FI101227B - Menetelmä farmaseuttisesti aktiivisten 4-desoksi-4-epipodofyllotoksiin ijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

x 101227

Menetelmä farmaseuttisesti aktiivisten 4-desoksi-4-epipodo-fyllotoksiinijohdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av farmaceutiskt aktiva 4-desoxi-4-epipodo-fyllotoxinderivat 5

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää uusien farmaseuttisesti aktiivisten 4-desoksi-4-epipodofyllotoksiinijohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen 10 valmistamiseksi, joilla on kasvaimen vastaista aktiivisuut ta ja jotka ovat käyttökelpoisia kasvaimen vastaisina aineina .

Podofyllotoksiinijohdannaisia, joilla on kasvaimen vastais-15 ta aktiivisuutta, on tunnettu pitkään ja etoposidi ja tani- posidi kuuluvat niiden joukkoon. Kuitenkin nämä yhdisteet voivat aiheuttaa vakavia vastareaktioita mukaanlukien leu- * .·. kopenia, trombopenia, tukanlähtö, pahoinvointi ja oksente- • · lu, joten niitä ei voida kliinisesti ottaa käytöön, koska * » · /-/20 niiden turvallisuutta ei ole varmistettu. Siten tähän saak- ' ka ei ole löydetty tyydyttäviä yhdisteitä.

* · I

*· '· Nämä tekniikan tason ongelmat tiedossaan esillä olevan kek- v ' sinnön keksijä tutki tätä teknologian alaa innostuneesti ja 25 keksi, että uudella 4-desoksi-4-epipodofyllotoksiinijohdan- j naisella, jolla on seuraava yleinen kaava (I) , tai sen far- maseuttisesti hyväksyttävällä suolalla on hyvin voimakas . kasvaimen vastainen aktiivisuus ja se on käyttökelpoinen « m m kasvaimen vastaisena aineena. Havainto on johtanut esillä • · ’•”'3 0 olevaan keksintöön.

·· · • · · • · • ·

Siten esillä oleva keksintö koskee menetelmää farmaseuttises- t · ti aktiivisen 4-desoksi-4-epipodofyllotoksiinijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava 35 2 101227 R-, / ‘

(CH2),N

<X il j> = o h3co-^y^\OCH3 ORl (I) jossa on vetyatomi tai ryhmä R4, joka on metyyliryhmä, bentsyylioksikarbonyyliryhmä, alempialkanoyyliryhmä, jossa 5 voi olla yksi tai useampi halogeeniatomi tai kaavan -Si(Rx)(Ry)(Rz) mukainen ryhmä (jossa Rx, Ry ja Rz ovat samoja tai erilaisia ja kukin on alempialkyyliryhmä tai fenyyli-ryhmä) ; R2 ja R3 ovat samoja tai erilaisia ja kukin on vetyatomi, ,10 sykloalkyyliryhmä tai alempialkyyliryhmä, joka voi olla substituoitu hydroksilla, alemmalla alkoksilla, fenyylillä, '· : piperidyylillä, pyridyylillä, morfolinyylillä tai kaavan -N(Rc) (Rd) mukaisella ryhmällä (jossa Rc ja Rd ovat samoja tai erilaisia ja kukin on alempialkyyliryhmä) , tai toinen : :15 ryhmistä R2 ja R3 on kaavan -N(Ra) (Rb) mukainen ryhmä (jossa

Ra ja Rb ovat samoja tai erilaisia ja kukin on alempialkyy-j'.i# liryhmä tai fenyyliryhmä tai Ra ja Rb voivat yhdistyä, joi- loin muodostuu alempialkyyli-substituoitu piperatsinoryhmä) , • · · tai R2 ja R3 voivat yhdistyä, jolloin muodostuu piperatsino- • · · :20 ryhmä, piperidyyliryhmä, morf oi inyyli ryhmä tai pyrrolidinyy- • · · liryhmä, jotka kaikki voivat sisältää lisäsubstituentin, joka on alempi alkyyliryhmä, joka voi olla substituoitu hydroksil- • · : la, tai piperidinoryhmä; ja • · · n on 2 tai 3; 25 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi.

Esillä olevan keksinnön mukaisesti yleisen kaavan (I) mukaisella yhdisteellä on erinomainen kasvaimen vastainen aktiivisuus ja se on tehokas erilaisten kasvainten käsit-30 telyssä.

3 101227

Viitaten edellä olevaan yleiseen kaavaan (I), alempi alka-noyyliryhmä Ri käsittää suoraketjuiset tai haarautuneet C2-5-alkanoyyliryhmät kuten asetyyli, propionyyli, butyryy-li, isobutyryyli, valeryyli, isovaleryyli, pivaloyyli, jne.

5 ja halogeeniatomi voi olla esimerkiksi fluori, kloori, bro mi tai jodi. Alempi alkyyliryhmä, jota merkitään symboleilla Rx, Ry, Rz, R2, R3, Ra, Rb, Rc ja Rd, käsittävät suoraket juiset tai haarautuneet C^.5-alkyyliryhmät kuten metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, isobutyyli, 10 sek-butyyli, tert-butyyli, pentyyli, neopentyyli, heksyyli ja niin edelleen.

Viitaten edelleen edellä olevaan yleiseen kaavaan (I), alem-pialkoksiryhmä käsittää suoraketjuiset tai haarautuneet 15 Ci.g-alkoksiryhmät kuten metoksi, etoksi, n-propoksi, iso- propoksi, n-butoksi, isobutoksi, sek-butoksi, tert-butoksi, pentyylioksi, heksyylioksi ja niin edelleen. Sykloalkyyli-ryhmä käsittää C3 _ 5-sykloalkyyliryhmät kuten syklopropyyli, ;y: syklobutyyli, syklopentyyli, sykloheksyyli ja niin edelleen.

. *.*:2 0

Kaavan (I) mukaisen 4-desoksi-4-epipodofyllotoksiinijohdan-naisen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola käsittää vastaa-!,.* vat erilaisten orgaanisten happojen kuten muurahaishappo, * * etikkahappo, propaanihappo, trifluorietikkahappo, viinihap- 25 po, omenahappo, maleiinihappo, fumaarihappo, meripihkahap- • « ; ** po, oksaalihappo jne. suolat ja erilaisten epäorgaanisten »·» ·.· · happojen, kuten suolahappo, vetybromihappo, rikkirikkihap- : po, fosforihappo ja niin edelleen, suolat.

• · · · • · * · *·* 30 Edullinen yleisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden joukko • · · • .* on yhdisteet, joissa Ri on vetyatomi tai bentsyylioksikar- ·.’·* bonyyliryhmä.

Edullisin joukko ovat yhdisteet, joissa R^ on vetyatomi ja 35 R2 ja R3 ovat samoja tai erilaisia ja kukin on vetyatomi, tai alempialkyyliryhmä, joka voi olla substituoitu piperi-dyylillä, pyridyylillä, morfolinyylillä tai kaavan -N(Rc)(Rd) mukaisella ryhmällä (jossa Rc ja Rd ovat samoja 4 101227 tai erilaisia ja kukin on alempialkyyliryhmä), tai toinen ryhmistä R2 ja R3 on kaavan -N(Ra)(Rb) mukainen ryhmä (jossa Ra ja Rb ovat samoja tai erilaisia ja kukin on alempialkyyliryhmä tai Ra ja Rb voivat yhdistyä, jolloin muodostuu 5 alempialkyyli-substituoitu piperatsinoryhmä) tai R2 ja R3 voivat yhdistyä, jolloin muodostuu piperatsinoryhmä, pipe-ridyyliryhmä, morfoiinyyliryhmä tai pyrrolidinyyliryhmä, jotka kaikki voivat olla substituoidut alemmalla alkyyli-tai piperidinoryhmällä.

10

Yleisen kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan keksinnön mukaisesti valmistaa siten, että johdannainen, jolla on kaava R7 < Il o

r O

’· ' H3Co^^Y/\0CH3 ; ·: 0R4 (Ie) ·".· · jossa R4 tarkoittaa samaa kuin edellä ja R7 on kaavan -(CH2) mCHO mukainen ryhmä (jossa m on 1 tai 2) tai alempi-alkyyliryhmä, jossa on ketoaldehydiryhmä, altistetaan pel-kistävälle aminoinnille aminoyhdisteen kanssa, jolla on kaava *. *20 Γ”: hn • · · N.

r3 (IV) • · • · * jossa R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin saa daan johdannainen, jolla on kaava 25 5 101227

(CH2)nN

^ 1 XR3 \ II ° Ξ f^\ h3co^^Y>\OCH3 OR4 df) jossa R2, R3, R4 ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, ja haluttaessa kaavan (If) mukainen johdannainen, jossa R4 on 5 bentsyylioksikarbonyyliryhmä, pelkistetään katalyyttisesti, jolloin saadaan johdannainen, jolla on kaava ^r2

(CH2)nN

^ X

\ Il 0 .:, = o

r^S

1 H3CO^^Y^\OCH3 OH (Ig) • « • · · • · · V ϊΙΟ jossa R2, R3 ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, ja halut- :.·. taessa saatu johdannainen muutetaan farmaseuttisesti hyväk- • · · *··’·. syttäväksi suolaksi.

• · m : V Kun ryhmä R7 kaavassa (Ie) on alempialkyyliryhmä, jossa on • · ·.'·· 15 ketoaldehydiryhmä, se käsittää Ci-g-alkyyliryhmät, joissa on a- tai β-ketoaldehydiryhmät, kuten 2-okso-2-formyyli-1-etyyli, 2-okso-3-formyyli-l-propyyli, 3-okso-3-formyyli-l-propyyli, 3-okso-4-formyyli-1-butyyli ja niin edelleen.

20 Yleisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistusta kuvataan seuraavassa reaktiokaavion 1 avulla.

6 101227

Reaktiokaavio 1

OH

<°rrv°

"ft 9h3 Menetelmä A

X O + CH,-Si-Rs —---- ή όΗί H3CO IT OCHj (lll) on, O')

Rs R6 <°πΓ° <°XTj °

Menetelmä B

ά° " ώ° h3co if och3 h3co t och3 OR, OR, (la) (lb)

MeneteLnä^C^^^^^" Menetelmä D

x Re Re

^oMenetelmä Menetelmä F

RnCO^^i^OCRa H3CO^Y^ OCH3 HjCO^Y^ OCH3 : .·. 0R4 0H ~ ORg :.: : (lc) (w) (ie) • · • · r2

:’·.· HN{ (|V) Menetelmä G

' R3 ’·’*· R2 r2 *·.·; (CH2)nN( (CH2)nN(

R;) R3 Menetelmä H

s Δ° ώ° H3CO T OCH3 HjCO t och3

OR, OH

: 00 (ig) 7 101227

Edellä olevissa kaavoissa R4 on metyyliryhmä, bentsyyliok-sikarbonyyliryhmä, alempialkanoyyliryhmä, jossa voi olla yksi tai useampi halogeeniatomi tai kaavan -Si(Rx)(Ry)(Rz) mukainen ryhmä (jossa Rx, Ry ja Rz ovat kuten edellä on 5 määritelty); R5 on alempialkenyyliryhmä; Rg hydroksin si sältävä alempi alkyyliryhmä; R7 on kaavan -(CH2)mCH0 mukainen ryhmä (jossa m on kuten edellä on määritelty) tai alem-pialkyyliryhmä, jossa on ketoaldehydiryhmä; Rg on kaavan - (CH2)mCHO mukainen ryhmä; Rg on metyyliryhmä, bentsyyliok-10 sikarbonyyliryhmä, alempialkanoyyliryhmä, jossa voi olla halogeeniatomi, tai kaavan -Si(Rx)(Ry)(Rz) mukainen ryhmä (jossa Rx, Ry ja Rz ovat kuten edellä on määritelty); R2, R3 ja n ovat vastaavia kuin edellä on määritelty; edellyttäen kuitenkin, että R4 ja Rg eivät ole samoja.

15

Kukin edellä kaavamaisesti esitetty menetelmä selitetään seuraavassa.

Menetelmä A

:'· ;20 Yleisen kaavan (II) mukainen tunnettu 4-epipodofyllotoksii- ni saatetaan reagoimaan yleisen kaavan (III) mukaisen alem-

« · I

; man alkenyylisilaanin kanssa Lewisin hapon kanssa sopivassa ·.. liuottimessa, jolloin saadaan haluttu yleisen kaavan (Ia) mukainen johdannainen, jossa R5 on alempi alkenyyliryhmä.

25 Liuotinta ei rajoiteta erityisesti mihinkään erityiseen, ** sillä se ei osallistu reaktioon. Käyttökelpoisiin liuotti- ♦ · · *·* * miin kuuluu esimerkiksi aproottiset liuottimet kuten halo- • genoidut hiilivedyt, esimerkiksi dikloorimetaani, kloro- • * · « ,***. formi, 1,2-dikloorietaani, jne., ja eetterit, esimerkiksi « « · 30 tetrahydrofuraani, dioksaani, jne. Lewisin happoihin, joita • m « : ·* voidaan käyttää, kuuluvat esimerkiksi titaanitetrakloridi, • · • · · * *: trimetyylisilyylitrifluorimetaanisulfonaatti, sinkkibromi- di, booritrifluoridi-etyylieetteri ja niin edelleen. Tässä reaktiossa käytetään edullisesti yleisen kaavan (III) mu-35 kaista yhdistettä 1-5 mooliekvivalentin suhteessa lasket tuna yleisen kaavan (II) mukaisesta yhdisteestä ja Lewisin happoa käytetään edullisesti 0,5 - 3 mooliekvivalentin suhteessa laskettuna yleisen kaavan (II) mukaisesta yhdistees 8 101227 tä. Reaktiolämpötila on -100 - 100 °C ja edullisesti -20 -20 °C.

Menetelmä B

5 Yleisen kaavan (Ia) mukainen johdannainen, joka saatiin mene telmässä A, hapetetaan inertissä liuottimessa, jolloin saadaan haluttu yleisen kaavan (Ib) mukainen johdannainen, jossa Rg on hydroksin sisältävä alempi alkyyliryhmä. Liuottimena voidaan käyttää hiilitetrakloridia, asetonitriiliä, etikka-10 happoa, vettä, pyridiiniä, jne. joko yksin tai yhdistelmänä.

Hapetusaine voi olla esimerkiksi ruteniumoksidi, natriumper-jodaatti tai osmiumtetraoksidi. Tässä reaktiossa hapetusai-netta käytetään edullisesti 0,1 - 2 mooliekvivalenttia suhteessa yleisen kaavan (Ia) mukaiseen yhdisteeseen. Reaktio-15 lämpötila on -10 - 80 °C ja edullisesti 0 - 20 °C.

