisella tavalla esimerkissä 1(A)(iv) esitetyn kanssa 0,367 g:sta 2(RS)-ZY(RS)-(metoksi)(ftaa- 30 li-imidometyyli) fosfinyyli7metyyli_7-4-metyylivaleriaana-happoa ja 0,2 g:sta (-)-3-amino-2-atsasyklotridekanonia saatiin 0,21 g /(RS)-4-metyyli-2-/7(R tai S)-2-oksoatsa-syklotridekyyli/karbamoyyli/pentyyli7(ftaali-imidometyy-li)fosfiinihapon metyyliesteriä valkoisena kiinteänä ai-35 neena.

39 89059 (B) Menetelmä 75 mg /"(RS) -4-metyyli-2-/7(R tai S)-2-oksoatsasyk-lotridekyyli7karbamoyyli7pentyyli/(ftaali-imidometyyli)-fosfiinihapon metyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 3(B) 5 kappalessa (ii) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 72 mg /T(RS)-4-metyyli-2-/7 (R tai S)-2-oksoatsa-syklotridekyyli7karbamoyyli./pentyyli7 (ftaali-imidometyyli) fosfiinihappoa valkoisena vaahtona.

Esimerkki 16 10 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,64 g:sta (aminometyyli) [(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/pen-tyyli7fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia ja 0,4 g:sta 3-(bentsyylioksi)ftaalihappoanhydridiä saatiin analogi-15 sella tavalla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,347 g CL 3-(bentsyylioksi)ftaali-imido/metyyli7/(RS)-4-metyyli-2-/7 (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamo-yyli/pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteriä valkoisena vaahtona.

20 (B) Menetelmä 0,1 g //3-(bentsyylioksi)ftaali-imido7metyyli7-/7RS) -4-metyyli-2-/7'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyli7pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 3(B) kuvatun menetelmän mu-25 kaisesti, jolloin saatiin 95 mg /73-(bentsyylioksi)ftaa-li-imido/metyyli7/ (RS) -4-metyyli-2-/‘/'(S) -3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pentyyli7 fosfiinihappoa valkoisena vaahtona.

Esimerkki 17 - 30 0,2 g //3-(bentsyylioksi)ftaali-imido7metyyli7- L (RS)-4-metyyli-2-/Y(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-butyyli7karbamoyyli/pentyyli7fosfiinihappoa liuotettiin 50 ml:aan metanolia, joka sisälsi 0,1 g 10 % palladoitua hiiltä. Seosta hydrattiin neljä tuntia ja sen jälkeen se 35 suodatettiin. Suodosta haihdutettiin, jolloin saatiin 0,16 g /(3-hydroksiftaali-imido)metyyli//(RS)-4-metyyli- 40 89059 2- //(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa likaisen valkoisena vaahtona.

Esimerkki 18 (A) Lähtöaineen valmistaminen 5 0,23 g:sta (aminometyyli) /'(RS)-4-metyyli-2-//"(S) - 3- metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia ja 0,105 g:sta 3-nitroftaalihappoanhydridiä saatiin analogisella tavalla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,105 g /'4-metyyli-2- 10 / /"3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen tyyli/ f. (3-nitroftaali-imido)metyyli/fosfiinihapon metyy-liesteriä vaaleankeltaisena vaahtona.

(B) Menetelmä 0,1 g /'4-metyyli-2-/"/'3-metyyli-l-(metyylikarbamo-15 yyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli//(3-nitroftaali-imido)-metyyli/fosfiinihapon metyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 3(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg /4-metyyli-2-/7"3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/[(3-nitroftaali-imido)-20 metyyli/fosfiinihappoa vaaleankeltaisena vaahtona.

Esimerkki 19 75 mg /4-metyyli-2-//3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli//(3-nitroftaali-imido)-metyyli/fosfiinihappoa liuotettiin 2,5 ml:aan metanolia, 25 joka sisälsi 0,01 g 10 % palladoitua hiiltä. Seosta hyd-rattiin kolme tuntia ja sen jälkeen se suodatettiin. Suo-dos haihdutettiin, jolloin saatiin 70 mg /(3-aminoftaa-li-imido) metyyli/ / (RS) -4-metyyli-2-/' f (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihap-30 poa keltaisena vaahtona.

Esimerkki 20 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) Analogisella tavalla esimerkissä l(A)(i)-(iv) esitetyn kanssa 10,95 g:sta kiteistä fosfiinihappoa, 35 10,99 g:sta bentsyyli-isobutyyliakrylaattia ja 30,31 g:sta trietyyliortoformiaattia saatiin 3,2 g /(RS)-4- 4i 39059 metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli)butyyli7~ karbamoyyli7-4-metyylipentyyli/(ftaali-imidometyyli)fos-fiinihapon etyyliesteriä valkoisena vääntönä.

(ii) 3,2 g /"(RS) -4-metyyli-2-/7(S) -3-metyyli-l- 5 (metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7-4-metyylipentyy-li/(ftaali-imidometyyli)fosfiinihapon etyyliesteriä käsiteltiin analogisella tavalla esimerkissä 2(A)(i) esitetyn kanssa, paitsi että käytettiin 0,33-M hydratsiini-hydraatin etanoliliuosta, jolloin saatiin 2,06 g (amino-10 metyyli)/ (RS)-4-metyyli-2-//· (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli_/pentyyli/fosf iinihapon etyy-liesteriasetaattia valkoisena vaahtona.

(iii) 0,52 g:sta (aminometyyli)/(RS)-4-metyyli-2-f.[(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyy- 15 li/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteriasetaattia ja 0,34 g:sta difenyylimaleiinihappoanhydridiä saatiin analogisella tavalla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,581 g /"(2,3-difenyylimaleiini-imido)metyyli7/(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/-20 karbamoyyli/pentyylijfosfiinihapon etyyliesteriä keltai-senvihreänä vaahtona.

(B) Menetelmä 0,1 g L (2,3-difenyylimaleiini-imido)metyyli7-/(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-25 butyyli/karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon etyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 4(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg /'(2,3-difenyylimaleiini-imido)metyyli//(RS)-4-metyyli-2-/7 (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli7pentyyli7fosfiini- 30 happoa keltaisenvihreänä vaahtona.

Esimerkki 21 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,5 g:sta (aminometyyli)/(RS)-4-metyyli-2-//(S)- 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen-35 tyyli7fosfiinihapon etyyliesteriasetaattia ja 0,27 g:sta 3,6-dimetoksiftaalihappoanhydridiä saatiin analogisella 42 89059 tavalla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,325 g /(3,6-dime toks i f taali-imido) me tyyli/ /'(RS) -4-metyy li-2-//( S) -3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen-tyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä vaaleankeltaisena vaah-5 tona.

(B) Menetelmä 0,1 g /(3,6-dimetoksiftaali-imido)metyyli// (RS) - 4-metyyli-2-/’/(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyy-li/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä käsi-10 teltiin esimerkissä 3(B) esitetyn menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 95 mg /(3,6-dimetoksiftalai-imido)metyyli/ /(RS)-4-metyyli-2-// (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyll/pentyyll/fosfiinihappoa keltaisena vaahtona.

15 Esimerkki 22 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,528 g:sta (aminometyyli)/(RS)-4-metyyli-2-//(S)- 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen-tyyli/fosfiinihapon etyyliesteriasetaattia ja 0,273 g:sta 20 2,3-naftaalihappoanhydridiä saatiin analogisella tavalla esimerkissä 3(A) esitetyn kanssa 0,387 g /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/ pentyyli/(2,3-naftaleenidikarboksimidometyyli)fos-fiinihapon etyyliesteriä valkoisena vaahtona.

25 (B) Menetelmä 0,1 g /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyy li/ karbamoyyli.7pentyy li/ (2,3-nafta-leenidikarboksimidometyyli)fosfiinihapon etyyliesteriä käsiteltiin esimerkissä 3(B) esitetyn menetelmän mukai-30 sesti, jolloin saatiin 95 mg /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen-tyyli/ (2,3-naftaleenidikarboksimidometyyli)fosfiinihappoa valkoisena vaahtona.

43 89059

Esimerkki 23 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) Analogisella tavalla esimerkissä 1(A)(iv) esitetyn kanssa 1,9 g:sta 2(RS)-[L (RS)-(etoksi)(ftaali-imi- 5 dometyyli) fosfinyyli.7metyyli7-4-metyylivaleriaanahappoa ja 1,0 g:sta (-)-3-amino-2-atsasyklotridekanonia saatiin 0,21 g (RS)-Z"(RS)-4-metyyli-2-/7'(R tai S)-2-okso-3-atsa-syklotridekyyli/karbamoyyli/pentyyli/(ftaali-imidometyy-li)fosfiinihapon etyyliesteriä valkoisena kiinteänä ai-10 neena.

(ii) Neljän isomeerin seos, joka oli valmistettu niin kuin edellisessä kappaleessa on esitetty, erotettiin toisto-flash-kromatografiällä käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa 30 % asetonin dikloorimetaaniliuosta. Nel- 15 jästä isomeeristä käytettiin merkintöjä isomeeri A, B, C ja D kolonnista eluoitumisjärjestyksessä. 3,5 g:sta seosta saatiin 1 g isomeerien B ja C seosta.

(iii) 0,5 g isomeerien B ja C seosta käsiteltiin esimerkissä 20(A)(ii) esitetyn kanssa analogisella ta- 20 valla, jolloin saatiin (aminometyyli)/~(R tai S)-4-metyy-li-2-/Y~(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli/karbamoyy-li.7pentyyli.7fosf iinihapon etyyliesteriasetaattia valkoisena hartsina, jota sitten käsiteltiin 0,2 g:11a 1,8-naf-taalihappoanhydridiä analogisella tavalla esimerkissä 25 3(A) esitetyn kanssa, jolloin saatiin 0,355 g f(R tai S)- 4-metyyli-2-/'/'(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli/kar-bamoyyli/pentyyli/(1,8-naftaleenidikarboksimidometyyli)-fosfiinihapon etyyliesteriä valkoisena kiinteänä aineena.

