FI85487C

FI85487C - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 3- propenylaminotiazolylcefalosporansyror och estrar.

Info

Publication number: FI85487C
Application number: FI862642A
Authority: FI
Inventors: Seiji Iimura; Yoshio Abe; Jun Okumura; Takayuki Naito; Hajime Kamachi
Original assignee: Squibb Bristol Myers Co
Priority date: 1985-06-24
Filing date: 1986-06-19
Publication date: 1992-04-27
Also published as: FI85487B; OA08349A; SG91691G; ZA864297B; SE500218C2; IE59123B1; FI862642A; GB2178032A; JPS62491A; FI862642A0; SE8602780L; HK106091A; FR2583757A1; DK295386D0; YU110086A; MY102073A; IL79181A0; CY1618A; AU5882186A; IE861670L

Description

1 85487

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 3-prop-enyyliaminotiatsolyylikefalosporaanihappojen ja -esterei-den valmistamiseksi 5 EP-hakemusjulkaisussa 30 630 kuvataan hyvin suuri määrä 7-asyyliamino-3-vinyylikefalosporaanihappo-johdannaisia, mukaan luettuina muun muassa yhdisteet, joiden kaava on

10 S

N--—C-CONH -S ^

h n n I A

•H2N_CH=CH2

OR COOH

15 jossa R voi olla muun muassa (alempi)alkyyli, (alempi)alk-enyyli, (alempiJalkinyyli tai karboksi(alempi)alkyyli. Yhdisteitä valmistetaan muun muassa antamalla vastaavan 3-halogeenimetyyliyhdisteen reagoida triaryylifosfiinin 20 kanssa, minkä jälkeen seuraa käsittely emäksen kanssa ja reaktio formaldehydin kanssa. Kummassakin tapauksessa lopullinen 3-substituentti on vinyyliryhmä. 3-substituentin osalta paljastuksen tai viittauksen kohteena ei esitetä propenyyli- tai substituoitua propenyyliryhmää. Siinä ei . .25 myöskään paljasteta tai viitata esilääkkeenä suun kautta • annettavaan esteriin, joka liittyisi 4-karboksyylihappo- -·” osaan. Yhdistettä, jossa R on -CH2C02H on käsitelty kirjal- lisuudessa nimellä FK-027 ja cefcixim.

GB-patenttijulkaisu 1 399 086 kuvaa yleisesti hyvin 30 suurta määrää kefalosporiineja, joiden kaava on

....: R-C-CONH --S

h I I

*. 35 \ 0X P

*:**: 0Ra I

COOH

• · · • · · · 1 · 2 85487 jossa R on vety tai orgaaninen ryhmä, Ra on eetterin muodostava yksivalenssinen orgaaninen ryhmä, joka on sitoutunut happeen hiiliatomin välityksellä, B on s tai S—>0, ja P on orgaaninen ryhmä. Eräässä sovellutuksessa P voi olla 5 muun muassa vinyyliryhmä, jonka kaava on -"-a3

-CH=C

\r4 3 4 jossa R ja R voivat olla itsenäisesti vety, nitriili, 10 (alempi)alkoksikarbonyyli, tai substituoitu tai substituoi- maton alifaattinen, sykloalifaattinen, aralifaattinen tai aromaattinen ryhmä. Kuitenkaan 2-amino-tiatsol-4-yyli-ryhmää ei identifioida mahdollisena R-substituenttina eikä paljasteta tai viitata esteriin suun kautta käytettävänä esilääkkeenä, 15 joka liittyisi sen 4-karboksyylihappoon.US-patenttijulkaisussa 3 971 778 ja sen lohkaistuissa hakemuksissa numeroissa 4 024 133, 4 024 137, 4 064 346, 4 033 950, 4 079 178, 4 091 209, 4 092 477 ja 4 093 803 esiintyy samanlaisia pal jastuksia .

20 US-patenttijulkaisussa 4 307 233 kuvataan muun muassa 3-vinyyli-kefalosporiini-johdannaisia, joiden kaava on N-r-C-CONH—- h | li I vR3 ··.: H2N-k s/3 \or5 (jj»—“n^ch-cbh'

Iooh X14 ϊ.·.: jossa R3 muun muassa voi olla alkyyli, vinyyli, syanyyli tai ·1 · . 3 4 : suojaava ryhmä, kuten 2-metoksiprop-2-yyli, ja R ja R ovat : 30 alkyyliryhmiä (joissa valinnaisesti substituenttina hydroksi, ;V; alkoksi, amino, alkyyliamino tai dialkyyliamino) tai fenyyli- ryhmiä, tai RJ ja R4 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, voivat muodostaa tyydytetyn heterosyklisen 5- tai 6-jäsenisen renkaan, jossa on valinnaisesti toinen 35 heteroatomi ryhmästä N, 0 ja S, ja jossa on valinnaisesti · • » 1 3 85487 substituenttina alkyyliryhmä. Yhdisteet ovat käyttökelpoisia väliyhdisteinä valmistettaessa 3-tiovinyyli-kefalosporiini-johdannaisia. Siinä ei paljasteta tai viitata 3-substituentin osalta substituoituun tai substituoimattomaan propenyyli-osaan 5 eikä myöskään esitetä paljastusta tai viitata esteriin suun kautta käytettävänä esilääkkeenä, joka liittyisi 4-karboksyy-lihappoon. Julkaistu GB-patenttihakemus 2 051 062 on yhdenmukainen sen kanssa ja sen paljastus on samanlainen.

EP-hakemusjulkaisussa 53 537 paljastetaan muun 10 muassa 3-vinyylikefalosporiini-johdannaisia, joiden kaava on

S

N-J-C---------S ^ li jju Ί i zr3 15 H2N-ks/1 N c 5 T nr4

Ri/\Bb COOR2 4 R5 R5 jossa ja ovat samoja tai erilaisia ja ovat vety tai 20 alkyyli, tai yhdessä muodostavat alkyleeniryhmän, jossa on 2 tai 3 hiiliatomia, R_ on happoa suojaava ryhmä, R_ on happoa D Δ suojaava ryhmä, kuten esteri, ja R^ ovat samoja tai erilaisia ja ovat vety, alkyyli (jossa valinnaisesti substituenttina hydroksi, alkoksi, amino, alkyyliamino tai dialkyyliamino) tai : 25 fenyyli-ryhmiä, tai R^ ja R^ yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneet, voivat muodostaa tyydytetyn heterosykli-sen 5- tai 6-jäsenisen renkaan, jossa on valinnaisesti toinen heteroatomi ryhmästä N, O ja S, ja jossa on valinnaisesti '· substituenttina alkyyliryhmä. Yhdisteet ovat käyttökelpoisia 30 väliyhdisteinä valmistettaessa 3-tiovinyyli-kefalosporiini-johdannaisia. Siinä ei paljasteta tai viitata 3-substituentin osalta substituoituun tai substituoimattomaan propenyyli-·:*·· ryhmään ja 4-karboksyylihapon esteriin, joka on tarkoitettu suun kautta käytettäväksi.

• · * · · m · * » · 4 85487 US-patenttijulkaisussa 4 307 116 kuvataan 3-tiovinyyli-kefalosporiineja, joiden kaava on

. ,jctc~"“xO

2 ^ OR· cY \^CH=CH-SR

COOH

jossa R° on vety, alkyyli, vinyyli tai syaanimetyyli, ja R voi olla muun muassa jokin hyvin suuresta määrästä hetero-10 syklisiä renkaita. Siinä ei paljasteta tai viitata 3-substi-tuentin osalta substituoituun tai substituoimattomaan prope-nyyliryhmään eikä siinä myöskään paljasteta tai viitata sen esteriin, joka on tarkoitettu suun kautta käytettäväksi.

EP-patenttihakemuksessa 53 074 kuvataan yleisesti 15 hyvin suuri määrä 3-vinyylikefalosporiini-johdannaisia, joiden kaava on (0,n * n

Ria'NH“T-f" S "h „.

20 — Hv-^J-CH-C-r3 COOR· 2a jossa R° (yhdessä useista suoritusmuodoista) voi olla I cl : 25 N-i—CCO- 1ΓΊΓ& »2^5^ \,R_ 5 s 30 jossa R muun muassa voi olla vety, alkyyli, vinyyli, syaani-metyyli, oksiimin suojaryhmä, kuten trityyli jne., tai ryhmä, jonka kaava on :·· ", 35 \ /C00R5

R1/CV

*:·1: R5 R5 « · • « · • · · 0 · • · · • ♦ · 5 85487 jossa Rg ja ovat samoja tai erilaisia, ja voivat olla vety, alkyyli, tai yhdessä alkyleeni-radikaali, jossa on c 2 tai 3 hiiliatomia, ja R^ on vety tai happoa suojaava radikaali; R°a on vety tai happoa suojaava radikaali, kuten me-5 toksimetyyli; R° (yhdessä useista suoritusmuodoista) voi olla metyyliryhmä, jossa on substituenttina 5- tai 6-jäseninen aromaattinen heterosyklinen rengas, jossa on yksi ainoa heteroatomi, kuten 2- tai 3-pyridyyli, 2- tai 3-tienyyli tai 2- tai 3-furyyli; 10 ja R. on ryhmä, jonka kaava on 3 R4S020- jossa R^ voi olla alkyyli, trihalogeenimetyyli tai valinnaisesti substituoitu fenyyli. Näiden yhdisteiden mainitaan ole-15 van väliyhdisteitä valmistettaessa yhdisteitä, joissa 3-substituentti on ryhmä, jonka kaava on R° (

-CH=C-SR

joilla mainitaan olevan bakteerien vastainen vaikutus. Vaikka-20 kin tämä patentti sisältää mahdollisuuden, että R° on metyyli-ryhmä, jossa on substituenttina N-pitoinen heterosyklinen rengas, sekä väliyhdisteissä että lopputuotteessa (mahdollistaen täten heterosyklisesti substituoidun propenyyli-osan läsnäolon), esimerkkinä R°:sta väliyhdisteissä ja lopputuot-25 teessä viitataan vain metyyliin ja edelleen sekä välituot- -teissä että lopputuotteessa, propenyyliryhmässä on oltava toi- 4 nen substituentti (-O^SR tai vastaavasti -SR) . Siinä ei pal-jasteta tai viitata sen esteriin, joka on tarkoitettu käytet-täväksi suun kautta.

: 30 EP-hakemusjulkaisussa 53 538 kuvataan muun muassa : 3-vinyylikefalosporiini-välituotteita, joiden kaava on (0)n « γτγ “"ττΟ s/1 \or5 "v^CH-CH-R3

COOH

• ·

• · O

• · · • » · · 1 » · • · · • · 6 85487 jossa n on 0 tai 1, R5 on vety, alkyyli, vinyyli, syaanime-tyyli tai oksiimin suojaryhmä, ja R3 on halogeeni.

Tämä patenttihakemus koskee menetelmää uusien kaavan I mukaisten kefalosporiinijohdannaisten valmistamisek-5 si, jotka ovat tehokkaita bakteerien vastaisia aineita ja joista eräitä käyttökelpoisista voidaan käyttää suun kautta antaen, 10 N — 1—C-CONH—j ^ '"'j .½ XJ i 0j-«^-CH=CHCH2K3 (I) OR2 * 4

COOR

15 jossa R1 on vety tai tavanomainen aminoryhmän suojaryhmä; R2 on vety, suora- tai sivuketjuinen alkyyli, jossa on 1 -4 hiiliatomia, alkenyyli tai alkinyyli, jossa on 2 - 4 hiiliatomia, sykloalkyyli, jossa on 3 - 6 hiiliatomia, 20 sykloalkyylialkyyli, jossa on 3 - 6 rengasjäsentä ja 4 -10 hiiliatomia, tai alkanoyyli, jossa on 2 - 4 hiiliatomia; R3 on vety, alempi alkyyli, jossa on 1 - 3 hiiliatomia, alempi alkoksi, jossa on 1 - 3 hiiliatomia, alempi alkano-.·. : 25 yylioksi, jossa on 2 - 3 hiiliatomia; ja R4 on vety tai fysiologisesti hydrolysoituva esteriryhmä, kuten asetoksimetyyli, 1-asetoksietyyli, pivaloyylioksime-tyyli, 5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yylimetyyli, 1- (etoksikarbonyylioksi)etyyli tai 4-glysyylioksibentsoyy- 30 lioksimetyyli.

Keksinnön piiriin sisällytetään myös kaavan I mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävät happo-additiosuolat, metallisuolat (R4 on H) ja solvaatit (hyd-raatit mukaan lukien), jotka voivat esiintyä erilaisina ‘ . 35 tautomeerimuotoina, esim. 2-aminotiatsol-4-yyli-osan 2- iminotiatsolin-4-yyli-muoto.

7 85487

Kuten rakennekaavassa on esitetty, kaavan I mukaiset yhdisteet ovat alkoksi-iminoryhmän suhteen "syn"- tai "Z"-konfiguraation mukaisia. Koska yhdisteet ovat geometrisia isomeerejä, läsnä voi olla myös vähän "anti"-isomeeriä. Tämä 5 keksintö käsittää kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa on ainakin 90 % "syn"-isomeeriä. Ensisijaisesti kaavan I mukaiset yhdisteet ovat "syn"-isomeereja, jotka ovat oleellisesti vapaita vastaavista "anti"-isomeereistä.

Geometristen isomeerien lisäksi, jotka ovat mahdol-10 lisiä alkoksi-iminoryhmän suhteen, kaavan I mukaiset yhdisteet (ja välituotteet VIII, XII, XIII ja XIV) muodostavat myös geometrisia (cis ja trans, tai Z ja E) isomeerejä 3-asemassa olevan propenyyliryhmän kaksoissidoksen kohdalla. Näiden yhdisteiden sekä cis ("Z")- että trans ("E")-isomeerit sisäl-15 lytetään spesifisinä tämän keksinnön piiriin.

Kaavan I mukaisia farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja ovat ne, joissa anioni ei myötävaikuta merkittävästi suolan toksisuuteen ja jotka ovat sekoittuvia tavallisiin farmaseuttisiin väliaineisiin ja soveltuvat 20 annettaviksi suun kautta tai parenteraalisesti. Farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja ovat kaavan I mukaiset suolat epäorgaanisten happojen kanssa kuten kloorivety-hapon, bromivetyhapon, fosforihapon ja rikkihapon kanssa, orgaanisten karboksyylihappojen tai orgaanisten sulfonihappo-; 25 jen, kuten etikkahapon, sitruunahapon, maleiinihapon, meripih-kahapon, bentsoehapon, viinihapon, fumaarihapon, mantelihapon, **“ askorbiinihapon, omenahapon, metaanisulfonihapon, p-tolueeni- sulfonihapon ja muiden happojen kanssa, jotka ovat tunnettuja ja käytettyjä penisilliinien ja kefalosporiinien yhteydessä.

30 Näiden suolojen valmistus suoritetaan tavanomaisin menetel-min, joihin sisältyy kaavan Ia mukaisen yhdisteen reaktio pääasiallisesti ekvivalenttimäärän kanssa happoa.

4

Kaavan I mukaiset aineet, joissa R on vety, muodos-tavat myöskin farmaseuttisesti hyväksyttäviä metalli- ja • 35 amiinisuoloja, joissa kationi ei merkittävästi myötävaikuta 8 8 5 4 S 7 suolan toksisuuteen tai biologiseen aktiivisuuteen. Nämäkin suolat muodostavat osan tästä keksinnöstä. Sopivia metalli-suoloja ovat natrium-, kalium-, barium-, sinkki- ja alumi-niumsuolat. Ensisijaisesti ovat natrium- tai kaliumsuolat.

5 Amiinisuoloja, jotka on valmistettu amiineista, joita käytetään esimerkiksi bentsyylipenisilliinin kanssa, jotka pystyvät muodostamaan stabiileja suoloja happamen karboksyyli-ryhmän kanssa, ovat trialkyy liamiinit,kuten trietyyliamiini, prokaiini, dibentsyyliamiini, N-bentsyyli-/6~fenetyyliamiini, 10 2-efeeniamiini, N,N 1-dibentsyylietyleenidiamiini, dehydro-abietyyliamiini, N-etyylipiperidiini, bentsyyliamiini ja disykloheksyyliamiini.

Fysiologisesti hydrolysoituvat esterit toimivat esilääkkeinä hydrolysoituen kehossa, jolloin saadaan anti-15 bioottia itseään. Niitä annetaan ensisijaisesti suun kautta koska hydrolyysi monissa tapauksissa tapahtuu pääasiallisesti ruoansulatusentsyymien vaikutuksen alaisena. Parenteraalista antoa voidaan käyttää milloin esteri itse on aktiivinen, tai tapauksissa, joissa hydrolyysi tapahtuu veressä. Sopivia 20 estereitä ovat asetoksimetyyli, pivaloyylioksimetyyli, 1-asetoksietyyli, 1-pivaloyylioksietyyli, 3-ftalidyyli, p-glysyylioksibentsoyylioksimetyyli, 5-metyyli-1,3-dioksasyklo-pent-4-en-2-on-4-yylimetyyli ja muut penisilliini- ja kefalo-sporiinialalla tunnetut esterit. Ensisijaisimpia estereitä : 25 ovat 1-asetoksietyyli ja pivaloyylioksimetyyli.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan formuloida suun kautta tapahtuvaa tai parenteraalista käyttöä varten tavalliseen tapaan käyttämällä tunnettuja farmaseuttisia kantajia ja apuaineita, ja ne voivat olla yksikköannosmuodossa tai moniannok--:· 30 sissa säiliöissä. Yhdistelmät voivat olla tabletteina, kapse- lien, liuosten, suspensioiden tai emulsioiden muodossa. Nämä yhdisteet voidaan formuloida myös peräpuikoiksi käyttämällä ‘t**: tavanomaisia peräpuikko-pohjia, kuten kaakaovoita tai muita rasvamaisia aineita. Haluttaessa yhdisteitä voidaan antaa . 35 yhdistelmänä muiden antibioottien kanssa, kefalosporiinit, penisilliinit ja aminoglykosidit mukaan lukien.

9 85487

Annosyksikkömuotoihin saatettuina yhdistelmät sisältävät ensisijaisesti noin 50 - noin 1500 mg kaavan I mukaista aktiivista aineosaa. Kaavan I mukaisten yhdisteiden annos riippuu sellaisista tekijöistä kuten potilaan painosta ja 5 iästä, samoin kuin sairauden erityisestä luonteesta ja vakavuudesta, ja on lääkärin harkinnan varassa. Kuitenkin täysikasvuisen ihmisen hoitamiseen käytettävä annos on tavallisesti rajoissa noin 500- noin 5000 mg päivää kohden, riippuen antotiheydestä ja antotiestä. Lihaksensisäisesti tai 10 laskimonsisäisesti täysikasvuiselle ihmiselle annettaessa kokonaisannos noin 750 - noin 3000 mg päivää kohden, jaettuina annoksina, on normaalisti riittävä.

Kaavan I mukaisissa yhdisteissä erityisen ensisijai- 1 2 4 nen R on vety, R on vety, asetyyli tai metyyli, ja R on 15 pivaloyylioksimetyyli tai 1-asetoksietyyli. Ensisijaisimmat keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet on lueteltu alla ja niitä seuraavat niiden valmistuksen koeyksityiskohdat ja luonnehdinta. Yhdisteet, joita ei ole esitetty spesifisen esimerkin avulla, ovat helposti valmistettavissa analogisin menetelmin.

