FI56843C - Foerfarande foer framstaellning av antibakteriella 7-(alfa-amino-p-hydroxifenylacetamido)-3-heterocykliska tiometylcefalosporiner - Google Patents

Description

I5SF1 [B] (11) ^ u U LUTU SJ U LKAISU ςβΑ_

l J '' UTLÄGGN I NGSSKRIFT Ö0Ö4J

C (45) Patentti ayönnetty 10 C4 i960 Patent ceddelat V V (51) Kv.lk.»/lnt.CI.* C 07 D 501/36 SUOMI —FINLAND (21) NMnttlh.k.mu.-P.Mnttrueknlng 1010/73 (22) H»k«mUp«|y» — An*»knlngsdig 17.05.73 * * (23) Alkuptivl —GHtlghuudag γ 05.73 (41) Tullut |ulklMk*l — Bllvlt offwitllg ^ 73

Patentti- J* rakburiltellltin /44) NiWMbl,.». i. p™._

Patent- och registerstyrelsen Antdkm utiagd och utLskrKton pubUcerad 21 12.79 (32)(33)(31) Pyydetty «uolkuu* —Begird prloriut # q6.72 I5.O9.72 USA(US) 262903, 289^99 Toteennäytetty-Styrkt (71) Smith Kline & French Laboratories, 1500 Spring Garden Street, Philadelphia, Pennsylvania 19101, USA(US) (72) George Lawrence Dunn, Wayne, Pennsylvania, John Russel Eugene Hoover,

Glenside, Pennsylvania, USA(US) (7*0 Berggren Oy Ab (54) Menetelmä bakteereja tappavien 7~(c*-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-heterosyklisten tiometyylikefalosporiinien valmistami seksi - Förfarande för framställning av antibakteriella 7-(#-amino-p-hydroxifenylacetamido)-3-heterocykliska tiometylcefalosporiner

Esillä oleva keksintö kohdistuu menetelmään bakteereja tappavien 7-(a-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-heterosyklisten tio-metyylikefalosporiinien valmistamiseksi, joilla on kaava

HO—/ /—CHC0NH-—1-S' >N

\=/ NH2 0=1—_ ch^s.r

m* I

C00H

jossa kaavassa R on l,2,3,-triatsol-4-yyli, 4-metyyli-l,2,3-triatsol- 5-yyli tai l-metyyli-l,2,3-triatsol-5-yyli.

Suomalaisesta patenttijulkaisusta 50427 tunnetaan menetelmä antibakteeristen 3,7-disubstituoitujen kefalosporaaniyhdisteiden valmistamiseksi. Nämä tunnetut yhdisteet eivät kuitenkaan sisällä 1,2,3-triatsoli-5-yylitiometyyliryhmää 3-asemassa. Näiden ennestään tunnettujen yhdisteiden asyyliryhmien rakenne eroaa myös aivan olennaisesti kaavan I mukaisessa yhdisteessä olevien asyyliryhmien rakenteesta .

2 56843

Suomalaisesta patenttijulkaisusta 51201 tunnetaan menetelmä 3-merkaptotiatsoli- tai merkaptotetratsoli-kefalosporiinien valmistamiseksi. Siinä ei ole kuitenkaan erikseen ja erityisesti esitetty yllä olevan kaavan I mukaisia asyyliryhmiä, eikä tässä ennestään tunnetussa yhdisteessä ole yllä olevan kaavan I mukaisia 1,2,3-triatsolisubstituentteja.

Suomalaisessa patenttihakemuksessa 35Ö5/71 on lisäksi esitetty menetelmä 7“(a-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3~(5-metyyli- 1,2,4-triatsol-3-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihapon valmistamiseksi, joka kuitenkin eroaa triatsolijohdannaisen suhteen esillä olevan keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetuista yhdisteistä, ja joka lisäksi aikaansaa huomattavasti alhaisemman ED^g-arvon hiirien suojaamiskokeissa, kuten alla olevasta selityksestä lähemmin ilmenee.

EDj-q tarkoittaa sitä kokonaisannosta (milligrammoissa/kg) joka vaaditaan suojaamaan puolet hiiristä.

