FI120692B

FI120692B - Menetelmä syövänvastaisten dolastatiinijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI120692B
Application number: FI945416A
Authority: FI
Inventors: Franz Emling; Andreas Haupt; Cynthia Romerdahl
Original assignee: Basf Ag
Priority date: 1992-05-20
Filing date: 1994-11-17
Publication date: 2010-01-29
Also published as: CA2136339A1; JPH07506580A; MX9302927A; DK0642530T3; JP3523253B2; HU211745A9; FI945416A0; UA45304C2; CZ292612B6; CN1085563A; IL105651A0; CN1065874C; KR100286242B1; ES2118955T3; NO944419L; RU2116312C1; JP2004149538A; NO310465B1; ATE169637T1; WO1993023424A1

Description

Menetelmä syövänva s tai s ten dolastätiinijohdannaisten valmis tami sek s i Käsillä oleva keksintö kohdistuu sellaisten uusien 5 peptidien ja niiden johdannaisten valmistukseen, jotka mahdollistavat merkittävästi parannetun terapeuttisen hyötykäytön kasvainsairauksien hoidossa dolastatiini-10 ja -15 yhdisteisiin verrattuna (U.S-patentti A 87 9 278, 7.11.1989; US-patentti 4 816 444, 28.3.1989). Toisin kuin 10 dolast.atiinI-10 ja -15, joiden puhdistaminen niukoista luonnonresursseista on työlästä, voidaan nyt kuvatut yhdisteet helposti syntetisoida, kuten jäljempänä on yksityiskohtaisesti kuvattu. Lisäksi dolastatiini-lO on epästabiili hapoksi. On kuvattu, että jopa vähäiset muutokset 15 rakenteessa voivat aiheuttaa aktiivisuuden täydellisen häviämisen (Biochemical Pharmacology 40 (8) {1990) 18'St - 1864):.

Esillä oleva keksintö koskee syövänvastaisten kaavan (I) mukaisten peptidien ja niiden fysiologisesti 20 siedettävien happojen kanssa muodostamien suolojen valmistusta,

R1 X

\ i I

25 N - CH -CO-Ä-E-D- (E)u “ (E) v - (G)w - K

(I) | / s

R3 I

30 jossa \

Rl on alkyyli, sykloalkyyli, alkyylisulf o ny yli.,, fluorialkyyli tai NR3r\ jossa R3 ja R4 voivat kumpikin olla joko vety tai alkyyli; R2 on vety, alkyyli, f1uoria1kyyIi, sykloalkyyli; | 35 tai j

S

r\ ·· δ 2 R!-N-R2 yhdessä voivat olla —N 7 .

^_j tai A on valyyli-, isoleusyyli-, leusyyli-, allo-iso-5 leusyyli-, S-tert-butyylialanyyli-, 2-tert-butyyliglysyy-li-, S-sykleheksyylialanyyli-, ornityyli-, lysyyli-, 2-etyyiiglysyy.ll-, '2^syklöheks.yyiigiysyyii-> norleusyyli-tai norva1yy1i jäännös; B on N-alkyylivalyyli-, -norvalyyli-, -leusyyli-, 10 -isoleusyyli-, -S-tert-butyyliglysyyli-, -3-tert-butyyli-alanyyli-* -3-sykloheksyylialanyyli-, -fenyyli alanyyli-, tai -2-sykloheksyyliglysyylijäännös; D ja E on toisistaan riippumatta valittu ryhmästä prolyyli, homoprolyyli, h y ci r o k s i p r o 1 y y 11 ja tiatsolidinyy- j 15 li-4-karbonyyli; j F ja G on toisistaan riippumatta valittu ryhmästä f prolyyli-, homoprolyyli-, hydroksiprolyyli-, tiat solidi- \ nyyli-4-karbonyyli-, 1 -ani.nopentyyli-1 -karbonyyli-, vai yy- j li-, 2-tert-butyyliglysyyli-, isoleusyyli-, leusyyli-, 3- j 20 sykloheksyylialanyyli-, fenyylialanyyli-, N - me t y y 1 ifen yy- | lialanyyli-, tetrahydroisokinolyyli-2-karbonyyli-, 3-tiat-solyylialanyyli-, 3-tienyylialanyyli-, histidyyli-, 1—ami-noihdyyli-l-karbonyyli-, B-pyridyylialanyyli-, 3-tert-bu- | tyylialanyyli-, 2-sykloheksyyliglysyyli,-norvalyyli-, | 25 norleusyyli- ja 3-naftyylialanyylijäännökset; X on alkyyli, sykloalkyyli, -CHs-syklgheksyyli tai aryylialkyyli; tai E ja F yhdessä voivat olla | j 3 /“V /v \ / ^i^co υ jossa V on happi tai rikki ja U on vety, C1-4-alkyyli, 5 fenyyli tai sykloalkyyli; u, V ja w ovat toisistaan riippumatta 0 tai 1; ja K on hydroksi-, aikoksi-, fenoksi-, bentsyylioksi-tai substituoitu tai substituoimaton amino-osa.

Eräs kaavan I mukaisten yhdisteiden alaluokka 1.0 käsittää yhdisteitä, joissa R^N-R2 on

N

~nQ tai C ^3

Toinen kaavan I mukaisten yhdisteiden alaluokka sisältää kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa K on kaavan R5-N-R6 mukainen amino-osa, jossa j 15 R5 on vety tai hydroksi tai Ci-7-alkoksi tai hentsyylioksi tai Ci„7-alkyyli, joka voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla f luoriatomilla, tai C3,7-syklo- | alkyyli tai bentsyyli, joka voi olla substituoitu jopa kolmella substituentilla, joita voivat toisistaan riippu-20 matta olla CF3, nitro, Ci-7-alkyylisulfonyyli, Ci^-alkoksi, f enoksi, bentsoksi, halogeeni tai C 1.,4-alkyyli,* j

Re on vety, Gi-7-alkyyli, joka voi olla substituoitu j yhdellä tai useammalla f luoriatoniiiläy tai C3-.7- | sykloalkyyli tai fenyyli (joka voi olla substituoitu jopa 25 kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CöNHBsl, CON{Bz1)2, Ci-4-alkyyli, joka voi muodostaa syklisen ] ! 4 systeemin, C1-4-aikoksi, f enoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyy-lisulfonyyli), tai bentsyyli (joka voi olla substituoitu jopa kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riip-5 pumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)2, Ci-4-alkyyli, joka voi muodostaa syklisen systeemin, Cj.,4-alkoksi, f enoksi, bentsoksi tai Ci-7~alkyyliS:Ulfonyyli) , tai nafLyyli (joka voi olla substituoitu jopa kahdella 10 substituenti11a, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl) 2, Ci_4-alkyyl i, Ci-4-alköksi, bentsoksi, f enoksi tai Ci-7-alkyylisulfonyy-li), tai bentshydryyli (joka voi olla substituoitu jopa 15 kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON (Bzl) 2, Cx-i-alJryyli:, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyylisulfonyyli) , tai \ bifenyyli (joka voi olla substituoitu jopa kah-20 della substituentilla, jotka voivat toisistaan: riippumatta | olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, 00Ν:{Β·ζ.1) 2,· Ci_4-

alkyyli, Ci^-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7~alkyy- I

lisulfonyyli), tai trifenyylimetyyli (joka voi olla substituoitu jopa j 25 kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippu- \ matta olla CF-*, nitro, halogeeni, CONHBzl, Ο0Ν{ΒζΓ)2, C1-4- j alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai C,. /-alkyyli-sulfonyyli), tai bent shydryy lie tyyli (joka voi olla substituoitu 30 jopa kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON (Bzl) 2, Ci-4~alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci_7-alkyylisulfönyyli) , tai ben t shydryy 1 ime tyy 1 i (joka voi olla substituoitu 35 jopa kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan 5 riippumatta olla CP3/ nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl) 2, Cj.-4-alkyyli, Ci-<,-aikoksi , f enoksi, bentsoksi tai C.-7-alkyylisulfonyyli) , tai naf tyylimetyyli (joka voi olla substi tuoitu jopa 5 kahdella substituentillä, jotka voivat toisistaan riippu-matta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl) , C1-4-alkyyli, C3..4-a lkoksi , f enoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyyli-Sulfönyyli}, tai asenaftyyii (joka voi olla substituoitu jopa kah-10 della substituentillä, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CP3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON (Bzl) 2, Ci.4-a.lkyy-11, C|.d-alkoksi, f enoksi, bentsoksi tai Ci. .,—alkyylisulfa-nyyli), tai asenaf tyylimetyyli (joka voi olla substituoitu 15 jopa kahdella substituentillä, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CQN(Bz1)2, Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, f enoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyyllsulfdnyyli) , tai { pyridyyli (joka voi olla substituoitu jopa 20 kahdella substituentillä, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro , halogeeni , CONHBzl, CON(Bzl)2, j

Ci-4-alkyyli, Ci-4-alhoksi, f enoksi, bentsoksi tai Ci-7-al- j kyylisulfonyyli), tai j pikplyyli (joka voi olla substituoitu jopa j it 25 kahdella substituentillä, jotka voivat toisistaan j riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)2, Cj-A-alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai C; .7-alkyylisulfonyyl.i) , tai bentsotiatsolyyli (joka voi olla substituoitu jopa 30 kahdella substituentillä, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF!, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON (Bzl )2, C1-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci.7-alkyyli-sulfonyyli}, tai bentsisotiatsolyyli (joka voi olla substituoitu 35 jopa kahdella substituentillä:;, jotka voivat toisistaan 6 riippumatta olla CF-j, nitro, halogeeni, CQNHBzl, CON (Bzl) 2, Gi-.i-a.lkyyli, e^-alkoksi:, f enoksi, bentsoksi tai Ci_7~alkyylisulfonyyii}· , tai bentsopyratsolyyli (joka voi olla substatuoitu 5 jopa kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CFj, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON (Bzl) 2, Ci^-alkyyli, Ci-4-alkoksi, f enoksi, bentsoksi tai C|..7-alkyylisulfonyyli ) , tai b exit s oksa t s o1yy li (joka voi olla substituoitu jopa 10 kahdella substituentilla, jotka, voivat toisistaan riippumatta olla CF-j, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)2, C1-4-alkyyli, Ci~4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyyli-sulfonyyli) , tai fluorenyyli (joka voi olla substituoitu jopa kah-15 della substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CPs, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl}2, Ci_4-alkyy-li, Ci.-4-alkoks:ä, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyylisulfo~ ; nyyl.i), tai | aminofluorenyyli (joka voi olla substituoitu jopa 20 kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippu- f matta olla CF3, nitro:, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)3, C1-4- | alkyyli, Ci-4~alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci..7-alkyyli~ | sulfonyvli) , tai.

pyfimidyyli (joka voi olla substituoitu jopa kah-'25 della substitUehtilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CP-;, nitro, halogeeni, COOEt, CONHBzl, CON(Bzl)2, Ci-4-alkyyli, joka voi muodostaa syklisen systeemin, Ci-4~ alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyylisulfonyyli} , tai 30 5-jäseninen heteroaryyli [joka voi olla substituoitu jopa kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, syaani, CQOMe, COOEt, tiometyyli, tioe tyyli., tiof enyyli, pikolyyli, asetyyli, ~CH2:-C00Et, C0NH2, CQNHBzl, CON (Bzl } 2 , 35 Ci_4-alkyyli, C3-6-sykloalkyyli, C3-4-alkyleeniryhmä, joka

J

7 muodostaa kaks i renkä i s en systeemin heterosyklin kanssa, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi, fenyyli {joka voi olla substituoitu jopa neljällä substituentlila, jotka voivat toisistaan riippumatta olla nitro, CF3, halogeeni tai Ci-4~ 5 alkyyli), bentsyyli (joka voi olla substituoitu jopa neljällä substituent il la, jotka voivat toisistaan riippumatta olla nitro, CF3, halogeeni, Ci-ä-alkyyli, naftyyli, Cx-7-alkyylisulfonyyli, f enyylisulf onyyli tai C1-4-dialkyyliamino)] , tai 10 -CHR'-,5-jäseninen heteroaryyli ( joka voi olla subs tituoitu jopa kahdella substituentillä, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni; cONHBzl, CON(Bzl)2, COOMe, COOEc, COOCH (CH3) :2, CONH;;, COOBzl, Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi, fenyyli, 15 bentsyyli, naf tyyli tai Ci^-alkyylisulfohyyli [R7 on vety , lineaarinen tai haarautunut C>5-alkyyli, bentsyyli; tai R7 ja R5 yhdessä muodostavat ryhmän -(0¾) 3- tai - (CM3) 4— ]) . f Tämä: alaluokka sisältää ne kaavan I mukaiset. ] yhdisteet' joissa t, u, v ja w ovat toisistaan riippumatta j 20 0 tai 1; E1, R2 ja X ovat alempia alkyyleja, A ja F ovat alempia alkyyli aminohappo ja, B on N-alen^ialkyloitu alempi \ alkyyli aminohappo; D, E, G ja K ovat kuten aiemmin on mää- | ritelty. Pitäen edellä mainittu mielessä, voidaan erästä ] tällaisten yhdisteiden sarjaa kuvata seuraavalla kaavalla 25 II: RLR;!N - CXH - CO - A - B - Pro-Pro - (F)v - (G)w - K (II) | ja toista seuraavalla kaavalla III :j 30 j R1R2N - CXH - CO - A - B - Pro - (F)v - (G)w - K (III) |

Toisessa käsillä olevan keksinnön mukaisten yhdis- \ teiden alaluokassa voivat R5-Kf-Rfi yhdessä muodostaa 1 35 seuraavasta ryhmästä valittuja rakenteita, j 8 f—S, /“Λ / \

— N S02 —N SO —N I —N S

\_/ \_/ W \ / i I 1 0 00 %

. i rPiO

1 f J —« 0 ’ N N \ /

Q n O

i j jotka voivat o.'l la subs ti tuoimat tornia tai substituoituja ] yhdellä tai useammalla substituentilla, joita voivat olla i 5 toisistaan riippumatta CF3, nitro, halogeeni, okso, j syaani, M, N-dime tyyli amino, CONHBsl, CON(Bzl) Ci-g-alkyy- | li, Ca-s-sykloalkyidi, :C3-4~slkyleeniryhmä, joka muodostaa j kaksirenkäisen systeemin heterosyklin kanssa, Ci-a-alkoksi, ] fenoksi, bentsoksi, naftyyli, pyrimidyyli, COOEt, COOBsl, j 10 CV^-sykloalkyyli, pyrolidinyyli, piperidinyyli, tienyyli, j pyrolyyll, -CHs-CQ-NCHfCHsb, -CH2--CO-M(CH2) 4, -CHj-CO- |

NtCHyhO, bentsyyli (joka voi olla substituoitu jopa I

| j : $ :! 9 kolmella substituentilia, jotka voivat toisistaan riippumatta olla nitro, halogeeni, CF3, tiometyyli tai vastaava sulfoksidi tai sulfoni, tioetyyli tai vastaava sulfoksidi tai sulfoni, Ci-4-alkyyli tai Ci-4-alkQksi) tai 5 fenyyli (joka voi olla substituoitu jopa kolmella substi-tuentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla; nitro, halogeeni, CF3, tiometyyli, tioetyyli, Ci^-alkyyli tai. C1-4-alkoksi).

Eräs kaavan (i) mukaisten yhdisteiden alaluokka 10 käsittää esimerkiksi yhdisteet, joissa t, u, v ja m ovat 0 ja K ei ole hydroksi-, bentsoksi-, f enoksi- tai alkoksiosa.

Eräs kaavan (I.) mukaisten yhdisteiden alaluokka käsittää esimerkiksi yhdisteet, joissa t, u ja v ovat 0 ja 15 K ei ole hydroksi- tai alkoksiosa.

Vielä eräs kaavan (1) mukaisten yhdisteiden alaluokka käsittää esimerkiksi yhdisteet,, joissa t, u, v ) ja ovat 1 j,a K on hydroksi-, alkoksi-, f.enoksi- tai bentsyylioksiosa...

20 Vieläkin eräs kaavan (I) mukaisten yhdisteiden I

alaluokka käsittää esimerkiksi yhdisteet, joissa t, u ja v ovat 1, w on 0 ja K on hydroksi-, alkoksi-, fenoksi- tai bentsyylioksiosa:.

Vielä yksi kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ala- i

25 luokka käsittää esimerkiksi yhdisteet, joissa t ja u ovat I

1, v ja w ovat D ja K on hydroksi-, alkoksi-, fenoksi- tai j bentsyylioksiosa. |

Edullisia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat j

sellaiset yhdisteet, joissa substituenteilla on seuraavat I

30 merkitykset: j Ί 5 R^ on etyyli, metyyli, 2-fluori e tyyli.,· 2,2- f difluorietyyli, 2,2,2-trifluorietyyli, 2-fluori-isöpropyy- | li, trifluori-isopropyyli, isopropyyli, propyyli, butyyli, \ pentyyli, syklopropyyli, sykiopentyyli, mesyyli, 2,4,6- | 3 5 trimetyy 1 isulfonyyli, NH2, N(CH3}2, NiCH2CH3)2, N[CH(CH3)2] 2 * 1 10 R2 on vety, metyyli, etyyli, 2-fluorietyyli, 2,2-(3.1 fiuörietyyli, 2,2,2- trifluorietyyli2-fluori-iso- propyyli, trifluori-isopropyyli, isopropyyli, propyyli, butyyli, syklopropyyli tai R3-N~Ra yhdessä on jokin 5 :seuraavista jäännöksistä:

— N — N

A, B, D, E, G ja X ovat kuten edellä on määritelty; t, u, v ja w ovat toisistaan riippumatta 0 tai 1; E ja F yhdessä ovat _ I s —~l ' CO — cHs 9trC0” 1 °~^“3 i 10 | k X^^C0- __, C\ n Co- { s —V / v CO — { V / N ' 5 f S — WV“' ' 1

i l-f GHj I

K on -jto;5R6, jossa j r5 on vety, metyyli, etyyli, 2-fluorietyyli, 2,2-difluori- | etyyli, tr· if·luori-isopropyyli, propyyli, isopropyyli tai j j | | 11 N, ch2 r—\ CF3 —0 -o a ^CH2 -^0¾ ^CHs *^CH2 '"‘‘CHa Μ Λ fh\ f^]\

k^k k-x k^J k^J

ch3 CF3 F OCH3 OBU

\CH2 V(jH2 ^0¾ Λ Λ ή ^ ήΓ Λ

y V v C) V V

c (CH3 ) 3 0 0 CH3 CH(CH3)j XCH2 k^j N(jH2

Jk^OCH-3 ^CHs °CHLkN/°CH3 k-X (A kv^ 00113^^0093 T jCHl och3 1

0CH3 och3 ucti3 I

\ 0CH3 \ I

ch2 ch2 ! CH2 kA0cH3 j^2 kk\k j CF3 CF35i>^>VV cp3 j

6 I

R on vety, metyyli, etyyli, 2-fluorietyyli, 2,2-difluori- 1 j etyyli, trifluorietyyli, trifluori-isopropyyli, propyyli, j 5 isopropyyli, tert-butyyli tai \ \

:S

:¾ 12 xch2 “<i ~o 6r ^CH2 CH2 "^CH2. *^CHj ^CH2 ^CHs

f\i Λ Λ f^h f^S

^ V V V V V

eH3 cf3 f och3 obu "^CHj ^3 CH2 "^CHs ^CK2

A Λ A |>VC"· X

i/r>w , 0 0 X^-XX CH3 1 I

G<CH3)3 χ^Γν. V 3 CH {CH'3) 2 I

vch2 VcH2 X([H2 !

