FI63037B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara stbila sulfonater av s-adenosyl-l-metionin - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara stbila sulfonater av s-adenosyl-l-metionin Download PDFInfo
- Publication number
- FI63037B FI63037B FI751946A FI751946A FI63037B FI 63037 B FI63037 B FI 63037B FI 751946 A FI751946 A FI 751946A FI 751946 A FI751946 A FI 751946A FI 63037 B FI63037 B FI 63037B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- acid
- sam
- solution
- added
- methionine
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
I. .ίί'-ΪΙ Γο, /<4Χ KU ULUTUSJULKAISU ,--.-- ^ (11) UTLÄGGNI NGSSKRIFT 6 30 3 7 C (45) Γαtentti riy tly 11 34 1933 ^ T ^ (51) Kv.ik.3/rnt.a.3 C 07 H 19/16 SUOMI—FINLAND (21) ρ»·η«ιι»*#ιιιυ«—ΡΜίαηιβΜιι 7519U6 . (22) HtkumlipUv» Antöknlnjtdtj 03.07-75 V 7 (23) AlkupUvi—CJkiftMttdic 03.07-75 (11) Tulkit luikituksi — Blivit offuMlig 13.01.76
Ratantti- ja rekisterihallitus (44) Nlhuviktlp»» j. kudjulkAun pm-
Patent· och ragiatarstyrdaan AmMean utitgd och utLtkrMkan puMicund 31.12.82
(32)(33)(31) Pnr4«ty«ueikuui-4«|Wpnodtut 12.07.7U Italia-Italien(lT) 25128 A/7U
(71) Bioresearch Netherland B.V., Schiedamse Vest 15U, 3011 BH Rotterdam, Alankomaat-Nederländerna(NL) (72) Alberto Fiecchi, Milano, Italia-Italien(lT) (7U) Oy Kolster Ab (5U) Menetelmä terapeuttisesti käytettävien stabiilien S-adenosyyli-L--metioniinin sulfonaattien valmistamiseksi - Förfarande för fram-ställning av terapeutiskt användbara stabila sulfonater av S-adeno-syl-L-met ionin
Keksinnön kohteena on menetelmä terapetittisesti käyttökelpoisten stabiilien S-adenosyyli-L-metioniinin (SAM) sulfonaattien valmistamiseksi, joiden kaava on SAM+/fiS04".H2S047x/R(S03H) ^ 1 jossa x on 0 tai 1, n on 1 tai 2, ja y on 0,5, 1, 1,5, 2, 3 tai 4, jolloin x = 0, n = 1 jay=3 tai 4, x = 0, n = 2 ja y = 1,5 tai 2, x = 1, n = 1 ja y = 1 tai 2, tai x = 1, n = 2 ja y = 0,5 tai 1, ja R on sulfonihappotähde, joka on johdettu seUraavasta sulfonihaposta: metaanisulfonihappo, etaanisulf onihappo, 1-n-dodekaanisulfonihappo, 1-n-okta-dekaanisulf inihappo, 2-kloorietaanisulfonihappo, 2-bremietaanisulfonihappo, 2-hydroksietaanisulfonihappo, 3-hydroksipropaanisulfonihappo, d-, 1-, d,l-10- 63037 kamferisulfanihappo, d-, 1-, d,l-3-hromikamferi-10-sulfonihappo, kysteiini-happo tad. kondroitiinirikkihappo.
S-adenosyyli-L-rnetioniini (SAM) on luontoperäinen tuote, jota löytyy kaikissa elävissä organismeissa bakteereista kasveihin, yksisoluisista eliöistä ylempiin imettäväisiin, ihminen mukaan luettuna, ja jonka kaava on
NH
UD
N CH_ NH.
I I 3 I 2 CH-CH-CH-CH-CH_-S-CH„-CH„-CH-OCOi Il 2 2 2 OH OH + -O- X" jossa X on anioni.
Elävissä organismeissa SAM'ia muodostuu entsyymien väliintulon vaikutuksesta (Sradenosyy limetioniinisyntetaasi tai S-adenosyy1itransferääsi) solulima-alueella lähtien metioniinista oletettavasti tavintoaineiden kanssa tai ATP:sta, joita on energiareservinä läsnä jokaisessa elävässä solussa.
Qn myös jonkun aikaa ollut tunnettua, että SAM on tuote, jölla en perustavaa laatua oleva merkitys suuressa joukossa biologisia entsymaattisia trans-metylointireaktioita, minkä johdosta sitä aina on pidetty erittäin tärkeänä reagenssina biokemiassa.
Tähän aineeseen liittyvä suuri ongelma on kuitenkin aina ollut sen erittäin suuri pysymättömyys ympäristön tai sitä korkeauroissa lämpötiloissa sekä sen valmistusmenetelmät, jotka ovat työläitä ja joita ei voida helposti toteuttaa teollisessa mittakaavassa.
Viime vuosina on tutkimus, joka on kohdistettu SAM'in stabiloimiseen siinä määrin, että sen käyttö saataisiin tehdyksi mahdolliseksi biologisen tutkimuksen alueella, suunnattu suolojen valmistukseen, jotka ovat pysyviä normaaleissa länpötila- ja kosteusolosuhteissa. Tällä tavalla on valmistettu SAM'in kloridi ja sulfaatti, mutta niillä on käyttöä ainoastaan reagenssina biokemiassa ja ainoastaan lyhyeksi ajaksi, koska niiden pysyvyys kuivassakin tilassa on a jeni suhteen rajoitettu matalissa lämpötiloissa. Lisäksi niiden valmistusprosessit ovat käyttökelpoisia pienten määrien tuottamiseksi, mutta varmasti ei tuotantoa varten teollisessa mittakaavassa.
3 63037
Nyt on keksitty uusia SAM'in suoloja, jotka ovat ajan suhteen rajoittamattomasti pysyviä lämpötiloissa 45°C:een asti ja joita voidaan valmistaa uudella menetelmällä, joka voidaan helposti saattaa tapahtumaan taloudellisesti teollisessa mittakaavassa antaen hyvät saannot. Näillä suoloilla on osoittautunut olevan voimakas parannuskyky sopivilla ihmisterapian alueilla, usein ilmeisesti ilman vastaavuussuhdetta niiden välillä. Uudet suolat ovat SAM'in kaksois-suoloja sulfonihappojen kanssa, vastaten kaavaa SAM.4RSO.jH, jossa RSO^H on joku seuraavista hapoista: metaanisulfonihappo, CH^SO^H; etaanisulfonihappo, C^H^SOgH; n-dodekaanisulfonihappo, 1 -oktadekaanisulfonihappo, C18H37S03H> 2-kloorietaanisulfonihappo, C1C2H^S03H; 2-bramietaanisulfOnihappo, BrC2H^S03H> 2-hydroksietaanisulfonihappo, H0C2H4SO3H; 3-hydroksipropaanisulfonihappo, H0C3HgSO3H; d, 1 -10-kamferi-sulfonihappo, C^H^OSO^; d-, 1-, d,1-3-brcmikamferi-10-sulfonihappo, C^H^BrOSO^; kysteiinihappo,C3HgNS03H. Uusiin suoloihin kuuluvat myös SAM’in suolat sulfonihappojen kanssa, joiden yleinen kaava on SAM.3RS0.jH, jossa RS03H on bentseenisulfonihappo (CgHj.S0.jH), p-kloori-bentseenisulfonihappo (CIC^H^SO^), 2-mesityylibentseenisulfonihappo ((CH3) 3CgH2S03H), 4-bifenyylisulfonihappo (C^H^SO-jH) , 1 -naftaleenisulfonihappo (C^qH^SO^) , 2-naftaleenisulfonihappo (C^H^SOgH), 5-sulfosalisyylihappo (C^Hj^SO^) tai p-asetyylibentseenisulfonihappo (CgH^OSO-jH), sekä SAM'in suolat 1,2-etaanisulfonihapon (SAM.2C2H4(SOgH)2), O-bentseenidisulfanihapon (SAM. 1,5CgH4(S03H)2) ja kondroitiinirikkihapan (SAM. 40.^^130^5) kanssa. Uusiin yhdisteisiin kuuluvat myös seuraavat kaksoissuolat rikkihapon ja jonkun edellä mainitun sulfanihapan välillä: SAM+.HS04“.H2S04.RSOgH ja SAM+.HS04”.H2S04.2RS03H, joissa RSOjH tarkoittaa jotakin edellä mainituista sulfonihapoista tai edustaa samanarvoista happoa etaanidisulfonihapon, o-bentseenidisulfonihapon tai kondroitiinirikkihapon tapauksessa.
Suuri tekninen edistys, joka näillä uusilla suoloilla saavutetaan, on niiden pysyvyys jän suhteen 45°C:ssa kuivassa tilassa.
Kaikkien keksinnön mukaisesti valmistettujen happojen SAM-pitoisuus pysyy muuttumattomana jopa 360 päivän ajan 45°C:ssa kuivassa tilassa. Kahdella pysyviirmällä tähän asti tunnetulla SAM-suolalla, kloridilla ja sulfaatilla, on SAM-pitoisuus 30 päivän varastoinnin jälkeen 45°C:ssa kuivassa tilassa 20 % ja vastaavasti 50 %; 60 päivän varastoinnin jälkeen on edellinen kokonaan hajonnut, kun taas sulfaatti sisältää ainoastaan 5 % alkuperäisestä SAMista.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että a) valmistetaan S-adenosyyli-L-metioniinin väkevä liuos, 63037 4 b) säestetään vesiliuoksessa oleva S-adenosyyli-L-metioniini pikrolo-nihapon kyllästetyllä vesiliuoksella tai pikrolonihapon kyllästetyllä liuoksella orgaanisessa liuottimessa, joka liukenee, veteen, c) saostettu pikrolonaatti liuotetaan sulfonihappoliuokseen, jolloin sulfanihappo on jokin edellä mainituista sulfanihapoista, tai näiden sulfoni-happojen ja rikkihapon liuoksessa, d) S-adenosiili-L-metioniini-sulfonaatti saostetaan lisäämällä orgaanista liuotinta, joka sekoittuu täydellisesti vaiheessa c) käytettyyn liuotti-meen.
Kaksi ensimmäistä prosessin vaihetta kaksoissuolojen saamiseksi rikkihapolla ovat samanlaiset, kun taas seuraavat vaiheet voidaan toteuttaa seuraavasti: c') liuotetaan suodatettu sakka seokseen, jossa on yhtä suuret tilavuus-osat liuotinta, joka on osittain sekoittuva veden kanssa, kuten metyylietyyli-ketöniä, metyyli-isobutyyliketöniä, n-butanolia teli isobutanolia, sekä jonkun edellä mainitun sulfanihapon sekä rikkihapon vesiliuosta, jonka normaalisuus on yhtä suuri kimmankin hapon suhteen.
d') erotetaan orgaaninen kerros ja lisätään vesipitoiseen liuokseen ketoni- tai alkoholi-liuotinta, joka on täydellisesti veteen liukeneva, e') liuotetaan sakka uudelleen 10 - 20-% happoliuokseen, jota käytettiin vaiheessa c') jossakin vaiheen c) alkoholi-liuottimessa ja käsitellään liuosta väriä poistavalla hiilellä, f') lisätään orgaanista liuotinta, joka pystyy seostamaan puhtaan SAM'in hyvässä kiteisessä ja helposti suodatettavissa olevassa muodossa.
Erään muunnelman mukaan saadaan kaksoissuoloja saattamalla edellä esitetyn vaiheen d) lopussa saatu yksinkertainen suola seuraaviin käsittelyvaiheisiin, joissa e") liuotetaan sakka uudelleen vesipitoiseen liuokseen, jossa on yhtä suuret normaalisuudet rikkihappoa ja edellisessä vaiheessa c) käytettyä happoa, ja käsitellään liuosta väriä poistavoilla hiilellä.
63037 5 f") lisätään orgaanista liuotinta, joka pystyy seostamaan puhtaan SAM-suolan kiteisessä ja helposti suodatettavissa olevassa muodossa.
Menetelmän vaihe a) voidaan toteuttaa eri tavoilla, jotka kaikki ovat yhtä käyttökelpoisia.
Erään vaihtoehdon mukaisesti rikastetaan hiivaa (Saccharoryces cerevisiae Tarulopsis utilis, Candida utilis jne.) SAM:n suhteen lisäämällä metioniinia sopivissa olosuhteissa (Schlenk, Enzymologia 29, 283 (1965)) yhdessä etyyliasetaatin kanssa ja sitten rikkihapon kanssa, jonka väkevyys on 0,1 - 0,5, edullisesti 0,35 g ekv/1, huoneen lämpötilassa, jolloin saadaan aikaan solujen liukeneminen ja käytännöllisesti katsoen 100 %:n läsnäolevasta SAMista kulkeutuminen liuokseen. Edullisesti ovat käytetyn veden ja asetaatin määrät 1/20 - 1/5 kosteiden solujen painosta ja käsittelyä jatketaan 15-45 minuutin, edullisesti 30 minuutin ajan.
Lisätään sitten rikkihappoa ja liuottamista jatketaan 1-2 tuntia, edullisesti 1,5 tuntia. On huomattava, että hiivasolujen liuottaminen, joka suoritetaan orgaanisen liuottimen ja laimean rikkihapon seoksella an sopivampi kuin normaalisti perkloorihapolla ympäristön lämpötilassa tai muurahaishapolla tai etikkahapolla 60 C:ssa ja niiden kaltaisilla suoritettava liuotus, sikäli että se ei ainoastaan tapahdu ympäristön lämpötilassa, mikä on edullista SAM'in pysyvyydelle, vaan saatetaan tapahtumaan sellaisissa olosuhteissa, että liuos voidaan helposti suodattaa selluloosajäännöksistä ja ei sisällä mitään epäpuhtauksista, joita on läsnä, kun käytetään muita liuotusmenetelmiä, ja joita on vaikea poistaa tunnetuilla menetelmillä puhtaan SAM'in valmistamiseksi.
