FI62103B - Foerfarande foer framstaellning av heparin med hoeg specifik aktivitet - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av heparin med hoeg specifik aktivitet Download PDFInfo
- Publication number
- FI62103B FI62103B FI770491A FI770491A FI62103B FI 62103 B FI62103 B FI 62103B FI 770491 A FI770491 A FI 770491A FI 770491 A FI770491 A FI 770491A FI 62103 B FI62103 B FI 62103B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- heparin
- gel
- requirement
- requirements
- specific activities
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
fl rBl ri1.KUULUTUSJULKAISU ,0Λη-,
JgU '11) UTLÄGGN I NGSSKRI FT 6210 3 mertsjg <(45) Patentti cyannetty 10 11 1932
Patent oeddelat ^ τ ^ (51) K*.ik?/int.a.3 C 08 B 37/10 SUOMI—FINLAND ¢21) Pewnttiwwmu·-.ρκμνμμο** 770U91 (22) Hakamltpilvt — AiwMcninpdag 15*02.77 (23) Alkupttvt—GHtlfhatadaf 15-02*77 (41) Tullut (ulklMksI — MMt offmtNg 06.09* 77
PtUntti* )> reki*t*Hh*llltU· /44V Nlhtlvllulpenon |t ktMiL|ulk*l*un pvm. —
Patent- och registentyrelMn 7 Amok·*» utiafd odi uti.*krift*n pubncmtf 30.07.62 (32)(33)(31) **η«Ι·«Τ «uolk·»·»—»«f»rd prtarHat 05.03.76
Ruotsi-Sverige(SE) 76030lt02 (71) Aktiebolaget Kabi, S-lOU 25 Stockholm, Ruotsi-Sverige(SE) (72) Lars-Olov Andersson, Knivsta, Erik Yngve Holmer, Bromma,
Ruotsi-Sverige(SE) (7*0 0y Roister Ab (5U) Menetelmä suuren spesifisen aktiivisuuden omaavan hepariinin valmistamiseksi - Förfarande för framställning av heparin med hög specifik aktivitet
Keksinnön kohteena on menetelmä suuren spesifisen aktiivisuuden omaavan hepariinin valmistamiseksi. Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että veteen liukenematonta, edullisesti aga-roosia sisältävää geelimatriisia, johon on sidottu antitrombiinia tai inter- ¢(-trypsiini-inhibiittoria, jonka molekyylipaino on noin 150 000, käytetään spesifisen aktiivisuuden 200-270 E/mg omaavan hepariinifrak-tion adsorboimiseksi selektiivisesti lähtöaineesta, jonka spesifinen aktiivisuus on 100-160 E/mg, minkä jälkeen geeliin sidottu hepariini-fraktio desorboidaan.
Hepariinia on käytetty sairaanhoidon alalla useita vuosikymmeniä. Se on eräs tunnetuimmista koaguloitumisen estoaineista ja sitä käytetään laajalti, mm. veritulpan estämiseen. Hepariini on sulfatoi-tu polysakkaridi, jota voidaan valmistaa eläinten suolilimasta tai keuhkosta suhteellisen monimutkaisella menetelmällä. Ne hepariinival-misteet, joita kliinisesti nykyään käytetään, sisältävät aineita, joilla on hyvin vaihtelevat molekyylikoot, noin 5 000:sta aina noin 35 000 asti. Spesifinen aktiivisuus on yleensä noin 130 yksikköä/mg.
2 62103
Nyt saatavat kaupalliset valmisteet ovat siis melko heterogeenisiä. Hepariinihoitoon liittyviä sivuvaikutuksia on melko vähän, mutta ne tapaukset, joita esiintyy, aiheuttavat usein vaikeasti ratkaistavia ongelmia. Osan näistä sivuvaikutuksista voidaan todennäköisesti katsoa aiheutuvan epäpuhtauksista hepariinivalmisteissa.
