FI87789C - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara epipodofyllotoxinglukosidderivat innehaollande nitrogen - Google Patents

Description

1 :7^59

Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten, typpeä sisältävien epipodofyllotoksiiniglukosidijohdannaisten valmistamiseksi 5 Tämä keksintö koskee menetelmää uuisen typpeä si sältävien epipodofyllotoksiiniglukosidijohdannaisten valmistamiseksi, joita voidaan käyttää terapeuttisesti kasvaimia vastaan.

Etoposidi (VP-16, Ia) ja teniposidi (VM-26, Ib) 10 ovat kliinisesti käyttökelpoisia syöpälääkkeitä, joita saadaan luonnossa esiintyvästä lignaanista, podofyllotok-siinista (II). Nimistössä käytettävä numerointitapa on esitetty kaavassa II.

15 JLo ΓΤΎι» 20 'o 0 Y I! K 2' rr 0 I ΙΓ3.

f [ CH3°'YY'ocH3 CH3°^SYAoCH3 0CH3

OH

25 I

Ia A = CH3 II

Ib A = 2-tienyyli

Etoposidi ja teniposidi ovat epipodofyllotoksiinin joh-30 dannaisia, joka epipodofyllotoksiini on podofyllotoksii- nin epimeeri avaruusrakenteiden poiketessa toisistaan 4-asemassa. Etoposidi ja teniposidi ovat tehokkaista monien eri syöpälajien, mm. pienisoluisten keuhkosyövän, ei-lym-fosyyttisen leukemian ja kivespussin syövän (joka ei ole 35 seminooma), hoidossa (AMA Drug Evaluation, 5. painos, 2 ·< 7 7 8?

American Medical Assosciation, Chicago, Illinois, 1983, s. 1554 - 1555).

Etopisidi ja teniposidi sekä menetelmiä niiden valmistamiseksi on esitetty US-patenttijulkaisuissa 5 3 524 844 (Keller-Juslen et ai.). Etoposidi-3',4'-kinonia (lila) on tuotettu hapettamalla etoposidi sähkökemialli-sesti [J.J.M. Holthuis et ai., J. Electroanal. Chem. Intefacial Electrochem. 184 (1985), nro 2, 317 - 329]. Kinonin, joka vastaa kaavaa III, valmistus kemiallisella 10 hapetuksella on esitetty US-patenttijulkaisussa 4 609 644 (Josef Nemec). Epipodofyllotoksiini-3',4'-kinonijohdannaiset, jotka vastaavat kaavaa III, jossa A ja Y ovat jäljempänä kaavan IV yhteydessä esitettyjen määritelmien mukaisia, toimivat lähtöaineina tämän keksinnön mukaises-15 sa menetelmässä typpeä sisältävien epipodofyllotoksiini-johdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava IV.

Y

A

"f

20 I

CXX-X/ ™ ry 25 ch3o^\^^0 o

Ula A = CH3; Y = H

30

Podofyllotoksiinin, jolla on kaava 35 3

OH

/ ^ ί ο 5 ί^] [I Ν 'ii ovat esittäneet Ayres ja Lim artikkelissa Cancer Chemother. Pharmacol. 7 (1982), 99 - 101.

Tämä keksintö koskee menetelmää kasvaimia vastaan 15 vaikuttavien yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kaava

IV

Y

A

20 H0 (^X300° - g o

B

25 jossa Y on H ja A on C1.10-alkyyli, C2_20-alkenyyli, C5_6-sykloal-30 kyyli, 2-furyyli, 2-tienyyli, aryyli, aralkyyli tai aral-kenyyli, joissa kukin aromaattinen rengas voi olla subs-tituoimaton tai yhdellä tai useammalla halogeeni-, Cj_R-alkyyli-, Cj.g-alkoksyyli, hydroksyyli-, nitro- ja/tai aminoryhmällä substituoitu, tai 4*, ·ί f? r λ • ' / G 3 A ja Y ovat kumpikin C^g-alkyylejä, tai A ja Y sekä se hiiliatomi, johon ne ovat liittyneet, muodostavat yhdessä C5.6-sykloalkyyliryhmän, ja B on jokin ryhmistä a - c 5 CH30''^X^ , r2o^^^nr4r5 10 O OR3 a b 15 c joissa R1 on Cj.jQ-alkyyli, C4_7-sykloalkyyli, C2.20-alkenyyli tai C2.10-alkynyyli, joista ryhmistä kukin voi olla substi-tuoimaton tai yhdellä tai useammalla Z-ryhmällä substi-20 tuoitu; aryyli, heteroaryyli, aralkyyli tai heteroaral-kyyli, joiden ryhmien rengasosa voi olla substituoimaton tai yhdellä tai useammalla C^g-alkyyli- ja/tai Z-ryhmällä substituoitu; halogeeni-, C^-alkoksyyli-, amino-, nitro-, syaani-, hydroksyyli- ja merkaptoryhmien tullessa . 25 kysymykseen mainittuina Z-ryhminä; R2 on H tai metyyli;

R11 on H, -CH, -CR10, -COR10 tai -CNHR10, joissa R10 on 1111¾ I

0 0 0 0 C^Q-alkyyli, joka voi olla substituoimaton tai yhdellä 30 tai useammalla Z-ryhmällä substituoitu, tai aryyli-C,.,,-alkyyli; R3 on H tai jokin fenolinsuojausryhmä ja R4 ja R5 ovat kumpikin itsenäisesti R11 tai R1 tai 35 5 ' · '' 7 < 9 O 2 3 9 R4 on H ja R5 on sulfonyyli tai -CH-Nf"*^tai -CH-N|)

f*12 V M2V

joissa R12 on H tai C^-alkyyli ja R13 on H, R1 tai -S-R1, 5 tai R3, R4 ja R5 muodostavat yhdessä ryhmän, jolla on kaava -CR14=, jossa R14 on H tai C^-alkyyli, tai NR4R5 on nitro-, atsido- tai N2*X'-ryhmä, jossa X" on anio-10 ninen ryhmä, sillä edellytyksellä, että R3 ei ole H, kun X" on anioninen ryhmä; tai NR4R5 on N-CHR6, N=CHNR7R® tai N*NNHR9, joissa R6 merkitsee samaa kuin R1 edellä, R7 ja R8 ovat kumpikin itsenäisesti H tai C1_8-alkyyli ja R9 on C^-alkyyli, tai 15 R3 ja NR4R5 muodostavat yhdessä sisäisen diatsoniumhydrok- sidisuolan.

Eräs edullinen toteutusmuoto on sellainen, jossa Y on H ja A on metyyli tai 2-tienyyli, edullisimmin metyy li.

20 NR4R5 tarkoittaa selitysosassa ja patenttivaati muksessa käytettynä sitä, että R4, R5 ja se typpiatomi, johon ne ovat liittyneet, tulee käsittää yhtenä kokonaisuutena ellei toisin ole erikseen mainittu. Alkyyli tarkoittaa suoraa tai haaroittunutta, tyydyttynyttä hiili-25 ketjua, kuten metyyliä, etyyliä, n-propyyliä tai isopro-pyyliä. Asyyli tarkoittaa karbonyyliryhmän (C-0) sisältävää orgaanista ryhmää sulkien sisäänsä formyylin, alka-noyylin, sustituoidun alkanoyyli, aryylikarbonyylin, al-koksikarbonyylin, substituoidun alkoksikarbonyylin, (ar)-30 alkyyliaminokarbonyylin ja substituoidun (ar)alkyyliami-nokarbonyylin sellaisten ryhmien rajoittumatta kuitenkaan tässä mainittuihin. Sulfonyyli tarkoittaa orgaanista ryhmää, joka sisältää ryhmän -S02-. Heteroaryyli tarkoittaa aromaattista rengasta, jossa ainakin yksi renkaan muodos- 6 :7759 tavista atomeista on muu kuin hiili; esimerkkejä sellaisista renkaista ovat pyridiini-, pyrroli-, tiofeeni- ja furaanirengas.

Kasvainten torjumiseksi nisäkkäillä, joilla on 5 kasvain, niille annetaan tehoava määrä kasvaimia vastaan vaikuttavaa yhdistettä, jolla on kaava IV.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle kaavan IV mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on tunnusomaista, se mitä on esitetty patenttivaatimuksen tunnusmerkkiosassa.

10 Tämän keksinnön mukaisessa valmistuksessa lähtöai neena käytettävä ortokinoni III voidaan valmistaa antamalla hapettimen reagoida 4'-demetyloidun epipodofyllok-siini-ö-D-glukosidijohdannaisen I kanssa. Menetelmää kuvataan US-patenttijulkaisussa 4 609 644, joka mainitaan 15 täten viitteenä.

Yksi puoli tätä keksintöä koskee yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa IVa

Y

/ 0 ’ " jfV

30 X k CK30>SSvsj7'X^ nor1 0 IVa 7 *7789 jossa A, Y ja R^ ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Eräs edullinen toteutusmuoto tarjoaa yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa IVa, jossa R* on C1_^Q-alkyyli, 5 fenyyli, fenyyli-C1_1Q-alkyyli tai fenyyli-C1_1Q-alkyy-lisubstituoitu rengas.

3'-oksiimieettereitä, jotka vastaavat kaavaa IVa saadaan annettaessa vastaavan ortokinonin, joka vastaa kaavaa III, reagoida O-substituoidun hydroksyyliamiinin 10 tai sen happoadditiosuolan kanssa sopivassa liuottimessa, kuten pyridiinissä. Reaktio toteutetaan edullisesti huoneen lämpötilassa reaktioajan ollessa riittävän pitkä mono-oksiimieetterin aikaansaamiseksi, esimerkiksi noin 10 minuutista noin yhteen tuntiin. Näin muodostetut tuot-15 teet voidaan eristää ja puhdistaa, esimerkiksi flash-kro-matografiakäsittelyllä tai vaihtoehtoisesti ne voidaan pelkistää suoraan vastaaviksi amiiniyhdisteiksi, jotka vastaavat kaavaa V, eristämättä niitä ensin.

Eräs toinen puoli tätä keksintöä koskee yhdistei-20 tä, jotka vastaavat kaavaa V

Y

25 " jQ °° 3 ^ NH2 OH '

V

35 Va Y = H, A = metyyli r* 7 7cg 8 ' ' °' jossa A ja Y ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia .

Kaavan V mukainen amiini voidaan valmistaa pelkistämällä kaavaa IVa vastaava oksiimieetteri ja kuten edel-5 lä on mainittu, voidaan käyttää joko puhdistettua kaavan IVa mukaista yhdistettä tai puhdistamatonta tuotetta. Ok-siimieetterin pelkistys voidaan toteuttaa tavanomaisin menettelytavoin, esimerkiksi heikkoa kemiallista pelkis-tintä käyttäen tai hydraamalla sopivan katalysaattorin, 10 kuten Pt:n, Pd:n, Ni:n, Ru:n tai Rh:n ollessa mukana. Edullisesti käytetään katalyyttistä hydrausta. Amiini-yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa V, voidaan valmistaa myös suoraan ortokinonista III huoneen lämpötilassa toteutettavalla ammoniakki- tai alkyyliamiinikäsittelyllä; . 15 reaktio jälkimmäisen kanssa tuottaa tulokseksi sekä amiinia V että vastaavaa alkyylisubstituoitua amiinia. Edullinen valmistusmenetelmä on kaavaa IVa vastaavan oksiimi-eetterin pelkistys.

Amiiniyhdisteiden, jotka vastaavat kaavaa V, 20 voidaan antaa reagoida monenlaisten reagenssien kanssa 2 yhdisteiden, jotka vastaavat kaavaa IVb (R on metyyli, 4 5 ja R ja R eivät molemmat ole H), aikaansaamsieksi. Reaktiot toteutetaan yleensä jossakin inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, dikloorimetaa-25 nissa tai kloroformissa, haluttujen tuotteiden aikaansaantiin soveltuvissa olosuhteissa. Tuotteet voidaan eristää ja puhdistaa tunnetuin menetelmin, kuten uudelleen-kiteyttämällä tai erilaisin kromatografisin menettelytavoin .

30 Yksi puoli tätä keksintöä koskee siis yhdisteitä,

jotka vastaavat kaavaa VI

9 *7789 γ

COCO

ϊ t>

ifS

J vdL 4 5

10 R

OR3

VI

3 15 jossa A, Y ja R ovat edellä esitettyjen määritelmien mu- 4.5 1010 kaisia, R on H ja R on sulfonyyli, -CH, -CR , -COR ,

tf «I «I

0 0 O

-CNHR10, joissa R10 on C^_10-alkyyli, joka voi olla subs- 0 20 tituoimaton tai yhdellä tai useammalla Z- tai aryyli-C^_1Q- ^V*13 ^ alkyyliryhmalla substituoitu tai -CH-N A CH-N ||

25 R12 Νθ' R12 A

0 12 13 joissa R ja R ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

30 Eräs edullinen toteutusmuoto tarjoaa yhdisteitä, 3 jotka vastaavat kaavaa VI, jossa R on H.

Erilaisia asyyliyhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa VI, voidaan valmistaa tavanomaisia menettelytapoja käyttäen. Esimerkiksi amidi johdannaisia voidaan valmistaa asy-35 loimalla yhdisteen V 3'-aminoryhmä karboksyylihapolla, edullisesti jonkin kondensoivan aineen, kuten disyklo- 10 8 7 7 89 heksyylikarbodi-imidin (DCC), ollessa mukana, happohalo-genidilla, symmetrisellä tai epäsymmetrisellä anhydri-dillä tai reaktiivisella esterillä tai amidilla. Vastaavalla tavalla kuin amideja, voidaan sulfonamideja valmis-5 taa antamalla yhdisteiden, jotka vastaavat kaavaa V, reagoida jonkin sulfonihappojohdannaisen, kuten sulfonyyli-halogenidin, kanssa. Valmistettaessa amidijohdannaisia happohalogenidia tai -anhydridiä käyttäen tai valmistettaessa sulfonamidijohdannaisia, on yleensä edullista to-10 teuttaa reaktiot huoneen lämpötilaa alemmassa lämpötilassa suunnilleen alueella -20 - 5°C. Yhdisteet, jotka vastaavat kaavaa V, voidaan käsitellä klooriformiaateilla tai hiilihappoestereillä 31-aminoryhmän muuntamiseksi karbamaattiryhmäksi tai substituoiduilla isosyanaateilla 15 vastaavien ureajohdannaisten aikaansaamiseksi. Mitä edellä esitettyyn tulee, odotettaessa reaktion sivutuotteena syntyvän vetyhalogenidia tai vahvaa happoa, on usein edullista lisätä reaktioseokseen amiiniemästä; sopivia amiiniemäksiä ovat esimerkiksi pyridiini, trietyyliamii-20 ni, di-isopropyylietyyliamiini ja dimetyyliaminopyridii-ni. Mikäli on toivottavaa suojata kaavaa VI vastaavien yhdisteiden 4'-hydroksyyliryhmä, voidaan valita jokin monista erilaisista fenolinsuojausryhmistä, esimerkiksi bentsyyli-, asyyli- tai asetaaliryhmä. Reagenssin valin-25 taa, suojausvaihetta ja suojausryhmän poistoa käsitellään yleisoppikirjoissa, kuten Theodora Greenen kirjassa Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1981. Arvellaan, että fenolinsuojausmenetelmät ovat yleensä sovellettavissa yhdisteisiin, jotka vastaa-30 vat kaavaa IVb.

Aminaaliyhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa VI, 0

O 13 U

jossa R5 on -CH-N^ CH-N |] t voidaan valmistaa

35 «12 V ^ *12 V

R 0 R H

0 11 β 7 7 S 9 käsittelemällä kaavan V mukainen amiini syklisellä imi-dillä vähintään ekvivalenttisen määrän aldehydiä ollessa mukana.

Yksi puoli tätä keksintöä koskee yhdisteitä, jot-5 ka vastaavat kaavaa VI

DB ^

A

15 I 3

• OR

VI

3 jossa A, Y ja R ovat edellä esitettyjen määritelmien 4 5 20 mukaisia ja R ja R ovat kumpikin itsenäisesti H tai 4 5 C^_^Q-alkyyli sillä edellytyksellä, että R ja R eivät molemmat ole H.

Eräs edullinen toteutusmuoto tarjoaa yhdisteitä, 3 4 jotka vastaavat kaavaa VI, jossa R ja R ovat molemmat H. 25 Kaavaa VI vastaavia N-alkyloituja johdannaisia voidaan saada aikaan monin tavoin. Esimerkiksi amiini V voidaan alkyloida suoraan esimerkiksi alkyylihalogeni-dilla, jolloin saadaan mono- tai disubstituoituja johdan-: naisia. Kuten myös on mainittu edellä, kinonin III voi- 30 daan antaa reagoida alkyyliamiinin kanssa, jolloin syntyy amiinin V lisäksi alkyylijohdannaista. Amiinien V mono-alkyloitujen johdannaisten valmistamiseen voidaan käyttää myös amidien, imiinijohdannaisten tai aminaalien pelkistämisiä koni i a 1 lis il la pelkisti.mil lä t:ai katalyytti sent i 35 hydraamalia ja kyseiset monoalkyloidut johdannaiset voidaan haluttaessa alkyloida edelleen samalla tai eri 12 87789 alkyloivalla ryhmällä; nämä menetelmät ovat kemian alalla hyvin tunnettuja ja niitä kykenee soveltamaan käytännössä ilman suurta kokemusta henkilö, jolla on normaali ammattitaito orgaanisten synteesien alalla.

5 Yksi puoli tätä keksintöä koskee yhdisteitä, jot

ka vastaavat kaavaa VII

Y

10 /°Ηίί>ΐΓΤ*Χ° 15 ' N-CHR6

OH

VII

3 6 20 jossa A, Y, R ja R ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Eräs edullinen toteutusmuoto tarjoaa yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa VII, jossa R^ on aryyli, substi-tuoitu aryyli, heteroaryyli tai substituoitu heteroaryyli.

25 Imiiniyhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa VII, voi daan muodostaa antamalla kaavaa V vastaavien yhdisteiden reagoida aldehydin kanssa huoneen lämpötilassa, edullisesti happokatalysaattorin, kuten esimerkiksi p-tolueeni-sulfonihapon, ollessa mukana ja käyttämällä myös jotakin 30 vedenpoistomenetelmää; sopivia menetelmiä siihen tarkoitukseen ovat dehydratoivan aineen, kuten molekyyliseulo-jen tai atseotrooppisen tislauksen käyttö. Kaavaa VII vastaavat yhdisteet ovat usein labiileja ja eräs edullinen menetelmä niiden eristämiseksi on kromatografinen kä- 35 sittely neutraalia alumiinioksidia käyttäen.

13 3 7 7 s 9

Yksi puoli tätä keksintöä koskee yhdisteitä, jotka vastaavat kaavoja VIII ja IX ja joita voidaan saada aikaan antamalla amiinien, jotka vastaavat kaavaa V, reagoida trialkoksiortoesterin kanssa happokatalysaattorin 5 ollessa mukana tai vastaavasti, amidiasetaalin kanssa.

Eräs edullinen toteutusmuoto tarjoaa yhdisteitä, jotka 14 vastaavat kaavaa VIII, jossa R on H ja yhdisteitä, jot- 7 8 ka vastaavat kaavaa IX, jossa R ja R ovat molemmat alkyylejä.

10 ” o£C0 A.

MeO l “ 20 °n/ R14

VIII

25

Y

30 (#ΐΠί]/β ; o

XX

CH,ox I N-CHH) o.1 i’ » 35 zx 14 ο τι η λ 6 ! b 7 joissa kaavoissa A, Y, R"^, R7, R® ja R14 ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Yksi puoli tätä keksintöä koskee yhdisteitä, jotka vastaavat kaavoja Xa ja Xb cm _ 00¾ 15 *1 B°—— "" Ϊ o 25 c=3o^Nj^e

OJT

Xb joissa A, Y ja X ovat edellä esitettyjen määritelmien 3 30 mukaisia ja R on fenolinsuojausryhmä.

Yhdisteet, jotka vastaavat kaavaa V, voidaan diat-sotoida jossakin inertissä orgaanisessa liuottimessa alennetussa lämpötilassa, jolloin saadaan veden avulla eristämisen jälkeen stabiilia sisäistä diatsoniumhydroksidi-35 suolaa Xa. Vastaionin sisältävä diatsoniumsuola Xb voidaan valmistaa, jos 4'-hydroksyyliryhmä derivatisoidaan is 7 7 C 9 ensin esimerkiksi suojaamalla se jollakin tavanomaisella fenolinsuojausryhmällä ennen diatsotointia.

Yksi puoli tätä keksintöä koskee 3'atsidi- ja 3'-nitrojohdannaisia, joilla on vastaavat! kaavat XI ja 5 XII

Y

15 ch OR3

XI

Y

cOCO

* D

25 jQl

OR

XII

30 3 joissa A, Y ja R ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Atsidianalogi valmistetaan korvaamalla diatsonium-ryhmä atsidiryhmällä. Yhdisteiden, jotka vastaavat kaavaa 35 V, hapetus perhapolla tuottaa tulokseksi 31-nitroana1oqoja .

16 87 7C?

Yksi puoli tätä keksintöä koskee yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa XIII ja joita voidaan valmistaa feno-lisuojatuista diatsoniumyhdisteistä, jotka vastaavat kaavaa Xb, käsittelemällä ne amiinilla; sen jälkeen tehtävä 5 suojauksen poisto tuottaa tulokseksi 4'-hydroksi-3-tri-atseeniyhdisteen I o 15 JÖL 9

N-N-NHR

ch3o 1

0RJ

XIII

3 . 9 20 jossa a, Y, R ja R ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Yksi puoli tätä keksintöä koskee yhdisteitä, jotka vastaavat kaavoja XIV ja XV

v 25 i sc· ^ ' <'XXX> S o 0 0

XIV

17 27789 γ <ÄX)· * ο hq/Y^nhr11

OH

10 XV

joissa R^ on asyyliryhmä ja A ja Y ovat edellä esitettyjen määritelmien mukaisia.

Eräs edullinen toteutusmuoto tarjoaa yhdisteitä, 15 jotka vastaavat kaavoja XIV ja XV, joissa on H, for- myyli, substituoitu tai substituoitumaton alkanoyyli, substituoitu tai substituoimaton alkoksikarbonyyli tai substituoitu tai substituoimaton (ar)alkyyliaminokarbo-nyyli.

20 Yhdisteitä, jotka vastaavat kaavaa XIV, voidaan valmistaa hapettamalla yhdisteistä, jotka vastaavat kaa- 3.4 5 vaa VI, jossa R ja R ovat molemmat H ja R on asyyli.

Voidaan käyttää sellaisia hapettimia kin NalC^/CH^CN/i^O ja NaNO^/AcOH/THF samoin kuin muitä tavallisia hapetti-25 mia. Kaavan XIV mukaiset yhdisteet voidaan muuntaa helposti vastaaviksi hydrokinoneiksi XV sopivalla pelkisti-mellä, kuten natriummetabisulfiitilla, pelkistämällä tai katalyyttisestä hydraamalla.

Yksi puoli tätä keksintöä koskee yhdisteitä, jot-30 ka vastaavat kaavoja XVI - XIX ja joita voidaan valmistaa kaaviossa I esitetyllä reaktiosarjalla. Hydrokinoneista, jotka vastaavat kaavaa XV, voidaan poistaa asyyliryhmä tavanomaisin menetelmin, jolloin saadaan 3',4'-dihydrok-si-5'-aminojohdannaisia, jotka vastaavat kaavaa XVI; niin-35 pä esimerkiksi R5:n ollessa trikloorietoksikarbonyyliryh-mä, se voidaan poistaa esimerkiksi sinkillä ja etikka- 18 ίί?7Β9 hapolla. Kaavaa XVI vastaavat yhdisteet voidaan sitten muuntaa 31,4'-dihydroksi-5'-atsidijohdannaisiksi, jotka vastaavat kaavaa XVIII, yllä kuvatulla yleisellä menettelytavalla; mainittujen atsidijohdannaisten refluksointi 5 klooratussa hiilivetyliuottimessa tuottaa tulokseksi vastaavia 31-amino-ortokinoneja, jotka vastaavat kaavaa XIX; menettelytapaa atsidisubstituoitujen bentsohydroki-nonien muuntamiseksi aminosubstituoiduiksi bentsokino-neiksi kuvataan artikkelissa H.W. Moore ja H.R. Shelden, 10 J. Org. Chem. 33 (1968) 3019 - 24.

Kaavio I

XV c'^2\__0 15 bo·^-'^'’”"^ ce · /° l/lr \\ e <Xv4

HO MMJ

20 o· xvj

V

^____

oOCO

30 bo^T"«2®

XVII

V

35 19 ?7 789 ° ".Av

OH

χνηι 10

V

-η

' cjOOO

ά *

HjN ' (1 0 Ο

XIX

Biologinen aktiivisuus 25 Tyypillisten tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden aktiivisuutta kasvaimia vastaan tutkittiin in vitro suoritetulla sytotoksisuustestillä, jolla määritettiin niiden aktiivisuus ihmisen ja hiiren kasvainsolulinjoja sekä transplantoitavissa olevaa hiiren P388-leukemiaa vas-30 taan.

P388-leukemia

Naaraspuolisiin GDF1-hiiriin implantoitiin intra- ^ 6 peritoneaalisesti kasvaininokulaatti, joka käsitti 10 hiiren P388-leukemian askiitessolua ja niitä hoidettiin 35 erilaisilla annoksilla testattavaa yhdistettä; käytettiin neljää hiirtä kutakin annostasoa kohden ja 10 hiirtä 20 s 7 789 vertailuryhmänä, jota "hoidettiin" fysiologisella suolaliuoksella. Yhdisteet annettiin intraperitoneaalisina ruiskeina päivinä 5 ja 8 (päivän 1 ollessa se päivä, jolloin kasvain implantoitiin). Aktiivisuus kasvainta vas-5 taan ilmaistiin prosentuaalisena T/C-arvona, joka on lääkkeellä hoidetun ryhmän keskimääräisen hengissäpysy-misajan (MST) ja suolaliuoskäsitellyn vertailuryhmän MST:n suhde. Yhdisteellä, jonka prosentuaalinen T/C-arvo on 125 tai sitä suurempi, katsotaan yleensä olevan huo-10 mättävä kasvaimen vastainen vaikutus P388-leukemiatestis-sä. Koe kesti 31 vuorokautta, jonka jakson lopussa todettiin henkiin jääneiden lukumäärä. Edellä kuvatun tutkimuksen tulokset on esitetty taulukossa I; siinä on ilmoitettu ainoastaan maksimi-T/C (%) ja annos, jolla maksimi-15 vaikutus saavutetaan.

21 37789

Taulukko I

Vaikutus hiiren P388-leukemiaa vastaan

Yhdistettä vas- Annos Maksimi-T/C

5 taavan esim, nro (mq/ka/ini) 1_(%)1 1 100 200 (444) 2 50 242 3 60 228 (444) 4 140 (80) 170 (275) 10 7 70 (80) 135 (275) 10 >160 (80) 110 (275) 11 >160 (60) 110 (280 12 140 (60) 150 (280) 13 >200 (80) 230 (275) 15 17 >140 (60) 195 (280) 18 >120 (60) 200 (280) 19 >200 (60) 230 (280) 20 70-140 (80) 175 (275) 21 >200 (60) 225 (280) 20 22 >200 (80) 235 (275) 24 140 (25) >140 (>140) 25 >200 (80) 240 (275) 27 >120 (60) 165 (280) 28 160 (25) 125 (>140) 25 29 j>20 0 (80) 135 (275)

Suluissa olevat arvot saatiin käytettäessä samassa kokeessa positiivisena vertailuaineena etoposidia. Sytotoksisuustesti 30 in vitro suoritettu sytotoksisuustesti sisälsi nisäkkäiden erilaisten kasvainsolujen, mm. ihmisen kas-vainsolujen, viljelyn mikromaljalevyillä vakiintuneita kudosviljelymenetelmiä käyttäen. Se kunkin yhdisteen pitoisuus, joka vaadittiin aiheuttamaan solujen kasvun 35 50-%:inen inhibitio (IC5Q), määritettiin sitten nelin kertaisella sarjalaimennustekniikalla. Menetelmän päte- 22 ''7739 vyyden on vahvistanut raportti, joka julkaistiin lehdessä Proceedings of the American Association for Cancer Research 25 (1984) 1891 (abstrakti nro 328). Kunkin yhdisteen testaukseen käytettiin seuraavia kasvainsolutyyp-5 pejä: hiiren Bl6-F10-melanoomasoluja, ihmisen Moser-pak-suosuolensyöpäsoluja, ihmisen SW900-keuhkosyöpäsoluja sekä kolmea ihmisen paksusuolensyöpäsolulinjaa, nimittäin HCT-116:ta, HCT-VM:ää ja HCT-VP:tä, joista kahdesta viimeksi mainitusta edellinen on resistentti teniposidille 10 (VM) ja jälkimmäinen etoposidille (VP). IC5Q-arvot, jotka ovat alle 500 ^ug/ml, ovat selviä merkkejä kasvaimen vastaisesta aktiivisuudesta. Taulukossa II on esitetty erilaisten tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden IC^q-arvot edellä mainittuja solulinjoja vastaan.

