FI119911B - Liikakasvusairauksien yhdistetty terapeuttinen hoito - Google Patents
Liikakasvusairauksien yhdistetty terapeuttinen hoito Download PDFInfo
- Publication number
- FI119911B FI119911B FI973023A FI973023A FI119911B FI 119911 B FI119911 B FI 119911B FI 973023 A FI973023 A FI 973023A FI 973023 A FI973023 A FI 973023A FI 119911 B FI119911 B FI 119911B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- combination according
- nucleic acid
- combination
- anticancer agent
- cells
- Prior art date
Links
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title abstract 2
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 title abstract 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 62
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 60
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 60
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 27
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 claims abstract description 12
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 claims abstract description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 43
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 25
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 23
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 20
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims description 18
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 12
- -1 taxides Chemical compound 0.000 claims description 12
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 11
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 10
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 claims description 9
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 7
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 6
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 6
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 6
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 claims description 5
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 claims description 5
- 230000003439 radiotherapeutic effect Effects 0.000 claims description 5
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 5
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims description 4
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 4
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 claims description 4
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 4
- 208000002267 Anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis Diseases 0.000 claims description 3
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims description 3
- 108700025695 Suppressor Genes Proteins 0.000 claims description 3
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 claims description 3
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 claims description 3
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 claims description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 2
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 2
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 claims 2
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 claims 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 claims 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 125000002456 taxol group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 56
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 12
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 11
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 9
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 229940063683 taxotere Drugs 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 6
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 6
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 6
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 5
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 4
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- CIUQDSCDWFSTQR-UHFFFAOYSA-N [C]1=CC=CC=C1 Chemical compound [C]1=CC=CC=C1 CIUQDSCDWFSTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 3
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- WCYWZMWISLQXQU-UHFFFAOYSA-N methyl Chemical compound [CH3] WCYWZMWISLQXQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700042226 ras Genes Proteins 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 2
- 102100030708 GTPase KRas Human genes 0.000 description 2
- 101710113436 GTPase KRas Proteins 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101150040459 RAS gene Proteins 0.000 description 2
- 108700025701 Retinoblastoma Genes Proteins 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 2
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 150000004579 taxol derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N (2s)-2,5-bis(3-aminopropylamino)-n-[2-(dioctadecylamino)acetyl]pentanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CC(=O)NC(=O)[C@H](CCCNCCCN)NCCCN)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N 0.000 description 1
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 1
- 125000006432 1-methyl cyclopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C1(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- ZLRFPQPVXRIBCQ-UHFFFAOYSA-N 2-$l^{1}-oxidanyl-2-methylpropane Chemical compound CC(C)(C)[O] ZLRFPQPVXRIBCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004198 2-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(F)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000002941 2-furyl group Chemical group O1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000175 2-thienyl group Chemical group S1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- USCSRAJGJYMJFZ-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-1-butyne Chemical compound CC(C)C#C USCSRAJGJYMJFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001541 3-thienyl group Chemical group S1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000001255 4-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1F 0.000 description 1
- 125000004172 4-methoxyphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(OC([H])([H])[H])=C([H])C([H])=C1* 0.000 description 1
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010002913 Asialoglycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 101150044789 Cap gene Proteins 0.000 description 1
- 102100038909 Caveolin-2 Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000007317 Farnesyltranstransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010007508 Farnesyltranstransferase Proteins 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 102000018898 GTPase-Activating Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010027920 GTPase-Activating Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000740981 Homo sapiens Caveolin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000876829 Homo sapiens Protein C-ets-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000713862 Moloney murine sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241001045988 Neogene Species 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 102100035251 Protein C-ets-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108050002653 Retinoblastoma protein Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000713896 Spleen necrosis virus Species 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 125000003302 alkenyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004466 alkoxycarbonylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005735 apoptotic response Effects 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- GNDPAVKYAUIVEB-NTEUORMPSA-N furonazide Chemical compound C=1C=COC=1C(/C)=N/NC(=O)C1=CC=NC=C1 GNDPAVKYAUIVEB-NTEUORMPSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000012248 genetic selection Methods 0.000 description 1
- 231100000024 genotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000003818 metabolic dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 101150091879 neo gene Proteins 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005959 oncogenic signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 125000003854 p-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Cl 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 101150066583 rep gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Oncology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Liikakasvu sairauksien yhdistetty terapeuttinen hoito
Esillä oleva keksintö koskee liikakasvupatologioi-den terapian aluetta. Keksintö koskee tarkemmin ottaen 5 liikakasvupatologioiden uutta hoitomuotoa, joka perustuu kahden tyyppisten terapeuttisten aineiden yhdistettyyn käyttöön,
Spesifisernmin esillä oleva keksintö koskee liika-.kasvupatologioiden uutta hoitomuotoa, joka perustuu gee-10 nien, jotka salpaavat onkogeenisiä solusignallpintireit-tej ä, ja kemoterapeuttisten aineiden tai radioterapian yhdistettyyn käyttöön. Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdistetyillä hoidoilla on erityisen tehokkaita vaikutuksia liiallisesti lisääntyvien solujen tuhoamiseksi suh-15 teellisen pieninä: annoksina. Esillä oleva keksintö antaa täten käyttöön liikakasvupatologioidan (syövät:, uudelleen-ahtautuminen) uuden hoitomenetelmän, joka on erityisen tehokas ja jolla on rajoitetusti sivuvaikutuksia.
Huolimatta tällä alueella suoritetusta hyvin mer-20 kittävästä edistymisestä syöpien hoitoon tällä hetkellä käytettävien menetelmien tehokkuus on yhä rajoitettu, Radioterapialla ja kemoterapialla on varmastikin hyvin suotuisa vaikutus syöpien kehitykseen. Kuitenkin akuutti ongelma syöpien hoidossa on tiettyjen primaaristen kas-25 vainten epäherkkyys ja/tai resistenttien kasvaiiisolujen ilmaantuminen ensimmäisen tehokkaiden hoitojen syklin jälkeen samalla kertaa sekä radio- että kemoterapiassa.
Lukuisissa tutkimuksissa on pyritty selvittämään molekyylimekanismeja, jotka voivat olla näiden tapahtumien 30 lähtökohtana. Yleensä ottaen tutkimukset ovat koskeneet I
tapaa, jolla kemoterapeuttiset aineet menevät soluihin, ja tapaa, jolla ne reagoivat solukohteidensa kanssa [Chin et ai. , Ädv. Cancer Res. 60 (1993) 157 - 18 0 ; Chabner ja
Meyers kirjassa "Cancer/Principles and Practices of Onco-35 logy", De Vita et ai. (toim.), J.B. Lippencott Co., 1989, 2 ss, 349 - 395]. Esimerkiksi geenin mdrl korkeat i1menty-mistasot voivat rajoittaa erilaisten kemoterapeuttisten aineiden solunsisäistä pitoisuutta ja ne voisivat myötävaikuttaa monilääkeresistenssin ilmentymiseen (Chin et 5 ai., suora).
Resistenssin kemoterapialle ja radioterapialle mekanismien täydellisempi ymmärtäminen käy näiden aineiden indusoimien solukuolemaprosessien paremman tuntemisen kautta. Koska ionisoivat säteilyt ja lukuiset syöpävastaito set aineet indusoivat vaurioita DNA.ssa, näiden terapeuttisten aineiden vaikutuksen on katsottu johtuvan niiden genotoksisesta kyvystä. Kuitenkaan näiden aineiden aiheuttamat soluvauriot eivät riitä selittämään täydellisesti niiden terapeuttista aktiivisuutta Chabner ja Meyers, sup-15 ra) . Viime vuosina ohjelmoidun kuoleman tai apoptoosin mekanismien tutkiminen ja ymmärtäminen ovat tehneet mahdolliseksi harkita uudestaan mekanismeja, joilla kasvain-solut saavat tai menettävät herkkyytensä sytptöksisxlle aineille. Lukuisat toksiset stimulantit indusoivat apop-20 toosin myös annoksina, jotka ovat riittämättömiä indusoimaan aineenvaihdunnallisia toimintahäiriöitä. Kyky indusoida apoptoöttinen vaste kasvainsoluissa voisi määrätä hoidon tehokkuuden.
Hakija on nyt kehittänyt uuden hoitomenetelmän:, 25 joka on erityisen tehokas liikäkasvusolujen tuhoamiseksi. Kuten edellä on mainittu, keksinnön mukainen hoitomuoto perustuu oleellisesti kahden tyyppisten terapeuttisten aineiden yhdistettyyn käyttöön: geenien, jotka sälpäävat onkogeenisiä solusignallointireittejä, ja kemoterapeuttis-30 ten ja/tai radioterapeuttisten aineiden. Esillä oleva keksintö on itse asiassa seurausta näiden kahden ainetyypin yhdistettyyn käyttöön liittyvän erityisen merkittävän sy-nergistisen vaikutuksen osoittamisesta.
Esillä olevan keksinnön ensimmäinen kohde koskee 35 siis yhden tai useamman nukleiinihapon, jotka inhiboivat 3 ainakin osittain onkogeenisiä solusignallointireittejä, ja syöpävastaisen terapeuttisen aineen lääkkeellistä yhdistelmää samanaikaiseen, erilliseen tai ajallisesti jaksotettuun käyttöön liikakasvupatologioiden hoitamiseksi.
5 Kuten edellä on mainittu, keksintö perustuu oleel lisesti synergistisen vaikutuksen osoittamiseen tiettyjen geenien tuotteen ja syöpävastaisen terapian aineiden välillä. Tämä yhdistetty käyttö tuottaa tehokkaampia vaikutuksia aineiden matalampina annoksina. Tämä keksintö antaa 10 siten erityisen edullisen keinon liikakasvupatologioiden hoitamiseksi.
