FI120291B - Lisäkilpirauhasen hormoniformulaation valmistusmenetelmä - Google Patents

Description

Lisäkilpirauhasen hormoniformulaation valmistusmenetelmä Förfaringsmetod för formulering av bisköldkörtelhormon

Keksintö koskee menetelmää lisäkilpirauhasen hormonia sisältävän valmisteen aikaansaamiseksi. Tarkemmin keksintö koskee sellaista lisäkilpirauhasen hormonivalmistetta, jolla on parannettu varastointistabiliteetti.

Lisäkilpirauhasen hormoni {PTH) on erittyvä, nisäkkään lisäkilpirauhasen 84 aminohappoa sisältävä tuote, joka eri kudoksiin, mukaan lukien luut, kohdistuvan vaikutuksensa kautta säätelee seerumin kalsiumtasoa. Tutkimuksilla, jotka on suoritettu ihmisillä, joilla on tietty PTH-muoto, on osoitettu luihin kohdistuvaa anabolista vaikutusta ja ne ovat herättäneet huomattavaa kiinnostusta PTH:n käyttöön luukadon ja vastaavien luusairauksien hoidossa.

Ihmisillä on osoitettu että lisäkilpirauhasen hormoni, esimerkiksi käyttämällä N-terminaalista 34 aminohappoa sisältävää naudan ja ihmisen hormonia, joka kaikkien julkaistujen kertomusten perusteella pidetään biologisesti samanvertaisena täyspitkän ·'·*. hormoonin kanssa, lisää luun kasvua erityisesti silloin, kun sitä annetaan sysäyksenomaisella tavalla ihonalaisesti tai : »·, suonensisäisesti. Hieman toisenlaisella PTH:n muodolla, ihmisen .·. ; PTH(1-38) :11a, on saatu samantapaisia tuloksia. Koska täyspitkän, * e m ihmishormonin, s.o. ihmisen PTH(l-84) yhdistelmämuoto on ollut «· # 8 «li saatavilla vasta vähän aikaa, sitä ei vielä ole tutkittu ihmisessä vaikka rottakokeilla on osoitettu samanvahvuista ja eräiltä ,näkökohdiltaan jopa jonkin verran parantunutta tehokkuutta luun kasvussa.

j ί : Ne PTH-valmisteet, jotka käytetään näissä tutkimuksissa on : valmistettu tuoreesta tai kylmäkuivatusta hormonista, ja on sisällytetty eri tyyppisiin, kantajiin, apuaineisiin ja vehikkeleihin. Useimmat on valmistettu vesipohjaisiin vehik- keleihin kuten suolaan, tai hormonin liuottamiseksi etikka- 2 hapolla hapotettuun veteen. Suurin osa kuvatuista formulaa-tioista sisältävät myös albumiinia kantajana (katso esimerkiksi Reeve et ai, Br. Med, J., 1980, 280:6228; Reeve et ai, Lancet, 1976, 1: 1035; Reeve et ai, Calcif Tissue Res, 1976, 21: 469; Hodsman et ai, Bone Miner; 1990, 9 (2): 137; Tsai et ai, J. Clin. Endocrinol Metab, 1989, 69 (%) :1024,- Isaac et ai, Horm Metab Res 1980, 12(9) :487; Law et ai, J Clin Invest, 1983, 72(3):1106,- and Hulter J. Clin Hypertens, 1986, 2 (4):360). Muihin kuvattuihin formulaatioihin on sisällytetty täyteainetta, kuten mannitolia, joka on läsnä joko kylmäkuivatussa hormonissa tai rekonstituoitivehikkelinesteessä. Edustavia esimerkkejä sellaisista formulaatioista, joita on käytetty ihmistutkimuksissa ovat annostelumuodot, jotka sisältävät ihmisen PTH(1-34)-valmistetta, joka rekonstituoinnin jälkeen sisältää mannitolia, lämpöinaktivoitua ihmisen serumalbu-miinia, ja kapronihappoa (proteaasi-inhibiittori) absorbointia lisäävänä aineena (katso Reeve et ai, 1976 Calcif. Tissue Res., 21, Suppl., 469-477); ihmisen PTH(1-38)-valmiste, joka on rekonstituoitu suolavehikkeliin (katso Hodsman et ai, 1991, i V 14(1), 67-83); ja naudan PTH(1-34)-valmiste vesipitoisessa r*„: : vehikkelissä, jonka pH on nostettu etikkahapolla ja joka si- i"l i sältää albumiinia. On myös olemassa kansainvälinen referenssi- valmiste, joka ihmisen PTH:sta puhuttaessa sisältää noin 100 ; ng hormonia, joka on suljettu pieneen lääkepulloon eli ampui- liin (vial) yhdessä ihmisen seerumalbumiinin 250 /ig ja laktoosin 1,25 mg kanssa (1981), ja kun on kysy naudan PTH:sta sisältää 10 μg kylmäkuivattua hormonia 0,01 M etikkahapossa ja 0,1 l", paino-% mannitolia (katso Martindale, The Extra Pharmacoepia, *, the Pharmaceutical Press, London, 29. painos, 1989 sivu 1338).

