FI64374C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara 4-ubstituerade imidazo(1,2-a)kinoxaliner - Google Patents

Description

. 1 ,, KUULUTUSJULKAISU . . _ _ .

^ UTLÄGG N I N GSSKRI FT 64 37 4 | C Patentti myönnetty 10 11 1933 • »Vu?Patent ccidelat 1m) , , v (51) Kv.ik.7int.c1." c C7 D 7/ :- SUOMI — FINLAND (21) - Pa tentansökrlrg C J 023 (22) H»k«rnlspilvS — AnsSkrlngsdag ^ * · - - (23) Alkupilvi—Glltlghetidag 7- - 91 - ' (41) Tullut julkiseksi — Bllvit offentllg 9 8 . 0 ” . 7 :

Patentti- ja rekisterihallitus Nihtuväksipanon ja kuut.Julkalsun pvm. — o

Patent- och registerstyrelsen ' Ansökan utlagd ech utUkrirten publ'cerad 2 9 · 7’ ~ (32)(33)(31) pyydetty etuoikeus—Begird prlorltet 17.11.7 7 USA ('13 ) 75^610 ( " 1 ) p r 1 s t e 1 - M y n c s C o mp a r. y , 3 3 Par k A v e r. u·? , N e v v o r k, V O O i!C Λ / UC '> -..- ¢. t. , o -.s \ - (72) Paul L. Warner , Jr., Clarence, Me v York, Edvard Γ. tube r,

Jr., Buffalo , lev York, USA ( US ) (7^) 0y Kolster At { 5 '4 ) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten k-sutstituoitu-j era ici datso/Ί ,2-a/kinoksaliinien valmi stair i seksi - Förfα-rar.de för f rams talin in g av terapeuti skt använöbara il - s nosti t uerade i m i d a z o [~L , 2 - aJ k i n o x a 1 i n e r Tämä keksintö koskee menetelmää terapeuttisesti käyttökelpoisten 4-substatuoitujen imidatso/ΐ,2-a/kinoksaliinien valmistamiseksi, joiden kaava on

N R

i w/ \ / A'

N N

\^y

O

jossa R on 1-17 hiiliatomia sisältävä alkyvli, trifluorimetyyli, 2-10 hiiliatomia sisältävä alkenyyli, 3-7 hiiliatomia sisältävä sykloaikyyli, alempi sykloalkenyyli, fenyyli, joka on substitu-oitu yhdellä tai useammalla alemmalla alkyylillä, alemmalla halo-r-^- 2 64374 nialkyyliilä, alemmalla alkoksilla, alemmalla alkyylitiolla, 2-10 hiiliatomia sisältävällä asyylioksilla, fenyylillä, fenoksilla, alemmalla alkvylioksifer.oksilla , hydroksif enoksilla , karboksyylillä , sya-nolla, aminolla, 2-16 hiiliatomia sisältävällä asyyliaminolla, p-klooribentsovyliaminolia, nitrolla, hydroksilla tai halogeenilla, alempi-alkoksi-alempi-alkyyli, fenoksi-alempi-alkyyli, fenyyli-alem-pi-alkyyli, alempi-alkyvli-fenyyli-alempi-alkyyli, fenyyli-alempi-al-kenyyli tai naftyyli.

Sopivia ryhmiä R ovat esimerkiksi CH3~, CH3CH2~, CH3CH2-CH2-, CH (CH2)n-, jossa n on 3, 4, 5, 6, 7, 8, 14 tai 16, (CK3)2CH-CH2-, CH3(CK2)3(CH3CH2)CK-, CH2=CH-(CH2)g-, alkoksialkyyli, jonka alkyyli-rvhmässä on ' - 4 hiiliatomia, kuten metoksimetyyli ja trifluorimetvv- li.

R on edullisesti 3-8 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä tai 5-6 hiiliatomia sisältävä sykloalkenyyliryhmä, kuten syklopro-pyyli ( [>- ) , syklobutyyli ( O- ), sykloheksyyli ja syklohekse-nyyli () · uTS-patentista 3 887 566 tunnetaan sellaisia kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa R on vety tai substituoimaton fenyyli. Ei ole kuitenkaan tunnettua, että näillä yhdisteillä on immunologinen suppres-siivinen vaikutus.

Yleisen kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa siten, että palautus jäähdytetään vastaavaa 1 - ( 2-asyy liaminof enyyli)imidatsolia ja renkaanmuodostukseen tarvittavaa määrää renkaanmuodostusreagenssia, esim. fosforioksikloridia. Lähtöaineella, 1-(2-asyyliaminofenyyii)-imidatsolilla on yleinen kaava II: 0

N

1 11

I O

— NHC-R

jossa R merkitsee samaa kuin edellä.

Keksinnön mukainen reaktio voidaan esittää seuraavalla yhtälöllä: li 3 64374 (> vV'" \ -sf 0 fosf orioksi- i j j kloridl ^ j |! palautus- ! !: jäähdytys

II I

Keksinnön mukainen reaktio on edullista suorittaa käyttämällä ylimäärää orgaanista amiinia liuottimena. Tähän tarkoitukseen sopivat useat liuottimet, joista mainittakoon mm. pyridiini, 2,6-dimetyyli-pyridiini, N,N-dimetyylianiliini, trimetyyliamiini ja N-metyylimor-fOliini. Etusijalle asetettava liuotin on kuitenkin pyridiini.

Käytetty fosforioksikloridimäärä voi hieman vaihdella. Yleensä fosforioksikloridia käytetään noin 1/2-6 moolia, edullisesti 1/2-2 moolia, yhdisteen II moolia kohti.

Haluttu kaavan I mukainen tuote voidaan ottaa talteen reaktio-seoksesta tavallisia tunnettuja menetelmiä käyttämällä. Reaktioaika riippuu mm. käytetyistä reagensseista ja niiden moolisuhteista. Yleensä reaktioaika on noin 30-120 min.

Reaktiolämpötila vaihtelee myös käytettyjen reagenssien, liuottimen ja muiden tekijöiden mukaan. Tavallisesti käytetään reaktio-seoksen palautusjäähdytyslämpötilaa. Se on yleensä välillä noin 9?-19 5°C.

1-(2-asyvliaminofenyyli)imidatsolin (yhdiste II) valmistusmenetelmä voidaan esittää seuraavalla yhtälöllä:

M /N

r\ o f s S / M f / N / + Cl-OR-> NN7 I I ° f i '

VI II

4 64374 jossa R tarkoittaa samaa kuin edellä.

Reaktio suoritetaan tavallisesti palautusjäähdytyslämoötilassa käyttäen ekvimolaarista määrää tarvittavaa happokloridia ja liuotin-ylimäärää (esim. pyridiiniä).

Taulukoista I ja II ilmenevät lähtöaineyhdisteiden valmistustavat ja fysikaalis-kemialliset ominaisuudet. Sulamispisteet on määritetty kapiilaariputkimenetelmällä Mel-Temp-sulamispisteenmääritys-laitteen avulla ja ne ovat korjaamattomia. Ultraviolettispektrit on mitattu etanoliliuoksista ja määrityslaitteena on ollut Beckman U.V. Acta III tai Beckman D3G. 1-(2-aminofenyyli)imidatsoli valmistettiin seuraavan julkaisun mukaan: A.F. Pozharskii, A.M.Siminov and L.M. Sitkina, Khim. Geterotskl. Soedin., 5, 1916 (1969) /Chem. Abstr. 72, 1 1 42 7a (1970)7·

Taulukossa I on esitetty alifaattisia, sykloalifaattisia ja monosyklisellä arvylillä substituoituja alifaattisia amidofenyyli-imidatsoleja. Taulukossa II on esitetty esimerkkejä aryyliamidofe-nyyli-imidatsoiien (fuusioituneet aryylirenkaat mukaanluettuina) valmistuksesta.

Yhdisteet valmistettiin siten, että tarvittavaa happokloridia ja 1-(2-aminofenyyli)-imidatsolia kuumennettiin ekvimolaariset määrät pyridiiniylimäärässä höyryhauteella 45 minuuttia. Tämän jälkeen reak-tioseos kaadettiin jääveteen, sekoitettiin ja epäpuhdas tuote eristettiin jollakin seuraavista menetelmistä.

Menetelmä A:

Jos saatiin kiinteä aine, se kiteytettiin välittömästi taulukossa I mainitusta 1iuottimesta.

Menetelmä B:

Jos saatiin öljy, se liuotettiin mahdollisimman pieneen määrään kloroformia ja laskettiin alimiinioksidipylvään läpi, jossa oli alumiinioksidia noin kaksikymmentä kertaa epäpuhtaan kiinteän tuotteen määrä, ja eluointiliuoksena käytettiin kloroformia. Kloroformi haihdutettiin ja jäännökseksi saatu epäpuhdas tuote kiteytettiin taulukossa I mainitulla tavalla.

Menetelmä C:

Jos jäävesiseokseen saatiin liuos, pyridiinivesiaseotrooppia poistettiin kunnes epäpuhdas tuote erottui. Tuote käsiteltiin sen jälkeen edellä kuvatun menetelmän B mukaisesti.