20 1) 70-/"(Z)-2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (metoksi- imino) -asetamidoZ-S-^Z) -prop-1 -en-1 -yyl jJ‘-3-kefem-4-karboksyy1ihappo, 2) 1-asetoksietyyli-70-/lz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2- metoksi-imino)-asetamido7-3-^Z)-prop-1-en-1-yyli7-3-: 25 kefem-4-karboksylaatti, 3) pivaloyylioksimetyyli-7/J-l“(Z)-2- (2-aminotiatsol- 4-yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamid^-3-ΖΓζ) -prop-1 -en-1 -yyliT- 3- kefem-4-karboksylaatti, 4) 7 β ~Z"(Z) -2- (2-aminotlatsol-4-yyli)-2- (metoksi- 30 imino)-asetamido7-3-^E)-prop-1-en-1-yyli7“3“kefem-4- karboksyylihappo, 5) 1 -asetoksietyyli-7j5i£7z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2-(metoksi-imino)-asetamido7-3-£(E)-prop-1-en-1-yyl£7-3- ‘ - kefem-4-karboksylaatti, 10 85 487 6) pivaloyylioksimetyyli-70-/lz)-2-(2-aminotiatsol- 4-yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamido7-3-£]E) -prop-1 -en-1 -yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, 7) 7p-£"(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (metoksi- 5 imino) -asetamido7-3-,£l Z) -but-1 -en-1 -yy 147-3-kef em-4- karboksyylihappo, 8) asetoksimetyyli-70-£Tz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2- (metoksi-imino) -asetamido7-3-£Tz) -but-1-en-1 -yyli7-3-kef em- 4-karboksylaatti, 10 9) 1-asetoksietyyli-7|0-Z7z)-2-(2-aminotiatsol-4- yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamidQ7-3-ZKz)-but-1-en-1-yyli7- 3- kefem-4-karboksylaatti, 10) pivaloyylioksimetyyli-7/3-£(Z) -2- (2-aminotiatsol- 4- yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamido7~3-71 Z)-but-1-en-1-yylf7~ 15 3-kefem-4-karboksylaatti, 11) 4-glysyylioksibentsoyylioksimetyyli-7^-ZTz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamidc>7-3-ΠΖ)-but-1-en-1-yyl£7-3-kefem-4-karboksylaatti, 1 2) 7/? — ΖΓΪZ) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (metoksi-20 imino)-asetamido7-3-£lE)-but-1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksyy- lihappo, 13) asetoksimetyyli-7/5Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2- (metoksi-imino)-asetaraidQ7-3-£*(E)-but-1-en-1-yyli7-3-kefem- 4-karboksylaatti, . . 25 14) 1-asetoksietyyli-7i0-7”(Z)-2-(2-aminotiatsol-4- yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamidq7-3-/"(E)-but-1-en-1-yyliJ- 3- kefem-4-karboksylaatti, 15) pivaloyylioksimetyyli-7y9-Z"(Z)-2-(2-aminotiatsol- 4- yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamidq7-3-^E) -but-1 -en-1 -yyli7_ 30 3-kefem-4-karboksylaatti, 16) 4-glysyylioksibentsoyylioksimetyyli-7/fr-£lZ)-2- (2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamido7-3-Z(E)-....: but-1-en-1 -yyli7_3-kefem-4-karboksy laatti, 11 854S7 17) 7|ϊ-Ζ7Ζ) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamido7-3-<T(Z) -pent-1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karbok-syylihappo, 18) 1 -asetoksietyyli-7/3 -/“(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 5 2- (metoksi-imino) -asetamid<27-3-^"(Z) -pent-1 -en-1 -yyli7“3- kefem-4-karboksylaatti, 19) pivaloyylioksimetyyli-7/3-£(Z) -2- (2-aminotiatsol- 4-yyli) -2-metoksi-imino) -asetamida7-3-ZT(Z) -pent-1-en-1-yy 117- 3- kef em-4-karboksy laatti, 10 20) 7^-^(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi- imino) -asetamidoj7~3-17E) -pent-1-en-1-yyl4J-3-kefem-4-karbok-syylihappo, 21) 1-asetoksietyyli-7^-/lZ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (metoksi-imini) -asetamid<i7’-3-^1 E) -pent-1 -en-1 -yyl£7- 15 3-kefem-4-karboksylaatti, 22) pivaloyylioksimetyyli-7/3-^lZ) -2- (2-aminotiatsol- 4- yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamido7-3-£j(E) -pent-l-en-l-yyljj- 3-kefem-4-karboksylaatti, 23) 7/9-lTz) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (metoksi-20 imino) -asetamido7-3-£'(Z)-3-metoksiprop-1-en-1-yyli7“3- ke f em-4-ka rbok syy1ihappo, 24) 1-asetoksietyyli-7/?-ZlZ) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamido7-3-/f(Z) -3-metoksiprop-1-en-1-yyl|7-3-kefem-4-karboksylaatti, ·1·.: 25 25) pivaloyylioksimetyyli-7/3-/1(z)-2-(2-aminotiatsol- ,:. 4-yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamidQ7~3-£(Z) -3-metoksiprop-1- en-1-yyli7~3-kefem-4-karboksylaatti, 26) 7^~1(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamido7-3-^"(E)-3-metoksiprop-1-en-1-yyli7~3-kefem-4- 30 karboksyyl ihappo, 27) 1-asetoksietyyli-7/0-£“(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamido/-3-£(E)-3-metoksiprop-1- - - en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, * » · 12 8 5 487 28) pivaloyylioksimetyyli-7/3-/~(Z) -2- (2-aminotiatsol- 4-yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamido7-3-ZT(E) -3-metoksiprop- 1 -en-1 -yyli7-3-kefeni-4-karboksylaatti, 29) 7/3-/Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (hydroksi-5 imino) -asetamidd7~3-Z"(Z) -prop-1 -en-1 -yyli7-3-kefem-4- karboksyylihappo, 30) 1-asetoksietyyli-7^-^T(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(hydroksi-imino)-asetamido7-3-£Tz)-prop-1-en-1-yy- 3- kefem-4-karboksylaatti, 10 31) pivaloyylioksimetyyli-7/)-ZTz)-2- (2-aminotiatsol- 4- yyli)-2-(hydroksi-imino)-asetamidq7-3-/7z) prop-1-en-1-yyli7- 3-kefem-4-karboksylaatti, 32) asetoksimetyyli-7^-/JZ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2- (hydroksi-imino)-asetamidq7-3-/7z)-prop-1-en-1-yy147-3~ 15 kefem-4-karboksylaatti, 33) 7/0-/7( Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (hydroksx-imino)-asetamidq7-3-/“(E)-prop-1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksyy1ihappo, 34) asetoksimetyyli-7/?-/lz) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 20 2- (hydroksi-imino) -asetamido7_3-/7E) -prop-1 -en-1-yyli7-3- kefem-4-karboksylaatti, 35) 1-asetoksietyy 11-7/3-/7z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (hydroksi-imino) -asetamido7_3“Z~(E) -prop-1 -en-1 -yyli7~ 3- kefem-4-karboksylaatti, 25 36) pivaloyylioksimetyyli-7/3-ZTz)-2- (2-aminotiatsol- 4- yy li) -2- (hydroksi-imino) -asetamid07-3-£T(E) -prop-1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, 37) 7fo-£\Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- (hydroksi-imino) -asetamidq7~3-/j(Z) -3-asetoksiprop-1-en-1-yyl47“3-kefem- ' ' 30 4-karboksyylihappo, 38) asetoksimetyy li-7/0-/T(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2-(hydroksi-imino)-asetamido7-3-/7z)-3-asetoksiprop-1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, : 39) 1-asetoksietyyli-7/3-/7z) -2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- ....: 35 2- (hydroksi-imino) -asetamido7-3-/j(Z) -3-asetoksiprop-1 -en-1 - ....: yyl i7~ 3-kef em-4-karboksylaatti, 13 85487 40) pivaloyylioksimetyyli-7pTf(z)-2-(2-aminotiatsol- 4-yyli)-2-(hydroksi-imino)-asetamido7-3-/lz)-3-asetoksiprop- 1- en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, 41) 70-£"(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli)-2- (hydroksi- 5 imino) -asetamido7-3-^E) -3-asetoksiprop-1 -en-1 -yyli7-3-kefem- 4-karboksyylihappo, 42) asetoksimetyyli-7(S-£’(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2- (hydroksi-imino) -asetamido7-3-^f(E) -asetoksiprop-1-en-1-yyH7-3-kefem-4-karboksy laatti, 10 43) 1-asetoksietyyli-70-Z~(Z) -2-(2-ammotiatsol-4- yyli)-2-(hydroksi-imino)-asetamid^-S-^lE)-3-asetoksiprop-1-en-1-yyli7~3-kefem-4-karboksylaatti, 44) pivaloyylioksimetyyli-7/?-£lz) -2- (2-aminotiatsol- 4-yyli)-2-(hydroksi-imino)-asetamido7-3-/lE)-asetoksiprop-1- 15 en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, 45) 7/2-ZJz) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (metoksi-imino)-asetamidä7-3-£IZ)-3-asetoksiprop-1-en-1-yyli7~3-kefem- 4-karboksyylihappo, 46) asetoksimetyyli-7/0-if(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 20 2- (metoksi-imino) -asetamid<27-3-£7z) -3-asetoksiprop-1-en-1 - yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, 47) 1-asetoksietyyli-7^-/Kz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2- (metoksi-imino)-asetamido7-3-ZlZ)-asetoksiprop-Ί-en-1-yylij- 3- kefem-4-karboksylaatti, 25 48) pivaloyylioksimetyyli-7/?-£KZ) -2- (2-aminotiatsoi- .:. 4-yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamido7-3-/“(Z) -3-asetoksiprop- 1- en-1-yyli7“3-kefem-4-karboksylaatti, 49) Ίβ-£{Ζ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino) -asetamido7-3-ifiE) -3-asetoksiprop-1 -en-1 -yyli7~3- 30 kefem-4-karboksyylihappo, 50) asetoksimetyyli-7^-£]Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2- (metoksi-imino)-asetamido7-3-£lE)-asetoksiprop-1-en-1-yyljj- 3- kef em-4-karboksylaatti, 51) 1-asetoksietyyli-7/?-/"(z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 35 2- (metoksi-imino) -asetamido7-3-£lE) -asetoksiprop-1 -en-1 -yyli7- 3-kef em-4-karboksylaatti, 14 8 5437 52) pivaloyylioksimetyyli-7|3-Z"(Z) -2- (2-aminotiatsol- 4-yyli) -2- (metoksi-imino) -asetamidQ7-3-/T(E) -3-asetoksiprop- 1- en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, 53) 7j0-/~(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (asetoksi- 5 imino) -asetamidq7-3-£iZ) -prop-1 -en-1 -yyliJ-3-kefem-4-karbok- syylihappo, 54) asetoksimetyyli-7/9-/~(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2- (asetoksi-imino) ~asetamidq7-3-/"(Z) -prop-1-en-1-yyli_7~3-kefem-4-karboksylaatti, 10 55) 1 -asetoksietyyli-7/θ -£\ Z)-2-{2-aminotiatsol-4- yyli)-2-(asetoksi-imino)-asetamidq7-3-/lZ)-prop-1-en-1-yyli7~ 3- kefem-4-karboksylaatti, 56) pivaloyylioksimetyyli-7/9-/f(Z) -2- (2-aminotiatsol- 4- yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamido7~3-Z"(Z) -prop-1-en-1-yyliJ- 15 3-kefem-4-karboksylaatti, 57) 5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yylimetyyli-7/3-ZT(Z) -2- (2-amino-tiatsol-4-yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamidq7~ 3-£j(Z) -prop-1-en-1-yyl4J-3-kefem-4-karboksylaatti, 58) 7/9—/7(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli-2- (asetoksi- 20 imino)-asetamido7-3-^E)-prop-1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karbok-syylihappo, 59) asetoksimetyyli-7^-/~(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2- (asetoksi-imino) -asetamido7-3-Z~(E) -prop-1 -en-1 -yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, : 25 60) 1-asetoksietyyli-7^-/(Z)-2-(2-aminotiatsol-4- .:. yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamido7-3-/(E) -prop-1-en-1-yyli/- 3- kefem-4-karboksylaatti, 7 61) pivaloyylioksimetyyli-7^-/“(Z)-2-(2-aminotiatsol- 4- yyli)-2- (asetoksi-imino) -asetamido7-3-/“(E) -prop-1-en-1- 30 yylii7-3-kefem-4-karboksy laatti, • 62) 5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yylimetyyli- 7 D.Z) -2- (2-amino-tiatsol-4-yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamidq7“ 3- £TE)-prop-1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti -/7 63) 7/0 — Z7( Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(asetoksi- ’ * 35 imino) -asetamido7-3-/*(Z) -3-asetoksiprop-1-en-1-yyli7“3-kefem- 4- karboksyylihappo, is 8 5 4 87 64 ) asetoksimetyyli-7/5^T(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2- (asetoksi-imino)-asetamid&7“3-Z7z)-3-asetoksiprop-1-en-1-yyl4J-3-kefem-4-karboksylaatti, 65) 1-asetoksietyyli-7£-£7z)-2-(2-aminotiatsol-4- 5 yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamidQ7-3-ZT(Z) -3-asetoksiprop-1-en-1-yy1 d/ -3-kef em-4-karboksylaatti, 66) pivaloyylioksimetyyli-70-/*(Z) -2- (2-aminotiatsol- 4-yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamidq7-3-/"(Z) -3-asetoksiprop- 1- en-1-yy147-3-kefem-4-karboksylaatti, 10 67) 5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yylimetyyli-7^- EX Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamidc/- 3- tfZ)-3-asetoksiprop-1-en-1-yyli7~3-kefem-4-karboksylaatti, 68) ΐβ-/ΛΖ) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamid67-3-£*(E) -3-asetoksiprop-1 -en-1 -yyl£7-3- 15 kefem-4-karboksyylihappo, 69) asetoksimetyyli-7/?-/("z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2- (asetoksi-imino)-asetamidQ7-3-^lE)-3-asetoksiprop-1-en-1-yyliy-S-kefem-4-karboksylaatti, 70) 1 -asetoksietyyli-7jS-/’(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-20 yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamidq7-3-/"(E) -3-asetoksiprop- 1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, 71) pivaloyylioksimetyyli-70-/7z)-2-(2-aminotiatsol- 4- yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamido/-3-/‘(E) -3-asetoksiprop- 1-en-1-yyli/-3-kefem-4-karboksylaatti, V*: ^ 72) 5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yylimetyyli-7)0- /7z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (asetoksi-imino) -asetamidq/-: 3-£iE)asetoksiprop-1-en-1-yyli/-3-kefem-4-karboksylaatti, -/-/ 73) 7/*-£(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(isopropyyli- oksi-imino)-asetamidq7-3-/7z)-prop-1-en-1-yyl 4/-3-kefem-4-30 karboksyylihappo, 74) 1-asetoksietyyli-70-/“(Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(isopropyylioksi-imino)-asetamido7-3-^Z)prop-1-en-1~yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, **' 75) pivaloyylioksimetyyli-7j0-£7z)-2-(2-aminotiatsol- ...: 35 4 -yyli )-2-( isopropyylioksi-imino) -ase tamido7 -3 Z) prop-1 -en- yyll/-3-kef em-4-karboksylaatti, ie 85487 76) lp -/“(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (allyylioksi-imino)-asetamido7~3-^7 Z)-prop-1-en-1-yyli7-3-kefem-4-karboksyy1ihappo, 77) 1 -asetoksietyyli-70-/LlZ) -2- (2-aminotiatsol-4-5 yyli)-2-(allyylioksi-imino)-asetamidd7~3-£lZ)-prop-1-en-1- yyl±7"3-kefem-4-karboksylaatti, 78) pivaloyylioksimetyyli-7j0-£iZ) -2- (2-aminotiatsol- 4-yyli) -2- (allyylioksi-imino) -asetamid67-3-/T( Z) -prop-1-en-1 -yylt/“3-kefem-4-karboksylaatti, 10 79) 7|ö-£‘(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(etoksi-imino)- asetamido7-3-£l Z)-prop-1-en-1-yyli?-3-kefem-4-karboksyy1ihappo, 80) 1-asetoksietyyli-7^-£TZ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (etoksi-imino) -asetamidq7-3-£(Z) -prop-1 -en-1 -yyliJ7-3-kefem-4-karboksylaatti, 15 81) pivaloyylioksimetyyli-7f8-/L(Z)-2- (2-aminotiatsol-4- yyli) -2- (etoksi-imino) -asetamidq7-3-/Ii Z) -prop-1 -en-1 -yy 1Jl7~ 3- kefem-4-karboksylaatti, 82) Ίβ-β,Ζ) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (syklopropyylime toksi-imino) -asetamido7-3-^"(Z) -prop-1-en-1 -yyli^7-3-kefem- 20 4-karboksyylihappo, 83) 1 -asetoksietyyli-7/?-£TZ) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (syklopropyy lime toksi-imino) -asetamidö7-3-^Z) -prop- 1- en-1-yyl£7~3-kefem-4-karboksylaatti, 84) pivaloyylioksimetyyli-7j0-Z"(Z) -2- (2-aminotiatsol- *. *: 25 4-yyli)-2-(syklopropyylimetoksi-imino)-asetamidq7-3-/KZ)-propri* 1 -en-1 -yyli7-3-kefem-4-karboksylaatti, : ^ : 85) 7/0-£*(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(propergyyli- : oksi-imino)-asetamidc£7-3-ZlZ)-prop-1-en-1-yyli7~3-kefem-4- ; karboksyylihappo, 30 1 -asetoksietyyli-7^-/lZ)-2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2- (propargyylioksi-imino) -asetamido7-3-£l[Z) prop-1-en-1-yyl£7- ____- 3-kefem-4-karboksylaatti, 87) pivaloyylioksimetyyli-7/?-£lZ)-2-(2-aminotiatsol- 4- yyli)-2-(propargyylioksi-imino)-asetamidq7-3-£Tz)-prop-1-"*: 35 en-1 -yylf7-3-kefem-4-karboksylaatti, • * • ♦ · 17 85 487 88) (5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yyli)-metyyli- 7$-/2%)2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(hydroksi-imino)-asetamido/- 3-^(Z)-prop-1-en-1-yyl£7-3-kefem-4-karboksylaatti, 89) 1 - (etoksikarbonyylioksi) -etyyli-7^-£lZ) -2- (2- 5 aminotiatsol-4-yyli)-2-(hydroksi-imino)-asetamidq?-3-ZlZ)-prop-1-en-1-yyli/-3-kefem-4-karboksylaatti.

Kaavan I mukaisten kanta-kefalosporaanihappojen bakteerien vastainen vaikutus in vitro on esitetty taulukossa 1 pienempien inhibioivien konsentraatioiden (MIC-arvot) geo-10 metrisen keskiarvon muodossa, jotka määritettiin kaksinkertaisen sarja-aagarilaimennusmenetelmän avulla Mueller-Hinton-aagarissa 25 koeorganismi-kantaa vastaan kuutena ryhmänä.

Taulukko 2 esittää kaavan I mukaisten esilääke-este-rien pitoisuuksia hiiren veressä, jotka määritettiin suun 15 kautta tapahtuneen annon jälkeen.

Taulukko 3 esittää kaavan I mukaisten esilääke-este-rien vaikutusta in vivo kantoja S. aureus Smith, E. coli Juhl, Pr, mirabilis A9900, Pr. vulgaris A9436 ja Ser. marcescens A20019 vastaan.

20 Taulukko 4 esittää hiirien virtsasta takaisin saatuja erilaisia estereitä.

Taulukko 1

Kefalosporiinihappojen aktiivisuus in vitro • » *·· 25 e • ” R—7-c-coira-j—

^OR2 COOB

• · · « · · * m m « · * · · * * * » « · ie 85487 __Ia_Geometrinen MIC-keskiarvo (jag/ml)

Yhdiste n:o Gpla Gplb Gnla Gnlb Gnll (BMY n:o) * R2 R3 (5*) (5) (5) (5) (5) 29 (28232) Z H h 0,20 0,40 0,066 0,35 6,3 37 (28266) Z H 0Ac 0,17 0,40 0,025 0,1 1,1 53 (28270) Z Ac h 0,17 0,40 0,057 0,26 3,6 1 (28098) Z CH3 h 1,8 3,6 0,1 0,52 6,3 4 (28252) E CH3 H 2,4 3,6 0,3 0,91 8,4 7 (28154) Z CH3 ch3 1.8 3,1 0,20 0,80 6,3 12 (28204) E CH3 CH3 1.8 4,1 0,69 1,8 14 17 (28215) Z CH3 CH2CH3 1,1 1,6 0,53 1,2 7,2 20 (28217) E CH3 CH2CH3 1,2 2,4 0,46 0,91 6,3 45 (28248) Z CH3 OAc 1,2 1,6 0,05 0,15 0,91 49 (28280) E CH3 OAc 0,53 1,6 0,025 0,087 0,60 23 (28157) Z CH3 0CH3 2,1 2,4 0,10 0,35 5,5 79 (28235) Z CH2CH3 H 2,1 3,1 0,30 0,91 7,3 73 (28233) Z CH(CH3)2 h 1,6 2,7 0,53 1,2 8,3 76 (28234) Z CH2CH=CH2 H 1,4 1,8 0,30 1,0 7,0 85 (28237) Z CH^CH H 1,4 1,6 0,23 0,91 14,0 82 (28236) Z CH2-<J h 0,8 1,6 0,70 1,2 8,3

Cefadroxil 1,4 3,6 8,3 17 > 100

Cefaclor 0,7 4,7 0,92 11 > 100

Cefvixim(1 Y-: (FK-027) 4,7 12,5 0,016 3,1 3,2 1) : S ^ N-1—C-CONH-1 { > v-i.sJ ' 0J-hJ-ch-c«2

OCH2COOH I

COOH

19 85 487

Gp-Ia: Penicillin (PC)-herkkä S. aureus

Gp-Ib: PC-kestävä S. aureus

Gn-Ia: Cephalothin (CET)-herkkä E. coli (2 kantaa), K.

pneumoniae (1) ja P. mirabilis (2) 5 Gn-Ib: CET-kestävä E. coli (3) ja K. pneumoniae (2)

Gn-II: M. morcanii (1), E. cloacae (2) ja S. marcescens (2) 20 8 5 4 87 O H _ • β ^ ♦-* f-< (N σ> O* s. " ·* » - ^ 4JV0 00 h* ^flAf^ntTHiNyjyjCOI/lUi

*.{_)*-« *-« fO M M r-l ΓΊ Γ4 <N t-H

tn a tr M O* * « a k

g1 . M

g H m 04 o o t"· ro ςτ^ in *· Ä

o o co *r σ\ o r» » ro σ* * * * * * H

(M H |J " *·***> " ' ' " t—I t-4 O Ή r-4 X

w fH O «N »H ^trHOfSfO*H V

B * rA

"k “S

n g o> ys σι f** ** o ^ h n n in Λ 93 (J V, * ' % ^ ' " ' ' ^ r i <J h Λ h Ό H VChU>inNff»r)^fWOr4 y k a m -< ^ -t m . V g

M U

__f ^ 5

Γ\_8 5 S

w / « . υ m o vo oo *-< oo oo oo t-ι in to σ> ^ \ / ODtr'0 "y ^ H m m O' Ch n n n h· w _ \— a · < a *-« v*> ^ o# w

-\ M M

>\ S N — r) H N ie » O gi h V n osmo o »n o tn · » » « ·.

M E “ ' ' ' » - * M .-I t-l M r-t S K {-,·π o M M n r-t r~ in n * O o w

O/o (J

V / Ή /— o I / M n y

Us=3<C X E tn tn Ό os M a o · te v. 40 Μ m o ή n tn to <-t t-ι M M tn U —~ B tr n N n m in tr tn -tr o m ——v υ a u w “ \ — o u

w «K

! U O

— -/ N M

** —1 »MMMNt-JUINMMNUJN dl O ^ IN § 2

'«S 2 Γπ S fs Ts S 3 ^3 MM

u • · - 92 '· M M M M M M U -J"1 JT1 päWu«KKaaK®aa m g g < υ u u υ u g g υ n ”m

. .·. MM MM K

·* Sd Oi tC EC U MMMMMMMMMgg JJ

w <®ιι:χ®®κκ®κυυ ..

tn υουυυυυυυ g : <μ υ . Ui 0 tHn-oomMinininoMinti) , ^Γ1 · y .. Mr-intxiottrtinviMMOtH'”·^ j * • ►> c^mmmommmmmmmm „ „ , -u υ

Qooa)rotnoooooocoooooeooo~~ ” E X

Ö-- «.. ΜΜΜΜΜΜΜΜΜΜΜΜν·1Τ°·„Ρ * 3 0) „ c ~ w _ w _ υ r* -o > V M -Ί >< t26l2°· r\ · j S g o m m o ^ !C 2 Λ Λ Λ ~ , M Ή st_.MMinMMtn>-iooin,-ir-ir-i M IN CJ CJ U m ..... <d 43 • · +>

«I 4J

• · - ΓΊ 0) 0) I Ό O <D 3 ....: MM 3 • - ,¾ :it) tn 3 »d H m4 o 3 -rt +i id to ·Η H W Ot 21 P C .* Ο Π • ' (

Taulukko 3

Esilääke-esterien in vivo-aktiivisuus hiirissä PD50 (mg/kg, p.o.)

Yhdiste n:o S. aureus E. coli P. mira- P. vul- P. marces-

Smith Juhl bilis garis cens (BMY n:o)_A99Q0_A9436 A20019 55 (28258) 1,8 0,36 3 (28099) 6,3 4,5 2 (28191) 8,5 1,6 10 (28155) 7,7 3,4 3,4 0,55 2,6 8 (28255) 11 9 (28170) 6,3 1,7 2,7 < 0,39 3,6 11 (28231) > 25 14 (28205) 11 25 (28158) 8,1 24 (28171) 22,5 V-: Cefaclor 0,35 0,63 3,0 3,1 > 25 . .·. Cefvixim > 25 1,6 1,2 0,68 1,1

Cefadroxil 0,4 13 5 22 8 5487

Taulukko 4

Hiiren virtsasta talteen otetut suun kautta annetut esilääke-esterit_

Annos Taiteenotto-% (n>g/kg, po) 0-2 2-4 4-6 6-24 Kaikkiaan 10 BM¥-28170a 100 17 6, 3 2r2 3,5 29 (erä 2) 20 13 4,0 1,1 1,6 19 15 FX-027 100 2,9 9,1 6,9 6,5 25 (BB-S 1086 erä 2) 20 2r 8 4,1 3r 2 2,9 13 20 Koe-standardi a: BMY-28154 b: cefuroxime

Muu tämän keksinnön kohde koskee menetelmiä kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi. Ensisijaiset menetelmät on esitetty alla reaktiokaavioissa 1 ja 2. Näissä reaktio-25 kaavioissa lyhenne Ph vastaa fenyyliryhmää. Täten (CHfPh^-• *.: ryhmä on bentshydryyli- tai difenyylimetyyliryhmä, joka on -f- ensisijainen karboksyyli-suojaryhmä. Lyhenne Tr tarkoittaa - trityyli- tai trifenyylimetyyliryhmää, joka on ensisijainen * - 2ci amino-suojaryhmä. R on tavallinen suojaryhmä, jota on käy-10 tetty kefalosporiini-kemiassa hydroksi-ryhmien suhteen ja niitä ovat trityyli, klooriasetyyli, formyyli, trikloorietok-sikarbonyyli, tert.-butoksikarbonyyli, karbobentsyylioksi jne. R^a:n määritelmään sisältyvät myös samat ryhmät, jotka on sisällytetty R^:n määritelmään vetyä lukuunottamatta.

85487

Reaktiokaavio 1 osoittaa, että haluttu 7-sivuketju-happo liitetään varhaisessa vaiheessa. Sitten 3-aseman ryhmä muutetaan substituoiduksi propenyyli-ryhmäksi. Toisaalta kaaviossa 2 lähtöyhdisteen II 7-amino-ryhmä on suojattu 5 Schiff'in emäksenä suurimman ajan reaktiovaiheesta ja haluttu 7-sivuketju lisätään synteesin myöhemmässä vaiheessa. Lohkaisemalla sekä VIII että XIV saadaan kantahappoja Ia, jotka muutetaan tavanomaisin menetelmin esilääke-estereiksi Ib.

Reaktiokaavio 1 esittää kahta vaihtoehtoista keinoa 10 valmistaa yhdisteestä IV yhdistettä VI. Toinen on suora tie antamalla kloorijohdannaisen IV reagoida trifenyylifosfiinin kanssa, jolloin saadaan fosfonium-yhdistettä, ja toinen tapa on muuttaa kloorijohdannainen aktiivisemmaksi jodiyhdisteek-si V, minkä jälkeen tämän annetaan reagoida trifenyylifos-15 fiinin kanssa, jolloin saadaan fosfonium-yhdistettä VI. Saantojen osalta niiden välillä ei ole merkittävää eroa.

Reaktiokaavio 2 esittää kahta vaihtoehtoista tapaa valmistaa yhdisteestä XIII yhdistettä Ia. Toisena on yhdisteen XIII asylointi 2-aminotiatsolyylihapolla XX yhdisteeksi 20 XIV, minkä jälkeen seuraa lohkaisu yhdisteeksi Ia. Toinen tapa on asyloida tiatsolyylihapolla III, jossa on 2-N-suojattu-amino (kuten N-trityyliamino)-ryhmä, jolloin saadaan yhdistettä VIII, joka lohkaistaan yhdisteeksi Ia.

Reaktiokaavioissa 1 ja 2 bentshydryyliryhmä oli esi-\ ·: 25 tetty ensisijaisena karboksyyli-suojaryhmänä. Alan asiantuntijoille on selvää, että voidaan käyttää muita alalla hyvin tunnettuja karboksyyli-suojaryhmiä. Asyloivaa happoa III tai XX voidaan käyttää johdannaisen muodossa, kuten happohalo-genidinaan, aktivoituna esterinä, sekahappoanhydridinä jne., 30 jotka kaikki ovat alalla hyvin tunnettuja. Asylointihapossa III myös sen aminoryhmä voi olla suojattuna millä tahansa tavallisella amino-suojaryhmällä, esim. N-trityylillä, N-formyylillä, N-t-butoksikarbonyylillä tai näiden kaltaisella - ' ryhmällä.

24 8 5 4 87

Emäs, jota käytetään fosfoniumhalogenidin (VI tai X) muuttamiseen fosforylidin (VII tai XI) saamiseksi, voi olla NaOH, Na2CC>2, IRA-410 (OH )-hartsi, IRA (CO^ )-hartsi, tai näiden kaltainen emäs, tai niiden seos. Ylidin VII 5 (XI) reagoidessa asetaldehydin tai substituoidun asetalde- hydin kanssa saadaan 3-propenyyli-johdannaista VIII (tai XII).

Olemme todenneet, että XI:stä saadussa yhdisteessä XII (kaavio 2) 3-(1-propenyyli)-konfiguraation osalta suhde Z:E oli noin 3-5:1, kun taas Vilistä saatu yhdiste VIII 10 (kaavio 1) oli yksinomaan Z-konfiguraation mukainen. Käytetty tie ei voi olla syynä eroavuuteen, vaan Witting-reaktiossa (VII—>VIII tai XI—»XII) käytetyt olosuhteet. Olemme myös todenneet, että sopivan litiumhalogenidin, kuten litiumkloridin, litiumbromidin tai litiumjodidin käyttäminen Witting-reak-15 tiossa aiheutti Witting-reaktiotuotteen VIII (tai XII) saannon ja puhtauden parantumisen. Reaktio suoritetaan ensisijaisesti käyttämällä 5-15 ekvivalenttialitiumhalogenidia. Haluttaessa yhdisteen XIII Z-isomeeri (XIII(Z) kaaviossa 3] voidaan muuttaa vastaavaksi E-isomeeriksi {XIII(E)} foto-20 kemiallisen reaktion avulla herkistäjän läsnäollessa. Reaktio suoritetaan tavallisesti liuottimessa, joka on valittu liuottimista metanoli, etanoli, propanoli, bentseeni, tolueeni, asetoni, asetonitriili, dikloorimetaani, DMF, etyyliasetaatti, THF, pyridiini ja näiden kaltaisista liuottimista, jolloin - 25 läsnä on 0,5 - 10 ekvivalenttia herkistäjää ryhmästä aseto- fenoni, bentsofenoni, bentsiili, naftaleeni, etyylipyruvaatti 4a :.·.· ja näiden kaltaisia herkistäjiä. Kaaviossa 3 R tarkoittaa vetyä tai bentshydryyliä.

VIII:n (tai XIV:n) lohkaisu laiksi suoritetaan taval-- · 30 lisesti trifluorietikkahapolla (TFA) sopivassa liuottimessa anisolin läsnäollessa. Näin saatu happo Ia puhdistettiin kään-teisfaasi-kolonnikromatografiaa käyttäen, käyttämällä lasista kolonnia, joka sisälsi täytettä, joka oli otettu Waters' Associates PrpPAK-500/C^g-panoksesta.

25 85487

Esteriä Ib voidaan valmistaa tavalliseen tapaan, esimerkiksi antamalla hapon Ia tai sen suolan (kuten natrium-, kalium-, trietyyliammonium- jne. suolan) reagoida halogenoidun yhdisteen kanssa, jonka kaava on 5

R4-X

4 jossa X on kloori, bromi tai jodi ja R on valittu ryhmästä 10 -ch2ococ(ch3)3 , -pococH3 , -ch2-c=c-ch3 , -ch2occx:h3 , ch3 b <4 Ύ o Q 0 r™ i 0 15 · -fHOC‘OCH2CH3 -CH.oBy/JvVoScHj .

Ογλ^ CH3 o

Reaktio suoritetaan tehokkaasti inertissä liuotti-messa, kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidissa, N,N-dimetyyliasetami-20 dissa, dimetyylisulfoksidissa, asetonissa, asetonitriilissä tai näiden kaltaisessa liuottimessa, lämpötilan ollessa rajoissa -10°C - +50°C, tarkoituksenmukaisesti välillä 0°C ja 5°C. Näin saatu esteri Ib puhdistetaan suorittamalla tavallinen kolonnikromatografiointi käyttämällä silikageeliä.

^ Reaktiokaavio 1 vr~T 'Ί 11 :·ϊ 30 C00CHPh2

N—ΓΓ" CCOOH

ΤγΝΗ-Ϊ^Γ H

*:·: 35 V

III

V

26 8 5 4 87 ·.—i %— coNH-ργ"E > w

TrNH s J \0R2a J- N^Lch2C1v COOCHPhj ^

Nai tai KI

5 Ψ »I-p-C0NH^-^S^ ΤγΝΗ->\5Χ \QR2a N\^^“CH2I pph3 1 o COOCHPh2 PPh3 Φ

1t. N-rC-CONH-r- f itT

COOCHPhj

VI

20 emäs

-- 25 /S >S

H-Tjj-C0NBT \ I v«

Jj k ,

TrNH-^s/ Njr2^ O' C00CHPh2 30

R3CH2CHO

T: ψ 27 8 5 487 /s \ N-J-C-CONH—I r ΤΓΝΗ-Λs β \,R*> 0J N CH=CHCH2r3

5 COOCHPh2 VIII

TFA

V

10 s N-h:-CONH—-S ^ aAs J \»Ϊ y N^^h-chch^3

COOH

15 la r4-x

V

N-r-C-CONH-i ^ 20 H2NA s J \r2 0P^L:"'C»ch2r3 coor4 lb 28 8 5 4 8 7

Reaktiokaavio 2 Η2ΝΊ-f S

5 2 I II

Jr- nv^-ch2ci COOCHPh2

PhCHO

10 Φ s

PhCH=N-i-S’ 'N

I I K

15 J-N vy^-CH2C1 COOCHPh2 PPh3 20 φ

Ph-CH=N-i-f \ NVS^-CH2^(C6H5)3C1"

/-: 25 T

.:. COOCHPh2 emäs \

30 V

Ph-CH=N-i-r^S ^ oj-Xy^-CH-Pph3 *:··: 35 COOCHPhj 29 85487 h3c:-:2c:-:o Ψ 5 ?hc:-:=N— s \

I I XII

10 C00CK?h2

V

15 vi—r 'i

I XIII

— nn-^Lch=chch2r3 COOCHPh.

20 2 v.

ί,-ΤΓ^ΟΟΗ TrwXpr 25 ''or2 in ;·; w i .

