ES2930312T3

ES2930312T3 - Uso de un derivado de pteridinona como inhibidor del EGFR

Info

Publication number: ES2930312T3
Application number: ES16802532T
Authority: ES
Inventors: Honglin Li; Yufang Xu; Zhenjiang Zhao; Wei Zhou; Yuqiong Xu; Deheng Sun; Xia Wang; Zhuo Chen
Original assignee: Shanghai Yidian Pharmaceutical Tech Development Co Ltd
Current assignee: Shanghai Yidian Pharmaceutical Tech Development Co Ltd
Priority date: 2015-05-29
Filing date: 2016-05-30
Publication date: 2022-12-09
Anticipated expiration: 2036-05-30
Also published as: WO2016192609A1; CA2987466A1; AU2016272057B2; KR20180021743A; US11306095B2; EP3312180B1; CN107922417A; EP3312180A4; JP2018516278A; CN107922417B; US20180148454A1; AU2016272057A1; CN106279173A; EP3312180A1; JP7320823B2

Abstract

La presente invención se refiere a un derivado de pteridinona que actúa como inhibidor de EGFR y al uso del mismo. Específicamente, la presente invención se refiere a un compuesto representado por la siguiente fórmula I, una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la siguiente fórmula I y el uso del compuesto en la preparación de fármacos para tratar enfermedades mediadas por EGFR o inhibir EGFR. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Uso de un derivado de pteridinona como inhibidor del EGFR

Campo técnico

La presente invención se relaciona con el campo de la química medicinal; y en particular, la presente invención se relaciona con novedosos derivados de pteridina, composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos y compuestos para su uso como inhibidores de la tirosina quinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) para tratar enfermedades mediadas por el EGFR (tumores). Se divulgan procedimientos de síntesis para los compuestos, pero no están cubiertos por la invención reivindicada.

Antecedentes

El cáncer, también conocido como tumor maligno, es un grupo de enfermedades caracterizadas por una proliferación celular anormal, metástasis, alta incidencia y alta mortalidad, y es una de las enfermedades malignas que amenazan la salud humana y causan la muerte. Los datos de la investigación muestran que en 2008 había 12,7 millones de pacientes de cáncer, en los que el número de muertes ascendía a 700 millones. Además, el 20% de los nuevos casos de tumor en el mundo se dan en China, y el 24% de las muertes causadas por tumores se producen en este país. Sin una prevención eficaz ni mejores opciones de tratamiento, se calcula que en 2030 habrá 26 millones de nuevos casos de cáncer en todo el mundo cada año y el número de muertes causadas por el cáncer alcanzará los 17 millones. Entre los cánceres existentes, el de pulmón es el tumor maligno con mayor morbilidad y mortalidad en el mundo, donde el cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) representa más del 80% de los pacientes con cáncer de pulmón. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), se prevé que para 2025 el aumento anual de nuevos casos de cáncer de pulmón será de más de un millón en China. Una vez diagnosticado el cáncer de pulmón, los pacientes tienen pocas perspectivas de supervivencia, y la tasa de supervivencia a 5 años es inferior al 15%.

Desde la década de 1980, los mecanismos moleculares de la tumorigénesis y el desarrollo han quedado claros gracias a las profundas investigaciones sobre la biología molecular de los tumores. Entre los muchos factores que inducen el cáncer, algunas de las proteínas quinasas altamente expresadas en las células cancerosas, causadas por mutaciones genéticas, son uno de los principales factores que conducen avías detransducción de señales anormales. La proteína tirosina quinasa es un factor importante en el proceso de transmisión de señales, que interviene en una serie de actividades celulares y está estrechamente relacionada con el crecimiento, la diferenciación y la proliferación de las células. Cataliza la transferencia del grupo Y-fosfato del ATP a los residuos de tirosina de muchas proteínas importantes y fosforila los hidroxilos fenólicos, transfiriendo así las señales. Por lo tanto, para el desarrollo de fármacos antitumorales, es una estrategia de investigación eficaz el desarrollo de inhibidores selectivos de la proteína quinasa para bloquear o regular las enfermedades causadas por estas vías de señalización anormales. Entre las muchas tirosina quinasas, la tirosina quinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) es una parte indispensable e importante. El EGFR consta de 1186 aminoácidos y codifica una glicoproteína transmembrana con un peso molecular de 170-kDa. El EGFR puede mediar en múltiples vías de transducción de señales y transmitir señales extracelulares a las células, lo que desempeña un importante papel regulador en la proliferación, diferenciación y apoptosis de las células normales y tumorales (Cell, 2000, 100, 113-127). El EGFR es un componente que se expresa de forma constitutiva en muchos tejidos epiteliales normales, como la piel y los folículos pilosos, mientras que está sobreexpresado o altamente expresado en la mayoría de los tumores sólidos. Por ejemplo, en el cáncer de pulmón, la tasa de expresión del EGFR alcanza entre el 40 y el 80%. Por lo tanto, el propósito de tratar el cáncer de pulmón puede lograrse inhibiendo selectivamente el EGFR e interfiriendo en sus vías de transducción de señales, lo que abrirá una vía factible para el tratamiento dirigido del cáncer de pulmón.

En la práctica clínica, los fármacos dirigidos al EGFR, como Iressa, Tarceva, etc., en combinación con la radioterapia y la quimioterapia tradicionales, han demostrado ser muy eficaces en el tratamiento del cáncer de pulmón. Sin embargo, la práctica clínica muestra que la mayoría de los pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas desarrollan una resistencia adquirida en los 6-12 meses siguientes al tratamiento con Gefitinib o Erlotinib. Aproximadamente el 50% de los casos de resistencia están relacionados con la mutación de un residuo de aminoácido en el dominio de la quinasa del EGFR (mutación del residuo de treonina en la posición 790 a metionina, T790M) (The New England Journal of Medicine, 2005, 352, 786-792). La mutación T790M provoca un impedimento estérico cuando un inhibidor se une al EGFR o aumenta la afinidad del EGFR por el ATP, de modo que los efectos anticancerígenos de dichos inhibidores competitivos de unión reversible se reducen considerablemente. La resistencia a los medicamentos no sólo reduce la sensibilidad del paciente a los fármacos, sino que también reduce en gran medida la calidad de vida de los pacientes con cáncer. Para superar la resistencia inducida por la mutación T790M, una serie de inhibidores competitivos de ATP irreversibles (como CI-1033, HKI-272, PF00299804, etc.) han entrado en la fase de investigación clínica. Los inhibidores irreversibles contienen un fragmento aceptor de Michael que forma un enlace covalente con un residuo de aminoácido conservado (Cys797) en el sitio de unión al ATP del EGFr , lo que da lugar a una mayor afinidad de unión al EGFR en comparación con el inhibidor reversible. Sin embargo, este tipo de fármacos presentan una escasa selectividad tanto para el EGFR de tipo salvaje como para el mutante, por lo que la dosis máxima tolerada (DMT) de los mismos es baja, y los efectos clínicos son menos eficaces. Además, algunos compuestos presentan una escasa capacidad de utilización farmacéutica a pesar de su buena actividad, lo que limita su aplicación clínica.

Por lo tanto, es de gran importancia clínica y perspectivas de aplicación el estudio y desarrollo de fármacos dirigidos al EGFR que puedan inhibir selectivamente la mutación T790M y superar la resistencia clínica.

Wei Zhou et al. (2013) J. Med. Chem., 56, 7821-7837 divulgan un andamio de pteridin-7(8H)-ona que se transformó en inhibidores irreversibles del mutante T790M del EGFR.

El documento CN 1373763 A se refiere a 8H-pteridin-7-onas, tetrahidroteridina-7-onas, 5H, 8H-pteridin-6,7-dionas y pteridin-7-ureas que inhiben la serina/treonina quinasa dependiente de ciclina, la tirosina quinasa Wee 1 y las enzimas tirosina quinasas mediadas por el factor de crecimiento, y como tales son útiles para tratar enfermedades y trastornos de proliferación celular.