Il 64374 4-substituoitujen imidatso/ΐ,2-a7kinoksaliinien valmistus 4-substituoidut imidatso/Ί,2-a7kinoksaliinit valmistetaan vastaavista 1- (2-asyyliaminofenyyli)-imidatsoleista noudattamalla edellä kuvattuja yleisiä menettelytapoja.. Taulukoissa III ja IV on mainittu kunkin yhdisteen valmistustapa ja fysikaalis-kemialliset ominaisuudet.

4-alkyyli-imidatso/l, 2-a7kinoksaliinit (taulukko III) valmistettiin palautusjäähdyttämällä tarvittavaa amidia (taulukko I, yhdisteet 1-26) fosforioksikloridin kanssa pyridiiniylimäärässä 1 tunti. Reak-tioseos sekoitettiin veteen ja aseotrooppia poistettiin niin paljon, että muodostui viskoosi jäännös, joka liuotettiin kloroformiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja kromatografoitiin alumiinioksiöipy1-väässä. Kloroformi haihdutettiin ja tuote kiteytettiin mainitusta liuottimesta.

4-aryyli-imidatsoT’l ,2~a7kinoksaliinit (taulukko IV) valmistettiin periaatteessa samalla tavalla kuin 4-alkyyli-imidatso^1,2-a7~ kinoksaliinit lukuunottamatta taulukossa mainitut huomautukset.

Esimerkki 4-metyyli-imidatso/l,2-a7kinoksaliini (yhdiste n:o 110 taulukossa V) .

1-(2-metyyliaraidofenyyli)imidatsoli (600 mg) liuotettiin pyri-diiniin (20 ml) ja lisättiin varovaisesti fosforioksikloridia (2,5 ml) . Liuosta keitettiin palautus jäähdyttäen tunnin ajan. Reakt.-.oseos kaadettiin veteen ja liuos haihdutettiin pieneen tilavuuteen. Öljy-mäinen jäännös liuotettiin kloroformiin, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja kromatografoitiin käyttäen aluminiumhydroksidillä täytettyä kolonnia. Kloroformiliuos haihdutettiin kuiviin. Kiteytettiin isopro-pyylieetteristä; saanto 79,8 mg. Sulamispiste oli 134 - 135°C.

6 64374 >4 4-1 j -Pi

Oi o^tN^vDLnomtNLO

Ό VCLOOCCN,—|ρτσυΟΟ\; >- :0 LO L.O ο O' VO σ Γ~· VO 00

1-3 · VC CM VC : VO t—I

H

V) >! >. 3 ιΟι-ΡΟΟνΟσίΜΟσΓΟ 1—14-1 νΟίΡΟίσΟΙΓίι-ΡίΟΙΟΟ

3 -P

CO νΠιΓΟνΟνοσοΟνΟΟΟ <C X VO CM VO 1— VO r-' ’Jl j U22U22U22 j ! vo vo o

U j VC' r-J

Ο ι~> Γ—- I i

1¾ I I I I

1 · I ro p* oc

0 = 0 CO Ό p* O

ΞΞ t/3 j r—I I—* r-(

'Z

Λ 5 1 -^\ /~\ S ;

W w I I

ε 3

-Η -P

A ^ 1-1

P UJ j -P

1—* >- I -p c M > -P : rP 0 >- > : o o o rp go;·' c -p 3 -¥ O CD j 3 cn .-4 rJ4 I 'PI -P j +4 O 0

3 0=0 O « I O > -P

I—I DC 33 l 3 -p 3 + ε !

P- : rj I

CM -P : 2 Ή 0 : 2 >1 -P !

\ >- C Oi> ΐ CM σι rP

\ 1/2 3: *·

/X >---. 3 3' VO CO rP

7\ / ^\ Λ w \_/ \\ 7 Λ • -- I ε , V) rP j >i O I -P -P i w αι j

---3 < O CQ

P 0 W £ j i

_. CM

3 —

I CM

CM 2

2 O

1 o — co co co 2 2 2

K U O O

O 1

·· I

2 I T— CM CO

I 7 64374 >< -j a; rj-or^r-iLiOvDt^^ooi^LOLO'^* CN)cOLOc\irxtococ''OC5>Lr'LOCT'i r^Or—lrOOt’C''jr--r^rvJtDOCDrN^HO'irOCOO'--ΙΓ'-ΓηηΟΧΓ'Γ— CX — :01 crvr-'r^cr^LDor'~tni-noO'3,ni » no ro oo ro n tr- o tc ο co r^· r''

H 1-3 VC -Π f'' r-π D- 1—I t— r—i !^· CO —1 Γ~ -—ΙΓ'' -i VC 1—I

τη >, 3 ,_(r^r^r— rrrocNOccLncNCNf-^rsimrHoOtHrsCNr^cTNOor^^-^fr-

C*^ ^HOrsiC^rOOOQO^Lnr-ir^CM^OOOO^LOOOLOr-J-HOO—:OC'I

< CU ; a'.r^r^or'Voor^Ln!—ico^cNCO^rcsjoorntro^oLcocoo'· r-r- ^ . \c r—! r~: r-> r— r- r*” r^- r-f !"* ^ r- —·γ^^η lo — w r*. ' <i *». *k k *«. »- *» »- v *. v

i3 UaZUaZUaZUBIZUaJZUaZCja^Ua^CJaZ

in in cx OH·

OfMOCOOLOrHVCOO

Cr'-rHOVr-lOLOOCT''—i I—i I ! I I ! I i I i .rorotD>—Ίοοσνχτοο cn

Cl· ex o crv ο σν σ', σ·. o is. — —I <—ί i—

I I

•r-l Ή ·Η Ή Ή ·Η *Η

C ·Η Ci M C Cl M C

occd cd cd cd oi a' 4-1 O -t-> 44 44 44 44 44 i 4_l O 44 4-’ 44 44 44 44

0) r- 0! CD CD· CD 1' CD

CD >i CD CD CD1 CD CD CD

H 44 -H Ή *H1 — ·Π Ή HO H i—I t-i 1-i 1-C Ή

I l 3η -h Do !>i ^ 3· 3** -H

t!) -H -H 3- C 3i 3h 3h 3· Ή 3n 3h >, c c c a o a cd a, cc a cu cd 44 -h. (DC 00 O O O O C o o o

>, 44 (D C Ci iH H Cl Cl CC C Cl W

<d c : c tn cd λ: £· cd Cd cc cd cd 4-' 44 c ί *—13<c o-h o c o o λ: o o c •h-Hioo tn c tn en en tn o tn tn cd

^ 1—I I 44 33 -H 44 -H *H -H *H 33 *H *H -C

eyp 0 44 C i ID CO ι-l ID LO r-J ID 00 (T «* «* «* ·«. »» ·» **· r^io> a> in m LO o co o

Vj ί -ςτ lo ld io -x ^ :rc ; 1 ε i tn 1-4 ; 3h (D ; 44 44 tn tD ! h C Sh cd w e m a < < <c < m m cj i 1 1 1 I I I I I I ^ CD __ ro rj* tn to t'- 00 rH 1—1

(N (N (N 00 CN (N CM Γ4 CJ

a a a a a a a a on j CJ CJ o u u u u cj - i ro ro ro ro ro ro ro ro 33 ja a a a a a a a cc

k I u o CJ cj cj cj u CJ

o i 1 “T rn LO r- ¢0 co o *“ 8 64374

^ I

-p ! -p <U ! ooo vr> •p' en ο o o o o oo >—< r~~ .—i ro cn σ' iri •O co c -p· cc co o cm lt> o p- o i^ co lo p· 05 n in σ 'f ^ :θ O p- rP r-' ο ·ρ· cc cm o o en o lp up p- vo 0 p· up ·ρ> *P PI ! CD -—1 σ' I—' P· I—1 Γ" p I—I P- —1 p 1—i 03 > >1 —1 C ' ο ο ·ρ· up cm cm .—1 ΐβ rH cm cm p 0 up up o p co cm o cm (tJ-P ·ρ* ο 0 up r—1 ! 00 cp o' op f—1 op ο ·ρ· r—I p cm p p cm up C 4-1 i ' ' ' v ^ s " *· v · * ·. s v ^ v k. v < ^ < C op cc p f-u ao 'S· 0 oo cm in σ σ oi m in 40 0 ^ up >3·

M \£> r-t P r-J P γΗ P P r-1 P rHP' H

03 ; U a 2 CJ 2 2 U 2 2 0 2 2 0 2 2 O 2 2 O'” 2 2 OP' 1 ' p -3-

O : PP CM 'T Ο CO

C ί '—1 r-ί OP P I—I CM Γ-1

I II II II

• 00 up cm o up ld 1—I

C-ijcM cm op p ·*3« 0 co

C/3 ; r~ I—1 r—I CM .—I

0! e -p -π •P ! -P p -P a a

0 : O -P

C . Ή -P

•P 1—1 -H CL'

|p *H -P |>i C CU

03 , C C >* C -H

2* O QJ CjU σ3 -H 1—i *P

P O) 0003 rH >, rP

>;03 03 C A3 O >1 0 0 , -p -p a, a> c -pc -pic co-c m <dc

•H!0) 0 03 -H O' -p -p +J

a j uQ Λ -Pp -p 0) O ¢) i <*° ! 0 -p ; C I 'S' OOCO CO O' P'0

Cl' ' - » <C i UP (MO O rH p 0 iTj I cp opi -^r -^r ! p ! :« 2 ί ε o 03 iP —

>P 03 CM

-P -P I — 0) Φ S3 2 •pc 0 um <c 00 ο 10 < p qj ; — n a ω ε : cm a 0 ί a 0 ~ 1 u 1 I 1 1 no 00 CM I a ί a — a cm ^ pN o cm co cm 0 a 1 i ii ί a — a — oh' a O m O rp 1 cj O CM I Ίμ ^ Jm cm a a a 1 cm / \n