Menetelmä C

Yleisen kaavan (Ia) mukainen johdannainen, joka saatiin me-netelmässä A, altistetaan samanaikaisesti hapetukselle ja ,20 pelkistykselle inertissä liuotimessa, jolloin saadaan ha- luttu yleisen kaavan (Ie) mukainen johdannainen, jossa R7 ; on kaavan -(CH2)mCH0 mukainen ryhmä tai alempialkyyliryhmä, /.·' jossa on ketoaldehydiryhmä. Liuottimena voidaan käyttää hiilitetrakloridia, metyleenikloridia, etikkahappoa, vettä, 25 tetrahydrofuraania, pyridiiniä, jne. joko yksin tai yhdis- • ** telmänä. Pelkistysaine voi olla esimerkiksi boraani-dime- « · · *·’ 1 tyylisulfidi, tiamyyliboraani-dimetyylisulfidi tai sellai- nen, kun taas hapetusaine voi olla esimerkiksi kromihappo ··· » ,**·. tai pyridiniumkloorikromaatti. Tässä reaktiossa pelkistys- • · · 30 ainetta käytetään edullisesti suhteessa 0,5-2 mooliekvi- « · · ; ·1 valenttia ja hapetusainetta suhteessa 1-3 mooliekviva- • « • · · *. 1: lenttia, kumpikin perustuen laskettuna kaavan (Ia) mukai sesta yhdisteestä. Reaktiolämpötila on -10 - 50 °C ja edullisesti 0-20 °C.

35

Menetelmä D

Haluttu yleisen kaavan (Ie) mukainen johdannainen, jossa R7 on kaavan -(CH2)mCHO mukainen ryhmä tai alempialkyyliryhmä, 9 101227 jossa on ketoaldehydiryhmä, voidaan saada myös hapettamalla inertissä liuottimessa yleisen kaavan (Ib) mukainen johdannainen, joka on saatu menetelmässä B. Liuottimena voidaan käyttää hiilitetrakloridia, metyleenikloridia, etikkahap-5 poa, tetrahydrofuraania, dietyylieetteriä, bentseeniä, jne.

joko yksin tai yhdistelmänä. Hapetusaine voi olla esimerkiksi kaliumpermanganaatti, lyijytetra-asetaatti, pyridi-niumkloorikromaatti tai sellainen. Tässä reaktiossa hape-tusainetta käytetään edullisesti suhteessa 0,8 - 3 mooli-10 ekvivalenttia suhteessa yleisen kaavan (Ib) mukaiseen yhdisteeseen. Reaktiolämpötila on 0 - 50 °C ja edullisesti 0 - 20 °C.

Menetelmä E

15 Yleisen kaavan (Ie) mukainen johdannainen, joka saatiin me netelmässä C tai D, pelkistetään katalyyttisestä katalyytin läsnäollessa inertissä liuottimessa, jolloin saadaan halut-; tu yleisen kaavan (Id) mukainen johdannainen, jossa Rg on :: : kaavan -(CH2)mCH0 mukainen ryhmä. Liuotinta ei ole erityi- :'· :20 sesti rajoitettu mihinkään, sillä se ei osallistu reak- tioon. Liuottimena voidaan käyttää esimerkiksi etyyliase- • « t * : taattia, metanolia, tetrahydrof uraania, jne. joko yksin tai yhdistelmänä. Katalyytti voi olla esimerkiksi palladium- « < < musta, platina tai sellainen. Vedyn paine voi olla 1-3 25 ilmakehää ja edullisesti 1-2 ilmakehää. Reaktiolämpötila • " on 0 - 40 °C ja edullisesti huoneenlämpötila.

• · « • · ·

• Menetelmä F

• · · ·

Yleisen kaavan (Id) mukainen johdannainen, joka saatiin me- • · « 3 0 netelmässä E, saatetaan reagoimaan asylointiaineen tai si- t · · \ ·[ lylointiaineen kanssa emäksen läsnäollessa inertissä liuot- * · · *· ’· timessa, jolloin saadaan haluttu yleisen kaavan (Ie) mukai nen johdannainen. Liuotinta ei ole mitenkän rajoitettu, sillä se ei osallistu reaktioon ja hiilitetrakloridia, me-35 tyleenikloridia, tetrahydrofuraania, bentseeniä, dimetyyli- formamidia, dimetyyliasetamidia, jne., voidaan käyttää joko yksin tai yhdistelmänä. Emäs voi olla esimerkiksi pyridii-ni, dimetyyliaminopyridiini, imidatsoli tai sellainen. Asy- 10 101227 lointiaineisiin kuuluu happoanhydridit kuten asetanhydridi, propionianhydridi, voihappoanhydridi, isobutyyrihappoanhyd-ridi, valerihappoanhydridi, klooriasetanhydridi jne., ja happohalidit kuten asetyylikloridi, propionyylikloridi, n-5 heksanoyylikloridi, klooriasetyylikloridi, diklooriasetyy- likloridi ja niin edelleen. Silylointiaineisiin kuuluu t-butyylidimetyylisilyylikloridi, tri-isopropyylisilyyliklo-ridi, t-butyylidifenyylisilyylikloridi ja niin edelleen.

Tässä reaktiossa emästä käytetään edullisesti suhteessa 10 0,01 - 7 mooliekvivalenttia ja asylointiainetta tai sily- lointiainetta käytetään edullisesti suhteessa 1:5 mooliekvivalenttia, kummankin perustuessa yleisen kaavan (Id) mukaiseen yhdisteeseen. Reaktiolämpötila on 0 - 50 °C ja edullisesti 0-20 °C.

15

Menetelmä G

Yleisen kaavan (Ie) mukainen johdannainen, joka saatiin menetelmässä C tai D, altistetaan pelkistävälle aminoinnille yleisen kaavan (IV) mukaisen aminoyhdisteen kanssa inertissä •Λ 20 liuottimessa, jolloin saadaan haluttu yleisen kaavan (If) mukainen yhdiste, joka vastaa yleistä kaavaa (I). Liuotinta , ei ole rajoitettu mitenkään, sillä se ei osallistu reaktioon.

_· Siten esimerkiksi alkoholeja kuten metanoli, etanoli, jne.,

• I

eettereitä kuten tetrahydrofuraani, dioksaani, jne., vettä ,, 25 ja niin edelleen voidaan käyttää yksin tai yhdistelmänä.

* · • " Pelkistävä aine voi olla esimerkiksi natriumboorihydridi, * · · ’·* ' natriumsyanoboorihydridi tai sellainen. Tässä reaktiossa ; yleisen kaavan (IV) mukaista yhdistettä käytetään edullises- • · · « ,**·. ti suhteessa 0,9 - 3 mooliekvivalenttia ja pelkistävää • · « 30 ainetta käytetään edullisesti suhteessa 1 - mooliekviva- • · · ·* ·' lenttia, kumpikin laksettuna yleisen kaavan (Ie) mukaisesta • « * • *« 101227 11 yhdisteestä. Reaktiolämpötila on 0 - 50 °C ja edullisesti 0 - 20 ’C.

Menetelmä H

5 Yleisen kaavan (If) mukainen johdannainen, joka saatiin menetelmässä G, pelkistetään katalyyttisesti katalyytin läsnäollessa inertissä liuottimessa, jolloin saadaan haluttu yleisen kaavan (Ig) mukainen yhdiste. Liuotinta ei ole erityisesti rajoitettu mihinkään, sillä se ei osallistu 10 reaktioon, siten esimerkiksi etyyliasetaattia, metanolia, tetrahydrofuraania, asetonitriiliä, jne., voidaan käyttää yksin tai yhdistelmänä. Katalyytti voi olla esimerkiksi palladiummusta, platina tai sellainen. Vedyn paine voi olla 1-3 ilmakehää ja edullisesti 1-2 ilmakehää. Reaktioläm-15 pötila on 0 - 40 °C ja edullisesti huoneenlämpötila.

Keksinnön mukaiset yhdisteet, kuten ne on saatu millä tahansa edellä olevalla reaktiolla, voidaan muuttaa suoloik-seen tunnetuilla tavoilla, esimerkiksi saattamalla reagoi-20 maan mainitun orgaanisen hapon tai epäorgaanisen hapon kanssa liuottimessa, kuten metyleenikloridissa, 1,2-dikloo-rietaanissa, tetrahydrofuraanissa, etyyliasetatissa, jne., lämpötilassa, joka on lähellä huoneenlämpötilaa.

25 Yhdisteet (Ia), (Ib), (Ie), (Id), (Ie), (If) ja (Ig), jotka on saatu edellä kuvatulla tavalla, eristetään ja puhdiste- . . taan menetelmillä, joita käytetään yleisesti tässä teknii- • · · : kan alan tasossa, kuten konsentraatio, suodatus, uudelleen- • · kiteytys, erilaiset kromatografian tavat ja niin edelleen.

=:··: 30

Terapeuttisena lääkkeenä käytettäväksi pahanlaatuisia kas-vaimia vastaan nisäkkäissä mukaanlukien ihminen, esillä olevan keksinnön mukainen yhdiste voidaan tarjota lukuisissa farmaseuttisissa valmisteissa kuten oraaliset valmis-35 teet, injektoitavat valmisteet, peräpuikot jne., joista • · · ··· kukin voidaan valmistaa vakiintuneella farmaseuttisella • · * tavalla.

• · 12 101227

Kiinteiden valmisteiden formulaatiosisa oraaliseeen annos-telemiseen, keksinnön mukainen yhdiste formuloidaan täyteaineen kanssa ja vaadittaessa sideaineen, hajotusaineen, voiteluaineen, värjäysaineen, korrigentin, mausteaineen, 5 jne. kanssa, ja prosessoidaan tableteiksi, päällytetään tableteiksi, rakeiksi, jauheiksi, kapseleiksi, jne., tavanomaisella tavalla. Lisäaineet ovat sellaisia, joita käytetään jo alalla. Esimerkiksi täyteaine käsittää laktoosin, sukroosin, natriumkloridin, glukoosin, tärkkelyksen, kallo siumkarbonaatin, kaoliinin, mikrokiteisen selluloosan, pii- hapon, jne. Sideaine käsittää veden, etanolin, propanolin, yksinkertaisen siirapin, glukoosiliuoksen, tärkkelysliuoksen, gelatiiniliuoksen, karboksimetyyliselluloosan, hydrok-sipropyyliselluloosan, hydroksipropyylitärkkelyksen, metyy-15 liselluloosan, etyyliselluloosan, sellakan, kalsiumfosfaa- tin, polyvinyylipyrrolidonin ja niin edelleen. Hajotinaine käsittää kuivatun tärkkelyksen, natriumalginaatin, agarjauheen, natriumvetykarbonaatin, kalsiumkarbonaatin, natrium-lauryylisulfaatin, stearyylimonoglyseridin, laktoosin ja 20 niin edelleen. Voiteluaine käsittää puhdistetun talkin, steariinihapposuolat, booraksin, polyetyleeniglykolin ja niin edelleen. Koerrigentti käsittää sukroosin, appelsiinin · · : : kuoren, sitruunahapon, viinihapon ja niin edelleen.

• I

25 Nestemäisten, oraaliseen annosteluun tarkoitettujen formu- ”* laatioiden valmistamiseksi keksinnön mukainen yhdiste voi- daan formuloida korrigentin, puskurin, stabiloijan, makeu- • · ;*·*; tusaineen ja/tai sellaisen kanssa ja syntynyt koostumus voidaan prosessoida oraalisiksi liuoksiksi, siirapeiksi, 30 eliksiireiksi, jne., tavanomaisella tavalla. Korrigentti • · · !.I tätä tarkoituksta varten voi olla mikä tahansa edellä mai- • · · • · · *. nituista. Puskuri voi olla esimerkiksi natriumsitraatti ja ·« · • stabiloi ja voi olla esimerkiksi tragantti, arabikumi, gela- tiini tai sellainen.

* « * . *.·. 35 t * · ; Injektoitavien valmisteiden formuloimiseksi keksinnön mu- a « *··· kainen yhdiste voidaan formuloida pH:ta säätelevän aineen, 13 101227 puskurin, stabiloijan, isotonisen aineen, paikallispuudutteen, jne. kanssa ja voidaan prosessoida ihonalaista, lihaksensisäistä tai intravenöösiä ruisketta varten. pH:ta säätelevä aine ja puskuri, joita voidaan käyttää, käsittä-5 vät natriumsitraatin, natriumasetaatin, natriumfosfaatin ja niin edelleen. Stabiloija käsittää natriumpyrosulfiitin, EDTArn, tioglykolihapon, tiomaitohapon ja niin edelleen. Paikallispuudute käsittää prokaiinihydrokloridin, lidokaii-nihydrokloridin ja niin edelleen.

10

Peräpuikkojen formulointia varten keksinnön mukainen yhdiste voidaan formuloida tekniikan tasossa hyvin tunnetun farmaseuttisen kantajan kanssa kuten polyetyleeniglykolin, la-noliinin, kaakaovoin, rasvahappotriglyseridin, Witepsolin 15 (tavaramerkki), jne. kanssa, ja tarvittaessa pinta-aktiivi - sen aineen kanssa kuten Tween (tavaramerkki) ja syntynyt koostumus voidaan prosessoida peräpuikoiksi tavanomaisella tavalla.

;20 Esillä olevan keksinnön mukaisen yhdisteen määrä missä ta- hansa edellä mainitussa yksikköannosmuodossa riippuu hoidet- « I · t ·, : tavan potilaan kliinisestä tilasta ja erityisestä valitusta annosmuodosta. Yleisesti kuitenkin edullinen määrä annosyk- * < « sikköä kohti on noin 1 - 1000 mg oraalisiin valmisteisiin, 25 noin 0,1 - 500 mg ruiskeisiin ja noin 5 -1000 mg peräpuik- 4 • ’1 koihin. Mikä tahansa edellä mainittu farmaseuttisen valmis- ·«· V 1 teen päivittäinen annos riippuu myös potilaan tilasta, kehon « painosta, iästä, sukupuolesta ja muista tekijöistä, mutta on • 41 · yleisesti suositeltavaa annostella noin 0,1 - 5000 mg, edul- • · » 30 lisesti 1 - 1000 mg päivää kohti aikuiselle potilaalle, joko i · · • ·1 yhtenä annoksena tai 2-4 jaettuna annoksena.

• · ·

• M

• ·

Seuraavissa esimerkeissä farmakologiset kokeet ja valmistu-sesimerkit ovat keksintöä edelleen valaisevia.

35 14 101227

Farmakologinen koe 1 96-kaivoinen levy ympättiin 1 x 103 solua/kalvo P388 hiiren leukemia solulinjalla ja sitä inkuboitiin 24 tuntia. Koeyh-diste liuotettiin dimetyyliformamidiin ja liuos laimennet-5 tiin elatusaineella erilaisiin konsentraatioihin ja lisät tiin vastaaviin kaivoihin. Levyä inkuboitiin edelleen 3 päivää, minkä jälkeen se kiinnitettiin glutaarialdehydillä ja värjättiin kristallivioletilla sytometriaa varten. Kunkin yhdisteen soluja tappava teho ilmaistiin konsentraatio-10 na, joka aiheuttaa 50 %:n pienenemisen solumäärässä (ED50) verrattuna kontrolliin. Tulokset on annettu taulukossa 3.