Kuten jäljempänä mainitaan, valitun geenin ja kemo-tai radioterapeuttisen aineen mukaan esillä olevan keksinnön mukaisen yhdistetyn hoidon kahta koostumusosaa voi-15 daan käyttää samanaikaisesti, erillisesti ja ajallisesti jaksotetusti. Kun kyseessä on samanaikainen käyttö, näitä kahta ainetta inkuboidaan solujen kanssa tai annetaan potilaalle samanaikaisesti. Esillä olevan keksinnön tämän suoritusmuodon mukaan kyseiset kaksi ainetta voidaan val-20 misteliä erikseen ja: sekoittaa sitten välittömästi ennen antoa yhdessä. Tavallisemmin ne annetaan samanaikaisesti mutta erikseen. Erityisesti kyseisten kahden aineen anto-tiet voivat Olla erilaiset. Toisessa suoritusmuodossa kyseiset kaksi ainetta annetaan ajallisesti jaksotetusti.
25 Esillä olevan keksinnön piirissä käytetty nukleii nihappo voi olla deoksiribonukleiinihappo (DNA) tai ribo-nukleiinihappo {RNÄ) . DNA-sekvensseistä kyseessä voivat, olla komplementaarinen DNA (eDNA) , genomi-DNA .(gDNA) , hybridisekvenssi tai synteettinen tai puolisynteettinen 30 sekvenssi. Lisäksi kyseessä voi olla nukleiinihappo, jota j on kemiallisesti modifioitu esimerkiksi sen resistenssin nukleaaseille, sen tunkeutumisen tai sen Sölukohdentuimisen, sen terapeuttiseh tehokkuuden jne. parantamiseksi.
Nämä nukleiinihapot Voivat olla ihmis-, eläin-, kasvi-, 3 5 bakteeri-, virus- tai synteettistä jne. alkuperää. Ne 4: voidaan saada millä tahansa alan ammattilaiselle tutulla tekniikalla, ja etekin seulomalla pankkeja, syntetisoimalla kemiallisesti tai edelleen sekamenetelmillä mukaan lukien pankkeja seulomalla saatujen sekvenssien kemiallinen 5 tai entsymaattinen modifiointi. Kuten jäljempänä mainitaan, ne voidaan lisäksi sisällyttää vektoreihin, kuten plasmidi-, virus- tai kemiallisiin vektoreihin.
Kuten edellä on mainittu, esillä olevan keksinnön mukainen nukleiinihappo on nukleiinihappo, joka kykenee 10 inhiboimaan ainakin osittain onkogeenisiä solusignalloin-tireittejä. Näitä nukleiinihappoja kutsutaan seuraavassa ilmaisulla "onkogeenien neutraloinnin solunsisäiset elementit" eli EINO. Solun transfiormoituraiseen johtavat signal lointireitit ovat moninaiset. Soluiisäänt.ymiseen liit-15 tyy monilukuinen määrä tekijöitä, kuten membraaniresepto-rit CG-prpteiinit), onkogeenit, entsyymit {proteiinit ki-naasit, färnesyylitransferaasit, fosfolipaasit jne.), nuk-leosidit (ATP, AMP, GDP, GTP jne.'), aktivaatiotekijät [guanosiinivaihtgtefcijät (GRF, GAP, RAF jne.), transkrip-20 tioanaäliset tekijät jne.]. Häiriöt näiden eri tekijöiden esimerkiksi rakenteessa, aktiivisuudessa, konformaatiossa jne. on yhdistetty soluiisääntymisen säätelyhäiriÖilmiöi-hän. Täten 90 % haiman rauhaa syövistä käsittää mutatoitu- \ heen onkogeenin Ki-ras 12. koöonina: EÄlmoguera et ai. .
25 Cell 53 (1988) 549], Samoin mutatoituheen ras-geenin läs näolo on osoitettu paksusuolen rauhaasyövissä ja kilpirau-haSsyövisSä (50 %) tai keuhkosyövissä: ja myeloidileukemioissa (30 %, Bos, J.L., Cancer Res, 49 (198:9) 4682].
Nykyään on identifioitu lukuisia muita onkogeenejä (myc, 3 0 fos, jun, ras, myb, erb, etc) , joiden mut a toi tulleet muodot vai kiittävät, olevan vastuussa solulisääntymisen säätelyhäiriöistä. Niinikään p53 i.n mutatoituneita muotoja havaitaan lukuisissa syövissä, kuten etenkin paksusuolen-peräsuolen-syövi s.sä, rintasyövissä, keuhkosyövissä, mahasyövissä, 35 ruokatorven syövissä, B-lyrofoomissa, munasarjasyövissä, 5 rakkosyövissä jne. Keksinnön piirissä käytetyt nukleiinihapot ovat nukleiinihappoja, jotka kykenevät puuttumaan yhteen näistä solulisääntymiseen liittyvistä tekijöistä ja inhiboimaan ainakin osittain sen aktiivisuuden. Keksinnön 5 mukaisten nukleiinihappojen kohteena ovat edullisesti tekijät, jotka esiintyvät ensisijaisesti tai spesifisesti solulisääntymisen säätelyhäiriöissä (aktiiviset onkpgee-nit, kasvainten suppressorin mutantti jne.),
Keksinnön piirissä käytetyt nukleiinihapot voivat 10: olla eri tyyppiä. Kyseessä ovat edullisesti: ant i sense-nukleiinihapot, oligoribonukleotidit, jotka kykenevät kiinnittämään suoraan onkogeenisiä kohdeproteiinej a niiden neutraloimi-seksi (ligandi-RNA), 15 nukleiinihapot, jotka koodittavat proteiineja, joilla on negatiivinen dominant tiluonne ja jotka kykenevät oiigomerisoitumaan tuottaen täten inaktiivisen kompleksin, nukleiinihapot, jotka koodittavat sölunsisäisiä vasta-aineita (esimerkiksi vasta-aineesta peräisin olevia 20 yksiketjuisia vaihtuvia fragmentteja), jotka kohdistuvat vastaan onkogeenistä proteiinia (ScFv), kasvaimia suppressoivat geenit.
Esillä olevan keksinnön ensimtiäisen edullisen suoritusmuodon mukaan, nukleiinihappo on DNA tai RNA, joka 25 koodittaa polypeptidiä tai proteiinia, joka inhiboi aina- \ kin osittain onkogeenisiä solusignallointireitteja. Tarkemmin ottaen polypeptidi tai proteiini valitaan negatiivisistä dominanteista, ScFv:eistä ja kasvainsuppressöreis-ta.
30 Edelleen edullisemmin negatiivinen dominantti on GAP-proteiinin, Gbr3-3-proteiinin tai Ets-proteiinimutant-tien N-pääalueen rakenneosa. Mitä tulee ScFv:hen, kyseessä on edullisesti ScFv, joka kohdistuu vastaan mut at o i t unu 11 a ras-proteiinia tai Vastaan GAP-tekijää. Kasvaimia suppres-
S
6 soiva proteiini on edullisesti p53, Rb, waf 1, p21, DCC tai MTS.
Esillä olevan keksinnön toisen edullisen suoritusmuodon mukaan nukleiinihappo on DNA, joka koodittaa 5 RNÄ;ta, joka inhiboi ainakin osittain onkogeenisiä solu-signallointireittejä. Tarkemmin ottaen RNA on kohdenukle-iiriihappoon nähden komplementaarinen RNA, joka kykenee sälpaamaan kohdenukleiinihapon transkription ja/tai translaation (antisense-RNÄ); ribotsyymi tai ligandi-RNA.
10 Edullinen esimerkki on antisense-ENA anti-Kiras.
Edelleen esillä olevan keksinnön edullisen suoritusmuodon mukaan nukleiinihappo on antisense-oligonukleo-fcidi, jota on mahdollisesti modifioitu kemiallisesti. Kyseessä voivat olla erityisesti oligonukleotidit, joiden 15 fosfodiesterirunkoa on modifioitu kemiallisesti, kuten esimerkiksi oligonukleotidit fosfonaatit, fosfotriesterit, fosforamidaatti ja fosforotioaatti, joita kuvataan esimerkiksi WO-patentt ihakemusj ulkai sus s a 94/08 003. Samoin kyseessä voivat olla alfa-oligonukleotidit, tai oligonukleo-20 tidit, jotka on konjugoitu akryloivien aineiden kaltaisiin aineisiin.
Esillä olevan keksinnön erityisen edullisessa suoritusmuodossa nukleiinihappo on sisällytetty vektoriin.
Käytetty vektori voi olla kemiallista alkuperää (liposomi, 25 nanopartikkeli, peptidikömpleksi, kationinen lipidi jne.}, virusalkuperaa (retrovirus, adenovirus, herpes-virus, AÄV, lehmänrokkovirus jne.) tai plasmidialkuperää. Esillä olevassa keksinnössä käytetty nukleiinihappo voidaan koostaa annettavaksi paikallisesti, suun kautta, ruoansulatuskana-30 van Ulkopuolisestl, nenänsisäisesti, laskimonsisäisesti, lihaksensisäisesti, ihonalaisesti, silmänsisäisesti, ihon i kautta jne. Edullisesti nukleiinihappoa käytetään ruiskeena annettayassa muodossa. Se voidaan siten sekoittaa mihin tahansa ruiskeena annettavaan koostumukseen farmaseutti-35 sesti hyväksyttävään nestemäiseen kantoaineeseen, etenkin 7 annettavaksi ruiskeena suoraan hoidettavaan kohtaan. Kyseessä voivat olla erityisesti steriilit, isotooniset liuokset, tai kuivat, etenkin kylmäkuivatut, koostumukset, joista lisäämällä, tapauksesta riippuen steriloitua, vettä 5 tai fysiologista seerumia on mahdollista rekonstituoida ruiskeena annettavia liuoksia. Nukleiinihapon suora ruiske potilaan kasvaimeen on kiinnostava, koska tällöin se mahdollistaa terapeuttisen vaikutuksen tiivistämisen sairaisiin kudoksiin. Käytetyt nukleiinihappoannokset voidaan 10. sovittaa eri parametrien funktiopa* ja etenkin käytetyn geenin, vektorin, antomuodon, kyseessä olevan patologian täi edelleen hoidon halutun keston funktiona.
Syöpävastäinen terapeuttinen aine, jota käytetään esillä olevan keksinnön suorittamiseksi, voi olla mikä 15 tahansa aine, jota alan ammattilainen tällä hetkellä käyttää kemoiterapiassä tai radioterapiassa. Erityisesti kyseessä voi olla cis-platina, taksoidi, etoposidi, TNF, adriamysiini, kamptotesiini, mitöqsimyrkky (vinka-alkaloidi, navelleiini jne.), röntgen-, UV-säteet jne. Erityisen 20 kiinnostavia tuloksia on saatu käytettäessä kemoterapeut- j tisena aineena taksoidia. Syöpävastainen kemoterapeuttinen aine annetaan tavanomaisia teitä. Yleensä se annetaan j ruoansulatuskanavan u1kopuo1i s es t i.
