CZ184296A3

CZ184296A3 - Formulation of parathyroid hormone

Info

Publication number: CZ184296A3
Application number: CZ961842A
Authority: CZ
Inventors: Josephus Johannes Mar Holthuis; Albert Merking; Alwinus Antonius Voetman
Original assignee: Allelix Biopharma
Priority date: 1993-12-23
Filing date: 1994-12-16
Publication date: 1997-01-15
Also published as: FI962593A; US5496801A; JP3065662B2; FI120291B; NO962634D0; JPH09506869A; PT735896E; NO324905B1; ES2293637T3; FI962593A0; HK1010336A1; AU681737B2; EP0735896B1; CN1116897C; EP0735896A1; BR9408398A; CA2179207A1; LV11731B; HU9601721D0; LV11731A

Description

Oblast vynálezu

Tento vynález se vztahuje k farmaceutickému složení, které obsahuje parathyroidní hormon. Vynález se zvláště vztahuje k formulaci parathyroidního hormonu se zvýšenou skladovací stabilitou.

Dosavadní stav techniky

Parathyroidní hormon (PTH) je produkt s 84 aminokyselinou, který je vylučován parathyroidní žlázou savců. Tato žláza svou činností na různé tkáně, včetně kostí, reguluje hladinu séra vápníku. Studia prováděné s určitými typy PTH u lidí prokázaly anabolický efekt na kost a vyvolaly velký zájem o jeho využití pro léčení osteoporozy a s tím spojených onemocnění kostí.

Například použitím N-koncových 34 amino-kyselin hovězího dobytka a lidského hormonu, které jsou všemi publikacemi považovány za biologicky ekvivalentní k dlouhému hormonu, bylo u lidí prokázáno, že parathyroidní hormon (hormon příštipných tělísek) podporuje růst kostí zvláště je-li aplikován pulsatilním způsobem podkožně či intravenózně. Lidský PTH (1-38), který má jemné odchylky, vykázal obdobné výsledky. Vzhledem k tomu, že není často k dispozici, nebyl prozatím rekombinantní typ dlouhého lidského hormonu, t.j. lidského PTH (1-84) u lidí studován, i když studie u potkanů indikují účinnost a v některých směrech i zvýšenou účinnost u růstu kostí.

Přípravky PTH, které jsou využívány u těchto studií, byly připraveny z čerstvého či lyofi 1izovaného (vymrazeného) hormonu a obsahují různé typy nosiče, vehikula a přenašeče.

Většina z nich je připravována u přenašečů se základem vody, jako například fyziologický roztok nebo voda typicky okyselená kyselinou octovou tak, aby byl hormon solubilizován. Většina ze zaznamenaných formulací též obsahuje jako nosič albumin (viz například Reeve et al, Br. Med. J. , 1930, 280:6223; Reeve et al, Lancet, 1976, 1:1035; Reeve et al, Calcif Tissue Res, 1976, 21:469; Hodsman et al, Bone Miner; 1990, 9 (2):137; Tsai et al, J. Clin. Endocrinol Metab, 1989, 69(5):1024; Isaac et al, Horm Metab Res, 1980, 12(9) :487; Law et al, J Clin Invest, 1983, 72(3):1106; a Hulter J. Clin Hypertens, 1986, 2(4):360). Další zaznamenané formulace obsahovaly vshikulum jako například mannitol, který je přítomen buď s Iyofi 1izovaným hormonem nebo v rozředěném přenašeči. Zástupce formulací, které jsou využívány u lidských studií, obsahují přípravek lidského PTH (1-34), který po zředění obsahuje mannitol, lidské sérum albumin, které není aktivováno teplem, a kapronovou kyselinu (inhibitator proteinasa) pro zvýšení absorpce (viz Reeve et al, 1976, Calcif. Tissue Res., 21, Suppl., 469-477); přípravek lidského PTH (1-38) naředěný do solného přenašeče (viz Hodsman et al, 1991, 14(1), 67-83); a přípravek hovězího PTH (1-34) ve vodném přenašeči s pH upraveným octovou kyselinou a obsahující albumin. Existuje též přípravek. International Reference (mezinárodní reference), který obsahuje u lidského PTH lOOng hormonu v ampuli s 250 ug lidského séra albumin a 1,25 mg laktosy (1981) a u hovězího PTH obsahuje lOug Iyofi 1izovaného hormonu v 0,01 M octové kyseliny a 0,1% w/v mannitolu (viz Martindale, The Extra Pharmacoepia, The Pharmaceutical Press, London, 29.vydání, 1989 str.1338).