Heinäkuussa 1972 julkiseksi tulleesta DE-hakemusjulkaisusta 2202271* tunnetaan menetelmä bakteerinvastaisesti vaikuttavan 7(a-aminofenyyliasetamido)-3(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyyli)-3-kefem-^-karboksyylihapon valmistamiseksi.

Keksinnön kohteena on menetelmä kaavan I yhdisteiden valmistamiseksi (1) saattamalla asetoksimetyylikefalosporiini-yhdiste, jolla on kaava

RlNHT-r\ 0=l—ch2ococh5

C00H

jossa R"*· on HO-^ y-CHCO, jossa NH2-ryhmä on sopivasti suojattu, \=/ nh2 3 56843 mikäli välttämätöntä, tai on H, reagoimaan sellaisen heterosyk-lisen tioliyhdisteen kanssa, jolla on kaava

HS-R III

jossa kaavassa R tarkoittaa samaa kuin edellä, ja (2) kun R1 on H, asyloimalla saatu yhdiste sellaisella p-hydroksifenyylietikkahappo-yhdisteellä, jolla on kaava

HO—\ V—CHCOOH IV

\=/ NH2 tai sen asyloidulla tai aktivoidulla johdannaisella, jossa NH2~ryhmä on sopivasti suojattu, mikäli välttämätöntä ja (3) poistamalla tämän jälkeen mahdollinen suojaava ryhmä.

Keksinnön mukaisesti valmistettuja edullisia yhdisteitä ovat mm. seuraavat: 7- (p-hydroksi-a-aminofenyyliasetamido)-3”( 1,2,3-triatsol-il-yyli-tiome tyyli )-3-kefem-iJ-karboksyylihappo 7-(p-hydroksi-a-aminofenyyliasetamido)-3-(^-metyyli-1,2,3-triätsol- 5-yylitiometyyli )-3-kefem-il-karboksyylihappo.

Keksinnön mukaisesti valmistetuilla bakteereja tappavilla yhdisteillä on odottamattoman edulliset ominaisuudet samantapaisiin yhdisteisiin verrattuna. Esimerkiksi yhdiste 7-(a-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3- (1,2,3-triatsol-i»-yylitiometyyli )-3-kefem-^-karboksyylihappo (yhdiste 60771) on edullinen 7-(a-amino-fenyyliasetamido)-3- (1,2,3-triat sol-1l-yylitiometyyli-3-kefem-i»-karboksyylihappoon (yhdiste 60222) verrattuna, koska se aikaansaa korkeammat maksimaaliset seerumiväkevyydet hiirissä ja erikoisesti pidemmät seerumin puoliintumisajat. Tästä seurauksena on se vaikutus, joka voidaan todeta sekä oraalisen että subkutaanisen annostelun jälkeen hiirillä, huomattavasti parantunut, mikä osoittautuu alhaisempien ED^Q-arvojen perusteella. Saadut arvot on esitetty taulukoissa A ja B.

“ 56843

Taulukko A

Seerumiväkevyys hiirissä

Annostus- Maksimiväkevyys Puoliintumisaika

Yhdiste Annos tapa (pg/ml) (min.) 60771 20 mg/kg p.o. 52 62 60222 20 mg/kg p.o. 13 48 60771 20 mg/kg s.c. 54 71 60222 20 mg/kg s.c. 35 34

Taulukko B

Hiirien suojaamiskokeet

Yhdiste Koeorganismi Annostustapa ^50 (mg/kg) 60771 E. coli 12140 S.c. <0,8, 0,8 60222 E. coli 12140 s.c. <3, 3,6 60771 E. coli 12140 p.o. <0,8, 1,2 60222 E. coli 12140 p.o. <12,5, 4 60771 K. pneumoniae 4200 s.c. 0,6, 0,6 60222 K. pneumoniae 4200 s.c. 4,8, 60771 K. pneumoniae 4200 p.o. 0,4, 0,5 60222 K. pneumoniae 4200 p.o. 12,5

Yhdiste 60771 on myös edullinen 7-(a-amino-p-hydroksifenyyli-asetamido)-3“(5-nietyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoon (yhdiste 61529) verrattuna, koska se aikaansaa huomattavasti alhaisemman ED^g-arvon hiirien suojaamiskokeissa. Saadut arvot on esitetty taulukossa C.