Erään toisen vaihtoehdon mukaan voidaan vaihe a) toteuttaa valmistamalla SAM entsymaattisella synteesillä antamalla entsyymi ATP-metioniiniadenosiltrans-feraasin (E.C. 2.4.12) vaikuttaa inkuboimisseokseen, joka sisältää adenosiltri-fosfaattia (ATP) ja metioniinia.
Olennainen edellytys tämän menetelmän teolliselle täytäntöönpanolle on, että entsyymi on puhdas ja on muodossa, joka voidaan helposti eristää sekä alku-inkuboimisseöksesta että valmistuneesta SAM:sta.
Entsyymi-ATP^netioniini-adenosiltransferaasi voidaan puhdistaa kromato-grafisesti affiniteetti- ja pylväsreaktioraenetelmällä, joka tekee mahdolliseksi saavuttaa edellä mainitut tavoitteet.
Spesifisen entsyymin affiniteetti-kromatografia toteutetaan perkloloi-malla sitä sisältävä liuos (esimerkiksi hiivan tai "Escherichia coli'n" raaka-uutetta) pylvään läpi, joka on täytetty kiinteällä tukiaineella, johon an kova-lenttisesti sidottu ryhmä, joka toimii entsyymin kilpailevana estoaineena. Erinomainen pylväs tällaista puhdistusmenetelmää varten on polysakkaridien aktivoi- 6 63037 tu geeli, johon kovalenttisesti on sidottu L-lysiiniä. Spesifisen entsyymin affiniteetti kiinteään matriisiin sidotin lysiinijäännöksen suhteen aiheuttaa viivytyksen kolonnin vaikutuksesta entsyymin eluointiin ja siten on mahdollista saada aikaan erottuminen muista proteiineista hyvin puhtaassa muodossa.
Entsyyminä erottaminen sitä sisältävästä eluaatista, käytettäväksi jäl-keentulevassa entsymaattisessa synteesivaiheessa, on kuitenkin antanut täysin epätyydyttäviä tuloksia, koska sen, kun se kerran ole erotettu, pysyvyys väheni ajan mukana ja lisäksi, sen jälkeen kun sitä oli käytetty ainoastaan yhden kerran SAM'in synteesissä se tuhoutui jälkeentulevissa SAM-eristysprosesseissa.
Sensijaan päästään erinomaisiin tuloksiin adsorboimalla spesifisen entsyymin sisältävä eluaatti sopivaan kiinteään kantimeen ja saattamalla katalyyttinen reaktio metioniinin ja ÄTP:n välillä tapahtumaan pylväässä, mikä johtaa SAM'in muodostumiseen, Sopiva kiinteä kännin käsittää polysakkaridin, joka on aktivoitu reagenssilla, joka sopii proteiinien sitomiseen kiinteisiin kantimiin, kuten syaanibramidilla.
Perkoloimalla ATP:n ja metioniinin liuosta sopivassa puskuriliuoksessa pylvään läpi saadaan SAM'ia sisältävä eluaatti pylvään pohjalle.
Menetelmän vaihe b) tekee mahdolliseksi SAM'in erottamisen erittäin puhtaassa tilassa. Itse asiassa ainoa yhdiste, joka happamessa ympäristössä saostuu pikloronihapolla, on SAM, kuten on osoitettu ohutkerroskromatografises-ti Anal. Biochem. 4:n, 16 - 28 (1971) mukaisesti.
Pikloronihapan toiminta on täten äärinmäisen ja yllättävän selektiivinen. Muut saostusaineet, joita on näihin asti lisätty, kuten pikriinihappo, Reinecke-suola tai boorihappo antavat hyvin epäpuhtaita sakkoja, jotka aina vaativat jälkeen tulevan SAM'in puhdistamisen krcxnatografisesti ioninvaihtopylvääs-sä.
Pikloronihapon vesiliuosten tai tämän hapon liuosten käyttö edellä mainituissa orgaanisissa liuottimissa ei aiheuta erityisiä ongelmia, ja se on toimitus, joka suoritetaan ympäristön lämpötilassa. Vaihe c) saatetaan edullisesti tapahtumaan liuoksilla, jotka sisältävät jonkin edellä mainituista sulfonihapois-ta väkevyyksissä väliltä 0,25 - 1,5 g ekv/1, edullisesti 1 g ekv/1, sekä jollakin esitetyistä alkoholiliuottimista. SAM-syötön hajoaminen pikloronihapolla on täydellinen, kuten kiinteän aineen kokonaan liukeneminen'osoittaa.
Menetelmän vaihe d) saatetaan edullisesti tapahtumaan käyttäen 4-10 tilavuusosaa (alkoholiliuoksen tilavuudesta laskettuna) liuotinta, jona on bents-eeni, tolueeni, dietyylieetteri, di-isopropyylieetteri, asetoni, metyyli-iso-butyyliketoni, metyyli- teli etyyliasetaatti tai tetrahydrofuraani.
7 63037
Menetelmän vaihe e) yhdessä vaiheen f) kanssa muodostaa lopullisen toimenpiteen halutun SAM-suolan saamiseksi. Tämä suola, joka on peräisin edellisestä vaiheesta d) liuotetaan uudelleen liuokseen, jonka väkevyys on 0,1 - 0,5 g ekv/1, edullisesti 0,2 g ekv/1 hapon suhteen, jota käytettiin edellisessä vaiheessa c), liuottimessa, jona on 1 - 4 hiiliatomia sisältävä 2-metoksi-etanoli tai 2-etdksietanoli.
Menetelmän vaihe f) saatetaan tapahtumaan edullisesti käyttäen 4-8 tilavuusosaa (laskettuna alkoholiliuoksen tilavuudesta) orgaanista liuotinta, jona on bentseeni, tolueeni, dietyylieetteri, di-isopropyylieetteri, asetoni, me-tyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketani, metyyli- tai etyyliasetaatti, tetra-hydrofuraani tai kloroformi.
Keksinnön mukaisesti saatuja yksinkertaisia SAM-suoloja voidaan säilyttää kuivassa tileissä rajoittamattomasti, käytännöllisesti katsoen ilman muutosta, kuten jo todettiin.
Keksinnön mukaisessa menetelmässä ei käytetä vettä missään vaiheessa saostamisen jälkeen pikloronihapolla, mikä varmistaa pienimpienkin vesiliukoisten epäpuhtauksien jälkien täydellisen poissaolon.
SAM'in kaksois suoloja rikkihapon ja jonkun sulfonihapon kanssa saadaan edullisesti toteuttamalla menetelmän vaihe c') vesipitoisilla liuoksilla, jotka sisältävät jonkun edellä mainituista sulfanihapoista ja rikkihappoa kummankin väkevyyden ollessa väliltä 0,05 - 0,2 g ekv/1, edullisesti 0,1 g evk/1 orgaanisessa liuottimessa, joka on osittain sekoittuva veden kanssa, kuten metyy1ietyyliketo-nissa tai n-butanolissa. Orgaanisen liuottimen käyttö tekee mahdolliseksi vesipitoisten happoliuosten hyvin voimakkaan vähentämisen ja se poistaa käytännöllisesti katsoen kaiken pikloronihapon. Menetelmän vaihe d') toteutetaan edullisesti käyttäen 4-8 tilavuusosaa (laskettuna vesipitoisen liuoksen tilavuudesta) liuotinta, kuten asetonia, metyylialkoholia, etyylialkoholia tai prcpyylialkoholia.
On myös yllättäen havaittu, että jos vaiheessa e') käytetään pienintä mahdollista alkoholimäärää, joka tarvitaan liuottamaan sakka, joka on peräisin vaiheesta d'), erottuu kaksoissuola SAM+.SO^ .H^SO^.2 RSO^H jälkeen tulevassa saostusvaiheessa f*j.
Jos kuitenkin vaiheessa e') käytetään alkoholin tilavyusmäärää, joka on ainakin kaksinkertainen tarvittavaan tilavuusmäärään nähden, erottuu kaksoissuola SAM+.HSOj .I^SO^.RSO^H saostusvaiheessa f').
Näiden väliltä olevien alkoholimäärien käyttö johtaa näiden kahden suolan seoksen muodostumiseen.
RSO^H tarkoittaa jotakuta edellä mainituista sulfanihapoista tai samanarvoista happoa etaanidisulfonihapon tai kondroitiinisuöfonihapon ollessa kysymyksessä.
8 63037
Jonkun tai joidenkin näistä uusista kaavan I mukaisista suoloista lopullinen saostuminen (vaihe f') vaatii orgaanisen liuottimen käyttöä, jona on bents-eeni, tolueeni, dietyylieetteri. di-iscpropyylieetteri, kloroformi, asetoni, me-tyylietyyliketoni, metyyli-isobutyyliketoni, metyyli- tai etyyliasetaatti, iso-amyylialkoholi tai tetrahydrofuraani.
Kuten jo todettiin, voivat SAM-kaksoissuolat, jotka on saatu tämän keksinnön mukaisesti, säilyä rajoittamattomasti kuivassa tilassaan, käytännöllisesti katsoen ilman muutosta.
SAM-kaksoissuolojen valmistus rikkihapolla ja jollakin edellämainituista sulfonihapoista käyttäen toista muunnelmaa, käsittää vaiheessa d) saadun suolan uudelleen liuottamisen (vaihe e1') liuokseen, jonka väkevyys on 0,05 - 0,2 g ekv/1 ja edullisesti 0,1 g ekv/1 yhtä suuret määrät rikkihappoa ja happoa, jota käytettiin edellisessä vaiheessa c), jona liuottimena on 1 - 4 hiiliatomia sisältävä alkoholi tai 2-metoksietanoli tai 2-etoksietanoli.
Yllättäen on myös havaittu, että jos vaiheessa e”) käytetään pienintä mahdollista alkoholimäärää, joka tarvitaan liuottamaan sakka, joka on peräisin vaiheesta d), muodostuu kaksoissuola SAM+.HS0. .HoS0..2 RSO-H (jossa RS0,H tarkoit-taa jotakuta sulfonihapoista tai edustaa samanarvoista happoa, etaanidisulfoni-happoa tai kondroitiinirikkihappoa) jälkeentulevassa saostusvaiheessa f").
Jos kuitenkin käytetään metanolin tilavuusmäärää, joka on ainakin kaksinkertainen vaadittavaan pienimpään mahdolliseen tilavuusmäärään verrattuna vaiheessa e1') muodostuu kaksoissuola SAM+.HS0j .H^SO^.RSO^H jälkeentulevassa saostusvaiheessa f'').
Yhden tai useanman näistä kaksoissuoloista lopullinen saostaminen (vaihe f") vaatii orgaanisen liuottimen käyttöä, jona on bentseeni, tolueeni, dietyylieetteri. di-iscpropyylieetteri, kloroformi. 1-5 hiiliatomia sisältävä etyyli-tai metyyli asetaatti, tetrahydrofuraani, asetoni, metyylietyyliketoni tai metyy-li-isobutyyliketoiii.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksinnön mukaista menetelmää.
Esimerkki 1 90 kgzaan SAM:n suhteen (6,88 g/kg) Schlenk*in (Enzymologia 29, 283 (1965)) mukaisesti rikastettua hiivaa lisätään 111 etyyliasetaattia ja 11 1 vettä ympäristön lämpötilassa. 30 minuutin energisen sekoittamisen jälkeen lisätään 50 1 0,35-n rikkihappoa ja jatketaan sekoittamista vielä 1,5 tuntia. Suodattamisen ja pesemisen jälkeen vedellä saadaan 140 1 liuosta, joka sisältää 4,40 g/1 SAM'ia, mikä vastaa 99,5 % lähtöaineessa mukanaolleesta. Edellä saatuun liuokseen lisätään sekoittaen liuos, jossa on 2,3 kg pikloronihappoa 25 l:ssa metyylietyyliketöniä. Seistyään yli yön sakka erotetaan linkoamalla ja pestään vedellä.
63037 9
Sakka liuotetaan sekoituksenalaisena ympäristön lämpötilassa 6,2 l:aan 1-n metaanisulfonihapon liuosta metanolissa. Liukenemattoman aineen jälkien eroon suodattamisen jälkeen lisätään 50 1 asetonia liuokseen. Sakan täydellisen lasketumisen jälkeen sen päällä oleva kerros dekantoidaan ja liukenematon jäännös pestään pienellä asetonimäärällä.
Sakka liuotetaan 25 l:aan 0,25-n metaanisulfonihapon liuosta metanolissa, lisätään väriä poistavaa hiiltä ja suodatetaan liuos. Suodokseen lisätään 125 1 metyyli-isobutyyliketonia.
Saostuu 1089 g kiteistä ja helposti suodatettavissa olevaa sakkaa, joka liukenee yli 20-%risesti veteen muodostaen värittömän liuoksen. Suola on ainoastaan vähäisen liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Anal. Biochem. 4:n, 16 - 28 (1971) mukainen ohutkerroskramatografinen analyysi osoittaa tuotteen olevan vapaan epäpuhtauksista. Analyysitulokset on esitetty taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa kaavan C.cH-.11.0-S. 4 CH.O.S kanssa.