El doumento WO 2006/002367 A1 divulga compuestos, composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos y procedimientos de uso de dichos compuestos para tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados con una actividad de quinasa anormal o desregulada, particularmente enfermedades o trastornos que implican una activación anormal de las quinasas Abl, Bcr-abl, Bmx, c-RAF, CSK, Fes, FGFR3, FIt3, GSK3P, IR, JNK1a1, JNK2a2, Lck, MKK4, MKK6, p70S6K, PDGFRa, Rsk1, SAPK2a, SAPK2|3, SykyTrkB.

El documento WO 2013/170671 A1 se refiere a la síntesis de cetonas de pteridina y a las cetonas de pteridina como inhibidores de EGFR, BLK y FLT3 en la preparación de un medicamento para enfermedades relacionadas con tumores.

Sumario de la invención

La invención se define en las reivindicaciones. Los aspectos que no están comprendidos en el ámbito de las reivindicaciones se divulgan y son meramente informativos.

Un objeto de la presente invención es proporcionar un derivado de la pteridinona con una estructura novedosa, que sea capaz de inhibir selectivamente la mutación T790M del EGFR y que posea una buena capacidad de utilización farmacéutica.

En el primer aspecto de la presente invención, se proporciona un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

donde

A es un radical divalente -(CRaRb)n-A'-, en el que Ra y Rb se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en H, un alquilo C i-3, un halógeno, y n es un número entero de 0 a 3;

m es un número entero de 0 a 3;

R1 se selecciona independientemente entre fenilo sustituido o no sustituido, y cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido;

A' es un anillo de benceno, un heterociclo de cinco o seis miembros que contiene nitrógeno;

R2 se selecciona de forma independiente entre un acilamino sustituido con alquenilo C2-C4, acilo sustituido con alquenilo C2-C4 sustituido o no sustituido;

R7 se selecciona del grupo que consiste en

R3, R4, R5 y R6 se seleccionan de forma independiente entre el grupo que consiste en H, un alcoxi C1-C6 (preferentemente C1-C3) sustituido o no sustituido, un alquilo C1-C6 (preferentemente C1-C3) sustituido o no sustituido,,

o un compuesto o una sal farmacéutica aceptable del mismo seleccionado del siguiente grupo

En una realización particular,

R1 se selecciona independientemente entre fenilo sustituido o no sustituido;

n = 0;

A' es un anillo de benceno, o un heterociclo de cinco miembros que contiene nitrógeno;

R2 se selecciona de forma independiente entre un alquenilo C2-C4 sustituido por un acilamino, o un alquenilo C2-C4 sustituido por un acilo;

m es un número entero de 0 a 2;

R7 se selecciona entre

R3, R4, R5 y R6 se seleccionan de forma independiente entre el grupo que consiste en H, un alcoxi C1-C3 sustituido o no sustituido, un alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido.

En una realización particular de la presente invención, se proporciona un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo seleccionada del siguiente grupo

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En el segundo aspecto, se proporciona una composición farmacéutica en la presente invención, que comprende un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo del primer aspecto y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

En una realización preferida, la composición farmacéutica está en una forma adecuada para la administración oral, incluyendo pero no limitado a tabletas, soluciones, suspensiones, cápsulas, gránulos, polvos.

En el tercer aspecto, se proporciona un compuesto del primer aspecto para su uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades mediadas por el EGFR, o la inhibición del EGFR en la presente invención, donde la enfermedad mediada por el EGFR es el cáncer.

En una realización particular, el cáncer se selecciona de un grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, glioblastoma, cáncer de ovario, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer cervical, cáncer de esófago, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de páncreas, cáncer de colon, cáncer de piel, leucemia, linfoma, cáncer de estómago, mieloma múltiple y tumores sólidos.

También se divulga en el presente documento, pero no está cubierto por la invención reivindicada, un procedimiento para tratar o prevenir enfermedades mediadas por el EGFR utilizando el compuesto del primer aspecto de la invención. Se divulga que la enfermedad mediada por el EGFR es un cáncer; preferentemente, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, glioblastoma, cáncer de ovario, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer de cuello uterino, cáncer de esófago, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de páncreas, cáncer de colon, cáncer de piel, leucemia, linfoma, cáncer de estómago, mieloma múltiple y tumores sólidos.

Debe entenderse que en la presente invención, las características técnicas mencionadas específicamente arriba y abajo (como en los Ejemplos) pueden combinarse entre sí, constituyendo así una solución técnica nueva o preferida que no necesita ser descrita individualmente.

Descripción de los dibujos

La figura 1 muestra la evaluación farmacodinámica de una serie de compuestos: tras la administración oral a ratones desnudos del modelo de xenoinjerto celular H1975 durante 14 días, el compuesto 14 mostró una eficacia superior a la del CO-1686.

La figura 2 muestra la comparación farmacodinámica entre el compuesto 14 y el CO-1686 y el AZD9291: El compuesto 14 (10 mg/kg) mostró una mejor eficacia que el CO-1686 (50 mg/kg), el compuesto 14 (25 mg/kg) mostró una eficacia comparable a la del AZD9291 (25 mg/kg), ambos pueden reducir eficazmente el tamaño de un tumor, y los ratones siguen vivos y el tumor no reaparece después de suspender la administración durante 1 mes.

La figura 3 muestra que el compuesto 14 mostró una mayor selectividad sobre el EGFR de tipo salvaje. Se administró a ratones desnudos el modelo de xenoinjerto de células EGFR de tipo salvaje A431 durante 14 días por vía oral, el compuesto 14 (25 mg/kg) mostró un rendimiento comparable al de la misma dosis de AZD9291, es decir, el tamaño del tumor no cambió substacialmente, y la selectividad fue significativamente mejor que la de afatinib (un medicamento de 2a generación).

La figura 4 muestra la evaluación de la toxicidad del compuesto 14 y del AZD9291.

La figura 5 muestra el análisis patológico de los ratones portadores de tumores tras 14 días consecutivos de administración.

Modos de llevar a cabo la invención

A través de una investigación exhaustiva e intensiva, los inventores han encontrado inesperadamente derivados de la pteridinona con una estructura novedosa, que son capaces de inhibir selectivamente la mutación T790M del EGFR y que poseen una buena capacidad de utilización farmacéutica. Para estos compuestos, los valores IC50 de la actividad

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inhibitoria sobre la quinasa EGFR-T790M/L858R y los valores IC50 de la inhibición de la proliferación de las células H1975 (células de cáncer de pulmón de células no pequeñas, EGFR-T790M / L858R) alcanzaron niveles nM y estos compuestos mostraron una excelente solubilidad. Sobre la base de los resultados anteriores, se completa la presente invención.

Definición de términos

Los términos mencionados en el presente documento se definen además como sigue:

Tal y como se utiliza aquí, "alquilo" se refiere a un alquilo saturado de cadena recta o ramificada que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, y preferentemente el alquilo incluye un alquilo con 2-8 átomos de carbono, 1-6 átomos de carbono, 1-4 átomos de carbono, 1-3 átomos de carbono de longitud. Ejemplos de alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, heptilo y similares. El alquilo puede estar sustituido por uno o más sustituyentes, por ejemplo, por un halógeno o un haloalquilo. Por ejemplo, el alquilo puede ser un alquilo sustituido por 1-4 átomos de flúor, o un alquilo sustituido por alquilo fluorado.

Tal y como se utiliza en el presente documento, "cicloalquilo" se refiere a un alquilo cíclico saturado que tiene de 3 a 10, preferentemente de 3 a 8 átomos de carbono en anillo. Los cicloalquilos ejemplares incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo, cicloheptilo y similares. El cicloalquilo puede estar sustituido por uno o más sustituyentes, por ejemplo, por un halógeno o un haloalquilo. Por ejemplo, el cicloalquilo puede estar sustituido por 1 4 átomos de flúor. En una realización preferida, el cicloalquilo es el ciclohexilo.

Tal y como se utiliza aquí, "alcoxilo" se refiere a un óxido sustituido por alquilo. Un alcoxilo preferido es un alcoxilo con 1-6 átomos de carbono de longitud, más preferentemente un alcoxilo con 1-4 átomos de carbono de longitud. Ejemplos de alcoxilo incluyen, pero no se limitan a, metoxilo, etoxilo, propoxilo y similares. En una realización particular, el alcoxi puede ser un grupo alcoxi sustituido, por ejemplo, un alcoxi sustituido. En una realización particular, es preferible un un alcoxi C1-C3 sustituido con alcoxi C1-C3.