Taulukko C

Hiirien suojaamiskokeet

Yhdiste Koeorganismi Annostustapa ED^q (mg/kg) 60771 E. coli 12140 s.c. · <0,8, 0,8 61529 E. coli 12140 s.c. 10,7, 60771 E. coli 12140 p.o. <0,8, 1,2 61529 E. coli 12140 p.o. 7,5 60771 K. pneumoniae 4200 s.c. 0,6, 0,6 61529 K. pneumoniae 4200 s.c. 8,6 6077I K. pneumoniae 4200 p.o. 0,4, 0,5 61529 K. pneumoniae 4200 p.o. 16

Sitäpaitsi 7-(a-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-(4-metyy- 5 56843 li-l,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3“kefem-4-karboksyylihappo (61775) on edullinen 7-(a“aminofenyyliasetamido)-3”(4-metyyli-l,2,3-triatsol-5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoon (61348) verrattuna sen johdosta, että sillä on alhaisempi ED^Q-arvo hiirien suo-jaamiskokeissa. Arvot on esitetty alla olevassa taulukossa D.

Taulukko D

Hiirien suojaamiskokeet

Yhdiste Koeorganismi Annostustapa ED50 (mg/k8) 61775 E. coli 12140 s.o. 1,8 61348 E. coli 12140 s.c. 42, 18,2 61775 E. coli 12140 p.o. 3,6 3 61348 E. coli 12140 p.o. 50, 19 61775 K. pneumoniae 4200 s.c. 2,8 61348 K. pneumoniae 4200 s.c. 20 61775 K. pneumoniae 4200 p.o. 5,2 61348 K. pneumoniae 4200 p.o. 146 7-(a-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3“(l-metyyli-l,2,3- triatsol-5~yylitiomet^]i)-3“kefem-4-karboksyylihappo (60876) on myös edullinen 7“(craminofenyyliasetamido)-3-(l“metyyli-l,2,3-triatsol- 5-yylitiometyyli)-3“kefem-4-karboksyylihappoon (60637) verrattuna, koska sillä on alhaisempi ED^Q-arvo ja korkeampi maksimaalinen see-rumiväkevyys ja puoliintumisaika, kuten ilmenee seuraavista taulukoista E ja F.

Taulukko E

Hiirien suojaamiskokeet

Yhdiste Koeorganismi Annostustapa ED^q (mg/kg) 60876 E. coli 12140 s.o. 5,2 60637 E. coli 12140 s-c- 21,5 60876 E. coli 12140 p.o. 6,2 60637 E. coli 12140 p.o. >50 60876 K. pneumoniae 4200 s.c. 3,5 60637 K. pneumoniae 4200 s.c. 40 60876 K. pneumoniae 4200 p.o. 6 60637 K. pneumoniae 4200 p.o. >200 6 56843

Taulukko F

Seerumiväkevyys hiirissä

Annostus- Maksimiväkevyys Puoliintumis-Yhdiste Annos tapa (jug/ml) aika (min.) 60876 20 mg/kg p.o. 1¾ 48 60637 20 mg/kg p.o. 1,8 x 60876 20 mg/kg s.c. 44 48 60637 20 mg/kg s.c. 21 12 xLiian alhainen jotta sillä olisi merkitystä.