Komerční využití parathyroidního hormonu vyžaduje vývoj formulace, která bude přijatelná v podmínkách skladovací stability a pro jednoduchost přípravy a zředění. Vzhledem k tomu, Se se jedná o protein, který je mnohem stálejší neS běžná léčiva s malou molekulární váhou, představuje formulování parathyraidního hormonu výzvu, se kterou farmaceutický průmysl běžně nepočítá. PTH je též na rozdíl od jiných proteinů, které byly již úspěšně formulovány, zvláště citlivý na oxidaci a vyžaduje, aby z důvodů zachování bioaktivity zůstalo N-koncové pořadí neporušené.

Cílem tohoto vynálezu je poskytnout přípravek PTH, a to přípravek, který obsahuje jako aktivní složku typ dlouhého lidského PTH, který by bylo možno využívat ve farmaceutickém průmyslu.

Podstata vynálezu

Podstatou parathyroidního hormonu podle vynálezu spočívá v tom, Se sestává z množství parathyroidního hormonu, které lze využít pro léčebné účely, vehikulu, které kolyofilizuje s uvedeným hormonem tak, aby bylo dosaženo amorfního koláče, netěkavé tlumivé látky v množství, které bude dostatečné k úpravě pH přípravku na fyziologicky přijatelnou hladinu pH a vody. Vehikulem může být mannitol, tlumivou látkou citratový zdroj. Přípravek je případně ve formě lyofi 1 izovaného prášku, který obsahuje nejvýše 2X vody a hormon PTH je hormonem lidským (1-34). Pokud je vehikulem mannitol, je tlumivou látkou citratový zdroj.

Přípravek parathyroidního hormonu se skládá z parathyroidního hormonu při koncentraci v rozsahu od 25 do 250 ug/mL, mannitolu při koncentraci v rozsahu od 3 do 7X w/v, citrátavé tlumivé látky v množství, které bude dostačovat pro úpravu pH v přípravku v rozsahu od pH 3,5 do pH 6,5 a vody.

Parathyroidní hormon je lidský PTH (1-84) a přípravek je ve formě lyofi 1 izovaného prášku, který neobsahuje více než 27.

vody. Mannitol je v tomto případě v koncentraci v rozsahu od do 6%. Citrátový tlumič je přítomen v množství, které bude dostatečné pro úpravu pH přípravku na pH 5,6 až 6,4.

Jednotlivé přípravky mohou být ve formě ampulí zahrnutých případně do soupravy, kterou lze využít při formulaci injektovatelného PTH roztoku a která obsahuje nejméně jednu první ampuli s obsahem přípravku parathyroidního hormonu ve formě lyofi 1izovaného prášku a nejméně jednu druhou ampuli obsahující sterilní vodu pro zředění přípravku a instrukce pro přípravu a formulaci přípravku. Dále může souprava obsahovat zařízení pro aplikování injekce zředěného PTH roztoku.

Přípravek PTH, který lze využít ve farmaceutickém průmyslu. Tento hormonální přípravek je v souladu s jedním aspektem tohoto vynálezu, v lyofi 1izované formě, která obsahuje parathyroidní hormon, který lze využít v lékařství a který je vehikulem kolyofilizujícím s parathyroidním hormonem tak, aby vytvářel amforní koláč a netěkavou tlumivou látku v množství, které bude dostatečné pro úpravu pH přípravku na fyziologicky přijatelné pH. Hormon v přípravku je v preferovanější verzi vynálezu lidským parathyroidním hormonem, vehikulem je mannitol a tlumivou látkou je zdroj citrátu.

V souladu s dalším aspektem tohoto vynálezu je zde uveden proces získávání PTH přípravku, který se týká postupu kombinování PTH, tlumivé látky a vehikula ve vodě s tím, že výsledný roztok bude předmětem procesu lyofilizace, jehož výsledkem bude produkt obsahující méně než 2X vody.

