FI60501B - Foerfarande foer selektiv separering av interferon fraon interferon-raopreparat - Google Patents
Foerfarande foer selektiv separering av interferon fraon interferon-raopreparat Download PDFInfo
- Publication number
- FI60501B FI60501B FI771624A FI771624A FI60501B FI 60501 B FI60501 B FI 60501B FI 771624 A FI771624 A FI 771624A FI 771624 A FI771624 A FI 771624A FI 60501 B FI60501 B FI 60501B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- interferon
- preparation
- attached
- crude
- buffer
- Prior art date
Links
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims description 70
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims description 70
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims description 70
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 57
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 29
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 19
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 11
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 10
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 7
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 238000003795 desorption Methods 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 claims description 3
- -1 agarose Chemical class 0.000 claims description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 claims 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 claims 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 claims 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 claims 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 31
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 21
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical group Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001064 anti-interferon Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 150000001923 cyclic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 241000906034 Orthops Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- CIUQDSCDWFSTQR-UHFFFAOYSA-N [C]1=CC=CC=C1 Chemical compound [C]1=CC=CC=C1 CIUQDSCDWFSTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 206010006007 bone sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- IZXGZAJMDLJLMF-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanol Chemical compound CNCO IZXGZAJMDLJLMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/565—IFN-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
© SUOMI—FINLAND patenttijulkaisu—patentskrift 60501 © Kv.lk?/lnt.CI? A 61 K 45/02, G 12 P 21/0^ (g) Patenttihakemus — Patentansökning 771621+ »Kar® (g) Hakemispäivä — Ansökningsdag 20.05*77 ® Alkupäivä — Giltighetsdag 20.05-77 @ Tullut julkiseksi — Blivit offentlig 22.11.77 ® Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm.—
Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad 30.10.81
Patentti- ja rekisterihallitus (g) Patentti myönnetty - Patent meddelat θβ. 06.83
Patent* och registerstyrelsen , ©©© Pyydetty etuoikeus—Begärd prioritet 21.05.7o
Ranska-Frankrike(FR) 7615^1^ (73) Agence Nationale de Valorisation de la Recherche (ANVAR), 13, rue Madeleine-Michelis, 92522 Neuilly-sur-Seine, Ranska-Frankrike(FR) (72) Edward De Maeyer, Orsay, Jaqueline De Maeyer-Guignard, Orsay,
Ranska-Frankrike(FR) (7M Forssen & Salomaa Oy (5U) Menetelmä interferonin selektiiviseksi erottamiseksi interferoniraaka-valmisteesta - Förfarande för selektiv separering av interferon fr&n interferon-rdpreparat Tämän keksinnön kohteena on menetelmä interferonin selektiiviseksi erottamiseksi affiniteettikromatografiaa käyttäen interferoniraakavalmisteesta, joka sisältää epäpuhtautena muita proteiineja, jossa menetelmässä interferoniraakavalmiste saatetaan kosketuksiin adsorboijan kanssa, joka koostuu kantaja-aineesta sekä siihen liitetystä interferonin ligandina toimivasta yhdisteestä, ja desorboidaan interferoni.
Tiedetään, että interferoni on hyvin arvokas terapeuttinen tuote varsinkin sen huomattavien antiviraalisten ja immunodepressiivisten ominaisuuksien johdosta.
Tavallisten synteesimenetelmien in vitro mukaan tätä tuotetta saadaan virusten tai kemiallisten aineiden vaikuttaessa kudosviljelmiin. Mutta saadut valmisteet sisältävät myöskin epäpuhtauksia. Varsinkin nämä valmisteet sisältävät proteiineja, joilla on pyrogeeninen vaikutus ja jotka lisäksi voivat aiheuttaa vastaanottajassa erikoisen herkistymisen.
Raakoja interferonivalmisteita ei voida tämän johdosta käyttää välittömästi terapeuttisesti, vaan ne on puhdistettava.
2 60501
On ehdotettu erilaisia puhdistusmenetelmiä, varsinkin geelisuodatusta ja ionin-vaihtimien käyttöä.
Käytettäessä näitä menetelmiä interferonivalmisteiden puhdistamiseen ovat saannot olleet huonoja.
On ehdotettu myös affiiniteettikromatografian käyttöä puhdistukseen. Tämä menetelmä perustuu sopivalla tavalla kantaja-aineeseen liitetyn ligandin muodostaman adsorboivan faasin ja ko. tuotteen väliseen selektiiviseen affiniteettiin. Tuotetta sisältävän valmisteen kulkeminen adsorboivassa faasissa mahdollistaa tuotteen pidättymisen selektiivisellä tavalla ligandiin ja näin sen erottamisen sitä sisältävästä valmisteesta. Kiinnitetyn tuotteen talteenotto voidaan sitten suorittaa sopivan eluointi-aineen avulla.
Affiniteettikromatografiamenetelmät, joissa käytetään interferonin puhdistamiseen erikoisia vasta-aineita, anti-interferonia, eivät ole suuremmassa mitassa vielä kehittyneet antiseerumien ja anti-interferonin valmistusvaikeuksien johdosta.