Yleisesti voidaan sanoa, että keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat ylivoimaisia, koska niitä voidaan käyttää pienempinä suojaavina annoksina ja/tai ne aikaansaavat suuremmat ja pitkäaikaisemmat seerumiväkevyydet.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa asyloimalla 7-aminoryhmä halutussa 7-amino-3-heterosyklisessä tiometyylikefalo-sporiinirenkaassa p-hydroksifenyyliglysiinin avulla. Asyloimista varten on toivottavaa suojata glysiinosan aminoryhmä helposti poistettavalla suojaryhmällä, kuten t-butoksikarbonyyli-, bentsyylioksi-karbonyyli-, trikloorietoksikarbonyyli- tai sen tapaisella suojaryhmällä jollaista yleisesti käytetään peptidisynteeseissä. Asyloimista varten voidaan asyloimisaineen karboksyyliryhmä aktivoida muuttamalla happokloridiksi tai seka-anhydiidiksi käyttäen esim. alempaa al-kyylikloroformaattia. Karbonyyliryhmä voidaan myös aktivoida muuttamalla 2,4-dinitrofenyyli- tai N-hydroksimeripihkahappoimidoyyli-esteriksi. Käytettäessä sellaista esteriä, joka sisältää kefalospo-riinirenkaan, esim. bentshydryyli-, t-butyyli-, trikloorietyyli-tai bentsyyliesteriä, voidaan suojattu fenyyliglysiini kytkeä suoraan 7-aminoryhmään käyttäen jotain karbodi-imidiä, kuten disyklo-heksyylikarbodi-imidiä. Vaihtoehtoisesti voidaan suojattu fenyyliglysiini aktivoida kondensaatiota varten halutun kefalosporiiniren-kaan kanssa saattamalla se ensin reagoimaan karbonyylidi-imidatso-lin tai sen kanssa ekvivalenttisen yhdisteen kanssa.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan myös valmistaa saattamalla sellainen yhdiste, joka eroaa kaavan I mukaisista yhdisteistä siinä, että 3-substituentti on asetoksimetyyli eikä R-tiometyyli, reagoimaan merkaptoheterosyklisen yhdisteen kanssa. Reaktio suoritetaan edullisesti neutraalia lähellä olevassa pH-arvossa. Liuottimena käytetään edullisesti vettä tai vesi-asetonia. Reaktio voidaan suorittaa lämpötilassa, jokacn noin huoneen lämpötilasta aina liuotti- 7 56843 men kiehumispisteeseen saakka, jolloin reaktioaika vaihtelee riippuen käytetystä lämpötilasta, liuottimesta ja reagoivista aineista. Reaktiotuote erotetaan hapottamalla reaktioseos varovaisesti ja uuttamalla sopivalla orgaanisella liuottimena. Fenyyliglysiini-lähtöai-neen α-aminoryhmä on suojattava helposti poistettavissa olevalla ryhmällä, kuten t-butoksikarbonyyIillä, karbobentsyylioksilla tai trikloorietoksikarbonyyIillä. Korvausreaktio 3-asemassa suoritetaan tämän jälkeen ja sitä seuraa suojaryhmän poistaminen tavanomaisella tavalla.

„ Ne lähtöaineet, joita käytetään 7-asyloidun kefalosporiini- hapon 3-korvausreaktiossa, ovat kuvatut kirjallisuudessa tai niitä voidaan valmistaa tunnetuilla menetelmillä. Lähtöaineet, joita käy-^ tetään 3-heterosyklisen tiometyylirenkaan 7-asyloinnissa, valmiste taan korvaamalla 7-aminokefalosporaanihapon (7-ACA) alkalimetalli-suolan 3-asetoksiryhmä heterosyklisen tiolin alkalimetallisuolalla esim. kuumassa vesipitoisessa asetonissa.

Voidaan todeta, että johtuen asymmetrisesta a-hi. liiat omis ta 7-asetamidoryhmässä, esiintyy optisia isomeerejä. D-isomeeri on edullisin isomeeri. Kuitenkin myös L-isomeeri ja raseeminen seos kuuluvat keksinnön piiriin.

Nämä yhdisteet muodostetaan injektoitaviksi tai oraalisesti nautittaviksi seoksiksi samalla tavoin kuin muut kefalosporiini-anti-biootit. Niitä annostellaan injektoimalla tai oraalisesti bakteeri-infektioiden estämiseksi ja niiden käsittelemiseksi annoksina, jotka vaihtelevat riippuen sairauden laadusta ja vaikeudesta ja potilaan *- iästä, painosta ja tilasta. Yhdisteitä annostellaan yleensä joko oraalisesti tai parenteraalisesti.

Johtuen sekä amiiniryhmän että karboksyylihapporyhmän _ esiintymisestä kaavan I mukaisissa kefalosporiiniyhdisteis- sä, on mahdollista valmistaa tavanomaisilla menetelmillä farmaseuttisesti sopivien myrkyttömien happojen ja emästen happo- ja emässuolo-ja samoin kuin yhdisteiden amfoteerisiä muotoja. Suolat voidaan valmistamisensa jälkeen muuttaa helposti amfoteerisiksi yhdisteiksi tunnetuilla menetelmillä. Sellaisten yhdisteiden suoloja, jotka sisältävät ainoastaan happaman funktion, valmistetaan myös käyttäen farmaseuttisesti sopivia myrkyttömiä emäksiä. On ymmärrettävää, että kaikki nämä suolat kuuluvat keksinnön piiriin.