Další aspekt tohoto vynálezu se zabývá metodou získávání formulace parathyroidního hormonu u parenterální aplikace, která obsahuje postup ředění zmrazeného přípravku ve sterilní vodě.

na základě tohoto vynálezu poskytnuta souprava, využít při léčbě a která obsahuje sterilní obsahem lyofi 1izovaného přípravku, přenašeče zředění, a instrukce, jak ředění provádět a aplikaci. Souprava může dále obsahovat zařízení likaci injekce zředěného přípravku konečným

Dále je táž kterou lze ampuli s vhodného pro instrukce k vhodné k ap uživatelem.

Přehled obrázků na výkresech

Na obrázku č.l a č.2 je zobrazen účinek skladování při 4<>C a 37'>C při stabilitě přípravků PTH tlumených na pH4 a pH6, kde je stabilita zajištěna zkouškou bioaktivity (obr.l) a analýzou SDS-PAGE (obr.č.2).

Příklad Provedení vynálezu

Vynález se vztahuje k přípravkům parathyroidních hormonů, které vykazují skladovací stabilitu v podmínkách složení a aktivity hormonů.

Přípravek obsahuje vhodný typ dlouhého lidského parathyroidního hormonu s 84 amino-kyselinou, který je získáván buď na základě rekombinace peptidovou syntézou nebo extrakcí z lidské tekutiny. V této specifikaci je lidský typ PTH uveden zkratkou hPTH ¢1-84), kde pořadí amino-kyselin je zaznamenáno Kimura et al, Biochem Biophys Res Comm, 114(2):493. Přípravek může jako alternativu dlouhého typu lidského PTH obsahovat takové homology, fragmenty nebo varianty lidského PTH, které obsahují aktivitu lidského PTH tak, jak bylo zjištěno u osteoporozy na testovaném potkanovi, a zaznamenáno Kimmel et al., Endocrinology, 1993, 32(4):1577 a do tohoto dokumentu zapracováno na základě referencí.

Parathyroidním hormonem může například být hovězí nebo prasečí typ PTH (viz Keutmann et al, Běžný výzkum kalcia regulujícího hormony, Cooper, C.W. (Ed.), 1937, University of Texas Press, Austin, pp57-63), nebo fragmenty či varianty zralých homologů PTH. Alternativy ve formě fragmentů PTH obsahují nejméně prvních 34-N-koncových zbytků jako například PTH ¢1-34), PTH (1-37), PTH (1-38) a PTH (1-41). Alternativy ve formě variant PTH obsahují náhradu 1 až 5 aminokyselin, které zvyšují stabilitu a poločas PTH, jako například náhrada zbytků methioninu při poloze 3 a/nebo 18 leucinem a další hydrofobní amino-kyselinou, která zvyšuje odolnost PTH proti oxidaci, a náhradu amino-kyselin v oblasti 25-27 amino-kyselinami necitlivými na trypsin, jako například histidin či jiná amino-kyselina, která zvyšuje odolnost PTH proti proteinasa. Tyto formy PTH jsou shrnuty pod termínem parathyroidní hormon, který je v tomto dokumentu všeobecně použ íván.

Přípravky parathyroidního hormonu jsou v souladu s tímto vynálezem k dostání ve formě prášku, který neobsahuje více než 2X vody a který je výsledkem lyofilizace sterilního vodního hormonálního roztoku, který se připravuje smícháním vybraného parathyroidního hormonu, netěkavé tlumivé látky a vehikula.

Vehikulum obsažené v přípravku slouží v průběhu lyofilizace jako kryoochranný prostředek a též jako tlumivá látka k usnadnění formulace dávkování. Tento vynález vylučuje z vehikul, které lze využít ve farmaceutickém průmyslu, cukry jako například laktosu a maltosu, a využívá pouze ta vehikula, která jsou při jejich kombinaci s vybranou tlumivou látkou schopna v průběhu lyofilizace vytvořit nekrystalický amforní koláč. Po provedení volby vehikula dle výše uvedeného bude koláč, který je výsledkem procesu lyofilizace, stejné kvality, jako je kvalita požadována u rychlého rozpouštění. Vehikula typu polyol jsou v tomto případě preferována. Hodnocení vlastností sintrování u vehikulů typu polyol prokázalo, že mannitol je zvláště vhodným vehikulem nejen pro svou schopnost vytvoření kvalitního koláče, ale též proto, že mannitol sám poskytuje roztoku PTH stabilitu.

