FI70925C - Foerfarande foer framstaellning av 3-hydroxy-ml-236b-derivaterm-4 och m4' - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av 3-hydroxy-ml-236b-derivaterm-4 och m4' Download PDFInfo
- Publication number
- FI70925C FI70925C FI823978A FI823978A FI70925C FI 70925 C FI70925 C FI 70925C FI 823978 A FI823978 A FI 823978A FI 823978 A FI823978 A FI 823978A FI 70925 C FI70925 C FI 70925C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- nocardla
- ferm
- compound
- brown
- microorganism
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/365—Nocardia
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/872—Nocardia
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
70925 1 Menetelmä 3-hydroksi-ML-236B-johdannaisten M-4 ja M-4' valmistamiseksi Förfarande för framställning av 3-hydroxy-ML-236B-clerivaten M-4 och M-4' 5 Tämä keksintö käsittää menetelmän kaavan (I) mukaisen lääkeaineena käyttökelpoisen yhdisteen: 10
^ ...OH
hooc^ y‘
HCX J
H O £··% 15 '0 ΗΪ O) CH3fA|A>^3 HO^ 20 (missä 'VvAA.0H edustaa ryhmää "Ji**0H tai >M»iuoh), sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja esterien sekä vastaavien suljetun renkaan omaavlen laktonlen valmistamiseksi, saattamalla yhdiste 25 ML-236B, joka on kaavan II mukainen
..-OH
HOOCT ^-* 30 · 0%/
νϊ T-H
9 H I on 35 1 (ML-236B)-karbokeyylihappo tai sen suola, kosketukseen hydroksylointient- syymin kanssa.
2 70925 ML-236B, joka voi esiintyä happomuodossa ("ML-236B-karboksyylihappo") 5 tai laktonimuodossa ("ML-236B-laktoni"), on kuvattu GB patenttijulkaisussa 1.453.425, Ja, laktonimuodossaan, sillä on kaava:
10 O^J
-rVS
A A. /ch3
15 flT
Myöhemmin GB patenttijulkaisussa 1.555.831 on kuvattu erilaisia 20 ML-236B:n suoloja ja estereitä. ML-236B:n ja sen suolojen ja estereiden havaittiin Inhiboivan kolesterolin biosynteesiä kilpailemalla 3-hydroksi- 3-metyyliglutaryylikoentsyymi-A:n reduktaasin kanssa, mikä on reaktio-nopeutta määräävä entsyymi kolesterolin biosynteesissä; näiden yhdisteiden havaittiin siten osoittavan erittäin merkittävää kykyä alentaa seeru-25 min kolesterolitasoa.
Myöhemmin tiettyjä 3-hydroksi-ML-236B:n johdannaisia eristettiin ML-236B-laktouin eläinten aineenvaihdunnan tuotteina, ja samanlaisia johdannaisia havaittiin tuotettavan ML-236B-laktonln ja -karboksyylihapon tai niiden 30 suolojen tai estereiden entsymaattlsella hydroksylolnnilla, mikä oli saatu aikaan suvun Absldia, Cunninghamella, Syncephalastrum, Streptomyces, Mucor, Rhizopus, Zygorhynchus, Circinella, Actlnomucor, Gongronella, Phycomyces, Mortierella, Pycnoporus ja Rhizoctonla mikro-organismeilla. A. Terahara ja M. Tanaka julkaisivat nämä menetelmät US-patentlssa 4.346.227, jota 35 vastaava patenttihakemus jätettiin 5. heinäkuuta 1981, ja siten tuotettuja yhdisteitä kuvataan tuossa patenttihakemuksessa M-4:ksi, M-4':ksi, TsoM-4:-ksi ja IsoM-4':ksi. Näillä yhdisteillä havaittiin olevan kykyä inhiboida 3 70925 1 kolesterolin biosynteesiä» mikä on vähintään verrannollinen itse ML-236B:n inhibointikyvyn kanssa ja mikä joissakin tapauksissa olennaisesti ylittää sen.
5 ML-236B:llä ja sen johdannaisilla käsittäen M-4- ja M-41-yhdisteet on siten terapeuttista merkitystä veren hyperlipemian hoitamisessa ja val-timonkovetustaudin ennaltaehkäisyssä.
Tekniikan tasona mainitaan myös FI-patenttien 66.427 ja 67.231 sekä FI-10 hakemuksen 802357 esittämät läheistä rakennetta olevat yhdisteet.
Me olemme nyt keksineet, että M-4:ä ja M-4':ä voidaan myös valmistaa ML-236B:stä ja sen erilaisista johdannaisista käsittelemällä suvun Nocardia mikro-organismilla tai sen soluttomalla, entsyymiä sisältävällä 15 uutteella. Suvun Nocardia mikro-organismien käytöllä on se etu verrattuna US-patentissa 4.346.227 esitettyihin mikro-organismeihin nähden, että substraattina käytettävää ML-236B-yhdistettä voi olla reaktioliuok-sessa paljon suurempana konsentraatloua kuin jos käytetään aiemman kaltaisia mikro-organismeja. Tämä on kalkkein hännnästyttävlntä, sillä 20 ML-236B-yhdisteiden on havaittu omaavan fungisidisia ja antibioottisia ominaisuuksia.
Näin ollen tämä keksintö on tunnettu siltä, että hydroksylointientsyyml on valmistettu suvun Nocardia mikro-organismilla; jos on tarpeellista, 25 altistamalla saatu tuote yhteen tai useampaan reaktioon, joka on hydro-lyysi, suolan muodostus, esterölnti tai laktonlsointl; ja eristämällä tuote reaktioseoksesta.
Kaavan (I) yhdistettä, jossa SΙΛ/ΙΑ. OH on OH, kutsutaan 30 (M-4)-karboksyylihapoksi, ja vastaavat suolat ja esterit tunnetaan (M-4)-karboksylaatteina. Kaavan (I) yhdiste, missä SVWL OH on OH, lyhennetään (M-41)-karboksyylihapoksi, ja vastaavat suolat ja esterit lyhennetään (M-4')-karbokeylaareiksi.
35 4 70925 1 Suljetun renkaan omaavla laktoneja, jotka vastaavat kaavan (I) yhdisteitä, voidaan kuvata kaavalla (Ia): h3C'^y o h> (Ta> 10 »Tipu
H CT
15 missä /VW> OH edustaa ryhmää -*·βθΗ tai ja ne tunnetaan vastaavasti (M-A)-laktonlna ja (M-VJ-laktonlna.
Suljetun renkaan omaavaa laktonla, joka vastaa kaavan (TI) ML-236B-20 karboksyyllhappoa, voidaan kuvata kaavalla (Ila):
.....OH
25 y' H O [x. dia)
hSH
ja se tunnetaan ML-236B-laktonina.
35 5 70925 1 Suvun Nocardia parempina pidettyjä lajeja käytettäväksi tämän keksinnön menetelmässä ovat Nocardia autotrophica, Nocardia asteroldes, Nocardia farclnica ja Nocardia coeliaca, erityisesti Nocardia autotrophica. Näistä lajeista seuraavia kantoja pidetään parempina: 5
Nocardia autotrophica FERM P-6181 (SANK 62781);
Nocardia autotrophica subsp. canberrica nov. PERM P-6182 (SANK 62881); Nocardia autotrophica subsp. amethystine nov. FERM P-6183 (SANK 62981); 10 Nocardia autotrophica IFO 12743 (SANK 91279);
Nocardia asteroides IFO 3424 (SANK 62065);
Nocardia farcinica ATCC 3318 (SANK 64265) ja Nocardia coeliaca ATCC 17040 (SANK 63665).
15 Yllä mainituista suvuista Nocardia autotrophica IFO 12743, Nocardia asteroides IFO 3424, Nocardia farclnica ATCC 3318 ja Nocardia coeliaca ATCC 17040 tunnetaan kaikki lajeina, joita on vapaasti ja yleisesti saatavissa vastaavalta vi.ljelmäkokoelmalta, so. the Institute for Fermentation, Osaka, Japani (IFO) tai the American Type 20 Culture Collection, USA (ATCC), annetuilla talletusnumerollia.
Nocardia autotrophica kannat, joita merkitään talletusnumerollla FERM P-6181, FERM P-6182 ja FERM P-6183, ovat kaikki tämän mikro-organismin uusia kantoja, jotka on hiljakkoin eristetty maa-aineksesta ja jotka on 25 16. lokakuuta 1981 liitetty kokoelmaan Fermentation Research
Institute:ssa, Ibaraki-Ken, Japani (FERM).
Vastikään eristettyjen mikro-organismien morfologiset ja fysiologiset ominaisuudet määritettiin käyttäen tavanomaista väliainetta ja 30 Shirlingin ja Gottliebin kuvaamia menetelmiä International Journal of Systematic Bacteriology 16, 313-340 (1966) yhdessä useiden lisä-testien kanssa. Havaintoja viljelmästä tehtiin inkuboinnin jälkeen 28°C:8sa 2 viikkoa. Käytetyt värien nimet merkittiin "Guide to Colour Standard"-käsikirjan mukaan (Nippon Shikisai Kenkyushorn, Tokio, 35 Japani, julkaisema käsikirja). Viljelmien omineisuuksia verrattiin ak-tlnomysetaalien erilaisten tunnettujen Actinomycetes lajien ominaisuuksiin, joita Wakeman kuvaa teoksessa "The Actinomycetes, Voi. 2", Shir- 6 70925 1 ling ja Gottlieb julkaisussa "The ISP Report" ja joita kuvataan "Bergey's Manual of Determinative Bacteriology", 8. painoksessa ja muussa viimeaikaisessa kirjallisuudessa, joka käsittelee suvun Nocar-dlaceae taksonomiaa. Uusia mikro-organismeja merkitään niiden FERM-5 talletusnumeroilla.
Taulukossa 1 on esitetty edellä mainittujen uusien mikro-organismien morfologisia ominaisuuksia.
10 TAULUKKO 1
FERM FERM FF.RM
P-6181 P-6182 P-6183 15_____________
Itiöketjun morfologia RF RF RF
Haaroittuminen vaatimaton vaatimaton vaatimaton
Fragmentoltuminen kyllä kyllä kyllä
Segmentoituneiden rihmojen 20 (hyphae) pintarakenne (itiöt) sileä, sileä, sileä, kiiltävä kiiltävä kiiltävä
Muut elimet solmukoh- solmu- ei tla, pesä- kohtia kemäistä 25 kasvustoa (tangles) ----- — - - ------- * - ' . j—....
RF - Rectus Flexlbills 30
Kalkki uudet kannat osoittivat hyvää kasvua vaihteleviesa väliaineissa.
Kannalla FERM P-6181 oli valkoisia plntarihmastoja (aerial mycelia) väriltään kellanharmaasta vaalean kellanoransslln kasvuston päällä. Tle-35 tylssä liuoksissa havaittiin vaalea, kellanruskea, liukoinen pigmentti, mutta vain vähäisessä määrin.