Kuten edellä on mainittu, kyseisiä kahta ainetta 25 voidaan käyttää samanaikaisesti, erikseen tai ajallisesti jaksotetusti. Keksinnön erityisen edullisessa suoritusmuodossa nukleiinihappo annetaan ensin, minkä jälkeen sitten kun solut voivat ilmentää nukleiinihapon, annetaan syöpävastainen terapeuttinen aine.
30 Esillä olevan keksinnön erityisen edullinen suori tusmuoto koskee yhden tai useamman kasvaimia suppressoivan geenin ja taksoidin lääkkeellistä yhdistelmää käytettäväksi samanaikaisesti, erikseen tai ajallisesti jaksotetusti liikakasvupatologioiden hoitamiseksi. Edelleen edullisem- 8 min suppressorigeeni koodittaa p53-proteiinin villimuotoa tai proteiinia wafl {p21.).
Esillä oleva keksintö antaa siten käyttöön erityisen tehokkaan menetelmän liikaa lisääntyvien solujen tu-5 hoamiseksi. Sitä voidaan käyttää in vitro tai ex vivo in- kuboimalla soluja yhden tai useamman nukleiinihapon ja kemoterapeuttisten aineiden läsnä ollessa. Tässä suhteessa keksintö koskee myös menetelmää liikaa lisääntyvien solujen tuhoamiseksi, jonka menetelmän mukaan mainitut solut 10 tai osa niistä saatetaan kosketuksiin edellä määritellyn mukaisten nukleiinihapon ja kemoterapeuttisen aineen kanssa.
Esillä olevaa keksintöä käytetään edullisesti in vivo liikaa (eli epänormaalisti) lisääntyvien solujen tu-15 hoamiseksi. Sitä voidaan siten käyttää kasvainsolujen tai suonen seinän sileälihassoluj en (uudelleenahtautuminen) tuhoamiseksi. Se sopii aivan erityisen hyvin syöpien hoitoon, joihin liittyy aktivoitunut onkogeeni. Esimerkkeinä voidaan mainita paksusuolen rauhassyövät, kilpirauhassyö-20 vät, keuhkosyövät, myeloidileukemiat, paksusuolen-peräsuo-lensyövät, rintasyövät, keuhkosyövät, mahasyövät, ruokatorven syövät, B-lymfoomat, munasarjasyövät, rakkosyövät, gliqblastoomat jne.
Antisense-nukleiinihappojen käyttö 25 Kohdegeenien ilmentymisen säätely antisense-nukle iinihappojen avulla on terapeuttinen lähestymistapa, jonka kehitys on kasvussa. Tämä lähestymistapa perustuu nukleiinihappojen kykyyn hybridisoitua spesifisesti toisen nukleiinihapon 'komplementaarisiin alueisiin, ja inhiboida täten 30 spesifisesti määrättyjen geenien ilmentyminen. Tämä inhi-bitio voi koskea joko translaatiota tai transkriptiota- Äntisense-nukleiinihapot ovat nukleiinihappösek-venssejä,; jotka kykenevät hybridi soi tumaan selektiivisesti ko.hdescsiuj.en lähetti-RNÄ-sekvensseihin niiden translaation 3 5 proteiiniksi inhihoimiseksi, Nämä nukleiinihapot muodosta- 9 vat kohde -TnRNÄ: n kanssa paikallisesti kaksisäikeisiä alueita tyyppiä RNA/mRNA tai myös DNA/mRNÄ tavanomaisen Wa t s on-Cri ck-vuorovaikutuksen välityksellä. Kyseessä voivat olla esimerkiksi synteettiset oligonukleotidit, jotka 5 ovat pienikokoisia ja komplementaarisia solu-mRNA.-sekvens-seihin nähden ja jotka viedään kohdesoluihin. Tällaisia oligonukleotidejä kuvataan esimerkiksi SP-patenttijulkaisussa 92 574. Kyseessä voivat olla myös DNA-sekvenssit, joiden ilmentymisessä kohdesolussa muodostuu solu-mRNA-10 sekvensseihin nähden komplementaarisia RNA-sekvenssejä. Tällaisia sekyenssejä kuvataan esimerkiksi EP-patenttijulkaisussa 140 308.
Nyttemmin on löydetty uuden tyyppisiä nukleiinihappoja, jotka kykenevät säätelemään kohdegeenien ilmentymis-15 tä. Nämä nukleiinihapot eivät hybridisoidu solu-mRNA-sekvensseihin vaan suoraan kaksisäikeiseen genomi-DNA:han. Tämä uusi lähestymistapa perustuu sen osoittamiseen, että tietyt nukleiinihapot kykenevät olemaan spesifisesti vuorovaikutuksessa kakso.i.sheeliksi-DNA:n suuressa poimussa, 2Q jolloin muodostuu paikallisesti kolmoisheeliksejä, mikä johtaa kohdegeenien transkription inhibitioon. Nämä nukleiinihapot tunnistavat selektiivisesti kaksoisheeliksi-DNA:n öligöpuriinioiigopyrimidiinisekvenssien tasolla, eli alueiden tasolla, joilla on öligöpuriinisekvenssi yh-25 tenä säikeenä ja oiigopyrimidiinisekvenssi komplementaarisena säikeenä ja jotka muodostavat paikallisesti kolmois-heeliksin. Kolmannen säikeen (oligonukleotidi) emäkset muodostavat vetysiltoja (Hoogsteen- tai käänteiset Hoog-steen-sidokset) Watson-Cricfc-emasparien puriinien kanssa. 30 Tällaisia nukleiinihappoja kuvaa etenkin Helene julkaisussa Anti-Cancer Drug Design 6 (1991) 569.
Esillä olevan keksinnön mukaiset anti sense-nukleiinihapot voivat olla DNA-sekvenssej ä, jotka koodittavat antisense-RNÄ-tuotteita tai ribotsyymejä, Näin tuotetut 35 antisense-RNÄ:t voivat olla vuorovaikutuksessa kohde- 10 mRNA:n tai kohdegenomi - DNA: n kassa muodostaen tämän kanssa kaksois- tai kolmoisheeliksejä. Samoin voivat kyseessä olla antisense-sekvenssit (oligonukleotidit), joita on mahdollisesti modifioitu kemiallisesti ja jotka kykenevät 5 olemaan vuoroValkutuksessa suoraan kohdegeenin tai kohde-RNÄ:n kanssa.
Edullisesti keksinnön mukaiset antisense-sekvenssit kohdistuvat vastaan onkogeenejä tai aktivoitujen onkogee-nien spesifisiä alueita, erityisesti vastaan onkogeeniä 10 ras,
Ligandi-RNA- sekvenssien käyttö
Ligandi-RNA: t ovat pienikokoisia oligoribonukleoti-dejä, jotka ovat hyvin spesifisiä ja joilla on hyvin korkea affiniteetti annetun kohteen, etenkin protelinikoh-15 teen, suhteen. Tällaisten ligandi-RNA-sekvenssien valmistusta ja identifiointia kuvataan etenkin WO-patenttihake-musjulkaisussa 91/19 813. Esillä olevan keksinnön erityisen suoritusmuodon mukaan on mahdollista liittää proteiinille Ki-ras spesifinen pieni RNA, joka ilmennetään so-20 luissa sopivan virus- tai ei-virusvektorin avulla, kuvat tuihin .kemoterapeuttisiin tai radioterapeuttisiin aineisiin.
Negatiiviset dominant!t
Negatiivinen dominantti on onkogeenisen signalloin-25 tireitin polypeptidiantagonisti. Tämä antagonisti puuttuu asiaan, kun pplypeptidi on asettunut kosketuksiin onkogeenisen signalloinnin avainelementtiin, ja ryhtyy kilpailemaan polypeptidin kanssa, jota luonnollisesti käytetään solussa tähän signallointiin. Käytetty polypeptidiäiitago-30 nisti jäljittelee hyvin usein luonnollista polypeptidiä, mutta on vailla domeeneja, jotka mahdollistavat cnkogeeni-sen signaalin lisääntymisen kauttaan.
Edullisina negatiivisina dominantteina esillä olevan keksinnön suorittamiseksi voidaan mainita nukleiiniha- 11 potf jotka koodit tavat GAP-proteiinin NH2-päädomeenia, pro-teiinia Grb3-3 tai ETS-proteiinien mutatoitunsita muotoj a.
WQ-patenttihakemnsjulkaisussa 94/03 597 on osoitettu, että proteiinin GAP-Ras NH2-päädomeenin hyvin runsas 5 ilmentyminen voisi spesifisesti salvata solujen tumorige-nisiteetin, jotka ovat transformoituneet seurauksena muta-toi tuneen ras-geenin ilmentymisestä. Nyt kyseessä olevan patenttihakemuksen esimerkissä 1 osoitetaan nyt, että do-meenin GAP(170-702) hyvin runsas ilmentyminen indusoi ih-10 missolujen apoptoosin ei-pienisolukeuhkosyövässä (H460) . Esimerkissä 2 osoitetaan lisäksi, että rakenteen GAP(170702) indusoiman apoptoottinen vaikutus lisääntyy hyvin huomattavasti lisättäessä ihmiskasvainsolujen kasvualustaan tuotteita kuten cis-platinaa, komptotesiinia 15 tai taksoteeriä näiden tuotteiden pitoisuuksina, jotka eivät vaikuta solujen elinkelpoisuuteen.
Esillä olevan hakemuksen esimerkissä 1 kuvataan lisäksi geenin grb3-3 aktiivisuutta H460-soluissa. Grb3~3:n sekvenssiä ja oletettua funktiota kuvataan jul-20 kaisussa Science (1994). Esimerkissä 2 osoitetaan samoin, että geenin Grb3-3 siirron indusoima apoptoottinen vaikutus lisääntyy hyvin huomattavasti lisättäessä ihmiskasvainsolujen kasvualustaan tuotteita kuten cis-platinaa, kamptotesiinia tai taksoteeriä näiden tuotteiden pitoi-25 suuksina, jotka eivät vaikuta solujen elinkelpoisuuteen.