J. ^,och3 Nch2 OGH3^x^-OCH3 j^j] I

*kyA i^jl och3 > νχχ'Ν*. irH, 0CH3 \ 0CH3 0CH3 0CH3

\rH 0CK3 \ I

ch2 ch2 I

oc*l ~” C'n^V^N S

NCH3 kjj NCH3 I

jL Jkjl i

CfP^>^CF3 I

i ) 5 ]

J

i 13 /^^^rC00Et C0KICTjl2 X.. C0NH2 V" COOEt \ CQNH3 z 1 \JT sJC \j ^^ch3 L.N v.CON(BzX)2 \ N cooBzi -\¥ 'sT 'll

Χ°Η3 I

V^CONiB2l)2 ί M \ m I

sy^T"CH3 xA>^”^-cooEt

^_____ ^ \ I

5I

iS

j ! ] ä 14 CH(CH3)2 CH{ CH3)2 CH (CH'3 ) 2 co°Bt co°Me C0QS 21 CH (CH'3 j 2

CH{CHj}2 \ M

\ vt V ^CONHBzl 'sjj^r comi ch ( ch;3 ) a

s JJ /^f ^C0K ic%! ?- S

5 CH ( CHi) 2 ?iCH3b L N CH, v^,C0N(B2l>2 CH (CH3 ) 2 V" \ Jj x^CO°Et S~\ ^ \ Jj CH3 CH iCH3)2 CHl CH(CH3)3 CONfBzlJa CH f CH3} 2 COOEt

's-Γ A-fjr0'3 \_T

CH(CH3!2 ^- CHiCH3)3 sJ/^ ^ (^)

CH3 I

CH (CHj) 2 rr\-d ,^ΖΓν I

>xrW7r^O 1 5 ) ] ij 15 \ \ "v \ ch2 gh3 ^ch2 ^ch2 ch2

S'^'N S '^N S ''^'N S'^N g'^N

COOE ^COOMe ^COOBzl ^ ^ΟΟΝΗΒζ 1 ^ ^CONH3 \ XCH2 f Λη ςΑΝ Λ 1 s nn s s \2j y^ y^ V\ CON(CH3}2 CH3 COOEt / CHj CON(Bzl)2 CH3 jt | CH2 E^N S^N A, W W =,2/ Z~~4 CQN(Bzl)2 ch3 / \ Z' >λ -/ COOEt

xch2 \=z/ I

XCH2 i |

I S^N

S^N ^ ' \__ CH3 /\ xch2 O A, Vi Λ ) | j $ $ 16 c°Och3 gooec V· // <7 s COOEt CH3 cOOEt CHa V # S cooch, S' Scooch-3 \ If Cl* Cl 0 N02 ^ ^J\ // S. COOCH3 'S COGCH3 n ε ^ Ίί ^ci s ^ya> ΎΝν-0 s J s~^ no2 s

Br r^X. r^sN

s j

N CF3 I

^.Nv^CHj ""f y” cl I

s ^ s I

^JTS "Viv^\ i

XCOOEt S ^~\^/ \g_ΖΓ % I

ch3 I

$ :¾ >Λ >s 17

Cj CH, f’ r-C"3 I X'h

Xl M H XJ

Λ CH·, V

CHj ' X

ΓΗ "\ CH3 CH3 v n y

s V-o > \ , scT

"n IF1 CH3 /v if\ V //^ %J! n-0^ch3 CH3 CH3 '^i\0 ‘^^'N'y^'SEt CH3 ^Λη5 „

>SCH3 M ifS N"N

S-N \\ //

\ If N ~ N

S - N j

xVc,a!j,> Ί-Γ”" XX1 I

N - N N-N N-K \ CH(CH3h s j

XXwkj)2 XXY^« I

N-N N -N χΧ I

j ] i 18 I— CH3 s N-N K-K C“3 Ν·Η N Cl M—k /^ I K! COOKt. ^ rr\ \AJ -y Λ \=( --4/-1

w =^/ -gh3 n ~( J

V- C-H.3 ch3

CH3 qchj I

CH'3 I

V CH3 L/W CL J^sJ*

ch2 I

] \ \ \ \ \ 19 OCH3 φι [φ φ φ φ (φ) CF= Ρ °™3 6*t LicH,), ill (ΜΙ Γ il fhfCF3 r^v0”3 νγφ C(CH3)3 0 ch3 j OCH3 I 0CH3 J.

γ r^ π ^cp3 AncH3 Π 1

tr ex v xx I

0CHl OCH3 j

cf3 0CH3 och3 I

] ! ] i :ί 20 ^CH2 ^CH2 ^CHa XCHS ^ch2 vj"CH3 \ ° x: \ll \j-~zJ s —' \r= n n. ^CH: CH3 xh2 j Ϊ /s'o \ Γι*Η \ I F jL CH2 [|^^j ch2 \ "5 ll \> 1 (iS cH;i i

F ’'s^N

kJ ^lfN"2 0

x \_/ r^ji Λ^0*! Jv I

ch2Li) I

och3 j

J

j j j ] j j 21 R5-N-CHR7-5-jäsenisi.ä heteroaxyylejä ovat \ ^/s^COOCHj (^yyco°Et j si C3-^wy-C00ösl _ ^ £ θ_Ν CH3 / V ** C0NH2 *? \ // i \J CH3 __. / N-^^CQGEt / V W cÖN (Sei) 2 ^ \ // N ν' K 1 ^CH,

1 *J

3~c0®321 ^jf' i s

Is 1 j ] s 22 R^-N-K6 yhdessä ovat CH'3 OCHj CH3 "“N0 ^N\j L CH3 —« o chs ~0 -o -N^o CH3 v·—1 ( ch3 /—CH3 Ch3 CH3 /—\ )-~\ /—C r~{ )~“Λ — N o —N 0 -N O —-N S ~— N ) \ / y_/ \ / \_/ / CH3 CHj CH.3 CH3 CH3 CHj /—\ /~\,? r~( /“Λ/1* N / \ / 'o N—/ N—' ch3

ch3 I

^n/™\~c(ch3)3 —j \—f\ 1 \-™«/ "chj \ / \rzz/

-N V \ —N V—^ V- C(CH3)3 I

V~/\-/ ^ * '—'S CU-J j

/......v .........·. -N V«— CH3 I

— N \=0 —N \—COOBzl ) ' ]

V—/ \-/ ch3 I

] ] i i 23 ivjx3 Cx^x. 1 1 OCX OO N" Οί^γ*"3 CHj \ ^ ^ ^ 0CH3 \n w j|| 0O\^ 00\ίΧ CH3 ch3"ch3 X]^YY°CH3

OH

v - /V CH3 73 ^ 1 I "^n'^N. v^v CH3 -\7 \ y fy f~i i CN ^Br ^ § ] ] j ::¾ 24

I I ! ! I I I

.N N N N .N

ΓιΓ^ΓΊΓΊ ΓΊΓΊ ΓΊ

N ^N' ^J\T N

CH, Jv CH(CHs).2 COOEt C(CH3)3 CHO

ch3 f j

N N

n r ί I r Ί n ,-ά Aa Ί L^ Aa L^ Γ Ί Γ 1 f Ί

V sK C J A V I I

Λ Ö Λ Ö V

La Π A r\ ®VCHj

W, O Q X

N CH3^n CHS /^X

N N

^ ch3 v_y \j/ I

! ! I I I i I

fNl rNi f 1 γνί Λ Λ 1

^I'T N VNJ ^ϊΤ I

A A A A, I “Ay®

T S

C(CH3)3 GE3 0CH^ NOj ch3 0CH3 1 j $ j j :1 25

I I I I I

N Y a .N N

rS rS jfS (S (S

oaY^OCH3\^CH3^^0CH3 CH, OCHs

] I

I ! I ^n Ö Λ Λ Ο y %Γ ^ΪΤ J. °γΑγΗ3

λ^®· Ατ-0151 α^®3 ίι \J

I J I I λΑ^οοηΥ 0CH3 1 I I 1

N N N I

O O O )

Sr Sr ^ 1 I JT N /~\ ö ö 0 r^y VN N —N \----/ j

^C^XC(CH3)3 I

\ \ \ \ \ \ i 3 ! $ -¾ 26 K on hydroksi-, ai koksi-· {edullisesti Ci-4-aIkoksi-) , fenoksi- tai bentsoksiosa.

Edullisempia yhdisteitä ovat yhdisteet, joissa 5 substituehteilla on seuraavat merkitykset: R1 on etyyli, metyyli, 2-fluorietyyli, 2,2-difluo-rietyyli, 2,2,2-trifluorietyyli, 2-fluori-isopropyylitri-fluori-isopropyyli, isopropyyli, propyyli,: sykloprppyyli täi N CCH3) 2 :? 10 R'; on vety, metyyli, etyyli,, 2-fluorietyyli, 2,2- difluorietyyli, 2,2,2-trifluorietyyli, isopropyyli, pro- j pyyli, butyyli tai sykloprooyyli; ! i R -N-R" yhdessä ovat 1

15 I

A, B, D, E, F, G ja x ovat samat kuin edellä on määritelty; | u, v ja w ovat toisistaan riippumatta 0 tai 1; | E ja F yhdessä ovat j O- CLn C°- j yr yr yr i \ s Jf i s Λ i s Λ 1 CH3 2 0 K on hydroksi-, Ci-4-aikoksi- tai bentsyylioksiosa· R5 On vety, metyyli, etyyli, 2-fluorietyyli, 2,2-difluorietyyli, propyyli, isopropyyli, syklopropyyli, * $ .1 27 syklöpen tyyli, syki oli eksyy li, bentsyyli, 4-fenoksi- bentsyyli, 4-bentsyylioksibentsyyli tai 3,4,5-fcrimetoksi-bentsyyli; R6 on vety, metyyli, etyyli, 2-fluotietyyli, 5 2,2-dIfluorietyyli, propyyli, isopropyyli, tert-bii tyyli, syklopropyylx, syklopentyyli, sykloheksyyli, bentsyyli, 4-fenoksibentsyyli, 4-bentsyylioksibentsyyli, 3,4,5-trime-toksibentsyyli, f.enyyli, 4-f enoksi fenyyii, 4-bentsyyliok-sifenyyii, 3,4,5-trimetoksifenyyii tai j | § ! : ä

: S

:>·$ i 28 L/^COOEt ( N i j L>> CH3 \T κ\Τ CHfCHj); CH(CH3)2 CH(CHs)2

CooBt Ly.-ooru s_/ S“^CH3 '•CHj '"'CHj ''CH, Λ Λ λ

S^N S ^"N S^N

CQOEt. __/ COOEt 1 ^CH2 \=/ S^N j

^CHb I

•^Nn_-CH3 /7"% I

^tr Vrö^i yyO

fc-i i jj s I

^ N CF3 ^ .N ίιΨ^ I

Jr" JQ I

j ! $ j j 29 V0 -<vcH5 ^νσ* y*

N-N N-N Nv > N-N

S o

^ T^1 \j vv*U

^SCH, N"N ^CH?\.r^ s N=/

Xch2 )-CH5 CHj . ___________II···" ^ ^ Q CZy wg ^ 0CH3 ! :j ] \ 30 VC% VCHZ ^CHi ^cH2 s.CH2 J^o J^o X Xs J\ \=^ \r=i y= n jl j X^-i \ Jj -CH2 \CHi ch3 n ch3 ^-j5 rS "cHa *i^-N jjAh k3\^NH2 R5-N-CHR7-5“jäsehinen heteroaryyli on {3--^/1^ COOEl {3-^ COOEt

n T // fr"f Y

\ v I

I S-3 I S-/ I

Rb-N-R6 yhdessä ovat \ r Λ y OCH3 j — Ν') -Nst —N S —K, ! v3 \ / Ό \ / CH3 ] ^ ^ j $ : ^ : $ I -¾ 31 hNNoc::h:3 ^

ö rS rS rS rS

N Snt ^Ι'Γ CH:i ^ COOEt 5 1 t Λ Ö v V i N^N fj

Kf^ OcitT'OCHs OCHj | ) 5 ! \ \ \ \ \ \ \ \ \ \ 32

I I I

ö ö ö S<T Sr

N N

r^ 3 f ^

kN^ ^ I

Nämä esimerkit kuvaavat; käsillä olevaa keksintöä, f mutta eivät rajoita sen piiriä. \

5 Kaavan I mukaiset peptidit koostuvat edullisesti J

L-aminohapoista, mutta ne voivat sisältää yhtä tai useaa- j pää D-aminohappoa. j

Uudet yhdisteet voivat esiintyä suoloina fysiolo- | gisesti siedettyjen: happojen, kuten suolahapon, sitruuna- | 10 hapon, viinihapon, maitohapon, fosforihapon, metaanisulfQ- j nihapon, etikkahapon, muurahaishapon, maleiinihapon, | fumaarihapon, omenahapon, meripihkahapon, malonihapon, | rikkihapon, L-glutamiinihapon, L-aspaxagiinihapon, palo- j rypälehapon, limahapon, bentsoehapon, glukuronihapon, ]

15 oksaalihapon, askorbiinihapon ja asetyyliglysiinin kanssa. I

| | 33

Uudet yhdisteet voidaan valmistaa peptidikemiassa sinänsä tunnettujen menetelmien mukaisesti. Niinpä peptidit voidaan koota peräkkäin aminohapoista yhdistämällä sopivia pieniä peptidi fragmentteja. Peräkkäisessä kokoon-5 panossa, lähtien liikkeelle C-päästä, peptidiketjua kasvatetaan vaiheittain yhdellä aminohapolla kerrallaan. Fragmenttien yhdistämisessä on mahdollista liittää yhteen eri pituisia fragmentteja ja fragmentteja puolestaan voidaan saada peräkkäisellä liittämisellä aminohapoista tai niistä 10 itsestään: fragmenttiliitärinällä.

Sekä peräkkäisessä kokoonpanossa että fragmenttien liittämisessä on tarpeellista yhdistää yksiköt muodosta-maila, amidisidos. Entsymaattiset ja kemialliset menetelmät ovat sopivia tätä varten.

15 Kemiallisia menetelmiä amidisidoksen muodosta miseksi kuvataan yksityiskohtaisesti seuraavissa teoksissa; Möller, Methodeh der organischen chemie, voi. XV/2, s. 1 -364 (Thieme ¥erlag, Stuttgart, 1974); Stewart;,

Young, Solid Phase Peptide Symthesis, s. 31 - 34, 71 - 82 I

20 (Pierce Chemical Company, Rockford, 1984); BOdanszky, I

Klausner, Ondetti, Peptide Synthesis, s. 85 - 128 (John \

Wiley & Sons, New York, 1976} ja muissa peptidikexnian perusteoksissa. Erityinen etusija annetaan atsidimene- f telmälle, symmetriselle ja seka-anhydridimenetelmälle, in | 25 situ syntyneille tai esimuodostetuille aktiivisille j estereille, uretaanilla suojattujen aminohappojen N-kar- j boks ianhydr idi en käytölle ja ami di s i doks en itiuo- j

dostumiselle, jossa käytetään kiinnitysaineita (aktivaat- I

toreita, erityisesti disykloheksyylikarbodi-imidiä (DCC), | 30 di-isopropyylikarbodi-imidiä (Die), 1-etoks ikarbonyyli-2- j

etoksi-1,2-dihydrokinoliinia (EEDQ), 1-etyyli-3-(3-dime- I

] tyyliaminoprppyyli}karbodi-imidihydrokloridia (EDCZ ) , n- j propaanifosfonianhydridiä (PPA), Ν,Ν-bis(2-okso-3~oksatso- j lidinyyli)midof:osforYylikloridia (BOP-C1) , bromi-tris-pyr- \ 35 rolidiiilifosfoniiimheksafluorifosfaattia (FyBropj , difenyy- | ] $ il il 34 lifosforyyliatsidia (DBPÄ), Castron reagenssia (BOP:, Py-Bop) , O-bentsOtriatsolyyXi-Nv Nv N' , N' -tetrametyyliuronium-suoloja (HBTU), äietyylifosforyylisyanidia (PEPCN), 2,5- di f enyyli -2,3 -dihydro- 3 -okso-4 -hydroks i tio f eenidioks idia 5 (Steglichin reagenssi; HOTDO) ja 1,1'-karbonyylidi-imidat-solia (CDI), Kiirmitysaineita voidaan käyttää yksin tai yhdessä lisäaineiden, kuten N,:M-dime:tyyli-4”aminopyridii-nin (DMäP) , N-hydroksibentsotriatSOlin (HOBt) , N-hydroksi-bentsotriatsiinin (HOOBt), N-hydroksisukkinimidin (HOSu) 10 tai 2-hydroksipyridiinin kanssa.