(B) Menetelmä 30 0,16 g [(R tai S)-5-metyyli-2-/7(R tai S)-2-okso- 3-atsasyklotridekyyli.7karbamoyyli7pentyyli/(1,8-nafta-leenidikarboksimidometyyli)fosfiinihapon etyyliesteriä liuotettiin 2 mlraan etikkahappoa, joka sisälsi 48 % ve-tybromidia ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 35 18 tuntia. Haihdutuksen jälkeen kiinteä jäännös hierot tiin hienoksi 20 ml dietyylieetterin kanssa, kiinteä 44 8 9 0 5 9 aine suodatettiin pois ja kuivattiin alipaineessa lämpötilassa 60°C, jolloin saatiin 0,145 g /(R tai S)-4-metyy-!L-2-[£(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli/karbamoyy-Ii7pentyyli7(1,8-naftaleenidikarboksimidometyyli)fosfii-5 nihappoa valkoisena jauheena, jonka sulamispiste on 268 -269°C.

Esimerkki 24 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,155 g (1 mmol) isobutyylimaleiinihappoanhydridiä 10 ja 0,42 g (1 mmol) (aminometyyli) ^(RS)-4-metyyli-2-//'(S) - 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyliypen-tyyli/ fosfiinihapon metyyliesteriasetaattia liuotettiin 5 ml:aan kuivaa tetrahydrofuraania ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 0,202 g (2 mmol) 15 trietyyliamiinin läsnä ollessa. Seuraavaksi lisättiin 0,27 g (2 mmol) hydroksibentsotriatsolia ja 0,206 g (1 mmol) N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Disykloheksyyli-urea poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin.

20 Jäännös vietiin 50 ml:aan etyyliasetaattia ja liuosta pestiin peräkkäin 5 % sitruunahappoliuoksella ja kylläisellä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja sen jälkeen se kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistettiin haihduttamalla, minkä jälkeen saatiin 0,35 g kiin-25 teää ainetta, joka kromatografoitiin käyttäen silikagee-liä ja eluointiin 1 % metanolin kloroformiliuosta. Tällöin saatiin 165 mg [(2-isobutyylimaleiini-imido)metyyli7-[(RS) -4-metyyli-2-7’/"(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyIi7pentyyli7 fosfiinihapon metyylieste-30 riä vaahtona.

(B) Menetelmä 0,145 g (0,29 mmol) /'(2-isobutyylimaleiini-imido)-metyyliy /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli_/karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon me-35 tyyliesteriä liuotettiin 3 ml:aan trifluorietikkahappoa ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa viisi tuntia.

45 89059

Haihduttamisen jälkeen saatu raakatuote kromatografoitiin käyttäen silikageeliä ja eluointiin kloroformi/metanoli/ etikkahappo/vesiseosta (120:15:3:2). Tällöin saatiin 70 mg /f(2-isobutyylimaleiini-imido)metyyli/Γ(RS)-4-metyy-5 li-2-/7"(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karba- moyylijpentyyli7fosfiinihappoa vaahtona.

Esimerkki 25 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,161 g:sta (1,41 mmol) glutaarihappoanhydridiä ja 10 0,41 g:sta (0,94 mmol) (aminometyyli) /^(RS)-4-metyyli-2- [[ (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyy-li/pentyyli./fosfiinihapon etyyliesteriasetaattia saatiin analogisella tavalla esimerkissä 24(A) esitetyn kanssa 0,124 g (glutaari-imidometyyli) /"(RS) -4-metyyli-2-/Y(S) -15 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pen-tyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä.

(B) Menetelmä 0,11 g (0,23 mmol) (glutaari-imidometyyli)L (RS)- 4-metyyli-2-/7'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyy-20 li7karbamoyyli7pentyy117fosfiinihapon etyyliesteriä liuotettiin 4 ml:aan dikloorimetaania ja liuosta sekoitettiin yön yli bromitrimetyylisilaanin (2 ml) läsnä ollessa. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännös liuotettiin 5 ml:aan asetoni/vesiliuosta (9:1). Liuotin poistet-25 tiin haihduttamalla ja tämä käsittely toistettiin vielä kerran, jolloin saatiin 0,1 g (glutaari-imidometyyli)-[ (RS)-4-metyyli-2-/[(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-butyyli7karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihappoa vaahtona.

Esimerkki 26 30 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,17 g:sta (1,09 mmol) 2(S)-isobutyylimeripihka-happoanhydridiä ja 0,32 g:sta (0,73 mmol) (aminometyyli)-/"(RS)-4-metyyli-2-/y(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon etyyliesteri-35 asetaattia saatiin analogisella tavalla esimerkissä 24(A) esitetyn kanssa 0,16 g lf(S)-2-isobutyylisukkinimido.7- 46 89059 metyyliJ ί(RS)-4-metyyli-2-/[(S)-3-metyyli-l-(metyylikar-bamoyyli) butyyli7karbamoyyli7pentyyli.7fosfiinihapon etyy-liesteriä.

(B) Menetelmä 5 Edellisen kappaleen mukaisesti saatua tuotetta, joka oli 2 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin yön yli bromitrimetyylisilaanilla (2 ml). Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä käsiteltiin 5 ml:11a aseto-ni/vesiliuosta (9:1). Liuotin poistettiin haihduttamalla 10 ja raakatuote puhdistettiin kromatografisesti käyttäen silikageeliä ja eluointiin kloroformi/metanoli/etikka-happo/vesiseosta (90:21:3:2), jolloin saatiin 0,09 g [[{S)-2-isobutyylisukkinimido7metyyll7/(RS)-4-metyyli-2-[[(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyy-15 li/pentyyli/fosfiinihappoa.

Tämän esimerkin osassa (A) käytetty 2(S)-isobutyy-limeripihkahappoanhydridi oli valmistettu seuraavasti: (i) 2,5 g (8,1 mmol) 1-(4-nitrobentsyyli)bety- 2(S)-isobutyylisukkinaattia liuotettiin 10 ml:aan tetra-20 hydrofuraania ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia 4-M natriumhydroksidiliuoksen (4 ml) läsnä ollessa. Liuotin poistettiin haihduttamalla, jäännös liuotettiin 20 ml:aan vettä ja liuosta uutettiin kolme kertaa 25 ml:11a dietyylieetteriä kullakin kerralla. Ve-25 siliuos tehtiin happamaksi 2-M vetykloridihapolla ja tuotetta uutettiin dietyylieetterillä. Dietyylieetteriuutto-liuoksia pestiin kylläisellä natriumkloridiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Liuotin poistettiin haihduttamalla, jolloin saatiin 1,3 g 2(S)-iso-30 butyylimeripihkahappoa hartsina.

(ii) 0,19 g (1,1 mmol) 2(S)-isobutyylimeripihka-happoa liuotettiin 5 ml:aan dikloorimetaania ja liuos jäähdytettiin lämpötilaan 0°C. Lisättiin 0,225 g (1,1 mmol) N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä ja seosta se- 35 koitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Disykloheksyyli-urea poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin, 47 89059 jolloin saatiin 0,17 g 2(S)-isobutyylimeripihkahappoan-hydridiä hartsina; IR 1800 cm

Esimerkki 27

Analogisella tavalla esimerkissä 26 esitetyn kans-5 sa valmistettiin /T(R)-2-isobutyylisukkinimido7metyyli7-jf(RS) -4-metyyli-2-/7"(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyli7pentyyli7 fosfiinihappoa.

Esimerkki 28 (A) Lähtöaineen valmistaminen 10 (i) 3 g (6,4 mmol) bentsyyli-2(RS)-//(RS)-(etok- si)(ftaali-imidometyyli)fosfinyyli/metyyli/-4-metyyliva-lerianaattia liuotettiin 39 ml:aan (12,8 mmol) 0,33-M hydratsiinihydraatin etanoliliuosta. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Liuotin poistettiin 15 haihduttamalla ja hydratsiinijäämät poistettiin käsittelemällä tolueenilla ja sen jälkeen haihduttamalla. Jäännös vietiin 50 ml:aan dikloorimetaania ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa 45 minuuttia jääetikan (5 ml) läsnä ollessa. Kiinteä aine poistettiin suodattamalla ja suodos 20 haihdutettiin, jolloin saatiin 2,56 g bentsyyli-2(RS)-[L (RS)-(aminometyyli) (etoksi)fosfinyyli7metyyli7-4-me-tyylivalerianaattia hartsina.

(ii) 1,3 g (6,34 mmol) ftaaliglysiiniä liuotettiin 10 mitään tetrahydrofuraania ja liuosta jäähdytet-25 tiin jää-suolahauteessa ja käsiteltiin sitten 0,85 g:lla (6,4 mmol) hydroksibentsotriatsolia ja 1,3 g:11a (6,4 mmol) N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa viisi tuntia ja sitten di-sykloheksyyliurea poistettiin suodattamalla. Suodos haih-30 dutettiin ja saatu hartsi liuotettiin 10 ml:aan tetrahydrofuraania ja liuosta käsiteltiin lämpötilassa 0°C 2,5 g:lla (6,2 mmol) bentsyyli-2(RS)-//(RS)-(aminometyyli)-(etoksi)fosfinyyli7metyyli7-4-metyylivalerianaattia ja 0,75 g:lla (6,5 mmol) N-etyylimorfoliinia. Liuosta se-35 koitettiin huoneen lämpötilassa yön yli ja liuotin poistettiin suodattamalla. Jäännös vietiin 100 ml:aan etyyli- 48 89059 asetaattia, pestiin perkkäin 5-%:isella sitruunahappo-liuoksella, 5-%:isella natriuravetykarbonaattiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin hartsia. Kromatografoitaes-5 sa tämä hartsi käyttäen silikageeliä ja eluointiin kloro-formi/metanoliseosta (98:2) saatiin 0,95 g bentsyyli-2(RS)-(etoksi)/(2-ftaali-imidoasetamido)metyyli7fosfi-nyyli7metyyli7-4-metyylivalerianaattia.

(iv) 0,95 g (1,8 mmol) bentsyyli-2(RS)-[[(RS)-10 (etoksi) [(2-ftaali-imidoasetamido)metyyli/fosfinyyli7me-tyyli/-4-metyylivalerianaattia käsiteltiin 11 ml:11a (3,6 mmol) 0,33-M hydratsiinihydraatin etanoliliuosta.

Sen jälkeen kun seosta oli sekoitettu huoneen lämpötilassa yön yli, sen kanssa työskenneltiin niin kuin on esi-15 tetty tämän esimerkin kappaleessa (i). Puhdistaminen kro-matografisesti käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa klo-roformi/metanoli/etikkahappo/vesiseosta (120:15:3:2) antoi 0,43 g bentsyyli-2 (RS)-/'/’/'(RS) - (1-aminoasetamido)metyyli/ (etoksi)fosfinyyli/metyyli7“4-metyylivalerianaat-20 tiasetaattia hartsina.

