ES2966719T3 - Derivados de quinazolina-2,4-diona como inhibidores de PARP - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I) y a composiciones que contienen dichos compuestos que actúan como inhibidores de PARP (Poli (ADP-ribosa) polimerasa). Además, la presente invención proporciona procesos para la preparación de los compuestos descritos, así como métodos para usarlos, por ejemplo como medicamento, en particular para el tratamiento de trastornos de proliferación celular, tales como el cáncer. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de quinazolina-2,4-diona como inhibidores de PARP

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos y composiciones que contienen dichos compuestos que actúan como inhibidores de PARP (poli (ADP-ribosa) polimerasa). Además, la presente invención proporciona procesos para la preparación de los compuestos descritos, así como métodos para usarlos, por ejemplo como medicamento, en particular para el tratamiento de trastornos proliferativos celulares, tales como el cáncer.

Cualquier referencia en la descripción a los métodos de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante terapia y métodos de diagnóstico practicados en el cuerpo humano o animal se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en esos métodos.

Antecedentes de la invención

La enzima nuclear poli(ADP-ribosa) polimerasa-1 (PARP-1) es un miembro de la familia de enzimas PARP. PARP-1 y PARRP-2 son miembros únicos de la familia, ya que sus actividades catalíticas son estimuladas por la aparición de roturas de la cadena de ADN. PARP desempeña un papel en los mecanismos de reparación del ADN, por su capacidad de reconocer y unirse rápidamente roturas de cadena simples o dobles. Por lo tanto, la inhibición de PARP es una herramienta valiosa en el tratamiento del cáncer y el diagnóstico del mismo.

La inhibición de PARP puede ser especialmente eficaz cuando se combina con un tratamiento que daña el ADN, tal como con radiación ionizante o después del tratamiento con agentes que dañan el ADN. La inhibición de la actividad enzimática de PARP conduce a una sensibilidad potenciada de las células tumorales hacia los tratamientos que dañan el ADN.

Se ha informado que ciertas moléculas pequeñas son inhibidores de PARP. Por ejemplo, las Publicaciones de PCT n.°: Los documentos WO 2000/42040 y 2004/800713 informan de derivados tricíclicos de indol como inhibidores de PARP. Las publicaciones PCT n.° WO 2002/44183 y 2000/105700 informan de derivados tricíclicos de diazepinindol como inhibidores de PARP PCT n.° WO 2011/130661 y la patente GB 2462361 informa de derivados de dihidropiridoftftalazinona como inhibidores de PARP. Las publicaciones PCT n.° WO 2012/130166 A y WO 2012/125521 A informan de derivados de quinazolina-2,4-diona como inhibidores de PARP. Además, algunas publicaciones informan sobre inhibidores de PARP radiomarcados y marcados por fluorescencia para su uso en la formación de imágenes y/o radioterapia (por ejemplo, el documento WO2018218025).

Sin embargo, existe una necesidad continua de más moléculas inhibidoras de PARP adecuadas en el diagnóstico y/o tratamiento del cáncer. A este respecto, esta familia de patentes proporciona compuestos y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; composiciones farmacéuticas que comprenden al menos uno de esos compuestos y sus sales farmacéuticamente aceptables y su uso en la inhibición de la actividad PARP para diagnosticar y/o tratar enfermedades tales como el cáncer. Por ejemplo, los compuestos y composiciones como se describe en el presente documento pueden ser útiles en el tratamiento de cánceres con vías defectuosas de reparación del ADN y/o pueden ser útiles para mejorar la efectividad de la quimioterapia y la radioterapia.

Breve descripción de los dibujos

Con referencia específica ahora a las figuras, se enfatiza que los detalles mostrados son a modo de ejemplo y con fines de discusión ilustrativa de las diferentes realizaciones de la presente invención solamente. Se presentan con el fin de proporcionar lo que se considera la descripción más útil y sencilla de los principios y aspectos conceptuales de la invención. A este respecto no se hace ningún intento para mostrar detalles estructurales de la invención con más detalle de lo necesario para una comprensión fundamental de la invención. La descripción tomada con los dibujos hace evidente para los expertos en la técnica cómo las varias formas de la invención pueden incorporarse en la práctica.

Fig. 1 :Curvas de inhibición de dosis-respuesta utilizadas para determinar IC50-valores de diferentes inhibidores de PARP.

Fig. 2 :Datos de citometría de flujo de la unión celular por células de14F-FL A Cal27 (A), FaDu (B) y OE33 (C).Fig. 3 :Análisis por citometría de flujo de células sin teñir y células incubadas con diferentes inhibidores de PARP-1, células FaDu (A), Cal27 (B) y OE33 (C). Las células teñidas con 14F-FL se usaron como control positivo.

Resumen de la invención

En un primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

Ri es halógeno;

R2 y R3 tomados junto con el átomo de N al que están unidos, representan un resto heterocíclico mono o bicíclico de 5-10 miembros; que puede estar opcionalmente sustituido por un sustituyente seleccionado de la lista que comprende: - alquilo C1-20, y -C(=O) R8;

cada uno de estos

opcionalmente sustituido opcionalmente con un sustituyente seleccionado de la lista que comprende un resto fluorescente, - heterociclilo C3-20, y carboxi;

R4, R5, R6y R7 son cada uno -H;

R8se selecciona de la lista que comprende un resto fluorescente, - alquilo C1-20, y - cicloalquilo C3-20;

X e Y se seleccionan cada uno independientemente de C Y N;

en donde al menos uno de dicho X e Y es N;

en donde cuando X es N, entonces R7 está ausente.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto como se define en la presente memoria; siendo más particularmente la Fórmula II o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

R1 , R2, R3, R4, R5 y R6son como se han definido anteriormente.

En otra realización particular adicional, la presente invención proporciona un compuesto como se define en la presente descripción; siendo más particularmente la Fórmula III o un estereoisómero, tautómero, racémico, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

iii)

en donde,

Ri, R<2>, R<3>, R4, R<5>, R6 y R<7>son como se han definido anteriormente.

En otra realización específica, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, tal como que es de fórmula I, II o lIl; donde R<1>es un halógeno radiactivo seleccionado de la lista que comprende 18F y 123I, preferiblemente 18F

En otra realización muy específica, la presente invención proporciona un compuesto tal como se define en el presente documento, tal como de fórmula I, II o llI;

en donde,

R8 es un resto fluorescente o un compuesto que no contiene un resto radiactivo o fluorescente.

En otra realización específica más, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento y se selecciona de la siguiente lista; donde cada Z se selecciona independientemente de -I, -Br, -At y -F; cada uno de los mencionados -I, -Br, -At y -F que están opcionalmente radiomarcados:

La presente invención proporciona además un compuesto de Fórmula I o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo, y se selecciona de la lista que comprende:

En cada uno de los compuestos definidos anteriormente, uno o más de los átomos de halógeno indicados pueden reemplazarse opcionalmente por un radiomarcado uno, tal como -F puede reemplazarse por 18F; I puede reemplazarse por 123I,...

La presente invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en la presente descripción; más en particular es de fórmula I, II o Ill; y un diluyente, portador o excipiente aceptable, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona además un compuesto como se define en la presente descripción; o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto; para su uso en medicina humana o veterinaria más particularmente para su uso en el diagnóstico o tratamiento de un trastorno caracterizado por sobreexpresión de PARP (ADP-ribosa) polimerasa); tal como, por ejemplo, seleccionada de la lista que comprende: cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de páncreas, glioblastoma, neuroblastoma, cáncer peritoneal, carcinoma oral y cáncer esofágico.

Finalmente, la presente invención proporciona el uso no diagnóstico del compuesto como se define en el presente documento; o una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto; en el procesamiento de imágenesin vivode la distribución de PARP.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se describirá ahora adicionalmente. En los siguientes pasajes, se definen con más detalle diferentes aspectos de la invención. Cada aspecto así definido puede combinarse con cualquier otro aspecto o aspectos a menos que se indique claramente lo contrario. En particular, cualquier característica indicada como preferida o ventajosa puede combinarse con cualquier otra característica o características indicadas como preferidas o ventajosas.

A menos que un contexto indique lo contrario, los asteriscos se usan en el presente documento para indicar el punto en el que un radical mono o bivalente representado está conectado a la estructura a la que se relaciona y del cual la radical forma parte.

Como ya se mencionó anteriormente, en un primer aspecto la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

Al describir los compuestos de la invención, los términos utilizados deben interpretarse de acuerdo con las siguientes definiciones, a menos que un contexto indique lo contrario:

El término “ alquilo” por sí mismo o como parte de otro sustituyente se refiere a un hidrocarburo completamente saturado de Fórmula CxH<2>x<+1>donde x es un número mayor o igual que 1. En general, los grupos alquilo de esta invención comprenden de 1 a 20 átomos de carbono. Los grupos alquilo pueden ser lineales o ramificados. Cuando se usa un subíndice en la presente descripción después de un átomo de carbono, el subíndice se refiere al número de átomos de carbono que el grupo nombrado puede contener. Así, por ejemplo, alquilo C<1-4>significa un alquilo de uno a cuatro átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo son metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo, y sus isómeros (p. ej., n-butilo, i-butilo y t-butilo); pentilo y sus isómeros, hexilo y sus isómeros, heptilo y sus isómeros, octilo y sus isómeros, nonilo y sus isomeros; decilo y sus isómeros. Alquilo C<1>-C<6>incluye todos los grupos alquilo lineales, ramificados, con entre 1 y 6 átomos de carbono, y por tanto incluye metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, butilo y sus isómeros (por ejemplo, n-butilo, i-butilo y t-butilo); pentilo y sus isómeros, hexilo y sus isómeros.

El término “ cicloalquilo” por sí mismo o como parte de otro sustituyente es un grupo alquilo cíclico, es decir, un grupo hidrocarbilo monovalente, saturado, que tiene una estructura cíclica de 1, 2 o 3. El cicloalquilo incluye todos los grupos hidrocarburo saturados que contienen de 1 a 3 anillos, que incluyen grupos alquilo monocíclicos, bicíclicos o policíclicos. Los grupos cicloalquilo pueden comprender 3 o más átomos de carbono en el anillo y generalmente, según esta invención, comprenden de 3 a 15 átomos. Los anillos adicionales de cicloalquilos multianillo pueden estar fusionados, puenteados y/o unidos a través de uno o más átomos espiro.

Los grupos cicloalquilo también se pueden considerar un subconjunto de anillos homocíclicos descritos a continuación. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo, adamantanilo y ciclodecilo con ciclopropilo que es particularmente preferido.

Cuando los grupos alquilo como se definen son divalentes, es decir, con dos enlaces simples para la unión a otros grupos, se denominan grupos “ alquileno” . Los ejemplos no limitantes de grupos alquileno incluyen metileno, etileno, metilmetileno, trimetileno, propileno, tetrametileno, etiletileno, 1,2-dimetiletileno, pentametileno y hexametileno.

Los términos “ heterociclilo” o “ heterociclo” como se usan en el presente documento por sí mismos o como parte de otro grupo se refieren a grupos cíclicos no aromáticos, completamente saturados o parcialmente insaturados (por ejemplo, de 3 a 13 miembros monocíclicos, de 7 a 17 miembros bicíclicos o de 10 a 20 miembros tricíclicos de anillo tricíclico, o que contienen un total de 3 a 10 átomos en el anillo) que tienen al menos un heteroátomo en al menos un anillo que contiene un átomo de carbono. Cada anillo del grupo heterocíclico que contiene un heteroátomo puede tener 1, 2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados de átomos de nitrógeno, átomos de oxígeno y/o átomos de azufre, donde los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden oxidarse opcionalmente.

El grupo heterocíclico puede estar unido en cualquier heteroátomo o átomo de carbono del anillo o sistema de anillos, donde la valencia permite. Los anillos de heterociclos multianillo pueden fusionarse, unirse y/o unirse a través de uno o más átomos espiro.

Los grupos heterocíclicos ilustrativos incluyen piperidinilo, azetidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, isoxazolinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, piperidilo, .... preferiblemente piperidinilo.

El término “ oxo” , como se usa en el presente documento, se refiere al grupo =O.

El término “ carboxi” o “ carboxilo” o “ hidroxicarbonilo” por sí mismo o como parte de otro sustituyente se refiere al grupo -CO2H. Por lo tanto, un carboxialquilo es un grupo alquilo como se definió anteriormente que tiene al menos un sustituyente que es -CO2H.