, H2Nrji—-T^\ 3 ™· 2 \r2 d^NN-^-CH=CECH2R3 .-:-. COOCHPh2

XIV

TFA ^ 30 8 5 4 87 s ij>— h2n_^s/ N)R2 <f~ N ^'‘-C^CHCHjR3

COOH

la 5 r4-x Φ 10

/ S V

N-r-C-CONH—-f 1

Il I t J 3

^OR2 c/- \i^‘CH=CKH2R

I 4

COOR

15 lb 31 85 487

Reaktiokaavio 3 cE-κ3 0S—K2 nn (Z) 5 COOR**a hv/herkistäjä 10 vn'l ^—ίίν^Ν^—CHgR3 TIU (E) COOR**a

N—-rC-COOH

15

1 J W

XX

4* K-p C-CONH-j—p S ^ H N—N XIV (E) 20 V° w* 2 4* R-r-C-CONE-j-j^Svl 25 ^ Ia (E)

^OR2 COOH

Rk-X

* * Jr 30 s R-p C-CONH-i-

HgR^gJj 11 0/-R^U^-CH2RS Ib (E) : : ‘ or2 coor** 32 85487

Esimerkki 1

Difenyylimetyyli-7-amino-3-(1-propenyyli)-3-kefem-4-karboksylaatti (XIII, R3 - H)_

Liuokseen, jossa oli difenyylimetyyli-7-bentsyli-5 deeniamino-3-/’(trifenyylifosforanylideeni) -metyyli7~3-kefem- 4-karboksylaattia (XI) (2,9 g, 4 mmoolia) dikloorimetaa-nissa (16 ml), lisättiin 90 prosenttista asetaldehydiä (10 ml, 0,2 moolia). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia, kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin 10 kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (80 ml). Liuokseen lisättiin isopropyylieetteriä (160 ml) ja sitten silikageeliä (25 g). Seosta sekoitettiin hiljaa ja suodatettiin kiinteän aineen poistamiseksi. Suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Liuokseen, jossa jäännös oli etyyli-15 asetaatissa (48 ml), lisättiin seos, jossa oli Girard'in reagenssia T (1,34 g, 8 mmoolia), metanolia (40 ml) ja etikkahappoa (2 ml). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja konsentroitiin noin 10 ml:ksi. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (100 ml). Liuos pestiin natrium-20 vetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silikageelikolonnissa (50 g), joka eluoi-tiin 1 % metanolia sisältävällä kloroformilla. Eluaattia koottiin 18 ml:n fraktioin. Fraktiot nrot 22-40 yhdistettiin . 25 ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 718 mg 3-propenyyli-johdannaista XIII (= H). (Saanto 44 %, E/Z=1/3).

TLC: Rf 0,56 (silikageeli, etyyliasetaatti).

*.: HPLC*: Retentioaika (min.) 13,2 ja 15,6 (suhteelli- : nen intensiteetti = 3:1).

30 IR: \) maks (KBR) cm"1 1770, 1720.

UV: λ maks (C2H5OH) nm <£) 214 (20500), 222 (20800), 266 (4200), 273 (4200), 292 (3800).

NMR (E- ja Z-isomeerien seos 1:2):cf(CDCl^) PPm 1/42 ja 1,72 (suhteellinen intensiteetti = 3:1) (kumpikin dd, 35 J=2 ja 7 Hz, CH3), 3,37 (ABq, J=18 Hz, 2-H) ja 3,52 (s, 2-H), 33 85487 4,72 (d, J=4,5 Hz, 6-H), 4,97 (d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,50 (dq, J=7 ja 11 Hz, =CH-), 6,06 (dd, J=2 ja 11 Hz, 6,96 ja 7,00 (3:1), s, -OCHPl^)/ 7,35 (s, fenyyli-H).

* Täyte: Lichrosorb RP-18 (4 x 300 mm). Liikkuva 5 faasi: CH3CN-H2O (1:1). Virtausnopeus: 2,5 ml/min.

Esimerkki 2

Difenyylimetyyli-7-Z~(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2-metoksi-imino-asetamidq7~3-(1-propenyyli)-3-kefem-4- karboksylaatti (XIV, R2=CH3, R3=H._ 10 Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-amino-3-(1- propenyyli)-3-kefem-4-karboksylaattia (XIII, R^=H) (3,37 g, 8,3 mmoolia) ja 1-/.(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetoksi7-bentsotriatsolia* (2,64 g, 8,3 mmoolia) THFrssa (70 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia 15 ja sitten haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöksen etyy-liasetaattiliuos pestiin peräkkäin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natrium-sulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa tuotetta, joka liuotettiin kloroformiin ja kroma-20 tografioitiin silikageelikolonnissa (150 g) 2 % metanolia sisältävällä CHCl^Ha. Halutut fraktiot (TLC: silikageeli,

Rf 0,49, tolueeni-etyyliasetaatti 1:2) yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 1,95 g (40 %) yhdistettä 2 3 .·. : XIV (R -CH^r R =H) /E- ja Z-isomeerien seos 1:2 3-(1 -propenyy- ' - 25 li)-konfiguraation suhteeo7· * Hoechst, Japan Kokai 54-95593 (7/28/79) ja Ger.

Offen 275800 (5/7/79) (Ger. Appi. P2758000.3, 12/24/77 NMR (E- ja Z-isomeerien seos 1:2):cf(CDCl^) ppni 1,45 ja 1,75 (suhteellinen intensiteetti 2:1) (kumpikin d, J=7 Hz, ‘30 C-CH3), 3,42 ja 3,53 (2:1) (s, 2-H), 4,02 (s, OCH3), 5,13 (d, J=4,5 Hz), 5,2-6,3 (m, 7-H ja vinyyli-H), 6,73 (s, tiatsoli-H), 6,93 (s, OCHPh2)» 7,30 (s, fenyyli-H).

34 8 5 4 8 7

Esimerkki 3 7~ΖΊ 2)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-imino-asetamidq7-3-(1-pröpenyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo (Ia, R2=CH3, R3=H)_ 5 Yhdistettä XIV (R2=CH3, R3 = H) (1,9 g, 3,2 mmoolia) käsiteltiin trifluorietikkahapon (TFA) kanssa (5 ml) huoneen lämpötilassa 40 minuutin ajan. Seos laimennettiin isopropyyli-eetterillä (IPE). Saatu sakka koottiin talteen suodattamalla, liuotettiin muurahaishappoon ja laskettiin kolonnin läpi, 10 jossa oli PrepPAK cartridge (Waters)-täyte (50 ml), joka pestiin vedellä ja eluoitiin peräkkäin 15-prosenttisella metanolilla ja 20-prosenttisella metanolilla. Haihduttamalla kuiviin ja lyofilisoimalla 15-prosenttinen metanoli-eluaatti saattiin 205 mg (15 1) otsikon yhdistettä (E/Z = 1/17). Las-15 kettu puhtaus 90 % (HPLCrn perusteella). Sp. >180°C (hajoten hitaasti).

IR: Vmaks (KBr) cm"1 1770, 1660, 1630, 1530.

UV: Λ ma]^s (PH 7 fosfaattipuskuri) nm (0 228 (17400) , 283 (16200) .

20 NMR: 6 (D20 + K2C03) ppm 1,70 (3H, d, J=6 Hz, C-CH3), 3,52 (2H, ABq, J=18 Hz, 2-H), 4,03 (3H, s, OCH3), 5,28 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H, 5,6-6,2 (3H, m, 7-H ja vinyyli-H), 7,30 (1H, tiatsoli-H).

- HPLC: Retentioaika 6,8 minuuttia (metanoli-pH 7 25 fosfaattipuskuri 1:3, 1,5 ml/min.).

· ·; Analyysi, laskettu yhdisteelle C^H^N^O^S^· 1 /2Η30: C, 44,44; H, 4,20; N, 16,19, S, 14,83;

Saatu: C, 44,37; H, 3,94; N, 16,18; S, 14,53

Esimerkki 4 30 Pivaloyylioksimetyyli-7-^Tz) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2-metoksi-iminoasetamido7-3-/7z)-1-propenyyli7-3-kefem-4- *;··; karboksylaatii (Ib, R2=CH3, R3=H, R4=PV*)_

Seokseen, jossa oli 7^(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2-metoksi-iminoasetamidc^-3-(1-pröpenyyli)-3-kefem-4-karbok- ..... 2 3 35 syylihappoa (Ia, R =CH3, R =H) (E/Z=1/17, 90 mg, 0,21 mmoolia) 35 85487 ja kaliumkarbonaattia (44 mg, 0,32 mmoolia) DMFissa (3 ml), lisättiin 0°C:ssa pivaloyylioksimetyylijodidia (77 mg, 0,32 mmoolia). Seosta sekoitettiin 0°C:ssa 40 minuuttia, laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml), pestiin vedellä, 5 kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin CHCl^iin ja kromato-grafioitiin silikageeli-kolonnissa (silikageeli: 3 g) eluoimalla 1 % metanolia sisältävällä CHCl^illa, jolloin saatiin 85 mg (75 %) otsikon yhdistettä. Sp. 100-104°C.

10 Laskettu puhtaus 90 % (HPLC:n perusteella).

IR: γ (KBr) cm"1 1780, 1760, 1680, 1620.

i m3K s· UV: Λ . (metanoli) nm (£) 232 (17800), 287 maks · (13500) .

NMR: 6 (CDC13) ppm 1,23 (9H, s, CfCH^), 2,15 15 (3H, d, J=7 Hz, 0CH3), 3,45 (2H, s, 2-H), 4,05 (3H, s 0CH3), 5,12 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-8), 5,6-6,2 (5H, m, 7-H, vinyyli-H ja OCH2O-), 6,85 (1H, s, tiatsoli-H).

HPLC: Retentioaika 8,1 minuuttia (CH3CN-H20 1:1,

2 ml/min.). O

20 * PV: -CH2OCC(CH3)3

Esimerkki 5 1-asetoksietyyli-7-£7z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido7-3-£Tz)-1-propenyyli7-3-kefem-4- karboksylaatti (Ib, R^=CHj, R^=H, R^=AX*)_ • 25 Seokseen, jossa oli 7-/(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2-metoksi-imino-asetamidq7-3-(1-propenyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (190 mg, 0,45 mmoolia) ja kaliumkarbonaattia (75 mg, 0,54 mmoolia) DMF:ssa (5 ml), lisättiin 5°C:ssa 1-bromietyyliasetaattia** (90 mg, 0,54 mmoolia). Seosta 30 sekoitettiin 5°C:ssa 1,5 tuntia ja laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml). Laimennus pestiin peräkkäin vedellä ja kylläs-tetyllä NaCl:n vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magne-siumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös 35 * AX = -CH(CH3)OCOCH3 ** E. Buckley ja E. Whittle, Can. J. Chem. 40, 1611 (1962).

36 8 5 4 87 liuotettiin kloroformiin ja kromatografioitiin silikageeli-kolonnissa (5 g) 1 % metanolia sisältävällä kloroformilla. Halutut fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin.

Jäännös liuotettiin dioksaaniin ja lyofilisoitiin, jolloin 5 saatiin 103 mg (45 %) otsikon yhdistettä dioksaani-solvaatti-naan. Sp. 105-110°C. Laskettu puhtaus 85 % (HPLC:n perusteella). IR: V (KBR) cm~1 1760 <br·)' 1670, 1610.

UV: ^maks (etanoli) nm (£) 233 (15700), 292 (12800).

10 NMR: 6 (CDC13) ppm 1,50 (3H, d, J=6 Hz, OCHCH3), 1,65 (3 H, d, J=7 Hz, =CH-CH3), 2,07 (3H, s, COCH3), 3,43 (2H, s, 2-H), 3,68 (4H, s, 1/2-dioksaani), 4,05 (3H, s, OCH3), 5,10 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,5-6,0 (2H, m, 7-H ja =CH-CH3), 6,12 (1H, d, J=12 Hz, 3-CH=), 6,83 (1H, s, tiatsoli-H), 15 6,98 ( 1H, q, J = 6 Hz, OCHO) .

HPLC: Retentioaika, 7,5 minuuttia (CH3CN-H20 1:1, 1 ml/min.).

Esimerkki 6

Dif enyylimetyyli-7-amino-3-^T(Z) -1 -butenyyli7-3-kefem- 20 4-karboksylaattihydrokloridi (XIII, R^=CH3 hydrokloridi)_

Liuokseen, jossa oli propionialdehydiä (10,7 g, 18 mmoolia) ja litiumjodidia (13,4 g, 10 mmoolia) DMF/CH2C13- seoksessa (50 ml/150 ml), lisättiin yhdistettä XI (7,3 g, . 10 mmoolia) 0°C:ssa. Seoksen annettiin olla paikoillaan 25 5°C:ssa 2 päivää ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännök- ·“ sen etyyliasetaattiliuos (200 ml) pestiin vedellä, kuivattiin

MgSC>4:lla ja haihdutettiin vakuumissa siirapiksi, jota käsiteltiin CCl^:n kanssa (200 ml) ja suodatettiin. Suodos konsentroitiin noin 50 ml:ksi ja konsentraattia sekoitettiin V 30 6-norm. HCl:n kanssa (4 ml) huoneen lämpötilassa 30 minuuttia.

Saatu sakka koottiin talteen suodattamalla ja kiteytettiin uudelleen CHCl3~etyyliasetaatti-seoksesta, jolloin saatiin 1,49 g (33 %) otsikon yhdistettä. Sp. 120-127°C.

IR: V . (KBr) cm"1 1780, 1710.

maks.

; 35 UV: ^maks. (metanoli) nm (£) 217 (13900), 286 (7400).

37 85457 NMR: 6 (DMSO-d6) ppm 0,93 (3H, t, J=7 Hz, CH3), 2,00 (2H, m, CH2CH3), 3,75 (2H, Abq, J=16 Hz, 2-H), 5,1-5,9 (3H, m, 6-H ja 7-H, =CH-CH2-), 6,33 (1H, d, J=12 Hz, 3-CH=), 6,97 (1H, s, -CHPh2), 7,40 (10H, s, fenyyli-H).

5 HPLC: Retentioaika (minuutteja) 10,4 ja 12,0 (suhteellinen intenssiteetti = 8:1) (metanoli-pH 7 fosfaatti-puskuri 4:1, 1 ml/min.).

Esimerkki 7

Difenyylimetyyli-7-Z"(Z) -2- ( 2-aminotiatsol-4-yyli) -2-10 metoksi-iminoasetamidoJ-S-^Z)-1-butenyyli7~3-kefem-4- karboksylaatti (XIV, R2=CH3, R3=CH.,)_

Suspensiota, jossa oli difenyylimetyyli-7-amino-3-£X Z)-1-butenyyli/-3-kefem-4-karboksylaatti-hydrokloridia (1,41 g, 3,1 mmoolia) etyyliasetaatissa (20 ml), ravisteltiin 15 NaHC0^:n vesiliuoksen kanssa, jolloin saatiin kirkas kaksikerroksinen liuos. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä ja sitten kyllästetyllä NaCl:n vesiliuoksella, ja kuivattiin MgSO^:lla. Kuivattuun suodokseen lisättiin 1-/7z)-2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoasetoksi^?-bentso-20 triatsolia (1,27 g, 4,0 mmoolia), ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suo-dos pestiin NaHC03:n vesiliuoksella, vedellä ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silikagee-25 likolonnissa (40 g) CHCl3-etyyliasetaatti-seoksella 3:1, jolloin saatiin 1,7 g (91 %) otsikon yhdistettä. TLC (silikageeli); Rf 0,25 (CHCl3~etyyliasetaatti 1:1).

IR: ^maks (KBr) cm_1 1780' 1720, 1680, 1620.

UV: ftmaks (etanoli) nm (£*) 288 (1 2400).

30 NMR: 6 (CDCl3) ppm 0,86 (3H, t, J=7 Hz, -CHj), 1,90 (2H, m, CH2CH3), 3,45 (2H, s, 2-H), 4,06 (3H, s, OCH3), 5,15 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,45 (1H, dt, J=7 ja 11 Hz, =CH-CH2-) , 6,05 (1H, dd, J=4,5 ja 9 Hz, 7-H), 6,17 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH=), 6,75 (1H, s, tiatsoli-H), 6,97 (1H, s, : 35 CHPh2), 7,35 (10H, s, fenyyli-H), 8,08 (1H, d, J=9 Hz, CONH).

38 85487

Esimerkki 8 1-1(7.)-2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-imino- asetamidq7-3-£*( Z) -1 -butenyy 1 i7~3-kef em-4-karboksyy 1 ihappo (la, R2=CH3, R3 =CHj)_ 5 Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-Z.Tz)-2- (2- aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoasetamidQ7-3-ZT(Z) -1- butenyyli7-3-kefem-4-karboksylaattia (1,65 g, 2,65 mmoolia) ja anisolia (0,5 ml), käsiteltiin TFA:n (5 ml) kanssa huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Seos laimennettiin IPE:llä. Muodos-*1 10 tunut sakka koottiin talteen suodattamalla ja kromatogra-fioitiin kolonnissa, jossa oli PrepPAK cartridge (Waters)-täyte (50 ml), 20-30-painoprosenttisella metanolilla, jolloin saatiin 605 mg (52 %) otsikon yhdistettä. Laskettu puhtaus 90 % (HPLCrn perusteella). Sp. >160°C (asteettaista 15 hajaantumista).

IR: Vmaks (KBr) cm-1 1760, 1670, 1650, 1620.

UV: ^ maks ? fosfaattipuskuri) nm (£) 232 (16200), 283 (15500).

NMR: <£ (D20 + NaHC03) ppm 1,00 (3H, t, J=7 Hz, 20 CH3), 2,00 (2H, dq, J=7 ja 7 Hz, -CH2CH3), 3,52 (2H, ABq, J= 17 Hz, 2-H) , 4,02 (3H, s, 0CH3) , 5,27 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,4-6,1 (3H, m, 7-H ja -CH-CH-), 7,0 (1H, s, tiatsoli-H).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C^H^ ^N^O^S^ * 1/2 H20: C, 4 5,73; H, 4,51; N, 15,69; S, 14,36; 25 Saatu: C, 45,41; H, 4,23; N, 15,35; S, 14,21.

*1 HPLC: Retentioaika (minuutteja), 5,0 ja 6,4 (suhteellinen intensiteetti = 8:1) metanoli-pH 7 fosfaatti-puskuri 3:7, 2 ml/min.).

Esimerkki 9 30 Pivaloyylioksimetyyli-7-Z(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2-metoksi-imino-asetamidq7-3-£lZ)-1-butenyyli7-3-kefem-4- ‘ karboksylaatti (Ib, R^=CHj, R3=CH3> R^ = PV*)__ : Pivaloyylioksimetyylijodidia (162 mg, 0,67 mmoolia) lisättiin 0°C:ssa seokseen, jossa oli 7-/(Z)-2-(2-aminotiatsol-.35 4-yyli) -2-metoksi-iminoasetamido7-3-ZliZ) -1 -butenyylt/-3-kefem- 4-karboksyylihappoa (197 mg, 0,45 mmoolia) ja K2C03:a 39 8 5 4 8 7 (93 mg, 0,67 mmoolia) DMFtssa (4 ml). Seosta sekoitettiin 0-5°C:ssa tunnin ajan ja laimennettiin etyyliasetaatilla (30 ml). Laimennus pestiin vedellä ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivattiin vedettömällä MgSO^:lla ja haihdutet-5 tiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silika-geelikolonnissa (5 g) 1 % metanolia sisältävällä CHCl^lla. Halutut fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa . Jäännös liuotettiin dioksaaniin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 242 mg (97 %) otsikon yhdisteen dioksaani-10 solvaattia. Silikageeli TLC: Rf 0,25 (CHCl-j-etyyliasetaatti 1:1). Laskettu puhtaus 85 % (HPLCrn perusteella). Sp, 90-95°C.

IR: V R (KBR) cm"1 1780, 1750, 1670.

UV: r\maks (etanoli) nm (£) 233 (15300), 285 (11300).

15 NMR: 6(CDCl3)ppm 0,97 (3H, t, J=7 Hz CH2CH3), 1,23 (9H, s, C(CH3>3), 2,03 (2H, dq, J=7 ja 7 Hz, -CH2CH3), 3,43 (2H, s, 2-H), 3,67 (4H, s, 1/2 dioksaani), 4,02 (3H, s, OCH3), 5,10 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,3-6,3 (5H, m, 7-H, -CH=CH- ja -0CH20-), 6,82 (1H, s, tiatsoli-H), 7,97 (1H, d, 20 J = 8 Hz, CONIJ).

HPLC: Retentioaika, 10,0 minuuttia (CH3CN-H20 1:1, 2 ml/min.).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C23H2gN^O^S2·1/2C^Hg=2: C, 50,41; H, 5,58; N, 11,76; S, 10,76; 25 Saatu: C, 4 9,94; H, 5,57; N, 11,56; S, 10,76.

Esimerkki 10 1-asetoksietyyli-7-/lz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido7“3-^"(Z) -1 -butenyylij^-3-kef em-4-karboksy- laatti (Ib, R2=CH3, R3=CH3, R4=AX*)_ 30 Seokseen, jossa oli 7-/*(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2-metoksi-iminiasetamidq7_3-/"(Z) -1 -butenyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappoa (1,55 g, 3,54 mmoolia) ja K2C03:a (636 mg, - - - 3,6 mmoolia) DMF:ssa (4 ml), lisättiin 5°C:ssa 1-bromietyyli- asetaattia (769 mg, 4,6 mmoolia). Seosta sekoitettiin 5°C:ssa ; 35 tunnin ajan, laimennettiin etyyliasetaatilla (300 ml), 4o 85487 pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä MgSO^slla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin kloroformiin ja kromatografioitiin silikageelikolonnissa (50 g) 1 % metanolia sisältävällä CHCl3:lla. Halutut fraktiot yhdistet-5 tiin ja konsentroitiin pienitilavuiseksi. Jäännöstä trituroi-tiin isopropyylieetterin kanssa, jolloin saatiin 1,29 g (70 %) otsikon yhdistettä isopropyylieetteri-solvaattina. Laskettu puhtaus 90 % (HPLCtn perusteella). Sp. 103-110°C (hajoten).

IR: ^maks (KBr) cm~1 1770 (br) ' 1670' 1620.

10 UV: f\ (etanoli) nm (€) 233 (14300), 288 (11000).

NMR: £ (CDCl3) ppm 1,00 (3H, t, J=7 Hz, -CH2CH3), 1,12 (12H, d, J=6 Hz, isopropyylieetteri CH3>, 1,53 (3H, d, J=5 Hz, OCHCH3), 1,95 (2H, m, CH2CH3), 2,08 (3H, s, COCH-j) , 3,43 (2H, s, 2-H), 3,62 (2H, m, isopropyylieetteri CH), 4,08 15 (3H, s, OCH3), 5,13 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,2-6,2 (3H, m, 7-H ja -CH=CH~), 6,87 (1H, s, tiatsoli-H), 7,00 (1H, q, J=5 Hz, -chch3).

HPLC: Retentioaika, 10,8 minuuttia (CH3CN-H2= 1:1, 1 ml/min.).

20 Analyysi, laskettu yhdisteelle c21H25N5O^S2»CgH^O: C, 51,83; H, 6,28; N, 11,19; S, 10,25 Saatu: C, 51,62; H, 6,07; N, 11,16; S, 10,05.

* AX = -ch(ch3)ococh3

Esimerkki 11 . 25 Difenyylimetyyli-7-/T(Z)-2-metoksi-imino-2- (2-trityyli- aminotiatsol-4-yyli)-asetamidQ7“3“£3z)-3-metoksi-1-propenyyli7- 3-kefem-4-karboksylaatti (VIII, R^a=CH3> R3=OCH3)_

Liuosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-£(Z)-metoksi-imino-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-asetamidq7_3-trife-30 nyylifosfoniometyyli-3-kefem-4-karboksylaattijodidia (1,19 g, 1 mmooli) CH2Cl2:ssa (30 ml), ravisteltiin 1-norm. NaOH:n kanssa (5 ml) 2 minuuttia. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä ja kyllästetyllä NaCl:n vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja suodatettiin. Suodok-35 seen lisättiin isopropyylialkoholia (15 ml) ja metoksiasetalde-·:·· hydiä (7,41 mg, 10 mmoolia) . Seosta sekoitettiin huoneen n 41 85487 lämpötilassa yön ajan ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin CHCl^een ja kromatografioitiin silika-geelikolonnissa (20 g) etyyliasetaatti-tolueeni-seoksen 1:20 ollessa eluenttina, jolloin saatiin 570 mg (66 %) otsi-5 kon yhdistettä.

IR: ^maks (KBr) cm_1 1 775' r720' 1670, 1525, 1175.

NMR: cT (CDC13 + D20) ppm 3,24 (3H, s, OCH3>, 3,3-3,8 (4H, m, S-CH2 ja OCH2), 4,13 (3H, s, NOCH3), 5,15 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,98 (1H, d, J=,4,5 Hz, 7-H), 6,3 (1H, d, 10 J=11 Hz, vinyyli-H), 6,8 (1H, s, tiatsoli-H), 6,98 (1H, s, CHPH2), 7,1-7,5 (25H, fenyyli-H).

IIPT.C: Retentioaika 13,6 minuuttia (CH3CN-H20 3:1 , 1 ml/min.).

Esimerkki 12 15 1-1(7,)-2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-imino- asetamid<i7-3-/(Z) -3-metoksi-1 -propenyyli/-3-kefem-4-karboksyy- lihappp (Ia, R2=CH3, R3=OCH3)_

Liuoksen, jossa oli difenyylimetyyli-7-/!Z)-2-metoksi-imino-2- (2-trityyliaminotiatsol-4-yyli) -asetamidq7-3-/"(Z) -20 3-metoksi-1-propenyyli7~3-kefem-4-karboksylaattia (550 mg, 0,64 mmoolia) anisoli-TFA:ssa (0,5 ml/5 ml), annettiin olla paikoillaan huoneen lämpötilassa 50 minuuttia ja laimennettiin isopropyylieetterillä, jolloin saatiin sakkaa, joka koottiin talteen suodattamalla ja pestiin IPE:llä. Kiinteä : 25 aine liuotettiin metanoliin ja kromatografioitiin kolonnissa, --- jossa oli PrepPAK cartridge (Waters)-täytettä (40 ml) 30- prosenttisen metanolin ollessa eluenttina, jolloin saatiin 104 mg (36 %) otsikon yhdistettä. Sp. 155-159°C (hajoten). Laskettu puhtaus 90 % (HPLC:n perusteella) .

:; 30 IR: ^ maks <KBr) cm_1 1765, 1660, 1630, 1530, 1040.

UV: *maks <metanoli) nm (£) 234 (16600), 287 (14500).

... NMR: 6 (DMSO-dg + D20) ppm 3,19 (3H, s, OCH-j) , 3,83 (3H, s, OCH3), 5,17 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,4-5,8 35 (1 H, m, vinyyli-H), 5,72 (1H, d, J = 5 Hz, 7-H), 6,27 (1H, d, J=12 Hz, vinyyli-H), 6,72 (1H, s, tiatsoli-H).

42 ö 5 4 S 7 HPLC: Retentioaika 9,6 minuuttia (metanoli-pH 7 fosfaattipuskuri 1:3, 1 ml/min.).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C, ..H. QNC0 * H_0: i / I y 3 o 2 C, 43,30; H, 4,49; N, 14,85; S, 13,60; 5 Saatu: C, 43,04; H, 4,09; N, 14,59; S, 13,89.

Esimerkki 13

Pivaloyylioksimetyyli-7-/"(Z) -2- (2-aminotiatsol-4- yyli) -2-metoksi-imino-asetamido7-3-£"( Z) -3-metoksi-1 -prope- _ 2 3 4 nyyli7~3-kefem-4-karboksylaatti (Ib, R =CH_,, R =QCHj, R =PV) 10 Estcröimällä 7-/T(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- metoksi-iminoasetamido7~3-£lZ)-3-metoksi-1-propenyyli7~3-kefem-4-karboksyylihappo (226 mg, 0,5 mmoolia) samalla tavalla kuin on esitetty esimerkissä 9, saatiin otsikon yhdistettä (97 mg, 34 %). Sp. 100-102°C. Laskettu puhtaus 90 % (HPLC:n 15 perusteella, metanoli-pH 7 fosfaattipuskuri 1:1).

IR: ”^maks (KBr) cm“1 1775, 1750, 1670, 1530, 1370, 1120.

UV: ^maks (metanoli> nm (£) 232 (16600), 289 (13500) .

20 NMR: ί(DMSO-dg + D20) ppm 1,18 (9H, s, 3 x CH3), 3,19 (3H, s, 0CH3), 3,57 (2H, br., SCH2), 3,85 (3H, s, 0CH3), 5,23 (1H, d, J = 5 Hz, 6-H) , 5,4-5,9 (4H, m, 7-H, 0CH20 ja vinyyli-H), 6,24 (1H, d, J=12 Hz, vinyyli-H), 6,74 (1H, s, • tiatsoli-H) .