Koska normaalisti on mahdollista olla ilman suoja-ryhmiä entsymaattisissa peptidisynteesissä, on amidisidok-sen muodostumisessa tarpeettomien reaktiivisten ryhmien reversiibeli suojaus tarpeellista molemmille reagoiville 15 aineille .kemiallisessa synteesissä. Kemiallisessa peptidi-synteesissä voidaan käyttää kolmea edullista konventionaalista suojaryhmätekniikkaa: bentsyylioksikarbonyyli- (2)·, t-butoksikarbonyyli- (Boc) ja 9-fluorenyylimetoksikarbo-nyylitekniikkaa (Fmoc). Jokaisessa tapauksessa identifioi-20 tava on suojaryhmä ketjua pidentävän yksikön a-aminoryh- j mässä. Teoksessa Methoden der organischen Chemie, voi. | XV/1, s. 20 - 90S {Thieme Verlag, Stuttgart, 1974) antaa j . # ]

Muller yksityiskohtaisen katselmuksen aminohappojen suoja- ! ryhmistä. Peptidiketjun kokoamiseksi käytettyjen yksiköi- f 25 den voidaan antaa reagoida liuoksessa, suspensiossa tai j niitä voidaan käsitellä samankaltaisella menetelmällä, 1 jota Merrifield on kuvannut julkaisussa J. Amer. Chem, j

Soc. 85 (1963) 2149. Erityisen edullisia menetelmiä ovat j

ne, joissa peptidit kootaan peräkkäin tai fragmenttilii- I

30 täimällä käyttäen Z-, Boc- tai Fmoc-suojaryhmätekniikkaa j yhden reagoivan aineen kanssa mainitussa Merrifield-tek-

niikassa, jossa ne sidotaan liukenemattomaan polymeeriseen I

kantajaan (kutsutaan tästä lähtien myös hartsiksi). Tämä j tyypillisesti määrää polymeerikantajalle peräkkäin koot- j 35 tavan peptidin käyttäen Boc- tai Fmoc-suojaryhmätekniik- j | i 35 kaa, kasvava peptidiketju, joka sidotaan kovalen.tti.sesti C-päässä liukenemat torni in 'harts ipar t ikke.1 ei.ftih {vertaa kuviot 1 ja 2) . Tämä menettely mahdollistaa iröagenssien ja sivutuotteiden poistamisen suodattamalla ja täten väli-5 tuotteiden uudelleerkiteytys on tarpeetonta.

Suojatut aminohapot voidaan sitoa mihin: tahansa sopiviin polymeereihin, joiden tulee olla ainoastaan, liukenemattomia käytettäviin nuottiini in ja niiden tulee omata stabiili fysikaalinen muoto, joka tekee suodattamisen 10 helpoksi. Polymeerin tulee sisältää funktionaalinen: ryhmä., johon ensimmäinen suojattu aminohappo voi sitoutua lujasti kovalenssisidoksella. Tähän tarkoitukseen sopivia polymeerejä on useita, kuten esimerkiksi selluloosa, polyvinyy-lialkoholi, polymetakrylaatti;, sulfonoitu polystyreeni, 15 kloorimetylöitu styreeni/divinyylibentseenikopolyitieeri (Merrifield-hartsi) , 4-metyy:libentshyöryyliamiihihartsi (MBHA-hartsij, fenyyliasetamidametyylihartsi (Pam-hartsi), p-bentsyylioksihentsyylialkoholihartsi, bentshydryyliamii- \ n.ihartsi (BHA-hartsi) , 4-(hydröksimetyyli)bentsyylioksime- j 20 tyylihartsi, Breipohl et ai. kuvaama hartsi (Tetrahedron j betters 28 {1987} 565 ; toimittaja BACHEM), 4- (2,4-elimetok- \ sifenyyliaminometyyli)fenoksihärtsi (toimittaja Novabio-them} tai ö-klooritrityylihartsi (toimittaja Biohellas}.

Sopivia liuottimia peptidisynteesiä varten liuok- j 25 sessa ovat kaikki liuottimet, jotka ovat inerttejä reak- j tio-olosuhteissa, erityisesti vesi., N,N-dimetyyliformarnidi ] (DMF}, dimetyylisulfoksidi (DMSO), asetonitriili, dikloo- j rimetaani (DCM) , 1, 4-di oksaani, t e t r ahydr o f uz'aan i (THF) , | N-metyyli-2-pyrrolidpni (NMP) ja mainittujen liuottimien 30 seokset. Peptidisynteesipolymeerisellä kantajalla voidaan suorittaa kaikissa inerteissä orgaanisissa liuottimissa, joihin käytetyt aminohappojohdannaiset ovat liukoisia; kuitenkin edullisilla liuottimilla on lisäksi hartsia laajentavia ominaisuuksia, ja tällaisia liuottimia ovat esi-35 merkiksi DMF, DGM, NMP, asetonitriili ja DMSO sekä näiden iä 36 liuottimien seokset. Synteesin mentyä loppuun peptidi lohkaistaan pois polymeerisestä kantajasta. Olosuhteita, joissa poistaminen erilaisilta hartsityypeiltä on mahdollista, kuvataan kirjallisuudessa. Tavallisimmin käytettyjä 5 lohkaisureaktioita ovat happo- ja palladiumkatalysoidut reaktiot:, erityisesti poistaminen nestemäisessä vedettömässä. vetyfluoridissä, vedettömässä trifluorimetaarLisulfo-nihapossa, laimeassa tai konsentroidussa trifluörietikka-hapossa, palladiunikatalysoitu lohkaisu THF:ssa tai THF-10 DCM-seoksissä heikon emäksen, kuten morfoliinin, läsnä ollessa tai lohkaisu etikkahappo/dikloorimetääni/trifluori-etanoliseoksissaValituista suojaryhmistä riippuen nämä. voidaan pitää tai sama! la tavoin lohkaista pois lohkaisu-olosuhteissa. Peptidin osittainen suojauksen poisto voi 15 myös Olla kannattavaa, kun tiettyjä johdannaisreaktioita suoritetaan. N-päässä dialkyloituja peptidejä voidaan valmistaa joko kytkemällä sopiviin ti,N-dialkyylj.aminohappoihin liuoksessa tai polymeerikantajaan tai hartsiin sidotun j peptidin pelkistävällä alkyloinnilla seoksessa, jossa on \ 20 DMF:a ja 1 % etikkahappoa NaCNBH3:n ja sopivien aldehydien j kanssa. Useita aminohappoja, joita ei esiinny luonnossa, j samoin kuin useita tässä kuvattuja ei-aminohappo-osia voidaan saada kaupallisista lähteistä tai niitä voidaan syntetisoida kaupallisesti saatavilla olevista materiaaleista 25 käyttäen sinänsä tunnettuja menetelmiä. Esimerkiksi aminohappojen rakennuslohkoja R1- ja R2-osien kanssa voidaan j valmistaa julkaisun E. Wiinsch, Houben Weyl, Meth. d. Org. j

Chemie, sid. XV, 1, sivulta 306 eteenpäin (Thieme Verlag, |

Stuttgart, 1974, ja siinä referoidun kirjallisuuden mukai- j 30 sesti. Peptidit, joissa on gamma- tai delta-laktaamisil- \ lat, voidaan valmistaa sisällyttämällä sopivat laktaami- j siltaiset dipeptidiyksiköt (R. Freidinger, J. Org. Chem. j (1982) 104 - 109) peptidiketjuun. Peptidejä, joissa on ] tiatsolia, oksatsolia, tiatsoliinia tai oksatsoliinia si- ] 35 sältäviä dipeptidirakennusosasia, voidaan valmistaa sisäl- 37 lytt-ämällä sopivat dipeptidiyksiköt (F. Jonin et ai., Tetrahedron Letters (.1992) , 2807 - 2810; P, Wipf et ai., Tetrahedron Letters (1992} 907 - 910; VJ. R. Tally, J. Med.

Chem. (1991), 2065; Synthesis (1987) 235} peptidiketjuun.

5 Käsillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voi daan käyttää inhiboitaessa kiinteitä kasvaimia tai muutoin hoidettaessa niitä (esimerkiksi keuhko-, rinta-, lynkky-suoli-, eturauhas-, rakko-, peräsuoli- tai kohdun limakalvon kasvaimia), tai hematologista maligniteettää (esimer-10 kiksi leukemiat, lymfoomat) antamalla yhdistettä nisäkkäälle. Antaminen voi tapahtua millä tahansa tavalla, joka on tavanomainen annettaessa farmaseuttisia, erityisesti on-kologisia aineita, käsittäen oraaliset ja parenteraaliset tavat, kuten subkutaanisesti, intravenoosisesti, intramus-15 kulaarisesti ja intraperitoneaalisesti. Yhdisteitä voidaan antaa yksin tai sellaisten farmaseuttisten koostumusten muodossa, jotka sisältävät kaavan I mukaista yhdistettä yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan kanssa, halutusta antotavasta riippuen. Tällaiset farmaseuttiset j 20 koostumukset voivat olla yhdistelmätuotteita eli ne voivat sisältää muitakin terapeuttisesti aktiivisia ainesosia. j

Nisäkkäälle annettava annos sisältää tehokkaan j kasvainta inhiboivan määrän aktiivista ainesosaa, joka j riippuu tavanomaisista tekijöistä, kuten käytettävän yh- j 25 disteen biologisesta aktiivisuudesta, antotavasta, vas- \ taanottajan iästä, terveydentilasta ja painosta, oireiden j luonteesta ja laajuudesta, hoidon toistumiatiheydestä, \ muiden terapioiden antamisesta ja toivotusta vaiku- ] tulisesta. Tyypillinen päivittäinen annos on noin 5 - 250 | 30 mg painokiloa kohden oraalisesti annettuna ja noin 1 - 100 | mg painokiloa kohden parenteraalisella annolla. |

Uusia yhdisteitä voidaan antaa tavanomaisissa | kiinteissä tai nestemäisissä farmaseuttisissa antomuo- | doissa, esimerkiksi päällystämättöminä täi (filmi)pääl- ] 35 lystettyinä tabletteina, kapseleina, jauheina, rakeina, ] j ! j 38 peräpuikkoina tai liuoksina. Nämä valmistetaan tavanomaisella tavalla. Aktiivisia aineita prosessoitaessa voidaan käyttää, tätä tarkoitusta varten apuna tavanomaisia farmaseuttisia aineita, kuten tablettia sitovaa ainetta, 5 täyteaineita, säilytysaineita, tablettien hajotusaineita, virtauksen säätelyaineita, pehmentimiä, kostutusaineita, dispegointiaineita, emulgointiaineita, liuottimia, jatkuvasti vapautuvia koostumuksia, antioksidantteja ja/tai ponnekaasuja (vertaa H Sucker et ai., Pharmazeuti-10 sche Teehnologie, Thieme-Verlag, Stuttgart, 1978) . Tällä tavoin saadut antomuodot sisältävät normaalisti 1-90 painoprosenttia aktiivista ainetta.

Seuraavien esimerkkien on tarkoitus kuvata keksintöä. Proteiinipitoiset aminohapot lyhennetään esimerkeissä 15 käyttäen tunnettuja kolmikirjaimisia koodeja. Muita merkityksiä ovat; TFA tarkoittaa trifluorietikkaiiappo, Ac etik-kahappoa, Bu tarkoittaa butyyliä, Et etyyliä, Me metyyliä ! ja Bzl bentsyyliä.

A, yleiset menettelytavat 20 I. Patenttivaatimuksessa 1 esitetyt peptidit on joko syntetisoitu klassisella liuossynteesiXlä käyttäen f tavallista, edellä kuvattua Z- ja Boc-metodologiaa tai | tavallisilla kiinteäfaasisynteesimenetelraillä täysin auto- j maattiseila mallin -43IA syntetisaattorilla, jota toimittaa | 25 APPLIED BIOSYSTEMS. Laite käyttää erilaisia synteettisiä | syklejä Boc- ja Fmoc-suojaryhmätekniikolta varten. | j \ | | \ \ | | i j s

-S

i 39 a ) Synteettinen sykli Boc-suoj aryhmä t ekniikkaa varten 1. 30-% : inen trifluorietikkahappQ DCM:ssa 1 x 3 min 2. 50-%:inen trifluorietikkahappo DCM:ssa 1x1 min 5 3, DCM-pesu 5 x 1 min 4. 5-% : inen di-isopropyylietyyliamiini DCM: ssa 1x1 min 5 . 5-%: inen di-isopropyylietyylianniini NMP:Ssa lxl min 6 . NMP-pesu 5x1 min 7. Esiaktivoidun suojatun aminohapon lisäys 10 (aktivointi 1 ekvivalentilla DCC:a ja 1 ekvivalentilla HOBt:a NMP/DCM seoksessa);

Peptidiliitäntä (1. osa) 1 x 30 min 8. DMSO:n lisäys reaktioseokseen, kunnes se sisältää 20 tilavuusprosenttia DMSO:a 15 9. Peptidiliitäntä (2. osa) 1 x 16 min 10. Di-isopropyylietyyliarniinin (3,8 ekv.) lisäys reaktioseokseen 11. Peptidiliitäntä (3. osa) 1 x 7 min { 12... DCM-pesu 3 x 1 min | 2 0 13. Liitännän toisto, jos konversio: on j epätäydellinen (takaisin vaiheeseen 5) | 14. 10-%:inen asetanhydridi, 5-%:inen di- \ isopropyylietyyXiamiini DCM: ssa 1x2 min f 15. 10-%:inen asetanhydridi DCM:ssa 1x4 min | 25 16. DCM-pesu 4x1 min | 17. Takaisin vaiheeseen 1 j j BOP-Cl;a ja PyBrop: a käytettiin reagensseina ;| aminohapon liitännässä N-metyyliaminQhappojen jälkeen.

30 Reaktioajat kasvoivat vastaavasti. Liuossynteesissä on joko Boc-suojattujen aminohappo-MCA:ien (N-tert-butyy- j

liöksikarbonyyliaminohappo-N-karboksianhvdridien} tai vas~ I

taavasti Z-suojattujen aminohappo~NC&:ien (N-bentsyyl iolc- j sikarbonyyliaminohappo-N-karboksianhydriclien) käyttö edul- j 35 lisinta tämäntyyppisessä liitännässä. j ] j 40 b) Synteettinen sykli Fmoe - suo j aryhmätekniikkaa varten 1. DMF-pesu 1 X 1 min 2. 20-%:inen piperidiini DMF; ssa. 1x4 min 5 3. 20-%-inen piperidiini DMF:ssa 1 x 16 min 4. DMF-pesu 5 x 1 min 5. Esiaktivoidun suojatun aminohapon lisäys (aktivointi 1 ekvivalentilla TBTU;a ja 1,5 ekvivalentilla DIPEA:a DM?: ssa):; 10 Feptidiliitäntä 1 x 61 min 6. DMF-pesu 3x1 min 7. Liitännän toisto, jos konversio on epätäydellinen (takaisin vaiheeseen 5} 8. 10-%:inen asetanhydridl DMF:ssa 1x8 min 15 9. DMF-pesu 3 x 1 min 10. Takaisin vaiheeseen 2 BOP-Cl:a ja PyBröprä käytettiin reagensseina j aminohapon liitännässä N-metyyliaminohappojen jälkeen. \ 20 Reaktioajat kasvoivat vastaavasti. j

II. N~päätfceen pelkistävä alkylointi I

Kohdan Ala tai Alb mukaisesti valmistetun peptidi- j hartsin suojaus poistettiin N-päässä (vaiheet 2-4 koh- j dassa Alb tai vaiheet 1 - 6 kohdassa Ala) ja sitten sen \ 25 annettiin reagoida 3-kertaisen molaarisen aldehydi- tai \ ketöniyliiriäärän kanssa seoksessa, jossa oli DMF:a ja 1 % 1 etikkahappoa, lisäämällä 3 ekvivalenttia WaCNBH3:a. Sen j jälkeen kun reaktio oli täydellinen (negatiivinen Kaiser- ! j testi), hartsi pestiin useita kertoja vedellä, isopropano- \ 30 lilla, ,DMF:lla ja dikloorimetäänillä. ] III. Kohdissa la ja II saatujen peptidihartsien j työstö j

Peptidihartsi kuivattiin alipaineessa ja se siir- j rehtiin TEFLON HF -laitteen (toimittaja PENINSULA.) reak- j 35 tioastiaan. Puhdistavaa lisäainetta, edullisesti anxs.plia j ! i 41 {1 ml/g hartsia) ja tryptofaania, sisältävien peptidien tapauksessa tiolia lisättiin indoLisen fonnyyliryhmän, edullisesti etaaniditiolih (0,5 nil/g hartsia), poistamiseksi ja sitten tätä kondensoitiin vetyfluoridissa {10 ml/ 5 g hartsia) samalla jäähdyttäen nestemäisellä typellä.

Seoksen annettiin lämmetä Q °C:seen ja sitä sekoitettiin tässä lämpötilassa 45 minuuttia, Sitten vetyfluoridi poistettiin alipaineessa ja jäännös pestiin etyyliasetaatilla jäljelle jääneen puhdistavan lisäaineen poistamiseksi.

•10 Peptidiä uutettiin 30 %:n vahvuisella etikkahapolla ja se suodatettiin ja suodos lyofilisoitiin.

