FI63943C - Vid framstaellning av 7-acylamido-3-(1-karboxi-laegre-alkyl-tetrazol-5-yltiometyl)-3-cefem-4-karboxylsyror och deras salter saosom mellanprodukter anvaendbara foereningar - Google Patents

Description

63943 7-asyyliamido-3- (1 -karboksi-alempi-alkyyli-tetratsoli-5-yylitiometyyli)-3-kefein-4-karboksyylihappojen ja niiden suolojen valmistuksessa välituotteina käytettävät yhdisteet 5

Jakamalla erotettu hakemuksesta 802984 Tämän keksinnön kohteena ovat välituotteina 7-asyyliamido-3-(1-karboksi-alempi-alkyyli-tetratsoli-5-yyli-10 tiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappojen, joiden kaava on R1-NH_|-f \ - L | il i ,5 <S?

COOH (^CH.) -COOH

£ n jossa li1 on asyyli ja n on kokonaisluku 1-3, ja niiden suolojen valmistuksessa käytettävät 7-amino-3-(1-karboksi-alerapi-20 alkyylitetratsoli-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihapot, joiden kaava on / s \

H-N--f N-N

I I !j B

25 -HY^CV-<b^

COOH (CH_) -COOH

λ n jossa n merkitsee samaa kuin edellä, ja näiden suolat.

30 Lopputuotteen valmistus on selitetty FI-hakemuksessa 752434 (pat. n:o 62 841 ); keksinnön mukainen välituote (kaava B) saatetaan reagoimaan kaavan a-ch2-cox 35 mukaisen asyloimisaineen kanssa, jossa A merkitsee ryhmää 63943 _s CHjNHR’ ^x^.CH2NHR' _✓CH2NHR' R —\^ y— tai I I tai 5 joissa kaavoissa R on vety, hydroksi tai metoksi ja R' on vety tai metyyli, ja X merkitsee halogenidia tai sen funktionaalista vastinetta.

Uusi välituote valmistetaan poistamalla 7-sivuketju kaavan 1° .ς R -NH-C-CH CH0 N--N.

Il i2 J

0/—N\^-C~CH2

,c COOH (CH_) COOH

15 2 n mukaisesta yhdisteestä, jossa kaavassa n merkitsee samaa kuin 1 edellä ja R on asyyliryhmä muuttamalla mainittu reagenssi, mieluiten silyylimuodossa, iminokloridiksi (esim. fosforipent-oksidilla) ja sitten iminoeetteriksi (esim. metanolilla) ja 20 sitten halutuksi tuotteeksi hydrolysoimalla (esim. vedellä).

Tällaisten reaktioiden suorittamisyksityiskohdat ovat ko. alalla tunnettuja ja niitä on kuvattu esim. US-patenteissa 3 575 970, 3 573 295 ja 3 573 296.

Toisen menetelmän mukaan uusi välituote valmistetaan 25 antamalla 7-aminokefalosporaanihapon tai sen suolan tai helposti hydrolysoitavan esterin Schiff’in emäksen reagoida kaavan

N N

30 J I, hs—il ja

N

(CH_) COOH 2 n mukaisen yhdisteen kanssa, jossa kaavassa n merkitsee samaa 35 kuin edellä.

63943

Sopivia suoloja ovat karboksyylihapposuolat mukaanluettuina metallisuolat, esim. natrium-, kalium-, kalsium-, alumiini-, ammonium- ja substituoidut ammoniumsuolat, esim. suolat, joita muodostavat tällaiset amiinit, kuten trialkyyli-5 amiinit, mukaanluettuina trietyyliamiini, prokaiini, dibentsyy-liamiini, N-bentsyyli-yk -fenetyyliamiini, 1-efenamiini, N,N'-dibentsyylietyleenidiamiini, dehydroabietyyliamiini, Ν,Ν'-bid-dehydroabietyylietyleenidiamiini, N-alempi alkyylipiperidiini, esim. N-etyylipiperidiini ja muut amiinit, joita on käytetty 10 muodostamaan suoloja bentsyylipensilliinin kanssa sekä niiden myrkyttömät happoadditiosuolat (so. amiinisuolat) mukaanluettuina mineraalihappoadditiosuolat, esim. hydrokloridi, hydro-bromidi, hydrojodidi, sulfaatti, sulfamaatti ja fosfaatti ja orgaaniset happoadditiosuolat, esim. maleaatti, asetaatti, sit-15 raatti, oksalaatti, sukkinaatti, bentsoaatti, tartraatti, fu-maraatti, malaatti, mandelaatti ja askorbaatti.

Keksinnön mukaisen yhdisteen aminoryhmä voi olla suojattu substituentilla, esim. 2-jodoetoksikarbonyylillä (GB-patentti 1 349 673), tert.-butoksikarbonyylillä, karbobentsyy-20 lioksilla, formyylillä, o-nitrofenyylisulfenyylillä, trikloorietoksikarbonyylillä, 4-okso-2-pentenyylillä-2 tai 1-karbometoksi-1-propenyylillä-2. Erityisesti tällaisia suoja-ryhmiä ovat ketonit (erityisesti asetoni) ja aldehydit (erityisesti formaldehydi ja asetaldehydi), jotka on julkistettu 25 esim. US-patenteissa 3 198 804 ja 3 347 851 , ja /S-ketoesterit ja /3-diketonit, jotka on julkistettu US-patentissa 3 325 479 sekä -ketoamidit, jotka on julkistettu JP-patentissa 71/24714 (Farmdoc 47 321S).