El término “ halo” o “ halógeno” como grupo o parte de un grupo es genérico para flúor, cloro, bromo, yodo o astatina. Siempre que el término “ sustituido” se use en la presente invención, se pretende indicar que uno o más hidrógenos en el átomo indicado en la expresión usando “ sustituido” se reemplaza con una selección del grupo indicado, siempre que no se exceda la valencia normal del átomo indicado, y que la sustitución da como resultado un compuesto químicamente estable, es decir, un compuesto que es suficientemente robusto para sobrevivir al aislamiento hasta un grado útil de pureza de una mezcla de reacción y formulación en un agente terapéutico. Cuando los grupos pueden estar opcionalmente sustituidos, dichos grupos pueden estar sustituidos con una vez o más, y preferiblemente una vez, dos o tres veces.

Como se describe en el presente documento, algunos de los compuestos de la invención pueden contener uno o más átomos de carbono asimétricos que sirven como centro quiral, lo que puede conducir a diferentes formas ópticas (por ejemplo, enantiómeros o diastereoisómeros). La invención comprende todas estas formas ópticas en todas las configuraciones posibles, así como mezclas de las mismas.

Además, será evidente para el experto en la técnica que los compuestos de la invención pueden existir en forma de diferentes tautómeros.

Al tales posibles tautómeros y mezclas de los mismos se incluyen dentro del alcance de la invención. Siempre que se use en la presente invención, el término “ compuestos de la invención” o un término similar se entiende que incluye los compuestos de la Fórmula general I y cualquier subgrupo de los mismos. Este término también se refiere a los compuestos como se representa en las Tablas 1 a 1, 1, su N -óxidos.

sales, solvatos, hidratos, formas estereoisoméricas, mezclas racémicas, formas tautoméricas, isómeros ópticos. Las formas de N-óxido de dichos compuestos están destinadas a comprender compuestos en los que uno o varios átomos de nitrógeno están oxidados a los denominados N -óxido.

La presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, en particular de Fórmula (I) (II) o (III) o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo, en donde,

R1 es halógeno;

R2 y R3 tomados junto con el átomo de N al que están unidos, representan un resto heterocíclico mono o bicíclico de 5-10 miembros; que puede estar opcionalmente sustituido por un sustituyente seleccionado de la lista que comprende: - alquilo C1-20, y -C (=O)R8; cada uno de estos opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de la lista que comprende un resto fluorescente, - heterociclilo C3-20 y carboxi;

R4, R5, R6y R7 son cada uno -H;

R8se selecciona de la lista que comprende un resto fluorescente, - alquilo C1-20, y - cicloalquilo C3-20;

X e Y se seleccionan cada uno independientemente de C Y N;

en donde al menos uno de dicho X e Y es N;

en donde cuando X es N, entonces R7 está ausente.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

R1 es halógeno;

R2 y R3 tomados junto con el átomo de N al que están unidos, representan un resto heterocíclico mono o bicíclico de 5-10 miembros; que puede estar opcionalmente sustituido por un sustituyente seleccionado de la lista que comprende: - alquilo C1-20, y -C (=O) R8; cada uno de estos opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de la lista que comprende un resto fluorescente, - heterociclilo C3-20 y carboxi;

R4, R5, y R6son cada uno -H;

R8se selecciona de la lista que comprende un resto fluorescente, - alquilo C1-20, y - cicloalquilo C1-20;

X es N;

Y es C; y

R7está ausente.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

R1 es halógeno;

R2 y R3 tomadas junto con el átomo de N al que están unidos, representan una fracción de piperazina sustituido con -alquilo C1-20; que puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de la lista que comprende un resto fluorescente, - heterociclilo C3-20, y carboxi;

R4, R5, y R6son cada uno -H;

X es N;

Y es C; y

R7está ausente.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

donde,

R1 es -F o -I; preferiblemente -F;

R2 y R3 tomadas junto con el átomo de N al que están unidos, representan una fracción de piperazina sustituido con -alquilo C1-20; que puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de la lista que comprende un resto fluorescente, - heterociclilo C3-20, y carboxi;

R4, R5, y R6son cada uno -H;

X es N;

Y es C; y

R7está ausente.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

R1 es halógeno;

R2 y R3 tomados junto con el átomo de N al que están unidos, representan un resto heterocíclico mono o bicíclico de 5-10 miembros; que puede estar opcionalmente sustituido por un sustituyente seleccionado de la lista que comprende: -C1-20 alquilo, y -C (=O) Rs;

cada uno de estos opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de la lista que comprende un resto fluorescente, -C3-20 heterociclilo y carboxi;

R4, R5, R6y R7 son cada uno -H;

R8se selecciona de la lista que comprende un resto fluorescente, - alquilo C1-20, y - cicloalquilo C1-20;

X es C; y

Y es N.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

R1 es halógeno;

R2 y R3 tomadas junto con el átomo de N al que están unidos, representan una fracción de piperazina sustituido con -alquilo C1-20; que puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de la lista que comprende un resto fluorescente, - heterociclilo C3-20, y carboxi;

R4, R5, R6y R7 son cada uno -H;

X es C; y

Y es N.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

R1 es -F o -I; preferiblemente -F;

R2 y R3 tomadas junto con el átomo de N al que están unidos, representan una fracción de piperazina sustituido con -alquilo C1-20; que puede sustituirse opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de la lista que comprende un resto fluorescente, - heterociclilo C3-20, y carboxi;

R4, R5, R6y R7 son cada uno -H;

X es C; y

Y es N.

Los compuestos de la presente invención son particularmente adecuados para varias aplicaciones, dependiendo del tipo de sustituyentes usados:

- Compuestos fríos terapéuticos

- Compuestos radiomarcados terapéuticos

- Compuestos radiomarcados de diagnóstico

- Compuestos diagnósticos marcados con fluorescencia

Compuestos fríos terapéuticos

Los compuestos de la presente invención pueden usarse para aplicaciones terapéuticas, donde dichos compuestos están en un formato “frío” , es decir, no están marcados tales como no están radiomarcados ni marcados con fluorescencia. Por lo tanto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, II o III, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato o solvato del mismo, donde dicho compuesto no contiene un resto radiactivo o fluorescente. En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, II o Ill, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato o solvato del mismo,

en donde,

R<1>es halógeno;

R<2>y R<3>tomadas junto con el átomo de N al que están unidos, representan una fracción de piperazina que está además sustituido con -C (=O) R 8

R4, R5 y R6son -H

R8se selecciona de la lista que comprende- alquilo C1-20, y - cicloalquilo C3-20;

X e Y s e seleccionan cada uno independientemente de C Y N al menos uno de dicho X e Y es N; donde cuando X es N, entonces R<7>está ausente; y donde dicho compuesto no contiene un resto radiactivo o fluorescente.

En otra realización específica más, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento y se selecciona de la siguiente lista; donde cada Z se selecciona independientemente de 1, -Br, -At y -F:

En una realización muy específica, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, y se selecciona de la lista que comprende:

Compuestos terapéuticos radiomarcados

Los compuestos de la presente invención pueden usarse para aplicaciones radioterapéuticas, donde dichos compuestos están etiquetados radiactivamente.

Por lo tanto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, II o III, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde R<1>es un halógeno radiactivo seleccionado de la lista que comprende 76Br, 77Br, 81Br, 123I, 125I, 131I, 209At, 210At, y 211At.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, II o Ill, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

R<1>es halógeno;

R<2>y R<3>tomadas junto con el átomo de N al que están unidos, representan una fracción de piperazina que está además sustituido con -C (=O) R8

R<4>R<5>y R<6>son -H

R8 se selecciona de la lista que comprende -alquilo C<1>-<20>, y - cicloalquilo C<3>-<20>;

X e Y se seleccionan cada uno independientemente de C Y N

al menos uno de dicho X e Y es N; donde cuando X es N, entonces R<7>está ausente; y

en donde,

R<1>es un halógeno radiactivo seleccionado de la

lista que comprende 76Br, 77Br, 81Br, 123I, 125I, 131I, 209At, 210At y 211At.

En otra realización específica más, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento y se selecciona de la siguiente lista; donde cada Z se selecciona independientemente

de 76Br, 77Br, 81Br, 123I, 125I, 131I.209At, 210At y 211At;

En una realización muy específica, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, y se selecciona de la lista que comprende:

En cada uno de los compuestos definidos anteriormente, los átomos de halógeno indicados se reemplazan por otro radioetiquetado, tal como123I,125I,131I, ...

Compuestos radiomarcados para diagnóstico

Los compuestos de la presente invención pueden usarse para aplicaciones de diagnóstico, donde dichos compuestos se radiomarcan.

Por lo tanto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, II o III, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde R1 se selecciona de18F y123I; preferiblemente18F

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, II o Ill, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

en donde,

R1 es halógeno;

R2 y R3 tomadas junto con el átomo de N al que están unidos, representan una fracción de piperazina que está además sustituido con -C (=O) R8

R4 y R5 R6son -H

R8se selecciona de la lista que comprende -alquilo C1-20, y - cicloalquilo C3-20;

X e Y se seleccionan cada uno independientemente de C Y N

al menos uno de dicho X e Y es N; donde cuando X es N, entonces R7 está ausente; en donde R1 se selecciona de18F y123I; preferiblemente18F

En otra realización específica más, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento y se selecciona de la siguiente lista; donde cada Z se selecciona independientemente de -1, -Br, -At y -F; y al menos una de dicha Z es18F o123I; preferiblemente18F:

En una realización muy específica, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, y se selecciona de la lista que comprende:

En cada uno de los compuestos definidos anteriormente, los átomos de halógeno indicados I se reemplazan por un radiomarcado uno, tal como -F sustituido por 18F

Compuestos diagnósticos marcados con fluorescencia

Los compuestos de la presente invención pueden usarse para aplicaciones de diagnóstico, en donde dichos compuestos están marcados con fluorescencia.

Por lo tanto, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, II o III, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato o solvato del mismo,

en donde cualquiera R8 es un resto fluorescente, o al menos uno de dicho sustituyente de R<2>y R<3>se sustituye adicionalmente con un resto fluorescente.

En una realización particular, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, II o III, o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato o solvato del mismo, donde

Ri es halógeno;

R2 y R3 tomadas junto con el átomo de N al que están unidos, representan una fracción de piperazina que está además sustituido con un resto seleccionado de - alquilo C 1-20, y -C (=O) R8

R4, R5 y R6son -H

R8se selecciona de la lista que comprende un resto fluorescente, - alquilo C1-20, y - cicloalquilo C3-20; X e Y se seleccionan cada uno independientemente de C Y N;

al menos uno de dicho X e Y es N; donde cuando X es N, entonces R7 está ausente; y

en donde Rs es un resto fluorescente o al menos uno de dichos sustituyentes piperazina está adicionalmente sustituido con un resto fluorescente.

En una realización específica de la presente invención, el resto fluorescente puede ser un BODIPY

Fluoróforo. Las fracciones fluorescentes particularmente interesantes son los ésteres de succinimidilo BODIPY, tales como: BODIPY FL C3 éster de succinimidilo

BODIPY FL C5 éster de succinimidilo

BODIPY R6G C3 éster de succinimidilo

BODIPY 493/503 C3 éster de succinimidilo

BODIPY 530/550 C3 éster de succinimidilo

BODIPY 558/568 C3 éster de succinimidilo

BODIPY 564/570 C3 éster de succinimidilo

BODIPY 576/589 C3 éster de succinimidilo

BODIPY 581/591 C3 éster de succinimidilo

BODIPY FL-X éster de succinimidilo

BODIPY TMR-X éster de succinimidilo

BODIPY TR-X éster de succinimidilo

BODIPY 630/650-X éster de succinimidilo

BODIPY 650/665-X éster de succinimidilo

En otra realización específica más, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento y se selecciona de la siguiente lista; donde cada Z se selecciona independientemente de un -1, -Br y -F:

En una realización muy específica, la presente invención proporciona un compuesto como se define en el presente documento, y se selecciona de la lista que comprende:

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse de acuerdo con los esquemas de reacción proporcionados en los ejemplos de aquí en adelante, pero los expertos en la técnica apreciarán que estos son solo ilustrativos para la invención y que los compuestos de esta invención pueden prepararse mediante cualquiera de varios procesos sintéticos estándar comúnmente utilizados por los expertos en la técnica de la química orgánica.

Método de tratamiento o diagnóstico

Como se detalla en el presente documento anteriormente, dependiendo de la selección de sustituyentes, los compuestos de la presente invención pueden ser adecuados para su uso en el diagnóstico, prevención y/o tratamiento de trastornos caracterizados por la sobreexpresión de PARP (ADP-ribosa) polimerasa); tal como, por ejemplo, seleccionada de la lista que comprende: cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de páncreas, glioblastoma, neuroblastoma, cáncer peritoneal, carcinoma oral y cáncer esofágico.

