CS196349B2 - Process for preparing heparine - Google Patents
Process for preparing heparine Download PDFInfo
- Publication number
- CS196349B2 CS196349B2 CS771523A CS152377A CS196349B2 CS 196349 B2 CS196349 B2 CS 196349B2 CS 771523 A CS771523 A CS 771523A CS 152377 A CS152377 A CS 152377A CS 196349 B2 CS196349 B2 CS 196349B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- heparin
- gel
- specific activity
- antithrombin
- matrix
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Vynález se - týká způsobu přípravy velmi čistého heparinu o vysoké specifické aktivitě.The invention relates to a process for the preparation of very pure heparin of high specific activity.
Heparinu se používá k léčebným účelům již několik desetiletí. Je jedním z nejlépe známých antikoagulancií a široce se ho používá, mimo jiné k prevenci trombósy.Heparin has been used for therapeutic purposes for several decades. It is one of the best known anticoagulants and is widely used, inter alia, to prevent thrombosis.
Heparin je sulfatovaný polysacharid, který lze připravovat ze živočišné střevní mukosy nebo plic poměrně složitými metodami. Heparinové přípravky používané v současné klinické praxi obsahují látku se značným rozptylem ve velikosti molekul, asi od 5000 až asi do 35 000. Specifická aktivita činí obvykle okolo 130 j/mg. Obchodní přípravky, které jsou v současné době dostupné, jsou značně heterogenní. Při terapii heparinem se vyskytují vedlejší účinky velmi vzácně, ale pokud se takové případy objeví, představují vážné problémy. Některé z těchto vedlejších účinků jsou pravděpodobně vyvolány nečistotami v heparinovém přípravku.Heparin is a sulphated polysaccharide that can be prepared from animal intestinal mucosa or lung by relatively complex methods. Heparin formulations used in current clinical practice contain a substance with considerable scattering in molecular sizes, from about 5000 to about 35,000. The specific activity is usually about 130 J / mg. The currently available commercial preparations are highly heterogeneous. Side effects occur very rarely with heparin therapy, but if such cases occur, they present serious problems. Some of these side effects are probably due to impurities in the heparin formulation.
Jsou tedy dobré důvody pro to, aby se vyráběly heparinové přípravky čistší než ty, které se běžně používají. Ve spojitosti se studiemi o antitrombinu, kofaktoru heparinu, byly zkoumány možnosti vazby bílkoviny na matrici. S překvapením bylo zjištěno, že antitrombin vázaný na matrici může specificky vázat zlomky molekul terapeuticky používaného heparinu, . který působí jako nositel klinicky cenného preventivního účinku heparinu proti trombóze. Při vhodně zvolených adsorpčních a desorpčních podmínkách lze připravit mimořádně . - čistý heparin. Dosažená specifická aktivita - byla 200 až 270 j/mg ve srovnání přibližně se 130 . j/ /mg výchozího materiálu. - Rozptyl molekulových hmotností u specificky vyčištěného heparinu byl omezenější než v původním materiálu. Kromě heparinového kofaktoru antitrombinu lze s výhodou používat i dalších bílkovin vázajících heparin, jako je inter-«f-trypsmový inhibitor s molekulovou hmotností okolo - 150 000, který lze získat . v průběhu izolace koagulačního faktoru IX (B- faktoru). S - antitrombinem vázaným na matrici bylo dosaženo nejlepší kvality- heparinu, se specifickou aktivitou až 270 j/ /mg.Thus, there are good reasons for making heparin preparations cleaner than those commonly used. In connection with studies on antithrombin, a heparin cofactor, the possibility of protein binding to the matrix has been investigated. Surprisingly, it has been found that antithrombin bound to the matrix can specifically bind fragments of the therapeutically used heparin molecules. which acts as a carrier of the clinically valuable preventive effect of heparin against thrombosis. Exceptionally, adsorption and desorption conditions can be prepared appropriately. - pure heparin. The specific activity achieved was 200 to 270 J / mg compared to approximately 130. j / mg of starting material. - The molecular weight scatter for specifically purified heparin was more limited than in the original material. In addition to the heparin cofactor antithrombin, other heparin binding proteins, such as an inter-β-trypsin inhibitor having a molecular weight of about --150,000, can be advantageously used. during the isolation of coagulation factor IX (B-factor). Matrix-bound antithrombin achieved the best heparin quality with a specific activity of up to 270 J / mg.