Taulukko 3

Yhdiste nro ED50 (M) 3 4,5 x 10’7 5 1,2 x 10’7 28 1,2 x 10'8 33 2,0 x 10'8 34 3,0 x ΙΟ"9 35 1,0 x 10"9 38 1,9 x 10'8 43 4,1 x 10"9 44 1,2 X 10"8 45 3,3 x 10"9 47 6,3 x 10'9 • ’* 52 4,0 x 10"8 V : 53 4,3 x ΙΟ"9 • » * I « • · » » « ·

Farmakologinen koe 2 t/w 15 L1210 hiiren leukemiasolulinjaa, 1 x 105 solua/hiiri, siir- • « · • ·' rettiin vatsakalvonsisäisesti 7 viikkoa vanhoihin uros- • · 0 · * *. *ί CDF^^-hiiriin (6 ryhmää kohti) . Koeyhdiste, alla olevassa taulukossa 4 mainituissa vaihtelevissa määrissä, liuotettiin fysiologiseen suolaliuokseen, joka sisälsi 3,5 % 20 dimetyylisulfoksidia ja 6,5 % Tween 80:tä ja liuosta an nosteltiin vatsakalvonsisäisesti 5 päivää solujen siirtämistä seuraten yhteensä 5 kertaa. Yhdisteen prosenttinen elämää pidentävä teho määritettiin vertaamalla ryhmään, is 101227 jolle oli annettu fysiologista suolaliuosta, joka vain sisälsi 3,5 % dimetyylisulfoksisdia ja 6,5 % Tween 80:tä. Tulokset on esitetty taulukossa 4.

5 Taulukko 4

Yhdiste nro. Annos Elämää pidentävä teho (%) (mg/kg/päivä) 36 10 81 43 5 257 10 45 2,5 231

Farmakologinen koe 3

Seuraavassa esitetään vertailukoetuloksia, jotka on saatu käyttäen etoposidia, jossa 4-asemassa oleva substituentti 15 on sitoutunut happiatomin välityksellä ja joka on valittu edustamaan tavanomaista tunnettua epipodofyllotoksiinijohdannaista ja käyttäen keksinnön mukaisia yhdisteitä.

Suoritettiin seuraavassa kuvattuja vertailukokeita keksin-; 20 nön mukaisten yhdisteiden ja etoposidin kasvainten vastai sen vaikutuksen selvittämiseksi.

Koemenetelmä

Lewiksen keuhkokarsinoomasolulinja implantoitiin laskimon 25 sisäisesti 5 viikkoa vanhojen uros-BDFi-hiirien häntään (7 • « * ’* hiirtä kussakin ryhmässä) määrässä 3,2 x 105 solua/hiiri.

·♦· « « « V’ 24 tuntia implantaation jälkeen injisoitiin koeyhdisteen »·*· suolaliuosta laskimon sisäisesti hiirten häntään kerran « «· · j*·'. päivässä viitenä peräkkäisenä päivänä. Kontrolliryhmä koos- t 30 tui 7:stä hiirestä, joilla esiintyi Lewis-keuhkokarsinooma, • · e »' mutta joita ei käsitelty millään yhdisteellä. Teho arvioi- V*: tiin sen perusteella, kuinka monta hiirtä selvisi hengissä vähintään 60 päivää, elämän pidennysprosentin perusteella ja kehon painon alentumisen perusteella hiirissä mitattuna 35 6 päivää karsinoomasolujen implantaation jälkeen.

16 101227

Elämän pidennysprosentti laskettiin seuraavasta yhtälöstä:

Ryhmän A EP - Kontrolliryhmän EP χ Kontrolliryhmän EP 5 jossa EP on eloonjäämispäivien summa ja ryhmä A on hiiri-ryhmä, jota käsiteltiin jokaisella koeyhdisteellä. Kun yhdisteellä käsitelty hiiriryhmä selvisi hengissä yli 60 päivää, niin hiirten eloonjäämispäivät olivat 60 päivää. Kontio rolliryhmän keskimääräiset eloonjäämispäivät olivat 18 päivää.

Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa 5.

15 Taulukko 5

Koeyhdiste Annos Vähintään 60 Elämän Kehonpainon (mg/kg/päivä) päivää hen- pidennys- alentuminen gissä selvin- prosentti (g) neiden hii- (%) rien lukumää- :':':___rä___

Yhdiste no 34 1,3 3 169 3,3 ·.' Yhdiste no 35 4,0 6 223 2,9

Yhdiste no 4 3__7_j_0__5__177__3,5

Vertailuyhdiste 21,0 1 110 3,8 (etoposidi)___ •

Koetulokset osoittavat, että esillä olevan keksinnön mukai- ·*·.. set yhdisteet vaikkakin käytettynä pienenä annoksena, ;*:*;20 osoittavat korkeampia arvoja koskien niiden hiirien luku- . *. määrää, jotka selvisivät hengissä 60 päivää tai yli 60 päi- • · · vää ja koskien elämän pidennysprosenttia kuin vertailuyh- '···' diste (etoposidi) . Tämä viittaa siihen, että keksinnön mu- :*·*: karsilla yhdisteillä on parempi kasvainten vastainen vaiku- • · 25 tus ja ovat käyttökelpoisempia erityisesti kliinisessä kä sittelyssä kuin etoposidi. Lisäksi kehon painon pieni alentuminen (vaikkakin ainoastaan hieman erilainen kuin etopo-sidilla) osoittaa, että keksinnön mukaiset yhdisteet aikaansaavat vähemmän sivuvaikutuksia kuin etoposidi.

30 ” 101227

Esiiaedsfei ι 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-al-lyyli-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 1) 5 Liuokseen, jossa oli 1 g (1,87 mmol) 4'-demetyyli-4#-0- bentsyylioksikarbonyyli-4-epipodofyllotoksiinia 15 ml:ssa dikloorimetaania, lisättiin 426 mg (3,73 mmol) trimetyyli-allyylisilaania ja seos jäähdytettiin -10 - 0 °C:seen. Tähän liuokseen lisättiin 0,6 ml booritrifluoridietyylieette-10 riä ja seosta sekoitettiin 1 tunti. Reaktion jälkeen 0,6 ml pyridiiniä lisättiin ja seos kaadettiin kylmään laimennettuun suolahappoon ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin ja tislattiin ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografiällä (silika 50 g, eluentti: kloro-15 formi). Eluaatti konsentroitiin ja kiteytettiin eetteristä, jolloin saatiin 1 g (saanto 95,7 %) 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-allyyli-4-epipodofyllotok-siinia (yhdiste l).

20 Sp.: 135 - 137 °C

[α 1 aoD = -70,03° (c = 1,30, DMSO) 1H-NMR (CDC13) <5ppm: 7,30-7,43 (5H, m, -0C00CH2£tl), 6,72 (1H, s, 5-H) , 6,46 (1H, S, 8-H), 6,31 (2H, S, 2'-H, 6'-H), 5,94 (1H, d, J = 1,5 Hz, 25 -OCH20-), 5,93 (1H, d, J = 1,5 Hz, -0CH20-) , 5,80 (1H, d-d-t, J = 17, 10,5, 6,5 Hz, -CH2CH=CH2), 5,25 (2H, S, —OCOOCH2Ph) , 5,12 (1H, d-d-t, J = 17, 2, 1,5 Hz, : -CH2CH=CH2), 5,11 (1H, d-q, J = 10,5, 1,5 Hz, -CH2CH=CH2) , • ♦ 4,58 (1H, d, J = 5 Hz, 1-H), 4,25 (2H, m, 11-H) , 3,68 (6H, 30 S, 3'-OCH3, 5'-OCH3) , 3,27 (1H, m, 4-H) , 3,07 (1H, d-d, J = . 14,5, 5 HZ, 2-H) , 2,93 (1H, m, 3-H) , 2,57 (1H, m, -ch2ch=ch2) , 2,42 (ih, m, -ch2ch=ch2) • · • · · • · · • · ·

Esimerkki 2 .·. 35 4-desoksi-4/-demetyyli-4/-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(2,3- dihydroksi-l-propyyli)-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 2) ie 101227

Liuokseen, jossa oli 1 g (1,79 mmol) 4-desoksi-47-demetyyli-4 7 -0-bentsyylioksikarbonyyli-4-allyyli-4-epipodofyllo-toksiinia, saatu esimerkissä 1, 2 ml:ssa pyridiiniä, lisättiin 455 g (1,79 mmol) osmiumtetraoksidia ja seosta sekoi-5 tettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Tämän reaktion jälkeen lisättiin liuos, jossa oli 0,8 g natriumvetysulfiitti vesipitoisessa pyridiinissä, ja seiosta sekoitettiin vielä 30 minuuttia. Reaktioseos uutettiin etyyliasetaatilla ja uute pestiin laimealla suolahapolla ja vedellä ja kuivattiin.

10 Orgaaninen kerros konsentroitiin ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografisesti (silika 50 g, eluentti: klorofor-mi-metanoli = 20:1). Eluaatti konsentroitiin ja jäännös kiteytettiin eetteristä, jolloin saatiin 1,0 g (saanto 94,2 %) 4-desoksi-47-demetyyli-47-O-bentsyylioksikarbonyyli-4-15 (2,3-dihydroksi-l-propyyli)-4-epipodofyllotoksiinia (yhdis te 2 ) .

Sp.: 170,5 - 172 °C Γ a ] 2°d = -62,25° (c=0,66 , DMSO) 20 Ή-NMR (DMSO-dJ Äppm: 7,40 (5H, S, -OCOOCH2£h), 6,94, 6,84 (1H, s, 5-H) , 6,44 (1H, s, 8-H) , 6,34, 6,32 (2H, S, -OCOOCJkPh) , 5,96 (2H, S, -OCILO-), 5,23 (2H, S, -OCOOCILPh), 4,78 (1H, m, -CH2CH(OH)CH2OH) , 4,58 (1H, d, J = 6,0 Hz 1-H) , 4,52 (1H, 25 m, -CH2CH(0)CH20H) , 4,35 (1H, m, lla-H), 4,17 (1H, m, 11β-Η), 3,62 (6H, S, S'-OCHs), 3,17-3,69 (4H, m, -CH2CH(OH)CJLOH, 4-H) , 2,94-3,02 (1H, m, 2-H) , 2,19 (1H, m, : 3-H) , 1,67 (1H, m, -CHCH(0H)CH20H) , 1,24-1,32 (1H, m, • « -CH2CH(OH)CH2OH) :.’*l 30 *:· Esimerkki 3 ·»·· :*·.· 4-desoksi-47 -demetyyli-47 -O-bentsyylioksikarbonyyli-4-f or- • · myylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 3) ... : 35 Liuokseen, jossa oli 1 g (1,69 mmol) 4-desoksi-4'-demetyy- li-47-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(2,3-dihydroksi-l-propyy- *. li)-4-epipodofyllotoksiinina, saatu esimerkissä 2, 80 ♦ · · • · · • i . · 19 101227 ml:ssa bentseeniä, lisättiin 795 g (1,79 mmol) lyijytetra-asetaattia ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia. Sitten reaktioseos suodatettiin ja suodos konsentroitiin. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografisesti 5 (silika 70 g, eluentti: kloroformi-metanoli =20:1) ja ki teytettiin eetteristä, jolloin saatiin 934 mg (saanto 98,7 %) 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 3).

10 Sp.: 180 - 182 °C

[a]2°d = -71,04° (c=l, 32 , DMSO) "H-NMR (DMS0-d6) 6ppm: 9,73 (1H, S, -CHO), 7,39 (5H, s, -0C00CH2Ph) , 6,88 (1H, s,

5-H), 6,46 (1H, s, 8-H), 6,35 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5,96 15 (2H, s, -0CH20-), 5,23 (2H, s, -OCOOCJLPh) , 4,54 (1H, d, J

= 3,6 HZ, 1-H), 3,96-4,32 (1H, m, lla-H), 3,63 (6H, s, 3'-0CH3, 5'-0CH3) , 3,48-3,92 (1H, m, llfi-H), 2,56-3,40 (5H, m, 2-H, 3-H, 4-H, -CH2CHO) 20 Esimerkki 4 4-desoksi-4/-demetyy1i - 4'-O-bentsyy1ioksikarbonyy1i-4-(2-formyyli-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 4) 25 Liuokseen, jossa oli 4 g (7,17 mmol) 4-desoksi-4'-demetyy-li-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-allyyli-4-epipodofyllo-toksiinia, saatu esimerkissä 1, 40 ml:ssa tetrahydrofuraa- • · · ί·ί · nia, lisättiin 4,3 ml (8,6 mmol) boraani-dimetyylisulfidin « · 2 M liuosta tetrahydrofuraanissa tipoittain jäällä jäähdyt- • · :.*·· 30 täen ja sitten seoksen annettiin reagoida huoneenlämpöti- lassa 1 tunti. Reaktioseos konsentroitiin ja jännös liuo- :°·.· tettiin 80 ml:aan metyleenikloridia, mitä seurasi 3,0 g:n • · (13,9 mmol) lisäys pyridiniumkloorikromaattia. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa. Reaktion jälkeen 100 ml ..; 35 etyyliasetaattia lisättiin ja liukenematon aines suodatet- ti in pois Florisilin avulla. Suodos konsentroitiin ja jään-nös puhdistettiin kolonnikromatorafisesti (silika 50 g, • · · 20 101227 eluentti: heksaani-etyyliasetaatti = 1:1) ja kiteytettiin eetteristä, jolloin saatiin lm85 g (saanto 44,9 %) 4-desok-si-4' -dexnetyyli-4' -O-bentsyylioksikarbonyyli-4- (2-f ormyyli-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 4).

5

Sp. 153 - 155 *C [a]20d = -69,09* (c=0,38 , DMSO) 1H-NMR (CDC13) Sppm: 9,83 (1H, S, -CHO), 7,40 (5H, m, -0C00CH2Eh) , 6,83 (1H, S, 10 5-H), 6,45 (1H, s, 8-H), 6,28 (2H, S, 2'-H, 6'-H), 5,94 (2H, S, -C1L0-), 5,25 (2H, s, -OCOOCJLPh), 4,58 (1H, d, J = 4,6 Hz, 1-H), 4,37 (1H, m, llcr-H) , 4,11 (1H, m, 11B-H), 3,67 (6H, S, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3,04-3,10 (1H, m, 4-H) , 2,86-3,00 (2H, m, 2-H, 3-H), 2,49-2,67 (2H, m, -CH2CH0) , 15 1,83-2,21 (2H, m, -CH2CH2CHO)

Esimerkki 5 4-desoksi-4/-demetyyli-4'-formyylimetyyli-4-epipodofyllo-toksiinin synteesi (yhdiste 5) 20

Liuokseen, jossa oli 100 mg (0,178 mmol) 4-desoksi-4'-deme-tyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-formyylimetyyli-4-epi-podofyllotoksiinia, saatu esimerkissä 3, 10 ml:ssa etyyli-asetaatti-metanolia (1:1), lisättiin 30 mg 5 % palladiumia 25 hiilen pinnalla, ja katalyyttinen pelkistys suoritettiin vetyvirrassa (ilmakehän paineessa). Tämän reaktion jälkeen 5 % palladiumiin hiilen pinnalla suodatettiin pois ja suodos ! konsentroitiin alennetussa paineessa. Jäännös kiteytettiin • · V.: eetteristä, jolloin saatiin 75 mg (saanto 98,9 %) 4-desok- 30 si-4#-demetyyli-4/-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia ·;· (yhdiste 5).