15 Taulukko II

In vitro -sytotoksisuustestin IC^g-arvot B-16-F10 HCT-116 HCT/VM3 4 HCT/VP35 MOSER SW900 20 Esim. 4 13.9 16,2 23 40 56 63 17.9 15,7 33 47 49 63

Esim. 7 54 60 63 90 >188 78 25 63 63 65 83 82 >188

Esim. 10 57 71 81 92 121 116 87 78 100 106 >250 >250

Esim. 11 30 44 58 24 30 89 74 40 98 26 31 93 84 '4 '7 7 O 3 23 ' '

Taulukko II (jatkoa) B-16-F10 HCT-116 HCT/VM3 4 HCT/VP3 5 MOSER SW9 00 5 Esim. 12 61 54 59 88 90 >188 54 62 >188 132 >188 >188

Esim. 13 5,5 3,6 2 ,1 3,4 12,3 11,0 10 8,7 4,1 3,9 3,3 12,1 8,6

Esim. 17 6,7 12T3 23 31 45 22 8,4 10,1 24 44 45 44

Esim. 18 15 12,5 29 37 55 40 42 15.3 18,4 >125 >125 37 40

Esim. 19 16,9 13,9 21 71 38 42 16.4 12,7 19,3 >188 32 28 20 Esim. 20 13.3 9,6 92 35 74 >188 19.8 5,6 >188 61 >188 78

Esim. 21 5.3 10,0 14 26 25 76 25 4,3 39 10,6 15,6 27 33

Esim. 22 10.9 17,0 21 36 >250 >250 14,1 13,3 16,2 43 >250 >250

Esim. 24 ^^ 30 41 43 56 >188 92 66 50 53 82 92 84 90 24 '<1113

Taulukko II (jatkoa) B-16-F10 HCT-116 HCT/VM34 HCT/VP35 MOSER SW900

Esim. 25 29 24 38 78 >250 76 25 38 43 102 120 >250

Esim. 27

Sf3 10,0 14 26 25 76 1ft 4.3 39 10,6 15,6 27 33 1U (1)

Esim. 28' 72 66 58 84 87 80 81 68 64 70 71 >188

Esim. 29 15 39 53 55 77 71 >188 38 46 53 79 77 >188 *Arvot etoposidille samassa kokeessa (eri kuin esimerkkien 24 ja 28 mukaisten yhdisteiden tapauksessa) ovat 2,7, 20 1,9 (B16-F10); 2,1, 2,7 (HCT-116); 6,1, 3,1 (HCT/VM34); 30, 41 (HCT/CP35); 38, 39 (Moser); ja 67, 12,5 (SW900).

(1) Arvot etoposidille samassa kokeessa ovat 7,0, 4,6 (B16-F10); 9,6, 10,2 (HCT-116); 31, 33 (HCT/VM34); 92, 51 (HCT/VP35); 126, 112 (Moser); ja 25, 65 (SW900).

25

Edellä esitettyjen eläinkoetulosten perusteella on selvää, että yhdisteillä, jotka vastaavat kaavaa IV, on voimakas inhibitorinen vaikutus nisäkkäiden kasvaimia vastaan. Niinpä nisäkkäiden kasvainten inhiboimiseksi koh-. 30 teelle, jolla on kasvain, voidaan antaa tehoava, kasvainta inhiboiva annos yhdistettä, joka vastaa kaavaa IV.

Ko. yhdisteistä, voidaan valmistaa farmaseuttisia koostumuksia, jotka sisältävät tehoavan, kasvainta inhiboivan määrän jotakin kasvaimia vastaan aktiivista yhdis-35 tettä, joka vastaan kaavaa IV ja jotakin farmaseuttisesti ο 7πη 25 , y, > hyväksyttävää kantaja-ainetta. Nämä koostumukset voivat olla missä tahansa sellaisessa farmaseuttisessa muodossa, joka on toivottua antotietä ajatellen tarkoituksenmukainen. Esimerkkejä sellaisista koostumuksista ovat 5 suun kautta annettaviksi soveltuvat kiinteät koostumukset, kuten tabletit, kapselit, pillerit, pulverit ja rakeet, suun kautta annettaviksi soveltuvat nestemäiset koostumukset, kuten liuokset, suspensiot, siirapit ja tinktuurat sekä parenteraalisesti annettaviksi soveltu-10 vat valmisteet, kuten steriilit liuokset, suspensiot ja emulsiot. Ne voidaan myös valmistaa steriilien kiinteiden koostumusten muodossa, jotka koostumukset voidaan liuottaa steriiliin veteen, fysiologiseen suolaliuokseen tai johonkin muuhun steriiliin, ruiskeisiin kelpaavaan väliin aineeseen juuri ennen käyttöä.

Alan ammatti-ihmiset pystyvät helposti määrittämään edullisimmat annokset ja hoito-ohjeet määrätylle nisäkäskohteelle. On tietysti huomattava, että todellinen käytettävä annostus vaihtelee kulloisenkin koostumuk-20 sen, kulloinkin käytettävän yhdisteen, antotavan, hoidettavan kasvaimen sijainnin, taudinkantajan ja hoidettavan taudin mukaan. Monet lääkkeen vaikutusta muuttavat tekijät, kuten potilaan ikä, paino ja sukupuoli, ruokavalio, antoaika ja -tie, erittymisnopeus, potilaan tila, lääk-25 keiden yhdistelmät, reaktioherkkyydet ja taudin vakavuus, : tulee ottaa huomioon.

Seuraavat esimerkit annetaan ainoastaan keksinnön valaisemiseksi, eikä niitä tulisi käsittää keksinnön piiriä rajoittaviksi.

30 Seuraavissa esimerkeissä kaikki lämpötilat on esi tetty Celsius-asteina. Sulamispisteet rekisteröitiin kapi llaarisella Thomas-Hoover-sulamispistelaitteella ja ne ovat korjaamattomia. ^H-NMR-spektrit rekisteröitiin joko Bruker WM 360 tai Varian VX2 200 -spoktrofotometrillä 35 (käyttäen sisäisenä standardina CDCl^). Kemialliset siirtymät on ilmoitettu ό-yksikköinä ja koplausvakiot 26 R 7 7 R 9 hertseinä. Jakautumiskuvioista käytetään seuraavia merkintöjä: s, singletti; d, dubletti; t, tripletti; q, kvartetti; m, multipletti; bp, leveä piikki; ja dd, kaksois-dupletti. Infrapunaspektrit määritettiin joko Fourier-5 muunnosinfrapunaspektrofotometrillä Beckman Model 4240 tai Perkin-Elmer 1800 ja on ilmoitettu resiprookkisent-timetreinä (cm ^). Ohutkerroskromatografia-analyysi (TLC) tehtiin valmiiksi päällystetyillä silikageelilevyillä (60F-254) käyttäen visualisointiin UV-valoa ja/tai jodi-10 höyryä. Suuren erotuskyvyn ja pienen erotuskyvyn massa-spektrit rekisteröitiin KRATOS MS 50 ja KRATOS MS 25RFA -spektrofotometrillä, tässä järjestyksessä. "Flash-kro-matografia" tarkoittaa menetelmää, jonka on esittänyt Still /W.C. Still et ai., J. Org. Chem. 43 (1978) 2923[7 15 ja ne käsittelyt tehtiin käyttäen joko E. Merckin sili-kageeliä (200 - 400 mesh) tai Woelmin silikageeliä (32 -63 ^um). Kaikki liuottimien haihdutukset toteutettiin alennetussa paineessa.

Esimerkki 1 20 Etoposidi-orto-kinoni-3'-O-metyylioksiimi (IVa; A = R^ = metyyli, Y = H)

Liuokseen, joka sisälsi etoposidi-orto-kinonia lila (350 mg, 0,611 mmol) pyridiinissä (20 ml), lisättiin liuos, joka sisälsi mctoksyyliamiinihydrokloridin (350 mg, 25 4,19 mmol) pyridiinissä (10 ml). Syntynyttä oranssia liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja sen jälkeen pyridiini poistettiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin Cl^C^iiin (50 ml) ja liuokselle tehtiin partitio H^Orn (20 ml) ja 1 N HCl:n (10 ml) kesken. Ve-30 sikerros uutettiin vielä CH2cl2:11a (25 ml) ja yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin MgSO^:lla. Liuotin haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin tummanoranssi öljy. Flash-kromatografiakäsittely silikageelillä (15 g) käyttäen eluenttina 5 % CH^OH sisältävää CH2C12 antoi tuot-35 teeksi 243 mg (66 ?.) otsikon mukaista tuotetta oranssina kiinteänä aineena. Triturointi ELMOin kanssa tuotti 27 -''7759 tulokseksi analysoitavaksi kelpaavan näytteen. Suuremmassa mitassa valmistettaessa tätä oksiimia ei yleensä puhdisteta, vaan se hydrataan suoraan amiiniksi Va noin 70 %:n kokonaissaannolla.

5 _i IR (KBr) 3480, 1775, 1670, 1625, 1488, 1237, 1040 cm 1.

XH NMR (CDClj) δ 6,82 (s,lH), 6t56 (s,lH), 6,48 (d,lH), 6,07 (d, 1H) , 6f 01 (d, 1H) 5f75 (d,lH) , 4.92 (d,lH) , 4,76 (q,lH), 4,66 (d, 1H) , 4.50 (dd,lH), 4,38 (dd,lH), 4,27 (d,lH), 4,22-4.17 (m, 1H) , 4,15 (s,3H), 3,79 (s,3H), 3,78-3,74 (m,1H), 3,63-3,58 (m,lH), 3,44 (dd,lH), 3,38-3,30 (m,3H), 2,95-2, 87 (m,lH), 1,40 (d,3H).

Alkuainenalyysi yhdisteelle C29H3iNOi3: 15 Laskettu: C 57,90 H 5,19 N 2,33

Saatu: C 56,01 H 5,04 N 2,41

Esimerkki 2

Etoposidi-orto-kinoni-3’-O-bentsyylioksiimi (IVa; A = metyyli, Y = H, = bentsyyli) 20 Noudatettiin esimerkin 1 mukaista yleistä menette lytapaa, paitsi että metoksyyliamiinihydrokloridin sijasta käytettiin O-bentsyylihydroksyyliamiinihydrokloridia, jolloin saatiin otsikon mukainen yhdiste.

Esimerkki 3 25 2'-amino-31-demetoksietoposidi (Va)

Etoposidi-orto-kinonista lila (4,1 g, 7,2 mmol) ja metoksyyliamiinihydrokloridista (4,1 g, 49 mmol) esimerkissä 1 kuvatulla menettelytavalla saatu puhdistama-ton oksiimi liuotettiin reagenssilaatua olevaan alkoho-30 liin (275 mol) ja liuokseen lisättiin 20 V, palladium- hydroksidia hiilikantoaineella sisältävää katalysaattoria (290 mg) ja 10 % palladiumia hiilikantoaineella sisältävää katalysaattoria (1,6 g). Seosta hydrattiin 2,8 - 3,5 baarin l^-paineessa. 16 tunnin kuluttua seos suoda-35 tettiin piimään läpi ja pestiin etyyliasetaatilla ja liuotin haihdutettiin pois. Raakatuote puhdistettiin flash-

?R O '7 ^ O O

kromatografiakäsittelyllä käyttäen adsorbenttinä 300 g silikageeliä (E. Merck, 230 - 400 mesh) ja eluenttina EtOAc-heksaaniseosta (8:2), jolloin saatiin 2,89 g (kokonaissaanto 70 %) otsikon mukaista yhdistettä valkoise-5 na kiinteänä aineena. Uudelleenkiteytys etanolista tuotti tulokseksi analysoitavaksi kelpaavan näytteen.

IR (KBr) 3455, 1775, 1615, 1490, 1235, 1070, 1030, 1000, 930 -1 cm .

10 i XH NMR (CDC13) δ 6,76 (s,lH), 6,48 (s,lH), 6.37 (d,lH), 5,96 (ABq, 2H) , 5t 65 (d,lH), 4,87 (d,lH), 4,73 (q,lH), 4,61 (d,1H), 4,47 (d,1H), 4,38 (dd,lH), 4,23-4,16 (m,2H), 3,78 (s, 3H) , 3,76-3,72 (m,lH), 3,60-3,55 (m,lH), 3,42 (dd,lH), 3,37-3,30 (m, 2H) , 3,21 (dd,lH), 2,97-2,88 (m, 1H) , 1,37 (d , 3H) .

Alkuaineanalyysi yhdisteelle ^26Η31Ν012:

Laskettu: C 58,63 H 5,45 N 2,44 Saatu: C 57,85 H 5,76 N 2,35 20 Esimerkki 4 3’-demetoksi-31-metyyliamiinietoposidi (VI; A = R5 = metyyli, Y = R3 = R4 = H)

Liuos, joka sisälsi 10-%:ista metyyliamiinin vesiliuosta (1 ml, 12,80 mmol) MeOH:ssa (4 ml), lisättiin 25 kolmen minuutin aikana liuokseen, joka sisälsi etoposi- di-orto-kinonia lila (0,25 g, 0,437 mmol) MeOH:ssa (50 ml) ja jota sekoitettiin huoneen lämpötilassa. Tummanpunainen liuos muuttui tummanruskeaksi. 30 minuutin kuluttua liuos väkevöitiin ja puhdistettiin preparatiivisen kromatogra-30 fian avulla käyttäen adsorbenttinä silikageeliä ja eluenttina 5 % MeOH sisältävää CI^C^· Kahden voimakkaimmin UV-valoa absorboineen vyöhykkeen eristys tuotti tulokseksi kahta päätuotetta kompleksisena seoksena. Ylempi eristetty vyöhyke tuotti tulokseksi otsikon mukaista yh-35 distettä (45 mg, 18 %) likaisenvalkoisena kiinteänä aineena .