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksinnön mukaisia menetelmiä.

8 56843

Esimerkki 1 7- (α-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3- (1,2,3-triatsol-4-yyli-tiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 10,75 g (0,0375 moolia) N-t-butoksikarbonyyli-p-hydroksifenyyliglysiiniä 150 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania, lisättiin 5,2 ml (0,0375 moolia) trietyyliamii-nia. Seos jäähdytettiin lämpötilaan -10° ja siihen lisättiin tipot-tain tämän jälkeen 4,92 ml (0,0375 moolia) isobutyylikloroformaat-tia 10 min. kuluessa. Reaktioseosta sekoitettiin lämpötilassa -10° 70 min, ja tämän jälkeen siihen lisättiin kylmä liuos, joka sisälsi 7-ACA:ta (10,1 g, 0,0375 moolia) 140 mlrssa 50 ?:sta vesipitoista tetrahydrofuraania ja 6,75 g (0,0487 moolia) trietyyliamiinia 15 min. kuluessa. Reaktioseosta sekoitettiin lämpötilassa välillä -5 ja 0° 1 tunti ja huoneen lämpötilass.a2 tuntia. Orgaaninen liuotin haihdutettiin pois ja vesipitoiseen jäännökseen lisättiin 150 ml vettä. Jäännös uutettiin etyyliasetaatilla ja vesifaasi erotettiin, peitettiin tuoreella etyyliasetaatilla, hapotettiin pH-arvoon 2,8 ja suodatettiin. Faasit erotettiin ja hapan liuos uutettiin jälleen etyyliasetaatilla. Hapotetun vesiliuoksen uutteet yhdistettiin, kuivattiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 7-(α-amino-p-hydroksifenyyliasetamido) -kefalosporaanihapon N-butoksikarbonyylijohdannainen.

Seosta, jossa oli 3,0 g (0,00493 moolia) edellä mainittua tuotetta pH-arvon 6,4 omaavassa fosfaattipuskurissa (30 ml), käsiteltiin 1,0 85 g: Ha (0,01233 moolia) NaHCOjra ja tämän jälkeen 0,748 g:11a (0,0074 moolia) 4-merkapto-l,2,3“triatsolia. Liuos lämmitettiin lämpötilaan 70° ja sitä sekoitettiin lämpötilassa 70 ± 3° 2,75 tuntia. Liuos jäähdytettiin, suodatettiin ja tehtiin happamaksi pH-arvoon 2,5, jolloin saatiin jäännös. Liuotin dekantoitiin ja jäännös pestiin vedellä. Tuote liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin N-suojatuksi tuotteeeksi, joka saos-tettiin uudelleen asetoni-kloroformista.

Suojattua tuotetta sekoitettiin lämpötilassa 0-5° trifluori-etikkahappo-anisoliliuoksen (9:1) kanssa 70 min. Liuottimet haihdutettiin pois ja jäännös kaadettiin samalla nopeasti sekoittaen 350 ml:an eetteriä. Kiinteä aine otettiin talteen, liuotettiin veteen ja sekoitettiin emäksisen ioninvaihtohartsin ("Amberlite IR-45" poly-styreeniamiini-anioninen hartsi) kanssa siksi, kunnes pH-arvo pysyi vakiona. Hartsi erotettiin suodattamalla ja vesiliuos lyofi-lisoitiin tuotteen saamiseksi.