4 63943

Esimerkki 1 7-amino-3-(1-karboksimetyylitetratsol-5-yylitio-metyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo 5

.11 H2N. S

N ^ + I-0 10 NaS^-^«2C°2Na CH2-0-i-CH3 co2h 15 —-

2N I h I

J-N c-i--N -CH-CO-H

20 0^ CH2"S 2 2 co2h 1. Kolmikaulakolviin, joka on varustettu sekoittimel-la, lämmönsäätimellä, lämpömittarilla ja typen tuloputkella, 25 lisätään 18 g (0,066 moolia) 7-aminokefalosporaanihappoa ja 300 ml 0,1-m pH 6,4 fosfaattipuskuria (20,7 g yksiemäksistä natriumfosfaattia. Η2<0 ja 8,5 g vedetöntä kaksiemäksistä nat-riumfosfaattia kahdessa litrassa).

2. Sekoitetaan kohdassa 1 kuvattua seosta ja lisätään 30 1,5 g natriumbisulfiittia ja 16 g (0,078 moolia) dinatrium-1- karboksimetyyli-5-merkaptotetratsolia.

3. Sekoitusta jatketaan ja seoksen läpi kuplitetaan 10 minuuttia typpeä.

4. Sekoitusta ja typen kuplittamista jatketaan ja sus-35 pensiota kuumennetaan 20 minuuttia 56°C:ssa. Tänä aikana lisätään 6,5 g natriumbikarbonaattia pieninä annoksina.

5. Sekoitusta ja typen kuplittamista jatketaan ja liuok- 5 '3943 sen lämpötila pidetään neljä tuntia 56 C:ssa. Tällöin pH:n on oltava 6,2 - 6,6.

6. Reaktioseos jäähdytetään jäähauteessa 5°C:seen.

7. Seokseen lisätään 50 ml 1:1 fosforihappo-vesiliuos-5 ta tai konsentroitua kloorivetyhappoa pH-arvoon 2,0 - 3,0.

8. Tuote eristetään suodattamalla. Suodoskakkua pestään 20 ml:11a kylmää vettä ja 200 ml:11a kylmää metanolia.

9. Kiintoaines ilmakuivataan vakiopainoon. Tyypillisessä ajossa saatiin 14,5 g tuotetta. Tämän tuotteen väri 10 saattaa vaihdella keltaisesta tumman ruskeaan.

10. Tuote seulotaan ruostumatonta terästä olevan 200 meshin seulan läpi.

11. Suspendoidaan 10 g 200 meshin jauhetta voimakkaasti sekoittaen 200 ml:aan n-propanolia.

15 12. Lisätään 2,0 ml konsentroitua kloorivetyhappoa ja sekoitetaan voimakkaasti puoli tuntia huoneen lämpötilassa.

13. Suspensio suodatetaan. Ruskeaa kiintoainesta pestään 20 ml:11a n-propanolia ja pesuneste lisätään suodokseen (otetaan suodoskakku talteen tuotteen lisäeristämistä varten).

20 14. Vaiheen 13 n-propanolisuodokseen lisätään 1,5 g puuhiiltä (Darco G-60). Suspendoidaan puoli tuntia. Hiili poistetaan suodattamalla. Hiiltä pestään 20 ml:11a n-propano-lia ja pesuneste lisätään suodokseen.

15. Sekoitetaan voimakkaasti ja n-propanolisuodokseen 25 lisätään trietyyliamiinia näennäiseen pH-arvoon 3,0. Muoodos- tuu kiteitä. Suspendoidaan 10 minuuttia.

16. Valkoiset kiteet eristetään suodattamalla, pestään 30 ml:11a n-propanolia ja 50 ml:11a metanolia ja kuivataan vakuumissa 40°C:ssa vuorokausi. Saanto 4 - 8 g 7-amino-3-(1- 30 karboksimetyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbok- syylihappoa, sp. 157°C (hajoaa).

17. Vaihtoehtoinen menetelmä 7-amino-3-(1-karboksime-tyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihapon puhdistamiseksi on seuraava: 35 a) suspendoidaan 10 g vaiheen 10 200 meshin tuotetta 75 ml:aan 1-n kloorivetyhappoa 10 - 15 minuuttia huoneen lämpötilassa. Suodatetaan tummanruskean kiintoaineksen poistami-

__ . I

6 seksi. «94 3 b) Lisätään 2,5 g puuhiiltä (Darco G-60) ja suspen-doidaan puoli tuntia.

c) Hiili poistetaan suodattamalla. Hiiltä pestään 15 5 ml:11a vettä ja pesuneste lisätään suodokseen.

d) Sekoitetaan voimakkaasti ja suodokseen lisätään konsentroitua ammoniumhydroksidia pH-arvoon 2,5 - 3,0. Muodostuu kiteitä.

e) Kidemassaa suspendoidaan 25 minuuttia. Kiteet eris-10 tetään suodattamalla. Kiteitä pestään 30 ml:11a vettä ja 50 ml:11a metanolia ja kuivataan vakuumissa huoneenlämpötilassa. Saanto 4 - 7 g lähes valkoisia kiteitä; sp. 157°C. Lähtöaineiden valmistus 1-karboksimetyyli-5-merkaptotetratsoli 15

N-N

P II

HS - c N

20 |

CH2COOH

a) 1-metyyli-5-merkaptotetratsolin uudelleenkiteytys Menetelmä: 1. Suspendoidaan 110 g 1-metyyli-5-merkaptotetratsolia 25 350 ml:aan kiehuvaa kloroformia. Liukeneminen on lähes täy dellistä.