Tämän keksinnön kohteena on poistaa nämä epäkohdat ja aikaansaada menetelmä, jolla voidaan erittäin yksinkertaisella tavalla ja lisäksi erinomaisin tuotoksin saada interferonivalmisteita, joiden interferoniaktiivisten tuotteiden, joista epäpuhtauksina olevat proteiinit on suurimmaksi osaksi poistettu, pitoisuus on suuri, ja joita voidaan tämän johdosta käyttää terapeuttisesti.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on pääasiallisesti tunnusomaista se, että ligandina käytetään yhdistettä, jolla on kaavan
0 NIL
Jl I SOjONa 00φ —r(' ίϊ-Q.---
SOjONa ""^OH
3 60501 mukainen sinisen kromoforin polysyklinen rakenne, jossa kaavassa R on H tai -S020Na.
Rakenne mahdollistaa interferonin selektiivisen pidättymisen, kun käytetyn adsor-boijan määrä on riittävä sekä ligandin ja puhdistettavan valmisteen välinen kosketus kestää riittävän kauan, niin että saavutetaan edellä mainittujen valmisteiden interferoniaktiivisuutta omaavien tuotteiden haluttu kiinnittyminen, ja näin kiinnitetyt tuotteet otetaan talteen desorboimalla nämä kiinnitetyt tuotteet puskurin avulla, jonka suolapitoisuus on hypermolaarinen veren suolapitoisuuteen nähden.
Näin on mahdollista erottaa huomattavan selektiivisesti interferoni sitä sisältävistä valmisteista, jotka voivat olla yhtä hyvin ihmis- kuin eläinalkuperää ja varsinkin kudosviljelmien pinnalta saatuja nesteitä, tuoreita viljelmiä (primäärisiä tai sekundäärisiä) tai jatkuvia solukolta, joiden solut on saatettu tuottamaan interferonia edullisesti seerumia sisältämättömässä viljelyväliaineessa virusten tai synteettisen nukleiinihapon kuten poly I.C avulla.
Interferoni voidaan ottaa talteen helposti ja käytännöllisesti katsoen melkein totaalisesti ja sen denaturoitumatta suorittamalla desorptio edellä mainituissa sopivissa olosuhteissa. Tämän menetelmän merkitystä lisää vielä se, että käytetyn adsorboijan adsorptiokyky pysyy käytännöllisesti katsoen ennallaan. Näin ollen tätä adsorboijaa voidaan käyttää useampia kertoja, mikä on erittäin edullista taloudelliselta kannalta.
Keksinnön erään sovellutusmuodon mukaan adsorboija sisältää geelin muodostavaa kiinteää kantaja-ainetta, joka on polysakkaridia kuten agaroosia tai sen johdannaista, varsinkin modifioitua agaroosia, jossa polysakkaridiketjut ovat verkkoutu-neet kolmiulotteiseksi verkoksi, erittäinkin tavaramerkillä SEPHAROSE (Pharmacia) myytyä, tai polyakryyliamidia tai akryyliamidihartsia.
Kantajaan liitetyn ligandin muodostaa edullisesti BLEU CIBACRON F3GA tai tavaramerkillä BLEU CIBACRON 3GA myyty tuote, joka eroaa edellisestä oleellisesti siten, että ketjun päässä olevan fenyyliradikaalin S020Na-ryhmän tilalla on vetyatomi.
Ligandina käytetty syklinen yhdiste voidaan vaikeuksitta kiinnittää polysakkaridiin, varsinkin molekyylipainoltaan suuruusluokkaa 2 miljoonaa olevaan polysakkaridiin nimeltään DEXTRAN 2000. Tämän jälkeen polysakkaridi liitetään kantaja-aineeseen.
Tällainen edullinen tuote, jonka siis muodostaa DEXTRAN 2000:aan liitetty sykli- 4 60501 nen yhdiste, on tavaramerkillä BLEU DEXTRAN 2000 saatava tuote, joka vastaa aikaisemmin mainittua DEXTRAN 2000:aan kiinnitettyä BLEU CIBACRON F3GA:a. Tämä tuote on edullisesti liitetty DEXTRAN 2000:n välityksellä agaroosin muodostamaan kantaja-aineeseen, joka on erityisesti SEPHAROSE'a, joka vastaa kaupallista tuotetta BLEU DEXTRAN SEPHAROSE (valmistaja Pharmacia, Uppsala, Ruotsi).
Vielä selittämättömistä syistä on käytännössä käyttökelpoiseksi mainitulla BLEU CIBACRON F3GA tyyppisellä polysyklisellä yhdisteellä suuri affiinisuus interferoniin. Yksinkertaisella kosketuksella edellä esitetyissä iso- tai hypomolaarisissa olosuhteissa, jotka edullisesti on aikaansaatu noin 0,01-0,15 M molaarisuuden omaavan puskurin avulla, mainitut tuotteet adsorboituvat selektiivisesti, kun taas suurin osa valmisteissa olevista epäpuhtauksista jää adsorboitumatta.
On erittäin yksinkertaista saattaa adsorboija ja puhdistettava valmiste keskenään kosketukseen kromatografiakolonnissa saattamalla puhdistettava valmiste kulkemaan kolonnin läpi. Adsorboijalla täytetty kolonni tasapainotetaan mainitulla puskurilla, jonka pH on suuruusluokkaa 6-8, edullisesti neutraali.
Käytetään raakoja interferonivalmisteita, joiden interferonipitoisuus on noin 46 . ...