Tal y como se utiliza en el presente documento, "alquenilo" significa generalmente un grupo hidrocarburo monovalente con al menos un doble enlace, que comprende generalmente de 2 a 8 átomos de carbono, preferentemente de 2 a 6 átomos de carbono y que puede ser de cadena recta o ramificada. Los ejemplos de alquenilo incluyen, pero no se limitan a, etenilo, propenilo, iso-propenilo, butenilo, iso-butenilo, hexenilo y similares.

Tal y como se utiliza en el presente documento, "halógeno" se refiere al flúor, el cloro, el bromo y el yodo.

Tal como se utiliza aquí, "arilo" significa un grupo aromático monocíclico, bicíclico o tricíclico con 6 a 14 átomos de carbono, e incluye el fenilo, el naftilo, el fenantrilo, el antrilo, el indenilo, el fluorenilo, la tetralina, el indanilo y similares. El arilo puede estar opcionalmente sustituido con 1 - 5 (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o 5) sustituyentes seleccionados entre: un halógeno, un grupo aldehído C1-4, un alquilo C1-6, un ciano, un nitro, un amino, un hidroxilo, un hidroximetilo, un alquilo sustituido por halógeno (por ejemplo, trifluorometilo), un alcoxilo sustituido por halógenos (por ejemplo, trifluorometoxilo), un carboxilo, un alcoxilo C1-4, un etoxiformilo, N(CH3) y un acilo C1-4, un heterociclilo o un heteroarilo, y similares.

Como se usa aquí, "grupo heterociclo" incluye, pero no se limita a, grupos heterocíclicos de 5 o 6 miembros que comprenden 1-3 heteroátomos seleccionados de O, S o N, incluyendo (pero no se limita a) un furilo un tienilo, un pirrolilo, un pirrolidinilo, un pirazolilo, un imidazolilo, un triazolilo, un oxazolilo, un piranilo, un piridilo, un pirimidinilo, un pirazinilo, un piperidinilo, un morfolinilo y similares.

Tal y como se utiliza en el presente documento, "grupo heterocíclico aromático" significa que el grupo comprende de 5 a 14 átomos de anillo, y que se comparten 6, 10 o 14 electrones en el sistema de anillos. Y los átomos de anillo contenidos son átomos de carbono y 1-3 heteroátomos seleccionados opcionalmente entre O, N, S. El grupo heterociclo aromático útil incluye un piperazinilo, un morfolinilo, un piperidinilo, un pirrolidinilo, un tienilo, un furilo, un piranilo, un pirrolilo, un imidazolilo, un pirazolilo, un piridilo, incluyendo, pero sin limitarse a, 2-piridilo, 3-piridilo y 4-piridilo, un pirazinilo, un pirimidinilo y similares.

El grupo heterociclo aromático puede estar opcionalmente sustituido por 1-5 (por ejemplo, 1,2, 3, 4 o 5) sustituyentes seleccionados entre: un halógeno, un grupo aldehído C1-4, un alquilo de cadena recta o ramificada C1-6, un ciano, un nitro, un amino, un hidroxilo, un hidroximetilo, un alquilo sustituido por halógeno (por ejemplo, trifluorometilo), un alcoxilo sustituido por halógenos (por ejemplo, trifluorometoxilo), un carboxilo, un alcoxilo C1-4, un etoxiformilo, N(CH3) y un acilo C1-4.

Tal y como se utiliza en el presente documento, "acilo" se refiere a un grupo con la estructura de fórmula "-C-(O)-R", en el que R puede seleccionarse entre un alquilo, un alquenilo o un alquinilo. Y R puede ser opcionalmente sustituido. En una realización particular, R en el "acilo" descrito aquí está sustituido con un alquenilo opcionalmente sustituido. En una realización preferida, R en el "acilo" descrito aquí está sustituido con alquenilo C2-C4 opcionalmente sustituido. En una realización preferida, el "acilo" según la presente invención es formilo sustituido con alquenilo opcionalmente sustituido, por ejemplo, formilo sustituido con vinilo, formilo sustituido con propenilo NRxRy-sustituido, donde Rx y Ry pueden seleccionarse independientemente de alquilo o H.

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Tal como se utiliza en el presente documento, "acilamino" se refiere a un grupo con la estructura de fórmula "-NH-C(O)-R", en el que R puede seleccionarse de entre un alquilo, un alquenilo, un alquinilo, un alquenilo sustituido por NRxRy, un alquenilo sustituido por NRxRy, un alquinilo sustituido por NRxRy, un alquilo sustituido por halógeno, un alquenilo sustituido por ciano, en el que Rx y Ry se seleccionan independientemente de un alquilo o un alquenilo. En una realización particular, R en el "acilamino" descrito aquí está sustituido con un alquenilo. En una realización preferida, R en el "acilamino" descrito aquí está sustituido con alquenilo C2-C4. En una realización preferida, el "acilamino" según la presente invención es formilamino sustituido con vinilo.

Tal como se utiliza en el presente documento, "opcionalmente sustituido" significa que el grupo modificado por el término puede estar opcionalmente sustituido por 1-5 (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o 5) sustituyentes seleccionados entre: un halógeno, un grupo aldehído C i-4, un alquilo de cadena recta o ramificada C i-6, un ciano, un nitro, un amino, un hidroxilo, un hidroximetilo, un alquilo sustituido por halógeno (por ejemplo, trifluorometilo), un alcoxilo sustituido por halógenos (por ejemplo, trifluorometoxilo), un carboxilo, un alcoxilo C i-4, un etoxiformilo, N(CH3) y un acilo C i-4. Compuestos de la presente invención

Los inventores han sintetizado una serie de candidatos que poseen actividad inhibidora del EGFR. Se diseñó y sintetizó una serie de compuestos de 7(8H)-pteridinona con estructura novedosa mediante la optimización de la estructura de los compuestos candidatos obtenidos, y se caracterizó estructuralmente. Se probaron las actividades biológicas y las propiedades físico-químicas de esta serie de compuestos, y se obtuvo una serie de compuestos capaces de inhibir selectivamente la mutación T790M del EGFR y que poseían una buena capacidad de utilización farmacéutica. Entre estos compuestos, los valores IC50 de la actividad inhibitoria del compuesto ZW-39 sobre la quinasa EGFR-T790M/L858R fue de 3,9 nM, los valores IC50 de la inhibición de la proliferación de las células H1975 (células de cáncer de pulmón de células no pequeñas, EGFR-T790M / L858R) fue de 9 nM, y su solubilidad en agua (tampón fosfato 20 mM, pH 6,8) fue de 1367 ^g/ml.

Tras una investigación más profunda, los inventores descubrieron que, al juzgar un compuesto candidato, no sólo debe tenerse en cuenta la actividad absoluta, sino también la solubilidad del compuesto candidato, es decir, la buena capacidad de utilización farmacéutica de un compuesto candidato. Para evaluar los compuestos candidatos en su conjunto, los inventores adoptaron creativamente como criterios la relación entre la solubilidad de un compuesto candidato y el valor IC50 de la actividad inhibidora de la quinasa EGFR-T790M/L858R (relación 1) y la relación entre la solubilidad del compuesto candidato y el valor IC50 de la inhibición de la proliferación de la célula H1975 (relación 2), y se utilizó como control positivo el inhibidor selectivo del EGFR AZD9291 de tercera generación, que actualmente se encuentra en ensayos clínicos de fase II, identificando así una serie de excelentes compuestos candidatos.