En una realización particular, los compuestos de la presente invención pueden ser adecuados para su uso en el diagnóstico, prevención y/o tratamiento del carcinoma oral, cáncer esofágico, cáncer de piel, heridas malignas (por ejemplo, heridas mamarias, heridas de colon, heridas de la próstata,.,.) y trastornos pulmonares. Para ambos tipos de carcinoma, es decir, carcinoma oral y cáncer esofágico, las subcategorías de carcinoma de células escamosas así como adenocarcinoma caen dentro del alcance pretendido. En particular, los compuestos marcados con fluorescencia de la presente invención son altamente adecuados en el diagnóstico de estos trastornos.

Siempre que en esta solicitud, se use el término “ uso farmacéutico” , se entiende que incluye usos tanto terapéuticos como de diagnóstico de los compuestos (marcados) de la invención. Para uso farmacéutico, los compuestos de la invención pueden usarse como un ácido o base libre, y/o en forma de una sal de adición de ácido y/o adición de base farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, obtenida con ácido o base orgánico o inorgánico no tóxico), en forma de un hidrato, solvato y/o complejo. Como se usa en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, el término “ solvato” incluye cualquier combinación que pueda estar formada por un compuesto de esta invención con un disolvente inorgánico adecuado (por ejemplo, hidratos) o disolvente orgánico, tal como, pero sin limitación, alcoholes, cetonas, ésteres y similares. Dichas sales, hidratos, solvatos, etc. y su preparación serán claras para el experto en la materia se hace referencia, por ejemplo, a las sales, hidratos, solvatos, etc. descritos en US-A-6.372.778, US-A-6.369.086, US-A-6.369.087.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de acuerdo con la invención, es decir, en forma de productos solubles en agua, solubles en aceite, incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario que se forman, por ejemplo, de ácidos o bases inorgánicos u orgánicos. Los ejemplos de tales sales de adición de ácido incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, alcanforato, alcanforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftaleno-sulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionatetartrato, picrato, pivalato, propionato, sucinato, tartrano, tiocianato, tosilato y undecanoato. Las sales base incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio y potasio, sales de metales alcalinotérreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-Dglucamina y sales con aminoácidos tales como arginina, lisina, etc. Además, los grupos que contienen nitrógeno básicos pueden cuaternizarse con agentes tales como haluros de alquilo inferior, tales como cloruro, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; dialquil sulfatos como dimetil, dietil, dibutil; y sulfatos de diamilo, haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo como bencilo y fenetilbromuros y otros. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales etanolato de sal de sulfato y sulfato. Generalmente, para uso farmacéutico (diagnóstico, prevención o tratamiento), los compuestos de las invenciones pueden formularse como una preparación farmacéutica o composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de la invención y al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable y/o adyuvante, y opcionalmente uno o más compuestos farmacéuticamente activos adicionales.

Con respecto a las aplicaciones de diagnóstico específicamente, los compuestos pueden formularse como una solución para su uso como un enjuague bucal o (esofágico). Las mediciones pueden, por ejemplo, tomarse endoscópicamente.

Por medio de ejemplos no limitantes, dicha formulación puede estar en una forma adecuada para administración oral, para administración parenteral (tal como por inyección intravenosa, intramuscular o subcutánea o infusión intravenosa), para administración tópica (incluyendo ocular), para administración por inhalación, por un parche de piel, por un implante, por un supositorio, etc. Tales formas de administración adecuadas -que pueden ser semisólidas o líquidas, dependiendo de la forma de administración-, así como los métodos y portadores, diluyentes y excipientes para su uso en la preparación de las mismas, serán evidentes para el experto; se hace referencia de nuevo, por ejemplo, a los documentos US-A-6.372.778, US-A-6.369.086, US-A-6.369.087 y US-A-6.372.733, así como a los manuales habituales, como la última edición de Remington's Pharmaceutical Sciences.

Algunos ejemplos preferidos de tales preparaciones incluyen comprimidos, píldoras, polvos, pastillas para chupar, sobres, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, bolsitas, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles, pomadas, cremas, lociones, cápsulas de gelatina blanda y dura, supositorios, gotas oculares, soluciones inyectables estériles y polvos envasados estériles (que generalmente se reconstituyen antes de su uso) para la administración como un bolo y/o para la administración continua, que pueden formularse con portadores, excipientes y diluyentes, que son adecuados para dichas formulaciones en sí como lactosa, dextrosa, sucrosa, sorbitol, manitol, almidones, goma arábiga, fosfato de calcio, alginatos, goma tragacanto, gelatina, silicato cálcico, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, polietilenglicol, celulosa, agua (estéril), metilcelulosa, metil y propilhidroxibenzoatos, talco, estearato de magnesio, aceites comestibles, aceites vegetables y aceites minerales o mezclas adecuadas de los mismos. Las formulaciones pueden contener opcionalmente otras sustancias farmacéuticamente activas (que pueden o no conducir a un efecto sinérgico con los compuestos de la invención) y otras sustancias que se usan comúnmente en formulaciones farmacéuticas, tales como agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes dispersantes, desintegrantes, agentes espesantes, cargas, agentes conservantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, reguladores del flujo, agentes de liberación, etc. Las composiciones también pueden formularse para proporcionar una liberación rápida, sostenida o retardada del compuesto o compuestos activos contenidos en el mismo, por ejemplo, usando liposomas o matrices poliméricas hidrófilas basadas en geles naturales o polímeros sintéticos. Para mejorar la solubilidad y/o la estabilidad de los compuestos de una composición farmacéutica según la invención, puede ser ventajoso emplear a, p o Y-ciclodextrinas o sus derivados. Una forma interesante de formular los compuestos en combinación con una ciclodextrina o un derivado de la misma se ha descrito en el documento EP-A-721.331. En particular, la presente invención abarca una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de acuerdo con la invención con una ciclodextrina farmacéuticamente aceptable.

Además, los codisolventes tales como alcoholes pueden mejorar la solubilidad y/o la estabilidad de los compuestos. En la preparación de composiciones acuosas, la adición de sales de los compuestos de la invención puede ser más adecuada debido a su mayor solubilidad en agua.

Se hace referencia particular a las composiciones, formulaciones (y vehículos, excipientes, diluyentes, etc. para su uso en el mismo), vías de administración, etc., que son conocidas per se para piridinocarboxamidas análogas, tales como las descritas en los documentos US-A-4, 997.834 y EP-A-0-370-498.

Más en particular, las composiciones pueden formularse en una formulación farmacéutica que comprende una cantidad efectiva a nivel terapéutico de partículas consistentes en una dispersión sólida de los microorganismos de la invención y uno o más polímeros solubles en agua farmacéuticamente aceptables.

El término “ dispersión sólida” define un sistema en estado sólido (por oposición a un estado líquido o gaseoso) que comprende al menos dos componentes, en el que un componente está disperso más o menos uniformemente en el otro componente o componentes. Cuando dicha dispersión de los componentes es tal que el sistema es químicamente y físicamente uniforme u homogéneo en toda o consiste en una fase como se define en la termodinámica, dicha dispersión sólida se denomina “ una solución sólida” . Las soluciones sólidas son sistemas físicos preferidos porque los componentes en el mismo generalmente están fácilmente biodisponibles para los organismos a los que se administran.

Además, puede ser conveniente formular los compuestos en forma de nanopartículas que tengan un modificador de superficie adsorbido en la superficie de las mismas en una cantidad suficiente para mantener un tamaño medio efectivo de partícula inferior a 1000 nm. Los modificadores de superficie adecuados pueden seleccionarse preferentemente entre excipientes farmacéuticos orgánicos e inorgánicos conocidos. Dichos excipientes incluyen diversos polímeros, oligómeros de bajo peso molecular, productos naturales y tensioactivos. Los modificadores de la superficie preferidos incluyen tensioactivos no iónicos y aniónicos.

Otra forma interesante de formular los compuestos de acuerdo con la invención implica una composición farmacéutica mediante la cual los compuestos se incorporan en polímeros hidrófilos y aplicar esta mezcla como una película de recubrimiento sobre muchas perlas pequeñas, produciendo así una composición con buena biodisponibilidad que puede fabricarse convenientemente y que es adecuada para preparar formas farmacéuticas para administración oral. Los materiales adecuados para su uso como núcleos en las perlas son colectores, siempre que dichos materiales sean farmacéuticamente aceptables y tengan dimensiones y firmeza apropiadas. Ejemplos de tales materiales son polímeros, sustancias inorgánicas, sustancias orgánicas y sacáridos y derivados de los mismos. Las preparaciones pueden prepararse de una manera conocida per se, que generalmente implica mezclar al menos un compuesto de acuerdo con la invención con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, y, si se desea, en combinación con otros compuestos farmacéuticos activos, cuando sea necesario en condiciones asépticas. Se hace referencia de nuevo, por ejemplo, a los documentos US-A-6.372.778, US-A-6.369.086, US-A-6.369.087 y US-A-6.372.733, y la técnica mencionada anteriormente, así como a los manuales habituales, como la última edición de Remington's Pharmaceutical Sciences.

Las preparaciones farmacéuticas de la invención están preferentemente en una forma de dosificación unitaria, y pueden empaquetarse adecuadamente, por ejemplo en una caja, blíster, vial, botella, bolsita, ampolla o en cualquier otro soporte o recipiente adecuado de dosis única o multidosis (que puede marcarse correctamente); opcionalmente con una o más valvas que contienen información de producto y/o instrucciones para su uso. Generalmente, tales dosificaciones unitarias contendrán entre 1 y 1000 mg, y generalmente entre 5 y 500 mg, del al menos un compuesto de la invención, por ejemplo aproximadamente 10, 25, 50, 100, 200, 300 o 400 mg por dosificación unitaria.

Los compuestos pueden administrarse por una variedad de vías que incluyen las vías oral, rectal, ocular, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular o intranasal, dependiendo principalmente de la preparación específica usada y de la afección a tratar o prevenir, y con la administración oral e intravenosa generalmente se prefieren. El al menos un compuesto de la invención generalmente se administrará en una “ cantidad eficaz” , lo que significa cualquier cantidad de un compuesto de Fórmula I, II o III o cualquier subgrupo del mismo que, tras la administración adecuada, sea suficiente para lograr el efecto terapéutico o profiláctico deseado en el individuo al que se administra. Por lo general, dependiendo de la afección que se va a prevenir o tratar y la vía de administración, dicha cantidad eficaz normalmente estará entre 0,01 a 1000 mg por kilogramo de día de peso corporal del paciente por día, más a menudo entre 0,1 y 500 mg, tal como entre 1 y 250 mg, por ejemplo aproximadamente 5, 10, 20, 50, 100, 150, 200 o 250 mg, por kilogramo de peso corporal del paciente del paciente por día, que puede administrarse como una dosis diaria única, dividida en una sola dosis diaria, dividida en una sola dosis diaria, o esencialmente de forma continua, p. La(s) cantidad (s) a administrar, la vía de administración y el régimen de tratamiento adicional pueden determinarse por el médico tratante, dependiendo de factores tales como la edad, el sexo y el estado general del paciente y la naturaleza y gravedad de la enfermedad/síntomas a tratar. Se hace referencia de nuevo, por ejemplo, a los documentos US-A-6.372.778,US-A-6.369.086, US-A-6.369.087, así como a los manuales habituales, como la última edición de Remington's Pharmaceutical Sciences.

De acuerdo con el método de la presente invención, dicha composición farmacéutica puede administrarse por separado en diferentes momentos durante el curso de la terapia o simultáneamente en formas de combinación divididas o únicas. Por lo tanto, la presente invención debe entenderse como que abarca todos estos regímenes de tratamiento simultáneo o alternante y el término “ administrar” debe interpretarse en consecuencia.

Para una forma de administración oral, las composiciones de la presente invención pueden mezclarse con aditivos adecuados, tales como excipientes, estabilizantes o diluyentes inertes, y llevarse por medio de los métodos habituales en las formas de administración adecuadas, tales como comprimidos, comprimidos recubiertos, cápsulas duras, soluciones acuosas, alcohólicas u oleosas. Ejemplos de portadores inertes adecuados son goma arábiga, magnesia, carbonato de magnesio, fosfato de potasio, lactosa, glucosa o almidón, en particular, almidón de maíz. En este caso, la preparación se puede llevar a cabo tanto en seco como en gránulos húmedos. Los excipientes o disolventes oleosos adecuados son aceites vegetales o animales, tales como aceite de girasol o aceite de bacalao. Los disolventes adecuados para soluciones acuosas o alcohólicas son agua, etanol, soluciones de azúcar o mezclas de los mismos. Los polietilenglicoles y los polipropilenglicoles también son útiles como auxiliares adicionales para otras formas de administración. Como comprimidos de liberación inmediata, estas composiciones pueden contener celulosa microcristalina, fosfato dicálcico, almidón, estearato de magnesio y lactosa y/u otros excipientes, aglutinantes, extensores, disgregantes, diluyentes y lubricantes conocidos en la técnica.