- u o o C, a M

ο'-' ί — <2 0 11 /! a O CM 0 0 0 a a a a a — 0 0 0 0

9. ^ ^ LOO P OO CP

z--- 9 64374 >1 l 4-1 ; 4-) ! Οίσΐ’τοοοΜΓ'-^τι^ιηΓ'-^τι—i uo oo 04 σι —J ; O) [^orcCOOOOOCO'P'CNLncOCTlin :C iHLr-oo^LD^ootnooe^vct^-ovDin

Ή μ_Γ O —- O' —4 O) r—J 0> I—I —I

cn >1 >-.

t—( z3 ; m vo i— I—! mror-4voc^cT>r^f-4inino 3-0;ooo>—'o—1000-0-^004^00000

<0,fNLr;ooc7\i-0'^'QOtJOCX5c>or^T—ir^LD

Pi ι O >-40 <—I O 1-40 γΗΓ' >—I

en 1

(-clurnZUKZUffiZUECZUKZ

i" <7\ oo

U ·οτ I O LO I

0)-4 in uo c4 —4 o

I - - I I

• o o oo ο- I—I cm in C4 ^ oo 00 O LTi >!Τ Tf U'j ’ t—1 I—( *—I 04 r-4 I—I —4 c

*H

4J

0 ; -H

3 I-H

•H 0 1 -1 I 3

(/) i -r-4 -1-4 3 -Η -H

>1 I C C Q. C C

4J ' o a1 o ai a) >1 0 0 14 0 0 0 3 3 CL 3 3 -P —4 i—I 0 1—I ·—! •h O O tn 0 0 « -P 4-) -r4 44 44 00 0 44 3 1 oo O' -H o oo 3 - - * - *· 3 j <Ti r- o in O' co ! O' i-ι uo o :3 j

1 E

0 f-4 >i 0 ! 44 44 j 0 0 I <C <C <C <C <

•PC

P 0 k e j t

I CN

; x o

'o. ? I II

s (fS δ λ Γ»Ί OS j u ® <n p· γ O -- 04 oo 04 ^ 04 04 04 64 374 1 o

>1 I

X

X

<L· ; -cr cm r^- cc o ro —i o lo

Ti CN'3,i—ILPCNLDCN!—Il—I

>·. -''-''VK-*.·-

:C ro i_o lc x ro lo o lo lc C

-H—3 —1 CM LO r—I V£5 rp QJ

ui :¾

>1 X

> X

i-PGiLCLCLnxLDr^roLn.—i >, 3 x j ro lo cm — rr cm o γμ lo C-P‘ λ; < CU , ro lo vr r- ό lc o lo ld M - - -M lO i—t lo i—', ro

Ui ; r-i

EZXCJEZCJKZ -H

i U T3 j *r^

Ui o λ; O vD ro o O 1 —‘ -i-t

! ’ C

• j -.o oo -h

Cl i w cm ·γη

Ui j - r- g i ·—1 3

•r-J

-P

C V) •H o -P I c/j

O -P

Ξ ! -P U-

•P · Qj fZ

i— -P P

P CT-

-n -HO O

- ; >—i O x ' 0 r-Η -h ra 0 c pr c £ lt -H 1' o •P pj P G p >5 o -P i—i Pi ta c c

-H G

!tt> ' ta -h g

! -P -P X

01 -P -p o -P ; 3 G 3 3 ί o .—i (C -P -3 ta ! ' en r— ta i ΓΜ OT -3 -3

Cfi OM -a C 33 x ’ -h x e -o 3 -<

-3 CP C

; p 3 -3 · 1—i

>- :3 G

:3 X :3 IS 3 -P 3 tn -— 3 x -3 ia G; ί -ί O i3 x -P -p ! p φ X1

Ui G I -3X3 •3 P j -P -3 3 P G X ΛΕ ~

W g -PO

G 3 Ui X -P 3 ui -p -Γ- I -PO--' O = U g > Ui O I—1 >1 cm 3 -3 x

E > W O

U

ro m

EP E 3 X

Cd G) U

O g

·· LO L£J O

ΓΜ CM 3 32 , 6*374 δ C ! o c\! ro <^r o cc V· ^ ro ό ^ rv :n : - .r 4 i n lt· ίΡ ^ ιΛ it m if ' <—‘ [— —! r- >* ; O , ,— 4j lo °o lp, lo ro fU -(-5 ^ P LD ^ ^ i—! <£ C 1' ‘ *· *· «—* <" ν' p'"' LP ·» ΓΡ LT) lp po oo r- t_o r-~ —: r- (Tj K ·». ·».*.* ·»

M U K 2 U Ä A

j ; δ δ ε ; ^ < I *· o '—'I rH x: o rp

x f CM CO CN CM

(p t '---- ·» o ^ έ <n ^^ > rp H rp

PL rs} CN ^ CN

LP *-P lp

CN CO O

& u j CP ^ ! c ! ^ - C = V ! ! * ! •r: . or- s 0* I 0 \ w I ^ P\ s c

Z Z -fj Λ Ο -H

\ / \ / V) -V

w/ V=/ % 3 Ό •Hi—1 i ·Η Ή Η! Λ g x i <= '-:: HI -H >1 Ή &' C-: j -V «Ρ 1—i Qj C' oi -h > 0 'x VI 1—I Qj C 4-' x\ >1 HI Ί3 C c

3 1 >1 H -HO) O

t—1 <H C Z O X3 X! 3! U 0)

3i I «-I

H 0:U C

I T2 o'P

« £ O

3 -P

+ C r- rc -s r- (t ' OJ >1 (C : CD nc r~

K > U3 j CP L") LT

A 7 ill \=/ \=/ -2g W g < cq cc

J

ro i .

I K '"'P

! U ! I

<v rrA H A

« i' 1 y - ® r~ CO -Τ' gj ΓΜ CM Csi 12 64 374 |r~fNrr ke in I-i ic 10 σι ιο gm o r- o r~· in ·ρ cm ^ lh m om md co ο ro or r~ ο cm mo rp cm ο ι—t .—ι cc oo t—ι *3· r—ι | \ j «» ·» «k ·> ·. *. *« «k «fc S \ V S k. ^ V S «k ·» k.

-p -p1 o co cm ime n t^ «p cm cm co oo cm ·ρ· oc re m σ o 'S· σι

’X O MD t—t ι—' r— r— ΜΩ r-i to rp LO ι—) [" r—I

K rT~\ ^ V, ^*•1 .Q ] r—i ΓΟ Γ'-' mm oo cn^d(N m oo m rs r- r-< <n r- o^r(N <ν ο σ> vC vd ^ ^ ^ co o m m cr> r—ι ^ ι ^ r—· oo oo ^ C P * » m MD CO r ·. ·. v ·* » « s v ^ ......

< ·Η ·ρ o' cm r-i Γ'· m <n cncooocmcooo η σ

φ *k0 t-1 £ -H 'kD <-H *kC r—I LP) i“H Γ r—I

iZ k. k. k» W V V «k k, V S S S k k k k k. k. k, k. ·« w o e ;z u n: z: uxs u κ jz u rn z u ec ;z u £ :z 3; 000c — O O Γ-l o o £ 'T r-ι 00 m o

< ! ^ ^ ' V LO

--. C 0C Γ' ID

X CM OM I—I *—I 1—I

E σ-i .n o o p· , -k ro r~ id m r-\ ro

/Τ ' O CM CM CM CM O CM

in m v «*.

CO CO O VO CM MC o in co o OM o in cm

U —1 —I CM i—I CM CM CM

C ! ! ! Il I I

• 1—1 m 00 p oo m1 σ'.

C- m Ρ-; OM GM O'. LO r—1

Kfj ·—4 1—1 1—I 1—I 1—f ("SJ es

C -H

•r-i -P I -H I I I

-u j-> ε ή ε ε ε

C ! 05 -P POP M, P

Zi fO ι—1 O G O *P C ’P O *P

-I—l ; 40 O <P n! lp en 1<— CO lp en

ι—I . ·Ρ Cl) C -P -P *P O -H il) *P CU

en ie en fö ι—1 <u in > r-ι > r-t > >- ! 0) ie Pj >1>1 >1 >, 4-! 1 0) -P O >1' lo - >r - lp j tn 1—! P -P ·Ρ -P -H -P *P -P *r-i CUi-P >. Cu 0) Ό 0)Ό Φ V QJ T3

-P ! C O £ *P £ -H £ -H £ -P

•P j 0) P' tn -P £ -P £ -P £ -P £ X I JQ O -P Ό <C <T! 03 03 03 et i <*> I 1—i r- 0 j o co in m p p co -P i ·. ·- — — r. r ^ C : co gm m co p r~· e

to ; m e- p t^r-r 00 MO

tn : :et3 1 ε: tn ro >1 CU : -P -P 1 tncu'C (Q <C < < < < aE , ¢0,, 00 rn r 1 O0 \ - i « ^M-r x" 0 l g i 'i

cp U U J CM O

u — o z z o o ·— pj <n -r m md Z λΟ rO rr^ f'| rr, ^

II

13 64374 . ' vocNfr-vor-ofPaoi—i^roooooLnLnc^rvicrip-i^fNLn^oc jj coo-—lo^m^OLDLnooLn^rt^-cc^coc^LP, ^c^O'O'a-c q; r~p,LOLP*3**7'VO<PCNLOr··', CN^ypiroHifPriiH-oorooDP-rp rl Ό VO rH LO rH LT) t—( tn ί—I (XI .—I IX) i—f VO f—I LT r— tn >< >|·^ >. cNOHiOrHr^vorooovopiaor^voi—!Η·νο-Η·«3<νθΓΗιη·Η·νΓ> t—ί rnrpcicNunrrrHiorMi—iLncNinorHinoi—imoi-Hoonvo 73 3 .