IV* Kohdissa Ib ja II saatujen peptidihartsien työstö

Peptidihartsi kuivattiin alipaineessa ja sitten se j 15 alistettiin yhteen seuraavista liitäntämenetelniistä riip- \ puen aminohappokoostumuksesta (Wade, Tregear, Howard j

Florey Fmoc Workshop Manual, Melbourne, 1985). ;

Lohkaisuo1osuhteet 20 TFA Puhdistava lisäaine Reaktioaika i 1 95 % 5 % HaO 1,5 h j 2 95 % 5 % etaaniditioli/ 1,5 h | anisoli (1:3) ] 25 Peptidihartsisuspensiota sapiyässa TFA-seoksessa | sekoitettiin huoneenlämmössä mainittu Sika ja Sitten hart- j si suodatettiin pois ja pestiin TFA:ila ja DCM-lla, Suodos | | ja pesuvedet konsentroitiin ja peptidi saostettiin lisää- ] isällä dietyylieetteriä. Jäähauteessa jäähdyttämisen jäi- ] 30 keen sakka suodatettiin pois, vietiin 30-%:iseen etikka- j happoon ja lyofilisoitiin. j V. Käytettäessä o-klooritrityylihartsia (toimitta- j ja Biohellas) sekoitetaan peptihartsisuspensiota etikka- | happo/trifluorietanoli/dikloorimetaaniseoksessa (1:1:3) | 35 huoneenlämmössä 1 tunti. Sitten hartsi suodatetaan pois j } •5

II

42 imulla ja se pestään huolellisesti lohkaisuliuoksella. Yhdistetyt suodokset konsentroidaan tyhjössä ja niitä käsitellään vedellä. Saostunut kiinteä aines: poisteta®-*! Suodattamalla: tai sentrifugoimälla, pestään dietyylieetteril-5 lä ja kuivataan alipaineessa.

VI. Peptidien puhdistus ja karakterisointi Puhdistus suoritetta in geelikromatografisesti (Sephadex G-10, G-15/10 % HOAc, Sephadex LH20/MeOH) ilman tämän jälkeistä keskipainekromatografiaa tai sen kanssa 10 (liikkumaton faasi: HD-SIL· C-18, 20 - 45 μ, 100 A; liikkuva faasi: gradient ti A = 0,1 % TFA/MeOH, B = 0,1 % TEA/ H20) .

Tuloksena saatujen tuotteiden puhtaus- määritettiin analyyttisellä HPLC;lla (liikkumaton faasia 100 2,1 mm 15 VYDÄC C-18, 5 1, 300 A; liikkuva faasi: CHjCN/H20 gradi ent ti, puskuroitu 0,1 ·%:isella TFArlla, 40 °C) . Karakterisointi suoritettiin äminohäppoanalyysillä ja nopealla ato-miatömipornmitusinassaspektroskopialla. j B. Spesifiset menetelmät j 20 Esimerkki 1 (sekvenssin tunnusnumero: 1) \

N,N-dime tyyli-Vai-Vai-N-metyyli ^Vai-Pro-Pro-Vai- I

Phe-MH3 | 1,98 g Emoc-RINK-hartsiä (substituutio 0,46 iranol/ j g), joka vastaa eräkokoa 0,84 mmol, annettiin reagoida | 25 kohdassa Alb esitetyn mukaisesti 1,26 mmol jokaisen seu- \ raavan yhdisteen kanssa ]

Fmoc-Phe-OH Fmo c - N - rae t yy 1 i - Va 1 - OH ]

Fmoc-Val-OH Fmoc-Val-OH

FmoG-Pro-OH Fmoc-Val-OH

30 Fmoc-Pro-OH

N-metyy1iaminohappoa seuraava aminohappo liitettiin PyBropin ollessa liitäntäreagenssina. Iteratiivisten synteettisten syklien loputtua peptidihartsi läpifcävi N-päätteen suojauksen poiston (vaiheet 2 - 4 köhdasa Alb) ja 35 sen annettiin lisäksi reagoida vesipitoisen formalde- f 43 hydiliuoksen kanssa, kuten kohdassa AH on kuvattu, ja sitten se kuivattiin alipaineessa, Tuloksena saatu hartsi alistettiin TFA-lohkaisulle, kuten kohdassa AIV on kuvattu. Raakatuote (590 mg) puhdistettiin geeli-5 suodatuksella (Sephadex LH-20). Saanto oli 295 mg.

Esimerkki 2 (sekvenssin tunnusnumero: 2}

JL N

N, N-aitnetyyli*-Val-Val-N-Me"Val-Pro —HN

4., 1.1 g:n Fmoc-Pro-p-älkoksibentsyylialköhöliharhsia 10 (substituutio 0,73 inmol/g) , joka vastaa erikokoa 3 mmol, ahnettiin reagoida: kohdassa Alb esitetyn mukaisesti 4,5 mmol jokaisen seuraav&n yhdisteen kanssa Fmo c - Kf-MeVa 1 - QH:

Fmoc-Val-OH | 15 Fmoc-Val-OH. j N-metyyliaminohappoa seuraavan aminohapon annet- Ϊ

tiin tässä tapauksessa reagoida kaksoisliitänhällä I

käyttäen PyBrop:a ja Böp-Cl:a pidemmillä reaktioajoilla. j

Sen jälkeen kun synteesi oli mennyt loppuun, peptidihartsi | 20 läpikävi N-päätteen suojauksen poiston (vaiheet 2-4 | kohdassa Alb) ja sen annettiin lisäksi reagoida vesipitoisen formaldehydiliuoksen kanssa, kuten kohdassa Ali on kuvattu, ja sitten se kuivattiin alipaineessa. Tällä tavoin saatu hartsi alistettiin TFA-lohkaisulIe, kuten 25 kohdassa AIV on kuvattu. Raakatuotetta (750 mg) käytettiin suoraan seuraavaa liitäntää varten. Tämän yhdisteen (100 mg) annettiin reagoida (Sj-2“[l-ainino-2-fenyylietyy-· liltiatsolin (45 mg) ja ByBoptin (230 mg) kanssa lisäämällä seosta, jossa oli 192 μΐ DIΡΕΑ:a DMFissa, 30 huoneenlämmössä 2 vuorokautta. Reaktioseos puhdistettiin | 44 geelikromatograf isesti (Sephadex LH-20, metanoli) ja tuotefraktiot yhdistettiin. Tuotetta saatiin 83 rag.

Seuraavat yhdisteet valmistettiin ja ne voidaan valmistaa esimerkkien 1 ja 2 mukaisesti: 5 3. Xaa Vai Xan Pro Pro Vai Phe 4 . Xaa Vai Xan Pro Pro Vai Xac 5. Xaa Vai: Xan Pro Pro Vai Xad 6. Xaa Vai Xan Pro Pro Vai Xae 7 , xaa vai Xan Pro Pro vai Xaf 8. Xaa Vai Xan Pro Pro Vai His-NHj 9. Xbo Vai Xan Pro Pro Vai Phe-NHj 10. Xaa Vai Xan Pro Pro vai Xag-NHz 11. Xaa Vai Xan Pro Pro Vai Xah 12. Xaa xbe Xan Pro Pro Vai Trp-NH^ 13 . Xaa Vai Xan Pro Pro Xai Phe-NHj 14. Xae vai Xan Pro Pro Ile Phe~NH2 15. Xaa Vai Xan Pro Xai Vai Phe-NHj 16. Xaa Vai Xan Pro Xak Vai Phe-NHj ; 17. Xaa Vai Xan Xak Pro Vai Phe-NH2 18. Xaa Vai Xan Xai Pro Vai Phe-MH2 j 19. Xaa Vai Xao Pro Pro Vai Phe-NH2 j 20 . Xaa Vai Xam Pro Pro Vai Phe-NH2 j 21. Xaa Xap Pro Pro Vai Phe-NH2 ] 22. xaa Xag Pro Pro vai Phe-NH2 j 23. Xaa Ile Xan Pro Pro Vai Phe-NH2 24 . Xaa Xai Xan Pro Pro Vai Phe-NH2 25. Xaa Leu Xan Pro Pro Vai Phe-NHj 26. Xar Vai Xan Pro Pro Vai Phe-NH2 27. xas Vai Xan Pro Pro Vai Phe-NHj \ 28. Xat Vai Xan Pro Pro Vai Phe-MH2 j 29. Xau Vai Xan Pro Xai Vai Phe-NH2 j

30. Xav Vai Xan Pro Pro Vai Phe-NHj I

31. ' Xan Vai Xan Pro Pro Vai Phe-NH2 \ 32. Xaw Vai Xan Pro Pro Vai Phe-NHj j 33. Xax Vai Xan Pro Pro Vai Phe~NH2 j 34 . Xaa Vai Xan Pro Pro Phe Phe-NHa j 35. Xa2 Vai Xan Pro Pro Vai Phe-NHj j 36. Xba Vai Xan Pro Pro Vai Phe-NH2 j 37. Xaa Vai Xan Pro Pro Val-NH2 j 38. Xaa Vai Xan Pro Xhb j 39. Xaa Vai Xan Pro Xbc j 40. Xaa Vai Xan Pro Pro Xbd j § | 45 41. Xax Vai Xan Pro Pro Val-NH2 42. Xaw Va'l Xan Pro Pro Val-NHj 43 , Xat Val Xan Pro Pro Val-KH-j 44 . Xaa Xai Xan Pro Pro Val-NHz 45. Xaa Val Xan Pro Pro Xai-NHj 46. Xaa Val Xan Xak Pro Val-NH? 47. Xaa Val Xan Pro Xak Val-NHz 48. Xaa Val Xan Pro Pro Val 49. Xav Val Xan Pro Pro Val-NHj 50. Xaa val Xan Pro Pro-NHz 51. Xaa Val Xan Pro Pro 52. Xaa Val Xan Pro Xbf 53. Xaa Val Xan Xbb 54. Xaa Val Xan Xbc 55. Xaa Val Xan Xbg 56. Xaa Val Xan xbh 57. Xaa Val Xan Xtoi 58. Xaa Val Xan Xbk 59. Xaa Val Xan Xbl 60. Xaa Val Xan Xbm 61. Xaa Val Xan Xbn 62. Xax Val Xan Pro Pro-NHj 63. Xaw Val Xan Pro Pro-MHz 64. Xbo Val Xan Pro Pro-NH2 ^ 65. Xat Val Xan Pro Pro-NBz 66; Xaa Xai Xan Pro Pro-NHj 67. Xat Xai Xan Pro Pro-NH2 68. Xaa Xap Pro Pro-NHz ! 69. Xaa Xaq Pro Pro-NHj 70. Xav Val Xan Pro Pro-NH2 71. Xaa Xap Pro-MHz 72 . Xaa Xaq Pro-MHz j 73. Xaa Val Xan Pro ]

74. Xaa Vai Xbp I

75. Xaa Val Xbq j 76. Xaa Val Xbr | 77. xaa val Xbs \ 78. xaa val Xan xbf j 79. Xaa Val Xbt \ 80. Xaa Val Xbu | SI. Xaa Val Xbv· | 82. Xaa Val Xbw ] 83 , Xax Val Xan Pro-NHj ]

J

$ 46 84 .. XbO Vai Xan Pro-NHj 85. Xav Vai Xan Pro-NH2 86. Xaa Vai Xan Pro Xbn 87. xaa Vai Xan Pro xbg 88. Xaa Vai Xan Pro Xbi S9. Xaa Vai Xan Pro Xbl 90. Xbo Vai Xan Pro Xbg 91. xbo Vai Xan Pro Xbl 92. Xbo Xbe Xan Pro Xbg 93. Xaa Vai Xan Pro Xbx 94. xaa Xbe Xan Pro Pro-NH2 95. Xby Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH2 96. Xed Vai xan Pro Pro Vai Phe NH? 97. Xee Vai Xan Pro Pro Vai Phe MH2 98. Xef Vai Xan pro Pro Vai Phe nh2 99. Xbr Vai Xan Pro Pro Vai Phe nb2 100 . Xeg Vai Xan Pro Pro Vai Phe 14¾ 101. Xca Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH2 102. Xcb Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH? 103. Xcb Vai Xao Pro Pro Vai Phe NH2 104. Xcc Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH2

105. Xce Vai Xan Pro Pro Vai Phe S

107, Xcg Vai Xan Pro pro Vai Phe NH2 | 108. Xch Vai Xan Pro Pro Vai Phe NK2 109. Xci Vai Xan Pro Pro Vai Phe NHj 110. Xek Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH2 111, Xcl Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH2 j 112, Xcra Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH2 j 113, Xcn Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH2 j 114. Xhn Vai Xan Pro Pro Vai Phe NH2 \ 115 , Xho Vai Xan Pro Pro Vai Phe MH2 j 116. Xhp Vai xan Pro Pro Vai Phe NH2 \ 117. Xhq Vai Xan Pro Pro Vai Phe NHj \ 118. Xby Vai Xan Pro Pro Vai NH2 \ 119. Xed Vai Xan Pro Pro Vai NHj \ 120. Xee Vai Xan Pro Pro Vai NHj | 121. Xef Vai Xan Pro Pro Vai MH2 ] 122. Xbz Vai Xan Pro Pro Vai j 123. Xeg Vai Xan Pro Pro Vai NHj j 124. Xca Vai Xan Pro Pro Vai NH; j 125. Xcb Vai Xan Pro Pro Vai NH2 ] 12 6, Xcc Vai Xan Pro Pro Vai NHj j 127. xce Vai Xan Pro Pro Vai NH2 | 128. Xcg Vai Xan Pro Pro Vai j 129. Xch Vai Xan Pro Pro Vai NH2 j 47 130. xci Vai Xan pro pro Val .14¾ 131. Xck val Xan Pro Pro Vai NH, 132. Xcl Val Xan Pro Pro Vai NH; 133. Xcm Val Xan Pro Pro Vai NH; 134. xcn Val Xan Pro Pro Val 34¾ 135. xhn val Xan Pro Pro Val NH2 136. xho Val Xan pro Pro Val 14¾ 13 7. xhp Val Xan Pro Pro Val NH2 138. Xhq Val Xan Pro Pro Val 24¾ 13 9. Xby Val Xan Pro Pro NH2 14 0. Xed Val Xan Pro Pro NH2 141. xee Val Xan Pro Pro 14¾ 142. xe£ Val Xan Pro Pro NH2 143. xbs val Xan Pro Pro 24¾ 14 4 , xeg Val Xan Pro Pro 14¾ 14 5. Xca Val Xan Pro Pro NH2 14 6, Xcb Val Xan Pro Pro 14¾ 147. Xcc Val Xan Pro Pro 14¾ 14 8, Xce Val Xan Pro Pro 14¾ 149. xcg Val Xan Pro Pro 14¾ 150. Xch Val Xan Pro Pro 24¾ 151. Xci Val Xan Pro Pro 24¾ 152 . Xck Val Xan Pro Pro 14¾ 153. Xcl Val Xan Pro Pro 14¾ 154. Xcm Val Xan pro Pro 14¾ 155. Xcn Val Xan Pro Pro 14¾ 156. Xhn Val Xan pro Pro 14¾ j 157. xho Val Xan Pro Pro HH2 158. Xhp Val Xan Pro Pro 14% j 159. Xhq Val Xan Pro Pro NH2 j 160. Xaa Val Xan pro Pro Val Xei j 161. xaa Val xan pro Pro Val Xem | 162. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xeo j 163. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xep | 164. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xeq 165. xaa Val Xan Pro Pro Val Xex 166. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xey 167. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xfb 168. Xaa Val Xan Pro Pro Val xfe 169. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xfh 170. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xfu 171. xaa Val :Xan Pro Pro val Xfv 172. Xaa Val Xan Pro Pro val Xft 17 3. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xfw 48 174,Xaa Vai Xan Pro Pro Val Xfx 17 5, Xaa Val Xan Pro Pro Val Xga 17 6. Xaa Val Xan Pro Pro Val X.gd 177. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xgg 17 8. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xgh 179, Xaa Val Xan Pro Pro Val Xgi 160, Xaa Val Xan Pro Pro Val Xgl 181. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xgs 182. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xgv 183. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xhe 184. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xgy 185. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xhd 186. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xhb 187. xaa Val Xan Pro Pro Val Xhc 188. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xhl 189. Xaa Val Xan Pro Pro Xeh 190. Xaa Val xan Pro Pro Xen 191. Xaa Val Xan Pro Pro Xeo 192. xaa Val Xan Pro Pro Xep 193. Xaa Val Xan Pro Pro Xeq j 194. Xaa val Xan Pro Pro Xer j 195. Xaa Val Xan Pro Pro Xet | 196. Xaa Val Xan Pro Pro Xen ; 197. Xaa Val Xan Pro Pro Xes i 198. Xaa Val Xan Pro Pro Xew j 199. Xaa Val Xan Pro Pro Xez j

200. Xaa Val Xan Pro Pro Xfc I

201. Xaa Val Xan Pro Pro Xff 202. Xaa Val Xan Pro Pro Xfi 1 203. Xaa Val Xan Pro Pro Xfs j 204 . xaa Val xan Pro Pro Kfz ) 205. Xaa val Xan Pro Pro Xgc | 206. Xaa Val xan Pro Pro Xgf j 207. xaa val Xan Pro Pro Xgm j 208. Xaa Val Xan Pro Pro Xgr j 209. Xaa Val Xan Pro Pro Xgn | 210. Xaa Val Xan Pro Pro Xgs j 211. xaa Val Xan Pro Pro Xgx j 212 . Xaa Val Xan Pro Pro Xha j