10 -10 kansainvälistä yksikköä 0,1-0,2 g:ssa proteiinia, mikä antaa ommaisaktii- visuuden (kansainvälisiä interferoniyksiköitä mg:aa proteiinia kohti), joka on 10 -10^ välillä. Nämä valmisteet voidaan johtaa sellaisinaan kolonnin läpi tai ne voidaan ennalta dialysoida puskurin avulla, jota on käytetty mainitun kolonnin tasapainotukseen. Työskenneltäessä kudosviljelyvällaineen kanssa isomolaarisissa olosuhteissa interferonisaanto on noin 80-90%, kun taas hypomolaarisissa olosuh-eissa se on 100 %. Viimeksi mainitussa tapauksessa erittäin sopivan puskurin muodostaa Tris-HCl 10 mM pH 7,5. Tris on lyhennys, joka tarkoittaa tris-(hydroksi-metyyliaminometaania).
Kiinnittyneet tuotteet voidaan ottaa talteen lisäämällä puskurin suolapitoisuutta, varsinkin lisäämällä asetaatteja, fosfaatteja, klorideja tai muita suoloja siten, että saadaan hypermolaarinen suolapitoisuus veren suolapitoisuuteen nähden ja ainakin 0,5 M, edullisesti 1 M.
Interferonin talteenotto suoritetaan edullisesti kolonnista eluoimalla.
Tämä talteenotto voidaan kokonaan suorittaa vesiliuoksessa. On todettu, että orgaanisia liuottimia käyttämättä on mahdollista ottaa talteen käytännöllisesti katsoen 5 60501 totaalisella tavalla ligandiin kiinnittyneet interferoniaktiiviset tuotteet käyttämällä edellä esitetyn kaltaista hypermolaarisen puskurin vesiliuosta.
Saadut tulokset ovat tyydyttäviä olkoonpa interferonin alkuperä mikä tahansa ja varsinkin, kun se on peräisin sidekudoksista tai valkosoluista.
Kokoamalla valitut fraktiot saadaan puhdistettuja interferonivalmisteita, joiden interferonipitoisuus on suuri ja jotka käytännöllisesti katsoen ovat kokonaan vapautetut epäpuhtauksina olevista muista proteiineista, ja ainakin 90 %:sti alkujaan läsnäolevista muista proteiineista.
Lisäksi eluointiolosuhteet mahdollistavat interferoniaktiivisten tuotteiden pääosan kokoamisen fraktioon, jonka tilavuus on pieni, jolloin etuna on, että saadaan valmisteita, joiden interferonipitoisuus on suuri raaoissa valmisteissa olevaan pitoisuuteen verraten.
Niinpä lähtemällä edellä esitetyistä interferoniraakavalmisteista, joiden ominais-aktiivisuus jo on suuri, suuruusluokkaa 10^ kansainvälistä yksikköä proteiini mg kohti, voidaan tämän keksinnön mukaista menetelmää käyttämällä melkein totaalisin tuotoksin ja yhdessä ainoassa vaiheessa saada interferonivalmisteita, jotka ovat 30-40 kertaisesti puhdistettuja raakavalmisteisiin verraten, ja joiden ominais- g aktiivisuus on välillä 1-5 x 10 kansainvälistä yksikköä interferonia mg:aa proteiinia kohti. Tämä ominaisaktiivisuus on parhaita saatuja.
Puhdistetuilla valmisteilla on edulliset terapeuttiset ominaisuudet ja tarkemmin sanottuna hyvin tärkeä antiviraalinen vaikutus, kuten eri kokeet ovat osoittaneet.
Valmisteilla on vaikutusta varsinkin Hepatitis B virukseen, mikä on osoitettu keksinnön mukaisesti puhdistettujen ihmissidekudos- ja ihmisvalkosoluinterferonivalmis-teiden avulla kroonista Hepatitis B:tä sairastavissa potilaissa. Suoritetut kokeet on julkaissut Desmyter et ai julkaisussa The Lancet sivuilla 522-645, 1976 ja Greenberg et ai julkaisussa J. Med. 295 sivuilla 517-522, 1976. On voitu todeta näiden potilaiden maksan toiminnan huomattava paraneminen, jota on edistänyt infektoituneiden solujen korvautuminen interferonin suojaamilla infektoitumattomilla soluilla.
Keksinnön mukaiset interferonivalmisteet ovat osoittautuneet samoin tehokkaiksi Herpes simplex'iin nähden ja varsinkin Hepatitiksen aiheuttaman sarveiskalvon tulehduksen uusiutumisten estämisessä. Keksinnön mukaisten ihmisinterferonivalmisteiden avulla Kaufman'in et ai julkaisussa J. Infect. Dis. 133 (suppt) A 165-168, 1976 60501 6 esittämien menetelmien mukaan suoritetut kokeet ovat osoittaneet näiden valmisteiden suojaavan vaikutuksen viruksen aiheuttamaan infektioon nähden ja niiden estävän vaikutuksen Hepatitiksen aiheuttaman sarveiskalvon tulehduksen uusiutumisiin.
Lisäksi valmisteet vähentävät viruskomplikaatioiden, varsinkin Herpes Zoster'ista johtuvien uusiutumista ja kestoa, kuten on ilmennyt Jordan et al:n julkaisussa J. Infect. Dis. 130, 56-62, 1974 esittämistä kokeista. Valmisteet näyttävät toisaalta pidentävän kasvannaista vastustavien ominaisuuksiensa johdosta luusarkoomaa sairastavien potilaiden eloonjäämisaikaa. Nämä ominaisuudet voidaan osoittaa Strander'in et ai Acta Orthop. Scand:ssa 45, sivut 958-959, 1974 esittämällä menetelmällä.
