FI77574C - Foerfarande foer framstaellning av derivat av succinyl-ferroprotein. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av derivat av succinyl-ferroprotein. Download PDFInfo
- Publication number
- FI77574C FI77574C FI830678A FI830678A FI77574C FI 77574 C FI77574 C FI 77574C FI 830678 A FI830678 A FI 830678A FI 830678 A FI830678 A FI 830678A FI 77574 C FI77574 C FI 77574C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- iron
- succinylated
- protein
- proteins
- derivatives
- Prior art date
Links
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 175
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 76
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 42
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 42
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 40
- 150000002505 iron Chemical class 0.000 claims description 28
- 108091005992 succinylated proteins Proteins 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 14
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 claims description 12
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 12
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 claims description 12
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 claims description 11
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 claims description 11
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 claims description 11
- 230000035322 succinylation Effects 0.000 claims description 9
- 238000010613 succinylation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 159000000014 iron salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 claims description 3
- 150000003443 succinic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 35
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 20
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 18
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 18
- 238000008416 Ferritin Methods 0.000 description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 17
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 9
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 8
- 125000002730 succinyl group Chemical group C(CCC(=O)*)(=O)* 0.000 description 8
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 7
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 7
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 7
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- -1 inorganic acid salts Chemical class 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 5
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- 208000015710 Iron-Deficiency Anemia Diseases 0.000 description 4
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 4
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 4
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 3
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 2
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 206010022971 Iron Deficiencies Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241001537210 Perna Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- WBJZTOZJJYAKHQ-UHFFFAOYSA-K iron(3+) phosphate Chemical compound [Fe+3].[O-]P([O-])([O-])=O WBJZTOZJJYAKHQ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 102000000546 Apoferritins Human genes 0.000 description 1
- 108010002084 Apoferritins Proteins 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101100494773 Caenorhabditis elegans ctl-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010009192 Circulatory collapse Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L Copper gluconate Chemical class [Cu+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O OCUCCJIRFHNWBP-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 101100063996 Drosophila melanogaster dpn gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061825 Duodenal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010014579 Enanthema Diseases 0.000 description 1
- 206010053155 Epigastric discomfort Diseases 0.000 description 1
- 101100112369 Fasciola hepatica Cat-1 gene Proteins 0.000 description 1
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical class [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005955 Ferric phosphate Substances 0.000 description 1
- PMVSDNDAUGGCCE-TYYBGVCCSA-L Ferrous fumarate Chemical compound [Fe+2].[O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O PMVSDNDAUGGCCE-TYYBGVCCSA-L 0.000 description 1
- 206010061459 Gastrointestinal ulcer Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 108010017480 Hemosiderin Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 101000965313 Legionella pneumophila subsp. pneumophila (strain Philadelphia 1 / ATCC 33152 / DSM 7513) Aconitate hydratase A Proteins 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 1
- 102100030856 Myoglobin Human genes 0.000 description 1
- 101100005271 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cat-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 description 1
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L aspartate group Chemical class N[C@@H](CC(=O)[O-])C(=O)[O-] CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 201000000312 duodenum cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001362 electron spin resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229940032958 ferric phosphate Drugs 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L fumarate(2-) Chemical class [O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 230000000215 hyperchromic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 229940082629 iron antianemic preparations Drugs 0.000 description 1
- 229910000399 iron(III) phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003893 lactate salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000010907 mechanical stirring Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010060938 metalloflavoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000853 optical rotatory dispersion Methods 0.000 description 1
- 239000008183 oral pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000005414 paramagnetic center Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000013777 protein digestion Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 206010040560 shock Diseases 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 230000002381 testicular Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 201000005060 thrombophlebitis Diseases 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 208000018408 tumor of duodenum Diseases 0.000 description 1
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/107—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides
- C07K1/1072—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups
- C07K1/1077—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length by chemical modification of precursor peptides by covalent attachment of residues or functional groups by covalent attachment of residues other than amino acids or peptide residues, e.g. sugars, polyols, fatty acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/76—Albumins
- C07K14/77—Ovalbumin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/832—Milk; colostrum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/843—Digestive system
- Y10S530/846—Liver
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
77574 1 Menetelmä sukkinyyli-ferroproteiini-johdannaisten valmistamiseksi Förfarande för framställnlng av derivat av sukkinyl-ferroprotein 5
Keksinnön kohteena on menetelmä lääkeaineina käytettävien, rautaa sisältävien sukkinyloitujen proteiinien valmistamiseksi.
10 Esillä oleva keksintö liittyy sukkinyloituihin proteiineihin, joiden sukkinylointiaste on 20-100%, jotka sisältävät 0,4-6,7 paino-% rautaa ja jotka valmistetaan käsittelemällä sukkinyloituja proteiineja rautasuoloil-la sopivilla pH-alueilla. Käytetyille yhdisteille, jotka ovat täysin siedettäviä, on tunnusomaista raudan optimaalinen bio-soveltuvuus.
15
Raudalla, joka on läsnä kaikissa ruumiin kudoksissa, on täysin välttämätön fysiologinen merkitys. Se on hemoglobiinin, myoglobiinin ja entsyymien: katalaasi, fumaari-dehydrogenaasi, peroksldaasl, sytokromit, DPN-sytokromireduktaasi, ja metalloflavoproteiinien, kuten ferroflaviinin 20 osana ja olennaisena komponenttina. Aikuisen henkilön kudokset sisältävät 1,5-5 g rautaa, josta 60-65% on konsentroitunut punaisiin verihiukkasiin, kun taas 18-30% on sidottu ferritiiniproteiineihin ja hemosideriiniin, jolta on maksassa, pernassa, luuytlmessä ja endotellsalisessa retikulaari-sessa järjestelmässä. Loput ovat jakautuneet erilaisiin yllä mainittuihin - - 25 entsyymijärjestelmiin, myoglobliniln (n. 4%), ja tranferriiniin (n. 0,1%), ^-glubuliiniin suolistoperäisen raudan verenkuljetukseen. Se pystyy sitomaan fysiologisissa pH-arvoissa kaksi rauta-atomia käytännöllisesti erottamattomalla tavalla.
30 Raudantarve tyydytetään osittain käyttämällä endogeenista rautaa (johtuen vanhojen punaisten verihiukkasten tuhoutumisesta) ja osittain absorboimalla eksogeenista rautaa. Eksogeenisen raudan adsorptio tapahtuu pohjukals-suolta ja tyhjäsuolen yläosaa pitkin ja se kerääntyy pääasiassa maksaan. Raudan puutteen ensimmäinen patologinen oire on hyperkrominen sideropee- 35 ninen anemia, jonka primääriset syyt voivat vaihdella: krooninen verenvuoto, joka tapahtuu maha-pohjukalssuoll-haavoissa tai neoplaslassa; puutteelliset ravintovaliot tai huono absorptio kuten on asianlaita ripulissa; 2 77574 lisääntyneet tarpeet esim. raskaudessa, imetyksessä, infektiotaudeissa jne.; huono aineenvaihdunnan käyttö; erityiset hoidot, kuten ACTHrn ja kortisonien käyttö.
5 Sopivin terapia on raudan antaminen. Tämä vähentää tehokkaasti aneemista tilaa, kun tämä tila johtuu ajankohtaisesta raudan puutteesta. Kuitenkin siihen liittyy yleensä ei-toivottuja sivuvaikutuksia, joihin kytkeytyy rautaan käytetyn vektorin tyyppi. Laajimmin käytetyt farmaseuttiset per os-valmisteet perustuvat hyvin vaihteleviin orgaanisiin ja epäorgaanisiin 10 happosuoloihin, jotka on asteittain otettu terapiaan toivottaessa vähentää yllä mainittuja sivuvaikutuksia. Tästä syystä markkinoidaan per os-erikoi-suuksia, jotka perustuvat seuraavan tyyppisiin epäorgaanisiin suoloihin: ferrikloridi, ferrosulfaatti, ferrifosfaatti tai jopa orgaanisiin suoloihin, kuten sitraatit, kolinaatit, aspartaatit, fumaraatit, glukonaatit, 15 glysinaatit, laktaatit, oksalaatit, sukkinaatit. Annettaessa intramusku-laarisesti ehdotetaan ferro-dekstraani-kompleksia, kun taas iv.-käsittelyssä (raudanpuutosanemiassa, jossa per os-käsittely ei ole onnistunut) käytetään ferri-dekstriini-kompleksia.
20 Viimeksi mainitun tyyppisissä komplekseissa sivuvaikutukset voivat esiintyä allergisten reaktioiden, lämmönnousun, takykardian, leukosytoosin, lymfadenopatian (intramuskulaarisessa käsittelyssä), ja jopa anafylakti-sen shokin, tromboflebiitin ja verenkiertokollapsin (i.v.-käsittelyssä) muodossa. Per os-käsittelyssä, joissa käytetään yllämainittuihin yhdis-25 teisiin perustuvia yhdisteitä, sivuvaikutukset ovat yleensä maha-suoli- haavoja, jolloin esiintyy nekroosia ja limakalvojen puhkeamia vakavammissa tapauksissa, ja ripulia ja oksentamista. Lisäksi alhainen siedettävyys tekee raudan sopivan määrien antamisen vaikeaksi. Sivuvaikutusten minimoimiseksi on ehdotettu, että ruoka tulisi ottaa samanaikaisesti, mutta tämä 30 on ristiriidassa raudan absorption todistetun vaihtelevuuden kanssa itse ruokien koostumuksen funktiona. Itse asiassa on varmistettu, että raudan absorptio valmisteista on optimaalinen, kun potilas on paastonnut. Lisäksi mahanärsytystä seuraa antasidien käyttö, mikä puolestaan vähentää absorptiota ja pahentaa aneemista tilaa.