Tlumivá látka, která je obsažena v tomto přípravku, musí být nejen využitelná ve farmaceutickém průmyslu, ale musí se též >

jednat o netěkavou tlumivou látku, t.j. látku, která není v průběhu procesu lyofilizace těkavá do té míry, do které je pH zredukována o více než 0,4 pH jednotek. U tlumivých látek, které byly používány dříve v přípravcích PTH, jako například octová kyselina, bylo zjištěno, že v průběhu procesu lyofilizace těkají při různých stupních, což vedlo nejen k nesouhlasnému produktu, ale i ke ztrátě tlumivé látky, a tím docházelo u rozředěného produktu k nesouhlasným hladinám pH. Netěkavé tlumivé látky obsažené v těchto přípravcích, jsou vybírány z látek,které jsou schopny tlumit přípravek na pH v rámci fyziologicky přijatelné hladiny pH. pH, které je fyziologicky přijatelné, je pH, které nezpůsobuje při aplikaci formulace žádné či pouze minimání potíže u pacientů, a může se tímto lišit, což závisí na způsobu aplikace.

U přípravků, které jsou před aplikací ředěny, například rozředění v zásobním injekčním roztoku, může se pH přípravku, podávaném per se, velmi lišit, např. od asi pH3 do asi pH9. V případech, ve kterých je přípravek aplikován přímo po zředění, bude přípravek PTH tlumen dle požadavku v rámci hladiny pH od 3,5 do 7,5. Vhodné netěkavé tlumiče jsou v souladu s látkami, které lze využívat ve farmaceutickém průmyslu, látkami, které tlumí pH přípravku v rámci cílové hladiny pH, a které obsahují tlumiče se základem fosfátu, nejlépe tlumiče se základem citrátu jako například citrát sodíku/ kyselina citrónová.

K dosažení přípravků parathyroidních hormonů se skladovací stabilitou bude do přípravků přidávána netěkavá tlumivá látka, která dodává konečné pH v rámci rozsahu 3,5 do 6,5, a dále bude do přípravků přidáváno vehikulum, které poskytuje konečnou koncentraci v rozsahu od 2% do 10% h/v. Ve vynálezu je pH poskytováno tlumivou látkou v rozsahu od 3,8 do 6,2, a konečná koncentrace vehikula je od 3 do 7%, t.j. 4 až 6% h/v. Nejvhodnější je využívat jako tlumivé látky citrát, např. citrát mcnosodíku/kyselina citrónová, a jako vehikula 5% mannitol h/v.

Přípravky PTH uvedené v tomto vynálezu, obsahují PTH v množství, které je účinné pro léčbu, jedná se o termín, který je používaný s odkazem na množství, která lze využít při léčení nebo při stanovení lékařské diagnózy. Určité množství parathyroidního hormonu, začleněné v přípravku, lze stanovit u zvoleného typu PTH a u předpokládaného konečného použití přípravku předem. U jedné z aplikací jsou přípravky využívány pro léčebné účely, zvláště pak pro léčení osteoporozy. Léčba osteoporozy vyžaduje aplikaci zředěného přípravku formou injekcí, zvláště podkožních injekcí, dávkováním, které ovlivňuje režim předepsané léčby, ale u lidského PTH (1-84) jsou v rozsahu od 25 gg PTH/ml injektovaného roztoku do 500 i^g/ml injektovaného roztoku na pacienta a injekce mají obsah od 0,3 do 1,3 ml. V souladu s tímto je smíchán čištěný, sterilovaný filtrovaný PTH spolu s tlumivou látkou a vehikulem tak, aby byl vytvořen vodný roztok s obsahem PTH s koncentrací v rozsahu od 25 Ljg/ml do 250 tyg/ml, nejlépe 50 l^g/ml do 15CMgg/ml. Dle požadavku je možné namísto lidského PTH (1-84) smíchat molární ekvivalenty zvláště silných forem PTH, jako například varianty a fragmenty PTH (1-84).

jedné části vynálezu jsou přípravky uvedeny ve formě, která poskytuje dávkování 50 - 150l^g lidského PTH (1-84) po zředění do asi lml (0,8 - 1,2 ml) zředěného přenašeče, ampule jsou v souladu s tímto plněny asi lmfL vodného přípravku PTH pro následnou lyofilizaci.