10 2.-5 O -) 4 o
Uusi yhdiste tunnistettiin myös entsymaattisella menetelmällä, joka pohjautui nikotiiniamidin ja guanidiinietikkahapon entsymaattiseen metylointiin SAMrlla (G. L. Cantoni, J. Biol. Chem. 189, 745 (1951); G. de la Hoba, B. A. Jameison, S. H. Mudd ja H. H. Richards J. Am. Chem. Soc. 81 3975 (1959)).
Toistamalla menetelmä sameilla tavalla, mutta käyttäen n-dodekaanisulfcni-hapon ja 1-n-oktadekaanisulfonihapon suoloja saadaan vastaavasti seur aavat yhdisteet: C15H23N6°5S' 4 C14H26°3S‘ C15H23N6°5S- 4 C18H38°3S joiden analyysiarvot on annettu taulukossa 1.
Esimerkki 2 1,15 kg pikloronihappoa liuotettuna 10 1:aan isobutyylialkoholia lisätään 70 l:aan liuosta, joka on peräisin hiivasolujen liuottamisesta ja joka on saatu käyttäen samaa raaka-ainetta ja samaa menetelmää kuin esimerkissä 1.
Yhden yön seisottamisen jälkeen muodostunut sakka erotetaan linkoamalla.
Sakka liuotetaan ympäristön lämpötilassa sekoituksen alaisena 3,1 Iraan etaanisulfonihapon 1-n liuosta etanolissa. Pienen määrän liukenematonta ainetta eroon suodattamisen jälkeen liuokseen lisätään 25 1 dietyylieetteriä. Seisomisen jälkeen seos suodatetaan ja kiinteä aine pestään pienellä määrällä eetteriä. Kiinteä aine liuotetaan 12,5 Iraan 0,25-n etaanisulfonihapon liuosta etanolissa, lisätään väriä poistavaa hiiltä ja seos suodatetaan. Suodokseen lisätään 63 1 bentseeniä.
63037 10
Saostuu 585 g suolaa, joka suodatetaan ja kuivataan. Yhdiste on yli 20-%risesti liukoinen veteen ja niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerroskrcmatografia (ks. esimerkki 1) osoittaa yhdisteen olevan vapaan kaikista epäpuhtauksista. Analyysiarvot on annettu taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa tuotteen kanssa, jolla on kaava C^H^N^O,.. 4 C^HgO^S.
Uusi yhdiste tunnistettiin myös esimerkissä 1 annetulla entsymaattisel-la menetelmällä.
Toistettaessa menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen 2-brcmietaani-sulfonihapon ja 2-kloorietaanisulfonihapon suoloja saadaan vastaavasti seuraavat yhdisteet: C15H23N6°5S· 4 C2H5S°3Br' Ja C15H23H6°5S· 4 C2K5S03C1 joiden analyysiarvot on annettu taulukossa 1.
Esimerkki 3 1,15 kg pikloronihappoa liuotettuna 12 l:aan n-butanolia lisätään 70 l:aan liuosta, joka on peräisin hiivasolujen liuottamisesta ja joka on saatu samalla liuotusmenetelmällä ja sanalla raaka-aineella kuin eismerkissä 1. Seistyään yli yön sakka erotetaan linkoamalla. Sakka liuotetaan ympäristön lämpötilassa' sekoituksen alaisena 3,1 Iraan D,L-10-kamferirikkihapon 1-n liuokseen 1-propano-lissa. Lisätään 25 1 bentseeniä. Erotettu kiinteä aine liuotetaan 12,5 Iraan kamferirikkihapon 0,25-n liuosta 1-propanolissa ja sen jälkeen kun on lisätty hiiltä ja suodatettu, lisätään suodokseen 63 1 asetonia.
Saadaan 928 g suolaa. Yhdiste en liukoinen veteen yli 20-%risesti ja ainoastaan niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerros-kranatografian perusteella yhdisteen osoitetaan olevan vapaan kaikista epäpuhtauksista.
Analyysiarvot on annettu taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa tuotteen kanssa, jolla on kaava C^I^NgOgS. 4 C^H^O^S.
Uusi yhdiste tunnistettiin myös esimerkissä 1 annetulla entsymaatti-sella menetelmällä.
Toistamalla menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen d-3-kamferi-10-rikkihappoa, saadaan suola, jolla on kaava C15H23N6°5S· 4 C10H15°4SBr' ja jonka analyysiarvot on annettu taulukossa 1.
63037 11
Esimerkki 4
Spesifisen entsyymin puhdistus 50 ml Sepharose'a (polysakkaridia, jota tuottaa Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Ruotsi) kakkaroituneena ja veteen suspendoituna käsitellään syaanihromidilla tunnettujen menetelmien mukaisesti aminoryhmiä sisältävien aineiden sitomiseksi polysakkaridi geelistä koostuvaan matriisiin. Näin valmistettuun geeliin lisätään ylimäärä L-lysiiniä. Reaktion jälkeen sitä pestään toistuvasti tislatulla vedellä, pH 8,5 puskuriseoksella ja pH 4,5 puskuriseoksella. Geeliä käytetään sitten pylvään täyttämiseen, jonka läpimitta on 1,5 cm ja korkeus 30 cm. Puskuriseosta, jossa on 0,05-m trietanoliamiinia ja 0,01-m ja jonka pH on 8,0, johdetaan pylvään läpi, kunnes täydellinen tasapaino saavutetaan. 2 ml hiivauutetta, joka sisältää spesifisen entsyymin ja joka on saatu so-nidioimalla tai homogenoimalla kuivan jään kanssa ja mahdollisesti rikastamisen jälkeen spesifisellä entsyymillä, kerrostetaan pylvääseen. Pylvästä eluoidaan sitten sanalla puskuriseoksella, jota käytettiin tasapainottamiseen, seuraten proteiinien jakautumista eluaattiin ultraviolettispektrofotcmetrisin mittauksin. Samanaikaisesti syntetaasi-aktiivisuus mitataan eri jakeissa J.A. Stekol' in mukaisesti, Methods in Enzymology, voi. 6, sivu 566 (1963). Jakeet, jotka osoittavat asiaan kuuluvaa syntetaasi-aktiivisuutta, yhdistetään ja näin saadun liuoksen spesifinen aktiivisuus on ainakin 20 kertaa suurempi kuin raakauutteen.
Entsyymiä voidaan edelleen väkevöidä tässä liuoksessa saostamalla suoloilla, orgaanisilla liuottimilla tai muiden tunnettujen menetelmien mukaisesti proteiiniliuosten väkevöimiseksi.
SAM'in valmistaminen 30 ml rakeista Sepharose -gee 1 iä aktivoidaan syaanihromidilla proteiinien sitomiseksi polysakkaridigeeli-matriiseihin. 4 ml spesifisen entsyymin, joka on puhdistettu kuten edellä, ja joka sisältää n. 100 mg proteiinia, liuosta lisätään aktivoituun geeliin. Aktivoitua geelisuspensiota ja entsyymiliuosta sekoitetaan 4°C:ssa 18 tuntia. Suspensio pestään vedellä. Tämä pesuneste sisältää n.
70 % koko entsymaattisesta aktiivisuudesta, joka on alunperin läsnä spesifisen entsyymin liuoksessa. Inkuboimalla jäljellä olevaa sakkaa, havaitaan edellä mainitulla menetelmällä syntetaasiaktiivisuuden määrittämiseksi, että n. 20 % koko-naisaktiivisuudesta on sitoutunut polysakkaridiin.
Näin valmistettua Sepharose -gee 1 iä käytetään pylvään täyttämiseen, jonka läpimitta on 1,5 cm ja korkeus 20 cm. Liuosta, joka sisältää 0,675 mol/1 trietanoliamiinia, 0,150 mol/1 magnesiunsulfaattia, 0,05 mol/1 ATP, 0,05 mol/1 M-metioniinia ja 0,01 mol/1 KC1, valutetaan pylvään läpi nopeudella 5 ml/tunti 63037 12 25 - 27°C:een lämpötilassa. Pylväästä tuleva eluaatti analysoidaan SAM-pitoisuu-den suhteen, jolloin saadaan konversioksi 30 %.
SAM p-kloorlbentseenlsulfonaatin valmistus 103 ml:aan eluaattia, joka sisältää 6 g/1 SAM:ia, lisätään rikkihappoa, kunnes saavutetaan pH 3, ja tähän liuokseen sekoittaen liuos, jossa on 2 - 3 g pikloronihappoa 25 mltssa metyylietyyliketonia. Annetaan seoksen seistä yli yön, jonka jälkeen sakka suodatetaan ja pestään vedellä.
Sakka liuotetaan uudelleen 6,2 ml:aan p-klooribentseenisulfonihapon 1-n liuosta 2-metoksietanolissa.
Sitten lisätään 50 ml tolueenia. Erottunut kiinteä aine liuotetaan 12,5 ml:aan p-klooribentseenisulfonihapon 0,25-n liuosta 2-metoksietanolissa, lisätään hiiltä ja suodatetaan, ja lisätään suodokseen 60 ml kloroformia, jolloin suola saostuu; saanto 1,43 g. Yhdiste on liukoinen veteen yli 20-%:isosti ja on ainoastaan vähäisesti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerroskromato-grafisen analyysin mukaan suola ei sisällä epäpuhtauksia.
Analyysiarvot on esitetty taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa yhdisteen kanssa, jolla on kaava C..H NO S. 3 CLH^CIO-S.
ib 23 6 5 65 3
Uusi yhdiste tunnistettiin myös esimerkissä 1 kuvatulla entsymaattisella menetelmällä.
Toistamalla menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen p-asetyylibentsee-nisulfoni-, o-bentseenidisulfoni-, 4-bifenyylisulfoni-, 2^mesityleenisulfani- ja 5-sulfosalisyylihappoa, saadaan seuraavien kaavojen mukaiset suolat: C15H23N6°5S· 3 C8H8°4S' C15H23N6°5S· 1'5 C6H6°6S2' C15H23N6°5S‘ 3 C12H10°3S/ C15H23N6°5S· 3 C9H12°3S' ja C15H23N6°5S· 3 C7H6°6S Analyysiarvot on esitetty taulukossa 1.
Esimerkki 5 70 l:aan SAM: ia sisältävää liuosta lisätään pikloronihappoa kuten esimerkissä 1 on selitetty. Muodostunut sakka liuotetaan huoneen lämpötilassa sekoittaen 3,1 l:aan 1,2-etaanidisulfonihapon 1-n liuosta metanolissa.
Sitten lisätään 25 1 asetonia. Erotettu kiinteä aine liuotetaan 12,5 l:aan 1,2-etaanidisulfonihapon 0,25-n liuosta metanolissa ja sen jälkeen kun on lisätty hiiltä ja suodatettu, lisätään suodokseen 60 1 metyyli-isobutyyliketonia.
63037
Saadaan 546 g suolaa. Yhdiste on liukoinen yli 20-%risesti veteen ja ainoastaan niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerros-krcrnatografiällä osoitetaan yhdisteen olevan vapaan kaikista epäpuhtauksista. Analyysiarvot on esitetty taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa yhdisteen kanssa, jonka kaava on C1cH N 0_S. 2 C_H O S .
1D 23 O D Z Ό Ό Z
Uusi yhdiste tunnistettiin iryös esimerkissä 1 kuvatulla entsymaattisella menetelmällä.
Esimerkki 6 70 Iraan SAM:ia sisältävää liuosta lisätään pikloronihappoa kuten esimerkissä 1 on selitetty. Muodostunut sakka liuotetaan huoleen länpötilassa sekoittaen 3,1 l:aan 2-hydroksietaanisulfonihapon 1-n liuosta etanolissa.
Sitten lisätään 25 1 iretyyli-isobutyyliketonia.
Erotettu kiinteä aine liuotetaan 12,5 l:aan 2-hydroksietaanisulfonihapan 0,25-n liuosta etanolissa ja sen jälkeen kun on lisätty hiiltä ja suodatettu, lisätään suodokseen 80 1 tetrahydrofuraania.
Saadaan 632 g suolaa. Yhdiste on liukoinen veteen yli 20-%risesti ja ainoastaan niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerroskro-matografisen analyysin mukaan yhdiste on vapaa kaikista epäpuhtauksista.
Analyysiarvot on esitetty taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa yhdisteen kanssa, jonka kaava on j-H^N^O^S. 4 C^HgO^S. .
Uusi yhdiste tunnistettiin myös esimerkissä 1 kuvatulla entsymaattisella menetelmällä.
Toistamalla menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen 3-hydroksiprcpaa-nisulfonihappoa saatiin suola, jonka kaava on C LJ O S. 4 C-Ho0.S.
15 23 6 5 384
Analyysiarvot on esitetty taulukossa 1.
Esimerkki 7 70 Iraan SAMria sisältävää liuosta lisätään pikloronihappoa kuten esimerkissä 1 on selitetty. Muodostunut sakka liuotettiin huoneen läiqpötilassa sekoittaen 3,1 Iraan 1 -naftaleenisulfcnihapan 1-n liuosta metanolissa.
Sitten lisättiin 25 1 metyylietyyliketonia. Erotettu kiinteä aine liuotetaan 12,5 Iraan 1-naftaleenisuöfonihapan 0,25-n liuosta metanolissa ja sen jälkeen kun on lisätty hiiltä ja suodatettu, lisätään suodos 70 Iraan metyylietyyliketonia.
Saadaan 717 g suolaa. Yhdiste on liukoinen veteen yli 20-%risesti ja ainoastaan niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerroskro-matografisen analyysin mukaan yhdiste on vapaa kaikista epäpuhtauksista.