ϊ : Lisäkilpirauhasen hormonin kaupallista hyödyntämistä varten on kehitettävä sellainen annosmuoto, jolla on hyväksyttävä varas-. tointistabilisuus ja joka on helppo valmistaa ja rekonstruoida. Koska se on proteiini ja siten paljon labiilimpi kuin traditionaaliset pienen molekyylipainon omaavat lääkeaineet, lisäkilpirauhasen hormonin formulointi muodostaa kuitenkin sellaisen haasteen, jota ei yleensä kohdata farmaseuttisessa 3 teollisuudessa. Lisäksi, ja muista onnistuneesti formuloiduista proteiineista poiketen, PTH on erityisen herkkä hapettumiselle ja jotta sen bioaktiviteetti säilyisi siltä vaaditaan edelleen että sen N-terminaalinen sekvenssi on koskematon.

Tämän keksinnön tarkoituksena on aikaansaada farmaseuttisesti hyödyllinen PTH-valmiste, erityisesti sellainen, jolla on parannettu varastointistabiilisuus.

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettu PTH-hormoni valmiste on kylmäkuivatun koostumuksen muodossa, ja sisältää lääkinnällisesti hyödyllisen määrän lisäkilpirauhasen hormonia, täyteainetta, joka kylmäkuivautuu yhdessä lisäkilpirauhasen hormonin kanssa muodostaen amorfisen kakun ja sellaisia määriä haihtumattonta puskuroivaa ainetta että se säätää valmisteen pH:n fysiologisesti hyväksyttävälle pH-tasolle. Eräässä keksinnön edullisessa muodossa valmisteessa oleva hormoni on ihmisen lisäkilpirauhasen hormoni, täyteaine on mannitoli ja puskuroiva aine on sitraattiperäinen.

Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on saada aikaan prosessi, • jolla saadaan PTH-valmiste, joka sisältää vaiheet, yhdistää vedessä PTH, puskuroiva aine ja täyteaine, ja sitten kohdistaa näin aikaansaatu liuos kylmäkuivausprosessille, joka antaa tuotteen, joka sisältää vähemmän kuin 2 paino-% vettä.

Esillä olevan keksinnön eräänä toisen tarkoituksena on saada aikaan menetelmä, jolla saadaan sellainen lisäkilpirauhasen hormonin ... annostelumuoto, joka sopii parenteraaliseen antoon ja sisältää vaiheet rekonstituoida keksinnön mukainen kylmäkuivattu valmiste steriilissä vedessä.

Edelleen on aikaansaatu keksinnön mukaisesti terapeuttisesti käyttökelpoinen pakkaus, joka sisältää steriilin ampullin, jossa on keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettu kylmäkuivattu valmiste, toinen ampulli, 4 joka sopii sen rekonstruoimiseen ja ohjeet rekonstituoimiseksi ja valinnaisesti antoa varten. Pakkaus voi edelleen sisältää välineen, joka sopii loppukäyttäjälle rekonstituoidun valmisteen injisoimista varten.

Keksintö kuvataan nyt suuremmalla tarkkuudella ja viitaten oheistettuihin kuviin, joissa:

Kuvat 1 ja 2 esittävät säilyttämisen vaikutuksen sellaiseen PTH-valmisteeseen, joka on puskuroitu pH 4 ja pH 6 ja joka on säilytetty sekä 4°C:ssa että 37°C:ssa. Kuvissa stabiliteetti ilmaistaan bioaktiviteettitestillä (kuva 1) ja SDS-PAGE analyysillä (kuva 2).

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetulla kilpirauhasen hormonivalmisteella on parannettu varastointistabiilisuus sekä hormonikoostumuksena että aktiviteettina määritettynä.