Nämä esimerkit osoittavat selvästi, että erilaisia kemoterapeuttisia aineita voidaan tehokkaasti yhdistää apoptoosin indusöintistrategioihin geenisiirron välityksellä .
30 ScFv
ScFv:t ovat molekyylejä, joilla on vasta-aineeseen verrattavia sitoutumisominaisuuksia ja jotka ovat aktiivisia solunsisäisesti. Kyseessä ovat erityisemmin molekyylit, jotka koostuvat peptidistä, joka vastaa vasta-aineen 35 kevyen ketjun vaihtuvan alueen sitoutumiskohtaa, liitetty- 12 nä peptidiliittäjällä peptidiin, joka vastaa vasta-aineen raskaan ketjun vaihtuvan alueen sitoutumiskohtaa. Hakija on osoittanut, että tällaisia ScFv:eitä voitiin tuottaa in vivo geenisiirrolla {vrt. WP-patenttihakemusjulkaisu 5 94/29 466).
Tarkemmin ottaen tässä hakemuksessa osoitetaan, että on mahdollista neutraloida onkogeenisiä proteiineja ilmentämällä eri soluosastoissa ScFv:eitä. Esillä olevan keksinnön erään suoritusmuodon mukaan käytetään nukleiini-10 happoa, joka mahdollistaa ScFv:n solunsisäisen tuotannon, joka neutraloi ras-proteiinien transformointikyvyn, yhdistettynä .kemoterapeuttiseen aineeseen. Tällainen yhdistäminen tuottaa merkittäviä synergistisiä vaikutuksia (vrt. esimerkki 2}.
15 Kasvainsuppressorit
Esillä olevan keksinnön piirissä käyttökelpoisista kasvaimia suppressoivista geeneistä vöidään mainita erityisemmin geenit p53, p2:l, Rb, raplA, DDC, WAF j a MTS.
Tarkemmin ottaen käytetään geenejä p53, Rb tai Waf.
2G p53-geeni koodittaa 53 kDa:n tumaproteiinia. Tämän geenin deleetiolla ja/tai mutaatiolla mutagenisoitu muoto liittyy useimpien ihmissyöpien kehitykseen [Baker et ai., Science 244 (1989) 217] . Sen mutagenisoidut muodot kykenevät samoin olemaan yhteistoiminnassa ras-onkogeenien kans-25 sa hiirifibroblastien transformoimiseksi. p53:ea kooditta-va villigeeni inhiboi sitä vastoin transformaatiopesäkkei-den muodostumista jyrsijöiden fibroblasteissa, jotka on transfektöitu erilaisilla onkogeenisillä yhdistelmillä. Tuoreet tulokset korostavat sitä, että p53-proteiini itse 30 voisi olla transkriptiotekijä ja stimuloida muiden kasvainta suppressoivien geenien ilmentymistä. Lisäksi vast'ikään on osoitettu p53:n vaikutus suonen sileän lihaksen soluihin [Epstein et ai., Science 151 (1994)3·
Geeni Rb määrittää noin 927 aminohapon tumafosfo-35 proteiinin synteesin [Friend et ai., Nature 323 (1986) 13 643] , jonka tehtävänä on estää solujen jakautuminen saattamalla ne menemään lepotilaan. Geenin Rb inaktivoidut, muodot on osoitettu syyksi eri kasvaimiin, ja etenkin verkkokalvon pahanlaatuiseen glioomaan tai mesenkyymisyö-5 vät, kuten luu-syövät. Viemällä tämä geeni takaisin kas-vainsoluihin, joissa se inaktivoitu!, tuottaa paluun normaaliin tilaan ja aiheuttaa tumorigenisiteetin menetyksen [Huang et. ai-. . Science 242 (1988) 1563] . Nyttemmin on osoitettu, että normaali Rb-proteiini tukahduttaa proto-10 onkogeenin c-fos ilmentymisen, mutta sen mutatoituneet muodot eivät tukahduta mainittua, jolloin tämä geeni on välttämätön soluiisääntymiseile.
Geenejä WÄF ja MTS ja niiden kasvainvastäisiä ominaisuuksia on kuvattu kirjallisuudessa [Cell 75 (1993) 15 817; Science 264 (1994) 436] .
Esimerkissä 3 esitetään yhden tyyppinen tehokas yhdistelmä taksolijohdannaisen ja p53-geenin välillä. Taksoli indusoi apoptoosin erilaisissa kasvainsoluviljelmissä ("Proceedings of the American Association for Cancer 20 Research", osa 35, maaliskuu 1994, Bhalla et ai., s. 306, Seiter et ai.. s. 314, Saunders et ai., s. 317). p53 laukaisee apoptoosin eri solutyypeissä. Olemme nyt pystyneet osoittamaan, että taksolijohdannaisen ja p53:n yhdistelmä indusoi ihmiskasvainsolujen apoptoosin. Etenkin solujen 25 H460 erityisiä klooneja, jotka vastustavat p53:n Vaikutus ta, on viljelty taksoteerin kasvavien annoksien läsnä ollessa. Esimerkissä 3 osoitetaan seivästi, että solut kuolevat seurauksena käsittelystä taksoteerillä pitoisuuksina, jotka ovat täysin tehottomia soluihin, jotka eivät 30 ilmennä villi-p53:ea.
Villi-p53:n hyvin runsas ilmentyminen indusoi Waf 1:n ["Wild-type p53 Activated Fragment", Cell 75 (1993) 817] tai edelleen p21:n [Nature 366 (1993) 701] . Waf l ilmaantuu soluihin, jotka ovat pysähtyneet Gl-faasiin tai 35 apoptoosiin seurauksena villi-p53:n hyvin runsaasta ilmen- 14 tyrnisestä> mutta ei soluihin, jotka ovat pysähtyneet G1:een tai apoptoosiin p53:sta riippumattomalla tavalla f Cancer Res. 54 (1994) 1169] , Waf 1 vähentää kasvainsolu-jen kasvua yhtä tehokkaasti kuin villi-p53. Waf 1 -geenin 5 ja taksa!ijohdannaisen yhdistetty käyttö indusoi samoin synergistisen vaikutuksen liiallisesti lisääntyvien solu-j en tuhoamiseen.
Syöpävastäinen terapeuttinen aine
Esillä olevan keksinnön mukaisessa yhdistetyssä lp terapiassa käyttökelpoiset syöpävastaiset terapeuttiset aineet voidaan valita kaikista alan ammattilaiselle tutuista kemoterapeuttisista tai radioterapeuttisistä aineista. Kyseeseen voivat tulla etenkin cis-platina, tak-soidi, etoposidi, INF, adriamysiini, kamptotesiini, mitoo-15 simyrkky jne. Näitä eri aineita voidaan saada kaupallisesti .
Näistä aineista taksoidit muodostavat edullisen suoritusmuodon. Tässä suhteessa taksoideja, joita voidaan erityisemmin käyttää esillä olevan keksinnön piirissä, 20 ovat ne, joita edustaa yleinen kaava: r4
R7-COx H R5V^_iV \ R
- ? w r6 öh yv' / Hy° H0 ÖCOCH3 öcoc6h5 30 jossa: symbolit Rj ja R2 ovat kumpikin vetyatomi, tai sit-ten yksi radikaaleista E, tai R2 on vetyatomi ja toinen on hydroksi-, asyylioksi- tai asyylikarbonyylioksiradikaali, tai sitten R2 on vetyatomi ja R1 muodostaa metyyliradikaa- 15
Iin a-hiiliatomin kanssa sidoksen siten, että muodostuu sykiopropaanirengas, yksi symboleista Rs tai R4 on -vetyatomi ja toinen on hydroksirädikaali, tai sitten R3 ja R4 muodostavat yh-5 dessä karbonyyliradikaalin, symbolit Rg ja S6 ovat kumpikin vetyatomi, tai yksi symboleista R5 tai R6 on vetyatomi ja toinen on hydroksi-, asyylioksi-, asyylikarbonyylioksi- tai alkoksimetyylikar-bonyylioksiradikaali, tai sitten Rg ja R6 muodostavat yh-10 dessä karbonyyliradikaalin, symbolit Re ja Rg ovat kumpikin vetyatomi tai sitten R1 ja R8 muodostavat yhdessä sidoksen, symboli R? on alkoksi-, alkenyylioksi- tai sykloal-kyylioksiradikaali tai fenyyliradikaali, ja 15 Ar on f enyyliradikaali, joka on mahdollisesti subs- tituoitu yhdellä tai useammalla atomilla tai radikaalilla, jotka ovat identtisiä tai erilaisia ja valitaan seuxaavis-ta: halogeeniatomit ja alkyyli-, alkoksi-, dialkyyliami-no-, asyyliamino-, alkoksikarbonyyliamino- tai trifluori-2 0 metyyliradikaali, tai aromaattinen heterosyklinen radikaa li , jossa on 5 rengasjäsentä ja joka sisältää yhden tai useamman heteroatomin, jotka ovat identtisiä tai erilaisia ja valitaan typpi-, happi- ja rikkiatomeista, jolloin alkyyliradxkaalit ja muiden radikaalien 25 alkyyliosat sisältävät 1 - 8 hiiliatomia suorassa tai haarautuneessa ketjussa ja jolloin alkenyyliradikaalit sisältävät 2 - 8 hiiliatomia.