25 Esimerkki 14 1-asetoksietyyli-7-/”(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamid^-S-^Z)-3-metoksi-1-propenyyli7-3-kefem-4-karboksylaatti (Ib, R^=CH3, R^=OCH3, R^=AX)_

Esteröimällä 7-/"(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-30 metoksi-iminoasetamidq7-3-/lZ) -3-metoksi-1-propenyylj,y-3- kefem-4-karboksyylihappo (300 mg, 0,66 mmoolia) 1-bromietyyli-asetaatilla samalla tavalla kuin on esitetty esimerkissä 10, saatiin otsikon yhdistettä (154 mg, 43 %). Sp. 102-105°C (hajoten). Laskettu puhtaus 95 % (HPLC:n perusteella, .... 35 CH3CN-pH 7 fosfaattipuskuri 1:1).

♦ -* 43 85487 IR: ^maks. (KBr) cm_1 1775-1760, 1670, 1530, 1375.

UV: ^maks <metanoli) nm (£) 232 (15900), 288 (13000).

NMR: i(CDCl3 + D20) ppm 1,51 (3H, d, J=5 Hz, 5 CHCH3), 2,07 (3H, s, COCH3), 3,29 (3H, s, CH^CHg), 3,45 (2H, br., S-CH2), 3,87 (2H, d, J=7 Hz, =CHCH20), 4,04 (3H, s, NOCH3), 5,09 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,55-5,9 (1H, m, vinyyli-H), 5,97 (1H, d, J=5 Hz, 7-H), 6,8 (1H, d, J=12 Hz, vinyyli-H), 6,83 (1H, s, tiatsoli-H), 6,97 (1H, q, J=5 Hz, 0CHCH3).

10 Esimerkki 15 7-Z.Tz) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-imino- asetamidq7-3-^"(E) -1 -butenyylf7 -3-kefem-4-karboksyylihappo 2 3 (Ia, R =CH3, R =CH3, E-isomeeri)_

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-/lZ)-2-(2-15 aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamidq7-3-£7Z)-1- butenyyli7“3-kefem-4-karboksylaattia, jota oli saatu esimerkissä 7 (7,6 g, 1,3 mmoolia), TFA:a (25 ml) ja anisolia (5 ml), sekoitettiin 5°C:ssa tunnin ajan ja laimennettiin isopropyylieetterillä. Muodostunut sakka koottiin talteen 20 suodattamalla, liuotettiin muurahaishappoon ja puhdistettiin preparatiivista HPLC:tä käyttäen (Waters, System 500, PrepPAK-500/C.jg) 40 %:sella metanolilla. Eluaattia tarkkailtiin analyyttisen HPLC:n avulla ja ryhmitettiin kahteen fraktioon, jotka haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 0,94 g • · 2 3 25 Ia:n Z-isomeeria (R =CH3, R =CH3) ja 1,65 g Z-isomeerin ja :· vastaavan E-isomeerin seosta. Seos liuotettiin muurahaishap-

- poon ja kromatografioitiin kolonnissa, jossa oli PrepPAK

cartridge (Waters)-täytettä (50 ml) 20-30-prosenttisella metanolilla, jolloin saatiin 0,22 g (4 %) E-isomeeria yhdessä 30 0,90 g:n kanssa Z-isomeeria. Laskettu puhtaus 90 % (HPLC:n perusteella). Sp. >170°C (hajaantuu asteettain).

IR: V maks (KBr) cm“1 1760, 1660.

UV: i^makg ^PH 7 fosfaattipuskuri) nm (£) 232 : (15400) , 292 (19400) .

44 8 5487 NMR: (D20 + NaHC03) ppm 1,18 (3H, t, J=7 Hz, CH2C—3)' 2/30 (2H' m' Cä2CH3)' 3,83 (2H' s' 2-H), 4,15 (3H, s, OCH3), 5,37 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,92 (1H, d, J=5 Hz, 7-H), 5,9-6,4 (1H, m, =CHCH2) , 5,66 (1H, d, J=16 Hz, 3-CH=) , 5 7,18 (1H, s, tiatsoli-H).

HPLC: Retentioaika 6,4 minuuttia (metanoli-pH 7 fosfaattipuskuri 3:7, 2,0 ml/min.).

Esimerkki 16 1 -asetoksietyyli-7-/~(z) -2-( 2-aminotiatsol-4-yyl i) -2-1 0 metoksi-iminoasetamidq7-3-/"(E) -1 -butenyyliJ-3-kefem-4- Λ Λ i karboksylaatti (Ib, R -CHj, R =ch3, R =AX E-isomeeri)_

Seokseen, jossa oli 7~/“(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoasetamido7-3-£'(E) -1 -butenyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappoa (130 mg, 0,3 mmoolia) ja K2CC>3:a (55 mg, 15 0,4 mmoolia) DMFrssa (2,5 ml), lisättiin 5°C:ssa 1-bromietyy- liasetaattia (67 mg, 0,4 mmoolia). Seosta sekoitettiin 5°C:ssa tunnin ajan, laimennettiin etyyliasetaatilla (25 ml), pestiin peräkkäin vedellä ja NaCl:n vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä MgSO^rlla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös 20 liuotettiin kloroformiin ja kromatografioitiin silikageeli-kolonnissa 1 % metanolia sisältävällä CHCl3:lla. Halutut fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 77 mg (49 %) otsikon yhdistettä. Laskettu puhtaus 90 % (HPLCrn perusteella). Sp. 110-115°C.

: 25 IR: "V . (KBr) cm"1 1760 (br.), 1670, 1510.

• . maks · UV: λ , (metanoli) nm (E.) 232 (15100), 298 maks.

ΓΛ (17000).

NMR: ά (CDC13) ppm 1,05 (3H, t, J=7 Hz, CH2CH3), 1,54 (3H, d, J=6 Hz, CHCH3) , 2,08 (3H, s, COCILj) , 2,0-2,4 f 30 (2H, m, -CH2CH3), 3,57 (2H, s, 2-H), 4,05 (3H, s, OCH3), 5,07 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,8-6,3 (2H, m, 7-H ja =CH-CH2-), 6,86 (1H, s, tiatsoli-H), 6,8-7,1 (2H, m, OCH ja 3-CH=).

HPLC: Retentioaika, 7,7 minuuttia (CH3CN-H20 1:1, - ’ - 1,5 min./ml) .

···*< 4 * 45 8 5487

Esimerkki 17

Asetoksimetyyli-7-/"(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoasetamido7-3-^*(Z) -1 -butenyyli7~3-kefem-4-karboksylaatti (Ib, R2 = CH3, R3 = CH3, R4 = CH3OCOCH3, 5 Z-isomeeri)_

Seokseen, jossa oli 7-/(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-imino-asetamidq7“3-/"(Z) -1 -butenyyli7“3-kefem-4-karboksyylihappoa (300 mg, 0,69 mmoolia) ja K2C03:a (95 mg, 0,69 mmoolia) kuivassa DMFtssa (3 ml), lisättiin tiputtamalla 10 0°C:ssa liuos, jossa oli bromimetyyliasetaattia (105 mg, 0,69 mmoolia) kuivassa DMF:ssa (0,25 ml) ja seosta sekoitettiin 0°C:ssa 15 minuuttia. Seokseen lisättiin jälleen liuos, jossa oli bromimetyyliasetaattia (105 mg, 0,69 mmoolia) kuivassa DMF:ssa (0,25 ml). Reaktioseosta sekoitettiin toiset 15 30 minuuttia ja laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml).

Laimennus pestiin vedellä ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivattiin vedettömällä Na^O^lla ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin metanoliin ja laskettiin kolonnin läpi, jossa oli PrepPAK cartridge (Waters)-täytettä (40 ml), joka 20 pestiin vedellä ja eluoitiin sitten 50-prosenttisella meta- nolilla. Eluaattia seurattiin HPLC:n avulla. Halutut fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 96 mg (27 %) otsikon yhdistettä. Laskettu puhtaus 90 % (HPLC:n perusteella). Sp. 149-152°C.

• 25 IR: V . (KBr) cm"1 1780, 1660, 1535, 1375, mak s.

1170, 1045.

UV: ti , (metanoli) nm (€.) 231 (17000), 289 . . maks.

(13100).

NMR: cf (CDC13 + D20) ppm 0,99 (3H, t, J=7,2 Hz, CH-j), :Y: 30 2,11 (3H, s, COCH3), 1,75-2,5 (2H, m, CH2CH3), 3,45 (2H, S, S-CH2), 4,05 (3H, s, OCH3), 5,11 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,81 (2H, s, 0CH20) , 5,99 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H) , 6,18 (1H, d, J=12 Hz, 3-CH=) , 6,76 (1H, S, tiatSOli-H) .

HPLC: Retentioaika, 6,3 minuuttia (CH3CN - pH 7 fos- : ' 35 faattipuskuri 3:2).

46 6 5487

Analyysi, laskettu yhdisteelle C20H23N5°7S2* 1 /2H20: C, 46,32; H, 4,66; N, 13,50; S, 12,37;

Saatu: C, 46,51; H, 4,44; N, 13,34; S, 12,25.

Esimerkki 18 5 4-/]¾ (t-butoksikarbonyyli) -glysyylioksi/bentsoyyli- oksimetyyli-7-/T(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoasetamido/-3-/T( Z) -1 -butenyyli7~3-kef em-4-karboksylaatti (Ib, R2 = CHt, R3 = CHj, R4 = BOC-GBM*_

Liuosta, jossa oli kloorimetyyli-4-/N-(t-butoksi-10 karbonyyli)-glysyylioksibentsoaattia (584 mg, 1,7 mmoolia) asetonissa (10 ml), sekoitettiin natriumjodidin kanssa (1,28 g, 8,5 mmoolia) huoneen lämpötilassa 6 tuntia. Erottunut natriumkloridi poistettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin dimetyyliform-15 amidiin (10 ml) ja lisättiin -20°C:ssa seokseen, jossa oli 7-/^Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamid^/-3 — /7?Z)-1 -butenyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappoa (437 mg, 1 mmooli) ja kaliumkarbonaattia (207 mg, 1,5 mmoolia) dime-tyyliformamidissa (5 ml). Seosta sekoitettiin 0°C:ssa tunnin 20 ajan, laimennettiin etyyliasetaatilla (50 ml), pestiin peräkkäin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silikageelikolonnissa (20 g) eluoimalla tolueeni-etyyliasetaatti-seoksella 1:1, 25 jolloin saatiin 533 mg (76 %) otsikon yhdistettä. TLC (silika-geeli): Rf 0,16 (tolueeni-etyyliasetaatti 1:1).

’ Sp. 110-11 7°C.

IR: Vmaks (KBr) cm"1 1770, 1740, 1670.

UV: ft maks (metanoli) nm (£) 237 (26700), 287 30 (11800).

NMR: 6 (CDCI3 + D20) ppm 0,90 (3H, t, J=7 Hz, CH2CH3), 1,48 (9H, s, C(CH3)3), 2,00 (2H, dq, J=7 ja 7 Hz, CH2CH3), 3,43 (2H, s, 2-H), 3,98 (3H, s, OCH3), 4,13 (2H, s, : ; : CH2NH), 5,10 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,50 (1H, dt, J=11 ja 7 ____'35 Hz), 5,9-6,3 (4H, m, 7-H, vinyyli-H ja 0CH20), 6,52 (1H, s, ____: tiatsoli-H), 7,17 ja 8,06 (kumpikin 2H, d, J=8 Hz, bentseeni-H).

47 65487 * BOC-GBM = -CH2OCO—— OCOCHjNHCOOC (CHj) 3 Esimerkki 19 4-glysyylioksibentsoyylioksimetyyli-7-£( Z)-2-(2- 5 aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido7-3-/7z)-1- butenyyli7~3-kefem-4-karboksylaatti-dihydrokloridi (lb, 2 3 4 R = CH3> R = CHj, R = GBM*, hydrokloridi_

Seosta, jossa oli N-(t-butoksikarbonyyli)-johdannaista (349 mg, 0,5 mmoolia), jota oli saatu esimerkissä 18, anisolia 10 (3 tippaa) ja 2-norm. kloorivetyhappoa etyyliasetaatissa (2,5 ml), sekoitettiin 5°C:ssa 15 minuuttia. Muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla ja liuotettiin metanoliin (3 ml). Suodattamisen jälkeen suodokseen lisättiin etyyliasetaattia (39 ml). Muodostunut sakka koottiin talteen suodatta-15 maila, jolloin saatiin 166 mg (46 %) otsikon yhdistettä.

Sp. >160°C (hajoten). Laskettu puhtaus 90 % (HPLC:n perusteella) .

IR: V . (KBr) cm”1 1780, 1745, 1670, 1630.

ma. k s · UV: (7 ,^^3 (metanoli) nm (£.) 235 (27200), 287 20 (12900) .

NMR: 6 (DMSO-dg) ppm 0,78 (3H, t, J=7 Hz, CH^Hg) , 2,00 (2H, m, CH2CH3), 3,52 (2H, s, 2-H) , 3,90 (3H, s, OCH-j), 4,05 (2H, s, CH2NH) , 5,22 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,5-6,2 (5H, m, 7-H, vinyyli-H x 2 ja OCH20), 6,88 (1H, s, tiatsoli-H), 25 7,35 ja 8,00 (kumpikin 2H, d, J=8 Hz, bentseeni-H).

Analyysi, laskettu yhdisteelle c27H2gN609S2·2HC1 · 1/2H20: C, 44,63; H, 4,30; N, 11,57; S, 8,82; Cl, 9,76;

Saatu: C, 44,60; H, 4,34; N, 11,13; S, 8,46; Cl, 9,18.

30 HPLC: Retentioaika, 5,2 minuuttia (CH3CN-H20 3:2, 1 ml/min.).

* GBM = -CH2OCO——OCOCH2NH2 48 8 5 4 87

Esimerkki 20

Difenyylimetyyli-7-amino-3-(1-pentenyyli)-3-kefem- 4-karboksylaatti (XIII, R3 = CH2CH3)___ Jäähdytettyyn ja sekoitettuun liuokseen, jossa oli 5 8,7 g (0,1 moolia) kuivaa litiumbromidia 50 ml:ssa DMF:a, lisättiin yhtenä eränä liuos, jossa oli 7,3 g (0,01 moolia) ylidiä (XI) 250 ml:ssa metyleenikloridia. Liuokseen lisättiin 30 ml n-butyyrialdehydiä ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 24 tuntia. 50 ml:ksi konsentroinnin jälkeen 10 jäännös uutettiin 300 ml :11a etyyliasetaattia. Uute pestiin vedellä ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella, ja kuivattiin vedettömällä MgSO^:lla. Lisättiin Wago-gel'iä (C-100, 10 g) ja aktiivihiiltä (1 g). Seos suodatettiin ja suodos konsentroitiin 100 ml:ksi. Konsentraattiin lisättiin 5 g (0,03 moolia) 15 Girard T:tä 100 ml:ssa metanolia, jossa oli 5 ml etikkahappoa ja seosta sekoitetiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Kuiviin haihduttamisen jälkeen jäännös uutettiin 300 ml:n kanssa etyyliasetaattia. Uute pestiin peräkkäin vedellä, nat-riumvetykarbonaatin vesiliuoksella, vedellä ja kyllästetyllä 20 NaCl-liuoksella ja kuivattiin vedettömällä MgSO^:lla. Kuiviin haihduttamisen jälkeen jäännös kromatografioitiin silikageeli-kolonnissa (Merck Kieselgel 60, 120 g) eluoimalla tolueeni-etyyliasetaatti-seoksella (5:1). Halutut fraktiot, jotka oli . . koottu talteen tarkkailemalla TLC:n avulla, haihdutettiin kui- ' 25 viin, jolloin saatiin 1,78 g (41 %) otsikon yhdistettä vaahto--*·· maisena kiinteänä aineena.

NMR: <i(CDCl3) ppm 0,7-2,0 (7H, m, CH2 x 2 & C-CH3) , V-: 3,28 (1H, d, J=18 Hz, 2-H) , 3,58 (1H, d, J=18 Hz, 2-H) , 4,75 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H) , 5,01 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H) , 5,2-5,7 ’· 30 (1H, m, CH=C), 6,12 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH=C), 7,00 (1H, s, CHPh2), 7,2-7,6 (1 OH, m, fenyyli-H).

* - · 49 8 5 4 87

Esimerkki 21

Difenyylimetyyli-7-£Iz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido7-3-(1-pentenyyli)-3-kefem-4-karboksy- laatti (XIV, R2 = CH2CH3)_ 5 Seosta, jossa oli 1,7 g (3,9 mmoolia) yhdistettä XIII (R3 = CH2CH3) ja 1,24 g (3,9 mmoolia) 1 ~Z"(Z)-2-(2-amino-tiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetoksi7bentsotriatsolia 150 ml:ssa etyyliasetaattia, sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 tuntia ja seos haihdutettiin kuiviin. Jäännös kromatogra-10 fioitiin silikageelikolonnissa (Merck Kieselgel 60, 60 g) eluoimalla peräkkäin kloroformilla ja 1 % metanolia sisältävällä kloroformilla. Halutut fraktiot, eluoitu kloroformi-metanoli-seoksella ja tarkkailemalla silikageeli-TLC:n avulla (MeOH-CHCl^ 1:15, Rf 0,50), koottiin yhteen ja haihdutettiin 15 kuiviin. Jäännöstä trituroitiin eetteri-isopropyylieetterin kanssa, jolloin saatiin 1,94 g (85 %) otsikon yhdistettä, joka suli 115-120°C:ssa (hajoten).

IR: ^ maks (KBr) cm_1 1775' 1720' 1670' 1610' 153°' 1380, 1220, 1180, 1030.

20 UV: ^ . (metanoli) nm (£) 290 (14000).

IHclK S · NMR: ci (CDC13) ppm 0,6-2,1 (7H, m, CH2 x 2 & CH3>, 3,42 (2H, br. s, 2-H), 4,04 (3H, s, OCH3), 5,15 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,3-5,8 (3H, m, CH=C & NH2), 6,02 (1H, d-d, J=4,5 & 8 Hz, 7-H), 6,15 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH=C), 6,80 (1H, s, 25 tiatsoli, H), 6,98 (1H, s, CHPh2) , 7,2-7,5 (10H, m, fenyyli-H) , 8,0 (1H, d, J=8 Hz, NH).

Esimerkki 22 7-£(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoaset-amido7-3-/j(Z)-1-pentenyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappo (Ia, 30 R2 = CH^, R3 = CH2CH3, Z-isomeeri)_

Seosta, jossa oli 2,5 g (4,27 mmoolia) yhdistettä XIV 2 3 (R = CH3, R = CH2CH3), 2,5 ml anisolia ja 7,5 ml trifluori-etikkahappoa, sekoitettiin huoneen lämpötilassa 10 minuuttia V r ja konsentroitiin 3 ml:ksi. Jäännös laimennettiin 100 ml:11a 35 isopropyylieetteriä, jolloin saatiin 2 g otsikon yhdisteen 50 8 5 4 87 trifluoriasetaattia (Z- ja E-isomeerien seosta 5:1). Raaka tuote liuotettiin vesipitoiseen metanoliin ja liuos kromato-grafioitiin kolonnissa, jossa oli täytteenä PrepPAK C^g cartrige (Waters, 300 ml), eluoimalla peräkkäin vedellä, 1O-prosenttisella metanolilla, 20-prosenttisella metanolilla, 5 30-prosenttisella metanolilla ja 40-prosenttisella metanolilla. Eluaattia tarkkailtiin HPLC:n avulla. Z-isomeeria sisältävät fraktiot, jotka oli saatu eluoimalla 40-prosenttisella metanolilla, koottiin talteen ja haihdutettiin kuiviin ja jäljelle jäänyt kiinteä aine liuotettiin metanoliin ja suodatettiin.

10 Suodokseen lisättiin 200 ml isopropyylieetteriä ja muodostunut kiinteä aine koottiin talteen suodattamalla, pestiin isopropyylieetterillä ja kuivattiin vakuumissa P2°5:n päällä, jolloin saatiin 695 mg (39 %) tuotetta, jonka puhtaus oli 90 % HPLC:n perusteella. Sp. 150-155°C (hajoten).

15 IR: -Ymaks (KBr) cm"1 1770, 1670, 1630, 1530, 1370, 1180, 1040.

UV: ^maks (PH 7 fosfaattipuskuri) nm (£.) 229 (16000) , 283 (15000) .

NMR: £(D20 + Na2C03) ppm 1,01 (3H, t, J=7 Hz, 20 CH2CH3) , 1,3-1,7 (2H, m, CH2CH_2CH3) , 2,0-2,3 (2H, m, =CH-CH2~CH2), 3,46 (1H, d, J=18 Hz, 2-H) , 3,76 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,15 (3H, s, OCH3>, 5,38 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,5-5,9 (1H, m, CH=C), 5,92 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,09 (1H, •X: d, J=11 Hz, 3-CH=C), 7,16 (1H, s, tiatsoli-H).

25 Analyysi, laskettu yhdisteelle C^gH^NgO^S^ 1/2H20: . C, 46,94; H, 4,82; N, 15,21; S, 13,92;

Saatu: C, 46,93, 47,04; H, 4,66, 4,71? N, 15,00, 15,00? S, 13,34, 13,36.

HPLC: Retentioaika, 9,9 minuuttia (MeOH-pH 7 fosfaat-30 tipuskuri 2:3, 1 ml/min.).

* · # · · Λ < » f» 1 · 1 1 “ s r si 85487

Esimerkki 23 7-/"(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoaset-amidQ7-3-/~(E) -1 -pentenyyli7~3-kefem-4-karboksyylihappo (Ia/ R2 = CHj/ = CH^CH^, E-isomeeri)__ 5 40-prosenttisella metanolilla eluoituneet E-isomeeri- pitoiset fraktiot (vrt. esimerkkiin 22) koottiin talteen ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin 455 mg cis- ja trans-isomeerien seosta (1:1). Raaka tuote kromatografioitiin uudelleen kolonnissa, jossa oli täytteenä PrepPAK C^g 10 cartrige (Waters, 300 ml), eluoimalla 35-prosenttisella metanolilla ja tarkkailemalla HPLC:n avulla. Trans-isomeeria sisältävät halutut fraktiot koottiin talteen ja konsentroitiin 10 mlrksi ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 89 mg (5 %) tuotetta, jonka puhtaus oli 75 % HPLC:n perusteella. Sp. 180°C 15 (hajosi asteettain).

IR: ^maks (KBr) Cm_1 1770' 1660, 1630, 1530, 1380, 1040.

UV: <PH 7 fosfaattipuskuri) nm {€.) 228 (17000) , 292 (22000) .

20 NMR: <i(D20 + Na^Og) ppm 1,05 (3H, t, J=7 Hz, CH2CH3), 1,2-1,8 (2H, m, CH2CH2CH3), 2,1-2,5 (2H, m, =CH-CH2CH2), 3,81 (2H, s, 2-H), 4,16 (3H, s, OCHg), 5,37 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,91 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,9-6,3 (1H, m, CH=C), 6,67 (1H, d, J=16 Hz, 3-CH=C), 7,17 (1H, s, 25 tiatsoli-H) .

i' HPLC: Retentioaika, 12,3 minuuttia (MeOH-pH 7 fos faattipuskuri 2:3, 1 ml/min.).

Esimerkki 24 l-asetoksietyyli-?-^2)2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- 30 metoksi-iminoasetamidQ7-3-/'(Z) -1-pentenyyH7-3-kefem-4-kar- ; 2 3 4 boksylaatti (Ib, R = CHg, R = CHgCHg, R = AX, Z-isomeeri

Sekoitettuun seokseen, jossa oli yhdistettä Ia (R^ = CHg, R^ = CH2CH3, Z-isomeeri) (225 mg, 0,5 mmoolia) ja 69 mg ' (0,5 mmoolia kaliumkarbonaattia 5 ml:ssa DMF:a, lisättiin 35 0-5°C :ssa liuos, jossa oli 84 mg (0,5 mmoolia) 1-asetoksietyy- ..... libromidia 1 ml:ssa DMF:a ja seosta sekoitettiin huoneen 52 85 437 lämpötilassa 30 minuuttia. Seokseen lisättiin jälleen liuos, jossa oli 84 mg (0,5 mmoolia) bromidia 1 ml:ssa DMF:a ja seosta sekoitettiin 5-10°C:ssa 30 minuuttia. Sitten seos uutettiin 100 ml:11a etyyliasetaattia. Uute pestiin peräkkäin 5 natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella, vedellä ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella ja kuivattiin MgS04:lla. Kuiviin haihduttamisen jälkeen öljymäinen jäännös kromatografioitiin silika-geelikolonnissa (Kieselgel 60, 30 g) eluoimalla peräkkäin kloroformilla ja 1 % metanolia sisältävällä kloroformilla, 10 ja tarkkailemalla TLC:n ja HPLC:n avulla. 1 % metanolia sisältävällä kloroformilla eluoituneet halutut fraktiot koottiin talteen ja haihdutettiin kuiviin. Jäännöstä trituroitiin eetteri-n-heksaani-seoksen kanssa, jolloin saatiin 91 mg otsikon yhdistettä. Raa'at sivufraktiot kromatografioitiin 15 uudelleen samalla tavalla, jolloin saatiin vielä 63 mg tuotetta. Kokonaissaanto oli 154 mg (57 %). Laskettu puhtaus 80 % HPLC:n perusteella. Sp. 100-110°C (hajoten).

IR: V , (KBr) cm-1 1765, 1670, 1610, 1530, 1380, ma K s · 1240, 1210, 1180, 1100, 1070, 1040.

20 UV: ^maks (metanoli) nm (£) 233 (17000), 290 (13000) .

NMR: cf(CDC13) ppm 0,90 (3H, t, J=7 Hz, CH2CH3), 1,2-1,8 (5H, m, CHCH3 & CH2CH2CH3) , 1,8-2,1 (2H, m, =CH-CH2CH2), 2,06 (3H, s, COCH3), 3,43 (2H, br-s, 2-H), 4,05 ; 25 (3H, s, OCH3), 5,08 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,32 (2H, br-s, NH2), 5,5-5,7 (1H, m, CH=C), 5,94 (1H, d-d, J=8 & 4,5 Hz, 7-H) , 6,13 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH=C) , 6,84 (1H, s, tiatsoli-'·· H), 6,97 (1H, q, J=7 Hz, CH-CH3) , 7,48 (1H, d, J=8 Hz, NH) .

t HPLC: Retentioaika, 8,1 minuuttia (MeOH-pH 7 fos- : 30 faattipuskuri 7:3, 1 ml/min.).

53 8 5 487

Esimerkki 25

Difenyylimetyyli-7-/2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2- (Z) -isopropyylioksi-iminoasetamidq7“3-£‘(Z) -1 -propenyy 1^7-3- kefem-4-karboksylaatti (VIII, R2a = CH(CH3)2, R3 = H)_ 5 Seokseen, jossa oli 2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)- 2-(Z)-isopropyylioksi-iminoetikkahappoa (III, R2a = CHiCH^^; 754 mg, 1,60 mmoolia) ja dikloorimetaania (7 ml), lisättiin -10°C:ssa fosforipentakloridia (332 mg, 1,60 mmoolia). Seoksen annettiin olla paikoillaan 20 minuuttia samassa lämpöti-10 lassa ja lisättiin tiputtamalla liuokseen, jossa oli difenyy-limetyyli-7-amino-3-/^Z) -1 -propenyyl 4,7-3-kefem-4-karboksy- 3 laattihydrokloridia (XIII, R = H: 443 mg, 1 mmooli) ja Ν,Ο-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia (0,74 ml, 4,4 mmoolia) dikloorimetaanissa (5 ml) -10°C:ssa. Reaktioseoksen annettiin 15 olla paikoillaan 30 minuuttia samassa lämpötilassa ja kaadettiin jääveteen. Uuttamalla seos etyyliasetaatilla ja haihduttamalla sen jälkeen uutteet kuiviin vakuumissa, saatiin raakaa tuotetta öljynä, joka kromatografioitiin silikageelikolonnissa (eluoitiin kloroformilla), jolloin saatiin 419 mg (49 %) 2 3 20 yhdistettä VIII (R =CH(CH^)2' R = amorfisena jauheena.