• · · · • · • · · • · · * «

.·:·. Sp. : 237 - 239 °C

• · · [a]20d = -110,12° (c=0,38, DMSO) . . 35 XH-NMR (CDC13) 6ppm: 9,72 (1H, S, -CHO), 8,22 (1H, S, 4/-OH), 6,86 (1H, s, 5-H), ’·* ' 6,43 (1H, S, 8-H), 6,21 (2H, S, 2'-H, 6'-Η) , 5,96, 5,94 21 101227 (2H, s, -OCiLO-), 4,41 (1H, d, J = 5,28 Hz, 1H) , 4,15 (1H, d-d, J = 7,9, 3,9 HZ, lla-H) , 3,66-3,73 (1H, IB, 11B-H), 3,62 (6H, s, 3'-OCH, 5'-0CH3) , 2,56-3,40 (5H, IB, 2-H, 3-H, 4-H, -CH2CH0) 5

Esimerkki 6 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(2-okso-2-formyyli-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 6) 10

Liuokseen, jossa oli 100 mg (0,17 mmol) 4-desoksi-4'-deme-tyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(2,3-dihydroksi-l-pro-pyyli)-4-epipodofyllotoksiinia, valmistettu esimerkissä 2, 5 ml:ssa metyleenikloridia, lisättiin 73 mg (0,34 mmol) 15 pyridiniumkloorikromaattia ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Reaktion jälkeen etyyliasetaattia lisättiin ja orgaaninen kerros pestiin kylmällä, laimealla suolahapolla ja kylläisellä natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin magnesiumsulfaatin päällä. Liuotin tistattiin 20 pois ja jännös puhdistettiin kolonnikromatografisesti (si-lika 20 g, eluwentti: kloroformi-metanoli =20:1) ja kiteytettiin eeteristä, jolloin saatiin 45 mg (saanto 45,0 %) 4-des oks i-4'-demetyy1i - 4'-O-bentsyy1ioksikarbonyy1i-4-(2-ok-so-2-formyyli-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 25 6) .

1H-NMR (CDCla) Äppm: • · ·.: * 9,85 (1H, s, -CH2C0CH0), 7,38 (5H, m, -0C00CH2Eh), 6,61 :V: (1H, s, 5-H), 6,45 (1H, s, 8-H), 6,31 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 30 5,93 (2H, S, -OCHaO-), 5,25 (2H, s, -OCOOCfiUPh) , 4,55 (1H, • · ·:· d, J = 3,6 Hz, 1-H) , 4,12-4,40 (1H, m, lla-H), 3,48-4,00 • · · · (1H, m, 11B-H), 3,68 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 2,60-3,08 .·;*! (5H, m, 2-H, 3-H, 4-H, -CiLCOCHO) • · · . . 35 Esimerkki 7

t « I

4-desoksi-4#-demetyyli-4'-O-klooriasetyyli-4-formyylimetyy- * r * ’·] * li-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 7) t * » « « · « « · « 22 101227

Liuokseen, jossa oli 50 rag (0,117 mmol) 4-desoksi-4'-deme-tyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia, saatu esimerkissä 5, 5 ml:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin 50 mg (0,292 mmol) klooriasetanhydridiä ja 10 mg (0,081 mmol) 5 dimetyyliaminopyridiiniä ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Reaktion jälkeen liuotin tislattiin pois ja jäännös puhdistettiin preparatiivisella ohutlevykromato-grafiällä (eluentti: kloroformi-metanoli = 30:1). Uuttamalla saatu jäännös kiteytettiin etyyliasetaatti-n-heksaanista 10 ja kiteet kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 50 mg (saanto 90,0 %) 4-desoksi-4'-demetyyli-4/-0-klooriasetyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 7).

Sp.: 119 - 121 °C

15 f 1 2°d ) -85,21° (C=0,399. DMSO) Ή-NMR (CDC13) Sppm: 9,64 (1H, S, -CHO), 6,40 (1H, s, 5-H), 6,25 (1H, s, 8-H), 6,10 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5,73 (1H, S, -0CH20-), 5,72 (1H, S, -0CH20-) , 4,36 (1H, d, J = 4,9 Hz, 1-H), 4,12 (2H, s, 20 ClCHsCO-), 4,06 (1H, d, J = 7,2 Hz, lla-H), 3,61 (1H, m, Ιΐβ-H) , 3,46 (6H, S, 3'-0CiL, S'-OCIL), 3,37 (1H, t, J - 10,5 HZ, 2-H), 2,51-2,85 (4H, m, 3-H, 4-H, -CJLCHO)

Esimerkki e, 25 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-O-triklooriasetyyli-4-formyylime- tyyli-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 8) : Liuokseen, jossa oli 4,26 g (10 mmol) 4-desoksi-4'-demetyy- « · • ,ί.ϊ li-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia, saatu esimer- i’·.: 30 kissä 5, 50 mlrssa metyleenikloridia, lisättiin 2,36 g (13 ·;· mmol) triklooriasetyylikloridia ja 1,58 g (13 mmol) dime- • ·· · .‘.J tyyliaminopyridiiniä ja seosta sekoitettiin huoneenlämpöti- 0 · lassa yön yli. Reaktion jälkeen liuotin tistattiin pois ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografisesti (eluentti: . . 35 etyyliasetaatti-n-heksaani = 1:1). Eluaatti kiteytettiin metanolista, jolloin saatiin 4,10 g (saanto 71,7 %) 4-des- « # · »1 · * 1 · * 1 · « « » · » t · ♦ > 1 r * · · • 1 f « « 23 101227 oksi-4'-demetyyli-4'-0-triklooriasetyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 8).

Sp.: 177 - 178 °C

5 [ a ] 20d = -68,96° (c=0,58 , DMSO) Ή-NMR (CDC13) ippm: 9,88 (1H, S, -CHO), 6,63 (1H, S, 5-H), 6,47 (1H, S, 8-H), 6,35 (2H, S, 2'-H, 6'-H), 5,96 (1H, S, -0CH20-), 4,61 (1H, d, J = 5,2 Hz, 1-H), 4,30 (1H, t, J = 8,9 Hz, lla-H), 3,80 10 (1H, m, 11B-H), 3,72 (6H, S, 3'-OCH3i 5'-OCH3) , 3,60 (1H, t, J = 9,6 Hz, 2-H), 2,70-3,10 (4H, m, 3-H, 4-H, -CH2CHO)

Esimerkki 9 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-0-asetyyli-4-formyylimetyyli-4-15 epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 9)

Liuokseen, jossa oli 50 mg (0,117 mmol) 4-desoksi-4'-deme-tyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia, saatu esimerkissä 5, 5 ml:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin 50 mg 20 (0,49 mmol) asetanhydridiä ja 10 mg (0,081 mmol) dimetyyli- aminopyridiiniä ja seosta sekoitettiin yön yli. Reaktion jälkeen liuotin tislattiin pois ja jäännös puhdistettiin preparatiivisella ohutlevykromatografiällä (eluentti: kloroformi -metanoli = 30:1). Uuttamalla saatu jäännös kitey-25 tettiin n-heksaanista ja kiteet kerättiin suodattamalla n-heksaanista, jolloin saatiin 40 mg (saanto 73,0 %) 4-desok-si-4'-demetyyli-4'-0-asetyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodo- t.J : fyllotoksiinia (yhdiste 9).

• · c # · 1 · · • ·

:/.f 30 Sp. : 130 - 133 °C

·:· ra]a0D - -88,40° (c=0,5, DMSO) » ·· · "H-NMR (CDCI3) «Sppm: • · /:·. 9,55 (1H, s, -CHO), 6,30 (1H, s, 5-H), 6,16 (1H, s, 8-H), 5,99 (2H, s, 2'-H, 67-H), 5,63 (1H, S, -0CH20-), 5,62 (1H,

; 35 s, -OCtLO-), 4,27 (1H, d, J = 4,9 Hz, 1-H), 3,98 (1H, t, J

:/.1 = 8,2 HZ, lla-H), 3,51 (1H, m, 11B-H) , 3,37 (6H, s,

I I I

• · I

• t b ·

< · I

* 1 » • * • » » * ? t # ' > i · t I « * t 24 1 0 1 2 2 7 3'-OCH3, 5'-0CH3) , 3,28 (1H, t, J = 9,9 Hz , 2-H), 2,41-2,75 (4H, m, 3-H, 4-H, -CH2CH0), 1,97 (3H, S, -OCOQi,)

Esimerkki 10 5 4-desoksi-4/-demetyyli-4'-0-t-butyylidifenyylisilyyli-4- formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 10)

Liuokseen, jossa oli 50 mg (0,117 mmol) 4-desoksi-4'-deme-10 tyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia, saatu esi merkissä 5, 5 ml:ssa tetrahydrofuraania, lisättiin 33 mg (0,12 mmol) t-butyylidifenyylisilyylikloridia ja 79 mg (0,64 mmol) dimetyyliaminopyridiiniä ja seosta sekoitettiin yön yli. Sitten reaktioseos uutettiin etyyliasetaatti-ve-15 dellä ja kuivattiin. Sitten liuotin tislattiin pois ja jäännös puhdistettiin preparatiivisella ohutlevykromatogra-fialla (eluentti: kloroformi-metanoli = 30:1). Uuttamalla saatu jäännös kuivattiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 35 mg (saanto 37,4 %) 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-0-20 t-butyylidifenyylisilyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllo- toksiinia (yhdiste 10).

1H-NMR (CDC13) Äppm: 9,71 (1H, s, -CHO), 7,71 (4H, m, -Si(2H,6H-fenyyli)2), 7,38 25 (6H, m, -Si(3H,4H,5H-fenyyli)2) , 6,50 (1H, s, 5-H), 6,38 (1H, S, 8-H), 6,06 (2H, S, 2'-H, 6'-H), 5,87 (2H, s, : -OCILO-), 4,40 (1H, d, J = 4,9 Hz, 1-H) , 4,16 (1H, t, J = • · 7,5 Hz, lla-H) , 3,70 (1H, m, 11B-H), 3,43 (1H, t, J = 9,5 V··; HZ, 2-H), 3,28 (6H, S, 3'-0CH3, 5'-0CH3), 2,47-2,84 (4H, m, 30 3-H, 4-H, -CH2CH0), 1,05 (9H, s, -Si-t-Bu) • · • · ♦ • ·· • · :T: Esimerkki 11 4-desoksi-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinin syntee-... ; si (yhdiste 11) • · · 35 '. Liuokseen, jossa oli 500 mg (1,2 mmol) 4-epipodofyllotok- • < « v ; siinia 10 ml:ssa dikloorimetaania, lisättiin 274 mg (2,4 • t · • ♦ • · • · · 25 1 0 1 2 2 7 mmol) trimetyyliallyylisilaania ja seos jäähdytettiin -10 -0 °C:seen. Tähän liuokseen lisättiin 0,35 ml booritrifluo-ridietyylieetteriä ja seosta sekoitettiin 4 tuntia. Sen jälkeen, kun oli lisätty 0,35 ml pyridiiniä, reaktioseos 5 uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin ja tislattiin ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografi-sesti (silika 50 g, eluentti: etyyliasetaatti-heksaani = 1:2). Eluaatti kiteytettiin eetteri-heksaanista ja kiteet kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 450 mg (saanto 10 81,1 %) 4-desoksi-4-allyyli-4-epipodofyllotoksiinia. Sitten liuokseen, jossa oli tätä yhdistettä 200 mg (0,46 mmol) pyridiinissä (4 ml), lisättiin 116 mg (0,46 mmol) osmium-tetraoksidia ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1 tunti. Reaktion jälkeen lisättiin 0,1 g natriumvetysylfii-15 nin liuosta vesipitoisessa pyridiinissä ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Tämä reaktioseos uutettiin etyyliasetaatilla ja uute pestiin laimealla suolahapolla ja vedellä ja kuivattiin. Orgaaninen kerros konsentroitiin ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatofgrafisesti (silika 50 g, 20 eluentti: kloroformi-raetanoli = 20:1). Eluaatti konsentroi tiin ja sitten kiteytettiin eetteri-heksaanista, jolloin saatiin 194 mg (saanto 89,3 % 4-desoksi-4-(2,3-dihydroksi-1-propyyli)-4-epipodofyllotoksiinia.

SP.: 144 - 145 °C

25 Γα]2°„ = -73,42 “ (c=0,52, CHC13) :.· · sitten liuokseen, jossa oli 100 mg (0,21 mmol) tätä yhdis- :V: tettä 10 ml:ssa bentseeniä, lisättiin 113 mg (0,25 mmol) lyi jytetra-asetaattia ja seosta sekoitettiin huoneenlämpö- • · .{. 30 tilassa 20 minuuttia. Reaktioseos suodatettiin sitten ja • · · · .·.: suodos konsentroitiin. Jäännös puhdistettiin kolonnikroma- • · · ,*:·! tografisesti (silika 20 g, eluentti: kloroformi-metanoli = • · · 20:1) ja kiteytettiin eetteriheksaanista (1:1), jolloin . , saatiin 90 mg (saanto 97,4 %) 4-desoksi-4-formyylimetyyli- • · « 35 4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 11).

Sp.: 157 - 159 °C

• ♦ • · • · · • » > » • ♦ * · » » · 26 101227 [ α ] 20d = -105,82’ (c=l , 253 , DMSO) "H-NMR (CDC1J δ ppm: 9,84 (1H, s, -CHO), 6,29 (1H, s, 5-H), 6,46 (1H, S, 8-H), 6,28 (2H, s, 2/_H, 6'-H), 5,93 (2H, S, -0CH20-) , 4,52 (1H, 5 d, J = 3,6 HZ, 1-H), 4,12-4,36 (1H, m, lla-H), 3,79 (3H, S, 4'-OCH3), 3,74 (6H, S, 3'-OCH3, 5'-OCH3) , 3,40-3,92 (1H, in, Ιΐβ-H) , 2,56-3,24 (5H, Iti, 2-H, 3-H, 4-H, -CJLCHO)

Esimerkki 12 10 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(3- N,N-dimetyyliamino-l-propyyli)-4-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 12)

Seokseen, jossa oli 0,1 ml dimetyyliamiinin 50 % vesiliuos-15 ta ja 3 ml metanolia, lisättiin 0,1 ml etikkahappoa ja 35 mg (0,56 mmol) natriumsyanoboorihydridiä, mitä seurasi 300 mg:n (0,52 mmol) lisäys 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-o-bent-syylioksikarbonyyli-4-(2-formyyli-l-etyyli)-4-epipodofyllo-toksiinia, joka saatiin esimerkissä 4. Seoksen annettiin 20 reagoida huoneenlämpötilassa 1 tunti. Sitten sen jälkeen, kun 30 ml kloroformia oli lisätty, reaktioseos pestiin kylläisellä natriumvetysulfaatin vesiliuoksella ja vedellä ja kuivattiin magnesiumsulfaatin päällä. Liuotin tislattiin sitten pois ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografi-25 sesti (silika 20 g, eluentti: kloroformi-metanoli = 20:1), jolloin saatiin 245 mg (saanto) 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-: 0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(3-N,N-dimetyyliamino-l-propyy- • · li)-4-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 12).