Huomattavaa edistystä rautaterapiassa, etenkin annettaessa sitä per os, on saatu aikaan ottamalla markkinoille ferritiiniin perustuvia erikoisuuksia.
35 3 77574
Ferritiini on ferriglobuliini ja se edustaa tärkeintä rautaa sisältävää proteiinia nisäkkäiden kehoissa. Kaupallinen tuote uutetaan käyttämällä hevosen pernaa raaka-aineena.
5 Sen rautapitoisuus on 20 paino-%. Sen proteiiniosan, apoferritiinin mole-kyylipaino on n. 445.000 ja se ympäröi kiteisen oksidifosfaattiraudan "ydintä". Tämä sopii annettavaksi per os, koska se on veteen liukeneva.
Ferritiinin perustava käsittely ei tuota maha-suoli-sivuvaikutuksia, joita 10 esiintyy käytettäessä yllä mainittuja rautajohdannaisia. Sen käyttö on kuitenkin rajoitettu sekä raakamateriaalin hyvin kalliiden kustannusten johdosta että etenkin uuttamislähteiden rajoitetusta käytettävyydestä.
Tekniikan taso näyttää osoittavan, että optimaalinen kantoaine raudalle 15 absorptiota varten ilman sivuvaikutuksia voi olla proteiinikantoaine.
Useilla proteiineilla on määrätty affiniteetti raudan suhteen. Kläinalku-perää olevien proteiinin määrättyjä tyyppejä (seerumiproteiineja, organo-proteiineja, ovalbumiineja, laktoproteiineja) tai kasvialkuperää olevia (soijaproteiini) on tästä syystä testattu käytettäviksi kantoaineina.
20
Epäorgaanisten ferrisuolojen ja yllämainittujen proteiinien vuorovaikutus johtaa ferroproteiini-johdannaisten muodostumiseen, joiden terapeuttista hyötyä heikentävät kuitenkin muutamat negatiiviset ominaisuudet, nimittäin: 25 - saatujen johdannaisten liukenemattomuus, kun proteiinin sidotun raudan prosenttimäärät saavuttavat yli 0,5%:n arvot; - vaikeus tai jopa mahdottomuus arvioida, mikä koko rautapitoisuuden fraktio tällaisissa liukenemattomuustiloissa todella sitoutuu proteiiniin ja mikä fraktio saostuu mukana hydrattujen oksidien muodossa, jotka voivat 30 aiheuttaa vaikeita mahahaavoja; - homogenisuuden ja koostumusstabiliteetin puuttuminen näiden johdannaisten raudan suhteen.
Lisäksi muutamien proteiinien kohdalla, mukaanlukien maidosta johdetut, 35 liukenevien rautajohdannaisten läsnäolo liukenemattomien johdannaisten huomattavan määrän kanssa on todettu eri pH-arvoissa, jolloin näiden liukenevien fraktioiden koostumus on erittäin vaihteleva hyvin pienien muu- 4 77574 tosten funktiona kokeellisissa parametreissä.
Nyt on yllättäen varmistuttu, että suorittamalla yllä mainittujen proteiinien sukkinylointi sopivissa olosuhteissa (prosessi, jota normaalisti 5 käytetään proteiini-sukkinyyli-johdannaisten valmistamiseksi käytettäväksi ruoka-aineissa tai eläinten rehussa), on mahdollista saada saattamalla nämä reagoimaan raudan kanssa ferroproteiinijohdannaisia, joilla on korkea rautapitoisuus ja jotka ovat stabiileja, liukenevia pH-arvoissa, jotka ovat yli 5, joissa on erilaiset, mutta toistettavissa olevat rautapitoi-10 suudet, ja jotka pystyvät toimittamaan rautaa nisäkkäille annettaessa niitä oraalisesti aiheuttamatta mahahaavatyyppisiä sivuvaikutuksia. Rotissa päivittäinen oraalinen käyttö 20 peräkkäisenä päivänä ei saanut aikaan yhtään mahahaavaa ja sillä oli korkea siedettävyysaste.
15 Rottien yhteydessä vertailu sideremian olosuhteiden välillä, kun oli annettu oraalisesti ekvivalenttisia määriä rautaa ferrosulfaatin, hevosen pernan ferritiinin (Sigma, Saint Louis, Missouri) ja sukkinyloiduista maitoproteiineista peräisin olevien ferroproteiinijohdannaisten muodossa, jotka oli valmistettu esimerkissä 1 esitetyllä tavalla, osoitti, että 20 a) veren rautatasot, jotka oli valmistettu keksinnön mukaisilla johdannaisilla, niiden suhteen, jotka oli valmistettu ferrosulfaatilla, pitkittyivät ajallisesti (ks. taulukko IX); b) veren rautatasot, jotka oli tuotettu keksinnön mukaisilla johdannaisilla suhteessa vakiolla ferritiinillä tuotettuihin ovat korkeampia (n. 1,5:1 25 keskimäärin) kokeen kuuden tunnin jaksossa (ks. taulukko X).
Pitäen mielessä tuotteen korkea siedettävyysaste, sen alhainen toksisuus (suurempi kuin 4,000 mg/kg Swiss-hiirissä), korkeat rautatasot, jotka voidaan saavuttaa, ja raakamateriaalin hankinnan helppous, keksinnön mukais-30 ten johdannaisten käyttö on selvä parannus rautakäsittelyn tekniikan tasosta .
Näiden sukkinyyli-ferroproteiinien fysiko-kemialliset ominaisuudet, kuten mainittiin, ovat toistokelpoisia ja vakaita, kuten on esitetty ei-rajoit-35 tavissa esimerkeissä. Raudan poissaolo, joka ei ole sitoutunut, on esitetty sukkinyloiduista proteiineista ja rautasuolasta valmistettujen valmisteiden täydellisellä liukenevuusasteella alkalisessa väliaineessa (olosuh- ^ teissä, joissa rauta saostuu hydrattuna oksidina).
5 77574
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat siten johdannaiset, joita ei ole tähän mennessä tunnettu ja jotka on tunnettu siitä, että ne sisältävät rau-5 dan määriä, jotka voivat vaihdella prosentteina, ja eläin- tai kasvipro-teiinien määriä, jotka on sukkinyloitu eri asteisiin, ja että ne on suunniteltu tuottamaan bio-soveltuvaa rautaa nisäkkäille tuottamatta maha-suolistohaavoja annettaessa oraalisesti, kuten on esitetty seuraavilla esimerkeillä, jotka on annettu vain ei-rajoittavien viitteiden tavoin.
10 Näitä johdannaisia voidaan käyttää aktiivisena lähteenä valmistettaessa farmaseuttisia erikoisuuksia käytettäväksi raudan puutteesta johtuvan anemian hoidossa nisäkkäissä, mistä syystä tämä patentti koskee myös farmaseuttista antomuotoa, joka sisältää näitä johdannaisia aktiivisena läh-15 teenä käytettäväksi ihmisessä tai eläimissä.
Keksinnön mukainen menetelmä näiden sukkinyloitujen proteiinien valmistamiseksi on tunnettu siitä, että sukkinyloldaan lähtöproteiini sukkiini-hapon johdannaisen avulla, joka sitten saatetaan reagoimaan rautasuolojen 20 kanssa vesipitoisessa väliaineessa pH-arvossa 7,5-8 ja että saatu tuote eristetään seostamalla pH-arvossa 2-4, jolloin viimeksi mainittu pH-alue tuotetaan spontaanisti tai tekemällä happameksl.
Vaihtoehtona reaktiotuote voidaan eristää poistamalla liuotin sen jälkeen, 25 kun pH-arvo on säädetty lähellä neutraalia olevaan arvoon.
Esimerkki 1 5%:sten rautajohdannaisten valmistus kokomaitojauheen sukkinyloiduista 30 proteiineista 1 kg maitojauhetta suspendoltiin 6 litraan 0.3M natriumbikarbonaattia ja sekoittamalla mekaanisesti ja valvomalla pH-arvoa lisättiin 500 g meri-pihkahappoanhydridiä peräkkäisinä annoksina, jolloin pH-arvo pidettiin 35 arvossa 7,5-8 lisäämällä 4N NaOH:a. Lisäyksen jälkeen seosta sekoitettiin 2-3 tuntia ympäristön lämpötilassa. Tänä aikana suspensio liukeni täysin. Opaloiva liuos lingottiin tai suodatettiin, kunnes se oli lähes kirkas 6 77574 ja tehtiin hitaasti happameksi HClrlla pH-arvoon 3.
Muodostunut sakka erotettiin linkoamalla tai suodattamalla ja suspendoi-tiin uudestaan veteen (n. 8 litraa). NaOH-liuosta lisättiin, kunnes se oli 5 täysin liuennut (pH n. 7,5). Suoritettiin linkoaminen ja kirkas liuos tehtiin uudelleen happameksi pH-arvoon 2-3 lisäämällä HCl:a.