C j-j OOrTH-VCpi^vOfPCNVOCOCOrtfiHfi^Hi^iisi^iaipii^lPCN

fC^ VC .—1 VO t—I LPI i—I LO »—I VO r—( VO r—1 VO I—! in '— Ί uxzvxzuxzuxzuxzuxzvxzu'zz ι-

Ο O O O O O O

^ ! o o o o o <—· e

£ j iP rH ,—< H Γ~· ^ O

<****·· * -- CO O fN O VO VO Ή

X I r-j 1—I (M (N 1—I «NOO

£ <21 O O CO i—I O LP.

^oivo’tf'irivD^'a'VD

OJ «N «N O) O) U «N «N

m tn ·*

CO Oi—I en VO C CN

o O O O P" t~- f—i CJ PJ VD '—I «N (N >—I 1-1 O)

0 I σι I I I I I I

• LO I «Ti O'. i—I M· O' C

CL, i O ΓΟ 00 CO O 'S· VO 1—1 c/o ; oj o'. r—t r-ι «n ί—1 ί—i «n e

-H I I I I -H I

-ρ e e ε ε -h e

0 P P P P O P

3 O -ί-· O O -h o C G -P

•Hi ή en m vh tn «h «o u-, tn rH *H Ή (I) Ή -H 0) ·Η H Ή CL' tn C i—( > rH i—i > 1—I 0) rH > >1 01 >1 >1 >1 >1 ‘1-i -H >1 -P CL) >i"- >i >1*1 >i* ί—I iH >1* >, tn -P -H 4-1 -H -P -H -P -H C O -P Ή CU +) (U 73 0)73 0) 73 0)73 C C 0)73

-P C E -H E ·Ρ 6 -H E -h 7! «0 E -H

•H 0) -H E -H £ *H E -H E *P -P Ή t, L3 33 737) 7373 7373 7373 0) O 7373 i äO ,*—> ' t C oorN «—i r*» m r-' vo 4J v «» *» ** ** *. ··*

C VO CO r—1 O 00 00 <01 VO

«3 1 ui lp 33 Hj· ro vo lp tv 73 03 ! :rc ! 1 e : tn — i >1 O i -P -P 1 tn <u ; m C < < < PQ < < -h e

p o ω E

i—i i j j Ί Π I ^ I I « , ö I h^L/ . y o' e o' 6' o. 9 9 ^ | rH rH !—i

I P U U OJ

i CQ

O ‘ ·· r** oo o> o <— (N ro 'Z ! m ro ro ^ ^ <r rr *-r >< i 14 64 37 4 -j ! LO >—I tNLOLno'r—i^vcr^fMoo Γ'οο·^· σ cc oo lt> —1 :--

,- LO ΙΟ Γ\1 —iCOCOOi—! O'") (N O CL CL O LC r—| C i—' LC LC 'C

'C- C- (T O' O CN CO 1C ^ <T LO LC LO <~η cr·, LT 'J* LT O (\

.,-1 >~ -C ^ Γ-. Γ0 LO I—I LO —i LC — LC i-H LO —I

K L ; : >· <-> m σ' o i—ir-iLncOi—i m ro ie o o r~1 if! o LC-rroo tv oo ro rOr— colc lOt—ifCLC^-in ooroo cor-JfC I—:i_or-; ~ 1¾ K Ifc »fc V K *» *► fc. V ·.

co (? m c in ^ C' '/i vd !_n o^LT^r vc oo c\ ^ G lo r—I oo vd lc i-h μξ —i lc rH tn — 7/S U £ U K JS H U tE Ϊ2 U ffi S U s ^ O’ ffi o" £ ^ 5 : o o POO O - o

p O CC O O CN H

.3 «— ·* ^ o *—I ^

X CN 00 O ^ .C LO

rc o\ <n CO m a: —i ~ LO '-Ο· ΓΟ -—J r— — o oo oc v OC CN CM CM 0 i_n lo

CO σ'· LiO Ό LO

X· 00 - ~0 O

r— —I I—I ΓΟ CM Γ— r-J

O ! ! LO Γ-" .Ό ! \

r- LO LO .—ϊ (—f H LO lO

" . I i 1

- o LO Ό t—I Ο Ο^ι *P

p- co co r- co ro o 00 I—! I-1 r—I f—H I—i r-1 l-, •i—1 *iH *rH *r*^ -, cn to tn t/j 5 c a> a ?j

3 > > ^ C

O'' ’ *rH *rH *iH *γ-^

2 Ό "0 "DU

, ; Ή ·Η ·Η -H

P £ 5=1 P

1-1 § § S ^ en β έ β β >, ; S- ·η C fit

jj C r-i O O C

p * u-i O P-ι ILL cn ! -r, CJ Ή *H Ή Ή

CD r—I m I—I £5 <—i I—I

P >i -1-1 &: >3 CJ ί"3 -H > — O >i Ο r- >1

v· . 4J C M +J !/) +J LJ

G C Qi 0) -P Qi 0> = ^ o e c a £

'C· O -P rC 'C

cAO

0 -P (^, >^c- C ΓΜ ΟΛ LD CN CN r-s CTjSS , S , ss.

ίτ; . ϊ—ϊ cn oo cn r—ϊ cr co TJI LO rr LH 00 LC CJ Γ- :c0 I £ m L-i >s O -P +j Cfi O i

-HCj< < OQ CO CO U CO

P Φ i ω £ j • I aT'

i : ! /ss I I , § I

« 1 ''"f ό ° o'^'o

I I I oo t. re oo v CG

; o U ?5 3 Ö 5 o ·· ! in mj oo o »— x7! 1 -r n* rr -T -r io

II

64374 15 : r. id oo αο σ ό C' ^rr^oomrH cooler oc r~- oc r; r": ^ ^ r: ^ °°ν ^ r- ο 'Λ ^ ^ 4-J Γ" -T 'P Γ\! C! 1C **r ΓΡ " K *" ΓΤ LT’ C\i IT 'S> Γ-4 ~J · v£- — i_P — Γ'" —1 (N 1C r-» o r-> Z Γ* r—i rn rr‘< IX .1 — X. r< o -r c oo ct lc co ,— vocNir-H cc pj en cc o o

-r ^ : Ο- "Ί σ· ~r PJ O' 5C CO Ό* 50 00 m -rt OC CC : ^ O

ί +-' 00 -t "f Ό* oj ,—I 50 "T m 50 Ί rn OOH 50 lp p·

X . 50 — '-p ^ Γ- ' 1 0 r—4 *-C G ‘~J

i ’: ::' x' ^ = ^ j i ^ o = * r-o

S

' o o o ° o o § ^ co ? co cc cr- O- i oc m * cp :-

Xi^ r- la 3, — ^ p 0C Γ-- <Ts X) -^ π I/"· <p co vO r- / \ Π 'N rsj 04 r··.) Cv "g

LP IP A

la ιτ' r- lh to £ at ο \0 r*«* ** ^ ” — CN -i ^ Γ- ^ I ! 1 J, LP P' U IP LT tP, ^ .—

C «· '1 - I

• I PJ ΓΟ LP in 50' C.. pr c 50 r- lp cn d L'- P- — ^ r-l ^ ^ r •H ,— Ό *r“J r e (0 e I ε C I -H S-t .--

§ : r 1 1 O £ S

·-! O G C C -H ^ r' — g e g ns h -h ;;

w 0 § ο a>iC t: C

>i . Cj ϋ ·Η CL. q s- G ·ρ* >* -P O O 1—1 O Ho O ^ +J 4-' >< j U GO G H -2-1 05 C ,o Φ I C, Dj C a, a <U 4J C , 0 -G o on o o e e n .r ·· S ·ί o -2 ii t Co ° o e i e e

cc C

o ' i s ; -G r-' 00 1:0 O *, w Ό.'

e ' O 5C CP 00 CO

ιτ; V. » - v ^ v 4-. X

O 1 '—1 m 5D m CC lp -GO

d I LP — ^ ^ pp pf n -j -- Ό 4J 4— : g cc e . li : V2 Τ' ! x n g >1 O I V p U L ·- ex O I ^ 0 d s! < m ^ ^ a < xxd 1C C H -: \ > £ e | r·-; -J P- A “· 1 - i i p^dö i - ί o. W ei i ^ ,o a- s i f i ^ d | Il fT^ c x e Xo pP n x o i f ^ 1- J ^ ^ JT ö

d. p' ^ X X X

O Gf LL __·

o O

;. i τ in 5o in > X i f\i m m in m ::.