Cuando se administra por aerosol nasal o inhalación, estas composiciones pueden prepararse según técnicas bien conocidas en la técnica de la formulación farmacéutica y pueden prepararse como soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, promotores de la absorción para mejorar la biodisponibilidad, fluorocarbonos y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes conocidos en la técnica. Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración en forma de aerosoles o aerosoles son, por ejemplo, soluciones, suspensiones o emulsiones de los compuestos de la invención o sus sales fisiológicamente tolerables en un disolvente farmacéuticamente aceptable, tal como etanol o agua, o una mezcla de tales disolventes. Si es necesario, la formulación también puede contener adicionalmente otros auxiliares farmacéuticos tales como tensioactivos, emulsionantes y estabilizadores, así como un propelente.

Para la administración subcutánea, el compuesto de acuerdo con la invención, si se desea con las sustancias habituales, tales como solubilizantes, emulsionantes o auxiliares adicionales se llevan en solución, suspensión o emulsión. Los compuestos de la invención también pueden liofilizarse y los liofilizados obtenidos usados, por ejemplo, para la producción de preparaciones de inyección o infusión. Los disolventes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina fisiológica o alcoholes, por ejemplo, etanol, propanol, glicerol, además también soluciones de azúcar tales como soluciones de glucosa o manitol, o alternativamente mezclas de los diversos disolventes mencionados. Las soluciones o suspensiones inyectables pueden formularse de acuerdo con la técnica conocida, mediante el uso de diluyentes o disolventes no tóxicos y aceptables por vía parenteral adecuados, tales como manitol, 1,3-butanodiol, agua, solución de Ringer o solución isotónica de cloruro de sodio, o agentes dispersantes o humectantes adecuados y de suspensión, tales como aceites estériles, sólidos y fijos, que incluyen mono o diglicéridos sintéticos y ácidos grasos, que incluyen ácido oleico.

Cuando se administra por vía rectal en forma de supositorios, estas formulaciones se pueden preparar mezclando los compuestos de acuerdo con la invención con un excipiente no irritante adecuado, tal como manteca de cacao, ésteres de glicérido sintéticos o polietilenglicoles, que son sólidos a temperaturas normales, pero se licúan y/o disuelven en la cavidad rectal para liberar el fármaco.

En realizaciones preferidas, los compuestos y composiciones de la invención se usan localmente, por ejemplo, tópicos o en aplicaciones tanto absorbidas como no adsorbidas.

Las composiciones son de valor en el campo veterinario, que para los fines en el presente documento no solo incluye la prevención y/o el tratamiento de enfermedades en animales, sino también para animales económicamente importantes tales como ganado vacuno, cerdos, ovejas, pollos, peces, etc. Por lo tanto, en un aspecto adicional, la invención se refiere a una composición para uso veterinario que contiene al menos un compuesto de la invención y al menos un vehículo adecuado (es decir, un vehículo adecuado para uso veterinario). La invención también se refiere al uso de un compuesto de la invención en la preparación de dicha composición.

La invención se ilustrará ahora mediante los siguientes ejemplos de síntesis y biológicos, que no limitan en modo alguno el alcance de la invención.

Ejemplos

Detalles experimentales generales:

Los rendimientos informados en la presente descripción se refieren a productos purificados (a menos que se especifique). La TLC analítica se realizó en placas de fondo de aluminio de gel de sílice Merck 60 F254. Los compuestos se visualizaron mediante luz UV y/o se tiñeron con yodo, ninhidrina o solución de permanganato de potasio seguido de calentamiento. La cromatografía en columna ultrarrápida se realizó en gel de sílice. Los espectros de 1H-RMN se registraron en un espectrómetro Bruker 400 MHz, Avance II con una sonda de 5 mm DUL (Dual) 13C y Bruker 400 MHz, Avance Ill HD con sonda BBFO (Observadora de banda ancha). Los desplazamientos químicos (8) se expresan en partes por millón (ppm) con referencia al pico de disolvente deuterado en el que se prepara la muestra. Los patrones de empalme se designan como s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuarteto), m (multiplete) y br s (singlete ancho).

Los siguientes disolventes, reactivos o terminología científica se pueden denominar por sus abreviaturas:

TLC Cromatografía de capa fina

ml Mililitros

mmol Milimoles

h Hora u horas

min Minuto o minutos

gGramos

mg Miligramos

eq Equivalentes

rT o RT Temperatura ambiente, ambiente, aproximadamente 25 °C

MS Espectrometría de masas

A. Esquemas de síntesis

A.1. Síntesis de compuestos

Los compuestos de la invención pueden prepararse por métodos bien conocidos por los expertos en la técnica, y como se describe en los procedimientos sintéticos y experimentales que se muestran a continuación.

Síntesis de compuestos de fórmula

Ejemplo 1a: Síntesis de TRA-13F

Ejemplo 1b: Síntesis de 1-(3-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carbonil)-4-fluorobencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13F)

Esquema-1

S ín t e s is d e5-(b ro m o m e til) -2-f lu o ro b e n z o a to de m e tilo (2): 2-fluoro-5-metilbenzoato de metilo (8, 6,70 g, 40.0 mmol) se agitó en cloruro de carbono: acetonitrilo (120,0 ml, 5 : 1) y se añadió N-bromosuccinamida (7,47 g, 42.0 mmol) seguido de la adición de y AIBN (1,29 g, 8,0 mmol). La mezcla resultante y se calentó a 80 °C durante 2 h. Después del consumo del material de partida (monitoreada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua helada (50 ml) y salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida dando 5-(bromometil)-2-fluorobenzoato de metilo bruto (2, 6,0 g, 61 %) como un sólido blanco.

1RM N H( 400MHz, D M S O -d 6): 57,98-8,02 (m, 1H), 7,73-7,80 (m, 1H), 7,31-7,40 (m, 1H), 4,78 (s, 2H), 3,87 (s, 3H).

Esquema-2

Síntesis de 2-amino-N-(terc-butil)nicotinamida (4): A una solución de ácido 2-aminonicotínico (1, 10,0 g, 72,46 mmol), terc-butil amina (2, 15,28 g, 144,9 mmol) y DIPEA (38,0 ml, 218,80 mmol) en DCM (200 ml) y T<3>Se añadió P (solución al 50%en EtOAc, 92,0 ml, 144,9 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Después del consumo del material de partida (controlado por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (100 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar 2-amino-N-(terc-butil) nicotinamida bruto (4, 5,60 g, 40 %) como un sólido blanco.

1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6):56,50-6,55 (m, 1H), 6,83 (bs, 2H), 7,71 (bs, 1H), 7,77-7,82 (m, 1H), 8,00-8,05 (m, 1H).LCMS:m/z 194,10 [M H]+, 95,11 %.

Síntesis de 3-(terc-butil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (6): A una solución de 2-amino-N-(terc-butil) nicotinamida (4, 5,0 g, 25,9 mmol,) en piridina (10,0 ml) y cloroformiato de metilo (4, 5,0 ml, 42,5 mmol) gota a gota a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h, que se continuó adicionalmente a 80 °C durante 16 h. Después del consumo del material de partida (monitorizado por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua y se precipitó un sólido que se filtró y se secó a presión reducida para dar 3-(terc-butil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (6, 1,95 g, 34 %) en forma de un sólido de color blanco.LCMS:m/z218,12 [M-H]+ 90 %.

Síntesis de 5-(3-(terc-butil)-2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1-il) metil)-2-fluorobenzoato de metilo (7): A una solución de 3-(terc-butil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (6, 1,5 g, 6,84 mmol), 5-(bromometil)-2-fluorobenzoato de metilo (2, 1,68 g, 6,84 mmol) en ACN (30 ml) y Cs2CO3 (4,46 ml, 13,68 mmol) se añadió al mismo. La mezcla de reacción se agitó a 60 °C durante 16 h. Después del consumo del material de partida (monitorizado por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (3X 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar el compuesto bruto que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida [fase normal, gel de sílice (100-200 de malla), gradiente 20 % a 25 % de acetato de etilo en hexano] para dar 5-(3-(terc-butil )-2,4-dioxo-3,4-d ihidropirido [2,3-d] pirimidin-1(2H)-il) metil)-2-fluorobenzoato de metilo (7, 1,90 g, 30 %) como un sólido blanco.

LCMS:m/z388,07 [M H]+, 85 %.

Síntesis de ácido 5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1(2H)-il) metil)-2-fluorobenzoico (8): 5-(3-(tercbutil)-2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1-il) metil)-2-fluorobenzoato de metilo (7, 0, 65 g, 1,68 mmol) se agitó en 1.4- dioxano (6,5 ml) y HCl 6N (6,5 ml). La masa de reacción se calentó a 100 °C durante 16 h. Después de que se consumió el material de partida (monitorizado por TLC), la mezcla de reacción se basificó con NaOH 6N y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h más. Después de la finalización, la mezcla de reacción se acidificó con solución de bisulfato de sodio al 10 %, se precipitó suspensión sólida que se filtró y se secó a presión reducida para dar 5-(2,4-dioxo-3.4- dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1(2H)-il) metil)-2-fluorobenzoico ácido (8, 0,55 g, 98 %) como un sólido blanquecino.

1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6):85,37 (s, 2H), 7,20-7,28 (m, 1H), 7,30-7,35 (m, 1H), 7,55-7,62 (m, 1H), 7,85 (d, J= 6 Hz, 1H), 8,36 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 8,69 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 11,85 (bs, 1H). LCMS:m/z32,12 [M H]+ 95 %;

Síntesis de 4-(5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1(2H)-il) metil)-2-fluorobenzoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (10): A una solución de ácido 5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1(2H)-il) metil)-2-fluorobenzoico (8, 0,50 g, 1,42 mmol), piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (9, 0,19 mmol) y DIPEA (0,71 ml, 4,23 mmol) en diclorometano (10,0 ml) y T3P (1,50 ml, 2,37 mmol, solución al 50 % en EtOAc) se añadió a 0 °C La mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después del consumo del material de partida (monitoreada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con diclorometano (2 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua helada (20 ml) y salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó bajo presión reducida para dar 4-(5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1(2H)-il) metil)-2-fluorobenzoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo crudo (10, 0,8 g, 94 %) como un sólido pegajoso marrón.

1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6):81,40 (s, 9H), 3,00-3,15 (m, 4H), 3,30-3,40 (m, 4H), 5,37 (s, 2H), 7,18-7,23 (m, 1H), 7,30-7,39 (m, 2H), 7,40-7,48 (m, 1 H), 8,35-8,40 (m, 1H), 8,65 - 8,72 (m, 1H), 11,89 (bs, 1H).LCMS:m/z 484,26 [M H]+ 75 %.

Síntesis de 1-(4-fluoro-3-(piperazina-1-carbonil) bencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona. 2TFA (11): A una solución agitada de 4-(5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1(2H)-il) metil)-2-fluorobenzoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (10, 0,80 g, 1,48 mmol) en diclorometano (6,0 ml) se añadió ácido trifluoroacético (2,0 ml) a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. Después del consumo del material de partida (monitoreada por TLC), la mezcla de reacción se evaporó bajo presión reducida para dar 1-(4-fluoro-3-(piperazina-1-carbonil) bencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona en bruto. 2 TFA (11, 1,0 g, bruto) como un sólido marrón pegajoso que se usó para una etapa adicional sin purificación.

1H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): 83,00-3,20 (m, 4H), 3,50-3,80 (m, 4H), 5,37 (s, 2H), 7,18 -7,22 (m, 1H), 7,23-7,30 (m, 1H), 7,40-7,48 (m, 2H), 8,30-8,40 (m, 1H), 8,61-8,70 (m, 1H), 9,12 (bs, 2H), 10,00 (bs, 1H), 11,86 (bs, 1H).MS-ESI:m/z384,27

Síntesis de 1-(3-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carbonil)-4-fluorobencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13F): A una solución de 1-(4-fluoro-3-(piperazina-1-carbonil) bencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona. 2TFA (11, 0,60 g, 0,73 mmol; calculado considerando el 75 % de pureza de Lc Ms ), TEA (0,68 ml, 4,90 mmol) en diclorometano (10,0 ml) y cloruro de ciclopentano carbonilo (12, 0,19 g, 1,47 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después del consumo del material de partida (monitorizado por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar residuo bruto. El residuo se purificó por HPLC prep (fase inversa, Sunfire (19 x 250) mM, 10 p, gradiente 17 %:52 % de ACN en 12 min que contenía AA 5 mM, r T: 11, 27 min) para dar 1-(3-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carbonil)-4-fluorobencil) pirido [2,3-d] pirimidin-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13F, 140 mg, 40 %) como un sólido blanco.