Mainitut kokeet ovat osoittaneet keksinnön mukaisten interferonivalmisteiden vaarattomuuden ja niiden käytöstä johtuvien turmiollisten sivuvaikutusten puuttumisen.
Keksinnön mukaisten puhdistettujen valmisteiden huomattavan puhtauden johdosta niitä käytetään edullisesti sellaisinaan lääkkeen aktiivisena aineosana.
Keksintöä selvittävät seuraavat esimerkit.
Esimerkki 1 BLEU DEXTRAN SEPHAROSE affiniteettikromatografiakolonnin valmistus eläin- ja ihmis-alkuperää olevan interferonin puhdistamista varten 1. BLEU DEXTRAN SEPHAROSE - geelin valmistus BLEU DEXTRAN SEPHAROSE-geelien valmistusmenetelmän ovat esittäneet L.D. Ryan ja C.S. Vestling (Arch. Biochem. Biophys., 160, 279-284, 1974). Tästä julkaisusta alkaen ei enää tarvitse aktivoida SEPHAROSE'a bromisyaanilla kuten Cuatrecasas on aikanaan esittänyt (Cuatrecasas P., J. Biol. Chem., 3059-3065, 1970), koska kaupasta on saatavissa lyofilisoituja käyttövalmiita jo aktivoituja SEPHAROSE-valmistei-ta, kuten bromisyaanilla aktivoitua SEPHAROSE'a ja BLEU DEXTRAN 2000, joita myy esim. Pharmacia (Uppsala, Ruotsi).
a) SEPHAROSE (CNBr-SEPHAROSE 4B)-geelin valmistus
Geelin paisuttamiseksi ja lyofilisoidussa valmisteessa olevien bakterisidien 7 60501 poistamiseksi pestään lasisuodattimella 1 mM HCl-liuoksella noin neljännestunnin ajan haluttua määrää CNBr-SEPHAROSE:a, jolloin grammasta kuivatuotetta saadaan noin 3,5 ml geeliä. Tätä tarkoitusta varten käytetään 200 ml 1 mM HCl:ää CNBr-SEPHAROSE'n kuivapainogrammaa kohti. Muodostettu geeli kiinnitetään heti BLEU DEXTRAN 2000:een.
b) SEPHAROSE-geelin kiinnittäminen BLEU DEXTRAN 2000:aan Määrätään kiinnittyvä BLEU DEXTRAN määrä ottamalla huomioon, että gramma kuivaa SEPHAROSE'a pystyy kiinnittämään 80-100 mg BLEU DEXTRAN'ia. Tämä määrä liuotetaan alkaliseeen puskuriin, jonka pH on suuruusluokkaa 8-10, edullisesti 0,4 M karbo-naattipuskuriin, jonka pH on 10 (20 mg BLEU DEXTRAN'ia liukenee helposti yhteen ml karbonaattipuskuria).
BLEU DEXTRAN liuos kaadetaan geelille, joka on ennalta huuhdeltu 3 tai 4 kertaisel-la tilavuudellaan karbonaattipuskuria (0,4 M pH 10). Geelin ja BLEU DEXTRAN’in seos kaadetaan tummalasiseen pulloon ja sitä sekoitetaan kevyesti esimerkiksi pyörivän pyörän avulla noin 18-24 tunnin ajan lähellä +4°C olevassa lämpötilassa kiinnittymisen edistämiseksi.
Kiinnittämisvaiheen jälkeen saatua BLEU DEXTRAN SEPHAROSE tuotetta huuhdellaan lasisuodattimella karbonaattipuskurin ylimäärällä kiinnittymättömän BLEU DEXTRAN'in poistamiseksi, kunnes puskuri jää värittömäksi (optinen tiheys pienempi tai yhtäsuuri kuin 0,02).
BLEU DEXTRAN'iin kiinnittymättornien aktiivisten kohtien poistamiseksi tuote saatetaan sitten kosketukseen alkanoliamiini-, varsinkin etanoliamiiniliuoksen (1 M, pH 8) kanssa noin kahden tunnin ajaksi lämpötilassa +4°C. Tätä vaihetta varten tuote kaadetaan edullisesti pullosta toiseen astiaan.
Geelin tekemiseksi kestäväksi pH:n, molaarisuuden tai muita muutoksia vastaan se huuhdellaan sitten kolmasti, vuorotellen sekä happamalla liuoksella, jonka muodostaa asetaattipuskuri (0,1 M pH 4,0), johon on lisätty 1 M NaCl:a, että alkalisel-la liuoksella, jonka muodostaa 0,1 M boraattipuskuri (pH 8,5), johon on lisätty 1 M NaCl:a.
Näiden huuhtelujaksojen jälkeen geeli tasapainotetaan 10 mM Tris-HCl-puskurilla (pH 7,5), johon on lisätty bakterisidista ja antiseptistä ainetta, varsinkin 0,02 % natriumatsidia.
8 60501 2. Affiniteettikromatografiakolonnin valmistus BLEU DEXTRAN SEPHAROSE kaadetaan mitoiltaan sopivaan kromatografiakolonniin (yksi ml geeliä pystyy kiinnittämään noin 8 miljoonaa kansainvälistä yksikköä interferonia).