14 63C37
Analyysiarvot annetaan taulukossa 1 ja ne vastaavat yhdistettä, jolla on Jaava 3 C^H^S.
Uusi yhdiste tunnistettiin myös esimerkissä 1 kuvatulla entsymaatti-sella menetelmällä.
Esimerkki 8 70 Iraan SAM'ia sisältävää liuosta lisätään pikloronihappoa kuten esimerkissä 1 on selitetty. Muodostunut sakka liuotetaan huoneen lämpötilassa sekoittaen 3,1 Iraan 2-naftaleenisulfonihapon 1-n liuosta 2-propanolissa.
Sitten lisättiin 25 1 di-isopropyylieetteriä. Erotettu kiinteä aine liuotetaan 12,5 Iraan 2-naftaleenisulfonihapon 0,25-n liuosta metanolissa ja sen jälkeen kun on lisätty hiiltä ja suodatettu, lisätään suodokseen 70 1 etyyliasetaattia.
Saadaan 710 g suolaa. Yhdiste on liukoinen veteen yli 20-%risesti ja ainoastaan niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerros-kranatografisen analyysin mukaan yhdiste on vapaa kaikista epäpuhtauksista.
Analyysiarvot on annettu taulukossa 1 ja ne vastaavat yhdistettä, jolla on kaava C^H^NgOj-S. 3 C^HgO^S.
Uusi yhdiste tunnistettiin mysö esimerkissä 1 kuvatulla entsymaatti-sella menetelmällä.
Esimerkki 9 70 Iraan SAM'ia sisältävää liuosta, lisätään pikloronihappoa kuten esimerkissä 1 an selitetty. Muodostunut sakka liuotetaan huoneen lämpötilassa sekoittaen 3,1 Iraan bentseenisulfonihapon 1-n liuosta 2-butanolissa. Sitten lisätään 25 1 di-isopropyylieetteriä. Erotettu kiinteä aine liuotetaan 12,5 Iraan bentseenisulfonihapon 0,25-n liuosta metanolissa ja sen jälkeen, kun on lisätty hiiltä ja suodatettu, lisätään suodokseen 65 1 etyyliasetaattia.
Saadaan 612 g suolaa.Yhdiste on liukoinen veteen yli 20-%risesti ja ainoastaan niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerros-kronatografisen analyysin mukaan yhdiste on vapaa kaikista epäpuhtauksista.
Analyysiarvot on annettu taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa yhdisteen kanssa, jonka kaava on C.cH~oN..0_S. 3 C,HLO_S.
Id ii b o o 6 o
Uusi yhdiste tunnistettiin myös esimerkissä 1 kuvatulla entsymaatti-sella menetelmällä.
Esimerkki 10 103 ml raan SAM'ia sisältävää liuosta lisätään pikloronihappoa kuten esimerkissä 4 on selitetty. Muodostunut sakka liuotetaan huoneen lämpötilassa sekoittaen 6,2 mlraan konfroitiinirikkihapan 1-n liuosta meetanolissa. Sitten lisätään 50 ml asetonia.
63037 15
Erotettu kiinteä aine liuotetaan 25 ml:aan kondroitiinirikkihapcn 0,025-n liuosta metanolissa, ja lisätään hiiltä ja suodatetaan ja suodokseen lisätään 125 ml netyyli-isobutyyliketonia, jolloin suola saostuu; saanto 327 g. Yhdiste on liukoinen veteen yli 20-%risesti ja ainoastaan niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerroskrcmatografisen analyysin mukaan yhdiste on vapaa kaikista epäpuhtauksista. Analyysiarvot on annettu taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa yhdisteen kanssa, jonka kaava on C-|5H23N6C5S* 4 C^H^^NO^S.
Uusi yhdiste tunnistettiin myös esimerkissä 1 kuvatulla entsymaattisella menetelmällä.
Esimerkki 11 103 ml:aan SAM'ia sisältävää liuosta lisätään pikloronihappoa kuten esimerkissä 4 on selitetty. Muodostunut sakka liuotetaan huoneen länpötilassa sekoittaen 6,2 ml:aan systeiinihapcn 1-»n liuosta 2-etoksietanolissa. Sitten lisätään 50 ml dimetyyliasetaattia. Erotettu kiinteä aine liuotetaan 25 ml:aan systeiinihapon 0,25-n liuosta 2-etoksietanolissa ja sen jälkeen kun on lisätty hiiltä ja suodatettu, lisätään suodokseen 125 ml metyyliasetaattia.
Saadaan 1,53 g suolaa. Yhdiste on liukoinen veteen yli 20-%:isesti ja ainoastaan niukasti liukoinen tavallisiin orgaanisiin liuottimiin. Ohutkerroskro- matografisen analyysin mukaan yhdiste on vapaa kaikista epäpuhtauksista. Analyysi- arvot on esitetty taulukossa 1 ja ne ovat sopusoinnussa yhdisteen, jolla on kaava C. cH N O S. 4 C_H NO S kanssa, lb 2.S o 5 o75
Uusi yhdiste tunnistettiin myös esimerkissä 1 kuvatulla entsymaattisella menetelmällä.
Esimerkki 12 SAM-kaksoissuolojen valmistus 103 ml:aan eluaattia, joka sisältää 6 g/1 SAM ja joka on saatu kuten esimerkissä 4 on selitetty, lisätään rikkihappoa, kunnes saavutetaan pH-arvo 3 ja tähän lisätään sekoittaen liuos, jossa on 2,3 g pikloronihappoa 25 mlrssa metyyli-etyyliketonia (liuotin a).
Seistyään yön yli sakka suodatetaan ja pestään vedellä. Sakka liuotetaan uudelleen seokseen, jossa on 18 ml rikkihapon ja metaanosulfonihapon 0,1-n liuosta ja 18 ml metyylietyyliketonia (liuotin a).
Sekoittamisen ja seisomisen jälkeen orgaaninen kerros erotetaan ja vesi-kerrosta ravistellaan pienen määrän kanssa metyylietyyliketonia pikloronihapon viimeisten jälkien poistamiseksi. Vesikerros erotetaan ja lisätään väriä poistavaa hiiltä ja seos suodatetaan. Saadaan 16,5 ml väritöntä liuosta, joka sisältää 33,8 g/1 SAM, mikä vastaa 90 % alkuperäisen liuoksen SAM:sta. Ohutkerroskrcmatografisen analyysin mukaan liuos sisältää ainoastaan SAM'ia. 16,5 ml liuoksesta kaadetaan 63037 16 100 mlsaan asetonia (liuotin b). Sekoittamisen ja seisomisen jälkeen neste erotetaan dekantoimalla. Kiinteä aine liuotetaan 6,6 gsaan metaanisulfonihapon 15-% liuosta metanolissa (liuotin c).
Lisätään väriä poistavaa hiiltä ja suodatetaan ja kaadetaan liuos 25 mlsaan etyylieetteriä (liuotin d). Se suodatetaan seisomisen jälkeen ja saatu hyvin kiteytynyt suola painaa 1,2 g ja sen kaava on SAM+.HSO^ . 2 CH^SO^H. Analyy-siarvot on esitetty taulukossa 2.
Toistettaessa menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen taulukossa 2 esitettyjä sulfonihappoja ja liuottimia, saadaan muut taulukossa 2 esitetyt kak-soissuolat.
Toistettaessa menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen 3,3 g metaanisulfonihapon 15-% liuosta metanolista, antaa jälkeen tuleva saostamisvaihe 25 ml:11a etyylieetteriä (liuotin d) 1,05 g suolaa, jonka kaava on SAM+HS0^ .CH^SO^H. Analyysiarvot on esitetty taulukossa 3.
Toistettaessa menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen taulukossa 3 esitettyjä sulfonihappoja ja liuottimia, saadaan muut taulukossa 3 esitetyt kaksois-suolat.
Esimerkki 13 SAM-kaksoissuolojen valmistus
Suola, joka saatiin ensimmäisestä SAM-saostuksesta 2-hydroksietaanisul-fonihapolla, kuten esimerkissä 6, liuotetaan 20 l:aan 0,1-n rikkihapon ja 0,1-n 2-hydroksietaanisulfonihapon liuosta metanolissa (liuotin a).
Se suodatetaan sen jälkeen kun on lisätty väriä poistavaa puuhiiltä, ja lisätään 100 1 metyyli-isobutyyliketöniä (liuotin b) suodakseen. Seos suodatetaan seisomisen jälkeen ja saadaan 587 g suolaa, jonka kaava on SAM+. HSO^ . H^SO^. 2 C^H^OS; analyysiarvot on esitetty taulukossa 4.
Toistettaessa menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen 10 1 0,1-n rikkihapon ja 0,1-n 2-hydroksietaanisulfonihapon liuosta metanolissa (liuotin a) antaa jälkeen tuleva saostaminen metyyli-isobutyyliketonilla (liuotin b) 505 g suolaa, jolla on kaava SAM+.HSO^ .H^SO^.C^H^O^S; analyysiarvot on esitetty taulukossa 5.
Toistettaessa menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen yksinkertaisia SAM-suoloja, jotka sisältävät taulukossa 5 annetut anionit, ja käyttäen taulukossa 5 esitettyjä liuottimia, saadaan muut taulukossa 5 esitetyt kaksoissuolat.
Toistettaessa menetelmä samalla tavalla, mutta käyttäen 3,3 g p-toluee-nisulfonihapon 15-% liuosta metanolissa, antaa jälkeen tuleva saostusvaihe 25 ml:11a etyylieetteriä 1,18 g suolaa SAM+.HSO^ .H^SOj .2CH^CgH^SO^H, jolla on samat ominaisuudet kuin esimerkin 1 tuotteelle esitetyt.