Sakka otettiin talteen suodattamalla tai linkoamalla ja se pestiin HC1-liuoksella, jonka pH-arvo oli 3. Jäännös, joka muodostui sukkinyloiduista 10 proteiineista (joiden sukkinylointiastetta voitiin vaihdella käytetyn meripihkahappoanhydridin määrän funktiona; tässä kyseessä olevassa tapauksessa se oli 90% suhteessa ryhmiin, jotka voitiin sukkinyloida lähtöpro-teiinissa, kuten alla on esitetty), dispergoitiin tislattuun veteen tyhjössä suoritetun kuivatuksen jälkeen. Se liuotettiin lisäämällä NaOH:a 15 pH-arvoon 7,5, joka laimensi liuosta niin, että lopullinen proteiinikon- sentraatio oli n. 0,04 mg/ml. Rautasuolan (esimerkiksi FeCl_:n) liuos, 3+ jonka Fe :n/sukkinyloidun proteiinin painosuhde oli 1:10, lisättiin tähän liuokseen. Tämä sai aikaan suspension, joka dispergoitiin tarkoin sekoittamalla mekaanisesti samalla, kun pH aleni arvoon n. 2,5. Sekoitusta 20 jatkettiin 3 tuntia ympäristön lämpötilassa ja sitten suspensio suodatettiin. Kiintoaine suspendoitiin veteen (n. 3 tilavuutta) ja se liuotettiin lisäämällä NaOHra (pH 7,5).
Liuos, joka ei ollut täysin kirkas, suodatettiin ja kiinteässä tilassa 25 oleva tuote otettiin talteen käyttämällä jotakin seuraavista menetelmistä: a) liuos tehtiin happameksi ja sakka, joka saatiin pH-arvossa 2,5, suodatettiin pois ja kuivattiin tyhjössä; b) kirkas liuos dialysoitiin vettä vastaan natriumkloridin eliminoimiseksi ja sitten jäädytyskuivattiin tai kuivattiin suihkukuivurilla.
30
Valmiin tuotteen saannot olivat samat ja niiden määrä oli noin 20 paino-% alkuperäisestä maitojauheesta. Tuotteen ominaisuudet on esitetty taulukossa I (esimerkki Ib).
35 Esimerkki 2 5%:sten rautajohdannaisten valmistus sukkinyloiduista maitoproteiineista 7 77574
Kuten esimerkissä 1 on esitetty, mutta muunnettuna siten, että lähtötuote muodostui 350 g:sta maitoproteiineja, jotka oli edellä seostettu maitojauheesta dispergoimalla jauhe veteen (noin 5 litraa), tekemällä happamek-si pH-arvoon 2,5 mineraalihapolla ja suodattamalla tai linkoamalla sitten 5 proteiinikiintoaine ja kuivattamalla.
Rautapitoisuus, kuten alla on esitetty (taulukko I), oli esimerkeissä 1 ja 2 saatujen johdannaisten kohdalla noin 4-5 paino-%.
10 Esimerkki 3
Rautajohdannaisten valmistus sukkinyloiduista, erilaiset rautapitoisuudet omaavista maitoproteiineista 15 Menetelmävaiheita, kuten esimerkeissä 1 ja 2 on esitetty, käytettiin samoilla maitojauheen tai edellä saostettujen maitoproteiinien määrillä sa-3+ maila, kun Fe :n/sukkinyloidun proteiinin painosuhdetta muunnettiin arvoihin 0,1:10, 0,2:10, 0,5:10 ja 1,5:10, jolloin saatiin rautajohdannaisia, joiden ominaisuudet on esitetty taulukossa I.
20
Esimerkki 4
Rautajohdannaisten valmistus sukkinyloiduista munaproteiineista (ovalbumiinista) 25 5 g ovalbumiinia liuotettiin 100 ml:an vettä, joka sisälsi 3 g KHC0^:a, ja lisättiin 2,5 g meripihkahappoanhydridiä peräkkäisinä annoksina kirkkaaseen liuokseen pitämällä pH-arvot arvossa 5...8 lisäämällä NaOHra. Seoksen annettiin reagoida 2 tuntia ympäristön lämpötilassa. Liuos tehtiin happa-30 meksi pH-arvoon 3,4, minkä jälkeen saatiin sakka, joka eristettiin linkoamalla, puhdistettiin liuottamalla pH-arvossa 7,5 NaOH:lla ja sitten se seostettiin uudestaan pH-arvossa 3,4. Kiintoaine otettiin talteen linkoamalla ja kuivattiin tyhjössä. Kuiva kiintoaine suspendoitiin tislattuun veteen ja liuotettiin lisäämällä NaOH:a (pH 8), niin että saatiin lopul-35 linen liuos, jossa oli 0,04 g proteiinia/ml.
3+
Fe :n suolan (esimerkiksi ferrikloridin) liuos lisättiin hyvin viskoosiin 8 77574 3+ liuokseen, niin että saatiin sukkinyloidun proteiinin/Fe :n painosuhteeksi 10:1. Näissä olosuhteissa pH-arvoa alennettiin arvoon 2,6, jolloin muodostui sakka, joka otettiin talteen suodattamalla. Tämä sakka liuotettiin uudelleen veteen ja NaOH:a lisättiin, kunnes se oli täysin liuennut 5 (pH 7,5). Dialysoitiin vettä vastaan natriumkloridin poistamiseksi, minkä jälkeen kiinteä tuote otettiin talteen jäädytyskuivattamalla ja suihku-kuivurilla. Johdannaisen saanto oli 33 paino-% lähtöproteiinista. Sen rautapitoisuus ja ominaisuudet on esitetty taulukossa I.
10 Esimerkki 5
Rautajohdannaisten valmistus naudanseerumin sukkinyloiduista proteiineista 1,5 g NaHCO^:a lisättiin 50 ml:an liuosta, jossa oli naudanseerumiproteii-15 neja, ja seos käsiteltiin 6 g:11a meripihkahappoanhydridiä, joka lisättiin peräkkäisinä annoksina samalla, kun pH-arvo pidettiin arvoissa 7,5...8 lisäämällä NaOH:a. Kun lisäys oli suoritettu, reaktio jätettiin 2 tunniksi ympäristön lämpötilaan ja sitten muodostettiin sakka tekemällä happameksi pH-arvoon 2,4 mineraalihapolla. Sakka otettiin talteen linkoa-20 maila ja se puhdistettiin esimerkissä 4 esitetyllä tavalla.
Kiinteä tuote suspendoitiin veteen ja saatettiin pH-arvoon 7,5 NaOH:lla. Tällä tavalla saatuun liuokseen lisättiin rauta(III)-suolan (esimerkiksi ferrikloridin) liuos, kunnes se saavutti sukkinyloidun proteiinin/Fe :n 25 painosuhteen 10:1. pH-arvo putosi spontaanisti arvoon 2,4 ja saatiin sakka, joka, kun se oli saatettu pH-arvoon 7,5, liukeni vain osittain. Liuos erotettiin jäännöksestä linkoamalla, suoritettiin dialyysi vettä vastaan natriumkloridin eliminoimiseksi ja sitten suoritettiin jäädytyskuivatus. Rautajohdannaisen painosaanto suhteessa lähtöproteiiniin oli n. 30%. Rau-30 tapitoisuus ja ominaisuudet on esitetty taulukossa I.
Esimerkki 6
Rautajohdannaisten valmistus porsaanmaksan sukkinyloiduista proteiineista 400 g tuoretta porsaanmaksaa homogenoitiin Silverson homogenointilaittees-sa 0,2M KHCO^-liuoksen (800 ml) läsnäollessa pH-arvossa 8,3. Lingottiin 35 9 77574 9000 rptnrssa 5°C:ssa, minkä jälkeen pinnalla oleva kerättiin ja suodatettiin 0,45 y:n selluloosa-asetaattikalvon läpi. 1,2 g meripihkahappoanhyd-ridiä lisättiin peräkkäisinä annoksina 50 ml:an kirkasta liuosta ja varmistettiin, että pH-arvo pysyi arvossa 7,5...8, lisäämällä NaOH:a.
5
Liuos jätettiin tunniksi ympäristön lämpötilaan ja sitten se tehtiin hap-pameksi mineraalihapolla pH-arvoon 3, jolloin saatiin sakka, joka käsiteltiin samalla tavalla kuin esimerkissä 4, sillä muunnoksella, että lopullinen talteenotto suoritettiin jäädytyskuivaamalla liuos, joka oli dialysoi-10 tu vettä vastaan.
Jäädytyskuivattu jäännös suspendoitiin veteen ja saatettiin pH-arvoon 8 käyttämällä soodaa. Tämä tuotti liuoksen, joka ei ollut täysin kirkas ja joka lingottiin. Raudan (esimerkiksi ferrikloridin) liuos lisättiin kirk- 15 kaaseen pinnalla olevaan nesteeseen siten, että (arvioitu) sukkinyloidun 3+ proteiinin/Fe :n suhde oli suunnilleen 10:1.
Liuoksen pH-arvoa alennettiin arvoon 2,6, mikä tuotti sakan, joka puhdistettiin samalla tavalla kuin edellä olevissa esimerkeissä. Kiintoaine saa-20 tiin lopullisen liuoksen jäädytyskuivatuksesta, dialysoitiin vettä vastaan ja sen ominaisuudet ja rautapitoisuus on esitetty taulukossa I.