IR: ^maks (KBr) cm"1 1780' 1720' 1680· * R. Bucourt ym., Tetrahedron 34, 2233 (1978).

Esimerkki 26 l-O·- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (Z) -isopropyylioksi-25 iminoasetamidc^-3-((Z)-1-propenyyli)-3-kefem-4-karboksyyli-. Γ happo (Ia, R2 = CH(CH3)2, R3 = H)_

Seosta, jossa oli yhdistettä VIII (R2a = CH(CH^)-, •“.3 6 1 ·.: R = H: 400 mg, 0,47 mmoolia) ja 85-prosenttista muurahais-

happoa (2 ml), sekoitettiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa ja 30 seokseen lisättiin kloorivetyhappoa (0,08 ml). Seosta sekoitettiin vielä 4 tuntia ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä trituroitiin isopropyylieetterin kanssa, jolloin saatiin raakaa tuotetta, joka puhdistettiin kromatografioimalla kolonnissa C-18 silikageelillä (eluentti 30 % vettä MeOH:ssa), 35 minkä jälkeen konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin ot-·; ·: sikon yhdistettä neulasina. Saanto 70 mg (33 %) . Sp. 170-175°C

; (hajoten) . Laskettu puhtaus 90 %.

54 85487 IR: V , (KBr) cm"1 1760, 1660, 1540, 1380.

maks. ..

UV: /1 , (pH 7 fosfaattipuskuri) nm (E, % ) iticiKs · 1 cm 232 (370) , 284 (357) .

NMR: 6(D20 + NaHC03) ppm 1,50 (6H, d, J=6 Hz, 5 i-pr), 1,76 (3H, d, J=6 Hz, =CH-CH3), 3,65 (2H, ABq, J=18 Hz, 2-H), 5,42 (1H, d, J=4 Hz, 6-H), 5,80-6,40 (3H, m, vinyyli-H, 7-H), 7,15 (1H, s, tiatsoli-H).

Esimerkki 27

Difenyylimetyyli-7-/2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-10 2-(Z)-allyylioksi-iminoasetamido7-3-((Z)-1-propenyyli)-3- kefem-4-karboksylaatti (2) (VIII, R2a = CH2CH=CH2, R3 = H)_

Seokseen, jossa oli 2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(Z)-allyylioksi-iminoetikkahappoa (III, R2a = CH2CH=CH2) (750 mg, 1,60 mmoolia) ja dikloorimetäänia (5 ml), lisättiin 15 fosforipentakloridia (332 mg, 1,60 mmoolia) -10°C:ssa. Seoksen annettiin olla paikoillaan 20 minuuttia samassa lämpötilassa ja lisättiin tiputtamalla liuokseen, jossa oli difenyy-limetyyli-7-amino-3-((Z)-1-propenyyli)-3-kefem-4-karboksy-laatti-hydrokloridia (XIII, R^ = H: 443 mg, 1 mmooli) ja 20 Ν,Ο-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia (0,74 ml, 4,4 mmoolia) dikloorimetaanissa (5 ml) -10°C:ssa. Reaktioseoksen annettiin olla paikoillaan 30 minuuttia samassa lämpötilassa ja kaadettiin jääveteen. Uuttamalla seos kloroformilla ja haihduttamalla uutteet kuiviin vakuumissa saatiin raakaa tuotetta öl-25 jynä, joka kromatografioitiin silikageelikolonnissa (eluoi-; tiin kloroformilla), jolloin saatiin 817 mg (95 %) yhdistettä : VIII (R2a = CH2CH=CH2/ R3 = H) amorfisena jauheena.

: IR: Vmaks (KBr) cm"1 1780, 1720, 1680.

... * R. Bucourt ym., Tetrahedron 34, 2233 (1978).

Φ m m » - 55 85487

Esimerkki 28 7-/2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(Z)-alloksi-imino-asetamido7-3-((Z)-1-propenyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo (Ia, R2 = CH2CH=CH2/ R3 = H_ 5 Seosta, jossa oli yhdistettä VIII (R2a = CH2CH=CH2/ = H; 810 mg, 0,95 mmoolia) ja 85-prosenttista muurahaishappoa (2 ml), sekoitettiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa ja seokseen lisättiin kloorivetyhappoa (0,1 ml). Seosta sekoitettiin 3 tuntia ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa.

10 Trituroimalla jäännöstä isopropyylieetterin kanssa saatiin raakaa tuotetta, joka liuotettiin pieneen määrään metanolia ja kromatografioitiin C-18 silikageeli-kolonnissa (eluoitiin 30-prosenttisella vesipitoisella metanolilla). Eluaatti konsentroitiin vakuumissa ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 15 215 mg (50 %) otsikon yhdistettä amorfisena jauheena.

Sp. 140°C (hajoten). Laskettu puhtaus 80 %.

IR: V . (KBr) cnf1 1770, 1660, 1620.

maks. ^ UV: Λ . (pH 7 fosfaattipuskuri nm (E. %) maks. 1 cm 232 (378), 285 (326).

20 NMR: <f(D20 + NaHCO-j) ppm 1,78 (3H, d, J=6 Hz, C=CH-CH3), 3,62 (2H, ABq, J=18 Hz, 2-H), 5,50-6,30 (7H, m, vinyyli-H, 6,7-H), 7,18 (1H, s, tiatsoli-H).

Esimerkki 29 1-0,1) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- (Z) -etoksi-imino-.·. : 25 asetamidq7-3-((Z)-1-propenyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo (Ia, R2 = C2Hr t R3 = H)_

Liuokseen, jossa oli (Z)-2-(2-N-trityyliaminotiatsol- 4-yyli)-2-etoksi-iminoetikkahappoa* (III, R2a = C2Hj.) (458 mg, 1,0 mmoolia) ja 1-hydroksibentsotriatsolia (135 mg, 30 1,0 mmoolia) dikloorimetaanin (20 ml) ja tetrahydrof uraan in : (7 ml) seoksessa huoneen lämpötilassa, lisättiin disyklo- heksyylikarbodi-imidia (210 mg, 1,0 mmoolia). Seosta sekoi-·:*·: tettiin 80 minuuttia, suodatettiin ja suodos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin tetrahydrofuraaniin (10 ml) ja * . 35 lisättiin difenyylimetyyli-3-propenyyli-3-kefem-4-karboksy-’ laatti-hydrokloridia (XIII, = H; 443 mg, 1 mmooli) ja 56 85487 natriumvetykarbonaattia (84 mg, 1 mmooli). Lisättiin vettä (10 tippaa) ja saatua liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 tuntia. Reaktioseos laimennettiin eetterillä ja suodatettiin. Suodos konsentroitiin, jolloin saatiin öljyä.

5 Öljy kromatografioitiin silikageelillä (230-400 mesh), elu-oimalla heksaani-etyyliasetaatti-seoksella 2:1, jolloin saa-tiin asylointituotetta (VIII, R a = C^HR = H) (400 mg).

Tämä liuotettiin muurahaishappoon (1,6 ml), sekoitettiin voimakkaasti 60 minuuttia ja lisättiin 12-norm. HCL:ää (50 μΐ).

10 Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia, laimennettiin vedellä (2 ml) ja tolueenilla (20 ml) ja haihdutettiin kuiviin 30°C:ssa. Jäännöstä trituroitiin isopropyylieetterin kanssa, muodostuneet sakat koottiin talteen ja pestiin iso-propyylieetterillä. Kiinteä aine kromatografioitiin C-18 15 silikageelillä, eluoimalla metanoli-vesi-seoksella 3:7, jolloin saatiin otsikon yhdistettä amorfisena kiinteänä aineena, 100 mg (23 %). Sp. 158°C (hajoten). Laskettu puhtaus 90 % (HPLC:n perusteella).

IR: Xnaks (KBr) Cm_1 3600-2600' 1765, 1660, 1620, 20 1530, 1385, 1355, 1035.

UV: Λ (MeOH) nm (£) 235 (16100), 286 (13800).

maks.

NMR: Cf(D20 + NaHC03) ppm 1,45 (3H, t, J=7 Hz), 1,77 (3H, d, J=6 Hz), 3,45 ja 3,75 (2H, ABq, J=18 Hz), 4,40 (2H, q, J = 7 Hz), 5,40 (1H, d, J=5 Hz), 5,75-6,20 (3H, m), 7,13 (1H, s). 25 * R. Bucourt ym. , Tetrahedron 34, 2233 (1978).

. Esimerkki 30 ; 7-/_(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-syklopropyyli- metoksi-iminoasetamid27-3-((Z)-1-propenyyli)-3-kefem-4-karbok- " o 3 syylihappo (Ia, R = CH^ R = H)__ 30 Liuokseen, jossa oli (Z)-2-(2-N-trityyliaminotiatsol- 2a 4-yyli)-2-syklopropyylimetyyli-iminoetikkahappoa* (III, R = C^"-··^) (484 mg, 1,0 mmoolia) ja 1-hydroksibentsotriatsolia v : (135 mg, 1,0 mmoolia) dikloorimetaania (20 ml) ja tetrahydro- ____; furaanin (7 ml) seoksessa huoneen lämpötilassa, lisättiin di- ____; 35 sykloheksyylikarbodi-imidiä (210 mg, 1,0 mmoolia). Seosta • & 57 85487 sekoitettiin 80 minuuttia, suodatettiin ja suodos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin tetrahydrofuraaniin (10 ml) ja lisättiin difenyylimetyyli-3-propenyyli-3-kefem-4- 3 karboksylaatti-hydrokloridia (XIII, R = H) (443 mg, 1,0 5 mmoolia) ja natriumvetykarbonaattia (84 mg, 1,0 mmoolia). Lisättiin vettä (10 tippaa) ja saatua liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 tuntia. Reaktioseos laimennettiin eetterillä ja suodatettiin. Suodos konsentroitiin, jolloin saatiin öljyä. Öljy kromatografioitiin silikageelillä (230-10 400 mesh), eluoiraalla heksaani-etyyliasetaatti-seoksella 2:1, jolloin saatiin asyloitua tuotetta (VIII, R^a = CH- -O .

3 ^ R = H) (500 mg). Tämä liuotettiin muurahaishappoon (2,0 ml), sekoitettiin voimakkaasti 60 minuuttia huoneen lämpötilassa ja lisättiin 12-norm. HCl:ää (50 μΐ). Seosta sekoitettiin 15 huoneen lämpötilassa 3 tuntia, laimennettiin vedellä (2 ml) ja tolueenilla (20 ml) ja haihdutettiin kuiviin 30°C:ssa. Jäännöstä trituroitiin isopropyylieetterin kanssa ja muodostuneet sakat koottiin talteen ja pestiin isopropyylieette-rillä. Kiinteä aine kromatografioitiin C-18 silikageelillä, 20 eluoimalla metanoli-vesi-seoksella 4:6, jolloin saatiin otsikon yhdistettä amorfisena kiinteänä aineena 80 mg (19 %).

Sp. 150°C (hajoten). Laskettu puhtaus 85 % (HPLC:n perusteella).

IR: ^maks (KBr) Cm~1 3600"2600' 1765' 1660' 1620, 1530, 1350, 1025, 1010.

V-l 25 UV: ^maks (MeOH) nm (€1) 236 (17200), 256 (14400).

NMR: «£ (D20 + NaHC03) ppm 0,25-0,85 (4h, m), 1 ,20-1 ,60 (1H, m), 1,75 (3H, d, J = 6 Hz), 3,45 ja 3,75 (2H, ABq, J=18 Hz), 4,17 (2H, d, J=7 Hz), 5,40 (1H, d, J=5 Hz), 5,75-6,20 (3H, m), 7,14 (1H, s), y. 30 * Glaxo, Japan Kokai 59-106492 (6/20/84).

58 8 5487

Esimerkki 31

Difenyylimetyyli-7-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli) -2- (propargyylioksi-iminoasetamido)_7~3- ((Z) -1-propenyy-li)-3-kefem-4-karboksylaatti (VIII, R2a = CH^C Ξ CH, = H) 5 Jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli 750 mg (1,65 mmoolia) dif enyylimetyyli-7-amino-3-/"*(Z)-1-propenyyli7”3-kefem-4-karboksylaatti-hydrokloridia (XIII, = H) ja 1,05 ml (5 mmoolia) N,0-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia 17 ml:ssa kuivaa metyleenikloridia, lisättiin liuos, jossa 10 oli 750 mg (1,65 mmoolia) 2-trityyliaminotiatsol-4-yyli-2- (2-propargyylioksi-imino)-etikkahappoa* (III, R2a = CI^CICH) ja 415 mg (2,0 mmoolia) fosforipentakloridia 17 ml:ssa kuivaa metyleenikloridia, ja seosta sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin NaHCO^in vesiliuokseen 15 (30 ml) ja laimennettiin 60 ml :11a etyyliasetaattia. Orgaani nen kerros pestiin vedellä (30 ml x 2) ja suolaliuoksella (20 ml), kuivattiin MgSO^illa ja konsentroitiin vakuumissa. öljyinen jäännös kromatografioitiin silikageelikolonnissa (Wako gel-200, 20 g), joka eluoitiin CHCl3:lla. Haluttua 20 tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 90,5 mg (97 %) otsikon yhdistettä. Sp. 155°C (hajoten).

IR: ^maks (KBr) cm'1 3280, 2120, 1780, 1720, 1670.

. . * US-patentti 4 294 960 (10/13/81) • ’ 25 Esimerkki 32 1~L(Z)-2- (2-aminotiatsol-4-yyli)-2- (propargyylioksi-iminoasetamidq7-3-£'(Z) -1 -propenyyli7_3-kefem-4-karboksyyli-happo (Ia, R2 = CH2C i CH, R3 = H)_

Liuosta, jossa oli 900 mg (1,18 mmoolia) yhdistettä : 30 Vili (R2a=CH2C-CH, R3=H) 3 ml:ssa 85-prosenttista muurahais happoa, sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Reak-tioseokseen lisättiin 0,3 ml väkevää HCl:ää ja suspensiota .·;· sekoitettiin 4 tuntia ympäristön lämpötilassa. Seos suodatet tiin ja pestiin pienellä määrällä muurahaishappoa ja haihdu-• 35 tettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin 59 85487 käänteisfaasi-silikageelikolonnissa, joka oli otettu PrepPAK-500/C18 cartridge-kolonnista (Waters). Kolonni eluoitiin peräkkäin vedellä ja 30-prosenttisella metanoli-vesi-seoksel-la. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja 5 lyofilisoitiin, jolloin saatiin 105 mg (22 %) otsikon yhdistettä .

IR: "^maks (KBr) CItl~1 3400' 3280' 1770, 1670, 1630.

UV: λ maks (pH 7 fosfaattipuskuri) nm ( ) 229 (17000) , 285 (14200) .

10 NMR: cf(DgO + NaHC03) ppm 1,75 (3H, d, J=6 Hz, CH=CH-CH3), 3,61 (2H, Abq, 2-H) , 4,98 (2H, s, O-CK^CHCH) , 5,39 (1H, d, J=5 Hz, 6-H) , 5,80 (1H, m, CH=CH-CH3), 5,92 (1H, d, J=5 Hz, 7-H) , 6,08 (1H, d, J=11 Hz, CH=CHCH3), 7,22 (1H, s, tiatsoli-5H).

1 5 Esimerkki 33

Difenyylimetyyli-7-^f(Z) -2- (2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamidq7~3-((Z)-1-propenyyli)-3-kefem-4-karboksylaatti (VIII, R2a = Tr, R3 = H)_

Seokseen, jossa oli 2-(2-trityyliaminotiatsol-4- 20 yyli)-2-(Z)-trityylioksi-iminoetikkahappoa (III, R^a = Tr) (873 mg, 1,30 mmoolia) ja dikloorimetaania (5 ml), lisättiin fosforipentakloridia (297 mg, 1,43 mmoolia) -5°C:ssa. Seoksen annettiin olla paikoillaan 20 minuuttia samassa lämpötilassa ja lisättiin tiputtamalla liuokseen, jossa oli difenyylimetyy- . . 25 li-7-amino-3-(1-propenyyli)-3-kefem-4-karboksylaatti-hydro- . ·; 3 kloridia (XIII, R = H: 443 mg, 1 mmooli) ja Ν,Ο-bis(trimetyy-lisilyyli)asetamidia (0,74 ml, 4,4 mmoolia) dikloorimetaanissa (5 ml) -5°C:ssa. Reaktioseoksen annettiin olla paikoillaan 20 minuuttia samassa lämpötilassa ja kaadettiin jääveteen.

• 30 Uuttamalla seos etyyliasetaatilla ja haihduttamalla uutteet kuiviin vakuumissa saatiin raakaa tuotetta öljynä, joka kroma-tografioitiin silikageelikolonnissa (eluoitiin kloroformilla), jolloin saatiin otsikon yhdistettä amorfisena jauheena.

:T: Saanto 510 mg (48 %) .

60 8 5487 IR: ^maks (nu3oli) cm~1 1780, 1720, 1680.

* R. Bucourt ym., Tetrahedron 34, 2233 (1978).

Esimerkki 34 7-£l Z) - 2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-imino- 5 asetamidq7-3-£(Z) -1 -propenyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappo 2 3 4 (la, R = R = R = H)_

Seosta, jossa oli yhdistettä VIII (R^a = Tr, R^ = H) (810 mg, 0,76 mmoolia) ja 85-prosenttista muurahaishappoa (2 ml), sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Reak-10 tioseokseen lisättiin kloorivetyhappoa (0,1 ml). Sen jälkeen kun oli sekoitettu 2 tuntia ja haihdutettu kuiviin vakuumissa, jäännöstä trituroitiin isopropyylieetterin kanssa, jolloin saatiin raakaa tuotetta, joka kromatografioitiin C-18 silika-geeli-kolonnissa (eluoitiin 20-prosenttisella vesi-MeOH-15 seoksella). Eluaatti haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä amorfisena jauheena. Saanto 109 mg (35 %). Sp. 170°C (hajoten). Laskettu puhtaus 75 %.

IR: V . (KBr) cm"1 1770, 1760, 1630.

ITlclKS · * 20 UV: ({ , (pH 7 fosfaattipuskuri) nm (E. %) 225 maKs· I om (450), 282 (370).

NMR: cT(D20 + NaHCO-j) ppm 1,78 (3H, d, J=6 Hz, CH=CH- CH3), 3,64 (2H, ABq, J=18 Hz, 2-H), 5,40 (1H, d, J=4 Hz, 6-H), 5,70-6,25 (3H, m, 7-H, vinyyli-H), 7,14 (1H, d, tiatsoli-* 25 H) .

Esimerkki 35 1-asetoksietyyli-7-Z.(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- hydroksi-iminoasetamido7-3-£lZ)-1-propenyyli7-3-kefem-4- karboksylaatti (Ib, R^=R^=H, R^=AX)_ ; 30 Jäissä jäähdytettyyn ja sekoitettuun liuokseen, jossa 2 3 oli yhdistettä Ia (R =R =H, esimerkki 34) (270 mg, 0,66 mmoo lia) kuivassa DMF:ssa (2 ml), lisättiin natriumkarbonaattia (105 mg, 0,99 mmoolia) ja kolmena eränä 15 minuutin välein ; liuos, jossa oli 1-asetoksietyylibromidia (397 mg, 2,38 mmoo- ____: 35 lia) DMF:ssa (0,6 ml). Reaktiota tarkkailtiin TLC:n avulla 61 8 5487 (Merck Kieselgel 60 T2^, MeCN-H20 10:1). Seosta sekoitettiin vielä 30 minuuttia, jolloin näkyi kolme suurempaa täplää kohdilla Rf 0,11, 0,58 ja 0,75. Etyyliasetaatilla laimentamisen jälkeen (50 ml) muodostunut sakka suodatettiin pois, 5 ja suodos pestiin vedellä (3 kertaa) ja sen jälkeen kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös liuotettiin pieneen määrään kloroformia. Liuos kromatografioitiin Kieselgel 60-kolonnissa (20 g), joka 10 eluoitiin CHCl^Ha ja sitten MeOH:n ja CHCl^n seoksella 1:20. Fraktiot, joissa näkyi täplä TLC:ssä kohdalla Rf 0,58, yhdistettiin ja konsentroitiin pienitilavuiseksi. Konsentraat-tiin lisättiin isopropyylieetteriä, jolloin saatiin sakkaa, joka koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 61 mg 15 (19 %) haluttua asetoksietyyliesteriä. Sp. 120-125°C.

Laskettu puhtaus 75 % HPLC:n perusteella.* IR: V v. (KBr) cm-1 1765, 1665, 1610, 1 530, 1375.

ma. k s · UV: Λ . (etanoli) nm ( £) 223 (19000), 264 maks.

(12000), 285 (12000).

20 NMR: <f(CDCl3) ppm 1,50 (3H, d, J=5,0 Hz, CHCH3), 1,65 (3H, d, J=6,0 Hz, =CHCH3), 2,07 (3H, s, COCH3>, 3,45 (2H, br, SCH2), 5,08 (1H, d, J=5,5 Hz, 6-H), 5,5-6,0 (2H, m, 7-H & =CH), 6,15 (1H, d, J=10 Hz, 3-CH=), 6,96 (2H, m, tiatsoli-H & OCHCH3).

; 25 * Täyte: TSK gel 120 T (4 x 250 mm)

Liikkuva faasi: CH3CN/pH 6 fosfaattipuskuri (2/3).

Esimerkki 36 1-asetoksietyyli-7-^lZ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-asetoksi-iminoasetamido7-3-ZlZ)-1-propenyyli7~3-kefem-4-:.;30 karboksylaatti (Ib, R2=Ac, R3=H, R4=AX) ._

Sekoitettuun seokseen, jossa oli yhdistettä Ia (R2=R3=H) (200 mg, 0,49 mmoolia) ja K2C03:a (34 mg, 0,24 mmoolia) kuivassa DMF:ssa (5 ml), lisättiin 0°C:ssa liuos, ; jossa oli 1 -asetoksietyylibromidia (81 mg, 0,49 mmoolia) kui- ' , 35 vassa DMF:ssa (0^1 ml) Kalxumkarbonaattxa 3a bromxdxa lisät* * tiin vielä 4 kertaa 45 minuutin välein. Reaktioseosta 62 85487 tarkkailtiin HPLC:n avulla (Lichrosorb RP-18 4 x 300 mm, MeCN-H20 4:1). Lisäyksen jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Reaktioseos, jossa näkyi suurempi piikki kohdalla 4,5 min (retentioaika), laimennettiin etyyliasetaatilla 5 (40 ml), pestiin vedellä (x 3) ja kyllästetyllä NaCl-liuok- sella, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin pienitilavui-seksi. Konsentraatti kromatografioitiin Kieselgel 60 (8 g) kolonnissa eluoimalla. MeOH-CHCl^-seoksella 1:20. Eluaattia tarkkailtiin HPLC:n avulla ja fraktiot, joiden retentioajan 10 piikki oli kohdalla 4,5 min., yhdistettiin ja konsentroitiin noin 2 ml:ksi. Konsentraattiin lisättiin isopropyylieetteriä (20 ml), jolloin saatiin 190 mg (72 %) otsikon yhdistettä isopropyylieetteri-solvaattina. Laskettu puhtaus 85 %.

IR: V . (KBr) cm"1 3280 (w), 1770 (s), 1680 (m), maks.

15 1540 (m), 1215 (s).

UV: ^maks (MeOH) nm (£) 231 (17600), 293 (9800).

NMR: (f (CDC13+D20) ppm 1,5 (3H, d, J = 6 Hz, OCHCH3) , 1,65 (3H, d-d, J=7 & 1 Hz, =CHCH3), 205 (3H, s, C0CH3), 2,2 (3H, s, COCH3), 3,44 (2H, br, SCH2), 5,1 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 20 5,5-6,0 (1H, m, 3-CH=CH) , 5,9 (1H, d, J=5 Hz, 7-H) , 6,15 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH=CH) , 6,89 (1H, m, OCHCH3), 6,92 (1H, s, tiatsoli-H).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C21H23N5°8^2* 4/5Z.lcH3)2CH?20: .- :25 C, 50,04; H, 5,57; N, 11,31; S, 10,3 5;

Saatu: C, 49,78; H, 5,47; N, 10,90; S, 10,28.

Esimerkki 37 7~Z.(Z)-2- (2-aminotiatsol-4-yyli)-2- (asetyylioksi-iminoasetamido)J7-3-^7z) -1-propenyyli7~3-kefem-4-karboksyyli-30 happo (la, R2=Ac, R3=H) ._

Suspensiota, jossa oli 200 mg (1,30 mmoolia) 1-hyd-roksi-lH-bentsotriatsoli-monohydraattia, 631 mg (1,30 mmoolia) 2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-asetoksi-imino-etikka-- ; : happoa* ja 268 mg (1,30 mmoolia) disykloheksyylikarbodi-imidiä, .35 sekoitettiin tunnin ajan 5°C:ssa. Seokseen lisättiin 510 mg 63 85487 (1,26 mmoolia) difenyylimetyyli-7-amino-3-£(Z)-1-propenyyli/- 3-kefem-4-karboksylaattia. Seosta sekoitettiin 5 tuntia huoneen lämpötilassa ja laimennettiin 50 ml:11a etyyliasetaattia. Reaktioseos pestiin 1-norm. HCl:llä (25 ml), vedellä (25 ml) 5 ja suolaliuoksella (25 ml), kuivattiin MgSO^rlla ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silikageeli-kolonnissa (30 g), joka eluoitiin tolueeni-etyyliasetaatti-seoksella (10/1). Fraktiot, joissa näkyi täplä TLC:ssä kohdalla Rf 20 (tolueeni-etyyliasetaatti 10:1), yhdistettiin ja 10 haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäljelle jäänyt öljy

(noin 1,15 g) liuotettiin seokseen, jossa oli 8 ml 95-prosent-tista TFA:a ja 2 ml anisolia ja seosta sekoitettiin tunnin ajan jäähauteessa. Liuos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja trituroitiin isopropyylieetterin (40 ml) ja n-heksaanin (10 ml) 15 kanssa, jolloin saatiin 432 mg raakaa tuotetta, joka puhdistettiin kolonnissa, jossa oli täytettä Bondapak C-18, eluoitiin 30 % vettä sisältävällä MeOH:lla. Fraktiot, joissa oli piikki retentioajan 6,9 min. kohdalla (HPLC), yhdistettiin, konsentroitiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 153 mg 20 (27 %) otsikon yhdistettä amorfisena jauheena, sp. 155°C

(hajoten). Laskettu puhtaus 65 %. HPLC (Lichrosorb RP-18 4 x 300 mm, MeOH-pH 7 puskuri 3:7); retentioaika, 6,9 min.

IR: V , (KBr) cm~1 3260, 1775, 1765, 1665.

maks.

UV: K maks (etanoli) nm (£) 230 (20100), 292 25 (12700) .

NMR: ^(DMSO-dg) ppm 1,63 (3H, dd, J=1 & 7 Hz, =CHCH3), 2,16 (3H, s, OAc), 3,55 (br.s, 2H, 2-H), 5,22 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,70 (1H, m, =CHCH3>, 5,76 (1H, dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6,10 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH=CH-), 7,05 (1H, s, -30 tiatsolia-H), 7,28 (2H, s, -NH2), 9,80 (1H, d, J=8 Hz).

* Japan Kokai 59-184186 (10/19/84, Meiji Seika).

64 85487

Esimerkki 38 1-asetoksietyyli-7-/(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-asetoksi-iminoasetamido7-3-/~(Z) -1 -propenyyli7-3-kefem-4-karboksylaatti (Ib/ R^=AC, R~1=H, R^=AX)_ 5 Liuokseen, jossa oli 20 mg (0,05 mmoolia) yhdistettä 2 3

Ia (R =Ac, R =H) 0,2 mlrssa kuivaa DMF:a, lisättiin 6 mg (0,05 mmoolia) K2C03:a ja seosta sekoitettiin 5 minuuttia 5°C:ssa. Seokseen lisättiin 1-asetoksietyylibromidia (10 μΐ) ja suspensiota sekoitettiin tunnin ajan samassa lämpötilassa.

10 Reaktioseos laimennettiin 5 ml:11a etyyliasetaattia, pestiin peräkkäin vedellä (2 ml x 3) ja suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä trituroitiin 10 ml:n kanssa isopropyylieetteriä, jolloin saatiin haluttua asetoksietyyliesteriä, joka suodatettiin 15 erilleen ja kuivattiin. Saanto 15 mg (63 %). Tuotteen spektri-arvot olivat yhdenmukaiset esimerkissä 36 valmistetun yhdisteen arvojen kanssa.

