FI85284C - Foerfarande foer framstaellning av ett immobiliserat enzympreparat med hjaelp av ett tvaerbindningsmedel. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av ett immobiliserat enzympreparat med hjaelp av ett tvaerbindningsmedel. Download PDFInfo
- Publication number
- FI85284C FI85284C FI833615A FI833615A FI85284C FI 85284 C FI85284 C FI 85284C FI 833615 A FI833615 A FI 833615A FI 833615 A FI833615 A FI 833615A FI 85284 C FI85284 C FI 85284C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- enzyme
- glutaraldehyde
- crosslinking agent
- activity
- ett
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 102
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 102
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 50
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 45
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical group O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 33
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 23
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims description 21
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 94
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 51
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 26
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 24
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 20
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 108700040099 Xylose isomerases Proteins 0.000 description 11
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 10
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 10
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 7
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 6
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- -1 reinforcements Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 4
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 4
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 4
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 4
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 4
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 3
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 3
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- KIWBPDUYBMNFTB-UHFFFAOYSA-M ethyl sulfate Chemical compound CCOS([O-])(=O)=O KIWBPDUYBMNFTB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- WSWCOQWTEOXDQX-MQQKCMAXSA-M (E,E)-sorbate Chemical compound C\C=C\C=C\C([O-])=O WSWCOQWTEOXDQX-MQQKCMAXSA-M 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 241001274216 Naso Species 0.000 description 1
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical class OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical class [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021626 Tin(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N azane;7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole-4-sulfonic acid Chemical compound N.OS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C2=NON=C12 JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001112 coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000007931 coated granule Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003979 granulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 108010090785 inulinase Proteins 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 150000002730 mercury Chemical class 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 108010001078 naringinase Proteins 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940075554 sorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylammonium Chemical compound C[N+](C)(C)C QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJFVITRRNTVAPC-UHFFFAOYSA-L tetramethylazanium;sulfate Chemical class C[N+](C)(C)C.C[N+](C)(C)C.[O-]S([O-])(=O)=O KJFVITRRNTVAPC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009489 vacuum treatment Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/06—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
1 85284
Menetelmä immobilisoidun entsyymivalmisteen tuottamiseksi silloittavan aineen avulla
Entsyymit, jotka on immobilisoitu silloittavan aineen avulla, ovat laajimmin käytettyjä immobilisoitujen entsyymien muotoja. Tällaisten immobilisoitujen entsyymien valmistamiseksi on kehitetty useita menetelmiä. Yhdessä tällaisessa menetelmässä kantaja esim. aktivoidaan silloittavalla aineella, jonka jälkeen se käsitellään entsyymillä, joka tällöin kiinnittyy tiukasti kantajaan. Tällainen aktivoiminen sisältää mahdollisesti kantajan impregnoimisen polyamiinilla ja sen jälkeen käsittelyn ylimäärällä glutaraldehydiä kuten on kuvattu US-patentissa 4 292 199, tai julkaisussa Biotechnology and Bioengineering, 22, ss. 271-287, 1980. Toinen tällainen aktivoiminen voi sisältää kantajan pinnoittamisen adsorptiota edistävällä liukenemattomalla polymeerillä, tämän jälkeen entsyymin adsorboimisen polymeerin pinnalle ja edelleen immobilisoimisen silloittamalla in situ kuten on kuvattu US-patentissa 3 705 084. Vielä eräs tällainen aktivoiminen on kuvattu US-patentissa 4 069 106; keratiinia sisältävä kantaja aktivoidaan pelkistämällä keratiini ja silloittamalla entsyymi siihen S-S-ryhmien kautta. Vielä eräs tällainen aktivointi on kuvattu US-patentissa 3 802 909; lasi murskataan proteiinin läsnäollessa, jolloin aikaansaadaan tuoreita aktiivisia pintoja proteiinin kiinnittämiseksi. Vielä eräs tällainen aktivointi on kuvattu US-patentissa 3 519 538; lasi käsitellään peräkkäin joukolla kemikaaleja haluttujen aktiivisten pintojen saamiseksi. Vielä eräs immobilisoidun entsyymin valmistusmenetelmä on kuvattu julkaisussa Biochemical and Biophysical Research Communications Voi. 36, ss. 235-242, 1969: entsyymi adsorboidaan kolloidiseen silikaan, ilman edeltävää aktivointia, joka edelleen kiinnitetään silloittamalla glutaraldehydillä.
Kaikille yllä mainituille menetelmille on tyypillistä, että ohut entsyymimolekyylien kerros on suoraan kiinnitetty kantajan 2 85284 aktiivisille pinnoille ja siten immobilisoidun entsyymin määrä määräytyy aktiivisten pintojen määrän mukaan.
Aivan toisenlainen lähestymistapa on kiinnittää paljon paksumpi kerros kantajan pintaan, jolloin ainoastaan pieni osa entsyymimolekyyleistä on suorassa kontaktissa kantajan kanssa. Tällä tavoin kantajan pinta-ala ei määrää immobilisoidun entsyymin määrää, ja tällä tavoin on mahdollista optimoida sidotun entsyymin määrä määrän riippuessa prosessimuuttajis-ta lopullisen käytön aikana. Tämä lähestymistapa on kuitenkin vaikeampi toteuttaa, koska suhteellisen suuri entsyymi-määrä vaikeuttaa entsyymin pitämistä paikallaan immobilisoin-nin aikana. Siksi julkaisuissa on käsitelty suhteellisen vähän tätä lähestymistapaa huolimatta sen ilmeisistä eduista. Erään ehdotuksen mukaan, jota on kuvattu kanadalaisissa patenteissa n:ot 1 011 671 ja 1 011 672, käytetään silloittavana väliaineena vesiliukoisen orgaanisen liuottimen vesipitoista liuosta, orgaanisen liuottimen pitoisuus pidetään riittävän suurena pitämään entsyymi liukenemattomana, mutta kuitenkin riittävän pienenä ollakseen vaikuttamatta liian paljon silloittumisreaktioon. Suurin haitta tässä menetelmässä on orgaanisen liuottimen suhteellisen suuri määrä, jolloin räjähdysriskit vaativat suurempia turvallisuustoimenpiteitä. Tällä tavoin saadun tuotteen fysikaalinen stabiilisuus ja aktiivisuus eivät myöskään ole täysin tyydyttäviä johtuen mahdollisesti orgaanisen liuottimen suhteellisen suuresta pitoisuudesta, joka tarvitaan pitämään entsyymi pois liuoksesta immobilisoinnin aikana. Toinen menetelmä, johon liittyy tämä ongelma on esitetty US-patentissa n:o 4 116 771: entsyymiä käsitellään rajoitetussa määrässä vettä glutaraldehy-dillä ja inertillä proteiinilla ennen kuin se nopeasti lisätään kantajaan, annetaan geeliytyä, granuloidaan ja kuivataan lopuksi. Suurin tämän menetelmän haitta on silloittavan aineen suuri konsentraatio, joka on seuraus rajoitetusta vesimäärästä. Monet entsyymit ovat hyvin herkkiä suurille silloi-tusainepitoisuuksille, joko koska ne inaktivoivat tai koska ne suuresta silloittumisasteesta johtuen tulevat myöhempää •V-Ι käyttöä silmälläpitäen "suljetuiksi" tai molemmista syistä.