Esimerkki 7 25 Rautajohdannisten valmistus sukkinyloiduista soijaproteiineista 5 g soijaproteiineja suspendoitiin 100 ml:an vettä, joka sisälsi 3 g NaHCOjia. Seosta sekoitettiin, kunnes se oli täysin liuennut, jolloin pH-arvo pidettiin arvossa 7,5...8 lisäämällä NaOH:a ja lisättiin 2,5 g 30 meripihkahappoanhydridiä peräkkäisinä annoksina. Seosta sekoitettiin kaksi tuntia ympäristön lämpötilassa ja saatettiin pH-arvoon 3,4 lisäämällä mineraalihappoa, jolloin saatiin sakka, joka puhdistettiin samalla tavalla kuin edellisissä esimerkeissä. Lopullisen jäädytyskuivatuksen kiinteä jäännös suspendoitiin 100 ml:an vettä, pH-arvo korjattiin arvoon 8 lisää-35 mällä soodaa ja sitten liuos, joka ei ollut täysin kirkas, lingottiin.
Kirkas pinnalla oleva aine käsiteltiin rautaliuoksella (esimerkiksi ferri- ,0 77574 3+ kloridiliuoksella) siten, että sukkinyloidun proteiinin/Fe :n painosuhde oli 10:1. Liuoksen pH-arvo aleni spontaanisti arvoon 2,6 ja muodostui sakka, joka käsiteltiin samalla tavalla kuin edellisissä esimerkeissä. Kiintoaineella, joka saatiin lopullisesta jäädytyskuivatuksesta, oli taulukos-5 sa I esitetyt ominaisuudet ja rautapitoisuus. Painosaanto suhteessa lähtö-proteiiniin oli 22%.
Kemiallis-fysikaalinen esimerkkien 1-7 mukaisesti sukkinyloiduista proteiineista valmistettujen rautajohdannaisten ominaisuuksien kuvaaminen 10
Yllä mainittujen esimerkkien mukaisesti saatuja johdannaisia analysoitiin noudattamalla alla olevia menetelmiä: a) Sukkinylointiaste 15 Tämä ominaisuus ilmaistaan sukkinyloitujen ryhmien prosenttimääränä suhteessa lähtoproteiinin sukkinylointiin pystyviin ryhmiin. KÄytettiin menetelmää, joka on esitetty julkaisussa S. Moore & W.H. Stein, J. Biol. Chem., 211, 907, 1954, jossa käytettiin vapaiden amiiniryhmien reaktiota 20 ninhydriinin kanssa. Tulokset on esitetty taulukossa I.
b) Rautapitoisuus
Rautapitoisuus määritettiin joko 2N HCl:lla suoritetun kuumauuton jälkeen 25 tai rikkihapolla suoritetun täydellisen proteiinin hajottamisen jälkeen, kuten on esitetty julkaisussa Standard Methods, 14th Ed., 1975, s. 208, APHA-AWWA-WPCF (reaktio o-fenantroliinin kanssa). Arvot on esitetty taulukossa I.
30 c) Spektroskooppiset tiedot 1) EPR-spektroskopia
Kaikki yllä olevissa esimerkeissä esitetyt johdannaiset osoittivat samaa 35 spektroskooppista käyttäytymistä. Esimerkin 1 mukaisesti valmistetun suk-kinyyli-ferroproteiinijohdannaisen EPR-spektri merkittiin esimerkkinä. Spektri tallennettiin jäädytyskuivatussa jauheessa ja sillä oli hyvin H 77574 laaja signaali, keskittynyt n. kohtaan g = 2,0, jolloin signaaliamplitudi oli noin 2000 G. Toinen hyvin analysoitu signaali oli läsnä ja se keskittyi myös kohtaan g = 2,0. Molempien signaalien muoto oli tunnusmerkki 3+
Fe -paramagneettisten keskusten vuorovaikutuksesta (F. Reid et ai., 5 Inorg. Chem. _7, 119, 1968). Kaikki nämä arvot osoittivat proteiiniraken-teiden läsnäolon liitäntäaineen ympärille suljettuna.
2. Kiertodikrolsmi 10 Esitettyjen erilaisten johdannaisten käyttäytyminen oli myös samanlainen tässä tapauksessa. Esimerkin 1 mukaisesti saatujen sukkinyyli-ferroprote-iinijohdannaisten kiertodikroismi (circular dichroism) on esitetty esimerkkinä. Spektrille oli luonteenomaista negatiivinen aktiviteetti UV-alueella. Tämä osoitti intensiivisen negatiivisen kaistan, jonka piikki 15 oli n. 200 nm:ssä ja reuna, joka oli myös negatiivinen, keskittyi n. 225 nm:än. Nämä spektriominaisuudet osoittivat "satunnaisen" proteii-nirakenteen vallitsevuutta (mm.: F. Ciardelli & P. Salvadori - Optical Rotatory Dispersion and Circular Dichroism - Heyden & Son Ltd., London, 1973 - luku A,5).
20 3. UV - näkyvä absorptiospektri Käyttäytyminen suhteessa esitettyjen eri johdannaisten elektronispektriin oli samanlainen. Kuvio 1 esittää UV - näkyvän spektrin esimerkin 1 mukai-25 sesti valmistetun sukkinyyli-ferroproteiini-johdannaisen suhteen.
Spektri (yhtäjaksoinen viiva) ei osoita absorptiopiikkejä, vain vain hyvin heikon reunan noin 450 nm:ssä. UV:ssä oli melko määritelty reuna, joka keskittyi noin 270 nm:ään, ja hyvin intensiivinen absorptio, jonka piikki 30 oli alle 220 nm.
Kuvio 1 esittää myös (katkoviivoin) hevosen pernasta peräisin olevan ferritiinin spektrin vertailuna (Boehringer-Mannheim).
35 Näkyvällä alueella olevat absorptiospektrit on esitetty kuviossa 1 ja ne suoritettiin vedessä, pH 7. Hevosen pernan ferritiinin spektri samoissa olosuhteissa on myös esitetty vertailuna (Boehringer-Mannheim).
i2 77574 4. Fluoriloistesäteilyspektri
Fluoriloistesäteilyspektrit on esitetty kuviossa 2, jossa yhtäjaksoinen viiva vastaa keksinnön mukaisia sukkinyyli-ferroproteiinijohdannaisia, 5 piste-/katkoviiva laktoproteiineja sellaisenaan ja katkoviiva sukkinyloi-tuja laktoproteiineja.
Voidaan nähdä proteiinin fluorisenssin sammuminen metallin läsnäolon johdosta.
10 d) Elektroforeesi
Elektroforeettiset jäljet selluloosa-asetaatin päällä erilaisista johdannaisista verrattuna sukkinyloituihin proteiineihin, alkuperäisiin prote-15 iineihin ja ferritiiniin on esitetty kuvioissa 3-6.
Kuvio 3 esittää elektroforeesin tuloksia, jotka on suoritettu soijapro-teiineilla (jälki 1), sukkinyloiduilla soijaproteiineilla (jälki 2), suk-kinyloitujen soijaproteiinien rautajohdannaisella (jälki 3), ei-sukkiny-20 loitujen soijaproteiinien rautajohdannaisilla, liukeneva fraktio (jälki 4). Kuvio 4 esittää elektroforeesin tuloksien, jotka on suoritettu oval-bumiinilla (jälki 1), sukkinyloidulla ovalbumiinilla (jälki 2), sukkiny-loidun ovalbumiinin rautajohdannaisella (jälki 3), ovalbumiinin rautajoh-dannalsella (jälki 4).
25
Kuvio 5 esittää elektroforeesin tuloksia, joka on suoritettu laktoprote-iineilla (jälki 1), sukkinyloiduilla laktoproteiineilla (jälki 2), sukki-nyloitujen laktoproteiinien rautajohdannaisella (jälki 3), hevosen pernan ferritiinillä (jälki 4). Kuvio 6 esittää elektroforeesin tulokset (densi-30 tometrinen lukema 550 nm:ssä), jotka suoritettiin sukkinyloitujen laktoproteiinien rautajohdannaisella (yhtäjaksoinen viiva), sukkinyloitujen soijaproteiinien rautajohdannaisella (piste-katkoviiva), ja sukkinyloidun ovalbumiinin rautajohdannaisella (katkoviiva).