9 56843

Cl8Hl8N6°5S2*2H20:n ana3-yysi laskettu: C 43,37; H 4,45; N 16,86 todettu: C 43,67; H 4,14; N 16,62

Samalla tavalla kuin yllä on selostettu saatettiin 7-(a-amino-p-hydroksifenyyliasetamidojkefalosporaanihapon-t-butoksi-karbonyyli-j ohdannainen reagoimaan 7~(a-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-(1-metyyli-1,2,3“triatsol-5~yylitiometyyli)-3“kefem-4-karboksyylihapoksi. Laskettu yhdisteelle ^9^0^5^21½^ C 44,52; H 4,76; N 16,40 todettu: C 44,71; H 4,42; N 15,74

Esimerkki 2 7-(D-a-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-(4-metyyli-l,2,3-triatsol- 5-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo 5-bentsoamido-4-metyyli-l,2,3_tiadiatsolia (6,60 g, 0,03 moolia, valmistettu siten kuin on kuvattu aikakausjulkaisussa Berichte 99, 1629, (1966) yhdistettiin 60 ml:n kanssa 2-n NaOH ja liuosta lämmitettiin samalla palautusjäähdyttäen yli yön. Noin 25 tunnin pituisen lämmittämisen jälkeen jäähdytettiin reaktioseos jään avulla ja siihen lisättiin 120 ml 2-n HC1 samalla sekoittaen. Seosta jäähdytettiin viikonlopun yli. Saostunut kiinteä aine (bentsoehappo) erotettiin sitten suodattamalla samalla seosta jatkuvasti jäähdyttäen. Kiinteä jäännös pestiin vähäisellä vesimäärällä ja suodoksen pH säädettiin arvoon 3,0 10 %:sella NaOH:11a. Vesipitoinen liuos uutettiin etyyliasetaatilla neljä kertaa. Uutteet kuivattiin ja suodatettiin. Sitten lisättiin natrium-2-etyyliheksanoaattia siksi, kunnes enää ^ ei tapahtunut saostumista. 5-merkapto-4-metyyli-l,2,3-triatsolin nat- riumsuola erotettiin suodattamalla ja kuivattiin sitten tyhjössä.

Sekoitettuun suspensioon, jossa oli 6,78 g (0,013 moolia) 7-_ (α-t-butoksikarbonyyliamino-p-hydroksifenyyliasetamido)-kefalo- sporaanihappoa ja 3,82 g (0,02 moolia) 5-merkapto-4-metyyli-l,2,3-triatsolin natriumsuolaa 100 ml:ssa fosfaattipuskuria, jonka pH-arvo oli 6,4, lisättiin 1,09 g (0,013 moolia) NaHCO^ra. Seosta lämmitettiin lämpötilassa 70° 4 1/2 tuntia samalla kun sitä säädettiin TLC:n lisäyksen avulla. Sen annettiin jäähtyä ja saatu kumimainen aine sekoitettiin veden kanssa ja mahdollisesti liukenemattomat aineet erotettiin suodattamalla. Liuos peitettiin etyyliasetaatilla ja sen annettiin olla jäähdytyskaapissa yli yön.

Kerrokset erotettiin sitten ja vesipitoinen kerros hapotettiin pH-arvoon 3,0 3-n HCl:llä. Se uutettiin sitten useamman kerran etyy- 10 56Θ43 liasetaatilla ja uutteet kuivattiin ja haihdutettiin. Saatu kumai-nen aine hangattiin eetterin kanssa, jolloin saatiin 2,69 g kiinteätä ainetta. Sen pieniä määriä saostettiin sitten kahdesti uudelleen metanolieetteristä ja haluttu tuote saostettiin sitten petrolieette-ristä. Saatua kiinteätä ainetta (1,75 g) käsiteltiin kromatograafi-sesti 100 g:11a piioksidigeeliä käyttäen kloroformi-metanoli-muura-haishappoa (90:10:3). Patsaasta saatiin 0,80 g otsikossa mainitun yhdisteen t-butoksikarbonyylijohdannaista.

0,80 g (0,00139 moolia) edellä mainittua johdannaista pantiin pieneen pyöreäpohjaiseen pulloon, jossa oli kuivausputki ja joka oli upotettu jääkylpyyn. Sitten lisättiin noin 10 ml kylmää trifluori-etikkahappoa ja seosta sekoitettiin kylmässä noin 15 min. ja haihdutettiin sitten 15 min. kuluessa. Jäännös kaadettiin noin 100 ml:aan eetteriä ja saatu kiinteä aine otettiin talteen ja liuotettiin noin 25 ml:aan vettä. Sitä sekoitettiin sitten "IR 45-Amberlite"-hartsin kanssa, joka on emäksinen ioninvaihto-polystyrolihartsi (pestiin kolmasti) siksi, kunnes liuoksen pH-arvo oli noin 5,5· Hartsi erotettiin suodattamalla ja liuos lyofilisoitiin yli yön, jolloin saatiin otsikossa mainittu tuote.

