FI82700B - Foerfarande foer framstaellning av naturligt heparansulfat och dermatansulfat i vaesentligen ren form. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av naturligt heparansulfat och dermatansulfat i vaesentligen ren form. Download PDFInfo
- Publication number
- FI82700B FI82700B FI861020A FI861020A FI82700B FI 82700 B FI82700 B FI 82700B FI 861020 A FI861020 A FI 861020A FI 861020 A FI861020 A FI 861020A FI 82700 B FI82700 B FI 82700B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- solution
- weight
- concentration
- process according
- sulphate
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0066—Isolation or extraction of proteoglycans from organs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0024—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
- C08B37/0027—2-Acetamido-2-deoxy-beta-glucans; Derivatives thereof
- C08B37/003—Chitin, i.e. 2-acetamido-2-deoxy-(beta-1,4)-D-glucan or N-acetyl-beta-1,4-D-glucosamine; Chitosan, i.e. deacetylated product of chitin or (beta-1,4)-D-glucosamine; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0069—Chondroitin-4-sulfate, i.e. chondroitin sulfate A; Dermatan sulfate, i.e. chondroitin sulfate B or beta-heparin; Chondroitin-6-sulfate, i.e. chondroitin sulfate C; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
1 82700
Menetelmä luonnon heparaanisulfaatin ja dermataanisul-faatin valmistamiseksi oleellisesti puhtaana Tämä keksintö perustuu uuteen menetelmään, jolla 5 valmistetaan luonnonmukaista heparaanisulfaattia ja derma-taanisulfaattia oleellisesti puhtaassa muodossa.
Aivan erityisesti keksintö koskee menetelmää, jonka mukaisesti valmistetaan heparaanisulfaattia ja derma-taanisulfaattia proteoglykaanien seoksista, jotka ovat 10 peräisin eläinkudoksista, aortasta, sydänlihaksesta ja erityisesti verisuonia sisältävästä kudoksesta. Menetelmä perustuu proteiinikomponentin poistamiseen proteoglykaa-neista lievällä käsittelyllä, joka mahdollistaa näiden kahden mukopolysakkaridin rakenteen jäämisen koskematto-15 maksi.
Tämä menetelmä on epäilemättä edullisempi kuin tun netut prosessit ja se mahdollistaa heparaanisulfaatin ja dermataanisulfaatin saamisen olennaisen puhtaassa muodossa, ts. ne eivät ole kontaminoituneita muilla mukopolysak-20 karidiryhmillä, prosessissa estyy tuotteiden itsensä kemiallinen tai entsymaattinen hajoaminen ja prosessia voidaan helposti soveltaa teolliseen tuotantoon.
Mukopolysakkaridit, jotka ovat levinneet laajalle kehon moniin keskuksiin, muodostuvat heterogeenisista mak- 25 romolekyylikomplekseista ja niiden rakenteet ja farmakolo giset profiilit vaihtelevat olennaisesti tehtävien mukaan.
Muunnokset rakenteessa ja sen seurauksena farmakologisessa profiilissa aiheutuvat usein kemiallisista ja entsymaattisista käsittelyistä, joita käytetään niiden 30 teollisessa puhdistuksessa tunnettujen menetelmien mukaisesti .
Heparaanisulfaattia ja dermataanisulfaattia saadaan yleisesti hepariinin valmistusprosessin sivutuotteena syntyvästä mukopolysakkaridiseoksesta.
35 Pitkät sarjat kemiallisia ja entsymaattisia käsit- 2 82700 telyjä, saostukset, fraktionnit jne. jotka ovat välttämättömiä hepariinien valmistuksessa ja niiden epäpuhtauksien poistamisessa, johtavat aina heparaanisulfaatin ja derma-taanisulfaatin rakenteiden hajoamiseen, jonka seurauksena 5 syntyy farmakologisessa profiilissa muunnoksia, jotka johtuvat käytettävästä fraktiointi- ja puhdistumenetelmästä.
Tunnettujen menetelmien mukaisesti mukopolysakka-ridit vapautetaan 55 °C:ssa proteolyyttisen entsyymien avulla. Proteiinien koagulointi suoritetaan lämmittämällä 10 100°C:seen ja kompleksoituminen suoritetaan kvaternääri-sillä ammoniumsuoloilla. Nykyisestä tekniikan tasosta tunnetut vähemmän voimakkaat menetelmät ovat erikoisen vaikeita ja kalliita, ja ne voidaan panna täytäntöön ainoastaan laboratoriovalmistuksessa.
15 Koska mukopolysakkaridit, jotka sijaitsevat aor tassa, sydänlihaksessa ja erityisesti verisuonia sisältävässä kudoksessa, jolla on taipumuksia koagulatiiviseen hemeostaasiin, nyt esillä oleva menetelmä, joka on sopiva mukopolysakkaridien uuttamiseen sanotuista elimistä siten, 20 että mukopolysakkaridien luonnonmukainen rakenne säilyy muuttumattomana, on erityisen tärkeä.
Tämän keksinnön mukaisessa menetelmällä vältytään mukopolysakkaridien vapauttamiselta 55eC:ssa proteolyytti-sillä entsyymeillä, ja myös lämmittämiseltä 100°C:een, 25 joka koaguloi proteiineja, sekä edelleen vältytään myös kompleksoinnilta kvaternäärisillä ammoniumsuoloilla.