En una realización particular, el compuesto de la presente invención es un compuesto de la siguiente fórmula general I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

donde

A es un radical divalente -(CRaRb)n-A'-, en el que Ra y Rb se seleccionan independientemente de un grupo que consiste en H, un alquilo C1-3, un halógeno, y n es un número entero de 0 a 3;

m es un número entero de 0 a 3;

R1 se selecciona de forma independiente entre fenilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido; A' es un anillo de benceno, un heterociclo de cinco o seis miembros que contiene nitrógeno;R2 se selecciona de forma independiente entre un acilamino sustituido con alquenilo C2-C4, acilo sustituido con alquenilo C2-C4 sustituido o no sustituido; R7 se selecciona del grupo que consiste en

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En una realización particular, se proporcionan los siguientes compuestos en la presente invención

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En otra realización preferida adicional, R1 se selecciona independientemente de fenilo sustituido o no sustituido; n = 0; A' es un anillo de benceno, o un heterociclo de cinco miembros que contiene nitrógeno;R2 se selecciona independientemente de un acilamino sustituido con alquenilo C2-C4, o acilo sustituido con alquenilo C2-C4; m es un número entero de 0 a 2; R7 se selecciona de:

En una realización preferida, se proporcionan los siguientes compuestos en la presente invención

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Basándose en los compuestos anteriores, se proporciona una composición farmacéutica en la presente invención, en la que la composición comprende un compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de la presente invención y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

El ejemplo de la sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de la invención incluye, pero no se limita a, sales inorgánicas y sales orgánicas, por ejemplo, clorhidrato, hidrobromuro, sulfato, citrato, lactato, tartrato, maleato, fumarato, mandelato y oxalato; y sales inorgánicas y orgánicas formadas con base, como hidroxilo de sodio, tri(hidroximetil) aminometano (TRIS, trometamina) y N-metil glucamina.

El experto en la materia puede determinar la dosificación óptima de cada ingrediente activo en las composiciones farmacéuticas de la invención, aunque la necesidad del individuo sea diferente. Generalmente, los compuestos de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos se administran por vía oral a un mamífero en una dosis diaria de aproximadamente 0,0025 a 50 mg / kg de peso corporal, preferentemente, se administran por vía oral aproximadamente 0,01 a 10 mg por kg. Por ejemplo, una dosis oral unitaria puede comprender entre 0,01 y 50 mg, preferentemente entre 0,1 y 10 mg de compuestos de la invención. Una dosis unitaria puede administrarse una o más veces, uno o más comprimidos al día, conteniendo cada comprimido entre 0,1 y 50 mg, preferentemente entre 0,25 y 10 mg de los compuestos de la invención o un solvato de los mismos.

La composición farmacéutica de la invención puede formularse en formas adecuadas para diversas vías de administración, incluyendo, pero sin limitarse a ellas, la parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica, bucal, intratecal, intracraneal, intranasal o tópica, para el tratamiento del cáncer y otras enfermedades. La cantidad de administración es la cantidad efectiva para mejorar o eliminar una o más enfermedades. Para tratar una enfermedad específica, la cantidad efectiva es la cantidad suficiente para mejorar o aliviar los síntomas relevantes de la enfermedad. Dicha cantidad puede administrarse en una sola dosis o según el esquema terapéutico eficaz. La cantidad administrada puede ser eficaz para curar enfermedades, pero normalmente el propósito es mejorar los síntomas de las mismas. Por lo general, es necesario repetir la administración para lograr la mejora de los síntomas. La dosis puede determinarse en función de la edad, el estado de salud y el peso del paciente, el tratamiento concurrente, la frecuencia del tratamiento y el beneficio terapéutico deseado.

Las formulaciones farmacéuticas de la invención pueden administrarse a cualquier mamífero, siempre que los compuestos de la presente invención sean eficaces para ellos. En los mamíferos, el ser humano es el más importante.

El compuesto o la composición farmacéutica de la presente invención puede ser útil en el tratamiento o la prevención de diversas enfermedades mediadas por la quinasa del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). En este caso, la enfermedad mediada por el EGFR son varios cánceres. Los cánceres incluyen, pero no se limitan a, el cáncer de pulmón de células no pequeñas, el cáncer de mama, el cáncer de próstata, los tumores de células gliales, el cáncer de ovario, el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, el cáncer de cuello uterino, el cáncer de esófago, el cáncer de hígado, el cáncer de riñón, el cáncer de páncreas, el cáncer de colon, el cáncer de piel, la leucemia, el linfoma, el cáncer gástrico, el mieloma múltiple y los tumores sólidos.

Las formulaciones farmacéuticas de la invención pueden prepararse de manera conocida, por ejemplo, mediante procesos convencionales de mezclado, granulación, tableteado, disolución o liofilización. En la fabricación de la formulación oral, se pueden combinar un excipiente sólido y un compuesto activo, y la mezcla se puede moler opcionalmente. Si es necesario, se pueden añadir los aditivos apropiados, y la mezcla se puede procesar en partículas para obtener comprimidos o núcleos de troqueles.

Los excipientes adecuados, en particular los rellenos, incluyen, por ejemplo, azúcares, como lactosa o sacarosa, manitol o sorbitol; preparados de celulosa o fosfatos de calcio, como fosfato tricálcico o fosfato de hidrógeno de calcio y un aglutinante, como la pasta de almidón, incluido el almidón de maíz, el almidón de trigo, el almidón de arroz, el almidón de patata, la gelatina, el tragacanto, la metilcelulosa, la hidroxipropilmetilcelulosa, la carboximetilcelulosa sódica o la polivinilpirrolidona. Si se desea, se puede añadir un agente isintegrador, como los almidones mencionados anteriormente, así como el carboximetilalmidón, la polivinilpirrolidona reticulada, el agar o el ácido algínico o una sal de éste, como el alginato de sodio. Entre los adyuvantes se incluyen especialmente los modificadores de flujo y los lubricantes, como la sílice, el talco, los estearatos, como el de magnesio y el de calcio, el ácido esteárico o el polietilenglicol. Si es necesario, el núcleo del trocillopuede recubrirse adecuadamente para que sea resistente a los jugos gástricos. Para ello, pueden aplicarse soluciones concentradas de sacáridos, que pueden contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Para preparar recubrimientos resistentes a los jugos gástricos, pueden utilizarse soluciones de celulosa adecuadas, como el ftalato de acetato de celulosa o el ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa. Pueden añadirse colorantes o pigmentos al recubrimiento de los comprimidos o de los núcleos de los trocillos, por ejemplo, para identificar o caracterizar las combinaciones de dosificación de los ingredientes activos.

Por consiguiente, en el presente documento se da a conocer un procedimiento para tratar enfermedades mediadas por el EGFR, pero que no está cubierto por la invención reivindicada, que comprende administrar el compuesto de la invención o la composición farmacéutica que comprende el compuesto de la invención a un sujeto que lo necesita.

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Los procedimientos de administración incluyen, pero no se limitan a, los procedimientos conocidos en la técnica, que pueden determinarse según la condición del paciente, incluyendo, pero no limitándose a, la administración parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica, bucal, intratecal, intracraneal, intranasal o tópica.

Un compuesto de la presente invención para su uso en el tratamiento de enfermedades mediadas por el EGFR, en el que la enfermedad mediada por el EGFR es el cáncer, también se incluye en la presente invención.

Las soluciones técnicas de la presente invención se describen con más detalle a continuación con referencia a ejemplos de implementación específicos. Sin embargo, las siguientes realizaciones no pretenden limitar la presente invención. Todos los procedimientos de aplicación adoptados según los principios y las soluciones técnicas de la presente invención entran en el ámbito de la presente invención. En los siguientes ejemplos, se especifican procedimientos experimentales sin condiciones específicas, normalmente según las condiciones habituales o según las condiciones sugeridas por el fabricante. Salvo que se indique lo contrario, los porcentajes y las partes se expresan en peso.

Material y procedimiento

Síntesis de los compuestos de 7(8H)-pteridinona de la presente invención

Reactivos y condiciones: (a) amina, DIPEA, 1,4-dioxano, r.t.; (b) ArNH2, DIPEA, 1,4-dioxano, r.t.; (c) Pd/C, H2, EtOH; (d) R2COCOOEt, HOAc, EtOH, reflujo; (e) ácido trifluoroacético, CH2Cl2, 0°C - r.t.; (f) cloruro de ácido, Et3N, CH2Cl2, 0°C - r.t. o cloruro de ácido, 1 -metil-2-pirrolidona, CH3CN, 0°C - r.t.