'j ^ <7 Λ 'Λ 29 / / O 7 ΧΗ NMR (CDC13) δ 6,82 (s, 1H) , 6.38 (s,lH), 6,16 (s,lH), 5,94 (m, 2H) , 5,85 (s , 1H) , 4,95 {d , J=3,2Hz , 1H) , 4,75 4,70-4,32 (m,3H), 4,21 (m,2H), 4,78 (s,3H), 4,75-2,85 (m, 7H) , 2,72 (s,3H), 1,40 (d, J=5,0Hz , 1H) .

5

Alempi eristetty vyöhyke tuotti tulokseksi esimerkin 3 mukaista yhdistettä (51 mg, 20 %).

Esimerkki 5 3'-butyyliamino-3'-demetoksietoposidi (VI; A = 10 metyyli, Y = R3 = R4 = H, R3 = butyyli)

Noudatettiin esimerkin 4 mukaista yleistä menettelytapaa, paitsi että käytettiin n-butyyliamiinia, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä ja esimerkin 3 mukaista yhdistettä.

15 MS (EI) m/e+ = 630 (m+l)+.

Osa 1H NMR:stä (CDC13): <$ 6'80 <s' lH>> 6,54 (s, 1H); 6,14 (bs, 1H); 5,94 (d, 2H) ; 5,78 (bs, 1H); 3,75 (s, 3H) ; 1,36 (d, 3H); 0,89 (t, 3H).

Esimerkki 6 20 3'-demetoksi-3'-formyyliaminoetoposidi (VI; A = metyyli, R3 = R4 = Y = H, R5 = formyyli)

Valmistettiin etikkahappo-muurahaishapposeka-an-hydridiliuos lisäämällä etikkahappoanhydridiin (1,23 ml, 13 mmol) muurahaishappoa (98-%:ista, 0,60 ml, 16 mmol) 25 sekoittaen niitä samalla huoneen lämpötilassa N^:n alla. Liuosta pidettiin 55°C:ssa 1,5 tuntia ja sitten sen annettiin jäähtyä huoneen lämpötilaan. Osa tästä reagens-sista (0,45 ml) lisättiin sen jälkeen pisaroittain liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (0,26 g, 0,454 30 mmol) kuivassa THF:ssa (4 ml) ja jota sekoitettiin 2°C:ssa N2:n alla. Reaktioseosta sekoitettiin 2°C:ssa kaksi tuntia ja sen annettiin sitten lämmetä yhden tunnin aikana 10°C:seen. Reaktioseos kaadettiin H^Orteen (50 ml) ja seos uutettiin yhdellä 60 ml:n erällä CH2C12 ja sen jäl-35 keen yhdellä 30 ml:n erällä EtOAc. Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin alipaineessa. Flash-kromatografia- 30 97755 käsittely silikageelillä käyttäen eluenttina ensin 3 % ja sitten 4 % MeOH sisältävää CHjClj ja aineen, jolla oli TLC:ssä (10 % MeOH sisältävä CH2CI2) hieman pienempi Rf-arvo kuin lähtöaineena käytetyllä amiinilla, eristys 5 tuottivat tulokseksi 0,213 g (78 %) vaaleanpunertavaa kiinteää ainetta; sp. 216 - 220°C.

IR (KBr) 3430 (b), 2940, 1780, 1690 cm-1.

1H NMR (CDC1-) δ 8.46 (bs,lH), 8,45, 8.19 (singlettipari,1H, 10 3 formyyli-H) , 7,80 (bm, 1H) , 6,95 , 6,85, 6, 71 , 6,58, 6, 53 , 6,15, (singl. kokon.integraali 4H) , 5.98 (bs,2H), 5,05 (m, 1H) , 4,78 (d, J=4.9Hz , 1H) 4,69-4, 40 (m,3H), 4,38-4,10 (m,2H),3,86, 3,83 (s,lH), 3,80-3,51 (m,2H), 3,60-3,30 (m, 4H) , 3,02 (bm,lH), 1,39 (d , J=4.9H, 3H) .

MS (FAB) m/e (suhteellinen intensiteetti) = 602 (MH+) Esimerkki 7 31-asetyyliamino-31-demetoksietoposidi (VI; Λ = metyyli, Y = R^ = R^ = H, R^ = asetyyli) 20 Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (0,420 g, 0,70 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (14 ml), lisättiin pisaroittain etikkahappoanhydridiä (0,065 ml, 0,69 mmol) sekoittaen niitä samalla 2°C:ssa alla. Reak- tioseosta sekoitettiin 2°C:ssa 5,5 tuntia ja sen jäl-25 keen lisättiin lisää etikkahappoanhydridiä (0,01 ml, 0,11 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 2°C:ssa yksi tunti ja sen jälkeen se kaadettiin liuokseen, joka sisälsi H20:ta (25 ml) ja kylläistä NaHCO^in vesiliuosta (25 ml).

Seos uutettiin kolmella 50 ml:n erällä CHCI2 ja yhdiste-30 tyt orgaaniset kerrokset pestiin kylläisellä NaCl:n vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä MgS04:lla. Väkevöinti ja flash-kromatografiakäsittely silikageelillä käyttäen eluenttina 3 % ja sitten 4 % MeOH sisältävää CH2CI2 tuotti tulokseksi 19,3 g tunnistamatonta sivutuo-35 tetta (TLC: Rf = 0,17; 5 % MeOH sisältävä CH2C12) ja 0,328 g (73 %) otsikonmukaista yhdistettä likaisenval- 3i — / / 8 9 koisena jauheena (TLC: Rf = 0,14; 5 % MeOH sisältävä CH2C12); sp. 225 - 227°C.

IR (KBr) 3350-3080, 2960, 1770 cm"1.

5 XK NMR (CDC13) δ 8,45 (s,lH), 8,23 (bs,lH), 6,76 (s,lH), 6,61 (s , 1H) , 6,49 (s , 1H) , 6,38 (s,lH), 5,84 (d,J=8,6Hz,2H), 4,86 (d,J=3,2Hz,1H), 4,63 (m,lH), 4,30-4,15 (m,3H), 4,15-4,05 (m,2H), 3,72 (s,3H), 3,6-3,4 (m,2H), 3,4-3,25 (m,4H), 2,86 (m, 1H) , 2,19 (s,3H), 1,26 (d,J=5,ORz,3H).

Esimerkki 8 3'-demetoksi-3'-trifluoriasetyyliaminoetoposidi (VI; A = metyyli, Y = R^ = R^ = H, R~* ) trifluori-asetyyli) 15 Liuokseen, joka sisälsi 3-aminoetoposidia Va (200 mg, 0,349 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (10 ml) ja py-ridiinissä (50 ^,ul) , lisättiin pisaroittain yhden minuutin aikana trifluorietikkahappoanhydridi (76 mg, 0,362 mmol) sekoittaen niitä samalla 0°C;ssa N2:n alla. Seosta 20 sekoitettiin 0°C:ssa 30 minuuttia ja sen jälkeen huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Seoksella suoritettiin parti-tio fosfaattipuskurin (pH 7; 75 ml) ja CH2Cl2:n (75 ml) kesken). Orgaaninen osa pestiin kylläisellä NaCl-liuok-sella (75 ml) ja kuivattiin Na2SO^:lla ja liuotin haih-25 dutettiin pois alipaineessa. Preparatiivinen ohutkerros-kromatografiakäsittely silikageelillä (5 % CH^OH sisältävä CH2C12) tuotti tulokseksi 149,7 mg (64,1 %) puhdasta otsikon mukaista yhdistettä valkoisena kiinteänä ai-• neena; sp. 209 - 212°C.

30 IR (KBr) 3420, 1775, 1735, 1625, 1510, 1490, 1237, 1165, 1082, 1045, 1010, 940, 878, 702 cm-1.

XH NMR (CDC13) δ 7,03 (d,lH), 6,99 (d,lH), 6,82 (s,lH), 6,49 (s, 1H) , 6,00 (br s, 2H) , 4,97 (d,lH), 4,74 (q,lH), 4,66 35 (d,1H), 4,57 (Ö,1H), 4,42 (dd,lH), 4,30-4,14 (m,2H), 3,92 (ε, 3H) , 3,75 (m, 1H) , 3,56 (m,lH), 3,49-3,17 (m,4H), 3, 09-2,92 (m, 1H) , 1,38 (d,3H).

32 7 ?S9

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C30H30NO13:

Laskettu: C 53,18 H 4,52 N 2,09 Saatu: C 53,62 H 4,44 N 1,96

Esimerkki 9 5 3'-demetoksi-31-/T( 2,2,2-trikloorietyyli)oksi/kar- 3 bonyyli7aminoetoposidi (VIb; A = metyyli, Y = R = R^ = H, R5 = 2,2,2-trikloorietoksikarbonyyli) Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (0,40 g, 0,70 mmol) ja pyridiiniä (90 ^ul, 1,11 mmol) 10 Ci^C^sssa (5 ml), lisättiin pisaroittain ruiskulla tri-kloorietyyliklooriformiaattia (0,10 ml, 0,73 mmol) sekoittaen niitä samalla 2°C:ssa N2:n alla. Reaktioseosta sekoitettiin 2 - 10°C:n lämpötilassa viisi tuntia ja sen jälkeen lisättiin lisää trikloor ictyy 1 iki oor i formiaa t:f-i a 15 (10 yul) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpöti lassa 15 tuntia. Reaktioseos kaadettiin veteen (50 ml) ja uutettiin kolmella 50 ml:n erällä CH2C12. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset kuivattiin vedettömällä MgSO^:lla ja puhdistettiin sitten flash-kromatografiakäsittelyllä 20 käyttäen adsorbenttina silikageeliä ja eluenttina 3 %

MeOH:ta sisältävää Ci^C^. Poolittomamman päätuotteen eristys tuotti tulokseksi 0,32 g (62 %) keltaista kiinteää ainetta; sp. > 220°C (hajosi).

IR (KBr) 3440, 2910, 1780 (b), 1625,.1552 cm"1.

25 XH NMR (CDC13) 6 7,12 (m,1H), 6,83 (m,2H), 6,49 (ε,ΙΗ), 5,95 (m, 2H) , 5,65 (s,lH), 4,94 (d, J=3,'28Hz,1H) , 4,80-4,60 (m,4H) , 4 r 54 (d,J=5,3Hz,1H), 4,38 (m,1H), 4,23-4,05 (m,2H), 3,94 3Q (s,3H) , 3,72 (m, 1H) , 3,52 (m,lH), 3,43 (m,lH), 3,32 (m,2H), 3,23 (dd, J-14,2, 5,4Hz,lH), 3,01 (m, 1H) , 2,68 (s,lH), 2,41 (s , 1K) , 1,38 (d,J=2,4Hz,3H) .

MS (FAB) m/e 748 (M+H)+ 33 87789

Esimerkki 10 3' -/'(2-kloorietyyliamino) karbonyyli/amino-3' -de- 3 4 metoksietoposidi (VI; A = metyyli, Y = R = R = 5 H, R 2-kloorietyyliaminokarbonyyli) 5 Liuokseen, joka sisälsi 31-aminoetoposidia Va (0,40 g, 0,69 mmol) kuivassa CM^C ] i (4 ml) ja jota sekoitettiin 20°C:ssa N2:n alla, lisättiin pisaroittain ruiskulla 2-kloorietyyli-isosyanaattia (62 yul, 0,76 mmol). Välittömästi lisäyksen jälkeen alkoi muodostua 10 valkoinen sakka. Reaktioseos sekoitettiin 20°C:ssa neljä tuntia ja sen jälkeen 0°C:ssa 15 minuuttia. Imusuoda-tus ja kuivaus alipaineessa tuottivat tulokseksi 0,32 g (68 %) likaisenvalkoista amorfista ainetta; sp. 195 -197°C.

15 IR (KBr) 3400 (b), 2920, 1770, 1660 cm"1.

1H NMR (CDC13/DMS0) δ 8,97 (bs,lH), 7,87 (ε,ΙΗ), 6,71 (S,1H), 6,54 (t, J=5,6Hz, 1H) , 6,33 (s,lH), 6,31 (s,lH), 6,24 (ε,ΙΗ), 5,78 (ABQ,JAB=5,5Hz,2H), 4,79 (d,J=5,3Hz,1H), 4,58 20 (m, 1H) , 4,51-4,24 (m,4H), 4,06-3,98 (m,2H) , 3,61 (s,3H), 3,45-3,33 (m,6H), 3,24-3,12 (m,4H), 2,80-2,76 (m,lH), 1,21 (d,J=2,7Hz, 1H) .

Yhdisteelle laskettu MH+: 678,1828 25 Saatu: 678,1826 - · Esimerkki 11 3 ' -demetoksi-3 '-CL(fenyy limetyy li) amino/karbonyy- 3 4 lijaminoetoposidi (VI; A = metyyli, Y = R = R 5 H, R bentsyyliaminokarbonyyli) 30 Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (200 mg, 0,349 mmol) C^C^-THF-seoksessa (9:1), lisättiin hitaasti trietyyliamiinia (0,25 ml) ja sen jälkeen bentsyyli-isosyanaattia (50 ^ul, 0,40 mmol). 20 minuutin kuluttua syntynyt sakka kerättiin talteen suodatta-35 maila, pestiin kylmällä EtOAc:lla ja kuivattiin, jolloin 34 87 789 saatiin 150 mg (61 %) otsikon mukaista yhdistettä värittömänä kiinteänä aineena.

XH NMR (CDC13) δ 7,33-7,18 (m,6H), 7,01 (s,lH), 6,55 (d,lH) 6,51 (s, 1H) , 6,00 (d,2H) , 5,22 (d,2H), 4,92 (d,lH), 4,71 5 (q,1H), 4,59 (d,1H,J=7,7Hz), 4,49 (df1H,J=5,5Hz), 4,31-4,07 (m, 3H) , 3,67 (s,3H), 3,49-2, 95 (m, 7H) , 1,37 (d,3H).