3 85284 Tämä valaisee suurinta vaikeutta kiinnitettäessä suurta määrää entsyymiä kantajaan: jotta saataisiin riittävän pieni pitoisuus silloittavalle aineelle tarvitaan suhteellisen suuri määrä väliainetta, jolloin entsyymin liukeneminen väliaineeseen on mahdoton estää ennenkuin silloittuminen tulee vaikuttavaksi, kun taas suuret silloittavan aineen pitoisuudet, jotka estäisivät entsyymin liukenemisen, ovat epätoivottavia kuten yllä on selitetty.
Täysin erilainen ongelman lähestymistapa on vesipitoisen väliaineen täydellinen välttäminen ja kaasufaasin käyttäminen sen sijaan; tämä on kuvattu julkaisussa The Journal of Society of Chemical Industry, Voi. 18, ss. 16-20 (1899) liukenemattomien gelatiinikuitujen valmistuksen yhteydessä, ja japanilaisessa patentissa J 57002683 entsyymien immobili-soinnin yhteydessä. Kuitenkin tämä menetelmä vaatisi hyvin huolelliset tuuletussysteemit, ja vaatisi edelleen erityiset laitteet liukenemattomien saostumien muodostumisen estämiseksi tuuletussysteemin sisäpuolelle.
Täten keksinnön kohteena on aikaansaada menetelmä immobili-soidun entsyymivalmisteen tuottamiseksi silloittavan aineen avulla, joka menetelmä olisi yksinkertainen toteuttaa, esimerkiksi ilman huolellisia turvatoimenpiteitä, ja jonka avulla valmistetulla immobilisoidulla entsyymillä olisi suuri aktiivisuus ja hyvä fysikaalinen stabiilisuus.
Nyt keksinnön mukaisesti on havaittu, että on mahdollista aikaansaada yllä mainittu päämäärä käyttämällä tiettyjä suoloja spesifisenä minimikonsentraationa. Vaikkakin yllä viitattu aikaisempi tekniikka kohdistuu ainoastaan kantajilla oleviin immobilisoituihin entsyymivalmisteisiin, keksintö ei rajoitu tällaisiin valmisteisiin vaan käsittää myöskin ilman kantajaa olevat immobilisoidut entsyymivalmis-teet.
Täten keksintö käsittää menetelmän immobilisoidun entsyymi-valmisteen tuottamiseksi silloittavan aineen avulla, jossa 4 85284 menetelmässä seuraavat komponentit saatetaan kosketuksiin vesipitoisessa väliaineessa: a) kiinteä tai liuoksena oleva entsyymivalmiste, b) silloittava aine, ja c) vesiliukoinen suola, joka ei reagoi silloittavan aineen kanssa tai inaktivoi entsyymiä, riittävänä pitoisuutena estääkseen pääasiallisen osan entsyymiä liukenemasta suolaliuokseen tai sekoittumasta siihen silloittumisreaktion aikana, jonka jälkeen immobilisoitu entsyymi otetaan talteen.
Mikäli valmis immobilisoitu entsyymi sisältää ylimäärän silloittavaa ainetta, se voidaan poistaa pesemällä.
On otettava huomioon, että entsyymivalmiste voi olla kiinteänä tai liuenneena; edelleen entsyymivalmiste voi olla puhdas tai se voi sisältää inerttejä lisäaineita (esim. täyteaineita, lujitteita, sidosaineita tai granuloivia aineita).
On myöskin otettava huomioon, että ainesosien sekoitusjärjestys on valinnainen sillä poikkeuksella, että mikäli ent-syylivalmiste ja silloittava aine saatetaan yhteen ennen suolan lisäämistä, entsyymisaanto vähenee jos suolan lisäystä viivytetään merkittävästi.
Yllä mainitut suolat (jolloin tietyt suolat määräytyvät kunkin spesifisen entsyymin ja spesifisen silloittavan aineen yhdistelmän mukaan) ovat tavallisesti halpoja suoloja.
On huomattava, että keksinnön mukaisessa menetelmässä voidaan käyttää yhtä tai useampaa entsyymivalmistetta, yhtä tai useampaa silloittavaa ainetta ja yhtä tai useampaa suolaa.
Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa suoritusmuodossa entsyymivalmiste sisältää kantajan. Vaikkakin keksinnön mukainen menetelmä voidaan suorittaa ilman kantajaa (esim.
' oheinen esimerkki 15), on tavallisesti edullista käyttää sitä, pääasiallisesti siksi, että kantajan avulla voidaan valmistaa partikkeli, jonka paremmat virtausominaisuudet ovat hyödylliset kiintopetioperaatioissa. Sillä onko entsyymi 5 85284 kiinteänä vai liuenneena ei ole merkitystä, vaan tässä ta- « pauksessa kantajassa; 'kiinteässä tilassa entsyymi voi olla peittävänä kerroksena kantajan pinnalla ja liuoksena entsyy-miliuos voi kyllästää (huokoisen) kantajan.
Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa sovellutusmuodossa entsyymivalmiste on kantaja, joka on pinnoitettu kiinteällä entsyymikerroksella. Tällöin on mahdollista valmistaa entsyymivalmiste, jossa haluttua entsyymimäärää voidaan säätää laajoissa rajoissa muuttamalla entsyymikerroksen paksuutta.
Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa sovellutusmuodossa entsyymivalmiste on huokoinen kantaja, joka on kyllästetty entsyymiliuoksella. Tällöin on saatu erittäin yksinkertainen menetelmä keksinnön mukaisen immobilisoidun entsyymivalmis-teen tuottamiseksi.
Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa sovellutusmuodossa silloittava aine on glutaraldehydi. Glutaraldehydi on suhteellisen halpa eikä ole terveysviranomaisten kieltämä. Glutaraldehydi on monien entsyymien suhteen myöskin hyvin tehokas ja kuitenkin hellävarainen silloittava aine.
Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa sovellutusmuodossa glutaraldehydin pitoisuus vesipitoisessa väliaineessa on välillä 0,001 ja 5 % (paino/tilavuus), edullisesti 0,005-1 % (paino/tilavuus). Kuten jäljempänä tässä selityksessä olevista esimerkeistä ilmenee, entsyymin aktiivisuus riippuu glutaraldehydin pitoisuudesta ja tavallisesti siitä glutaraldehydin pitoisuudesta, joka vastaa entsyymin maksimiaktiivi-suutta, joka on havaittavissa yllä osoitetulla välillä. Glutaraldehydin prosenttiosuus (paino/tilavuus) lasketaan seuraavan kaavan mukaisesti _glutaraldehydin määrä, g_ ^.oo suolaliuoksen ja glutaraldehydin yhteistilavuus, ml
Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa sovellutusmuodossa 6 35284 suola valitaan ryhmästä: sulfaatti, fosfaatti, sitraatti, bikarbonaatti, karbonaatti, fluoridi, asetaatti, tartraatti, polysulfaatti, polyfosfaatti, ferrosyanamidi, fenolisulfo-naatti, sorbaatti, etyylisulfaatti, kloridi, nitraatti ja sekundaarinen, tertiaarinen tai kvaternaarinen ammonium- tai jonkin alkalimetallin sukkinaatti, erityisesti natriumsul-faatti, natriumfosfaatti, kaliumfosfaatti ja kaliumsitraatti. Yleensä nämä suolat ovat halpoja, talteenotettavissa ja niiden avulla voidaan valmistaa immobilisoitu entsyymivalmiste, jonka entsyymiaktiivisuus on suuri.
Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa sovellutusmuodossa suolakonsentraatio on 0,1 M - tyydyttynyt liuos, erityisesti n. 0,5 M - 3 M. Kuten jäljempänä tässä selityksessä olevista esimerkeistä ilmenee, glutaraldehydin pitoisuus ja suolan mooliosuus on mahdollista valita yllä mainittujen rajojen sisältä, mikä johtaa erittäin suureen entsyymiaktiivisuuteen.
Keksinnön mukaisen menetelmän edullisessa sovellutusmuodossa entsyymi valitaan ryhmästä: glukoosi-isomeraasi, amylaa-si, erityisesti amyloglukosidaasi, pullulanaasi, laktaasi, pektinaasi, naringinaasi, penisilliiniasylaasit, inulinaasit, lipaasit ja proteaasit.
Tällöin yllä mainittujen suolojen käyttö, myöskin pienempinä pitoisuuksina kuin mitä tarvitaan entsyymien saostamiseen, estää kaikissa käytännön tarkoituksissa entsyymiä liukenemasta silloittavaan väliaineeseen (suolaliuokseen), ja pitää entsyymin samalla vapaana silloittavalle aineelle mikäli entsyymi on kiinteässä tilassa, tai estää entsyymiä sekoittumasta suolaliuokseen mikäli entsyymi on liuoksessa. Tällä tavoin voidaan käyttää silloittavan aineen optimikonsentraa-’ tiota, jolloin entsyymi vahingoittuu ainoastaan minimaalises ti ja saadaan kuitenkin riittävän hyvä fysikaalinen stabiilisuus. Näin ollen on havaittu, että pienennettäessä silloittavan komponentin osuutta, on lisättävä suolakonsentraatiota ; entsyymiaktiivisuuden säilyttämiseksi optimaalisella tasolla.
1 85284
Keksinnön mukaisesti vältetään sellaisten suolojen käyttöä, jotka reagoivat joko entsyymin tai silloittavan aineen kanssa, kuten hopea- tai elohopeasuolojen käyttöä, jotka saattavat inaktivoida entsyymin, tai ammoniumsuolojen tai primaaristen amiinisuolojen tai sulfiittisuolojen käyttöä, jotka pyrkivät reagoimaan useiden silloittavien aineiden kanssa. Suolat, joita voidaan käyttää tämän keksinnön tarkoituksiin vaihtelevat huomattavasti tehokkuuksiensa suhteen, ja lisäksi tämä tehokkuus pyrkii vaihtelemaan entsyymin mukaan. Kuitenkin joitakin summittaisia ohjeita suolan valinnasta voidaan antaa seuraavasti: kahdesta muuten ominaisuuksiltaan identtisestä suolasta on edullista valita liukoisempi. Tällöin Na2S04 on tavallisesti edullisempi kuin K2S04 paremman liukoisuutensa takia. On myöskin havaittu, että yleensä moni-valenttisten anionien, kuten sulfaattien, fosfaattien, karbonaattien, sitraattien ja vastaavien suolat ovat tehokkaampia kuin monovalenttisten anionien, kuten kloridien ja nitraattien suolat. Kationien suhteen asia on tavallisesti kuitenkin päinvastainen. Monovalenttiset kationit, kuten Na+, K+ tai tetrametyyliammonium ovat tehokkaampia kuin multiva-lenttiset, kuten Mg tai Ca . Edullisia suoloja ovat tämän vuoksi sulfaattien, fosfaattien ja sitraattien alkalimetalli-suolat ja erityisesti natriumsulfaatti, natriumfosfaatti, kaliumfosfaatti, kaliumsitraatti ja tetrametyyliammoniumsul-faatti.
Suolapitoisuus pidetään tavallisesti miniminä. Tämä minimi riippuu toisaalta kyseessä olevasta entsyymistä, koska eri entsyymit usein vaativat eri pitoisuudet ja toisaalta silloittavan aineen pitoisuudesta: mitä suurempi jälkimmäinen on, sitä vähemmän tarvitaan suolaa, ja päinvastoin. Silloittavan aineen pitoisuus pidetään myöskin minimissä, koska useimmat entsyymit ovat herkkiä silloittavalla aineelle. Pitoisuuden pitäisi kuitenkin olla riittävän korkea tehokkaan immobilisoimisen varmistamiseksi. Suurilla suolapitoisuuksilla, etenkin tehokkaiden suolojen ollessa kyseessä, tulisi kuitenkin olla huolellinen arvioitaessa optimiolosuhteita. On havaittu, että esimerkiksi Na2S04:n tai kaliumfosfaatin β 85284 suurilla pitoisuuksilla aktiivisuussaannot ovat huomattavasti pienentyneet verrattuna keskinkertaisiin pitoisuuksiin.
Tämä johtuu luultavasti erittäin tiheästä silloittumisesta, jolloin entsyymimolekyylit eivät ole täysin vapaina.
Kuitenkin toinen etu näiden suolojen käytössä silloittavassa väliaineessa on entsyymiä sisältävien partikkeleiden estyminen tarttumasta toisiinsa immobilisointireaktion aikana, jos entsyymi on läsnä kiinteänä. Tällainen aggregoituminen ei ole toivottavaa, koska se aiheuttaa pieniä tehokkuuksia ja huonontuneita virtausominaisuuksia käytön aikana. Myöskin tässä suhteessa suolat vaihtelevat suuresti.
Keksinnön mukainen menetelmä voidaan suorittaa useissa vaiheissa, joiden järjestys ei ole ratkaiseva. Täten esimerkiksi keksinnön edullisessa sovellutusmuodossa kantaja ensin käsitellään entsyymiliuoksella, kuivataan ja käsitellään sitten liuoksella, joka sisältää silloittavaa ainetta ja suolaa, pestään ja mahdollisesti kuivataan. Saman prosessin muunnelmassa osa kokonaissuolamäärästä voidaan lisätä entsyy-miliuokseen. Vielä toisessa muunnelmassa entsyymi käsitellään ensin silloittavalla aineella ja heti välittömästi suolalla. Tietyissä tarkoituksissa,esimerkiksi kun halutaan, että immobilisoitu entsyymi on kevyt ja kuitumainen, kantajan määrä voi olla hyvin pieni, tai kantaja voidaan jättää kokonaan pois, ja käsitellä entsyymi koaguloivassa panoksessa silloittavalla aineella ja suolalla. Tällöin entsyymi voi olla liuotettuna liuokseen, joka koaguloidaan suolakylvyssä, silloittava aine lisätään entsyymilluokseen tai kylpyyn joko ennen koagulointia tai sen jälkeen. Suola voidaan lisätä myöskin kuivana jauheena liuoksen sijasta mikäli halutaan rajoittaa veden määrää. Tällöin eri komponenttien sekoitus järjestys ja olomuoto, ts. liuos vai kiinteä aine, ei : : ole ratkaiseva keksinnön mukaisessa menetelmässä.