35 e) Geelisuodatus
Sukkinyloitujen maitoproteiinien rautajohdannaisen (valmistettu esimer- 13 77574 kissa 1 esitetyllä tavalla) geelisuodatusprofiili aineella Sephadex G 75 (Pharmacia, Uppsala) verrattuna itse sukkinyloituihin proteiineihin on esitetty kuviossa 7, missä yhtäjaksoinen viiva viittaa sukkinyloituihin laktoproteiineihin, katkoviiva vastaavaan rautajohdannaiseen. Ordinaatta 5 osoittaa adsorptiota 280 nm:ssä, ja abskissa kerättyjen fraktioiden progressiivista numeroa. Profiilista nähdään, että raudan läsnäolo saa aikaan erillisen lähtöpiikin samanlaisella retentioajalla kuin kolonnin tyhjällä kohdalla. Pitäen mielessä, että aineen Sephadex G 75 molekyyli-ekskluusio on noin 75,000 daltonia, aggregaatin selvä minimimolekyyli-10 painoarvo on suurempi kuin tämä arvo. Lisäksi eri tavoin havaittiin suuremman hajautuksen omaava kaksoispiikki, sukkinyloiduilla proteiineilla. Tämä tekijä havaittiin myös elektroforeesissa (kuvio 5). Tämän tyyppinen käyttäytyminen osoittaa, että läsnäoleva rauta on proteiiniväliaineen molekyylien välisen yhteenliittymän keskus. Muut arvot uutettiin suodatus-15 geelistä aineella Sephadex G 200 verrattuna ferritiiniin (kuvio 8, missä abskissa ja ordinaatta ovat samanlaiset kuin kuviossa 7, kun taas yhtäjaksoinen viiva vastaa sukkinyloitujen laktoproteiinien rautajohdannaista ja katkoviiva koskee hevosen pernasta saatua ferritiiniä). Tässä tapauksessa piikki oli myös aivan selvä, kun taas retentioaika oli suurempi kuin 20 ferritiinin. Tämä näyttäisi osoittavan, että näennäinen molekyylipaino on alhaisempi kuin hevosen pernasta saadun ferritiinin.
f) Stabiliteetti mahanesteessä 25 Tämä testi suoritettiin esimerkistä I saadulla rautajohdannaisella ja se suoritettiin liuottamalla 25 mg johdannaista 0,5 ml:an tislattua vettä ja lisäämällä tämä liuos 5 ml:an rotan mahanestettä. Saatiin sakka ja suspensiota inkuboitiin 37°C:ssa 60 min. sekoittaen. Tämän jakson jälkeen sakka erotettiin linkoamalla ja pinnalla oleva analysoitiin sen rautapi-30 toisuuden suhteen. Mahanesteen luovuttaman raudan määrä oli 1% alkuperäisestä.
g) Rautajohdannaisen saostamlnen ammoniumsulfaatilla 35 30% (w/v) ammoniumsulfaattia lisättiin rautajohdannaisen 10%:seen liuok seen (w/v), joka oli valmistettu esimerkin 1 mukaisesti. Saatiin raudan proteiinijohdannaisen sakka ja sen ominaisuudet olivat identtiset sen i4 77574 lähtöominaisuuksien kanssa ja se oli vielä veteen liukeneva. Rautaa ei ollut läsnä liuoksessa.
Yllä esitetyt tiedot osoittavat, että sukkinyloitujen proteiinien komplek-5 sinmuodostuskyky raudan suhteen ei ole ainoastaan tyypillistä sukkinyloi-duille maitoproteiineille, vaan se on ominaista eri alkuperää olevien ja erilaisia fysiologisia toimintoja, joko eläinperäisiä tai kasviperäisiä, omaaville sukkinyloiduille proteiinijohdannaisille.
10 Kuten yllä on mainittu tyypiltään muuntamattomat useat eläin- tai kasvi-proteiinit ovat sopivia liitettäviksi raudan kanssa. Kun muuntamattomat maitoproteiinit, ovalbumiini, soijaproteiinit, seerumiproteiinit, elimistä uutetut proteiinit (maksa) saatetaan reagoimaan raudan kanssa esitetyissä olosuhteissa vastaavien sukkinyyliproteiinijohdannaisten valmista-15 miseksi, saadaan tuote, jolla on samanlainen rautapitoisuus, mutta jolla on täysin erilaiset liukenevuus- ja stabiliteettiominaisuudet, Esimerkiksi, kuten taulukossa 1 on esitetty, soijaproteiini saa aikaan lopputuotteen, joka jäädytyskuivatettaessa on liukenematon 75%:n yli ja luovuttaa rautansa käsiteltäessä mahanesteellä. Kompleksinmuodostuskäyttäytymisen 20 lisäksi raudan suhteen keksinnön sukkinyloitujen ferroproteiinijohdannaisten käyttäytyminen (so. liukenevuus alkalisessa väliaineessa, stabiliteetti happamessa väliaineessa ja läsnäolossa mahanesteissä jopa korkeissa rautapitoisuuksissa) ei johdu perusproteiineista ja tästä syystä sitä ei voitu ennakoida.
25
TOKSISUUS
a) Akuutti toksisuus testattiin oraalisesti Swiss-hiirissä mahakokeella maitoproteiinien ferrosukkinyyliproteiinin suhteen, joka oli valmistettu 30 esimerkin 1 mukaisesti, käyttämällä tislattua vettä kantoaineena. LD,.q oli yli 4,000 mg/kg.
b) Rottien toksisuus annettaessa toistuvasti samaa esimerkin 1 mukaista johdannaista (nimitetään seuraavassa nimellä Ferrolat) per os tallennet- 35 tiin 20 päivän ajan käsiteltäessä peräkkäin koiraspuolisia Wistar-rottia, joiden alkupaino oli 200 g, jotka oli pantu häkkiin 14 päivää ennen käsittelyä ja sitten erotettu satunnaisesti 10 rotan ryhmiin (ryhmä I: is 77574 kontrollit; II, III ja IV Ferrolat 30-100-300 mg:ssa/kg/die.
Valmistetta, joka oli liuotettu käytön aikana tislattuun veteen, annettiin päivittäin ilman välejä samaan aikaan joka päivä kokeella. Kontrol-5 lit saivat samanlaisen määrän vesijohtovettä (10 ml/kg). Käsittelyn aikana rotat punnittiin päivittäin ennen annoksen antamista ja niitä tarkkailtiin useita tunteja tuotteen antamisen jälkeen. Ruoankulutus mitattiin käsittelyn lopussa ja 24 tuntia lopullisen tuotteen antamisen jälkeen ja 20 tunnin paaston jälkeen rotat nukutettiin eetterillä ja ne ta-10 pettiin leikkaamalla kaulavaltimo. Osa verestä kerättiin testiputkeen, joka sisälsi EDTA:a (2 pisaraa 4%:sesta liuoksesta), ja jäljelle jäävä jätettiin seerumiksi. Hemokromosytometriset testit suoritettiin koko verellä ja hematokemialliset testit suoritettiin seerumilla.
15 TULOKSET
Painon ja ruoankulutukeen vaihtelut
Kuvio 9 esittää painonkasvun käyriä, jotka saatiin käsittelyn aikana tap-20 pamista edeltävään päivään asti.
Taulukot II ja III osoittavat arvoja, jotka koskevat painon kasvua ja eläinten ruoankulutusta käsittelyn aikana.
25 Rottien ryhmän painonkasvukäyrä, joka oli käsitelty Ferrolatilla 300 mg:n/kg annostuksessa, esitetään olevan huomattavasti hitaampi suhteessa rottien kontrolliryhmän painonkasvukäyrään 15. päivästä alkaen käsittelyn aloituksen jälkeen; rottien sama ryhmä kulutti vähemmän ruokaa keskimäärin (-11,7%).
30
Pieniä eroja, jotka eivät ole merkittäviä statistiselta kannalta, voidaan havaita rottien jäljellä olevien ryhmien suhteen, joita käsiteltiin Ferrolatilla .
35 Hematologiset testit
Tulokset on esitetty taulukossa IV.
16 77574
Hematokemialliset testit
Tulokset on esitetty taulukossa V. Pientä alentumista alkalisessa fosfa-taasissa havaittiin rotissa, joita käsiteltiin Ferrolatilla, 300 mg/kg/ 5 "die".
Virtsatestit
Tulokset on esitetty taulukossa VI.
10
Elintestit
Taulukko VII osoittaa rotan pääelinten absoluuttisia keskimääräisiä painoja ja taulukko VIII vastaavia keskimääräisiä painoja suhteessa ruumiin 15 painoon.
Merkittävä kasvu pernan ja keuhkojen suhteellisessa painossa todettiin rottien ryhmässä, jota käsiteltiin Ferrolatilla 100 mg/kg/kuolema. Ruumiinpainon merkittävän alentumisen lisäksi todettiin kivesten keskimääräi-20 sen painon kasvu rottien ryhmässä, jota käsiteltiin Ferrolatilla 300 mg/ kg/"die".
VERITASOT TUOTTEEN ORAALISEN ANTAMISEN JÄLKEEN
25 a) Ferrolat-ferrosulfaatti-vertailu Käytettiin koiraspuolisia Wistar-rottia, jotka painoivat noin 200 g ja joita pidettiin nälässä 18 tuntia, hajotettiin ja erotettiin ne 5 rotan ryhmiin; jokainen ryhmä tapettiin määrättynä tuntina ja veri otettiin jo-30 kaisesta eläimestä leikkaamalla kaulavaltimo; ryhmän jokaisen eläimen veressä olevan raudan määrä määritettiin spektrofotometrisesti batofe-nantrolisulfonihapon avulla (Fe-testi, Wako). Tuotteen anto suoritettiin vesipitoisessa liuoksessa olevalla näytteellä (5 ml/kg), Sukkinyyli-ferroproteiinijohdannainen, jota käytettiin, oli valmistettu esimerkissä 35 1 esitetyllä tavalla (Ferrolat). Annokset ja tulokset on esitetty taulu kossa IX. Voidaan nähdä, että raudan määrä/kg oli sama molempien johdannaisten kohdalla (Fe: 1 mg/kg).