Tämän vuoksi on perusteltua valmistaa hepariinivalmisteita, jotka ovat puhtaampia ja spesifisemmin vaikuttavia kuin nyt käytetyt. Hepariinin osatekijän antitrombiinin tutkimusten yhteydessä tutkittiin mahdollisuuksia sitoa proteiini matriisiin. Kävi yllättäen ilmi, että matriisiin (agaroosi) sidottu antitrombiini spesifisesti pystyi sitomaan lääkeaineena käytettävässä hepariinissa olevan molekyyli-fraktion, jossa on hepariinin kliinisesti arvokas trombosprofylakti-nen vaikutus. Valitsemalla sopivasti adsorptio- ja desorptio-olosuh-teet, voidaan valmistaa erinomaisen puhdasta hepariinia. Saadut spesifiset aktiivisuudet olivat 200-270 yksikköä/mg verrattuna noin 130 yksikköön/mg lähtöaineessa. Molekyylipainojakauma puhdistetussa hepariinissa oli paljon kapeampi kuin lähtöaineessa. Hepariinin osatekijän antitrombiinin lisäksi voidaan myös edullisesti käyttää muita hepariinia sitovia proteiineja, kuten inter-°^-trypsiini-inhibiittoria, jonka molekyylipaino on noin 150 000 ja joka on saatu koaguloitumistekijän IX (B-tekijä) eristämisen yhteydessä. Laadullisesti paras hepariini saatiin matriisiin sidotulla antitrombiinilla, jolloin spesifiset aktiivisuudet nousivat 270 yksikköön/mg.
Keksinnön mukaisella menetelmällä voidaan siis valmistaa hepariinia, joka on erinomaisen puhdasta ja jolla on suuri spesifinen aktiivisuus. Menetelmä on yksinkertainen ja teollisesti käyttökelpoinen ja saadulla hepariinilla on suurempi spesifinen aktiivisuus kuin olemassa olevilla valmisteilla. Hepariinin spesifisen aktiivisuuden määritys on suoritettu Denson'in ia Bonnar'in ja Bonnar'in mukaan (1975, Brit. J. Haematol, 30, s. 139). Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1
Hepariinin puhdistus matriisiin sidotulla antitrombiinilla
Kolonnimenetelmä
Geeliadsorbentti valmistettiin seuraavasti:
Aktivointi 3 g BrCN liuotettiin 30 ml:aan tislattua vettä. 50 ml sedimen-toitua agaroosia (Sepharose 4B, Pharmacia Fine Chemicals) lisättiin BrCN-liuokseen. Seosta jäähdytettiin jäähauteella sekoittaen. Lisäämällä 4M NaOH nostettiin pH arvoon 11,2 ja pidettiin vakiona 10 minuutin 3 62103 ajan. Sen jälkeen geeli pestiin kylmällä tislatulla vedellä ja 0,2 M NaHC03.
Yhdistäminen 200 mg antitrombiinia, joka oli puhdistettu Miller-Andersson et ai* in mukaan (1974, Thromb Res. 5, sivut 439-452) ja liuotettu 50 mliaan 0,2 M NaHCO^ pH 9,0, lisättiin geeliin. Proteiiniliuosta ja geeliä sekoitettiin huoneenlämpötilassa yli yön ja pestiin sen jälkeen huolellisesti puskureilla, joilla on suuri ioniväkevyys ja vaihtele- ; vasti korkea ja alhainen pH. !
Hepariinin puhdistus
Geeliadsorbentti, joka sisälsi matriisiin sidottua antitrombiinia, pakattiin pylvääseen ja tasapainoitettiin puskurilla 0,05 M Tris, 0,15 M NaCl:lla, pH 7,4). 300 mg hepariinia (Vitrum, spesifinen aktiivisuus 130 yksikköä/mg) liuotettiin 20 ml:aan puskuria 0,05 M Tris, 0,15 M NaCl, pH 7,4 ja pumpattiin kolonnin läpi. Geeli pestiin ^ edellä mainitulla puskurilla ja adsorboitu hepariini desorboitiin sen jälkeen puskurilla 0,05 M Tris, 1,0 M NaCl, pH 7. Eluoitu hepariini vapautettiin suolasta geelisuodatuksella kolonnissa, joka oli täytetty Sephadex® G-25:llä (Pharmacia) tislatussa vedessä ja pakastekuivat-tiin. Puhdistetun hepariinin spesifinen aktiivisuus oli 270 yksikköä/mg.
