FI88403C

FI88403C - Monoklonala antikroppar, förfarande för framställning av dessa och aff initetsreningsförfarande vari dessa används

Info

Publication number: FI88403C
Application number: FI834530A
Authority: FI
Inventors: Richard M Bartholomew; Daniel E Beidler; Gary S David
Original assignee: Hybritech Inc
Priority date: 1982-04-12
Filing date: 1983-12-09
Publication date: 1993-05-10
Also published as: CH672028A5; ES528000A0; FI834530A; EP0105359A1; ES521371A0; ES528001A0; GB2128630A; DK192191D0; IT1219779B; IT8320550A0; GB2128630B; EP0105359A4; GB8332644D0; CA1209907A; WO1983003678A1; ES8404858A1; FI834530A0; ES8706964A1; ES8506902A1; ATA901983A

Claims

1. Förfarande för framställning av en monoklonal antikropp med hög affinitet gentemot motsvarande antigen i 5 en första omgivning och läg affinitet gentemot denna antigen i en annan omgivning varvid ingendera omgivningen vä-sentligen irreversibelt förändrar de immunokemiska egen-skaperna hos antigenen eller antikroppen, känne-t e c k n a t därav, att man 10 a) sällar hybridomen och väljer en hybridompopula- tion, som producerar specifika monoklonala antikroppar mot antigenen, b) sällar populationen frän steg (a) och väljer en underpopulation av hybridomen, vilken producerar monoklo- 15 nala antikroppar med hög affinitet gentemot antigenen i en första omgivning, c) sällar underpopulationen frän steg (b) och väljer en underpopulation av hybridomen, vilken producerar monoklonala antikroppar med läg affinitet gentemot anti- 20 genen i en andra omgivning, varvid ingendera omgivningen är skadlig för antigenens eller antikropparnas immunolo-: **: giska eller biologiska egenskaper, och d) klonar ätminstone en av de i steg (c) valda hybridomen, sä att man fär en tillräcklig mängd monoklonala ..25 antikroppar.

2. Förfarande enligt patentkravet 1, känne-t e c k n a t därav, att den första omgivningen är ett flytande medium med ett första pH och den andra omgivningen är ett flytande medium med ett andra pH. 30

3. Förfarande enligt patentkravet 2, känne- tecknat därav, att pH för den första omgivningen och pH för den andra omgivningen ligger inom omrädet ca 4 - 10,5.

4. Förfarande enligt patentkravet 1, känne- -.-'35 tecknat därav, att bindningskonstanten mellan anti- 22 8 8 403 kroppen och antigenen i den första omgivningen är ä 109 och bindningskonstanten mellan antikroppen och antigenen i den andra omgivningen är s 108.

5. Förfarande enligt patentkravet 4, k ä n n e -5 tecknat därav, att bindningskonstanten i den första omgivningen är ä ΙΟ10 och bindningskonstanten i den andra omgivningen är < 106.

6. Förfarande enligt patentkravet 1, känne-tecknat därav, att den första omgivningen är ett 10 flytande medium med en första detergentkoncentration och den andra omgivningen är ett flytande medium med en andra detergentkoncentration.

7. Förfarande enligt patentkravet 6, känne-tecknat därav, att den första och den andra deter- 15 genten är joniska eller icke-joniska detergenter.

8. Förfarande för rening av en antigen, känne-tecknat därav, att det omfattar följande steg: a) en antikropp, som framställts enligt nägot av patentkraven 1-7, med hög affinitet gentemot antigenen i 20 en första omgivning och läg affinitet gentemot antigenen i en annan omgivning, varvid ingendera omgivningen väsentli-gen irreversibelt förändrar de immunokemiska eller bio-logiska egenskaperna hos antigenen eller antikroppen, im-mobiliseras, 25 b) antigenen binds vid antikroppen i den första omgivningen; c) de obundna orenheterna avskiljs frän den bundna antigenen; och d) den i ren form befintliga antigenen elueras frän 30 den immobiliserade antikroppen genom att som eluent använ- da ett medium som utgör den andra omgivningen.

9. Förfarande enligt patentkravet 8, k ä n n e -tecknat därav, att den första omgivningen är ett flytande medium med ett första pH och den andra omgivning- --'35 en är ett flytande medium med ett andra pH. 23 8 8 4 0 3

10. Förfarande enligt patentkravet 9, känne-t e c k n a t därav, att pH för den första omgivningen och pH för den andra omgivningen ligger mellan ca 4 och 10,5. 5

11. Förfarande enligt patentkravet 8, känne- t e c k n a t därav, att den första omgivningen är ett flytande medium med en första detergentkoncentration och den andra omgivningen är ett flytande medium med en andra detergentkoncentration. 10

12. Förfarande enligt patentkravet 11, känne- t e c k n a t därav, att den första och den andra deter-genten är joniska eller icke-joniska detergenter.