Käytännössä vältytään niistä vaiheista, joissa aineita käsitellään siten, että niiden hienorakenne denaturoituu.
30 Keksinnön mukainen menetelmä luonnon heparaanisul- faatin ja dermataanisulfaatin valmistamiseksi olennaisesti puhtaassa muodossa proteiiniglykaanien seoksesta, jotka ovat peräisin eläinkudoksista, aortasta, sydämestä sekä erityisesti verisuonia sisältävästä kudoksesta, käsittää 35 seuraavat vaiheet: 3 82700 - e.m. hienojakoisista kudoksista uutetaan proteo-glykaanit urea- tai jollakin vastaavalla liuoksella; - liuos suodatetaan, kirkastetaan ja urea tai vastaava aine poistetaan; 5 - mukopolysakkaridien ja proteiinien väliset sidokset kat kaistaan; - proteiinit seostetaan ja suodatetaan; - nukleiinihappojäännökset poistetaan; - heparaanisulfaatti ja dermataanisulfaatti fraktioidaan 10 ja puhdistetaan.
Menetelmää kuvataan jäljempänä tarkemmin kuten myös sen suositeltavia käyttösovellutuksia.
Menetelmä koostuu kahdesta kiertoprosessista eli syklistä: ensimmäisessä syklissä lähdetään raakamateriaa-15 lista, syntyy raakatuote, joka muodostuu mukopolysakkaridien seoksesta, toisessa syklissä tämä fraktioidaan ja yksittäiset mukopolysakkaridit puhdistetaan.
Tässä menetelmässä käytetty raakamateriaali koostuu sian kudoksista sisältäen aorttaa, sydänlihasta ja erityi-20 sesti verisuonia sisältäviä elimiä.
Valmistetaan erikseen demineralisoidusta vedestä liuos, joka sisältää 0,5-2 paino-% natriumasetaattia, 0,5-1 paino-% EDTArn natriumsuolaa 20-35 paino-% ureaa ja kyseiseen liuokseen suspendoidaan 2-4 paino-% hienojakoista 25 tuotetta.
Liuosta sekoitetaan huoneen lämmössä 15-50 tuntia proteoglykaanien uuttamiseksi.
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää guanidiinia, tio-ureaa tai kaliumtiosynaattia urean sijasta.
30 Kyseinen suspensio suodatetaan pyörivän suodattimen läpi, saadaan opalisoiva liuos, joka ultrasuodatetaan putkimaisen membraanin läpi, jotta osittain saadaan urea poistetuksi.
Liuos pestään toistuvasti deminaralisoidulla vedel-35 lä, ja suodatetaan, kunnes ureapitoisuus on vähemmän kuin 4 827C0 5 paino-%. Tämä liuos käsitellään sitten natriumkloridi-liuoksella, jonka konsentraatio on 8,7-14,5 paino-%, sellaisella määrällä, että natriumkloridin loppukonsentraa-tio on 1,5-2,5 M. Tämä käsittely, jonka tarkoituksena on 5 katkaista mukopolysakkaridien ja proteiinien väliset sidokset, suoritetaan huoneen lämpötilassa sekoittamalla 5-15 tunnin ajan.
Proteiinit saostetaan sen jälkeen lisäämällä tri-kloorietikkahappoa siten, että konsentraatio on 3-6 paino-10 %, ja erotetaan suodattamalla painesuodattimella.
Nukleiinihappojäämät poistetaan absorboivalla pii-maalla käyttäen 2-5 paino-% suhteessa liuokseen, pH-arvos-sa 3-4 ja sekoittamalla huoneen lämpötilassa kaksi tuntia.
Kiinteät aineet erotetaan suodattamalla painesuo-15 dattimella, pH säädetään 5-6:ksi lisäämällä NaOH-liuosta ja mukopolysakkaridit saostetaan lisäämällä alkoholeja tai ketoneja, kuten metanolia, etanolia tai asetonia, 0,8-1,2 osaa, suhteessa liuoksen tilavuuteen.
Suodatuksessa saadaan raakatuote, joka sisältää 20 mukopolysakkarideja, joilla on seuraava keskimääräinen koostumus kuiva-aineena:
Kondroitiinisulfaatti A 15 paino-%
Dermataanisulfaatti 20 paino-%
Heparaanisulfaatti 65 paino-% 25 Raakatuotteen fraktiointi ja yksittäisten mukopoly sakkaridien puhdistus suoritetaan seuraavasti:
Raakatuotteesta valmistetaan 1-3 paino-% :inen demi-neralisoitu vesiliuos ja tämä liuos käsitellään kationi-muodossa olevalla ioninvaihtohartsilla ja neutraloidaan 30 lisäämällä kalsiumhydroksidia.
Asetonia lisätään yksittäisten mukopolysakkaridien fraktiosaostamiseksi seuraavalla tavalla: asetonikonsent-raatiolla 30 tilavuus-% dermataanisulfaatti saostuu ja erotetaan suodattamalla: lisättäessä edelleen asetonin 35 konsentraatio 50 tilavuus-%:iin heparaanisulfaatti saos tuu.