m m is 64374 -Μ ! -- r4 ^ / / / _ ’ " I! ' ~ ' r ,rJ >1 , TJ) :0 - >< ·->Ί c -p ; /// / ; * ; „ * · ”· ~ “ L- <Z £) : ' _' ^ L £♦ ^1 ^ r·*» ^ -v. ·^ ifj ! -Ύ- — - — . Γ / //.0 ,****/ * £ - X - υ X = / ! 5 I L: 5. -. : = X \ Z ° c. co - c “ G · ^ — HT Ό ^ \ - -- —» // 1 / ~ —·

/ ~ / I

/ \ /7“^ I

-/ z—JJ '> U I ~ - Ξ ^ , \ __ / ® 7 T -1 m LP :.-, --J ^ 7 Cj " ^ O T ^ f UO ’~' "P —ΓΜ r— ,-,

-Y

0 c

•H

λ:

VN I

-r-l fC< (/1 i__j 22 I /i ΰ <n ^ μ-J k 2*1

0 ir-4 φ -H

° Ή \J -P 2 Λί .Y O -P ft X ή m x +j 3 01 -p c ω •-λ x <ΰ 0) Φ a c td <a c rj 25 ‘H *rJ f—4 -f—( ^ P £ -P -P 5~ -P -p -p c -η οι o a ς c c p- i T3 p P « ίο a: 01 -H 3 -Γ- £ ns fi3 ο ΓΗ +J 5 & J2 52 52 p-' cT 'd w ω "S 'o r3 p

>1 G CW -P xi x: X

+ X -p r-^ -i-( *» Γ3 ^ 0 _ 1 <a -p .' 0 ^ 0 r\ ! ^ W 2 ^ r-~ ^ 7 c — V- 5 ^ 2 £ ζ c 7 C/l 7 1 C 7.· ~.

^ 'N X — ' _' ^ 5 5 7*5 l

Pi fp >·, - _ — X X X -r -Γ ^ P c 5 5 5 O 0 fH rg ro _ ·· —I f-H rH Ή ^ 2 1—1 1—1 1—1 —I rH -p 17 64374 I — ~ rr C "m — cj c r\· rr 'N1 —< -e- r· x »r ~ > j L' Γ-" c ..: - -' C. -c r c o g o c *r c c l-, \ ^ " -- " = ^ - 4—1 ! -^. , . ··>» __ - ,_, -^. f-j -v ^ r—· ^ — *,_“, <“H “"* '"* ' ’ ’~~‘

JJ I

<v !

r*-* I

•H :Q

^ -- Γ\ r— —S OS ·—' PN Γ"- ’—1 *T '— -C -- L- D ~S H C ^ X".

S tj ·_- Γ- L- G X H S <Γ Ο Ο -- Γ- ~ ~ *? C. X L- fN X X ^1 C L~ C

% t -\ . - r'_ -: . - r' -. - , ^ . ί ; .~ '\ . ~ jfc C x :: L t -. o - ?. u i z ._ x ·χ '_ x ο o x = ox- o x '- ro :

I—I

i ύ j — — o — -- — ~s O' ~ ^-- I — — r-. r~~ Γ— ^ ^ i ΓΝ' j Γ- — rj 1 - ’X r- --- '-"! ^ ^ L~ 0U -' C L- r- X- -- Λ c d t ^ -: d £ £ !>' Ξ 2 '-z i ! ! -jd

I -H 13 ·Η -Η -H

U] U W U U P

>, 0 ,χ G 0 0

4J +J 0 -P -P -P

>1 -μ XI -P 4-> 4-1 a s 3 s & 8 Η Ή Ο *H ·Η -1-1

_V 1—I -P »—I rH I—1 -H

I 6S SS" sis is - & 5 & & 6 8£g - ,—t 4_i .0 s-i pH P P r- POfD 0 GO Q->i DjQjCI iPSHMc; S3 & S c o -si o o ,y p H-rJ cn 4J U2 CG.0 W —I 0 4- 5ri -h 0 -h -p-i jc -h .v: x: <u df> 0 I r* m O > ^ 4d I o · in · · · * C ^ C j O . TT rv O ·

fO

V3

I fNJ

I CD x

^ ! rs: — U

! I 1 *7 C 3C ^ ' i -Γ r i 5 r * —s' pn' —j —s’ O ^ ; XXXXX is. x s- u o u o Gy p- , o — — — — — ! It --1 " -, p- “1 x m —'

XXXXXO>EljX

K 0> v-"' Ο Ό O ' O) ” 0 sor- oo os o >—I cn m-r .. i—I ·—I pH -4 CM ΓΜ CN (N -4

ISlr-rH p-r-trHrHrH —I —J

18 64374 ! ^ _ _ _ ,. ~ — "v x co ο ^ o c — r- x ~ ~~ r — — r X l~ r\ _ ~~ > tJ Y , -! X Y . rr -~‘ '-"' ~ x c c r' c x 2 ^ i ~ " c

I - I

-,U IY r-/t 05 J ; ^ π ; - o — c c ^ - 2 ^ x D ^ 2 = ^ j ... , . . ~ _ , ^ „ 3 2 ^ ^ ^ ^ ^! c ~ ^ — ------------ '}.

fi .' γ x ·' ' x - * E XXX X x -x χ χ z κ u_; --- -X- 2 ! x I —^ -1 ^ ry ζϊ f , . ' !—' *“- r—i r—4 ' ' 1

S. ; - 3 — ^ — — O

I - to r~ ^ _ /-~, , »s

I --N. - - 27" “ ' ' I

3 . ^ 3 U 1 -~ 1 ; I Τ' C ! x >- C' n ! . ' _ w X O .—‘ r—i · 6 { = ~ ~ ^ ^ ~ i'^' t < r^· : ^ σ>

rH

K — ο χ

, X rs O

I S E r- ! ^ C5 - ♦r-»

In -h "v3 u - nj

>~| G 0) O · CU

-M i 2 -P 'T c · m sf ! JX 4J (N -H fC LT) x ' £ g γη ό a \

-H % .¾ O O O

X \ X ,-1 G O tN ^ £ I · ‘7! ^ C w \ oo

1ί g Zj | § g I a J o V

-i £ : o o w m ίο & ^ p o ^ 0 o ; g c -x ui ω o. e/, χ r~-

'OP -H G c Jk x o --· 0> fC —I

X -X O 4J g X O Ö5 a 4J H

<-> ’-t \ ±> X -Q XC X -H 'Λ φ r-J. oJ

! -H O X r-J

O'0 r\' c S · £ —! \r . · O CO X £ -x (0 S ^ „' 7: ^ · <- -~i Q £ c 2 ° -1 ^ o xx:e<o ?9 u) « -h to •-σ' <-t ή

<Λ j. C «· „Q UJ

' 1 It ? -rl J>’ V ω c u) +j

? I X -X

Y L) -n x p 3

i ^ T ^ . . -X 4U UJ

! X>ss. _/\ J. T3 x -P X’ ! (| I / \ r 7 fY X D G Φ i : Il ‘ c Λ \ / ( >, · -X X) ^ Il k J X ^ O U2 01

! ? ^ ^ ^ C . -H -X

1 Y :ro H Ό 'd

! E jC X

01 I X :ro fö a C3

i X x-ι -n CU CU

j ro ja "u O m up r-~ oocri ofi ” <NCSJ(N (NCSJ ro5 2 j ·—1 i—I r—I i—I i—t ·—f ££ 19 64374 £ i : " -- - -. o b - 3 c ~ c !>1 •H :o V) \~2 ' >T P \ rr m 3 3 -- 3 ---3 ^3- 3 fC P . . ... ... ... ...

CO = --.3 C 3 r--3 -- -3 r- 3 - - C 44 3 - 3 - C Si Jcc bxb Jb3 Jx,' bbb

^ tC I

\__jr

Ajr\ I ! I !- I 3 ϊ ^ , \ -/ fC i — 7 " 7 ''—=7 ' " 5 ! 7 7 r - iK_ \ 3 -. 3 -I --.

ί i 1 ! i j 3^33-- ! U j L- - r, 3 - 1 oi 7 T 7 Ό·| o r\ 3 3 3 P Oj i 3" '—( 1 — — c lo ; ------- •H ;,

1—1 I

TS 1 -H

W ' u

44 s O

O C P

C -P : -p > -H -P P 1 I o

T3 X O I -H *H O *H

'P 3 p . I—! I—i -H I—I ·Η ·Ρ

O P (Τ3·Η| Ο Ο Ή 0 i—1 C

44 O I 1 I 1C C >1 C C fC

44 r—f CM C/ϊ -HfOnJ^rO C (C

2 44 - >i CaOjQuO, Π3 -P

Ή -Hr-H+J O O O O O Cl, X

2 W \ >i φ P p p P O O

rt 44 00 OOjOjCjOi P !

f-1 O CT. -P i iHOOOO O C

•h p -p j o to m tn en !.'. tr Ρ fC ^4 P -H ·γΗ Ή ·Η Ή ·-- 0 73 ; Ρ —I j

U) g ο4> I

C ·Ρ ! Ρ 10' <Ν 3 —! 3 3 -Η Ρ ! · · ‘ ' ‘ 4- ._I 4-* ί Γ“" ^ >, 3 ! " - - - - ρ > rt e £ w

1 rt I

1 ! /\ >=\ i * \N,__// j i , S' I I f ^!