C19H20N6°5S2‘2 3/4 H20:n analyysi laskettu: C 43,38; H 4,89; N 15,97 todettu: C 43,75; H 4,80; N 15,27.

Esimerkki 3

Yhdisteet, jotka on kuvattu esimerkeissä 1 ja 2, voidaan valmistaa myös saattamalla haluttu 7-amino-3~heterosyklinen tiometyyli-3-kefem-4-karboksyylihappo reagoimaan seosanhydridin kanssa, joka on muodostettu N-t-butoksikarbonyyli-p-hydroksifenyyliglysiinistä ja isobutyylikloroformaatista tai triklooriasetyylikloridista. N-suoja-ryhmä poistetaan trifluorietikkahapon tai jääetikkahappo-HCl:n avulla.

Esimerkki 4 7~(α-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-(l,2,3-triätsoi-4-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo.

Seosta, jossa oli 7-amino-kefalosporaanihappoa ( 23,4 g, 0,06 moolia) ja 4-merkapto-l,2,3_triatsolia (13,0 g, 0,13 moolia) 170 ml:ssa vettä ja 170 ml:ssa asetonia käsiteltiin riittävällä määrällä kiinteää natriumbikarbonaattia, jolloin saatiin liuos, jonka pH oli 7,0, jota sen jälkeen kiehautettiin palautusjäähdyttäen 4,25 tuntia samalla kun pH pidetiin arvossa 7,0-7,5 lisäämällä kiinteää natriumbikarbonaattia. Huoneenlämpötilaan suoritetun jäähdytyksen jälkeen 11 56843 haihdutettiin asetoni tyhjössä ja saatu vesiliuos jäähdytettiin jäillä ja käsiteltiin laimealla suolahapolla pH-arvoon 3,4. Saatu sakka otettiin talteen, pestiin vedellä ja sen jälkeen asetonilla sekä kuivattiin, jolloin saatiin 18,8 g (70 %) 7-amino-3-(li2,3-triatsol-4-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa.

Seosta, jossa oli N-(t-butoksi-karbonyyli)-p-hydroksifenyyli)-glysiiniä (4,5 g, 0,0169 moolia) ja kuivaa trietyyliaminia (2,33 ml, 0,0169 moolia) 67 mlrssa kuivaa tetrahydrofuraania jäähdytettiin -5°C:seen ja isobutyylikloroformiaattia (2,21 ml, 0,0169 moolia) lisättiin tipoittain 10 min. ajan nopeasti sekoittaen. 40 min. sekoituksen jälkeen -5°C:ssa lisättiin reaktioseokseen 7-amino-3-(1,2,3~ triatsol-4-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (5,28 g, " 0,0169 moolia) ja trietyyliaminia (3S03 ml, 0,029 moolia) 60 ml:ssa 50 %:sta tetrahydrofuraanin vesiliuosta tipoittain 15 min. aikana. Tunnin sekoituksen jälkeen -5°C:ssa ja sen jälkeen 2,25 tunnin jälkeen huoneenlämpötilassa haihdutettiin tetrahydrofuraani tyhjössä ja saatu vesiliuos laimennettiin 100 ml tilavuuteen vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 100 ml). Vesifraktio peitettiin etyyliasetaatilla (150 ml), jäähdytettiin jäähauteella ja pH säädettiin arvoon 3,0 laimealla suolahapolla. Saostuneen kiintoaineen poistamiseksi suoritetun suodatuksen jälkeen ja kerrosten erottamisen jälkeen, uutettiin vesikerros vielä etyyliasetaatilla (100 ml). Jälkimmäiset etyyliasetaattiuutteet yhdistettiin, kuivattiin mag-neesiumsulfaatilla ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 3,0 g lasimaista kiintoainetta. Kiintoaine kromatografoitiin pii-geelillä (90 g) käyttäen liuotinjärjestelmää, jossa oli 90 tila-vuusosaa kloroformia ja 10 osaa metanoolia sekä 3 osaa muurahaishappoa. Ne jakeet, jotka olivat ohutkerroskromatografian perusteella parhaimmat yhdistettiin, haihdutettiin ja kromatografoitiin uudestaan, kuten yllä, jolloin saatiin 90 ml (1 %) 7-(a-n-t-butoksi-karbonyyli-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-(1,2,3-triatsol-4-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa.