Happamuudella, lämpötilalla ja silloitusreaktion kestolla voi olla erittäin suuri vaikutus entsyymistä ja mahdolli- 9 85284 sesti läsnä olevista lisäaineista johtuvaan aktiivisuuteen. Yleisesti on havaittu, että pH-alue n, 4 - n. 9 on sopiva. Useimmissa tapauksissa sopiva lämpötila-alue on n. 15°C-30°C, vaikka korkeammat lämpötilat ovat tietyissä tapauksissa edullisia, esimerkiksi kun halutaan lyhentää silloitusreaktion kestoa, ja alemmat lämpötilat ovat edullisia erittäin lämpö-herkkien entsyymien tapauksissa. Silloitusreaktion kesto voi vaihdella laajasti, muutamista minuuteista muutamiin päiviin riippuen silloittavan aineen tyypistä ja pitoisuudesta, suolatyypistä ja -pitoisuudesta, entsyymistä, pH:sta ja lämpötilasta ja se tulee määrittää erikseen kussakin tapauksessa. Glutaraldehydille ja useimmille entsyymeille aika 10 minuutista useisiin tunteihin huoneen lämpötilassa näyttää kuitenkin oleva sopiva.
Seuraavassa on viitattu erilaisiin NOVO-kirjallisuusviit-teisiin. Näistä kaikista viitteistä on saatavana kopiot osoitteesta NOVO Industri A/S, Novo Alle, 2880 Bagsvaerd, Tanska.
Keksinnön mukaista menetelmää valaistaan seuraavien esimerkein.
Seuraavassa, esimerkit käsittävässä selityksen osassa on osoitettu painehäviöarvot (fysikaalinen lujuus) kolonnityös-kentelyn aikana. Tämä arvo määrätään menetelmän AF 166/2 mukaisesti, joka vastaa NOVO-larboratorio-ohjettä. Joitakin tähän painehäviön määrittämiseen liittyviä teoreettisia seikkoja on kuvattu julkaisussa Starch/Stärke 31 (1979) n:o 1, sivut 13-16. Verrattaessa tunnettuihin kaupallisiin tuotteisiin voidaan mainita, että immobilisoidulle glukoosi-isome-raasivalmisteelle, SWEETZYME-saadut parhaat painehäviöarvot ovat n. 10 g/cm . Esimerkeistä ilmenee, että painehäviöt keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetuille immobili- o soiduille entsyymipreparaateille on jopa 2 g/cm ja että •. · 2 kaikki arvot ovat huomattavasti pienempiä kuin 10 g/cm , jolloin keksinnön tekninen etu on selvästi osoitettu.
10 85284
Esimerkki 1 20 gramman erä kuivia kantajapartikkeleita, jotka oli pin- « noitettu osittain puhdistetulla glukoosi-isomeraasivalmis-teella 28 % (paino/paino) ja jotka oli valmistettu suomalaisen patenttihakemuksen n:o 833614 esimerkissä 8 kuvatulla menetelmällä, suspendoitiin ja sekoitettiin varovasti 500 ml:aan liuosta, joka sisälsi 0,06 M nat-riumfosfaattia, 1,4 M ja erikokoisia määriä glutaral- dehydiä, ja joka oli säädetty pH-arvoon 7,0. Tunnin kuluttua partikkelit poistettiin ja suspendoitiin tunniksi 0,06 M natriumfosfaattilluokseen, jonka pH säädettiin arvoon 7,0. Tämä pesu toistettiin kolme kertaa ja sitten partikkelit jätettiin yli yön fosfaattiliuokseen, minkä jälkeen niiden aktiivisuus määritettiin NOVO Analyseforskrift AF 189/1 mukaisesti. Tulokset on esitetty kuviossa 1, jonka käyrässä entsyymiaktiivisuus ilmaistuna entsyymiyksikköinä/g on esitetty glutaraldehydin prosenttiosuuksien funktiona, ja joka esittää entsyymin herkkyyden glutaraldehydille.
Esimerkki 2 (vertailu)
Partikkelit valmistettiin kuten esimerkissä 1, ainoastaan suolaa ei lisätty, erillään minimimäärästä fosfaattia, joka toimii puskurina (0,06 M natriumfosfaattia, pH 6,5). Glutaraldehydin prosenttiosuus on (kuviossa 2) esitetty suhteessa entsyymiaktiivisuuteen ilmaistuna yksikköä/g, mikä osoittaa, että silloittavalla aineella on kaksi vastakkaista vaikutusta: toisaalta se lisää saantoa estämällä entsyymin liukenemista { toisaalta se vähentää saantoa inaktivoimalla entsyymiä. Optimi saadaan tässä tapauksessa n. 1 prosentilla glutaraldehydiä. Verrattaessa kuviota 1 ja kuviota 2 ilmenee, että glutaraldehydin optimipitoisuus on n. 40 kertaa ; niin suuri kuin 1,4 M natriumsulfaatin, ja että saanto tässä tapauksessa on ainoastaan n. 60 % suolan avulla saatavasta saannosta.
Esimerkki 3
Partikkelit valmistettiin kuten esimerkissä 1, suolana käytettiin kaliumfosfaattia, ja suolapitoisuus vaihteli kun taas 11 85284 glutaraldehydipitoisuus pidettiin vakiona kolmella tasolla ja pH-arvossa 6,5. Kaliumfosfaatin prosenttiosuus on oheisessa kuviossa 3 esitetty suhteessa entsyymiaktiivisuuteen ilmaistuna yksikkönä/g, mikä selvästi ilmaisee, erityisesti pienillä glutaraldehydipitoisuuksilla, suolapitoisuuden korottamisen hyödyllisen vaikutuksen.
Esimerkki 4
Esimerkin 3 koe toistettiin,tässä natriumsulfaattia käytettiin kaliumfosfaatin asemesta. Na2S04-mooliosuus on oheisessa kuviossa 4 esitetty suhteessa entsyymiaktiivisuuteen ilmaistuna yksikköinä/g, josta selvästi ilmenee suolan hyödyllinen vaikutus. Kuten kuviosta 4 myöskin ilmenee on olemassa suolaoptimi, jonka jälkeen aktiivisuus vähenee, tämä optimi riippuu glutaraldehydipitoisuudesta.
Esimerkki 5
Esimerkissä 3 kuvattu koe toistettiin, ainoastaan suolapitoisuutta lisättiin. Kaliumfosfaatin molaarisuus on oheisessa kuviossa 5 esitetty suhteessa entsyymiaktiivisuuteen ilmaistuna yksikköinä/g. Kuvioiden 4 ja 5 vertailu osittaa, että Na2S0^ ja kaliumfosfaatti käyttäytyvät samalla tavoin.
Esimerkki 6
Esimerkissä 1 kuvattu koe toistettiin, ainoastaan kalium-sitraattia, pH 7, käytettiin fosfaatin ja sulfaatin sijasta silloittavana aineena. Kuviossa 6 glutaraldehydipitoisuus on esitetty suhteessa entsyymiaktiivisuuteen yksikköinä/g, ja tulokset muistuttavat selvästi esimerkin 1 tuloksia.