* [! j V ' ί J

^ t 1} ^ 0> ‘r-s --7

X

<-> O -¾1 in ·· cn m on on m Z on m p p --

•"H f—i ,-H

2o 64374 >1 -U _ _ _ w„ ~ ^ ~ "o — 'w O cr CD r~- cc r~ j~' C· "T (s: o -- o~ r- •H :o ί “ W J !

>4 I

>1 3 ! 1 1 ; O rr r- c 4; — l" oD C C 'V C C rv C O 's C C~ r~ ι— Ο Γ- Ο 4-) I v — ^ χ O -- *^OC; -- o 3 4. C ^ χ ~4 —1 χ --, c o ·· ·.. ... ... ... ... ... ...

<c „y ' Ξ, ^ "C 'T L"1 C T -"i c ix '4 X r\ l-i χ x „-. — rs' X — rs <-.

2 ! ^ G x x x 3 υ r χ o x x w x x uxr o x x ·“ i i ί

§ ^ C *— A r~ C A C

^ ; C; A o C· c «r O r*.

X ! ^ e=! ^ T ~ H C r->‘_ ^ ; A ^ rv r< rn rs 1 r-r-vr— r— i , IA j-> U ' - r Ξ f· ζ ^ ^ ^

o I

dl -X· r r, 0 Λ Jo r co s ^xr-r-x-- — χ j

I *rJ

C I Ό ί I £ 2 4J § § ^40 0 « rn 3j5_j5 -P G Cl ςΐ G -G (0 -H 4->

m c DjCdi-H <l)CQi G OJ

t! ! 2 O O 0 Ή QJfOO CJ 4J

mi ^ ^ SJ ^ 0 W (0 G 0) -H

2; ί a C 4-)1004 3 -4 H 0 ° *0 C 4* Ο Γ-l -r4 J} CO 0 U) 4-) <u 0) to O -rl

~ ·γ4 4-) -H 0) Λ jG -h 4-) JC

ΰΡ j

2 ' ^ ^ ^ 1/1 rs- CN

c ί j r-' J -4 C t^ J

(Π

M I

♦ j ί o v Λ Λ A,-' A .a A^7 li < t1 ί pi |i T |! ί p , ί ^ O "O I —1 ^ T ' ^ r-1 Π x 1 - 5 ° u ^ ^ Γ"00<ΤισΓ-(<Νπη-)< ” '^''^'^•'ΤΙ-τΤτΤ'-ρ ' ' · 1 ·—t —· ι-l n-4 m4 ,-1 21 64 37 4 1j ^ ~ p Ξ ^ — <£ r» G — r~ to o o c " c <r c ο o — 33 ~ ~- 3 ·" ' r~ ~ tr. C r-. -c ·.- ". o ' Ο —. Γ coo· > r\ —.

2>i : L ^ o — o .—( r— r-v,· + ,—, o — tj •Η :θ ! u) iJ ! i > D j I—ijJ: X~ w CC —< O O. <— o c r. <-\) -r >—; r— O^O o —- C o — —'< n? 4-J ! r-. ^ r · γν — o oca-. o.oo. o, r- o· — .-, c a i _· · „ _' · ‘ · · · ·.. ... ... ... . . ~.

fC^ ^>£ j - ' - Ο Γ\ ΓΝ’ r-j [_— O' ~ 'C Ό o. Ο O —' O ‘S 1—' O O

J ; = 2 = S 2 = S Jo5 L:==' ! |5 c. c c r c r? j ^ o a c ~ S £ I O fN TT CZ <-") c I ! ? 5 § - - - - ξ t- · . ^ ^ C S !—, r~> T r—, ri i L“ ΙΛ ! cr rs: ! O 'S> rs

« \D Τ') r< r; rsj lO

cc o I i '-r z: O · —< —' lD ΓΝ Γ* O ! 'I ..,, • l'— ^ o t*- O c-

Qj - C 3 C\ ^ r; ω ; ~ fN Γ.· -,

ill I

I Ή -G *H -r-l Ό Ό V T>

•Η -H *rH -H

c j ε e £ ,H £ •G ; G G to rH to Ί-* > ε ε ε ο ε

g j G G -H G G G

3 i O O r-, O fO O

•G I M-, <4-1 O »G.p 4-i

>G i -G -G c "G Φ -G

CO rG Ή to r-| -H -rH rG

>< >< >iGj -g >icn G >h H'iG >Λ O rG >1Λ; <u >1 >1 ! -n +>G o +1 O φ+j Φ d) -G CL) -G O., c φ -G 4-1 3 (1) g ; £ tn £ m o to g w a) ι-h £

•G -G φ -G O 02 +J -G O f o -G

r< ; Γ3 > T3>-G φ Ti^CN -U Ό2

*Γ^ O O O o O

O f—. O' to r—t ^ -P r%' —i —I — Ό L-

G

G

K

w I

| h s rr ä,^ (S Λ-§Λ Λ i & : " - - - - -.· CQ G G ό Ξ i ^ 3 i j O lo vd r- oo o o rGoj

••('G' G· ^ G· G* LT! LDlO

2jr—4 rGi—( rG -G rG rG i—I

22 64 3 7 4 ( C C T Ό O O C C TOO — — v? ^ T — OCT Ο — —> — —' r\ ω ; ; J J j ; ^ ^ ^ | ~. o. ~ _· ^ _: “ ^ ^ ^ ^ J _· -r-ί :01 ' T. d >1 a i f—( +J I ". c " ". ·-". " C Ο O TOT O C —.-1 Z o c O o O O τ T τ

5 3 i T -Γ ^ - T - CTO Ο - - o - O 2 ^ r- ecu- T T C - T T

rn ' 2 ' : - ' 2 Ö t ή Ί - , - \ 2 > ^ 2 . - ° -.

|J ; ^--^- ^ _ --- - -=- c » ·.

< j " T Ο Γ. O ^ ^ = C

2 ! o e· e c. ~ "· '- -· -' te O T — t -. o - τ ex- ε - e ' 1 -, - e c < ιΓι O O τ l/“i ιΛ : *-» r—·, ί c ^ ^ ^ ^ ;

} C ^ <—< ί . <·. ' 1 O

u - - o c, - ’-"> e, T c o ' ί · : j.

. C O T O c. O ^ ~ w i - -. ~ -x o - ^ - ! , 'ill I , - £ r| λ ή *h -r-* 5 ^ CD TJ Ό rn j Ή Ή JZ H ._, .£ ! £ e -he ε g 2 g E ε ||

^ ro in £ G

^ ! Ο ° Π3 0 O C

: ,ri -H d) .r-| _i d ^ ιτ'γ^2γΗ § φΐ^ξ: 2 >1 >, -H o U ^ ^ ^ >* Ή 4- r | +> r—I *r-| Jj Q jj jj Pj p.

^ £ '£ V >1 β O -H q o Ή Qj -H § 2

ErX E 10 >i <C gu5^3 £W pv m n : ^ 2 £ 2 ^ « ·* ω -ho 5. i 2 5 ^ ^ > ^3 > a> en T3 > o ό > T3 > ο Λ> o cr. e o —, O . . . , ” 'JD υ*Ί Γ'* \_· -P ^ ^ e? ^ 2 · * r- · r^· j:· ·Ä ^ ^ O ^ fN e S / L/1 ^ ^ ' rc

W

!’ ^ ° O rs: 'n r r T) ~1 \ \ —

H H 7j U i I

J, ί^ϊ I ' ^^''1 Λ r ^ ... V , . (^ rf> o

! _r- °"'2. ! G

= . J

V

-i ^ n Ln^von ro oo tn o !2 inr- LO o in ·ο ' ί ^ ^ -1 -H Ή Ή rH rH 2^ 23 6 4 3 7 4 % - ~^.= ~: τ 7 = .7^ ^= " - ”

Ό — ·- r~ cr -r T r- ΚΓ r- -, j- rv <r ·— Γ"· c X w" tr .Ί V

:0 - . ~ ~ ,~--r--

•rJ J K

>1 3 C d . 3 "3 '. ! ~. '. 7 7 TO 7 ,7 7 7 7 7 C X - -r - TO *r lTO - TO Γ- ^ LT. r; l- r- C C - - <r l- v < Tj TO — TO —! Γ- —' Γ" -< Γ' — -- — r- TO " ^ ^ p p . Ä ^ _T ~ ^ f - - < to. to to 7 “ ': 7 γ-η to "TO L-! TO - 7 X to r\- H —. —- to ε 7 7 7 ' 7 7 ^ to

Ln

C 1.-1 TO

— to, o c: 1 1—. to, 'm

0) TO; -V .— TO

Ο · I 1 : to I

• to O zz 'w ' to ~

TO·1 to, 1 TO ή C TO

CO - '' - — C -1 - c

-H

4-1

Ο ! -H

^ ] >-41 -H

•H 0 £

f—I -H C U

tn c to o I>i , Ο Oj Ή *H ·η 44 Ή 4-1 1 (U O >—* r-4 I—I 0 1—1

>| d 15-) 0 0 0 C

v -p a. c c c o c 4-1 CO TO TO TO -P I’* •P d C/! 4J -P 4-> 4* 44 W 40 -H d d Φ ^

l'"' C

<*> ^ to ^ ° ~ . · · TO r; TO C · 0 to, to p r. 7 ^ ' -N' 44 , to ™

C

(ΰ Λ w — o — d ω i o j , ΑΆ r- I TO" -/A i! I ^ _ r „ r ί r ^ u ! 77 13, ” " ;

a I Vto TOV A. ~TO .0.8 r'TO TO TOTO

; i; ‘ i Ί i I n TOT x ,TO-: I ’v. /y _ro> - ^ ^ 's^

1 i r^T ί ^ ^ ^ O

o r C TO H 7 °L0 - C "rp S - TO ^

C TO TO * O

0 ^HCsin^fu-i^oro ·· VDV£)k£)vovo^u> I *—I I—I 1—! r—1 I—I r-H 1—! 24 64374 i ^ CC O' r· O - X CM CO Ό X X «-" -T GO Oo O lr ;C\] , cr- · * jr- .n o a .cr jo cr c\ ro;— vo co vD >- o oo >1 .. . ... ... ... ... ...