En el procedimiento de preparación anterior, R1,R2, R3, R4 se definen como se ha descrito anteriormente. Diversos compuestos de partida obtenidos rutinariamente en el arte como materia prima pueden ser utilizados por un experto en el arte según las necesidades reales para preparar el compuesto de la presente invención.

Ejemplo

Ejemplo 1

El procedimiento particular para los pasos a-f como se ha dicho anteriormente se muestra como sigue:

Síntesis del (3-(2-cloro-5-nitropirimidil-4-amino)fenil)carbamato de tert-butilo

La 2,4-dicloro-5-nitro-pirimidina (3,80 g, 19,59 mmol) se colocó en un matraz de fondo redondo de 100 ml, se añadieron 80 ml de 1,4-dioxano y se agitó a temperatura ambiente. El carbamato de tert-butilo (3-aminofenilo) (4 g, 19,21 mmol) y la N,N-diisopropiletilamina (2,98 g, 23,05 mmol) se disolvieron en 20 ml de 1,4-dioxano. La solución resultante se añadió gota a gota a la solución de reacción como se ha dicho anteriormente. Una vez completada la adición, la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 0,5 h, y la TLC mostró que la materia prima estaba completamente convertida. El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria y el producto crudo se separó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo = 10: 1, v/v) para obtener (3-(2-cloro-5-nitropirimidilo-4-amino)fenilo)carbamato de tert-butilo como sólidos color naranja (5,9 g, rendimiento del 84%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): <510,37(s, 1H), 9,48(s, 1H), 9,13(s, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,15(m, 1H), 1,48(s, 9H).

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Síntesis de (3-((2-(metoximetoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil) fenil)amino)-5-nitro-4-pirimidinil)amino)fenil)carbamato de tert-butilo

El tert-butilo-3-(2-doro-5-nitropirimidina-4-amino)fenilcarbamato (902 mg, 2,47 mmol), la 2-(metoximetoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)-anilina (775 mg, 2,47 mmol) y la DIPEA (956 mg, 7,4o mmol) se pesaron en un matraz de fondo redondo de 100 ml. Se añadieron 50 ml de tetrahidrofurano, se calentaron a reflujo y se mezclaron durante la noche. Una vez completada la reacción, el disolvente se eliminó por evaporación rotatoria, se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 2). La fase orgánica se lavó con solución saturada de cloruro de amonio (50 ml x 2) y solución saturada de cloruro de sodio, y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se eliminó por evaporación rotatoria y el producto crudo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano / metanol = 30: 1, v / v) para dar (3-((2-(metoximetoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-5-nitro-4-pirimidinil)amino)fenil)carbamato de tertbutilo como sólido color rojo naranja, 945 mg, rendimiento 66%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,25 (s, 1H), 9,44 (s, 1H), 9,28 (s, 1H), 9,04 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,42 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,23-7,20 (m, 2H), 7,08 (t, J=8,0 Hz, 1H), 6,70 (s, 1H), 6,43 (d, J=8,8 Hz, 1H), 5,15 (s, 2H), 3,32 (s, 3H), 3,11 (br, 4H), 2,46 (br, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Síntesis de (3-(2-((metoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil) fenil)amino)-7-oxo-8(7H)-pteridinil)carbamato de tert-butilo

Se pesó (3-((2-(metoximetoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-5-nitro-4-pirimidinil)amino)fenil)carbamato de tertbutilo (940 mg, 1,62 mmol) en un matraz de fondo redondo de 400 ml. Se añadieron 120 ml de etanol, 100 ml de cloruro de metileno y 250 mg de paladio sobre carbono (10% Pd). Se ventiló el hidrógeno y se agitó el sistema de reacción durante 8 horas a temperatura ambiente. Una vez completada la reacción, la mezcla de reacción se filtró por succión, el filtrado se centrifugó y el producto se utilizó directamente en la siguiente reacción sin purificación.

El producto de la reacción anterior se colocó en un matraz de fondo redondo de 50 ml y se añadieron 1,45 ml de ácido acético glacial y 25 ml de etanol absoluto, seguido de glioxilato de etilo (50% en tolueno) (0,495 ml, 2,43 mmol), se calentó a reflujo y se agitó durante la noche. Una vez completada la reacción, se eliminó el disolvente por evaporación rotatoria y se añadieron 15 ml de etanol para la recristalización. Los sólidos se precipitaron y se filtraron por succión. La torta de filtración se lavó con etanol, amoníaco acuoso y agua desionizada y se secó para dar (3-(2-((metoximetoxi)-4-(4-metil-1 -piperaz¡n¡l)fenil)am¡no)-7-oxo-8(7H)-pter¡d¡n¡l)fen¡l)carbamato de tert-butilo como sólidos de color rojo naranja 452 mg, rendimiento 47%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 59,65 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,55 (br, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,52 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,43 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,36-7,33 (m, 1H), 6,97 (d, J=8,0 Hz, 1H), 6,65 (d, J=2,0 Hz, 1H), 6,16 (br, 1H), 5,17 (s, 2H), 3,36 (s, 3H), 3,03 (br, 4H), 2,44 (t, J=3,6 Hz, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).

Síntesis de 8-(3-aminofenil)-2-((2-(metoxietoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7(8H)pteridinona

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El (3-((2-(metoxietoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7-oxo-8(7H)-pteridinil)carbamato de tert-butilo (452 mg, 0,77 mmol) se pesó en un matraz de fondo redondo de 25 ml. Se añadieron 7 ml de cloruro de metileno y 2 ml de ácido trifluoroacético en un baño de hielo con agitación. El sistema de reacción se agitó durante 1 hora más en un baño de hielo y durante 1 hora a temperatura ambiente. Una vez completada la reacción, se añadió una solución saturada de bicarbonato de sodio para neutralizar la solución hasta un pH = 9. El filtrado se extrajo con diclorometano. La fase orgánica se lavó con agua desionizada y solución saturada de cloruro sódico, y se secó, y el disolvente se centrifugó. El producto crudo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (diclorometano / metanol = 20: 1, v/v) para obtener 8-(3-aminofenil)-2-((2-(metoximetoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7(8H)pteridinona, sólidos de color rojo naranja 132 mg, rendimiento 35%. MS (ESI) m/z489,2 [M H]+.

Síntesis de N-(3-(2-((metoximetoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil) amino)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 9) (Comparativo)

Se pesó 8-(3-aminofenil)-2-((2-(metoximetoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amin)-7(8H)pteridinona (132 mg, 0,270 mmol) en un matraz de fondo redondo de 25 ml. Se añadieron 4 ml de N-metilpirrolidona y se agitó en un baño de hielo. Se disolvió cloruro de acriloilo (25 pl, 0,297 mmol) en 2 ml de acetonitrilo y se añadió gota a gota a la mezcla de reacción con un embudo de goteo a presión constante. Tras la adición, la mezcla se agitó durante media hora en un baño de hielo y después durante 2 horas a temperatura ambiente. Una vez completada la reacción, se añadió al líquido de reacción una solución saturada de bicarbonato sódico y se agitó durante otros 15 minutos. La mezcla de reacción se diluyó con agua y se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica se lavó con agua desionizada y con una solución saturada de cloruro sódico. Tras la concentración, el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (cloruro de metileno / metanol / amoníaco acuoso = 100: 5: 0,5, v/v) para obtener N-(3-((2-(metoximetil)-4-(4-metil-1-piperazinil) fenil)amino)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida, sólidoscolor naranja 101 mg, rendimiento 69%.

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,40 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,53 (br, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,85 (d, J=6,4 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,53 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,34-7,33 (m, 1H), 7,10 (d, J=8,0 Hz, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,46 (dd, J = 16,8, 10,0 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 16,8, 1,6 Hz, 1H), 6,13-6,09 (m, 1H), 5,78 (dd, J = 10,0, 1,6 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 3,35 (s, 3H), 3,00 (br, 4H), 2,43 (t, J=4,4 Hz, 4H), 2,22 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C28H31N8O4, 543,2468; encontrado, 543,2476.