On toivottavaa että valmisteen aktiivisena aineena on täyspitkä, 84 aminohappoa sisältävä ihmisen kilpirauhasen hormoni, joka saadaan yhdistelmätekniikalla, peptidisynteesillä tai uuttamalla ihmisestä • V. peräisin olevia nesteitä. Esillä olevassa selityksessä, PTH:n ihmisperäinen muoto lyhennetään hPTH(l-84), jolla on se : „·, aminohapposekvenssi, jonka Kimura et ai Biochem Biophys Res Comm, ,·, ; 114(2):493 on raportoinut. Vaihtoehtoisena ihmisen täyspitkänä PTH- muotona, valmiste voi sisältää ne homologit, fragmentit, tai ,11 variantit ihmisen PTH:sta, joilla on ihmis-PTH:n aktiviteetti määritettynä osteoporoosi-ovarioektomisoidulla rottamallilla, jonka on kuvannut Kimmel et ai, Endocrinology, 1993, 32(4):1577 ja *; * sisällytetään viitteellä tähän hakemukseen.

Lisäkilpirauhasen hormoni voi esimerkiksi olla PTH:n naudasta tai siasta peräisin olevia muotoja, (katso Keutmann et ai, Current Research on Calcium Regulating Hormones, Cooper, C.W.

(Ed.), 1987, University of Texas Press, Austin, sivut 57-63) tai kypsien PTH-homologien fragmentteja tai variantteja. Vaih- 5 toehdot PTH:n fragmenttien muodossa sisältävät vähintään PTH: n ensimmäiset 27 N-terminaalista jäännettä ja on toivottavaa että ne sisältävät ainakin ensimmäiset 34 N-terminaalista jäännettä, kuten PTH(1-34), PTH(1-37), PTH(l-38) ja PTH(1-41) Vaihtoehdot PTH:n varianttien muodossa sisältävät yhdestä viiteen aminohapposubstituutiota, jotka parantavat PTH:n stabilitettia ja puolintumisaikaa, kuten metioniinijänteen korvaaminen asemassa 8 ja/tai 18 leusiinilla tai toisella hydrofobisella aminohapolla, joka parantaa PTH:n stabiliteettia hapettumista vastaan ja korvaamalla aminohapot alueella 25-27 aminohapoilla, jotka eivät ole trypsiiniherkkiä, kuten histidiini tai aminohapolla, joka parantaa PTH:n stabiliteettia proteaasia vastaan. Nämä PTH:n muodot sisältyvät määritelmään "lisäkilpirauhasen hormoni" siten kuin sitä yleisesti käytetään tässä.

Esillä olevan keksinnön mukaan aikaansaatu lisäkilpirauhasen hormoni esiintyy jauhemuodossa, jossa ei ole enempää kuin 2 paino-% vettä, ja joka aikaansaadaan kylmäkuivaarnalla steriili, vesipitoinen hormoniliuos, joka on valmistettu sekoittamalla lisäkilpirauhasen hormoni, haihtumaton puskuroiva aine ja täyteaine.

yjy Täyteaine, joka sisältyy valmisteeseen toimii kylmäsuojaavana « « aineena kylmäjäähdytyksen aikana ja myös massaa antavana ainee- Γ 1 na, joka mahdollistaa annosmuotoilun. Farmaseuttisesti hyväk syttävistä täyteaineista, esillä olevassa keksinnössä vältetään *" sellaisia sokereita kuin laktoosi ja maltoosi ja hyödynne- * » * tään ainoastaan sellaisia täyteaineita, jotka kykenevät kun ne yhdistetään valitun puskuroivan aineen kanssa muodostamaan ei-kiteisiä, amorfisia kakkuja kun ne kylmäkuivataan. Kun on '··.·' valittu täyteaine tällä perusteella, kakku, joka saadaan ; - kylmäkuivausprosessin tuloksena on laadultaan homogeeninen, <”s» mikä on toivottavaa tuotteen nopeaksi rekonstituoinniksi.

, \ Polyolityyppiset täyteaineet ovat edullisia. Polyolityyppisten täyteaineiden kakunmuodostusominaisuuksien arviointi on pal-’' jastanut, että mannitoli on erityisen edullinen täyteaine, ei 6 ainoastaan johtuen sen ominaisuudesta muodostaa laatukakku, vaan myöskin siksi että mannitoli itsessään antaa jonkin verran stabilisuutta liuoksessa olevalle PTH:lle.