Esimerkki 39

Pivaloyylioksimetyyli-7-Z~(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-20 yyli) -2-hydroksi-iminoasetamido7-3-^’(Z) -1 -propenyyli7-3- kefem-4-karboksylaatti (Ib, R2=R3=H, R^=PV)_

Sekoitettuun seokseen, jossa oli yhdistettä Ib 2 3 (R =R =H, (200 mg, 0,49 mmoolia) ja Na2C03:a (26 mg, 0,24 mmoolia) kuivassa dimetyyliasetamidissa (5 ml), lisättiin .25 -5°C:ssa pivaloyylioksimetyylijodidia (118 mg, 0,49 mmoolia) ’ / ja seosta sekoitettiin 45 minuuttia. Seokseen lisättiin jäl leen natriumkarbonaattia (13 mg, 0,12 mmoolia) ja jodidia (59 mg, 0,12 mmoolia) ja seosta sekoitettiin samassa lämpö-. 1: tilassa. 30 minuutin kuluttua seos, jossa näkyi täpliä Rf- ; 30 kohdilla 0,60 (suurempi), 0,70 (pienempi) ja 0,80 (pienempi) : : TLC:ssä (Merck Kieselgel 60 ^254 ' MeCN-H2° 20:^)' laimennet tiin etyyliasetaatilla (25 ml) ja liuos pestiin vedellä (3 kertaa) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin pieneen 35 määrään CHCl-^a ja laskettiin Kieselgel 60 (13 g) -kolonnin . · 65 85487 läpi, joka oli pesty CHC^illa (50 ml) ja eluoitiin MeOH-CHCl^-seoksella 1:20 (150 ml). Fraktiot, joissa näkyi TLC:ssä täplä kohdalla Rf 0,60, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin bentseeniin ja liuos lyofilisoitiin, 5 jolloin saatiin 63 mg (25 %) otsikon yhdistettä. Sp. 101-104°C. Laskettu puhtaus 80 %. HPLC (Develosil 4 x 100 mm, MeCN-pH 7 fosfaattipuskuri 3:2): retentioaika, 4,6 min.

IR: . (KBr) cm"1 1 780, 1 755, 1670, 1 530, 1 120.

maks.

UV: ^maks (Me0H) nm (£> 270 (12000).

10 NMR: £ (CDC13 + D20) ppm 1,22 (9H, s, 3 x CH3), 1,56 (3H, dd, J=1 & 7 Hz, =CHCH3), 3,45 (2H, m, S-CH2), 5,11 (1H, d, J=4 Hz, 6-H) , 5,5-5,95 (4H, m, 7-H, =CHCH3 & 0CH20), 6,14 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH=), 7,02 (1H, s, tiatsoli-H) .

1 5 Esimerkki 40

Asetoksimetyyli-7-ZlZ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamidq7-3-/1[Z) -1 -propenyyli7~3-kefem-4-karboksylaatti (Ib, R^ = R^=H, R^=AM*)__

Sekoitettuun suspensioon, jossa oli yhdistettä Ia 2 3 20 (R =R =H) (280 mg, 0,68 mmoolia) ja Na2CC>3:a (36 mg, 0,34 mmoolia) kuivassa DMF:ssa (5 ml), lisättiin -10°C:ssa 10 minuutin aikana liuos, jossa oli asetoksimetyylibromidia kuivassa DMF:ssa (104 mg, 0,68 mmoolia/100 μΐ). 30 minuutin kuluttua lisättiin vielä Na2CC>3:a (18 mg, 0,17 mmoolia) ja . .25 bromidiliuosta (52 mg, 0,34 mmoolia/50 μΐ) pienin erin 10 ‘ / minuutin aikana. Seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa — 30 minuuttia. Reaktioseos, jonka TLC:ssä (Merck Kieselgel 60 F254' MeCN-H2° 1°:1) näkyi neljä täplää kohdilla Rf 0,10 (BMY-28232),0,15, 0,60 ja 0,75, laimennettiin etyyliasetaa- 30 tiliä (25 ml), pestiin vedellä (x 3) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin pieneen määrään CHCljta ja pantiin Kieselgel 60-kolonniin (18 g), joka pestiin CHCl3:lla (50 ml), ja eluoitiin MeOH-CHCl3-seoksella (1:20, 250 ml). Fraktiot, 35 joiden TLC:ssä näkyi täplä kohdalla Rf 0,60, yhdistettiin ja 66 8 5487 haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin bentsee-niin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 45 mg (14 %) otsikon yhdistettä. Sp. 107-110°C. Laskettu puhtaus 70 %. HPLC (Lichrosorb 4 x 300 mm, MeCN-I^O 2:3): retentioaika 6,0 min.

5 IR: ^maks <KBr) cm"1 1770, 1665, 1530, 1370, 1200, 1000, 985.

UV: ^maks (Me0H) nm (£) 268 (10900).

NMR: 6 (CDC13 + D20) ppm 1,65 (3H, s, J=7 Hz, =CHCH3), 2,1 (3H, s, C0CH3) , 3,43 (2H, br, SCH2), 5,1 (1H, d, 10 J=5 Hz, 6-H), 5,3-5,95 (4H, m, 7-H, =CHCH3 & 0CH20), 6,15 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH=), 6,96 (1H, s, tiatsoli-H).

* AM = -CH2OCOCH3

Esimerkki 41

Difenyylimetyyli-7-amino-3-£]E)-1-butenyyli7-3-15 kefem-4-karboksylaatti-hydrokloridi (XIII (E), R3=CH3, R4a = CHPh2_

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-amino-3-/”(Z)-1-butenyyli7-3-kefem-4-karboksylaatti-hydrokloridia (esimerkistä 6) (2,9 g, 6,5 mmoolia) ja bentsofenonia (1,2 g, 6,5 mmoolia) 20 metanolissa (300 ml), säteilytettiin matalapaineisella Hg- lampulla (2537 A, 6W) huoneen lämpötilassa 26 tuntia. Liuotin haihdutettiin pois vakuumissa ja jäännös liuotettiin kloroformiin. Liuosta käsiteltiin hiilen kanssa ja suodatettiin. Suodos laimennettiin eetterillä, jolloin saostui 2,2 g (76 %) *·.:25 otsikon yhdisteen E-isomeeria, jossa oli epäpuhtautena 10 % Z-isomeeria, jota käytettiin seuraavassa vaiheessa enempää ... puhdistamatta.

IR: Vmaks (KBr) cm"1 1780, 1720, 1625.

UV: Λ , (MeOH) nm (£) 298 (10200).

: : : maks.

: : 30 NMR: O(DMS0-d6) ppm 0,97 (3H, t, J = 7 Hz, CH3) , 2,15 (2H, m, CH2CH3), 3,84 (2H, br-s, 2-H), 5,15 (1H, d, J= 5 Hz, 6-H), 5,30 (1H, d, J=5 Hz, 7-H), 6,65 (1H, d, J=16 Hz, 3-CH = ), 6,97 (1H, s, OCH) , 7,45 (10H, s, fenyyli-H) .

* HPLC: Lichrosorb RP-18 (4 x 250 mm), CH3CN - pH 7 ....r 35 fosfaattipuskuri 3:2, 2 ml/min. Retentioaika: Z-isomeeri 5,1 min.; E-isomeeri 6,7 min.

• · 67 85487

Esimerkki 42

Difenyylimetyyli-7-£iz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido7-3-/f(E) -1 -butenyyli7-3-kefem-4- karboksylaatti (XIV (E) , R2=R3=CH3, R4a = CHPh^)_ 5 Suspensiota, jossa oli raakaa difenyylimetyyli-7- amino-S-^E)-1-butenyyli7~3-kefem-4-karboksylaatti-hydro-kloridia (1,97 g, 4,3 mmoolia) etyyliasetaatissa (30 ml), ravisteltiin NaHCO^in vesiliuoksen kanssa, jolloin saatiin kirkas kaksikerroksinen liuos. Orgaaninen kerros erotettiin, 10 pestiin vedellä ja sitten kyllästetyllä NaClrn vesiliuoksella, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin DMF:iin (20 ml). Liuokseen lisättiin 1-/(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetoksi/-bentsotriatsolia (2,07 g, 6,5 mmoolia). Seosta sekoitettiin 15 huoneen lämpötilassa tunnin ajan ja laimennettiin etyyliasetaatilla (100 ml). Laimennettu liuos pestiin peräkkäin NaHCO^sn vesiliuoksella, vedellä ja NaCl:n vesiliuoksella, kuivattiin MgS0^:lla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silikageelikolonnissa (50 g) ja 20 eluoitiin tolueeni-etyyliasetaatti-seoksella 2:1, jolloin saatiin 1,58 g (61 %) otsikon yhdistettä.

IR: V . (KBr) cm"1 1770, 1720, 1670.

maks.

UV: ^ maks (Me0H) nm (£) 297 Π8800).

NMR: ό (CDC13 + DjO) ppm 0,97 (3H, t, J=7 Hz, ' '-:25 CH2CH3), 2,12 (2H, m, CH2CH3), 3,52 (2H, s, 2-H) , 4,00 (3H, ·: s, OCH3), 5,10 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H) , 5,93 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 5,7-6,3 (1H, m, =CH-CH2), 6,74 (1H, s, tiatsoli-H), 6,96 (1H, s, OCH), 7,25 (10H, s, fenyyli-H).

es 85487

Esimerkki 43 7 — Z.(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-imino-asetamidoZ-S-^E) -1 -butenyyH7-3-kefem-4-karboksyylihappo (Ia (E), R2=R3=CH3)_ 5 Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-/"(Z)-2-(2- aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoasetamidq7-3-Z’(E) -1-butenyyl£7-3-kefem-4-karboksylaattia (650 mg, 1,1 mmoolia), TFA:ta (3 ml) ja anisolia (1 ml), sekoitettiin 5°C:ssa 30 minuuttia ja laimennettiin isopropyylieetterillä. Muodostunut 10 sakka koottiin talteen suodattamalla. Se liuotettiin muurahaishappoon (3 ml) ja kromatografioitiin kolonnissa, jossa oli täytettä (100 ml) PrepPAK cartridge (Waters), joka pestiin vedellä ja eluoitiin sitten 30-prosenttisella meta-nolilla. Eluaattia tarkkailtiin HPLC:n avulla ja halutut 15 fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 277 mg (59 %) otsikon yhdistettä*. Sp. >170°C (hajoten asteettain). Laskettu puhtaus 90 %.

IR: ^maks (KBr) cm_1 1770' 166°* UV: /\ , (pH 7 fosfaattipuskuri) nm ( £) m ci K s · 20 232 (15700), 292 (22400).

NMR: 0(O20 + NaHCC>3) ppm 1,18 (3H, t, J=7 Hz, CH2CH3), 2,30 (2H, s, CH2CH3), 3,83 (2H, s, 2-H), 4,15 (3H, s, OCH3), 5,37 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,92 (1H, d, J=5 Hz, 7-H), 5,9-6,4 (1H, m, =CHCH2), 5,66 (1H, d, J=16 Hz, 25 3-CH=), 7,18 (1H, s, tiatsoli-H).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C.j gN^O^S^ 1/2H20: C, 45,73; H, 4,51; N, 15,69; S, 14,36;

Saatu: C, 4 5,63; H, 4,28; N, 15,33; S, 14,27.

- 2 3 * 3-trans-butenyyli-kefalosporiini Ia (E, R =R =CH3) , :30 joka oli identtinen esimerkissä 15 selostetun yhdisteen kanssa.

69 85487

Esimerkki 44 1-asetoksietyyli-7-/lZ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- metoksi-iminoasetamido7-3-/"(E) -1-butenyyl47~3-kefem-4- karboksylaatti (Ib (E), R2=R3=CHn, R^ = AX) j 2 3 5 Seosta, jossa oli yhdistettä Ia (E) (R =R =CH3) (438 mg, 1 mmoolia) ja I^CO^a (207 mg, 1,5 mmoolia) DMF: ssa (10 ml), käsiteltiin 1-asetoksietyylibromidin kanssa (250 mg, 1,5 mmoolia) samalla menetelmällä, joka on selostettu esimerkissä 16, jolloin saatiin 350 mg (67 %) haluttua AX-este-10 riä, joka oli identtinen esimerkissä 16 saadun yhdisteen kanssa. Sp. 110-115°C. Laskettu puhtaus 90 %, HPLC:n perusteella.

IR: ^maks (KBr) Cm_1 1760 (br·)' 1670, 1610.

UV: ^maks (Me0H> nm (£) 232 (16600), 298 (19300).

15 NMR: rf(CDCl3) ppm 1,05 (3H, t, J=7 Hz, CH2CH3), 1,54 (3H, d, J=6 Hz, CHCH-j) , 2,08 (3H, s, COCH3), 2,0-2,4 (2H, m, -CH2CH3), 3,57 (2H, s, 2-H), 4,05 (3H, s, OCH3), 5,07 (1H, d, J = 5 Hz, 6-H), 5,8-6,3 (2H, m, 7-H & =CHCH2-), 6,86 (1H, s, tiatsoli-H), 6,8-7,1 (2H, m, OCH & 3-CH=) .

20 Analyysi, laskettu yhdisteelle C21H25N5°7S2* 1/4/(CH3)2CH/20: C, 49,21; H, 5,23; N, 12,75; S, 11,68;

Saatu: C, 49,44; H, 5,28; N, 12,24; S, 11,70.

Esimerkki 45 . .25 7-amino-3-/(E)-1-propenyyli/-3-kefem-4-karboksyyli- happo (XIII (E), R3=R4a=H_

Liuosta, jossa oli 7-amino-3-£’(Z)-1 -propenyy 14^-3-kefem-4-karboksyylihappoa* (1,2 g, 5 mmoolia) ja bentsofenonia ·/: (900 mg, 5 mmoolia) metanolissa (800 ml), jossa oli 1 ml - ; :30 6-norm. kloorivetyhappoa, säteilytettiin matalapaineisella Hg-lampulla (2537 A, 6W) huoneen lämpötilassa 44 tuntia. Reaktioseos haihdutettiin kuiviin ja jäännös hajoitettiin • · seoksessa, jossa oli 0,15-norm. HCLtää (200 ml) ja eetteriä (200 ml). Vesikerros erotettiin, käsiteltiin aktiivihiilen 35 kanssa ja suodatettiin. Suodoksen pH säädetiin laimealla 70 85487

NaOH-liuoksella arvoon 3 ja jäähdytettiin, jolloin saatiin sakkaa. Se koottiin talteen suodattamalla ja pestiin vedellä ja asetonilla, jolloin saatiin 476 mg otsikon yhdistettä, E-isomeeria, joka suli 245°C:ssa (hajoten asteettain). Toinen 5 erä (195 mg) saatiin konsentroimalla suodos 30 ml:ksi.

Kokonaissaanto 671 mg (56 %). Tuote sisälsi vähemmän kuin 5 % vastaavaa Z-isomeeria.

IR: ^maks (KBr) Cm”1 1800' 1620' 1540, 1420, 1360.

UV: ^maks (PH 7 fosfaattipuskuri) nm (£) 10 292 (15000).

NMR: <$(D20 + Na2C03) ppm 1,78 (3H, d, J = 6 Hz, =CH-CH3), 3,62 (2H, s, 2-H), 5,03 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,3-6,2 (2H, m, =CH & 7-H) , 6,52 (1H, d, J=16 Hz, 3-CH=C) .

Analyysi, laskettu yhdisteelle ci oH-| 2N2°3S ‘ ^2H20: 15 C, 48,18; H, 5,25; N, 11,24; S, 12,86;

Saatu: C, 47,88; H, 4,83; N, 10,79; S, 12,83.

* Z- ja E-isomeerien 4:1-seos Esimerkki 46 7-Z(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-imino- 20 asetamidö//-3-/T(E) -1 -propenyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappo (Ia (E), R2=CH3, R3=H)_

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 7-amino-3-trans- 3 4a propenyyli-johdannaisia XIII (E, R =R =H) (720 mg, 3 mmoolia) ja natriumvetykarbonaattia (504 mg, 6 mmoolia) 50-prosentti--‘•.-25 sessa DMF:ssa (60 ml), lisättiin 1-£lZ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetoksiTbentsotriatsolia (954 mg, 3 mmoolia) ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Neljänä eränä 30 minuutin välein lisättiin vielä aktiivista esteriä (1,81 g, 6 mmoolia). Seosta sekoitettiin vielä 2 tuntia huoneen lämpö-30 tilassa ja laskettiin kolonnin läpi, jossa oli täytettä prepPAK-C^g cartridge (300 ml, Waters). Kolonni pestiin vedellä ja sitten eluoitiin peräkkäin 10-prosenttisella meta-nolilla ja 20-prosenttisella metanolilla. 20-prosenttisella : metanolilla eluoituneet fraktiot, joissa näkyi piikki retentio- ....;35 ajan 5,57 min. kohdalla HPLC:ssä, koottiin yhteen ja haihdutet- ____: tiin kuiviin. Jäännös liuotettiin metanoliin ja suodatettiin.

71 8 5 487

Suodos konsentroitiin 5 mltksi ja jäännöstä trituroitiin eetteri-isopropyylieetteri-seoksen kanssa, jolloin saatiin 805 g (63 %) otsikon yhdistettä, joka suli 180°C:ssa (hajoten asteettain). HPLC:n perusteella puhtaus 80 %.

5 IR: ^maks (KBr) cm”1 1770, 1670, 1630, 1540, 1380, 1040.

UV: ^maks (Me0H> nm (£ ) 234 (17000), 293 (20000).

NMR: <£(D20 0 Na2C03) ppm 1,93 (3H, d-d, J=6 & 1,5

Hz, =CHCH3), 3,76 (2H, s, 2-H), 4,12 (3H, s, OCH3), 5,32 10 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H) , 5,86 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 5,8-6,3 (1 H, m, =CH-CH3), 6,61 (1H, d-d, J=16 & 1,5 Hz, CH=C), 7,13 (1H, s, tiatsoli-H).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C^gH^N3O^S2: C, 45,38; H, 4,05; N, 16,54; S, 15,14; 15 Saatu; C, 45,57; H, 4,37; N, 15,94; S, 13,90; C, 45,41; H, 4,29; N, 15,76; S, 13,62.

* Täyte; Lichrosorb RP-18 (4 x 300 mm), liikkuva faasi; MeOH-pH 7 puskuri (35:65).

Esimerkki 47 20 1-asetoksietyyli-7-^lz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- metoksi-iminoasetamido7-3-£(E)-1-propenyyli7“3-kefem-4-karboksylaatti (Ib(E), R2=CH3, R3=H, R4=AX)_

Sekoitettuun seokseen, jossa oli 317 mg (0,75 mmoolia) 2 3 trans-propenyylikefalosporiinia Ia (E, R =CH3, R =H) ja 104 mg 25 (0,75 mmoolia) kaliumkarbonaattia 5 ml; ssa DMF:a, lisättiin 0-5°C:ssa liuos, jossa oli 167 mg (Immooli) 1-asetoksietyyli-bromidia 0,5 ml;ssa DMF:a ja seosta sekoitettiin 5°C:ssa 15 minuuttia. Lisättiin vielä lisäerät kaliumkarbonaattia (204 mg, 1,5 mmoolia) ja bromidiliuosta DMF:ssa (334 mg, 30 2 mmoolia/1 ml) kahtena eränä 15 minuutin aikana reaktion saattamiseksi loppuun. Seosta sekoitettiin 5°C:ssa vielä 30 minuuttia ja laimennettiin 150 ml:11a etyyliasetaattia. Laimennettu liuos pestiin vedellä ja NaClrn vesiliuoksella, : kuivattiin MgS04:lla, ja haihdutettiin kuiviin, öljymäinen jäännös liuotettiin pieneen tilavuusmäärään CHCl3:a ja 72 85487 kromatografioitiin silikageelikolonnissa (Merck Kieselgel 60, 40 g), joka pestiin kloroformilla ja eluoitiin kloro-formi-mecanoli-seoksella (50:1). Halutut fraktiot, joissa näkyi täplä TLC:ssa kohdalla Rf 0,40 (silikageeli, kloro-5 formi-metanoli 10:1) ja piikki retentioajan 7,7 min. kohdalla HPLC:ssä (asetonitriili-pH 7 puskuri, 1:1), yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin öljymäistä jäännöstä, jota trituroitiin eetterin ja isopropyylieetterin seoksen kanssa, jolloin saatiin 270 mg (70,5 %) haluttua otsikon 10 esteriä, joka suli 140°C:ssa (hajoten). Laskettu puhtaus 80 % HPLC:n perusteella.

IR: ^maks (KBr) Cm~1 1770, 1670' 162°' 1540' 1380, 1210, 1100, 1070, 1040.

UV: ^maks (Me0H) nm ( €> 234 Π7000), 297 (19000).

15 NMR: <f(CDCl3) ppm 1,53 (3H, d, J = 5 Hz, C-CH3), 1,86 (3H, d, J=6 Hz, CH=CH-CH3), 2,08 (3H, s, OCOCH3), 3,55 (2H, br-s, 2-H), 4,05 (3H, s, OCH3), 5,07 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,38 (2H, br-s, NH2), 5,95 {1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,7-6,2 (1H, m, CH-CH-CH-j) , 6,81 (1H, s, tiatsoli-H) , 6,9-20 7,1 (2H, m, CH-CH3 & CH=CH-CH3), 7,55 (1H, d, J=8 Hz, NH).

Esimerkki 48

Difenyylimetyyli-7-Zlz)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoasetamido7-3-Z~( trifenyylifosf oranyli- deenl)-metyyli7-3-kefem-4-karboksylaatti (VII, R2a = CHj)_ . 25 Liuosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-£*(Z)-2- (2- trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamidq7-3-£ltrifenyylifosfonio)-metyyli7“3-kefem-4-karboksylaatti-jodidia* (3,0 g, 2,5 mmoolia) dikloorimetaanissa (40 ml), ravisteltiin 1-norm. NaOH:n kanssa (10 ml) kunnes lähtöaineen 30 täplä katosi TLC:ssa (silikageeli, CHCl3~MeOH = 10:1).

Orgaaninen kerros erotettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuu-missa. Jäännöstä trituroitiin n-heksaanin kanssa ja tuote koottiin suodattamalla, jolloin saatiin 2,5 g (93 %) otsikon yhdistettä.

73 85487 IR: ^maks (KBr) cm"1 1760, 1740, 1560.

UV: Amaks< (CH2C12) nm (£) 310 (8800), 388 (15000).

* US 4 486 586, Column 33, Preparation No. 17,

Compound VIII-1.

5 Esimerkki 49

Difenyylimetyyli-7-^~(Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol- 4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamidq7-3-^3-(Z)-asetoksi-1- 2a propenyyliy-3-kefem-4-karboksylaatti (VIII, R = CH.,,

3 J

R = OAc)_ 10 Seosta, jossa oli difenyylimetyyli 7-£\z)-2-(2- trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamidq7-3- (trifenyylifosforanylideeni)-metyyli-3-kefem-4-karboksy- 1) laattia (2,13 g, 2,9 mmoolia) ja asetoksiasetaldehydiä (0,61 g, 6,0 mmoolia) dikloorimetaanissa (10 ml), sekoitet-15 tiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös kromatografioitiin silikageelikolon-nissa. Kolonni eluoitiin n-heksaani-CHCl^-seoksella (1:2) ja haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin. Haihduttamalla liuotin pois vakuumissa saatiin 1,0 g (56 %) otsikon 20 yhdistettä.

IR: Ό (neste) cm"1 1785, 1735, 1675, 1430, mdJc s · 1230, 1180.

NMR: <f(CCl.) ppm 6,08 (1H, d, J=13 Hz).

1) q J. Corbet ja C. Benezra, J. Org. Chem. 46, 25 1141 (1981 ).

Esimerkki 50

Difenyylimetyyli-7-amino-^(Z)-3-asetoksi-1-propenyyl47“ 3-kefem-4-karboksylaatti (XIII, R^ = OAc)_ Jäähdytettyyn seokseen, jossa oli LiBr:a (8,6 g, 30 o,1 moolia) kuivassa DMF:ssa (40 ml), lisättiin peräkkäin liuos, jossa oli difenyylimetyyli-7-bentsylideeniamino-3-£\ trifenyylifosforanylideeni)-metyyli7~3-kefem-4-karboksy-laattia (XI) (7,3 g, 10 mmoolia) kuivassa metyleenikloridissa • » · : (200 ml) ja asetoksiasetaldehydiä (3,06 g, 0,03 moolia), ja 35 seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 44 tuntia. 50 ml:ksi 74 8 5487 konsentroinnin jälkeen öljymäinen jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla ja liuos pestiin vedellä, kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivattiin MgSO^illa ja konsentroitiin 100 mlrksi. Sekoitettuun konsentraattiin lisättiin liuos, jossa oli 5 Girard T-reagenssia (5 g, 0,03 moolia) metanolissa (100 ml), joka sisälsi 1 ml etikkahappoa, ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 40 minuuttia. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäännös liuotettiin 300 ml:aan etyyliasetaattia ja liuos pestiin natriumvetykarbonaattia-liuoksella, vedellä 10 ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella ja kuivattiin MgS04:lla.

Haihduttamalla liuotin pois saatiin Öljymäinen jäännös, joka kromatografioitiin silikageelikolonnissa (Merck Kiesel gel 60, 100 g) eluoimalla kloroformilla. Eluaattia tarkkailtiin TLC:n avulla (kloroformi: metanoli =30:1) ja fraktiot, joissa 15 näkyi täplä kohdalla Rf 0,30, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin öljymäistä jäännöstä, jota trituroi-tiin eetteri-isopropyylieetteri-seoksen kanssa, jolloin saatiin 2,8 g (60 %) otsikon yhdistettä, sulaen 130-135°C:ssa (hajoten).

20 IR: V (KBr) cm-1 1770, 1720, 1390, 1370, 1220, 1100.

UV: ^maks (MeOH) nm ( £) 286 (7500).

NMR: ^(CDC13) ppm 1,83 (2H, br s, NH2) , 2,02 (3H, S, COCH3), 3,27 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,65 (1H, d, J=18 Hz, . .25 2-H), 3,9-4,9 (2H, m, CH2OAc), 4,78 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,02 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,3-5,8 (1H, m, =CH-CH2-), 6,27 (1H, d, J=11 Hz, CH=CH-CH2), 6,97 (1H, s, CH-Ph), 7,2- 7,6 (10H, m, fenyyli-H).

Analyysi, laskettu yhdisteelle C25H24N2°5S: 30 C, 64,64; H, 5,21; N, 6,03; S, 6,90;

Saatu: C, 64,79; H, 5,33; N, 5,89; S, 6,94.

75 85 487

Esimerkki 51

Difenyylimetyyli-7-Zlz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)- 2- metoksi-iminoasetamido7“3-£lZ)-3-asetoksi-1-propenyyli/- 3- kefem-4-karboksylaatti (XIV, R^=OAc)_ 5 Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-amino-3-£iz)-3- asetoksi-1-propenyyli7~3-kefem-4-karboksylaattia (2,32 g, 5 mmoolia) ja bentsotriatsol-1-yyli-(Ζ)-2-(2-aminotiatsol- 4- yyli)-2-metoksi-iminoasetaattia (1,9 g, 6 mmoolia) 100 ml:ssa kuivaa THF:a, sekoitettiin huoneen lämpötilassa 10 20 tuntia ja liuos haihdutettiin kuiviin. Etyyliasetaatilla (200 ml) uuttamisen jälkeen liuos pestiin natriumvetykarbo-naatin vesiliuoksella, kyllästetyllä NaCl-liuoksella ja vedellä, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin öljymäistä jäännöstä, joka kromatografioitiin 15 silikageelikolonnissa (Kiesel gel 60, 80 g, Merck), eluoi- malla peräkkäin kloroformilla ja kloroformi-metanoli-seoksella (50:1). Halutut fraktiot, jotka eluoituivat kloroformi-metanoli-seoksella (50:1), yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin jäännöstä, jota trituroitiin eetteri-20 isopropyylieetterin kanssa, jolloin saatiin 1,97 g (61 %) otsikon yhdistettä, joka suli 120°C:ssa (hajoten asteettain).