• « • « · • ♦ · • ♦ ·:· 30 Esimerkki 13 • · ·· :1·.· 4-desoksi-4/-demetyyli-4/-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-( 3- • · .·:1. N,N-dimetyyliamino-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinin syn- teesi (yhdiste 13) • · « « · 35 Seokseen, jossa oli 15 mg (0,167 mmol) dimetyyliamiinin 50 ’** 1 % vesiliuosta ja 5 ml metanolia, lisättiin 0,1 ml etikka- • » · : happoa ja 10 mg (0,19 mmol) natriumsyanoborihydridiä, mitä 27 1 0 1 2 2 7 seurasi 100 mg:n (0,178 mmol) lisäys 4-desoksi-4'-demetyyli-4 '-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-formyylimetyyli-4-epipo-dofyllotoksiinia, joka saatiin esimerkissä 3, ja seoksen annettiin reagoida huoneenlämpötilassa 1 tunti. Sitten sen 5 jälkeen, kun 100 ml etyyliasetaattia oli lisätty, reaktio- seos pestiin kylläisellä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä ja kuivattiin magnesiumsulfaatin päällä. Sitten liuotin tislattiin pois ja jäännös puhdistettiin ohutlevykromatografisesti (eluentti: kloroformi-metanoli = 10 5:1), jolloin saatiin 60 mg (saanto 57,2 %) 4-desoksi-4'- demetyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(3-N,N-dimetyyli-amino-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 13).

Esimerkki 14 15 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(2-N- metyyli-N-sykloheksyyliamino-l-etyyli)-4-epipodofyllotok-siinin synteesi (yhdiste 14)

Liuokseen, jossa oli 180 mg (1,81 mmol) sykloheksyyliamii- 20 nia 10 ml:ssa metanolia, lisättiin 0,1 ml etikkahappoa ja 85 mg (1,35 mmol) natriumsyanoboorihydridiä, mitä seurasi 500 mg:n (0,9 mmol) lisäys 4-desoksi-4,-demetyyli-4,-0- bentsyylioksikarbonyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllo- toksiinia, joka saatiin esimerkissä 3, ja seoksen annettiin 25 reagoida huoneenlämpötilassa 1 tunti. Tähän reaktioseokseen lisättiin 0,1 ml 37 % formaliinia ja reaktion annettiin '··'· ' edetä vielä huoneenlämpötilassa 1 tunti. Reaktioseos lai- » · menettiin kloroformilla, pestiin kylläisellä natriumvety- • « karbonaatin vesiliuoksella ja vedellä ja kuivattiin magne-"'l· 30 siumsulfaatin päällä. Sitten liuotin tislattiin pois ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografisesti (silika 20 • « g, eluentti: kloroformi-metanoli = 20:1), jolloin saatiin 470 mg (saanto 79 %) 4-desoksi-4#-demetyyli-4'-O-bentsyy-lioksikarbonyyli-4-(2-N-metyyli-N-sykloheksyyliamino-l-35 etyyli)-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 14). 1 « 1 I · 28 101227

Esimerkki 15 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-O-bentsyylioksikarbonyyli-4-(2-N,N-dietyyliamino-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 15) 5

Seokseen, jossa oli 38 mg (0,53 mmol) dietyyliamiinia ja 10 ml metanolia, lisättiin 0,1 ml etikkahappoa ja 52 mg (0,82 mmol) natriumsyanoboorihydridiä, mitä seurasi 300 mg:n (0,53 mmol) lisäys 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-O-bentsyyliok-10 sikarbonyyli-4-formyylimetyyli-4-epipodofyllotoksiinia, joka saatiin esimerkissä 3, ja seoksen annettiin reagoida huoneenlämpötilassa 1 tunti. Tämä reaktioseos laimennettiin kloroformilla, pestiin kylläisellä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä ja kuivattiin magnesiumsulfaatil-15 la. Liuotin tislattiin sitten pois ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografisesti (silika 20 g, eluentti: klorofor-mi-metanoli = 20:1), jolloin saatiin 175 mg (saanto 53,5 %) 4-desoksi-4'-demetyyli-4'-O-bentsyylioksikarbonyyli-4-(2-N,N-dietyyliamino-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinia (yhdis-20 te 15).

Esimerkit 16 - 27

Yhdisteet 16 - 27, jotka on annettu taulukossa 1, syntetisoitiin samalla tavalla kuin esimerkeissä 12 - 15.

25 • · 1 • · · · • · il· • · · • · • · • · · • · 1 • · • · · · • · • · t * · · • 1 • · · • · · · « * t • · · * 1 « 29 101227

Taulukko 1 1 <YXj o αΑΛιΑ<ο H- CO y OCH,

0i0CH?O

o

Yhdiste : 12 R=-CH2CH2CH2N(CH3)2 ^ Saanto:7**·^ 1H-NMR [nuotin:· CDCI3]: δ (ppm) 7.37 (5H, m, PhCH2OCO-), 6.71 (1H, s, 5-H) , 6.44 (1H, s, 8-H), 6.30 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (2H, s, -0CH20-), 5.25 (2H, s, PhCJ^OCO-) , 4.00-4.60 10 (3H, m, 1—H, 11-H), 3.67 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCHj), 3.00 (3H, m, 2-H, 3-H, 4-H), 2.20-2.40 (2H, m, -CH2N<), • · ♦ '•V 2.22 (6H, s, -N(CH3)2), 1.66 (4H, m, -CH2CH.2CH2N<) • · * · • « · • · p . _____

Yhdiste: : 13 • · ’^'15 R=-CH2CH2N(CH3 ) 2 Φ « t

Saanto: ^ 7.2 % H-NMR [liuotin: CDC13J: 8 (ppm) 7.37 (5H, m, PhCH2OCO-), 6.74 (1H, s, 5-H), v . 6.44 (1H, s, 8-H), 6.29 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 • · · 30 1 0 1 2 2 7 (2H, s, -00Η20-), 5.25 (2H, s, PhCH^OCO-), 4.56 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.00-4.28 (2H, m, 11-H), 3.67 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 2.68-3.28 (3H, m, 2-H, 3-H, 4-H), 2.32 (2H, t, J=7.2Hz, -CH2N<) 5 2.27 (6H, s, -N(CH3)2), 1.48-2.04 (2H, m, -CH2CH2N<)

Yhdiste: 14 CH0 I 3 r=-ch2ch2n^} 10 Saanto: 79.0% 1H-NMR [liuotin : CDC13]: δ (ppm) 7.46 (5H, m, PhClUOCO-1, 6.73 (1H, s, 5-H), 6.44 (1H, s, 8-H), 6.31 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (2H, s, -OCH20-), 5.25 (2H, s, PhCI^OCO-) , 15 4.10-4.60 (3H, m, 1-H, 11-H), 3.68 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 2.80-3.16 (3H, m, 2-H, 3-H, 4-H), 2.38-2.53 (3H, m, -CH2N<, ), 2.26 (3H, s, >NCH3), 1.79 (7H,

::v H

i * « • » · • · m, -CH2CH2N<, ) , 1.13-1.28 (5H, m, 20

• I

• · · • · · « · ·

Yhdiste: 15 R=-CH2CH2N(C2H5) 2 Saanto: 53.5% .25 1H-NMR [liuotin: CDC13]: S(ppm) 31 101227 7.45 (5H, m, PhCi^OCO-), 6.65 (1H, s, 5-H), 6.38 (1H, s, 8-H), 6.28 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.86 (1H, d, J=1.5Hz, -0CH20-), 5.85 (1H, d, J=1.5Hz, -0CH.20-), 5.26 (2H, s, PhCH2OCO-), 4.47 (1H, d, J=5.0Hz, 1-H), 5 4.26 (1H, dd, J=9.7Hz, lla-H), 4.06 (1H, t, J=9Hz, 11β- H), 3.71 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.06 (1H, dt, J=7Hz, 5Hz, 4-H), 2.91 (1H, dd, J=14Hz, 5Hz, 2-H), 2.87 (1H, dddd, J=14Hz, 9Hz, 7Hz, 5Hz, 3-H), 2.49 (4H, q, J=7Hz, -N(CH2CH3)2), 2.41 (2H, m, -CH2CH2N<), 1.82 (1H, ra, 10 -CH2CH2N<), 1.63 (1H, m, -CH.2CH2N<) , 0.98 (6H, t, J=7Hz, -n(ch2ch3)2)

Yhdiste' 16 CH,

15 R=-CH2CH2NCH2CH2OH

Saanto: 79.5% 1H-NMR [liuotin: CDC1 ] : S(ppm) • I „ 3 · 7.37 (5H, m, PhCH2OCO-), 6.72 (1H, s, -5-H), i\j 6.44 (1H, s, 8-H), 6.30 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 ..!Γ 20 (2H, s, -0CH20-), 5.25 (2H, s, PhCH2OCO-) , % * · 4.00-4.60 (3H, ra, 1-H, 11-H), 3.67 (6H, s, 3'-OCH^, » » · «j • « » 5'-OCH.3), 2.80-3.20 (5H, ra, 2-H, 3-H, 4-H, -CH2OH) , 2.40- 2.70 (4H, m, -CH2NCH2-), 2.30 (3H, s, >NCH3) , 1.60-2.10 V : (2H, m, -CH2CH2N<) 25 _ « · · • · 4 · ♦ » • · · • · · » · 32 1 0 1 2 2 7

Yhdiste: 17 CH, R=-CH2CH2N-N(CH3)2 Saanto: 79-9% 5 ^H-NMR [liuotin: CDCl^]: 5(ppm) 7.37 (5H, m, PhCH2OCO-), 6.79 (1H, s, 5-H) , 6.43. (1H, s, 8-H), 6.31 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.92 (2H, s, -OCH^O-), 5.25 (2H, s, PhCHjOCO-), 4.54 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.10-4.40 (2Hf m, 11-H), 3.67 (6H, s, 3'-OCH3, 5 '-OCH-j) , 10 2.80-3.30 (3H, m, 2-H, 3-H, 4-H), 2.46 (2H, t, J=7.2Hz, -CH2N<), 2.33 (6H, s, -N(CH3)2), 2.26(3H, s, -N(CH3)-N(CH3)2), 1.60-2.10 (2H, m, -CH2CH2N<)

Yhdiste: 18 15 r=-ch2ch2n^n-ch3 Saanto :76.9% 1H-NMR [liuotin: CDC1.J: δ(ppm)

) O

f · I

.V.’ 7.37 (5H, m, PhCH OCO-) , 6.74 (1H, s, -5-H), 6.44 (1H, j · · ^ • 9 :*·„· s, 8-H), 6.29 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.92 (2H, s, -OCH^O-), 20 5.24 (2H, s, PhCH2OCO-) , 4.56 (1H, d, J=5.4Hz, 1-H), !· · 3.96-4.44 (2H, m, 11-H), 3.67 (6H, s, 3' -OCH.,, 5'-OCH.3) , o- tl-v 2.76-3.28 (3H, m, 2-H, 3-H, 4-H), 2.49 (8H, m, -N N-), /—\ V-/ , 2.30 (3H, s, >NCH3), 2.36 (2H, m, -CH2N^N-), 2.08 (2H, m, -CH2CH2N^N-) ; 25 _ I I i

< V I

* « f I

33 1 0 1 2 2 7

Yhdiste: 19 CH., R=-CH2CH2NCH2CH2N(CH3)2 Saanto :42.4% 5 1H-NMR [liuotin; CDC13]: S(ppm) 7.38 (5H, m, PhCH2OCO-), 6.75 (lHf s, 5-H), 6.44. (1H, s, 8-H), 6.30 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (2H, s, -0CH20-), 5.25 (2H, s, PhCH2OCO-), 4.56 (1H, d, J=4.5Hz, 1-H), 3.96-4.40 (2H, m, 11-H), 3.67 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 10 2.80-3.24 (3H, m, 2-H, 3-H, 4-H) , 2.38-2.60 (6H, m, -CH2NCH2CH2N<), 2.27 (9H, s, -N(CH3)CH2CH2N(CH3)2, 1.60- 2.08 (2H, m, -CH2CH2N(CH3)CH2CH2N<)

Yhdiste: 20 15 CH., R=-CH2CH2NCH(CH2OH)2 : .·. Saanto : 70.0% :Y: 1H-NMR [liuotin: CDC13]: 5(ppm) ♦ · 7.37 (5H, m, PhCH2OCO-) , 6.68 (lHr s, 5-H), 6.44 (1H, • · · \··:. 20 s, 8-H), 6.30 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (2H, s, -OCH20-) , • 'm 5.25 (2H, s, PhCH-OCO-) , 4.59 (1H, d, J=3.6Hz, 1-H), 3.92-4.48 (2H, m, 11-H), 3.68 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), Υ·ί 3.66 (4H, d, J=7.0Hz, -CH(CH2OH)2), 2.60-3.24 (7H, m, 2- *·.1 1 H, 3-H, 4-H, -CH2NCH<), 2.37 (3H, s, >NCH.3) , 1.48-2.20 Y : 25 (4H, b, -CH2CH2NCH(CH2OH)2) i 34 101227

Yhdiste: 21 CH., I ^Λ.