7 70925 1 Kannalla FERM P-6182 oli ruskean valkoisesta vaalean kellanoransslln värisiä pintarlhmaetoja harmahtavan kellanruskean kasvuston päällä. Mitään liukoista pigmenttiä el havaittu.
5 Kannalla FERM P-6183 oli väriltään ruskean valkoisesta vaalean kellanoransslln värinen kasvusto, ja violetlnruskeita täpliä havaittiin, kun viljely edistyi. Rusehtavan harmaita pintarilimastoja oli mukana kalkkien väliaineiden päällä paitsi hiiva-mallas-väliaineella.
10 Viljelmien ominaisuudet 14. viljelypäivänä 28°C:ssa eri väliaineissa on esitetty taulukossa 2. Taulukossa käytetyt lyhenteet ovat seuraa-vat: G * kasvusto; 15 AM pintarihmasto; R « kääntöpuoli; SP - liukoinen pigmentti.
20 25 30 35 1 TAULUKKO 2 8 70925 Väliaine FERM P-6181 FERM P-6182 FFIRM P-6183 5 ________________________________________________________
Hiiva- G Erittäin hyvä, Erittäin hyvä, Erittäin hyvä, mallas- vaalean kellan- ruskea (6-4-1) ruskean valkeasta agari ruskea (6-7-9) (2-9-8) harmah- (ISP 2) tavan punarus- 10 keaan (4-3-5) AM Runsas, Runsas, Jälkiä, valkoinen rusehtavan valkoinen valkoinen (2-9-7) 15 R Kiilloton, Ruskea (4-4-7) Ruskean valkeasta kellanoranssi (2-9-8) harmahta- (8-8-8) van punaruskeaan (4-3-5) SP Kellanruskea Ei lainkaan Ei lainkaan 20 (8-7-9)
Kaura- G Hyvä, vaalean Erittäin hyvä, Erittäin hyvä, jauho- ruskea (2-8-9) vaalean kellan- tumman punaruskea agari oranssi (2-9-9) (4-3-4) 25 (ISP 3) AM Kohtalainen, Runsas, vaalean Kohtalainen, hiu- valkea kellanruskea kan vaalean pu- (2-9-9) nainen (2-8-4) R Kellertävän Vaalean kellan- Ruskean violetti 30 ruskea (4-7-9) ruskea (4-8-9) (3-3-2) SP Vaalean kellan- Ei lainkaan F.i lainkaan ruskea (4-8-9) 35 1 TAULUKKO 2 (jatkuu) 9 70925 - - - ------- ------------ — i Väliaine FERM P-6181 FERM P-6182 PERM P-6183 5 _________________________________________________________________ Tärkkelys/ Γ. Hyvä, keller- Niukka, ke Her- Erittäin hyvä, epäorg. tävän harmaa tavan harmaa ruskean violetti suola (2-9-10) (1-9-10) (3-3-2) - agari AM Kohtalainen, Runsas, vaalean Hyvä, kiiltävän 10 (ISP 4) valkoinen kellanoranssi ruskean harmaa (2-9-9) (2-8-2) R Vaalean keltai- Vaalean kellan- Tumman punaruskea nen (3-9-10) oranssi (2-9-9) (4-3-4) SP Ei lainkaan Ei lainkaan Ei lainkaan 15 __________________________________________________________________________ . Glyseriini/ G Hyvä, vaalean Hyvä, harmahta- Erittäin hyvä, asparagiini ruskea (2-8-9) van kellan- vaalean ruskeasta -agari ruskea (4-5-7) (2-9-9) ruskean (ISP 5) violettiin (3-3-2) 20 AM Runsas, Runsas, ruskean Runsas, valkoinen valkoinen valkoinen (1-8-6) R Vaalean kellan- Ruskea (4-4-6) Vaalean kellanruskea (6-8-9) oranssista (2-9-9) 25 harmahtavan puna ruskeaan (4-3-6) SP Vaalean kellan- Ei lainkaan Ei lainkaan ruskea (6-9-11) 30 Ty rosiini- G Erittäin hyvä, Erittäin hyvä, Hyvä harmahtavan agari vaalean keltai- harmahtavan ruskea (4-6-6) (ISP 7) sen oranssi kellanruskea (3-8-8) (4-5-7) AM Runsas Runsas, ruskean Jälkiä, 35 valkoinen valkoinen valkoinen (2-9-7) _____________ 10 1 TAULUKKO^ (jatkuu) 70925 Väliaine FERM P-6181 FERM P-6182 FFRM P-6183 5 ________________________________________________________________ R Kellertävän Kirkkaan Vaalean kellan- harmaa (1-9-10) ruskea (6-5-7) oranssista (2-9-9) ruskeanviolettiin i (3-3-2) | 10 SP J Vaalean kellan- Ki lainkaan F.i lainkaan j I ruskea (6-7-9) |
j ‘ I
Sakkaroosi- G | Hyvä, vaalean Heikko, Heikko, nitraatti- j kellanruskea vaalean kellan- vaalean kellan- 15 agari I (2-9-9) ruskea (2-9-9) oranssi (2-9-9) i i AM j Kohtalainen, Runsas, Kohtalainen, ! valkoinen ruskean valkoi- valkoinen - nen (2-9-7) R Kellertävän Ruskean valkoi- Vaalean kellan- 20 I I harmaa (1-9-10) nen (1-9-6) oranssi (2-9-9) j SP 1 Fi lainkaan Ki lainkaan Ei lainkaan |
Glukoosi/ G Erittäin hyvä, Hyvä, harmahta- Erittäin hyvä, asparagiini 'vaalean kellan-jvan kellan- vaalean kellan- 25 -agari 'oranssi (2-9-9)!ruskea (4-5-7) oranssista (2-9-9) I ruskean violettiin ! (3-3-2) AM Kohtalainen, Runsas, kiiltä- Kohtalainen, ! valkoinen vän ruskean valkoinen _ i 30 | valkoinen ; (1-7-6) R , Vaalean kellan- Harmahtavan Vaalean kellan- ruskea (4-8-9) punaruskea oranssista (2-9-9) (4-3-6) harmahtavan puna- 35 ruskeaan (4-3-6) SP Vaalean kellan- Ei lainkaan Ei lainkaan ruskea (4-8-9) 1 TAULUKKO 2 (jatkuu) π 70925 Väliaine FFRM P-6181 FF.RM P-6182 FF.RM P-6183
Ravinto- G Hyvä, keller- Erittäin hyvä, Hyvä vaalean kel- agari tävän harmaa vaaleau kellan- lanoranssi (2-9-9) (2-9-10) ruskea (6-8-9) AM Kohtalainen, Vaalean kellan- Jälkiä, valkoinen Ί0 valkoinen oranssi (2-9-9) R Kellertävän Vaalean kellan- Vaalean kellan- harraaa (4-9-10) ruskea (6-8-9) oranssi (2-9-9) SP Ei lainkaan F.i lainkaan Ei lainkaan 15 Vesi- G Heikko, keller- Heikko, Heikko, vaalean agari tävän harmaa väritön ke 1lanoranssi (1-9-10) (2-9-9) AM Kohtalainen, Runsas, Kohtalainen, valkoinen valkoinen valkoinen 20 R Kellertävän Vaalean kellan- Vaalean kellan- harmaa (1-9-10) oranssi (2-9-9) oranssi (2-9-9) SP Ei lainkaan Ei lainkaan Ei lainkaan
Peruna/ G Heikko, keller- Heikko, Heikko, vaalean 25 porkkana- tävän harmaa väritön kellanoranssi 1 uute (1-9-10) (2-9-9) -agari AM Kohtalainen Kohtalainen, Kohtalainen, valkoinen valkoinen valkoinen 30 R Kellertävän Vaalean kellan- Vaalean kellan- harmaa (1-9-10) oranssi (2-9-9) oranssi (2-9-9) SP Ei lainkaan Ei lainkaan Ei lainkaan 35 12 70925 1 Uusien kantojen fysiologiset ominaisuudet on esitetty taulukossa 3. Tumman pigmentin muodostuinlskoe tehtiin seuraavlssa kolmessa väliaineessa: 5 Väliaine 1: Tryptoni-hlivauute-lihaliemi (ISP 1); Väliaine 2: Peptoni-hilvauute-rauta-agari (ISP 6); Väliaine 3: Tyrosiinlagarl (ISP 7).
TAULUKKO 3 10
FERM FERM FERM
P-6181 P-6182 P-6183 15 Nitraatin pelkistys - - Tärkkelyksen hydrolyysl - -
Urean hajoaminen + +
Lysoteyymien kestävyys +
Tumman pigmentin muodostus 20 Väliaine 1 - - Väliaine 2 - - Väliaine 3 -
Happojen tuottaminen arablnoosista + - + 25 ksyloosista + +
raffinoosista + NG
- - negatiivinen; 30 + = positiivinen; NG « el kasvustoa.
Hiilihydraattien hyväksikäyttö uusilla kannoilla on esitetty taulukossa 4. Käytetty väliaine oli Pridham-Cottlieb-agaria (ISP 9), ja 35 määritys tehtiin viljelyn jälkeen 28°C:ssa 14 päivän ajan.
70925 1 TAULUKKO 4
FERM PERM FF.RM
5 P-6181 P-6182 P-6183 D-glukoosi + + + D-arablnooei +-+ D-ksyloosl +-+ 10 D-fruktoosi +++ L-ramnoosi +-+
Inositoli +++
Sakkaroosi + --
Raffinoosi +-- 15 D-mannitoli +++
Vertailu --- + = hyödynnetty; 20 + => hiukan hyödynnetty; - e ei hyödynnetty.
Paperikromatografia-analyyseja tehtiin kunkin kolmen, uuden suvun hap-pohydrolyysituotteelle B. Beckerin et ai. {^Applied Microbiology, 13, 25 236 (1965)J ja M.P. LeChevalier'n et ai. [[H. Prauset, "The Actino- mycetales", 311 (1970)J menetelmän mukaan. Meso-2,6-diaminopimeeli-happoa löydettiin soluseinlstä, ja arabinoosia ja galaktoosia löydettiin koko solun sakkarilnln aineosina, mikä siten varmistaa sen, että kullakin suvulla olivat solun osat tyyppiä TV-A.
30 Näiden taksonomisten tutkimusten tulokset osoittavat, että kaikki kannat kuuluvat sukuun Nocardla. Nocardlan tunnetuista lajeista uusien kantojen ominaisuudet ovat lähimpänä Nocardla autotrophican ominaisuuksia International Journal of Systematic Bacteriology, 30, 337 (1980) 35 paitsi ainoastaan niiden erojen kohdalla, jotka on esitetty taulukossa 5. Taulukossa merkit ja lyhenteet ovat samoja kuin vastaavissa taulukoissa 1-4 annetut.