Il s 827C0
Molemmat saostumat liuotetaan uudelleen erikseen 2M natriumkloridiliuokseen siten, että niiden konsentraatio kyseisessä liuoksessa on 3-7 paino-%.
Liuokset kirkastetaan suodattamalla ja kyseiset 5 mukopolysakkaridit saostetaan metanolilla käyttäen 0,8-2 osaa suhteessa liuoksen tilavuuteen.
Saadut tuotteet lyofilisoidaan lopuksi.
Tämän keksinnön mukaisella prosessilla valmistetuilla tuotteilla on seuraavat ominaisuudet: 10 Heparaanisulfaatti - molekyylipaino: 5000-30000 daltonia (määritetty geeli-suodatuksella, jossa oli standardina mukopolysakkaridi); - sulfatoitumisaste keskimäärin 1,2 S04'/heksosamiini (määritetty gravimetrisellä menetelmällä); 15 - iduronaatioaste: 30-40 % (laskettu karbatsolitorsinoli- suhteen perusteella); - elektroforeesi: yksittäinen vyöhyke, jonka Rf 1,90 1,96 cm. Capelletin et ai:n menetelmä Analyt. Biochem 99 (1979), 311. Ajoajat I ajo = 3 minuuttia, II ajo 15 mi- 20 nuuttia, III ajo = 20 minuuttia.
Dermataanisulfaatti - molekyylipaino: 2000-45000 daltonia (määritetty geeli-suodatuksella, jossa on standardina mukopolysakkaridi); - sulfatoitumisaste: 1,1-1,2 S04’/heksosamiini (määritetty 25 gravimetrisellä menetelmällä); - iduronaatioaste 45-65 % (laskettu karbatsoli:orsinoli-suhteen perusteella); - Elektroforeesi yksittäinen vyöhyke, jonka Rf in 2,15 -2,20 cm. Capelletti et ai:in menetelmä Analyt. Biochem.
30 99, (1979), 311. Ajoajat: I ajo = 30 minuuttia, II ajo = 15 minuuttia, III ajo = 20 minuuttia.
Nämä tuotteet annettuna joko oraalisesti tai paren-teraalisesti ihmisille, joilla on trombogeenisia sairauksia, osoittavat seuraavia farmakodynaamisia pääominaisuuk- 35 siä.
6 82700
Heparaanisulfaatti - antikoagulatiivisen aktiivisuuden puutetta (hepato Quick: PTTA); - Faktori Xa:n matalaa aktiivisuutta; 5 - antitrombiini III:n aktivointia; - merkittäviä fibrinolyyttisiä vaikutuksia (euglobuliinin hajoamista normaaliolosuhteissa ja laskimotukoksen jälkeen ).
Dermataanisulfaatti 10 - matala antikoagulanttiaktiivisuus (hepato-Quick: PTTA) - Faktori Xa:han kohdistuva inhiboiva vaikutus; - aiheuttaa antitrombiini III plasmatason alenemista; - merkittäviä fibrinolyyttisiä vaikutuksia; - aktivoi ja voimistaa heparaanisulfaatin fibrinolyyttisiä 15 vaikutuksia;
Farmakokineettiset kokeet Tämän menetelmän mukaan valmistettujen heparaanisulfaatin ja dermataanisulfaatin farmakokineettistä profiilia ja näiden kahden aineen farmakologisia vuorovaiku-20 tuksia arvioitiin in vivo tutkimuksissa tutkien vapaaeh toisia molempiin sukupuoliin kuuluvia potilaita, joiden ikä oli 45 - 70 vuotta ja joilla on trombogeenisiä laski-moperäisiä sairauksia (tromboflebiittiä, varikoflebiittiä) ja valtimoperäisiä sairauksia (mikroangiopatia).
25 Tuotteita annettiin sekä oraalisesti että parente- raalisesti samalla kertaa erilaisia annostasoja ja vaikutukset koagulatiivisiin ja fibrinolyyttisiin prosesseihin arvioitiin useampia kertoja.
Kun havaittiin, että tuotteilla on laadullisesti 30 sama annoksesta riippuvainen farmakologinen profiili annosteltuna sekä parenteraalisesi että oraalisesti, tulokset, jotka on annettu tämän jälkeen, on saatu suurimmassa testatusta intramuskulaarisesta annoksesta, joka parhaiten luonnehtii yksittäisten yhdisteiden tai niiden yhdistel-35 mien vaikutusta sekä koagulatiivisiin ja fibrinolyyttisiin
II
7 827C0 prosesseihin.
Koe tehtiin käyttäen yksittäisiä tuotteita, nimittäin heparaanisulfaattia ja dermataanisulfaattia, sekä yhdistelmää, jossa oli heparaanisulfaattia yhtä paljon 5 kuin dermataanisulfaattia.
Alustavat kokeet osoittivat, että heparaanisulfaat-ti-dermataanisulfaattiyhdistelmä, joka sisälsi yhtä paljon molempia aineita, parhaiten toi esiin molempien aineiden positiivisen yhteisvaikutuksen.