Ennen käyttöä kolonni huuhdellaan 20 kertaisella kuolleen tilavuuden määrällä 10 mM Tris HCl-puskuria (pH 7,5), johon on lisätty 0,02 % natriumatsidia.
Helposti irtoavien BLEU DEXTRAN-molekyylien poistamiseksi johdetaan läpi eluointi-liuosta, joka sisältää Tris-HCl (10 mM, pH 7,5), johon on lisätty 1 M NaCl niin kauan, että optinen tiheys 254 nimissä pysyy arvossa 0.
(Suurikokoisten kolonnien ollessa kysymyksessä suositellaan suoritettavaksi useita peräkkäisiä huuhtelujaksoja Tris-puskurilla, johon on mahdollisesti lisätty NaCl, kolonnien sopeuttamiseksi pH:n, molaarisuuden tai muiden olosuhteiden vaihteluihin) .
BLEU DEXTRAN SEPHAROSE kolonnia voidaan käyttää useita kuukausia interferonin useita puhdistusjaksoja varten edellyttäen, että kontaminoitumista ei tapahdu. Sen suojaaminen natriumatsidilla ja pitäminen kylmässä, noin +4°C:ssa, on riittävä varastointitoimenpide.
Natriumatsidin ollessa myrkyllistä soluille, on johdettava ainakin kolme kuollutta tilavuutta puskuria Tris-HCl kolonniin ilman atsidia kaikkien antiseptisten aineiden jäämien poistamiseksi.
Esimerkki 2
Ihmisinterferonivalmisteen puhdistaminen kromatografoimalla esimerkin 1 mukaisessa kolonnissa.
Puhdistettavan interferonivalmisteen muodostaa 32 ml vasta siirrostetun ihmis-fibroblastiviljelmän, joka on saatettu tuottamaan interferonia poly I.C.illä, pinnalta saatua nestettä. Pitoisuus on 6250 kansainvälistä yksikköä interferonia ml:a kohti, kun proteiinia on 1 mg ml kohti (tämän valmisteen suuri proteiinipitoisuus johtuu siitä, että se on rikastettu ihmisalbumiinilla säilyttämistä varten). Maini-. . 4 tun tuotteen ominaisaktiivisuus on 6,2 x 10 kansainvälistä yksikköä interferonia proteiini-mg kohti.
Valmistetta dialysoidaan voin +4°C lämpötilassa viidentoista tunnin ajan kolonnin 9 60501 tasapainotuspuskuria vastaan, tässä tapauksessa Tris-HCl (0,01 M, pH 7,5) vastaan.
32 ml valmistetta saatetaan kulkemaan nopeudella 1 ml minuutissa kolonnissa, jonka läpimitta on 1,6 cm ja jossa on 10,5 cm korkeuteen esimerkin 1 mukaista BLEU DEXTRAN SEPHAROSE geeliä. Kolonni huuhdellaan ennalta ainakin sen kuolleen tilavuuden kolminkertaisella määrällä atsiditonta puskuria. Sorptiovaihetta tarkkaillaan aallonpituudella 280 nm rekisteröimällä optinen tiheys (OD).
Kun kaikki valmiste on tunkeutunut geeliin, suoritetaan kolonnin pesu saattamalla kolonnin läpi kulkemaan viidestä kahdeksaan kuollutta tilavuutta puskuria Tris-HCl (10 mM, pH 7,5) adsorboitumattomien epäpuhtauksien poistamisen varmistamiseksi.
Optinen tiheys alenee arvoon 0 ja jää sitten tähän arvoon.
Interferonin talteenottamiseksi saatetaan kolonnin läpi kulkemaan 0,5-0,7 ml/min Tris-HCl (10 mM, pH 7,5) vesiliuos, johon on lisätty tällä kerralla 1 M NaCl.
Putkiin kootaan 6 ml fraktiot, joiden OD mitataan sorptiovaiheen tarkistamiseksi. Alla esitetään numeroitujen putkien fraktioilla 8-11 saadut tulokset niiden inter-feronipitoisuuksien ja proteiinipitoisuuksien avulla.
Putken n:o Kansainvälistä yksikköä Proteiineja Ominaisuus- interferoni a/ml (pg/ml) aktiivisuus 8 6 250 250 9 61 900 278 2,2 x 105 10 830 160 11 460 80 Hävitään, että interferoniaktiiviset tuotteet ovat pääasiallisesti kerääntyneet putkeen n:o 9. Interferonipitoisuus (kansainväl. yksikköä/ml) on kymmenen kertaa niin suuri kuin alussa havaittu, kun taas proteiinipitoisuus on noin 25 % raaka-valmisteiden proteiinipitoisuudesta, ja ominaisaktiivisuus on lisääntynyt 36-kertaiseksi, toisin sanoen BLEU DEXTRAN SEPHAROSE kolonnista poistuva valmiste on puhdistettu 36 kertaisesti raakatuotteisiin verrattuna.
Havaitaan, että vesiliuoksena kromatografoidun interferonin talteensaanti on totaalista. Putkeen n:o 9 on koottu 6 ml interferonia, jonka pitoisuus on 61900 yksikköä ml kohti, siis yhteensä 371400 yksikköä interferonia. Alussa oli 32 ml valmistetta, jossa oli 6250 yksikköä ml kohti, siis yhteensä 200 000 yksikköä.