2. Kuuma liuos (50 - 60°C) suodatetaan nopeasti vakuumissa kuumennetun Buchner-suppilon läpi (11 cm, paperi SS n:o 604, 6,4 - 8,5 mm tiivistettyä suodatusapuainetta (Supercel)).

30 Suodoskakkua pestään 50 ml :11a 50 - 60°C kuumaa kloroformia, joka lisätään suodokseen.

3. Suodos jäähdytetään n. 0 - 6°C:seen ja pidetään tässä lämpötilassa kaksi tuntia. Muodostuneet kiteet eristetään suodattamalla 0 - 6°C:ssa ja pestään 60 ml :11a 0 - 6°C läm- 35 pöistä kloroformia, joka lisätään suodokseen. Kiteitä (osaa A) kuivataan 18 tuntia 37 - 45°C:ssa.

4. Suodosta konsentroidaan pyörövakuumihaihduttimessa 7 63943 (haudelämpötila 60°C) n. puoleen tilavuuteen. Tämä suspensio jäähdytetään 0 - 6°C:seen ja pidetään tässä lämpötilassa kaksi tuntia. Kiteet eristetään suodattamalla 0 - 6°C:ssa, pestään 40 ml :11a 0 - 6°C lämpöistä kloroformia, joka lisätään 5 suodokseen. Kiteitä (osa B) kuivataan 18 tuntia ilmassa 37 -45°C:ssa. Kiteiset osat A ja B yhdistetään, jolloin saanto on n. 65 paino-%.

5. Vaiheen 4 osan B suodosta voidaan kahdesti käsitellä uudelleen kohdassa 4 kuvatulla tavalla, jolloin saanto pa-10 ranee 15 %.

b) 1-karboksimetyyli-5-merkaptotetratsolin dinatrium-suolan valmistus 1. Jäähdytetään 500 ml lähes kuivaa ja puhdasta tetra-hydrofuraania sekoittimella varustetussa kahden litran kolmi- 15 kaulakolvissa suola-asetoni-jäähauteessa n. -10°C:seen. Nesteen pinnalle johdetaan kuivaa typpikaasua.

2. Tetrahydrofuraaniin lisätään 500 ml 15,06-% (1,6-n) butyylilitiumia heksaanissa (Foote Mineral Co.) 10 minuutin aikana kuivassa typpikehässä ja sekoittaen, lähes täydellinen 20 liuos jäähdytetään -5 - -10°C:seen.

3. Liuotetaan 46,4 g 1-metyyli-5-merkaptotetratsolia (kiteytetty uudelleen kuten yllä) 200 ml:aan lähes puhdasta ja kuivaa tetrahydrofuraania. Mikäli liuos on samea se suodatetaan ja jäähdytetään 5 - 10°C:seen.

25 4. Kohdan 3 jäähtynyt liuos lisätään 10 minuutin ai kana ja sekoittaen kuivassa typpisuojassa butyylilitiumliuok-seen. Lämpötilan on oltava -5...+10°C. Saattaa muodostua sakkaa .

5. Seosta sekoitetaan puoli tuntia kuivassa typpisuo-30 jassa 0...+10°C:ssa.

6. Seokseen kuplitetaan kuivaa hiilidioksidia suurella nopeudella ja voimakkaasti sekoittaen 15-30 minuuttia n. ympäristölämpötilasta (0 - 10°C) enintään +20°C:seen.

7. Muodostunut valkoinen sakka eristetään sopivimmin 35 suodattamalla paikassa, jonka kosteus on pieni. Sakkaa pestään n. 75 ml :11a tetrahydrofuraania.

8 63943 8. Sakka liuotetaan 250 ml:aan vettä (pH 8,5 - 9,5). Mukana voi olla toinen kerros tetrahydrofuraania. Tämä voidaan poistaa pyörövakuumihaihduttimessa (haudelämpötila 50°C).

9. Vesiliuoksen pH säädetään konsentroidulla kloori- 5 vetyhapolla arvoon 1,6 - 2,0.

10. Hapanta vesiliuosta uutetaan kahdesti 250 ml:n annoksilla etyyliasetaattia. Kumpaakin 250 ml:n etyyliasetaat-tiuutetta uutetaan 10 ml:n annoksilla vettä. Vesiuutteet heitetään pois. Etyyliasetaattiuutteet (joissa ei ole vesikerros- 10 ta) suodatetaan ja yhdistetään.

11. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet haihdutetaan kuiviin pyöröhaihduttimessa (haudelämpötila 60°C).

12. Keitetään n. 2 minuuttia kolvissa olevia kiteitä ja 300 ml kloroformia. Kuuma suspensio (50 - 60°C) suodate- 15 taan vakuumissa kuumennetun Buchner-suppilon läpi (paperi 11 cm SS 604). Kiteitä pestään n. 75 ml:lla 50°C lämmintä kloroformia. Kiteitä kuivataan n. 3 tuntia huoneen lämpötilassa ja jauhetaan 100 - 200 meshiin.