10 Antotavan yksityiskohdat ja saadut tulokset on esi tetty seuraavissa taulukoissa:
Taulukko 1
Heparaanisulfaatin (HS), dermataanisulfaatin (DS) ja niiden seoksen (HS + DS 1:1 painon mukaan) vaikutusten 15 vertailu hepato-Quick aikaan (E-OT), osittaiseen trombo-plastiinin aktivoitumisaikaan (PTTA) ja trombiiniaikaan (TT).
Tuote Anto- Annos Maksimi- (*)perusarvon 20 tapa mg vaihtelu suhteen _T - EQ_PTTA_TT_ DS i.m. 25 +2,46%(6) +4,51%(2) +4,54%(2) HS i.m. 25 +1,32%(6) +4,01%(4) +2,23%(4) HS+DS i.m. 25+25 +0,25%(2-4) +5,18%(4) +3,84%(4) 25
Arvot suluissa aikoja, tunneissa, jolloin on saavutettu maksimaalinen aktiivisuus lääkkeen annon jälkeen (*), (+) kasvua; (-) vähentymistä.
30 Taulukko 2
Heparaanisulfaatin (HS), dermataanisulfaatin (DS) ja niiden yhdistelmän (HS + DS 1:1 painon mukaan) vaikutusten vertailu Faktori Xa:han ja antitrombiini III:een (ATIII).
35 8 82700
Tuote Anto- Annos Maksimi- (*)perusarvon tapa mg vaihtelu suhteen
_Xa_AT III
5 DS i.m. 25 -36,4 % (2) -9,14 % (2) HS i.m. 25 -5,14 % (4) +5,82 % (6) HS+DS i.m. 25+25 +37,05 % (2)
Arvot suluissa aikoja, tunneissa, jolloin on saavutettu 10 maksimaalinen aktiivisuus lääkkeen annon jälkeen (*), (+) kasvua; (-) vähentymistä.
Taulukko 3
Heparaanisulfaatin, dermataanisulfaatin ja niiden 15 yhdistelmän (HS + DS 1:1 painon mukaan) vaikutus plasman fibrinogeenisisältöön (FB), a2-antiplasmiiniin (a2-AP) ja plasminogeeniin (PA) ja niiden vertailu.
Tuote Anto- Annos Maksimi- (*)perusarvon 20 tapa mg vaihtelu suhteen _FB_azZAP_PA_ DS i.m. 25 -8,8%(6) -9,3%(6) -6,2% (6) HS i.m. 25 -17,6%(6) -17,1%(6) -20,4%(6) HS+DS i.m. 25+25 -21,8%(6) -23,3%(4) -31,9%(4) 25
Arvot suluissa aikoja, tunneissa, jolloin on saavutettu maksimaalinen aktiivisuus lääkkeen annon jälkeen (*), (+) kasvua; (-) vähentymistä.
30 Taulukko 4
Heparaanisulfaatin (HS), dermataanisulfaatin (DS) ja niiden yhdistelmän (HS + DS 1:1 painon mukaan) vaikutus euglobuliinin hajoamisaikaan (ELT) sekä euglobuliinin ha-joamisaikaan laskimon tukoksen jälkeen (ELT-STAS).
35 9 82700
Tuote Anto- Annos Maksimi- (*)perusarvon tapa mg vaihtelu suhteen _ELT_ELT-STAS_ DS i. m. 25 -6,9 % (4) -8,8 % (4) 5 HS i.m. 25 -33,7 % (4-6) -30,2% (4-6) HS+DS i.m. 25+25 -50,12 % (2) -47,9 % (2)
Arvot suluissa aikoja, tunneissa, jolloin on saavutettu maksimaalinen aktiivisuus lääkkeen annon jälkeen 10 (*), (+) kasvua; (-) vähentymistä.
Edellä mainitut tulokset osoittavat, että tämän keksinnön menetelmän mukaisesti valmistetut puhtaat hepa-raanisulfaatti ja dermataanisulfaatti, jolloin niitä ei ole käsitelty voimakkaasti ja jolloin näiden kahden poly-15 sakkaridin luonnonomainen rakenne säilyy, omaavat seuraa-via farmakologisia ominaisuuksia; a) heparaanisulfaatti eikä dermataanisulfaatti pysty huomattavasti muuttamaan hepato-Quick aikaa, osittaista tromboplastiinin aktivoitumisaikaa eikä trombiiniaikaa.
20 Näiden kahden yhdisteen seos käyttäytyy samalla tavoin (taulukko 1); b) dermataanisulfaatit on merkittävä Faktori Xa:n estäjä; heparaanisulfaatti ei osoita merkittävää vaikutusta; yhdistelmällä on samanlainen inhibitioarvo kuin derma- 25 taanisulfaatilla yksin (taulukko 2); c) dermataanisulfaatin anto pienentää huomattavasti plasman antitrombiini III:n sisältöä; heparaanisulfaatti kasvattaa sitä kuitenkin vain vähän; yhdistelmällä ei ole mitään vaikutusta (taulukko 2); 30 d) heparaanisulfaatilla on huomattava fibrinolyyt- tinen vaikutus, joka on matala dermataanisulfaatin tapauksessa; yhdistelmä osoittaa vaikutuksen johdonmukaista lisääntymistä ja ajan ennakoitumista, ilmeisimmin osoittaen dermataanisulfaatin indusoimaa aktivoitumista verrattaessa 35 hepraanisulfaatin itsensä aiheuttamaa vaikutusta fibrino- 10 82700 lyysiin (taulukot 3 ja 4).