(iv) 0,4 g (0,87 mmol) bentsyyli-2(RS)-/77 (RS)-(2-aminoasetamido)metyyli/(etoksi)fosfinyyli/metyyli/-4-metyylivalerianaattiasetaattia liuotettiin 170 ml:aan kuivaa tolueenia ja liuosta lämmitettiin lämpötilassa 25 110°C siten, että läsnä oli 0,125 g (0,124 mmol) trietyy- liamiinia ja 4 ml (7,72 mmol) 1,93-M fosgeenin tolueeni-liuosta. 15 minuutin kuluttua liuotin poistettiin haihduttamalla, jäännös liuotettiin 10 ml:aan kuivaa tolueenia ja liuosta haihdutettiin. Jäännös liuotettiin sitten 30 5 ml:aan kuivaa dikloorimetaania ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 0,125 g (1,24 mmol) trietyyliamiinin läsnä ollessa. Lisättiin 25 ml dikloorimetaania ja liuosta pestiin vedellä ja natriumkloridi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla 35 ja haihdutettiin, jolloin saatiin hartsia. Tämän hartsin puhdistaminen kromatografisesti käyttäen silikageeliä ja 49 89059 eluoinnissa kloroformi/metanoliseosta (19:1) antoi 0,3 g bentsyyli-2(RS)-l[(RS)-(etoksi) [(2,5-diokso-l-imidatso-lidinyyli)metyyli/fosfinyyli7metyyli7-4-metyylivaleria-naattia hartsina.

5 (v) 0,27 g (0,64 mmol) bentsyyli-2 (RS)-/’/'(RS) - (etoksi) /"(2,5-diokso-l-imidatsolidinyyli)metyyli7fosfi-nyyli/metyyli7-4-metyylivalerianaattia liuotettiin 10 ml:aan etanolia ja liuosta hydrattiin 10 % palladium/hii-len (0,2 g) läsnä ollessa huoneen lämpötilassa ilmakehän 10 paineessa. Tunnin kuluttua katalysaattori poistettiin suodattamalla ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 0,22 g 2(RS)-/Y(RS)-(etoksi)[(2,5-diokso-l-imidatsolidi-nyyli)metyyli/fosfinyyli/metyyli7-4-metyylivaleriaanahap-poa vaahtona.

15 (vi) 0,22 g (0,64 mmol) 2(RS)-/Y(RS)-(etoksi)[(2,5- diokso-l-imidatsolidinyyli) metyyli.7 fosfinyyli_7 metyyli/- 4-metyylivaleriaanahappoa ja 0,116 g (0,81 mmol) L-leu-siinimetyyliamidia laitettiin 5 ml:aan dikloorimetaania ja 2,5 ml:aan tetrahydrofuraania. Lämpötilassa -8°C 20 liuosta käsiteltiin 0,3 g:11a (1,2 mmol) N-etoksikarbo-nyyli-2-etoksi-l,2-dihydroksikinoliinoa. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 24 tuntia ja sitten sen annettiin seistä lämpötilassa 0°C 48 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla, jäännös vietiin 50 ml:aan kloro-25 formia, liuosta pestiin peräkkäin 5-%:isella sitruuna-happoliuoksella, 5-%:isella natriumvetykarbonaattiliuok-sella ja natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin hartsia. Tämä hartsi kromatografoitiin käyttäen silika-30 geeliä ja eluointiin kloroformi/metanoliseosta (19:1), jolloin saatiin 0,08 g f(2,5-diokso-l-imidatsolidinyyli)-metyyli7Z(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikar-bamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli7fosfiinihapon etyy-liesteriä hartsina.

so 89059 (B) Menetelmä 60 mg (0,13 mmol) C(2,5-diokso-l-imidatsolidinyy-li)metyyli7[(RS) -4-metyyli-2-/'iT(S) -3-metyyli-l- (metyyli-karbamoyyli) butyyli7karbamoyyli7pentyyli7fosf iinihapon 5 etyyliesteriä liuotettiin 1 ml:aan dikloorimetaania ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia bromitrimetyylisilaanin (1 ml) ja trifluorietikkahapon (0,1 ml) läsnä ollessa. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä käsiteltiin kolme kertaa asetoni/vesi-10 liuoksella (9:1) ja liuotin poistettiin kullakin kerralla haihduttamalla. Lopuksi tuote hierottiin hienoksi di-etyylieetterin kanssa, jolloin saatiin 55 mg /(2,5-di-okso-l-imidatsolidinyyli)metyyli7 L(RS)-4-metyyli-2-ZY (S)- 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pen-15 tyyli7fosfiinihappoa vaahtona.

Esimerkki 29

Analogisella tavalla esimerkissä 4(B) esitetyn kanssa /’71, 4-dihydro-2,4-diokso-3 (2H) -kinatsolinyylijme-tyyli77 (RS) -4-metyyli-2-/'/'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarba-20 moyyli)butyyli7karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon etyy-liesteristä saatiin Ifl,4-dihydro-2,4-diokso-3(2H)-kinat-solinyyli7metyyli7 7(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyH7pentyyli7 fosf iinihappoa vaaleankeltaisena vaahtona; 25 /71,4-dihydro-2,4-diokso-3(2H)-kinatsoiinyyli/- metyyli7Z (R tai S) -4-metyyli-2-7/"(R tai S)-2-okso-3-at-sasyklotridekyyli7karbamoyyli7pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /7*1,4-dihydro-2,4-diokso-3(2H)-kinatsolinyyli7metyyli77"(R tai S)-4-metyyli-2-/7~(R tai 30 S) -2-okso-3-atsasyklotridekyyli7karbamoyyli.7pentyyli7~ fosfiinihappoa likaisen valkoisena vaahtona; L[2,4-diokso-2H-l,3-bentsoksatsin-3(4H)-yyli7me-tyyHy^iRS) -4-metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon etyy-35 liesteristä saatiin ί[2,4-diokso-2H-l,3-bentsoksatsin-3 (4H) -yyli7metyyli77 (RS) -4-metyyli-2-/‘Z'(S) -3-metyyli-l- si 89059 (metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfii-nihappoa likaisen valkoisena vaahtona; [(RS) -4-metyyli-2-//‘(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/1 [ 3,5-diokso-4H-tie-5 no/4,3-c/pyrrol-5(6H)-yyli/metyyli/fosfiinihapon etyyli- esteristä saatiin /'(RS)-4-metyyli-2-/7'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli///3,5-diokso-4H-tieno/"3,4-c_7pyrrol-5 (6H) -yyli/me tyyli/fosfii-nihappoa kermamaisena vaahtona; 10 //1,4-dihydro-l-metyyli-2,4-diokso-3(2H)-kinatso- linyyli/me tyyli/ / (RS) -4-metyyli-2-/Y(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfiiniha-pon etyyliesteristä saatiin /7'l,4-dihydro-l-metyyli-2,4-diokso-3 (2H) -kinatsolinyyli/metyyli//’(RS) -4-metyyli-2-15 [[ (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyy li/pentyyli/fosf iinihappoa valkoisena vaahtona; /(4-amino-l,8-naftaleenidikarboksiamido)metyyli7-L (RS) -4-metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon metyyliesteris-20 tä saatiin f( 4-amino-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/ / (RS) -4-metyyli-2-/7 (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa oranssina vaahtona; [( 4-amino-3-bromi-l,8-naftaleenidikarboksimido)-25 metyyli/ /(RS)-4-metyyli-2-/7* (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(4-amino-3-bromi-l,8-naftaleenidikarboksimido) metyyli//(RS)-4-metyyli-2-/7 (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfii-30 nihappoa keltaisena vaahtona; /(4-amino-3-kloori-l,8-naftaleenidikarboksimido)-metyyliJL (RS)-4-metyyli-2-/7"(S) -3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(4-amino-3-kloori-l,8-naftalee-35 nidikarboksimido)metyyli//(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyy- 52 8 9 0 5 9 li-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyy li/pentyyli/-fosfiinihappoa keltaisena jauheena; /(4-amino-3-jodi-1,8-naf taleenidikarboksimido) me-tyyli// (RS)-4-metyyli-2-/[(S)-3-metyyli-l-(metyylikarba-5 moyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(4-amino-4-jodi-1,8-naftaleenidikarb-oksimido)metyyli// (RS) -4-metyyli-2-//(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfiini-happoa oranssinkeltaisena jauheena; 10 /(3-amino-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/- / (RS) -4-metyyli-2-/7 (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon etyyliesteris-tä saatiin /“O-amino-l, 8-naf taleenidikarboksimido) metyyli/ / (RS) -4-metyyli-2-//(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamo-15 yyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa oranssina vaahtona; /'(RS)-4-metyyli-2-/7'(R tai S)-2-okso-3-atsasyklo-tridekyyli/karbamoyyli/pentyyli//(l, 8-naf taleenidikarboksimido) metyyli/fosf iinihapon etyyliesteristä saatiin /(RS)-20 4-metyyli-2//(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli/kar-bamoyyli7pentyyli//(1,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/-fosfiinihappoa valkoisena jauheena; /'(RS) -4-metyyli-2-//(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli7pentyyli7/7'l, 3,6,7-tetrahydro-25 1,3-diokso-2H-indeno/6,7, l-def/isokinolin-2-yyli/metyy- li/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /f(RS)-4-metyy-li-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/kar-bamoyyli/pentyyli///1,3,6,7-tetrahydro-l,3-diokso-2H-in-deno/6,7,1-def/isokinolin-2-yyli/metyyli7 fosfiinihappoa 30 vaaleana kermamaisena vaahtona; /(3,6-dinitro-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyy-li//(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli7fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(3,6-dinitro-l,8-naftaleenidikarboks-35 imido)metyyli//(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyy- 53 89059 likarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli7pentyyli/ fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; L(4-amino-3-bromi-l,8-naftaleenidikarboksimido)-metyyli//(R tai S)-4-metyyli-2-//*(R tai S)-2-okso-3-atsa-5 syklotridekyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyy-liesteristä saatiin /'(4-amino-3-bromi-l,8-naftaleenidi-karboksimido)metyyli//(R tai S) -4-metyyli-2-//~(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli/karbamoyyli7pentyyli7 fosfiinihappoa keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on 277 -10 280°C (hajoaa); /7"6-amino-5-bromi-lH-bents/"d,e/isokinolin-2 (3H) -yyli/metyyli//(R tai S)-4-metyyli-2-//'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfii-nihapon etyyliesteristä saatiin /7’6-amino-5-bromi-lH-15 bents/"d,e/isokinolin-2 (3H)-yyli/metyyli//(R tai S)-4- metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/-karbamoyyli/pentyyli/fosf iinihappoa keltaisena jauheena; {(3-bromi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/-/ (R tai S)-4-metyyli-2-/7"(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamo-20 yyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(3-bromi-l,8-naftaleenidikarboksimi-do)metyyli//’(R tai S)-4-metyyli-2-/7‘(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa valkoisena jauheena; 25 /"(3,6-diamino-l, 8-naf taleenidikarboksimido) metyy li// (RS) -4-metyyli-2-/7"(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(3,6-diamino-l,8-naftaleenidikarboksimido) metyyli//(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(me-30 tyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon trifluoriasetaattia oranssina vaahtona; /(RS)-4-metyyli-2-/7'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ /(4-nitro-l,8-naf-taleenidikarboksimido)metyyli/fosfiinihapon etyylieste-35 ristä saatiin /(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli./pentyyli/ /(4-nitro- 54 89059 1,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/fosfiinihappoa likaisen valkoisena vaahtona; /”(2-amino-1,8-naftaleenidikarboksimido) metyy li/-[(RS) -4-metyyli-2-/Y'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -5 butyyli7karbamoyyli7pentyyli7 fosfiinihapon etyylieste-ristä saatiin /'{2-amino-l, 8-naftaleenidikarboksimido) metyyli/ / (RS) -4-metyyli-2-//'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihappoa oranssina vaahtona? 10 / (4-bentsyylioksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)me- tyyli// (RS) -4-metyyli-2-/7”(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfiinihapon etyy-liesteristä saatiin /’(4-bentsyylioksi-l, 8-naftaleenidikarboksimido) metyyli7/ (RS) -4-metyyli-2-/' [ (S)-3-metyyli-l-15 (metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfii-nihappoa likaisen valkoisena vaahtona; /~(4-hydroksi-l, 8-naftaleenidikarboksimido) metyyli// (RS) -4-metyyli-2-/'/'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyli-20 esteristä saatiin /(4-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido) metyyli// (RS) -4-metyyli-2-/T(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli7pentyyli7 fosfiinihappoa vaaleankeltaisena vaahtona; [(3,6-diasetamido-l,8-naftaleenidikarboksimido)me-25 tyyli// (RS) -4-metyyli-2-/7"(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyy-liesteristä saatiin /(3,6-diasetamido-l,8-naftaleenidi-karboksimido)metyyli// (RS) -4-metyyli-2-/’/’(S) -3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fos-30 fiinihappoa vaaleankeltaisena vaahtona; [(3,6-dihydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/ / (RS) -4-metyyli-2-/'/(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyli-esteristä saatiin /(3,6-dihydroksi-l,8-naftaleenidikarb-35 oksimido) metyyli// (RS) -4-metyyli-2-// (S) -3-metyyli-l- 55 89059 (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosf ii-nihappoa keltaisena vaahtona; [ (3-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/-0(RS)-4-metyyli-2-/"/'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-5 butyyli/karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon etyylieste-ristä saatiin /"(3-hydroksi-l, 8-nartaleenidikarboksimido) -metyyli7/ (HS) -4-metyyli-2-/Y’(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli.7pentyyli/fosfiinihappoa keltaisena vaahtona; 10 /( 4-hydroksi-l, 8-naftaleenidikarboksimido) metyyli/- Z"(RS)-4-metyyli-2-//(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyy-li7karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin [(4-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/-L (RS)-4-metyyli-2-/7(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyy-15 li/karbamoyyli.7pentyyli_/fosfiinihappoa keltaisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 230 - 231°C; /(4-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/-i (RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosf iinihapon etyyliesteris-20 tä saatiin /(4-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli./ L (RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosf iinihappoa keltaisena jauheena, jonka sulamispiste on 185 - 193°C; /~(3-hydroksi-4-nitro-l, 8-naftaleenidikarboksimi-25 do)metyyli/7(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin [(3-hydroksi-4-nitro-l,8-naftaleenidikarboksimido) metyyli/ 7(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyy-30 li7fosfiinihappoa keltaisena vaahtona; /(3-bromi-4-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido) metyyli// (RS) -4-metyyli-2-/7'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli7pentyyli/ fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(3-bromi-4-hydroksi-l,8-nafta-35 leenidikarboksimido)metyyli//(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3- 56 89059 metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen-tyyli/fosfiinihappoa keltaisena kiinteänä aineena; C(3-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/-/"(RS)-4-metyyli-2-/Y(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyy-5 li/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(3-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/-L (RS)-4-metyyli-2-//'(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyy-li/karbamoyyli.7pentyyli7 fosf iinihappoa hygroskooppisena jauheena, jonka sulamispiste on >250°C; 10 t. (3-bromi-4-hydroksi-l, 8-naftaleenidikarboksimido) - metyyliJ^iRS)-4-metyyli-2-/7"(R tai S)-2-okso-3-atsasyklo-tridekyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin [(3-bromi-4-hydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido) metyyli//(RS) -4-metyyli-2-/T(R tai S)-2-ok-15 so-3-atsasyklotridekyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa vaaleankeltaisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 251 - 252°C; ja / (3,6-dihydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli// (RS) -4-metyyli-2-/’/'(R tai S)-2-okso-3-atsasyklo-20 tridekyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /(3,6-dihydroksi-l,8-naftaleenidikarboksimido) metyyli//(RS)-4-metyyli-2-/Y(R tai S)-2-okso-3-at-sasyklotr idekyyli/karbamoyy1i/pentyy1i/fosf iinihappoa vaaleankeltaisena jauheena, jonka sulamispiste on 280 -25 282°C.