213 . Xaa Val Xan Pro Pro Xhk I

214, Xaa Val Xan Pro Xek \ 215, Xaa Val Xan Pro Xen j 216 . Xaa Val xan Pro Xer ] 217. Xaa Val Xart Pro Xep j 218. Xaa Val Xan Pro Xeg j \ \ 5 49 219, Xaa Vai Xan Pro Xer 22 0. Xaa Val Xan Pro Xet 221, Xaa Val Xan Pro Xeu 222. xaa Val Xan Pro Xes 22 3. Xaa Val Xan Pro Xfa 224. Xaa Val Xan Pro Xfd 225. Xaa val Xan Pro xfg 226. Xaa Val Xan Pro Xfl 227. Xaa Val Xan Pro Xfk 22 8 , Xaa Val Xan Pro Xfiti 229. Xaa Val Xan Pro Xfn 230. Xaa Val Xan Pro Xfo 231. Xaa Val Xan Pro Xfp 232. xaa Val Xan Pro Xfq; 233 . Xaa val Xan Pro Xfr 23 4. Xaa Val Xan Pro Xfy 23 5.. Xaa Val Xan Pro Xgb 236. Xaa Val Xan Pro Xge 23 7, Xaa Val Xan Pro Xgk 23 8. Xaa Val Xan Pro Xgn 239. Xaa Val Xan Pro Xhi 240. Xaa Val Xan Pro Xgo 241. Xaa Val Xan Pro Xgp 242. Xaa val Xan Pro Xgq j 243. Xaa Val Xan Pro Xgt 244. Xaa Val Xan Pro Xgw 245. Xaa val Xan Pro Xgz i 246. Xaa Val Xan Pro xhm 247. Xaa Xco Pro Pro Vai Phe NH3 j 2 48. Xaa xcp Pro Pro Val Phe NH2 j 24 9, Xaa Xcq Pro Pro Vai Phe NH2 ) 250 , Xaa Xcr Pro Pro Val Phe NH2 j 251. Xaa Xcs Pro Pro Val Phe j 252. Xaa Xct Pro Pro Val Phe NH2 j 253. Xaa Xcu pro Pro Val Phe NH2 j 254. Xaa Xcw Pro Pro Val Phe NH2 j 255. Xaa Xcv Pro Pro Val Phe NH2 | 256. Xaa Xcx Pro Pro Val Phe NH2 ) 257. Xaa xcy Pro Pro Val Phe NH2 258. Xaa Xda Pro Pro Val Phe MH2 259. Xaa Xdb Pro Pro Val Phe NH2 260. Xaa Xde Pro Pro Val Phe NH2 261. Xaa Xdd Pro Pro Val Phe NH2 262. Xaa Xdf pro Pro Val Phe NH2 50 263. Xaa Xdg Pro Pro Val Phe NH2 264. Xaa Xdh Pro Pro Val Phe NHj 265. Xaa Xco Pro Pro Val NH2 266. Xaa Xcp Pro Pro Val NH2 267. Xaa Xcg Pro Pro Val NH2 268. Xaa Xcr Pro Pro Val NH2 269. Xaa Xcs Pro Pro Val NH2 270. Xaa Xct Pro Pro val NH2 271. Xaa Xcu Pro Pro Val NHj 272. Xaa Xcw Pro Pro Val NH2 273. Xaa Xcv Pro Pro Vai NH? 274. Xaa Xcx Pro Pro Val MH2 275. Xaa Xcy Pro Pro Vai NH5· 276. Xaa Xcz Pro Pro Val NHj 277. Xaa Xda Pro Pro Val NH2 27 8. xaa Xdb Pro Pro Val NH2 279. Xaa Xdc Pro Pro Val 280. Xaa Xde Pro Pro Val NH2 2 81. Xaa Xdf Pro Pro Val NH2 282 . xaa Xdg Pro Pro Val NH2 283 , Xaa Xdh Pro Pro Val NH2 284. Xaa Xco pro Pro NH2 285. Xaa Xcp Pro Pro WH2 286. Xaa Xcg Pro Pro NH2 2B7.Xaa Xcr Pro Pro NH2 j 288. Xaa Xcs Pro Pro j 289. Xaa Xcc Pro Pro NH2 | 290. Xaa Xcu Pro Pro NH2 291. Xaa Xcw Pro Pro NP2 292. Xaa Xcv Pro Pro NH2 2 9 3. Xaa Xcx Pro Pro NH2 294. Xaa Xcy Pro Pro NH2 295. Xas Xcs Pro Pro NH2 296. Xaa Xda Pro Pro NH3 297. xaa Xdb Pro Pro NH2 298. Xaa Xdc Pro Pro NH2 299. Xaa Xdd Pro Pro NHj 300. Xaa Xdf Pro Pro NH2 301. Xaa Xdg Pro Pro KH2 3 02. Xaa Xdh Pro Pro NH2 3 03. Xds Xan Pro Pro Val Phe NH2 304. Xdc Xan Pro Pro Val Phe. NHj 305. xdu Xan Pro Pro Val Phe m2 306. Xdv Xan Pro Pro Val Phe NH2 1 5 5 ) 51 307. Xdw Xan Pro Pro Val Phe N% 308. Xdx Xan Pro Pro Val Phe 14% 309. Xdy Xan Pro Pro Val Phe NBj 310. Xdz Xan Pro pro Val Phe 14% 311. Xea Xan Pro Pro Val Phe N% 312. Xeb Xan Pro Pro Val Phe N% 313. Xec Xan Pro Pro val Phe N%· 314 . Xds Xan Pro Pro Val N% 315 . Xdt Xan Pro Pro Val 14% 315.xdu Xan Pro Pro Val n% 317 . Xdv Xan Pro Pro Val N% 318. Xdw Xan Pro Pro Val N% 319. Xdx Xan Pro Pro Val NH2 32 0. Xdy Xan Pro Pro Val 14¾ 321. Xdz Xan Pro Pro Val N% 322. Xea Xan Pro Pro Val N% 323. Xeb Xan Pro Pro Val N% 3 24. Xec xan Pro Pro Val 14¾ 325. Xds Xan Pro Pro N% 326. Xdt Xan Pro Pro 14% 327. Xdu Xan Pro Pro N% 328. Xdv Xan Pro Pro NH; 32 9 , Xdw Xan Pro Pro N% 330. Xdx Xan Pro Pro K% 331. Xdy Xan Pro Pro 14% ; 3 3 2 , Xdz Xan Pro Pro N% j 333. Xea xan Pro Pro N% j 334. Xeb Xan Pro Pro 14% j 33 5. Xec Xan pro Pro N% 33 6. Xds Val Pro Pro Val Phe H% 337. Xds Val Pro Pro 141% 338. Xdv Val Pro Pro N% 339. Xds Xan Pro Xfy 340. Xdv Xan Pro Xfy 341. Xaa Val Xhf Pro Pro Val Phe N% 34.2. Xaa Val Xhg Pro Pro Val Phe N% 343. Xaa Val xhh pro Pro Val Phe N% 344. Xaa Val Xhf Pro Pro Val N% 345. Xaa Val Xhg Pro Pro Val N% 345. Xaa Val Xhh Pro Pro Val N% 347. Xaa Val Xhf Pro Pro N% 348. Xaa Val Xhg Pro Pro N% 349. Xaa val xhh' Pro Pro N% !

J

$ 52 350. Xaa Vai Xhf Pro Xfy 351. Xaa Val Xhg Pro Xry 3:52. Xaa Val Xhh Pro Xfy 353. Xaa Val Xhf Pro Xgb 354. Xaa Val Xhg Pro Xgb 355. Xaa Val Xhh Pro Xgb 3 56. Xed Val Xan Pro Xfy 357, Xby Val Xan Pro Xfy 358, Xby Val Xan Pro Xhi 359, Xef Val Xan Pro Xfy 360, Xef Val Xan Pro Xhi 361, Xca Val Xan Pro Xfy 3 62. Xca Val Xan Pro Xhi 363, Xaa Val Xan Pro Xdp Phe NH2 3 64. Xaa val xan Pro Xdq Phe nh2 365. Xaa Val Xan Pro Xdr Phe NH2 3 66. Xaa Val Xan Pro Xdp NH2 367. Xaa Val Xan Pro Xdq NH2 368. Xaa Val Xan Pro Xdr NH2 369. Xaa Val Xan Pro Fro Xdi NH2 370. Xaa Val Xan Pro Pro Xcs NH2 371. Xaa Val Xan Pro Pro Xct NH2 j 372. Xaa Val xan Pro Pro Xca 14¾ 373. xaa Xcs Pro Pro Xdi 374. Xaa Xct Pro Pro Xdi HH2 37 5. Xaa Xcs Pro Xdp Phe NH2 j

376. Xaa Xct Pro Xdp Phe NH2 I

377. Xaa Xcs Pro Xdp N% \ 37 8 . Xaa Xct Pro Xdp NH2 j 379. Xaa Xcs Pro Xdq NHj j 380. Xaa Xct Pro Xdg NHj j 381. Xaa Xcs Pro Xdr NH2 j 382. Xaa Xct Pro Xdr NH2 \ 3 83 . Xaa Val Xan Pro Pro Xdi £4¾ | 384. Xaa Val Xan Pro Pro Xdk NH2 | 385. Xaa V.al Xan Pro Pro Xdi NH2 386. Xaa Val Xan Pro Pro Xdm nh2 3 87. Xaa Val Xan Pro Pro Xdn NH2 388. Xaa Val Xan Pro Pro Xcio ΝΗ2 389. Xca Val Xan Pro Pro Phe Phe 14¾ 3 90 . Xby Val Xan Pro Pro Phe Phe NH2 53 391. Xca Vai Xan Pro Pro Phe Phe NH2 392. Xef Val Xhf pro Pro tLeu Phe NH2 393. Xef Val Xhf Pro Pro tLeu Aic NH2 394. Xef Val Xhf Pro Pro tLeu Tic NH2 395. Xef Val Xan Pro Xfy 396. Xef Val Xan Pro Xbg 397. Xef Val Xan Pro Xbh 398. Xef Val Xan Pro Xgn 399. Xca Xct Pro Xfy 400. Xaa tLeu Xan Pro Pro Val Phe NH2 401. Xa a Leu Xan Pro Pro Val Phe NH2 402. Xaa He Xan Pro Pro Vai Phe NH2 403 . Xaa Val Xan Pro Pro tLeu Phe NHj 404 , Xaa Val Xan Pro Pro Leu Phe islH2 4 05. Xaa Val Xan Pro Pro lie· Phe NH2 406. Xaa Val Xan Pro Pro Val Dab NH2 407. Xaa Val Xan Pro Pro Val Ala NH2 408. Xaa Dab Xan Pro Pro Val Phe NH2 409. Xaa Dab Xan Pro Pro Val NH2 410. Xaa Dab Xan Pro Pro NH2 411. Xht Val Xan Pro Pro Val Phe ΝΗ2 412. Xhu Val Xan Pro Pro Val Phe NHa 413. Xht Val Xan Pro Pro Val NH2 413(a). xhu Val Xan Pro Pro Val NH2 ) 414. Xht Val Xan Pro Pro NH2 415. Xhu Val Xan Pro Pro NH2 i 416. Xaa Val Xhy Pro Pro Val Phe NHa 417. Xaa Val Xhz pro Pro Val Phe nh2

418 . Xaa Val Xhy Pro Pro Vai NH2 I

419, Xaa Val Xhz Pro Pro Val NHj 420, Xaa Val Xhy Pro Pro NH2 ) 421, Xaa Leu Xhz Pro Pro NB2 422 . Xaa Val Xhy Xfy i 423. Xa Val Xhz Xfy 424. Xhv Val Xan Pro Pro Val Phe NB2 425. Xhw Val Xan Pro Pro Val Phe NHa 42 6, Xhx Val Xan Pro Pro Val Phe NH2 427. Xhv Val Xan Pro Pro Val NHa 428. Xhw Val Xan Pro Pro Val NH2 ] 429. Xhx Val Xan pro Pro Val NH2 |

430 . Xhv Val Xan Pro Pro NH2 I

431. Xhw Val Xan Pro Pro NH2 I

432. Xhx Val Xan Pro Pro nh2 j t ; 433. Xaa Val xan Pro xia | 54 434. Xaa Vai Xan Pro Xib 435. Xaa Val Xan pro Xic 436. Xaa Val Xan Pro Xid 437. Xaa Val Xan Pro Xie 438. Xby Val Xan Pro Xia 439. Xby Val Xan Pro Xib 440. Xby Val .Xan Pro Xic 441. Xby Val Xan Pro Xid 442 ; Xby Val Xan Pro Xie 443.Xca Val Xan Pro Xia 44 4. Xea Val Xan Pro Xib 44 5. Xca Val Xan Pro Xic 446. xca Val Xan Pro xid 447. Xca Val Xan Pro Xie 448. Xed Val .Xan Pro Xia 449. Xed Val Xan Pro Xib 450. Xed Val Xan Pro Xic 4 51. Xed Val Xan Pro Xid 4 52. Xed val Xan Pro Xie j 453. Xby Leu Xan Pro Xia \ 454. Xby Leu Xan Pro Xib 4 55, Xby lie Xan Pro Xic 456. Xby lie Xan Pro Xid 457. Xby Leu Xan Pro Xie 458. Xca Leu Xan Pro Xia 459. Xca Val Xao Pro xib ; 460. Xca Val Xao Pro Xic \ 461. Xat Val Xhf Pro Xak Leu Phe NH2 | 4 62. Xat val Xhf Pro Xhr Leu Phe NHa j 4 63. Xed Val Xhf Pro Xak Leu Phe NH2 j 464. Xed Val Xhf Pro Xhr Leu Phe NH2 j 465. Xat Val Xhf Pro Xak Val NH2 j 4 66, Xat Val Xhf Pro Xhr Val NH2 j 4 67. Xed Val Xhf Pro Xak Val NH2 | 468. Xed Val Xhf Pro Xhr Val WH2 [ 469. Xat Val Xhf Pro Xak NH2 j 47 0 . Xat Val Xhf Pro Xhr NHS j 471. Xed Val xhf Pro xak NH2 j 472 , Xat Val Xhf Pro Xia j 473. Xat Val Xhf Pro Xib ] 474. Xed Val Xhf Pro Xic | 475. Xed Val Xhf Pro Xid j 476. Xat Val Xhf Pro Xie j 477 . xat Val Xhf Pro Xhs NH2 j 4 78. Xed Val Xhf Pro Xhs NH2 ] \ j $ i 55 47 9 . Xat Vai Xhf Pro Xak Xfz 480, Xat Val Xhf Pro Xhr Xfz 481, Xed.Val Xhf Pro Xak xfz 482, Xed Val Xhf Pro xhr Xfz 483, Xat Val Xhf Pro Xak Xbw 484, Xat Val Xhf Pro Xhr xbw 4 85. Xed Val Xhf Pro Xak Xbw 486. Xed Val Xhf Pro Xhr Xbw 487. Xat Val Xhf Pro Xak Xer 488. Xat Val Xhf Pro Xhr Xer 489. Xed Val Xhf Pro Xak Xer 490. Xed Val Xhf Pro Xhr Xer 491. Xat Val Xhf Pro Xak Xgi 492. Xat Val Xhf Pro Xhr Xgi 493 . Xed Val Xhf Pro Xak Xgi 494. Xed Val Xhf Pro Xhr Xgi 4 95. Xat Val Xhf Pro Xak Xif 496. Xat Val Xhf Pro Xhr Xif 497. Xed Val Xhf Pro Xak Xif 4 98. Xed Val Xhf Pro Xhr Xif 4 99. Xat Val Xhf pro Xak Xig 500. Xat Val Xhf Pro Xhr Xig 501. Xed Val Xhf pro Xak Xig 502. Xed Val Xhf Pro Xhr Xig 503 . Xaa Val Xan Pro Pro Xif 504 , xaa val Xan Pro xig i| 505. Xca Val Xan Pro Pro Xif 506. Xca Val Xan Pro Xig 507. Xby Val Xan Pro Pro Xif 508. Xby Val Xan Pro Xig j 509. Xed Val Xan Pro Pro Xif j 510. Xed Val Xan Pro Xig j 511. Xaa Leu Xan Pro Pro Xif ) 512. Xaa Leu xan Pro Xig 513. Xca Leu Xan Pro Pro Xif 514. Xca Leu Xan Pro Xig 515. Xby Leu Xan Pro Pro Xif 516. Xby Leu Xan Pro Xig 517. Xed Leu Xan Pro Pro Xif 518. Xed Leu Xan Pro,Xig 519. Xaa Lys Xan Pro Pro Vai Phe MH? 520. Xaa Lys Xan Pro Pro val NH2 521. Xaa Lys Xan Pro Pro NH2 522. Xaa Lys Xan Pro Xfy 523. Xaa Chg Xan Pro Pro val NH2 56 524. Xaa Chg Xan Pro Pro NH2 525. Xaa Chg Xan Pro Pro Val Phe NH2 526. Xaa Val Xii Pro Pro Val Phe NH2 527. Xaa Val Xii Pro Pro Val NH2 528. Xaa Val xii pro Pro 52 9, Xaa Val Xan Pro Pro val Lys NH2 530..Xaa Val Xan Pro Xik 531, Xaa Val Xan Pro Pro Xii NH2 532 . Xaa Val Xbu 533 . Xby Val Xbu 534. xca Val xbu 535, Xaa Val xbv 53 6, Xby Val Xbv 537. Xca Val Xbv 538. Xaa Val Xan Pro Pro Xab 539. xaa Val Xan Xab 540. Xim Val Xan Pro Pro Val Phe NHj 541. Xin Val Xan Pro Pro Val Phe NH2 542. Xio val Xan pro pro val Phe NH2 543. Xip val Xan Pro Pro Val Phe NH2 54 4, Xiq Val Xan Pro Pro Val Phe 14¾ 545, xkd Val Xan Pro Pro Val Phe NH2 54 6. Xim Val Xan Pro Pro Val NH2 547, Xin Val Xan Pro Pro Val NH2 548, Xio Val Xan Pro Pro Val MH2 \ 549, Xip Val Xan Pro Pro Val NH3 j 550, Xiq Val Xan Pro Pro Val NH2 551, Xfcd Val Xan Pro Pro Val NHj 552 , Xim Val Xan Pro Pro NH2 553. Xin Val Xan Pro Pro NH2 554 . Xio Val Xan Pro Pro NH2 555. Xip Val Xan Pro Pro NH2 556 , Xiq Val Xan Pro Pro NH2 557. Xkd Val Xan Pro Pro Ϊ4Η2 j 558 . Xaa Val Xan Pro Pro Vai Xir | 559. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xis j 560. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xit \ 561. Xaa Val Xan Pro Pro Val Xiu \ 562. Xaa val Xan Pro Pro Xiv \ \ \ i j 57 563. Xaa Vai Xan Pro Pro Xiw 564. Xaa Val Xan Pro Pro Xiy 565. Xaa Val Xan Pro Pro Xix 566. Xaa Val xan Pro XIz 567. Xaa Val Xan Pro Xka 568. Xaa Val Xan Pro Xkb 569. Xaa Val Xan Pro Xke 570. Xke Val Xan Pro Pro Val Phe Nth 571. Xkf Val Xan Pro Pro Val Phe NBj 572 . xkg Val Xan Pro Pro Val Phe NHj 573. Xkh Val Xan Pro Pro Val Phe m2 57 4. Xke Val Xan Pro Pro Val Nth 575. Xkf Val Xan Pro Pro Val Nth 576. Xkg Val Xan Pro Pro Val Nth 577. Xkh Val Xan Pro Pro Val NH2 578. Xke Val Xan Pro Pro Nth 579. Xkf Val Xan Pro Pro NH2 580. Xkg Val Xan Pro Pro Nth 581. xkh Val xan Pro Pro NHj 582 . Xaa Xcz Pro Pro Val Phe NH2 583 . Xeä Val xhf Pro Xhr NH2

Seuraajassa taulukossa on annettu esimerkkejä syntetisoitujen uusien yhdisteiden MS-karakterisointia var-5 ten. | i | 5 5 58

Esimerkki- Nopea atomipommi tus, MS-analyysi numero Molekyylipaino {mitattu) 3 798 16 810 5 24 811 28 811 30 825 33 881 34 845 10 37 649 56 550 101 853 115 845 139 579 15 234 641 403 811 544 869 | | 5 59

Taulukko I. Esi merkki en 1 ja 2 mukaisesti valmistettujen yhdisteiden sekvenssi tunnistus.