R=-CH2CH2NCH2CH2N 5 Saanto: 64.0% 1H-NKR [ liuotin; CDC13]: δ(ppm) 7.37 (5H, m, PhCH2OCO-), 6.74 (1H, s, 5-H) , 6.44 (1H, s, 8-H), 6.30 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (2H, s, -0CH20-), 5.25 (2H, s, PhCH2OCO-), 4.00-4.60 (3H, m, 1-H, 11-H), 10 3.55 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 2.90-3.20 H(e) (5H, m, 2-H, 3-H, 4-H, -N~\ ), 2.43-2.55 (8H, m, H (e/ H (aq) 15 -ch2n(ch3)ch2ch2 ) , H (aq) ; 2.27 (3H, s, >NCH3), 1.40-1.76 (8H, m, -CH.2CH2N(CH3 ) -, ' -«O') • · « • · · ···· 20 Yhdiste:: 22 • · • · · r=_CH2CH2NvD>

Saanto: 96.0% : ^H-NMR [liuotin; CDC13]: 6(ppm) : 7.38 (5H, ra, PhCH2OCO-), 6.75 (1H, s, 5-H), 6.44 (1H, : 25 s, 8-H), 6.30 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (2H, s, -OCH20-), 35 101227 5.25 (2H, s , PhCH^OCO-), 4.24-4.55 (3H, m, 1-H, 11-H), 3.67 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 2.90-3.44 (3H, m, 2-H, 3- H, 4-H), 2.24-2.40 (6H, m, -CH2N^> ), 1.20-1.95 (8H, m, -cH2CH2hQ<) 5 __

Yhdiste: 23 R=-CH2CH2N^)—

Saanto: 79.1% 1H-NMR [liuotin; DMSO-dg]: δ(ρρπι) 10 7.39 (5H, m, PhOUOCO-l, 7.02 (1H, s, 5-H) , 6.48 (1H, s , 8-H) , 6.32 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.98 |2Ht.s, -OCH.20-) , 5.23 (2H, s, PhCH^OCO-), 4.54(1H, d, J=3.6Hz, 1-H), 3.92-4.44 (2H, m, 11-H), 3.62 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 2.60- 3.50 (14H, m, 2-H, 3-H, 4-H, -CH2^~^)^N~^ ) ,

15 H

I. 20-2.60 (12H, m, -CH2CH2N~~^-N~^<) • · * — r ’ ' • « « · :V: Yhdiste: 24 ch0 | ·;·· 20 R=-CH2CH2NCH2CH2OCH3 • · « • · ·

Saanto: 76.0% • · * • · · "^H-NMR [ liuotin: CDC13 ] : 6(ppm) 7.38 (5H, m, PhCH2OCO-), 6.80 (1H, s, 5-H), 6.44 (1H, : s, 8-H) , 6.30 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (2H, s, -OCH20-) , : 25 5.26 (2H, s, PhCH2OCO-), 4.57(1H, d, J=5.0Hz, 1-H), 4.34 • · · 36 101227 (1H, t, J=9.6Hz, lla-H), 4.14 (1H, t, J=9.5Hz, 11β-Η), 3.68 (6H, s, 3'-OCH3, 5 '-OCH.3 ), 3.53 (2H, t, J=5.0Hz, -CH2OCH3), 3.39 (1H, m, 4-H), 3.37 (3H, s, -CH2OCH3), 2.95-3.19 (2H, m, 2-H, 3-H), 2.64 (2H, m, -CH2N<), 2.48 5 (2H, m, >NCH2CH2OCH3), 2.34 (3H, s, >NCH.3 ) , 1.96 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.72 (1H, m, -CH.2CH2N<)

Yhdiste: 25 CH-, I 3 10 R=-CH2CH2NCH2-^|n Saanto: 65.0% 1H-NMR [liuotin: DMSO-dg]: δ(ppm)

H

8.51 (2H, d, J=5.6Hz, 7*39 (5H/· m'

15 H H

PhCH2OCO-), 7.34 (2H, d, J=5.6Hz, -^\) ,

: :’: H

0.*; 6.82 (1H, s, 5-H) , 6.45 (1H, s, 8-H), 6.32 (2H, s, 2'-H, • · 6' -H) , 5.96 (2H, s, -0CH20-), 5.23 (2H, s, PhCH2OCO-), • · * ‘I”. 20 4.52 (1H, d, J=5.9Hz, 1-H), 4.26 (1H, m, lla-H), 4.05 * · · (1H, m, 1 Ιβ-H) , 3.10-3.70 (4H, m, 2-H, 4-H, -N(CH3)CH2—ζ\) , 3.62 (6H, s, 3'-OCH3, 5 '-OCH3 ), 2.90 • * (1H, m, 3-H), 2.30-2.50 (2H, m, -CH2CH.2N<) , 2.16 (3H, s, ’ >NCH3), 2.10 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.60 (1H, m, -CH2CH2N<) / 25 _ 37 1 0 1 2 2 7

Yhdiste : 26 CH3 r=-ch2ch2nch2-^)

Saanto: 66.0% 5 1H-NMR [ liuotin·: CDC13] : 8(ppm)

H

8.57 (1H, d, J=4Hz, ), 7.68 (1H, ra, , 7.36 (6H, m, PhCH2OCO-, , 7.20 (1H, m, ),

H H

10 6.74 (1H, s, 5-H), 6.43 (1H, s, 8-H), 6.29 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93, 5.92 (2H, dx 2, J-lHz, -0CH20-), 5.25 (2H, s, PhCH2OCO-), 4.55 (1H, d, J=5Hz, 1-H), 4.10 (1H, m, lla-H), 4.00 (1H, ra, 11β-Η), 3.73 (1H, d, J=8.1Hz, ~NCH2-(_J> ), 3.67 (6H, s, 3 '-OCH.3, 15 5'-OCH3), 3.15 (1H, m, 4-H), 2.97 (1H, dd, J=5.3Hz, : 9.8Hz, 2-H) , 2.87 (1H, m, 3-H), 2.44 (2H, m, -CH2CH2N<) , :V: 2.34 (3H, s, >NCH3), 1.91 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.78 (1H, m, -CH2CH2N<) * · · • · · · • · · 20 Yhdiste: 27 • t · CH0 \ ·; R=-CH2CH2N(CH2)3N(CH3)2 • Saanto: 58.0% ·’ ‘ ^H-NMR [ liuotin: CDC13]: S(ppm) „ 101227

Jo 7.46 (5H, m, PhCH^CO-), 6.75^ (1H, s, 5-H), 6.44 (1H, s, 8-H) , 6.30 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.94 (2H, s, -0CH20-), 5.25 (2H, s, PhCH^OCO-), 4.57 (1H, d, J=5Hz, 1-H) , 4.35 (1H, t, J=7.7Hz, llct-H), 4.13 (1H, t, J=8.5Hz, 11β-Η), 5 3.68 (6H, s , 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.16 (1H, ra, 4-H), 3.02 (1H, dd, J=5Hz, 8.5Hz, 2-H), 2.92 (1H, m, 3-H),,2.38 (6H, m, -CH2NCH2CH2CH2N(CH3)2), 2.27 (6H, s, -N(CH3)2), 2.24 (3H, s, -N(CH3)-CH2-), 1.68-2.07 (4H, m, -ch2ch2n-ch2ch2ch2n(ch3)2) 10 _ • · • · « i » i • · • · • · · • · » • · • · · • · · · • · • · · • · · • ·.

• · « • t » * 1 · · 39 1 0 1 2 2 7

Esimerkki 28 4-desoksi-4'-demetyyli-4-(3-N,N-dimetyyliamino-l-propyyli)-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 28) 5 Liuokseen, jossa oli 230 mg (0,38 mmol) 4-desoksi-4'-deme- tyyli-4'-0-bentsyylioksikarbonyyli-4-(3-N,N-dimetyyliamino-l-propyyli)-4-epipodofyllotoksiinia, saatu esimerkissä 12, 4 ml:ssa etyyliasetaatti-metanolia (1:1) lisättiin 50 mg 10 % palladiumia hiilen pinnalla ja seoksen annettiin reagoida 10 huoneenlämpötilassa vetyvirrassa ilmakehän paineessa 4 tuntia. Sen jälkeen kun katalysaattori oli suodatettu pois, liuotin tislattiin pois ja jäännös puhdistettiin kolonni-kromatografisesti (silika 5 g, eluentti: kloroformi-metano-li = 20:1). eluaatti liuotettiin 2 ml:aan dikloorietaania, 15 mitä seurasi 0,2 ml:n lissäys 4 N HCl-etyyliasetattia. Seos konsentroitiin alennetussa paineessa ja jäännös kiteytettiin dietyylieetteristä, jolloin saatiin 110 mg (saanto 61,5 %) 4-desoksi-4'-demetyyli-4-(3-N,N-dimetyyliamino-l-propyyli)-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 28).

20

Esimerkki 29 4-desoksi-4'-demetyyli-4-(2-N,N-dietyyliamino-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinin synteesi (yhdiste 31) 25 Liuokseen, jossa oli 160 mg (0,25 mmol) 4-desoksi-4'-deme tyyli-4 ' -0-bentsyylioksikarbonyyli-4- ( 2-N , N-dietyyliamino-

« · I

:·:· l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinia, saatu esimerkissä 15, 20 • · VV ml:ssa etyyliasetaatti-metanolia (1:1), lisättiin 20 mg 10 :.1·· % palladiumia hiilen pinnalla ja seoksen annettiin reagoida >t|{· 30 huoneenlämpötilassa vetyvirrassa ilmakehän paineessa 10 tuntia. Sen jälkeen, kun katalyytti oli suodatettu pois, • · liuotin poistettiin konsentroimalla alennetussa paineessa ja jäännös kiteytettiin dietyylieetteristä, jolloin saatiin ,·. ; 102 mg (saanto 84,3 %) 4-desoksi-4'-demetyyli-4-(2-N,N-di- 35 etyyliamino-l-etyyli)-4-epipodofyllotoksiinia (yhdiste 31).

• · « I I • · · I I · • · • • · · * « • · ·

• Il • I

40 1 0 1 2 2 7

Esimerkit 30 - 53

Yhdisteet 29, 30, 32-53, esitetty taulukossa 2, syntetisoitiin samalla tavalla kuin esimerkeissä 28 ja 29.

• < I « · · · • · • · · • ·

• · I

• «I

• · · « • ·· · • · · • · · • · 1 ·« • · · • · · 101227

Taulukko 2

o AU

< Xj(u ° oVX<0

A

h3 co y och3 oh

Yhdiste: 2^ R=-CH2CH2CH2N(CH3)2-HCl

5 Saanto:61.5% Sulamispiste: 240-243°C

U-NMR [ liuotin: DMSO-dg]: 5(ppm) 9.74 (1H, brs, N+H), 8.22 (1H, s, 4'-OH), 6.89 (1H, s, 5-H), 6.45 (1H, s, 8-H), 6.20 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.98 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 5.96 (1H, d, J=lHz, -OCHjO-), 10 4.43 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.38 (1H, t, J=8Hz, llct-H), 4.12 (1H, dd, J=11Hz, 8Hz, Ιΐβ-H), 3.62 (6H, s, 3'-OCH.3, : 5'-OCH,), 3.12 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz, 2-H), 3.08 (2H, :V: m, -CH.2N<), 3.05 (1H, m, 4-H), 2.86 (1H, m, 3-H) , 2.75 V-i (6H, s, -N(CH3)2), 1.84 (1H, m, -CH2CH2CH2N<) , 1.76 (1H, ι«· 15 m, -CH2CH2CH2N<) , 1.61 (1H, m, -CH2CH2CH2N<) , 1.41 (1H,

• M

,·:·! m, -CH2CH2CH2N<)

Yhdiste: 29 i · t *·; ' ' R=-CH2CH2N(CH3) «HCl

20 Saanto: 81.8% Sulamispiste: 226-228°C

• · « • * 42 1 0 1 2 2 7 1H-NMR [ liuotin: CD3OD]: S(ppm) 6.81 (1H, s, 5-H), 6.47 (1H, s, 8-H), 6.29 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (1H, d, J=1.0Hz, -0CH.20-) , 5.92 (1H, d, J=1.0Hz, -0CH20-), 4.56 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.42 (1H, 5 dd, J=8.5Hz, 7.5Hz, lla-H), 4.17 (1H, dd, J=llHz, 8.5Hz, 1 Ιβ-H), 3.71 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.3 (2H,'m, -CH2N<), 3.24 (1H, m, 4-H), 3.17 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz, 2-H), 3.05 (1H, m, 3-H), 2.87 (6H, s, -N(Ci£3)2), 2.19 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.91 (1H, m, -CH2CH2N<) 10 _

Yhdiste: 30 CH, I 3 R=-CH2CH2N-<(^> · HC1

Saanto:81.0% Sulamispiste: 240-242°C (hajoaa) 15 1H-NMR [ liuotin: DMSO-dg]; δ (ppm) 9.94 (1H, brs, N+H), 8.23 (1H, s, 4'-OH), 7.05, 7.02 (1H, s, 5-H), 6.46 (1H, s, 8-H), 6.20 (2H, s, 2'-H, 6'-H), • · V.: 5.99 (1H, d, J=1.0Hz, -OCH„0-), 5.97 (1H, d, J=1.0Hz, * · · ’* -OCH-0-), 4.45 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.38 (1H, m, 11a- « · « A· 9 .'·**; 20 H), 4.15 (1H, m, Ιΐβ-H) , 3.62 (6H, s, 3' -OCH-., 5'-OCH,), ;T: 3.20 (1H, m, -CH2N<) , 3.20 (1H, m, >Ny{^) )r

H

• « • « 3.12 (2H, m, 2-H, 4-H), 2.87 (1H, m, 3-H), 2.8 (1H, m, -CH2N<), 2.65 (3H, s, >NCH3), 2.27 (1H, m, -CH2CH2N<), 43 1 0 1 2 2 7

HV

l. 97 (2H, m, >Ν-/Λ ), 1.86 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.84 Ηβ /Ηβ 5 (2H, m, >Ν-ΛΛ )/ 1-62 (1H, m, >ΝΗ^~^-Ηβ), 1.42 (2H, Ηβ Ηα Ηα m, >Ν-^^) ), 1.30 (2Η, ra, >Ν“(^ )/ 1-13 (1Η, ra, Ηα Ηα 10 >Ν^(^)-Ηα)

Yhdiste: 31 r=-ch2ch2n(c2h5)2

Saanto: 84.3% Sulamispiste: 204-205°C

15 1H-NMR [liuotin. CDCI3]: 5(ppra) 6.66 (1H, s, 5-H), 6.38 (1H, s, 8-H), 6.24 (2H, s, 2'-H, . 6' -H) , 5.87 (1H, d, J=1.5Hz, -OCH-O-), 5.86 (1H, d, 1«« 1 ^ ϊΥί J=1 - 5Hz, -0CH20-), 5.30 (1H, b, 4'-OH), 4.47 (1H, d, « · Y1i J=5.0Hz, 1-H) , 4.27 (1H, dd, J=9.7Hz, lla-H) , 4.05 (1H, ·« · Ί". 20 t, J=9Hz, 1Ιβ-H), 3.70 (6H, s, 3'-OCH,, 5'-OCH,), 3.07

< · · O -J

• «1 (1H, dt, J=7Hz, 5Hz, 4-H), 2.92 (1H, dd, J=14Hz, 5Hz, 2- • · · H), 2.88 (1H, dddd, J=14Hz, 9Hz, 7Hz, 5Hz, 3-H), 2.50 « f :.v: ( 4H, q, J=7Hz , -N(CH2CH3)2) , 2.41 (2H, m, -CH2CH.2N<) ,

t I I

'·; ‘ 1.82 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.64 (1H, m, -CH.2CH2N<), 0.99 • « 1 V 1 25 (6H, t, J=7Hz, -N(CH2CH3)2) • < * 1 f « « «

• · I

44 101227

Yhdiste: 32 CH, r=-ch2ch2nch2ch2oh.hci 5 Saanto: 72.0% Sulamispiste: 234-237°C (hajoaa) 1H-NMR [ liuotin: cd3OD]: S(ppm) 6.83 (1H, s, 5-H), 6.47 (1H, s, 8-H), 6.29 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.93 (1H, d, J=lHz, -OCHjO-), 5.92 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 4.56 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H)f 4.42 (1H, 10 dd, J=8.5Hz, 7.5Hz, lla-H), 4.14 (1H, dd, J=llHz, 8.5Hz, Ιΐβ-H), 3.86 (2H, t, J=5.5Hz, >NCH2CH2OH), 3.71 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.3 (2H, m, -CH2CH2NCH2CH2OH), 3.2-3.3 (3H, m, 4-H, -CH2CH2OH), 3.17 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz, 2-H), 3.05 (1H, m, 3-H), 2.91 (3H, s, >NCH3), 2.23 (1H, 15 m, -CH2CH2NCH2CH2OH), 1.96 (1H, m, -CH2CH2NCH2CH2OH) • * · Yhdiste: 33 *·· *