17 J 63037 , j a’ _ s oooointnt^^-t-cTif^oo^r^r^-ocrifor-vocyi»-^·^)· W C sT4 cod'tor'Ni^'-O'flrtffinrf^coLnfflio^Ki'f^ S c
CM I — VO
3 ti voooaiinoO'S'voocnrr^rin'rocMt-cM^iiT'r^oo ti <Tivoo>unLnooocor-unvocN<yi<TieMeo»-covoco©0 7¾ ovocMi^r^oo^^rr^cNvoonr^r-T-r-r^uno©© ja incNCM'S'co^cotMTfromncncoLn'a'nr-Ti'Trpon op >3
r~mCMr~<TiCMCMCM*-LAO«— OOCOCMCnir-OOCOCnCM
S mmr'-r-'ooounooocor'un»— vovococriCMT-unr^un "ίτ
ovoeMr-rroav^rcot—CMvoor^or-vor-unocoaQ
X LncMCM^rcoTrcMCM^nmn^c^in^cor-^ricoco
ti unocMooooonvounonuno^cMi^unoor^r-cNCNCN
m 'rr-cNooofnot-^r^ocjnvooor-unr^crir-ior-unun
’S OOOOCTiOnvOCNiTir^CMVOt— CNCMO'O'rrr'-rTmCNCN
J CM r— *— i— i— i— 1— *— i— *— i— i— CN 1— τ t— r— r— OP Pl CO · - —— ----— -— 3 ti Or-OCMOOl— COt-lOi— VOCMf-r-munOOTrCNCMCOun ti coonunvovooouncocMor^unOoounvocoeNr^ocTi X OOeTiOOCOVDr-avr-CMVO»— CMCMOVOriVOrtfCMCMv— S cMv-^r-oocrieni-oooooor-r^oouncnvocMooo
ti r^vocoocMuncn^mavovo^rcTir-r^ocMvovocMCM
Φ oin^or^ooeounovr-r-r-aor^ococovocTicocooo . i —_:-:-- z >1 r— U7CMCMU700f'~'3,T— ιηθ©ΟίΤιτ—<Τ>Ο00^·Ο000η ti LTiLnr'COcnuncriT— cTir^r-rfLOcnrnr^Lnoocor— oco ti oun,<i,<T>r--ooununcor-'r-r~oor'-ococMun<Tioooor'~ O_____ ti ^ rr TT en
g h r-< u un .H
3 unCQUffl un en υ ti un en unmunununununrr^^^^ununen <— rr rr “T -r ^ m en r-~cnwcncnwcncntncncncncncnw un vo ui co en en
ly (^>Γ^-Ι— Γ— r— r— τ— t— rJirJirTror^r— (NO
£ r- O 1— t— i— *— CM CM CM CM '— *— *— CM'— CMO O r— r— r—
S O V£> OOOOOOOOOOOOOO Or- OOOO
Ϊ5 m 2 VDVOO iOVOVDVOVOVOVOVOVOVOVOr-Z VO VO VO Ό
n Z f- Z Z Z Ζ,Ζ Z_ Z Z Z Z ΖΛΖ Z Z Z £- Z Z Z Z
in tri cm un m m r~ m r- cm en <Ti t— un un *- o »— co r*·* i'·
Ti m»— h^vfloooo't^ninm^ciininr en rj< rj« ti «καίζκκζκζζκζκκκ^ίίΓκκκκκΜ n (Ti t— r-- mcncnununcniTirrr-rMOCPi r» r- *- m on un un Λ t~r'OOCM<NCMununcMcncNun,rrcn'!— cNtNr-oncnrrrr m υυουυυυυουυυυυυυυυυυυυ 3 t -h I 1 3 2 •H ·(—j +J 18 '3 O -H -H C <3 ti ti +> ti ro m ti ti ti0 S ti ti -P -p (β 3 (3 H -P ·Η -P -pew O-Pti
<e (Öig-HtQCäigjJfÖ -PH -H 4-1 -P -P
•h ro roc-Piöeoro-Pro rod ti ti 1-1 <3 *3 -P e go-P°lwtiS<SSti!Stn -P -p d ro ro •h -PO o>w<g«-<ticorootiS’d (S ti “ e e +> ro <w -h >w h ro 1 doJewcew-POc ro ro ti o o -proti-PtiPc-HtoOHOr-iroewro >w ro e >w 4-1 tiägtititnOP-HtfitiePtiroHtfl ti « Φ ti ti roowrotn-w|pa)e-PtoHcnH3Qi d o © d 3 ciwHro-HgH'wroctidtilwwp tnewtotow Otis sSS^groStieQCWvjw ti ti ti ti ti iwdroororowroti.QtitiQj-i-t'cio* e 3 e e e •H W ra m ra 4J ,i2 d) *H C rH Φ rH ·Η ·Η «H *H CO QJ 0) δ g -a §5 S-S-gÄ ia fes ^s-s 1¾¾¾ Ι^βΊ '3 SiSsoSliwtciSSHJ'SIli llS'H'ij
5 roo^roP^iiigiKS-HQjdr^i-PtititiSS
** titiOroxs^icnxjroixiSwcM^tnfiroAidd
Oiöitii 1 o 1 1 1 1 1 il * 1 Ä Q jS 1 1 I
SP^-HCM(Nr-T3<N ^O’iCJlArClOlgffl ft r- (N
Taulukko 2 63037 18 SAM+.HSO ~ H-SO,. 2 RSO-H 4 2 4 3
Anioni Liuotin a Liuotin b Liuotin c Liuotin d
Metaanlsulfcnaatti Metyylietyyli- ketoni Asetoni Metanoli Etyylieetteri 10-kamferi- Iso- sulfonaatti butanoli Metanoli m-butanoli Bentseeni 2 -brcnietaani- Iso- Metyylietyyli- sulfonaatti n-butanoli Etanoli butanoli ketoni
Konadroitiini- Metyyli-iso- Etyylin sulfaatti butyyliketoni Asetoni Metanoli asetaatti p-klooribentseeni- Metyylietyyli- 2-metoksi- sulfonaatti ketoni 1-prqpanoli etanoli Etyylieetteri 4-bifenyyli- Metyylietyyli- 2-etoksi- di-isopropyyli- sulfonaatti ketoni Metanoli etanoli eetteri N % S % SAM % E1% 1 on
Bruttokaava Laskettu Todettu Laskettu Todettu Laskettu Todettu !^60 \
Id—n C1?H34N6Ol9S5 19,68 10,81 20,37 20,02 50,77 51,10 187
CorHcoN^O-.S. 7,96 8,12 15,19 15,01 37,84 37,51 140
Jb bo b zl b C19H36N6°19S5Br2 8,64 8,75 16,48 16,10 41,06 41,30 151 C,oH*oNo0 s 7,40 7,13 10,59 10,72 26,39 25,95 97 4J oo o 41 d
Co-H,cNc0,oScCL· 8,57 8,62 16,36 16,54 40,77 41,01 150 27 36 6 19 5 2 n Sc 7,91 8,12 15,08 15,20 37,57 37,82 139 39 46 6 19 5
Taulukko 3 19 63037 sam+.hso4”. h2so4. rso3h
Anioni Liuotin a Liuotin b Liuotin c Liuotin d
Metaanisulfonaatti Metyylietyylike töni Asetoni Metanoli Etyylieetteri
Dodekaani- Metyyli-iso- 2-metoksi- sulfonaatti butyyliketoni Metanoli etanoli Etyylieetteri 1f2-etaanidi- sulfonaatti n-butanoli Etanoli Metanoli Bentseeni p-asetyylibentsee- nisulfanaatti Isobutanoli Metanoli n-butanoli Tolueeni 5 —sulfosalisylaatti Metyyli-iso- Metyyli-iso^· butyyliketoni Asetoni Metanoli butyyliketoni E1% 1 an N % S % SAM % *260 (g_n U Q0 |
Bruttakaava Laskettu Todettu Laskettu Todettu Laskettu Todettu 2 4' 12,7 11,95 18,57 18,71 57,83 57,62 213 16 30 6 16 4 9,67 9,83 14,76 14,54 45,96 45,99 170 29 52 6 16 4 11,17 11,01 17,04 17,25 53,07 53,22 196 16 29 6 16 4 C.-H-.N.O.-S. 10,16 10,28 15,51 15,08 48,31 48,06 178 23 34 6 17 4 C28H38n6016s4 9'97 9'65 15'21 15'37 47'39 47'11 175 C„H„Nc01QS. 10,34 10,08 15,78 15,45 49,19 49,00 181 22 32 6 19 4
Taulukko 4 20 63037 SAM+.HS0 ~.Ho90.. 2 RSO.H 4 2 4 3
Anioni Liuotin a Liuotin b 2-hydroksietaanisulfanaatti Metanoli Metyyli-isobutyyliketoni
Etaanisulfonaatti 2-metoksietanoli Asetoni
Systeaatti Isopropanoli Tetrahydrofuraani 1- oktadekaanisulfonaatti 2-etoksietanoli Metyyliasetaatti 2- kloorietaanisulfonaatti Etanoli Kloroformi 2-naftaleenisulfonaatti Metanoli Etyylieetteri E1% 1 an N % S % SAM % *260 ^
Bruttokaava Laskettu Todettu Laskettu Todettu Laskettu Todettu ^6-n C19H38N6 °21S5 10,02 10,15 19,11 19,23 47,62 47,43 176 C19H38N6°19S5 10,31 10,01 19,67 19,35 49,02 49,28 181 C21H40N8O23S5 12,01 12,26 17,18 17,02 42,82 42,55 158 C51H1q2N6019S5 6,65 6,40 12,68 12,49 31,61 31,29 117 C19H36N6°19S5C12 9,51 9,38 18,14 18,32 45,20 45,36 167 C35H42N6019S5 8,30 8,07 15,84 15,64 39,47 39,50 146
Taulukko 5 21 63037 SAM+.HS0 ” RSCUi 4 3
Anipni Liuotin a Liuotin b 2- hydroksietaani- Metyyli-isobutyyli- sulfonaatti Metanoli ketoni 3- hydroksiprqpaani- sulfonaatti 2-etoksietanoli Etyylieetteri d-3-branikamferi-10- sulfonaatti n-butanoli Kloroformi 1-naftaleenisulfonaatti Etanoli Etyylieetteri
Bentseenisulfonaatti Etanoli Metyyli-isobutyyliketoni o-bentseenidi sulf onaatti 2-metoksietanoli Bentseeni E1% 1 cm N % S % SAM % *260 ^
Bruttokaava Laskettu Todettu Laskettu Todettu Laskettu Todettu H2S04^
Cl7H32Ng017S4 11.66 11,45 17,79 17,95 55,42 55,15 204 C18H34N6°17S4 11,44 11,62 17,45 17,01 54,36 54,30 201 C25H41N6°17S4Br 9,28 9,08 14,16 14,20 44,10 43,91 163 C0(-H_ .N-O..-S. 1°'47 10,57 15/99 16,22 49,75 49,62 183 25 34 6 16 4
Co1H__Nc01ÄS 11/16 11,22 17,03 16,95 53,06 53,15 196 21 32 6 16 4 11'78 11'53 17'97 17'62 55,97 55'65 206 18 29 6 16 4 22 63037
Joitakin vuosia on biokemiallisesta tutkimuksesta oliut tunnettua» että SAM on ainoa spesifinen metyylien luovuttaja elävissä organismeissa CH^-ryhmän biokemiallisia siirtoreaktioita varten» jotka ovat perustavaa laatua olevia reaktioita rasva-valkuaissine- ja sokeriaineenvaihdunnassa. Esimerkkeinä esitetään seuraavassa Joitakin kaikkein tärkeimmistä SAMista riippuvista transmetylolntireaktiolstai a) H-transmetylointit adoniini» karnitiini, karnosiini, kreatiini» 2,6-diaminopuriini, adrenaliini» guaniini, hordeniini» 5'-nikotiiniamidi» fosfatidyylikoliini, risinlini; b) O-transmetylointli N-asetyyliserotonilni, dopamiini, epiniini» d-adrenaliini» 1-adremaliini, ergosteroli, 1-noradrenaliini» pektiini, ubikinoni; o) S-transmetylointii 2»5-dimerkaptopropanoli, HgS, metioniini» metyylimerkaptaani» S-merkaptopropionihappo, S-merkapteetanoli, tiopyriml-diini, tiourasyyli; d) C-transmetylointii sytosiini» tyrniini.
Tämä tarkoittaa» viitaten erityisesti ihmisen elimistöön, että SAM toimii seuraavlssa aineenvaihduntaprosesseissat koliinin biosynteesissä; fostatidyylikollinin biosynteesissä; entsyymien aktiivisuudessa» jotka vaativat SH-ryhmiä; katekoliamlinien aineenvaihdunnassa; elosyntyisten keskus-aivoani ini en aineenvaihdunnassa; serotoniinin aineenvaihdunnassa; histamiinin aineenvaihdunnassa; vitamiinin B12 ja foolihapon aineenvaihdunnassa; kreatiinia aineenvaihdunnassa; myosiinin aineenvaihdunnassa; histonien aineenvaihdunnassa; RNAsn aineenvaihdunnassa DNAin aineenvaihdunnassa; valkuaisaineiden aineenvaihdunnassa; joidenkin syklopentaanl-perhydrofenan-treenirankalta sisältävien hormoonien» joista pääosa on estrogeenejä, aineenvaihdunnassa; ja triglyseridien aineenvaihdunnassa. On myös ollut jonkin aikaa tunnettua että SAM, kun se kerran on demetyloitu metyylitransperaasi-entsyynien vaikutuksesta, muuttuu S-adenosllhomosysteiiniksi (SAO), joka on epäsuora vetysulfidi-ryhmien luovuttaja ja sillä siten on ratkaiseva merkitys kaikkien yhdisteiden aineenvaihdunnassa, jotka tarvitsevat SH-ryh-miä biologisen aktiivisuutensa käyttämiseksi* Erityisen tärkeitä näiden joukossa ovat jotkut tioentsyynit ja tioaminohapot.
SAO puolestaan dekarboksyloituu elimistössä ja dekarboksyloitu tuote on aminopropyyliryhmän, joka - uusimman biokemiallisen tietämyksen mukaan -on polyamilnien biosynteesille välttämätön, pääasiallinen luovuttaja. Prosessia katalysoidaan eri entsyymeillä, spesifinen aminopropyyli-transferaasi-nukaanlukien.
Yhteenvetona voidaan sanoa, että tiedetään SAM'in 63037 23 ihmiselimistössä olevan läheisesti kytketty kaikkiin biokemiallisiin reaktioihin, joita ovat* A - transmetylointi (CH^-ryhmän spesifinen tuottaminen) B - transeulfurointi (SH-ryhmän spesifinen tuottaminen) C - transaminopropylointi (aminopropyyliryhmän spesifinen tuottaminen).
Tämän tietämyksen yhteismäärä saattaisi panna ajattelemaan, että SAMilla voisi olla terapeuttista vaikutusta hoidettaessa patologisia tiloja, Jotka liittyvät niukkuuteen tai muihin puutostiloihin elimistössä joidenkin suhteen monista edellä mainituista tuotteista. SAM'in äärimmäinen pysymättömyys sekä näihin asti kaikkien sopivien menetelmien puute sen tekemiseksi pysyväksi riittävän pitkäksi ajaksi normaaleissa ympäristön olosuhteissa on kuitenkin estänyt tämän tuotteen kaikki farmakologiset tai kliiniset testit ja siten myös estänyt kaiken käytännön käytön, jota sille löytyisi terapian alalla ihmistä varten. Vasta tämän keksinnön uusien SAM-suolojen valmistamisen jälkeen, suolojen, jotka ovat tosiasiallisesti rajoittamattomasti pysyviä ympäristön lämpötilassa, on ollut mahdollista suorittaa systemaattista farmakologista ja kliinistä tutkimusta»
Siitä valtavasta määrästä farmakologista Ja kliinistä tietoa, joka on koottu tätä uutta tuotetta varten, esitetään tässä tämän jälkeen ainoastaan muutamia peruspiirteitä, jotka ovat riittäviä selvästi osoittamaan alan asiantuntijoille uuden tuotteen oleelliset ominaisuudet ja sen pääasialliset käyttöalueet ihmisterapiassa.
Yksinkertaisuuden vuoksi nimitetään tämän jälkeen keksinnön mukaisia uusia suoloja yksinkertaisesti "SAM-suoläksi", niiden absoluuttisen samanlaisesta käytöstä johtuen.
Farmakologisissa ja kliinisissä asiatiedoissa annettu suola osoitetaan aina yleisesti SAM'illa ja annettu suolamäärä ilmaistaan sen sisältämänä SAM-määränä, niin että on selvä, että asiatiedot tarkoittavat aivan samalla tavalla yhtä tai toista keksinnön mukaista suolaa.
Myrkyllisyys - Keksinnön mukaiset SAM-suolat ovat osoittautuneet absoluuttisen vapaiksi äkillisestä myrkyllisyydestä, kroonisesta myrkyllisyydestä, paikallisesta sietämättömyydestä tai sekundäärisistä vaikutuksista.
Erityisesti DL^0 hiirelle on suurempi kuin 2,3 g/kg suun kautta ja 1,00 g/kg ruiskeena annettuna (i.p.).
