FI118156B - Runsaasti hydroksiproliinia käsittävät proteiinit sekä niitä sisältävät farmaseuttiset ja kosmeettiset valmisteet - Google Patents

Description

118156 ;Sd

Runsaasti hydroksiproliinia käsittävät proteiinit sekä niitä sisältävät farmaseuttiset ja kosmeettiset valmisteet

Hydroxiprolinrika proteiner och farmaceutiska och kosmetiska samman- I

5 sättningar som innehäller dessa

SI

%

Esillä olevan keksinnön kohteena ovat runsaasti hydroksiproliinia sisältävät glykopro- 4: 10 teiinit, joita voidaan saada kasviperäisistä lähteistä, sekä niiden farmaseuttinen ja kosmeettinen käyttö. , *1

Täsmällisemmin, keksinnön kohteena ovat runsaasti hydroksiproliinia sisältävät .Y

y.|| glykoproteiinit, joita voidaan saada happamalla alkoholiuutolla Taxus sdp.

-f*' 15 Gingko biloba. Lvcopersicum esculentum ja Daucus carota -lajien soluviljelmistä, ja joilla on seuraavat tunnusomaiset piirteet: il • * . is.

• » · ."jE

: ” — keskimääräinen molekyylipaino 20 000 Daltonia, sen vaihdellessa alueella Λ • · • * λ j·· : 12 000 - 38 000, geelipermeaation ja elektroforeesin avulla määritettyinä; • * :'5| \ 20 — liukoisuus happamiin vesiliuoksiin.

» · • ·· · Ä • · Ψ m · '7; • · • · · Y. Tunnettua on, että eräillä eläinperäisillä glykoproteiineilla kuten kollageenilla ja

• · · S

proteoglykaaneilla on ihoon kohdistuvaa edullista vaikutusta, kun niitä käytetään | paikallisesti sellaisenaan tai sopiviin valmisteisiin sisällytettyinä.

25 , -*! :·. Kollageenia, joka on runsaasti proliinia ja hydroksiproliinia sisältävä glykoproteiini, v .':· käytetään erityisesti sellaisenaan tai yhdessä muiden polypeptidiperusainciden kanssa , y ryppyjen ja muiden, ihon heikkoon kosteuteen ja kimmoisuuteen liittyvien epäesteet- ♦ · tisten virheiden käsittelemiseksi. Kuitenkin kollageenin eläinalkuperä rajoittaa sen »k *·*· 30 käyttöä, sillä vaarana voi olla se, että se on kontaminoitunut viruksilla ja toksiineilla. | * * ;·,®ι ! ! 1 • *t Vaikka kasviperäisiin yhdisteisiin ei liitykään näitä vaaroja, niin kuitenkin tähän saakka niiden käyttö kosmetiikassa on ollut melko rajallista: alalla tunnetaan esimer- /j- 118156 : 2 "tl kiksi sellaisia kosmeettisia valmisteita, jotka sisältävät sellaisista kasveista kuten Aloe saatuja raakauutteita tai jopa kokonaisia hienonnettuja kasveja kuten avokadoa.

./V· tf

Tunnettuja ovat kasviperäiset, ekstensiineiksi kutsutut glykoproteiinit, joita kasvisolut 5 tuottavat lisääntymisvaiheessa ja joilla on samankaltainen rakenne kuin eläinperäisellä l§ kollageenilla. Patenttijulkaisussa EP-A-0 533 4078 on kuvattu ekstensiinien, joiden keskimääräinen molekyylipaino on enemmän kuin 100 000 Daltonia, kosmeettinen |

käyttö. Tämän mennessä kuvatuilla menetelmillä ekstensiinien uuttamiseksi, joissa S

menetelmissä alkuperältään erilaisia kasvimateriaaleja uutetaan veteen tehdyillä 10 suolaliuoksilla, minkä jälkeen ne puhdistetaan vahvoilla hapoilla kuten trikloorietik- v ·? kahapolla, ei saada kuitenkaan kosmetiikkaan sopivia tuotteita niiden liukoisuuteen sekä kemiallis-fysikaalisten ominaisuuksien pysyvyyteen, toistettavuuteen ja yhden- ΐ

mukaisuuteen liittyvistä ongelmista johtuen. I

.