1RMN H (400 MHz, DMSO-d6): 8 1,45-1,80 (m, 9H), 2,88-3,02 (m, 1H), 3,10-3,20 (m, 2H), 3,30-3,40 (m, 2H), 3,50 3,65 (m, 4H), 5,37 (s, 2H), 7,21 (t, J=9, 2 Hz, 1H), 7,30-7,35 (m, 1H), 7,39 (d, J=5, 3 Hz, 1H), 7,42-7,48 (m, 1H), 8,36 (d, J=7, 7 Hz, 1H), 8,67 (d, J=3, 6 Hz, 1H), 11,82 (bs, 1H).LCMS:m/z 478,10 [M H]+, 97,74 %.

Ejemplo 2a: Síntesis TRA-13F-FL

Ejemplo -2b: Síntesis de 1-(3-(4-(3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinin-3-il) propanoil) piperazin-1-carbonil)-4-fluorobencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13F-FL)

Esquema-3

Síntesis de (E)-3-(1H-pirrol-2-il) acrilato de etilo (15): 2-(dietoxifosforil) acetato de etilo (13, 1,0 g, 10,52 mmol), Cs2CO3 se agitó (5,1 g, 15,70 mmol) en 1,4-dioxano (10,0 ml) y agua (0,1 ml) durante 30 min y 1H-pirrol-2-carbaldehído (14, Se añadieron 2,80 g, 12,62 mmol) al mismo. La mezcla de reacción se agitó a 70 °C durante 10 h. Después del consumo del material de partida, la mezcla de reacción se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con agua helada y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar (E)-3-(1 H-pirrol-2-il) acrilato de etilo (15, 1,3 g, 76 %) como un líquido de color marrón.

1RMN H (400 MHz, DMSO-d6):5 1,22 (t, J= 6,8 Hz, 3H), 3,56 (s, 2H), 4,13 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 6,13-6,21 (m, 2H), 6,56 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,40-7,48 (m, 1H).LCMS:m/z 166,10 [M H]+, 96 %.

Síntesis de etil 3-(1 H-pirrol-2-il) propanoato (16): A una solución de (E)-3-(1 H-pirrol-2-il) acrilato de etilo (15, Se añadieron 1,3 g, 7,87 mmol) en EtOAc (50,0 ml) y Pd al 10 % sobre carbón vegetal (0,3 g, 50 % húmedo). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h bajo atmósfera de H2. Después del consumo del material de partida (monitoreado por TLC), la mezcla de reacción se filtró a través de una capa de celite, se lavó con MeOH y se concentróal vacío.El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida [fase normal, gel de sílice (100-200 de malla), gradiente de 10% a 15 %de acetato de etilo en hexano] para dar 3-(1 H-pirrol-2-il) propanoato de etilo (16, 1,25 g, 96 %) en forma de un líquido incoloro.

1RMN H (400 MHz, DMSO-d6):8 1,10-1,20 (m, 3H), 2,50-2,60 (m, 2H), 2,70-2,80 (m, 2H), 4,00-4,10 (m, 2H), 5,71 (s, 1H), 5,86 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 10,57 (bs, 1H).LCMS:m/z168,15 (M+H)+ 84 %.

Síntesis de 3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinin-3-il) propanoato de etilo (18): 3-(1 H-pirrol-2-il) propanoato de etilo (16, 1,2 g, 7,18 mmol) y 3,5-dimetil-1H-pirrol-2-carbaldehído (17, 0,90 g, 7,31 mmol) se agitó en DCM seco (48,0 ml) y se añadió POCl3 (0,75 ml, 8,04 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h, luego se añadieron eterato de trifluoruro de boro (3,58 ml, 29,24 mmol) y DIPEA (5,30 ml, 30,70 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó durante 16 h a temperatura ambiente. Después del consumo del material de partida (monitoreada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (25 ml) y se extrajo con DCM (3 x 50,0 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (30 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar el residuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida [fase normal, gel de sílice (100-200 de malla), gradiente 20 % a 25 % de acetato de etilo en hexano] a 3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]diazaborinin-3-ilo) propanoato de etilo (18, 1,25 g, 54 %) como un sólido marrón. 1H NMR (400 m Hz , DMSO-d6): 8 1,18 (t, J = 6,8 Hz, 3H), 2,6 (s, 3H), 2,42 (s, 3H), 2,70 -2,74 (m, 2H), 3,08 -3,12 (m, 2H), 4,07 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 6,31 (s, 1H), 6,36 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H). LCMS: m/z 319,21 (M+H)+, 99 %

Síntesis de ácido 3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinina-3-il) propanoico (19): A una solución de 3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6l4-dipirrolo[1,2-c:2',1'-f][1,3,2] diazaborinin-3-ilo) propanoato de etilo (18, 1, 25 g, 3,90 mmol) en THF (187,5 ml), el cono HCI (62,5 ml) y agua (125,0 ml) se añadieron en la mezcla de reacción. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. Después del consumo del material de partida (monitorizado por TLC), el compuesto se extrajo con DCM (125,0 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar ácido 3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo[1,2-c:2', 1'-f][1,3,2]diazaborinain-3-il) propanoico bruto (19, 1,15 g, en bruto) como un sólido marrón.

LCMS:m/z 291,14 (M-H)+, 80 %

Síntesis de 1-(3-(4-(3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I4, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinin-3-il) propanoil) piperazin-1-carbonil)-4-fluorobencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13F-FL): A una solución de 1-(4-fluoro-3-(piperazina-1-carbonil) bencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1 H, 3H)-diona. 2 TFA (11, 0,3 g, 0,51 mmol, calculado considerando el 75 % de pureza de LCMS) y ácido 3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5H, 6I4-dipirrolo[1,2-c:2',1 '-f][1,3,2]diazaborinina-3-il) propanoico (19, 0,16 g, 0,438 mmol, calculado considerando el 80 % del material de partida) en<d>M<f>(8,0 ml), DIP<e>A (0,34 ml, 1,96 mmol) y HATU (0,37 g, 0,95 mmol) se añadieron a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después del consumo del material de partida (controlado por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua helada y se filtró el sólido. El residuo sólido se secó a presión reducida para dar residuo bruto que se purificó por HPLC prep (fase inversa, x Select Phenil Hexyl (19 x 250) mm, 10 p, gradiente 30 %: al 65 % de<a>C<n>en 11 min que contenía 0,1 % de TFA, RT: 10,5 min) para dar 1-(3-(4-(3-(5,5-difluoro-7, 9-d i meti l-5H-5I4, 6I4-dipirrolo[1,2-c:2', 1 '-f][1,3,2] diazaborinin-3-il) propanoil) piperazin-1-carbonil)-4-fluorobencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13F-FL, 0, 14 g, 41 %) como un sólido marrón rojizo.

1RMN H (400 MHz, DMSO-d6): 82,26 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,66-2,71 (m, 1H), 2,75-2,79 (m, 1H), 3,02-3,10 (m, 2H), 3,11-3,20 (m, 2H), 3,32-3,42 (m, 2H), 3,50-3,62 (m, 4H), 5,37 (s, 2H), 6,29 (s, 1H), 6,37 (dd, J=14, 2, 3,8 Hz, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,25 (t, J= 9,0 Hz, 1H), 7,35-7,29 (m, 1H), 7,40 (d, J= 6,2 Hz, 1H), 7,46 (bs, 1H), 7,69 (s, 1 H), 8,37 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,67 (s, 1H), 11,84 (s, 1H).LCMS:m/z 658,28 [M H]+ (ES+), 98,93 %.

ntess e compuestos e rmua

Ejemplo 3a: Síntesis de TRA-14F

Ejemplo -3b:

Síntesis de 1-(4-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carbonil)-5-fluoropiridin-2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-14F):

Esquema-4

Síntesis de 2-amino-N-(terc-butil) benzamida (21): A una solución de 2H-benzo [d] [1,3] oxazin-2,4(1H)-diona (12, 3,0 g, 73,60 mmol) y terc-butil amina (8,53 ml, 80,96 mmol) en DMF (75,0 ml), DMAP (1,35 g, 11,04 mmol) se añadió en la mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente por 5 h. Después de completar la reacción (monitoreada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua y el sólido se filtró y se secó bajo presión reducida para obtener 2-amino-N-(terc-butil) benzamida (21, 9,0 g, 63 %) como un sólido blanco.

LCMS:m/z 191,13 [M H]+, 92 %

Síntesis de (2-(terc-butilcarbamoil) fenil) carbamato de metilo (22): A una solución de 2-amino-N-(terc-butil) benzamida (21, 5 ,46 g, 2,82 mmol) y cloroformiato de metilo (5, Se añadieron 2,65 g, 2,82 mmol) en 1,4-dioxano (44,0 ml) y solución de NaOH 1 N (32,0 ml) en la mezcla de reacción. La masa de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después del consumo del material de partida, la mezcla de reacción se diluyó con agua (80 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida dando (2-(terc-butilcarbamoil) fenil) carbamato de metilo bruto (22, 5,5 g, bruto) como un sólido marrón.

1RMN H (400 MHz, DMSO-d6): 5 1,37 (s, 9H), 3,67 (s, 3H), 7,01 (t, J= 7,6 Hz, 1H), 7,46 (t, J= 7,2 Hz, 1H), 7,65 (d,J=8Hz, 1H), 8,04 (bs, 1H), 8,09 (d, J = 8, 4 Hz, 1H), 10,56 (bs, 1H).

LCMS:m/z 251,17 [M H]+, 99 %

Síntesis de 3-(terc-butil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (23): A una solución de (2-(terc-butilcarbamoil) fenil) carbamato de metilo (22, 5,82 g, 15,82 mmol) en EtOH (100,0 ml) y se añadió KOH en polvo (10,0 g) en la mezcla de reacción. La mezcla resultante se agitó a 80 °C durante 16 h. Después del consumo del material de partida, la mezcla de reacción se diluyó con agua y el sólido se filtró y se secó a presión reducida para dar 3-(terc-butil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (23, 2,5 g, 72 %) en forma de un sólido de color blanco.

1RMN H (400 MHz, DMSO-d6):51,66 (s, 9H), 7,02-7,18 (m, 2H), 7,57 (t,J=7,2 Hz, 1H), 7,82 (d,J = 8Hz, 1H), 11,71 (bs, 1H).LCMS:m/z 219,16 [M H]+, 99,75 %

Esquema 5

Síntesis de terc-butil 4-(2-bromo-5-fluoroisonicotinoil) piperazina-1-carboxilato (25): A una solución de ácido 2-bromo-5-fluoroisonicotínico (24, 0,0 g, 22,72 mmol) y piperazina-1 -carboxilato de terc-butilo (9, 5,27 g, 27,27 mmol) en DCM (100,0 ml), DIPEA (11,8 ml, 68,16 mmol) y T<3>Se añadieron P (21,6 ml, 34,08 mmol, solución al 50%en EtOAc) a 0 °C. La mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después del consumo del material de partida (monitoreada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó bajo presión reducida para dar 4-(2-bromo-5-fluoroisonicotinoil) piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (25, 0,0 g, 91 %) como un sólido blanquecino.

1H-NMR (400 MHz; DMSO-d 6):1, 40 (s, 9H), 3,22-3,30 (m, 4H), 3,40-3,42 (m, 2H), 3,58-3,63 (m, 2H), 8,83 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,64 (s, 1H).LCMS:m/z 388,05 [M H]+, 99 %

Síntesis de 4-(5-fluoro-2-(metoxicarbonil) isonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (26): A una solución de 4-(2-bromo-5-fluoroisonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (25, 4,0 g, 10,33 mmol) en MeOH (120,0 ml), se añadieron NaOAc (1,27 g, 15,49 mmol) y PdCl2 (dppf). DCM (0,84 g, 1,03 mmol) en la mezcla de reacción que se purgó con argón durante 15 min y se agitó a 60 °C durante 24 h en un recipiente a presión a 60 psi bajo atmósfera de CO. Después del consumo del material de partida, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y luego la masa de reacción se filtró a través de una capa de celite, se lavó completamente con MeOH y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida [fase normal, gel de sílice (100-200 de malla), gradiente de 25 % a 30 % de acetato de etilo en hexano] para dar 4-(5-fluoro-2-(metoxicarbonil) isonicotinoil) piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (4, 2,50 g, 66 %) como un sólido blanco.