Tutkimukset molekyylipainon jakaumasta tälle hepariinille osoittivat, että sillä on merkitsevästi kapeampi molekyylipainojakauma kuin lähtöhepariinilla.
Hiilihydraattianalyysi geelisuodatuksessa on tehty karbatsoli-H2S04-menetelmällä.
Esimerkki 2 »
Hepariinin puhdistus matriisiin sidotulla antitrombiini11a
Panosmenetelmä '
Antitrombiinimatriisi valmistettiin esimerkin 1 mukaisesti.
i
Hepariinin puhdistus: j 500 mg hepariinia (Vitrum, spesifinen aktiivisuus 130 yksikköä/- ; mg) liuotettiin 300 ml:aan puskuria 0,05 M Tris, 0,15 M NaCl, pH 7,4).
300 ml sedimentoitua antitrombiinia, joka sisälsi geeliadsorbenttiä, tasapainoitettiin edellä esitetyssä puskurissa ja imettiin kuivaksi.
Geeli lisättiin hepariiniliuokseen, mitä seurasi sekoittaminen huoneen lämpötilassa 1 tunnin ajan. Geeli imusuodatettiin lasisuotimella ja pestiin 10 kertaa 200 ml:lla puskuria 0,05 M Tris, 0,15 NaCl, pH 7,4. Adsorboitunut hepariini desorboitiin sen jälkeen geelistä kolme kertaa 200 mlrlla puskuria (0,05 M Tris, 1,0 M NaCl, pH 7,4). Eluoitu hepariini väkevöitiin pakastekuivaamalla. Jäljelle jäänyt suola poistet- j 62103 4 tiin geelisuodatuksella Sephadex ®c 25:llä tislatussa vedessä, mitä seurasi pakastekuivaus. Puhdistetun hepariinin spesifinen aktiivisuus oli 250 yksikköä/mg.
Esimerkki 3
Hepariinin puhdistus geeliadsorbentillä, joka sisältää matriisiin sidottua inter-cK-trypsiini-inhibiittiä
Geeliadsorbentin valmistus:
Koagluoimistekijän IX (B-tekijä) puhdistuksen yhteydessä (L.- O. Andersson et ai., 1975, Tromb Res, 7, sivut 451-459) saatiin hepa-riinia sitova proteiini, inter-p(-trypsiini-inhibiittori. Sen molekyy-lipaino on noin 150 000. 250 mg tätä proteiinia liuotettiin 200 ml:aan puskuria 0,2 M NaHCO,, pH 9,0 ja lisättiin sen jälkeen 50 ml:aan sedi-mentoitua Sepharose^r4B, joka oli aktivoitu BrCN:llä esimerkin 1 menetelmän mukaisesti. Proteiiniliuosta ja geeliä sekoitettiin huoneen lämpötilassa yli yön. Geeli pestiin sen jälkeen samalla tavalla kuin geeli esimerkissä 1.