Sen lisäksi että puskuroiva aine, joka sisältyy keksinnön mukaiseen valmisteeseen, on farmaseuttisesti hyväksyttävä sen on ehdottomasti oltava ei-haihtuva puskuroiva aine, s.o. sellainen, ettei se haihdu kylmäkuivausprosessin aikana siinä määrin, että pH alenee enemmän kuin 0,4 pH-yksikköä. On osoitettu, että PTH-valmisteissa aikaisemmin käytetyt puskuroivat aineet, kuten etikkahappo, haihtuvat erilaisilla nopeuksilla kylmäkuivausprosessin aikana, mikä johtaa ei ainoastaan epäyhtenäiseen tuotteeseen vaan puskuroivan aineen häviämiseen ja siten epäyhtenäisiin puskuritasoihin rekonstituoidussa tuotteessa. Haihtumaton puskuroiva aine, joka on sisällytetty esillä olevaan valmisteeseen on valittu sellaisista aineista, jotka kykenevät puskuroimaan valmisteen sellaiselle pH-alueel-le, joka on fysiologisesti hyväksyttävällä tasolla. Fysiologisesti hyväksyttävä pH on sellainen pH, joka joko ei aiheuta mitään, tai aiheuttaa potilaalle mahdollisimman vähän vaivoja valmisteen annon yhteydessä, ja voi siten vaihdella riippuen annostelutavan mukaisesti. Ennen antoa laimennetta-• i* vien valmisteiden, kuten varastoinfuusioliuoksesta liuottamal- s s s ’** * la valmistettavien valmisteiden, pH voi vaihdella laajasti, : esimerkiksi noin pH 3:sta noin pH 9:ään. Kun valmiste on tar- •7’j koitettu annettavaksi heti rekonstituoinnin jälkeen, PTH-val-*.J » miste puskuroidaan edullisesti niin, että se on pH-alueella : 3.5 - 7.5. Sopivat haihtumattomat puskurit ovat siten sellai set hyväksyttävät aineet, jotka voivat puskuroida valmisteen , ,·, pH:n siten, että se pysyy kohde-pH-alueella, ja niihin sisäl-tyy fosfaattipohjaiset puskurit, edullisesti sitraattipohjai-nen puskuri kuten natriumsitraatti/sitruunahappo.

Kilpirauhasen hormonin varastointistabiilisten valmisteiden aikaansaamiseksi keksinnön mukaisesti, valittu haihtumaton puskuroiva aine sisällytetään siten, että saadaan lopullinen pH, joka on alueella 3,5 - 6,5 ja täyteaine sisällytetään 7 siten, että saadaan lopullinen konsentraatio, joka on alueella 2-10 paino-%. Keksinnön sovellutusmuodoissa, pH joka aikaansaadaan puskuroivilla aineilla on alueella 3,8 - 6,2 ja täyteaineen lopullinen konsentraatio on alueella 3-7, esimerkiksi 4-6 paino-%. Edullisimmin, puskuroiva aine on sitraatti-peräinen, kuten mononatriumsitraatti/sitruunahappo ja täyteaineessa on 5 paino-% mannitolia.

Keksinnön mukaisiin PTH-valmisteisiin PTH sisältyy lääkinnällisesti vaikuttavina määrinä, jotka ovat hyödyllisiä joko hoidollisesti tai lääkinnällisessä diagnoosissa. Se, nimenomainen määrä kilpirauhasen hormonia, joka on sisällytetty valmisteeseen voidaan etukäteen määrittää valitun PTH:n perusteella ja valmisteen aiotulle loppukäytölle. Eräässä sovellutuksessa, valmiste hyödynnetään terapeuttiseen tarkoitukseen ja erityisesti osteoporoosin hoitoon. Osteoporoosi-terapias-sa vaaditaan rekonstituoidun valmisteen antoa injektiona, edullisesti ihonalaisena pistoksena, yksikköannoksina, jotka heijastavat lääkärin määrämän hoitoalueen, mutta jotka ovat ihmisen PTH (1-84) : lie, alueella 25 /xg/ml - 500 μg/ml injektoitavaa liuosta potilasta kohden, injektiovolyymien ollessa 0,3 , - 1,3 ml. Näin ollen puhdistettu ja steriilisuodatettu PTH on * ’* edullisesti sisällytetty puskuroivaan aineeseen ja täyteaineeseen siten että se muodostaa vesipitoisen liuoksen, jonka pitoisuus on alueella 25 μg/ml - 250 μg/ml, edullisesti 50 μg/ml - 150 μg/ml. Molaariset ekvivalentit olennaisesti yhtä-vahvoista PTH:n muodoista, kuten PTH(1-84) muunnokset ja frag-:T: mentit, voidaan samalla tavalla sisällyttää ihmisen PTH(1-84) tilalle, jos niin halutaan.