Siedettävyys- ja krooniset myrkyllisyystästit suoritettiin Vistar-ja Sprague-Bovley-sukuisilla rotilla antamaan niille 12 kuukauden ajan 4*8 mg/kg tuotetta päivittäin* käsittelyn loputtua eri elimissä ja elinryh- 63037 24 nissi sl havaittu patologisia muutoksia. Epämuodostumien syntynietestit suoritettiin kaniineilla ja rotilla» ei edes annettaessa suuria SAK-annok-siä, jotka olivat n. kymmenkertaisia terapeuttisiin maksimiannoksiin verrattuna, havaittu epämuodostumia synnyttäviä vaikutuksia tai minkäänlaisia epämuodostumia alkioissa tai loppuvaiheisissa sikiöissä.
Annosten, joissa on tuotetta 0,05-0,10 mg/mltaan asti, lisääminen elossa oleviin ihmisen imusolu- tai hiiren maksasoluvlljelmiin ei aiheuta muutosta solumaisten perusaineiden plaetieioiaiskertoimeen.
Verisuonensisäieten annosten 16 mg/kg antaminen ei saa aikaan kuumetta aiheuttavaa ilmenemismuotoa kaniinissa.
16 mg/kgtn annosten antaminen suoneen kaniinille ja kissalle ei aiheuta muutoksia pään valtimon paineessa, sydämen lyöntitlheydessä eikä hengitystaajuudessa tai sydänkäyrässä.
Lihaksen sisäisen ruiskeen paikallinen sieto, jopa yli 180 päivän toistetun antamisen jälkeen sekä verisuonensisäisen ruiskeen sieto korva-laajentuman reunasuoneen kaniinilla on erinomainen.
Ihmisessä, nuorissa vapaaehtoisissa terveissä kumpaakin sukupuolta edustavissa kohteissa annettaessa nopealla verisuonensisäisellä menetelmällä tai lasklmorulskeena SAM-annoksia, jotka vastasivat 5-150 mg (keskipaino 70 kg), ei samanaikainen samanaikainen minimi- ja maksimipaineen ja valtimon tai hengitystiheyden taajuuden tutkiminen 1, 5» 15* 20, 50, 60 minuutin ja 2, 5» 6» 8, 10, 12, 24 tunnin kuluttua antamisen päättymisestä osoittanut muutoksia normaaliarvoista.
Sähkökardiografikäyrä ei osoita muutosta PQ-välillä, ST-osassa, eikä liioin ilmene sydämen lisälyöntisyyttä tai muita muutoksia 50 sekunnin, 1» 2, 5» 5» 10 ja 20 minuutin kuluttua antamisesta. Veren muodostuseiin-ryhmässä sekä maksa- ja munuaistoiminnassa ei tapahtunut normaalista tilastollisesti merkittäviä muutoksia.
farmakologia Tässä on toistettava, että joka kerran kun tämän jälkeen puhutaan SAM'in antamisesta, tarkoitetaan, että on annettu jotakin keksinnön mukaista yksinkertaista tai kaksoissuolaa, koska niiden aktiivisuudet ovat täysin samat. Yksinkertaisen vertailuparametrin saamiseksi viitataan aina eri suolojen SAM-pltoisuuteen.
SAM1 in jakautumisen osoittavaksi määrittämiseksi kudoksissa valmistettiin S-adenosllmetioniini (metyyli C^). Tämän tuotteen jakautumista rotissa tutkittiin antamalla 4,2 mgsn/kg/e.v annos, mikä vastasi n. 10 ;noi radioaktiivista tuotetta. Tuotteen spesidinen aktiivisuus oli 5Θ mCi/m moolia. Hinnakkain tämän kanssa tehtiin hiirille autoradiografinen tutkimus.
25 63037 Häiden kahden kokeen tulokset osoittavat, että SAM jakaantuu hyvin nopeasti kaikkiin kudoksiin.
Esimerkkinä annetaan osa tiedoista, jotka koskevat joitakin ko. elimistä! SAM'in jakautuminen joihinkin rotan kudoksiin.
Arvot on ilmaistu yksikkönä jug/g.
Kudos 15 min lh 4 h 8 h 24 h
Maksa 1,7 3,0 5,5 5,6 5,7
Lisämunuaierauhaset 1,9 3,4 4,0 4,5 4,4
Perna 1,3 1,2 3,5 2,6 2,8
Aivolisäke 2,5 2,5 0,0 4,5 4,2
Alanäkökukkula 0,5 0,65 1,0 1,5 1,3
Iho 0,25 0,45 0,75 0,5 9,4
Alkulima 7,5 2,1 2,3 2,0 1,1
Niinmuodoin oli pääteltävissä, että uudet keksinnön mukaiset suolat luovuttavat CH -ryhmän kaikille kudoksille, joilla on metyylitransferaasi- 3 aktiivisuutta. Toisin sanoen keksinnön mukaisten uusien tuotteiden kyky valitsevasti sijoittua kaikkiin elimiin, jotka on varustettu metyylitrans-ferääsi-järjestelmillä, oli pääteltävissä.
Tämä vahvistettiin myöhemmillä farmakologisilla testeillä. Kokonainen sarja testejä, jotka on suoritettu rotilla, on osoittanut, että uusilla yhdisteillä on huomattava suojaava ja sulattava vaikutus maksan rasvoittumisessa, mikä johtuu Handler'in mukaan runsasrasvaisesta ja runsasproteii-nisesta ruokavaliosta, rasvoittumisessa, joka johtuu äkillisestä alkoholimyrkytyksestä ja muista myrkyllisistä aineista (hiilitetrakloridi, bromi-bentseeni jne.), antamalla ainoastaan 6 mg/kg/i.p.{ sekä morfohistokemialli-selta että analyyttiseltä kannalta SAM merkittävästi vähentää rasvojen kasautumista maksan tasolla (hepatooite level), samalla kun se edistää fosfaattirasvojen normaalitason, Joka on alentunut myrkytyksen jälkeen CCl^tllä, ennallaan palautumista.
Maksa-fosfaattirasvoja rotissa CC1^-myrkytyksen ja SAM-käsittelyn jälkeen.
26 6 3 0 3 7 Käsittely Fosfaattirasvoja yhteensä (ag/g)
Fysiologinen liuos 30,57 - 1,18 CC14 18,87 - 1,06 CC14 + SAM 15 ag/kg/i.p. 27,20 ± 1,25 CC14 ♦ SAM 150 ag/kg/i.p. 20,87 ± 0,42 CC14 + Ad + Met 15 ag/kg/i.p. 19,9 - 0,92
Arvot ovat 10 arvon keskiarvoja - E.S. kullakin ryhaälle. Tutkittaessa aaksaa suojaavaa vaikutusta on käytetty koelaitetta, joka aikaansaa rotassa ns. maksan kolesteroli-rappeutumisen (fiidout ja kumppanit.
Biochem. J. 52, 99, 1952).
Tässä menetelmässä saadaan sopivan ruokavalion avulla aikaan huovattava lisäys uaksan kokonaisrasvapitoisuudessa ja maksan kolesterolissa eläimissä. Rasva-aineenvaihdunnassa toimivat aineet vähentävät tätä lisäystä tai mitätöivät sen.
Eläimet jaettiin kuuteen ryhmään. Ensimmäiselle ryhmälle annettiin ruokavalio, joka vaihteli vapaasti. Toista ryhmää ruokittiin Rldoufln perusruokavaliolla (20 g rottaa kohti päivässä); muita ryhmiä ruokittiin samalla ruokavaliolla samoin annoksin, uutta rikastettuina kolesterolilla 0,2 gtaan asti/rotta/päivä. Käsittely kesti kolme viikkoa.
Ryhmille 4, 5 Ja 6 annettiin SAM'ia seuraavina annoksina! 0,4, 0,8 ja 2 mg/kg/i.p. päivässä.
Kolmen viikon kuluttua kaikki eläimet lopetettiin, maksat poistettiin ja kokona!srasvasisältö (Best ja kumppanit, Biochem. J. 40, 568, 1966) ja kolesteroli (Sperry ja Brand, J. Biol. Chem. 150, 315, 1943) määritettiin.
Tulokset osoittivat, että ryhmät, jolta oli käsitelty SAM'illa annoksilla 0,4-0,8 mg/kg/i.p. olivat huonosti suojattuja, kun taas ryhmä, jota oli käsitelty 2 mgtlla/kg/i.p. oli täysin suojattu. Maksan kolesteroli ja kokonaisrasvat kokeen päättyessä (keskiarvo ryhmää kohti).
Ryhmä Vereksen maksan Kokonaisrasvat Kolesteroli paino g g £ mg i» I 15 1,41 9,4 40 2,6 II 18 1,93 10,6 68 3,7 III 16 3,84 24,0 92 5,7 IV 17 3,70 21,6 90 5,2 V 16 3,5 21,9 67 4,1 VI 16 2,0 12,5 61 3,8 27 63037
Toinen farmakologinen kohta, joka tutkittiin, oli SAM*in tulehdusta ehkäisevä ja kipua lievittävä vaikutus.
Sri testeistä mainittakoon klassillisimmat nimittäin karrageniinil-la ja munanvalkuaisella aikaansaatu turvotus äkillisenä tulehdustestinä sekä puuvillapillereillä aikaansaatu jyvälskasvaaa ja apuaineella aiheutettu niveltulehdus kroonisena tulehdustestinä. Kaikissa tapauksissa SAM osoittautui vaikuttavaksi sekä suun kautta annettuna (annos väliltä 8-40 mg/kg) että ruiskeena annettuna (annokset väliltä 4-8 mg/kg) verrattuna muihin tunnettuihin lääkkeisiin (Ibuprofen - Indometacina). Kivunlie-vitystestit olivat kuumalevytesti ja etikkahappo-oikaisutesti sekä Randal ja Selittotesti rotille. Lääke osoittautui vaikuttavaksi myös näissä testeissä verrattuna tunnettuihin tutkittuihin lääkkeisiin.
Edelleen ajateltiin tutkia SAM'in mahdollista vaikutusta barbituraateilla aikaansaadun unen kestoaikaan.
Tätä tarkoitusta varten suoritettiin koe, jossa hliriryhmät saivat heksobarbitaalia 80 mgsn/kg/i.p. annoksena Holten'in ja Larsen'in menetelmän mukaisesti (Acta Pharmacol. Toxlool. 1956» 12, 346) | toinen ryhmä sai SAM'ia 4 mgsn/kg/i.p. annoksena (taulukko).
Kukkunisalka (min.)
Vertailuryhmä 24,4 - 2»7 SAM 4 mg/kg/i.p. 41,2 ± 5,8
Arvojen tutkiminen osoitti, että SAM vaikuttaa heksobarbltaalilla aikaansaadun unen kestoaikaan.
Kliiniset testit
Kun SAM'in antaminen tämän jälkeen mainitaan, tarkoittaa tämä keksinnön mukaisen jonkin suolan antamista.
Seuraten farmakologissa testeissä saatuja kokemuksia suunnattiin kliiniset testit sairaalloisiin vaikutuksiin, jolloin vaikutus kohdistuu ensisijaisesti tai sekunfäärisestl seuraaviim 1 - rasva-aineiden aineenvaihduntaan, 2 - protidien ja glusidien aineenvaihduntaan ja 3 - katekoliamiinien ja elosyntylsten amiinien aineenvaihduntaan.
1. Testeistä, jotka suoritettiin kliinisesti sadoilla kohteilla käyttäen SAM-annoksia, jotka vaihtelivat laajalla alueella, havaittiin, että nämä uudet yhdisteet aiheuttavat nopean pudotuksen makSarasvoissa eri tavalla syntyneissä maksan rasvoittumissairauksissa, mikä oli todettavissa bioptisella tutkimuksella, joka toistettiin käsittelykierroksen päätyttyä ja vielä 60 päivää tämän käsittelyn jälkeen.
28 6 30 3 7
Tuotteen antaainen saa aikaan myös merkittävän putouksen kokonais» kolesteroliverisyyden, hypertriglyserldemian suurissa arvoissa ja normalisoi muuttuneet β/α-lipoproteiinisuhteet kohteissa, joissa on hyperdisli-pidemiaa kompensoimattomassa vaiheessa.
Tämä runsaskoleeterolisuutta ja runsasrasvaisuutta vähentävä vaikutus todetaan jopa annoksissa väliltä n. 8-1,$ mg, annettuina 2-3 kertaa päivässä, ja se on verrannollinen annokseen.
Selvässä arterioskleroosissa, johon liittyy kliinisiä ilmenemismuotoja psykovaikutteiselta alueelta, turbemnesiaa ja sekundääristä keskus-aivotautia (huonontuminen arterioskleroottisen aivotaudin vaikutuksesta) sekä airojen hapen niukkuudesta johtuvia oiteita, on SAM’in antaminen lihaksen sisäisesti, tai vakavammissa tapauksissa verisuonensisäisesti ruiskeena tai hitaasti laskimoruiskeena 8-16 ng:n annoksina $-4 kertaa päivässä, osoittanut hyvin edullista lievennystä oireistoon. Erityisesti selvissä hapennlukkuustiloissa toimintojen, jotka liittyvät yhteyden kesto-aikaan, elpyminen oli hyvin nopea ja tilastollisesti merkittävä.
Jälki-halvauBOirelssa havaittiin suurempi nopeus kliinisen tukirangan parantumisessa.