Esimerkki 7 20 g kuivia kantoainepartikkeleita, jotka oli valmistettu suomalaisen patenttihakemuksen n:o 833614 esimerkin 4 mukaisesti leijutettiin Lab-tyyppisessä leijukerrok-sessa 45,8 g 11,0-prosenttista paino/paino homogenoitua solulietettä (fermentoitu kuten tanskalaisessa patenttihakemuksessa n:o 5190/79, esimerkissä 1 on osoitettu, liete valmistettu kuten tanskalaisessa patenttihakemuksessa 5190/79 12 85284 esimerkissä 4 on osoitettu), joka sisälsi 80,1 U/g terraofii-listä laktaasia Bacillus-lajista NRRL B-11.229, ruiskutettiin kantajapartikkeleiden päälle 30-40°C:ssa, ja pinnoitettujen partikkeleiden annettiin kuivua. Laktaasiaktiivisuus-yksikkö määriteltiin laktaasimääränä, joka hajottaa 1 ^umoolia laktoosia/minuutti seuraavissa reaktio-olosuhteissa: sub-straattipitoisuus = 10 % laktoosia, lämpötila = 60°C, pH = 6,5 ja reaktioaika 30 min. Entsyymin aktiivisuus oli 79,8 %.
10 g pinnoitettuja rakeita käsiteltiin sitten 250 ml:ssa liuosta, joka sisälsi 0,06 M Na2HP04, 1,4 M Na2S04 ja 0,1 % paino/tilavuus glutaraldehydiä pH:n ollessa 7,5. Tunnin kuluttua huoneen lämpötilassa partikkelit poistettiin ja pestiin huolellisesti 0,06 M I^HPO^llä happamuudessa pH = 7,5. Aktiivisuus suhteessa silloittumisvaiheeseen oli 17,2 %.
Esimerkki 8 24 g suomalaisen patenttihakemuksen n:o 833614 esimerkin 4 mukaan valmistettuja kuivia kantajapartikkeleita sekoitettiin 20,2 g:aan 39,6-prosenttista paino/’paino osittain puhdistettua amyloglukosidaasia lajista A. niger, joka 011 valmistettu ultrasuodattamalla kaupallista tuotetta AMG 200 L (kuvattu NOVO-esiteessä NOVO Enzymes AMG, B 020 g-GB) pienimolekyylisten aineksien poistamiseksi kuiva-ainepitoisuuteen 39,6 % paino/paino (aktiivisuus 2610 IAG/g, ak-tiivisuusyksikön määritellyt NOVO Analyseforskrift AF 159/2). Vakuumia pidettiin 1 tunti. Tällä tavoin saatu tuote sisälsi 25 paino-% osittain puhdistettua amyloglukosidaasikuiva-ainetta, jonka entsyymiaktiivisuus oli 77,9 %.
20 g partikkeleita, joiden kuiva-ainetta oli 71,8 %, käsiteltiin sitten 1600 ml:ssa liuosta: 0,06 M Ν3Η2?0^, 1,4 M . ·- Na2S04 ja 0,2 % glutaraldehydiä happamuudessa pH = 4,5.
____ Tunnin kuluttua partikkelit poistettiin suodattamalla ja pestiin 0,06 M NaH2PO^ happamuudessa pH = 4,5.
Entsyymiaktiivisuus suhteessa silloittumisvaiheeseen oli 55,1 %.
i3 85284
Esimerkki 9 40 g kantajapartikkeleita, jotka oli valmistettu suomalaisessa patenttihakemuksessa n:o 833514 esimerkissä 4 osoitetulla tavalla, ja joiden kuiva-ainepitoisuus oli 98,8 %, ja 24 g vakuumissa haihdutettua osittain puhdistettua lajin Bacillus coagulans glukoosi-isomeraasikonsentraat-tia, johon oli lisätty 5 % glukoosia ja 8 % natriumsulfaattia (kuiva-aine 41,8 %), sekoitettiin keskenään ja partikkelien huokosissa oleva ilma korvattiin nesteellä vakuumikäsittelys-sä. Paino sekoituksen jälkeen oli 63,22 g. Kuiva-ainetta oli 79,2 %.
18 g:n eriä tätä valmistetta (~ 14 g kuiva-ainetta) käsiteltiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa 375 ml :11a liuosta, joka sisälsi kaikissa tapauksissa 1,5 M natriumsulfaattia, 5 % glukoosia ja 0,06 H natriumfosfaattia säädettynä happamuuteen pH 7,5, ja edelleen joko 0,1, 0,2 tai 0,3 % glutar-aldehydiä.
Tämän käsittelyn jälkeen erät pestiin viisi kertaa n.
150 ml :11a 1-prosenttista natriumfosfaattia, pH 7,5.
Entsyymiaktiivisuus määritettiin menetelmän AF 189/1 mukaisesti sen jälkeen kun neste oli kuivattu partikkeleista. Myöskin kuiva-aine määritettiin kuivatuista partikkeleista.
% kuiva- U/g u/g Saanto, Immob, ainetta märkä kuiva %_ saanto, % 4i>« 1415 3385
Entsy^itoisuus + 792 463 Μ5 86
KcUTCcl^)cl
InmobllXSOltU Λ* r ICO aqc. oo 0,1 %:lla GA 32'5 158 486 72 83 liltlCbxliSOltU *2 0 A 1 Λ1 nro C*2 CL ^ 0,2 %:lla GA 38'9 141 362 53
Irmobilisoitu „Q c- 0,3 %:lla GA ‘ 117 333 49 57 i4 85284 Näytteet, jotka olivat ekvivalenttiset 5 g:lie kuiva-ainetta testattiin painehäviön suhteen.
Glutaraldehydipitoisuus Painehäviö immobilisoitaessa 25 h 50 h 0,1 % 3 5 0,2 % 1 3 0,3 % 2 3
Esimerkki 10 Tämä esimerkki kuvaa menetelmää immobilisoidun entsyymi-valmisteen tuottamiseksi, jossa kantajana on aktiivihiili, Norit.
Tällöin 20 g aktiivihiiltä Norit Rox 0,8, tyyppiä A-3397 ravistettiin 33 g:ssa 39,2-prosenttista paino/paino osittain puhdistettua glukoosi-isomeraasiliuosta, glukoosi-isomeraasi oli saatu lajista Bacillus coagulans (aktiivisuus 3950 U/g kuiva-ainetta, aktiivisuusyksikkö määritetty NOVO:n julkaisussa "Analyseforskrift" AF 189/1).
Vakuumia pidettiin 20 h 4°C:ssa paitsi, että se päästettiin neljä kertaa tänä aikana. Tällä tavoin saatu tuote sisälsi 35 paino-% osittain puhdistettua glukoosi-isomeraasikuiva-ainetta, jonka entsyymiaktiivisuus oli 97 %.
98 % yllä selostetusta aggregoidusta tuotteesta immobilisoi-tiin sitten 890 ml:ssa liuosta 0,06 M KH2PO4, 1,4 M NaS04 ja 0,18 % glutaraldehydiä, pH säädettiin arvoon 7,5 4 N NaOHrlla. Kahden tunnin varovaisen sekoittamisen jälkeen huoneen lämpötilassa partikkelit poistettiin suodattamalla ja pestiin huolellisesti 0,06 M KH2P04:llä, pH 8,0. Aktiivisuus suhteessa silloittumisvaiheeseen oli 31 %.
Esimerkki 11 Tämä esimerkki kuvaa menetelmää immobilisoidun entsyymipre-paraatin valmistamiseksi, jossa kantaja muodostuu sulkapalloista, joiden halkaisija on n. 2 mm.