Esimerkki 12 3'-demetoksi-3'-metaanisulfonamidoetoposidi (VI; 3 4 5 10 A = metyyli, Y=R = R = H, R = metaanisulfo- nyyli)

Liuokseen, joka sisälsi 31-aminoetoposidia Va (0,22 g, 0,384 mmol) ja pyridiiniä (0,10 ml, 1,24 mmol) kuivassa Cl^C^^sa (9 ml) ja jota sekoitettiin -20°C:ssa 15 N2:n alla# lisättiin pisaroittain metaanisulfonyyliklo-ridia (31 ^ul, 0,384 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin -20°C:ssa kolme tuntia ja sen annettiin sitten lämmetä yhden tunnin aikana 20°C:seen sekoittaen sitä samalla. Reaktioseos kaadettiin veteen (50 ml) ja uutettiin yhdcl-20 lä 50 ml:n erällä ja sen jälkeen kahdella 10 ml:n erällä Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin vedettömällä MgSO^:lla ja väkevöitiin alipaineessa. Flash-kro-matografiakäsittely käyttäen eluenttina 3 % ja sitten 4 %

MeOH sisältävää CI^C^ tuotti tulokseksi 0,139 g (56 %) 25 likaisenvalkoista kiinteää ainetta; sp. 208 - 211°C (valkoisesta kiintoaineesta vaaleanpunaiseksi vaahdoksi).

IR (KBr) 3460 (b), 2925, 1779, 1620, 1340, 1163 cm"1.

1H N MR (CDC1-/DMSO) δ 7,04 (s,lH), 6,97 (s,lH), 6,77 (S,1H),

30 J

6,66 (d , J=1.7Hz , 1H) , 6,41 (s,lH), 6,37 (d , J=1.7Hz , 1H) , 5,89 (m,2H), 4,89 (d,J=3,4Hz,1H), 4,67 (m,1H), 4,66 (m,2H), 4,40 (m> 1H) , 4,17 (m,2H), 3,82 (s,3H), 3,66 (t, J=8,8Hz , 1H) , 3,39-3,28 (m, 4H) , 2,90 (m,lH), 2,85 (s,3H), 1,32 (d, J=5,0Kz, 3H) .

3 5 MS (FAB) m/e (suhteellinen intensiteetti) = 625 (MH+)

I

35 ^7 789

Esimerkki 13 3' -demetoksi-3 ' -/"(N-sukkinimido) metyyli/aminoeto-posidi (VI; A = metyyli, Y = R^ = = H, R~* = N-sukkinimidometyyli) 5 Liuos, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (0,30 g, 0,52 mmol) ja sukkinimidiä (0,052 g, 0,52 mmol) vedettömässä etanolissa (4 ml) N2:n kuumennettiin palautus- jäähdyttäjän alla kiehuvaksi ja siihen lisättiin 37-%:is-ta formaldehydin vesiliuosta (0,040 ml, 0,52 mmol). Reak-10 tioseosta refluksoitiin neljä tuntia, jona aikana muodostui valkoinen sakka. Reaktioseos jäähdytettiin 0°C:seen ja suodatettiin imun avulla ja jäännös pestiin 5 ml:11a kylmää EtOHrta, jolloin saatiin 0,272 g (76 %) likaisen-valkoista kiinteää ainetta; sp. 210 - 212°C.

15 IR (KBr)' 3435 (b) , 2920, 1780, 1705, 1620 cm”1.

1H NMR (CDC13/DMS0) δ 6,81 (s,lH), 6,40 (s,2H), 5,80 (d,J=7, 9Hz,2H) , 5,83 (s,lH), 5,82 (ε,ΙΗ), 5,04-4,97 (m,2H (1 vaihde l l ,i v . )), 4,73-4,67 (m,3H), 4,51 (d, J-7.6Hz , IM) , 4,38 20 (m, 2H) , 4,14 (t,J-8,3Hz,2H), 3,97 (d , J=2,9Hz , 1H) , 3,75 (s,3H), 3,61 (t,J=2,2Hz,lH), 3,53 (t,J=9,0Hz,1H), 3,36-3,25 (m, 4K) , 2,99 (bm, 1H) , 2,51 (m,4H), 1,32 (d , J*5,0Hz , 3H) .

Yhdisteelle las^ettu MH+: 684,2167 25 Saatu: 684,2151

Esimerkki 14 3'-demetoksi-3'-/N-(3-oktyylitio)sukkinimido^me- : 3 tyyliaminoetoposidi (VI; A = metyyli, Y = R = - · 4 5 R = H, R = N-(3-oktyylitio)sukkinimidometyyli) 30 Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (0,20 g, 0,35 mmol) ja 3-oktyylitiosukkinimidiä (0,085 g, 0,35 mmol) EtOH:ssa (6 ml) ja jota refluksoitiin, lisättiin formaliinia (26 ^ul, 0,35 mmol). Reaktioseosta ref-luksoitiin kolme tuntia ja sekoitettiin sen jälkeen huo-35 neen lämpötilassa 14 tuntia. Lisättiin lisää sukkinimidiä (5 mg) ja formaliinia (5 ^,ul) ja reaktioseosta ref- 36 .° 7 7 89 luksoitiin yksi tunti ja sitten se jäähdytettiin huoneen lämpötilaan. Etanolin poisto alipaineessa ja sitä seurannut flash-kromatografiakäsittely silikageelillä käyttäen eluenttina 4 % MeOH sisältävää Ci^C^ antoivat tulokseksi 5 valkoisen jauheen muodossa olevan tuotteen (0,111 g, 38 %); HPLC-analyysi osoitti sen sisältävän kahta diastereomee-riä suhteessa 1:1.

IR (KBr) 3480, 2962, 2925, 1781, 1707, 1621, 1520, 1490 cm”1.

10 XH NMR (CDC13) 6 6,83, 6,81 (ε,ΙΗ), 6f49, 6,47 (s,lH), 6,45 (s, 1H) , 5,95 (m,2H) , 5,84, 5,81 (s,lH), 5,33 (s,lH), 5,01 (m, 2H) , 4,80-4,70 (m,2H), 4,62 (m,lH), 4,45 (m, 1H) , 4,37 (m, 1H) , 4,15 (m,2H) , 3,80 (s,3H), 3,68 (m,lH), 3,57 (m,2H), 3,41 (m, 1H) , 3,19 (m,2H), 3,04 (m,lH), 3,02 (m,2H), 2,82 (m, 1H) , 2,62-2,30 (m,4H), 1,60-1,40 (m,2H) , 1,37 (d,J=2,4Hz,3H), 0,86 (t,J=6,3Hz,3H).

Esimerkki 15 20 3 ' -demetoksi-3' -/"(N-maleimido) metyyli7aminoetopo- sidi (VI; A = metyyli, Y = R3 = R4 = H, R5 = n-maleimidometyyli)

Noudatettiin esimerkissä 14 kuvatun kaltaista menettelytapaa, paitsi että 3-oktyylitiosukkinimidi korvat-2T) tiin maleimidillä, jolloin saatiin kromatogralisen käsittelyn jälkeen lievästi keltaista jauhetta 68 %:n saannolla.

IR (KBr) 3440, 2918, 1775, 1710, 1616, 1505, 1486 cm”1.

1H NMR (CDC13) δ 6,85 (s,lH), 6,57 (s,lH), 6,56 (s,2H), 6,45 (s, 1H) , 5,95 <m,2H), 5,76 (s,lH), 5,31 (s,lH), 5,01 (d,J=3,3Hz,1H), 4,91 (m,lH), 4,78-4,66 (m,3H), 4,47 (d,J=5,3Hz,lH) , 4,37 (m,lH), 4,18 (m,2H) , 3,82 (s,3H), 3,74 (m, 1H) , 3,55 (m, 1H) , 3,43 (m,lH), 3,22 (m,2H), 3,20 35 (dd, J= 7, 0, 5,26Hz , 1H) , 3,05 (m,lH), 2,68 (s,lH), 2,41 ( s , 1H) , 1,38 (d, J=4, 9Hz , 3H) .

37 37 7 89 MS (FAD) m/e * 682 (M+)

Esimerkki 16 3 ' -demetoksi-3 ' -/N-/3- (2-pyridyyli) tio/sukkinimi-do/metyyliaminoetoposidi (VI; A = metyyli, Y = 5 = = H, = Ν-/Γ3- (2-pyridyyli) tio/sukkin- imidometyyli)

Noudatettiin esimerkissä 14 kuvatun kaltaista menettelytapaa, paitsi että 3-oktyylitiosukkinimidi korvattiin 3-(2-pyridyyli)tiosukkinimidillä, jolloin saatiin 10 kermanväristä kiinteää ainetta; sp. > 185°C (hajosi hitaasti) .

Esimerkki 17 31-demetoksi-3'-(3-tienyylimetyleeni)aminoetopo-sidi (VII; A = metyyli, Y = R2 = H, R^ = 3-tie-15 nyyli)

Seokseen, joka sisälsi 31-aminoetoposidia Va (222 mg, 0,387 mmol), vedetöntä MgSO^ (2,0 g), aktivoituja 4 A:n molekyyliseuloja (2,7 g) ja p-tolueenisulfoni-happomonohydraattia (11 mg), lisättiin N2:n alla kuivaa 20 CH2C12 (30 ml) ja sen jälkeen ruiskulla paljaaltaan 3-tiofeenikarboksaldehydiä (3,37 g, 30,1 mmol). Seosta sekoitettiin pimeässä huoneen lämpötilassa seitsemän vuorokautta, se suodatettiin ja kiintoaine pestiin CH2Cl2:lla (10 ml) ja EtOAczlla (25 ml). Suodos väkevöitiin noin 25 15 ml:n tilavuuteen ja siirrettiin halkaisijaltaan 3 cm:n pylvään, joka oli täytetty 11,5 cm:n korkeuteen saakka Woelmin neutraalilla alumiinioksidilla, yläpäähän. Eluoin-ti Cl^c^rlla (250 ml) ja sen jälkeen 5 % CH^OH sisältävällä CH2Cl2:lla tuotti tulokseksi 95,0 mg (37 %) otsi-30 kon mukaista yhdistettä kellanruskeana kiinteänä aineena; sp. 190 - 195°C.

IR (KBr) 3445, 1775, 1630, 1605, 1510, 1495, 1290, 1240, 1165, 1085, 1045, 1008', 940, 875, 805, 700 cm-1.

2 k 7 7 8 9 38 ' H NMR (CDC13) δ 8, 45 (S,1H), 7,77 (d,lH, J=2,9Hz), 7,64 (d, 1H,J=5, 2Hz) , 7,35 (dd,lH,J=2, 9 and 5,2Hzj,, 6,81 (s,lH), 6,58 (d,lH,J=l;6Hz), 6,54 (S,1H), 6,40 (d,1H,J=l,6Hz), 5,97 (d,2H), 4,91 (d,1H,J=3,5Hz), 4,75 (q,lH,J*5,OHz), 4,65 5 (d,1H,J=7,5Hz), 4,61 (d,1H,J=5,3Hz), 4;41 (dd,lH), 4,22 (dd, 1H) , 4,16 (dd,lH), 3,81 (s,3H), 3,74 (dd,lH), 3,56 (dd, 1H) , 3,43 (dd,lH), 3,34-3,31 (m,2H), 3,26 (dd,lH,J=5,3 ja 14, OHz) , 2,94-2,88 (m,lH) , 1,38 (d,3H,J=5,OHz).

10 Esimerkki 18 3'-demetoksi-3'-(2-furyylimetyleeni)aminoetoposidi (VII; A = metyyli, Y = R^ = H, = 2-furyyli) Noudatettiin esimerkissä 19 kuvattua menettelytapaa käyttäen 3'-aminoetoposidia Va (213 mg, 0,371 mmol), 15 vedetöntä MgSO^ (2,0 g), aktivoituja 4 A:n molekyyliseu- loja (2,5 g), p-tolueenisulfonihappomonohydraattia (13 mg), 2-furaanikarboksaldehydiä (3,39 g, 35,2 mmol) ja (30 ml). Sen jälkeen kun seosta oli pidetty huoneen lämpötilassa 72 tuntia, se käsiteltiin tuotteen eristämisek- 20 si ja puhdistamiseksi esimerkissä 19 kuvatulla tavalla, jolloin saatiin 79,0 mg (33 %) otsikon mukaista yhdistettä kellanoranssina kiinteänä aineena.

IR (KBr) 3440, 1775, 1630, 1603, 1508, 1488, 1285, 1235, _ 1162, 1080, 1023, 935, 893, 765, 705 cm-1.

2 5 1 2 3 H NMR (CDC13) δ 8,30 (s,lH>, 7,57 (d,1H,J-l,5Hz), 6,95 (d, 1H, J=3,5Hz) , 6,80 (s,lH), 6,66 (d, 1H, J=1,5Hz) , 6,53 2 (S,1H), 6,34 (d,1H,J=1,5Hz), 5,97 (d,2H), 4,89 3 (d,lH,J=3,4Hz), 4,73 (q,1H,J=5,0Hz), 4,65 (d,1H,J=7,5Hz), 4,60 (d, 1H,J=5,3Hz) , 4,41 (dd,lH), 4,23-4,13 (m,2H), 3,83 (s,3H), 3,75 (dd, 1H) , 3,56 (dd,lH), 3,43 (dd,lH), 3,34-3,31 (m,2H), 3,25 (dd,lH,J=5,3 ja 14,1Hz), 2,93-2,88 (m,lH), 1,38 (d , 3H,J=5,0Hz).

39 87 789

Esimerkki 19 3'-demetoksi-3'-(41-pyridyylimetyleeni)aminoeto-posidi (VII; A = metyyli, Y = R^ = H, = 4-py-ridyyli) 5 Seosta, joka sisälsi 31-aminoetoposidia Va (215 mg, 0,375 mmol), aktivoituja 4 A:n molekyyliseuloja (2,1 g) ja 4-pyridiinikarboksaldehydiä (3,8 g, 35,5 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (38 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa seitsemän vuorokautta ja sen jälkeen se siirrettiin 10 suoraan halkaisijaltaan 2 cm:n pylvään, joka oli täytetty 16,5 cm:n korkeuteen saakka Woelmin neutraalilla alumiinioksidilla, yläpäähän. Eluointi CH2Cl2:lla (250 ml) ja sen jälkeen EtOAc-CH2Cl2-seoksella (1:1; 250 ml) poisti ylimääräisen aldehydin ja jatkoeluointi 5 - 6 % CH^OH 15 sisältävällä CH2Cl2:lla tuotti tulokseksi 114,2 mg (46 %) otsikon mukaista yhdistettä kellanoranssina kiinteänä aineena; sp. 198 - 204°C (hajosi).