Erityisemmin kiinnpstavia ovat taksoidit, joissa R2 on vetyatomi, R1 on vetyatomi tai hydroksiradikaali tai BO sitten R1 muodostaa metyy1iradikaalin a-hiiliatomin kanssa yksinkertaisen sidoksen, R3 ja R4 muodostavat yhdessä karbonyyliradikaalin, Rg on vetyatomi ja R6 on vetyatomi tai hydroksi-, asetyyliöksi— tai metoksiasetyylioksiradikaali tai sitten Rg ja R6 muodostavat yhdessä karbonyyliradikaa-35 Iin, R7 on t-butoksiradikaali tai fenyyliradikaali.
i 16
Erityisesti voidaan mainita seuraavat yhdisteet: [4 -asetoksi-2a-bentsoyylioksi-5S, 20-epdksi-liä, 7β, -10β~trihydroksi-9 -Okso-11 -1aksen-13o>-yyl i ] - 3 ' -1 -butoksi-kä:rbonyyliaTnino-3 1 -fenyyli-2 ' -hydroksi- (2R, 3 3) -propio-5 naatti (dosetakseli eli TaxotereR) , [4,1θβ-diasetoksi -2a-bent soyyl i oksi - 5 β, 2 0 - epoks i -1β, 7β-di hydroksi -9-okso-11 -1 aksen -13 α-yy1 i J - 3 *' -bent soyy-liamino-3 ' -fenyvli-2 1 -hydroksi- (2R, 3S) -propionaatti (pak-litakseli):, 10 l4-asetöksi-2:a:-bentsoyylioksi-5S, 20-epöksi~lb, IQfi- di hy droks i - 7 β:, 10 β - me t y 1 e e n i -19 - no r - 9 - o k s o -11 -1 ak s e n -13 a -yyli]-3'-t-butaksikarbonyyliamino-3'-fenyyli-2'-hydroksi-{2R, 3S) -propi ©naatti.., [4, 1Οβ-diagetoks i - 2 o; ~ bent soyylioks i - 5β, 20 - epoks i -15 1β-hydroksi-7β, lQS-metyleeni-19-nor-9-okso-ll- taks©n-i3a- yyli]-3'-t-but.oksikarbonyyliamino-31-fenyyli-21-hydroksi-(2R,3S)-propionaatti, [4-asetöksi-2a-bentsoyylioksi-5S,20-epoksi-Χβ,7β, -10β-trihydroksi-9-okso- 11-taksen- 13a-yyli] -3 ' -1 - but oksi-20 karbonyyliamino-31 -(2-fluorifenyyli)-2'-hydroksi-(2R,3S)-p rop i onaa11 i, [4-asetoksi-2a-benesoyylioksi-5&,2Ö-epoksi~lS,7β,-10B-trihydrQksi-9-okso- 11-taksen-I3a-yyli] -3 1 -t-butoksi-karbonyyliamino-3'-{4 -kloori fenyyli)-2'-hydroksi-(2R,3S)-25 propionaatti, [4-asetoksi-2a-bentsoyylioksi-5β,20-epoksi-lfi,7β,-10β-trihydroksi-9-okso-ll-taksen-13a-yyli3 -3 1 -t-butoksi-karbonyyl i amino - 3 1 - (4-metöksifenyyli) -2 ' -hydroksi - (2R, 3 S) -propionaatti, 30 [4-asetoksi-2a-bentsoyylioksi-5S,20-epoksi-l£,7β,- 10β-trihydroksi-9-okso-11-taksen-13α-yyli] - 3 1 -t-butoksi-karbonyyliamino-3'-(4-fluorifenyyli)-21-hydroksi-(2R,3S)-propionaatti, [4-asetoksi-2a-bentsoyylioksi-5β,20-epoksi-Ιβ,7£,-35 10β-trihydroksi-9-okso-li-:taksen-l3a-yyli] -3 1 -adamantyy- 17 lioksikarbonyylIamino-3'-fenyyli-21-hydroksi-(2R/3S)-pro-pionaatti, [4-asetoksi-2oi-bentsoyylioksi~5β,20-epoksi-lfi, 7S, -lOS-trihydroksi-S-okso-ll-taksen-lSa-yylij -3 1 -tert-pentyy-5 lioksikarbonyyliamino“3'-fenyyli-21-hydroksi-(2R,3S)-pro-pi ona at ti , U-asetoksi^a-bentsoyyliQksi-SS, 2 0 -epoksl-lS, 7S:, -10β-trihydroksi-9-okso-ll-taksen-l3ö-yyli] -:3 1 - (1-metyyli-sykloheksyyli)oksikarfoonyyliamino-31-fenyyli-21-hydroksi-10 (2R,3S)-propionaa11 i, [4-asetoksi-2oi-bentsoyylloksi-5S, 20-epoksi-lfi, 7β, -lQS-trihydroksi-9-oksQ-li-taksen-13a-yyli] -3 T - (1-metyyli-syklopropyyli)öksikarbonyyliamino-3'-fenyyli-21-hydroksi-(2R,3S)-propionaatti, 15 [^-asetoksi-Sa-berLtsoyylioksi-SS, 20-epoksi-lS, 7β, - 10:S-trihydrpksi-9-okso-ll-takse:n-13oi-yyli] -3 1 - (l-metyyli-Sykiopentyyli) oksikarbonyyliamino-3 1 - fenyyli-2 ' -hydroksi-('2R,3S)-propionaatti, [4-asetoksi-2oi-bentsoyylioksi-5S, 2 0-epoksi-lS, 7β, -20 10E-trihydroksi-9-okso-ll-taksen."13Q;-yyli] -3 ' - tl,l-dime- tyyli-2-propyyni)yylioksikarbonyyliamino-31-fenyyli-2'-hydroksi-(2R,3S)-propionaatti, [4 - asetoksi-2οι-bentsoyylioksi -5β,20-epoksi- 1β, 7β, -9 β,10 β-1 etrahydrbks i-11-1 aksen-13 ö-yyli]-3'-1-butoksikar-25 bonyyliamino-31-fenyyli-2'-hydroksi-(2R,3S)-propionaatti, l4:-asetoksi-2a-bentsoyylioksi-5fi,:20-epoksi-ifi, 7β, -dihydrQksi-9-pkso-ll-taksen-13Di-yyli] -3 ' -t-butoksikarbo-nyyliamino-3 1 - fenyyli-2 1 -hydroksi- (2R, 3S): -propionaatti, r4-asetoksi-2Q!-bentsoyylioksi-5fi, SO-epoksi-lB, 7fi, -30 lOfi-trihydx'oksi-S-okso-ll-taksen-lSa'-yyli] -3 ' -t-butoksi- karbonyyliamino-3 ' - (2-t ienyyli) -2' -hydroksi- (2R, 33) -propionaatti, [4-asetoksi-2a-bentsoyylioksi-5fi,2 0- epoksi-1β,7β,-10β-1 rihydroksi - 9 - oks o -11 -1 aksen-13 a - yyl i ] -3 1 -1- but oks i - ....... ......> 18 karbonyyliamino-3 ' - (2-furyyli)-2 1 -hydroksi- (2R, 3S) -prppio-naatti, [4-asetoksi-2a-bentsoyylioksi-5fi,20 -epoksi-1&,7β, -lOE-trihydroksi-R-okso-ll-fcaksen-ISa-yyli] -3 ' -t-butoksi-5 karbonyyliaminö-3 ' - (3-tienyylij -2 ' -hydroksi- (2R, 3S) -propionaatti , [4-asetoksi-2ai-bentsoyylioksi-5S, 2Q-epoksi-l£, lOfi-dihydroksi-9-akso-ll-takseii-a3;Q;-yyli] -3 ' -t-butoksikarbo-nyyliamino-3:' -fenyyli-2 ' -hydroksi- {2R,3S} -propionaatti, 10 [4-as;etoksi-2a-beiitsoyyliQk:si-5fi, 2 0-epoksi- IS, 76- dihydroksi-9:, lÖ-diokso-ll-taksen-13®~yyli] -3 ' -t-butoksi-karbonyyliamino-3' -Eenyyli-2 1 -hydroksi- f2R, 3S) -propionaatti , [4-asetöksi-:2oi-bentsQyylioksi-SS, 20-epoksi- lS-hyd-15 roksi-9-okso-ll-taksen-13Q!-:yyli] -3 ' -t-butaksikarbonyyli-amino-31-fenyyli-21-hydroksi-(2R,3S)-propionaatti* Nämä eri yhdisteet voidaan saada menetelmillä, joita kuvataan esimerkiksi WO-patenttihakemusjulkaisussa 94/13 654 ja 92/09 589, jotka sisällytetään esillä olevaan 20 hakemukseen viitteiksi.
Esillä olevan keksinnön mielessä käytetään erityisen edullisesti taksolia, dosetakselia tai paklitakselia. Vektoreita nukleiinihapon antamiseksi Nukleiinihappo voidaan ruiskut taa sellaisenaan hoi -25 dettavaan kohtaan, tai sitä voidaan inkuboida suoraan so lujen kanssa, jotka on määrä tuhota tai joita on määrä hoitaa. On itse asiassa kuvattu, että paljaat nukleiinihapot voisivat tunkeutua soluihin ilman erityistä vektoria.
Kuitenkin esillä olevan keksinnön piirissä käytetään edul-30 lisesti antovektoria, joka tekee mahdolliseksi seuraavien parantamisen: (i.) soluun tunkeutumisen tehokkuus, (ii) kohdentaminen, ja (iii) solunulkoinen ja -sisäinen stabiilisuus .
Voidaan käyttää.eri tyyppisiä vektoreita. Kyseessä 35 voivat olla virus- tai ei-virusvektorit.
19 V i rusvektori t
Virusvektorien käyttö perustuu virusten luonnollisiin transfektöintiöminäisuuksiin:. Täten on mahdollista käyttää adenoviruksia, herpes-virusta, retroviruksia ja 5 nyttemmin adenoliitteisiä viruksia. Nämä vektorit osoittautuvat erityisen suorituskykyisiksi transfektoinnissa.
Mitä tulee erityisemmin adanoviruksiin, on karakterisoitu eri serotyyppej ä:, jotka vaihtelevat rakenteeltaan ja ominaisuuksiltaan jonkin verran. Näistä serotyypeistä 10 esillä olevan keksinnön piirissä käytetään edullisesti ihmisen adenovirus tyyppiä 2 tai 5 (Ad2 tai Ad5) tai eläin-alkuperää olevia adenoviruksia (katso W0-hakemus julkaisu 94/26 914). Eläinalkuperää olevista adenoviruksista, jotka ovat käyttökelpoisia esillä olevan keksinnön piirissä, 15 voidaan mainita adenoyirukset, jotka ovat peräisin koirasta, naudasta, hiirestä [esimerkki: Mavl, Beard et ai., Virology 75 (1990) 81], lampaasta, siasta, linnusta tai vielä apinasta (esimerkki: SAV). Edullisesti eläinalkuperää oleva virus on koiran adenovirus, edullisemmin adeno-20 virus CAV2 [esimerkiksi kanta Manhattan tai A26/61 (ATCC VR-800)]. Edullisesti keksinnön piirissä käytetään ihmistä! koira- tai seka-alkuperää olevia adenoviruksia.