..^1 15 Nyt ollaan todettu, että runsaasti hydroksiproliinia sisältäviä glykoproteiineja, jotka ^ ovat rakenteellisesti edellä kuvattujen ekstensiinien kaltaisia, mutta joilla on pienempi / * * ; [’ molekyylipaino ja suurempi liukoisuus happamiin vesiliuoksiin, voidaan saada • ’ menetelmällä, jossa valittujen kasvien soluja viljellään in vitro ja nämä sopivassa j • # .

• »· , elatusalustassa kasvatetut solut uutetaan happamilla alkoholiliuoksilla.

* · · m ' 20 i * * -h.

* · · ]·,·, Keksinnön mukaisesti saatavilla glykoproteiineilla on kosteuttavia, kalvon muodosta- <11 * 1 '!ΐ-φ via, kiinteyttäviä ja arpeuttavia ominaisuuksia, jotka ovat paremmat kuin kollageenil- la. Näin ollen tämän keksinnön mukaisia glykoproteiineja voidaan käyttää kos- .i meettisissa tai dermatologisissa valmisteissa kuivan ihon, psoriasiksen, suomutaudin,

·*·. 25 hilseen, sarveistumisen, ryppyjen, aknen, ihottuman, tulehduksellisen ihotaudin ja I

**·’ ihon vanhenemisen käsittelemiseksi sekä kaikissa muissa sellaisissa sovellutuksissa, joihin on ehdotettu eläinperäistä kollageenia. i • · /' ···.

I I » ···

Keksinnön mukaisten glykoproteiinien vesiliuokset ovat pysyviä ilman glykoproteii- ί • * < • · - 30 nien minkäänlaista polymeroitumista, joka polymeroituminen johtaa liukenemattomi- » en tuotteiden muodostumiseen. Lisäksi näiden liuosten viskositeetti on erityisen suuri ύ eikä riipu pitoisuuksista; 0,1 %:n pitoisuuksilla on yllättäen sellainen kalvon 3 * 118156 muodostava ja kosteuttava kyky, joka vastaa 1 % kollageeniliuosta tai 5 % kasvial-bumiiniliuosta.

v:& '

Uutettava kasvimateriaali saadaan Taxus spp. Gineko biloba. Lvcopersicum esculen-5 turn ja Daucus carota -solujen fermentoriviljelmistä. Erityisen edullisesti käytetään §

Taxus spp.. Gineko biloba ja Lvcopersicum esculentum -soluja. Soluviljelytekniikat ovat tavanomaisia ja niistä voidaan mainita suspensioviljely lähtien eri kasvinosien -ΐ f, kuten lehtien, kuoren, juurien, varren tai siemenien callus-viljelmistä, kuten Dobbs j ja Roberts ovat kuvanneet teoksessa Experiments in Plant Tissue Culture, 2. painos,

10 Cambridge University Press, New York, 1985. rM

.--¾

Callus-kasvikudosta, joka on ensin steriloitu ja johon on lisätty valinnaisesti baktereja | toijuvia aineita, siirrostetaan tyypillisesti sopivaan nestemäiseen viljelyalustaan edellä i| mainitussa, Dobbs:in ja Robertson käsikirjassa kuvatulla tavalla. Keksinnön puitteis- 15 sa erityisen sopiva alusta on Murashige- ja Skoog-alusta. Erityisten lisäaineiden ' kuten proliinin, pelkistävien aineiden, etyleenin tai etyleeniä vapauttavien yhdisteiden & l*· ·’&

* kuten tuotteet Ethephon tai L-aminosyklopropaanikarboksyylihapon lisääminen I

% · ;;· saattaa olla sopivaa toivottujen glykoproteiinien tuotannon parantamiseksi. i

* · · '-A

* » * * * • · 20 Edullista on, että naftyylietikkahappoa käytetään auksiinina, 6-(7,7-dimetyyIiamino)- -s * ··· • · puriinia käytetään sytokiinina ja vitamiineja ja 3 % sakkaroosia käytetään hiilen v v| lähteenä. C-vitamiinin lisääminen saattaa olla sopivaa, valitusta materiaalista :% riippuen, lopullisen tuotteen ruskettumisen estämiseksi.