1H-NMR (400 MHz; DMSO-d 6):1, 40 (s, 9H), 3,20-3,23 (m, 2H), 3,30-3,33 (m, 2H), 3,40-3,45 (m, 2H), 3,60-3,65 (m, 2H), 3,89 (s, 3H), 8,17 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 8,82 (s, 1H).LCMS:m/z 368,23 [M H]+, 93 %

Síntesis de 4-(5-fluoro-2-(hidroximetil) isonicotinoil) piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (27): A una solución de 4-(5-fluoro-2-(metoxicarbonil) isonicotinoil) piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (26, 2,5 g, 6,79 mmol) en MeOH: THF (50 ml, 1: 1), se añadieron cloruro de litio (0,29 g, 6,79 mmol) y borohidruro de sodio (0,50 g, 13,58 mmol) en secciones a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después de que se consumió el material de partida (monitoreada por TLC), la reacción se apagó con agua (30,0 ml) y se concentró bajo presión reducida. El residuo se diluyó con agua (50,0 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar 4-(5-fluoro-2-(hidroximetil) isonicotinoil) de terc-butilo bruto (27, 2,40 g, en bruto) como un sólido marrón.

LCMS:m/z 342,23 [M H]+, 70 %

Síntesis de 4-(5-fluoro-2-((metilsulfonil) oxi) metil) isonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (28): A una solución de 4-(5-fluoro-2-(hidroximetil) isonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (27, 1,68 g, 4,95 mmol, calculado considerando 70 % de pureza) en diclorometano (48,0 ml), Et3 Se añadieron secuencialmente N (2,95 ml, 21,23 mmol) y MsCI (1,64 g, 21,2 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. A Consumo de potencias del material de partida (monitoreada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con DCM (3 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida dando 4-(5-fluoro-2-((metilsulfonil) oxi) metil) isonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo bruto (28, 3,0 g, bruto) como un sólido marrón que se usó para la siguiente etapa sin purificación.

Síntesis de 4-(2-(3-(terc-butil)-2,4-dioxo-3,4-dihidroquinazolin-1(2H)-il) metil)-5-fluoroisonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (29): 3-(terc-butil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (23, 1,20 g, 5,50 mmol), 4-(5-fluoro-2-((metilsulfonil) oxi) metil) isonicotinoil) piperazina-1-carboxilato de terc-butilo (28, 2,76 g, 6,60 mmol) y Cs2CO3 (3,57 g, 11,0 mmol) se agitó en ACN (50,0 ml) a 60 °C por 16 h. Después del consumo del material de partida (monitoreado por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 30 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar bruto. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida [fase normal, gel de sílice (100-200 de malla), gradiente 30 % a 40 % de acetato de etilo en hexano] para dar 4-(2-(3-(terc-butil)-2,4-dioxo-3,4-dihidroquinazolin-1(2H)-il) metil)-5-fluoroisonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (29, 1,20 g, 41 %) como un sólido blanco.

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): 8 1,44 (s, 9H), 3,18-3,21 (m, 2H), 3,20-3,23 (m, 2H), 3,38-3,41 (m, 2H), 3,58-3,62 (m, 2H), 5,37 (s, 2H), 7,26-7,20 (m, 2H), 7,49 (d, J= 5,0 Hz, 1H), 7,59 (t, J= 7,9 Hz, 1H), 7,93 (d,J = 6,7 Hz, 1H), 8,60 (s, 1H).LCMS:m/z540,22 [M H]+, 83 %

Síntesis de 1-(5-fluoro-4-(piperazin-1-carbonil) piridin-2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona. 2 TFA (30): A una solución agitada de 4-(2-(3-(terc-butil)-2,4-dioxo-3,4-dihidroquinazolin-1(2H)-il) metil)-5-fluoroisonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (29, 1,20 g, 2,22 mmol) en diclorometano (24,0 ml), se añadió ácido trifluoroacético (12,0 ml) a 0 °C y la masa de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. Después de que se consumió el material de partida (monitoreado por TLC), la mezcla de reacción se evaporó bajo presión reducida para dar 1-(5-fluoro-4-(piperazin-1-carbonil) piridin-2-il) metil) quinazolina-2,4(1H, 3H)-diona en bruto. 2 TFA (30, 1,20 g, bruto) como un sólido blanquecino.

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-d6):82,90-3,00 (m, 2H), 3,18-3,22 (m, 2H), 3,33-3,43 (m, 2H), 3,78-3,83 (m, 2H), 5,41 (s, 2H), 7,26-7,20 (m, 2H), 7,54 (d, J= 5,0 Hz, 1H), 7,63 (t,J = 7,9 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,78 (bs, 1H), 11,74 (s, 1H).LCMS:m/z 384,01 [M H]+, 80 %

Síntesis de 1-(4-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carbonil)-5-fluoropiridin-2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-14F): A una solución de 1-(5-fluoro-4-(piperazina-1-carbonil) piridin-2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona. 2 TFA (30, 0,50 g, 0,82 mmol) en DCM (10,0 ml), TeA (0,34 ml, 2,46 mmol) y cloruro de ciclopentanocarbonilo (12, 0,13 g, 0,98 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Después de completar la reacción (TLC monitoreada), la mezcla de reacción se diluyó con agua (10,0 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 50 ml). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se evaporó a presión reducida para dar residuo bruto. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida [fase normal, gel de sílice (100-200 de malla), gradiente de 2 % a 4 % de MeOH en DCM] para dar 1-(4-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carbonil)-5-fluoropiridin-2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-14F, 140 mg, 36 %) como un sólido blanco.

1RMN H (400 MHz, DMSO-d6):81,51-1,75 (m, 10H), 2,85-3,00 (m, 1H), 3,01-3,10 (m, 2H), 3,50-3,61 (m, 4H), 5,41 (s, 2H), 7,20-7,30 (m, 2H), 7,54 (t, J= 5,0 Hz, 1H), 7,64 (t, J= 7,9 Hz, 1H), 8,02 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 8,62 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 11,71 (s, 1H).LCMS:m/z 480,16 [M H ]+ (ES+), 98,26 %

Ejemplo 4a: Síntesis de TRA-14F-FL

Ejemplo -4b Síntesis de 1-(4-(4-(3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I4, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinin-3-il) propanoil) piperazin-1 -carbonil)-5-fluoropiridin-2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-14F-FL):

Esquema-6

Síntesis de 1-(4-(4-(3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dip irrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinin-3-il) propanoil) piperazin-1-carbonil)-5-fluoropirid in-2-il) metil) inazoli ne-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-14F-FL): A una solución de 1-(5-fluoro-4-(piperazina-1-carbonil) piridin-2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona. 2 TFA (29, 0,7 g 1,14 mmol) y ácido 3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinina-3-il) propanoico (19, 0,27 g, 0,95 mmol; calculada considerando 80%de pureza de LCMS) en d Mf (14,0 ml), DIp Ea (0,60 ml, 3,44 mmol) y HATU (0,65 g, 1,72 mmol) se añadieron a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de completar la reacción (monitoreada por TLC), la mezcla de reacción se diluyó con agua helada (40 ml) y el sólido se filtró para obtener residuo. El residuo obtenido se secó a presión reducida para dar el material bruto que se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida [fase normal, gel de sílice (100-200 de malla), gradiente de 2 % a 5 % de MeOH en DCM] para dar 1-(4-(4-(3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3, 2] diazaborina-3-il) propanoil) piperazin-1-carbonil)-5-fluoropiridina -2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-14F-FL, 0,20 g, 27 %) en forma de un sólido de color marrón rojizo.

1 RMN H (400 MHz, DMSO-de) 5: 2,26 (s, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,62-2,80 (M, 1H), 2,78-2,75 (M, 2H), 3,01-3,10 (M, 2H), 3,11-3,20 (M, 2H), 3,30-3,40 (M, 2H), 3,51-3,63 (M, 4H), 5,41 (s, 2H), 6,30 (s, 1H), 6,43 (dd, J= 12,6, 3,3 Hz, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,20-7,28 (M, 2H), 7,54 (bs, 1H), 7,60-7,65 (M, 1H), 7,69 (s, 1H), 8,01 (d, J= 7,4 Hz, 1H), 8,62 (s, 1H), 11,71 (s, 1H). LCMS:m/z658,31 [M H]+ (ES+), 96 %.

Ejemplo 5

Síntesis de 1-(3-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carbonil)-4-yodobencil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13I):

Esquema-7

9 31 32

Síntesis de 4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo (31):

A una solución de compuesto 9 (0,5 g, 2,6 mmol) y Et3N (1,1 ml, 8,0 mmol) en DCM (6 ml) se añadió compuesto 12 (0,35 g, 2,6 mmol) a 0 °C. La mezcla se agitó a temperatura ambiente por 2 horas. Después de finalizar, la suspensión se disolvió en agua y se extrajo con DCM. La capa orgánica se lavó con solución de salmuera, se secó sobre Na2SO4 y se concentró al vacío para proporcionar el compuesto 31 como un gel incoloro. Rendimiento: (0,75 g, 86 %).

1 H-NMR (400 MHz; CDCl3): 53,58 (s, 2H), 3,48 (s, 2H), 3,40-3,42 (m, 4H), 2,82-2,88 (m, 1H), 180-1,87 (m, 4H), 1,74-1,78 (m, 2H), 1,58-1,61 (m, 2H), 1,55 (s, 9H).

Síntesis de clorhidrato de ciclopentil (piperazin-1-il) metanona(32):

A una solución de compuesto 31 (0,65 g, 2,3 mmol) en DCM (8 ml) se añadió HCl 4N en 1,4 dioxano (5 ml). La reacción se agita durante 1 h a 85 °C. Después de finalizar, los solventes se eliminaronbajo presión reducidapara 32 como un sólido blanco.

Rendimiento: (0,5 g, 90 %).

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-cfe):59,37 (bs, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,02-3,06 (m, 2H).

Esquema-8

Síntesis de 2-yodo-5-metilbenzoato de metilo(34):

El compuesto33(16,0 g, 61,0 mmol) se disolvió en DMF (150 ml), luego se trató con carbonato de potasio (16,9 g, 122 mmol) y Mel (6,3 ml, 95,7 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de finalizar, la suspensión se disolvió en agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se lavó con una solución saturada de NaCl, se secó sobre Na<2>SO<4>y se concentró al vacío para proporcionar un compuesto34como un líquido marrón.

1 H-NMR (400 MHz; CDCl 3): 57,85 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 6,96-6,98 (d, 1H, J=6,8), 3,92 (s, 3H), 2,33 (s, 3H). Rendimiento: (15,2 g, 90 %).

Síntesis de 5-(bromometil)-2-yodobenzoato de metilo (35):

A una solución agitada de compuesto34(14,5 g, 52,0 mmol) en tetracloruro de carbono (150 ml) se añadió N-Bromo succinimida (11,5 g, 63,0 mmol) seguido de una cantidad catalítica de peróxido de benzoílo (0,86 g, 5,2 mmol). La solución se sometió a reflujo durante 24 h. La mezcla de reacción se filtró para eliminar el subproducto de succinimida y el filtrado se lavó con salmuera, se secó sobre Na anhidro2SO4 y se evaporó a presión reducida. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (5-8 % EtOAc en hexanos) para dar 35 como un sólido blanco.

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-d6):57,96-7,98 (d, 1H, J=8,0 Hz), 7,82-7,83 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 7,17-7,18 (d, 1H, J = 2, 2 Hz), 4,43 (s, 1H), 3,94 (s, 3H).

Rendimiento: (9,2 g, 50 %).

Síntesis de 5-(3-(terc-butil)-2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2,3-d] pirimidin-1 -il(2H)-il) metil)-2-yodobenzoato de metilo (36): Una suspensión del compuesto6(2,7 g, 12,3 mmol), compuesto35(12,3 mmol), CS2CO3 (24,6 mmol) y acetonitrilo se agitó A 80 °C por 16 h. Después de la finalización, la RM se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na anhidro2SO4 y se evaporó a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (10-15 % EtOAc en hexanos) para dar el compuesto36como un sólido blanco.

1H-NMR (400 MHz; CDCI<3>): 88,55-8,56 (m, 1H), 8,31-8,34 (dd, 1H,J = 4Hz, 8 Hz), 7,90-7, 92 (m, 1H), 7,24 (s, 1 H), 7,12-7,16 (m, 1H), 5,44 (s, 2H), 3,90 (s, 3H), 1,73 (s, 9H).

Rendimiento: (3,6 g, 68 %).

ESI-MS: m/z 494 [M+ 1]+.