Hepariinin puhdistus:
Geeliadsorbentti, joka sisälsi matriisiin sidotun proteiinin, pakattiin pylvääseen. 300 mg hepariinia (Vitrum), liuotettuna 20 ml:aan puskuria 0,05 M Tris, 0,15 M NaCl, pH 7,4, pumpattiin kolonniin. Geeli pestiin edellä mainitulla puskurilla ja adsorboitunut hepariini desor-boitiin sen jälkeen puskurilla 0,05 M Tris, 1,0 M NaCl, pH 7,4. Hepariini vapautettiin suoloista geelisuodatuksella Sephadex G 25:llä tislatussa vedessä ja pakastekuivattiin sen jälkeen. Puhdistetun hepariinin spesifinen aktiivisuus oli 230 yksikköä/mg.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7603040 | 1976-03-05 | ||
| SE7603040A SE431218B (sv) | 1976-03-05 | 1976-03-05 | Forfarande for rening av heparin |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI770491A FI770491A (fi) | 1977-09-06 |
| FI62103B true FI62103B (fi) | 1982-07-30 |
| FI62103C FI62103C (fi) | 1982-11-10 |
Family
ID=20327240
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI770491A FI62103C (fi) | 1976-03-05 | 1977-02-15 | Foerfarande foer framstaellning av heparin med hoeg specifik aktivitet |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS52108012A (fi) |
| AT (1) | AT356818B (fi) |
| AU (1) | AU508430B2 (fi) |
| CA (1) | CA1079272A (fi) |
| CS (1) | CS196349B2 (fi) |
| DE (1) | DE2709500C2 (fi) |
| DK (1) | DK155606C (fi) |
| ES (1) | ES456196A1 (fi) |
| FI (1) | FI62103C (fi) |
| FR (1) | FR2342991A1 (fi) |
| GB (1) | GB1539332A (fi) |
| HU (1) | HU176811B (fi) |
| IE (1) | IE44907B1 (fi) |
| IL (1) | IL51346A (fi) |
| NL (1) | NL186385C (fi) |
| NO (1) | NO144388C (fi) |
| NZ (1) | NZ183480A (fi) |
| PL (1) | PL103049B1 (fi) |
| SE (1) | SE431218B (fi) |
| SU (1) | SU736860A3 (fi) |
| ZA (1) | ZA771267B (fi) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE449753B (sv) * | 1978-11-06 | 1987-05-18 | Choay Sa | Mukopolysackaridkomposition med reglerande verkan pa koagulation, lekemedel innehallande densamma samt forfarande for framstellning derav |
| DE3531101A1 (de) * | 1984-08-31 | 1986-03-13 | Nicolás Huberto Olivos Behrens | Ein nicht thrombenbildendes heparin und ein verfahren zu seiner gewinnung |
| US9676816B2 (en) | 2014-01-21 | 2017-06-13 | Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Heparin affinity tag and applications thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2623001A (en) * | 1949-04-07 | 1952-12-23 | Bengt E G V Sylven | Preparing heparin |
| DE1195010B (de) * | 1962-05-12 | 1965-06-16 | Ormonoterapia Richter S P A | Verfahren zur Reinigung von Heparin nach der Chromatographischen Methode |
-
1976
- 1976-03-05 SE SE7603040A patent/SE431218B/xx not_active IP Right Cessation
-
1977
- 1977-01-27 IL IL51346A patent/IL51346A/xx unknown
- 1977-02-14 CA CA271,731A patent/CA1079272A/en not_active Expired
- 1977-02-15 FI FI770491A patent/FI62103C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-02-22 NL NLAANVRAGE7701882,A patent/NL186385C/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-02-23 ES ES456196A patent/ES456196A1/es not_active Expired
- 1977-02-25 JP JP2016477A patent/JPS52108012A/ja active Pending
- 1977-03-02 NZ NZ183480A patent/NZ183480A/xx unknown
- 1977-03-03 IE IE469/77A patent/IE44907B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-03-03 ZA ZA00771267A patent/ZA771267B/xx unknown
- 1977-03-04 PL PL1977196438A patent/PL103049B1/pl unknown
- 1977-03-04 GB GB9275/77A patent/GB1539332A/en not_active Expired
- 1977-03-04 HU HU77KA1485A patent/HU176811B/hu unknown
- 1977-03-04 SU SU772457090A patent/SU736860A3/ru active
- 1977-03-04 DE DE2709500A patent/DE2709500C2/de not_active Expired
- 1977-03-04 FR FR7706469A patent/FR2342991A1/fr active Granted
- 1977-03-04 DK DK096077A patent/DK155606C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-03-04 AT AT144577A patent/AT356818B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-03-04 NO NO770764A patent/NO144388C/no unknown