X cOc- O; LOcr r-ι COCT X X MO CM 7 MOCM

x _o' ^ ' 7-, >-,-ί x o- χ mo χ & - * 03 >1 :0

Ή X M

£ Zi rcnj c-c cm coco covccr cm moO -=r-=r o MOrncn XT' 2 >- r-rr co χ χ-cr G\cO O r-o o- c

C „2 H (\i rn X cr CM OOcT X X X· X XXX X XX

< m X x x Γ-. XX XX X - x X

0 *> ·> __*> , ' X . Γ X X r^1 X X τ Τ X X jX' x —Γ o o' o' o o o c ° o o o _ 2 ., -, -, ·. *> O' ' < X X X X !- ' ~ :m cm X x, C-

o ^" x cx x X

2 V. on cr cj- \., ;γ-, r-c ic x re X, Lr ^ CX ex 4Λ ‘ X X X rÖ ' CT' I I w .

r ) rH ΧΛ LP» ° gP r~> '

nu : I . · o CO I

°. oo x x O t x ' 0 o- LX X (X fX X, {£ ! x X X A GO x

1 ( n X

» i <8 -H s >1 C x m .-4 g x x ! x u) ή 2 I ,_i

; ζϋι m $ X X G

mo; ji Φ Φ χ χ δ t; 2 sX s s s g s S3 , 1¾ 3 S I Ϊ 5

; 73 fc x is $ % S

c*> ;

0 °S "1 '“i GO CM MO

^ 1 00 ix 140 OO CC r\' 5 ^ go ro oj x r: cr. ’ i i o 1 ~w I — ^ -v ίϋ

x x j ^ x I

• 1 0 A.

! JL (^=1 I Λ γ I

< P Χγ o <x τ

Ί ! X I W o I O

V χΑ, O oo ! oo Τ ο I I τ GO a; o cc

! ° X X ^ CJ 00 CO

μ ί V fij G

Χχ o X o O ί. χ O O oc

O co C3 CO

·· cn 2 O X oj tji 2 M X CN OJ <N o> 1 0J oj CM oj —!

II

25 64374

Taulukkoa IV koskevat huomautukset: a ) Valmistettiin palautus jäähdyttämällä 2-amin.ofenyyli-imi-datsolia ja ftaalihapon anhydridia ekvimolaarisinä määrinä tolueenissä 1 1/2 tuntia. Jäähdytyksen aikana tuote erottui liuoksesta.

b) Valmistettu hydraamalla katalyyttisestä hiilen pinnalla olevalla palladium-hiilellä (10 %) nitroanalogin dimetyyliformamidiliuosta ja seostamalla epäpuhdas tuote vedellä.

c) Valmistettu käsittelemällä yhdiste 153 pyridiiniliuoksena vastaavalla happokloridilla ja säestämällä sen jälkeen vedellä.

d) Valmistettu jodivetyreaktiolla yhdisteestä n:o 138.

e.) Valmistettu käsittelemällä yhdisteen n:o 162 litiumsuola vastaavalla happokloridiliuoksella dimetyyliformamidiliuoksessa ja saostamalla sen jälkeen vedellä.

f) Valmistettu käsittelemällä yhdiste n:o 151 vastaavalla nuk-leofiililla noudattamalla julkaisun Kornblum et ai.» J.Orc.Chem. 41, 1560 (1976) menetelmää.

g) Valmistettu yhdisteestä n:o 220 jodivetyreaktiolla.

26 6 4 3 7 4

Keksinnön mukaisesti valmistetuilla yhdisteillä on sienten- ja hiivojenvastaista vaikutusta. Niinpä niiden on havaittu tuhoavan esimerkiksi sellaisia organismeja kuin Candida albicans (ATCC η:ο 10231), Candida tropicalis, Aspergillus niger (ATCC n:o 16404), Trichophyton rubrum (ATCC n:o 10218 ja 14001) ja Trichophyton ajelloi. Tämän takia niitä voidaan käyttää ihon sienitautien hoidossa, joita tauteja ovat esimerkiksi tinea capitis, tinea favosa, tinea barbae, tinea corporis, tinea imbricata, tinea cruris, tinea pedis, tinea manus ja tinea unquium, ja erityyppiset kandida-sienitartunnat, kuten kielitulehdus, suutulehdus, chelitis, suupie-lenrikkouma, emätintulehdus ja terskatulehdus.

Kun keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä käytetään sientenvastaisiin lääkinnällisiin tarkoituksiin, ne tavallisesti sisällytetään sopivaan farmaseuttiseen kantaja-aineeseen.

Nämä sientenvastaiset valmisteet voivat olla liuosten, pesunesteiden, emulsiovoiteiden, voiteiden jne. muodossa. Vaikuttavan yhdisteen määrä näissä valmisteissa voi vaihdella; tavallisesti vaikuttavaa ainetta on noin 0,5 - 10,0 % valmisteen kokonaispainosta.

Taulukossa IX on lueteltu eräiden tämän keksinnön sisältämien yhdisteiden sientenvastainen vaikutus. Määritykset on tehty agarlaimennusmenetelmällä, joka on selostettu teoksessa Methods in Microbiology, Voi. 73, edited by J. R. Norris and D. W. Ribbons, Academic Press, New York, 1972, luvut 2 ja 3.

Taulukko IX

27 64 374

Sientenvastainen aktiivisuus Sienten ja hiivojen inhibitio (ppm)

Yhdiste C. C. A. T. T.mentagro- T.

albicans tropicalis niger a je Hoi phy te s_ rubur.

136 100 133 100 100 883 134 100 16 139 100 137 100 100 135 100 100 142 100 132 100 100

138 100 ICO

130 100 100 100 100 113 100 100 100 116 1616 127 1616 109 123 32 114 16· 116 256 4 123 131 16 2 140 <0'5 151 1 119 ° 120 1 110 128 123 64 1 22 32 112 128 64 64374

Taulukko IX (jatkuu)

Yhdiste C. C. A. T. T.mentagro- T.

albicans tropicalis nicer aielloi phytes_ rubun 153 100 124 100 100 100 100 8 >26 100 100 100 145 100 100 100 159 100 100 100 160 100 100 100 163 100 100 100 164 ICO 100 100 165 100 100 100 137 100 100 123 16 129 16 "16 8 29 6437-!

Keksinnön mukaisesti valmistetuilla yhdisteillä on havaittu myös hylkimistä vastustava vaikutus. Tämän vaikutuksensa ansiosta niitä voidaan käyttää sellaisten sairauksien hoidossa, joita jo ennestään on katsottu voitavan auttaa antamalla hylkimistä vastustavia aineita. Tällöin tulevat kysymykseen sellaiset tilat kuin mu-nuaiskerästulendus, seerumitauti, elintensiirrot, nivelreuma, systeeminen lupus erythematosis, haavainen paksusuolentulehdus, krooninen aktiivinen maksatulehdus, multippeliskleroosi, vieraslajisiir-teet ja omalajisiirteet palovammoissa, reumahilsettymä, nokkosihottuma, hengitysteiden allergiat (so. astma, heinänuha), scleraclerma, punapahkasienitauti, iholihastulehdus, hilsetystauti ja kosketuksesta aiheutuva ihotulehdus (myrkkysumakki mukaanluettuna).

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen hylkimistä vastustavien yhdisteiden annosmäärät vaihtelevat käytetystä yhdisteestä riippuen. Yleensä annosten määrät ovat suunnilleen samoja kuin ennestään tunnettujen hylkimistä vastustavien aineiden kohdalla. Jos yhdisteitä annetaan suun kautta tai laskimonsisäisesti, vuorokausiannos on tavallisesti noin 0,1 - 15 mg/kg. Muita antotapoja, kuten varastoruiskutusta, istutuksia jne., käytettäessä yksittäinen annos voi olla huomattavasti suurempi, eli jopa noin 100 mg/kg.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden hylkimistä vastustava vaikutus määritettiin hemolvsiinikokeella hiirillä ja viivästyneen yliherkkyyden kokeella. Käytetty hemolysii-nikoe on selostettu teoksessa Methods in Immunology, edited by D. H. Campbell et ai., W. A. Benjamin, New York, ’563, ss. 172 - 175, ja sillä määritetään humeraalinen vasta-ainereaktio. Viivästyneen yliherkkyyden koe ilmaisee kokeiltavan yhdisteen vaikutuksen koe-eläi-menä olevan hiiren kykyyn saada aikaan solujen välittämä immuunireaktio antigeenille, joka on Mycobacterium tuberculosis H37Ra.