Síntesis de ácido 5-(2,4-dioxo-3,4-dihidropirido [2, 3-d] pirimidin-1(2H)-il) metil)-2-yodobenzoico (37):

Una solución del compuesto 36 (3,5 g, 7,0 mmol) y HCl 6N (15 ml) en 1,4-dioxano (25 ml) se calentó a reflujo durante 16 h. La suspensión resultante se enfrió a RT y se añadió una solución de NaOH para ajustar A pH 12-13. La reacción se agitó durante 3 h a temperatura ambiente. Después de finalizar, la solución se acidificó hasta pH<2,0 por HCl 6 N. El precipitado se filtró, se lavó con agua y una pequeña cantidad de MeOH. El precipitado se secó a presión reducida para dar el compuesto 37 en forma de un sólido de color blanco.

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): 813,3 (bs, 1H), 11,86 (bs, 1H), 8,66-8,67 (t, 1H, J= 4,7), 8,35-8,37 (dd, 1H, J=1,2 Hz, 7,5 Hz), 7,86-7,92 (m, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,37-7,32 (m, 1H), 7,16-7,22 (m, 1H), 5,34 (s, 2H), 3,56 (s, 1H), 1,60 (s, 1H). Rendimiento: (0,96 g, 32 %).

ESI-MS: m/z 42,9 [M-1]-.

Síntesis de 1-(3-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1-carbonil)-4-yodobenzoil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13I):

A una solución de compuesto 36 (0,2 g, 4,7 mmol) y el compuesto 32 (0,11 g, 5,0 mmol) en DCM se añadió DIPEA (0,26 ml, 14 mmol) a TA. La mezcla resultante se agitó a TA durante 15 min, después se añadió T3P (50 % de EtOAc) (0,45 ml, 14 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de la finalización, la RM se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó sobre Na anhidro2SO4 y se evaporó a presión reducida. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (70-80 % EtOAc en hexanos) para dar el compuesto TRA-13I como un sólido blanco.

Rendimiento: (0,16 g, 59 %).

ESI-MS: m/z 588,13 [M+ 1]+.

Ejemplo-6

Esquema-9

Síntesis de 4-(3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2’, 1 ’-f] [1,3,2] diazaborinin-3-il) propanoil) piperazin-1-carboxilato de terc-butilo;

A una solución decompuesto 19(1,4 g, 4,7 mmol) y compuesto9(0,9 g, 4,7 mmol) en DCM (15 ml) se añadió DIPEA (2,5 ml, 14,3 mmol) a TA. La mezcla resultante se agitó a TA durante 15 min, después se añadió T3P (solución al 50 % en EtOAc) (3,0 ml, 9,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de la finalización, la RM se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na anhidro2SO4y se evaporó a presión reducida. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (50 70 % EtOAc en hexanos) para dar el compuesto38como gel de color verde.

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): 87,69 (s, 1H), 7,08-7,09 (d, 1H, J = 3,9 Hz), 6,41-6,42 (d, 1H, J= 3,8 Hz), 6,30 (s, 1H), 5,75 (s, 1H), 3,44 (q, 4H), 3,05-3,09 (t, 2H, J = 14,2 Hz), 2,71-2,75 (t, 2H, J = 15,3 Hz), 2,46 (s, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,40 (s, 9H).

Rendimiento: (0,9 g, 46 %).

ESI-MS:m/z459,1 [M-1]-.

Síntesis de 3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinin-3-ilo)-1-(4-(2,2,2-trifluoroacetil)-4I4-piperazin-1-il) propan-1-ona(39):

A una solución decompuesto 38(0,9 g, 1,9 mmol) en DCM (5 ml) se añadió TFA (5 ml). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 1 h. Una vez completada, los disolventes se eliminaron a presión reducida para dar material bruto. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-20 % MeOH en DCM) para dar39como un sólido marrón.

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-d6): 85,37 (s, 2H), 7,20-7,28 (m, 1H), 7,30-7,35 (m, 1H), 7,55-7,62 (m, 1H), 7,85 (d, J= 6 Hz, 1H), 8,36 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 8,69 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 11,85 (bs, 1H).

Rendimiento: (0,3 g, 42 %).

ESI-MS: m/z 359,1 [M-1]-.

Síntesis de 1-(3-(4-(3-(5,5-difluoro-7,9-dimetil-5H-5I4, 6I4-dipirrolo [1,2-c:2', 1'-f] [1,3,2] diazaborinin-3-il) propanoil) piperazin-1-carbonil)-4-yodobenzoil) pirido [2,3-d] pirimidina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-13I-FL):A una solución decompuesto 37(0,2 g, 4,0 mmol) y compuesto39(0,17 g, 4,0 mmol) en DCM (4 ml) se añadió DIPEA (0,26 ml, 14,0 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó a TA durante 15 min, después se añadió T3P (50 % de EtOAc) (0,45 ml, 14,0 mmol). La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de la finalización, la RM se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na anhidro 2SO4 y se evaporó a presión reducida. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (50-70 % EtOAc en hexanos) para dar el compuestoTRA-13I-FLcomo un sólido blanco.

Rendimiento: (0,21 g, 58 %).

ESI-MS: m/z 765,8 [M+1]+.

Esquema-10

Síntesis de benzil 4-(5-amino-2-doroisonicotinoil) piperazina-1-carboxilato(41):

A una solución de40(10,0 g, 57,9 mmol) y compuesto9(14,0 g, 57,9 mmol) en DCM (100 ml) se añadió DIPEA (10,2 ml, 57,9 mmol) a TA. La mezcla resultante se agitó a TA durante 15 min, después se añadió T3P (50%de EtOAc) (74 ml, 57,9 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de la finalización, la mezcla se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó sobre Na anhidro<2>SO<4>y se evaporó a presión reducida. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (70-80 % EtOAc en hexanos) para dar el compuesto41como un sólido blanco.

Rendimiento: (12,5 g, 57 %).

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-d6):57,82-7,84 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,36 (s, 6H), 7,08 (s, 1H), 5,58 (s, 2H), 5,06-5,10 (d, 2H, J = 14,1 Hz), 3,38-3,65 (m, 8H).

ESI-MS: m/z 375,4 [M+1]+.

Síntesis de 4-(5-(bis-(terc-butoxicarbonil) amino)-2-cloroisonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de bencilo (42):

A una solución de compuesto41(13,0 g, 34,7 mmol), Boc<2>O (15,0 ml, 34,7 mmol) en THF (100 ml) se enfrió a -10 °C. Se añadió solución de Líh Md S (69,0 ml, 69,4 mmol, 1 M en THF) durante 15 min por debajo de 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a 70 °C por 16 h. Después de la finalización, la mezcla de reacción se enfrió a 0 °C, se inactivó con NH sat<4>solución de CI y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na anhidro<2>SO<4>y se evaporó a presión reducida. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (70-80 % EtOAc en hexanos) para dar el compuesto42como un sólido blanco.

Rendimiento: (16,5 g, 85 %).

ESI-MS: m/z 575,4 [M+1]+.

Síntesis de 4-(5-(bis (terc-butoxicarbonil) amino)-2-(metoxicarbonil) isonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de bencilo (43):

Una solución del compuesto42(13,0 g, 27,4 mmol) en DMF (30 ml) y MeOH (30 ml) se purgó con gas argón por 10 min, Pd (OAc<)2>Se añadieron (0,30 g, 1,37 mmol) y xphos (1,58 g, 2,74 mmol). El recipiente de reacción se llenó con gas CO hasta 100 psi y se agitó en un recipiente de parr a 80 °C durante 16 h. Después de la finalización, la RM se filtró a través de una capa de celite y se lavó con EtOAc. El filtrado se lavó con agua, la capa orgánica se separó y se concentró a presión reducida para dar bruto. El material bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (50 % de EtOAc en hexano) para proporcionar un compuesto deseado43como un sólido blanco.

Rendimiento: (10,0 g, 67 %).

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-tf;): 88,71-8,73 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 8,11 (s, 1H), 7,33-7,35 (m, 5H), 5,09 (s, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,30-3,50 (m, 6H), 3,17-3,24 (m, 2H), 1,38 (s, 18H).

ESI-MS:m/z59,5 [M+ 1]+.

Síntesis de 4-(5-(bis (terc-butoxicarbonil) amino)-2-(hidroximetil) isonico-tinoil) piperazin-1-carboxilato de bencilo(44): Una solución del compuesto43(10,0 g, 16,7 mmol) en MeOH (40 ml) se enfrió A 0 °C NaBH4(1,9 g, 50,1 mmol) se añadió en secciones durante 10 min. La mezcla de reacción se agitó A TA durante 2 h. Después de la finalización, la mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con DCM. La capa orgánica se separó y se concentró a presión reducida para dar un compuesto deseado44como un sólido blanco. Rendimiento: (7,0 g, 74 %).

ESI-MS: m/z 371,2 [M+1]+.

Síntesis de 4-(5-(bis (terc-butoxicarbonil) amino)-2-(3-(terc-butil)-2,4-dioxo-3,4-dihidroquinazolin-1(2H)-il) metil) isonicotinoil) piperazin-1-carboxilato de bencilo (45):

Una solución del compuesto44(7,0 g, 9,0 mmol) y compuesto23(1,98 g, 9,0 mmol) y PPh3 (3,5 g, 13,6 mmol) en THF A 0 °C se añadió DIAD (2,8 ml, 13,6 mmol). La mezcla de reacción se agitó a t A durante 1 h. Después de la finalización, la mezcla de reacción se inactivó con agua y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre Na anhidro2SO4y se evaporó a presión reducida, el producto en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (30- 40 % EtOAc en hexanos) para dar el compuesto45como un sólido blanco. Rendimiento: (4,0 g, 48 %).

1 H-NMR (400 MHz; DMSO-d ;):8 8,85 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,91-7,93 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,52-7,55 (t, 1H, J = 7,6 Hz), 7,44 (s, 1H), 7,32-7,36 (m, 5H), 7,13-7,16 (m, 2H), 5,41 (s, 2H), 5,09) s, 2H), 4,75-4,79 (m, 1H), 3,55 (m, 2H), 3,43 (m, 2H), 3,07 (m, 2H), 1,65 (s, 9H), 1,32 (s, 18H).

ESI-MS: m/z 771,4 [M+1]+.

Síntesis de ácido 5-amino-2-(2,4-dioxo-3,4-dihidroquinazolin-1(2H)-il) metil) isonicotínico (46):

Una mezcla de compuesto45(2,0 g, 852 mmol), HCl 6N (5 ml) y 1,4-dioxano (8 ml) se agitó a 100 °C Una vez completada, la mezcla de reacción se diluyó con agua, se precipitó una suspensión sólida que se filtró y se secó a presión reducida para dar el compuesto46como un sólido blanco. Rendimiento: (0,35 g, 41 %).

ESI-MS: m/z 311,0 [M-1]-.

Síntesis de ácido 2-(2,4-dioxo-3,4-dihidroquinazolin-1(2H)-il) metil)-5-yodoisonicotínico (47):

Una suspensión del compuesto46(0,35 g, 1,1 mmol) en H2O (20 ml) y H2SO4 (15 ml) se enfrió A 0 °C y NNO2 (0,155 g, 2,2 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora, después se añadió Kl (1,2 g, 7,22 mmol). La mezcla se calentó a 70 °C durante 20 minutos, después se enfrió de nuevo a 0 °C El precipitado sólido se filtró, se lavó con agua y se secó a presión reducida para dar el compuesto47como un sólido marrón claro.

Rendimiento: (0,2 g, 42 %).

ESI-MS: m/z 421,2 [M-1]'.

Síntesis de 1-(4-(4-(ciclopentanocarbonil) piperazin-1 -carbonil)-5-yodopiridin-2-il) metil) quinazolina-2,4 (1H, 3H)-diona (TRA-14I):

A una solución deCompuesto 47(0,2 g, 0,47 mmol) y32(0,095 g, 0,47 mmol) en DMF se añadió DIPEA (0,26 ml, 1,42 mmol) a TA. La mezcla resultante se agitó a TA durante 15 min, después se añadió T3P (solución al 50 % de EtOAc) (1,0 ml, 1,42 mmol) a 0 °C. La mezcla de reacción se agitó a TA durante 16 h. Después de la finalización, la RM se diluyó con agua y se extrajo con DCM. La capa orgánica se secó sobre Na anhidro2SO4y se evaporó a presión reducida. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (70-80 % EtOAc en hexanos) para dar el compuesto dianaTRA-14Icomo un sólido blanco.

Rendimiento: (0,070 g, 24 %).

ESI-MS: m/z 588,20 [M+1]+

B. Compuestos específicos de la invención

B.1. Compuestos de la invención

En la tabla 1 que se exponen a continuación, los compuestos ilustrativos de la invención se exponen en forma tabulada. En esta tabla, se establece el nombre del compuesto, un número de compuesto asignado arbitrariamente e información estructural. Aunque no se dibuja específicamente en la tabla a continuación, uno o más de los átomos de halógeno indicados pueden reemplazarse opcionalmente por un radiomarcado uno, tal como -F puede reemplazarse por 18F; I puede reemplazarse por 123I,...