\ Eräässä keksinnön sovellutusmuodossa, valmisteet ovat saatavis sa muodossa, jolla rekonstituoitaessa noin 1 ml:aan (0,8 - 1,2 *«% ml) rekonstituointivehikkeliä ja siten ampulleihin lisätään 1 %»»* ml vesipitoista PTH-valmistetta, jota sitten kylmäkuivataan.

Keksinnön edullisessa sovellutusmuodossa PTH-valmiste, johon kohdistetaan kylmäkuivaus, sisältää 25 - 250 μg/ral ihmisen 8 PTH (1-84) :ä sekä 3-7 paino-% mannitolia, ja sellaisia määriä sitraattilähdettä että· se puskuroi valmisteen siten, että pH on alueella 3,5 - 6,5 kun se rekonstituoidaan steriiliin veteen.

Keksinnön spesifisessä sovellutusmuodoissa sitraattia sisältävä puskuroiva aine on sisällytetty sellaisena määränä että se kykenee puskuroimaan pH:n 6,0 + 0,4.

Kun valmiste on saatu vesipitoisena liuoksena, jossa on haluttu määrä ja pitoisuus puskuroivaa ainetta, täyteainetta ja PTH:ia, yksittäiset ampullit täytetään liuoksella haluttuun tilavuuteen ja ampulleihin kohdistetaan kollektiivisesti kylmäkuivausprosessille.

Kuten on tavanomaista formuloinnissa, kylmäkuivaus tai lyofilisointiprosessi sisältää lämpötilasykliprosessin, joka kontrolloidaan huolellisesti, jotta varmistettaisiin, että kuivaus tapahtuu tasaisesti ja olennaisesti loppuun asti, s. o. siten, että sillä saadaan jauhe, joka ei sisällä enempää kuin 2 paino-% vettä ja edullisesti ei enempää kuin 1,5 paino-% vettä. Ohjesääntö, joka sopii esillä olevan kylmäkuivatun PTH-valmisteen saamiseksi sisältää sen, että ampulleihin, jotka on täytetty vesipitoisella PTH-valmisteella, kohdistetaan kuivausprosessi, jossa on ainakin ;V, kaksi eri kuivausvaihetta, jossa ensimmäinen suoritetaan sitoutumattoman veden poistamiseksi vesipitoisesta valmisteesta • ilman, että siitä aiheutuisi kakun hajoamista. Tämä saavutetaan y > ensin jäähdyttämällä annosteltu vesipitoinen PTH-valmiste jäätuotelämpötilaan, joka on alhaisempi kuin -30°C, edullisesti li; noin -50°C ja sitten nostamalla säilytyslämpötila ja pitämällä se noin -10°C:ssa alennetussa paineessa, joka ei ole enempää kuin 350 ^baaria, esimerkiksi 260 /^baaria, kunnes olennaisesti kaikki sitoutumaton vesi on poistettu. Niissä olosuhteissä, jotka on määritelty keksinnön mukaisissa esimerkeissä 16 tunnin kuivaus-aika on sopiva. Toinen kuivaussykli on suunniteltu vapauttamaan sidottua vettä kakusta samalla jälleen välttäen kakun hajoamista ja käyttäen lämpötilaa, joka on alhaisempi kuin sellainen, joka on PTH:n bioaktiviteetille haitallinen. Toi- 9 nen kuivausvaihe voidaan aikaansaada käyttäen vielä alhaisempaa painetta (>50 μbaaria) -10°C:ssa 3 tuntia, ja sitten lämmittämällä ja pitämällä 25°C:ssa kunnes olennaisesti kaikki (<2%) sidotusta vedestä on poistettu, esimerkiksi ainakin 12 tuntia, mutta edullisesti 16 tuntia tai enemmän. Kun tämä on saatettu loppuun ampullit voidaan sulkea esimerkiksi automaattisella tulppauksella ja sitten poistamalla kylmäkuivaajasta ja varustamalla sulkijoilla.

Keksinnön mukaisella menetelmällä aikaansaadut PTH-valmisteet ovat täydellisiä siinä mielessä että loppukäyttäjän tarvitsee vain rekonstituoida valmiste steriiliin veteen saadakseen annettava formulaatio. Keksinnön mukaisella menetelmällä saadaan aikaiseksi lääkinnällisesti hyödyllinen pakkaus, joka sisältää vähintään yhden ampullin, joka sisältää kylmäkuivatun keksinnön mukaisen PTH-valmisteen, vähintään yhden toisen ampullin, joka sisältää steriiliä vettä valmisteen rekonstruoimiseksi ja ohjeliuskan, joka antaa ohjeet kylmäkuivatun PTH:n rekonstituoimiseksi. Pakkaus voi lisäksi sisältää injektiovälineen, jolla loppukäyttäjä voi antaa rekonstituoidun formulaation. Eräässä keksinnön mukaisessa sovellusmuodossa injektioväline on injektioneula, esimerkiksi 25 V t gaugin neula ja ruisku, joka pystyy vastaanottamaan liuostilavuuden, joka on noin 0,5-5 ml, esimerkiksi 1 tai 2 ml.