14 70925 1 TAULUKKO 5 FERM FERM FERM Nocardia 5 Koe P-6181 P-6182 P-6183 autotrophica___
Kasvuston AM valkoinen valkoisesta valkoi- valkoisesta värit vaalean koisesta vaalean kellan- rusehta- keltaiseen 10 oranssiin van har maaseen C kellertävän harmahtavan ruskean vaalean kel- barmaasta kellan- violetti täisestä vaalean kel- ruskea kellertävän 15 lan oranssiin harmaaseen
Urean hajoaminen + - + +
Kestävyys 20 lyeotsyymille - + - -
Happojen tuotto: arablnooslsta + - + + ksyloosista + - + + 25 raffinoosista + - NG -
Hyväksikäyttö: arabinoosl + - + + ksyloosi + _ + + 30 ramnoosl + - + + sakkaroosi + - - + raffinoosi + + 35 Kanta FERM P-6181 ja Nocardla autotrophica muistuttivat toisiaan morfo logisilta, kasvuetollisiltä ja fysiologisilta ominaisuuksiltaan, ja siten pääteltiin, että tämä kanta kuului lajiin Nocardia autotrophica.
15 70925 1 Kanta FERM P-6182 poikkesi Nocardla autotrophlcasta urean hajottamisessa, kestävyydessä lysotsyymeille, happojen tuottamisessa hiilihydraateista ja hiilihydraattien hyväksikäytössä. Kuitenkaan nämä erot eivät ole riittäviä, jotta kanta FERM P-6182 tulisi käsittää uudeksi lajiksi; 5 sen tähden sitä pidetään Nocardla autotrophican uutena alalajina. Vastaavasti tämä kanta nimettiin Nocardla autotrophica subsp. canberrica subsp. nov.:kel.
Subsp. FERM P-6183 poikkesi Nocardla autotrophlcasta kasvustonsa värissä 10 ja ramnoosln, sakkaroosin ja raffinoosln hyväksikäytössä. Samoin nämä erot eivät olleet riittäviä, jotta tämä kanta tulisi käsittää uudeksi lajiksi, ja siksi sitä pidetään Nocardla autotrophican alalajina. Se on nimetty Nocardla autotrophica subsp. amethystlna subsp. nov.:ksl.
15 Suvun Nocardla erilaisista mikro-organismeista, joita voidaan käyttää keksinnön menetelmässä, me erityisesti pidämme parempana käyttää näitä kolmea uutta kantaa, toisin sanoen Nocardla autotrophica FERM P-6181, Nocardla autotrophica subsp. canberrica FERM P-6182 tai Nocardla autotrophica subsp. amethystlna FERM P-6183.
20 Tämän keksinnön entsymaattinen hydroksylolntiprosessi voidaan suorittaa saattamalla ML-236B-yhdlste kosketukseen sukuun Nocardla kuuluvan mikro-organismin kanssa tai sen soluttaman, entsyymiä sisältävän uutteen kanssa.
25 Tämän keksinnön prosessi suoritetaan mieluummin jollakin kolmesta tavasta: (a) lisäämällä lähtöyhdlstettä ML-236B viljelmän väliaineeseen muunta- 30 van mikro-organismin viljelyn aikana, ja sitten jatkamalla viljelyä; (b) kokoamalla muuntavan mikro-organismin viljelmää, ja saattamalla kerätyt solut kosketukseen lähtöyhdlsteen ML-236B kanssa; tai 35 (c) valmistamalle solutonta, entsyymiä sisältävää uutetta muuntavan mikro-organismin soluista, ja yhdistämällä tämä uute lähtöyhdis-teen ML-236B kanssa.
i6 70925 1 Suvun Nocardia muuntavan mikro-organismin viljely voi tapahtua tavanomaisella tavalla tavanomaisessa vlljelmMn väliaineessa, joka sisältää ravintoaineita, jotka sellaisten mikro-organismien kanssa käytettäväksi hyvin tunnetaan. Siten, niinkuin hyvin tiedetään, sellainen 5 viljelmän väliaine sisältää assimiloituvan hiilen ja assimiloituvan typen lähteen ja usein epäorgaanisia suoloja. Esimerkit assimiloituvan hiilen lähteistä käsittävät glukoosin, sakkaroosin, tärkkelyksen, glyseriinin, hirssigelatiinin, melassit ja soijapapu öljyn. Esimerkit assimiloituvan typen lähteistä käsittävät soijapavun kuiva-aineen 10 (mikä käsittää karkeat ja hienot soijapapujauhot) , vehnänalkion, liha-uutteet, peptonin, maissiniiotusveden, kuivatun hiivan ja ammonium-suolat, kuten ammoniumsulfaatin. Jos on tarpeen, voidaan myös epäorgaanisia suoloja, kuten natriumkloridia, kaliumkloridia, kalsiutnkarbo-naattia tai fosfaatteja, sisällyttää mukaan.
15
Myös, jos halutaan, voidaan käyttää muita lisäaineita, jotka kykenevät edistämään hydroksylointientsyymin tuotantoa, sopivina kombinaatioina. Erityinen viljelytekniikka ei ole kriittinen keksinnön menetelmälle, ja mitä tahansa tavanomaisesti mikro-organismien viljelyyn käytettyä 20 tekniikkaa voidaan käyttää yhtäläisesti tämän keksinnön kanssa. Yleensä tietenkin käytettävä tekniikka valitaan ottamalla huomioon teollinen tehokkuus. Siten liuosviljelyä pidetään parempana, ja syväviljely-menetelmä on mukavin teolliselta näkökannalta.
25 Viljely suoritetaan tavallisesti aerobisissa olosuhteissa ja alueella 20-37°C olevassa lämpötilassa, vielä mieluummin 26-28°C:ssa.
Menetelmä (a) toteutetaan lisäämällä lähtöyhdistettä ML-236B viljelyvä-llalneeseen viljelyn kuluessa. Viljelyn aikana täsmällinen kohta, jol-30 loin lähtöyhdisteita lisätään, vaihtelee riippuen viljelyvälineestä, vällaineseoksesta, viljelyväliaineen lämpötilasta ja muista tekijöistä, mutta se on mieluummin sinä aikana, jolloin mikro-organismin hyd-rokeylointikapasiteetti alkaa lisääntyä, ja tämä on tavallisesti 2 tai 3 päivää mikro-organismin viljelyn aloittamisen jälkeen. Lisättävän 35 ML-236B-yhdisteen määrä on mieluummin 0,01-5,0 paino-% väliaineesta, vielä mieluummin 0,05-0,5, esim. 0,05-0,1, paino-Z. ML-236B-yhdisteen lisäämisen jälkeen viljelyä jatketaan aerobisesti tavallisesti lämpö- i7 70925 1 tilassa, joka on yllä esitettyjen rajojen sisällä. Viljelyä jatketaan tavallisesti 3-5 päivän ajan ML-236B-yhdlsteen lisäämisen jälkeen.
Menetelmässä (b) mikro-organismin viljely tapahtuu ensin olosuhteissa, 5 joissa saavutetaan maksimi hydrokaylointikapasiteetissa; tämä kapasiteetti saavuttaa tavallisesti maksimin 4-5 päivän välillä viljelyn aloittamisen jälkeen, vaikka tämä ajanjakso on vaihteleva riippuen väliaineen luonteesta ja lämpötilasta, mikro-orpanistnin lajista ja muista tekijöistä. Viljelmän hydroksylointikapasiteettia voidaan tark-10 käillä ottamalla näytteitä viljelmästä sopivin väliajoin, määrittämällä näytteiden hydroksylolntlkapasiteetti saattamalla ne kosketukseen ML-236B-yhdisteen kanssa vakio-olosuhteissa ja määrittämällä saatujen yhdisteiden M-4 ja M-4' määrä sekä merkitsemällä tämä kapasiteetti ajan suhteen kaaviona. Kun hydroksylolntlkapasiteetti on saavuttanut maksi-15 mipisteensä, viljely lopetetaan, ja mikrobisolut kerätään. Tämä voi tapahtua sentrlfugolmalla, suodattamalla tai samankaltaisilla erottelu-menetelmillä. Siten kerätyt viljeltävän mikro-organismin kokonaiset solut mieluummin pestään sitten sopivalla pesuliuoksella, kuten fysiologisella suolaliuoksella tai sopivalla puskuriliuoksella.
20
Suvun Nocardia mikro-organismin kerättyjen solujen saattaminen yhteen yhdisteen KL-236B kanssa suoritetaan yleensä vesiliuoksessa, esimerkiksi fosfaattlpuskurllluoksessa pH-arvossa 5-9. Reaktiolämpötila on mieluummin rajojen 20-45°C sisällä, vielä mieluummin 25-3U°C. ML-236R-25 yhdisteen konsentraatio reaktiolluoksessa on mieluummin alueen 0,01- 5,0 paino-% sisällä. Aika, joka sallitaan reaktiolle, on mieluummin 1-5 päivää, vaikka tämä voi vaihdella riippuen ML-23f>B-yhdisteen kon-sentraatiosta reaktloseoksessa, reaktlolämpötilasta, mikro-organismin hydroksylointikapasiteetiata (mikä voi tietenkin vaihdella lajista 30 lajiin ja mikä myös, kuten yllä kerrottiin, riippuu viljelyajasta) ja muista tekijöistä.
Soluton, entsyymiä sisältävä uute, jota käytetään menetelmässä (c), voidaan saada hajoittamalla koko mikro-organismin solut, jotka on saa-35 tu niin kuin kuvattiin menetelmän (b) yhteydessä, fysikaalisin tai kemiallisin keinoin, esimerkiksi jauhamalla tai ultraäänikäsittelyllä hajoitetun solumassan aikaansaamiseksi tai käsittelemällä pinta-aktiivi- ie 70925 1 eella aineella tai entsyymillä soluliuokeen tuottamiseksi. Lopullinen soluton uute yhdistetään sitten lähtöyhdisteen ML-236B kanssa samoissa olosuhteissa, kuten kuvattiin yllä menetelmän (b) yhteydessä.
5 Muuntoreaktion loppuunsaattamisen jälkeen millä tahansa yllä mainitulla menetelmällä voidaan haluttu yhdiste suoraan eristää, erottaa tai puhdistaa tavanomaisin keinoin. Esimerkiksi erottaminen ja puhdistaminen voidaan suorittaa suodattamalla reaktloseos, uuttamalla saatu suodos veteen liukenemattomalla orgaanisella liuottImellä (kuten etyy-10 lisulfaatilla), tislaamalla liuotin uutteesta, viemällä saatu raaka-tuote kromatografiapylvääseen (esimerkiksi silikageeli tai aluminium-oksidi) ja eluolmalla pylvästä sopivalla elucntilla.