Esimerkki 30

Analogisella tavalla esimerkissä 10 esitetyn kanssa ///"N-ΓΛ-Γ(bentsyylioksi) karbonyyli/-L-prolyyli/-30 L-leusyyli/amino./metyyli// (RS) -4-metyyli-2-/7 (R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /Y/N-/l-Z/bentsyylioksi)-karbonyyli/-L-prolyyli/-L-leusyyli7amino./metyyli// (RS) - 4-metyyli-2-/7 (R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli7kar-35 bamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; 57 89059 /*(R) -l-TTN-/!-/"(bentsyylioksi)karbonyyli/-L-pro-lyyli7-D-leusyyli7araino7etyyli7/ (RS) -4-metyyli-2-//·(S) -3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pentyy-li7fosf iinihapon etyyliesteristä saatiin / (R)-1-//Ν-/Ί-5 /"(bentsyylioksi) karbonyyli7-L-prolyyli7“D-leusyyli7ami-no7etyyli7/(RS)-4-metyyli-2-/Y (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli7pentyyli7 fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; /(S) -1-/ΥΝ-/Ί-/"(bentsyylioksi) karbonyyli7~L-pro-10 lyyli7-D-leusyyliv/amino7etyyli7/ (RS) -4-metyyli-2-/"/'(S) -3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pentyy-li7fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin f(S)-1-/YN-71-/“(bentsyylioksi) karbonyyli7-L-prolyyli7-D-leusyyli7ami-no7etyyliv7/'(RS) -4-metyyli-2-/[(S) -3-metyyli-l- (metyyli-15 karbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pentyyli7 fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; [[( S)-3-/1-(bentsyylioksi)formamido7~2,5-diokso-l-pyrrolidinyyli7metyyli7/(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/pentyyli/-20 fosf iinihapon etyyliesteristä saatiin //"(S)-3-/^1-(bentsyylioksi) formamido7-2,5-diokso-l-pyrrolidinyyli7metyyli7~ Z (RS) -4-metyyli-2-/Y^(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; 25 /7(R)-3-/Ί-(bentsyylioksi)formamido7~2,5-diokso- l-pyrrolidinyyli7metyyli7/(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyy-. . li-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pentyyli7~ fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin //(R)-3-/1-(bentsyylioksi) formamido7-2,5-diokso-l-pyrrolidinyyli7metyy-30 li7/ (RS)-4-metyyli-2-/'/'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli7pentyyli./fosf iinihappoa valkoisena vaahtona; //(S)-3-/A-^(bentsyylioksi) karbonyyli7-L-prolyy-li.7amino72-5,diokso-l-pyrrolidinyyli7metyyli7/ (RS) -4-me-35 tyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7~ karbamoyyli/pentyyli7 fosfiinihapon etyyliesteristä 58 89059 saatiin //"(S) -3 -f 7l-7(bentsyylioksi) karbonyyli7 -L-prolyy-li7amino7-2,5-diokso-l-pyrrolidinyyli7metyyli//(RS)-4-metyyli-2-/"7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/-karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; 5 77(R)-3-/7l-7(bentsyylioksi) karbonyyli7-L-prolyy- lijamino7-2,5-diokso-l-pyrrolidinyyli)metyyli7/(RS)-4-metyyli-2-77(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli./-karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin 77(R)-3-//1-7(bentsyylioksi)karbonyyli/-L-prolyyli7~ 10 amino7-2,5-diokso-l-pyrrolidinyyli7metyyli7/(RS)-4-metyy-li“2-[[(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/kar-bamoyyli7pentyyli7fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; [Cl, 4-dihydro-l, 3-dioksonaf t[1,8-c<i7yyli-atsepin-2 (1H) yyli7metyyli77(RS) -4-metyyli-2-77(S) -3-metyyli-l- (me-15 tyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli7pentyyli/ fosfiiniha-pon etyyliesteristä saatiin [[l, 4-dihydro-l,3-dioksonaft-/1,8-cd7yyli-atsepin-2 (1H) yyli7metyyli7^ (RS) -4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamo-yyli7pentyyli7fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; 20 77(S)-3-77l-7(bentsyylioksi)karbonyyli/-L-prolyy- li7amino7-2,6-dioksopiperidino7metyyli/7(RS) -4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyy-li7pentyyli7fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /7(S)- 3-77l-7(bentsyylioksi)karbonyyli/-L-prolyyli7amino7-2,6-25 dioksopiperidino7metyyli/7(RS)-4-metyyli-2-7/ (S)-3-metyy-li-1 - (metyy 1 ikarbamoyy 1 i) butyy 1 iJkarbamoyy 1 i7pentyy 1 i.7-fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; 77(R)-3-/71-7(bentsyylioksi)karbonyyli/-L-prolyy-li7amino7~2,6-dioksopiperidino7metyyli77 (RS) -4-metyyli-2-30 77(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyy- li/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin 77(R)- 3-77l-7(bentsyylioksi)karbonyyli7-L-prolyyli7 amino/-2,6-dioksopiperidino7metyyli7/(RS)-4-metyyli-2-7/ (S)-3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7pentyyli7-35 fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; ja 59 89059 ί( 1,3-dihydro-1,3-diokso-2H-dibents/e,g7yyli-isoin-dol-2-yyli)metyyli/^(RS) -4-metyyli-2-/'/'(S) -3-metyyli-l- (me-tyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon isopropyyliesteristä saatiin / (1,3-dihydro-l,3-diokso-2H-5 dibents/e,g/yyli-isoindol-2-yyli)metyyli/Z/RS)-4-metyyli-2-/"/'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/-karba-moyyli/pentyyli/fosfiinihappoa keltaisena vaahtona.