2. Kliinisesti käsiteltiin satoja kohteita, joihin oli saatettu vaikuttamaan: sekunfäärinen hypoprotldemias ja disprotidemias; yhtämittainen ja hyökkäävä krooninen maksatautl; prekyrroottiset ja kyrroottiset tilat; ruoansulatushäiriöiden oireet sekä proteiinin hajaantumisoireet. Annoksien antaminen, jotka vaihtelevat välillä 20-80 mg SAM'ia päivässä lihaksen sisäisesti tai verisuonensisälsesti ruiskeena, tai suun kautta riippuen tapauksen vakavuudesta, aiheutti tilastollisesti merkittävän lisäyksen kokonais-protidemiaan, lisäyuksen albumiinitasoon ja pyrkimyksen saattaa muuttuneet prosentti-suhteet veriheran elektroforeettisten jakeiden välillä normaaleiksi. Tätä proteiiniin vaikuttavaa yhteyttävää aineenvaihdunnallista vaikutusta seurasi usein hyvin tärkeä parannus subjektiivisessa oireistossa sekä yleisessä ulkokohtaisessa tilassa ja kaikkien maksan toiminnan testien normali so i tuminen.
3· Erityisen yllättäviä tuloksia saatiin keksinnön mukaisen uuden entsymaattisen suolan kliinisissä sovellutuksissa, Joissa esiintyi sairaalloisia tukirankoja, jotka olivat selvästi vastaavuussuhteessa muuntelujen kanssa elosyntyisten amiinien vaihdossa, esimerkiksi: a) hermostollisista syistä aiheutuvat sairaalloiset tukirangat; b) Parkinsonin tauti ja eri syistä syntynyt Parkinson!smi; o) tulehduksen vastainen ja kipua lievittävä vaikutus hoidettaessa luu-niveltulehdusta ja kipua lievittävä vaikutus tietyissä neurologisissa ilmenemi smuodo1s sa; d) häiriöt nukkumis-valvomis-rytmissä.
29 6 3 0 3 7
Mitä kehtaan a) tulee, on laaja kliininen tapausten erittely, joka suoritettiin tutkiaalla kliinistä käyttäytymistä sekä Hamilton'in ja Vittenberg'ln testejä, selvästi osoittanut, että annosten, jotka vaihtele-vat välillä 8-20 g SAM, antaminen 3-4 kertaa päivässä 3-15 päivän ajan aiheuttaa, kaikki muut terapiamuodot poissulkien, merkittävän väliaikaisen lievenemisen pääparametreissä, joita tutkitaan masennusmuotojen diagnoosia varten.
Mitä kohtaan b) tulee Parkinsonin taudin ja Parkinsonismin hoidon suhteen, on havaittu, että: - SAM'in antaminen 4-16 mgtn annoksina päivää kohti lihaksen sisäisesti tai verisuonen sisäisesti ruiskeena, tai suun kautta - riippuen tapauksen vakavuudesta - yhdessä tavanomaisen Levodopa-hoidon kanssa, johtaa tilastollisesti merkittävääkään parantumiseen liikuntakyvyttömyydessä ja kankeudessa verrattuna siihen, mitä ilmenee potilaissa, joita hoidetaan ainoastaan Levodopa'11a.
Edullisia muunnelmia on löydetty myös Parkinsonin vapinalle, jota el voida lieventää pelkästään Levodopa*11a.
- SAM'in antaminen parantaa selvästi Levodopasta riippuvia psyykkisiä häiriöltä, erityisesti masennustiloja ja tyypiltään ärsyynnyttäviä psyykkisiä ilmenemismuotoja.
- SAM*in antaminen edellä mainittuina annoksina estää merkitsevästi Levodopan sivuvaikutusten sarjan eri elimiin ja elinryhmiin, erityisesti, mitä pahoinvointiin, oksentamiseen, ruokahaluttomuuteen, alhaiseen verenpaineeseen, voimattomuuteen, päänsärkyyn, liikahikoiluun ja unettomuuteen tulee.
Mitä kohtaan o) tulee, on SAM, jolla farmakologiset tulokset osoittavat olevan voimakkaan tulehduksen vastaisen ja kipua lievittävän vaikutuksen, osoittautunut vaikuttavaksi kaikissa luu-nlveltulahdusmuodoissa, joita on hoidettu 13 mg:n annoksella kahdesti päivässä lihaksen sisäisesti tai verisuonen sisäisesti ruiskeella, ja 13-20 g suun kautta neljä kertaa päivässä.
Jo 7 päivän kuluttua käsittelystä oli vaikutettu tilastollisesti merkittävällä tavalla llhaskouristukseen, liikkumisrajoituksiin, paikalliseen kipuun ja jäykkyyteen verrattuna tehottomaan lääkkeeseen. 90:ssä käsitellyssä tapauksessa ei havaittu mahan poltetta, Piiloveren tutkiminen ulosteissa ei kertaakaan osoittanut muutosta käsittelyn aikana.
SAM'lila, verrattuna tulehduksen vastaiseen ei-steroidilääkkeeseen, jota tavallisesti käytetään kaksoissokeakokeessa, näytti olevan terapeuttinen tehokkuus samanlainen kuin indometasiinilla.
63037 30 SAM1 in kipua lievittävä vaikutus testattiin nyös eri kohteilla eri neurologisilla tukirangoilla: hermotulehdus, mcnihermotulehdus, antralgia, lonkkahennosärky, radiokolitis, kierokaula.
Terapeuttinen vaikutus ilmeni ja oli tehokas ensimmäisestä antamispäivästä lähtien, jolloin annettiin 6 mg:n annos kahdesti päivässä lihakseen sisäisenä ruiskeena tai 13 - 20 mg 3 - 4 kertaa päivässä suun kautta. Samanlaisia tuloksia saatiin kohteilla, joilla oli toistuva ja pysyvä päänsärky, antamalla lääkettä suun kautta, pureskeltavina tabletteina.
Mitä kohtaan d) tulee, ts, häiriöihin nukkumis-valvanisrytmissä, erityisesti unettomuuden suhteen, pystyy uusi keksinnön mukainen tuote 4-13 mg:n annoksena suvin kautta huomattavasti parantaman muuttuneita nukkumis-valvcmis-suhteita aikaansaamalla fysiologisen unen ilman barbituraattien tai muiden aineiden, joilla on kuori- ja keskusaivoja lamaannuttava vaikutus, toistuvaa käyttöä.
Yhteenvetona edellisestä ovat lukuisat odottamattomat näköalat, jotka ovat avautuneet uuden lääkkeen vaikutuksesta ihmis terapian alueella, ilmeisiä. Yhteenvetona voidaan sanoa jo todettujen käyttöalueiden olevan: maksa taudin, hyperdislipidemian, yleisen tai paikallisen arterioskleroosin, depressiivistä! neurologistyyppisten psykiatristen ilmenemismuotojen, rappeuttavien nivelsairauksien, neurologisten kipuilmenemismuotojen ja nukkumis-valvaidsrytmin häiriöiden hoito, kun taas monet muut alueet vielä on tutkittava ja todettava. SAM-suoloja annetaan edullisesti ruiskeena lihakseen sisäisesti tai verisuonen sisäisesti tai suun kautta tai kielen alla tabletteina tai kapseleina.
Pysyvyyskokeiden tulokset an esitetty seuraavassa taulukossa.
63037 31
Taulukko SAM-suolan Lämpötila Muuttumattanan SAM-suolan pitoisuus (%) anioni_jC_30 vrk_60 vrk_180 vrk_360 vrk
Bisulfaatti 25 91,7 - 61,0 (vertailu) 45 50 5 -
Tri-p-tolueeni- sulfonaatti 25 98,5 - 92,2 84,2 (vertailu) 45 72 45 27 10
Metaanisulfonaatti 25 100 100 100 100 (SAM.4CH3S03H)
Etaanisulfonaatti 25 100 98 95 90 45 97 90 86 75 1-n-oktadekaani- 25 98 95 91 86 sulfonaatti 45 95 89 82 70 1- n-dodekaani- 25 96 91 85 80 sulfonaatti 45 93 85 75 60 2- hydroksietaani-r 25 100 98 95 90 sulfonaatti 45 97 90 85 70 2-kloorietaani- 25 100 98 94 90 sulfonaatti 45 98 90 85 76 10-kamferi- 25 100 96 92 85 sulfonaatti 45 95 90 82 70
Kysteinaatti 25 100 97 93 87 45 96 92 84 78
Bentseeni- 25 98 94 88 75 sulfonaatti 45 90 80 60 40 2-naftaliini- 25 98 95 90 78 sulfonaatti 45 90 82 65 50 (jatkuu) 63037 32
Taulukko (jatkuu) SAM-suolan Lämpötila Muuttumattoman SAM-suolan pitoisuus (%) anloni_jC_30 vrk_60 vrk_180 vrk_360 vrk o-bentseeni- 25 98 96 92 80 disulfcnaatti 45 92 83 70 65 5-sulfo-sali- 25 95 90 82 75 sylaatti 45 92 84 71 65 1,2-etaani- 25 100 98 94 90 disulfonaatti 45 98 92 87 75
Patenttissa 52 466 esitetty SAM-tri-p-tolueenisulfonaatti on pysyvä 25°C:n lämpötilaan saakka, kun taas tässä hakemuksessa esitetyt uudet yhdisteet ovat pysyviä 45°C lämpötilaan saakka, käytännöllisesti katsoen miten pitkän ajan tahansa. Kun otetaan huomioon, että 25°C:n lämpötila saavutetaan helposti lämmitetyissä tiloissa, kesällä tai kuuman ilmaston alueilla, on ilman muuta edullista,, jos farmaseuttiset tuotteet säilyvät muuttumattomina 45°C:een saakka.
Claims (1)
- 63037 33 Patenttivaatimus Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten stabiilien S-adenosyyli-L-netioniinin (SAM) sulf onaattien vaimistamiseksi, joiden kaava on SAM+^S0ä".H2S047x^(S03H)rt7y I jossa x on 0 tai 1, n on 1 tai 2, ja y on 0,5, 1, 1,5, 2, 3 tai 4, jolloin x = 0, n = 1 jay = 3 tai 4, x = 0, n = 2 ja y = 1,5 tai 2, x = 1, n = 1 ja y = 1 tai 2, tai x=1,n = 2jay = 0,5 tai 1, ja R on sulfonihappotähde, joka on johdettu) seuraavasta sulfonihaposta: metaani-sulfonihappo, etaanisulfonihappo, 1-n-dodekaanisulfonihappo, 1-n-oktadekaani-sulfonihappo, 2-kloorietaanisulfonihappo, 2-brcruetaanisulfonihappo, 2-hydroksi-etaanisulfonihappo, 3-hydroksipropaanisulfonihappo, d-, 1-, d,1τ10-kamf eri-sulfonihappo, d-,1 -, d, 1 - 3-brcmikamferi-10-sul f onihappo, kysteiinihappo tai kcndroitiinirikkihappo, tunnettu siitä, että a) valmistetaan S-adenosyyli-L-metioniinin väkevä liuos, b) saostetaan vesiliuoksessa oleva S-adenosyyli-L-metioniini pikroloni-hapon kyllästetyllä vesiliuoksella tai pikrolönihapon kyllästetyllä liuoksella orgaanisessa liuottimessa, joka liukenee veteen, c) saostettu pikrolonaatti liuotetaan sulfonihappoliuokseen, jolloin sulfonihappo an jokin edellä mainituista sulfonihapoista, tai näiden sulfoni-happojen ja rikkihapon liuokseen, d) S— adenosyyli-L-metioniini-sulfonaatti saostetaan lisäämällä orgaanista liuotinta, joka sekoittuu täydellisesti vaiheessa c) käytettyyn liuottimeen.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT2512874 | 1974-07-12 | ||
IT2512874 | 1974-07-12 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI751946A FI751946A (fi) | 1976-01-13 |
FI63037B true FI63037B (fi) | 1982-12-31 |
FI63037C FI63037C (fi) | 1983-04-11 |
Family
ID=11215784
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI751946A FI63037C (fi) | 1974-07-12 | 1975-07-03 | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara stbila sulfonater av s-adenosyl-l-metionin |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4057686A (fi) |
JP (1) | JPS51125717A (fi) |
AR (1) | AR221676A1 (fi) |
AT (1) | AT366064B (fi) |
AU (1) | AU498365B2 (fi) |
BE (1) | BE831310A (fi) |
CA (1) | CA1057681A (fi) |
CH (1) | CH606085A5 (fi) |
DD (1) | DD118643A5 (fi) |
DE (1) | DE2530898A1 (fi) |
DK (1) | DK144946C (fi) |
ES (1) | ES439316A1 (fi) |
FI (1) | FI63037C (fi) |
FR (1) | FR2277590A1 (fi) |
GB (1) | GB1506640A (fi) |
HU (1) | HU170264B (fi) |
IE (1) | IE41421B1 (fi) |
IL (1) | IL47656A (fi) |
NL (1) | NL171987C (fi) |
NO (1) | NO142175C (fi) |
NZ (1) | NZ178014A (fi) |
PL (1) | PL94268B1 (fi) |
RO (1) | RO77525A (fi) |
SE (1) | SE420204B (fi) |
SU (1) | SU676169A3 (fi) |
YU (1) | YU39271B (fi) |
ZA (1) | ZA754167B (fi) |
Families Citing this family (50)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2001976B (en) * | 1977-08-03 | 1982-03-10 | Yamasa Shoyu Kk | S-adenosyl-l-methionine compositions and production thereof |
JPS5428808A (en) * | 1977-08-03 | 1979-03-03 | Yamasa Shoyu Co Ltd | Composition containing s-adenoyl-l-methionine and its preparation |
JPS5596099A (en) * | 1979-01-12 | 1980-07-21 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | Production of s-adenosyl-l-methionine using enzyme |
GB2064523B (en) * | 1979-12-04 | 1983-06-29 | Kanegafuchi Chemical Ind | Stable composition of s-adenosyl-l-methionine |
IT1137640B (it) | 1981-08-24 | 1986-09-10 | Bioresearch Srl | Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo |
IT1137892B (it) * | 1981-08-24 | 1986-09-10 | Bioresearch Srl | Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo |
IT1139974B (it) * | 1981-09-11 | 1986-09-24 | Bioresearch Srl | Derivati della s-adenosilmetionina,processo per la preparazione e composizioni terapeutiche che li contengono come principio attivo |
US4419358A (en) * | 1981-11-12 | 1983-12-06 | Mead Johnson & Company | Isethionic acid salt of 9-cyclohexyl-2-propoxy-9H-purine-6-amine and compositions containing an effective bronchodilating concentration of it |