V preferované části vynálezu obsahuje přípravek PTH, který je předmětem lyofilizace, od 25 do 250 Z^g/mL lidského PTH (1-84), od 2 do SX mannitolu, a citrát v množství, které je schopna tlumit přípravek v rámci rozsahu od 3,5 do 6,5 pH zředění ve sterilní vodě. Ve specifických částech vynálezu je citratová tlumivá látka vmíchána v množství, které bude dostatečné k tlumení pH na 6,0 +/- 0,4.

Po získání přípravku ve formě vodného roztoku, který obsahuje požadovaná množství a koncentrace tlumivé látky, vehikula a PTH, budou jednotlivé ampule naplněny požadovaným množstvím roztoku, a ampule budou hromadně předmětem procesu lyofilizace.

Proces lyofilizace, nebo-li vymrazení, jak je běžné při formulaci, se týká procesu cyklování teploty, který je pečlivě řícen tak, aby bylo zajištěno, Se lyofilizace pokračuje jednotně k. následnému ukončení, t.j. tak, aby výsledkem byl práěek obsahující nejvýše 2X vody, nejlépe však 1,5X. Záznam, který se používá pro získání těchto lyofilizovaných přípravků PTH, bude obsahovat ampule naplněné vodným přípravkem PTH, které budou předmětem procesu lyofilizace, s nejméně dvěma různými stadii vymrazení. První stadium je prováděno tak, Se z vodného přípravku bude uvolněna nevázaná voda, aniS by došlo ke zhroucení koláče. Tohoto lze dosáhnout ochlazením vodného přípravku PTH v ampulích na teplotu produktu niSší než -30^<:>C, nejlépe na -SO^C, a poté zvyšováním a udržováním skladovací teploty na asi -ÍO^C za sníženého tlaku nejvýše 350x10 Pa, t.j. 260x10 Pa, dokud nebude všechna nevázaná voda uvolněna. Doba lyofilizace 16 hodin bude za podmínek specifikovaných v tomto příkladě, postačovat. Druhé stadium lyofilizace je určena k uvolnění vázané vody z koláče s tím, Se nedojde ke zhroucení koláče, a to použitím teploty nižší než teplota, která škodí bioaktivitě PTH. Tohoto druhého stadia lyofilizace lze dosáhnout na základě dále sníženého tlaku <50x10*Pa při -10°C po dobu 3 hodin, poté zvyšováním a udržováním teploty na 25°C, dokud nebude veškerá vázaná voda uvolněna, t.j. po dobu 12 hodin, nejlépe 16 a více hodin. Po dokončení procesu lyofilizace lze ampule uzavřít například automatickým zátkováním, vyjmout z lyofilizátoru a utěsnit hliníkovou folií.

Přípravky PTH uvedené v tomto vynálezu, jsou kompletní ve smyslu, že konečný uživatel musí přípravek, řadit výhradně ve sterilní vodě tak, aby byla vytvořena aplikovatelná formulace. Pro tento účel a v souladu s jiným aspektem tohoto vynálezu je poskytnuta souprava, kterou lze použít při léčbě, a která obsahuje nejméně jednu ampuli s obsahem lyofi 1izovaného přípravku PTH, nejméně jednu ampuli s obsahem sterilní vody pro zředění přípravku a instrukce pro zředění lyofilizovaného PTH. Souprava může dále obsahovat injekce pro aplikaci zředěné formulace určené pro konečné uživatele. V jedné části vynálezu je použita injekce - injekční jehla, např. jehla na 25 aplikací, a injekční stříkačka, schopná pojmout roztok v množství 0,5 - 5ml, t.j. 1 nebo 2 ml. Souprava může též obsahovat ampuli s obsahem více dávek PTH, a druhou ampuli s obsahem sterilní vody dostatečným k ředění výše uvedené ampule s obsahem více dávek.