Heparin s velmi vysokým stupněm čistoty a specifické aktivity lze vyrábět způsobem podle tohoto vynálezu, který je jednoduchý a použitelný k průmyslové výrobě heparinu s vyšší specifickou aktivitou než je tomu - v případě existujících přípravků. Stanovení specifické aktivity heparinu bylo prováděno podle Densona a Bonnara - (1975, Brit. J. Haematol. 30, str. 139).Heparin with a very high degree of purity and specific activity can be produced by the process of the present invention, which is simple and applicable to the industrial production of heparin with a higher specific activity than that of existing formulations. Determination of specific heparin activity was performed according to Denson and Bonnar - (1975, Brit. J. Haematol. 30, p. 139).
Vynález je ilustrován následujícími příklady provedení.The invention is illustrated by the following examples.
Příklad 1Example 1
Čištění heparinu na antitrombinu vázaném na nosiči. Sloupcový postup.Purification of heparin on carrier-bound antithrombin. Column procedure.
Adsorpční gel byl připraven takto:The adsorption gel was prepared as follows:
Aktivace: 3 g bromkyanu byly rozpuštěny ve 30 ml destilované vody. 50 ml sedimentované agarosy (Sepharose (R) 4B, Pharmacia, Fine Chemicals, Uppsala, Švédsko] bylo přidáno k roztoku bromkyanu. Směs byla ochlazena v ledové lázni za míchání. Přídavkem 4 M roztoku hydroxidu sodného byla hodnota pH zvýšena na 11,2 a udržována po dobu 10 minut. Získaný gel byl potom - promyt studenou destilovanou vodou - a 0,2 M roztokem hydrogenuhličitanu sodného.Activation: 3 g of cyanogen bromide were dissolved in 30 ml of distilled water. 50 ml of sedimented agarose (Sepharose.RTM. 4B, Pharmacia, Fine Chemicals, Uppsala, Sweden) was added to the cyanogen bromide solution, and the mixture was cooled in an ice bath with stirring. The gel was then washed with cold distilled water and 0.2 M sodium bicarbonate solution.
Vazba: 200 mg antitrombinu, - čištěnéhopodle Miier-Andersona se sp. (1974, Thromb. Res. S, str. 439 až 452], bylo rozpuštěno v 50 ml 0,2 M roztoku hydrogenuhličitanu sodného s hodnotou pH 9,0 a přidáno ke gelu. Suspenze gelu a bílkoviny byla mírně míehá-na· - pří - teplotě - místnosti - přes - - noc, - - - - po-tom byla pečlivě promývána pufry o vysoké iontové síle, střídavě při vysokých a nízkých hodnotách pH.Binding: 200 mg antithrombin, - purified according to Miier-Anderson sp. (1974, Thromb. Res. S, pp. 439-452), was dissolved in 50 ml of a 0.2 M sodium bicarbonate solution, pH 9.0 and added to the gel. The gel-protein suspension was stirred gently. at room temperature overnight, then it was thoroughly washed with high ionic strength buffers, alternately at high and low pH values.
Čištění heparinu: adsorpční gel, obsahující antitrombin vázaný na matrici, byl naplněn do sloupce a ekvilibrován pufrem s hodnotou pH 7,4, obsahujícím 0,05 M Tris a - 0,15 M chloridu sodného. 300 mg heparinu (Vitrum, specifická aktivita - 130 j/mg) bylo - rozpuštěno ve 20 ml pufru s hodnotou - pH 7,4, obsahujícího 0,05 M Tris a 0,15 M chloridu sodného a prolito sloupcem. Potom byl gel promýván uvedeným pufrem, načež byl adsorbovaný heparin desorbován pufrem s hodnotou pH 7,4, obsahujícím 0,05 M Tris a 1,0 M chloridu sodného.Heparin Purification: The adsorption gel containing antithrombin bound to the matrix was packed in a column and equilibrated with a pH 7.4 buffer containing 0.05 M Tris and - 0.15 M sodium chloride. 300 mg of heparin (Vitrum, specific activity - 130 J / mg) was - dissolved in 20 ml of pH 7.4 buffer containing 0.05 M Tris and 0.15 M sodium chloride and poured through the column. The gel was then washed with the buffer, and the adsorbed heparin was desorbed with a pH 7.4 buffer containing 0.05 M Tris and 1.0 M sodium chloride.
Z eluovaného heparinu byla odstraněna sůl gelovou filtrací v destilované vodě na sloupci naplněném Sephadexem (Ř) G 25 (Pharmacia) a potom byl heparin lyofilizován. Vyčištěný heparin měl specifickou aktivitu 270 j/mg. Studie o rozptylu molekulové hmotnosti ukazují, že molekulová hmotnost u vyčištěného heparinu má značně omezenější rozptyl než má heparin původní.Salt was removed from the eluted heparin by gel filtration in distilled water on a column packed with Sephadex (R) G 25 (Pharmacia) and then the heparin was lyophilized. Purified heparin had a specific activity of 270 J / mg. Molecular weight scattering studies show that the molecular weight of purified heparin has a much more limited scatter than the original heparin.