13. 100 - 200 meshin kiteitä käsitellään kiehuvalla 20 kloroformilla tarkoin kuten kohdassa 12 (kuuma kloroformi poistaa suurimman osan reagoimatonta 1-metyyli-5-merkapto-tetratsolia). Saanto n. 45 - 50 g kiteistä 1-karboksimetyy-li-5-merkaptotetratsolia. Nämä kiteet voivat sisältää 0,02 -0,05 moolia 1-metyyli-5-merkaptotetratsolia.

25 14. Vaiheen 13 kiteet suspendoidaan 3-5 minuutiksi 250 ml:aan etyylieetteriä huoneen lämpötilassa. Seos suodatetaan. Liukenemattomat ainekset (0,5 - 5 %) voivat muodostua epäpuhtautena olevasta symmetrisestä merkaptotetratsoli-ketonista, jonka kokeellinen kaava on 30 j—t ϊ ”1 N N - CH2-C-CH2- N f.» f f

35 SH SH

Huom. Tämä yhdiste räjähtää lämpötilassa n. 205 - 210°C.

r 63943 15. Vaiheen 14 eetterisuodos haihdutetaan kuiviin pyörövakuumihaihduttimessa (haudelämpötila 50°C). Saadaan n.

42 - 48 g kiteistä 1-karboksimetyyli-5-merkaptotetratsolia, joka sisältää n. 0,01 - 0,05 moolia 1-metyyli-5-merkaptotetr- 5 atsolia.

16. Kiteet liuotetaan 420 mitään absoluuttista etanolia (n. 100 mg/ml). Liuos lämmitetään 50 - 60°C:seen.

17. Vaiheen 16 kuumaan liuokseen lisätään 10 minuutin aikana hyvin voimakkaasti sekoittaen 310 ml 41-% 2-etyyli- 10 heksanoaattiliuosta (SEH) isopropanolissa. Muodostuu kiteinen sakka. Seosta suspendoidaan 20 minuuttia 50 - 60°C:ssa.

18. Seos suodatetaan kuumana (50 - 60°C) kuumennetun Biichner-suppilon läpi (paperi 11 cm, SS n:o 604). Kiteitä pestään 75 ml :11a 50°C lämpöistä etanolia.

15 19. Vaiheen 18 etanolikosteat kiteet suspendoidaan 200 - 300 ml:aan etanolia. Suspensio seulotaan 200 meshin seulan läpi. Suspensiota kuumennetaan viisi minuuttia voimakkaasti sekoittaen 50 - 60°C:ssa (reagoimatta jäänyt natrium-1-metyyli-5-merkaptotetratsoli liukenee hyvin kuumaan etanoliin.

20 20. Kiteet eristetään 50 - 60°C:ssa kuumennetun

Biichner-suppilon avulla, paperi 11 cm, SS n:o 604. Kiteitä pestään 75 - 100 ml:11a etanolia ja kuivataan vakuumissa 50 -60°C:ssa 24 - 48 tuntia. Saanto 40 - 48 g dinatrium-1-karboksi-metyyli-5-merkaptotetratsolia (NMR:n mukaan siinä ei ole 1- 25 metyyli-5-merkaptotetratsolia).

1-karboksietyylitetratsoli-5-tiolin valmistus

JP

30 HS-N

r (ch2)2-co2h A) 2-karbetoksietyyli-isosyanaatti 35 Sekoitetaan 93,3 g ,/3-alaniinietyyliesterihydroklo- ridia, 123,5 g trietyyliamiinia ja 400 ml metyleenikloridia ja 10 63943 jäähdytetään 10°C:seen. Liuokseen lisätään kahden tunnin aikana 46,5 g rikkihiiltä liuotettuna 150 ml:aan kloroformia ja lämpötila pidetään n. -10°C:ssa. Lisäyksen päätyttyä liuos sai lämmetä 10°C:seen n. 10 minuuttia. Liuos jäähdytetään 5 uudelleen -10°C:seen, lisätään tiputtaen ja sekoittaen 40 minuutin aikana 66,8 g etyylikloroformaattia 60 mlrssa kloroformia. Lämpötila saa nousta huoneen lämpötilaan 30 minuuttia ja jäähdytetään uudelleen 0°C:seen. Tässä lämpötilassa lisätään 61,6 g trietyyliamiinia ja liuosta sekoitetaan huoneen 10 lämpötilassa 3 tuntia.

Seosta käsitellään vedellä ja orgaaninen faasi eristetään, pestään kahdesti 250 ml:n annoksilla 2-n kloorivetyhap-poa, sitten kahdesti 250 ml:n annoksilla natriumbikarbonaattia ja sitten kahdesti 250 ml:n annoksilla vettä. Orgaaninen 15 faasi kuivataan natriumsulfaatin päällä ja liuotin poistetaan vakuumissa, jolloin saadaan 93,7 g öljyä, joka havaittiin halutuksi tuotteeksi. IR- ja NMR-spektrit vastaavat rakennetta.

B) 1 -karboksietyylitetratsoli-5-tioli

Liuotetaan 29,7 g natriumatsidia 400 ml:aan vettä ja 20 kuumennetaan typpisuojassa 60°C:seen. Kuumaan natriumatsidi-liuokseen lisätään 46,9 g 2-karboksietyyli-isosyanaattia liuotettuna 50 ml:aan Skellysolvea B (lähinnä n-heksaania). Liuosta sekoitetaan n. 150 minuuttia n. 70 - 72°C:ssa, jäähdytetään 30°C:seen jäähauteessa ja lisätään niin paljon 50-% 25 natriumhydroksidiliuosta, että pH on 12. Seosta kuumennetaan 40 minuuttia 70°C:ssa ja jäähdytetään 15°C:seen jäähauteessa. pH säädetään arvoon 2 väkevällä kloorivetyhapolla ja uutetaan neljästi 150 ml:n annoksilla etyyliasetaattia. Etyyliasetaat-tiuutteita pestään vedellä ja kuivataan natriumsulfaatilla.