IR (KBr) 3440, 1775, 1608, 1490, 1388, 1292, 1238, 1165, 1085, 1040, 1010, 940, 705 on-1.

20 XH NMR (CDC13) δ 8,72 (d , 2H, J=4.5Hz) , 8,49 (s,lH), 7,70 (d,2H,J-4,5Hz), 6,82 (s,lH), 6,65 (s,lH), 6,63 .

(d,lH,J«l,7Hz), 6,54 (s,lH), 6,49 (d,1H,J=1;7Kz), 5,98 (d,2H), 4,92 (d,lH,J=3,5Hz), 4,73 (q,1H,J=5,0Hz), 4,66 (d,1H,J=7,6Hz), 4,62 (d,1H,J=5,3Hz), 4,42 (dd,lH), 4,25-4,15 (m, 2H) , 3,82 (s,3H), 3,77 (m,lH), 3,56 (dd,lH), 3,44 (dd,lH) , '3,34-3,20 (m,3H), 2,91* 2,87 (m,lH), 1,38 (d,3H,J=5,0Hz).

30 Esimerkki 20 3'-demetoksi-3'-f (4-metoksifenyyli)metyleeni7ami- 3 noetoposidi (VII; A = metyyli, Y = R = H, R = p-metoksifenyyli)

Liuosta, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (260 mg, 35 0,453 mmol), p-anisaldehydiä (4,1 g, 30,1 mmol) ja p-to- lueenisulfonihappomonohydraattia (7,0 mg) kuivassa 40 87 789 CH2Cl2:ssa (70 ml), refluksoitiin kuusi tuntia pullossa, joka oli varustettu aktivoiduilla 4 A:n molekyyliseuloil-la (4,8 g) täytetyllä Sochlet-uuttolaitteella. Sen jälkeen seokseen lisättiin aktivoituja 4 A:n molekyyliseu-5 loja (0,31 g) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 13 vuorokautta. Reaktioseos siirrettiin suoraan halkaisijaltaan 2 cm:n pylvään, joka oli täytetty Woelmin neutraalilla alumiinioksidilla (20,5 g), yläpäähän. Eluointi CH2Cl2:lla (400 - 500 ml) ja sen jälkeen 2 % CH^OH sisäl-10 tävällä CH2Cl2:lla tuotti tulokseksi 175 mg (56 %) otsikon mukaista yhdistettä analyysipuhtaana vaaleankeltaisena kiinteänä aineena; sp. 173 - 178°C (hajosi).

IR (KBr) 3450, 1775, 1605, 1390, 1260, 1235, 1168, 1080, 1040, 940, 840, 705 cm"1.

15 ΧΗ NMR (CDC13) 5 8,37 (s,lH), 7,81 (d,2H), 6,94 (d,2H), 6,81 (s, 1H) , 6,57 (d,lH) , 6,55 (s,lH), 6,41 (d,lH), 5,97 (d,2H), 4,91 (d,lH), 4,73 (q,lH), 4,65 (d,lH), 4,61 (d,lH), 4,41 (dd, 1H) , 4,23-4,13 (m,2H), 3,85 (s,3H), 3,81 (s,3H), 3,74 20 r (dd, 1H) , 3,56 (dd,lH), 3,43 (dd,lH), 3,34-3,31 (m,2H), 3,25 (dd, 1H) , 2,94-2,87 (m,lH), 1,37 (d,3H).

Alkuaineanalyysi yhdisteelle Laskettu: C 62,51 H 5,39 N 2,02 25 Saatu: C 62,48 H 5,67 N 2,11

Esimerkki 21 3 ' -demetoksi-3 '-/"(3,4,5-trimetoksifenyyli) metylee- . 7 . 3 nxjaminoetoposidi (VII; A - metyyli, Y = R = H, R^ = 3,4,5-trimetoksifenyyli) 30 Seosta, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (145 mg, 0,253 mmol), 3,4,5-trimetoksibentsaldehydiä (829 mg, 4,23 mmol), p-tolueenisulfonihappomonohydraattia (2 mg) ja vedetöntä MgSO^ CH2Cl2:ssa (15 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 11 vuorokautta. Kiintoaine poistettiin 35 suodattamalla ja pestiin tuoreella CH2Cl2:lla. Suodos haihdutettiin alipaineessa ja jäännös käsiteltiin kroma- 4i S77S9 tografisesti Woelmin neutraalilla alumiinioksidilla (2 cm:n pylväs). Eluointi 30 % EtOAc sisältävällä hek-saanilla ja sen jälkeen 3 % CH^OH sisältävällä Ci^C^slla tuotti tulokseksi 155,5 mg (82 %) otsikon mukaista yhdis-5 tettä vaaleankeltaisena kiinteänä aineena; sp. 192 -196°C (hajosi).

IR (KBr) 3445, 1776, 1585, 1490, 1460, 1380, 1330, 1235, 1128, 1038, 1005, 940, 760, 700 cm”1.

10 1H NMR (CDC13) δ 8,39 (s,lH), 7,11 (s,2H), 6T81 (s,lH), 6,53 (s, 1H) , 6,53-6,49 (m,2H), 5,97 (d,2H), 4,91 (d,lH), 4,73 (q, 1H) , 4,63 (d,lH), 4,59 (d,lH), 4,41 (dd,lH), 4,24-4,08 (m, 2H) , 3,91 (br s,9H), 3,80 (s,3H), 3,72 (dd,lH), 3,55 (dd, 1H) , 3,42 (dd,lH), 3,32-3,17 (m,3H), 2, 94-2, 88 (m,lH), 15 1,37 (d,3H).

Esimerkki 22 3 ' -demetoksi-3 ' -/'(3-nitrofenyyli) metyleeni/amino- o zr etoposidi (VII; A = metyyli, Y = R = H, R 20 3-nitrofenyyli)

Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (200 mg, 0,349 mmol) ja m-nitrobentsaldehydiä (83 mg, 0,55 mmol) EtOH:ssa (10 ml), lisättiin p-tolueenisulfoni-happomonohydraattia (3 mg). 15 minuutin kuluttua synty-25 nyt sakka eristettiin suodattamalla ja pestiin kylmällä CH^OH:11a, jolloin saatiin 20 mg keltaista kiteistä ainetta. Suodos haihdutettiin ja kiteytettäessä jäännös saatiin 150 mg otsikon mukaista yhdistettä keltaisena kiinteänä aineena (yhteissaanto 69 %).

30 IR (KBr) 3445, 1775, 1605, 1535, 1505, 1485, 1355, 1235, 1095, 1075, 1040, 1005, 935, 890, 870 815, 735, 680 cm'1.

Osa 1H NMR:stä (d6-DMS0) δ 8,79 (s,lH), 8,39 (d,lH,J=7,5Hz), 8,34-8,30 (m, 2H) , 7,76 (dd,lH), 6,99 (s,lH), 6,65 35 (d, 1H, J=1,3Hz ) , 6,53 (s,lH), 6,26 (d , 1H, J-l, 3Hz ) , 6,00 42 R77B9 (s , 2H) , 5,25-5 , 22 (m,2H), 4,95 (d,lH), 4,73 (q,lH), 4,58 (d,lH), 4,52 (d , 1H) , 4,29-4,26 (m,2H), 4,07 (dd,lH), 3,72 {s , 3H), 1,23 (d,3H,J=5H2).

5 Esimerkki 23 3 1 -demetoksi-3' -/"(N,N-dimetyyliamino) metyleeni7- 7 8 aminoetoposidi (IX; A = R = R = metyyli, Y = R3 = H)

Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va 10 (0,26 g, 0,454 mmol) CHCl^sssa (4 ml) ja jota sekoitet tiin 20°C:ssa ^:n alla, lisättiin N,N-dimetyyliformami-diasetaalia (80 ^ul, 0,60 mmol). 20 minuutin kuluttua ohutkerroskromatografia osoitti seoksen sisältävän tuotetta (TLC: R^ = 0,18; 10 % MeOH sisältävä CH^Cl^) eikä 15 lainkaan lähtöainetta (TLC: R^ = 0,25). Liuotin poistettiin suuressa alipaineessa. Flash-kromatografiakäsittely silikageelillä käyttäen eluenttina EtOAc-heksaaniseosta (8:2) ja sen jälkeen EtOAc tuotti tulokseksi 171 mg vaaleanruskeaa kiinteää ainetta, joka käsiteltiin uudelleen 20 kromatografisesti silikageelillä käyttäen eluenttina 10 %, sitten 20 % ja sen jälkeen 30 % asetonia sisältävää EtOAc, jolloin saatiin 85 mg (30 %) likaisenvalkoista kiinteää ainetta; sp. 198 - 200°C.

IR (KBr) 3440 (b), 2925, 1780, 1645, 1615 cm"1.

25 NMR (CDC13) δ 7,60 (s,lH), 6,82 (s,lH), 6,57 (ε,ΙΗ), 6,37 (s, 1H) , 6,17 (s , 1H) , 5,99 (d , J=4,4Hz , 2H) , 4,91 (d,J=3,4Hz,1H), 4,76 (q,J«9,0Hz,1H), 4,66 (d,J=7,2Hz,1K), 4,58 (d,J=4,6Hz,lH), 4,42 (t, J=9,6Hz , 1H) , 4,22 (t,J=7,8Hz,2H) , 3,75 (s,3H), 3,60 (t, J=9Hz, 1H) , 3,49-3,21 (m, 5H) , 3,03 (s , 6H) , 2,95 (m,lH) , 1,41 (d, J=6,0Hz,3H).

MS (FAB) m/e (suhteellinen intensiteetti) = 629 (MH+) 43 u 7 789

Esimerkki 24 3'-demetoksi-3*-nitroetoposidi (XII; A = metyyli, Y = r3 = H)

Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va 5 (100 mg, 0,174 mmol) CH2Cl2:ssa (5 ml), lisättiin kolmen minuutin aikana kiinteä m-CPBA (Aldrich; 80 - 85-%:ista, 114 mg, 0,542 mmol) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kuusi vuorokautta. Seokselle tehtiin partitio kylläisen natriumvetykarbonaatin vesiliuoksen (75 ml) ja 10 CH2Cl2:n (75 ml) kesken. Vettä sisältävä osa laimennettiin sitten fosfaattipuskurilla (pH 7; 70 ml) ja kylläisellä NaCl-liuoksella (50 ml) ja uutettiin vielä CH2Cl2:lla (20 ml) ja EtOAc:lla (100 ml). Orgaaniset kerrokset pestiin kylläisellä NaCl-liuoksella, kuivattiin Na2SO^:lla 15 ja väkevöitiin alipaineessa. Jäännökselle tehtiin flash-kromatografiakäsittely silikageelillä käyttäen eluentti-na 2 - 5 % CH^OH sisältävää CH2C12, jolloin saatiin 83,7 mq (82 %) puhdasta otsikon mukaista yhdistettä.

IR (KBr) 3460, 1775, 1630, 1550, 1492, 1455, 1393, 1340, 20 1275 , 1240, 1160 , 1100, 1080, 1040, 935, 890, 760, 705 cm"1.

1H NMR (CDCl3) δ 7,42 (d, 1H, J=1 f 6Hz) , 6,83 (S,1H), 6,76 (d,lH,J»l,6Hz), 6,44 (s,lH), 5,99 (d,2H), 4,93 (d,lH,J=3,2Hz), 4,72 (q,1H,J=5Hz), 4,62 (d,1H,J=7,6Hz), 4,59 25 (d, 1H, J=5,4Hz) , 4,42 (dd,lH), 4,23 (dd,lH), 4, 15. (dd, 1H) , 3,94 (s,3H), 3,71 (dd,lH), 3,55 (m,lH), 3,41 (dd,lH), 3,37-3,27 (m,3H), 2,81-2,73 (m,lH), 1,37 (d,3H,J=5Hz) .

13C NMR (CDCl,) δ 174,6, 149,3, 149,1, 147,6, 145,6, 133,2, 30 3 131.0, (2C's), 128,5, 121,3, 116,3, 110,2, 109,2, 102,0, 101,7, 99,7, 79,6, 74,4, 73,5, 73,0, 68,0, 67,9, 66,4, 56,7, 43.0, 40,7, 37, 3, 20, 1.

44 87789

Esimerkki 25 3'-demetoksi-31-diatsoniumetoposidihydroksidi, sisäinen suola (Xa; A = metyyli, Y = H)

Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va 5 (0,22 g, 0,384 mmol) kuivassa THF:ssa (17 ml) ja jota sekoitettiin 0°C:ssa N2:n alla, lisättiin jääetikkaa (3,0 ml, 26,2 mmol) ja sen jälkeen NaN02 (0,15 g, 2,17 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin 0°C:ssa 3,4 tuntia ja sitten se kaadettiin CH2Cl2:iin (150 ml). Tummanpunainen 10 orgaaninen kerros pestiin NaHCO^in vesiliuoksella (100 ml). Yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin kylläisellä NaHCO^rlla (100 ml), kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin 0,177 g (79 %) punertavanoranssia kiinteää ainetta; sp. 150°C (hajosi hitaasti).

15 -1 IR (KBr) 3440 (b), 2930, 2160, 2120, 1779 cm .

1H NMR (CDC13) δ 6,78 (s,lH), 6,73 (s,lH), 6,52 (S,1H), 5,97 (d,J=8,3Hz,2H) , 5,82 (s,lH), 4,86 (d , J=2,2Hz , 1H) , 4,72 2Q (m,1H), 4,54 (d,J=7,6Hz,1H), 4,43 (t,J=9,0Hz,1H), 4,35 (d, J=5 , 1Hz , 1H) , 4,26 (t, J«8,3Hz, 1H) , 4,14 (m,lH), 3,71 (s,3H), 3,55 (t,J=9,7Hz,1H), 3,40 (t,J=8,1Hz,1H), 3,3 (bm,4H), 3,02 (m,lH), 1,35 (d , J»4,9Hz , 3H) .