Při použití čerpá konečný uživatel vodu z ampule s obsahem vody do injekční stříkačky a tuto vodu přenese do ampule s obsahem PTH, kterou smíchá a zředí lyof i 1 izovaný prášek. PTH, dokud není prášek viditelně rozpuštěn, dle potřeby může k čerpání a vypuzení směsi použít jehlu. Tento přípravek PTH má výhodu, že míchání rychlé a je ukončeno během jedné minuty, častěji však během 30 sekund. Po provedení smíchání si konečný uživatel aplikuje injekci formulace PTH způsobem a v množství, které mu předepíše lékař. V případě ampuli s obsahem více dávek by mělo být přiloženo bak.teriostatikum, formulaci, která zbyde po aplikaci každé dávky, lze pro následné použití opětovně zmrazit po dobu několika dní.

Tyto přípravky PTH lze nejen používat při léčbě, lze je též vyrábět a aplikovat při stanovení lékařských diagnóz, zvláště při stanovení diagnózy hypoparatyreobismu a pseudohypoparatyreoidismu u pacientů se sníženým obsahem vápníku v krvi. Složení přípravku PTH zůstane stejné tak jak je popsáno v tomto dokumentu, co se týká použití pro léčebné účely, s výjimkou dávky F'TH stačí intravenózně aplikovaná (1-84) nebo bioekvivalent

International Units (mezinárodních

Diagnóza je poté na hladiny moči znamenat podmínky pseudoformu.

stanovena určením

Pro tento diagnostický účel jednorázová dávka lidského PTH PTH, který se rovná 200 jednotek.) aktivity PTH. účinku aplikovaného PTH cAI*IP s tím, Se zvýšení hladiny cAMP bude pro hypoparatyreoidismus spíš než její

Přípravky PTH byly připravovány pro následnou lyofilizaci smícháním lidského PTH (1-84) jako hormonu; mannitolu jako vehikula; a citrátu jako tlumivé látky.

Prvním vadných roztoku mannitolu citrónové kyše 1iny krokem při přísad ze mannitolu by 1 (British smíchán (1) vytváření přípravků byla příprava dvou sterilního 202 h/v injikovatelného

Pharmacopeia). 202 roztok vodním roztokem kyseliny tak, aby bylo dosaženo první vodné přísady lOmM citrónové a 52 mannitolu, a (2) s vodným roztokem monohydrátu citrátu sodíku tak, aby bylo dosaženo druhé vodné přísady lOmM a 52 mannitolu. Smícháním přísad bylo poté dosaženo roztoků 52 mannitolu s upraveným pH, a to v množství dostatečném k dosažení roztoku 5% mannitolu s asi pH4 (+/0,2) roztoku a roztoku 52 mannitolu s pH 5,8 až 6,2 .

Do roztoků 52 mannitolu (pH4 a pH6) bude poté vmícháno odměřené množství lyofilizovaného lidského PTH (1-84), tato odměřená množství budou mikrobiálně vyrobena, čištěna a následně sterilována-filtrována lyofilizace. Odměřená množství PTH roztoků pH4 a pH6 52 manitolu tak, před provedením byla poté doplněna do aby vytvořila roztoky, které při plnění do ampulí s obsahem 1,1 ml_ vytvořily ampule s obsahem PTH v následujících množstvích : 100, 250, 500,

1000 a 2500.

U lyofilizace jsou roztoky s obsahem PTH pro každou připravenou koncentraci asepticky plněny buď manuálně nebo automaticky do skleněných amulí (USP, typ I) s obsahem 1,1 mL do 5mL skleněných ampulí (USP typ I) a tyto ampule budou poté naloženy na tác a vloženy do sterilizovaného lyofilizátoru, čištěného dusíkem a předem zmrazeného na - 50^<:’C. Po naložení s dobou předzmrazení 4 hodin bude lyofilizační komora evakuována snížením tlaku na 0,26mbar po dobu jedné hodiny.

Bude zahájeno první stadium lyofilizace, které se skládá z postupného oteplování z -50°C na -10°C, toto stadium trvá třicet minut a ampule jsou při této teplotě udržovány po dobu hodin. Poté bude zahájena druhé stadium lyofilizace, které se skládá z dalšího oteplování z -ÍO^C na 25*^C při dalším snížení tlaku na 0,05mbar, toto stadium trvá po dobu tří hodin a ampule jsou při této teplotě udržovány po dobu 16 hodin. Na konci druhého stadia lyofilizace je komora čištěna r x dusíkem a tlak je zvýšen na 0,85.10 - 0,95x10 Pa. Tác je poté zvednut tak, aby hrdla ampulí byla uzavřena gumovými uzávěry, poté je tác s ampulemi vyjmut a ampule jsou utěsněny hliníkovými foliemi s následkou ekvilibrací tlaku.