Analýza sacharidů byla provedena metodou karbazol—kyselina sírová.Carbohydrate analysis was performed by carbazole-sulfuric acid.
Příklad - 2Example - 2
Čištění heparinu na antitrombinu vázaném na matrici. Přetržitý postup.Purification of heparin on matrix-bound antithrombin. Interrupted procedure.
Antitrombinová matrice byla připravena podle příkladu 1. Čištění heparinu: 500 mg heparinu (Vitrum, specifická aktivita 130 j/mg] bylo - rozpuštěno ve 300 ml pufru s hodnotou pH 7,4, obsahujícího 0,05 M Tris a 0,15 M chloridu sodného. 300 ml sedimentovaného antitrombinu, vázaného na sedimentovanou matrici, bylo ekvilibrováno uvedeným pufrem a vysušeno odsáváním. Adsorbent byl přidán k rpztoku heparinu, který byl potom míchán při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Gel byl potom vysušen odsáváním na skleněném filtru a promýván lOkrát po 200 ml pufru s hodnotou pH 7,4, obsahujícího 0,05 M Tris a 0,15 M chloridu sodného. Adsorbovaný heparin byl potom desorbován z gelu promýváním 3krát po 200 ml pufru s hodnotou pH 7,4, - obsahujícího 0,05 M Tris a 1,0 M chloridu sodného. Eluovaný heparin byl zkoncentrován lyofilizací. Zbývající· - sůl - - byla - - odstraněna gelovou filtrací na Sehpadexu G 25 v destilované - - vodě a získaný heparin byl pak lyofilizován. Specifická aktivita vyčištěného heparinu byla 250 j/mg.The antithrombin matrix was prepared as in Example 1. Heparin purification: 500 mg heparin (Vitrum, specific activity 130 j / mg) was - dissolved in 300 ml of pH 7.4 buffer containing 0.05 M Tris and 0.15 M chloride 300 ml of sedimented antithrombin bound to the sedimented matrix were equilibrated with the buffer and sucked dry The adsorbent was added to the heparin solution, which was then stirred at room temperature for 1 hour, then the gel was suction dried on a glass filter and washed 10 times 200 ml of pH 7.4 buffer containing 0.05 M Tris and 0.15 M sodium chloride The adsorbed heparin was then desorbed from the gel by washing 3 times with 200 ml of pH 7.4 buffer containing 0.05 M Tris and 1.0 M sodium chloride The eluted heparin was concentrated by lyophilization and the remaining salt was removed by gel filtration on Sehpadex G 25 in distilled water. heparin was then lyophilized. The specific activity of the purified heparin of 250 U / mg.
Příklad 3Example 3
Čištění heparinu na gelovém adsorbentu ob-sahttjtcím - - inter-a-trypsinový - - - inhibitor - vázaný na matrici.Purification of heparin on a gel adsorbent containing an - - inter -? - trypsin - - - inhibitor - matrix bound.
Příprava adsorpčního gelu.Preparation of adsorption gel.
V průběhu čištění koagulačního faktoru IX (B-faktoru) [L.—O. Andersson se sp., Thromb. Res. (1975), str. 451 až 459] byla získána bílkovina, která váže heparin, inter-a-trypsinový inhibitor. Jeho molekulová hmotnost je přibližně 150 000. 250 mg této bílkoviny bylo rozpuštěno ve 200 ml pufru s hodnotou - pH 9,0, obsahujícího 0,2 M - hydrogenuhliičtanu sodného a přidáno k 50 ml sedimentované Sepharosy @ - 4B, aktivované bromkyanem postupem popsaným v příkladu 1. Suspenze gelu s bílkovinou byla mírně míchána při teplotě místnosti přes noc. Potom byl gel promýván tak jako gel podle příkladu 1.During purification of coagulation factor IX (B-factor) [L.—O. Andersson et al., Thromb. Res. (1975), pp. 451-459], a protein that binds heparin, an inter-α-trypsin inhibitor, was obtained. Its molecular weight is approximately 150,000. 250 mg of this protein was dissolved in 200 ml of pH 9.0 buffer containing 0.2 M sodium bicarbonate and added to 50 ml of sedimented Sepharose®-4B activated with cyanogen bromide as described in of Example 1. The gel-protein suspension was stirred gently at room temperature overnight. Then the gel was washed as in Example 1.