IR: V . (KBr) cm"1 1780, 1730, 1670, 1610, maks.

1530, 1370, 1220, 1030.

UV: /¾ (MeOH) nm ( £) 286 (14000).

..:25 NMR: (CDCl-j) ppm 1,97 (3H, s, COCH3), 3,42 (2H, s, 2-H), 4,02 (3H, s, OCH3), 5,15 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 6,03 (1H, d-d, J=4,5 & 9 Hz, 7-H) , 6,27 (1H, d, J=11 Hz, CH=CH-CH2), 6,78 (1H, s, tiatsoli-H), 6,94 (1H, s, CHPh), 7,2-7,6 (10H, m, fenyyli-H), 8,03 (1H, d, J=9 Hz, NH).

76 85487

Esimerkki 52 7-Z”(Z) -2- (aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoaset- amidq/-3-/“(Z) -3-asetoksi-1-propenyyli7~3-kefem-4-karboksyy- 9 3 lihappo (Ia, R -CH^, R = OAc)_ 5 A) Yhdisteestä XIV (R^=OAc)- Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-/"(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-metoksi-iminoasetamido7-3-/j(Z) -3-asetoksi-1 -propenyyli,7-3-kefem- 4-karboksylaattia (1,88 g, 2,9 mmoolia), 3 ml anisolia ja 9 ml TFA:a, sekoitettiin huoneen lämpötilassa 10 minuuttia 10 ja seos konsentroitiin 5 ml:ksi. 50 ml:11a eetteriä ja 100 ml:11a isopropyylieetteriä laimentamisen jälkeen muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 2 3 1,5 g raakaa yhdisteen Ia (R =CH3, R =OAc) trifluoriasetaat-tia. Se kromatografioitiin kolonnissa, jossa oli täytettä 15 prepPAK-C10 cartridge (400 ml, Waters), joka eluoitiin peräkkäin vedellä ja 20-prosenttisella metanolilla. Halutut fraktiot, jotka eluoituivat 20-prosenttisella metanolilla, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin kiinteätä ainetta, joka liuotettiin 100 ml:aan metanolia ja liuosta 20 käsiteltiin aktiivihiilen kanssa ja konsentroitiin 10 ml:ksi. Jäähdytettyyn konsentraattiin lisättiin eetteriä (200 ml) ja muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla, pestiin eetterillä ja kuivattiin vakuumissa Ρ2θ5:η päällä, jolloin saatiin 938 mg (67 %) otsikon yhdistettä, joka suli 160°C:ssa :25 (hajoten asteettain).

IR: ^maks (KBr) cm~1 1770' 1720' 1670, 1620, 1530, 1370, 1230, 1030.

UV: ^maks ^pH 7 fosfaattiPus^ur nm ( €.) 231 (17000), 284 (16000) .

30 NMR: <i(D20 + Na2C03) ppm 2,22 (3H, s, COCH3), 3,47 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,76 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 4,13 (3H, s, OCH3), 5,39 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,92 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,36 (1H, d, J=11 Hz, CH=CH-CH2), 7,14 (1H, s, tiatsoli-H) .

.35 Analyysi, laskettu yhdisteelle C^gH^gN3O^S2*1/2H20: C, 44,07; H, 4,11; N, 14,28; S, 13,07; \ Saatu: C, 44,29; H, 4,07; N, 13,98; S, 13,03.

77 8 5 487 B) Yhdisteestä VIII (R2a=CH,, R =OAc) -

Difenyylimetyyli-7-/7z)-2-(trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido7-3-/p[Z) -3-asetoksi-1 -propenyyli7~ metyyli-3-4-karboksylaatti (1,0 g, 1,12 mmoolia) liuotettiin 5 85-prosenttiseen muurahaishappoon (5 ml) ja liuosta sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Lisättiin kloorivety-happoa (0,1 ml) ja sekoittamista jatkettiin edelleen 2 tuntia. Haihduttamalla suoritetun ylimääräisen muurahaishapon poistamisen jälkeen seosta trituroitiin isopropyylieetterin kanssa 10 raa'an tuotteen saostamiseksi, joka koottiin talteen suodattamalla ja puhdistettiin kromatografioimalla, jolloin saatiin 154 mg (31 %) otsikon yhdistettä, joka oli identtinen menetelmällä A saadun tuotteen kanssa.

Esimerkki 53 1 5 1 -asetoksietyyli-7-/f(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2-metoksi-iminoasetamido7~3-^7(Z) -3-asetoksi-1 -propenyyli.7-3-kefem-4-karboksylaatti (Ib, R^=CH·^, R^=OAc, R^=AX)_ Jäähdytettyyn ja sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2 3 yhdistettä Ia (R =CH.j, R =OAc) (362 mg, 0,75 mmoolia) DMF:ssa 20 (5 ml), lisättiin KjCO^ta (312 mg, 2,25 mmoolia) ja liuos, jossa oli 1-asetoksietyylibromidia (501 mg, 3 mmoolia) DMFsssa (1,5 ml) kolmena eränä 15 minuutin välein, ja seosta sekoitettiin vielä 30 minuuttia. Etyyliasetaatilla (200 ml) laimentamisen jälkeen liuos pestiin vedellä, kyllästetyllä NaCl-liuok-.:25 sella, kuivattiin ja haihdutettiin kuiviin, öljymäinen jäännös puhdistettiin kromatografioimalla silikageelikolonnissa (Merck Kiesel gel 60, 40 g) eluoimalla peräkkäin kloroformilla ja kloroformi-metanoli-seoksella (50:1). Fraktiot, joissa näkyi piikki retentioajan 6,1 min. kohdalla HPLCtssä*, koottiin 30 yhteen ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin jäännös, jota trituroitiin eetterin kanssa, jolloin saatiin 236 mg (68 %) otsikon yhdistettä. Laskettu puhtaus 60 %. Tämä yhdiste sisälsi epäpuhtautena noin 25 % Δ^-isomeeria. Sp. 110°C (hajoten asteettain).

78 85487 IR: ^maks (KBr) cm~1 1780, 1760, 1740, 1670, 1610, 1530, 1370, 1230, 1070, 1030.

UV: ^ maks (Me0H> nm (€) 268 (15000).

NMR: <f (CDC13) ppm 1,51 (3H, d, J=6 Hz, CH-CH3), 5 2,04 (3H, s, COCH3), 2,08 (3H, s, COCH3), 3,03 ja 3,60 (1,5H, ABq, J=18 Hz, 2-H), 4,05 (3H, S, OCH-,), 6,17 (0,3H, 0 ^ s, Δ -H), 6,26 (1H, d, J=11 Hz, CH=CH-CH2).

* HPLC (Lichrosorb RP-18, 4 x 300 mm, 50-prosenttinen asetonitriili-puskuri (pH 7).

10 Esimerkki 54

Difenyy 1 imetyyli-7-amino-3-£*(E) -3-asetoksi-1-propenyyli7~3-kefem-4-karboksylaatti (XIII (E), R8=H, R^a= -CHPh2)_

Liuokseen, jossa oli difenyylimetyyli-7-amino-3-15 £}z)-3-asetoksi-1-propenyyl47~3~kefem-4-karboksylaattia (2,7 g, 5,8 mmoolia) ja asetofenonia (720 mg, 6 mmoolia) metanolissa (1 litra), lisättiin 1-norm, kloorivetyhappoa (6 ml). Liuosta säteilytettiin matalapaineisella Hg-lampulla (2537 A, 6W) sekoittamalla huoneen lämpötilassa 22 tuntia ja 20 haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (300 ml) ja liuos pestiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella, vedellä ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella ja kuivattiin MgSO^:lla. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäännös kroma-tografioitiin silikageelikolonnissa (Merck Kiesel gel 60, . ,25 100 g) eluoimalla kloroformilla. Fraktiot, joissa näkyi täplä kohdalla Rf 0,45 TLC:ssä (kloroformi:metanoli = 30:1), yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin jäännöstä. Trituroimalla jäännöstä eetterin kanssa saatiin 910 mg (34 %) otsikon yhdistettä, joka suli 157°C:ssa (hajoten).

30 Jälkimmäisestä fraktiosta, jossa näkyi täplä TLC:ssä - : kohdalla 0,40, saatiin 583 mg (22 %) lähtö-Z-isomeeria.

IR: ^maks (KBr) cm~1 1760' 1730' 1710' 1360' 1240, 1210, 1090.

.·:·. UV: λ maks (MeOH) nm (£) 301 (15000).

79 85487 NMR: O^CDCl^ ppm 1,8 (2H, br.s, NH2), 202 (3H, s, COCH3), 3,56 (2H, s, 2-H), 4,73 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 4,95 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,87 (1H, d, J=16 Hz, CH=CH-CH2), 7,05 (1H, s, CHPh), 7,3-7,6 (10H, m, Ph).

5 Analyysi, laskettu yhdisteelle C25H24N2°5S: C, 64,64; H, 5,21; N, 6,03; S, 6,72;

Saatu: C, 64,28; H, 5,21; N, 5,88; S, 6,82.

Esimerkki 55

Dif enyy lime tyyli-7-^f(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -1 0 2-metoksi-iminoasetamido7-3-^"(E) -3-asetoksi-1-propenyylj,7- 3-kefem-4-karboksylaatti (XIV (E), R^=CH3, R^=OAc, R^a= -CHPh2)__

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-amino-3-/lE)- 3-asetoksi-1-propenyyli/-3-kefem-4-karboksylaattia (930 mg, 15 2 mmoolia) ja 1-£\Ζ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi- iminoasetoksi7bentsotriatsolia (954 mg, 3 mmoolia) kuivassa THF:ssa (40 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 4 tuntia ja seos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (100 ml) ja liuos pestiin natriumvetykarbonaatin 20 vesiliuoksella, vedellä, kyllästetyllä NaCl-liuoksella ja kuivattiin MgSO^:lla. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäännös kromatografioitiin silikageelikolonnissa (Merck Kiesel gel 60, 40 g) eluoimalla peräkkäin kloroformilla ja kloro-formimetanoli-seoksella (50 %). Halutut fraktiot koottiin • "25 yhteen ja haihdutettiin kuiviin ja jäännöstä trituroitiin eetterin kanssa, jolloin saatiin 910 mg (70 %) otsikon yhdistettä, joka suli 110°C:ssa (hajoten asteettain).

IR: ^maks (KBr) cm_1 1780' 1730' 1680, 1610, 1530, 1380, 1220.

I- 30 UV: Λ k (MeOH) nm (ζ) 297 (22000).

NMR: CT(CDC13) ppm (1,99 (3H, s, COCH3), 3,56 (2H, s, 2-H), 4,04 (3H, s, OCH3), 4,52 (2H, d, J=6 Hz, CH=CH-CH2), 5,08 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,97 (1H, d-d, J = 8 & 4,5 Hz, V : 7-H) , 5,7-6,2 (1H, m, CH=CH-CH2), 6,83 (1H, s, tiatsoli-H) , : 35 6,96 (1H, s, CHPh) .

80 854S7

Esimerkki 56 7-/lZ)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi- iminoasetamido7-3-^*(E) -3-asetoksi-1 -propenyyli7-3-kefem- 2 3 4-karboksyylihappo (Ia (E), R =CH3, R =OAc)_ 5 Seos, jossa oli difenyylimetyyli-T-^Z) -2- (2-amino- tiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido7-3-ZlE)-3-asetoksi-1-propenyyli7~3-kefem-4-karboksylaattia (870 mg, 1,34 mmoolia) ja anisolia (0,8 ml), liuotettiin 2,4 ml:aan trifluorietikka-happoa ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 15 mi-10 nuuttia. Reaktioseosta jatkokäsiteltiin ja puhdistettiin samalla menetelmällä, jota on selostettu esimerkissä 52 (menetelmä A), jolloin saatiin 429 mg (66 %) otsikon yhdistettä, joka suli 180°C:ssa (hajoten asteettain).

IR: ^maks (KBr) cm_1 1770' 1730' 1670, 1630, 15 1530, 1370, 1240, 1030.

UV: ^maks (PH 7 fosfaattipuskuri) nm (g) 231 (17000) , 292 (26000) .

NMR: £ (D20 +Na2C03) ppm 2,20 (3H, s, COCH3), 3,75 (2H, s, 2-H), 4,10 (3H, s, OCH3), 4,75 (2H, s, CH2OAc), 20 5,32 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,88 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,9-6,3 (1H, m, CH=CH-CH2) , 6,73 (1H, d, J = 16 Hz, CH=CH-CH2), 7,09 (1H, s, tiatsoli-H).

Esimerkki 57 1-asetoksietyyli-7-£(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- - .25 metoksi-iminoasetamido7-3-£’(E)-3-asetoksi-1-propenyyli7-3- - kefem-4-karboksylaatti (Ib (E), R^=CH3, R^=OAc, R^=AX)

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli yhdistettä Ia (E) 2 3 (R =CH3, R =OAc) (241 mg, 0,5 mmoolia) kuivassa DMF:ssa (4 ml), lisättiin 0-5°C:ssa K2C03:a (140 mg, 1 mmoolia) ja i : 30 liuos, jossa oli 1-asetoksietyylibromidia (336 mg, 2 mmoolia) ; : DMFsssa (2 ml) neljänä eränä 15 minuutin välein, ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa vielä tunnin ajan. Etyyli-asetaatilla laimentamisen jälkeen liuos pestiin vedellä ja . kyllästetyllä NaCl-liuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja haih- 35 dutettiin kuiviin. Jäännös kromatografioitiin silikageeli-kolonnissa (Merck Kieselgel 60, 30 g) eluoimalla peräkkäin si 85487 kloroformilla ja kloroformi-metanoli-seoksella (50:1). Halutut fraktiot, jotka eluoitiin kloroformi-metanoli-seoksella, koottiin yhteen ja haihdutettiin kuiviin ja jäännöstä tritu-roitiin eettein kanssa, jolloin saatiin 185 mg (65 %) otsi-5 kon yhdistettä, joka suli 120°C:ssa (hajoten asteettain).

IR: V , (KBr) cm'1 1770, 1680, 1620, 1500, maks.

1390, 1240, 1080, 1040.

UV: ^maks (Me0H) nm (£> 232 d8000)/ 295 (21000).

NMR: <f(CDCl3) ppm 1,56 (3H, d, J = 6 Hz, CH-CH-j) , 2,08 10 (6H, s, COCH3), 3,6 (2H, br-s, 2-H), 4,06 (3H, s, OCH3), 5,07 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,39 (2H, br-s, NH2), 5,7-6,4 (2H, m, CH=CHCH2 & 7-H), 6,81 (1H, s, tiatsoli-H), 7,56 (1H, d, J=8 Hz, NH).

Esimerkki 58 15 Difenyylimetyyli-7-^(Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4- yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido7-3-kloorimetyyli-3-kefem- 4-karboksylaatti (IV, R^a=Tr)_

Seokseen, jossa oli (Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoetikkahappoa*) (6,71 g, 10 mmoolia) 20 ja 1-hydroksibentsotriatsolimonohydraattia (1,53 g, 11 mmoolia) THF:ssa (50 ml), lisättiin disykloheksyylikarbodi-imidiä (2,06 g, 10 mmoolia) 5°C:ssa ja seosta sekoitettiin 2 tuntia samassa lämpötilassa ja suodatettiin, jolloin saatiin aktiivisen esterin liuosta. Suspensio, jossa oli difenyylimetyyli-- :25 7-amino-3-kloori-metyyli-3-kefem-4-karboksylaatti-hydroklo- ridia (4,51 g, 10 mmoolia) etyyliasetaatissa (50 ml), pestiin kyllästetyllä NaHC03-liuoksella (10 ml x 3), vedellä ja kuivattiin. Liuos kaadettiin aktiivisen esterin liuokseen, joka oli valmistettu kuten edellä, sekoittamalla 0°C:ssa ja seok-.30 sen annettiin olla paikoillaan 2 päivää 5°C:ssa. Haihduttamisen jälkeen jäännös kromatografioitiin silikageelikolonnissa - (silikageeli 60, 100 g) ja kolonni eluoitiin CHCl3-n-heksaani- seoksella (2:1). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Trituroimalla jäännöstä n-heksaa-35 nin kanssa saatiin 10,0 g (94 %) otsikon yhdistettä amorfi-sena jauheena.

82 65487 IR: ^maks <KBr) cm~' 1780' '720, 1680, 1490.

UV: ^maks (ch2C12) nm 245 (23000>· NMR: cf(CDCl3) ppm 3,4 (2H, ABq, J = 12 Hz, 2-H) , 5,02 (1H, d, J=4 Hz, 6-H) , 6,01 (1H, d-d, J=4 ja 6 Hz, 5 7-H), 6,45 (1H, s, tiatsoli-H), 7,00 (1H, s, CHPh2>, 7,1- 7,7 (40H, fenyyli-H).

* R. Bucourt ym., Tetrahedron, 34, 2233 (1978).

Esimerkki 59

Difenyylimetyyli-7-ZlZ)-2-(2-trityyliaminotiatsol-10 4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido7~3-(trifenyylifosfo- ranylideeni)-metyyli-3-kefem-4-karboksylaatti (VII, R^a=Tr)

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-£(Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamidq7~ 3-kloorimetyyli-3-kefem-4-karboksylaattia (9,9 g, 9,3 15 mmoolia) ja Nal:a (11 g, 73 mmoolia) asetonissa (100 ml), sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla (100 ml), ja pestiin 10-prosenttisella Na^jO^jn vesiliuoksella (50 ml x 2) ja vedellä. Seokseen lisättiin 20 trifenyylifosfiinia (3,93 g, 15 mmoolia) ja seosta sekoitet tiin 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Kuiviin haihduttamisen jälkeen jäännöstä trituroitiin isopropyylieetterin kanssa ja sakka koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin fos-foniumsuolaa (14,2 g). Se liuotettiin CH2Cl2:iin (100 ml) 25 ja liuos pestiin 1-norm. NaOH:lla (noin 50 ml:11a) kunnes fosfoniumsuola oli muuttunut täydellisesti ylidiksi, tarkkailemalla TLC:n avulla (Merck silica gel 60 ^54' CHCl^-MeOH, 10:1). Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä ja • : haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä trituroitiin 30 isopropyylieetterin kanssa, jolloin saatiin 12,0 g (94 %) otsikon yhdistettä.

IR: V . (KBr) cm"1 1760, 1740, 1650, 1480.

maJts ♦ . UV: Ämaks (CH2C12) nm (£) 310 (9200), 388 (16200).

83 85487

Esimerkki 60

Difenyylimetyyli-7-^lZ)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli) -2-trityylioksi-iminoasetamidq7-3-£T;z) -3-asetoksi-1 -propenyyli7~3-kefem-4-karboksylaatti (Vili, R3a=Tr, R3=OAc) 5 Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-/*(Z)-2-(2- trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido/- 3-(trifenyylifosforanylideeni)-metyyli-3-kefem-4-karboksylaat-tia (2,58 g, 2 mmoolia) ja asetoksiasetaldehydiä*) (612 mg, 3 mmoolia) dikloorimetaanissa (10 ml), sekoitettiin yön ajan 10 huoneen lämpötilassa ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silikageelikolonnissa (Merck silicagel 60, 50 g) ja kolonni eluoitiin tolueeni-etyyli-asetaatti-seoksella (9:1). Haihduttamalla haluttua tuotetta sisältävät fraktiot kuiviin saatiin 1,0 g (45 %) otsikon 15 yhdistettä.

IR: ^maks (KBr) Cm_1 1780' 1730' 1680, 1520, 1220.

UV: ^maks. (CH2C12) nm 305 <12200).

NMR: c5(CDC13) ppm 2,00 (3H, s, COCH3),3,20 (2H, ABq, J=18 Hz, 2-H) , 5,1 (1H, d, J=4 Hz, 6-H), 6,20 (1H, d, J = 11 Hz, 20 =CH) , 6,48 (1H, s, tiatsoli-H), 6,95 (1H, s, CHPh2), 7,1-7,6 (40H, fenyyli-H).

* J. Corbet ja Benezra, J. Org. Chem., 46, 1141 (1981).

Esimerkki 61 - 25 7-/lz)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-imino- asetamidq7~3-/(Ζ)-3-asetoksi-1-propenyyl47-3-kefem-4- 2 3 karboksyylihappo (Ia, R =H, R =OAc)_

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-/lZ)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamidq7-. 30 3-^Tz)-3-asetoksi-1-propenyyl^-3-kefem-4-karboksylaattia (3,29 g, 2,94 mmoolia) ja 85-prosenttista muurahaishappoa (15 ml), sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuok-’"· seen lisättiin väkevää suolahappoa (0,6 ml) ja seosta sekoi- : tettiin 2 tuntia. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäännöstä ____: 35 trituroitiin isopropyylieetterin kanssa, jolloin saatiin 84 85487 1,2 g raakaa tuotetta, joka kromatografioitiin C-18 silika-geeli-kolonnissa (20 mm x 200 mm) eluoimalla 20-prosentti-sella metanolilla. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja väkevöitiin pienitilavuiseksi vakuumissa.

5 Lyofilisoimalla konsentraatti saatiin 412 mg (30 %) otsikon yhdistettä, joka suli 180°C:ssa (hajoten). Laskettu puhtaus 60 %.

IR: V . (KBr) cm"1 1760, 1620, 1530, 1370, 1240.

max s.

UV: λ (pH 7 fosfaattipuskuri) nm (£) 10 279 (15300).

NMR: &(DMSO-dg) ppm 2,00 (3H, s, COCH3), 4,50 (2H, d, J=8 Hz, CH20), 5,15 (1H, d, J=4 Hz, 6-H), 6,30 (1H, d, J=12 Hz, =CH-) , 6,65 (1H, s, tiatsoli-H) , 7,00 (2H, s, NH2) , 9,40 (1H, d, J=8 Hz, 7-CONH) , 11,30 (1H, s, =N-OH).

15 Esimerkki 62 1 -asetoksietyyli-7-/"(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-hydroksi-iminoasetamido^-3-£l Z)-3-asetoksi-1-propenyyli7~3-kefem-4-karboksylaatti (Ib, R^-H, R^=QAc, R^=AX)_

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli yhdistettä Ia 2 3 20 (R =H, R =OAc) (280 mg, 0,6 mmoolia) kuivassa DMFrssa (2 ml), lisättiin -5°C:ssa Na2C03:a (105 mg, 1 mmooli) ja kolmena eränä 20 minuutin välein liuos, jossa oli 1-asetoksi-etyyli-bromidia (396 mg, 2,37 mmoolia) DMF:ssa (2 ml) ja seosta sekoitettiin vielä 10 minuuttia. Etyyliasetaatilla laimenta-.25 misen jälkeen liuos pestiin vedellä ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Trituroimalla jäännöstä isopropyylieetterin kanssa saatiin 195 mg raakaa tuotetta, joka kromatografioitiin sili-kageelikolonnissa (25 g). Kolonni eluoitiin kloroformilla, .·: jossa oli 1-2 % metanolia ja haluttua tuotetta sisältävät 30 fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa.

: : : Trituroimalla jäännöstä isopropyylieetterin kanssa saatiin 75 mg (23 %) tuotetta, joka suli 100°C:ssa (hajoten). Las-kettu puhtaus 70 %.

IR: ^maks (KBr) cm-1 1780-1730, 1670, 1530, '* 35 1380, 1240.

UV: ^maks< (CH2C12) nm ( £) 249 (17300).

85 85 487 NMR: <i(CDCl3) ppm 1,0 (3H, d, J=5 Hz, CH-CH3), 2,03 (3H, s, COCH3), 2,05 (3H, s, COCH-j) , 5,10 (1H, d, J=4 Hz, 6-H), 6,30 (1H, d, J = 12 Hz, =CH-), 6,95 (1H, s, tiatsoli-H).

5 Yhdiste 33, Esimerkki 63 7-Z~(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-hydroksi-imino-asetamidq7-3-£T(E) -1-propenyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappo (Ia(E), R2=H, R3=H)_

Seosta, jossa oli raakaa yhdistettä VIII (R^a = Tr, 3 10 R = H), jossa oli 20 % sen E-isomeeria (9,2 g, 8,7 mmoolia) 85-prosenttisessa HCOOHrssa (60 ml) sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä käsiteltiin 90-prosenttisen TFA:n (60 ml) kanssa tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja kaadettiin jääveteen 15 (300 ml). Liukenemattomat aineet suodatettiin pois. Suodos kromatografioitiin käänteisfaasikolonnissa (Waters, prepPAK C18, 300 ml) ja kolonni eluoitiin 20-prosenttisella MeOHrlla. Polaariset fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännöstä trituroitiin isopropyylieetterin 20 kanssa, jolloin saatiin 1,15 g (33 %) Z-isomeeria (Ia, 2 3 R =R =H) ja vähemmän polaarisista fraktioista saatiin 143 mg (4 %) otsikon yhdistettä. Sp. >200°C (hajoten).

IR: V maks (KBr) cm"1 1760, 1660, 1630, 1530.

UV: A maks (pH 7 fosfaattipuskuri) nm (£) 25 223 (20000), 290 (21000).

1H NMR (D20) <5 1,38 (3H, d, J=7,0 Hz), 3,73 (2H, br.s), 5,85 (1H, d, J = 5,0 Hz), 5,80-6,30 (1H, m), 6,57 (1H, d, - : J=16 Hz), 7,06 (1H, s) .

Analyysi, laskettu yhdisteelle ^H^NgOgS2·1,5H20: : ; 30 C, 41,28; H, 4,16; N, 16,05; S, 14,65;

Saatu: C, 41,46; H, 3,60; N, 15,86; S, 14,83.

• ·· · » 86 85437

Yhdiste 40, Esimerkki 64

Pivaloyylioksimetyyli-7-Z.l Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-hydroksi-iminoasetamida7-3-/!lZ) -3-asetoksi-1 -propen-yylj7~3-kefem-4-karboksylaatti_ 5 Jäissä jäähdytettyyn seokseen, jossa oli yhdistettä 2 3

Ia (R = H, R = OAc) (170 mg, 0,36 mmoolia) ja Na2C03:a (20 mg, 0,19 mmoolia) kuivassa DMF:ssa (2 ml), lisättiin pivaloyylioksimetyylijodidia (87 mg, 0,36 mmoolia) ja seosta sekoitettiin 10 minuuttia samassa lämpötilassa. Lisättiin 10 vielä pivaloyylioksimetyyli jodidia (87 mg) ja Na2C03:a (20 mg) ja seosta sekoitettiin vielä 10 minuuttia. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla, pestiin vedellä ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Kromatografioimalla jäännös silikageeli-kolonnissa ja eluoimalla seoksella CHC^-MeOH (1-2 %) saatiin 15 tuotetta amorfisena jauheena. Saanto 110 mg (52 %), sp. 95-100°C (hajoten).

IR: ^maks (KBr) cm~1 1780' 1740' 1670, 1530.

UV: ^maks! (Et0H) nm (£) 280 (1 1400).

1H NMR (CDC13) <f 1,20 (9H, s, t-Bu) , 2,0 (3H, s, OAc), 20 3,45 (2H, s, 2-H), 4,50 (2H, d, J=7 Hz, CH2OAc), 5,10 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,3-6,0 (4H, m, 7-H, vinyyli-H, CH2OCO), 6,25 (1H, d, J=12 Hz, vinyyli-H), 7,0 (1H, s, tiatsoli-H), 11,5 (1H, d, J = 8 Hz, CONH) .

Yhdiste 41, Esimerkki 65 25 7-/"(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-imino- asetamido7-3-/"(E)-3-asetoksi-1 -propenyylij1 -3-kefem-4-karbok- — 2 3 syylihappo (Ia(E), R =H, R =OAc)_ a) Asylointi

Liuokseen, jossa oli 1-hydroksibentsotriatsolia 30 (223 mg, 1,44 mmoolia) ja (Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4- yyli)-2-trityylioksi-iminoetikkahappoa (1,06 g, 1,44 mmoolia) THF:ssa (14 ml), lisättiin DCC:tä (300 mg, 1,44 mmoolia) ja seosta sekoitettiin tunnin ajan 5°C:ssa. Seokseen lisättiin difenyylimetyyli-7-amino-3-/lE)-asetoksi-1-propenyyli7-3-35 kefem-4-karboksylaattia (670 mg, 1,44 mmoolia). 4 tuntia 87 8 5 4 87 ympäristön lämpötilassa sekoittamisen jälkeen reaktioseos suodatettiin, laimennettiin etyyliasetaatilla (50 ml) ja pestiin vedellä. Haihduttamalla orgaaninen kerros kuiviin saatiin öljyä, joka kromatografioitiin silikageelikolonnissa. 5 Eluoimalla tolueeni-etyyliasetaatti-seoksella (10:1) saatiin l, 607 g (99 %) difenyylimetyyli-7-/lZ)-2-(2-trityyliamino-tiatsol-4-yyli) -2-trityylioksi-iminoasetamido7-3-/j(E) -3-asetoksi-1-propenyyli7-3-kefem-4-karboksylaattia amorfisena jauheena.