13. Förfarande enligt patentkravet 8, känne-t e c k n a t därav, att bindningskonstanten mellan anti- 15 kroppen och antigenen i den första omgivningen är s 109 och bindningskonstanten mellan antikroppen och antigenen i den andra omgivningen är <, 10®.

14. Förfarande för rening av en antikropp, som framställts enligt patentkravet 1, och som har hög affini- 20 tet gentemot antigenen i en första omgivning och läg af-finitet gentemot antigenen i en annan omgivning, varvid ingendera omgivningen väsentligen irreversibelt förändrar de immunokemiska eller biologiska egenskaperna hos antigenen eller antikroppen, kännetecknat därav, V 25 att det omfattar stegen, där man a) immobiliserar antigenen vid en fast bärare; b) binder antikroppen vid antigenen i en första omgivning; c) avskiljer de obundna orenheterna frän den bundna 30 antikroppen; och - : d) eluerar den i renad form befintliga antikroppen .···. frän den immobiliserade antigenen genom att som eluent ’ använda ett medium som utgör den andra omgivningen.

15. Förfarande enligt patentkravet 14, känne- 35. e c k n a t därav, att den första omgivningen är ett 24 88403 flytande medium med ett första pH och den andra omgivning-en är ett flytande medium med ett andra pH.

16. Förfarande enligt patentkravet 15, känne-t e c k n a t därav, att pH för den första omgivningen 5 och pH för den andra omgivningen ligger mellan ca 4 och 10,5.

17. Förfarande enligt patentkravet 14, känne-t e c k n a t därav, att den första omgivningen är ett flytande medium med en första detergentkoncentration och 10 den andra omgivningen är ett flytande medium med en andra detergentkoncentration.

18. Förfarande enligt patentkravet 17, känne-t e c k n a t därav, att den första och den andra deter-genten är joniska eller icke-joniska detergenter. 15

19. Förfarande enligt patentkravet 14, känne- t e c k n a t därav, att bindningskonstanten mellan anti-kroppen och antigenen i den första omgivningen är 2 109 och bindningskonstanten mellan antikroppen och antigenen i den andra omgivningen är < 108.

20 20. Förfarande för fraktionering av serumantikrop- par för att erhälla en fraktion med hög affinitet gentemot en antigen i en första omgivning och läg affinitet gente-- mot en antigen i en annan omgivning, varvid ingendera om givningen väsentligen irreversibelt förändrar de immunoke- 25 miska eller biologiska egenskaperna hos antigenen eller antikroppen, kännetecknat därav, att man im-mobiliserar antigenen pä ett fast underlag, bringar antigenen i kontakt med serumantikroppar i den första omgivningen för att binda antikropparna vid antigenen, och elu-:30 erar antikroppsfraktionen genom att som eluent använda ett : medium som utgör den andra omgivningen, varvid den eluera- de antikroppen har läg affinitet gentemot antigenen i den andra omgivningen.

21. Förfarande enligt patentkravet 20, känne-.35 t e c k n a t därav, att den första omgivningen är ett 25 8 8 403 flytande medium med ett första pH och den andra omgivning-en är ett flytande medium med ett andra pH.

22. Förfarande enligt patentkravet 21, känne-t e c k n a t därav, att pH för den första omgivningen 5 och pH för den andra omgivningen ligger mellan ca 4 och 10,5.

23. Förfarande enligt patentkravet 20, känne-t e c k n a t därav, att den första omgivningen är ett flytande medium med en första detergentkoncentration och 10 den andra omgivningen är ett flytande medium med en andra detergentkoncentration.

24. Förfarande enligt patentkravet 23, känne-t e c k n a t därav, att den första och den andra deter-genten är joniska eller icke-joniska detergenter. 15

25. Förfarande enligt patentkravet 20, känne- t e c k n a t därav, att bindningskonstanten mellan anti-kroppen och antigenen i den första omgivningen är > 109 och bindningskonstanten mellan antikroppen och antigenen i den andra omgivningen är < 108.

26. Monoklonal antikropp med hög affinitet gentemot motsvarande antigen i en första omgivning och läg affini-:: tet gentemot denna antigen i en annan omgivning, varvid :'·: ingendera omgivningen väsentligen irreversibelt förändrar : .'. de immunokemiska egenskaperna hos antigenen eller anti- .:.25 kroppen, kännetecknad därav, att den fram- ställts enligt förfarandet enligt nägot av patentkraven : 1-7.