Esimerkki 31

Analogisella tavalla esimerkissä 25(B) esitetyn 10 kanssa /'(4-kloori-l, 8-naf taleenidikarboksimido) me tyyli/ -/’(RS) -4-metyyli-2-/7'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteris-tä saatiin /(4-kloori-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyy-15 li//(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa likaisen valkoisena vaahtona; /(RS)-4-metyyli-l-/7'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ /(1,2-naftaleenidi-20 karboksimido)metyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin [(RS) -4-metyyli-l-/^/'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli//(1,2-naftaleenidikarboksimido) metyyli/ fosf iinihappoa likaisen valkoisena vaahtona; 25 /(3-bromi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/- /(RS)-4-metyyli-2-/y(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /‘(3-bromi-l, 8-naf taleenidikarboksimido) metyyli// (RS) -4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyy-30 li)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa valkoisena vaahtona; / (RS)-4-metyyli-2-//'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli//(3-nitro-l, 8-naf ta-leenidikarboksimido)metyyli/fosfiinihapon etyyliesteris-35 tä saatiin /‘(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ (3-nitro-l,8- 60 89059 naftaleenidikarboksimido)metyyli/fosfiinihappoa likaisen valkoisena vaahtona; yf(2-metoksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/-[ (RS)-4-metyyli-2-/y (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-5 butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosf iinihapon etyyliesteris-tä saatiin /(2-metoksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli./ /(RS) -4-metyyli-2-/"/'(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli7fosfiinihappoa likaisen valkoisena vaahtona; 10 //3,4-dihydro-l,3-diokso-2(1H)-isokinolinyyli/me tyyli// (RS) -4-metyyli-2-/7"(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyll7pentyyli/fosfiinihapon etyy-liesteristä saatiin //3,4-dihydro-l,3-diokso-2(lH)-iso-kinolinyyli7metyyli7/ (RS) -4-metyyli-2-//*(S) -3-metyyli-l-15 (metyylikarbamoyyli)butyyli^karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa likaisen valkoisena vaahtona; /"(RS) -4-metyyli-2-f[(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyy1^7//1,3-diokso-lH-pyr-rolo/3,4-c/pyridin-2(3H)-yyli/metyyli/fosf iinihapon etyy-20 liesteristä saatiin /(RS) -4-metyyli-2-/r/’(S) -3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli///1,3-diokso-lH-pyrrolo/"! , 4-c7pyridin-2 (3H) -yyli/metyyli/fos-fiinihapon hydrobromidia keltaisena vaahtona; [[1,3-diokso-lH-pyrrolo//,4-b/pyridin-2(3H)-yyli7-25 metyyli//(RS)-4-metyyli-2-/‘/'(S)-3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyy-liesteristä saatiin //l,3-diokso-lH-pyrrolo/3,4-b/pyri-din-2 (3H) -yyli/metyyli//(RS) -4-metyyli-2-/T(S) -3-metyy-1i-1-(metyy1ikarbamoyy1i)butyyli/karbamoyyliJ pe ntyyli/ -30 fosfiinihappoa keltaisenruskeana vaahtona; ja /(4-metoksi-l, 8-naf taleenidikarboksimido) metyyli/-i(RS) -4-metyyli-2-//*(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) -butyyli7karbamoyyli7pentyyli7fosfiinihapon etyyliesteris-tä saatiin /(4-metoksi-l,8-naftaleenidikarboksimido)me-35 tyyli// (RS)-4-metyyli-2-/7'(S)-3-metyyli-l-(metyylikarba- 6i 39059 moyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa vaaleankeltaisena vaahtona.

Esimerkki 32

Analogisella tavalla esimerkissä 28(B) esitetyn 5 kanssa /"(4-asetamido-l, 8-naftaleenidikarboksimido) metyyli// (RS) -4-metyyli-2-//~(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamo-yyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyli-esteristä saatiin ^(4-asetamido-l,8-naftaleenidikarboks-imido)metyyli//"(RS) -4-metyyli-2-// (S) -3-metyyli-l- (me-10 tyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyld/pentyyli/fosfiini-happoa keltaisenvihreänä vaahtona.

Esimerkki 33

Analogisella tavalla esimerkissä 1(B) esitetyn kanssa 15 [[(S) -3-asetamidosukkinimido/metyyli_7/ (RS) -4-me- tyyli-2-/"/ (S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli)butyyli/-karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin LL (S) -3-asetamidosukkinimidq/metyyli// (RS) -4-metyy-li-2-[[(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/kar-20 bamoyyli/pentyyli/fosf iinihappoa valkoisena vaahtona; ja // (R) -3-asetamidosukkinimido_/metyyli// (RS) -4-me-tyyli-2-/[(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/-karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteristä saatiin /[(R)-3-asetamidosukkinimido/metyyli7/ (RS)-4-metyy-25 li-2-/7"(S) -3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karba- moyyli/pentyyli/fosfiinihappoa valkoisena vaahtona.

Esimerkki 34

Liuosta, jossa oli 0,2 g /"(4-amino-l, 8-naf talee-nidikarboksimido)metyyli//(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyy-30 li-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/- fosfiinihappoa 2 ml:ssa jääetikkaa, käsiteltiin kahdella pisaralla bromia. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja sen jälkeen haihdutettiin alipaineessa. Sen jälkeen, kun oli haihdutettu uudelleen neljä 35 kertaa käyttäen 10 ml metanolia kullakin kerralla, saatiin 230 mg /(4-amino-3-bromi-l,8-naftaleenidikarboks- 62 89059 imido)metyyli//(RS)-4-metyyli-2-/7 (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfiinihappoa keltaisena jauheena.

Esimerkki 35 5 Liuosta, jossa oli 0,075 g /(4-hydroksi-l,8-nafta- leenidikarboksimido)metyyli7/(RS)-4-metyyli-2-// (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/ fosfiinihappoa 17 ml:ssa jääetikkaa, käsiteltiin 10 pisaralla bromia ja seos jätettiin seisomaan huoneen lämpö-10 tilassa kolmeksi päiväksi. Sitten liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä käsiteltiin 20 ml :11a toluee-nia ja haihdutettiin uudelleen. Tämä menettely toistettiin viisi kertaa ja lopuksi tuote laitettiin 20 ml:aan metanoli/dikloorimetaaniseosta (1:1) ja haihdutettiin 15 jälleen, jolloin saatiin 0,085 g /(3-bromi-4-hydroksi- 1,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli//(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyy-li/pentyyli/fosfiinihappoa keltaisena vaahtona.

Esimerkki 36 20 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) Analogisella tavalla esimerkissä 9(A)(i) ja (ii) esitetyn kanssa, mutta käyttäen lähtöaineena (ami-nometyyli) /(RS) -4-metyyli-2-//(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyy1i/karbamoyy1 \J pentyy1i/fos f i inihapon 25 etyyliesteriasetaattia /valmistettu niin kuin on esitetty esimerkissä 20(A) (iii)/, saatiin bentsyyli(S)-2-//(S)-l-//etoksi/(RS)-4-metyyli-2-// (S)-3-metyyli-l-(metyyli-karbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfinyyli/metyyli/ karbamoyy li/ -3 -me tyylibutyy li/ karbamoyy li/- 1-pyr-30 rolidiinikarboksylaattia valkoisena vaahtona.

(ii) 0,36 g bentsyyli(S)-2-//(S)-l-///etoksi/(RS)- 4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyy-li/karbamoyyli/pentyyli/fosfinyyli/metyyli/karbamoyyli/- 3-metyylibutyyli/karbamoyyli/-1-pyrrolidiinikarboksylaat- 35 tia liuotettiin 5 ml:aan etanolia, joka sisälsi 0,5 ml 1-M vetykloridihappoa. Liuosta hydrattiin 5-%:isen palla- 63 89059 doidun hiilen avulla kaksi tuntia. Suodatuksen ja suo-doksen haihdutuksen jälkeen jäännöstä haihdutettiin uudelleen tolueenin kanssa, kunnes saatiin valkoinen kiinteä aine. Tämä kiinteä aine liuotettiin 6 ml:aan dikloo-5 rimetaania, liuos jäähdytettiin lämpötilaan 0°C ja sitä käsiteltiin 0,15 ml:lla trietyyliamiinia ja 0,064 ml:lla bentsoyylikloridia. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia ja sen jälkeen liuotin poistettiin haihduttamalla. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, seos 10 suodatettiin ja suodosta haihdutettiin, jolloin saatiin vaaleankeltaista hartsia. Kromatografoimalla käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa 3 % etanolin kloroformiliuos-ta ja sen jälkeen haihduttamalla saatiin 0,32 g //7N-(l-bentsoyyli-L-prolyyli) -L-leusyyli/amino./metyyli// (RS) -4-15 metyyli-2-/7T(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/-karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä valkoisena vaahtona.

(B) Menetelmä 0,25 g ///N-(1-bentsoyyli-L-prolyyli)-L-leusyyli/-20 amino. 7 me tyyli//(RS)-4-metyyli-2-// (S)-3-metyyli-l-(metyy-likarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä liuotettiin seokseen, jossa oli 1 ml etik-kahappoa ja 1 ml 45 % vetybromidin etikkahappoliuosta ja seoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa yön yli.

25 Liuosta käsiteltiin dietyylieetterillä, saostuneen hartsin annettiin laskeutua ja eetteriliuos poistettiin de-kantoimalla. Käsittelemällä uudelleen dietyylieetterillä, seuraavaksi dikloorimetaanilla ja sen jälkeen kuivaamalla suurtyhjössä saatiin 0,17 g ///H-(1-bentsoyyli-L-prolyy-30 li) -L-leusyyli/amino/metyyli7/(RS)-4-metyyli-2-/7"(S)-3-metyyli-1- (metyylikarbamoyyli) butyyli7karbamoyyli/pen-: tyyli./fosfiinihappoa vaaleanruskeana vaahtona, joka si sälsi jonkin verran vetybromidia.