Esimerkki 26 25 3'-demetoksi-3'-atsidoetoposidi (XI; A = metyyli, Y = R3 = H)

Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (210 mg, 0,366 mmol) kuivassa THF:ssa (10 ml) N2:n alla ja joka oli jäähdytetty 0°C:seen, lisättiin jääetikkaa 30 (2 ml) ja sen jälkeen kiinteää natriumnitriittiä (149 mg, 2,16 mmol). Seosta sekoitettiin 0°C;ssa kaksi tuntia ja huoneen lämpötilassa yksi tunti. Sen jälkeen lisättiin liuos, joka sisälsi natriumatsidia (110 mg, 1,69 mmol) IVOissa (l ml) ja 15 minuutin kuluttua lisää kiinteätä 35 nntriumatsid La (200 mg). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja sen jälkeen sille suoritettiin

'< 7 7 R Q

45 *" partitio Cl^C^sn (100 ml) sekä kylläisen natriumvetykar-bonaatin vesiliuoksen (30 ml) ja H20:n (300 ml) kesken.

Vettä sisältävä osa uutettiin vielä kahdella 40 ml:n erällä CI^C^ ja yhdistetyt orgaaniset osat pestiin 5 H20:lla (65 ml) ja kylläisellä NaCl-liuoksella (75 ml) ja kuivattiin Na2SO^:lla. Pyöröhaihdutus ja sitä seurannut kromatografinen käsittely silikageelillä (E. Merck, 230 - 400 mesh; 0,45 g) käyttäen eluenttina ja sen jälkeen 2 % CH^OH sisältävää Ct^C^ tuottivat tulok-10 seksi 210 mg (96 %) puhdasta otsikon mukaista yhdistettä kullankeltaisena kiinteänä aineena.

IR (KBr) 3460, 2120, 1775, 1612, 1510, 1490, 1240, 1165, 1080, 1045, 1006, 935, 700 cm"1.

15 1H NMR (CDC13) δ 6,80 (d,lH), 6,79 (s,lH), 6,48 (s,lH), 5,99 (ABq,2H), 5,79 (d,1H,J=1,6Hz), 4,88 (d,1H,J=3,5Hz), 4,73 (q,1H,J=5Hz), 4,62 (d,1H,J=7,5Hz), 4,54 (d,1H,J=5,3Hz), 4,38 (dd, 1H) , 4,23-4,15 (m,2H), 3,85 (s,3H), 3,74 (m,lH), 3,56 (m, 1H) , 3,41 (dd, 1H) , 3,33-3,30 (m,2H), 3,24 (dd,lH), 20 2,89-2,83 (m,lH), 1,37 (d,3H,J=5Hz).

Esimerkki 27

Etoposidin bentsoksatsolijohdannainen (VIII; A = metyyli, Y = R1^ = H) 25 Liuokseen, joka sisälsi 3'-aminoetoposidia Va (240 mg, 0,419 mmol) CI^C^-CH^OH-seoksessa (9:1), lisättiin trimetyyliortoformiaattia (1 ml) ja 60-%:ista per-kloorihappoa (1-2 pisaraa). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia, jonka jälkeen liuotin poistettiin 30 alipaineessa ja jäännös puhdistettiin preparatiivisella kromatografiakäsittelyllä käyttäen adsorbenttina silika-geeliä ja eluenttina CI^C^-CH^OH-seosta (9:1), jolloin saatiin 80 mg (33 %) otsikon mukaista yhdistettä värittömänä kiinteänä aineena.

46 ft 7 7 89 XH NMR (CDC13) 6 7,97 (s,lH), 7,18 (br s,lH), 6,81 (s,lH), 6,52 (brs,2H), 5,97 (m,2H) , 4,90 (d ,2H, J=3,4Hz) , 4,75-4,71 (mf 2H), 4,64 (d,1H,J=7,5Hz), 4,41 (dd,lH), 4,20-4,15 (m,2H), 4,02 (s,3H), 3,76-3,72 (χη,ΙΗ) , 3,58-3,54 (m,lH) , 3,45-3,41 5 (m,lH), 3,37-3,32 (m,3H), 2,95-2,90 (m,lH), 1,37 (d,3H,J=5Hz).

Esimerkki 28 5'-demetoksi-5'-asetyyliaminoetoposidi-3',4'-orto-10 kinoni (XIV; A = metyyli, R11 = asetyyli, Y = H)

Liuokseen, joka sisälsi 3 ' -asetamidootopos i<1 i a (0,1/.)0 g, 0,244 mmol) kuivassa TULissa (10 ml) ja jota sekoitettiin 2°C:ssa N2:n alla, lisättiin etikkahappoa (1,5 ml, 26,2 mmol) ja sen jälkeen natriumnitriittiä 15 (34 mg, 0,49 mmol). Kirkas liuos muuttui hitaasti punai seksi ja tummeni vähitellen reaktion edetessä. Reaktio-seosta sekoitettiin 2°C:ssa 3,5 tuntia ja se kaadettiin EtOAc-Et20-seokseen (1:1; 50 ml) ja pestiin kahdella 50 ml:n erällä kylläistä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta 20 ja yhdellä 50 ml:n erällä kylläistä NaCl:n vesiliuosta. Orgaaninen kerros kuivattiin MgSO^:lla ja väkevöitiin alipaineessa ja jäännökselle tehtiin flash-kromatografia-käsittely silikageelillä käyttäen eluenttina 5 % MeOH sisältävää jolloin saatiin 91 mg (62 %) tumman- 25 punaista kiinteää ainetta; sp. 245 - 250°C; TLC: Rf (5 %

MeOH sisältävä CH2CI2).

IR (KBr) 3450 (b), 2925, 1779, 1669, cm"1.

3o XH NMR (CDC13) δ 7,78 (m,2H), 6,77 (s,lH), 6,56 (s,lH), 5,99 (m, 2H) , 5.70 (s,lH), 4,89 (d , J«3,24Hz , 1H) , 4,74 (q,J=5.ΙΚζ,1H), 4,56 (d,J=7,8Hz,1H), 4.45 (t,J=3,2Hz,1H), 4,34 (t, J=7,5Hz , 1H) , 4,26 (d , J=6,3Hz , 1H) , 4,16 (dd,J=5,4,2,1Hz,1H), 3,70 (t,J=8t5Hz,1H), 3,57 (m,lH), 3,42 35 (t,J»ll, 8Hz,2H) , 3,34-3,29 (m,2H), 2,89 (m,lH), 2,75 (bs , 1H) , 2,50 (bs , 1H) , 1,37 (d, J-4,9Hz , 311) .

47 9.7789

Esimerkki 29 51 -demetoksi-5' -Z"/f(2-kloorietyyli) amino/karbonyy-liyaminoetoposidi-3',4'-orto-kinoni (XIV; A = metyyli, R1* = 2-kloorietyyli) amino/karbonyyli) 5 Noudatettiin esimerkissä 28 kuvattua yleistä me nettelytapaa käyttäen 3'-asetyyliaminoetoposidin sijasta esimerkin 10 tuotetta, jolloin saatiin otsikon mukainen yhdiste; sp. 195 - 197°C (hajosi).

IR (KBr) 3400 (b), 2940, 1780 cm”1.

10 h NMR (CDC13) δ 8,62 (s,lH), 7,53 (s,lH), 7,43 (s,lH), 7,28 (bt, J=7,2Hz,lH) , 6,83 (s,lH), 6,61 (s,lH), 5,98 (bs,2H), 5,59 (S,1H), 4,95 (d, J=3,1Hz, 1H) , 4,79 (m,2H), 4,58-4,30 (m,3H) , 4,28-4,13 (m,2H), 3,80-3,60 (bm,7H), 3,60-3,25 (bm, 3H) , 2,98 (m,lH), 1,41 (d, J=5,1Hz, 3H) .

MS (FAB) m/e (suhteellinen intensiteetti) = 665 (MH+) Esimerkki 30 5'-demetoksi-5'-//(2,2,2-trikloorietyyli)oksi/-20 karbonyyli./aminoetoposidi-31,4'-orto-kinoni (XIV; A = metyyli, R1* = /*(2,2,2-trikloorietyyli) oksi/-karbonyyli)

Noudatettiin esimerkissä 28 kuvattua yleistä menettelytapaa käyttäen 3'-asetyyliaminoetoposidin sijasta 25 esimerkin 9 tuotetta, jolloin saatiin otsikon mukainen yhdiste.

Esimerkit 31 - 33

Cm ^ co£q “3£y^r>SJHCR OM °

V

48 "7789 5 ...../ Ζ ο Ο

o NHCR

0 0 10

Noudatettiin esimerkissä 28 kuvattua yleistä menetelmää käyttäen etoposidireagenssia, yhdistettä A, jossa R on määritelty seuraavassa, jolloin saatiin vastaavat 15 orto-kinonijohdannaiset.

Esimerkki Etoposidireagenssi 31 R = H (esimerkki 6) 32 R = CF^ (esimerkki 8) 33 R = -NHCI^Ph (esimerkki 11) 20 Esimerkki 34 3'-demetoksi-5'-demetyyli-31-asetyyliaminoetopo-sidi (XV; A = metyyli, Y = H, = asetyyli)

Noudatettiin esimerkin 7 mukaista menttelytapaa käyttäen 65,4 ^,ul (0,69 mmol) etikkahappoanhydridiä ja 25 0,38 g (0,66 mmol) 3'-aminoetoposidia Va 10 mlrssa CI^C^.

MgS04:lla kuivauksen ja alipainehaihdutuksen jälkeen saatu tuote liuotettiin vedettömään THF:iin (10 ml) ja sen annettiin reagoida etikkahapon (1,5 ml, 26,2 mmol) ja sen jälkeen natriumnitriitin (0,182 g, 2,64 mmol) kanssa 30 esimerkissä 30 kuvattua menettelyä noudattaen. Flash-kro-matografiakäsittelyn jälkeen saatu tummanpunainen kiinteä aine liuotettiin EtOAc:iin (100 ml). Lisättiin kylläistä natriummetabisulfiitin vesiliuosta (60 ml) ja seosta ravistettiin (alle i min), kunnes tummanpunainen 35 väri hävisi ja jäljelle jäi vaaleanpunertava orgaaninen kerros, joka kuivattiin MgSO^illa ja väkevöitiin alipai- 49 -7 789 neessa. Flash-kromatografiakäsittely silikageelillä käyttäen eluenttina 4 % MeOH:ta sisältävää CH2C12 antoi tulokseksi 73 mg (18 %) kullanruskeaa tuotetta; sp. 210 -220°C (hajosi).

5 IR (KBr) 3440 (b), 2945, 1775 cm”1.

XH NMR (CDC13) δ 9,49 (bs,2H), 6,97 (bs,lH), 6,84 (s,lH), 6,61 (d , J=2 ,0Hz , 1H) , 6,46 (s,lH), 6,20 (d , J=2,0Hz , 1H) , 5,95 (s,2H), 4,94 (d,J=3,6Hz,1H), 4,75 (q,J=5,2Hz,1H), 4,55-4,39 10 (m, 3H) , 4,30-4,16 (m,2H) , 3,61 (m,2H), 3,43-3,29 (m,4H), 2,98 (bm,1H), 2,19 (s,3H), 1,38 (d,J=4,8Hz,3H).

FAB MS (m/e) 602 (MH+).

15 Esimerkit 35 - 38

B

bo-^-^ ^''bs ^ coio 5 o ώ

25 NHCR

oo N/ o jOl

HO' NHCR

1 s 35 P77R9 50 ' ' 7

Seuraavat orto-kinonit pelkistetään natriummeta-bisulfiitilla esimerkissä 34 kuvatulla tavalla, jolloin saadaan vastaavia hydrokinoneja.

Esimerkki R

5 35 NHCH2CH2C1 (esimerkki 29) 36 H (esimerkki 31) 38 -NHCH2Ph (esimerkki 33)

Esimerkki 39 3'-demetoksi-5'-demetyyli-3'-CC (2,2,2-trikloori-10 etyyli) oksi^karbonyylijaminoetoposidi (XV; A = metyyli, Y = H, = /"(2,2,2-trikloorietyyli) ok- si_7karbonyyli)

Liuokseen, joka sisälsi etoposidi-5'-trikloori-etyylikarbamaattia (esimerkin 11 tuote; 0,354 g, 0,473 15 mmol) ja etikkahappoa (3 ml) THFtssa (10 ml) ja jota sekoitettiin 2°C;ssa N2:n alla, lisättiin natriumnitriittiä (0,200 g, 2,90 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin kolme tuntia ja punainen liuos kaadettiin kylläiseen NaHCO^sn vesiliuokseen (80 ml) ja uutettiin 80 ml:n erällä EtOAc 20 ja sitten kahdella 25 ml:n erällä EtOAc. Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestiin NaCl:n vesiliuoksella (50 ml), kuivattiin Na2SO^:lla ja haihdutettiin alipaineessa, jolloin saatiin punaista kiinteää ainetta, joka liuotettiin THF:iin (7 ml). Liuokseen lisättiin H20:ta (1 ml) ja jää-25 etikkaa (1 ml). Reaktioseos jäähdytettiin jäävesihautees-sa ja siihen lisättiin aktivoitua sinkkiä (0,20 g, 3,06 mmol). Reaktioseos poistettiin jäävesihauteesta. Punainen väri häipyi nopeasti ja 15 minuutin kuluttua reaktioseos kaadettiin veteen ja uutettiin kolmesti EtOAc:11a. Or-30 gaaniset kerrokset kuivattiin MgSO^:lla ja puhdistettiin flash-kromatografiakäsittelyllä käyttäen adsorbenttina silikageeliä ja eluenttina 5 % MeOH sisältävää CH2C12, jolloin saatiin 0,2052 g (58 %) likaisenvalkoista kiinteää ainetta.

si 87789 IR (KBr) 3440, 2930, 1772 (b), 1623 cm"1.

1 * H NMR (CDC13) δ 8,12 (bs, 1H) , 7,79 (bs,lH), 7,64 (bs,lH), 6,73 (S,1H), 6,64 (s,lH), 6,26 (s,lH), 6,24 (s,lH), 5,73 5 (m,2H), 4,75 (d,J»3,4Kz,1H), 4,76-4,43 (m,4H), 4,31 (d, J = 7,5Kz , 1H) , 4,24-4,15 (m,2H), 4,02-3,95 (m,2H), 3, 43-3,33 (m,2H), 3,20-3, 05 (m,4H), 2, 86-2,78 (mf 1H) , 1,16 (d,J=5,0Hz, 3H) .