Milloin mikro-organismilla muunnettu yhdiste M-4 tai M-4' ei ole tuon 15 yhdisteen haluttu muoto, voidaan konversloreaktlon tuote sitten saattaa yhteen tai useampaan jatkoreaktioon, kuten hydrolyysiin, suolan muodostamisreaktioon, esteröintiin tai laktonlsointlin, tavanomaisilla menetelmillä, kuten tässä jäljempänä kuvataan. Sellaiset llsäreak-tiot voidaan sovittaa yllä kuvattujen erottelu- ja puhdistusvaibeita 20 ennen, niiden jälkeen tai niiden aikana, mieluummin näiden vaiheiden aikana.
Keksinnön menetelmässä aktiivisella hydroksylointientsyymillä ei ole itsessään vaikutusta ML-236B-yhdisteen karboksyyliryhmään, ja siten, 25 kun muut tekijät ovat samat, ML-236B-laktoni antaisi (M-4)- ja/tai (M-4’)-laktonia, ML-236B-karboksyylihappo antaisi (M-4)- ja/tai (M—4*) — karboksyylihappoa ja ML-236B-karboksyylihapon suola tai esteri antaisi (M-4)- ja/tai (M-4')-karboksyylihapon samaa suolaa tai esteriä. Kuitenkin tähän voidaan vaikuttaa muilla tekijöillä, erityisesti reaktio-30 seoksen pH-arvolla, tavalla, mikä on ennustettavissa tavallisilla kemian laeilla. Lähtöyhdiste ML-236B voi olla kaavan (TI) vapaa ML-236B-karboksyylihappo, sen vastaava kaavan (ITa) laktoni tai suola (esim. metalli-, aminohappo- tai amiinin suola) tai sen esteri (erityisesti alkyylieeteri).
Parempina pidettyjä metalllsuoloja ovat suolat alkallmetallien kanssa, kuten natrium tel kalium, suolat maa-a.1 kallmetal 1 ien kanssa, kuten 35 i9 70925 1 kalsium, tai suolat muiden metallien kanssa, kuten magnesium, alumiini, rauta, sinkki, kupari, nikkeli tai koboltti, joista alkalimetalli-, maa-alkalimetalli-, magnesium- ja alumlniumsuoloja pidetään parempina, ja natrium-, kalsium- ja alumlniumsuoloja pidetään parhaimpina.
5
Parempina pidettyjä aminohappoja aminohapon suolojen muodostamiseksi ovat emäksiset aminohapot, kuten arglnllni, lysllnl, hlstldilnl, •<,y$-diaminobutyyrihappo tai ornltllnl.
10 Parempina pidetyt amiinit amlinlsuolojen muodostamiseksi käsittävät t-oktyyliamilnln, dibentsyyllamllnln, dikloorlheksyyllamllnln, morfo-lilnln, D-fenyyliglysilnin alkyyHesterit ja D-glukoosiamlinin.
ML-236B-esterit ovat mieluummin alkyyllestereitä, kuten metyyli-, 15 etyyli-, propyyll-, lsopropyyli-, butyyli-, isobutyyli- tai pentyyli-estereltä, joista metyyliesterlä pidetään parempana. Kuitenkin voidaan käyttää multa estereitä, jos halutaan.
ML-236B:n lähtömateriaaleista pidetään erityisesti parempana alkall-20 metalllsuoloja, esim. natrium- tai kallumsuoloja, natrlumsuolaa pidettäessä parhaimpana, sillä me olemme havainneet, että se antaa yhdisteen ML-236B parhaan muuntumisen toivotuksi M-4- tai M-4'-yhdisteeksi.
Milloin tämän keksinnön entsymaattlsella hydroksylointlmenetelmällä 25 saatu tuote on kaavan (I) karboksyyllhapon suola, voidaan itse vapaa karbokeyylihappo saada säätämällä suodoksen pH arvoon 4 tai alemmas, mieluummin arvoon 3-4. Mitä tahansa orgaanista happoa tai mineraali-happoa voidaan käyttää ottamalla huomioon, ettei sillä ole mitään haittavaikutuksia haluttuun yhdisteeseen. Esimerkit monista hapoista, 30 jotka ovat sopivia, käsittävät trifluorietikkahapon, etlkkahapon, kloorlvetyhapon ja rikkihapon. Tämä karbokeyylihappo voi itse olla haluttu tuote, tai se voidaan saattaa, ja mieluummin saatetaan, jatko-reaktlolhln, kuten jäljempänä kuvataan, valinnan mukaan sellaisten käsittelyjen jälkeen kuin uuttaminen, pesu ja dehydraatio.
Kaavan (I) karboksyyllhappojen metalllsuoloja voidaan saada saattamalla valitun metallin hydroksidia, karbonaattia tai samankaltaista reaktli- 35 20 70 9 2 5 1 vista yhdistettä vesiliuoksessa kosketukseen kaavan (I) karboksyyliha-pon kanssa. Käytettävä vesiliuos on mieluummin vettä tai se voi olla veden ja orgaanisen liuottimen seos, mieluummin alkoholin (kuten meta-noli tai etanoli), ketonln (kuten asetoni), allfaattisen hiilivedyn 5 (kuten heksaani) tai esterin (kuten etyyliasetaatti). Erityisesti me pidämme parempana käyttää hydrofUlisen orgaanisen liuottimen ja veden seosta. Sellaisten reaktioiden annetaan tapahtua tavallisesti ympäristön lämpötilassa, mutta ne voivat tapahtua, jos halutaan, kuumentamalla.
10 Kaavan (I) karboksyyllhappojen amiinisuoloja voidaan saada saattamalla kosketukseen amiini vesiliuoksessa kaavan (I) karboksyylihapon kanssa. Sopivat vesiliuokset käsittävät veden ja veden seokset alkoholien (kuten metanoli tai etanoli), eettereiden (kuten tetrahydrofuraani), nitrii-lien (kuten asetonltrllll) tai ketonien (kuten asetoni) kanssa; me eri-15 tyisesti pidämme parempana käyttää vesipitoista asetonia liuottimena tätä reaktiota varten. Reaktio suoritetaan mieluummin pH:ssa 7-8,5 ja mieluummin ympäristön lämpötilassa tai sen alapuolella, vielä mieluummin lämpötilassa 5-10°C. Reaktio menee heti loppuun. Vaihtoehtoisesti kaavan (I) karboksyylihapon metallisuola (joka on voitu saada niin kuin 20 yllä kuvattiin) voidaan liuottaa vesiliuokseen, minkä jälkeen lisätään halutun amiinin mlneraalihapon suolaa (esimerkiksi kloorivetyhapon suolaa) käyttäen samoja reaktio-olosuhteita kuin jos amiini itse reagoisi kaavan (1) karboksyylihapon kanssa, ja haluttu tuote saadaan sitten suolanvalhtoreaktiolla.
25
Kaavan (1) karboksyyllhappojen aminohapon suoloja voidaan saada saattamalla vesiliuoksessa oleva aminohappo kosketukseen kaavan (1) karboksyylihapon kanssa. Sopivat vesipitoiset liuottimet käsittävät veden ja veden seokset alkoholien (kuten metanoli tai etanoli) tai eetterien 30 (kuten tetrahydrofuraani) kanssa. Reaktio suoritetaan mieluummin kuumentamalla, esimerkiksi lämpötilassa 50-60°C.
Kaavan (I) karboksyyllhappojen eetereltä, mieluummin alkyylestereltä, voidaan saada saattamalla kaavan (I) karboksyylihappo kosketukseen sopi-35 van alkoholin kanssa. Me pidämme parempana suorittaa tämä reaktio hap-pokatalyytin kanssa, esimerkiksi mlneraalihapon (kuten suolahappo tai 2i 70925 1 rikkihappo), Lewis'n hapon (esimerkiksi boriumtrifluoridi) tai ionin-vaihtohartein kanssa.
Tähän reaktioon käytettävä liuotin ei ole kriittinen, kun otetaan huo-5 mioon, ettei se vaikuta reaktiota haittaavasti; sopivat liuottimet käsittävät bentseenln, kloroformin ja eetterit. Vaihtoehtoisesti voidaan haluttu tuote saada saattamalla kaavan (I) karboksyylihappo kosketukseen diatsoalkaanln kanssa, missä alkaaniosa voi olla substituoltu tai subs-tituoimaton. Tämä reaktio toteutetaan tavallisesti saattamalla koske-10 tukseen happo diatsoalkaanln eetterlpitolsen liuoksen kanssa. Seuraavana vaihtoehtona voidaan esteriä saada liittämällä kaavan (1) karboksyyli-hapon metallisuola halogenidin, mieluummin alkyyllhalogenidin, kanssa sopivassa lluottimessa; parempina pidetyt liuottimet käsittävät dimetyy-liformamidin, tetrahydrofuraanin, dlmetyylisulfoksldln ja asetonin.
15 Kaikki reaktiot esterien tuottamiseksi suoritetaan mieluummin lähes ympäristön lämpötilassa, vaikka jos reaktlomenetelmän luonne vaatii, voidaan reaktiot suorittaa kuumentamalla.
Kaavan (I) karboksyyllhappojen laktoneja voidaan saada saattamalla 20 kaavan (1) karboksyylihappo kosketukseen katalyyttisen määrän kanssa happoa, joka voi olla orgaaninen tai epäorgaaninen. Me pidämme parempana käyttää sellaisia orgaanisia ja mineraallhappoja kuin trifluorietikka-happo, suolahappo ja rikkihappo. Tämä reaktio suoritetaan mieluummin suunnilleen ympäristön lämpötilassa.
25
Esimerkit yhdisteiden M-A ja M-A' suoloista ja estereistä, jotka on valmistettu keksinnön menetelmällä, sisältävät yllä annetut ML-236B:n suolat ja esterit käytettäväksi lähtöaineena.
30 Siten saadut johdannaiset M-A ja M-A' voidaan eristää, erotella tai puhdistaa tavanomaisilla keinoilla, esimerkiksi adsorptiolla kantaja-aineelle (kuten aktiivihiili tai slllkageell) tai ioninvaihtokromato-grafialla tai geelisuodatuksella Sephadex-pylväällä (tavaramerkki) tai uuttamalla orgaanisella liuottimelle, kuten eetterillä, etyyllasetaa-35 tiliä tai kloroformilla; jos halutaan, ja sitä tavallisesti pidetään parempana, voidaan käyttää näiden tekniikkojen yhdistelmää.
22 70925 1 Isomeerit M-4 ja M-4' voidaan erotella toisistaan joko konversioreak-tion loppuunsaattamisen jälkeen tai missä tahansa sopivassa kohdassa reaktioiden aikana tai yllä kuvattujen erottelu- tai puhdistusprosessien aikana.
5
Keksintöä kuvataan edelleen seuraavilla esimerkeillä.