64 89059

Esimerkki 37 (A) Lähtöaineen valmistaminen

Analogisella tavalla esimerkissä 36(A) esitetyn kanssa, paitsi että bentsoyylikloridin sijasta käytettiin 5 trifluorietikkahappoanhydridiä, saatiin /"(RS)-4-metyyli-2-/V(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamo-yyH7pentyyli.///7’N-A- (trifluoriasetyyli) -L-prolyyli/-L-leusyyli7amino7metyyli7fosfiinihapon etyyliesteriä vaaleankeltaisena vaahtona.

10 (B) Menetelmä C(RS)-4-metyyli-2-/Y (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli7pentyyli//7/N-/1-(trifluoriasetyyli) -L-prolyyli/-L-leusyyli./amino./metyyli/ fosf iini-hapon etyyliesteriä käsiteltiin analogisella tavalla esi-15 merkissä 36(B) esitetyn kanssa, jolloin saatiin Z"(RS)-4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/-karbamoyyli/pentyyli///'/N-A- (trifluoriasetyyli) -L-pro-lyyliZ-L-leusyyli/amino/metyyli/fosfiinihappoa vaaleanruskeana kiinteänä aineena, joka sisälsi jonkin verran 20 vetybromidia.

Esimerkki 38 (A) Lähtöaineen valmistaminen 0,65 g ///N-Zl-Abentsyylioksi) karbonyyli/-L-pro-Iyyli7-L-Ieusyyli7amino/metyyli7^(RS) -4-metyyli-2-7·/ (S) -25 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyli/pen-tyyldjfosfiinihapon etyyliesteriä liuotettiin 8 mlraan etikkahappoa, lisättiin 2 ml asetaldehydiä ja seosta hyd-rattiin neljä tuntia käyttäen 0,01 g 5-%:ista palladoitua hiiltä. Liuos suodatettiin ja suodos haihdutettiin kui-30 vaksi.

(B) Menetelmä

Kappaleen (A) mukaan saatu tuote liuotettiin 2 mlraan 45-%:ista vetybromidin etikkahappoliuosta ja sen annettiin seistä huoneen lämpötilassa yön yli. Liuos 35 haihdutettiin ja jäännöstä haihdutettiin uudelleen toluee-nin kanssa, kunnes saatiin vaaleanruskea kiinteä aine.

65 8 9 0 59 Tämä kiinteä aine (0,6 g) saostettiin metanoliliuokses-ta lisäämällä dietyylieetteriä ja sen jälkeen se kuivattiin suurtyhjössä, jolloin saatiin //7 N-(1-etyyli-L-pro-lyyli) -L-leusyyli7amino7metyyli7/ (RS) -4-metyyli-2-/ f (S) -5 3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/pen-tyyli/fosfiinihappoa ruskeana vaahtona.

Esimerkki 39 0,55 g /~(RS)-4-metyyli-2-//"(S)-3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyli/karbamoyyli_7pentyyli.7 / 7 (N-L-pro-10 lyyli-L-leusyyli) amino./metyyli7fosfiinihapon etyylieste-riä liuotettiin 4 ml:aan etikkahappoa ja lisättiin 2 ml 45-%:ista vetybromidin etikkahappoliuosta ja seoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa yön yli. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä haihdutettiin uudel-15 leen tolueenin kanssa, jolloin saatiin 0,47 g vaaleanruskeaa vaahtoa. Saostaminen metanoliliuoksesta lisäämällä dietyylieetteriä ja kuivaaminen suurtyhjössä antoi /"(RS)- 4-metyyli-2-/” [(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyy-li7karbamoyyli_7pentyyli/77(N-L-prolyyli-L-leusyyli) ami-20 no7nietyyli7fosfiinihappoa ruskeana vaahtona.

Esimerkki 40 (A) Lähtöaineen valmistaminen (i) Analogisella tavalla esimerkissä 9(A)(i) ja (ii) esitetyn kanssa, paitsi että lähtöaineena käytet- 25 tiin (aminometyyli)/"(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyyll7pentyyli7fosfii- nihapon etyyliesteriä ja että käytettiin N-/(bentsyyli- 2 oksi)karbonyyli7-L-proliinin sijasta N -7(bentsyylioksi)-karbonyyli/-N6-ftaloyyli-L-lysiiniä, saatiin /’/’/N-T’(S)-30 2-/'l-(bentsyylioksi)formamidq7-6-ftaali-imidoheksanoyy-li7-L-leusyyli.7amino7 me tyyli/ / (RS) -4-metyyli-2-// (S) -3-metyyli-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli7 pen-tyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä valkoisena vaahtona.

(B) Menetelmä 35 0,6 g ///N-/(S)-2-/1-(bentsyylioksi)formamido/-6- ftaali-imidoheksanoyyli7-L-leusyyli7amino7metyyli77(RS)- 66 89059 4-metyyli-2-/7 (S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyy-li/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä liuotettiin 2 mlraan etikkahappoa ja 2 ml:aan 45-%:ista vety-bromidin etikkahappoliuosta ja sen annettiin seistä huo-5 neen lämpötilassa yön yli. Liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännöstä haihdutettiin uudelleen tolueenin kanssa, kunnes saatiin kiinteä aine. Tämä kiinteä aine liuotettiin kaliumvetykarbonaatin vesiliuokseen, lisättiin 0,14 ml bentsyylikloroformiaattia ja seosta sekoi-10 tettiin neljä tuntia. Liuosta uutettiin kahdesti dietyy-lieetterillä ja se tehtiin happamaksi vetykloridihapol-la. Kiinteä aine erotettiin ja se liuotettiin uuttamalla kuumalla kloroformilla. Orgaaninen liuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin, jol-15 loin saatiin 0,53 g ///N-/7S)-2-/'l-bentsyylioksi) formami-do7-6-f taali-imidoheksanoyy li/-L-leusyyli7 amino./me tyyli/-/(RS)-4-metyyli-2-/'/(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)-kutyyli/karbamoyyli/pentyyli/fosfiinihappoa amorfisena kermamaisena jauheena.

20 Esimerkki 41

Analogisella tavalla esimerkissä 39 esitetyn kanssa saatiin //7N-/N-/(bentsyylioksi)karbonyyli/-L-alanyyli/-L-leusyyli/amino./metyyli//"(RS) -4-metyyli-2-//(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyll/karbamoyy-25 1i/pentyyli/fosfiinihappoa vaaleanruskeana jauheena.

Esimerkki 42 (A) Lähtöaineen valmistaminen

Analogisella tavalla esimerkissä 36(A)(i) esitetyn kanssa, paitsi että käytettiin N-(bentsyylioksi)karbonyy-30 li-L-leusiinin sijasta N-(bentsyylioksi)karbonyyli-L-ala-niinia, saatiin ///N-A-/(bentsyylioksi)karbonyyli/-L-prolyyli/-L-alanyyli/amino/metyyli//(RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli/karbamoyy-li/pentyyli/fosfiinihapon etyyliesteriä vaahtona.

67 89059 (B) Menetelmä /[ (bentsyylioksi)karbonyyli7-L-prolyyli7- L-alanyyli/amino7metyyli7L (RS)-4-metyyli-2-/7(S)-3-metyy-li-1-(metyylikarbamoyyli)butyyli7karbamoyyli/pentyyli/-5 fosfiinihapon etyyliesteriä käsiteltiin samalla tavalla kuin on esitetty esimerkissä 39(B), jolloin saatiin ///N-ΓΛ-[(bentsyylioksi) karbonyyli7-L-prolyyli_7-L-alanyyli/-aminoYmetyyli/[ (RS) -4-metyyli-2-/Y"(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyyliYkarbamoyyliYpentyyliY fosfiinihappoa 10 valkoisena vaahtona.

Esimerkki 43 (A) Lähtöaineen valmistaminen

Analogisella tavalla esimerkissä 41(A) esitetyn kanssa saatiin /YY(S)-2-Yl-/'(bentsyylioksi) karbonyyliY-L-15 prolyyliYamino7-6-ftaali-imidoheksanamidoYmetyyll//(RS)- 4-metyyli-2-7Y(S) -3-metyyli-l- (metyylikarbamoyyli) butyy-1 iYkarbamoyyli/pentyyliYfosfiinihapon etyyliesteriä.

(B) Menetelmä /// (S) -2-1 l-/~(bentsyylioksi) karbonyyli/-L-prolyy-20 li/amino/-6-ftaali-imidoheksanamidoYmetyyli_//(RS)-4-me-tyyli-2-77(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyliY-karbamoyyliYpentyyliYfosfiinihapon etyyliesteriä käsiteltiin samalla tavalla kuin on esitetty esimerkissä 39(B), jolloin saatiin Y//(S)-2-/Ί-Ζ(bentsyylioksi)karbonyyliY-25 L-prolyyliYaminoY-6-ftaali-imidoheksanamidoYmetyyliY/(RS)- 4-metyyli-2-/Y(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyy-li/karbamoyyliYpentyyliYfosfiinihappoa vaahtona.

Esimerkki 44 (A) Lähtöaineen valmistaminen 30 (i) 21,0 g N®-/"(bentsyylioksi) karbonyyli7-L-ly- siiniä liuotettiin 75 ml:aan 2-M natriumhydroksidiliuos-ta ja 75 ml:aan dioksaania. Lisättiin 18,0 g di-tert-butyylidikarbonaattia ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 16 tuntia. Liuos haihdutettiin dioksaanin pois-35 tamiseksi, lisättiin vettä, liuosta uutettiin dietyyli-eetterillä ja se tehtiin happamaksi 6-M vetykloridihapol- 68 89059 la. Tuote laitettiin etyyliasetaattiin, pestiin natrium-kloridiliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin öljymäistä ainetta. Liuos, jossa oli tätä öljyä tetrahydrofuraanissa, jäähdytettiin läm-5 pötilaan -15°C ja sitä käsiteltiin 8,51 ml:11a N-etyyli-morfoliinia, 8,61 mlslla isobutyyliklooriformiaatilla ja viiden minuutin kuluttua 10,0 ml:lla 40-%:ista metyyli-amiinin vesiliuosta. Kahden tunnin sekoituksen jälkeen lämpötilassa 0°C liuotin poistettiin haihduttamalla ja 10 jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Orgaaninen liuos pestiin vedellä, 5-%:isella sitruunahappoliuoksella, vedellä, 5-%:isella natriumvetykarbonaattiliuoksella ja natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin. Uudelleenkiteyttämällä 15 etyyliasetaatista saatiin 20,5 N -/"(bentsyylioksi)kar-bonyyli7~N -(tert-butoksikarbonyyli)-L-lysiinin metyyli-amidia valkoisena kiinteänä aineena, jonka sulamispiste on 100 - 102°C.