15 85284 A. 20 g silikapallosia leijutettiin laboratoriotyypin leijukerroksessa ja 40 g 15-prosenttista paino/paino osittain puhdistettua glukoosi-isomeraasiliuosta lajista Bacillus coagulans (aktiivisuus 3306 U/g kuiva-ainetta, aktiivisuus määritelty NOVO:n julkaisussa Analyseforskrift AF 189/1) ruiskutettiin pallosten päälle 25-30°C:ssa, ja pinnoitettujen pallojen annettiin kuivua. Näin saatu tuote sisälsi 23 paino-% osittain puhdistettua glukoosi-isomeraasia, jonka aktiivisuus oli 78 %.
95 % pinnoistetuista palloista käsiteltiin sitten 500 ml:lla liuosta, joka sisälsi 0,06 M I^HPO^, 1,4 M Na2SO^ ja 0,1 % paino/tilavuus glutaraldehydiä, pH säädetty arvoon 7,5 NaOH:lla; tunnin kuluttua huoneen lämpötilassa partikkelit poistettiin ja pestiin huolellisesti 0,06 M KH2PO^:llä pH:ssa 8,0. Tämän jälkeen määritettiin aktiivisuus. Aktiivisuus suhteessa silloittamisvaiheeseen oli 55 %.
B. 20 g silikapallosia ravistettiin 15 g:ssa 40-prosenttista paino/paino osittain puhdistettua glukoosi-isomeraasiliuosta, isomeraasi saatu lajista Bacillus coagulans (aktiivisuus 3270 U/g kuiva-ainetta), johon oli lisätty 0,56 M Na2SO^:a. Vakuumia pidettiin 20 min paitsi, että vakuumi päästettiin 4 kertaa tänä aikana. Näin saatu tuote sisälsi 20 paino-% osittain puhdistettua glukoosi-isomeraasia, jonka entsyymi-aktiivisuus oli 95 %. 95 % pinnoitetuista palloista käsiteltiin sitten tämän esimerkin osassa A kuvatulla tavalla. Aktiivisuus suhteessa silloittamisvaiheeseen oli 45 %.
Eräissä tapauksissa, kun entsyymin silloittaminen on erityisen vaikeata, suolat saattavat olla ei vain edullisia, vaan suorastaan välttämättämiä, kun entsyymi on immobilisoitava puhtaana. Hyvä esimerkki on amyloglukosidaasi, jota valmistaa NOVO (ja myy esimerkiksi tavaramerkillä AMG 200 L, kts. esitettä NOVO enzymes AMG, B 020 g-GB 2500, heinäkuu 1982) ja jota on käytännöllisesti katsoen mahdotonta immo-bilisoida puhtaana glutaraldehydin kanssa: on todettu mahdottomaksi tehdä tämä amyloglukosidaasi liukenemattomaksi jopa ie 85284 niinkin suuressa glutaraldehydikonsentraatiossa kuin 50 % paino/paino. Keksinnön mukaisessa menetelmässä käytettyjen suolojen avulla (joskin melko suurena konsentraationa) on kuitenkin mahdollista tehokkaasti tehdä entsyymi liukenemattomaksi jopa niinkin alhaisessa glutaraldehydikonsentraatiossa kuin 0,05 % paino/tilavuus, kuten ilmenee seuraavista esimerkeistä 12-17. Näin saatuja valmisteita, jotka ovat erittäin hyvin suodatettavissa ja kuitenkin ovat helposti juoksevia, voidaan edullisesti käyttää esimerkiksi pienika-lorisen oluen valmistukseen.
Esimerkki 12
Kaupallinen NOVO AMG 200 L, joka oli laimennettu kuiva-ainepitoisuuteen 30 % paino/tilavuus sekoitettiin Hyflo Celite'n kanssa ja kuivattiin, jolloin saatiin valmiste, joka sisälsi 21 % paino/paino AMG-valmisteesta peräisin olevaa kuiva-ainetta. 1 g:n erä valmistetta lisättiin sitten liuokseen, joka sisälsi 2,4 M Na2SO^, 0,06 M kaliumfosfaattia happamuudessa pH 6,5 ja glutaraldehydiä eri pitoisuuksina 32°C:ssa, ja koko seos jätettiin huoneen lämpötilaan 20 tunniksi. Tämän jälkeen partikkelit suodatettiin ja huuhdottiin kolme kertaa deionisoidulla vedellä ja aktiivisuussaanto mitattiin. Tulokset osoittavat tutun mallin glutaraldehydin kahdesta vastakkaisesta vaikutuksesta, jolloin optimi on 0,05 %, kts. kuvio 7.
Esimerkki 13
Esimerkin 12 menetelmä toistettiin, ainoastaan eri ^280^-pitoisuuksia käytettiin. Tämän entsyymin aktiivisuus on erittäin herkkä läsnä olevalle suolamäärälle, kts. kuvio 8.
Esimerkki 14
Esimerkin 12 menetelmä toistettiin, paitsi että AMG-val-miste sisälsi tässä ainoastaan puolet entsyymimäarästä. Tuloksena havaittiin glutaraldehydioptimin selvä muutos pienempien pitoisuuksien suuntaan, kts. kuvio 9.
Esimerkki 15 NOVO AMG 200 L spraykuivattiin ja saatu jauhe käytettiin 17 85284 lähtöaineena, menetelmä vaihteli jonkin verran: 0,5 g AMG-jauhetta lisättiin 100 ml:aan liuosta, joka sisälsi 2,5 M Na2S0^, 0,1 M kaliumfosfaattia, pH 6,5, ja 1-prosent-tista paino/tilavuus glutaraldehydiä 32°C:ssa, ja jätettiin huoneen lämpötilaan tunniksi satunnaisesti sekoittaen. Näin saadut liukenemattomat partikkelit suodatettiin sitten ja inkuboitiin uudelleen samassa väliaineessa, ainoastaan ilman glutaraldehydiä, ja samassa lämpötilassa edelleen 20 h. Tämän jälkeen ne suodatettiin ja huuhdeltiin kolme kertaa deionisoidulla vedellä. Näiden helposti suodattavien mikro-pallojen halkaisijat olivat n. 10-100 ^um ja ne säilyttivät 19 % alkuperäisestä aktiivisuudestaan.
Esimerkki 16
Esimerkin 15 menetelmä toistettiin, paitsi, että glutaraldehydi lisättiin suolaliuokseen sen jälkeen kun entsyymijauhe oli lisätty siihen. Tällä tavoin valmistettiin samanlainen tuote, jonka aktiivisuus oli 34 % alkuperäisestä.
Esimerkki 17
Toistettiin jälleen esimerkin 15 menetelmä, paitsi että käytettiin ainoastaan 0,4 % paino/tilavuus glutaraldehydiä ja kokonaisinkubaatioaika lyhennettiin 3 tuntiin. Tällä tavoin valmistettiin tuote, jonka aktiivisuus oli 37 % alkuperäisestä.