• .*» Vaihtoehtoisesti pakkaus voi sisältää ampullin, joka sisältää ; useampia PTH-annoksia ja seura-ampullin, joka sisältää kylliksi , steriiliä vettä usean annosformulaation rekonstituoimiseksi.

Käyttäessään keksintöä loppukäyttäjä imee veden vedellä täytetystä ampullista injektiovälineeseen ja siirtää sen PTH:11a täytettyyn ampulliin kylmäkuivatun PTH-jauheen sekoittumisen ja rekonstituoimisen aikaansaamiseksi, tarvittaessa käyttäen : neulaa vetämään sisään ja työntämään ulos seosta kunnes jauhe on selvästi liuennut. Esillä olevalla PTH-valmisteella on kui-tenkin se etu, että sekoittuminen on nopeaa ja on sekoittamattakin täydellinen minuutissa ja yleisimmin 30 sekunnissa.

10

Sekoittamisen jälkeen loppukäyttäjä injisoi PTH-valmisteen lääkärin ohjeen mukaisella tavalla ja määränä. Siinä tapauksessa, jossa käytetään multiannosampullia olisi sisällytettävä bakteriostaattinen aine ja se valmiste, joka jää antamisen jälkeen jokaisesta annoksesta voidaan syväjäähdyttää tulevaa käyttöä varten useamman päivän aikakehyksissä.

Lääkinnällisen käytön lisäksi nyt esillä oleva PTH-valmiste voidaan formuloida ja antaa lääkinnällisen diagnoosin tekemisen helpottamiseksi ja erityisesti avustamaan hypoparatyroi-dismi- ja pseudohypoparatyroidismin diagnoosin tekemistä hypo-kalsemiaa potevissa potilaissa. PTH:n annosta lukuunottamatta, PTH-valmisteen koostumus jää sellaiseksi kuin tässä on kuvattu terapeuttiseen käyttöön. Suonen sisäisesti annettu yksittäisannos ihmisen PTH(1-84) : sta tai PTH-bioekvivalentis-ta, joka vastaa 200 kansainvälistä yksikköä PTH-aktiviteettia, on sopiva tähän diagnostiseen tarkoitukseen. Diagnoosi tehdään sitten määrittämällä annetun PTH:n vaikutus virtsan cAMP tasoihin, jolloin cAMP:n kohonnut taso osoittaa että on kysymys hypoparatyroidismitilasta eikä pseudomuodosta.

,, , Esimerkit * Vesipitoiset PTH-valmisteet valmistettiin ensin jälkeenpäin •L I kylmäkuivattaviksi sekoittamalla ihmisen PTH(1-84) hormonina; \ ’* mannitoli täyteaineena; ja sitraattilähde puskuroivana ainee- ’J . ’ na.

Ensimmäisenä askeleena valmisteen tuottamiseksi valmistettiin , kaksi vesipitoista seosta steriilistä 20 paino-%: sesta injek- toitavasta mannitoli - liuoksesta (British Pharmacopeia). 20 % mannitoliliuos sekoitettiin (1) vesipitoiseen sitruunahappo-' liuokseen, jolloin saatiin ensimmäinen vesipitoinen seos, joka t sisälsi 10 mM sitruunahappoa ja 5 % mannitolia ja (2) vesipi toiseen natriumsitraattimonohydraattiliuokseen, joka antoi toisen vesipitoisen seoksen, joka sisälsi 10 mM sitrattia ja 5 % mannitolia. pH-säädetyt liuokset, jotka sisälsivät 5 % 11

mannitolia saatiin sitten sekoittamalla sellaisia tilavuus-seoksia tilavuuksina että niillä saatiin 5 % mannitoliliuos, jonka pH on noin pH 4 (±0,2) ja 5 % mannitoliliuos, jonka pH

on pH 6 (±0,2).