Voidaan näin ollen todeta, että heparaanisulfaatil-la, joka on valmistettu keksinnön mukaisesti, on oleellisesti fibrinolyyttisiä ja antitrombiini III:a aktivoivia 5 ominaisuuksia, eikä heparaanisulfaatti vaikuta dermataani-sulfaatin farmakologisiin ominaisuuksiin.
Tämä jälkimmäinen vaikuttaa huomattavalla tavalla inhiboiden Faktori Xa:ta (ilmeisesti hepariini kofaktori II aktivaation kautta), muuttamatta huomattavasti koagulaa-10 tioaikaa, kun taas se aktivoi yllättäen heparaanisulfaatin fibrinolyyttisiä vaikutuksia.
Alustavasti toistetut hoitokokeet sekä oraalisilla 75-600 mg:n päiväannoksilla että intramuskulaarisilla 50-400 mg:n päiväannoksilla, vahvistavat ylläolevia tuloksia 15 ja eivät erityisesti ainoastaan osoita merkittävien sivuvaikutusten puutetta vaan myös seuraavien vaikutusten olemassaoloa.
- dermataanisulfaatin tapauksessa merkittäviä tuloksia erityisesti laskimotukosten ehkäisyssä; 20 - heparaanisulfaatin tapauksessa merkittäviä tuloksia las kimo- ja valtimotrombogeenisten sairauksien hoidossa; - heparaanisulfaatin/dermataanisulfaatin yhdistelmätapauk-sessa on saavutettu huomattavia tuloksia estettäessä ja hoidettaessa laskimo- ja valtimo- trombogeenisia sairauk- 25 siä ja verisuonen kalkkeutumia.
Seuraavassa esimerkissä heparaanisulfaatin ja dermataanisulfaatin valmistuksesta on annettu ei-rajoittava kuvaus tämän keksinnön mukaisesta menetelmästä.
Esimerkki 1 30 1000 kg aorttaa, sydänlihaskudosta ja merkittävästi verisuonia sisältävää kudosta, joka on peräisin nisäkkäistä, hienonnetaan ja sekoitetaan 24 tuntia huoneen lämpötilassa liuoksessa, joka sisältää 2000 litraa diminerali-soitua vettä, 20 kg natriumasetaattia, 10 kg EDTA natrium-35 suolaa ja 700 kg ureaa.
li 11 82700
Seos suodatetaan pyörivän suodattimen läpi ja kirkas liuos ultrasuodatetaan putkimaisten membraanien läpi ja konsentroidaan noin 200 litraksi.
Liuos laimennetaan 200 1:11a demineralisoitua vettä 5 ja ultrasuodatetaan sen jälkeen ja konsentroidaan 200 litraksi. Tämä laimentaminen demineralisoidulla vedellä, ult-rasuodatus ja konsentrointi toistetaan kaksi kertaa, jotta saadaan liuos, jonka ureapitoisuus on pienempi kuin 5 pai-no-%. Natriumkloridia lisätään siten, että konsentraatio 10 on 2M ja seos sekoitetaan huoneen lämpötilassa 8 tuntia. 40 litraa 20 paino-%:sta trikloorietikkahappoliuosta lisätään ja proteiinit, jotka saostuvat, suodatetaan pois pai-nesuodattimella.
6 kg absorboivaa piimaata lisätään, pH säädetään 15 4:ksi, seosta sekoitetaan 2 tuntia ympäristön lämpötilassa ja suodatetaan sen jälkeen painesuodattimen läpi.
Liuoksen pH säädetään 5,5:ksi lisäämällä KOH:ia, sama volyymi metanolia lisätään seostamaan 0,500 kg muko-polysakkaridiseosta, jolla on seuraava keskiarvopitoisuus: 20 Kondroitiinisulfaatti A 13,5 paino-%
Dermataanisulfaatti 22,0 paino-%
Heparaanisulfaatti 64,6 paino-%
Seos liuotetaan demineralisoituun veteen siten, että saadaan liuos, jonka pitoisuus on 2 paino-%, ja tämä 25 käsitellään kationimuodossa olevalla ioninvaihtohartsilla ja neutraloidaan kalsiumhydroksidilla, jonka jälkeen lisätään asetonia 30 tilavuus-%:n loppukonsentraatioon.
Dermataanisulfaatti saostuu tällöin ja se otetaan talteen dekantoimalla ja suodattamalla.
30 Asetonia lisätään niin paljon, että konsentraatio on 50 tilavuus-%, hepariinisulfaatti saostuu ja otetaan talteen dekantoimalla ja suodattamalla.
Nämä kaksi tuotetta käsitellään edelleen molemmat erikseen seuraavalla tavalla: ne liuotetaan uudelleen 2M 35 natriurakloridiliuokseen siten, että molempien konsentraa- i2 82700 tio on 5 paino-%, liuokset suodatetaan ja molemmat tuotteet saostetaan uudelleen metanolilla tilavuussuhteessa 1:2 suhteessa liuokseen.