Esimerkki 18 Tämä esimerkki kuvaa keksinnön mukaisen menetelmän soveltuvuutta muihin silloittaviin aineisiin kuin glutaraldehydiin, nimittäin monivalenttisiin kationeihin. Tässä tapauksessa silloittavana aineena käytettiin Sn++++;a> Tällöin 0,5 g Celite -AMG-valmistetta esimerkistä 12, sellaisena kuin se oli ennen silloittamista, lisättiin hitaasti sekoittaen 100 ml:aan liuosta, joka sisälsi 2 M Na2SO^:a, 0,4 M kaliumasetaattia (pH 4,35) ja 0,0086 M SnCl^ · 5H20:a, ja seos jätettiin huoneen lämpötilaan 5 minuutiksi satunnaisesti sekoittaen. Näin saadut partikkelit suodatettiin ja dispergoitiin 100 ml:aan 0,2 M kaliumasetaattia, pH 4,35, ja suspensiota sekoitettiin 5 min. Tämä menetelmä toistettiin kolme kertaa. Lopputuotteen ensyymiaktiivisuus oli 43 %.
ie 85284
Esimerkki 19 Tässä esimerkissä tuote valmistettiin esimerkissä 18 kuvatun menetelmän mukaisesti, ainoastaan asetaatti- ja tinasuola-konsentraatiot kaksinkertaistettiin 0,8 M:iin ja 0,017 M:iin vastaavasti. Saatiin samanlainen tuote, entsyymiaktiivisuus oli 65 %.
Esimerkki 20 Tässä esimerkissä toistettiin myöskin esimerkin 18 menetelmä, ainoastaan asetaattikonsentraatio alennettiin puoleen, ts. 0,2 M:iin. Jälleen saatiin samanlainen tuote, entsyymi-aktiivisuus oli 48 %.
Esimerkki 21 Tässä esimerkissä kuvataan vielä yhden silloittavan aineen, nimittäin bentsokinonin, käyttöä. Tällöin lisättiin 0,5 g kuivattua esimerkin 12 mukaista Celite-AMG-valmistetta 75 ml:aan seosta, joka sisälsi 2,1 M Na2S0^:a ja 0,05 M natriumasetaattia, minkä jälkeen lisättiin 5 ml 20-prosent-tista paino/tilavuus puhtaassa etanolissa olevan bentsokinonin liuosta, ja koko seos jätettiin huoneen lämpötilaan 80 minuutiksi satunnaisesti sekoittaen. Näin saadut partikkelit suodatettiin, dispergoitiin 75 ml:aan 0,1 M kalium-asetaattipuskuria, pH 4,4, sekoitettiin 5 min ja suodatettiin uudelleen. Tämä menetelmä toistettiin kolme kertaa, ja aktiivisuus määritettiin. Entsyymiaktiivisuus oli 14 %.
Claims (7)
1. Menetelmä immobilisoidun entsyymivalmisteen tuottamiseksi silloittavan aineen avulla, tunnettu siitä, että seuraavat komponentit saatetaan kosketuksiin vesipitoisessa väliaineessa: a) kiinteässä tai liuenneessa tilassa oleva entsyymivalmis-te, b) silloittava aine, ja c) vesiliukoinen suola, joka ei reagoi silloittavan aineen kanssa tai inaktivoi entsyymiä, riittävän suurena pitoisuutena estääkseen pääasiallisen osan entsyymistä liukenemasta suolaliuokseen tai sekoittumasta siihen silloittumisreaktion aikana, minkä jälkeen immobilisoitu entsyymi otetaan talteen.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että entsyymivalmiste käsittää kantajan.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että entsyymivalmiste on kiinteän entsyymin kerroksella pinnoitettu kantaja.
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että entsyymivalmiste on entsyymiliuoksella kyllästetty huokoinen kantaja.
5. Patenttivaatimusten 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että silloittava aine on glutaraldehydi.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vesipitoisen väliaineen glutaraldehydipitoisuus on välillä 0,001 ja 5 % (paino/tilavuus), edullisesti 0,005-1 % (paino/tilavuus).
7. Patenttivaatimusten 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suolapitoisuus on välillä 0,2 M ja kyllästyspi-toisuus erityisesti n. 0,5 M - 3 M. 20 85284
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK443182 | 1982-10-06 | ||
| DK443182 | 1982-10-06 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI833615A0 FI833615A0 (fi) | 1983-10-05 |
| FI833615L FI833615L (fi) | 1984-04-07 |
| FI85284B FI85284B (fi) | 1991-12-13 |
| FI85284C true FI85284C (fi) | 1992-03-25 |
Family
ID=8133457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI833615A FI85284C (fi) | 1982-10-06 | 1983-10-05 | Foerfarande foer framstaellning av ett immobiliserat enzympreparat med hjaelp av ett tvaerbindningsmedel. |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4665028A (fi) |
| JP (1) | JPS59130184A (fi) |
| KR (1) | KR900007631B1 (fi) |
| AR (1) | AR245215A1 (fi) |
| BE (1) | BE897926A (fi) |
| CA (1) | CA1205402A (fi) |
| DE (1) | DE3336257A1 (fi) |
| ES (1) | ES8504247A1 (fi) |
| FI (1) | FI85284C (fi) |
| FR (1) | FR2534272B1 (fi) |
| IE (1) | IE56079B1 (fi) |
| IT (1) | IT1163947B (fi) |
| NL (1) | NL192796C (fi) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3515252C2 (de) * | 1985-04-27 | 1994-02-24 | Roehm Gmbh | Verfahren zur Immobilisierung gelöster Eiweißstoffe |
| US4713333A (en) * | 1985-09-23 | 1987-12-15 | Miles Laboratories, Inc. | Immobilization of biocatalysts on granular diatomaceous earth |
| FI85285C (fi) * | 1988-05-13 | 1992-03-25 | Stabra Ag | Tvaerbundet, vattenoloesligt glukosisomeras och foerfarande foer framstaellning daerav. |
| EP1088887A1 (en) * | 1999-09-23 | 2001-04-04 | Dsm N.V. | Crosslinked enzyme aggregates |
| NL1017258C2 (nl) * | 2001-02-01 | 2002-08-02 | Univ Delft Tech | Werkwijze voor het maken van vernette enzymaggregaten. |
| US20040130968A1 (en) * | 2002-10-09 | 2004-07-08 | Novozymes A/S | Method for improving particle compositions |
| US7311926B2 (en) * | 2002-12-20 | 2007-12-25 | Battelle Memorial Institute | Biocomposite materials and methods for making the same |
| JP2004344240A (ja) * | 2003-05-20 | 2004-12-09 | Takasago Internatl Corp | 消臭方法 |
| GB0313217D0 (en) * | 2003-06-09 | 2003-07-16 | Insense Ltd | Improvements in or relating to skin dressings |
| GB0505035D0 (en) * | 2005-03-11 | 2005-04-20 | Insense Ltd | Improvements relating to skin dressings |
| US20070077566A1 (en) * | 2005-09-30 | 2007-04-05 | Battelle Memorial Institute | High stability, high activity coatings and processes for using same |
| US7611878B2 (en) * | 2005-09-30 | 2009-11-03 | Battelle Memorial Institute | Biocatalytic material comprising multilayer enzyme coated fiber |
| US20070075495A1 (en) * | 2005-09-30 | 2007-04-05 | Moe Mostashari | Method of conducting a baccarat game |
| US7611835B2 (en) * | 2005-09-30 | 2009-11-03 | Battelle Memorial Institute | Process for preparing multilayer enzyme coating on a fiber |
| US20080014471A1 (en) * | 2006-07-13 | 2008-01-17 | Battelle Memorial Institute | Biomolecular hybrid material and process for preparing same and uses for same |
| GB0614278D0 (en) * | 2006-07-19 | 2006-08-30 | Insense Ltd | Hydrogen peroxide delivery system |
| DE102007034726A1 (de) * | 2007-07-23 | 2009-01-29 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Entfernung von Nebenprodukten aus vernetzbaren Zubereitungen |