Trifluorietikkahapon (60 ml) ja anisolin (6 ml) jäillä jäähdytettyyn seokseen lisättiin 7-(a-N-t-butoksikarbonyyli-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa(5,6 g, 0,010 moolia). 20 min. sekoituksen jälkeen 0°C:ssa liuos väkevöitiin tyhjössä noin 30 ml:aan ja kaadettiin 1,0 l:aan voimakkaasti sekoitettua eetteriä. Saatu sakka pestiin eetterillä, sen jälkeen etyyliasetaatilla ja lopuksi pentaanilla ja liuotettiin sen jälkeen 500 ml:aan vettä. Vesiliuosta sekoitettiin 12 5G843 riittävällä määrällä Amberlitea IR.45®. (heikosti emäksinen ioninvaihtohartsi) pH:n nostamiseksi arvosta 2,4 arvoon 5,4. Vesiliuoksen lyofilisointi antoi 3,6 g (72 %) 7-(a-amino-p-hydroksi-fenyyliasetamido)-3-(1>2,3“triätsol-4-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappodihydraattia.

Infrapuna: 5,64 ja 5,91 mikronia; 1H nmr (trifluorietikkahappo, tetrametyylisilaani) 6 3,77 (S, leveä, 2H), δ 3,80 ja 4,64 (dubletti-pari, J -v. 13Hz, 2H), 6 5,30 (d, J 'v- 5Hz, 1H), 6 5,53 (d, leveä, J -x. 6Hz, 1H), δ 5,80 (dd, J ^ 6 Hz, 1H), δ 7,18 ja 7,57 (duplettipa-ri, J ^ 9Hz, 4h), δ 7,75-7,97 (m, ^ 4H), δ 8,53 (S, 1H).

Cl8Hl8N6°5S2*2H20:n analyysi laskettu: C 43,37; H 4,45; N 16,86 todettu: C 43,67; H 4,14; N 16,62

Claims (1)

13 56843 Patenttivaatimus Menetelmä bakteereja tappavien 7-(a-amino-p-hydroksifenyyliasetamido)-3-heterosyklisten tiometyylikefalosporiinien valmistamiseksi, joilla on kaava H° x Vhconh- I—r 'Ί NH2 0= —CH2S-R C00H jossa kaavassa R on 1,2,3-triatsol-4-yyli, 4-metyyli-l,2,3-triatsol- 5-yyli tai l-metyyli-l,2,3~triatsol-5-yyli, tunnettu siitä, ~ että (1) asetoksimetyylikefalosporiiniyhdiste, jolla on kaava R1NH -|- 0= I—CH2OCOCH3 Ό00Η jossa kaavassa R^ on HO-^ y—CHCO, jossa NH2~ryhmä on sopivasti x=/ nh2 suojattu, mikäli välttämätöntä, tai on H, saatetaan reagoimaan sellaisen heterosyklisen tioliyhdisteen kanssa, jolla on kaava HS-R, jossa kaavassa R tarkoittaa samaa kuin edellä, ja (2) kun R·*- on H, saatu yhdiste asyloidaan p-hydroksifenyylietikkahappoyhdisteellä, „ jolla on kaava ho-v^ \<:ηοοοη ^===/ NH2 tai sen asyloivalla tai aktivoidulla johdannaisella, jossa NH2~ ryhmä on sopivasti suojattu, mikäli välttämätöntä, ja (3) mahdollinen suojaryhmä poistetaan. Förfarande för framställning av antibakteriella 7-(ot-amino-p-hydroxi-fenylacetamido)-3-heterocykliska tiometylcefalosporiner med formeln _/~~V H0“V 7-CHCONH-l-Γ NH2 0 = Ln v^Lch2s-r COOH