30 Liuotin haihdutetaan vakuumissa ja tuote eristetään kiteisenä metyleenikloridistä, jolloin saadaan 19,5 g otsikkotuotetta; sp. 147 - 150°C.

35 5 11 63943

Esimerkki 2 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyyli-tetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo CH2NH2 10 jY \ J—”| J”—C 2 0 T l

COOH CH2COOH

15 1. Kolmikaulakolviin, jossa on 100 ml ionivaihdettua vettä ja joka on varustettu sekoittimella ja lämpömittarilla lisätään 7,6 g (0^021 moolia) 7-amino-3-(1-karboksimetyyli-tetratsol-5-yyli-tiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa ja 3,4 g (0,034 moolia) N-metyylimorfoliinia. Jäähdytetään 0°C:seen.

20 Sekoittaen liuos pidetään 0°C:ssa jäähauteen avulla.

2. Lisätään erilliseen, sekoittimella varustettuun kolviin 9,6 g (0,03 moolia) natrium-2-(1-metoksikarbonyyli-1-propen-2-yyliaminometyyli)-fenyyliasetaattia ja 184 ml tetrahyd-rofuraania. Sekoittaen suspensio jäähdytetään -30°C:seen kuiva- 25 jää-asetoni-hauteen avulla. Sekoitusta jatkaen lämpötilassa -30°C lisätään 20 tippaa dimetyylibentsyyliamiinia ja 4,4 g (0,03 moolia) isobutyylikloroformaattia. Muodostunutta seosta sekoitetaan 5 minuuttia.

3. Lisätään vaiheessa 2 muodostunut seos kerralla vai- 30 heen 1 sekoitettuun liuokseen. Muodostunutta liuosta sekoitetaan tunti 3°C:ssä.

35 12 6394 3 4. Tetrahydrofuraani haihdutetaan reaktioseoksesta 30°C:ssa vakuumissa (15 mm Hg).

5. Jäljelle jäävän vesiliuoksen pH säädetään arvoon 4,0 väkevällä kloorivetyhapolla.

5 6. Liuokseen lisätään 2,5 g puuhiiltä (Darco G-60) ja sekoitetaan 20 minuuttia. Hiili poistetaan suodattamalla.

7. Suodokselle kaadetaan 120 ml etyyliasetaattia ja sekoittaen alennetaan pH arvoon 3,8 väkevällä kloorivetyhapolla. Muodostuu pieni määrä vaaleata sakkaa, joka poistetaan suodattamalla 10 (säästetään jälkikäsittelyä ja talteenottoa varten).

8. Suodos jäähdytetään jäähauteessa 5°C:seen ja sekoittaen alennetaan pH arvoon 2,5-2,8 väkevällä kloorivetyhapolla. Lämpötilassa 5°C jatketaan sekoitusta tunti.

9. Tuote eristetään suodattamalla. Suodoskakkua pestään 5 15 ml:11a kylmää ionivaihdettua vettä ja 5 ml:11a kylmää metanolia.

10. Kiteinen 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-kar-boksimetyylitetratso-5-yylitometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo ilmakuivataan vakiopainoon, 4,1 g.

11. Vaiheesta 10 saatu tuote seulotaan 200 meshin haponkes- 20 tävää terästä olevan seulan läpi.

12. Suspendoidaan 10 g tätä 200 meshin tuotetta 100 ml:aan kloroformia. Lisätään 5 ml trietyyliamiinia ja seosta kuumennetaan 50°C^een voimakkaasti sekoittaen. Seosta suspendoidaan 5 minuuttia 50°C:ssa.

25 13. Seos suodatetaan kuumana(7-amino-3-(1-karboksimetyyli- tetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo, pigmentit ja muut epäpuhtaudet liukenevat kuumaan kloroformi-trietyyliamiini-liuokseen). Suodoskakkua pestään 25 ml :11a kloroformia ja ilmakuivataan 2 tuntia. Saanto 1-8 g 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)- 30 3-(1-karboksimetyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbOk- syylihappoa.

14. Vaiheesta 13 saatu tuote seulotaan 200 meshin seulan läpi.

15. Suspendoidaan 10-15 minuuttia 10 g 200 meshin tuotetta 75 ml:aan 0,1-n kloorivetyhappoa. Seos suodatetaan, suodoskakkua 35 pestään 25 ml:11a vettä ja 50 ml :11a metanolia ja ilmakuivataan huoneen lämpötilassa 2-3 tuntia. Saanto 10 g.

13 ^394 3 16. Suspendoidaan 10 g vaiheessa 15 saatua 7-(2-aminome-tyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyylitetratsol-5-yylitio-metyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa 65 ml:aan metanolia, ja a) lisätään 2 ml väkevää kloorivetyhappoa; sekoitetaan 5 5 minuuttia, b) lisätään nopeasti ja voimakkaasti sekoittaen 130 ml vettä, pH-arvo on 1,3-1,6, muodostuu välittömästi sakka (joka sisältää suurimman osan väriä).

c) seosta suspendoidaan minuutti ja suodatetaan nopeasti 10 (säästetään kiintoaines jälkikäsittelyä ja talteenottoa varten), d) suodosta ympätään ja sekoitetaan lievästi; kiteytyminen alkaa n. 15-30 minuutin kuluttua, e) seosta sekoitetaan ympäristölampötilassa 2 tuntia kiteytymisen alkamisen jälkeen, ja - 15 f) kiteet eristetään suodattamalla, pestään 25 ml:11a seos ta, jossa on 65 % vettä ja 35 % metanolia (t/t) ja kuivataan va-kuumissa 1 vrk 50°C:ssa. Saanto 9 g puhdistettua, valkoista 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa.