10 60501
Interferoniaktiivisten tuotteiden desorptiovaiheen jälkeen kolonni regeneroidaan saattamalla noin kymmenkertainen kuollut tilavuus puskuria Tris-HCl (10 mM, pH 7,5), johon on lisätty 0,02 % natriumatsidia, kulkemaan sen läpi. Näin kolonni on valmis uuteen käyttöön ja se voidaan käyttöjen välisenä aikana säilyttää matalassa lämpötilassa.
Usean käyttöjakson jälkeen geeli voidaan regeneroida kiinnittyneiden proteiini-jäämien poistamiseksi. Tätä varten kolonni huuhdellaan viisinkertaisella kuolleella tilavuudellaan 3 M KCl:a.
Interferonin puhdistamisen tehokkuutta BLEU DEXTRAN SEPHAROSE geelissä esittää esimerkki 3, jossa kromatografoidaan hiiri-interferonivalmistetta, jota ei ole etukäteen keinotekoisesti rikastettu vierailla proteiineilla.
Esimerkki 3
Hiiri-interferonivalmisteen puhdistaminen kromatografisesti esimerkin 1 mukaisessa kolonnissa.
Puhdistettava interferonivalmiste on hiiren kudosviljelmän (sveitsiläisen hiiren fibroblasteja, soluja C 243), joka on saatettu tuottamaan interferonia Newcastle-taudin viruksella, pinnalta saatua nestettä. Viruksen inaktivoinnin jälkeen pH:ssa 2 pinnalta saatua nestettä dialysoidaan Tris-HCl-puskuria (0,01 M, pH 7,5) vastaan noin 14 tunnin ajan noin +°4C lämpötilassa.
Valmisteen alkuperäinen interferonipitoisuus on 1,5 x 10^ kansainvälistä yksikköä interferonia ml kohti, proteiinipitoisuus on 0,1 mg/ml ja ominaisaktiivisuus on 1,5 x 10^ interferoniyksikköä/mg proteiinia.
100 ml interferonia sisältävää valmistetta saatetaan kulkemaan esimerkin 1 mukaisessa BLEU DEXTRAN SEPHAROSE kolonnissa, jonka läpimitta on 1,6 cm ja joka sisältää geeliä 10,5 cm korkeuteen, työskennellen kuten esimerkissä 1. Valmisteen kulkemisen ja kolonnin huuhtelun jälkeen suoritetaan desorptio 1 M NaCl sisältävällä Tris-HCl-puskurin (0,01 M) vesiliuoksella kooten 6 ml:n fraktioita. Interferoni on rikastunut pääasiallisesti putkiin 15 ja 16, kuten allaolevassa taulukossa esitetyt tulokset osoittavat: 11 60501
Putken n:o Kansainvälistä inter- Proteiineja Ominaisuusaktiivisuus feroniyksikköä/ml (pg/ml) (interferoniyksiköitä mg proteiinia kohti) 14 2,4 x 105 70 15 2,3 x 107 111 2,1 x 108 16 5,8 x 106 12 4,8 x 108 17 2,4 x 105 11 18 1,2 x 105 10
Raakaan valmisteeseen nähden ominaisaktiivisuuden lisääntyminen, toisin sanoen puh-distusaste, on 15 kertainen putkeen n:o 15 nähden ja 35 kertainen putkeen n:o 16 nähden.
(Lisäksi raakavalmisteessa olevan interferonin talteenotto on totaalista).
6 8 100 ml:ssa lähtövalmistetta oli kaikkiaan 1,5 x 10 x 100 eli 1,5 x 10 yksikköä interferonia.
Kokoamalla kaikki interferoniaktiiviset tuotteet kahteen 6 ml putkeen, eli putkeen n:o 15 : 2,3 x 107 x 6 kaikkiaan 13,8 x 107 yksikköä putkeen n:o 16 : 5,8 x 108 x 6 kaikkiaan 3,4 x 107 yksikköä ja laskemalla yhteen putkissa 15 ja 16 havaitut interferonin aktiivisuusarvot g saadaan kokonaismääräksi 1,8 x 10 yksikköä interferonia.
Edellä esitetty osoittaa keksinnön mukaisen menetelmän huomattavan selektiivisyy" den. Menetelmän käyttö mahdollistaa interferoniaktiivisuuden lisäämisen, jolloin samalla poistuu suurin osa proteiiniepäpuhtauksista.