Sitten 5 %: seen mannitoliliuokseen (pH 4 ja pH 6) lisättiin mitattuja määriä kylmäkuivattua ihmisen PTH(l-84) :a, joka oli valmistettu mikrobiologisesti, puhdistettu ja sitten steriloitu ennen kylmäkuivaamista. Mitatut määrät PTH:a lisättiin sitten 5 % mannitolia sisältäviin pH 4- ja pH 6-liuoksiin sellaisten varastoliuosten aikaansaamiseksi, jotka ampulloi-taessa tilavuuksina 1,1 ml antoivat ampullit, jotka sisälsivät PTH:a seuraavina /xg-määrinä: 100, 250, 500, 1,000 ja 2,500.

Kylmäkuivaamista varten, liuokset, jotka sisälsivät PTH:a, jokaisesta valmistetusta pitoisuudesta täytettiin aseptisesti joko käsin tai automaattisella jakajalla 1,1 ml m tilavuuksina 5 ml:n lasipulloihin (USP tyyppi I) ja asetettiin tarjotti-mille steriloituun, typpi-puhdistettuun kylmäkuivaajaan, joka oli esijäähdytetty - 50°C:seen. Asettamisen jälkeen ja 4 tunnin esijäähdyttämisen jälkeen kylmäkuivauskammio tyhjennettiin alentamalla paine 0,26 mbaariin tunnin ajaksi. Pri-’ ** määrinen kuivaamissykli toteutettiin, mikä sisälsi asteittai- 14 * sen lämmityksen kolmenkymmenen minuutin ajan - 50°C - -10°C, äJ * missä ampullit pidettiin 16 tunnin ajan. Sitten toteutettiin ί,Λ; toinen kuivaussykli, joka sisälsi edelleen lämmittämistä - ' : ; 10°C:sta - 25°C:seen edelleen alennetussa 0,05 mbaarin pai- i Γ: neessa 3 tunnin aikana ja sitten pitämällä tässä lämpötilassa ja paineessa 16 tunnin ajan. Toisen kuivaussyklin loppupuolella, kammio puhdistettiin typellä ja saatettiin 0,85 -0,95 : baarin paineeseen. Tarjotin nostettiin sitten niin että kumi- tulpat voitiin laittaa ampullien suihin ja ampullitarjottimet poistettiin ja peitettiin alumiinisulkijalla paineen vapau-*,,»> tumisen jälkeen.

Ampullit, jotka sisälsivät kylmäkuivattua PTH-valmistetta eri pitoisuuksina pH 4:ssä ja pH 6:ssa säilytettiin sitten 4°C:ssa 12 ja 37°C:ssa ja analysointiin tämän jälkeen eri aikapisteissä 1, 2, 3, 6, ja 9 kuukauden ajan. Stabiliteetin analysointi suoritettiin rekonstruoimalla ampulloitu valmiste 1,1 ml: n steriiliin veteen. Tämä aikaansaatin injisoimalla vesi kumi-tulpan läpi, sen jälkeen kun oli annettu aikaa rekonstruoinnille jopa 1 minuutin, liuos poistettiin analysoitavaksi.

Stabiliteettikokeiden tulokset annetaan seuraavassa niiden eri testien yhteydessä, jotka käytettiin valmisteiden evaluoimiseksi .

PTH:n bioaktiviteetti mitattiin käyttäen vakiintunutta rotan osteosarkomasoluun (UMR 106) perustuvaa määritystä PTH-sti-muloidun adenylaattisyklaasin tuottamiseksi. Tämän PTH-mää-rityksen ohjesäännön ovat kuvanneet Rodan et ai julkaisussa J. Clin. Invest., 1983, 72:1511 ja Rabbani et ai julkaisussa

Endocrinol. 1988, 123:2709. Jopa 9 kuukauden säilytyksen jälkeenkin mitään merkittävää PTH:n bioaktiviteetin laskua ei voitu havaita lämpötilassa 4 °C tai 37°C missään PTH:n pitoisuudessa, tai pH:ssa 4 tai 6. Kuva 1 esittää analyyttiset tulokset PTH-valmisteelle, joka sisältää PTH annoksen 1,000 .. > MH- s * i ’·* Samaten r e konsti tuo idun PTH-valmisteen SDS-PAGE analyysi, joka hi l on suoritettu tavanomaisella tavalla ei paljastanut mitään *,’*! merkittävää puhtausasteen alenemista säilytyksen aikana mis-:JJ sään tutkitussa pH:ssa, lämpötilassa tai varastointilämpöti- Ί I lassa, kuten on esitetty kuvassa 2. Jonkinlaista puhtauden alentumista voitiin osoittaa rekonstruoidulla formulaatiolla tehdyllä RP-HPLC-analyysillä, mutta ainoastaan 37 °C varas-tointilämpötilassa (0,7 % puhtauden alentumista per varastoin-tikuukausi), kun taasen 4°C lämpötila ei osoittanut mitään merkittävää puhtauden alentumista käänteisfaasi-HPLC-analyy-sissä. Immunomäärityksellä (Allegro) avaamattoman PTH:n sta-: biliteetti osoitettiin myös pysyvän vakiona varastointikauden .aikana kaikissa evaluoiduissa pitoisuuksissa, pH:ssa ja lämpötiloissa .