Ampule s obsahem lyofilizovaných přípravků PTH při různých koncentracích a s teplotě 4OC a 37'^C pro následnou intervalech 1, 2, 3, 6 a 9 provedena zředěním přípravku vody. Tohoto bylo pH4 nebo pH6 budou poté uskladněny při analýzu v různých časových měsíců. Analýza stability byla v ampuli do 1,1 mL sterilní injektováním dosaženo uzávěr, po jedné minutě ředění je roztok, provedena.

vody přes gumový vyjmut a analýza

Výsledky testů stability jsou zaznamenávány dle níže uvedeného v kontextu s různými testy prováděnými z důvodů hodnocení přípravku:

Bioakti v i ta PTH se měří použitím zkoušky na základě zjištěné buňky osteosarkomu potkana (UMR-106) PTH stimulované vytvoření adenylatcyklasy. Záznamy tohoto testu PTH jsou zaznamenány Rodan et al in J.Clin. Invest., 1983, 72:1511 a Rabbani et al in Endocrinol. 1983, 123:2709. Po devíti měsících skladování nebylo zjištěno žádné mimořádné zvýšení bioaktivity PTH při 4'^C ani 37*3 při žádné koncentraci PTH, ani při pH4 nebo pHó. Na obrázku č.l jsou zobrazeny výsledky analýzy u přípravku PTH s dávkou PTH o obsahu 1000 Ljg (přímka označuje nej lepší shodu mezi průměrnými výsledky).

Ani analýzou SD-S-PAGE zředěných přípravků PTH, která se provádí obdobným způsobem, nebylo zjištěno žádné mimořádné snížení čistoty v průběhu zkoušek skladování při pH, teplotě a skladovacích teplotách uvedených na obr.č.2. Určité snížení čistoty bylo zjištěno analýzou RP-HPLC zředěné formulace, ale pouze při vyšší skladovací teplotě 37‘^C (0,7)( snížení čistoty skladování) při 4<’C teplotě skladování nebyla analýzou fáze HPLC byla byla konstantní skladování při všech koncentracích pH a teplotách, které byly hodnoceny.

za měsíc zpětnou Immunotestem (Allegro) neporušeného PTH, která prokázáno žádné snížení, též zjištěna stabilita po celou dobu

Zbytková vlhkost v přípravku PTH byla stanovena standardní technikou Karl-Fischer a indikovala, že obsah vody všech Iyofilizovaných přípravků zůstal pod hladinou 2% a běžně na asi 12 v průběhu doby skladování.

pH po zť&děrii nevykázalo žádné mimořádné změny pH po dobu procesu lyofilizace ani dobu skladování, čímž bylo potvrzeno, že tlumivá látka se v průběhu lyofilizace nevypařuje. Přípravky tlumené pH4 zůstávají na pH 3,Saž 4,2 a přípravky tlumené pH6 zůstávají na pH 5,6 až 6,4 .

Byla též provedena zkouška rychlosti a rozsahu rozpouštění lyofilizovaných přípravků. Všechny dávky byly rozpuštěny v 1,1 ml sterilované vodě v průběhu jedné minuty při pokojové teplotě. Maximální zjištěná doba rozpuštění byla 0,5 minut u přípravků s pH4, a 0,4 minut u přípravků s pH6. Dále nebyly po zředění lyofilizovaného prášku zjištěny žádné částice ani u pH ani u skladovací teploty.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY < parathyroidního hormonu se skládá z parathyroidního hormonu, které účely; vehikulu, které kolyofi 1izuje

9 6 .XI '9 L Ol^OQ

6 0 B 9 9 lze vyučit pro 1

F í‘5 I tak, aby bylo dosaženo amorfního koláče; netěkavé

1. Přípravě množství léčebné hormonem tlumivé látky v množství, které bude dostatečné k úpravě pH přípravku na fyziologicky přijatelnou hladinu pH; a vody.
2. Přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem 1, kde zmíněným vehikulem je mannitol.
3. Formulace parathyroidního hormonu v souladu s bodem 1, kde tlumivou látkou je citratový zdroj.
4.