I7 77574 b) Ferrolat-ferritiini-vertailu Käytettiin koiraspuolisia Wistar-rottia, jotka painoivat noin 200 g ja joita pidettiin nälässä 18 tuntia, hajotettiin ja erotettiin ne 9 rotan 5 ryhmiin; jokainen ryhmä tapettiin määrättynä tuntina ja veri otettiin jokaisesta eläimestä leikkaamalla kaulavaltimo. Ryhmän jokaisen eläimen veressä olevan raudan määrä määritettiin spektrofotometrisesti Iron Colorimetric Method-menetelmällä (Boehringer-Mannheim). Tuotteen antaminen suoritettiin vesipitoisessa liuoksessa olevalla näytteellä (5 ml/kg). Annok-10 set ja tulokset on esitetty taulukossa X. Voidaan nähdä, että raudan määrä/kg sukkinyyli-ferroproteiinijohdannaisen kohdalla (Ferrolat) oli sama kuin ferritiinin (Sigma, St. Louis Missouri) ja määrältään 1 mg/kg.
c) Vertailu erityyppisistä proteiineista saatujen sukkinyyli-ferropro- 15 teiinijohdannaisten välillä Käytettiin koiraspuolisia Wistar-rottia, jotka painoivat n. 200 g ja joita pidettiin nälässä 18 tuntia, hajotettiin ja erotettiin ne 5 rotan ryhmiin (yksi johdannaisen annosta kohden ja yksi kontrolliryhmä). Jokainen ryhmä 20 tapettiin kaksi tuntia tuotteen antamisen jälkeen leikkaamalla kaulavaltimo, otettiin veri jokaisesta eläimestä ja määritettiin veren rautapitoisuus batofenantrolisulfonihapolla (Fe-testi, Wako). Tuotteen oraalinen anto suoritettiin vesipitoisessa liuoksessa olevalla näytteellä (5 ml/kg). Yksittäisten johdannaisten annokset, joita käytettiin, valittiin siten, 25 että annettiin aina 1 mg/kg Fe:tä.
Testatut tuotteet: 1) sukkinyloidut soijaproteiinit + Fe (4. 42%) 2) sukkinyloitu ovalbumiini + Fe (3. 57%) 3) sukkinyloidut naudanseerumiproteiinit + Fe (5. 78%) 30 4) sukkinyloidut maitoproteiinit + Fe (4. 5%) (Ferrolat)
Tulokset on esitetty taulukossa XI.
35 77574 18
TAULUKKO I
Proteiini- Sukkinylointi Fe Saanto Liukenevuus lähde (% ryhmistä, jot- (% g) (% sukkiny- pH:esa 5 ka voidaan sukki- lolduista nyloida) proteiineista) a) 95 6.7 30 + -
Maito b) " A.6 20 + " c) " 3.2 18 + " d) " 2.5 18 + " e) " 0.8 13 +
Laktoproteiinit 95 A.5 +
Ovalbumiini 95 3.6 33 + 5.8 +
Seerumiproteiinit 82 + (nauta) (Soija) 92 A.A 22 + (Elin) n.a. 8.A n.a. + - (Maksa)
Maito 35 A.3 26 +
Laktoproteiinit 0 A. 8
Ovalbumiini 0 0. A + A.5
Soija 0 0. A + -
Seerumiproteiinit 0 0.5 + - (nauta) (Elin) 0 n.a. n.a.
(Maksa) 3+ a), b), c), d), e) näytteet, joiden Fe :n: sukkinyloitujen proteiinien suhde 0,1:1-5:1 (w/v).
f) täydellinen (+); osittainen (+ -); liukenematon (-) i9 7 75 7 4
TAULUKKO II
PAINON KASVU
Käsittely Keskimääräinen Lopullinen Painon kasvu mg/kg/die alkupaino keskimääräinen keskimäärin _________ paino
Kontrollit 224.10+2.83 343.60+8.87 119.50+7.66
Ferrolat 30 224.40+3.03 325.50+4.56 101.20+4.35
Ferrolat 100 224.40+2.30 326.10+8.06 101.70+8.08
Ferrolat 300 224.30+3.71 307?00+10.15 82?77+8.28 £ p < 0.05 p < 0.01
Merkitys kontrollin suhteen (laskettu Student's 't':llä
TAULUKKO III
RUOANKULUTUS
Käsittely Keskimääräinen Vaihtelu mg/kg/die kokonaiskulutus
Kontrollit 32.33
Ferrolat 30 30.42 - 5.91
Ferrolat 100 30.98 - 4.18
Ferrolat 300 28.54 - 11.72 2o 7 7 5 7 4
TAULUKKO IV
HEMATOLOGISET TIEDOT
Käsittely_mg/kg/die
Kontrollit Ferrolat 30 Ferrolat 100 Ferrolat 300
Hemoglobiini g% 12.11+0.47 11.77+0.37 12.39+0.30 12.93+0.25
Hematokriitti % 66.88+2.06 61.44+1.96 66.90+2.77 64.16+1.80
Leukosyytit 103/mm3 16.95+2.25 16.55+1.65 23.46+2.16 19.93+2.58
Erytrosyytit 106/mm3 5.76+0.51 6.12+0.68 5.91+0.68 6.22+0.31 21 77574
TAULUKKO V
HEMATOKEMIALLISET TIEDOT
_Käsittely_mg/kg/die
Kontrollit Ferrolat 30 Ferrolat 100 Ferrolat 300
Glukoosi mg% 55.33+5.75 52.81+4.38 63.61+5.58 60.74+4.97
Atsotemia mg% 32.73+1.33 34.59+2.25 28.68+2.34 32.33+2.52
GOT
ym /ml 110.51+7.10 130.81+8.59 109.09+5.21 113.36+7.29
GPT
ym /ml 19.58+1.52 26.86+3.43 30.14+6.02 23.15+2.57 AIkalinen fosfaatti 255.65+13.82 229.53+17.03 257.53+22.35 213.80-12.72
Wm /ml
Koko proteiinit 6.19+0.12 6.02+0.17 6.37+0.12 6.21+0.16 g%
Merkitys * p < 0.05 ** p < 0.01 *** p < 0.001 22 7 75 7 4
TAULUKKO VI VIRTSATESTIT
Käsittely__mg/kg/die_ __Kontrollit Ferrolat 30 Ferrolat 100 Ferrolat 300 pH 8.15+0.17 8.55+0.14 8.40+0.18 8.50+0.12
A A
proteiinit 21.- +3.78 24.- +3.05 63.- +12.47 53.33+11.66 glukoosi ei yhtään ei yhtään ei yhtään ei yhtään ketoniaineet ei yhtään ei yhtään ei yhtään ei yhtään bilirubiini ei yhtään ei yhtään ei yhtään ei yhtään veri ei yhtään ei yhtään ei yhtään ei yhtään
Merkitys * p < 0.05 ** p < 0.01
A A A
p < 0.001 23 775 74
TAULUKKO VII
ROTTIEN ELINTEN ABSOLUUTTINEN TUOREPAINO
_Käsittely_mg/kg/die_
Kontrollit Ferrolat 30 Ferrolat 100 Ferrolat 300
Ruumiin paino g 310.60+7.53 300.33+3.64 296.8+6.16 278?44+8.89
Sydän g 1.15+0.05 1.10+0.03 1.14+0.04 1.09+0.07
Keuhkot g 1.55+0.05 1.70+0.20 1.68+0.05 1.57+0.12
Maksa g 9.14j+).35 8.89+0.35 8.78+0.28 8.35+0.44
Perna g 1.38+0.13 1.36+0.08 1.65+0.12 1.37+0.09
Munuaiset g 2.28jO.07 2.21+0.09 2.22+0.08 2.09+0.10
Lisämunuais- rauhaset mg 50.30+4.55 56.33+7.69 51.80+6.07 37.44+5.56
Aivot g 1.77+0.03 1.70+0.03 1.67+0.05 1.68+0.06
Kivekset g 3.30+0.05 3.12+0.10 3.08+0.16 3.25+0.07
Maha g 1.77+0.09 1.77+0.05 1.75+0.07 1.53+0.09
Merkitys * p < 0.05 ** p < 0.01 *** p < 0.001 24 77574
TAULUKKO VII
ROTTIEN ELINTEN SUHTEELLINEN TUOREPAINO
Käsittely mg/kg/die_______
Kontrollit Ferrolat 30 Ferrolat 100 Ferrolat 300
Ruumiin paino 310.60+7.53 300.33+3.64 296.80+6.16 278?44+8.89
Sydän % 0.37+0.01 0.37+0.08 0.39+0.09 0.39+0.02
Keuhkot % 0.50+0.02 0.56+0.06 0?57+0.02 0.57+0.06
Maksa % 2.94+0.04 2.96+0.10 2.96+0.06 2.99+0.08
Perna % 0.44+0.03 0.45+0.03 0?56jO.04 0.49+0.03 L - - .. — I—---- — — , ----- — - ' ! — >
Munuaiset % 0.73+0.01 0.74+0.02 0.75+0.03 0.75+0.02
Lisämunuais- rauhaset % 0.016+0.001 0.019+0.003 0.017+0.002 0.014+0.002
Aivot % 0.57+0.02 0.57+0.01 0.57+0.02 0.60+0.01
Kivekset % 1.06+0.02 1.04+0.03 1.04+0.05 l?18+0.04
Maha % 0.56+0.02 0.59+0.02 0.59+0.02 0.54+0.02
Merkitys * p < 0.05 ** p < 0.01 •kitit p < 0.001 25 775 7 4
TAULUKKO IX
VERITASOT : VERTAILU FERROLAT - FERROSULFAATTI
Seerumin rauta g% Käsittely tuntia käsittelyn jälkeen 30' 1 2 4 6
Kontrollit H20 5 ml/kg 99.22 59.91 98.25 80.17 74.- +24.92 + 6.85 +13.28 + 6.37 +10.10 (5) (5) (5) (5) (5) , ** 'k'k'k A**
Ferrolat 22.37 mg/kg 227.45 275.28 269.61 203.16 148.18 (Fe = 1 mg/kg) +16.40 +18.91 +22.51 +22.74 +16.75 (5) " (5) " (5) (5) ' (5)
FeSO 7H 0* , *** *** *** *** 42 4.98 mg/kg 336.27 272.28 273.50 129..50 80.52 , ,. , +27.79 +24.09 +19.32 '+ 6.21 + 5.65 (Fe = 1 mg/kg p.os) -(5) - (5) -(5) -(5) -(5)
Merkitys kontrollin suhteen: * p < 0.05 p < 0.01 Λ** p < 0.001
Kahden rautavalmisteen merkitys: 30': < 0.01; 4 h: < 0.05; 6 h: p < 0.01 26 7 7574
TAULUKKO X
VERITASOT: VERTAILU FERROLAT - FERRITIINI
Käsittely Seerumin rauta g/100 ml tuntia käsittelyn jälkeen 12 4 6
Ferritiini (F-4503 Sigma 168.79 170.66 148.08 89.22 laimennus 1.081% v/v, +15.35 +14.70 +18.69 +12.75 5 ml/kg = 1 mg/kg di Fe)
Ferrolat 21.46 mg/kg icick ** ( = 1 mg/kg di Fe) 302.07 269.81 223.72 106.24 5 ml/kg +15.59 +29.94 +18.51 +11.30 “te Ä Ä
Kontrollit, tislattua 80.40 vettä 5 ml/kg + 6.39