Čištění heparinu: adsorpční gel obsahující bílkovinu vázanou na matrici byl naplněn do sloupce. 300 mg heparinu (Vitrum) bylo rozpuštěno ve 20 ml pufru s hodnotou pH 7,4, obsahujícího 0,05 M Tris a 0,15 M chloridu sodného a roztok byl nalit na sloupec. Gel by promýván výše uvedeným pufrem a adsorbovaný heparin byl potom desorbován pufrem s hodnotou pH 7,4, obsahujícím 0,05 M Tris a 1,0 M chloridu sodného. Sůl byla z heparinu odstraněna gelovou filtrací na Sephadexu G 25 v destilované vodě a heparin byl potom lyofilizován. Specifická aktivita vyčištěného heparinu byla 230 j/mg.Heparin Purification: The adsorption gel containing matrix bound protein was packed into a column. 300 mg of heparin (Vitrum) was dissolved in 20 ml of pH 7.4 buffer containing 0.05 M Tris and 0.15 M sodium chloride and the solution was poured onto a column. The gel would be washed with the above buffer and the adsorbed heparin was then desorbed with a pH 7.4 buffer containing 0.05 M Tris and 1.0 M sodium chloride. The salt was removed from the heparin by gel filtration on Sephadex G 25 in distilled water and the heparin was then lyophilized. The specific activity of purified heparin was 230 J / mg.
Claims (4)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SE7603040A SE431218B (en) | 1976-03-05 | 1976-03-05 | HEPARIN PURIFICATION PROCEDURE |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CS196349B2 true CS196349B2 (en) | 1980-03-31 |
Family
ID=20327240
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CS771523A CS196349B2 (en) | 1976-03-05 | 1977-03-07 | Process for preparing heparine |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS52108012A (en) |
AT (1) | AT356818B (en) |
AU (1) | AU508430B2 (en) |
CA (1) | CA1079272A (en) |
CS (1) | CS196349B2 (en) |
DE (1) | DE2709500C2 (en) |
DK (1) | DK155606C (en) |
ES (1) | ES456196A1 (en) |
FI (1) | FI62103C (en) |
FR (1) | FR2342991A1 (en) |
GB (1) | GB1539332A (en) |
HU (1) | HU176811B (en) |
IE (1) | IE44907B1 (en) |
IL (1) | IL51346A (en) |
NL (1) | NL186385C (en) |
NO (1) | NO144388C (en) |
NZ (1) | NZ183480A (en) |
PL (1) | PL103049B1 (en) |
SE (1) | SE431218B (en) |
SU (1) | SU736860A3 (en) |
ZA (1) | ZA771267B (en) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE449753B (en) * | 1978-11-06 | 1987-05-18 | Choay Sa | MUCOPOLYSACCARIDE COMPOSITION WITH REGULATORY EFFECTS ON COAGULATION, MEDICINAL CONTAINING ITS SAME AND PROCEDURE FOR PREPARING THEREOF |
GB2164346B (en) * | 1984-08-31 | 1988-03-30 | Nicolas Huberto Behrens | A non-thrombogenic heparin and a process for its obtention |
WO2015112121A1 (en) | 2014-01-21 | 2015-07-30 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Heparin affinity tag for use in protein purification |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2623001A (en) * | 1949-04-07 | 1952-12-23 | Bengt E G V Sylven | Preparing heparin |
DE1195010B (en) * | 1962-05-12 | 1965-06-16 | Ormonoterapia Richter S P A | Method for purifying heparin by the chromatographic method |
-
1976
- 1976-03-05 SE SE7603040A patent/SE431218B/en not_active IP Right Cessation
-
1977
- 1977-01-27 IL IL51346A patent/IL51346A/en unknown
- 1977-02-14 CA CA271,731A patent/CA1079272A/en not_active Expired
- 1977-02-15 FI FI770491A patent/FI62103C/en not_active IP Right Cessation
- 1977-02-22 NL NLAANVRAGE7701882,A patent/NL186385C/en not_active IP Right Cessation
- 1977-02-23 ES ES456196A patent/ES456196A1/en not_active Expired
- 1977-02-25 JP JP2016477A patent/JPS52108012A/en active Pending
- 1977-03-02 NZ NZ183480A patent/NZ183480A/en unknown
- 1977-03-03 ZA ZA00771267A patent/ZA771267B/en unknown
- 1977-03-03 IE IE469/77A patent/IE44907B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-03-04 FR FR7706469A patent/FR2342991A1/en active Granted
- 1977-03-04 NO NO770764A patent/NO144388C/en unknown