Molemmat tuotteet kylmäkuivataan lopuksi, jolloin 5 saadaan 240 g heparaanisulfaattia ja 250 g dermataanisul-faattia kylmäkuivatussa muodossa.
Il
Claims (9)
1. Menetelmä luonnonheparaanisulfaatin ja -derma-taanisulfaatin valmistamiseksi oleellisesti puhtaassa muo- 5 dossa proteoglykaanien seoksista, jotka ovat peräisin eläinkudoksista, jotka on saatu aortasta, sydänlihaksesta ja erityisesti vaskulaarisista elimistä, tunnettu siitä, että proteoglykaanit uutetaan kyseisistä hienonnetuista 10 kudoksista käsittelemällä seosta urean, guanidiinin, tio-urean tai kaliumtiosyanaatin liuoksella; liuos suodatetaan ja kirkastetaan, ja urea, guani-diini, tiourea tai kaliumtiosyanaatti poistetaan; mukopolysakkaridien ja proteiinien väliset sidokset 15 hajotetaan; proteiinit saostetaan ja suodatetaan; nukleiinihappojäännökset poistetaan; mukopolysakkaridit saostetaan; heparaanisulfaatti ja dermataanisulfaatti fraktioi-20 daan ja puhdistetaan.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että proteoglykaaniuutto suoritetaan käsittelemällä mainittuja kudoksia demineralisoidun veden liuoksella, joka sisältää 0,5-2 paino-% natriumase- 25 taattia, 0,2-1 paino-% EDTA natriumsuolaa ja 20-30 paino- % ureaa, jolloin liuoksen ja kudosten välinen paino-suhde on 1:2-4 ja seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 15-50 tuntia.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että urean, guanidiinin, tiourean tai kaliumsyanaatin poisto liuoksesta suoritetaan toistuvalla laimentamisella demineralisoidulla vedellä ja konsentroimalla ultrasuodatuksella niin kauan, kunnes liuoksen urea-, guanidiini-, tiourea- tai kaliumsyanaattipitoi-35 suus on pienempi kuin 5 paino-%. i4 82700
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mukopolysakkaridien ja proteiinien väliset sidokset hajotetaan käsittelemällä edellisestä vaiheesta saatua nestettä natriumkloridiliuoksel- 5 la, jonka konsentraatio on 8,7-14,5 paino-% ja jonka määrä on sellainen, että NaCl:n loppukonsentraatio on 1,5-2,5 M, jolloin käsittely suoritetaan huoneen lämpötilassa 5-15 tuntia.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että proteiinisaostus suoritetaan käsittelemällä mukopolysakkaridiliuosta trikloorietikkaha-polla konsentraation ollessa 3-6 paino-%.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että nukleiinihapot poistetaan 15 käsittelemällä mukopolysakkaridiliuosta absorboivalla pii- maalla, jonka määrä on 2-5 paino-% laskettuna liuoksen määrästä, pH:n ollessa 3-4 ja sekoittamalla huoneen lämpötilassa 2 tuntia.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että mukopolysakkaridien saostus suoritetaan käsittelemällä mukopolysakkaridiliuosta alkoholeilla tai ketoneilla, kuten metanolilla, etanolilla tai asetonilla, käyttäen 0,8-1,2 osaa suhteessa liuoksen tilavuuteen ja pH-arvossa 5-6.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että heparaanisulfaatin ja derma-taanisulfaatin fraktiointi suoritetaan liuottamalla talteen otettu raakatuote demineralisoituun veteen niin, että konsentraatio on 1-3 paino-%; liuos käsitellään kationi- 30 muodossa olevalla ioninvaihtohartsilla, neutraloidaan kal-siumhydroksidilla ja sen jälkeen lisäämällä asetonia ensin niin, että konsentraatio on noin 30 tilav.-%, ja sitten niin, että konsentraatio on noin 50 tilav.-%.