Tabla 1

Ejemplo 5: Ensayo in vitro de la actividad inhibidora de PARP:

Materiales y métodos

Los inhibidores (13F, 14F, 13I-FL, 13F-FL, 14F-FL, 131 y 141) se mantuvieron a -20 °C y se disolvieron en DMSO a 20 mg/ml.

El kit de ensayo colorimétrico universal PARP/apoptosis 4677-96-K se adquirió de BioTechne-R&D Systems. Este kit ELISA detecta poli(ADP-ribosa) biotinilado depositado por PARP-1 sobre histonas inmovilizadas en un formato de 96 pocillos. La adición de Strep-HRP (proteína de unión a biotina) y un sustrato de HRP colorimétrico produce una absorbancia relativa que se correlaciona con la actividad de PARP-1. El kit se usa para el cribado in vitro de inhibidores candidatos de PARP-1 y la determinación de los valores de IC50.

Se siguió el protocolo recomendado por el proveedor. Se añadió una dilución en serie 1/10 de los inhibidores (que van desde 500 pM hasta 0,5 nM, 7 puntos de datos por triplicado) a los pocillos designados. Los pocillos incubados con 0,5 U/pocillo de enzima PARP-HSA sin inhibidor se usaron como punto de referencia de actividad del 100 %. Los datos se expresaron como %de actividad máxima y se representaron en función del registro de concentración (M) usando Graph Pad Prism 8. Los valores de IC50 se determinaron usando una ecuación de inhibición de dosis-respuesta.

Resultados

La IC50 de todos los compuestos se puede encontrar en la Tabla 1. Se encontraron mejores valores de CI50 para 14F y 14F-FL, seguido de 13F-FL y 13F.

Se encontró que los compuestos marcados con yodo tenían un mayor valor de IC50 en comparación con los compuestos marcados con flúor.

Tabla 1: Valores de IC50 para diferentes inhibidores de PARP, calculado por ELISA

+++ significa<50 nM, + significa 50-500 nM, significa>500 nM

Las curvas dosis-respuesta para los compuestos marcados con flúor se pueden encontrar en la figura 1. Estos datos confirman las observaciones de los valores de IC50 que los compuestos 14F y 14F-FL son ligeramente mejores en comparación con los compuestos 13F y 13F-FL respectivamente.

Ejemplo 6: Experimentos de captación celular in vitro

Dado que los datos presentados en el ejemplo 5 revelaron los mejores valores de IC50 para los compuestos 14F y 14F-FL, los experimentos de captación celular in vitro se centraron en estos compuestos específicos para probar la funcionalidad/capacidad de penetración celular y especificidad de estos trazadores fluorescentes en el ejemplo de líneas celulares de cáncer de cabeza y cuello.

Materiales y métodos

Materiales

14F-FL así como el análogo no marcado 14F se prepararon como se ha detallado anteriormente. Olaparib (AZD2461) se adquirió de Sigma usado como referencia. Se prepararon soluciones madre (20 mg/ml) de los diferentes compuestos en DMSO y se mantuvieron a -20 °C. Para su uso posterior, los compuestos se diluyeron en medios de cultivo celular a concentraciones apropiadas.

Las líneas celulares FaDu (HTB-43, carcinoma de células escamosas faringe) y Cal27 (CRL-2095, carcinoma de células escamosas de lengua) se adquirieron de ATCC; las líneas celulares de adenocarcinoma esofágico OE33 se adquirieron de Sigma.

Cultivo celular

Las células FaDu y Cal27 se cultivaron en medio de cultivo DMEM, OE33 se cultivaron en medio de cultivo RPMI. Los medios se complementaron con suero bovino fetal al 10 %, L-glutamato 2 mM y 100 U/ml de penicilina/jg/ml de estreptomicina (también se añadieron aminoácidos no esenciales al medio DMEM). Al 80 % de confluencia, las células se tripsinizaron y se subcultivaron en una proporción de 1/20 de 1/20 1/50, dos veces por semana.

Estudio de unión celular in vitro

Se sembraron 40 000 células (FaDu, OE33 o Cal27) en placas de 24 pocillos (placas de formación de imágenes de células con fondo de vidrio, Eppendorf) y se incubaron durante 2 días a 37 °C Después de la eliminación del medio, se añadieron 0,5 ml de medio (Cond 1), 0,5 ml de PARPi (14F) no marcado 10 pM(Cond 2) o 0,5 ml de Olaparib 10 pM (Cond 3) a las células. Después de 30 minutos de incubación a 37 °C, las células se lavaron con 1 ml de medio. Posteriormente, se añadieron 0,5 ml de 14F-FL a una concentración final de 0,1 pM y se incubaron durante 15 min a 37 °C A continuación, las células se lavaron tres veces con 1 ml de PBS frío, se fijaron con 1 ml de paraformaldehído al 4 % (VWR) durante 7-10 minutos y se lavaron de nuevo con 1 ml de PBS. Finalmente, se añadieron 0,5 ml de solución de tinción de DAPl 1 pg/ml (solución preparada para DAPI, Sigma) durante al menos 10 min para teñir los núcleos celulares. Cinética de asociación in vitro

Se sembraron 40 000 células FaDu en placas de 24 pocillos (placas de imágenes celulares con fondo de vidrio, Eppendorf) y se incubaron durante 2 días a 37 °C Después de la eliminación del medio, se añadieron 0,5 ml de 14F-FL a una concentración final de 0,1 pM y se incubaron durante 2 min, 10 min, 20 min, 30 min, 45 min o 60 min a 37 °C A continuación, las células se lavaron tres veces con 1 ml de PBS frío, se fijaron con 1 ml de paraformaldehído al 4 % (VWR) durante 7-10 minutos y se lavaron de nuevo con 1 ml de PBS. Finalmente, se añadieron 0,5 ml de solución de tinción de DAPl 1 pg/ml (solución preparada para DAPI, Sigma) durante al menos 10 min para teñir los núcleos celulares. Cinética de disociación in vitro

Se sembraron 40 000 células FaDu en placas de 24 pocillos (placas de imágenes celulares con fondo de vidrio, Eppendrón) y se incubaron durante 2 días a 37 °C Después de la eliminación del medio, se añadieron 0,5 ml de 14F-FL a una concentración final de 0,1 pM y se incubaron durante 15 min a 37 °C A continuación, las células se lavaron tres veces con 1 ml de PBS frío, y se incubaron adicionalmente durante O min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h O 24 h en medio a 37 °C Después de lavar una vez con 1 ml de PBS frío, las células se fijaron con paraformaldehído al 4 % (VWR) y se tiñeron con DAPI como se describió anteriormente.

Microscopía confocal

El campo brillante de alta resolución y las imágenes fluorescentes de las células se adquirieron en un microscopio confocal (LSM800, Zeiss) con longitudes de onda de excitación y emisión de 405/455 nm para DAPI y 488/525 para BodipyFl (condiciones estándar). Las imágenes se tomaron con un objetivo de inmersión en aceite de plano apocromático 63x/1,4. Las imágenes se analizaron con el Software ZenLITE (Zeiss).

Citometría de flujo

Se incubaron 250 000 células (FaDu, Cal27 o OE33) en suspensión con 0,5 ml de medio, 0,5 ml 10 pM de 14F sin marcar o 0,5 ml de análogo Olaparib 10 pM. Después de 30 min de incubación a 37 °C, las células se lavaron una vez con 0,5 ml de medio y posteriormente se incubaron con 0,5 ml de 14F 0,1 pM-FL durante 10 min a 37 °C A continuación, las células se lavaron tres veces con medios (incluyendo 1 x 10 min de incubación) y se resuspendieron en tampón FACS (PBS+0,5 G de S EDTA N3). Finalmente, las células se analizaron en un citómetro de flujo (BO Celesta) en el canal de GFP (ex 488 nm, filtro em de 510 nm). Los datos se analizaron mediante el software FlowJo. Resultados

Estudios de unión celular 14F-FL

Después de la incubación de 14F-FL con células Cal27, FaDu o OE33, se puede observar una intensa señal fluorescente verde en los núcleos de las tres líneas celulares (colocalización con la señal de DAPI, una tinción nuclear). La señal de 14F-FL se concentra dentro de núcleos; esta estructura se ha descrito para contener cantidades sustanciales (hasta 50 %) de la enzima PARP1 (Boamah, 2012, PloS Genet). Se observa señal más alta en la línea celular Cal27 y FaDu, en comparación con OE33. Cuando las células se pretrataron con un exceso de análogo no marcado 14F no se puede ver ninguna señal fluorescente verde. (datos no mostrados), lo que demuestra la especificidad de la unión.

Citometría de flujo

Los datos de citometría de flujo confirman que se puede observar la unión por significativa para el compuesto de 14F-FL a las células Cal27, FaDu y OE33 (Figura 2A-C respectivamente). Esta unión es específica, como pretratamiento de las células con un exceso de 14F no marcado, disminuyó la unión. Es de destacar que el trazador presenta también cierta unión no específica (al citoplasma como se podría observar en microscopía) ya que la señal de estas condiciones de “ bloqueo ” es mayor que para células sin teñir. El lavado más intensivo no dio como resultado menos señal de fondo. Cinética de asociación de 14F-FL

La unión máxima de 14F-FL ya se logra dentro de 10 min de incubación con células FaDu (datos no mostrados). Prolongar el tiempo de incubación hasta 60 min no mejora significativamente el direccionamiento.

Cinética de disociación de 14F-FL

Después de la unión, 14F-FL permanece unido a su objetivo durante unas pocas horas. Desde aproximadamente 2-4h, la señal de 14F-FL en el núcleo disminuye gradualmente. Después de 24 h, todavía puede observarse alguna señal en los núcleos, pero es notablemente menor (datos no mostrados).

Citometría de flujo

Los datos de citometría de flujo confirman los datos de microscopía descritos anteriormente.

Específicamente, puede observarse una unión significativa para el compuesto 14F-FL (Fig. 3A-C). Esta unión es específica, ya que el pretratamiento de las células con un exceso de 14F no marcado disminuyó la unión.

Claims (1)

1. R E IV IN D IC A C IO N E S Un compuesto de Fórmula I o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

   en donde, R1 es halógeno; R2 y R3 tomados junto con el átomo de N al que están unidos, representan un resto heterocíclico mono o bicíclico de 5-10 miembros; que puede estar opcionalmente sustituido por un sustituyente seleccionado de la lista que comprende: -C1-20alquilo, y -C(=O) R8; cada uno de estos opcionalmente sustituido adicionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de la lista que comprende un resto fluorescente, -C3-20 heterociclilo, y carboxi; R4, R5, R6y R7 son cada uno -H; R8se selecciona de la lista que comprende un resto fluorescente, -C1-20alquilo, y -C3-20 cicloalquilo; X e Y se seleccionan cada uno independientemente de C Y N; en donde al menos uno de dicho X e Y es N; en donde cuando X es N, entonces R7 está ausente. Un compuesto como se define en la reivindicación 1, siendo dicho compuesto de Fórmula III o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

   Un compuesto como se define en la reivindicación 1, siendo dicho compuesto de Fórmula II o un estereoisómero, tautómero, racémico, sal, hidrato, solvato o isótopo del mismo,

   en donde Ri, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>y R6 son como se definen en la reivindicación 1. 4. Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; en donde R<1>es un halógeno radiactivo seleccionado de 18F y 123I, preferiblemente 18F 5. Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; en donde dicho compuesto no contiene un resto radiactivo o fluorescente. 6. Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; en donde Ra es un resto fluorescente; 7. Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y que se selecciona de la siguiente lista; en donde cada Z se selecciona independientemente de -I, -Br, -At y -F; cada uno de dichos -1, -Br, -At y -F opcionalmente radiomarcado:

   8. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7; y un diluyente, portador o excipiente aceptable, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. 9. Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 8; para su uso en medicina humana o veterinaria. 10. Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una composición farmacéutica que comprende tal compuesto; para su uso en el tratamiento del cáncer. 11. Un compuesto como se define en cualquiera de las reivindicaciones 4 o 6, o una composición farmacéutica que comprende tal compuesto; para su uso en el diagnóstico de cáncer. 12. Uso no diagnóstico de un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 4 o 6, o una composición farmacéutica que comprende tal compuesto en la obtención de imágenes in vivo de la distribución de PARP. 13. El compuesto para su uso o composición farmacéutica para su uso como se define en cualquiera de las reivindicaciones 10 u 11; en donde dicho cáncer se selecciona de la lista que comprende: cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de páncreas, glioblastoma, neuroblastoma, cáncer peritoneal, carcinoma oral y cáncer de esófago.