'1 25 Fermentointiaika voi vaihdella 3 vuorokaudesta 12 vuorokauteen, sen ollessa ΐ§ : · *’!* edullisesti 5—6 vuorokautta. Fermentoinninpäätyttyä viljelyalusta sentrifugoidaanja Λ ’ solumassa uutetaan alkoholeilla, edullisesti etanolilla laimeiden mineraalihappojen, | ,·"· edullisesti kloorivety- tai rikkihapon läsnä ollessa. Tämä menettelytapa inaktivoi * - eräitä entsyymejä, jotka saattavat vaarantaa keksinnön mukaisten glykoproteiinien j :Y * ’’ 30 pysyvyyttä, ja joista voidaan mainita erityisesti polyfenolioksidaasi ja tyrosiinioksi- f daasi, jotka edistävät glykoproteiinien polymeroitumista, jonka seurauksena muodos- | tuu liukenemattomia tuotteita.

118156 t 4 . .- . ·ά\

Alkoholiuutto mineraalihappojen läsnä ollessa tekee mahdolliseksi emäksisten glykoproteiinien täydellisen uuttamisen, ja se on osoittautunut äärimmäisen selektiivi- x seksi tähän tarkoitukseen. Etanolin lisäksi voidaan käyttää myös muita veteen se- f koittuvia alkoholeja kuten metanolia tai isopropanolia. Tuloksena saadut, vettä ja 5 alkoholia sisältävät uutteet neutraloidaan ja sitten ne väkevöidään ja kuumennetaan alueella 70—100 °C olevaa lämpötilaan, edullisesti noin 80 °C:n lämpötilaan, kunnes denaturoituneet proteiinit ovat saostuneet täydellisesti. Sitten suspensio kirkastetaan ^ väkevöimällä ja fluidi johdetaan fraktioivaan ultrasuodatukseen suuri- ja pienimole- - kyy listen aineiden poistamiseksi, Ultrasuodatus toteutetaan polysulfonikalvoilla, 10 joiden erottava raja-arvo ("cut-off") on alueella 10 000 - 40 000 Daltonia, ja joista voidaan mainita Centricon® tai Romicon®, joiden kuidut voivat olla onttoja tai vaihtoehtoisesti kierremäisiä. Tuloksena oleva suodatettu tuote dialysoidaan sähköisesti ; ,¾ sellaisten epätoivottujen aineiden kuten suolojen ja pienimolekyylisten sokereiden ;·. poistamiseksi. Suodatuksen ja dialyysin jälkeen tuloksena olevaa liuosta voidaan * · 1 * # : 15 käyttää sellaisenaan kosmeettisissa tai farmaseuttisissa valmisteissa, tai se voidaan -¾ * · · • · · · väkevöidä pieneen tilavuuteen ja sitten lyofilisoida tai sumuttaa.

· 1 -,‘jä· * m m * 1

Keksinnön mukaisten tuotteiden tunnusomaiset piirteet analysoitiin geelipermeaation 1 : avulla, käyttäen suuripaineista nestekromatografia, joka käsitti Waters-pumppuyksi- 20 kön ja jossa käytettiin Ultrahydrogel Linear Waters® -pylvästä, 30 cm x 0,5 cm, « sekä UV-absorptioon perustuvaa Waters-ilmaisinta, malli 484. Eluenttina käytettiin vesiliuosta, joka sisälsi 0,067 M monokaliumfosfaattia, 0,1 M NaCl sekä 6xl0'4 M : i|§ .. ·'» • 1·· NaN3. Analysoitavat glykoproteiininäytteet liuotetaan tähän samaan eluenttiliuokseen • ·« . , if (3 mg/10 ml), samoin kuin skalaarisia määriä tätä ainetta sekä niitä viiteaineita, jotka ” 25 on valittu molekyylipainomerkeiksi Sytokromi C:n (12 400 Daltonia) ja dekst- :t : raanisinisen (2 000 000 Daltonia) väliltä; tuotteet tai niiden välituotteet voidaan ¾ • · määrittää vaihtoehtoisesti tai samanaikaisesti elektroforeettisesti 12,5 % polyakryy- | • · ."’i • ;··· liamidigeelillä ja 4 % pinoavalla geelillä. Analysoitavat näytteet liuotetaan puskuriin, joka sisältää SDS.ia ja 0,1 % merkaptoetanolia, käyttäen alueella 100—300 mg j 30 olevia määriä. Liikkuminen saadaan aikaan käyttäen 4 tunnin ajan 20 mA:n vakiovir- ^