9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 35 tunnettu siitä, että heparaanisulfaatti ja derma- II is 82700 taanisulfaatti puhdistetaan liuottamalla uudelleen molemmat fraktioivalla saostuksella saadut raakatuotteet erikseen 2M natriumkloridiliuokseen, jonka määrä on sellainen, että konsentraatio on 3-7 paino-%, suodattamalla ja sitten 5 uudelleensaostamalla puhtaat tuotteet lisäämällä metanolia 0,8-2 osaa suhteessa liuoksen tilavuuteen. i6 82700
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT1988585 | 1985-03-13 | ||
| IT8519885A IT1208509B (it) | 1985-03-13 | 1985-03-13 | Processo per la produzione di eparan solfato e dermatan solfato naturali sostanzialmente puri eloro impiego farmaceutico. |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI861020A0 FI861020A0 (fi) | 1986-03-12 |
| FI861020A FI861020A (fi) | 1986-09-14 |
| FI82700B true FI82700B (fi) | 1990-12-31 |
| FI82700C FI82700C (fi) | 1991-04-10 |
Family
ID=11162062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI861020A FI82700C (fi) | 1985-03-13 | 1986-03-12 | Foerfarande foer framstaellning av naturligt heparansulfat och dermatansulfat i vaesentligen ren form. |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4783447A (fi) |
| EP (1) | EP0199033B1 (fi) |
| JP (1) | JPS61218601A (fi) |
| KR (1) | KR910006809B1 (fi) |
| AT (1) | ATE99702T1 (fi) |
| AU (1) | AU582221B2 (fi) |
| CA (1) | CA1286286C (fi) |
| DE (1) | DE3689493T2 (fi) |
| DK (1) | DK113886A (fi) |
| ES (1) | ES8705894A1 (fi) |
| FI (1) | FI82700C (fi) |
| GR (1) | GR860677B (fi) |
| IN (1) | IN163616B (fi) |
| IT (1) | IT1208509B (fi) |
| NO (1) | NO166187C (fi) |
| NZ (1) | NZ215435A (fi) |
| PH (2) | PH22370A (fi) |
| PT (1) | PT82198B (fi) |
| YU (1) | YU46303B (fi) |
| ZA (1) | ZA861855B (fi) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1189085B (it) * | 1986-03-25 | 1988-01-28 | Mediolanum Farmaceutici Srl | Processo per la preparazione di dermatan solfato ad alta purezza e composizioni farmaceutiche che lo contengono |
| US5707604A (en) * | 1986-11-18 | 1998-01-13 | Access Pharmaceuticals, Inc. | Vivo agents comprising metal-ion chelates with acidic saccharides and glycosaminoglycans, giving improved site-selective localization, uptake mechanism, sensitivity and kinetic-spatial profiles |
| DE3639561A1 (de) * | 1986-11-20 | 1988-06-01 | Baumann Hanno | Verfahren zur herstellung von nicht-thrombogenen substraten |
| IT1232939B (it) * | 1987-11-06 | 1992-03-10 | Opocrin Spa | Eparan solfato caratterizzato da elevata attivita' antitrombotica, elevata biodisponibilita', assenza di attivita' anticoagulante; suo processo di estrazione da organi e da tessuti e relative composizioni farmaceutiche |
| AU630359B2 (en) * | 1988-06-03 | 1992-10-29 | Italfarmaco S.P.A. | Glycosaminoglycan salts, processes for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them |
| ATE98656T1 (de) * | 1989-10-04 | 1994-01-15 | Akzo Nv | Sulfatierte glykosaminoglykuronane mit antithrombotischer wirkung. |
| EP0493533A4 (en) * | 1989-10-27 | 1992-10-28 | Case Western Reserve University | Inhibition of cell growth by keratan sulfate, chondroitin sulfate, dermatan sulfate and other glycans |
| IT1240615B (it) * | 1990-04-03 | 1993-12-17 | Mediolanum Farmaceutici Spa | Impiego del dermatan solfato nella prevenzione e terapia dell'invecchiamento cerebrale e degli stati di deficit funzionale del sistema nervoso centrale |
| WO1991015217A1 (en) * | 1990-04-06 | 1991-10-17 | Washington University | Anticoagulant oligosaccharides |
| US5605938A (en) * | 1991-05-31 | 1997-02-25 | Gliatech, Inc. | Methods and compositions for inhibition of cell invasion and fibrosis using dextran sulfate |
| US5705178A (en) * | 1991-05-31 | 1998-01-06 | Gliatech, Inc. | Methods and compositions based on inhibition of cell invasion and fibrosis by anionic polymers |
| FR2691066B1 (fr) * | 1992-05-15 | 1995-06-09 | Sanofi Elf | Utilisation de glycosaminoglycanes exogenes, de leurs analogues ainsi que de leurs fragments, fractions et derives, pour la preparation de medicaments destines au traitement de thrombopenies. |
| IT1256236B (it) * | 1992-12-23 | 1995-11-29 | Mediolanum Farmaceutici Srl | Oligosaccaridi aventi attivita' biologica e procedimento per la loro preparazione di glicosaminoglicani |
| PL177245B1 (pl) * | 1993-09-30 | 1999-10-29 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Środek przeciwzakrzepowy |
| US6106866A (en) * | 1995-07-31 | 2000-08-22 | Access Pharmaceuticals, Inc. | In vivo agents comprising cationic drugs, peptides and metal chelators with acidic saccharides and glycosaminoglycans, giving improved site-selective localization, uptake mechanism, sensitivity and kinetic-spatial profiles, including tumor sites |
| IT1296581B1 (it) * | 1997-11-28 | 1999-07-14 | Istituto Scient Di Chimica E B | Materiali polimerici non trombogenici e ad esaltata compatibilita' con fluidi e tessuti organici |
| KR20020032444A (ko) * | 1999-06-30 | 2002-05-03 | 잭 허쉬 | 응괴 연관된 응고 인자를 억제하는 헤파린 조성물 |