2g 17. Seuraavassa on kaksi vaihtoehtoista menetelmää A) ja B) 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyylitetratsol- 5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karvoksyylihapon kiteyttämiseksi; A) 1. Suspendoidaan 10 g vaiheen 15 tuotetta 100 ml:aan meta- 25 nolia.

2. Lisätään 2 ml väkevää kloorivetyhappoa.

3. Lisätään 1,5 g puuhiiltä (Darco G-60) ja seosta suspendoidaan puoli tuntia.

4. Hiili poistetaan suodattamalla ja pestään 20 ml:11a me- 30 tanolia. Pesuneste lisätään suodokseen.

5. Suodokseen lisätään 120 ml vettä (muodostunut pieni määrä sakkaa poistetaan suodattamalla ja säästetään uudelleenkäsittelyä ja talteenottoa varten) .

6. Vaiheen 5 liuosta sekoitetaan voimakkaasti ja pH sääde- 35 tään arvoon 2,5-3,0 10-% natriumhydroksidiliuoksella. Muodostuu sakka.

7. Seosta seko 1 Lotaan puoli tuntia. Sakka eristetään suodattamalla, pestään 20 ml:lla 50-% metanoli-vettä (t/t), 30 ml :11a metanolia ja kuivataan vakuumissa 1 vrk 50°C:ssa. Saadaan 9 g

_ I

14 9 3 9 4 3 puhdasta 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyy-litetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa.

B) 1. Suspendoidaan 10 g vaiheen 15 tuotetta 75 ml:aan vettä.

5 2. Lisätään 10-% natriumhydroksidiliuosta, kunnes pH on 6,8 - 7,2.

3. Lisätään 1,5 g puuhiiltä (Darco G-60) ja seosta sekoitetaan puoli tuntia pH-arvossa 6,8 - 7,2 (lisätään jatkuvasti 0,1 - 1-n natriumhydroksidiliuosta).

10 4. Hiili poistetaan suodattamalla; sakka pestään 20 ml:11a vettä, joka lisätään suodokseen.

5. Vaiheen 4 liuos, pH 6,8 - 7,2, voidaan kiteyttää pH-arvossa 1,2 - 1,5 (lisäämällä kloorivetyhappoa) ja kuten on kuvattu vaiheen 16 kohdissa d, e,ja f. Molemmissa tapauksissa saadaan 15 9 g kiteistä 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksime- tyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa.

Esimerkki 3 7-(2-aminometyyli-1,4-sykloheksadienyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyylitetratsoi-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyyli-20 happo

ch2conh-j—f" "'•j | N

cooh 1:h2cooh

Liuosta, jossa on 0,80 g (0,003 moolia) 2-tert.-butoksi-30 karbonyyliaminometyyli-1,4-sykloheksadienyylietikkahappoa ja 0,303 g (0,003 moolia) trietyyliamiinia 19,2 ml:ssa tetrahydro-furaania sekoitetaan 0°C:ssa ja lisätään 0,41 g (0,003 moolia) isobutyylikloroformaattia. Seosta sekoitetaan 30 minuuttia 0°C:ssa ja lisätään liuokseen, jossa on 0,003 moolia 7-amino-3-(1-karb-35 oksimetyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyyli- happoa ja 0,61 g ( 0,006 moolia) trietyyliamiinia 9,2 mlrssa 50-% tetrahydrofuraania. Muodostunutta liuosta sekoitetaan puolitoista tuntia 25°C:ssa. Tetrahydrofuraani haihdutetaan 30°C/15 mm 15 63 94 3

Hg:ssa, jäännöstä pestään kahdesti 30 ml:n annoksilla eetteriä ja laimennetaan puoliksi vedellä. Liuos hapotetaan pH-arvoon 3,5 laimealla kloorivetyhapolla, tuote eristetään ja kuivataan vakuu-missa 18 tuntia fosforipentoksidilla 25°C:ssa, jolloin saadaan 5 1,55 g (54,0 %) valkoista jauhetta. Lisätään kaikkiaan 3,4 ml trifluorietikkahappoa yllä mainittuun 7-(2- Οί-tert.-butoksikarbon-yyliaminometyyli-1 ,4-sykloheksadienyyliasetamido) -3- (1-karboksi->· metyylitetratsol-5-yylitiometyyli)3-kefem-4-karboksyylihappoon ja sekoitetaan tunti 0°C:ssa. Liuosta laimennetaan 150 ml:11a eette-10 riä ja sakka eristetään suodattamalla. Trifluoriasetaattisuola sus-pendoidaan 3,4 ml:aan vettä ja pH säädetään arvoon 4,5 laimealla ammoniumhydroksidiliuoksella. Kumimaista jäännöstä hierretään vedessä, eristetään ja pestään vedellä ja asetonilla. Tuotetta kuivataan vakuumissa 18 tuntia fosforipentoksidilla 25°C:ssa, jol-15 loin saadaan 53 mg (15,72 %) 7-(2-aminometyyli-1,4-sykloheksadi-enyyliasetamido)- 3-(1-karboksimetyylitetratsol-5-yylitiometyyli)- 3-kefem-4-karboksyylihappoa, sp. yli 160°C (hajoaa hitaasti).