Merkitys laskettu Student's "t":llä ferritiinin suhteen, * p < 0.05 λ* p < 0.01 kkk p < 0.001 27 77574
TAULUKKO XI
VERITASOT : VERTAILU ERITYYPPISISTÄ PROTEIINEISTA VALMISTETTUJEN SUKKINYYLIFERROPROTEIINIEN VÄLILLÄ 5 _ -
Seerumin rauta g/100 ml
Käsittely keskimääräiset arvot + SE
Kontrollit 83.99+7.56 10 Sukk.soija 260.68+29.52
Sukk.ovalbumiini 235.82+46.06 aa
Sukk. seeruminproteiini 277.63+49.35 •kirk
Ferrolat 305.81+23.20 15 Merkitys kontrollin suhteen * p < 0.05
AA
p < 0.01
AAA
p < 0.001 20
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat siis kaikki käyttökelpoiset teolliset muodot, joita käytetään esitetyissä sukkinyyli-ferroproteiinijohdan-naisissa ja jotka on esitetty vaatimuksina tässä aineena, jotka sopivat raudanpuutosanemian hoitoon. Eräs keksinnön olennainen muoto muodostuu 25 tästä syystä ihmisille ja eläimille tarkoitetuista farmaseuttisista valmisteista, jotka sisältävät ennalta määrättyjä määriä näitä johdannaisia. Viimeksi mainitut voidaan antaa oraalisesti, esimerkiksi tablettien, kapseleiden, ampullien, rakeita sisältävien pikkupussien, siirappien, eläinten ruokaan lisättävien jauheiden jne. muodossa.
30
Seuraavat valmisteet on esitetty vain esimerkkinä: - ampullit, jotka sisältävät 5-10-40 mg rautaa ferrosukkinyyliproteiinien muodossa, vesipitoisten liuottimien, stabilaattoreiden, makuaineiden jne. lisäksi, kuten tavallisesti käytetään farmasiassa; 35 - tabletit, jotka sisältävät 5-10-40 mg rautaa ferrosukkinyyliproteiinien muodossa, täyteaineiden, dispergointiaineiden jne. lisäksi, joita yleisesti käytetään apteekkitavaroissa; 28 77574 - kapselit, jotka sisältävät 5-10-40 mg rautaa ferrosukkinyyliproteiinien muodossa; - yksikköannospussit, jotka sisältävät kuohuvaa granulaattia, joissa on 5-10-40 mg rautaa ferroproteiinien muodossa, lisäksi sokeria, makuaineita, 5 stabilaattoreita jne., joita yleisesti käytetään farmasiassa; - jauhettua maitoa, jota lisätään vierotettavien eläinten ruokaan, 5-20 paino-% aktiivista ainetta.
Claims (10)
1. Menetelmä lääkeaineina käytettävien, rautaa sisältävien sukklnyloi-tujen proteiinien valmistamiseksi, tunnettu siltä, että sukkiny- 5 loidaan lähtöproteiini sukkilnlhapon johdannaisen avulla, joka sitten saatetaan reagoimaan rautasuolojen kanssa vesipitoisessa väliaineessa pH-arvossa 7,5-8 ja että saatu tuote eristetään seostamalla pH-arvossa 2-4, jolloin viimeksi mainittu pH-alue tuotetaan spontaanisti tai tekemällä happameksi. 10
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sukkinyloidun proteiinin ja rautasuolojen välinen reaktio tapahtuu lähellä neutraalipistettä olevassa pH-arvossa.
3. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukaisten, rautaa sisältävien sukklnyloitujen proteiinien valmistamiseksi, tunnettu siitä, että sukklnyloitu proteiini saatetaan reagoimaan rautasuolojen kanssa vesipitoisessa väliaineessa pH-arvossa 7,5-8 ja että reaktiotuote eristetään poistamalla liuotin sen jälkeen, kun pH-arvo on säädetty lähelle neut-20 raalipistettä oleviin arvoihin.
4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan sukklnyloituja proteiineja, jotka sisältävät 0,4-6,7 paino-% rautaa vaihtelemalla rautasuolan ja sukkinyloidun 25 proteiinin painosuhdetta välillä 0,4-6,7.
5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lähtöproteiini sukklnyloIdaan sukkinylointlasteeseen 20-100% vaihtelemalla sukkilnlhapon johdannaisen määrää suhteessa lähtöprotelinlln 30 sukkinyloitaviin ryhmiin.
6. Jonkin patenttivaatimuksien 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siltä, että lähtöproteiini on alkuperältään kasvi- tai elälnprotellnl.
7. Jonkin patenttivaatimuksien 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siltä, että valmistetaan maitoproteiini, jonka sukklnylointiaste on yli 70% ja joka sisältää yli 4 palno-% rautaa. 30 775 74
8. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan ovalbumiinl, jonka sukklnylointlaete on yli 70% ja joka sisältää yli 4 paino-% rautaa.
9. Jonkin patenttivaatimuksen 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan soijaproteiinl, jonka sukklnylolntlaste on yli 70% ja joka sisältää yli 4 paino-% rautaa.
10 15 20 25 ti 35 3i 77574
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT19908/82A IT1150213B (it) | 1982-03-02 | 1982-03-02 | Derivati di ferro biodisponibile esenti da gastrolesivita',procentimento di preparazione e relative composizioni farmaceutiche |
| IT1990882 | 1982-03-02 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI830678A0 FI830678A0 (fi) | 1983-03-01 |
| FI830678L FI830678L (fi) | 1983-09-03 |
| FI77574B FI77574B (fi) | 1988-12-30 |
| FI77574C true FI77574C (fi) | 1989-04-10 |
Family
ID=11162241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI830678A FI77574C (fi) | 1982-03-02 | 1983-03-01 | Foerfarande foer framstaellning av derivat av succinyl-ferroprotein. |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4493829A (fi) |
| JP (1) | JPS58159421A (fi) |
| KR (1) | KR860001571B1 (fi) |
| AR (1) | AR229805A1 (fi) |
| AT (1) | AT390067B (fi) |
| AU (1) | AU548034B2 (fi) |
| BE (1) | BE896051A (fi) |
| BR (1) | BR8301005A (fi) |
| CA (1) | CA1222508A (fi) |
| CH (1) | CH653893A5 (fi) |
| DE (1) | DE3306622A1 (fi) |
| DK (1) | DK159824C (fi) |
| ES (1) | ES519944A0 (fi) |
| FI (1) | FI77574C (fi) |
| FR (1) | FR2522664B1 (fi) |
| GB (1) | GB2115821B (fi) |
| GR (1) | GR78470B (fi) |
| HK (1) | HK56086A (fi) |
| IE (1) | IE54572B1 (fi) |
| IN (1) | IN156079B (fi) |
| IT (1) | IT1150213B (fi) |
| LU (1) | LU84672A1 (fi) |
| MX (1) | MX9203631A (fi) |
| MY (1) | MY8600588A (fi) |
| NL (1) | NL190399C (fi) |
| NO (1) | NO163859C (fi) |
| PH (1) | PH18538A (fi) |
| PT (1) | PT76318B (fi) |
| SE (1) | SE462716B (fi) |
| ZA (1) | ZA831350B (fi) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1186787B (it) * | 1985-11-06 | 1987-12-16 | Mediolanum Farmaceutici Srl | Ferro-derivati della globina e dell'acetilglobina dotati di elevata biodisponibilita',processo di preparazione e composizioni farmaceutiche |
| IT1207996B (it) * | 1986-03-18 | 1989-06-01 | Magis Farmaceutici | Composti contenenti ferro biodisponibile, procedimento per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono. |
| JP2520262B2 (ja) * | 1987-08-21 | 1996-07-31 | 春幸 川原 | パツチテスト材料 |
| IT1222912B (it) * | 1987-10-14 | 1990-09-12 | Italfarmaco Spa | Derivati polipeptidici a elevato tenore di ferro e altamente solubili atti alla terapia marziale procedimenti di preparazione e loro forme farmaceutiche |
| IT1223122B (it) * | 1987-11-13 | 1990-09-12 | Unibios Spa | Derivati proteici del ferro altamente biodisponibile e tollerabili, loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono |
| US5322678A (en) * | 1988-02-17 | 1994-06-21 | Neorx Corporation | Alteration of pharmacokinetics of proteins by charge modification |
| IT1237783B (it) * | 1989-11-16 | 1993-06-17 | Italfarmaco Spa | Derivati di ferro-albumina biodisponibile, loro procedimento di preparazione e relative composizioni farmaceutiche. |