Claims (8)
1. Menetelmä interferonin selektiiviseksi erottamiseksi affiniteettikromato-grafiaa käyttäen interferoniraakavalmisteesta, joka sisältää epäpuhtautena muita proteiineja, jossa menetelmässä interferoniraakavalmiste saatetaan kosketuksiin adsorboijan kanssa, joka koostuu kantaja-aineesta sekä siihen liitetystä interferonin ligandina toimivasta yhdisteestä, ja desorboidaan interferoni, tunnettu siitä, että ligandina käytetään yhdistettä, jolla on kaavan 0 n»2 II I SOjONa R SOjONa ^OH mukainen sinisen kromoforin polysyklinen rakenne, jossa kaavassa R on H tai -S020Na.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sininen kromofori kiinnitetään geelin muodostavaan kiinteään kantaja-aineeseen, jonka osaskoko on sellainen, että se päästää läpi raakavalmisteen muut makromolekyylit paitsi interferonin.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kantaja-aineeseen kiinnitetty sininen kromofori on tasapainotettu puskurin avulla, jonka suolapitoisuus on isomolaarinen tai hypomolaarinen veren suolapitoisuuteen nähden, s.o. vähemmän tai yhtä suuri kuin 0,15 M ja että interferonin desorptio suoritetaan puskurin avulla, jonka suolapitoisuus on hypermolaarinen verrattuna veren suolapitoisuuteen, s.o. vähintään 0,5 M.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kantaja-aine sisältää polysakkaridia kuten agaroosia, varsinkin modifioitua agaroosia, jonka polysakkaridiketjut ovat verkkoutuneet kolmiulotteiseksi verkoksi, tai vaihtoehtoisesti polyakryyliamidia tai akryylihartsia. 60501 13
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ligandi on kiinnitetty dekstraaniin, jonka molekyylipaino on noin 2 miljoonaa.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään adsorboijaa, joka sisältää agaroosia, johon mainittu ligandi on kiinnittynyt dekstraanin avulla.
7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että raakavalmiste sisältää fibroblasti-interferonia.
8. Jonkin patenttivaatimuksista 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että raakavalmiste sisältää valkosoluinterferonia.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR7615414A FR2351665A1 (fr) | 1976-05-21 | 1976-05-21 | Procede de purification de preparations possedant notamment une activite interferon, preparations purifiees ainsi obtenues et leur application en tant que medicament |
| FR7615414 | 1976-05-21 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI771624A7 FI771624A7 (fi) | 1977-11-22 |
| FI60501B true FI60501B (fi) | 1981-10-30 |
| FI60501C FI60501C (fi) | 1983-06-06 |
Family
ID=9173478
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI771624A FI60501C (fi) | 1976-05-21 | 1977-05-20 | Foerfarande foer selektiv separering av interferon fraon interferon-raopreparat |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4172071A (fi) |
| BE (1) | BE854916A (fi) |
| DE (1) | DE2722970A1 (fi) |
| FI (1) | FI60501C (fi) |
| FR (1) | FR2351665A1 (fi) |
| GB (1) | GB1585601A (fi) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6410697B1 (en) * | 1979-04-20 | 2002-06-25 | Schering Corporation | Process for purifying human leukocyte interferon |
| FI77877C (fi) * | 1979-04-20 | 1989-05-10 | Technobiotic Ltd | Foerfarande foer framstaellning och rening av human le-formig interferonprotein. |
| JPS5651995A (en) * | 1979-10-05 | 1981-05-09 | Green Cross Corp:The | Preparation of interferon |
| US4278661A (en) * | 1979-10-12 | 1981-07-14 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Purification of interferon |
| US4824432A (en) * | 1981-03-24 | 1989-04-25 | S.V.S. Laboratories, Inc. | Method for treating AIDS and other immune deficiencies and immune disorders |
| US4362155A (en) * | 1981-03-24 | 1982-12-07 | Skurkovich Simon V | Method and apparatus for the treatment of autoimmune and allergic diseases |
| US4605394A (en) * | 1982-12-03 | 1986-08-12 | Simon V. Skurkovich | Methods for the treatment of pathological conditions by removing interferon from the organism |
| JPS5821691A (ja) * | 1981-07-29 | 1983-02-08 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | α−及びβ−インタ−フェロンの精製方法 |
| US4499014A (en) * | 1984-02-07 | 1985-02-12 | Interferon Sciences, Inc. | Method for purifying gamma-interferon |
| US4658017A (en) * | 1984-02-14 | 1987-04-14 | Health Research, Inc. (Roswell Park Division) | Method for the large scale purification of human fibroblast interferon |
| US4803163A (en) * | 1984-06-04 | 1989-02-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Preparation of a protein fraction exhibiting cell growth-inhibiting activity |
| EP0195084B1 (de) * | 1984-09-21 | 1990-05-23 | Vsesojuzny Nauchno-Issledovatelsky Institut Osobo Chistykh Biopreparatov | Rektifizierungsverfahren menschlichen leukozyten-interferons |
| EP0190606B1 (de) * | 1985-02-04 | 1990-05-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Adsorbens für die Reinigung von Proteinen |
| US5144013A (en) * | 1986-09-24 | 1992-09-01 | Ube Industries, Ltd. | Body fluid purifying material and method for purifying body fluid by use thereof |