taa. Standardikäyrä määritetään 5 standardipainon avulla (7 kD, 14 kD, 24 kD, I

54 kD ja 66 kD). Tämän standardikäyrän avulla kahden pääasiallisen vyöhykkeen , 118156 ' - 5 -¾ painoiksi lasketaan 22,5 kD ja 25 kD, ja vähemmän voimakkaiden vyöhykkeiden painoiksi saadaan laskemalla 31 kD ja 34 kD. Ohessa kuvattujen menettelytapojen avulla erilaisten kasvien soluviljelmistä voidaan saada tuoteseoksia, joissa tuotteilla on samankaltainen molekyylipaino sekä samankaltainen aminohappokoostumus.

5 Gingko biloba -soluista uutettujen glykoproteiinien aminohappoanalyysistä saadut i 'Of tulokset on esitetty esimerkkinä seuraavassa: Ί

Aminohappo Piikin pinta-ala, % ί

Asp 4,399 10 Glu 4,328 §

Hyp 17,505

Ser 7,065 ^

Gly 6,056 | ... Hys 1,782 • * * : 15 Arg 2,471 ~r * · * ' :*! ' Thr 4,739 1 M % .\ : Pro 10,036 f • * * :·. Ala 8,2 : ♦* : ϊ

Tyr 2,388 20 Vai 6,162

Met 1,154

Ile 2,479 § • *·· Leu 5,525 0 Phe 1,862 :*:*· 25 Lys 14,254 4 • :3 • · · - - i»_ • * te • · • »f • ·

Edellä olevat tulokset on laskettu prosentuaalisena osuutena glykoproteiiniseoksessa > ·.·.* ..:¾ läsnä olevien aminohappojen kokonaismäärästä. Seoksessa olevat sokerit ovat i; arabinoosi ja galaktoosi. Aminohappojen ja sokereiden välinen suhde on keskimäärin * % 30 2:1 eri tuotteiden tapauksessa.

-- .-¾

’ I

118156 ί 6 . ’ - f

Kuten edellä on mainittu, keksinnön mukaisia tuotteita voidaan käyttää sekä far-maseutiikassa että kosmetiikassa. Farmaseutiikassa tuotetta voidaan sisällyttää geeleihin tai juokseviin voiteisiin tai levittää sideharsoon palovammojen tai haavojen f erityiseksi hoitamiseksi. Tässä tapauksessa tuote steriloidaan tai steriilisuodatetaan ja 5 lyofilisoidaan, i||

Keksinnön mukaiset kosmeettiset ja dermatologiset valmisteet voidaan valmistaa 4 tavanomaisten menetelmien mukaisesti. Esimerkkeinä käyttömuodoista voidaan mainita vettä sisältävät sumutteet, vedet, liuokset, emulsiot, geelit, juoksevat voiteet 10 ja voiteet. a n

Keksinnön mukaiset kosmeettiset ja dermatologiset valmisteet voivat sisältää runsaas- ti hydroksiproliinia sisältäviä glykoproteiineja noin alueella 0,01—50 %, edullisesti * •f .. 0,05—5 % olevina painoprosentuaalisina osuuksina, sekä tavanomaisia täyteaineita.

: ’*· a- • 15 Keksinnön mukaisten glykoproteiinien suuren pysyvyyden ansiosta voidaan saada 1 • * * • * * * sellaisia farmaseuttisia ja kosmeettisia valmisteita, jotka sisältävät enemmän kuin 50 ·· • ft • -4? .·, : % liukoisia, runsaasti hydroksiproliinia sisältäviä glykoproteiineja. il • · f····’· • · ····«*.

f ·· -.·<!*.