Los siguientes compuestos se sintetizaron utilizando la misma o similar ruta de síntesis descrita anteriormente:

(,S)-8-(1-acriloN-3-pirrolidmN)-2-((2-metoxi)-4-(4-metiM-piperaziml)feml)ammo)-7(,8tf)pteridmona (Compuesto 1) (Comparativo)

sólidos de color rojo naranja, rendimiento del 40%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 58,96 (s, 1H), 8,73 (s, 0,5 H), 8,72 (s, 0,5H), 7,86 (s, 0,5 H), 7,84 (s, 0,5 H), 7,32 (m, 1H), 6,57 (s, 1H), 643-6,42 (m, 1H), 6,16 (ddd, J = 16,8, 10,0, 2,4 Hz, 1H), 5,72 (dd, J = 10,0, 2,4 Hz, 1H), 5,65 (dd, J = 10,0, 2,4 Hz, 1H), 4,08 (t, J = 10,2 Hz, 0,5H), 3,88-3,82 (m, 0,5 H), 3,76 (s, 3H), 3,67-3,62 (m, 1H), 3,58-3,55 (m, 1H), 3,21-3,17 (m, 4H), 2,81-2,71 (m, 1H), 2,68-2,61 (m, 4H), 2,38

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(s, 1,4H), 2,34 (s, 1,6H), 2,04-1,96 (m, 2H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C25H31N8O3, 491,2519;encontrado, 491,2520. Pureza por HPLC: 95,7%, tiempo de retención = 9,43 min.

(R)-8-(1-acriloN-3-pirrolidiml)-2-((2-metoxi)-4-(4-metiM-piperazmN)feml)ammo)-7(8H)pteridmona (Compuesto 2) (Comparativo)

sólidos de color rojo naranja, rendimiento del 40%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 68,94 (s, 1H), 8,72-8,71 (m, 1H), 7,86-7,84 (m, 1H), 7,33 (t, J = 8,4 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,42-6,40 (m, 1H), 6,16 (ddd, J =16,8, 10,4,2,4 Hz, 1H), 5,70 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 5,65 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,10 (t, J = 10,2 Hz, 0,5H), 3,88-3,83 (m, 0,6H), 3,76 (s, 3H), 3,67-3,62 (m, 1H), 3,58-3,55 (m, 1H), 3,15-3,10 (m, 4H), 2,82-2,64 (m, 1H), 2,45 (br, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,06-1,96 (m, 1H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C25H31N8O3, 491,2519; encontrado, 491,2473.

(S)-8-(1-acriloN-3-piperidiml)-2-((2-metoxi)-4-(4-metiM-piperazmN)feml)ammo)-7(8H)pteridmona (Compuesto 3) (Comparativo)

sólidos de color rojo naranja, rendimiento del 38%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 69,14 (br, 1H), 8,71 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,22-7,21 (m, 1H), 6,80-6,62 (m, 2H), 6,48-6,47 (m, 1H), 6,15-6,08 (m, 1H), 5,71-5,60 (m, 1H), 4,82-4,76 (m, 0,6H), 4,34-4,24 (m, 1H), 3,95-3,92 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,14 (br, 4H), 2,46 (br, 4H), 1,64 (br, 2H), 1,34-1,30 (m, 1H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C26H33N8O3, 505,2676; encontrado, 505,2676.

M-(3-(2-((3-metoxi-4-(metiM-piperaziml)feml)ammo)-7-oxo-8(7M)-pteridmN)feml)acrilamida (Compuesto 4)

sólidos color rojo, rendimiento 55%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6 10,41 (s, 1H), 10,00 (br, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,87 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,54 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,04-6,95 (m, 2H), 6,48 6,42 (m, 2H), 6,27 (dd, J =17,2, 2,0 Hz, 1H), 5,77 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 3,55 (s, 3H), 2,83 (br, 4H), 2,43 (br, 4H), 2,22 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C27H29N8O3, 513,2363; encontrado, 513,2362.

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W-(3-((3-metaxi-4-(4-metil-1-piperaziml)feml)ammo)-7-oxo)-8(7H)pteridmN)feml)acrilamida (Compuesto 5)

sólidos color amarillo, rendimiento 63%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da): 510,41 (s, 1H), 10,04 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,87 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,55 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,13-7,10 (m, 2H), 6,70-6,69 (m, 1H), 6,45 (dd, J = 17,0, 10,2 Hz, 1H), 6,26 (dd, J =17,0, 2,0 Hz, 1H), 5,76 (dd, J =10,2, 2,0 Hz, 1H), 2,70 (br, 4H), 2,44 (br, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,97 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C27H29N8O2, 497,2413; encontrado, 497,2428.

W-(3-(2-(2-metoxi-5-metil-4-(4-metil-1-piperaziml)feml)ammo)-7-oxo-8 (7H)-pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 6) (Comparativo)

sólidos color rojo, rendimiento 50%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,38 (s, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,82 (d, J =8,0 Hz, 1H), 7,74 (s, 1H), 7,53 (t, J =8,0 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,10 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,45 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 6,25 (dd, J =16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,77-5,76 (m, 1H), 3,78 (s, 1H), 2,76 (br, 4H), 2,46 (br, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,85 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C28H31N8O3, 527,2519; encontrado, 527,2518.

W-(3-(2-((4-(acetiM-piperaziml)-2-metoxifeml)ammo)-7-oxo-8(7H)-pteridiml)feml)acrilamida (Compuesto 7) (Comparativo)

sólidos color rojo, rendimiento 50%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,36 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 7,52 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,0

18

Hz, 1H), 6,57 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,45 (dd, J = 17,0, 2,0 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 17,0, 10,0 Hz, 1H), 6,09 (br, 1H), 5,77 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 3,77 (s, 1H), 3,58-3,54 (m, 4H), 3,06-3,00 (m, 4H), 2,05 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C28H29N8O4, 541,2312; encontrado, 541,2312.

W-(3-(2-(4-(4-metil-1-piperaziml)etil)feml)ammo)-7-oxo-8(7H)-pteridiml)acrilamida (Compuesto 8) (Comparativo)

sólidos color amarillo, rendimiento 50%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,41 (s, 1H), 10,13 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,88 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,57 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,31-7,30 (m, 2H), 7,14 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,86 (br, 2H), 6,45 (dd, J = 16,8, 10,0 Hz, 1H), 6,26 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,77 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 2,56 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,39-2,31 (m, 9H), 2,15 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C28H31N8O2, 511,2570; encontrado, 511,2571.

M-(3-(2-(metoxietoxi)-4-(4-metil-1-piperaziml)feml)ammo)-7-oxo-8(7tf)-pteridmil)feml)acrilamida (Compuesto 9) (Comparativo)

sólidos color naranja, rendimiento del 69%. mp 187,3-188,1 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,40 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,53 (br, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,85 (d, J=6,4 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,53 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,34-7,33 (m, 1H), 7,10 (d, J=8,0 Hz, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,46 (dd, J = 16,8, 10,0 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 16,8, 1,6 Hz, 1H), 6,13-6,09 (m, 1H), 5,78 (dd, J = 10,0, 1,6 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 3,35 (s, 3H), 3,00 (br, 4H), 2,43 (t, J=4,4 Hz, 4H), 2,22 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M ^h]+ calculado para C28H31N8O4, 543,2468; encontrado, 543,2476.

W-(3-(2-(metoxietoxi)-4-(4-metil-1-piperaziml)feml)ammo)-7-oxo-8(7 H)-pteridiml)feml)acrilamida (Compuesto 10) (Comparativo)

19

sólidos de color rojo naranja, rendimiento del 61%. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 58,78 (s, 1H), 8,65-8,62 (m, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,41 (br, 3H), 6,93 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 6,44 (s, 1H), 6,33 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 6,10 (dd, J = 17,0, 10,4 Hz, 1H), 5,78 (d, J = 10,4 Hz, 1H),4,10 (br, 2H), 3,69 (br, 2H), 3,43 (s, 3H), 3,08 (br, 4H), 2,54 (br, 4H), 2,34 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C29H33N8O4, 557,2625; encontrado, 557,2621.