| IT1251702B (it) * | 1991-10-16 | 1995-05-19 | Mediolanum Farmaceutici Srl | Complessi del ferro con la conalbumina e i suoi derivati |
| IT1251725B (it) * | 1991-11-04 | 1995-05-23 | Italfarmaco Spa | Composti di ferro biodisponibile con ovotransferrina acilata o suoi derivati di idrolisi acilati |
| IT1291289B1 (it) * | 1997-04-30 | 1999-01-07 | Derivati Organici Lab | Complessi costituiti da fe(iii) un composto poliidrossilato e ovalbumina |
| ITMO20040200A1 (it) * | 2004-07-29 | 2004-10-29 | Biofer Spa | Processo per la produzione di complessi ferro succinilcaseina e ferro casein acetil aspartilato e loro utilizzato nelle relative composizioni farmaceutiche. |
| CN101321776A (zh) * | 2005-12-06 | 2008-12-10 | 维福（国际）股份公司 | 用于制备铁-琥珀酰酪蛋白的方法 |
| WO2009149553A1 (en) * | 2008-06-12 | 2009-12-17 | Universite Laval | Modified protein excipient for delayed-release tablet |
| KR101701830B1 (ko) | 2010-06-30 | 2017-02-13 | 이탈파마코 에스.피.에이. | 철 (ⅲ) 카세인숙시닐레이트 및 이의 제조 방법 |
| CN102838667B (zh) * | 2012-09-25 | 2014-06-25 | 济川药业集团有限公司 | 一种蛋白琥珀酸铁的制备方法 |
| WO2015101971A1 (en) * | 2014-01-06 | 2015-07-09 | Iron Therapeutics Holdings Ag | Dosage regimen of ferric trimaltol |
| GB201416293D0 (en) | 2014-09-15 | 2014-10-29 | Solvotrin Therapeutics Ltd | Methods and preparations |
| GB201418710D0 (en) | 2014-10-21 | 2014-12-03 | Iron Therapeutics Holdings Ag | Dosage regimen |
| ES2655238T3 (es) | 2014-12-19 | 2018-02-19 | Ioulia Tseti | Un proceso para producir complejos de caseína N-acetil-aspartilada y hierro (III) y uso de los mismos en composiciones farmacéuticas |
| ES3008084T3 (en) | 2016-03-15 | 2025-03-21 | Solvotrin Therapeutics Ltd | Compositions and methods for increasing iron intake in a mammal |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2932589A (en) * | 1956-03-12 | 1960-04-12 | Glidden Co | Paper coating compositions and process |
| IL26551A (en) * | 1965-10-08 | 1970-06-17 | Diagnostic Data Inc | Injectable protein and method of isolation and use |
| US3756682A (en) * | 1967-02-13 | 1973-09-04 | Schlumberger Technology Corp | Method for outgassing permanent magnets |
| US3873296A (en) * | 1968-06-24 | 1975-03-25 | Ashmead H H | Increasing metals in biological tissue |
| GB1284409A (en) * | 1968-12-31 | 1972-08-09 | Unilever Ltd | Oil emulsions containing acylated protein emulsifiers |
| US3764711A (en) * | 1971-03-29 | 1973-10-09 | Carnation Co | Acylated protein for coffee whitener formulations |
| US4017605A (en) * | 1974-09-20 | 1977-04-12 | Diagnostic Data, Inc. | Acylated orgotein |
| US4020158A (en) * | 1975-08-08 | 1977-04-26 | Ashmead H H | Increasing metals in biological tissue |
| NZ183858A (en) * | 1976-12-17 | 1979-10-25 | Ashmead Hh | Polyvalent metal proteinates as food additives |
| US4208405A (en) * | 1977-01-24 | 1980-06-17 | Kelatron Pharmaceutical Division of Intermountain Laboratories Inc. | Trace element composition for iron deficiency anemia |
| US4216144A (en) * | 1977-10-20 | 1980-08-05 | Ashmead H H | Soluble iron proteinates |
| US4172072A (en) * | 1977-10-20 | 1979-10-23 | Ashmead H H | Buffered enzymatically produced metal proteinates |
| SE451539B (sv) * | 1979-11-16 | 1987-10-19 | Sik Svenska Livsmedelsinst | Hemjernanrikat aminosyrapreparat framstellt av hemproteiner och forfarande for dess framstellning |
-
1982
- 1982-03-02 IT IT19908/82A patent/IT1150213B/it active Protection Beyond IP Right Term
-
1983
- 1983-02-18 CH CH922/83A patent/CH653893A5/it not_active IP Right Cessation
- 1983-02-21 ES ES519944A patent/ES519944A0/es active Granted
- 1983-02-22 AR AR291195A patent/AR229805A1/es active
- 1983-02-24 US US06/469,282 patent/US4493829A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-02-24 DK DK084883A patent/DK159824C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-02-25 DE DE19833306622 patent/DE3306622A1/de active Granted
- 1983-02-25 PH PH28572A patent/PH18538A/en unknown
- 1983-02-25 AU AU11858/83A patent/AU548034B2/en not_active Ceased
- 1983-02-28 CA CA000422538A patent/CA1222508A/en not_active Expired
- 1983-02-28 GR GR70623A patent/GR78470B/el unknown
- 1983-02-28 ZA ZA831350A patent/ZA831350B/xx unknown
- 1983-02-28 FR FR8303268A patent/FR2522664B1/fr not_active Expired
- 1983-02-28 KR KR1019830000820A patent/KR860001571B1/ko not_active Expired
- 1983-03-01 NO NO830707A patent/NO163859C/no unknown
- 1983-03-01 PT PT76318A patent/PT76318B/pt unknown
- 1983-03-01 SE SE8301129A patent/SE462716B/sv not_active IP Right Cessation
- 1983-03-01 IE IE428/83A patent/IE54572B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-03-01 BE BE2/60041A patent/BE896051A/nl not_active IP Right Cessation
- 1983-03-01 FI FI830678A patent/FI77574C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-03-01 JP JP58033718A patent/JPS58159421A/ja active Granted
- 1983-03-01 NL NLAANVRAGE8300757,A patent/NL190399C/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-03-01 AT AT0070983A patent/AT390067B/de not_active IP Right Cessation
- 1983-03-02 IN IN263/CAL/83A patent/IN156079B/en unknown
- 1983-03-02 LU LU84672A patent/LU84672A1/fr unknown
- 1983-03-02 GB GB08305691A patent/GB2115821B/en not_active Expired
- 1983-03-03 BR BR8301005A patent/BR8301005A/pt unknown
-
1986
- 1986-07-24 HK HK560/86A patent/HK56086A/xx not_active IP Right Cessation
- 1986-12-30 MY MY588/86A patent/MY8600588A/xx unknown
-
1992
- 1992-06-26 MX MX9203631A patent/MX9203631A/es unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI77574C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av derivat av succinyl-ferroprotein. | |
| Lönnerdal et al. | Isolation of a low molecular weight zinc binding ligand from human milk | |
| KR900003695B1 (ko) | 글로빈 또는 아세틸글로빈의 철-유도체의 제조방법 | |
| US5284832A (en) | Iron complexes containing conalbumin and its derivatives | |
| JP2005040128A (ja) | ヘム鉄を基礎とした食物調製剤を得る生物学的方法、及び該方法の実施により得られる食物調製剤 | |
| JPS6351337A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
| US4939092A (en) | Proteinaceous derivatives containing iron in highly bioavailable form, preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them | |
| KR100556865B1 (ko) | Fe(ⅲ), 폴리히드록실레이트 및 오브알부민으로 구성된 복합체 | |
| JPH01146900A (ja) | 鉄含量が高い可溶性ポリペプチド誘導体とその製法及びこれを含有する製薬組成物 | |
| Todaka et al. | Production and characterization of hydrophilic heme iron preparation from fish blood | |
| US3065138A (en) | Therapeutic preparations of elemental iron | |
| JPH06199693A (ja) | 虚血性疾患改善治療剤 | |
| WO1993008830A1 (en) | Compounds of bioavailable iron with acylated ovotransferrin or with acylated hydrolysis derivatives thereof | |
| KR20000060857A (ko) | 철분-트랜스페린 추출물의 제조방법 | |
| CN120309718A (zh) | 一种铁螯合卵转铁蛋白的制备方法及其补铁产品 | |
| KR20240157157A (ko) | 뇌혈관장벽을 통과하여 알츠하이머병을 개선 또는 치료할 수 있는 복합 나노입자 및 이의 용도 | |
| CN120608115A (zh) | 一种牦牛全血多肽铁螯合物以及制备方法和应用 | |
| WO1991007426A1 (en) | Bioavailable iron-albumin compounds, a process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them | |
| JPH0242467B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ITALFARMACO S.P.A. |