- 1977-03-04 AU AU22953/77A patent/AU508430B2/en not_active Expired
- 1977-03-07 CS CS771523A patent/CS196349B2/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL51346A (en) | 1979-11-30 |
| CA1079272A (en) | 1980-06-10 |
| SE431218B (sv) | 1984-01-23 |
| ZA771267B (en) | 1978-01-25 |
| IL51346A0 (en) | 1977-03-31 |
| IE44907B1 (en) | 1982-05-19 |
| FI62103C (fi) | 1982-11-10 |
| NZ183480A (en) | 1979-08-31 |
| DE2709500A1 (de) | 1977-09-08 |
| SU736860A3 (ru) | 1980-05-25 |
| CS196349B2 (en) | 1980-03-31 |
| HU176811B (en) | 1981-05-28 |
| NL186385B (nl) | 1990-06-18 |
| FI770491A (fi) | 1977-09-06 |
| NO770764L (no) | 1977-09-06 |
| NO144388C (no) | 1981-08-19 |
| NL7701882A (nl) | 1977-09-07 |
| FR2342991A1 (fr) | 1977-09-30 |
| ATA144577A (de) | 1979-10-15 |
| GB1539332A (en) | 1979-01-31 |
| DE2709500C2 (de) | 1986-09-18 |
| PL103049B1 (pl) | 1979-05-31 |
| ES456196A1 (es) | 1978-07-01 |
| NL186385C (nl) | 1990-11-16 |
| DK155606C (da) | 1989-09-11 |
| SE7603040L (sv) | 1977-09-06 |
| AU508430B2 (en) | 1980-03-20 |
| DK155606B (da) | 1989-04-24 |
| AU2295377A (en) | 1978-09-07 |
| JPS52108012A (en) | 1977-09-10 |
| NO144388B (no) | 1981-05-11 |
| AT356818B (de) | 1980-05-27 |
| DK96077A (da) | 1977-09-06 |
| IE44907L (en) | 1977-09-05 |
| FR2342991B1 (fi) | 1981-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU621148B2 (en) | Removal of process chemicals from labile biological mixtures by hydrophobic interaction chromatography | |
| US4424206A (en) | Process for heat treatment of aqueous solution containing cold insoluble globulin to inactivate hepatitis virus | |
| US5324823A (en) | Adsorbent for cellular fibronectin and a method for fractional purification of fibronectin | |
| FI60501B (fi) | Foerfarande foer selektiv separering av interferon fraon interferon-raopreparat | |
| CA2024667C (en) | Process for preparing a concentrate of blood coagulation factor viii-von willebrand factor complex from total plasma | |
| FI95136C (fi) | Menetelmä anneksiinien puhdistamiseksi | |
| HU214905B (hu) | Eljárás VIII. faktor izolálására | |
| JP2009161547A (ja) | 高度に精製された第ｖｉｉｉ因子コンプレックス | |
| US4119774A (en) | Heparin purification method | |
| JPH0424360B2 (fi) | ||
| CA1240264A (en) | Covalently bound heparin-antithrombin iii complex | |
| DK147408B (da) | Fremgangsmaade til udvinding af thrombinagtige enzymer fra slangegifte eller slangegiftfraktioner | |
| CN103328000A (zh) | 用于从含有凝血因子的溶液中减少和/或除去FXI和FXIa的方法 | |
| FI62103B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av heparin med hoeg specifik aktivitet | |
| Tager | Studies on the nature and the purification of the coagulase-reacting factor and its relation to prothrombin | |
| US4822872A (en) | Method of purifying factor VIII | |
| CA1283073C (en) | Adsorbent for purification of blood coagulation factor viii and process for purification of blood coagulation factor viii using the same | |
| US5681750A (en) | Process for preparing a C1-esterase inhibitor concentrate (C1-INH), and concentrate obtained, for therapeutic use | |
| JPH0153650B2 (fi) | ||
| JP2775093B2 (ja) | 免疫グロブリン含有組成物 | |
| Inose et al. | The elevation of plasma levels of myeloperoxidase and polymorphonuclear leukocyte elastase as an index of bioincompatibility of the column during hemodialysis using with a β 2-microglobulin-selective adsorbent column | |
| JPS6048930A (ja) | アンチトロンビン３の精製法 | |
| JPS59167519A (ja) | 不活化トロンビンゲルにより血漿タンパク質混合液からフイブリノ−ゲンを除去する方法 | |
| JPS6237009B2 (fi) | ||
| JPH0566960B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired | ||
| TC | Name/ company changed in patent |
Owner name: PHARMACIA AB |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: PHARMACIA AB |
|
| MA | Patent expired |
Owner name: PHARMACIA AB |