W-(3-(2-(4-(2-hidroxietil)-1-piperaziml)-2-metoxifeml)ammo)-7-oxo-8 (7H)-pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 11) (Comparativo)

sólidos color naranja, rendimiento del 53%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,39(s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,85 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 752 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,45 (dd, J = 16,8, 10,0 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 16,8,2,0 Hz, 1H), 6,02 (br, 1H), 5,78 (dd, J = 10,0,2,0 Hz, 1H), 4,43 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,56-3,52 (m, 2H), 3,04 (br, 4H), 2,53 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,44 (t, J = 6,0 Hz, 1H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+calculado para C29H33N8O3, 543,2468; encontrado, 543,2466.

W-(3-(2-(4-(4-metil-1-piperaziml)etN)feml)ammo)-7-oxo-8(7H)-pteridmN)acrilamida (Compuesto 12)

sólidos color rojo, rendimiento 50%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,41 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,88-7,87 (m, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,52 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,46 (dd, J = 17,2, 10,0 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 17,2, 2,0 Hz, 1H), 6,04 (br, 1H), 5,78 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,60-3,58 (m, 2H), 2,58 (t, J = 10,8 Hz, 2H), 2,20-2,18 (m, 7H), 1,82-1,79 (d, J =12 Hz, 2H), 1,48-1,40 (m, 2H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C29H33N8O3, 541,2676; encontrado, 541,2674.

M-(3-(6-isopropil-2-((4-(4-metiM-piperazmN)feml)ammo)-7-oxo-8(7tf)-pteridmN)feml)acrilamida (Compuesto 13) (Comparativo)

20

Sólidos color rojo 163 mg, rendimiento 75%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 610,42 (s, 1H), 9,85 (br, 1H), 8,79 (s, 1H), 7,91 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,55(t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,25 (s, 2H), 7,11 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,59-6,58 (m, 2H), 6,45 (dd, J = 17,0, 10,2 Hz, 1H), 6,26 (dd, J = 17,0, 2,0 Hz, 1H), 5,78 (dd, J = 10,2, 2,0 Hz, 1H), 3,45-3,38 (m, 1H), 2,97 (br, 4H), 2,42 (br, 4H), 2,21 (s, 3H), 1,25 (d, J = 6,8 Hz, 6H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C29H33N8O2, 525,2726; encontrado, 525,2728.

W-(3-(2-(metoxi-4-(4-metiM-piperaziml)feml)ammo)-7-oxo-6-feml-8 (7H)-pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 14)

sólidos color rojo, rendimiento 75%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6 10,41 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,21 8,19 (m, 2H), 7,89-7,88 (m, 1H),7,75 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 7,54 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50-7,48 (m, 3H), 7,35 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,17-7,14 (m, 1H), 6,54 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,46 (dd, J =17,0, 10,2 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 17,0, 2,0 Hz, 1H), 6,05 (br, 1H), 5,78 (dd, J =10,2, 2,0 Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,05 (br, 4H), 2,45 (br, 4H), 2,23 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C33H33N8O3, 589,2676; encontrado, 589,2676.

8-(1-acriloil-4-piperidinil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7(8H)-pteridinona (Compuesto 15) (Comparativo)

sólidos color naranja, rendimiento del 53%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 68,83 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,53 (br, 1H), 6,85 (dd, J = 17,2, 10,4 Hz, 1H), 6,61 (d, J =2,4 Hz, 1H), 6,47 (d, J =8,0 Hz, 1H),6,13(dd, J =17,2, 2,4 Hz, 1H), 5,70 (dd, J =10,4,2,4 Hz, 1H), 5,29 (br, 1H), 4,60 (d, J =10,4 Hz, 1H), 4,20 (d, J =12,8 Hz, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,13 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,59-2,53 (m, 3H), 2,45 (t, J = 4,8 Hz, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,67 (d, J = 10,0 Hz, 2H), 1,23 (s, 1H).

(R)-8-((1-acriloil-3-piperidiml)metil)-2-((2-metoxi-4-(4-metiM -piperazinil)fenil)amino)-7(8H)-pteridinona (Compuesto 16) (Comparativo)

21

sólidos color naranja, rendimiento del 61%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 68,92 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 7,91-7,89 (m, 1H), 7,50-7,44 (m, 1H), 6,75 (dd, J = 16,8, 10,4 Hz, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,56-6,51 (m, 1H), 6,02 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,64-5,54 (m, 1H), 4,13-4,10 (m, 1H), 3,94-3,83 (m, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,16 (br, 4H), 3,03-2,98 (m, 1H), 2,84-2,74 (m, 1H), 2,47 (t, J= 4,8 Hz, 4H), 1,92-1,91 (m, 1H), 1,64-1,57 (m, 2H), 1,30-1,23 (m, 3H).

(S)-8-((1-acriloil-3-piperidiml)metil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-7(8H)-pteridinona (Compuesto 17) (Comparativo)

sólidos color naranja, rendimiento del 54%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 68,92 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 7,91-7,89 (m, 1H), 7,49-7,43 (m, 1H), 6,75 (dd, J = 16,4, 10,4 Hz, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,56-6,51 (m, 1H), 6,02 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,64-5,54 (m, 1H), 4,13-4,08 (m, 1H), 3,94-3,86 (m, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,16 (br, 4H), 3,03-2,97 (m, 1H), 2,84-2,74 (m, 1H), 2,47 (t, J= 4,8 Hz, 4H), 1,92 (br, 1H), 1,64-1,57 (m, 2H), 1,30-1,20 (m, 3H).

W-(3-(2-((2-(dimetilammo)etil)(metil)ammo)-2-metoxifeml)ammo)-7-oxo-8(7H)-pteridiml)feml)acrilamida (Compuesto 18) (Comparativo)

sólidos color rojo, rendimiento 61%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6):610,37(s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,41 (br, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,84-7,83 (m, 1H),7,69(t, J= 2,0 Hz, 1H), 7,51 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 7,26-7,19 (m, 1H), 7,09 (d, J =8,0 Hz, 1H), 6,45 (dd, J = 16,8, 10,4 Hz, 1H), 6,29-6,24 (m, 2H), 5,77 (dd, J = 10,4, 2,0 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,35-2,33 (m, 2H), 2,19 (s, 6H).

M-(3-(2-((2-(dimetilammo)etil)(metil)ammo)-2-metoxifeml)ammo)-6-isopropil-7-oxo-8(7H)-pteridiml)acrilamida (Compuesto 19) (Comparativo)

sólidos color naranja, rendimiento del 62%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)6 10,37 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,84 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 769 (s, 1H), 7,51 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 7,26 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 7,09 (d, J= 8,4 Hz, 1H), 6,45 (dd,

22

J= 16,8, 10,4 Hz, 1H), 6,29-6,24 (m, 2H), 5,87 (br, 1H), 5,76 (dd, J = 10,4, 2,0 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,43-3,38 (m, 1H), 2,84 (s, 3H), 2,34 (t, J= 6,8 Hz, 2H), 2,19 (s, 6H), 1,24 (d, J= 6,8 Hz, 6H).

W-(3-(2-((2-(dimetilammo)etil)(metil)ammo)-2-metoxifeml)ammo)-7-oxo-6-feml-8(7H)-pteridiml)acrilamida (Compuesto 20)

sólidos color rojo, rendimiento 64%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6):<510,39 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,38 (br, 1H), 8,21 8,18 (m, 2H), 7,87 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,53 (t, J =8,0 Hz, 1H), 7,49-7,47 (m, 3H), 7,28 (br, 1H), 7,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,46 (dd, J = 16,8, 10,0 Hz, 1H), 6,29-6,25 (m, 2H), 5,83 (br, 1H), 5,76 (dd, J = 10,0, 2,0 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,35 (br, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,35 (t, J= 5,6 Hz, 2H), 2,20 (s, 6H).