• '«r

Keksinnön mukaiset glykoproteiinit voidaan lisätä farmaseuttisiin ja kosmeettisiin 20 valmisteisiin sellaisenaan tai mikrokapseloituina siten, että päästään pitkäaikaiseen j koskeuttavaan vaikutukseen. Nämä mikrokapselit voivat olla joko hydrofiilisia tai lipofiilisia. Keksinnön mukaiset valmisteet voivat sisältää myös muita aktiivisia g .. - ' 'f • *·. aineosia, joilla on täydentävää tai muunlaista käyttökelpoista aktiivisuutta toivottuja tavoitteita ajatellen.

:V 25 • · & •jm··

Keksintöä kuvataan edelleen seuraavilla esimerkeillä. ® • t» ♦ · · . ·'·},' • · '· • » λ , i •i .¾ 7 118156

Esimerkki 1

Gingko bilobarn callusviljelmän ja nestemäisen viljelmän valmistus glykoproteii- | nien tuottamiseksi 5-

Gingko biloba:n nuorista lehdistä peräisin oleva soluviljelmä valmistetaan pesemällä lehdet 0,1 % Tween 80®-liuoksessa. Lehtilavat leikataan noin 0,5 cm:n paloiksi ja | niitä steriloidaan ensin 1 minuutin ajan 75 % etanolilla. Sitten sterilointia täydennetään 2 % natriumhypokloriittiliuoksella, ja kasvisolut pestään kolmeen kertaan 10 steriilissä vedessä. Tuloksena saadut kasvisolut siirretään petrimalajlle, jolla on Murashigi & Skoog-alustaa, joka sisältää 3 % sakkaroosia, ja johon lisätään Lyns-meyer & Skoog-vitamiineja ja hormoneja kuten 2,4-dikloorifenoksietikkahappoa ja naftyylietikkahappoa. Tuotteita inkuboidaan pimeässä, 23 °C:ssa 20 vuorokauden .* ;·, ajan. Tämän jakson päätyttyä saadaan hauraita callus-muodosteita, jotka kasvavat • ·« • ,·. 15 helposti ja jotka siirretään jatkuviin riveihin samoissa olosuhteissa toteutettujen ? • · • # » · t aliviljelmien avulla, koska ne voidaan saattaa lisääntymään nestemäisessä alustassa. ^ ·*..! Näitä callus-muodosteita siirrostetaan Erlenmeyer-pulloihin, jotka sisältävät 200 ml "% » ·

Murashige & Skoog-alustaa, johon lisätään naftyylietikkahappoa ja 6-(y,y-dimetyy- g : : : liamino)-puriinia, Lynsmeyer & Skoog-vitamiineja sekä 3 % sakkaroosia hiilen 20 lähteeksi. Pulloja inkuboidaan samalla jatkuvassa valossa sekoittaen 4 vuorokauden ajan, minkä jälkeen solubiomassa otetaan talteen glykoproteiinien uuttamista varten.

f • · : *·· Esimerkki 2 ... i : : « * * :*:** 25 Glykoproteiinien valmistus Gingko biloba -soluista i • · ;% • ψ « * » · · • t

Viisi litraa esimerkin 1 mukaisesti saatua viljelmää sentrifugoidaan pienellä no- | ·;··: peudella ja talteen saadut solut (tuorepaino 1,5 kg) uutetaan 1,5 litralla 70 % etanolia, joka sisältää 1 % rikkihappoa. Uuttaminen toistetaan kahdesti, jolloin f 'j 30 emäksiset glykoproteiinit saadaan talteen kvantitatiivisesti. Neutraloinnin jälkeen i uutteet suodatetaan mahdollisen sameuden poistamiseksi ja ne väkevöidään tyhjössä, Ϊ 50 °C:ssa, kunnes etanolia on saatu poistetuksi kokonaan. Vesipitoinen tiiviste i ·/> 118156 : : 0-¾ 8 ΐ kuumennetaan 85 °C:n lämpötilaan 30 minuutiksi ja se sentrifiigoidaan jälleen sakan poistamiseksi, joka sakka hylätään. Tuloksena saatu kirkas liuos ultrasuodatetaan Centricon®-kalvolla, jonka erotusraja on 40 OOODaltonia, suurimolekyylisten tuottei- '1! den poissulkemiseksi.