Edullisesti keksinnön mukaiset defaktiiviset adeno-virukset käsittävät ITR:t, kapsidaation mahdollistavan 25 sekvenssin ja kiinnostavan nukleiinihapon. Edelleen edullisemmin keksinnön mukaisten adenovlrusten genomissa alue El vähintään on ei-funktionaalinen. Kyseessä olevasta vi~ rusgeenista voidaan tehdä ei-funktionaalinen millä tahansa alan ammattilaiselle tutulla tekniikalla, ja etenkin täy-30 sin suppressoimalla, substituoimalla, deletoimalla osa, tai lisäämällä yksi tai useampi emäs yhteen tai useampaan kyseessä olevaan geeniin. Tällaisia modifikaatioita voidaan saada in vitro {eristetyllä DNA:.11a) tai in situ, esimerkiksi geenimanipulaatiotekniikoita käyttämällä, tai 35 edelleen käsittelemällä mutagenisoivilla. aineilla. Muita- 20 kin alueita on voitu modifioida (E2, E3, E4, LI - L5 jne.) .
Keksinnön mukaiset defektiiviset yhdistelmä-DNA-adenovirukset voidaan valmistaa millä tahansa alan ämmät-5 tilaiselle tutulla tekniikalla [Levrero et ai. . Gene 101 (1991) 195; EP 185 573; Graham, EMBO J. 3 (1984) 2917],
Erityisesti ne voidaan valmistaa homologisella DNA-yhdistymisellä adenoviruksen ja. plasmidin välillä, joka käsittää muun muassa kiinnostavan DNA-sekvenssin. Homologinen 10 DNA-yhdistyminen saadaan tapahtumaan kotransfektoimalla mainitut adenovirus ja plasmidi sopivaan soluiinjaan. Käytetyn solulinjan tulee edullisesti (1) olla transformoitavissa mainituilla elementeilä, ja (ii) käsittää sekvenssit , jotka kykenevät täydentämään adenoviruksen defek-15 tiivisen genomin osan, edullisesti integroidussa muodossa DNA-yhdistyrnisvaarojen välttämiseksi. Esimerkkinä soluiin-jasta voidaan mainita ihmisen alkion munuaissolulinja 293 (Graham et ai.. J. Gen. Virol. 36 (1977) 59], joka sisältää etenkin genomiinsa integroituna adenoviruksen Ad5 ge-20 nomin vasemmanpuoleisen osan (12 %) . Strategioita adenovi-rusperäisten vektorien rakentamiseksi on niinikään kuvattu patenttihakemusjulkaisuissa MO 94/26 914 ja FR 9 308 596.
Sitten lisääntyneet adenovirukset otetaan talteen ja niitä puhdistetaan molekyylibiologian tavanomaisten 25 tekniikoiden mukaan kuten esitetään esimerkeissä.
Mitä tulee adenoliitteisiin viruksiin (AAV), kyseessä on suhteellisen pienikokoinen DNÄ-virus, joka integroituu tartuttamiensa solujen genomiin stabiilisti ja kohtaspesifisesti, Ne kykenevät tartuttamaan laajan vaii-30 koiman soluja indusoimatta vakutusta solujen kasvuun, morfologiaan tai differentiaatioon. Lisäksi ne eivät vaikuta liittyvän patologioihin ihmisellä. AAV:n genomi on kloonattu, sekventoitu ja karakterisoitu. Se käsittää noin 4 700 emästä, ja sisältää kummassakin päässä käänteisen 35 toistuvan alueen (ITR), joka käsittää noin 145 emästä ja 21 toimii virusreplikaation alkukohtana. Loput genomista jakautuu 2 oleelliseen alueeseen, jotka käsittävät kapsidaa-tiofunktiot: genomin vasemmanpuoleinen osa, joka sisältää rep-geenin, joka liittyy viruksen replikaatioon ja virus-5 geenien ilmentymiseen; genomin oikanpuoleinen osa, joka sisältää cap-geenin, joka koodittaa viruksen kuoriproteii-neja.
AAV-peräisten vektorien käyttöä geenien siirtämiseksi in vitro ja in vivo on kuvattu kirjallisuudessa 10 (katso etenkin WQ 91/18 088; W0 93/09 239; US 4 797 368; US 5 139 941, EP 488 528). Näissä patenttihakemusjulkaisuissa kuvataan erilaisia AAV-peräisiä rakenteita, joista geenit rep ja/tai cap on deletoitu ja korvattu kiinnostavalla geenillä, ja niiden käyttöä mainitun kiinnostavan 15 geenin siirtämiseksi in vitro (soluviljelmään) tai in vivo (suoraan organismiin). Keksinnön mukaiset defektiiviset yhdistelmä-DNA-ÄÄV:t voidaan valmistaa kotransfektoimalla solulinjaan, joka on tartutettu ihmisapuviruksel1a (esimerkiksi adenovirukselia), plasmidi, joka sisältää kiin-20 nostavan mikleiinihapposekvenssin kahden toistuvan käänteisen {ITR) AAV-alueen rajaamana, ja plasmidi, joka käsittää AA¥:n kapsidaatiogeenit (geenit rep ja cap), Sitten tuotetut yhdistelmä-DNA-AAV:t puhdistetaan tavanomaisin tekniikoin.
25 Mitä tulee herpes- ja retroviruksiin, yhdlstelinä- DNA-vektoreiden rakentamista on kuvattu laajalti kirjallisuudessa: katso etenkin Breakfield et ai, , New Biologist-3 (1991) 203; EP 453 242; EP 178 220; Bernstein et: ai.
Genet. Eng. 7 (1985) 235; McCormick, BioTechnoiogy 3.
30 (1985) 689 jne. Erityisesti retrovirukset ovat integroitu via viruksia, jotka tartuttavat selektiivisesti jakautumassa olevat solut. Ne ovat siten kiinnostavia vektoreitä syöpäliitteisiin käyttöihin. Retrovirusten genomi käsittää oleellisesti kaksi LTR:.ää, kapsidaatiosekvenssin ja kolme 35 koodltusaluetta (gag, pol ja env). RetrpvirusperäisiBsä ......................"< 22 yhdistelmä-DNA-vektoreissa geenit gag, pol ja env on yleensä, delatöitu kokonaisuudessaan tai osittain, ja korvattu kiinnostavalla heterologisella nukleiinihapposek-venssillä. Näitä vektoreita voidaan valmistaa eri tyyppi-5 sistä retroviruksista kuten etenkin MoMuLV ("hiiren Moloney-leukemiavirus" ,· kutsutaan edelleen nimellä MoMLV) , MSV ("hiiren Moloney-sarkoomavirus"), HaSV ("Harvey-sar-koömavirus»}. gNV ( "pernanekroosivirus" ) ; RSV { "Rous-sar-koomavirus") tai edelleen Friendin virus.
10 Yhdistelmä-DNA-retrovirusten rakentamiseksi, jotka käsittävät kiinnostavan sekvenssin, rakennetaan yleensä plasmidi, joka käsittää etenkin LTR:t, kapsidaatiosekvens-sin ja mainitun kiinnostavan sekvenssin, minkä jälkeen sitä käytetään soluiinjan transfektoimiseksi, jota kutsuit taan kapsidaatiosolulinjaksi, ja joka kykenee tuottamaan en t rans plasmidissa defektiiviset retrovirusfunktiot.
Yleensä kapsidaatiosoiulinjat kykenevät siis ilmentämään geenit gag, pol ja env. Tällaisia kapsidaatiosolulinjoja on kuvattu alan teknisen tason puitteissa, j a etenkin so-2 0 luiinjaa PA317 (US 4 861 719) ; solui inj aa PsiCRIP (W0 90/02 806) ja solulinjaa GP+envAm-12 (NO 89/07 150). Lisäksi yhdistelmä-DNA-retrovirukset voivat käsittää modifikaatioita LTR:ien tasolla transkriptioaktiivisuuden tukahduttamiseksi, sekä laajentuneita kapsidaatiosekvenssejä, 25 jotka käsittävät osan gag-geenistä [Bender et ai. . J.
Virpi * 61 (1987) 1639] . Tuotetut yhdistelmä-DNA-retrovi rukset puhdistetaan sitten tavanomaisilla tekniikoilla.
Esillä olevan keksinnön suorittamiseksi aivan erityisen edullisesti käytetään defektiivistä yhdistelmä-DNA-30 adenovirusta tai -retrovirusta. Näillä vektoreilla on itse asiassa erityisen kiinnostavia ominaisuuksia geenien siirtämiseksi kasvainsoluihin.
Ei-virusvektorit
Keksinnön mukainen vektori voi samoin olla ei-vi-35 rusalne, joka kykenee edistämään nukleiinihappojen siirtoa j 23 eukaryoottisiin soluihin ja ilmentymistä niissä. Kemialliset tai biokemialliset vektorit ovat kiinnostava vaihtoehto luonnollisille viruksille erityisesti kätevyys-, turvallisuussyistä ja myös siksi, ettei ole olemassa teoreet-5 tista rajaa sille, minkä kokoinen DNA voidaan transfektoi-da.
Näillä Synteettisillä vektoreilla on kaksi pääasiallista funktiota, pakata transfektoitava nukleiinihappo ja edistää sen solukiinnittymistä sekä sen kulkua plas-10 mamembräänin läpi j a tarvittaessa kahden tumamembraanin läpi. Nukleiinihappöjen polyanionisen luonteen vastavaikutukseksi ei-virusvektoreilla kaikilla on polykationiset varaukset.