- 1977-03-04 PL PL1977196438A patent/PL103049B1/en unknown
- 1977-03-04 DE DE2709500A patent/DE2709500C2/en not_active Expired
- 1977-03-04 AT AT144577A patent/AT356818B/en not_active IP Right Cessation
- 1977-03-04 GB GB9275/77A patent/GB1539332A/en not_active Expired
- 1977-03-04 DK DK096077A patent/DK155606C/en not_active IP Right Cessation
- 1977-03-04 HU HU77KA1485A patent/HU176811B/en unknown
- 1977-03-04 AU AU22953/77A patent/AU508430B2/en not_active Expired
- 1977-03-04 SU SU772457090A patent/SU736860A3/en active
- 1977-03-07 CS CS771523A patent/CS196349B2/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATA144577A (en) | 1979-10-15 |
DE2709500C2 (en) | 1986-09-18 |
NO144388B (en) | 1981-05-11 |
DK96077A (en) | 1977-09-06 |
AU2295377A (en) | 1978-09-07 |
FI62103B (en) | 1982-07-30 |
SE7603040L (en) | 1977-09-06 |
GB1539332A (en) | 1979-01-31 |
NO770764L (en) | 1977-09-06 |
NL7701882A (en) | 1977-09-07 |
NL186385B (en) | 1990-06-18 |
HU176811B (en) | 1981-05-28 |
CA1079272A (en) | 1980-06-10 |
NL186385C (en) | 1990-11-16 |
FR2342991A1 (en) | 1977-09-30 |
FI770491A (en) | 1977-09-06 |
FR2342991B1 (en) | 1981-10-30 |
IE44907L (en) | 1977-09-05 |
SU736860A3 (en) | 1980-05-25 |
NO144388C (en) | 1981-08-19 |
NZ183480A (en) | 1979-08-31 |
PL103049B1 (en) | 1979-05-31 |
FI62103C (en) | 1982-11-10 |
AU508430B2 (en) | 1980-03-20 |
IL51346A (en) | 1979-11-30 |
IL51346A0 (en) | 1977-03-31 |
JPS52108012A (en) | 1977-09-10 |
DK155606C (en) | 1989-09-11 |
DK155606B (en) | 1989-04-24 |
ES456196A1 (en) | 1978-07-01 |
SE431218B (en) | 1984-01-23 |
ZA771267B (en) | 1978-01-25 |
AT356818B (en) | 1980-05-27 |
DE2709500A1 (en) | 1977-09-08 |
IE44907B1 (en) | 1982-05-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US3842061A (en) | Method for isolation of antithrombin from animal tissue materials by adsorption on sulfated carbohydrate gel | |
US3920625A (en) | Isolation of coagulation factors from biological material using cross linked sulfated, sulfonated carbohydrates | |
EP0792281B1 (en) | Process for purification of factor viii | |
US4119774A (en) | Heparin purification method | |
US4022758A (en) | Isolation of coagulation factors I and VIII from biological material | |
FI95136C (en) | Procedure for cleaning annexins | |
Danishefsky et al. | Synthesis of heparin-sepharoses and their binding with thrombin and antithrombin-heparin cofactor | |
JPH0150208B2 (en) | ||
JPH0580455B2 (en) | ||
US4689323A (en) | Covalently bound heparin--antithrombin-III complex | |
JPH07116235B2 (en) | Process for producing antithrombin III concentrate | |
JP2511500B2 (en) | Purification method of placental tissue protein PP (4) | |
US4473553A (en) | Process for producing a lipoprotein-poor concentrate of coagulation factors VII and VIIa | |
ES2743711T3 (en) | A process for the reduction and / or withdrawal of FXI and FXIa from solutions containing such coagulation factors | |
JPH02113893A (en) | Method for concentrating one or more of coagulation factors ii, vii, ix, x | |
JP3745805B2 (en) | Purification method of thrombomodulin | |
CS196349B2 (en) | Process for preparing heparine | |
EP0048898B1 (en) | Method for the production of an antithrombin-heparin complex and pharmaceutical compositions containing the complex | |
JPH0423751B2 (en) | ||
JP2001097997A (en) | Carrier for affinity absorption from sulfated hyaluronic acid, and its use | |
SU1419717A1 (en) | Method of producing biospecific adsorbents for extracting fibronectin and colagenoses | |
JPH08176199A (en) | Method for purifying hirudine by affinity chromatography | |
CA2035927A1 (en) | Process for purifying lipocortins | |
JPH0459796A (en) | Carrier for affinity chromatography and purification of antithrombin iii | |
JPH0219400A (en) | Production of thrombin or prothronbin |