ϊ Vi CH

i I J

*· / R=-CH2CH2N-N (CH3 ) 2 · HC1 *♦*

”**. 20 Saanto: 89.2% Sulamispiste:; 224-226°C

• t! * · 1 H-NMR (liuotin CD..OD]: 6(ppm) 6.81 (1H, s, 5-H), 6.45 (1H, s, 8-H), 6.30 (2H, s, 2'-H, s t 3;’|· 6' -H) , 5.93 (1H, d, J=lHz, -OCH20-), 5.92 (1H, d, J=lHz, « i -OCH20-), 4.55 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.43 (1H, dd, « K ( Y. 25 J=8.5Hz, 7.5Hz, lla-H), 4.16 (1H, dd, J=llHz, 8.5Hz, 11β- « i

• I

< * I

\ I

.11« « [

« I

45 101227 H), 3.71 (6H, s, 3'-OCH3, 5 '-OCH-j ) , 3.3 (2H, ra, -CH2N<), 3.24 (1H, m, 4-H), 3.15 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz, 2-H), 3.02 (1H, m, 3-H), 2.80 (6H, brs, -N(CH3)2), 2.72 (3H, brs, -N(CH3)-N<), 2.13 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.80 (1H, m, 5 -CH2CH2N<)

Yhdiste: 34 R=-CH2CH2iQn-CH3 · 2HC1

Saanto: 66.7% Sulamispiste: 232-236°C (hajoaa) 10 1H-NMR [liuotin: DMSO-dg): 8(ppm) 6.91 (1H, s, 5-H), 6.43 (1H, s, 8-H), 6.23 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.94 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 5.93 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 4.43 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.35 (1H, t, J=8Hz, lla-H), 4.15 (1H, dd, J=llHz, 8Hz, Ιΐβ-H), 3.64 (6H, s, 15 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.20-3.50 (10H, m, -CHjNN-CH3), 3.16 A— (1H, m, 4-H), 3.08 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz, 2-H), 2.88 ; (1H, m, 3-H), 2.72 (3H, s, >NCH7) , 2.17 (1H, m,

• · J

;y; -CH2CH2N^\i-) , 1.80 (1H, m, -CHjC^lT^I-) • · · • · * • · — - — - - 20 Yhdiste: 35 • · • · · CH., R=-CH2CH2NCH2CH2N(CH3)2·2HC1

Saanto: 71.7% Sulamispiste: 203-205°C

: 1H-NMR (liuotin: DMSO-dg]: S(ppm) : 25 6.95 ( 1H, s, 5-H), 6.44 (1H, s, 8-H), 6.23 (2H, s, 2'-H, 46 101227 β'-Η), 5.95 (1H, d, J=lHz, -OC^O-), 5.94 (1H, d, J=1H2/ -0CH20-), 4.44 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.36 (1H, t, J=8Hz, lla-H), 4.16 (1H, dd, J=llHz, 8Hz, Ιΐβ-H), 3.64 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.42 (6H, brs, -CH2NCH2CH2N<), 3.1?

5 (1H, m, 4-H), 3.11 (1H, dd, J=14Hz, 5.5Hz 2-H), 2.90 (1H

m, 3-H) , 2.80 (6H, s, -N(CH3)2), 2.74 (3H, s, >N-(CH ) ), 2.26 (1H, m, -CH2CH2N(CH3)CH2CH2N<), 1.89 (1H, m, -ch2ch2n(ch3)ch2ch2n<) 10 Yhdiste: 36 R=-CH2CH2N^\)«HC1

Saanto: 70.0% Sulamispiste? 251-253°C

1H-NMR [liuotin: DMSO-dg]: 6(ppm) 10.48 (1H, brs, N+H), 8.22 (1H, brs, 4'-OH), 15 6.96 (1H, s, 5-H), 6.46 (1H, s, 8-H), 6.20 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.99 (1H, s, -OCH20-), 5.97 (1H, s, -OO^O-), 4.45 i,·’: · (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.37 (1H, t, J=8Hz, lla-H), 4.14

• 1 ·1 U

V.: (1H, dd, J=llHz, 8Hz, 11β-Η), 3.97 (2H, brd, -NO), 3.73 • · · ^ ^ ^ / (2H, brt, J=12Hz, -N O), 3.62(6H, s, 3'-OCH-,, S'-OCH.,), ... \_/ J — 3" !1!1: 20 Ηβ . 3.45 (1H, brd, J=12Hz, -iTjO),

Ha - 3.40 (1H, brd, J=12Hz, -iTjO) , 3.3 (1H, m, -CH^H^lTjD) , 3.15 (1H, m, 4-H), 3.11 (1H, dd, J=14Hz, 5.5Hz, 2-H), « I < _ ’ 25 3.06 (3H, m, -ΟΗ2ΟΗ2Ν~\)), 2.88 (1H, m, 3-H), 2.28 (1H, • « · « · 101227 m' -CH2CH2tTjD) , 1.88 (1H, m, -CH2CH2N p )

Yhdiste: 37 CH, CH-.

I 3 I 3 5 R = -CH2CH2N--HC1

Saanto: 67.4% Sulamispiste: 170-172°C « 1H-NMR [liuotin: DMSO-dg]: S(ppm)

H

7.17 (2H, dd, J=8.5Hz, 7Hz, , 7.01 (2H, d,

10 H II

J=8.5Hz, 6.67 (ΙΗ,.-t-, J=7Hz, -N-(Q^H), 6.66

H

(1H, s, 5-H), 6.39 (1H, s, 8-H), 6.18 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.92 (1H, s, -0CH20-), 5.90 (1H, s, -0CH20-), 4.38 15 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.30 (1H, t, J=8Hz, lla-H), 4.02 (1H, dd, J=12Hz, 8Hz, 11β-Η), 3.61 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.17 (IK, m, 4-H), 3.09 (1H, dd, J=14.5Hz, • · vV 5.5Hz, 2-H), 2.84 (1H, m, 3-H), 2.75 (3H, s, -N(CH3)Ph), • · · * / 2·69 (2Hz -CH2N(CH3)-), 2.38 (3H, s, -CH2N(CH3)-) , !\\· 20 1.93 (1H, m, -CH2CH2N<) , 1.53 (1H, m, -CH2CH2N<) • · • · · « · » • · · - _ ._ _ ____ » 1 " 1 1 —' —1 ' ""

Yhdiste: 38 « R=-CH2CH2N(CH2)5CH3.HC1

25 Saanto: 66.1% Sulamispiste: 210-217°C

48 101227 H-NMR [liuotin1 DMSO-dg]: δ(ppm) 9-73, 9.69 (1H, brs, N+H), 8.23 (1H, s, 4'-OH), 7.00, 6.96 (1H, s, 5-H), 6.46 (1H, s, 8-H), 6.19 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.99 (1H, s, -OCHjO-), 5.97 (1H, s, -0CH20-), 4.45 5 (1H, d, J-5.5Hz, 1-H), 4.36 (1H, t, J=8Hz, lla-H), 4.14, 4.11 (1H, dd, J=10Hz, 8Hz, 11β-Η), 3.62 (6H, s, 3'-0CH3, 5'-OCH3), 3.20 (1H, m, 4-H), 3.14 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz, 2-H), 3.09 (1H, brs, -CH2CH2N(CH3)CH2(CH2) -), 2.96 (1H, brs, -CH2CH2N(CH3)CH2(CH2)4~), 2.88 (1H, brs, 10 3-H), 2.73 (3H, s, >NCH3), 2.23 (1H, m, -CH2CH2N(CH3)-), 1.82 (1H, m, -CH2CH2N(CH3)~), 1.63 (2H, brs, -CH2CH2N(CH3)CH2CH2(CH2)3-), 1.29 (6H, brs, -N(CH3)CH2CH2(CH2)3CH3), 0.88 (3H, t, J=7Hz, >N(CH2)5CH3) 15 Yhdiste: 39

R=-CH2CH2lTJ -HC1 CHo0H

··· * 2.

« ·

Saanto: 59.3% Sulamispiste: 239-244°C (hajoaa) • « • *·· 1 ** / H-NMR [liuotin: DMSO-dfi]: 6(ppm) *”*. 20 9.63 (1H, brs, N+H), 8.22 (1H, s, 4'-OH), 7.02 (1H, s, 5- • ··

• C

H), 6.45 (1H, s, 8-H), 6.20 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.99 * (1H, s, -OCH20-), 5.96 (1H, s, -OCH20-), 5.44 (1H, t, J=5Hz, -CH2OH), 4.44 (1H, d, J=5Hz, 1-H), 4.35 (1H, t, J=8Hz, lla-H), 4.13 (1H, dd, J=llHz, 8Hz, 11β-Η), 3.77 25 (1H, m, -CH2OH) , 3.65 (1H, m, -CH2OH), 3.62 (6H, s, 3'- « ♦ 49 101227 ; OCH3, 5'-OCH3), 3.54 (1H, m, -N~] ), 3.54 (1H, m,

: HJ3 H CHo0H

-N^J ), 3.54 (1H, ra, -CH2-N^J ), 3.13 (1H, dd, ! CHo0H Ha ' )— 5 J=15Hz, 5Hz, 2-H), 3.13 (1H, m, -N^J ), 3.13 (1H,

« 0H2OH

m, 4-H), 3.00 (1H, m, -CH2-lQ ), 2.86 (1H, m, 3-H), 2.27 (1H, m, -CH2CH2-iQ), 2.08 (1H, ra,

: M

Λ-] r-i 10 -N ), 1.95 (1H, m, -N ), 1.90 (1H, m,

/ HJ3 CH2OH

CH2OH Ha -CH2CH2N^]), 1.86 (1H, m, ), 1.76 (1H, m, ch2oh 15 -N I )

M

/ Ha / : : ‘: ch„oh • · · · ^ • · • · · • · · • · ________________ • · « ’· ’’ Yhdiste: 40

• · I

1 TV 20 CH0 - I 3 i R=-CH2CH2NCH2-<^^> «HC1

" Saanto: 69.8% Sulamispiste: 204-205°C

r '· ^H-NMR [liuotin: DMSO-dg]: S(ppm) ; 10.76 (1H, brs, N+H), 7.96 (1H, brs, 4'-OH), . Λ · « · *i · • · · • · · 50 1 0 1 2 2 7

H

7.55 (2H, brs, -NCH2-^^ ) , 7.46 (3H, brs,

H H

-ch2-^^-h), 6.90, 6.86 (1H, s, 5-H) , 6.45 (1H, s,

5 H

8-H), 6.22 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.98 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 5.96 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 4.45 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H) , 4.39 (1H, brs, -CH.2hQ> ), 4.31 (1H, m, lla-H), 4.22 (1H, brs, ), 10 4.11 (1H, brt, J=8.5Hz, Ιΐβ-H), 3.64 (6H, s, 3'-OCH3, 5' -OCH3), 3.10 (1H, limittynyt 2-H), 2.89 (1H, m, 3-H) , 2.67 (3H, brs, >NCH.3), 2.33 (1H, m, -CH2CH2N<) , 1.96 (1H, m, -CH2CH2N<) 15 Yhdiste: 41 CH-, R=-CH2CH2NCH(CH2OH)21HC1

*.·.·1 Saanto: 67.0% Sulamispiste: 222-225°C

• · *· ^H-NMR [ liuotin: DMSO-dg ] : 6(ppm) Τ’, 20 9.29 (1H, brs, N+H) , 7.96 (1H, brs, 4'-OH), 6.95 (1H, s, * · · • · 5-H) , 6.45 (1H, s, 8-H), 6.23 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.97 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 5.96 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 5.24 (2H, brs, -CH(CH2OH)2), 4.45 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.36 (1H, t, J=8Hz, lla-H), 4.17 (1H, dd, J=llHz, 8Hz, 25 1 Ιβ-H) , 3.73 (4H, brs, -CH( CH2OH) 2) , 3.64 (6H, s, 3'- • < « 51 101227 OCH.3, 5'-OCH3)f 3.2-3.5 (2H, m, -CH2CH2N<), 3.39 (1H, brs, -CH(CH2OH)2), 3.15 (1H, m, 4-H), 3.09 (1H, limittynyt , 2-H), 2.89 (1H, m, 3-H), 2.81 (3H, brs, >NCH3), 2.28 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.91 (1H, m, -CH2CH2N<) 5______

Yhdiste: 42 cn3 R=-CH2CH2NCH2CH2lTjt)-2HCl

Saanto:66.0% Sulamispiste: 210-216°C

10 1H-NMR [liuotin: DMSO-dg]: δ(ppm) 11.30 (1H, brs, N+H), 10.78 (1H, brs, N+H), 8.23 (iH/ brs, 4'-OH), 7.00 (1H, brs, 5-H), 6.46 (1H, s, 8-H), 6 2Q (2H, s, 2' -H, 6'-H), 5.99 (1H, s, -0CH20-), 5.97 (iH, s -0CH20-), 4.45 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.37 (1H, t, J=8h2 15 lla-H), 4,15 (1H, m, 11β-Η), 3.62 (6H, s, 3'-OCH, S' —3 r j - OCH3), 3.16 (1H, m, 4-H), 3.14 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz 2-H), 3.0-4.1 (2H, limittynyt, -CH2CH2NCH2CH2N^\)), 3.0_

V.: 4.1 (12H, -NCH2CH2N 3), 2.89 (1H, m, 3-H) , 2.83 (3H

/ brs, >NCH3), 2.30 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.91 (1H, m/ • * 20 -CH9CH9N<) • · «·· 4 * · • · · ----

Yhdiste: 43 « « CH, «*!f« I 3 R=-CH2CH2NCH2CH2N^ · 2HC1

*;/ 25 Saanto: 69.0% Sulamispiste: 210-213°C

♦ « < « · « « • « · « 52 101227 1H-NMR [liuotini DMSO-dg]: S(ppm) 10.41 (1H, brs, N+H) , 10.72, 10.66 (1H, brs, N+H), 8.24 (1H, brs, 4'-OH), 7.03, 6.97 ( 1H, s, 5-H), 6.47 (1H, s, 8-H), 6.20 (2H, s, 2' -H, 6'-H), 5.99 (1H, s, -0CH.20-) , 5 5.97 (1H, s, -0CH20-), 4.45 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H), 4.37 (1H, t, J=7.5Hz, lla-H), 4.17, 4.13 (1H, m, 11β-Η), 3.63 (2H, m, >NCH2CH2N^>, >NCH2CH2N^> ) , 3.62 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.57 (2H, m, -N > ), 3.50 (2H, m, 10 Ηβ >nch2ch2 O , >NCH2CH2N ^ ), 3.45 (1H, m, -CH2CH2NCH2CH2lT^), 3.16 (1H, m, 4-H), 3.14 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz, 2-H), 3.08 (1H, m, -CH2CH2NCH2CH2iT^> ),

Ha 15 2.92 (2H, m, -N^> ) , 2.90 (1H, m, 3-H) , 2.84 (3H,

Ha :,i i brs, >NCH3), 2.30 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.90 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.7-1.9 (5H, m, -N —Ηβ), 1.42 (1H, m, -iQ-ho·) ^ * « · · /. : 20 • *« --—---- » · V * Yhdiste: 44 R=-CH2CH2N^) «HC1

; ,* Saanto: 61.0% Sulamispiste: 250-252°C

‘.1 ‘ 1 ; H-NMR [liuotin: DMSO-dg]: 6(ppm)