Esimerkki 1 10 Nocardia autotrophica subsp. amethystina FERM P-6183:n soluja ympättiin vinopintaviljelmältä platinasilmukan avulla jokaiseen kahteenkymmeneen 500 ml:n Erlenmeyer-pulloon, joista jokainen sisälsi 100 ml viljelyliuosta, jolla oli seuraava kokoonpano (prosentit ovat paino/ tilavuus): 15
Glukoosi 1,0%
Peptoni 0,2%
Lihauute 0,1%
Hiivauute 0,1% 20 Maissinliotusvesi 0,3%
Vesijohtovesi loput (pH:ta ei säädetty)
Viljelmää ravisteltiin 26°C:esa ja 220 r.p.rarssä kahden päivän ajan, 25 missä ajassa lisättiin natrium-(ML-236B)-karboksylaattia loppukonsen-traatioon 0,05% (paino/tilavuus) asti. Inkubointia jatkettiin 26°C:ssa ja 220 r.p.m:ssä seuraavat 5 päivää.
Viljelyn loppuun saattamisen jälkeen reaktioseos suodatettiin, ja suo-30 doksen pH säädettiin arvoon 3 lisäämällä trifluorietikkahappoa. Happamaksi tehty suodos uutettiin sitten kolme kertaa kullakin kerralla 1 litran kanssa etyyliasetaattia, mikä antoi uutteet, jotka sisälsivät (M-4)- ja (M-4')-karboksyylihapon seosta. Otettiin näytteitä näistä uutteista, ja niihin käytettiin ohutkerroskromatograflaa silika-35 geelilevyllä Art 5715 (valmistanut Merck / Co. Tnc.), kehitettiin 50:50:3-tllavuussuhteessa bentseenin, asetonin ja etikkahapon seosta. (M-4)-karboksyylihapon Rf-arvo oli 0,45, ja (M-4')-karboksyylihapon 23 70925 1 Rf-arvo oli 0,46.
Koko loppu-uute pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, minkä jälkeen lisättiin ekvivalentti moolimäärä diatsometaanin eetteripitois-5 ta liuosta huoneenlämpötilassa. Seoksen annettiin seistä 30 minuuttia, minkä jälkeen se haihdutettiin kuivaksi alipaineessa. Jäännös laitettiin Lobarin kolonniin (Si 60, valmistanut Merck / Co. Inc., koko A), mitä sitten eluoltiin 1:1 tilavuussuhteise]la seoksella bentseeniä ja etyyliasetaattia. Saatiin erotellut fraktiot, jotka sisälsivät metyyii-10 (M-4)-karboksylaattia ja metyyli-(M-4')-karboksylaattia. Nämä fraktiot konsentroitiin haihduttamalla alipaineessa, mikä antoi 320 g metyyli-(M-4)-karboksylaattia ja 11 mg metyyli-(M-4’)-karboksylaattia, molemmat värittömien Öljyjen muodossa.
15 Korvaamalla diatsometaani yllä kuvatussa menettelyssä muilla sopivilla diatsoalkaaneilla voidaan saada muita (M-4)-karboksyylihapon ja (M-4')-karboksyylihapcn estereitä.
Metyyli-(M-4)-karboksylaatln fysikaalisia ominaisuuksia 20 kuvataan seuraavaksi.
Ydinmagneettinen resonanssispektri (deuteriumkloroformissa käyttäen tetrametyylisilaania sisäisenä standardina, 200 MHz:ssa), & ppm: 25 0,88 (3H, tripletti, J * 7,3 Hz); 0,89 (3H, dupletti, J - 6,5 Hz); 1,12 (3H, dupletti, J * 6,8 Hz); 1,1-1*7 (10H, multipletti); 30 2,34 (1H, sekstetti, J « 7 Hz); 2,3-2,5 (2H, multipletti); 2,49 (2H, dupletti, J * 6,4 Hz); 2,58 (1H, multipletti); 3,72 (3H, singletti); 35 3,78 (1H, multipletti); A,25 (1H, kvintetti, J - 7 Hz); 4,40 (1R, multipletti); 24 70925 1 5,42 (1H, multipletti); 5,56 (1H, multipletti); 5.90 (1H, dupletti dupletelsta, J ·= 9,8 ja 5,6 Hz); 5,99 (1H, dupletti, J = 9,8 Hz), 5
Massaspektri: Silyloinnin jälkeen N ,Q-bis(trimetyylisilyyli)t:rif lnori-asetamidilla tehtiin mittaus käyttäen D-300 -tyyppistä laitetta, Jonka on valmistanut Nihon Electronics Co.
10 M/e: 654 (M+), 552, 462, 372, 290, 272, 233, 231.
Ultraviolettiabsorptiospektri (etanoli) λ nm: max 230,1, 237,3, 246,4.
15 Infrapuna-absorptiospektri (ohut kalvo) ^max cm 3400, 2950, 1730.
Ohutkerroskromatografia: Silikageelilevyllä Art 5715, valmistanut Merck / Co. Inc., käyttäen 1:1 tilavuussuhteessa bentseenln ja aseto-20 nln seosta kehityslluoksena.
Rf-arvo: 0,88.
Seuraavaksi kuvataan mgtyyli-(M-4*)-karboksylaatin fysikaalisia ominaisuuksia.
25
Ydinmagneettinen resonansslspektri (deuteriumkloroformlssa käyttäen tetrametyylisilaanla sisäisenä standardina, 60 MHz:ssa) S ppm: 30 3,70 (3H, singletti); 5,50 (1H, leveä singletti); 5,75 (1H, leveä singletti); 5.90 (1H, kvartetti); 6,01 (1H, dupletti).
Ultraviolettiabsorptiospektri (metanoli) Λ nm: max 230, 238, 246.
35 25 70925 1 Infrapuna-absorptlospektri (ohut kalvo) ^max cm *: 3400, 1730.
Massaspektri: Silyloinnin jälkeen N,Q~hls(trimetyyllsllyyll)trifluorl-5 asetamldilla tehtiin mittaus käyttäen D-300-tyyppistä laitetta, jonka on valmistanut Nihon Electronic Co.
M/e: 654 (M+).
Alkuaineanalyysi: 10 Laskettu Co.Hoo0,:lie: C, 65,73%; H, 8,73%.
Zh jo / Löydetty: C, 65,55%; H 8,79%.
Esimerkki 2 15 Esimerkissä 1 kuvattu menettelytapa toistettiin, mikä antoi 1,9 litraa konversioreaktlon seosta. Tämän seoksen pH asetettiin sitten arvoon 3,0 lisäämällä trlfluorletikkahappoa, minkä jälkeen seosta uutettiin kolme kertaa, kullakin kerralla 1 litralla etyyliasetaattia, mikä antoi fraktion, joka sisälsi sekä (M-4)-karboksyylihappoa että (M-4')-20 karboksyylihappoa.
Tämä uute pestiin sitten kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, minkä jälkeen se kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla. Sitten lisättiin katalyyttinen määrä trifluorletikkahappoa laktonisoinnin alkaan-25 saamiseksi. Saatu seos pestiin sitten 5%:11a (paino/tilavuus) natrium-vetykarbonaatin vesiliuoksella, minkä jälkeen se kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja sitten ee haihdutettiin kuivaksi, mikä antoi laktonifraktion.
30 Tämä laktonifraktlo laitettiin Lobarln kolonniin (Si 60, valmistanut
Merck / Co. Inc., koko A) Ja eluoitiln 7:3 tilavuuesuhtelsella bentsee-nin ja asetonin seoksella, mikä antoi erotetut fraktiot, jotka sisälsivät (M-4)-laktonia ja (M-4')-laktonia. Nämä fraktiot uudelleenkiteytet-tiin erikseen etyyliasetaatilla, mikä antoi 270 mg (M-4)-laktonia ja 35 8 mg (M-4')-laktonia.
Seuraavaksi esitetään (M-4)-laktonln fysikaalisia ominaisuuksia.
26 70925 1 Ydinmagneettinen resonanssispektri (deuteriumkloroformissa käyttäen tetrametyylisilaania sisäisenä standardina» 100 MHz:saa) 6 ppm: 5 4,38 (1H, multipletti); 4.41 (1H, multipletti); 4,62 (1H, multipletti); 5.41 (1H, multipletti); 5,58 (1H, multipletti); 10 5,90 (1H, kvartetti); 6,01 (1H, dupletti).
Ultraviolettiabsorptiospektri (metanoli) Tv nm: 230, 236,7, 244,6.
15
Infrapuna-absorptiospektri (ohut kalvo) U cm 3400, 2950, 1725.
Ohutkerroskromatografia: Silikageelilevyllä Art 5715, valmistanut 20 Merck / Co. Inc., käyttäen 50:50:3 tilavuussuhteessa bentseenin, asetonin ja etikkahapon seosta kehitysliuoksena.
Rf-arvo: 0,62.
Seuraavaksi kuvataan (M-4*)-laktonin fysikaalisia ominaisuuksia.
25
Ydinmagneettinen resonanssispektri (deuteriumklorofomissa käyttäen tetrametyylisilaania sisäisenä standardina, 100 MHz:ssa) S ppm: 30 4,25 (1H, multipletti); 4,60 (1H, multipletti); 5,50 (1H, multipletti); 5,75 (1H, multipletti); 5,90 (1H, kvartetti); 35 6,01 (1H, dupletti).
27 709 2 5 1 Ultraviolettiabsorptiospektri (metanoli) Λ χ nm: 230, 237, 245.
Infrapuna-absorptiospektri (KBr) ^max cm 5 3500, 1720.
Massaspektrl: M/e 406 (M+), 304, 286.
Optinen kiertokyky: 10 = = p>66, metanoli).
Sulamispiste: 141-143°C.
Alkuaineanalyysi: 15 Laskettu c23H34°6:lle: C, 67,95%; H, 8,43%.
Löydetty: C, 68,05%; H, 8,37%.
Ohutkerroskromatografia: Silikageelilevyllä Art 5715, valmistanut Merck / Co. Inc., käyttäen 1:1 tilavuussuhteessa bentseenin ja aseto-20 nin seosta kehityslluoksena.
Rf-arvo: 0,64.
Esimerkki 3 25 Esimerkissä 1 kuvattu menettelytapa toistettiin uuttamiseen asti, ja tämä mukaan lukien, kolmella etyyliasetaattierällä, mikä antoi uutteen, joka sisälsi sekä (M-4)-karboksyylihappoa että (M-4')-karboksyylihappoa.
Tämä uute siirrettiin sitten välittömästi 5%reen (paino/tilavuus) nat-30 riumvetykarbonaatln vesiliuokseen, ja seoksen pH asetettiin arvoon 7,0 lisäämällä 2N kloorivetyhappoa. Seos adsorboitiin sitten Dlalon HP-20-kolonniin (valmistanut Mitsubishi Chemical Industries). Kolonnia pestiin vedellä ja sitten eluoitiin 50 tilavuus-Zrlla vesipitoisella asetonilla, mikä antoi fraktion, joka sisälsi natrium-(M-4)-karboksylaattia. Tämä 35 pakastekuivattiin, mikä antoi 200 mg natrium-(M-4)-karboksylaattia.