Kehitetyistä synteettisistä vektoreista edullisim-15 pia ovat kationiset polymeerit tyyppiä poTylysiini, fLKLK) n, (LKKii) n, polyetyleeni-imiini ja DEAE-dekstraani tai edelleen kationiset lipidit tai lipofektantit. Niillä on kyky tiivistää DNA ja edistää sen liittymistä solumeinb-raaniin. Näistä viimemainituista voidaan mainita lipopoly-20 amiinit (lipofektamiini, transfektam jne.) ja erilaiset kationiset tai neutraalit lipidit (DOTMA, DOGS, DOPE jne.) , Nyttemmin on kehitetty reseptorivälitteisen kohdennetun transfektoinnin käsite, jossa hyödynnetään periaatetta kondensoida DNA katlonisen polymeerin ansiosta sa-25 maila ohjaten kompleksin kiinnittymistä membraaniin ke miallisen sidoksen välityksellä katlonisen polymeerin ja kohdennettavan solutyypin pinnalla esiintyvän membraänireseptorin ligandin välillä. Täten on kuvattu tränsfefriini, insuliinireseptorin tai maksasolujen asialoglykoproteii-30 nireseptofin kohdentamista.
Antoprotokolla
Keksinnön mukainen edullinen antoprotokolla käsittää ensiksi nukleiinihapon ja toiseksi terapeuttisen aineen. Edullisessa käytössä siirtogeenin anto toistetaan 3.5 maksimaalisen ilmentymisen saamiseksi maksimaalisessa 24 määrässä jakautuvia soluja (esimerkiksi 5 päivää peräkkäin) , minkä jälkeen annetaan kemoterapeuttinen hoito.
Edullisesti yksi tai useampi nukleiinihappo annetaan väuriakohtäan, joko suoralla kasvaimensisäisellä 5 ruiskeella useisiin vauriokohtiin tai saattamalla valtimo-vaurio kosketuksiin tämän tyyppiseen tarkoitukseen sopivan pienen tyynyn avulla. Kemoterapeuttinen aine annetaan voimassa olevien kliinisten protokollien mukaan.
Esimerkkeja 10 Esimerkki 1 H460-soluja, joita viljelllään RPMI 1640 -kasvualustassa, joka sisältää 10 % vasikansikiöseerumia, transfektoidaan cDNA-sekvensseillä, jotka koodittavat do-meenia GAP[170-702] tai proteiinia: Grb3-3, yhdistettyinä 15 geeniin, joka tuottaa positiivisesti: transf ektoiduille soluille genetisiiniresistenssin (Neo). Nämä cDNA;t, jotka on sijoitettu plasmideihin ja joiden ilmentyminen on vi-rusprotnoottQrien kontrollissa (pSV2-GAP [17 0-702] , pSV2-Grb3-3 ja pSV2“Neo), viedään H460-soluihin lipofektamiinin 20 avulla transfektoivana aineena. H460/NeoR-solut (resistenssi pitoisuuden 400 jug/ml genetisiiniä läsnä ollessa kasvualustassa) valikoidaan ja kvantiflpIdaan 15 - 20 päivän kuluttua transfektoinnista. Kuviossa 1 esitetään yhteenveto tuloksista edustavasta kvantifiointikokeesta, jossa 25 määritettiin NeoR-pesäkkeiden lukumäärä eri transfektolnti- olosuhteissa (pS.V2-0li; verrokkiplasmidissa ei ole lainkaan \ kiinnostavaa cDNA:ta, minkä vuoksi sillä on mahdollista kontrolloida genetisiinivalikoinnin tehokkuus.
Esimerkki 2 30 H460:-soluihin, jotka transf ektoidaan kuten esitet tiin esimerkissä 1, kohdistetaan genetisiinivalikoinnin aikana usean päivän aikana käsittely eri pitoisuuksilla taksoteerlä, cis-platinaa ja kamptotesliniä. H460/MeoR-solut, jotka ovat resistenttejä kemoterapia-aineille, 35 kvantifloidaan kuten kuvataan esimerkissä 1. H46G-solujen 25 herkkyys taksoteerille (A) , cis-platinalle (B) tai kamp·· totesiinille (C) , kun mainitut solut on transfektoitu seuraavilla: pSV2-Neo (umpinainen ympyrä) , pSV2-Neo + pSV2-GAP[170-702] (umpinainen kolmio kannallaan) tai pSV2~Neo + 5 pSV2-Grb3-3 (umpinainen kolmio kärjellään), esitetään suhteessa soliiihin, jotka on transfektöitu identtisesti mutta .joilla käsittely kemoterapeuttisilla aineilla on jätetty pois. Kuviossa 2 esitetään yhteenveto tuloksista pesäkkeiden lukumäärän edustavasta kvantifiöintikokeesta eri kä-10 sithelyjen jälkeen.
Esimerkki 3 H460-soluja transfektoidaan cDNA:lla, joka koodit-taa villi-p53-proteiinia (p53WT) , ja joka on sijoitettu plasmidiin pcDNA3 CMV-promoottorin kontrolliin. Plasraidi 15 pcDNA3 sisältää myös Neo-geenin sijoitettuna promoot
torin kontrolliin. pcDNA3:11a tai pcDMA3-p53WT: llä trans-fektoidut solut valikoidaan ja eristetään kuten esitetään esimerkissä 1- pcDNA3-p53WT: llä transfektoiduissa soluissa, jotka ovat genetisiiniresistenttejä, p53:n läsnäolo toden-20 netaan Western blot -määrityksellä spesifisten vasta-aineiden avulla. Kuviossa 3 esitetään yhteenveto tuloksista I
edustavasta kokeesta, jolloin kuviossa esitetään yhtäältä transfektoimalla pcDNA3:11a tai pcDNA3-p53WT: llä saatujen j ] pesäkkeiden lukumäärä (A) ja toisaalta eristettyjen kloo-25 nien herkkyys taksoteerikäsittelylle (B).
$ ] ] 1 )
Claims (22)
1. Yhden tai useamman nukleiinihapon, joka inhiboi /jotka inhiboivat ainakin osittain onkogeenisiä solusig- 5 nallointireittejä, ja syöpävastaiseh terapeuttisen aineen lääkkeellinen yhdistelmä samanaikaiseen, erikseen tapahtuvaan tai ajallisesti jaksotettuun käyttöön liikakasvupato-logioiden hoitamiseksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdistelmä, tun-10 nettu siitä, että nukleiinihappo on deoksiribonukleiini- happo (DNA) tai ribonukleiinihappo (RNA) , joka koodittaa tuotetta, joka inhiboi ainakin osittain onkogeenisiä solu-signallointireittejä.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdistelmä, tun- 15 nettu siitä, että nukleiinihappo on DNA, joka koodittaa antisense-RNA:ta.
4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että nukleiinihappo on DNA, joka koodittaa ligandi-RNÄ;ta. 2 0:
5. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdistelmä.,: tunnettu siitä, että nukleiinihappo on DNA, joka koodittaa negatiivista dominanttia.
6. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että nukleiinihappo: on DNA, joka koodittaa:
25 ScFvitä,:
7. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että nukleiinihappo on DNA, joka koodittaa tuumpr isuppr ess or ipro t ei inia.
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdistelmä, t un - 30: nettu siitä, että nukleiinihappo on äutisenseöligonukleo- tidi, jota on mahdollisesti modifioitu kemiallisesti.
9. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että nukleiinihappo on sisällytetty vektoriin.
10. Patenttivaatimuksen 9' mukainen yhdistelmä, tunnettu säitä, että. vektori valitaan liposomeista, nanopar-tlkkeleista, peptidikomplekseista, kationisista lipideistä ja 1ipopolyami ineista.
11. Patenttivaatimuksen 9 mukainen yhdistelmä, tun nettu siitä, että vektori on virusvektori, joka on peräisin retroviruksista, adenoviruksista, herpes-viruksesta, AAV; s t ä, 1 ehmänrokkoviiuks es ta.
12. Jonkin edeltävän, patenttivaatimuksen mukainen 10 yhdistelmä, tunnet tu siitä, että nukleiinihappo anne taan suoraan hoidettavaan kohtaan.
13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että syöpävastainen terapeuttinen aine on kemöterapeuttinen aine, joka valitaan seuraavista: cis-pla- 15 tina, taksoidit, etoposidi, TNF, adriamysiini, kamptotesii-ni, vinka-alkaloidit ja navelleiini.
14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että syöpävastäinen kemoteräpeuttinen aine on taksoidi.
15. Patenttivaatimuksen 14 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että syöpävastainen kemoteräpeuttinen aine valitaan taksolista, dosetakselista ja paklitäkselis-" ta.
16. Jonkin patenttivaatimuksen 13 - 15 mukainen yh- 25 distelniä, tunnettu siitä, että syöpävastainen kemötera peuttinen aine annetaan ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti,
17, Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että nukleiinihappoa ja syöpävastäistä kemo terapeuttista ainetta käytetään samänai- 30 kaisesti.
18- Jonkin patenttivaatimuksen 1 - 16 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että nukleiinihappo annetaan ennen syöpävastäistä kemöterapeuttistä ainetta.
19. Yhden tai useamman tuumorisuppressorigeenin ja taksoihin lääkkeellinen yhdistelmä samanaikaiseen, erikseen tapahtuvaan tai ajallisesti jaksotettuun käyttöön liikakas-vupätplogioiden hoitamiseksi.
20. patenttivaatimuksen 19 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että suppressorigeeni kooöittaa p53-proteiinin villimuotoa.
21, Patenttivaatimuksen 19 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että suppressorigeeni koodit taa wa£l-pro- 10 teiinia.
22. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdistelmä, tunnettu siitä, että syöpävastäinen terapeuttinen aine on radioterapia-aine.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9500436A FR2729295A1 (fr) | 1995-01-17 | 1995-01-17 | Traitement therapeutique combine des pathologies hyperproliferatives |
| FR9500436 | 1995-01-17 | ||
| FR9600056 | 1996-01-12 | ||
| PCT/FR1996/000056 WO1996022101A1 (fr) | 1995-01-17 | 1996-01-12 | Traitement therapeutique combine des pathologies hyperproliferatives |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI973023A0 FI973023A0 (fi) | 1997-07-16 |
| FI973023A FI973023A (fi) | 1997-07-16 |
| FI119911B true FI119911B (fi) | 2009-05-15 |
Family
ID=9475169
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI973023A FI119911B (fi) | 1995-01-17 | 1997-07-16 | Liikakasvusairauksien yhdistetty terapeuttinen hoito |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US6262032B1 (fi) |
| EP (1) | EP0800399B1 (fi) |
| JP (3) | JP4580469B2 (fi) |
| KR (1) | KR100385266B1 (fi) |
| AT (1) | ATE222109T1 (fi) |
| AU (1) | AU716364B2 (fi) |
| BR (1) | BR9606969A (fi) |
| CA (1) | CA2209771C (fi) |
| CZ (1) | CZ298710B6 (fi) |
| DE (1) | DE69622989T2 (fi) |
| DK (1) | DK0800399T3 (fi) |
| ES (1) | ES2180729T3 (fi) |
| FI (1) | FI119911B (fi) |
| FR (1) | FR2729295A1 (fi) |
| HU (1) | HU229484B1 (fi) |
| MX (1) | MX9704490A (fi) |
| NO (1) | NO325418B1 (fi) |
| PT (1) | PT800399E (fi) |
| SI (1) | SI0800399T1 (fi) |
| SK (1) | SK283989B6 (fi) |
| WO (1) | WO1996022101A1 (fi) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030044396A1 (en) * | 1998-04-21 | 2003-03-06 | Elia James P. | Methods for treating diseases and increasing longevity |
| FR2729295A1 (fr) * | 1995-01-17 | 1996-07-19 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Traitement therapeutique combine des pathologies hyperproliferatives |
| US7087582B1 (en) | 1995-09-26 | 2006-08-08 | Regents Of The University Of Michigan | Combination for site-specifically transforming cells in vivo comprising a double-balloon catheter and nucleic acid comprising a gene encoding P21 |
| US5744460A (en) * | 1996-03-07 | 1998-04-28 | Novartis Corporation | Combination for treatment of proliferative diseases |
| US20030064949A1 (en) * | 1998-02-17 | 2003-04-03 | Loretta Nielsen | Combined tumor suppressor gene therapy and chemotherapy in the treatment of neoplasms |
| US20030060434A1 (en) * | 1997-02-18 | 2003-03-27 | Loretta Nielsen | Combined tumor suppressor gene therapy and chemotherapy in the treatment of neoplasms |
| AU2002236765A1 (en) * | 2001-01-16 | 2002-07-30 | Glaxo Group Limited | Pharmaceutical combination for the treatment of cancer containing a 4-quinazolineamine and another anti-neoplastic agent |
| CA2530613A1 (en) * | 2003-06-30 | 2005-01-06 | Universite De Lausanne | Rasgap derived peptide for selectively killing cancer cells |
| KR100809890B1 (ko) * | 2003-12-24 | 2008-03-06 | 가부시키가이샤 로코모젠 | 암 억제 방법 |
| JPWO2005061007A1 (ja) * | 2003-12-24 | 2007-07-12 | 学校法人 聖マリアンナ医科大学 | 癌の抑制方法 |
| GB0406415D0 (en) * | 2004-03-22 | 2004-04-21 | Inst Of Cancer Res The | Materials and methods for treatment of cancer |
| US8124598B2 (en) | 2006-09-14 | 2012-02-28 | Sharon Sageman | 7-keto DHEA for psychiatric use |
| WO2008115478A2 (en) * | 2007-03-19 | 2008-09-25 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Method of cancer detection and treatment |
| US20100160274A1 (en) * | 2007-09-07 | 2010-06-24 | Sharon Sageman | 7-KETO DHEA for Psychiatric Use |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3751307T2 (de) * | 1986-03-28 | 1995-09-21 | Univ Illinois | Zubereitungen und verfahren für klone, die, mit mehrfacharzneimittelresistenz assoziierte, dna-sequenzen in menschlichen zellen enthalten. |
| US6410010B1 (en) * | 1992-10-13 | 2002-06-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant P53 adenovirus compositions |
| US5747469A (en) | 1991-03-06 | 1998-05-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53 |
| CA2136091A1 (en) * | 1992-05-20 | 1993-11-25 | Daniel S. Martin | Chemotherapeutic drug combinations |
| DE69329336D1 (de) * | 1992-05-28 | 2000-10-05 | Xenova Ltd | Acridin carboxamide zur behandlung von krebs |
| FR2694296B1 (fr) * | 1992-07-30 | 1994-09-02 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Peptides inhibant l'activité des protéines ras, préparation et utilisation. |
| AU676204B2 (en) * | 1992-09-18 | 1997-03-06 | Canji, Inc. | Gene therapy by retroviral vector with tumor suppressive gene |
| FR2697752B1 (fr) * | 1992-11-10 | 1995-04-14 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Compositions antitumorales contenant des dérivés du taxane. |
| TW442569B (en) | 1993-10-25 | 2001-06-23 | Canji Inc | Recombinant adenoviral vector |
| FR2729295A1 (fr) * | 1995-01-17 | 1996-07-19 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Traitement therapeutique combine des pathologies hyperproliferatives |
| US5789244A (en) | 1996-01-08 | 1998-08-04 | Canji, Inc. | Compositions and methods for the treatment of cancer using recombinant viral vector delivery systems |
| US6054467A (en) | 1996-07-05 | 2000-04-25 | Sidney Kimmel Cancer Center | Down-regulation of DNA repair to enhance sensitivity to P53-mediated apoptosis |
-
1995
- 1995-01-17 FR FR9500436A patent/FR2729295A1/fr active Granted
-
1996
- 1996-01-12 SI SI9630511T patent/SI0800399T1/xx unknown
- 1996-01-12 CZ CZ0226297A patent/CZ298710B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-01-12 ES ES96901387T patent/ES2180729T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-12 CA CA2209771A patent/CA2209771C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-12 KR KR1019970704839A patent/KR100385266B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-01-12 AU AU45429/96A patent/AU716364B2/en not_active Expired
- 1996-01-12 AT AT96901387T patent/ATE222109T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-01-12 MX MX9704490A patent/MX9704490A/es unknown
- 1996-01-12 PT PT96901387T patent/PT800399E/pt unknown
- 1996-01-12 HU HU9802423A patent/HU229484B1/hu unknown
- 1996-01-12 US US08/875,222 patent/US6262032B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-12 EP EP96901387A patent/EP0800399B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-12 BR BR9606969A patent/BR9606969A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-01-12 WO PCT/FR1996/000056 patent/WO1996022101A1/fr active IP Right Grant
- 1996-01-12 JP JP52207896A patent/JP4580469B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-12 SK SK957-97A patent/SK283989B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-01-12 DK DK96901387T patent/DK0800399T3/da active
- 1996-01-12 DE DE69622989T patent/DE69622989T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-07-09 NO NO19973197A patent/NO325418B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-07-16 FI FI973023A patent/FI119911B/fi not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-03-26 US US09/816,144 patent/US20010021395A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-04-14 US US10/412,684 patent/US7884082B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-01-09 JP JP2008001848A patent/JP2008133291A/ja not_active Withdrawn
-
2011
- 2011-09-22 JP JP2011206858A patent/JP5031921B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5031921B2 (ja) | 過増殖症の併用療法 | |
| KR100379174B1 (ko) | DNA손상제및p53을포함하는조성물 | |
| US5854038A (en) | Localization of a therapeutic agent in a cell in vitro | |
| JPH11511980A (ja) | Ｍｄｍ２タンパク質の腫瘍原活性のアンタゴニスト及び癌治療におけるその使用 | |
| JP2003531166A (ja) | 細胞傷害剤 | |
| JPH08506722A (ja) | 腫瘍を治療するためのレトロウイルスベクターおよびそれらを含む細胞系統 | |
| US7704962B1 (en) | Small oligonucleotides with anti-tumor activity | |
| JP4117367B2 (ja) | 腫瘍にあるサイクリンｇ１の発現を阻害する薬剤、その発現伝達体、およびベクター | |
| DE69732710T2 (de) | Mononukleare phagozyten zur verabreichung von therapeutischen arzneimitteln | |
| Kijima et al. | Ribozyme against mutant K-ras mRNA suppresses tumor growth of pancreatic cancer | |
| WO1997016547A1 (en) | ADENOVIRUS-ANTISENSE K-ras EXPRESSION VECTORS AND THEIR APPLICATION IN CANCER THERAPY | |
| JP2000514438A (ja) | Ｇｒｂ２またはＣｒｋ１へのリポソームアンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド標的化による慢性骨髄性白血病細胞増殖の阻害 | |
| JP2003525607A (ja) | 変異サイクリンｇ１タンパク質 | |
| KR100674140B1 (ko) | 유전자 치료제 | |
| Garcia-Hernandez et al. | Retroviral vector design for gene therapy of cancer: specific inhibition and tagging of BCR-ABL p190 cells | |
| JP2020517580A (ja) | 電離放射線耐性腫瘍を治療するための方法及び組成物 | |
| KR100737286B1 (ko) | ＶＥＧＦＲ 트렁케이티드 ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합아데노-연관 바이러스 및 이를 함유하는 암-특이적 유전자치료제 | |
| Steele et al. | Gene therapy for gastric cancer: problems and prospects | |
| KR100627377B1 (ko) | 뇌하수체 종양-형질전환 유전자 1 단백질의 합성을 차단할수 있는 작은 간섭 ｒｎａ 및 이를 발현하는 벡터를 이용한 암의 유전자 치료 | |
| KR100732248B1 (ko) | ＶＥＧＦ 안티센스 ｃＤＮＡ를 함유하는 재조합아데노-연관 바이러스（ｒＡＡＶ）및 이를 함유하는 대장암및/또는 폐암 특이적 유전자 치료제 | |
| Wagstaff et al. | Getting to the Heart of a Tumour Cell | |
| Zhang et al. | MOLECULAR TARGETING OF CANCER: RETROVIRAL VECTOR-MEDIATED ANTISENSE NUCLEIC ACID THERAPY | |
| WO2007026973A1 (en) | Recombinant adeno-associated virus containing vegfr truncated cdna and gene therapeutic agent for cancer comprising the same | |
| JP2009050268A (ja) | 転写ｄｎａ結合部位を含む環状ダンベルデコイオリゴデオキシヌクレオチド（ｃｄｏｄｎ） |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Ref document number: 119911 Country of ref document: FI |
|
| MA | Patent expired |