5 ; |

Tämän jälkeen tämä suodatettu tuote ultrasuodatetaan käyttäen onttokuitukalvoa, jonka erotusraja on 10 000 Daltonia, pienimolekyylisten, muunlaisten kuin glykopro- I

teiiniaineiden poistamiseksi. Sitten suodos dialysoidaan ja se väkevöidään 1 %:n Ί kiinteäksi jäännökseksi. Tällä tavalla saadaan 1,5 litraa hieman viskoosia tuotetta, 10 jota voidaan käyttää sellaisenaan kosmeettisissa valmisteissa. Elektroforeesianalyysis- i

IS

sä tuotteesta saatiin 6 vyöhykettä, joista neljän molekyylipaino oli vastaavasti 16 000, 22 000, 33 000 ja 36 000 Daltonia.

""'f », Esimerkki 3 ;.· is t I I • · * · :*. Glykoproteiinien valmistus Lycopersicum esculentum -lajista ' ΐ * « « M • · ·*·, Esimerkissä 1 kuvatulla tavalla menettelemällä Lvcopersicum esculentum-kasvin j§ • r*.

I l steriileistä silmuista peräisin olevaa solumassaa valmistetaan 14 litran fermentorissa, 20 joka sisältää 10 litraa Murashige & Skoog-alustaa, johon on lisätty naftyyli- £ etikkahappoa ja 6-(y,y-dimetyyliamino)-puriima, Lynsmeyer & Skoog-vitamiineja • .4¾ sekä 3 % sakkaroosia hiilen lähteeksi. Fermentointi toteutetaan 5 vuorokauden f • ψ • *♦ aikana 23 °C:ssa, samalla 150 kierr./min olevalla nopeudella sekoittaen, olosuh- • · t . -J$ V teissä, joissa on läsnä hiivauutetta 0,05 % olevana pitoisuutena sekä liuennutta » · :*;*· 25 happea noin 70 % olevana pitoisuutena. Fermentoinnin päätyttyä elatusalusta otetaan i ·#· i !( t' talteen ja se mikrosuodatetaan 0,2 μΐη:n keraamisen kalvon läpi solujen väkevöimi- * • · .·.· seksi. Täten saatuun solutahnaan lisätään vähän isopropanolia, joka sisältää 0,5 % f • * « fi kloorivetyhappoa, ja esimerkissä 2 kuvattua menetelmää sovelletaan näihin uutteisiin, Ϊ Tällä tavalla saadaan 3,5 litraa liuosta, kuivan jäännöksen ollessa 0,5 %. Lyofili- ^ s*· 30 soitujen liuosten analyysi osoitti, että proliinipitoisuus oli 10 % ja hydroksiproliinipi- ? toisuus oli 31 %. 4 9 * 118156

Esimerkki 4 Ί

Kosmeettinen valmiste ® 5 100 g öljy/vedessä-emulsiota sisältää:

Esimerkin 2 tai 3 liuos 10,0 g §

Asetyloitu lanoliinialkoholi PEG-10 2,0 g ^

Setyyli-stearyylialkoholi 1,5 g 10 Setyylipalmitaatti 2,0 g

Steariinihappo 7,0 g

Oktyyli-oktanoaatti 7,5 g ä

Kalium-setyylifosfaatti 0,5 g 4¾ 15 .. Säilöntäaineet tarvittava määrä • *·· ..¾ ! . 15 Hajuste tarvittava määrä | * * ' ·" Puhdistettu vesi 100 grammaksi : * .· » · • » Λ • · * » ·> ,

Esimerkki 5 4 i m * * • · 20 Kosmeettinen valmiste 100 g öljy/vedessä-emulsiota sisältää: ^ * * ♦ • · · i v Esimerkin 2 tai 3 liuos 10,0 g * * ;V 25 Setyyli-stearyyliglukosidi 5,0 g ,