10 Esimerkki 40 31-demetoksi-5'-demetyyli-3'-aminoetoposidi (XVI; A = metyyli, Y = H)

Liuokseen, joka sisälsi etoposididihydroksitri-kloorietyylikarbamaattia (0,205 g, 0,273 mmol) THF:ssa 15 (5 ml), IVOissa (0,5 ml) ja jääetikassa (0,5 ml) ja jo ta sekoitettiin huoneen lämpötilassa, lisättiin aktivoitua sinkkipölyä (0,40 g, 6,11 mmol). Reaktioastia ripustettiin ultraäänilaitteeseen 90 minuutiksi. TLC-analyysi (5 % MeOH sisältävä Ci^C^, siligakeeli) osoitti muodos-20 tuneen tuotetta, jolla oli pienempi Rf-arvo kuin lähtöaineella. Reaktioseos kaadettiin veteen ja uutettiin neljästi EtOAc:lla. Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin Na2SC>4:lla, väkevöitiin ja puhdistettiin flash-kromato-grafiakäsittelyllä käyttäen adsorbenttina silikageeliä 25 ja eluenttina 5 % MeOH sisältävää CH2CI2, jolloin saatiin 29 mg (19 %) tummanharmaata metallista kiintoainetta.

IR (KBr) 3434, 2923, 1767, 1734, 1486 cm-1.

NMR (CDC1,/DMSO) δ 7,75 (bs,lH), 6,61 (ε,ΙΗ), 6,26 30 3 (s, 1H) , 5,76 (S, 1H) , 5,71 (m,2H), 5,67 (s,lH), 4,70 (d,J=3,2Hz,1H), 4,53 (m,lH), 4,45 (bs,lH), 4,28 (d, J=7, 7Hz, 1H) , 4,22-4,13 (m,2H), 3,99 6 (m,2H), 3,50 (bm,lK), 3,34 (m,2H), 3,15-3,0 (m,3H), 2, 80-2,75 (m,lH), 1,15 (d,J=4,9H2,3H).

3 5 MS (FAB) m/e 560 (M+H) +.

52 «7789

Esimerkki 41 31-demetoksi-3'-metyylitriatsenyylidtoposidi (XIII; A = R9 = metyyli, Y = R3 = H)

Esimerkin 9 tuote käsitellään CH2Cl2:ssa pyridii-5 nillä ja sen jälkeen 2-trimetyylisilyylietoksimetyyli-kloridilla johdannaisen, jossa fenoli on silyylietoksi-metyyliasetaalisuojattu, aikaansaamiseksi. Liuokseen, joka sisältää tätä fenolisuojattua yhdistettä THF-H20-AcOH-seoksessa, lisätään aktivoitua sinkkipölyä. Näin 10 saatava 31-aminotuote diatsotoidaan HC1:n ja NaN02:n avulla. Diatsoniumyhdisteen reaktio metyyliamiinin kanssa ja sitä seuraava SEM-eetterisuojausryhmän poisto Bu^NF käyttäen tuottavat tulokseksi otsikon mukaisen yhdisteen.

Esimerkki 42 15 3'-demetoksi-31-aminoetoposidi-orto-kinoni (XIX; A = metyyli, Y = H)

Esimerkin 40 tuote diatsotoidaan ja käsitellään sitten natriumatsidilla esimerkissä 36 kuvattua yleistä menettelytapaa noudattaen. Syntyvän atsidiyhdisteen ref-20 luksointi kloroformissa tuottaa tulokseksi otsikon mukaisen yhdisteen.

Claims (8)

1. 53 "7789 Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten yhdisteiden valmistamiseksi, joilla on kava IV 5 Y --0 OH I 10 ......./ - 1 o B 15 jossa Y on H ja A on C^o-alkyyli, C2_20-alkenyyli, C5_6-sykloal-kyyli, 2-furyyli, 2-tienyyli, aryyli, aralkyyli tai aral-kenyyli, joissa kukin aromaattinen rengas voi olla subs-20 tituoimaton tai yhdellä tai useammalla halogeeni-, Cj.g-alkyyli-, C^g-alkoksyyli-, hydroksyyli-, nitro- ja/tai aminoryhmällä substituoitu, tai A ja Y ovat kumpikin C^g-alkyylejä tai A ja Y sekä se hiiliatomi, johon ne ovat liittyneet, muo-25 dostavat yhdessä C5_6-sykloalkyyliryhmän; ja B on jokin ryhmistä a - c vi (j^s
2. 30 CH3(K\^^Nor1 , R20^sn^/^NR4R5 o OR3 a b c 35 :: 7 7 fi 54 < ' ° ' joissa R1 on C^Q-alkyyli, C4_7-sykloalkyyli, C2.10-alkenyyli tai C2_10-alkynyyli, joista ryhmistä kukin voi olla substi-tuoimaton tai yhdellä tai useammalla Z-ryhmällä substi-5 tuoitu; aryyli, heteroaryyli, aralkyyli tai heteroaral-kyyli, joiden ryhmien rengasosa voi olla substituoimaton tai yhdellä tai useammalla C^g-alkyyli- ja/tai Z-ryhmällä substituoitu; halogeeni-, C1.5-alkoksyyli-, amino-, nitro-, syaani-, hydroksyyli- ja merkaptoryhmien tullessa 10 kysymykseen mainittuina Z-ryhminä; R2 on H tai metyyli; R11 on H, -CH, -CR10, -COR10 tai -CNHR10, joissa R10 on Il H II II 0 0 0 0 C^Q-alkyyli, joka voi olla substituoimaton tai yhdellä 15 tai useammalla Z-ryhmällä substituoitu, tai aryyli-C^-alkyyli; R3 on H tai jokin fenolinsuojausryhmä ja R4 ja R5 ovat kumpikin itsenäisesti R11 tai R1 tai R( on H ja R5 on sulfonyyli tai 20 ^vr13 Λ -CH-N^ -7 tai -CH-N || Y !<-V 0 25 joissa R12 on H tai C1.8-alkyyli ja R13 on H, R1 tai -S-R1, tai R3, R4 ja R5 muodostavat yhdessä ryhmän, jolla on kaava -CR14 =, jossa R14 on H tai C1.5-alkyyli, tai
3. 30 NR4R5 on nitro-, atsido- tai N2*X~-ryhmä, jossa X' on anio-ninen ryhmä, sillä edellytyksellä, että R3 ei ole H, kun X' on anioninen ryhmä; tai NR4R5 on N=CHR6, N=CHNR7R8 tai N=NNHR9, joissa R6 merkitsee samaa kuin R1 edellä, R7 ja R8 ovat kumpikin itsenäisesti 35 H tai C^g-alkyyli ja R9 on Cj.g-alkyyli, tai 55 *<7782 R3 ja NR4R5 muodostavat yhdessä sisäisen diatsoniumhydrok-sidisuolan, tunnettu siitä, että A) yhdisteen, jolla on kaava III 5 y A o^\—ό HO OH I 10 ^ \ III Λ* ch3o-\^0 15 0 annetaan reagoida oksiimin kanssa, jolla on kaava HjNOR1 tai sen happoadditiosuolan kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava IVa 20 Y 25 ( (f 0 0 — ch3o-^Aor1 30 o B) kaavan IVa mukainen yhdiste pelkistetään, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava V 35 56. j .. I Y A^0 --o
4. 110 OH I
5. 5 CXXX/ pss 0 1 ΟΗ3°'^χγ^ΝΝΗ2 OH 10 tai kaavan III mukaisen yhdisteen annetaan reagoida NH3:n tai alkyyliamiinin kanssa, jolloin saadaan kaavan V mukainen yhdiste, 15 haluttaessa kaavan V mukaisen yhdisteen annetaan reagoida asyloivan aineen; sulfonylointiaineen; klorofor-miaatin; hiilihappoesterin; substituoidun isosyanaatin; alkyloivan aineen; kaavan R6CH0 mukaisen aldehydin; kaavan R14C(OAlk)3 mukaisen trialkoksiesterin; kaavan 20 (AlkO)2CHNR7R8 mukaisen amidiasetaalin; tai diatsotoivan aineen kanssa ja mahdollisesti sen jälkeen alkalimetalli-atsidin tai kaavan R9NH2 mukaisen amiinin kanssa tai per-hapon kanssa; tai syklisen imidin kanssa, jolla on kaava „ 0 0 ^ Λ r13 h /V IIN I tai IIN | ''»s o o 30 kaavan R12CH0 mukaisen aldehydin läsnäollessa; tai C) kaavan IV mukainen yhdiste, jossa B on » Λ . R 2 0·R 4 R J OR3 57 · · 7 7 B 9 j jossa R2 on me tyyli ryhmä, R3 ja R* ovat vetyjä ja R5 on asyyliryhmä, hapetetaan vastaavaksi o-kinoniksi, joka mahdollisesti pelkistetään vastaavaksi o-hydrokinoniksi, minkä jälkeen suoritetaan deasylointi, ja haluttaessa 5 deasyloidun tuotteen annetaan reagoida alkylointlaineiden, asylointiaineiden, kloroformiaatin, hiilihappoeste-reiden tai substituoitujen isosyanaattien kanssa, tai deasyloitu tuote diatsotoidaan, käsitellään atsidilla ja termolysoidaan, jolloin substituentit A, Y, B ja R*-R14 10 merkitsevät samaa kuin edellä. 58 ".7789 Förfarande för framställning av nya, terapeutiskt användbara föreningar med formeln IV OH 1 10 (°XXY> - ......( i o B 15 väri Y är H och A är C^^-alkyl, C2_20-alkenyl, C5.6-cykloalkyl, 2-furyl, 2-tienyl, aryl, aralkyl eller aralkenyl, i vilka varje aromatisk ring kan vara osubstituerad eller substi-20 tuerad med en eller flera halogen-, C^g-alkyl-, C^.g-al-koxyl-, hydroxyl-, nitro- och/eller aminogrupper, eller A och Y är bäda C^.g-alkyler eller A och Y och den kolatomen vid vilken de är bundna bildar tillsammans en C5.6-cykloalkylgrupp; och 25 B är nägon av grupper a - c & A 3Q CH3cK\j^^N0R1 ,
6. 0 OR3 - b c
7. 35 B 59 87789 i vilka R1 är C1.10 -alkyl, C4_7-cykloalkyl, C2_10-alkenyl eller C2_10-alkynyl, av vilka grupper var och en kan vara osubstitue-rad eller substituerad med en eller flera Z-grupper; 5 aryl, heteroaryl, aralkyl eller heteroaralkyl, i vilka grupper ringdelen kan vara osubstituerad eller substituerad med en eller flera C^g-alkyl- och/eller Z-grupper; varvid säsom nämnda Z-grupper kommer i fräga halogen-, C:_5-alkoxyl, amino-, nitro-, cyan-, hydroxyl- och mercap-10 togrupper; R2 är H eller metyl; R11 är H, -CH, -CR10, -COR10 eller -CNHR10, i vilka R10 är II II II II 0 0 0 0 C1_10-alkyl, vilken kan vara osubstituerad eller substi-15 tuerad med en eller flera Z-grupper, eller aryl- Cj.j-alkyl; R3 är H eller nägon fenolskyddsgrupp och R4 och R5 är bäda självständigt R11 eller R1 eller R4 är H och R5 är sulfonyl eller 20 ^Vr13 A Ί eller ll 1,12 {.»γ1 25. vilka R12 är H eller C^g-alkyl och R13 är H, R1 eller -S-R1, eller R3, R4 och R5 bildar tillsammans en grupp med formeln -CR14*, väri R14 är H eller Cj.j-alkyl, eller NR4R5 är en nitro-, azido- eller N2+X‘-grupp, väri X' är en 30 anjonisk grupp, under den förutsättningen, att R3 är inte H, dä X' är en anjonisk grupp; eller NR4R5 är N=CHR6, N=CHNR7Ra eller N-NNHR9, i vilka R6 be-tecknar samma som R1 ovan, R7 och R8 är bäda självständigt H eller C1.8-alkyl och R9 är Cj.g-alkyl, eller 35 R3 och NR4R5 bildar tillsammans ett internt diazoniumhyd- 60 '· 7 7 89 roxisalt, kännetecknat därav, att A) en förening med formeIn lii Y /3r-0 5 —o ( 'i II I 0 \0 AAJ......·( — i° 0 CH30^\^O 0 15 omsätts med ett oxim med formeln I^NOR1 eller med ett sy-raadditionssalt därav, varvid erhälls en förening med formeln IVa 25. o | IVa J γ NOR1 0
8. 30 B) en förening med formeln IVa reduceras, varvid erhälls en förening med formeln V - f- r·* «* 61 'i / / ^ Y f ΓΤΤ^ο 5 'o XS αΗ30^γ^ΝΗ2 OH 10 eller en förening med formeln III omsätts med NH3 eller med en alkylamin, varvid erhälls en förening med formeln V, 15 ifali önskvärt, föreningen med formeln V omsätts med ett acyleringsmedel; ett sulfonyleringsmedel; kloro-format; en kolsyraester; ett substituerat isocyanat; ett alkyleringsmedel; en aldehyd med formeln R6CH0; en trialkoxiester med formeln R14C(OAlk)3; ett amidacetal med 20 formeln (AlkO )2CHNR7R8; eller med ett diazotiseringsmedel och eventuellt därefter med en alkalimetallazid eller en amin med formeln R9NH2 eller med en persyra; eller med en cyklisk imid med formeln 25 0 0 HN I HN | o o 30 i närvaro av en aldehyd med formeln R12CH0; eller 62 8 7 7 89 C) en förening med formeln IV, väri B Mr Λ OR3 väri R2 är en metylgrupp, R3 och R4 är väte och R5 är en acylgrupp, oxideras tili ett motsvarande o-kinon som eventuellt reduceras tili ett motsvarande o-hydrokinon, 10 varefter utförs deacylering, och ifall önskvärt, den deacylerade produkten omsätts med alkyleringsmedel, acy-leringsmedel, kloroformat, kolsyraestrar eller substitue-rade isocyanat, eller den deacylerade produkten diazoti-seras, behandlas med en azid och termolyseras, varvid 15 substituenterna A, Y, B och R1-R14 betecknar sanuna som ovan.