Formulace vehikulem parathyroidního je mannitol.

hormonu v souladu bodem 3, kde

Přípravek parathyroidního hormonu v souladu s formě lyofilizovaného prášku, který obsahuje vody.

bodem 1 ve nejvýše 2X
6. Přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem 5, ve kterém je hormon PTH hormonem lidským (1-Θ4).
7. Formulace parathyroidního hormonu v souladu s bodem 6, kde zmíněným vehikulem je mannitol

Θ. Formulace parathyroidnίho hormonu v souladu s bodem 7, ve kterém je tlumivou látkou citrátový zdroj.
9. Přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem S, kde zmíněným vehikulem je mannitol.
10. Přípravek parathyroidního hormonu, který se skládá z parathyroidního hormonu při koncentraci v rozsahu od 25 do 25 <)g/ml ;

mannitol při koncentraci v rozsahu od 3 do 7X h/v; citratová tlumivá látka v množství, které bude dostačovat pro úpravu pH v přípravku v rozsahu od pH 3,5 do pH 6,5; a voda.
11. Přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem 10, kde parathy roidn í hormon je lidským PTld (1-84).
12. Přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem 11, ve formě lyofi 1izovaného prášku, který neobsahuje více než 27. vody.
13. Přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem 12, ve kterém je přítomen mannitol v koncentraci v rozsahu 4 do 6X h/v.
14. Přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem 13, kve kterém je přítomen citrátový tlumič v množství, které bude dostatečné pro úpravu pH přípravku na pH 6 +/- 0,4.
15.Ampule obsahující přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem 1.

16.Ampule obsahuj ící přípravek parathyroidního hormonu v souladu s bodem 5. 17.Ampule souladu obsahuj ící s bodem 9. přípravek parathyroidn í ho hormonu v 18.Ampule obsahuj ící přípravek parathyroidn ího hormonu v

» souladu s bodem 12.
19.Souprava, kterou lze využít při formulaci injektovatelného F'TH roztoku, a která obsahuje nejméně jednu první ampuli s obsahem přípravku parathyroidního hormonu tak, jak je definováno v bodě 5, nejméně jednu druhou ampuli obsahující sterilní vodu pro zředění výše uvedeného přípravku, a instrukce pro přípravu a formulaci přípravku.
20.Souprava uvedená v bodě 19 může dále obsahovat zařízení pro aplikování injekce zředěného PTH roztoku.

1/3

Wtt' % • nad ' JAiOINiSVTA ₍' OHSAOlSÁlAIQbd ₍ avy o

9 6 .XI '9 l Ol^Oa

RELAtiw/ ECSO ftELATtW/ EC£V

Cfi.S t^čsíce) (M.1A

2/3

7. SDS PAGE ČlSToTA 7. SDS PAGE ČlSToTA

I 1'^ i í J/MOINiSVIA ΐ

CK3A0’S.VA9'dd ₍ • avy o f~~ \

9 5 .XI .9 l

01§0Q ? 0 H 9 9 J ° 250 qg¹—— ^x 500 t)g ° 1000 t/g o 2500Ug ^Δ 1000 qg

0W. 2A

100 »*5 §

Λ Δ _Δ

90 · o 250 pH4;37^lC y 500 Mg ^L lOQOljg o 25OO^g ^Δ 1000 ^g

1 I I I ¹ I.....i 1 I I »

0123455789

ČA£ í^ěs lee ^!

OZR. 2B

3/3

V. SDS PAGE Č/srCTA ^{% SDS PAeE} Č^lSrcrTÁ

0123456789 j ‘^d | —

[ JAIOINISVIA ₍, OHW.SÁWyyd , avy o Ϊ ~ '

9 6 Λ' ⁹ l ! οι?»» o 100x4g.pH6 x 250yg. pH6 □ 500^g,pH6 o 1000i)g.pH6

Qžg. 2C ⁰ lOQ^g.pHb x 250ug,pH6 ⁰ 500ug,pH6 o 1CÓOug,pH6 oep . 2D