10 IR: ^maks. (KBr) cm"1 1770, 1730.

1H NMR (CDC13) ii 2,0 (3H, s, OAc) , 3,33 (2H, s, 2-H) , 4,54 (2H, ABq, CH2OAc), 5,04 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 6,0 (1H, m, vinyyli-H), 6,02 (1H, dd, J=5 & 7 Hz, 7-H), 6,40 (1H, s, tiatsoli-H), 6,82 (1H, d, J=15 Hz, vinyyli-H), 7,00 (1H, s, 15 Ph2CH), 7,3 (25H, 2, Ph).

b) Lohkaisu

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-/lz)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamidq7- 3-ZT(E) -3-asetoksi-1 -propenyyli7’-3-kefem-4-karboksylaattia 20 (1,98 g, 1,75 mmoolia) muurahaishapossa (20 ml), sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Seokseen lisättiin väkevää suolahappoa (0,16 ml, 1,92 mmoolia) ja seosta sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Suodattamalla, ja haihduttamalla suodos kuiviin ja trituroimalla sen jälkeen IPE:n • ‘25 kanssa saatiin 975 mg raakaa tuotetta. Kromatografioima11a käänteisfaasi-silikageelikolonnissa ja eluoimalla 10-% MeOH:a sisältävällä vedellä ja haihduttamalla kuiviin haluttua tuotetta sisältävä fraktio saatiin 418 mg (51 %) otsikon yhdistettä amorfisena jauheena.

. . 30 IR: Vmaks (KBr) cm_1 1765' 1730' 1650 .

UV: j\ maks (pH 7 fosfaattipuskuri) nm ( £J 290 . (23400).

1H NMR (DMSO-dg) <f 2,03 (3H, s, OAc), 3,65 (2H, ABq, ‘ 2-H), 4,61 (2H, ABq, CH2OAc) , 5,15 (1H, d, J = 5 Hz, 6-H), *:·: 35 5,75 (1H, dd, J=5 & 8 Hz, 7-H), 6,15 (1H, m, vinyyli-H), *:·* 6,65 (1H, s, tiatsoli) , 6,85 (1H, d, J=15 Hz, vinyyli-H), . 7,05 (2H, S, NH2) .

se 85487

Yhdiste 44, Esimerkki 66

Pivaloyylioksimetyy 1 i-7-ΖΓ( Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2-hydroksi-iminoasetamidq7-3-£-(E) 3-asetoksi-1-pro-penyylj7-3-kefem-4-karboksylaatti (Ib(E), =H, R~*=OAc, R^=PV 5 Jäähdytettyyn ja sekoitettuun seokseen, jossa oli yhdistettä Ia(E) (R2 = H, R^ = OAc) (200 mg, 0,43 mmoolia) ja Na2CO^:a (22,7 mg, 0,22 mmoolia) DMF:ssa (2 ml), lisättiin pivaloyylioksimetyylijodidia (91 mg, 0,43 mmoolia) ja seosta sekoitettiin 5°C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos laimennettiin 10 etyyliasetaatilla (40 ml), pestiin peräkkäin vedellä ja suolaliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Raaka tuote kromatografioi-tiin silikageelikolonnissa. Eluoimalla CHCl^-MeOH-seoksella (1-3 %) saatiin 123 mg (50 %) tuotetta amorfisena jauheena.

15 IR: ^maks (KBr) cm“1 3300, 2970, 1780, 1740.

UV: ^maks (MeOH) nm ( £) 296 (18500).

1H NMR (DMSO-dg) <£1,22 (9H, s, t-bu) , 2,08 (3H, S, OAc), 3,60 (2H, s, 2-H), 4,66 (2H, ABq, CH2OAc), 5,06 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,85 (1H, dd, J=5 & 7 Hz, 7-H), 5,88 (2H, 20 4-CO2CH2)/ 6,0 (1H, m, vinyyli-H), 7,00 (1H, s, tiatsoli), 7,1 (1H, d, J=15 Hz, vinyyli-H).

Yhdiste 46, Esimerkki 67

Asetoksimetyyli-7-/j(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetamidq7-3-^7 Z)-3-asetoksi-1-propenyy1^7-3- λ Ί j 25 kefem-4-karboksylaattl (Ib, Rz - CHj, R - OAc, Rq = AM) Jäähdytettyyn ja sekoitettuun liuokseen, jossa oli 240 mg (0,5 mmoolia) yhdistettä Ia (R2 = CH^» R"* = OAc) 4 mlsssa kuivaa DMF:a, lisättiin 0°C:ssa K2C®3:a (138 mg, 1 mmooli) ja neljänä eränä 15 minuutin välein liuos, jossa 30 oli asetoksimetyylibromidia (306 mg, 2 mmoolia) DMF:ssa (2 ml) ja seosta sekoitettiin 0-5°C:ssa vielä 15 minuuttia.

100 ml:11a etyyliasetaattia laimentamisen jälkeen seos pestiin vedellä ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella ja kuivattiin MgSO^illa. Liuottimen poistamisen jälkeen öljymäinen jäännös . 35 puhdistettiin kromatografioimalla silikageelikolonnissa 89 85487 (Merck, Kieselgel 60, 30 g). Kolonni eluoitiin peräkäin kloroformilla ja kloroformi-metanoli-seoksilla (50:1 - 20:1).

Kloroformi-metanoli-seoksella (50:1) eluoidut fraktiot koottiin yhteen ja haihdutettiin kuiviin. Jäännöstä tritu- 5 roitiin eetteri-n-heksaani-seoksen kanssa, jolloin saatiin 72 mg (26 %) haluttua tuotetta, joka suli 90-95°C:ssa (hajoten). Laskettu puhtaus 80 %.

IR: V . (KBr) cm"1 1770, 1730, 1670, 1610, maks.

1530, 1370, 1230, 1030.

10 UV: Ä , (MeOH) nm (£) 230 (17000), 287 (13000).

1 maks.

II NMR (CDC13) <£ 2,02 (3H, s, OAc) , 2,12 (3H, s, OCOCH3) , 3,33 (1H, d, J=18 Hz, 2-H) , 3,60 (1H, d, J = 18 Hz, 2-H), 4,04 (3H, s, OCH3), 4,4-4,6 (2H, m, CH2OCOCH3), 5,12 (1 H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,38 (2H, br-s, NH2), 5,82 (2H, s, 15 C00CH20Ac), 5,4-5,9 (1H, m, CH=CHCH2), 5,98 (1H, dd, J=8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,29 (1H, d, J=11 Hz, CH=CH-CH2), 6,82 (1H, s, tiatsoli-H), 7,55 (1H, d, J=8 Hz, NH).

Yhdiste 63, Esimerkki 68 7-/1Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-asetoksi-imino- 20 asetamidg7~3-/lZ)-3-asetoksi-1-propenyylt/-3-kefem-4-karbok- 2 3 syylihappo (Ia, R = Ac, R = OAc)_ a) Asylointi

Seokseen, jossa oli (Z)-2-(trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-asetoksi-iminoetikkahappoa (1,95 g, 4,0 mmoolia) .25 ja 1-hydroksibentsotriatsolia (600 mg, 4,0 mmoolia) THF:ssa '(14 ml), lisättiin DCC:tä (824 mg, 4,0 mmoolia) ja seosta sekoitettiin tunnin ajan jäähauteessa. Suspensioon lisättiin difenyylimetyyli-7-amino-3-/“(Z)-3-asetoksi-1-propenyyli7”3-kefem-4-karboksylaattia (1,30 g, 2,8 mmoolia) ja seosta se-30 koitettiin 4 tuntia ympäristön lämpötilassa, suodatettiin ja : laimennettiin etyyliasetaatilla (60 ml) . Orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kui-viin vakuumissa. Jäännös kromatografioitiin silikageeli-kolonnissa (Wakogel C200, 80 g), joka eluoitiin tolueeni-35 etyyliasetaatti-seoksella (6:1). Tuotetta sisältävät fraktiot 9o 85487 yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 2,01 g (77 %) difenyylimetyyli-7-/"(Z) -trityyli-aminotiatsol-4-yyli) -2-asetoksi-iminoasetamidcj7-3-/ (Z) -3-asetoksi-1-propenyyli -3-kefem-4-karboksylaattia (VIII, 5 R2a = Ac, R3 = OAc).

IR: V , (KBr) cm 1 1780, 1730.

1 maks.

H NMR (CDC13) ci 2,0 (3H, s, CH30), 2,15 (3H, s, CH3CO), 3,45 (2H, ABq, 2-H), 4,20 (2H, ABq, CH2OAc), 5,12 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,70 (1H, m, 3-CH=CH), 5,90 (1H, dd, 10 J=5 & 7 Hz, 7-H), 6,26 (1H, d, J=12 Hz, 3-CH=CH), 6,95 (1H, s, tiatsoli), 7,30 (25H, s, fenyyli).

b) Lohkaisu

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-£(Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-asetoksi-iminoasetamidq7-3-15 £lZ)-3-asetoksi-1-propenyyli7-3-kefem-4-karboksylaattia (3,2 g, 3,43 mmoolia) TFArssa (20 ml) ja anisolia (5 ml), sekoitettiin tunnin ajan 5°C:ssa. Poistamalla liuotin ja trituroimalla sen jälkeen 100 ml:n kanssa isopropyylieetteriä saatiin 1,25 g TFA-suolaa. Raaka tuote puhdistettiin kroma-20 tografioimalla käyttämällä C18 Bondapak-kolonnia, joka eluoi-tiin peräkkäin vedellä, 10 % metanolia sisältävällä Η20:1ΐ3 ja 20 % metanolia sisältävällä H20:lla. Sopivat fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja lyofilisoi-tiin, jolloin saatiin 395 mg (23 %) otsikon yhdistettä.

**'.:25 IR: V maks (KBr) cm"1 3300, 1770, 1670.

UV: j\ maks (pH 7 fosfaattipuskuri) nm ( £, ) 228 (20300), 284 (15300).

1H NMR (DMSO-d,) <f2,0 (3H, s, CH.CO) , 2,15 (3H, s,

6 J

CH3CO) , 4,51 (2H, ABq, CH^OAc) , 5,22 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 30 5,60 (1H, m, 3-CH=CH) , 5,80 (1H, dd, J = 5 & 7 Hz, 7-H), 6,32 (1H, d, J=12 Hz, 3-CH=CH) , 7,05 (1H, s, tiatsoli).

91 85487

Yhdiste 65/ Esimerkki 69 1-asetoksietyyli-7-/iL(Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) -2- asetoksi-iminoasetamido7-3-£I Z)-3-asetoksi-1-propenyyli7“3- 2 3 4 kefem-4-karboksylaatti (Ib, R = Ac, R = OAc, R = AX)_ 2 3 5 Liuokseen, jossa oli yhdistettä Ia (R = Ac, R = OAc, 248 mg, 0,49 mmoolia) 25 ml:ssa kuivaa DMF:a, lisättiin Na2CC>2:a (51 mg, 0,49 mmoolia) ja 1-asetoksietyylibromidia (82 mg, 0,49 mmoolia) -10°C:ssa. Seosta sekoitettiin 5°C:ssa 30 minuuttia ja suspensioon lisättiin 82 mg (0,49 mmoolia) 10 1-asetoksietyylibromidia. 30 minuutin sekoittamisen jälkeen reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla (50 ml), pestiin vedellä (30 ml x 3) ja suolaliuoksella, kuivattiin MgSO^:lla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Raaka tuote puhdistettiin kromatografioimalla silikageelillä eluoimalla 3 % metanolia 15 sisältävällä kloroformilla. Poistamalla liuotin sopivasta eluaatista ja kylmäkuivaamalla sen jälkeen saatiin 157 mg (54 %) otsikon yhdistettä, sp. 125°C (hajoten).

IR: V^maks (KBr) cm"1 3430, 3290, 1770, 1680.

UV: /^maks (pH 7 fosfaattipuskuri) nm (£) 20 228 (21900) , 287 (12700) .

1H NMR (DMSO-dg) <fl,51 (3H, d, J=6 Hz, 4-COOCHCH-j) , 2,02 (3H, s, AcO), 2,06 (3H, s, AcO), 2,22 (3H, S, AcO), 3,47 (2H, br.s, 2-H) , 4,46 (1H, d, J = 6 Hz, 4-COOCHCH3), 4,55 (2H, ABq, Ci^OAc) , 5,12 (1H, d, J = 5 Hz, 6-H) , 5,70 (1H, '.: 25 m, 3-CH=CH-) , 5,95 (1H, dd, J=5 & 7 Hz, 7-H) , 6,25 (1H, d, J=12 Hz, 3-CH=CH), 6,92 (1H, s, tiatsoli).

92 85487

Yhdiste 88, Esimerkki 70 (5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yyli)-metyyli-7-f(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamid^ - 3-Z.7z)-1-propenyyli7-3-kefem-4-karboksylaatti (Ib, R2 5 - H, R3 = H, R^ = -CH2 1-T"CH3 % L — - - - ----I . . _______J_________ Jäissä jäähdytettyyn ja sekoitettuun liuokseen, jossa oli yhdistettä IB (R2 = H, R3 =H) (512 mg, 1,25 mmoolia) 10 DMF:ssa (2 ml), lisättiin natriumkarbonaattia (238,5 mg, 4.5 mmoolia) ja kolmena eränä 15 minuutin välein liuos, jossa oli 4-bromimetyyli-5-metyyli-1,3-dioksolen-2-onia (869 mg, 4.5 mmoolia) DMF:ssa (6 ml). Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (50 ml), pestiin vedellä ja suolaliuoksella, ja 15 kuivattiin MgSO^rlla. Suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin pieneen määrään kloroformia ja puhdistettiin kromatografioimalla silikageelikolonnissa (Kieselgel 60, 30 g). Halutut fraktiot, jotka oli eluoitu kloroformin ja metanolin seoksella (30:1), yhdistettiin ja haihdutettiin 20 kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 182 mg (29 %) haluttua tuotetta, sp. 115-120°C (hajoten).

IR: ^ maks (KBr) cm_1 1820' 1770' 1735' 1530' 1210, 1190.

UV: f\ maks Et OH) nm ( £) 225 (sh 19000), 287 (12000).

.·. : 25 1H NMR (CDC13 + D20) S 1,62 (3H, d, J = 6,0 Hz), 2,18 (3H, s, ), 3,45 (2H, br, s), 4,68 (2H, s), 5,10 (1H, d, J= 5.5 Hz), 5,50-5,90 (1H, m), 5,85 (1H, d, J=5,5 Hz), 6,12 (1H, d, J=12 Hz), 6,95 (1H, s).

· « * · · 93 85487

Yhdiste 89, Esimerkki 71 1-etoksikarbonyylioksietyyli-7-Z.(Z) -2- (2-amino-tiatsol-4-yyli) -2-hydroksi-iminoasetamidQ7-3-jT(Z) -1 -prope-nyyll^7-3-kefem-4-karboksylaatti (Ib, = H, R3 = H, R^ = 5 CHjCHOCOOEt)_

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli yhdistettä Ib (R^ = H, R3 = H, 256 mg, 0,625 mmoolia) DMFrssa (2 ml), lisättiin natriumkarbonaattia (40 mg, 0,625 mmoolia) ja liuos, jossa oli OC-jodidietyylikarbonaattia (183 mg, 10 0,625 mmoolia) DMFrssa (1 ml) 0-5°C:ssa. Sen jälkeen kun seosta oli sekoitettu 20 minuuttia 5°C:ssa, lisättiin natriumkarbonaattia (40 mg) ja liuos, jossa oli esc-jodidietyylikarbonaattia (183 mg) ja seosta sekoitettiin 40 minuuttia.

Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (50 ml), pestiin vedellä 15 (50 ml x 2), kuivattiin MgSO^rlla ja suodatettiin. Suodos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin pieneen määrään kloroformia ja puhdistettiin silikageelikolonnissa (Kieselgel 60, 20 g). Halutut fraktiot, jotka oli eluoitu kloroformin ja metanolin seoksella (30:1), yhdistettiin ja 20 haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 56 mg (17 %) haluttua tuotetta, sp. 105-110°C.

IR: ^maks (KBr) Cm_1 1760' 1525' 137°' 127°* UV: A * (EtOH) nm (£) 222 (20000), 286 (11000).

+ mäks· H NMR (CDC13 + D20) cfl,33 (3H, t, J=7 Hz), 1,57 .·. :25 (3H, d, J=5 Hz), 1,70 (3H, d, J=7 Hz), 3,45 (2H, br. s), 4,23 (2H, q, J=7 Hz), 5,10 (1H, d, J=5,0 Hz), 5,87 (1H, d, J=5,0 Hz), 5,50-6,00 (1H, m), 6,16 (1H, d, J=12 Hz), 6,92 (1H, q, J=5 Hz), 7,00 (1H, s).

Claims

94 85487

1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten, kaavan I mukaisten 3-propenyyliaminotiatsolyylikefa-5 losporaanihappojen ja -esterien valmistamiseksi „ /Sv N-T—C-CONH-i-p ^

10 R'HN-lLgj N oJ_NxJ-CH=CHCH2R3 (i) OR2 I 4 C00R jossa R1 on vety tai tavanomainen aminoryhmän suojaryhmä;

15 R2 on vety, suora- tai sivuketjuinen alkyyli, jossa on 1 -4 hiiliatomia, alkenyyli tai alkinyyli, jossa on 2-4 hiiliatomia, sykloalkyyli, jossa on 3 - 6 hiiliatomia, sykloalkyylialkyyli, jossa on 3 - 6 rengasjäsentä ja 4 -10 hiiliatomia, tai alkanoyyli, jossa on 2 - 4 hiiliato-20 mia; R3 on vety, alempi alkyyli, jossa on 1 - 3 hiiliatomia, alempi alkoksi, jossa on 1 - 3 hiiliatomia, alempi alkano-yylioksi, jossa on 2 - 3 hiiliatomia; ja R4 on vety tai fysiologisesti hydrolysoituva esteriryhmä; ‘25 tunnettu siitä, että yhdisteen, jonka kaa va on rVts\ 30 —NV^“CH-PPh3 (χν) COOR4' jossa R5 on ryhmä, jonka kaava on ^ ^-CH=N- (XVI) 95 85487 tai ryhmä, jonka kaava on N-1—CCONH- 5 ,, Il 1 H (XVII) R1-NH-X N ö \ 2a OR jossa R1' on tavanomainen kefalosporiinikemian yhteydessä 10 käytetty aminoryhmien suojaryhmä; R2a on tavanomainen kefalosporiinikemian yhteydessä käytetty hydroksiryhmien suojaryhmä, alkyyli, jossa on 1 - 4 hiiliatomia, alkenyyli tai alkinyyli, jossa on 2 - 4 hiiliatomia, sykloalkyyli, jossa on 3 - 6 hiiliatomia, tai alkanoyyli, jossa on 2 - 4 15 hiiliatomia; ja R4' on tavanomainen kefalosporiinikemian yhteydessä käytetty karboksyyliryhmien suojaryhmä, annetaan reagoida aldehydin kanssa, jonka kaava on r’ch^cho 20 jossa R3:lla on sama merkitys kuin edellä, inertissä orgaanisessa reaktioväliaineessa, kuten dikloorimetaanissa, N,N-dimetyyliformamidissa, isopropanolissa tai niiden seoksessa, valinnaisesti litiumkloridin, litiumbromidin 25 tai litiumjodidin läsnäollessa, reaktiolämpötilan ollessa välillä 0-25 °C, jolloin saadaan yhdistettä, jonka kaava on 30 *5-r-rS III (XVIII) yl—n^>^-ch=chch2rj :Τ: I 4· COOR " 35 96 8 5 4 87 ja R5:n ollessa bentsylideeniaminoryhmä (XVI), mainittu ryhmä poistetaan haluttaessa selektiivisesti, 3-(Z)-iso-meeri muutetaan 3-(E)-isomeeriksi fotokemiallisen reaktion avulla ja liitetään kaavan XVII mukainen ryhmä, jolloin 5 saadaan yhdistettä, jonka kaava on N-— C-CONH-'"'s 1 || I II I 3

10 R-HN-kS^N 0^N>y^“CH-CHCH2RJ (XIX) 0R COOR4' ja sen jälkeen poistetaan suojaryhmät R1', R2a ja R4', ja 15 haluttaessa, erotetaan 3-(Z)- ja 3-(E)-isomeerit, jolloin saadaan yhdistettä, jonka kaava on N-Tl C-CONH--S S N 2° J I I 3 <Ia> H2N~Vs·^ NVsX^-CH=CHCH2RJ OR2 COOH 1 jossa R2:lla ja R3:lla on sama merkitys kuin edellä, ja haluttaessa, yhdisteen Ia alkalimetallisuolan tai ammo-niumsuolan annetaan reagoida halogenidin kanssa, jonka kaava on

30 R4b-X jossa X on halogeeni, kuten kloori, bromi tai jodi, ja R4b on pivaloyylioksimetyyli, 1-asetoksietyyli, asetoksimetyy-li, 5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yylimetyyli, tai ryh-35 mä, jonka kaava on 97 85487 R6-NHCH,C-0 —ft ^S— C-OCH, (XXI) 5 2 \=/ jossa R6 on vety tai tavanomainen kefalosporiinikemian yhteydessä käytetty aminoryhmien suojaryhmä, ja haluttaessa, 10 poistetaan suojaryhmä, jolloin saadaan esteriä, jonka kaava on 1C n-c-conh—- li i it I a H?N—S N -N.. ^X~CH=CHCH0R Ub) '‘S v υ * or2 COOR4b 1 2 3 4 5 6 jossa R4:llä on sama merkitys kuin edellä. 2

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 3 tunnettu siitä, että valmistetaan 4 75- [ (Z ) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli )-2-( hydroksi-imino) -aset- 5 amido] -3- [ ( Z )-prop-l-en-l-yyli] -3-kefeemi-4-karboksyyli- 6 happo, 76- [ (Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli )-2-( hydroksi-imino) -aset-amido] -3-[ (E)-prop-l-en-l-yyli] -3-kefeemi-4-karboksyyli-happo, 1- asetoksietyyli-7fi-[( Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )-2-hydr- . 30 oksi-imino)-asetamido]-3-[(Z)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi- 4-karboksylaatti, pivaloyylioksimetyyli-7fl- [ (Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli) - 2- (hydroksi-imino)-asetamido]-3-[(Z)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, : 35 pivaloyylioksimetyyli-7B-[( Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )- 98 8 5487 2-(hydroksi-imino)-asetamido]-3-[(E)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 7β- [ (Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )-2-( hydroksi-imino) -aset-amido]—3—[(Z)-3-asetoksiprop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-5 karboksyylihappo, 76-[ ( Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )-2-(hydroksi-imino)-aset-amido]-3-[(E)-3-asetoksiprop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksyylihappo, 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-aset-10 amido] -3-[ ( Z )-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksyyli- happo, 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-aset-amido] -3-[ (E)-prop-l-en-l-yyli] -3-kefeemi-4-karboksyyli-happo, 15 l-asetoksietyyli-76-[ (Z )-2-( 2-aminotiatsoli-4-yyli)-2-(me toksi-imino )-asetamido] -3-[(Z)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefee-mi-4-karboksylaatti, 1- asetoksietyyli-76- [ (Z )-2-( 2-aminotiatsoli-4-yyli )-2-( metoksi-imino )-asetamido] -3-[(E)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefee- 20 mi-4-karboksylaatti, pivaloyylioksimetyyli-76-[ (Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )- 2- (metoksi-imino)-asetamido]-3-[(Z)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-aset-25 amido] -3- [ (Z )-but-l-en-l-yyli] -3-kef eemi-4-karboksyylihap- po, 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-aset-amido] -3-[ (E )-but-l-en-l-yyli] -3-kef eemi-4-karboksyylihap-po, . . 30 asetoksimetyyli-76-[Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metok- si-imino)-asetamido-3-[(Z)-but-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, l-asetoksietyyli-76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino )- ase t amido] -3-[(Z)-but-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-' 35 4-karboksylaatti, 99 85487 l-asetoksietyyli-7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamido] -3- [ (E) -but-1 -en-1 -yyli ] -3-kefeemi- 4-karboksylaatti, pivaloyylioksimetyyli-7B- [ ( Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli ) -5 2-(metoksi-imino)-asetamido]-3-[(Z)-but-1-en-l-yyli]-3- kefeemi-4-karboksylaatti, 7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(2-metoksi-imino)-asetamido] -3- [ ( Z )-pent-l-en-l-yyli] -3-kef eemi-4-karboksyy-lihappo, 10 7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(2-metoksi-imino)- asetamido] -3- [ (E)-pent-1-en-l-yyli] -3-kefeemi-4-karboksyy-lihappo, l-asetoksietyyli-7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(me-toksi-imino)-asetamido]-3-[(Z)-pent-1-en-l-yyli]-3-kefee-15 mi-4-karboksylaatti, 7β-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-asetamido] -3-t(Z)-3-asetoksiprop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksyylihappo, 78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino)-aset-20 amido]-3-[(E)-3-asetoksiprop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4- karboksyylihappo, asetoksimetyyli-7B-[ (Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )-2-(metoksi-imino)-asetamido] -3-[(Z)-3-asetoksiprop-1-en-l-yyli] -3-kef eemi-4-karboksylaatti, 25 asetoksietyyli-76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(me- toksi-imino)-asetamido]-3-[(Z)-asetoksiprop-l-en-l-yyli]- 3-kefeemi-4-karboksylaatti, asetoksietyyli-7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(metoksi-imino )-asetamido]-3-[(E)-asetoksiprop-1-en-l-yyli]-30 3-kefeemi-4-karboksylaatti, 7B- [ (Z) -2- (2-aminotiatsol-4-yyli )-2-( asetoksi-imino) -asetamido] -3-[ (Z )-prop-1-en-l-yyli] -3-kefeemi-4-karboksyyli-. happo, l-asetoksietyyli-7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-35 (asetoksi-imino)-asetamido]-3-[(Z)-prop-l-en-l-yyli]-3- loo 85487 kefeemi-4-karboksylaatti, 76- [ (Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )-2-( asetoksi-imino) -aset-amido]-3-[(Z)-asetoksiprop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karb-oksyylihappo, 5 l-asetoksietyyli-7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- (asetoksi-imino)-asetamido]-3-[(Z)-3-asetoksiprop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, l-asetoksietyyli-78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(asetoksi-imino)-asetamido]-3-[(E)-3-asetoksiprop-l-en-l-10 yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(isopropyylioksi-imi-no)-asetamido]-3-[(Z)-prop-1-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karb-oksyylihappo, 7Ö- [ ( Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )-2-(allyylioksi-imino)-15 asetamido]-3-[ (z)-prop-1-en-l-yyli] -3-kefeemi-4-karboksyy- lihappo, 7B-[ (Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )-2-( etoksi-imino)-asetamido] -3- [ (Z )-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksyyli-happo, 20 78-[(Z )-2-( 2-aminotiatsol-4-yyli )-2-(syklopropyylimetoksi- imino)-asetamido]—3—[(Z)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksyy1ihappo, 78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(propargyylioksi-imi-no)-asetamido]-3-[(Z)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karb-25 oksyylihappo, (5-metyyli-2-okso-l, 3-dioksolen-4-yyli) -metyyli-78- [ (Z )-2-(2-aminotiatsol-4-yyli )-2-( hydroksi-imino) -asetamido] -3-[(Z)-prop-l-en-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti tai 30 l-(etoksikarbonyylioksi)-etyyli-7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol- 4-yyli)-2-(hydroksiamino)-asetamido]-3-[(Z)-prop-l-en-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti. » » · 101 85487