28 70925 1 Seuraavaksi on kuvattu natrlum-(M-4)-karboksylaatin fysikaalisia ominaisuuksia.
Ydinmagneettinen resonanssispektri (deuterlummetanoliesa kHyttöen tetru-5 metyylisilaania sisäisenä standardina, 200 MHz:ssa) & ppm: 0,91 (3H, tripletti, J = 7,5 Hz); 0,92 (3H, duplettl, J = 7 Hz); 10 1*12 (3H, dupletti, J - 7 Hz); 1.1- 1,8 (10H, multipletti); 2,25 (1H, dupletti dupleteista, J >* 15 / 7,6 Hz); 2,34 C1H, dupletti dupleteista, J ** 15 / 5,5 Hz); 2.2- 2,4 (3H, multipletti); 15 2,48 (1K, multipletti); 3,68 (1H, multipletti); 4,07 (1H, multipletti); 4,28 (1H, multipletti); 5,36 (1H, multipletti); 20 5,48 (1H, dupletti dupleteista, J *= 3 / 2 Hz); 5,88 (1H, dupletti dupleteista, J 9,6 /5,3 Hz); 5,98 (1H, dupletti, J - 9,8 Hz).
Ultraviolettiabsorptiospektri (metanoli) ^max nm: 25 230,0, 237,2, 245,0.
Infrapuna-absorptiospektri (KBr) u cm 3400, 2900, 1725, 1580.
30 Ohutkerroskromatografla: Silikageelllevyllä Art 5715, valmistanut
Merck / Co. Inc., käyttäen 50:50:3 tilavuussuhteessa bentseenin, asetonin ja etyyliasetaatin seosta kehityslluoksena.
Rf-arvo: 0,45.
il 35 70925 29 1 Esimerkki 4
Esimerkeissä 1-3 kuvatut menettelytavat toistettiin, mutta käyttäen kantaa Nocardia autotrophica FERM P-6181 kannan Nocardia autotrophlca 5 subsp. amethystine FERM P-6183 tilalla; saatiin: 150 mg metyyli-(M-4)-karboksylaattia; 37 mg metyyli-(M-4')-karboksylaattia; 140 mg (M-4)-laktonia; 30 mg (M-4')-laktonia; ja 110 mg natrium-(M-4)-karboksylaattia. Kussakin tapauksessa tuotteiden ominaisuudet olivat samat esimerkeissä 1-3 saatujen vastaavien yhdisteiden kanssa.
10
Esimerkki 5
Silmukal1 itien viljelmää Nocardia autotrophica subsp. canberrica FERM P-6182 ympättiin kuhunkin kahteenkymmeneen 500 ml:n Erlenmeyer-pulloon, 15 joista jokainen sisälsi 100 ml liuosta, jolla oli seuraava kokoonpano (prosentit ovat paino/tilavuus):
Glyseriiniä 0,5%
Sakkaroosia 2,0% 20 Soijapapujauhoja 1,0%
Puristettua hiivaa 1,0%
Maissinliotusvettä 0,5%
Kobolttikloridia 0,001%
Vesijohtovettä loput 25 (pH 7,0)
Viljelmän ravistelua jatkettiin 26°C:ssa ja 220 r.p.mtssä 2 päivää, missä ajassa lisättiin natrium-(ML-236B)-karboksylaattia lopulliseen konsentraatioon 0,05% (paino/tilavuus) asti. Viljelyä jatkettiin sit-30 ten 26°C:ssa ja 220 r.p.m:ssä seuraavat 5 päivää. Konversiorenktion seos suodatettiin sitten, ja suodoksen pH asetettiin arvoon 3,0 lisäämällä kloorivetyhappoa. Seos uutettiin sitten kolme kertaa, kullakin kerralla 1 litralla etyyliasetaattia, mikä antoi uutteen, joka sisälsi sekä (M-4)-karboksyylihappoa että (M-4’)-karboksyyllhappoa, joiden 35 osoitettiin ohutkerroskromatografiällä olevan identtisiä esimerkin 1 vastaavien tuotteiden kanssa.
30 70925 1 Tätä uutetta käsiteltiin sitten edelleen, kuten esimerkissä 1 kuvattiin, mikä antoi 180 mg metyyli-(M-4)-karboksylaattia ja 110 mg metyyli-(M-4')-karboksylaattia.
5 Esimerkki 6
Esimerkissä 5 kuvattu menettelytapa toistettiin (M-4)-karboksyylihap-poa ja (M-4')-karboksyylihappoa sisältävän uutteen valmistukseen asti, ja käsittäen myfis valmistuksen. Tätä uutetta käsiteltiin sitten niin 10 kuin esimerkissä 2 kuvattiin, mikä antoi 170 mg (M-4)-laktonia ja 90 mg (M-4')-laktonia.
Esimerkki 7 15 Silmuksilinen viljelmää Nocardia autotrophica subsp. amethystina PERM P-6183 ympättiin kymmeneen 500 ml:n Erlenmeyer-pulloon, joista jokainen sisälsi 100 ml liuosta, jolla oli seuraava kokoonpano (prosentit ovat paino/tilavuue): 20 Glukoosia 1,0%
Peptonla 0,2%
Lihauutetta 0,1%
Hiivauutetta 0,1%
Vesijohtovettä loput 25 (pH:ta ei säädetty).
Viljelmää ravisteltiin 26°C:ssa ja 220 r.p.m:ssä 5 päivän ajan, minkä jälkeen kaikki mikrobisolut kerättiin erottamalla sentrifuugil-la. Kerätyt solut pestiin 0,1 M fosfaattipuskuriiiuoksella (pH 7,0), 30 ja sitten ne jälleen kerättiin ja suspendoitlln 900 ml:aan 0,1 M fos-faattipuskuriliuosta. Tähän suspensioon lisättiin natrium-(ML-236B)-karboksylaattia konsentraatioksi 0,5 g/100 ml, ja sitten seosta in-kuboitiin 26°C:ssa ja 220 r.p.mtssä 5 päivää. Tämän ajan päätyttyä konversioseos suodatettiin, Ja sen pH asetettiin arvoon 3,0 lisäämäl-35 lä kloorivetyhappoa. Seos uutettiin sitten kolme kertaa, kullakin kerralla 1 litralla etyyliasetaattia, mikä antoi uutetta, joka sisälsi (M-4)-karboksyylihappoa ja (M-4')-karboksyylihappoa, jotka tunnistet- 3i 709 2 5 1 tiin ohutkerroskromatografisesti ja joiden osoitettiin olevan samoja kuin esimerkin 1 vastaavat tuotteet.
Esimerkki 8 5
Esimerkissä 2 kuvattu menettelytapa toistettiin, paitsi että käytettiin taulukossa 6 lueteltuja mikro-organismeja; saadun (M-4)-laktonin määrä on sellainen kuin taulukossa esitetään.
10 TAULUKKO 6
Mikro-organismi (M-4)-laktonin määrä (mg) 15 Nocardla farclnlca ATCC 3318 7
Nocardla coellaca ATCC 17040 5
Nocardla autotrophlca IFO 12743 10
Nocardla asteroldes IFO 3424 15 20
Esimerkki 9
Soluja Nocardla autotrophlca subsp. amethystine FERM P-6183 ympättiin vinopintavlljelmältä platlnasllmukalla jokaiseen kahteenkymmeneen 25 500 ml:n Erlenmeyer-pulloon, joista jokainen sisälsi 100 ml viljely- liuosta, jolla on esimerkissä 7 annettu kokoonpano. Viljelmää ravisteltiin sitten 26°C:88a ja 220 r.p.m:ssä 2 päivän ajan, missä ajassa lisättiin natrium-(ML-236B)-karboksylaattia loppukonsentraatioksi 0,4Z (paino/tilavuus). Inkubointia jatkettiin 26°C:ssa ja 220 r.p.m:ssä 30 seuraavat 5 päivää. Esimerkissä 2 kuvattu menettelytapa toistettiin sitten, mikä antoi 2,9 g (M-4)-laktonla.
35
Claims (8)
1. Menetelmä kaavan (I) mukaisen lääkeaineena käyttökelpoisen yhdisteen: 5 HOOC^ γ H O Πχ 1° I L π (I) η2ο^ί; 9 h I
15 Her (missä λπΑΛοη edustaa ryhmää *^·ββ OH tai f/f IM OH), sen farma-20 seuttisesti hyväksyttävien suolojen ja esterien sekä vastaavien suljetun renkaan omaavien laktonlen valmistamiseksi, saattamalla yhdiste ML-236B, joka on kaavan II mukainen 25 .OH hooca y • H <«>
30 H3C/T 9 h? I I f 1 JZHz 35 33 7 0 9 2 5 1 (ML-236B)-karboksyylihappo tai sen suola, kosketukseen hydrokeylointient-syymln kanssa, tunnettu silti, että hydroksylointlentsyyml on tuotettu suvun Nocardla mikro-organismi11a; jos on tarpeen, viemällä saatu tuote yhteen tai useampaan reaktioon, joka on suolan muodostus, 5 esteröinti tai laktonlsolntl; ja eristämällä tuote reaktloseokseeta.
1 Patenttivaatimukset
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siltä, että kyseinen ML-236B-yhdlste saatetaan kosketukseen hydroksylolntlentsyymln kanssa viljelemällä suvun Nocardla mlkro-organlsmla liuoksessa, joka 10 sisältää ML-236B-yhdlstettä.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suvun Nocardla mlkro-organlsmln kokonaiset solut saatetaan kosketukseen ML-236B-yhdlsteen kanssa. 15
4. Patenttivaatimuksen 1,2 tai 3 mukainen menetelmä, tunnettu siltä, että mainittu mikro-organismi on Nocardla auto- trophica, Nocardla asteroldes, Nocardla farclnlca tai Nocardla coellaca. 20
5. Patenttivaatimuksen 1,2 tai 3 mukainen menetelmä, tunnettu siltä, että kyseinen mikro-organismi on: Nocardla autotrophlca FERM P-6181 25 Nocardla autotrophlca subsp. canberrlca FERM P-6182 Nocardla autotrophlca subsp. amethystine FERM P-6183 Nocardla autotrophlca IFO 12743 Nocardla asteroldes IFO 3424 Nocardla farclnlca ATCC 3318 ja 30 Nocardla coellaca ATCC 17040.
6. Jonkin edellisistä patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siltä, että valmistetaan yhdiste M-4, missä edustaa ryhmää -^41 OH. 35 34 70925
7. Jonkin edellisistä patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste M-4', missä rWirvjpil, edustaa ryhmää HMUOH.