Yhdistenumero (s) Sekvenssin tunnusluku 38, 39, 52, 86-91, 93, 214- 2 246, 350-362, 366-368, 395-39Θ, 433-452, 459, 460, 469-478, 504, 506, 508, 510, 530, 566-569, 583 3, 9, 26-28, 30-33,- 35., 36, 3 95-117, 341-343, 416, 417, 424-426, 526, 540-545, 570-573 4-7 , 10, 11, 406 , 558-561 4

e ___ “ V

12 ______ 6 13, 392, 403 7 14 8 15, 16., 2 9 9 Π, 18__ 10___ 19, 20_ 11 21, 22, 247-264, 303-313, 582 12 23 , 402 _ .. 13 24 , 4 00_ 14 25 , 401_______„ 15_ 34 16 37, 118-138, 344-346 17_

40, 45, 189-213, 369-372, 383- 18 I

388, 503, 505, 507, 509, 531, 538, 562-565_ 41-43, 48, 49, 527 19_ 4 4__________ 2 0 46 , 50 , 51, .62-65 , 70 , 139- 21 159, 347-349, 414, 415, 420, 421, 430-432, 528, 552-557, 578-581_ 47 22_ | 53-61, 78, 422 , 423, 539_ 23 ] 66, 67, 94, 410, 524 24_ |

68, 69, 284-302, 325-335 25 I

j i ] 60

Yhdistenumero (s) Sekvenssin tunnusluku 73, 8 3-85 __26 92_ 27______ 160-188______________ ____ 2 B_ 265-283 , 314-324__29_ 336_________30 337, 33B _31_ 339, 340, 377-382, 399 _____32_ 363-365_ 33_ 373, 374_ .34 _ 37 5, 376 ___35_ 389-39 1 ' _______36_ 393, 3 94__37 4 04__38 4 05 _ __39_ 407 40 ~·".................~-------·--ΐιΓΓιΤΡίίΐΊιιιι ·||··Τ~·· · III r rr ~ i "i ........................... .......... i ..................... m 4 08___41 409 __42___ 411, 412, 418, 419, 427-429, 43 546-551, 574-577 413, 413(a), 453, 454, 457, 44 458, 512, 5.14, 516, 518_!______ 455, 456 _' _45__ 465-4 68 _ 4 6 4 61-4 64 _______ 4 7 j 479-502_[_ 48 | 515, 517 _ 49 | 513 50 |

...............,..w..........—»». M.--·....-— — I

519__51_ | 52 Q_______52 __ | 521 ___________-_ 53 j 522 _______________ 54 | 523 55 | 525_ " _ 56_ | 529 ___57_ | :j •5 i 61

Symboleilla Xaa,,. yhteenvedossa on seuraavat merkitykset:

Xaa; N , N-dimetyyl i vai i ini

o (O

Xab: — HN JL νπ -γ^-ΝΗ \ ch.cch3}2 s ^

Xac: — HNl' CON(Bzl)2

Xad; ™ ir/^C^CH(CH3)2]2

Xae- ~~ s?\

vAJJ K'X

JM _KKSJiN-'-''^S/ o |

Xag: Tetrahydroisokinoliini karboksyy .1ihappo

Xab: 1-aminaindaani-1--karboksyyli happo

Xai: tert-1 eusi ini tai 2-tert-butyyl iglysi ini 62

Xak: Homoprolϊini tai pipekolihappo

Xal: 1 - am i nopen t aan i - 1 -karboksyy1 i happo

Xam: N-metyyli-isoleusiini

Xan: N-metyy 1 i val i i ni

Xao: N-metyy 11 J eus i i n I

Xan; N-metyyl i va l i ini

Xao: N-metyylileusiini

Xap; J "Vj CO

N γπ^ΓΡ \ q V JL .CO-

Xaq: —HK γ o CH(CHJ)1

Xari N,N~dimetyyli-isoleusiini

Xas: N,N-dimetyylileusiini

Xat: N, N-dimetyyli-ter t-leusi in.

Xau: N,N-dimetyyli-3-tert-butyylialaniini

Xav N-äsetyyli-N-metyy 1ivaliini

Xaw: N-metyy1i-N-bentsyy1i vai i ini

Xax: N, N-dibutyyl 1 val i ini ΝΉ CH(CH3)2 u 1

Xaz: Hibr'NH CO-

Xba: N-bentsyylivaliini j 63 o f

Xbb: n N

Vn s-^

Xbc: ΝίΓ^^ 0

Xbd; "^y^N(Bz!)2 CH(CH3>2

Xbe; O

"ΗίΐΛαο- NHa i ?i N il

Xbf: ^ V^N(Bzl>2 I o n o /s

Xbg: (_J ΕΪΝ—<f J]

N I

Xbh: ^ y^-Nlf j :l ! 64 j o XU: ^Ύ) o

I ° I

Xbk:

N’i^N

I ° T

Xbi: H ii J

/ 'Ύ'^ΝΗ ii 1 Γ5

Xbra: U-J

j^X

0 j

Xbn: (/\An^ UN CH3

V

Xbo: N-metyyli-N-isopropyy1ivai i ini ch3 is, Ji I 9 j

Xbp: — N IJ J

X^NH

CH(CH;,)2 ]

:S

65

N^N

ch3 W, J

^ I ° r

Xb(5: —N JJ J

y^NH

CHiCHjJj

N

CH3 ^3 I o y M>r: ~~N. U j v^nh CH(CH3)z CH3 n X3 [ o r ^

Xbt: N A ^ CH(CH3)2 ch3 0 i

Xbu: —N A

I $ -J/ CH(CH3)2

CH3 o I

Xbv: — N A I

AA I

I n <y I

CH(CH3)2 I

o j

Xbw: — NH JJ ~ S j ! Npf^f > 1

ch(cb3)2 \Ly I

i \ \ \ 5 : ^ $ 66

I O N'N

K 1 Jl /"CF,

Xbx: / V^NH S

Xby: N, K-dietyyJ ival i ini

Xbz; Nv N-hi s (2 - f 1 uor ietyy H ) va ) i i n i

Xca: N, N-dlpropyy 1 i vai i in i

Xcb: N-syklopropyyl ival i ini

Xoc: ( I O

v—N JJ

Y^co- CH(CH3)z /^/CH3 Xcd: O 0

Vvw

GH- I

CH(CH3)2

Xce: <( Ί 0

Vnh y^co— CH(CH3)2 ch3 N./

Xcf: << Ί O

N^-N jj V^co— CH(CH3)2

Xcg: 0,1 V^co— CH(CH3)2 67 v u N.

Xch: 0

V*kA

y^-co— CH(CH3)2

Xci: O ° VN I! Y^CO— CH(CH3)z ch3

Xck: O

VNY^co_ CHi i 3 CH(CH3)2

Cl 0 ! N π

Y^CO- I

CH(CH3)a I

Xcm: 0 I

CH(CH3)2 I

s-\ I

Xcir I/O \

Y^CO- I

CH(CH3)2 I

/ \ co- :!

Xco: —Η3θΝ/Νγ/ 1

S C(CH3)s I

X XO- 1

Xcp: —HN ^ I

o j \ \ \ i :1 68 CH3 CH31 / \ co- v A N^y

Xcq: — N \ O /*^ CH3 ch3 ch3 CH3i_ / \ CO- r^A Ny

Xcr: —HN

0

CfyCH> \ „N CO—

Xcs: CH3_/CH3

Co-

Xct: — HN V // €% C(CH3)3 L CO—

Xcu- -hnT If

S-JJ

_ .Nv ^ co-

Xcv: __HN^f^ co-

Xcw: „HN

"^CHa ? $ 3 j 69

CH

v 3^Ns^C0-

Xcx: — HN V // 0_J7 XJ\^CO-

Xcy; -HN Y jT

CH3 C0-

Xcz: —HN^f^ Y

CH3/CH3

Xda; _HNT f I

S I

CH3/CH3 I

\^·· CO- I

Xdb: -HN γ / j S"~^CH3

ch3 I

/S^VCO"

Xdc: —HN Y j j

CO- I

— HN Λ / !

Xdd: S —( 1

NCHi I

CH3/CH3 I

**· ~hnVVC0~ I

o-γ !

ch3 I

j j j 70 ch3

Xdf: cO~ -HN If CH3 C(CH3)3 CO-

Xdg; -HN Λ / 0-4 ch3

Xdh: — HN V / o—( ch3 ch 4yVC0"

Xdi: —HN V // I

S \ G* CH3 .CH= L^H CO-

Xdk; —HN Y / I

° \ 1

CHw®3 I

X-Wco- !

Xdl: -HN V // ij 0-4 j vX 1 i j § 71 Ν ΓΠ—

Xdm: -ΗίΓΥ Ίί*

s-Λ \J

Xdn: ~ΗΝ^^ f Ο—(

O

C0_

Xdo: — HM \ // 0-¾ \j

Xdp: (^L«-N y-C°- i s-^

Xdq: / 3__JwCO- \ /f I S4 CH3

Xdr: V JL^Nn^CO- Ö ch3,^

gh3 1 .N CO- I

Xds: Ί]Γ ] ch3 s 1 j il 72 CH3vCHs CH3 \ N CO·

Xdt: Y

) s_i CHs CHy,™» GH, L- -CO-

Xdu: Vn^JT

Δ ch3 CHs 3^Nv-C°·

Xdv: H \ // CHj S \ CHs

ch3/CH5 I

L/Vo>

Xdw: A"N \ // CHs \ S-\ d CHs CH5.CH= l ΓΟ- 1

Xdx: /^N'Y y I

CH3 \ S I

f CHs j

' CHs I

C(CH3)3 j

CHs I

Xdy: Ή \ // |

CHs b I

j $ i 73 C(CH3)3 CHi

Xdz; :NX Y // v ς '1

ρττ J ~-“V

^ri3 ^CH“

Xea: \ CH, A~«NN^C°·

‘ N \ T

CH3 S-pCHs ch3 CH3/CH3 CHa L^Nv^CO-

Xeb: Y^ / CHi °”\ !

ch3 I

c(ch3)3 ' I

v CH, jv/VC0- I

Xec: >τ \ T I

Yrj O ‘"“X i ch3

Xed: N,N-dietyy1i-tert-leusiini

Xee: N,N~ditrif Iuorietyyli-tert~3eusi ini ] 'Xef; N,N-dipropyyl i-tert-1eusi ini j

Xeg: N-syklopropyy1i-tert-leusi ini j

0 ΓΛ I

Xeh: |

ch(ch3)2 I

] ! \ \ l s ] 74 ο ΓΛ

Xei: - | O \

Xek: N JL X^y u ,OCH3 --•ν^ΝίΓ-^γ j

Xel; GH(CH3)2 ^f^^OCHa I

OCH3 Π Λ ^OCH3

Xemi S^OCH,

χ J och3 I

N A OC% !

Xen: ^ 7^ΝΙ^|Τ ! V—^ t^si^0CH3 ;'j

OCH3 I

3^.^v.GOOEt 1

Xeo: .— HN Λ // I

S J 1 $ : 75 L>7v^COOEt Xep: —HN \ jj s“^ch3

Xeq: CH(CH3)2 COOEt

Xer: —-HN //

CH(CH3}2 I

Y O^vAJ I

Xes: —-HN \ // j

$-Jj I

CH(CH3)2 I

COOEt \

Xet: —HN \ // \ S"~^CH3 j ch(ch3}2 j L /Nv .COOEt 1

Xeu: —HN ^ \ j ] $ j 76 / mm». \

- hnJ1— n W

Xev: ^ ch3

o=J

o V \

Xew; —HN J-L , ^ -γ^ΝΗ CH(CH3)2

ch3 I

0=d O V \

Xex: HX^ANlik/ Ό j CHa i

?, il N I

Xey; -HN | ch3 j u ι | ] j i ] § | .1 | 77 CHj

J

n JpN

Xez: -HN XNj^n' I Vh CH(CH3)2 3 ch3 1 0

XftK /ΝΎ^·ΚΗ f{ \_/ CHj CHa Λ ° IpN !

Xfb: -IWA^f-s' J

u CHa u JL >’

Xfc: -HN X^s' 1 CH(CHa)a ^ | I o pH ! ip JL Ας' i

Xfd: / V^NH s j 0 N'°\ !

Xte -ΗΝγΝΡ^ I

3 3 78

N' C

Xff; S J? j> CH(CH3)j kj .. o 1 u i>

Xfg; /NV^'NH^' O N'V^

Xfh: -HNAN,fs/

m-N

O ^_CP3

Xfi: 3 |

ch(ch3}2 I

n-n ! I 9 II S>—CH* |

Xfk: | m-N /T~~\

Xfl: I 0 n _ff \ M il S***, Q \ ™— / li s n^^*nh s

V-J ci I

i o ν·Λ_/ I

n Ji^ jL0' 7 !

Xfm: / V^NH ° | $ $ 79

i n Μη· K U

\_/ ch3 | o y'^'^

n. JL J

Xfo: / V^NH

Xfp: NTf1 I o

Xfq: ^

Xfr: 1 ^N | o ]

Xfs; — NH JI X 1 V^NH y j| | CH(GH3)2 | $ j j 80

O V

Xft: -NH li JL vjTv.

V^NH ή o y

Xfu; —--NH il ^ "γ^ΝΗ l^^il ° n i

Xfv: —HN ! \\ j ' -¾¾^ i u ! i | | | ] ] § | i 81 fl I 0

Xfy: ζ N γ^-

Xf2· ?,

Mz- — nH J1 Ύ'^-.ΝΗ YY' j| CH(CH3)2

° I

Xga: -BN 1ΜΛ0 I

I 0 I

Xgb: ^ j \

o \\ I

Xgc: -HN ^κπΤ\/Υν. 1 Y NH Y η T ]

ch(ch3)2 \^cr I

] i 82 ° Cl

Xgd: -HN ΑΝ(Γγ^ Y

Xge:

| O

'y^ NH^]T^]^ jf^|

Xgf: o rf^j | CH(CH3)2 !

Xgg: Q

ΝΉ Ji Λ jT^i 0 1

Xgh: I

^J-I I

o I

Xgi: I

j

• I

\ \ 5 5 3 $ 5 j $

S

83 X6k: I o \J O-N~

XgP o o-n

Xgm: °

*— ΗΝΛν NHS'‘s'^^— CH3 I

CH(CH3)2 °~h j

Xgn: C Jk^NwcooEt I

S S-^

Xgo: O-^-v-COOEt N \ jj i I s^ch3 j x§p: j N X jj j

I ° I

Xgq: Q^NQ I

] j i :5 84

O

Xgn

CHCCH^T

O

Xgs: ~HN AnA

Γϋ i o

n. il L JJ

Xgi: / j 0 |

Xgu: ~hnJ1^n^y j CH(CH3)2~^ 0 1

Xgv; ] i

' J

] ] i § § ] : | 85

Xgw: I 0 W OyXj

As

Xgx: 0 —-NH J1 ^

MQjQ

Xgy: 1 o — NH JJ Λ qJ o^q i

Xgz: !

GH(CH3)i I

. ™νή-^^ν-χ Jf"\ j

Xha; I

\ \ ! § j j 86

O

Xhb: —·ΗΗ li //%

O

Xhc: -HnJ^/^λ f \\ ό y 0 ί

Xbd: »HN Ih/N f \

i^N?T

0 j

Xhe: Γ Λ 1

i^N?y I

. j |

Xhf: N-metyy] i-2-tert-butyyl iglysi ini j

Xhg: N-metyyl i-3-tert-butyyl i.aiani in i |

Xhh: N-etyyiivallini | j | 87

Xhi: I O

BO

0

Xhk: -HN i^.N-CH3 I OCH3 CH(CH3)2 XM: -HN An-0CH3 CH3 j

j ° I

Xhm: OCHs

Xhn: N-ureyyl I val i ini ij

Xho; N, N-dimetyy1ifenyylialaniini j

Xhp: N,N-dietyylifenyylialani ini j

Xhq; NyN-dipropyylifenyylialani ini j

Xhr· Hydroksiprol i ini | \ l

Xhs; 3-tienyyl ialani ini j

Xht: N,'N-dimetyyI i-3-sykloheksyyl ialani ini ]

Xhu. N,N-dietyyli-3-sykloheksyyiialani ini | 5

J

Ί j 88

Xhv: N-metyyli-N-isopropyy1i-tert-leusiIni

Xhw: N- metyyli-N-i sopropyy1i1eusiini

Xhx: N-metyyli-N-isopropyy!i- iso1eusiiηi

Xhy; N-metyy1i-3-sykloheksyyii alani ini

Xhz: N-metyy 1 ifenyyl ialani ini

Xia: i 9 y s HO/

N-N I

N S 1 V'CHs !