• · M

Jojobaöljy 10,0 g • · «

,·.· Isopropyylimyristaatti 8,0 g I

• · • · ..... Dimetikoni 0.5 g

Antioksidantti tarvittava määrä | 30 Säilöntäaineet tarvittava määrä

Hajuste tarvittava määrä ^

Puhdistettu vesi 100 grammaksi __

Claims (3)

1. Runsaasti hydroksiproliinia sisältävät glykoproteiinit (HPRG), joita saadaan | happamalla alkoholiuutolla Gingko biloba-tai Lycopersicum esculentum-kasveista tai 5 niiden soluviljelmästä menetelmällä, tunnettu siitä, että sen käsittämissä vaiheissa: a) Gingko biloba- ja Lycopersicum esculentum-soluja viljellään nestemäisessä alustassa 3—12 vuorokauden pituisen ajanjakson ajan; > b) solumassaa uutetaan veteen sekoittuvilla alkoholeilla laimeiden mineraalihap- 10 pojen läsnä ollessa; £ c) uutteet neutraloidaan, väkevöidään ja kuumennetaan alueella 70-100 °C s olevaan lämpötilaan; d) minkä jälkeen toteutetaan sentrifugointi sakka hyläten, supematantin f fraktioiva ultrasuodatus sekä dialyysi, !':* is ι; » t *·* ·♦. näiden HPRG-proteiinien keskimääräisen molekyylipainon ollessa 20 000 Daltonia, * * - 9 Z .·. vaihteluvälin ollessa 12 000 - 38 000 Daltonia, geelipermeaation ja elektroforeesin n: avulla määritettynä. • · • > * · 2. Kosmeettiset ja farmaseuttiset valmisteet, tunnettu siitä, että ne sisältävät s, vaikuttavana aineena patenttivaatimuksen 1 mukaisia glykoproteiineja, ja joilla on kosteuttavia, kalvon muodostavia, kiinteyttäviä ja arpeuttavia ominaisuuksia. H ·· · · · * · • * * _·"/$- 3. Patenttivaatimuksen 2 mukaiset valmisteet, tunnettu siitä, että ne ovat vesi- • * ·*·* 25 pitoisia sumutteita, vesiä, liuoksia, emulsioita, geelejä, juoksevia voiteita, voiteita * * ' .';ί| :***. sekä lääkeainetta käsittäviä sideharsoja. 0 · · • · * · *.·. .. t * * * * * • « Ί j* 118156 Il 1

1. Hydroprolinrika glykoproteiner (HPRG), som kan erhällas medelst syra-alkoho-lextraktion frän Gingko biloba eller Lycopersicum esculentum växter, eller cellkultu-5 rer av dessa, i enlighet med ett förfarande som är kännetecknat av: f a) odling av Gingko biloba- och Lycopersicum esculentumceller i ett vätske- v formigt medium för en tidsperiod pä 3—12 dagar; b) extraktion av cellmassan med alkoholer som kan blandas med vatten i närvaro C av utspädda mineralsyror; , 10 c) neutralisation, concentration och upphettning av extrakten vid temperaturer i mellan 70 °C och 100 °C; d) centrifugering med avskiljande av fällningen, fraktionell ultrafiltrering och dialys av den flytande fasen; 15 varvid nämnda HPRG:er har en genomsnittlig molekylvikt pa 20 000 Dalton med variationsintervallen 12 000 - 38 000 Dalton; bestämd med hjälp av gelpermeation och elektrofores.

"... 2. Kosmetiska och farmaceutiska preparat, kännetecknade därav, att de : 20 innehäller glykoproteinerna enligt patentkrav 1 som aktivt ämne, vilka har fuktande, ♦ 1 1 · filmbildande, tonande och ärrbildande egenskaper. • · * 1 1 ··· ·2··

3. Preparat enligt patentkrav 2, kännetecknade därav, att de är i form av • · · *\: : vattenhaltiga sprayer, vatten, lösningar, emulsioner, geler, salvor, krämer och bindor 25 som innehäller läkemedel. > ·· ' '··> • · • ·· ··· • · · * 1 · * * 1 1 • · • · *«· • 1 · 1 1 • · ·· • · * ·· * ♦ • · · • · · 2 * ·