8. Jonkin edellisistä patenttivaatimuksista 1-7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukaisen yhdisteen natriumsuola. 10 15 20 25 30 35 35 70925
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP18664181 | 1981-11-20 | ||
JP56186641A JPS5889191A (ja) | 1981-11-20 | 1981-11-20 | 3−ヒドロキシ−ml−236b誘導体の製造法 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI823978A0 FI823978A0 (fi) | 1982-11-19 |
FI823978L FI823978L (fi) | 1983-05-21 |
FI70925B FI70925B (fi) | 1986-07-18 |
FI70925C true FI70925C (fi) | 1986-10-27 |
Family
ID=16192138
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI823978A FI70925C (fi) | 1981-11-20 | 1982-11-19 | Foerfarande foer framstaellning av 3-hydroxy-ml-236b-derivaterm-4 och m4' |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4537859A (fi) |
JP (1) | JPS5889191A (fi) |
KR (1) | KR880002483B1 (fi) |
AT (1) | AT387585B (fi) |
AU (1) | AU551720B2 (fi) |
BE (1) | BE895080A (fi) |
CA (1) | CA1186647A (fi) |
CH (1) | CH651065A5 (fi) |
DE (1) | DE3242849A1 (fi) |
DK (1) | DK159328C (fi) |
ES (1) | ES517542A0 (fi) |
FI (1) | FI70925C (fi) |
FR (1) | FR2516935A1 (fi) |
GB (1) | GB2111052B (fi) |
IT (1) | IT1191235B (fi) |
NL (1) | NL194373C (fi) |
SE (1) | SE453996B (fi) |
ZA (1) | ZA828535B (fi) |
Families Citing this family (86)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE69602T1 (de) * | 1985-09-13 | 1991-12-15 | Sankyo Co | Hydroxy-ml-236b-derivate, deren herstellung und anwendung. |
US4940727A (en) * | 1986-06-23 | 1990-07-10 | Merck & Co., Inc. | Novel HMG-CoA reductase inhibitors |
USRE36481E (en) * | 1986-06-23 | 2000-01-04 | Merck & Co., Inc. | HMG-CoA reductase inhibitors |
US5116870A (en) * | 1986-06-23 | 1992-05-26 | Merck & Co., Inc. | HMG-CoA reductase inhibitors |
US4833258A (en) * | 1987-02-17 | 1989-05-23 | Merck & Co., Inc. | Intermediates useful in the preparation of HMG-COA reductase inhibitors |
EP0306263B1 (en) * | 1987-09-02 | 1992-03-18 | Merck & Co. Inc. | Novel hmg-coa reductase inhibitors |
US4997848A (en) | 1987-10-27 | 1991-03-05 | Sankyo Company, Limited | Octahydronaphthalene oxime derivatives for cholesterol synthesis inhibition |
US4997755A (en) * | 1988-04-15 | 1991-03-05 | Merck & Co., Inc. | HMG-CoA reductase inhibitors produced by Nocardia sp. (MA 6455) |
EP0337548A3 (en) * | 1988-04-15 | 1991-08-14 | Merck & Co. Inc. | HMG-COA reductase inhibitors produced by nocardia SP. (MA6455)(ATCC 53695) |
US4963538A (en) * | 1988-06-29 | 1990-10-16 | Merck & Co., Inc. | 5-oxygenated HMG-CoA reductase inhibitors |
US5010105A (en) * | 1989-06-09 | 1991-04-23 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic compounds |
US4970231A (en) * | 1989-06-09 | 1990-11-13 | Merck & Co., Inc. | 4-substituted HMG-CoA reductase inhibitors |
US5041562A (en) * | 1989-06-09 | 1991-08-20 | Merck & Co., Inc. | 3-keto HMG-CoA reductase inhibitors |
US4937259A (en) * | 1989-06-09 | 1990-06-26 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic compounds |
US5001241A (en) * | 1989-06-09 | 1991-03-19 | Merck & Co., Inc. | 3-KETO HMG-CoA reductase inhibitors |
US4997849A (en) * | 1989-06-23 | 1991-03-05 | Merck & Co., Inc. | Microbial transformation of simvastatin |
US4965200A (en) * | 1989-06-23 | 1990-10-23 | Merck & Co., Inc. | Process for the preparation of 3-keto, 5-hydroxy simvastatin analogs |
US5112857A (en) * | 1990-09-04 | 1992-05-12 | Merck & Co., Inc. | Hmg-coa reductase inhibitor metabolites |
NZ250609A (en) * | 1992-12-28 | 1995-07-26 | Sankyo Co | Hexahydronaphthalene esters and ring closed lactones; preparation and medicaments |
US6043064A (en) * | 1993-10-22 | 2000-03-28 | Bristol-Myers Squibb Company | Enzymatic hydroxylation process for the preparation of HMG-CoA reductase inhibitors and intermediates thereof |
US5942423A (en) * | 1995-06-07 | 1999-08-24 | Massachusetts Institute Of Technology | Conversion of compactin to pravastatin by actinomadura |
SI9800144A (sl) * | 1998-05-21 | 1999-12-31 | LEK, tovarna farmacevtskih in kemičnih izdelkov, d.d. | Nov biotehnološki postopek pridobivanja 3-hidroksi-ML-236B derivatov poznanih kot M-4 in M-4' |
SI20305A (sl) * | 1999-08-06 | 2001-02-28 | LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. | Kristali natrijeve soli pravastatina |
CZ20012622A3 (cs) * | 1999-01-20 | 2002-01-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Proces přípravy inhibitorů HMG-CoA reduktázy |
DE60042879D1 (de) * | 1999-01-29 | 2009-10-15 | Kyowa Hakko Bio Co Ltd | Verfahren zur herstellung eines hmg-coa reduktase hemmers |
US6682913B1 (en) | 1999-02-03 | 2004-01-27 | Institute For Drug Research Ltd. | Microbial process for preparing pravastatin |
HUP9902352A1 (hu) | 1999-07-12 | 2000-09-28 | Gyógyszerkutató Intézet Kft. | Eljárás pravasztatin mikrobiológiai előállítására |
CZ20031166A3 (cs) * | 2000-10-05 | 2004-04-14 | Biogal Gyogyszergyar Rt | Sodná sůl pravastatinu, která v podstatě neobsahuje pravastatin lakton a epi-pravastatin a kompozice na její bázi |
JP3236282B1 (ja) * | 2000-10-16 | 2001-12-10 | 三共株式会社 | プラバスタチンを精製する方法 |
JP2003093045A (ja) * | 2001-09-26 | 2003-04-02 | Godo Shusei Co Ltd | 有用変換微生物 |
EP1496982A4 (en) * | 2002-04-16 | 2006-07-19 | Merck & Co Inc | SOLID FORMS OF SALTS WITH TYROSINE KINASE EFFECT |
US20040198800A1 (en) * | 2002-12-19 | 2004-10-07 | Geoffrey Allan | Lipoxygenase inhibitors as hypolipidemic and anti-hypertensive agents |
US20040132771A1 (en) * | 2002-12-20 | 2004-07-08 | Pfizer Inc | Compositions of choleseteryl ester transfer protein inhibitors and HMG-CoA reductase inhibitors |
BR0317521A (pt) | 2002-12-20 | 2005-11-16 | Pfizer Prod Inc | Formas de dosagem compreendendo um inibidor da cetp e um inibidor da redutase hmg-coa |
KR100470078B1 (ko) * | 2003-06-12 | 2005-02-04 | 씨제이 주식회사 | 컴팩틴을 프라바스타틴으로 전환할 수 있는 스트렙토마이세스 종(Streptomyces sp.)CJPV 975652 및 그를 이용한 프라바스타틴의 제조방법 |
CA2535359A1 (en) | 2003-08-21 | 2005-03-03 | Merck Frosst Canada Ltd. | Cathepsin cysteine protease inhibitors |
US20050101927A1 (en) * | 2003-09-11 | 2005-05-12 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Absorbent products comprising a moisturizing and lubricating composition |
WO2005051298A2 (en) | 2003-11-19 | 2005-06-09 | Metabasis Therapeutics, Inc. | Novel phosphorus-containing thyromimetics |
TWI252253B (en) * | 2004-01-09 | 2006-04-01 | Chinese Petroleum Corp | A novel Pseudonocardia sp RMRC PAH4 and a process for bioconverting compactin into pravastatin using the same |
US20110217412A1 (en) * | 2004-07-30 | 2011-09-08 | Jinis Biopharmaceuticals Co. | Cholesterol lowering supplement and low cholesterol egg produced by using the same |
KR100637762B1 (ko) * | 2004-07-30 | 2006-10-23 | 주식회사 지니스 | 저콜레스테롤 란을 생산하기 위한 가금류용 사료첨가제 및 이를 이용한 저콜레스테롤 란의 생산방법 |
TWI307360B (en) | 2004-12-03 | 2009-03-11 | Teva Gyogyszergyar Zartkoruen Mukodo Reszvenytarsasag | Process for constructing strain having compactin hydroxylation ability |
CA2590860C (en) | 2004-12-09 | 2011-05-03 | Merck & Co., Inc. | Estrogen receptor modulators |
PL1855674T3 (pl) | 2005-03-02 | 2015-01-30 | Merck Sharp & Dohme | Kompozycja do hamowania katepsyny K |
WO2006123182A2 (en) | 2005-05-17 | 2006-11-23 | Merck Sharp & Dohme Limited | Cyclohexyl sulphones for treatment of cancer |
TW200804345A (en) | 2005-08-30 | 2008-01-16 | Novartis Ag | Substituted benzimidazoles and methods of preparation |
GB0603041D0 (en) | 2006-02-15 | 2006-03-29 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Therapeutic compounds |
PL2010528T3 (pl) | 2006-04-19 | 2018-03-30 | Novartis Ag | 6-0-podstawione związki benzoksazolowe i benzotiazolowe i sposoby hamowania sygnalizacji csf-1r |
EP2946778A1 (en) | 2006-09-22 | 2015-11-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Method of treatment using fatty acid synthesis inhibitors |
US20110218176A1 (en) | 2006-11-01 | 2011-09-08 | Barbara Brooke Jennings-Spring | Compounds, methods, and treatments for abnormal signaling pathways for prenatal and postnatal development |
EP2109608B1 (en) | 2007-01-10 | 2011-03-23 | Istituto di Richerche di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.A. | Amide substituted indazoles as poly(adp-ribose)polymerase (parp) inhibitors |
EA019951B1 (ru) | 2007-03-01 | 2014-07-30 | Новартис Аг | Ингибиторы киназы pim и способы их применения |
KR20100017866A (ko) | 2007-05-21 | 2010-02-16 | 노파르티스 아게 | Csf-1r 억제제, 조성물 및 사용 방법 |
EP3103791B1 (en) | 2007-06-27 | 2018-01-31 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 4-carboxybenzylamino derivatives as histone deacetylase inhibitors |
PL2222636T3 (pl) | 2007-12-21 | 2014-04-30 | Ligand Pharm Inc | Selektywne modulatory receptorów androgenowych (SARM) i ich zastosowania |
EP2265725B1 (en) * | 2008-04-25 | 2014-07-30 | Amorepacific Corporation | Method for preparing 7,5,3',4'-tetrahydroxyisoflavone using a biotransformation system |