| US8753856B2 (en) * | 2008-11-14 | 2014-06-17 | Fermenta Biotech Ltd. | Stable biocatalysts of penicillin acylase as gel aggregates and the process of manufacture thereof |
| JP2014500020A (ja) * | 2010-11-26 | 2014-01-09 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | 異性体として純粋な置換シクロヘキサノールの調製 |
| CN115803421B (zh) * | 2020-05-21 | 2025-07-15 | 国际营养与健康丹麦有限公司 | 用于使用高单宁材料进行酿造的不受抑制的淀粉酶 |
| JP2025513274A (ja) | 2022-04-20 | 2025-04-24 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | 遊離脂肪酸の生成法 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3519538A (en) * | 1968-09-05 | 1970-07-07 | Corning Glass Works | Chemically coupled enzymes |
| US3705084A (en) * | 1970-03-18 | 1972-12-05 | Monsanto Co | Macroporous enzyme reactor |
| US3802909A (en) * | 1971-11-09 | 1974-04-09 | American Hospital Supply Corp | Bonding of organic materials to inorganic particles |
| GB1444539A (en) * | 1972-09-11 | 1976-08-04 | Novo Industri As | Immobilised enzymes |
| JPS5022506A (fi) * | 1973-06-26 | 1975-03-11 | ||
| GB1468298A (en) * | 1974-07-11 | 1977-03-23 | Buckbee Mears Co | Method of making a shadow mask for a colour television tube |
| JPS52120190A (en) * | 1976-04-02 | 1977-10-08 | Cpc International Inc | Fixing method of glucose isomerase and cotinuous isomerization of glucose |
| US4116771A (en) * | 1976-07-02 | 1978-09-26 | Novo Industri A/S | Immobilized saccharifying enzyme product and process for preparation thereof |
| US4167447A (en) * | 1976-07-19 | 1979-09-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Method for insolubilizing enzymes on chitosan |
| US4069106A (en) * | 1977-01-13 | 1978-01-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Immobilization of enzymes on keratin |
| JPS55111788A (en) * | 1979-02-19 | 1980-08-28 | Daiichi Rajio Isotope Kenkyusho:Kk | Production of protein-fixed plastic |
| JPS5736986A (en) * | 1980-08-13 | 1982-02-27 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Immobilized aminoacylase agent and its preparation |
| US4292199A (en) * | 1980-08-18 | 1981-09-29 | Uop Inc. | Method of preparing a support matrix |
-
1983
- 1983-10-05 FI FI833615A patent/FI85284C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-10-05 IT IT23150/83A patent/IT1163947B/it active
- 1983-10-05 IE IE2344/83A patent/IE56079B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-10-05 AR AR83294453A patent/AR245215A1/es active
- 1983-10-05 KR KR1019830004717A patent/KR900007631B1/ko not_active Expired
- 1983-10-05 DE DE3336257A patent/DE3336257A1/de active Granted
- 1983-10-05 NL NL8303415A patent/NL192796C/nl not_active IP Right Cessation
- 1983-10-05 ES ES526247A patent/ES8504247A1/es not_active Expired
- 1983-10-05 BE BE6/47882A patent/BE897926A/fr not_active IP Right Cessation
- 1983-10-05 US US06/539,303 patent/US4665028A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-06 FR FR8315914A patent/FR2534272B1/fr not_active Expired
- 1983-10-06 JP JP58186082A patent/JPS59130184A/ja active Granted
- 1983-10-06 CA CA000438535A patent/CA1205402A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR900007631B1 (ko) | 1990-10-17 |
| AR245215A1 (es) | 1993-12-30 |
| IT8323150A0 (it) | 1983-10-05 |
| DE3336257C2 (fi) | 1992-06-25 |
| NL8303415A (nl) | 1984-05-01 |
| JPH047192B2 (fi) | 1992-02-10 |
| FR2534272B1 (fr) | 1987-04-17 |
| IE832344L (en) | 1984-04-06 |
| FR2534272A1 (fr) | 1984-04-13 |
| BE897926A (fr) | 1984-04-05 |
| FI833615L (fi) | 1984-04-07 |
| FI85284B (fi) | 1991-12-13 |
| JPS59130184A (ja) | 1984-07-26 |
| IE56079B1 (en) | 1991-04-10 |
| FI833615A0 (fi) | 1983-10-05 |
| DE3336257A1 (de) | 1984-04-12 |
| NL192796B (nl) | 1997-10-01 |
| IT1163947B (it) | 1987-04-08 |
| US4665028A (en) | 1987-05-12 |
| CA1205402A (en) | 1986-06-03 |
| ES526247A0 (es) | 1985-04-01 |
| NL192796C (nl) | 1998-02-03 |
| KR840006367A (ko) | 1984-11-29 |
| ES8504247A1 (es) | 1985-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI85284C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett immobiliserat enzympreparat med hjaelp av ett tvaerbindningsmedel. | |
| DE1905681C3 (de) | Stabilisiertes Enzympräparat und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| US4323650A (en) | Immobilization of biologically active substances in a porous support | |
| Srivastava et al. | Stabilization of glucose oxidase in alginate microspheres with photoreactive diazoresin nanofilm coatings | |
| JPS61189218A (ja) | カプセル封入方法 | |
| DK160843B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et partikelformet, immobiliseret produkt og anvendelse af immobiliseret enzym fremstillet herved | |
| US4950600A (en) | Method of immobilizing enzymes or microbes with alginate having a low mannuronic acid to guluronic acid ratio | |
| EP0562371A2 (de) | Immobilisierung biochemischer Substanzen | |
| DE3315201C2 (fi) | ||
| GB2129809A (en) | Method for production of an immobilized enzyme preparation by means of a crosslinking agent | |
| DE2605797A1 (de) | Immobilisiertes enzym und verfahren zu dessen herstellung | |
| US5093253A (en) | Method for microbial immobilization by entrapment in gellan gum | |
| EP0097281A1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines unlöslichen Biokatalysators | |
| Schandl et al. | The role of Na+ and Ca+ ions on the action of pancreatic lipase studied with the help of immobilisation techniques | |
| Pifferi et al. | Immobilization of catalase on macromolecular supports activated with acid dyes | |
| CA1319632C (en) | Method for microbial immobilization | |
| DE2439923B2 (de) | Verfahren zum fixieren von enzymen auf einem traegermaterial | |
| Hoshino et al. | A study on the thermostability of microencapsulated glucose oxidase | |
| DK148513B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et immobiliseret enzympraeparat ved hjaelp af et tvaerbindingsmiddel | |
| SU1090715A1 (ru) | Способ получени иммобилизованной уреазы | |
| JPS59109173A (ja) | 固定化生体触媒の製法 | |
| DD285370A5 (de) | Verfahren zur immobilisierung von mikroorganismen bzw. coimmobilisierung von mikroorganismen und enzymen | |
| DD285372A5 (de) | Verfahren zur immobilisierung von mikroorganismen bzw. coimmobilisierung von mikroorganismen und enzymen | |
| DD260292A1 (de) | Verfahren zur isolierung und reinigung von beta-lactamasen | |
| JPH04211373A (ja) | 包括固定化生体触媒およびその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: NOVOZYMES A/S |