/ yarn's I

HO/

Xic: 10 I

H0/ j ] j j i j

J

j 89

Xid: I 0

N U ^ S

S V^nhV \ HO^ N S ^ JL #

HO

vf ° Π^Λ Äf: -ΝΉ U Λ/ ; CH(CH3).2 Ν-'Λ Ο Π ^

Xi'g: —NH 11 V^NH S s

u I

Xih: 2~sykloheksyyl iglysi ini I

Xii: N-metyy 1 i - ,2-sykloheksyy liglysiini j

HaN j i o -f^'0 ! N u J* 1

Xik; S \ \ \ ] 90

Xil: CO- N-4 jf\ - NE^jf y—\___y G(CB3}3 xina: N-metyyliaminosulfonyyl ival iini

Xin: N-1er t-butyyliaminosulfonyylivali ini 5 Xio: N-morfolinosulfonyylivaliini

Xip: N-bentsyYlioksikarbonyyliyaliini

Xi q: N-teri-butyylioksikarbonyvlivaliini

Xir: Fenyylialaniinimetyyliesteri

Xi s: Fenyylialani inietyyli esteri 10 Xit: Fenyylialaniinibentsyyliesteri

Xiu: F enyyl ialani ini-tert-butyyl ies teri | xiv: Väli iniberit syyl-i esteri j

Xiw: Valiinimetyyliesteri |

Xix: Valiinietyyliesteri ! 15 Xiy: Väliini-tert-butyyliesteri ]

Xiz; Proliihibentsyyliesteri \

Xka : Pböliinimetyylies teri

Xkb: Proliinietyyliesteri XKc: Proliini-tert-butyyliesteri ;j 20 Xkd: N-laktyylivaliini f

Xke: N-metyylisulfonyylivaliini ij

Xkf: N^metyyli-N-metyylisUlfonyyliväliini ;j

Xkg: N-tosyylivaliini :|

Xkh: N~ftälyylivaliini 1 Ί

25 I

Päätteellä -NH2 on se merkitys, että C-päätteen \ aminohappo on amidimuodossaan. ] Käsillä olevan keksinnön mukaisista yhdisteistä j voidaan analysoida niiden syövän vastainen aktiivisuus j 30. tavanomaisilla menetelmillä kuten esimerkiksi alla kuva- j tuilla menetelmillä. ] | 91 A. In vitro -menetelmä

Sytotoksisuus voidaan mitata käyttämällä tavallista menetelmää., jota käytetään kiinnittyvien solulin-jojen ollessa kyseessä, kuten mikroviljelmätetrasolium-5 määritystä (MTT) , Tämän määrityksen yksityiskohdat on julkaistu (H. C. Alley et ai,, Cancer Research 48 (1988) 589 - 601}. Mikrotiitterimaljaviljelmiä valmistettaessa käytetään kasvainsolujen eksponentiaalisesti kasvavia viljelmiä, kuten ΗΤ-29-lynkkysuolikarsinoomaa tai LX-1-10 keuhkokasvainta. Soluja ympätään 5 000 - 20 000 solua kaivoa kohden 96~kaivoisiXla maljoilla (150 μ! väliainetta) ja niitä kasvatetaan yön yli 37 °C:ssa. Testiyhdisteet lisätään 10-kertaisina laimennoksina vaihdellen välillä 10"4 - 10'10M. Sitten soluja inkuboidaan 48 tuntia. Elävien | 15 solujen määrän määrittämiseksi lisätään MTT-väriä .(5.0 pl | 3 - (4, 5-dimetyylitiatso:l-2-yyli} -2,5-di f enyyli tetrat solium- | bromidin 3 mg/ml liuosta suolaliuoksessa), Tätä seosta f inkuboidaan 37 °C:n lämpötilassa 5 tuntia ja sitten | jokaiseen kaivoon lisätään 50 μΐ 25-%:ista SDS:a (pH 2).

20 Yön yli jatkuvan inkuboinnin jälkeen luetaan jokaisen

kaivon absorbanssi (550 nm) käyttäen ELISA-lukijaa, I

Replikoiduista kaivoista saaduista tiedoista lasketaan I

arvot keskiarvolle ± keskihajonnalle käyttäen % T/C kaavaa | (% eläviä soluja käsitelty/kontrolll). j 25 '1

käsiteltyjen solujen OD I

% T/C = ------x 100 |

kontrollisolujen OD I

30 Testiyhdisteen konsentraatio, joka estää T/c-suh- | teen mukaisesti 50 % kasvua, määrättiin arvoksi IC5q, \ B. In vivo -menetelmä | Käsillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voi- j daan lisäksi testata missä tahansa prekliinisessä määri-35 tyksessä in vivo -aktiivisuuden suhteen, joka osoittaa kliinistä käyttökelpoisuutta. Tällaiset määritykset heh- \ j j 92 dään paljailla hiirillä, joihin on siirretty kasvainkudosta, edullisesti ihmislähteestä, (''vierassiirrännäinen*') , kuten tällä alalla hyvin tunnetaan. Testiyhdisteistä evaluoidaan niiden kasvaimen vastainen teho, kun niitä on 5 annettu vierasta siirrännäistä kantaville hiirille.

Spesifisemmin ihmiskasvaimia, joita on kasvatettu atymisissä (kateenkorva puuttuu) paljaissa hiirissä, siirretään uusiin vastaanottajaeläimiin käyttäen kasvainfrag-mänttejä, jotka ovat kooltaan noin 50 mg. Siirtopäivä merit) kitään päivällä Ö. Kuusi - kymmenen päivää myöhemmin hiiriä käsitellään testiyhdisteiliä, joita annetaan intravenoosi-sella tai intraperitoneaalisella injektiolla, ja jokaisessa anno s ryhmä s s ä on 5 - 10 hiirtä. Yhdisteitä annettiin päivittäin 5, 10 tai 15 päivän ajan annoksilla .10 - 1ÖÖ mg f

15 painokiloa kohden. Kasvainten halkaisijat ja kehon painot I

mitattiin kaksi kertaa viikossa. Kasvaintilavuudet laske- | taan käyttäen mitattuja halkaisijoita Vernier-mitoilla ja \ kaavalla j 20 Kasvaimen paino (mg) = (pituus x leveys2):2

Kasvaimen painojen keskiarvot lasketaan jokaiselle hoitoryhmälle ja D/C-arvot määritetään jokaiselle ryhmälle | suhteessa käsittelemättömiin kontrollikasvaimiin. | 25 Käsillä olevan keksinnön mukaiset uudet yhdisteet j osoittävät hyvää in vitro -aktiivisuutta edellä mainituis- j sa määrityssysteemeissä seka kasvainten vastaista aktiivi- j suutta edellä maini tus sa in vivo -systeemissä. ;j j $ 93 S elevens silistaus {!:). Yleinen informaatio (1) Hakija: (A) BASF Aktiengesellschaft 5 (B) Katuosoite: Carl-Bosch-Strasse 38 (C) Kaupunki: Ludwigshafen {E) Haa: Saksan liittotasavalta (F) Postinumero: W~ δ 7 0 0 (G) Puhe 1 innuxnero: 0621/60 4852 6 10 (H) Telefaksinumero: 0621/6043123 {I) Teleksinuinero: 1762175170 (ii) Keksinnön otsikko: Uudet peptidit, niiden valmistus ja käyttö (iii) Sekvenssien määrä: 57

15 {ivj Tietokoneen luettavissa oleva muoto: I

(A) Välinetyyppi: disketti, 3,5 tuumaa, 2 DD

(B) Tietokone: IBM ÄT-yhteensopiva, 80286 prosesso- |

ri I

\ (C) Operoiva systeemi: MS-DOS versio 5,0 | 20 (D) Ohjelmisto: WordPerfect versio 5.1 j (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 1: i {!) Sekvenssin tunnusmerkit: {A) Pituus: 9 aminohappoa 25 (B) Tyyppi: aminohappo j (D) Topologia: lineaarinen j {ii) Molekyylityyppi: peptidi | (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 1:

Xaa Vai Vai Xaa Vai Pro Pro Vai Phe ! 30 1 5 j {2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 2: (i) Sekvenssin tunnusmerkit: j (A) Pituus: 5 aminohappoa ] 35 {B} Tyyppi: aminohappo j ! 94 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi {xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 2: xaa Vai Xaa Pro Xaa 5 1 5 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 3: (1) Sekvens s in tunnusmerki t: (A) Pituus: ? aminohappoa 10 (B) Tyyppi: aminohappo (D) Topologia: lineaarinen.

(ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus*. Sekvenssin tunnusnumero: 3:

Xaa Vai Xaa Pro Pro Vai Phe 15 1 5 [ ΐ

(2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 4*. I

(1) Sekvenssin tunnusmerkit: j (A) Pituus: 7 aminohappoa \ 20 (B) Tyyppi: aminohappo (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyyli tyyppi-; peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus:; Sekvenssin tunnusnumero:: 4: f

Xaa Vai Xaa Pro Pro Vai Xaa | 25 1 5 :j | \\ (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero oh 5: |

(i) Sekvenssin tunnusmerkit: J

.\ (A) Pituus: 7 aminohappoa | 30 (B) Tyyppi: aminohappo j (D) Topologia; lineaarinen | (ii) Molekyylityyppi: peptidi j (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 5: 1

Xaa Vai Xaa Pro Pro Vai Kis 35 1 5 95 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 6: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 7 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 5 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi} Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 6:

Xaa Xaa Xaa Pro Pro Vai Trp 1 5 10 (2) Tiedot s elevens s is ta, jonka tunnusnumero on 7: {i) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 7 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo j 15 (DJ Topologia: lineaarinen |

(ii): Molekyyli tyyppi : peptidi I

(xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero* 7: |

Xaa Vai Xaa Pro Pro Xaa Pne 1 5 20 j (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 8: Ϊ (1) Sekvenssin tunnusmerkit: ;j (A) Pituus: 7 aminohappoa 1 d (B) Tyyppi: aminohappo | 25 (D) Topologia: lineaarinen j (ii) Molekyylityyppi: peptidi i (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 8:

Xaa Vai Xaa Pro Pro Ile Phe 1 5 30 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 9: (i) Sekvenssin tunnusmerkit* (A) Pituus: 7 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo j 35 (D) Topologia: lineaarinen j 3 ] | ) 96 (i i) Mol ekyyli tyyppi: pep t i di (:xi) Sekvenssin kuvaus : Sekvenssin tunnusnumero : 9;

Xaa Vai Xaa Pro Xaa Vai Phe 1 5 5 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 10:

Ci) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus- 7 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 10 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Mo1ekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 10: Ί

Xaa Vai Xaa Xaa Pro Vai Phe |

1 5 I

15 | (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 11: j (i) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus : 7 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 20 (Dj Topologia: lineaarinen {ii) Molekyylityyppi: peptidi | (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 11: |

Xaa Vai xaa Pro Pro Vai Phe j 1 5 j 25 j ¢:2.) Tiedot; sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 1:2:, :| (Γ) Sekvenssin tunnusmerkit: j (A) Pituus: 6 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo j

30 (D) Topologia: lineaarinen I

(li) Molekyylityyppi: peptidi j (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 12: j

Xaa Xaa Pro Pro Vai Phe j

1 5 I

j f 97 {2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 13: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 7 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 5 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 13·

Xaa Ile Xaa Pro Pro Vai Phe 1 5 10 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 14: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: {A) Pituus: 7 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo ) 15 (D) Topologia: lineaarinen | (ii) Molekyylityyppi: peptidi j (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 14; · l

Xaa Xaä Xaa Pro Pro Vai Phe 1 5 20 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 15: (1) Sekvenssin tunnusmerkit:

(A) Pituus: 7 aminohappoa I

(B) Tyyppi: aminohappo j 25 (D) Topologia: lineaarinen ;j (ii) Mo 1 ekyy 1 ityyppi : peptidi ;| (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 15: ]

Xaa Leu Xaa Pro Pro Vai Phe j 1 5 30 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 16: (i) Sekvenssin tunnusmerkit:

S

(A) Pituus: 7 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo | 35 (D) Topologia: lineaarinen | \ j 98 (ii) Moiekyy 1ityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tuimusnumerö: 16:

Xaa Vai Xaa Pro Pro Phe Phe 1 5 5 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 17; (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 10 (D) Topologia: lineaarinen (li) Molekyylityyppi:: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 17:

Xaa. Vai Xaa Pro Pro Vai | 1 5 | 15 | (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 18: i (1) Sekvenssin, tunnusmerkit: (A) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo

2:0 (D) Topologia: lineaarinen I

(ii) Molekyylityyppi: peptidi | (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 18: |

Xaa Vai Xaa Pro Pro Xaa f 1 5 | 25 j (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 19: (i) Sekvenssin tunnusmerkit:: j (A) Pituus; 6 aminohappoa | (B) Tyyppi: aminohappo 30 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 19:

Xaa Vai Xaa Pro Pro Vai 1 5

J

99 (2:) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 20: (1) Sekvenssin tunnusmerkit; (A) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 5 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi} Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 20:

Xaa Xaa Xaa Pro Pro Vai 1 5 io | (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 21: ] (1) Sekvenssin tunnusmerkit: ] (A) Pituus: G aminohappoa (H) Tyyppi: aminohappo 15 (D). Topologia: lineaarinen (li) Mo lekyy li tyyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 21:

Xaa Vai Xaa Xaa Pro Vai 1 5 20 ;| (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 22: \ (1) Sekvenssin tunnusmerkit: \ (A) Pituus: 6 aminohappoa | (B) Tyyppi: aminohappo j 25 (D) Topologia: lineaarinen ;j (ii} Molekyyli tyyppi: peptidi ;j (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 22:

Xaa Vai Xaa Pro Xaa Vai 1 5 30 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 23: (i) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 4 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo ]

35 (D) Topologia: lineaarinen I

i ] 100 (i i} Ho 1 ekyyl i tyypp i: pep t i d i (xi) Sekvenssin kuvaus.: Sekvenssin tunnusnumero: 23:

XcLci Vial Xaa. Xaa 1 5 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 24: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 5 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 10 {Dj Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin: kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: '2:4;

Xaa Xaa Xaa Pro Prq 1 5: i 15 j (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 25: j (1) Sekvenssin tunnusmerkit: j (A) Pituus: 4 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo f 20 (Dj Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityi^pi: peptidi j (xi) Sekvenssin kuvaus; Sekvenssin tunnusnumero: 25; xaa Xaa Pro Pro 1 j 25 1 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 26: § (i) Sekvenssin tunnusmerkit: j (A) Pituus: 4 aminohappoa \ ; j (B) Tyyppi: aminohappo ij 30 (D) Topologia: lineaarinen { (ii) Molekyylityyppi: peptidi j (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 26: j

Xaa Vai Xaa Pro j 1 1 j * il i 101 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 27: ti) Sekvenssin tunnusmerkit:: (A) Pituus: 5 aminohappoa (S) Tyyppi: aminohappo 5 (p) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus : Sekvenssin tunnusnumero: 27:

Xaa Xaa Xaa Pro Xaa 1 5 10 {2) Tiedot sekvenssistä,, jonka tunnusnumero on 28: (1) Sekvenssin tunnusmerkit :: (A) Pituus: 7 aminohappoa (B) Tyyppi* aminohappo 15 (D) Topologia: lineaarinen j (ii) Molekyylityyppi; peptidi \ (Xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 28;: \

Xaa Vai Xaa Pro Pro Vai Xaa J

1 5 j 20 | (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 29: (i) Sekvenssin tunnusmerkit: 1 (A) Pituus: 5 aminohappoa | {B) Tyyppi: aminohappo 1 25 (D) Topologia: lineaarinen | (ii) Molekyylityyppi:: peptidi | (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 29: j

Xaa Xaa Pro Pro Vai j 1 5 | 30 | (2} Tiedot sekvenssistä,: jonka tunnusnumero on 30:: j (i) Sekvenssin tunnusmerkit: j (A) Pituus: 6 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo | 35 (D) Topologia: lineaarinen \ \ \ \ \ | $ 102 (il) Molekyyl i tyypp i: pep t idi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 30:

Xaa Vai Pro Pro Vai Phe 1 .5 5 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 31: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 4 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo ID (D) Topologia: lineaarinen (ii) Mol ekyyl i tyyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 31*

Xaa Vai Pro Pro | 1 | 15 | (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 32: j

(1) Sekvenssin tunnusmerkit: I

(A) Pituus: 4 aminohappoa \ (B) Tyyppi: aminohappo \ 20 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Mö1ekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus; Sekvenssin tunnusnumero: 32:

Xaa Xaa Pro Xaa 1 ! 25 j (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 33; i:! (i) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus.: 6 aminohappoa (B) Tyyppi; aminohappo | 30 (D) Topologia: lineaarinen j

(ii) Mo1ekyylityyppi; peptidi I

(xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 33: j

Xaa Vai Xaa Pro Xaa Phe

1 5 I

IQ 3 (2) Tiedot: sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 34: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 5 aminohappoa (E) Tyyppi: aminohappo 5 (D) Topologia: lineaarinen

Cii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 34:

Xaa xaa Pro: Pro Xaa 1 5 10 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 35: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus:; 5 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 15 (D) Topologia: lineaarinen (li) Molekyylityyppi: peptidi | (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 35: ]

Xaa Xaa Pro Xaa Phe 1 1 5 | 20 | (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 36: j (1) Sekvenssin tunnusmerkit: \ (A) Pituus: 7 aminohappoa \ (B) Tyyppi: aminohappo j 25 (D) Topologia: lineaarinen f (ii) Molekyyli-tyyppi: peptidi | (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin timnusnumero: 36: j

Xaa Vai Xaa Pro Pro Phe Phe: j

1 5 I

3 0 :| (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 37: | (i) Sekvenssin tunnusmerkit: ] :| (A) Pituus: 7 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo :| 35 (D) Topologia: lineaarinen j 104

Ui) Molekyylityyppi: peptidi (xl) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 37:

Xaa Vai Xaa Pro Pro Xaa Xaa 1 5 5 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 38: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 7 aminohappoa ΐB) Tyyppi: aminohappo 10 (Ρ) Topologia: lineaarinen (i i} Molekyy 1i tyyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus;: Sekvenssin tunnusnumero: 38:

Xaa Vai Xaa Pro Pro Leu Phe 1 5 15 (2} Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 39: ti) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 7 aminohappoa | \ (B) Tyyppi: aminohappo | | 20 (D) Topologia: lineaarinen j (ii) Mö1ekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 39: |

Xaa Vai Xaa Pro Pro Ile Phe i 1 5 j .2 5 ] (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 40: | (i) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 7 aminohappoa i (B) Tyyppi: aminohappo | 30 (D) Topologia: lineaarinen \ (ii) Mo1ekyylityyppi: peptidi ; (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tuhnusniimero: 40:

Xaa Vai Xaa Pro Pro Vai Ala 1 5 105 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 41: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 7 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 5 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 41:

Xaa Xaa Xaa Pro Pro Vai Phe i 5 10 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 42; (1) Sekvenssin tunnusmerkit: i (A) Pituus: 6 aminohappoa \ (B) Tyyppi: aminohappo j 15 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 42:

Xaa Xaa Xaa Pro Pro Vai 1 5 20 j (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 43: j (1) Sekvenssin tunnusmerkit: j (A) pituus; 7 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo j 25 (D) Topologia: lineaarinen j

(ii) Molekyylityyppi: peptidi I

: | (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 43: 1

Xaa Vai Xaa Pro Pro Vai Phe | 1 5 | 30 |

(2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 44: I

(i) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo j 35 (D) Topologia: lineaarinen | 106 (ii) Molekyylityyppi: peptidi (x i) S ekvens sin kuvau s: S ekvens sin t unnu snumero: 4 4:

Xaa Val Xaa Pro Pro Val 1 5 5 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 45: .(1} Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 5 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo IQ (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 45:

Xaa Ile Xaa Pro Xaa 1. 5 15 | (2} Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 46: j {i) Sekvenssin tunnusmerkit: | (A) Pituus: 5 aminohappoa | ίB) Tyyppi: aminohappo 20 (D) Topologia: lineaarinen lii} MOlekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 46: |

Xaa Vai Xaa Pro Xaa Vai | 1 5 '1 25 |) (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 47: ij (i) Sekvenssin tunnusmerkit: j {A) Pituus: 7 aminohappoa j (B) Tyyppi: aminohappo j 30 (D) Topologia: lineaarinen j {ii) Molekyylityyppi: peptidi \ (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 47: \

Xaa Vai Xaa Pro Xaa Leu Phe j

1 5 I

107 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 48: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo S (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xl) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 48:

Xaa Vai Xaa Pro Xaa Xaa 1 5 10 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 49: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 15 (D) Topologia: lineaarinen (i i) Molekyyli tyyppi: pept idi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 49:

Xaa Leu Xaa Pro Pro Xaa 1 5 2:0 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 50: (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: e^inphappo 25 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi; peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 50:

Xaa Leu Xaa Pro Pro Xaa 1 5 3 0 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 51: ti) Sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 7 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 35 (D) Topologia: lineaarinen ! 108 (ii) Molekyylityyppi: peptidi (;xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 51;

Xaa Lys Xaa Pro Pro Vai Phe 1 5 5 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 52: (1) Sekvenssin tunnusmerkit :: (K) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 10 (Dj Topologia:: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xl) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 52:

Xaa Lys Xaa: Pro Pro Vai 1 5 | 15 | i (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 53: j (1) Sekvenssin tunnusmerkit: (Ά; Pituus: 5 aminohappoa j (B) Tyyppi1 aminohappo j 20 (D) Topologia: lineaarinen j (ii) Molekyylityyppi: peptidi j (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 53: j

Xaa Lys Xaa Pro Pro Ϊ 1 5 | 25 1 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 54: j (i) Sekvenssin tunnusmerkit: | (A) Pituus: 5 aminohappoa | (B) Tyyppi: aminohappo j 30 (D) Topologia: lineaarinen 1

(ii) Molekyylityyppi: peptidi I

(xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero; 54: 1

Xaa Lys Xaa Pro Xaa i 1 5 109 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 55: (1) sekvenssin tunnusmerkit: (A) Pituus: 6 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 5 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyylityyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 55:

Xaa Xaa Xaa Pro Pro Vai 1 5 10 (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 56: (1) Sekvenssin tunnusmerkit; (A) Pituus: 7 aminohappoa (B) Tyyppi: aminohappo 15 (D) Topologia: lineaarinen (ii) Molekyyli tyyppi: peptidi (xi) Sekvenssin kuvaus: Sekvenssin tunnusnumero: 56: -\

Xaa Xaa Xaa Pro Pro Vai Phe J

1 5 I

20 | (2) Tiedot sekvenssistä, jonka tunnusnumero on 57: j (i) Sekvenssin tunnusmerkit: j (A) Pituus: 7 aminohappoa | (E) Tyyppi: aminohappo \ 25 (D) Topologia::: lineaarinen \ (ii) Molekyyli tyyppi:: peptidi | (xi) Sekvenssin kuvaus ; Sekvenssin tunnusnumero: 57:

Xaa Vai Xaa Pro Pro Vai Lys

1 5—. I

i i t | \ \ \ 1 ^ :

Claims

1. Menetelmä syövänvastäisten kaavan (I) mukaisten peptidien ja niiden fysiologisesti siedettävien happoj en 5 kanssa muodostamien suolojen valmistamiseksi, R1 X ' I N - CH - GO - A - B - D - (E)tI - (F}v - {G)v, - K (I) 10 / R2 jossa R1 On älkyyli, svkloalkyyli, alkyylisulfonyyli, 15 fluorialkyyli tai MR3R4, jossa R3 ja R4 ypivat kumpikin olla j joko vety tai alkyyli; j R2 on vety, alkyyli, fluorialkyyli, sykloalkyyli; j tai j R1-N-R2 yhdessä voivat olla I - I \_J tal L J I 20. j A on valyyli-, isoleusyyli-, leusyyli-, allo-iso- | leusyyli-, 3-tert-butyylialänyyli-, 2-tert-butyyliglysyy- j li-., 3-sykloheksyylialanyyli-, ornityyli-, lysyyli-, 2- ij 25 etyyliglysyyli-, 2-sykloheksyyliglysyyli-, norleusyyli- tai i;| norvalyyli jäännös; | 5 3 on N~alkyylivalyyli-, -norvalyyli-, -leusyyli-, -isoleusyyli-, -2-tert-butyyligIysyyli-, -3~tert-butyyli- j alanyyli-, -3-sykloheksyylialanyyli-, -fenyylialanyyli-, \ 30 tai -:2-;sykloheksyyliglysyylijäännQs; j D ja E on toisistaan riippumatta valittu ryhmästä j prolyyli, homoprolyyli, hydroksiprolyyli ja tiatsolidinyy- ] ( ' 1 1l-4-karbonyy1l; | i | in F ja G on toisistaan riippumatta valittu ryhmästä, prolyyli-, homoprolyyli-, hydroksiprolyyli-, tiatsolidini-nyyli-4-karbonyyli-, l~aminopentyyli~l-karbonyyli-, valyy-li-, 2-tert~butyyliglysyyli-, isoleusyyli-, leusyyli-, 3-5 sykloheksyylialanyyli", fenyylialanyyli-, N-metyylifenyylialanyyli.- , tetrahydroisokinolyyli-2-karbonyyli-, 3-tiatso- lyylialanyyli-, 3-tienyyliälanyyli-, histidyyli-, 1-amino-indyyli-l-karbonyyli-, 3~pyridyylialanyyli-, 3-tert.-butyy-lialänyyli-, 2-sykloheksyyliglysyyli-, norvalyyli-, norleu-10 syyli- ja 3-naftyylialanyylijäännökset; X on alkyyli, sykloalkyyli, -CHv-sykloheksyyli tai äryylia1kyy1i /tai E ja F ylidessä: voivat olla ! c° I

15 U- ! j ossa | V on happi tai rikki ja U on vety, Ci-4~alkyyli, fe-nyyli tai sykloalkyyli/: | 20 u, v ja w ovat toisistaan riippumatta 0 tai 1; ja | K on hydroksi-, alkoksi-, fenoksi-, bentsyylioksi- f tai substituoitu tai substituoimaton amino-osa, ij tunnettu siitä, että j kaavan (I) mukaiset peptidit valmistetaan peptidikexniassa | 25 tunnettujen menetelmien mukaisesti. j

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t un- | netti siitä, että' valmistetaan käävän (I) mukainen yhdis- ] te, jossa r/'-n-r2 on | I I /\ / \ VJ i

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa K on kaavan R5-N-R6 mukainen amino-osa, jossa R5 on vety tai hydroksi tai Ct../-alkoksi tai bent·· 5 syylioksi tai C]-7-alkyyli tai fluorialkyyli tai C3-7-syklo-alkyyli tai bentsvyli, joka voi olla substituoitu enintään kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, Ci-7-alkyyIisulfonyyli, Ci-4-älkoksi, f enoksi, bent s oksi, halogeeni tai Ci-4-älkyyli;

10 R6' on H tai Ci-7~alkyyli tai Ca^-sykloalkyyli tai fluorialkyyli tai fenyyli (joka voi olla substituoitu enin- \ tään kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, C0N(Bzl)2, j Ci-4”älkyyli, joka voi muodostaa syklisen systeemin, Ci_4-15 alköksi, fenoksi, bentsoksi tai Gi-7-alkyylisulf onyyli) , tai bentsyyli (joka voi olla substituoitu enintään kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla: CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl) 2, Cj-a-alkyyli, joka voi muodostaa syklisen systeemin, Ci-4-alkoksi, fenok-20 si, bentsoksi tai Ci-7-alkyylisul f onyyli) , tai naftyyli (joka voi olla substituoitu enintään, kah- | della substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro:.,, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzlh, Ci-4-alkyyli, | Gi-:4-alkokSi, bentsoksi, fenoksi tai Ci-7-alkyylisulfonyyli) , ] 25 tai bentshydryyli (joka voi olla substituoitu enintään f kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippu- j matta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)2, C1-4- 1 alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci..·,—alkyvli- :j 30 sulfonyyli), tai bifenyyli (joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta j olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)2, Ci_4~alkyyli, } . I Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyy lisulf onyyli):, j 3. tai I ] $ J trifenyylimetyyli (joka voi olla substituoitu enintään kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, C0N(Bzl)2, Ci-4-alkyyli, Ci-4-a lkoksi, f enoksi, bentsoksi tai C-.-T-alkyy-5 lisulfonyyli) , tai bentshydryyl ietyyl i (joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)3, Ci-4-alkyyl:i, Ci-*-alkoksi, f enoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyy-10 lisulfonyyli) , tai bentshydryylimetyyli (joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, COMHBzl, CONfBzDs, Cj.-4-alkyyli, Ci-4-alköksi, f en oksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyy- j 15 lisulfonyyli), tai | naftyylimetyyli (joka voi oila substituoitu enin- J tään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan ] riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CONfBzlH, J Ci-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, f enoksi, bentsoksi tai C-._7-alkyy- i 20 lisulfonyyli), tai j asenaftyyli (joka voi olla substituoitu enintään \ kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippu- f matta olla CF3, nitro, halogeeni, COMHBzl, COM(;Bzl)2, C1-4-alkyyli, Ci-4-alkoksi,: f enoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyyli- 25 sulfonyyli), tai | asenaf tyylimetyyli (joka voi olla substituoitu ;i enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan j riippumatta olla CFy, nitro, halogeeni, COMHBzl, COM(Bzl)2, I Ci-4-alkyyli, Ci-^alkoksi, f enoksi,: bentsoksi tai Ci-7-alkyy-30 lisulfonyyli}, tai j pyridyyli (joka voi olla substituoitu enintään kali- ; della substituentlila, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CFj, nitrp,: halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)Ci_4-aikyyli, Ci-4-alkoksi, f enoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyylisulfonyyli) , 35 tai pikolyyli (joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(bz1}2, Ci_4-alTcyyli·, Ci_4-alkoksi, f enoksi, bent: seksi tai Ci_7-alkyylisulf onyyli) , 5 tai hentsotiatsolyyli {joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bsl)2, Ci-4-alkyyli, Ci-.j-alkoksi, fenoksi, bent s oksi tai Ci-7-alkyy-10 lisulfonyyli), tai bentsisotiatsolyyli {joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)2, I Ci,4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyy- i 15 lisulfonyyli), tai I bentsopyratsolyyli {joka voi olla substituoitu j enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan { riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, GON(Bzlh, \ Ci-^-alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyy-20 lisulfonyyli), tai i bentsoksatsolyyli (joka voi olla substituoitu enin- | tään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan | riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)2, | Ci_4-alkyyli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci_7-alkyy-25 lisulfonyyli), tai fluorenyyli (joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CPs, nitro, halogeeni, CONHBzl, COM {Bzl} 2, Ci-a-alkyyli, Ci^-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyyli-30 sulfonyyli), tai amino f luorenyyli (joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, CONHBzl, CON(Bzl)2, Cj-4-äl*^yli, Ci-4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Cj-7-aI:kyy~ 35 lisulfonyyli), tai pyrimidyyli (joka voi olla substituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, COQEt, CQMHBzl, CON(Bz1)2, Gi-4-alkyyli, joka voi muodostaa syklisen systeemin, C1-4-5 alkoksi, fenoksi, bentsoksi tai Ci-7-alkyylisulfonyyli}, tai 5-jäseninen heteroaryyli [joka voi olla substituoitu enintään kolmella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, syaani, COOMe, COOEt, tiometyyli, tiGetyyli, tiofenyyli, pikolyyli, ase-10 tyyli, -CH2-COOEt, GONH2, CÖNHBzl, CONfBzlb. C>:4-alkyyli, joka voi muodostaa syklisen systeemin, Ci-4-alkoksi, f enoksi, bentsoksi, fenyyli (joka voi olla substituoitu enintään neljällä substituentilla, jotka voivat toisistaan riippu- f matta Olla nitro, CF3, halogeeni tai Ci-4-alkyyli) , bentsyy- j 1. li (joka voi olla subs:tltupitu enintään neljällä substi- \ tuentiliä, jotka voivat toisistaan riippumatta olla nitro:, | CF3, halogeeni, Ci.-4~alkyyli, naftyyli, Ci-7-alkyylisulfonyy-11, fenyyiisulf önyyli tai Ci-4-dialkyyliamino) ], tai -CHR7-5-jäseninen heteroaryyli (joka voi Olla sub-20 stituoitu enintään kahdella substituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla CF3, nitro, halogeeni, COMHBzl, CON(Bzl)2, COOMe, CODEt, COOCH{CH3)2, CONH2# CGÖBzl, Ci_4-al- | kyyli, Ci~4-alkoksi, fenoksi, bentsoksi, fenyyli, bentsyyli, | naftyyli tai Ci-7-alkyylisulfonyyli [R7 on H, lineaarinen | 25 tai haarautunut Ci-5-alkyyli, bentsyyli; tai R? ja R3 yhdessä I muodostavat ryhmän - (CH2) 3- tai - (CH2)4~] . !

4, Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun- | \ nettu siitä, että valmistetaan kaavan (1) mukainen yhdis- j te, jossa K on R5-N-R6, jotka yhdessä voivat muodostaa yh- ; 30 dessä seuraavasta ryhmästä valittavia rakenteita, I / \ /-\ f-- ~~N S02 N: SO ~N ] __m o \—/ \_/ I vJ \_j l f% w |Λ A rk X / k J "™k P —N > \=/ nh v_y \ / N N (^X\ n o x>r —\__/<Y?G OuQl-O rNi r==·^ ____^ j ko^O ö j CX^ j jotka voivat olla subs ti truoimat tornia tai subs ti tuo itu ja yli- ^ della tai useammalla substituentilla, jotka voivat olla j 5 toisistaan riippumatta CF3, nitro, halogeeni, okso, syaani, ] N, N-dime tyyli amino., CONHBzl, CON(Bzl) 2, Ci-6-alkyyli, C3.4- ] alkyleeniryhmä, joka muodostaa anneloidun rengassysteemin, j ei-4-alkoksi, f enoksi, beiitsoksi, naf tyyli, pyrimidyyli, | | $ :¾ i COOEfc, COOBzl, Cj-G-sykloalkyyli, pyro1i dinyyli, piperidi-nyyli, tienyyli, pyrolyyli, -CH2-CO-NCH (C%) 2, -CH2-CQ~ Μ(ΟΗ2)λ, -CH2-C0-N {CHjJ.iQ:·, foentsyyli (joka voi olla substitu-oitu enintään kolmella siisti tuen ti 11 a, jotka voivat toi-5 s is taan riippumatta olla nitro, halogeeni, CF:i, tiome tyyli tai vastaava sulfoksidi tai sulfoni, tioetyyli tai vastaava sulfoksidi tai sulfoni, Ci-4~alkyyli tai CV^-alkoksi) tai fenyyli (joka voi olla substituoitu enintään kolmella sub-stituentilla, jotka voivat toisistaan riippumatta olla nit-10 ro, halogeeni, CF3, tiometyyli, tioetyyli, Ci-4-alkyyli tai C1-4 alkoksi) .

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa u, v ja w ovat 0 ja K ei ole hydroksi-, bentsyy-

15 Iloksi-, fenoksi- tai alkoksiosa. j

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t un - 1 nettu siitä, että valmistetaan kaavan {Ij mukainen yhdis- j te, jossa t, u ja v ovat 0 ja K ei ole hydroksi- tai alkok- ! i :siosa> j 2 0

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun- | nettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdis- j te, jossa u, v ja w ovat 1 ja K on hydroksi-, alkoksi-, f.e- ii noksi- tai bentSyyliöksiosa.

8, Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun- \ 25 nettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdis- ;j te, jossa u ja v ovat 1, w on 0 ja K on hydroksi-, alkoksi-, ij fenoksi- tai bentsyylioksiösa. j B. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun-nettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdis- : 30 te, jossa u on 1, v ja w ovat 0 ja K on hydroksi-, alkoksi-, fenoksi- tai bentsvylioksiosa. i ! j