| JP2004507562A (ja) * | 2000-09-08 | 2004-03-11 | ハミルトン シビック ホスピタルズ リサーチ ディベロップメント インコーポレイテッド | 抗血栓性組成物 |
| CN107098989A (zh) * | 2017-04-27 | 2017-08-29 | 甘肃省金羚集团药业有限公司 | 一种肝素钠的制备方法 |
| CN114478832B (zh) * | 2022-02-14 | 2023-03-03 | 河北常山生化药业股份有限公司 | 从肝素钠副产物中提纯四种多糖类产品的方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3179566A (en) * | 1963-05-16 | 1965-04-20 | Canada Packers Ltd | Purification of heparin |
| JPS5318520B2 (fi) * | 1972-07-05 | 1978-06-15 | ||
| AR207237A1 (es) * | 1974-02-25 | 1976-09-22 | Thomas A | Procedimiento para obtener extractos biologicos estables liofilizados solubles constituidos por complejos proteicos termorresistentes |
| US4243582A (en) * | 1979-04-26 | 1981-01-06 | Monsanto Company | Novel glycoproteins from bovine cartilage |
| JPS58171403A (ja) * | 1982-04-01 | 1983-10-08 | Eisai Co Ltd | ヘパラン硫酸の精製法 |
| IT1189298B (it) * | 1982-06-18 | 1988-02-04 | Manetti & Roberts Italo Brit | Procedimento per produrre i glicosa minoglicani dermatansolfato ed eparan-solfato sostanzialmente puri e loro impiego farmaceutico |
| FR2555993B1 (fr) * | 1983-12-06 | 1986-11-07 | Anic Spa | Chitosanes 6-sulfates et procede pour leur preparation |
| IT1195497B (it) * | 1983-03-08 | 1988-10-19 | Opocrin Spa | Procedimento per la preparazione di frazioni oligosaccaridiche dotate di proprieta' farmacologiche per degradazione chimica di eparina |
| IT1163772B (it) * | 1983-07-13 | 1987-04-08 | Baldacci Lab Spa | Oligosaccaridi eterogenei complessabili ed alfa-idosani ad attivita' terapeutica, procedimento per la loro preparazione e relative composizioni farmaceutiche |
-
1985
- 1985-03-13 IT IT8519885A patent/IT1208509B/it active
-
1986
- 1986-03-06 DE DE86102963T patent/DE3689493T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-03-06 AT AT86102963T patent/ATE99702T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-03-06 EP EP86102963A patent/EP0199033B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-10 US US06/838,133 patent/US4783447A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-03-11 NZ NZ215435A patent/NZ215435A/xx unknown
- 1986-03-12 ZA ZA861855A patent/ZA861855B/xx unknown
- 1986-03-12 CA CA000503943A patent/CA1286286C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-03-12 DK DK113886A patent/DK113886A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-03-12 GR GR860677A patent/GR860677B/el unknown
- 1986-03-12 NO NO860940A patent/NO166187C/no unknown
- 1986-03-12 PH PH33516A patent/PH22370A/en unknown
- 1986-03-12 IN IN184/CAL/86A patent/IN163616B/en unknown
- 1986-03-12 FI FI861020A patent/FI82700C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-03-12 ES ES552898A patent/ES8705894A1/es not_active Expired
- 1986-03-13 KR KR1019860001805A patent/KR910006809B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-03-13 JP JP61053838A patent/JPS61218601A/ja active Granted
- 1986-03-13 YU YU37586A patent/YU46303B/sh unknown
- 1986-03-13 PT PT82198A patent/PT82198B/pt unknown
- 1986-03-13 AU AU54727/86A patent/AU582221B2/en not_active Ceased
-
1987
- 1987-06-10 PH PH35381A patent/PH25136A/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI82700B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av naturligt heparansulfat och dermatansulfat i vaesentligen ren form. | |
| FI103050B (fi) | Menetelmä N,O-sulfatoituja heparosaaneja sisältävän koostumuksen valmi stamiseksi | |
| EP0066908B1 (en) | New anti-thromboticum based on polysacharides, method for its preparation and pharmaceutical compositions | |
| US20080146793A1 (en) | Highly sulfated derivatives of K5 polysaccharide and their preparation | |
| US8193166B2 (en) | Epimerized derivatives of K5 polysaccharide with a very high degree of sulfation | |
| DE3422518A1 (de) | Heparin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende arzneimittel und ihre verwendung bei der behandlung von fettstoffwechselstoerungen | |
| KR910006811B1 (ko) | 고-순도 더마탄 설페이트의 제조방법 | |
| JP3279316B2 (ja) | 血栓溶解活性を有するデルマタンスルフェート及びこれを含有する製薬形態 | |
| EP0245813B1 (en) | EDTA-free heparins, heparin fractions and fragments, processes for their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| EP0386053B1 (en) | Non-anticoagulant heparan sulfate, process for extraction from organs, and pharmaceutical compositions thereof | |
| EP1560855B1 (en) | Polysaccharide of echinacea angustifolia | |
| AU2002236118A1 (en) | Highly sulfated derivatives of K5 polysaccharide and their preparation | |
| CA2035948A1 (en) | Polysaccharides with immunomodulating properties from astragalus membranaceus and pharmaceutical compositions containing them | |
| JP2003528945A (ja) | 高い抗凝血活性と抗血栓活性を有するｋ５多糖由来のグリコサミノグリカンおよびその調製方法 | |
| FI101152B (fi) | Menetelmä sulfatoidun, antitromboottisesti vaikuttavan glykosaminoglyk uronaanin valmistamiseksi | |
| KR100729638B1 (ko) | 미역포자엽으로부터 분리한 항혈액응고활성을 가진황산화푸코스다당 및 그 제조방법 | |
| KR20220147996A (ko) | 고순도 헤파린나트륨의 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: MEDIOLANUM FARMACEUTICI S.R.L. |