WO2010093601A1 (en) | 2009-02-10 | 2010-08-19 | Metabasis Therapeutics, Inc. | Novel sulfonic acid-containing thyromimetics, and methods for their use |
WO2010114780A1 (en) | 2009-04-01 | 2010-10-07 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Inhibitors of akt activity |
CN104945382B (zh) | 2009-10-14 | 2020-02-07 | 默沙东公司 | 提高p53活性的取代的哌啶和其用途 |
US8999957B2 (en) | 2010-06-24 | 2015-04-07 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Heterocyclic compounds as ERK inhibitors |
JP6043285B2 (ja) | 2010-08-02 | 2016-12-14 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッドSirna Therapeutics,Inc. | 低分子干渉核酸(siNA)を用いたカテニン(カドヘリン結合型タンパク質)β1(CTNNB1)遺伝子発現のRNA干渉媒介性阻害 |
CN108676800B (zh) | 2010-08-17 | 2022-11-11 | 瑟纳治疗公司 | 使用短干扰核酸(siNA)的乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的RNA干扰介导的抑制 |
EP2608669B1 (en) | 2010-08-23 | 2016-06-22 | Merck Sharp & Dohme Corp. | NOVEL PYRAZOLO[1,5-a]PYRIMIDINE DERIVATIVES AS mTOR INHIBITORS |
EP2613782B1 (en) | 2010-09-01 | 2016-11-02 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Indazole derivatives useful as erk inhibitors |
US9242981B2 (en) | 2010-09-16 | 2016-01-26 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Fused pyrazole derivatives as novel ERK inhibitors |
ES2663009T3 (es) | 2010-10-29 | 2018-04-10 | Sirna Therapeutics, Inc. | Inhibición de la expresión génica mediada por interferencia por ARN utilizando ácidos nucleicos de interferencia cortos (ANic) |
EP2654748B1 (en) | 2010-12-21 | 2016-07-27 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Indazole derivatives useful as erk inhibitors |
WO2012112363A1 (en) | 2011-02-14 | 2012-08-23 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Cathepsin cysteine protease inhibitors |
CN103732592A (zh) | 2011-04-21 | 2014-04-16 | 默沙东公司 | 胰岛素样生长因子-1受体抑制剂 |
WO2013063214A1 (en) | 2011-10-27 | 2013-05-02 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel compounds that are erk inhibitors |
EP3358013B1 (en) | 2012-05-02 | 2020-06-24 | Sirna Therapeutics, Inc. | Short interfering nucleic acid (sina) compositions |
CN105050598B (zh) | 2012-09-28 | 2018-04-27 | 默沙东公司 | 作为erk抑制剂的新型化合物 |
CA2892361A1 (en) | 2012-11-28 | 2014-06-05 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Use of a wee1 inhibitor for treating a cancer characterized by low pkmyt1 expression levels |
AU2013361694B2 (en) | 2012-12-20 | 2017-10-26 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Substituted imidazopyridines as HDM2 inhibitors |
WO2014120748A1 (en) | 2013-01-30 | 2014-08-07 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 2,6,7,8 substituted purines as hdm2 inhibitors |
EP3041938A1 (en) | 2013-09-03 | 2016-07-13 | Moderna Therapeutics, Inc. | Circular polynucleotides |
AU2014332250B2 (en) | 2013-10-08 | 2018-07-19 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Cathepsin cysteine protease inhibitors |
WO2015051479A1 (en) | 2013-10-08 | 2015-04-16 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Cathepsin cysteine protease inhibitors |
US10441567B2 (en) | 2014-01-17 | 2019-10-15 | Ligand Pharmaceuticals Incorporated | Methods and compositions for modulating hormone levels |
WO2015120580A1 (en) | 2014-02-11 | 2015-08-20 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Cathepsin cysteine protease inhibitors |
JO3589B1 (ar) | 2014-08-06 | 2020-07-05 | Novartis Ag | مثبطات كيناز البروتين c وطرق استخداماتها |
EP3525785A4 (en) | 2016-10-12 | 2020-03-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | KDM5 INHIBITORS |
WO2019094311A1 (en) | 2017-11-08 | 2019-05-16 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Prmt5 inhibitors |
WO2020033282A1 (en) | 2018-08-07 | 2020-02-13 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Prmt5 inhibitors |
US11981701B2 (en) | 2018-08-07 | 2024-05-14 | Merck Sharp & Dohme Llc | PRMT5 inhibitors |
CN115087638B (zh) | 2019-12-17 | 2023-11-24 | 默沙东公司 | Prmt5抑制剂 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3281330A (en) * | 1964-03-20 | 1966-10-25 | Upjohn Co | Microbiological process for the oxygenation of cycloalkanes |
US3392171A (en) * | 1964-03-20 | 1968-07-09 | Upjohn Co | 4-morpholino-4'-hydroxy bicyclohexyls |
DK149080C (da) * | 1980-06-06 | 1986-07-28 | Sankyo Co | Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre |
-
1981
- 1981-11-20 JP JP56186641A patent/JPS5889191A/ja active Granted
-
1982
- 1982-11-16 AU AU90610/82A patent/AU551720B2/en not_active Expired
- 1982-11-16 CA CA000415650A patent/CA1186647A/en not_active Expired
- 1982-11-18 SE SE8206580A patent/SE453996B/sv not_active IP Right Cessation
- 1982-11-18 US US06/442,840 patent/US4537859A/en not_active Expired - Lifetime
- 1982-11-19 NL NL8204505A patent/NL194373C/nl not_active IP Right Cessation
- 1982-11-19 FI FI823978A patent/FI70925C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-11-19 DE DE19823242849 patent/DE3242849A1/de active Granted
- 1982-11-19 DK DK516182A patent/DK159328C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-11-19 BE BE0/209527A patent/BE895080A/fr unknown
- 1982-11-19 CH CH6754/82A patent/CH651065A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-11-19 ZA ZA828535A patent/ZA828535B/xx unknown
- 1982-11-19 FR FR8219433A patent/FR2516935A1/fr active Granted
- 1982-11-19 ES ES517542A patent/ES517542A0/es active Granted
- 1982-11-20 KR KR8205250A patent/KR880002483B1/ko active
- 1982-11-22 GB GB08233267A patent/GB2111052B/en not_active Expired
- 1982-11-22 AT AT0425182A patent/AT387585B/de not_active IP Right Cessation
- 1982-11-22 IT IT68359/82A patent/IT1191235B/it active Protection Beyond IP Right Term
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3242849C2 (fi) | 1989-01-05 |
DK516182A (da) | 1983-05-21 |
AU551720B2 (en) | 1986-05-08 |
BE895080A (fr) | 1983-03-16 |
NL194373B (nl) | 2001-10-01 |
ES8402350A1 (es) | 1984-01-16 |
ES517542A0 (es) | 1984-01-16 |
DK159328B (da) | 1990-10-01 |
KR840002451A (ko) | 1984-07-02 |
NL194373C (nl) | 2002-02-04 |
JPH0371116B2 (fi) | 1991-11-12 |
SE453996B (sv) | 1988-03-21 |
JPS5889191A (ja) | 1983-05-27 |
IT8268359A0 (it) | 1982-11-22 |
KR880002483B1 (ko) | 1988-11-19 |
SE8206580D0 (sv) | 1982-11-18 |
FI823978A0 (fi) | 1982-11-19 |
FI823978L (fi) | 1983-05-21 |
SE8206580L (sv) | 1983-05-21 |
ATA425182A (de) | 1988-07-15 |
IT1191235B (it) | 1988-02-24 |
CA1186647A (en) | 1985-05-07 |
FR2516935B1 (fi) | 1985-02-08 |
AU9061082A (en) | 1983-05-26 |
DE3242849A1 (de) | 1983-06-01 |
ZA828535B (en) | 1983-10-26 |
GB2111052A (en) | 1983-06-29 |
FR2516935A1 (fr) | 1983-05-27 |
AT387585B (de) | 1989-02-10 |
CH651065A5 (de) | 1985-08-30 |
FI70925B (fi) | 1986-07-18 |
DK159328C (da) | 1991-02-25 |
NL8204505A (nl) | 1983-06-16 |
US4537859A (en) | 1985-08-27 |
GB2111052B (en) | 1985-05-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI70925C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av 3-hydroxy-ml-236b-derivaterm-4 och m4' | |
Iwai et al. | Production of deoxyfrenolicin and a new antibiotic, frenolicin B by Streptomyces roseofulvus strain AM-3867 | |
US5153124A (en) | Hydroxyl-ml-236b derivatives, their preparation and use | |
RU2235780C2 (ru) | Гидроксилирование компактина до правастатина с помощью micromonospora | |
US4421687A (en) | Macbecin derivatives | |
EP1216237B1 (en) | Process for the preparation of mycophenolic acid and derivatives thereof | |
US4421688A (en) | Macbecin derivatives | |
EP0404581A3 (en) | Process for the preparation of 3-keto, 5-hydroxy simvastatin analogs | |
US4383037A (en) | Process to produce anthracycline glycosides | |
US4199514A (en) | Compound, frenolicin B which is useful as an antibiotic | |
US4540517A (en) | Antibiotic TAN-420 | |
GB2106111A (en) | Macbecin derivatives and their production | |
US4981954A (en) | Novel azoxy compounds and process for production thereof | |
US5719179A (en) | Compound GEX1 | |
US4997755A (en) | HMG-CoA reductase inhibitors produced by Nocardia sp. (MA 6455) | |
US4198481A (en) | Process for the preparation of 2-hydroxymethyl-3,4,5-trihydroxy piperidine | |
US5272174A (en) | Hydroxy-ML-236B derivatives, their preparation and use | |
CA2009043A1 (en) | Process for the preparation of 6-alpha-hydroxymethyl lovastatin derivatives | |
Bava et al. | Biotransformation of spirolaxine by Absidia cuneospora and Trametes hirsuta: formation of β-glycosyl and β-xylosyl derivatives | |
EP0337548A3 (en) | HMG-COA reductase inhibitors produced by nocardia SP. (MA6455)(ATCC 53695) | |
US4247703A (en) | Microbiological modification of antibiotic A23187 esters | |
US4287302A (en) | Microbiological modification of antibiotic A23187 esters | |
JPH0538283A (ja) | 新規微生物 | |
JPH0365347B2 (fi) | ||
JPH0482135B2 (fi) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MA | Patent expired |
Owner name: SANKYO COMPANY LIMITED |