Ilf ^ 25 9.48 (1H, brs, N+H), 8.23 (1H, s, 4'-OH), 6.96 (1H, s, 5-

Iff III* I · I a * « > » 53 1 0 1 2 2 7 H), 6.46 (1H, s, 8-H), 6.19 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 4.45 (1H, d, J=5.5Hz, 1-H) , 4.37 (1H, t, J=8Hz, lla-H), 4.12 (1H, dd, J=11Hz, 8Hz, 11β-Η), 3.62 (6H, s, 3'-OCH3,

HV

5 5'-OCH3), 3.44 (2H, m, -N~\ ) , 3.26 (1H, m, -CH2CH2N^> ) , Ηβ 3.13 (1H, dd, J=14.5Hz, 5.5Hz, 2-H), 3.13 (1H, m, 4-H), 2.97 (1H, m, ) , 2.89 (1H, m, 3-H) ,

Ha 10 2.86 (2H, m, ) , 2.24 (1H, ra, -CH2CH2N^> ) , 1.85

Ha Ηβ (1H, m, -CH2CH2N^>), 1-79 (2H, m, -κΓ^ ), 1.68 (2H,

Ha Ηβ m, -if^ ) , 1.68 (1H, m, -N^— Ηβ) , 1.38 (1H, m, 15 Ha -iO~Ha) • · • · ·

V

101227 -N^~\-n\), 3.65 (6Η, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.43 (3H, Ηβ 5 ra, ), 3.1-3.3 (2Η, limittynytf -CH2CH2lT^ ),

Ηβ H

3.1-3.3 (1Η, limittynyt,, 4-H), 3.18 (1H, dd, J=15Hz,

Ha 5.5Hz, 2-H), 2.4-3.1 (5H, limittynyt, 3-Η,-ν\-γΓΛ, 10 Ha Ηβ Ha -N^)— N~^> ) , 2.30 ( 2H, m, -Ν^Υ-Ν^Λ ) , 2.17 (1H, m,

Ha Ήβ -CH2CH2i( ^ ), 1.8-2.0 (5H, limittynyt,

Ha Ηβ 15 -CH2CH2n^-n^ ), 1.6-1.8 (3H, limittynyt /

Ha Ηβ :.: : Ha -Ν^^ίΓ^-Ηβ), 1.43 (1H, m, -lT^>—Ha)-Ha • · » · 20 _ : Yhdiste: 46 CH-, • · I ό

* * * I

I I , I

,, R=-CH2CH2NCH2CH20CH3*HC1

, Saanto: 92.0% Sulamispiste: 193-195°C

25 1H-NMR [liuotin: DMSO-dg]: S(ppm) 55 101227 8.26 (1H, s, 4'-OH), 6.97 (1H, d, J=7.9Hz, 5-H), 6.46 (1H, s, 8-H), 6.20 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.99 (1H, s, -OCH^O-), 5.97 (1H, s, -OCH^O-), 4.45 (1H, d, J=5.6Hz, 1-H), 4.36 (1H, t, J=7.2Hz, lla-H), 4.17 (1H, m, 5 1Ιβ-H), 3.69 (2H, m, -CH2OCH3), 3.62 (6H, s, 3'-OCH3, 5'- OCH3), 3.30 (3H, s, -CH2OCH3), 2.82-3.39 (7H, m,-2-H, 3-H, 4-H, -CH2NCH2-), 2.76 (3H, s, >NCH3), 2.29 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.86 (1H, m, -CH.2CH2N<) 10 Yhdiste: 47 CH0 R=-CH2CH2NCH2CH2N(C2H5)2·2HC1

Saanto: 41.5% Sulamispiste: 195-197°C

1H-NMR [liuotin: DMSO-dg): 5(ppm) 15 11.37 (1H, br, N+H), 11.17 (1H, br, N+H), 8.20 (1H, br, 4'-OH), 7.05, 7.00 (1H, s, 5-H), 6.45 (1H, s, 8-H), 6.19 | (2H, s, 2' -H, 6'-H), 5.99 (1H, s, -0CH20-), 5.96 (1H, s, • · • · · -0CH20-), 4.45 (1H, d, J=5.6Hz, 1-H), 4.37 (1H, t, • * · • · J=7.2Hz, lla-H), 4.10-4.30 (1H, m, 11β-Η), 3.61 (6H, s, * * * * 20 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.00-3.60 (12H, m, 2-H, 4-H, :T: -CH2NCH2CH2N(CH2CH3)2) , 2.90 (1H, m, 3-H) , 2.81 (2H, s, >NCH.3), 2.32 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.91 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.26 (6H, t, -N(CH2CH3)2) ... 25 Yhdiste: 48 56 101227 CH., I 3 R=-CH2CH2NCH2-^^N-2HC1

Saanto: 31.0% Sulamispiste: 181-183°C

1H-NMR [liuotin: DMSO-dg]: S(ppm)

5 H H

8.85 (2H, brs, ), 8.02 (2H, brs, -^\),

H H

6.90, 7.00 (1H, s, 5-H), 6.45 (1H, s, 8-H), 6.18 (2H, s, 2' -H, 6 ' -H) , 5.99, 5.97 (2H, s, -0CH.20-), 10 4.10-4.70 ( 5H, m, 1-H, -N (CH3 ) ΟΗ2-<^Λΐ, 11-H), 3.61 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.00-4.00 (4H, m, -CH2CH2N<, 2-H, 4-H), 2.90 (1H, m, 3-H), 2.67 (3H, s, >NCH3), 2.40 (1H, m, -CH2CH2N<), 2.00 (1H, m, -CH2CH2N<) 15 Yhdiste: 49 CH-.

: .*. I N-^ :;: / R=-CH2CH2NCH2-(V) · 2HC1 • · · Λ— ·

\\ Saanto: 57.0% Sulamispiste:i85-186°C

• · · • · · .:. 1H-NMR [ liuotin: DMSO-dg)]: S(ppm) • · · ·

' :/.: 20 H

: 8.68 (1H, d, J=5Hz, ), 7.99 (1H, m, , m'y[ 7.76 (1H, d, J=7.6Hz, ), 7.53 (1H, m, -ζ^)# /". 6.95 (1H, s, 5-H), 6.44 (1H, s, 8-H), 6.19 (2H, s, 2'-H, · * • * · 101227 6'-H), 5.99, 5.97 (2H, s x 2, -0CH20-), 4.50 (2H, s, >NCä2-C}) ' 4·44 (1H' d' J=5*3Hz' 1-H), 4.32 (1H, t, J=7.9Hz, lla-H), 4.17 (1H, m, Ιΐβ-H), 3.62 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 3.11-3.40 (4H, ra, 2-H, 4-H, -CH2CH2N<), 5 2.89 (1H, m, 3-H), 2.76 (3H, s, >NCH3), 2.40 (1H, m, -CH2CH2N<), 1.99 (1H, m, -CH2CH2N<)

Yhdiste: 50 CH-.

10 R=-CH2CH2N(CH2)3N(CH3)„«2HC1

Saanto: 92.0% Sulamispiste: 238°C (hajoaa) 1H-NMR [ iiuotin:DMSO-d6]: S(ppra) 8.26 (1H, s, 4'-OH), 7.03 (1H, s, 5-H), 6.45 (1H, s, 8-H), 6.19 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.99, 5.97 15 (2H, s x 2, -OCH^O-), 4.44 (1H, d, J=5.2Hz, 1-H), 4.37 (1H, m, lla-H), 4.34 (1H, m, Ιΐβ-H), 3.62 (6H, s, ;.· : 3'-OCH3, S'-OC^), 2.90-3.40 (9H, m, 2-H, 3-H, 4-H, • · · 'f·] -CH2NCH2CH2CH2N<), 2.75 (9H, m, -N(CH3)-(CH2)3N(CH3)2), • · · 1.91-2.34 (4H, m, -CH2CH2NCH2CH2CH2N<) .·. : 20 • «« — - — — - - — • · :T: Yhdiste: 51 CH, . R=-CH2CH2N(CH2 ) gN(CH3 ) 2* 2HC1

Saanto: 75.0% Sulamispiste: 198-199°C

···, 25 ^H-NMR [liuotin: DMSO-dg ] : 5(ppm) • « · 101227 58 ll.o (2H, br, N+H), 8.26 (1H, s, 4'-OH), 7.05 (1H, s, 5-H), 6.44 (1H, s, 8-H), 6.19 (2H, s, 2'-H/ 6'- H), 5.99 (2H, s, -0CH20-), 4.18-4.43 (3H, m, 1-H, lla-H, 1Ιβ-H), 3.62 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3), 2.51-3.62 (9H, m, 5 2-H, 3-H, 4-H, -CH2NCH2(CH2)4CH2N<), 2.75 (6H, s, -N(CH3)2), 2.27 (1H, m, -CH2CH2N(CH2)gN<), 1.85 (1H, m# -CH2CH2N(CH2)6N<), 1.65, 1.33 (8H, m, -NCH2(CH2)4CH2N<)

Yhdiste: 52 ίο r=-ch2ch2nhch2ch2n(ch3)2.2hci

Saanto:55.0% sulamispiste: 213°C (hajoaa) 1H-NMR [liuotin: CDC13 + CD3OD]: δ (ppm) 6.80 (1H, s, 5-H), 6.47 (1H, s, 8-H), 6.27 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5.95 (1H, d, J=lHz, -0CH20-), 5.94 (1H, d, J=lHz, 15 -0CH20-), 4.55 (1H, d, J=4.5Hz, 1-H), 4.41 (1H, m, ΐχα_ H), 4.26 (1H, m, Ιΐβ-H), 3.76 (6H, s, 3'-OCH3, 5'-OCH3)r jlY 3·61 (2Hr brt, J=6Hz, -NHCH2CH2N<), 3.47 (2H, brt, « · · -NHCH2CH2N<), 3.27 (1H, m, 4-H), 3.15 (2H, m, • · #|·' -CH2NHCH2CH2N<), 3.05 (2H, limittynyt, 2-H, 3-H), V'i 20 2-96 (6H' s' ~n(CH3)2), 2.27 (1H, m, -CH2CH2NHCH2CH2N<), 2.04 (1H, m, -CH2CH2NHCH2CH2N<) • · -- _

Yhdiste: 53 CH0 :: : j 3 25 R=-CH2CH2N-lT^\l-CH3.2HCl • · · 59 101227

Saanto:67.0% Sulamispiste: 188-190°C

1H-NMR [ liuotin;: DMSO-dg ] : S(ppm) 13.00 (2H, br, N+H), 10.94 (1H, br, 4'-OH), 7.05 (1H, s, 5-H), 6.44 (1H, s, 8-H), 6.19 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 5-98 5 (2H, s, -0CH20-), 4.45 (2H, m, 1-H, lla-H), 4.12 (1H, m, Ιΐβ-H) , 3.61 ( 6H, s, 3 ' -OCJHL· , 5 '-OCIU ) , 2.20-3:60 ( 13H, m, -CH9CH9N-N N-CH9, 2-H, 3-H, 4-H), 2.92 (6H, s, -N(CH3)-lT^N-CH3), 2.28 (1H, m, -CH2CH2N(CH3)-), 2.04 (1H, m, -CH2CH2N(CH3)-) 10 _ • · • · · • · « · • · · « · · • · « « « · • · · · • · « · · » · · » 1 • · · • » · • · · · • « · f « 4 • · · « · · • « « «

Claims (5)

1. Menetelmä farmaseuttisesti aktiivisen 4-desoksi-4-epipo- dofyllotoksiinijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava 60 1 0 1 2 2 7 (CH2)nN = No H3C0'-^%^\0CH3 5 0Rl (I) jossa Ri on vetyatomi tai ryhmä R4, joka on metyyliryhmä, bentsyylioksikarbonyyliryhmä, aiempialkanoyyliryhmä, jossa voi olla yksi tai useampi halogeeniatomi tai kaavan 10 -Si(Rx)(Ry)(Rz) mukainen ryhmä (jossa Rx, Ry ja Rz ovat sa moja tai erilaisia ja kukin on aiempia1kyyliryhmä tai fenyy-liryhmä); R2 ja R3 ovat samoja tai erilaisia ja kukin on vetyatomi, sykloalkyyliryhmä tai alempialkyyliryhmä, joka voi olla 15 substituoitu hydroksilla, alemmalla alkoksilla, fenyylillä, piperidyylillä, pyridyylillä, morfolinyylillä tai kaavan -N(Rc)(Rd) mukaisella ryhmällä (jossa Rc ja Rd ovat samoja tai erilaisia ja kukin on alempialkyyliryhmä), tai toinen ryhmistä R2 ja R3 on kaavan -N(Ra) (Rb) mukainen ryhmä :*·*: 20 (jossa Ra ja Rb ovat samoja tai erilaisia ja kukin on alem- . *, pialkyyliryhmä tai fenyyliryhmä tai Ra ja Rb voivat yhdis- • · · tyä, jolloin muodostuu alempialkyyli-substituoitu piperatsi- • ♦ ’···* noryhmä) , tai R2 ja R3 voivat yhdistyä, jolloin muodostuu :***: piperatsinoryhmä, piperidyyliryhmä, morfolinyyliryhmä tai • · :*·,· 25 pyrrolidinyyliryhmä, jotka kaikki voivat sisältää lisäsubs- tituentin, joka on alempi alkyyliryhmä, joka voi olla substituoitu hydroksilla, tai piperidinoryhmä; ja n on 2 tai 3; tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamisek-30 si, 101227 tunnettu siitä, että johdannainen, jolla on kaava = o OR4 (Ie) 5 jossa R4 tarkoittaa samaa kuin edellä ja R7 on kaavan -(CH2)mCHO mukainen ryhmä (jossa m on 1 tai 2) tai alempi-alkyyliryhmä, jossa on ketoaldehydiryhmä, altistetaan pelkistävälle aminoinnille aminoyhdisteen kanssa, jolla on kaava 10 hn^ r3 (IV) ’· · jossa R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin saa- daan johdannainen, jolla ön kaava \'i 15 (CH2)nN Wv\ • · · r • · • f • · · AA : *.·· h3co^^5^\OCH3 OR< (Xf) jossa R2, R3, R4 ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, ja haluttaessa kaavan (If) mukainen johdannainen, jossa R4 on 20 bentsyylioksikarbonyyliryhmä, pelkistetään katalyyttisesti, jolloin saadaan johdannainen, jolla on kaava 62 1 0 1 2 2 7 /Rl (OWN /v^sXX \ II ° = Η300-^γ/\οεΗ3 OH dg) jossa R2, R3 ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, 5 ja haluttaessa saatu johdannainen muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa 10 on vetyatomi, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu .·. : siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R-|_ on vetyatomi, ja ryhmä -(CH2)nN^R2 on -ch2ch2n n-ch 3 .·. : r3 >—f 15 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

·· 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu « · 9 • · · *... siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa :·;: -η ί”3 . · R on vetyatomi, ja ryhmä -(CH2)nN 2 on -ch 2ch 2 n ch 2ch 2n (ch 3) 2 1 \ \ 1 ° 3 > • « · 20 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

• · · • · · • · • · ,·. : 5. Patenttivaatimuksen l mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa fH3 /-y R*L on vetyatomi, ja ryhmä “ (CH2)ηΝ>^2 on -CH2CH2 NCH2CH2N^_^ 25 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.