13 Jäännöskosteus PTH-valmisteissa määritettiin standardi-Karl-Fisher tekniikkalla ja tämä osoitti että vesisisältö kaikissa kylmäkuivatuissa valmisteissa pysyi alle 2 paino-% ja tyypillisesti noin 1 paino-% paikkeilla, koko varastointiajan.

Rekonstituoinnin jälkeinen pH ei paljastanut mitään merkittävää pH:n vaihtelua kylmäkuivauksen ja varastointiprosessin aikana, mikä vahvisti sen että puskuroiva aine ei ollut haihtunut lyofilisoinnin aikana. Valmisteet, jotka oli puskuroitu pH 4 pysyivät pH 4 ± 0,2 ja ne, jotka oli puskuroitu pH 6 pysyivät pH 6 ± 0,4.

Kylmäkuivatun valmisteen liukenemisnopeus ja määrä tutkittiin. Kaikki erät liukenivat 1,1 ml:aan steriiliä vettä yhdessä minuutissa huoneen lämpötilassa. Havaittu maksimiliukenemis-aika oli 0,5 minuuttia pH 4-valmisteille ja 0,4 minuuttia pH 6 valmisteille. Lisäksi, mitään hiukkasia ei havaittu kylmäkuivatun jauheen rekonstituoinnin aikana kummassakaan pH:ssa ja kummassakaan varastointilämpötilassa.

Claims (9)

1. Menetelmä sellaisen lisäkilpirauhasen hormonia (PTH) sisältävän valmisteen aikaansaamiseksi, jolla valmisteella on parannettu varastointistabiilisuus, tunnettu siitä, että valmisteeseen vesipitoisessa väliaineessa yhdistetään lääkinnällisesti hyödyllinen määrä lisäkilpirauhasen hormonia (1-84), polyolitäyteainetta, joka kylmäkuivautuu yhdessä mainitun hormonin kanssa muodostaen amorfisen kakun ja sellaisia määriä haihtumatonta farmaseuttisesti hyväksyttävää puskuroivaa ainetta, että se riittää puskuroimaan valmisteen pH:n fysiologisesti sopivalle alueelle ja saatetaan näin saatu liuos kylmäkuivausprosessiin, jolla saadaan tuote, joka sisältää vähemmän kuin 2 paino-% vettä.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että täyteaine on mannitoli.

: ; 3. Patenttivaatimusten 1 tai 2 mukainen menetelmä, : : : tunnettu siitä, että puskuroiva aine on sitraatti- ; peräinen.

·„·,· 4. Jonkin edellämainittujen patenttivaatimusten mukainen V * menetelmä, tunnettu siitä, että lopputuote sisältää lisäkilpirauhasen hormonia, jonka pitoisuus on alueella ·· * 25 - 250 yg/ml; mannitolia pitoisuuksina, jotka ovat n,»* alueella 3-7 paino-%; sitraattipuskuria määränä, joka : : on riittävä säätämään valmisteen pH alueelle, joka on 3,5 ; - 6,5; ja vettä.

5. Jonkin patenttivaatimusten 2-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ollessaan läsnä mannitoli esiintyy pitoisuuksina, jotka ovat alueella 4 - 6 %.

6. Jonkin patenttivaatimusten 3-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sitraattipuskuria lisätään määränä, joka on riittävä säätämään pH:n valmisteessa pH:ksi 6± 0,4.

7. Jonkin patenttivaatimusten 1-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lisäkilpirauhasen hormonivalmiste on ampullissa.

8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ampullissa oleva lisäkilpirauhasen hormonivalmiste sisällytetään pakkaukseen, joka sisältää vähintään yhden toisen ampullin, jossa on steriiliä vettä valmisteen rekonstituoimiseksi ja ohjeliuskan, jossa on ohjeet valmisteen formuloimiseksi niistä.

9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu I siitä, että pakkaukseen lisäksi sisällytetään väline ! rekonstituoidun PTH-liuoksen injisoimiseksi.