Analyysi C20H23N7O6S2.1/2 H.,0

Laskettu: C 45,18 H 4,55 N 18,44 20 Saatu: C 45,46 H 4,68 N 17,09

Esimerkki 4 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyyli-tetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihapon mono-natriumsuolan trihydraatti 25 1. Suspendoidaan 10 g kiteistä 7-(2-aminometyylifenyyli asetamido) -3-(1-karboksimetyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (kuvattu ja valmistettu esimerkissä 1) 50 ml:aan ioninvaihtovettä.

2. Voimakkaasti sekoittaen lisätään hitaasti natriumhydrok-30 sidiliuosta pH:n pitämiseksi vakioarvossa 7,4 - 7,7.

3. Lisätään 2 g aktiivihiiltä (Darco G-60) ja seosta sekoitetaan puoli tuntia. pH pidetään arvossa 7,4 - 7,7 1-n natrium-hydroksidiliuoksella.

4. Hiili poistetaan suodattamalla ja pestään 10 ml:11a 35 vettä. Pesuvesi lisätään suodokseen.

5. Vaiheen 4, pH 7,4 - 7,7,liuos steriloidaan ja tehdään pyrogeenivapaaksi suodattamalla aseptisesti ja ko. menetelmin.

16 6394 3

Vaiheiden 3, 4 ja 5 kokonaisaika ei saa ylittää 5 tuntia huoneen lämpötilassa.

6. Käyttäen steriilitekniikkaa vaiheen 5 voimakkaasti sekoitettuun, steriiliin liuokseen lisätään 5 minuutin aikana 65 ml 5 (n. yhtä suuri tilavuus) steriiliä, pyrogeenivapaata asetonia.

7. Lisätään voimakkaasti sekoittaen 15-20 minuutin aikana 2 tilavuusosaa (120 ml) steriiliä, pyrogeenivapaata asetonia, jolloin muodostuu kiteitä.

8. Seosta suspendoidaan 10 minuuttia.

10 9. Lisätään 15 minuutin aikana 3 tilavuusosaa (180 ml) steriiliä asetonia. Seosta sekoitetaan puoli tuntia.

10. Sakka eristetään suodattamalla, pestään 75 ml:11a ste- ‘ rilliä asetonia ja vakuumikuivataan 45 - 50°C:ssa tai ilmakuiva-taan 50 - 56°C:ssa 24 tuntia. Saanto n. 8,8 g.

15 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyyli- tetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihapon mononatrium-suolan trihydraatin ominaisuudet: vettä = 9,2 % (teor. = 9,05 %) natriumia (liekkifotometrisesti) = 4,0 % (teor. 3,86 %) 20 liukoisuus veteen = yli 500 mg/ml stabiilisuus vedessä = stabiili vähintään 24 tuntia huoneen lämpötilassa konsentraation ollessa 250 mg/ml.

Esimerkki 5 7-(3-aminometyyli-2-tienyyliasetamido)-3-(1-karboksimetyyli-25 tetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo A) 7-(3-tert.-butoksikarbonyyliaminometyyli-2-tienyyliaset-amido)- 3-(1-karboksimetyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem- 4-karboksyylihappo

Seosta, jossa on 542 mg (2 mmoolia) 3-tert.-butoksikarbonyy-30 liaminometyyli-2-tienyylietikkahappoa ja 412 mg (2 mmoolia) di- sykloheksyylikarbodiimidiä tetrahydrofuraanissa, sekoitetaan puolitoista tuntia huoneen lämpötilassa. Saostunut urea poistetaan ja suodos haihdutetaan vakuumissa. Muodostunut 1,0 g aktiivista esteriä liuotetaan 10 ml:aan tetrahydrofuraania ja lisätään 0°C:ssa 35 sekoittaen seokseen, jossa on 656 mg (2mmoolia) 7-amino-3-(1-karb-oksimetyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyyli-happoa ja 816 mg (8mmoolia) trietyyliamiinia ja 5ml:ssa vettä.

17 ¢394 3

Sekoitusta jatketaan 3,5 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktioseos lisätään 20 ml:aan vettä ja pestään neljästi 20 ml:n annoksilla eetteriä. Vesiliuokselle kaadetaan etyyliasetaattia ja pH säädetään 5°C:ssa arvoon 2 väkevällä kloorivetyhapolla. Orgaaninen 5 kerros erotetaan ja vesikerrosta uutetaan kahdesti 50 ml:n annoksilla etyyliasetaattia. Etyyliasetaattiuutteet yhdistetään, pestään kyllästetyllä natriumkloridivesiliuoksella, kuivataan magnesium-sulfaatilla ja haihdutetaan vakuumissa. Jäljelle jäänyt öljy kromatografoidaan 10 g:11a silikageeliä. Kolonnia uutetaan peräk-10 käin 150 ml:11a kloroformia ja 100 ml:11a 3-% metanoli-klorofor- mia. Kloroformieluaatista saadaan talteen 50 mg 2,4-dinitrofenolla ja otsikkokefalosporiini eristetään haihduttamalla metanoli-kloroformieluaatti. Saanto 29 %, sp. 185 - 188°C (hajoaa).