IT1169772B (it) * | 1983-08-24 | 1987-06-03 | Bioresearch Spa | Composizioni terapeutiche per uso orale contenenti sali stabili della s-adenosil-l-metionina |
IT1169773B (it) * | 1983-08-24 | 1987-06-03 | Bioresearch Spa | Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina |
IT1169774B (it) * | 1983-08-24 | 1987-06-03 | Bioresearch Spa | Composizioni terapeutiche iniettabili contenenti sali stabili della s-adenosil-l-metionina |
IT1173992B (it) * | 1984-05-16 | 1987-06-24 | Bioresearch Spa | Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente idonei per uso farmaceutico orale |
IT1173990B (it) * | 1984-05-16 | 1987-06-24 | Bioresearch Spa | Sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina (same) particolarmente adatti per uso parenterale |
IT1177373B (it) * | 1984-12-06 | 1987-08-26 | Bioresearch Spa | Sali della 5'-metiltio-5'-deossiadenosina con acidi solfonici a lunga catena alchilica |
IT1200589B (it) * | 1985-02-14 | 1989-01-27 | Gibipharma Spa | Derivati naturali attivita farmagologica |
US4962451A (en) * | 1985-11-07 | 1990-10-09 | International Business Machines Corporation | Cache-effective sort string generation method |
JPH0532181Y2 (fi) * | 1987-09-16 | 1993-08-18 | ||
AU2538588A (en) * | 1987-10-09 | 1989-05-02 | Mario De Rosa | Lipophilic salts of s-adenosyl-l-methionine (sam) with acylated taurine derivatives |
FR2623396B1 (fr) * | 1987-11-25 | 1990-03-30 | Sanofi Sa | Utilisation de l'ademetionine contre le vieillissement de la peau |
IT1229477B (it) * | 1989-03-13 | 1991-09-03 | Bioresearch Spa | Impiego di 5' deossi - 5' metiltioadenosina, s adenosilmetionina e dei loro sali per la preparazione di composizioni farmaceutiche atte a ridurre la seborrea e composizioni farmaceutiche relative |
JPH02290896A (ja) * | 1989-04-28 | 1990-11-30 | Fuji Kagaku Kogyo Kk | 新規なs―アデノシルメチオニン誘導体 |
JPH03123514U (fi) * | 1990-03-27 | 1991-12-16 | ||
US6399093B1 (en) | 1999-05-19 | 2002-06-04 | Advanced Medical Instruments | Method and composition to treat musculoskeletal disorders |
US6635615B1 (en) * | 1999-11-17 | 2003-10-21 | Rolland F. Hebert | Stable salts of S-adenosyl-l-methionine |
DE10022856A1 (de) * | 2000-05-10 | 2001-11-15 | Basf Ag | Therapeutische Kombination von Liponsäure und C1-Donoren zur Behandlung von Störungen des Zentralen Nervensystems |
US6759395B2 (en) | 2000-12-18 | 2004-07-06 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals, Ltd. | Soft-gelatin capsule comprising S-adenosylmethionine and a method for producing the same |
FR2823211A1 (fr) * | 2001-04-10 | 2002-10-11 | Virbac Sa | Composition a base d'un polyphosphate de s-adenosyl-l-methionine et utilisations d'un tel polyphosphate |
US6881837B2 (en) | 2001-06-07 | 2005-04-19 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. | Chemical synthesis of S-adenosyl-L-methionine with enrichment of (S,S)-isomer |
US6649753B2 (en) | 2001-06-07 | 2003-11-18 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. | Stable salts of S-adenosyl-L-methionine (SAMe) and the process for their preparation |
WO2002102823A1 (en) * | 2001-06-14 | 2002-12-27 | Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Limited | Stable salts of s-adenosyl-l-methionine (same) and the process for their preparation |
US20050272687A1 (en) * | 2004-06-08 | 2005-12-08 | Hebert Rolland F | Stable S-adenosyl-l-methionine |
KR20070048700A (ko) | 2004-06-23 | 2007-05-09 | 오키드 케미칼즈 앤드 파마수티컬즈 리미티드 | (s,s)-이성질체가 풍부한s-아데노실-l-메티오닌의 화학 합성 |
US8063024B2 (en) * | 2005-01-26 | 2011-11-22 | University Of Manitoba | Use of S-adenosylmethionine, vitamin E, and vitamin C for the treatment of oxidative liver injury and insulin resistance |
FR2884421B1 (fr) | 2005-04-15 | 2007-08-10 | Virbac Sa | Nouveaux moyens de regulation des troubles du comportement chez les animaux de compagnie |
AU2006237346B2 (en) * | 2005-04-20 | 2011-04-07 | Basf Plant Science Gmbh | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
US20090012036A1 (en) * | 2005-05-24 | 2009-01-08 | Hebert Rolland F | Stable S-adenosyl-L-methionine |
ITMI20060629A1 (it) | 2006-03-31 | 2007-10-01 | Daniele Giovannone | Composizioni solide orali a base di s-adenosilmetionina e processo per il loro ottenimento |
ES2371781T3 (es) | 2006-05-10 | 2012-01-10 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Método para producir una levadura seca que contiene s-adenosil-l-metionina y composición para ingestión oral. |
US20090197824A1 (en) * | 2008-01-31 | 2009-08-06 | Methylation Sciences International Srl | Extended Release Pharmaceutical Formulations of S-Adenosylmethionine |
CA2677053C (en) * | 2007-01-31 | 2016-03-15 | Methylation Sciences International Srl | Extended release pharmaceutical formulations of s-adenosylmethionine |
US20090088404A1 (en) * | 2007-01-31 | 2009-04-02 | Methylation Sciences International Srl | Extended Release Pharmaceutical Formulations of S-Adenosylmethionine |
ITMI20071374A1 (it) * | 2007-07-10 | 2009-01-11 | Gnosis Spa | Sali stabili di s-adenosilmetionina e processo per il loro ottenimento. |
US20100004191A1 (en) * | 2008-07-01 | 2010-01-07 | Rolland F Hebert | Compositions of S-adenosyl-L-methionine. |
EP2193787A1 (en) * | 2008-12-02 | 2010-06-09 | Giorgio Stramentinoli | Formulations for systemic buccal delivery comprising s-adenosylmethionine, their preparation and use |
US8329208B2 (en) | 2009-07-28 | 2012-12-11 | Methylation Sciences International Srl | Pharmacokinetics of S-adenosylmethionine formulations |
US20110027342A1 (en) * | 2009-07-28 | 2011-02-03 | Msi Methylation Sciences, Inc. | S-adenosylmethionine formulations with enhanced bioavailability |
EP2696879A4 (en) | 2011-04-15 | 2014-11-26 | Scimar Ltd | USE OF S-ADENOSYLMETHIONINE, VITAMIN E AND VITAMIN C IN THE PREVENTION AND TREATMENT OF CARDIOVASCULAR DYSFUNCTION |
CN102321136B (zh) * | 2011-09-19 | 2014-10-22 | 北京化工大学 | S-腺苷-l-甲硫氨酸对甲苯磺酸硫酸双盐的制备方法 |
EP2945959B1 (en) | 2013-01-16 | 2020-05-13 | Hebert Sam-E LLC | Stable indole-3-propionate salts of s-adenosyl-l-methionine |
RU2537556C1 (ru) * | 2013-07-30 | 2015-01-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Волгоградский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения соли адеметионина с хондроитинсульфокислотой |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE1803978C2 (de) * | 1968-10-18 | 1985-05-02 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Gewinnung von S-Adenosyl-l-methionin und S-Adenosyl-l-ethionin |
IE37913B1 (en) * | 1972-08-02 | 1977-11-09 | Bioresearch Sas | Salt of s-adenosyl-l-methionine |
IE39517B1 (en) * | 1973-06-27 | 1978-10-25 | Bioresearch Sas | Double salts of s-adenosyl-l-methhionine |
-
1975
- 1975-01-01 AR AR259529A patent/AR221676A1/es active
- 1975-06-30 IE IE1448/75A patent/IE41421B1/en unknown
- 1975-06-30 ZA ZA00754167A patent/ZA754167B/xx unknown
- 1975-07-02 FR FR7520778A patent/FR2277590A1/fr active Granted
- 1975-07-03 NZ NZ178014A patent/NZ178014A/xx unknown
- 1975-07-03 FI FI751946A patent/FI63037C/fi not_active IP Right Cessation
- 1975-07-07 IL IL47656A patent/IL47656A/xx unknown
- 1975-07-07 AT AT0521275A patent/AT366064B/de not_active IP Right Cessation
- 1975-07-09 US US05/594,601 patent/US4057686A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-07-09 YU YU1744/75A patent/YU39271B/xx unknown
- 1975-07-09 HU HUEE2357A patent/HU170264B/hu unknown
- 1975-07-10 CA CA231,185A patent/CA1057681A/en not_active Expired
- 1975-07-10 DE DE19752530898 patent/DE2530898A1/de active Granted
- 1975-07-10 GB GB28984/75A patent/GB1506640A/en not_active Expired
- 1975-07-11 ES ES439316A patent/ES439316A1/es not_active Expired
- 1975-07-11 SU SU752152821A patent/SU676169A3/ru active
- 1975-07-11 AU AU82959/75A patent/AU498365B2/en not_active Expired
- 1975-07-11 JP JP50085200A patent/JPS51125717A/ja active Granted
- 1975-07-11 RO RO7582833A patent/RO77525A/ro unknown
- 1975-07-11 CH CH913575A patent/CH606085A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-07-11 NO NO752499A patent/NO142175C/no unknown
- 1975-07-11 DD DD187262A patent/DD118643A5/xx unknown
- 1975-07-11 BE BE158248A patent/BE831310A/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-07-11 DK DK315375A patent/DK144946C/da not_active IP Right Cessation
- 1975-07-11 SE SE7507966A patent/SE420204B/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-07-11 NL NLAANVRAGE7508316,A patent/NL171987C/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-07-12 PL PL1975182042A patent/PL94268B1/pl unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI63037B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara stbila sulfonater av s-adenosyl-l-metionin | |
FI60218B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara dubbelsalter av s-adenosyl-l-metionin | |
CN111093662B (zh) | 用于提高心脏代谢效率的组合物和方法 | |
Hall et al. | Antitumor agents. 21. A proposed mechanism for inhibition of cancer growth by tenulin and helenalin and related cyclopentenones | |
US3893999A (en) | Salt of S-adenosil-L-methionine and process of preparation | |
DE3883374T2 (de) | Acylatiertes uridin und cytidin und deren verwendungen. | |
JP7067745B2 (ja) | (+)-エピカテキン及びその類似体の有用性 | |
EP0072980A1 (en) | Stable S-adenosylmethionine salts, the process for their preparation and therapeutic compositions which contain them as active principle | |
FI72525B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara stabila s-adenocylmetioninsalter. | |
JPH03501970A (ja) | S‐アデノシル‐l‐メチオニン(sam)のアシル化タウリン誘導体との親油性塩 | |
US4028183A (en) | Process of preparing double salts of S-adenosyl-L-methionine | |
NZ201824A (en) | S-adenosylmethionine derivatives and pharmaceutical compositions | |
US20050272687A1 (en) | Stable S-adenosyl-l-methionine | |
CA2125776A1 (en) | Pharmaceutical composition and process for the preparation thereof | |
KR102434764B1 (ko) | 간 전송 항바이러스 전구체 약물 뉴클레오시드 시클로 포스페이트 에스테르 화합물 및 응용 | |
BR112021015300A2 (pt) | Triamtereno ou nolatrexed para uso no tratamento de fenilcetonúria | |
BRPI0718392A2 (pt) | SAL COMPOSTO DE 3-BENZIL-2-METIL-2,3,3a,4,5,6,7,7a-OCTAIDROBENZO [d] ISOXAZOL-4-ONA | |
RU2663836C1 (ru) | L-Энантиомер 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния гидроксибутандиоата, обладающий церебропротекторной активностью | |
Mirskova et al. | 2-Hydroxyethylammonium Salts of Organylsulphanyl (sylphonyl) acetic Acids as Novel Pharmacologically Active Compounds | |
CN1907987B (zh) | 恩地卡韦酸加成盐及其制备方法和用途 | |
JPH05506842A (ja) | 神経変性状態の処置方法 | |
JPS6191125A (ja) | S−アデノシル−l−メチオニン含有組成物及びその製造法 | |
NO139523B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av doble salter av s-adenosil-l-methionin | |
PL95666B1 (pl) | Sposob wytwarzania nowych podwojnych soli s-adenozylo-alfa-metioniny | |
Bassareo et al. | Receptor and metabolic insights on the ability of caffeine to prevent alcohol-induced stimulation of mesolimbic dopamine transmission |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MA | Patent expired | ||
MA | Patent expired |
Owner name: KNOLL AG |