Hiiri herkistetään antigeenille antamalla sitä ihonalaisesti bännär-tyveen. Viivästyneen yliherkkyyden mittaus voidaan suorittaa milloin tahansa sen jälkeen, kun herkistyksestä on kulunut kuusi vuorokautta, mutta mittaus tehdään tavallisesti yhdeksäntenä päivänä seuraavasti: oikeaan käpälään annetaan ruiskeena puhdistettua proteiini johdannaista (tuberkuliini) 3a vasempaan käpälään (kontrolli) annetaan fysiologista suolaliuosta. Käpälien tilavuudet mitataan 24 tunnin kuluttua ja merkittävä oikean käpälän tilavuuden kasvu 30 64374 katsotaan viivästyneen yliherkkyyden mitaksi. Kaikki kokeiltavat yhdisteet annettiin ihonalaisesti.

Taulukossa X on esitetty yhteenveto koetuloksista. Ilmaisu HL (ED^q) mg/kg s.c. tarkoittaa sitä lääkemäärää mg/kg:na ihonalaisesti annettuna, joka tarvitaan vähentämään vasta-aineaktiivi-suus 50 prosentilla kontrolliin verrattuna. Tässä tapauksessa lääke on sitä tehokkaampi hylkimistä vastustava aine, mitä alhaisempi HL (EDr„)-arvo on.

D U

Kolmannessa pystyrivissä oleva ilmaisu D.H.S. (ED^) mg/kg s.c. tarkoittaa lääkkeen vähentävää vaikutusta siihen turvotukseen, joka liittyy solujen välittämään immuunireaktioon. Ilmaisu tarkoittaa sitä lääkemäärää mg/kg:na ihonalaisesti annettuna, joka tarvitaan vähentämään solujen välittämän immuunireaktion aiheuttamaa turvotusta 60 prosentilla kontrolliin verrattuna. Lääke on jälleen sitä tehokkaampi hylkimistä vastustava aine solujen immuuni-reaktion suhteen, mitä alhaisempi D.H.S. (ED^J-arvo on.

3, 64374

Taulukko X

Yhdiste n:o HL (ED^^) mg/kg s.c. D.H.S. (EDgg) mg/kg s.c.

151 0,3 1,52 140 0,26 1,15 131 18 81 116 >50 56 117 >50 46 118 >50 43 109 >50 >50 110 - 50 1 47 0,027 1 ,7 134 0,5 7,2 137 >0,125 3,2 135 0,033 0,22 142 0,20 4,2 136 2,7 >50 133 0,75 32 139 3,0 >50 138 0,72 27 127 >50 36 160 22 >50 143 0,36 1,3 196 0,42 45,0 146 0,11 3,1

Taulukko X (jatkuu) 32 64374

Yhdiste n:o HL (ED^) mg/kg s.c. D.H.S. (ED^q) mg/kg s.c.

153 1,2 5,7 149 0,16 3,8 126 35,0 >50,0 162 13,0 159 3,0 27 158 1,0 7,6 157 0,39 12 219 2,5 >32 220 2,3 11 221 1,0 >32 >50 tarkoittaa, että lääkettä tarvittaisiin yli 50 mg/kg, jotta humeraalinen vasta-aineaktiivisuus vähenisi 50 prosentilla tai solujen välittämä immuunireaktio vähenisi 60 prosentilla. Näillä aineilla ei jatkettu kokeita, koska saadut arvot olisivat käytännön kliinisestä näkökulmasta liian korkeita.

33 64 574

Taulukosta X ilmenee, että uudet yhdisteet ovat huomattavasti voimakkaampia immunosuppressantteja kuin US-patentista 3 887 566 tunnetut yhdisteet, joissa fenyyliryhmä ei ole substi-fcuoitu. Niinpä tunnetun yhdisteen n:o 131 (jossa R on fenyyli) HL (ED^^I-arvo on 18 mg/kg, kun sensijaan uusilla yhdisteillä joissa fenyyliryhmä on substituoitu (erikoisesti yhdisteet n:o 133 - 162 ja 196 - 222) on huomattavasti voimakkaampi immunosuppressiivinen vaikutus.

Useilla tämän keksinnön mukaisesti valmistetuilla yhdisteillä on nonsteridaalisia tulehduksenvastaisia ominaisuuksia, joten niitä voidaan käyttää hoidettaessa sairauksia, joita jo aikaisemman tiedon perusteella katsotaan voitavan auttaa antamalla non-steridisiä tulehduksenvastaisia yhdisteitä. Kyseeseen tulevia tiloja ovat mm. ichthyosis, hilsetystauti, karvakato ja luontainen liikaherkkyysekseema.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen tulehduksenvas-taisten aineiden annostus vaihtelee riippuen valitusta lääkkeestä, hoidettavasta sairaudesta ja antotavasta. Ulkonaisesti käytettäessä yhdisteet sekoitetaan tavallisesti ulkonaiseen käyttötarkoitukseen sopivaan kantaja-aineeseen. Seokset sisältävät tämän keksinnön mukaista tulehduksenvastaista ainetta noin 0,5 - 15,0 % seoksen kokonaispainosta. Aineita voidaan antaa myös suun kautta, laskimonsisäisesti, ihonalaisesti, lihaksensisäisesti tai ihonsisäisesti. Tällöin on sopiva vuorokausiannos noin 0,5 -20 mg/kg.

Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden tulehduksen-vastainen. vaikutus määritettiin rotan käpälän turvotuskokeella antamalla yhdistettä paikallisesti (taulukko XI) tai suun kautta (taulukko XII). Suun kautta annettaessa noudatettiin julkaisun C. A. Winter, E. A. Risley ja G. W. Nuss, Proc. Soc. Exp. Biol.

Med. 111, 544 (1962) mukaista menetelmää, ja mittaus tehtiin 4 tunnin kuluttua lääkkeen antamisesta. Paikallisesti annettaessa kokeet tehtiin samalla tavalla, paitsi että ärsyttävä aine (karra-geeni) ja kokeiltava yhdiste annettiin saman aikaisesti hetkenä nolla.

Taulukoissa XI ja XII on esitetty tutkittujen yhdisteiden tulehduksenvastainen vaikutus turvotukseen. Taulukoissa on useissa kohdin annettu saman lääkkeen vaikutus eri suuruisina annoksina.

Taulukko XI

34 64374

Rotan käpälän turvotuksen mittaus

Paikallinen antotapa (ruiskutettu suoraan käpälään) Ero kontrolliin verrattuna (%)

Yhdiste n:o 1 jug 10 μ g 100 μ g 100 mg/kg 148 -32,6 -53,5 -14,3 -39 109 -30,8 -3,9 +31,6 114 -68,2 -30,0 -131,6 1 1 7 110 -74 122 -61 140 _7o

Taulukko XII

35

6 4 3 7 A

Rotan käpälän turvotuksen mittaus, anto suun kautta Ero kontrolliin verrattuna Yhdiste n:o 100 mg/kg 400 mg/kg

Indometasiini -66 fenyvlibutatsoni, -76 aspiriini -57 114 -61 HO -4 3 122 -61 143 -52 140 -35 131 -52 133 -17 137 -26 112 -17 -68 111 -43 121 -61 147 -39 134 -43 139 -22 -25 132 -76 150 -30 144 -25 115 +70 -25 117 -7 -18 123 0 -50 116 +104 -18 136 -9 -25 128 -39 129 -30

Claims (1)

1. 64 57 4 Patenttivaatimus : Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 4-substitu-oitujen imidatso/l ,2-a/kinoksaliinien valmistamiseksi, joiden kaava on /N R iJK H \\ // Ί jossa R on 1 - 17 hiiliatcnia sisältävä alkyyli, trifluoriraetvyli, 2-10 hiiliatomia sisältävä alkenyyli, 3-7 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyli, alempi sykloalkenvyli, fenyyli, joka on substituoitu yhdellä tai useammalla alemmalla alkyylillä, alemmalla halogeenialkyylillä, alemmalla alkoksilla, alemmalla al-kyylitiolla, 2-10 hiiliatomia sisältävällä asyylioksilla, fenyylillä, fenoksilla, alemmalla alkyylioksifenoksilla, hydroksi-fenoksilla, karboksyylillä, syanolla, aminolla, 2-16 hiiliatomia sisältävällä asyyliaminolla, p-klooribentsoyyliaminolla, nitrolla, hydroksilla tai halogeenilla, alempi-alkoksi-alempi-alkyyli, fenoksi-alempi-alkyyli, fenyyli-alempi-alkyyli, alempi-alkyyli-fenyyli-alempi-alkyyli, fenyyli-alempi-alkenyyli tai naf tyyli, tunnettu siitä, että 1 - ( 2-asyyl iam.inof enyy li) -imidatsoli, jolla on kaava k / N I o Tr X >-NHC-R ! il jossa R merkitsee samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan sellaisen määrän kanssa fosforioksikloridia, joka pystyy syklisoimaan sen, ja että otetaan talteen 4-substituoitu imidatso/j,2-a/kinoksaliini.