| US5434249A (en) * | 1992-05-27 | 1995-07-18 | Viragen Inc. | Method for modulating specific activity of inteferon alpha |
| US20040199099A1 (en) * | 1998-07-10 | 2004-10-07 | Matson James R | Hemofiltration systems, methods and devices used to treat inflammatory mediator related disease |
| US6287516B1 (en) | 1998-07-10 | 2001-09-11 | Immunocept, L.L.C. | Hemofiltration systems, methods, and devices used to treat inflammatory mediator related disease |
| US6736972B1 (en) | 2000-03-24 | 2004-05-18 | Immunocept, L.L.C. | Method and system for providing therapeutic agents with hemofiltration for reducing inflammatory mediator related diseases |
| US7291122B2 (en) * | 2000-03-24 | 2007-11-06 | Immunocept, L.L.C. | Hemofiltration methods for treatment of diseases in a mammal |
| US6787040B2 (en) * | 2000-05-16 | 2004-09-07 | Immunocept, L.L.C. | Method and system for colloid exchange therapy |
| CA2469846A1 (en) | 2001-02-27 | 2002-09-26 | Maxygen Aps | New interferon beta-like molecules |
| CN1674955A (zh) * | 2002-08-13 | 2005-09-28 | 阿尔比奥技术公司 | 选择性血浆交换治疗 |
| US10953148B2 (en) * | 2013-12-27 | 2021-03-23 | Eliaz Therapeutics, Inc. | Plasmapheresis device |
| CN114041622B (zh) * | 2021-10-16 | 2023-06-27 | 深圳市真味生物科技有限公司 | 电子雾化液制备用甜味剂母液脱色的工艺 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB980227A (en) * | 1962-08-16 | 1965-01-13 | Glaxo Lab Ltd | Purification and/or concentration of material containing interferon |
| GB1055896A (en) * | 1963-12-10 | 1967-01-18 | Glaxo Lab Ltd | Silica adsorbents in interferon purification and/or concentration |
| US3773924A (en) * | 1970-12-24 | 1973-11-20 | M Ho | Interferon production |
| FR2244543B1 (fi) * | 1973-07-27 | 1977-07-01 | Inst Nl Sante Rech Medica | |
| JPS5126900A (en) * | 1973-09-10 | 1976-03-05 | Research Corp | Ketsueki ryutai kara arubumin o sentakuteki ni jokyo suru hoho |
| US4016149A (en) * | 1973-09-10 | 1977-04-05 | Research Corporation | Selective removal of albumin from blood fluid and compositions therefore |
| NL7404589A (nl) * | 1974-04-03 | 1975-10-07 | Stichting Rega V Z W | Werkwijze voor het stabiliseren van interferon. |
| US3975344A (en) * | 1974-10-02 | 1976-08-17 | G. D. Searle & Co. | Interferon purification |
-
1976
- 1976-05-21 FR FR7615414A patent/FR2351665A1/fr active Granted
-
1977
- 1977-05-19 US US05/798,523 patent/US4172071A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-05-20 FI FI771624A patent/FI60501C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-05-20 DE DE19772722970 patent/DE2722970A1/de not_active Withdrawn
- 1977-05-23 BE BE177808A patent/BE854916A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-23 GB GB21596/77A patent/GB1585601A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2351665B1 (fi) | 1978-12-08 |
| FR2351665A1 (fr) | 1977-12-16 |
| FI771624A7 (fi) | 1977-11-22 |
| FI60501C (fi) | 1983-06-06 |
| GB1585601A (en) | 1981-03-11 |
| BE854916A (fr) | 1977-09-16 |
| DE2722970A1 (de) | 1977-12-08 |
| US4172071A (en) | 1979-10-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI60501B (fi) | Foerfarande foer selektiv separering av interferon fraon interferon-raopreparat | |
| ES2070919T5 (es) | Separacion cromatografica de las proteinas del plasma, principalmente del factor viii, del factor de willebrand de la fibronectina y del fibrinogeno. | |
| CA1073815A (en) | Method for purification and isolation of hepatitis virus for use in the preparation of vaccine | |
| FI72124C (fi) | Foerfarande foer tillvaratagande av interferon. | |
| AU621148B2 (en) | Removal of process chemicals from labile biological mixtures by hydrophobic interaction chromatography | |
| US4257938A (en) | Purification method of human fibroblast interferon | |
| JPS5944320A (ja) | Ｃ１不活性化剤の調製方法 | |
| US4440675A (en) | Human immune interferon | |
| US4382027A (en) | Purification of human immune interferon | |
| JPH0586097A (ja) | 上清ｉｖ、特にｉｖ−４またはコーンフラクシヨンｖまたはそれと類似の上清または画分からヒトアルブミンを単離する方法 | |
| JPS58201794A (ja) | ヒトインターフェロンβの濃縮精製法 | |
| JPS58159417A (ja) | 均一なヒトのインタ−フエロン及びその製造方法 | |
| GB2044775A (en) | Process for the preparation of immunoglobulin for intravenous administration | |
| US4617378A (en) | Purification of biologically active human immune interferon | |
| JP2004511492A (ja) | ビクニンを含む血漿画分、その調製方法、およびその使用 | |
| ES2213155T3 (es) | Procedimiento para la preparacion de un concentrado de inhibidor de la c1-esterasa (c1-inh) y concentrado obtenido, para uso terapeutico. | |
| JP2521551B2 (ja) | 抗血友病因子の製造方法 | |
| FI62103C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av heparin med hoeg specifik aktivitet | |
| JPS62191042A (ja) | 血液凝固第８因子吸着体およびそれを用いた血液凝固第８因子の精製法 | |
| GB1601744A (en) | Processes for the purification of interferon certain new and useful intermediates formed therein the purified interferon thus produced and pharmaceutical compositions containing | |
| JPS606191A (ja) | 低分子ウロキナ−ゼと高分子ウロキナ−ゼの分離方法 | |
| JP2775093B2 (ja) | 免疫グロブリン含有組成物 | |
| JPH0224840B2 (fi) | ||
| JPH05170799A (ja) | ヒトインターロイキン８の精製方法 | |
| JPH0459796A (ja) | アフィニティークロマトグラフィー用担体およびアンチトロンビン３の精製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: AGENCE NATIONALE DE VALORISATION DE LA |