(ii) 5,7 g (R tai S)-2-/7"etoksi (ftaali-imidometyy-20 li) fosfinyyli.7metyyli_7-4-metyylivaleriaanahappoa liuotettiin tetrahydrofuraaniin ja jäähdytettiin lämpötilaan -20°C. Lisättiin 1,90 ml N-etyylimorfoliinia ja 1,97 ml isobutyylikloroformiaattia ja 20 minuutin sekoituksen jälkeen lämpötilassa -20°C lisättiin 2,4 g N-hydroksi-25 bentsotriatsolia. Sen jälkeen liuosta sekoitettiin lämpötilassa -20°C 20 minuuttia. Liuos, jossa oli N^-/'(bent-syylioksi)karbonyyli7-L-lysiinin metyyliamidihydroklori-dia (valmistettu käsittelemällä 5,91 g N^-/"(bentsyyliok- -7 2 si)karbonyyli/-N -(tert-butoksikarbonyyli)-L-lysiinin me-30 tyyliamidia 4-M vetykloridin dioksaaniliuoksella 30 minuuttia huoneen lämpötilassa ja sen jälkeen haihduttamalla ja hieromalla hienoksi dietyylieetterin kanssa) dimetyyliformamidissa neutraloitiin 1,90 ml :11a N-etyylimorfoliinia ja se lisättiin seka-anhydridiliuokseen, 35 joka oli valmistettu, kuten edellä on esitetty. Seosta sekoitettiin lämpötilassa 0°C tunnin ajan, sen annettiin 69 89059 seistä huoneen lämpötilassa yön yli ja sitten se haihdutettiin. Jäännös laitettiin dikloorimetaaniin, pestiin vedellä, 1-M vetykloridihapolla, vedellä, 5-%:isella nat-riumvetykarbonaattiliuoksella ja natriumkloridiliuoksel-5 la, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin öljymäinen aine. Kromatogra-foimalla käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa 4-%:ista metanolia kloroformissa, saatiin 6,8 g bentsyyliT'(S)-5-Z"(R tai S) -2-/7etoksi (ftaali-imidometyyli) fosfinyyli7me-10 tyyli/-4-metyylivaleriaanaimido/-5-(metyylikarbamoyyli)-pentyyli.7karbamattia öljymäisenä.

(lii) 6,56 g bentsyyli^S) tai S)-2-//etok- si (ftaali-imidometyyli)fosfinyyli7metyyli7-4-metyyliva-leriaanaimidq7-5-(metyylikarbamoyyli)pentyyli7karbamaat-15 tia liuotettiin seokseen, jossa oli 120 ml etanolia ja 1,96 ml hydratsiinihydraattia, seosta sekoitettiin 16 tuntia ja sitten se haihdutettiin. Hydratsiinihydraattijäämät poistettiin lisäämällä ja haihduttamalla etanolia ja sen jälkeen tolueenia. Jäännös suspendoitiin dikloori-20 metaaniin ja tehtiin happamaksi etikkahapolla. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia, suodatettiin ja suodos haihdutettiin. Jäännös laitettiin 5-%:iseen sitruunahappoliuokseen, uutettiin dietyylieet-terillä, suodatettiin, suodos tehtiin emäksiseksi lisää-25 mällä kiinteää natriumvetykarbonaattia ja tuotetta uutettiin kolme kertaa 20 ml:11a dikloorimetaania kullakin kerralla. Liuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin 20 ml:ksi, lisättiin 2,82 g 1,8-naftaalihappo-anhydridiä ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 16 tuntia. Liuokseen lisättiin lämpötilassa 0°C 1,17 g N-hydroksibentsitriatsolia ja 1,61 g Ν,Ν'-disykloheksyy-likarbodi-imidiä. Liuosta sekoitettiin lämpötilassa 0°C kaksi tuntia, suodatettiin, suodos pestiin 5-%:isella natriumvetykarbonaattiliuoksella, kuivattiin vedettömäl-35 lä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin öljymäistä ainetta. Kromatografoimalla käyttäen 70 89059 silikageeliä ja eluoinnissa 4-%:ista metanolia dikloori-metaanissa saatiin 4,0 g bentsyyli/"(S)-5-f(R tai S)-2-Cfetoksi/"(1,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli7 fosfinyy-li/metyyli7-4-metyylivaleriaana-amidQ7-5-(etyylikarbamo-5 yyli)pentyylUkarbamaattia valkoisena vaahtona.

(iv) 1,0 g bentsyyli/f(S)-5-/*(R tai S)-2-//etoksi-( 1,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli7fosfinyyli7metyy-liJ'-4-metyylivaleriaana-amidq/-5-(etyylikarbamoyyli)pen-tyyli/karbamaattia, joka oli etanolissa, joka sisälsi 10 1,4 ml 1-M vetykloridihappoa, hydrattiin viisi tuntia 5-%:isen palladoidun hiilen avulla. Katalysaattori poistettiin suodattamalla ja suodos haihdutettiin kuivaksi. Viimeiset etanolijäämät poistettiin kahdella lisähaihdu-tuksella 15 ml:n kanssa tolueenia kummallakin kerralla.

15 Jäännös laitettiin dikloorimetaaniin, jäähdytettiin lämpötilaan 0°C, neutraloitiin 0,18 ml:11a N-etyylimorfolii-nia ja sitä käsiteltiin 0,293 g:11a N-/(bentsyylioksi)-karbonyyli/glysiiniä, 0,227 g:lla hydroksibentsotriatso-lia ja 0,316 g:lla N,N’-disykloheksyylikarbodi-imidiä.

20 Seosta sekoitettiin lämpötilassa 0°C tunnin ajan, sen annettiin seistä lämpötilassa 4°C yön yli, se suodatettiin, suodos pestiin 5-%:isella sitruunahappoliuoksella, vedellä, 5-%:isella natriumvetykarbonaattiliuoksella ja natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magne-25 siumsulfaatilla ja haihdutettiin. Kromatografoimalla käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa 7,5-%:ista metanolia etyyliasetaatissa saatiin 0,51 g bentsyyli/Y/TiS)-5-/"(R tai S)-2-//etoksiZ (1,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli/ fosfinyyli7metyyli.7-4-inetyylivaleriaana-amido./-5-30 metyylikarbamoyyli) pentyyli%/karbamoyyli7inetyyli_/karba-maattia vaahtona.

(B) Menetelmät 0,1 g bentsyyli//Y(S)-5-^(R tai S)-2-//etoksi-/(1,8-naf taleenidikarboksimido) metyyli / fosf inyyli_/metyy-3 5 li/-4-metyylivaleriaann-amida/-5- (metyylikarbamoyyli) -pentyyli/karbamoyyli./metyyliykarbamaattia, joka oli 7i 89059 3 mlrssa 45-%risen vetybromidin etikkahappoliuosta, annettiin seistä huoneen lämpötilassa 16 tuntia. Seosta haihdutettiin ja jäännöstä haihdutettiin uudelleen kolme kertaa 10 ml:n kanssa tolueenia kullakin kerralla. Saos-5 taminen metanoli/dietyylieetteriseoksesta ja sen jälkeen lyofilisointi vedestä antoi 0,11 g /"(R tai S)-2-/7 (S)-5-(glysyyliamino)-1-(metyylikarbamoyyli)pentyyli./karbamoyy-li/-4-metyylipentyyli77(1,8-naftaleenidikarboksimido)metyyli^ fosfiinihappohydrobromidia valkoisena pakastuskui-10 vattuna kiinteänä aineena.

(R tai S)-2-/*/'(etoksi) {ftaali-imidometyyli) fosfi-nyyli7metyyliJ-4-metyylivaleriaanahappo, jota käytettiin, kappaleessa (A)(ii) oli valmistettu seuraavasti (a) voimakkaasti sekoitettu seos, jossa oli 17,6 g 15 (0,27 mol) kiteistä fosfiinihappoa ja 43,6 g (0,2 mol) bentsyyli-2-isobutyyliakrylaattia 400 mlrssa dikloorime-taania, jäähdytettiin lämpötilaan 0°C ja sitä käsiteltiin pisaroittain 53,4 grlla (0,53 mol) trietyyliamiinia pitäen samalla lämpötilan alle 5°Crssa. Sen jälkeen, kun 20 lisäys oli suoritettu loppuun, lisättiin liuosta, jossa oli 56,0 g (0,52 mol) trimetyylisilyylikloridia 100 mlrssa dikloorimetaania, samalla sekoittaen voimakkaasti ja pitäen lämpötilan välillä 10 - 12°C. 30 minuutin kuluttua jäähdytyshaude poistettiin ja seosta sekoitettiin huoneen 25 lämpötilassa 24 tuntia. Sitten seosta käsiteltiin 200 mlr11a vettä ja 30 mlr11a 10-%rista rikkihappoa. Orgaaninen faasi erotettiin ja pestiin 200 mlr11a kylläistä natriumkloridiliuosta. Yhdistettyjä vesiuutteita uutettiin uudelleen 100 mlr11a dikloorimetaania ja orgaaninen 30 faasi pestiin 100 mlrlla natriumkloridiliuosta ja lisät-tiin aikaisemmin saatuihin dikloorimetaaniuuttoliuoksiin. Vedettömällä natriumsulfaatilla suoritetun kuivauksen jälkeen dikloorimetaani poistettiin haihduttamalla, jolloin saatiin 59,2 g /"(RS)-2-/(bentsyylioksi)karbonyyli/-35 4-metyylipentyyli7fosfiinihappoa värittömänä öljynä.

72 B 9 05 9 (b) Yhdiste, joka oli valmistettu edellisessä kappaleessa, liuotettiin 600 ml:aan etyyliasetaattia, lisättiin 25,0 g S(-)-metyylibentsyyliamiinia ja liuos jätettiin kiteytymään 24 tunniksi. Kiteinen suola kerät- 5 tiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 34,0 g valkoista kiinteää ainetta, joka uudelleenkiteytettiin yön aikana seoksesta, jossa oli 120 ml etanolia ja 48 ml etyyliasetaattia. Kiinteä aine kerättiin talteen ja kuivattiin, jolloin saatiin 21,3 g kiteistä suolaa, joka 10 uudelleenkiteytettiin yön aikana seoksesta, jossa oli 120 ml etanolia ja etyyliasetaattia. Tällöin saatiin 16,8 g / (R tai S)-2-/'(bentsyylioksi)karbonyyli_7-4-metyy-lipentyyli/fosfiinihapon S(-)-(X-metyylibentsyyliamiini-suolaa valkoisina kiteinä, joiden sulamispiste on 137 -15 138°C ja /^(/539 = “8,9° (c = 5 % etanolissa).