Analyysi 15 Laskettu: C 42,91 H 4,54 N 15,23 S 14,94

Saatu: C 43,02 H 4,17 N 15,07 S 15,04 B) 7-(3-aminometyyli-2-tienyyliasetamido)-3-(1-karboksi-metyylitetratsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo Lisätään 0°C:ssa 0,6 ml trifluorietikkahappoa 610 g:aan 20 (1,05 mmoolia) vaiheen A suojattuun kefalosporaaniin ja seosta sekoitetaan 15 minuuttia huoneen lämpötilassa. Reaktioseokseen lisätään 15 ml vedetöntä eetteriä sakan muodostamiseksi, joka erotetaan suodattamalla, pestään kahdesti 10 ml:n annoksilla vedetöntä eetteriä ja liuotetaan 10 ml:aan asetonitriiliä. Liuokseen lisätään 25 2 tippaa väkevää ammoniumhydroksidia. Sakka erotetaan suodattamal la, pestään kahdesti 10 ml:n annoksilla asetonitriiliä ja kuivataan 7 tuntia 75°C/1 mm Hg, jolloin saadaan otsikkotuote. Tätä käsitellään yhdellä ekvivalentilla ammoniumhydroksidia, jolloin saadaan monoammoniumsuola. Saanto 83 %, sp. 174 - 178°C (hajoaa).

30 Analyysi C.^ gH^NgOgSg.^O

Laskettu: C 38,56 H 4,32 N 19,98 S 17,16 Saatu: C 38,89 H 4,06 N 18,83 S 15,24

Esimerkki 6 7-(2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksietyylitetrat 35 sol-2-yyli tiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo.

A) Kalium-o-(1-karbometoksipropen-2-yyliaminometyyli)-fe-nyyliasetaatti (enamiini) 1. Lisätään säiliöön 1000 g o-aminametyylifenyylietikkahap-poa, 340 g kaliumhydroksidia, 1412 g metyyliasetoasetaattia ja _ - I.

is 63943 32 400 ml vedetöntä metanolia.

2. Seosta kuumennetaan pystyjäähdyttäen ja sekoittaen 4 tuntia.

3. Reaktioliuosta konsentroidaan vakuumissa ja lämpötilassa alle 50°C n. viidennekseen lähtötilavuudesta.

5 4. Konsentraattiin lisätään 10 000 ml metyyli-isobutyyliketo- nia ja konsentrointia jatketaan vakuumissa kunnes metanoli on poistunut.

5. Lisätään 10 000 ml metyyli-isobutyyliketonia konsentraatin työstettävän suspension saamiseksi.

10 6. Seosta sekoitetaan ja jäähdytetään 5 - 10°C£een 30 minuuttia 7. Suspensio suodatetaan ja suodoskakkua pestään 5000 ml:11a metyyli-isobutyyliketonia ja 5000 ml :11a asetonia.

8. Tuote kuivataan kiertoilmalämpökaapissa n. 40°C:ssa.

9. Saanto on 1605 - 1680 g eli 88 - 92 % valkoista, kiteistä 15 tuotetta, sp. 140 - 142°C.

B) 7-{2-aminometyylifenyyliasetamido)-3-(1-karboksietyylitatr-atsol-2-yylitiometyyli)-3-kefem-karboksyylihappo ή A ) Sekoitetaan 4,09 g vaiheen A enamiinia ja 90 ml tetrahyd-rofuraania sekoittimella ja kuivausputkella varustetussa kolmikaula-20 kolvissa, jota jäähdytetään kuivajää-asetonihauteessa. Lisätään 8 tippaa N,N-dimetyylibentsyyliamiinia ja seos jäähdytetään -38°Cseen. Lisätään 1,95 g isobutyylikloroformaattia ja sekoitetaan 15 minuuttia B^) Liuotetaan 3,5 g 7-amino-3-(1-karboksietyylitetratsol-2-yylitiometyyl.i)-3-kefem-4-karboksyylihappoa 50 ml:aan vettä ja 2,29 25 g:aan N-metyylimorfoliinia ja jäähdytetään 2°C -.seen. Liuokseen lisätään sekoittaen vaiheen A1 anhydridiä. Seosta sekoitetaan puolitoista tuntia 2°C:ssa, Tetrahydrofuraani poistetaan vakuumissa, jäännökselle kaadetaan etyyliasetaattia ja pH säädetään arvoon 3. Sekoitetaan jäähauteessa, ja tuote erotetaan; saanto 250 mg, sp. 140°C 30 (hajoaa).

IR- ja NMR-spektrien perusteella mukana on 20 % epäpuhtauksia, lähinnä lähtöainetta.

35

Claims (2)

19 6 3 94 3

1. Välituotteina 7-asyyliamido-3-(1-karboksi-alempi-alkyyli-tetratsoli-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyyli-5 happojen, joiden kaava on 1 /S R -NH —-f N N- N i L i * J-N >CHS-^ ^ I N 10 | COOH (CH0) -COOH 2 n jossa R on asyyli ja n on kokonaisluku 1 - 3, ja niiden suolojen valmistuksessa käytettävät 7-aminn--3-(1-karboksi-alempi-alkyylitetratsoli-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbok-15 syylihapot, joiden kaava on S H0N—-f ^ N N 2 1 1| I J—B

20 COOH (CHj -COOH 2 n jossa n merkitsee samaa kuin edellä, ja näiden suolat.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että n on 1.