(c) Suspensiota, jossa oli 5,8 g edellisessä kappaleessa esitetyllä tavalla valmistettua suolaa 100 ml:ssa etyyliasetaattia, ravisteltiin 100 ml:n kanssa 10-%:ista rikkihappoa, kunnes saatiin kirkas liuos. Orgaaninen ker- 20 ros erotettiin, pestiin 100 ml:11a kylläistä natriumklo-ridiliuosta ja kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatil-la. Haihdutuksen jälkeen saatiin 4,0 g /"(R tai S) — 2— /"(bentsyylioksi) karbonyyli7-4-metyylipentyy li/f os fiini-happoa värittömänä öljynä; /a7g3g = -12,3° (c = 5 % eta-25 nolissa).

(d) 4,0 g edellisessä kappaleessa valmistettua yhdistettä liuotettiin 40 ml:aan kuivaa tetrahydrofu-raania, joka sisälsi 0,7 ml etanolia. Lisättiin 3,1 g N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidiä ja 0,17 g 4-dimetyy-30 liaminopyridiiniä ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Sitten liuotin poistettiin haihduttamalla ja jäännös hierottiin hienoksi 50 ml etyyliasetaatin kanssa ja disykloheksyyliurea poistettiin suodattamalla. Suodosta pestiin 50 ml :11a 5-%:ista kaliumvetysul-35 faattiliuosta ja sitten 50 ml:11a kylläistä natriumvety-karbonaattiliuosta. Vedettömällä natriumsulfaatilla 73 89059

suoritetun kuivauksen jälkeen etyyliasetaatti poistettiin haihduttamalla, jolloin saatiin 4,5 g bentsyyli(R

tai S)-2-1(etoksifosfinyyli)metyyli7-4-metyylivaleria- 20 o naattia värittömänä öljynä; ^/539 = -8,5° (c = 5 % eta-5 nolissa).

(e) Seosta, jossa oli 4,5 g bentsyyli(R tai S)-2-[(etoksifosfinyyli)metyyli/-4-metyylivalerianaattia ja 1,8 g di-isopropyylietyyliamiinia ja 30 ml dikloorimetaa-nia, jäähdytettiin jäähauteessa samalla sekoittaen typpi- 10 kehässä. Lisättiin 7 ml bis(trimetyylisilyyli)asetamidia, seosta sekoitettiin viisi minuuttia ja sitten lisättiin 3,36 g N-bromimetyyliftaali-imidiä. Jäähdytyshaude poistettiin ja seoksen lämpötilan annettiin tasaantua huoneen lämpötilaksi. Viiden tunnin sekoituksen jälkeen liuosta 15 pestiin 50 ml :11a 10-%:ista rikkihappoa ja 50 ml :11a nat-riumkloridiliuosta, kuivattiin vedettömällä natriumsul-faatilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 6,6 g keltaista öljyä, joka puhdistettiin flash-kromatografisesti käyttäen silikageeliä ja eluoinnissa etyyliasetaatti/n-20 heksaaniseosta (3:1). Tällöin saatiin 4,5 g bentsyyli-(R tai S)-2-LL (etoksi)(ftaali-imidometyyli)fosfinyyli/-metyyli7-4-metyylivalerianaattia värittömänä öljynä.

(f) 4,5 g bentsyyli(R tai S)-2-/7(etoksi)(ftaali-imidometyyli) fosfinyy117metyyli/-4-metyylivalerianaattia 25 liuotettiin 120 ml:aan etanolia ja liuosta hydrattiin 5,5 tuntia käyttäen 1,6 g 10-%:ista palladoitua hiiltä. Suodatuksen ja suodoksen haihdutuksen jälkeen saatiin 3,0 g (R tai S)-2-/Y(etoksi)(ftaali-imidometyyli)fosfi-nyyli7metyyli/-4-metyylivaleriaanahappo valkoisena vaah-30 tona.

Seuraavat esimerkit kuvaavat farmaseuttisia valmisteita, jotka sisältävät tämän keksinnön esittämiä yhdisteitä: 74 89059

Esimerkki A

Tabletit, jotka sisältävät seuraavia aineosia, voidaan valmistaa tavanomaisella tavalla

Aineosa Tablettia kohti 5 Kaavan I mukainen yhdiste 10,0 mg

Laktoosi 125,0 mg

Maissitärkkelys 75,0 mg

Talkki 4,0 mg

Magnesiumstearaatti 1,0 mg 10 Tabletin paino 215,0 mg

Esimerkki B

Kapselit, jotka sisältävät seuraavia aineosia, voidaan valmistaa tavanomaisella tavalla:

Aineosa Kapselia kohti 15 Kaavan I mukainen yhdiste 10,0 mg

Laktoosi 165,0 mg

Maissitärkkelys 20,0 mg

Talkki 5,0 mg

Kapselin täytteen paino 200,0 mg

Claims (6)

75 89059

1. Menetelmä fysiologisesti käyttökelpoisten di-peptidisten fosfiinihappojohdannaisten valmistamiseksi, 5 joilla on yleinen kaava R1 O R2 R3 R4 »Ml t I C X-CH-P-CH2-CH-C0-NH-CH-C0-NH-CH-R3 I OH 10 jossa R1 on vetyatomi, tai C1.6-alkyyli tai fenyyli-CC^-alkyy-li)ryhmä; R2 on C2_e-alkyyliryhmä;

15 R3 on luonnon α-aminohapon sivuketju, jossa oleva jokin funktionaalinen ryhmä on mahdollisesti suojattu tai jossa oleva jokin aminoryhmä on mahdollisesti asyloitu asyyli-ryhmällä, joka on johdettu C^-alkaanihaposta, bentsoe-haposta tai luonnollisesta α-aminohaposta tai sulfonyloi-20 tu, sillä ehdolla, että R3 ei ole vetyatomi tai metyyli-ryhmä ; R4 on vetyatomi tai metyyliryhmä tai R3 ja R4 yhdessä muodostavat ryhmän, jolla on kaava -(CH2)n-, jossa n on luku 4-11 päätepisteet mukaan lu-25 kien; R5 on vetyatomi tai C1.6-alkyyli-, karboksyyli-, C^-al-koksikarbonyyli- tai C^g-alkyyliaminokarbonyyliryhmä; ja * X on joko syklinen imidoryhmä, joka on johdettu alifaat- tisesta tai aromaattisesta dikarboksyylihaposta, N-karb-30 oksiaminohaposta, atsadikarboksyylihaposta tai 0-karbok- r sihydroksihaposta tai ryhmä, jolla on kaava Rd RC Rb R3 e I I I I

35 R-N-CH-CO-N-CH-CO-NH- (a) (L) (L) 76 8 9 0 5 9 jossa R“ on luonnon α-aminohapon sivuketju, jossa oleva jokin funktionaalinen ryhmä on mahdollisesti suojattu tai jossa oleva jokin aminoryhmä on mahdollisesti asyloitu asyyliryhmällä, joka on johdettu C^-alkaanihaposta, 5 bentsoehaposta tai luonnollisesta α-aminohaposta tai sul-fonyloitu, Rb on vetyatomi tai R“ ja Rb yhdessä muodostavat trimetyleeniryhmän, Rc on luonnon α-aminohapon sivu-ketju, jossa oleva jonkin funktionaalinen ryhmä on mahdollisesti suojattu tai jossa oleva jokin aminoryhmä on 10 mahdollisesti asyloitu asyyliryhmällä, joka on johdettu C1.6-alkaanihaposta, bentsoehaposta tai luonnollisesta a-aminohaposta tai sulfonyloitu, Rd on vetyatomi, tai Rc ja Rd yhdessä muodostavat trimetyleeniryhmän ja Re on pepti-dikemiassa tavanomainen N-suojaryhmä tai asyyli-, 15 alkyylisulfonyyli- tai fenyylisulfonyyliryhmä, jolloin R3:n, Ra:n ja Rc:n määritelmissä mainitut luonnon a-amino-hapot on valittu ryhmistä väliini, leusiini, fenyyliala-niini, tyrosiini, seriini, kysteiini, treoniini, metio-niini, aspargiinihappo, glutamiinihappo, arginiini, ly-20 siini, glysiini ja alaniini ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että yhdistettä, jolla on yleinen kaava R1 o R2 R3 R4 25. li I I I 5 X-CH-P-CH_-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CM-R . T I z il I 6 OR jossa ryhmillä R1, R2, R3, R4, R5 ja X on sama merkitys 30 kuin edellä on annettu ja R6 on C^-alkyyliryhmä, käsitellään hapolla tai halogeenitrimetyylisilaanilla, modifioiden funktionaalisesti, jos halutaan, saadun kaavan I mukaisen yhdisteen X:llä merkityssä syklisessä imido-ryhmässä oleva reaktiivinen substituentti ja myös, jos 35 halutaan, muuntaen saatu kaavan I mukainen yhdiste farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi. 77 8 9 059

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [(3-amino-ftaali-imido)metyyli][(RS)-4-metyyli-2-[[(S)-3-metyyli-l-(metyylikarbamoyyli)butyyli]karbamoyyli]pentyyli]fos- 5 fiinihappoa.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [(RS)-4-metyy-li-2-[[(S)-3-metyy1i-1-(metyy1ikarbamoyy1i)butyy1i]karba-moyyli]pentyyli](1,8-naftaleenidikarboksimidometyyli)fosio fiinihappoa.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [(R tai S)-4-metyyli-2-[[(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli]kar-bamoyyli]pentyyli](1,8-naftaleenidikarboksimidometyyli)- 15 fosfiinihappoa.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N-[N-[(R tai S)-2-E C E[[N-[1-(bentsyylioksi)karbonyyli]-L-propyyli]-L-leusyyli]amino]metyyli]hydroksifosfinyyli]metyyli]-4-me-20 tyylivaleryyli]-L-leusyyli]-L-alaniinia.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan [[1,4-dihydro- 2,4-diokso-3(2H)-kinatsolinyyli]metyyli][[(R tai S)-4-me-tyyli-2-[[(R tai S)-2-okso-3-atsasyklotridekyyli]karbamo- 25 yyli]pentyyli]fosfiinihappoa. 1 78 8 9059