(R)-8-((1-acriloil-3-piperidmil)metil)-6-isopropil-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperaziml)feml)ammo)-7(8H)-pteridinona (Compuesto 21) (Comparativo)

sólidos color amarillo, rendimiento 55%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6).<58,70(br, 2H), 7,57-7,52 (m, 1H), 6,76 (dd, J = 16,4, 10,4Hz, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,57-6,51 (m, 1H), 6,05-5,98 (m, 1H), 5,64-5,53 (m, 1H), 4,15-3,96 (m, 3H), 3,90 3,87 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,16 (br, 4H), 3,04-2,75 (m, 2H), 2,47 (t, J =3,6 Hz, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,94 (br, 1H), 1,66 1,61 (m, 2H), 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 6H).

(R)-8-(1-acriloil-3-piperidinil)-2-((2-metoxi)-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7('8R)pteridinona (Compuesto 22) (Comparativo)

23

sólidos color naranja, rendimiento del 46%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da): 59,11 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,20 (br, 1H), 6,81 (br, 1H), 6,68-6,62 (m, 2H), 6,41 (br, 1H), 6,14-6,08 (m, 1H), 5,12-5,61 (m, 1H), 4,18-4,12 (m, 1H), 4,35-4,24 (m, 1H), 3,95-3,82 (m, 1H), 3,13 (s, 3H), 3,14 (br, 4H), 2,46 (br, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,62 (br, 2H), 1,34-1,26 (m, 1H).

W-(2-((dimetilammo)etil)(metil)ammo)-5-((6-isopropil-8-metil)-7-oxo-7,8-dihidrogeno-2-pteridiml)ammo)-4-metoxifenil)acrilamida (Compuesto 23) (Comparativo)

sólidos color amarillo, rendimiento 43%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,08 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 1,02 (s, 1H), 6,42 (dd, J =16,4, 10,0 Hz, 1H), 6,24 (d, J = 16,4Hz, 1H), 5,15 (d, J =10,4 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,59 (s, 3H), 3,43 -3,36 (m, 1H), 2,89 (br, 2H), 2,11 (s, 3H), 2,35 (br, 2H), 2,23 (s, 6H), 1,20 (d, J = 6,8 Hz, 6H). (,S)-8-(1-acriloil-3-pirrolidinil)-6-isopropil-2-((3-metil-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-7(8H)-pteridinona (Compuesto 24 (Comparativo)

sólidos color amarillo, rendimiento 81%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 59,90 (s, 1H), 8,11 (s, 0,6H), 8,16 (s, 0,4H), 1,49-1,41 (m, 2H),6,93 (t, J =1,2 Hz, 1H),6,13-6,41 (m, 1H), 6,23-6,15 (m, 1H),6,03-5,94(m, 1H),5,16-5,65(m, 1H),4,22 (t,J = 8,8 Hz,0,6H), 4,02-3,86(m, 1,1H),3,83-3,65 (m, 1,1H), 3,41-3,40 (m, 1H), 2,92-2,85 (m, 1H), 2,18 (br,4H), 2,46(br, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,14-2,01 (m, 1H), 1,20 (d, J =6,4 Hz,6H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C28H31N8O2 [M+H]+ 511,3039; encontrado, 511,3038.

(,S)-8-(1-acriloN-3-pirrolidmil)-2-((3-metN-4-(4-metiM-piperazmN)feml) amino)-6-fenil-7(8H)-pteridinona (Compuesto 25)

24

sólidos color naranja, rendimiento del 77%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,09 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,13 (br, 2H),7,52-7,49 (m, 5H),6,98-6,96 (m, 1H), 6,74-6,48 (m, 1H),6,23-6,15(m, 1H),6,13-6,02(m, 1H),5,73-5,65(m, 1H),428-4,24 (m, 0,5H), 4,12-3,90(m, 1,7H),3,85-3,67 (m, 1,8H), 3,52-3,44 (m, 1H), 2,94-2,89 (m, 1H), 2,82 (br,4H), 2,28(s, 3H), 2,22(s, 3H).HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C31H35N8O2 [M+H]+ 551,2883; encontrado, 551,2880.

fS)-8-(1-acriloil-3-pirrolidiml)-6-isopropil-2-((2-metoxi-4-(metiM-piperaziml)feml)ammo)-7(8H)-pteridmona (Compuesto 26) (Comparativo)

sólidos color naranja, rendimiento del 54%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 58,71 (s, 1H), 8,69 (s, 0,5H), 8,68 (s, 0,5H),7,39 (t, J = 7,6 Hz, 1H),6,57 (s, 1H),6,41 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,4 Hz, 10,8 Hz, 1H),5,86-5,80 (m, 1H), 5,72-5,63(m, 1H),4,12(t, J = 8,8 Hz,0,6H),3,91-3,86(m,0,6H),3,77 (s,3H), 3,69-3,64(m, 1H),3,59 (br,1H), 3,40-3,38 (m, 0,8 H),3,12(br, 4H), 2,81-2,70(m, 1H),2,45 (br,4H), 2,23 (s,3H), 2,09-1,98(m, 1H),1,18 (d, J= 6,4 Hz,6H). HRMS (lESI)(m/z): [M H]+ calculado para 533,2989; encontrado, 533,2994.

(S)-8-(1-acriloil-3-pirrolidiml)-2-((2-metoxi-4-(4-metiM-piperaziml)feml)ammo)-6-feml-7(8H)-pteridmona (Compuesto 27)

sólidos color rojo, rendimiento 63%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 58,90 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,10 (br, 2H),7,46 (br, 3H),7,41-3,39 (m, 1H), 6,58-6,42 (m, 3H),6,17(dd, J =16,4 Hz, 10,4 Hz, 1H),5,98-5,82 (m, 1H), 5,72-5,64(m, 1H),4,16 (t,J = 8,8 Hz,0,6H), 3,95-3,90 (m, 0,6H),3,78 (s,3H), 3,71(t, J = 9,6 Hz,0,8H), 3,60(br, 1H), 3,40-3,34 (m, 1H), 3,13 (br,4H), 2,83-2,71 (m, 1H), 2,45 (br,4H), 2,23(s, 3H), 2,12-2,02(m, 1H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C31H35N8O3 [M+H]+ 567,2832; encontrado, 567,2831.

25

(,S,E)-8-(1-(dimetilammo)-2-butenoil)-3-pirrolidmil)-6-isopropil-2-((3-metil-4-(4-metil-1-piperaziml)feml)ammo)-7(8H)-pteridinona (Compuesto 28) (Comparativo)

sólidos color naranja, rendimiento del 89%. 1H RMN (400 MHz, CDCh) 58,75 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,73 (s, 0,6H), 7,65 (s, 0,4H),7,02-6,89 (m, 1H),6,55-6,50 (m, 2H), 6,42-6,20 (m, 1H),6,17-6,07(m, 1H),4,48-4,45 (m, 0,5H),4,18-3,99(m, 2H),3,90 (s,3H), 3,83(t,J = 8,8 Hz, 0,8H),3,76-3,69 (m, 0,6H), 3,65-3,56 (m, 0,7H), 3,52-3,44(m, 1H), 3,22-3,18 (m, 4H), 3,15 (t, J = 6,0 Hz,1H), 3,04(d,J = 5,6 Hz, 2H), 2,62-2,60(br, 4H), 2,38(s, 3H), 2,30(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,14-2,10 (m, 1H), 1,99(s, 2H), 1,26(t, J= 6,0 Hz, 6H).

(,S,E)-8-(1-(dimetilammo)-2-butenoil)-3-pirrolidiml)-2-((3-metil-4-(4-metiM-piperazmil)feml)ammo)-6-feml-7(8H)-pteridinona (Compuesto 29)

sólidos color naranja, rendimiento del 82%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,10 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,12 (s, 2H),7,49 (br, 5H),6,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,72-6,61 (m, 1H),6,54-6,31(m, 1H),6,10-6,00(m, 1H),4,28-4,24 (m, 0,6H),4,05-4,00 (m0,7H), 3,93-3,86 (m, 1,5H), 3,81-3,76 (m, 1,5H), 3,73-3,67 (m, 1H),3,55(br, 4H),3,18 (d,J = 6,8 Hz,2H), 3,08(d, J = 5,2 Hz, 1H), 2,83(br, 4H), 2,57 (s, 3H), 2,32 (s, 1,5H), 2,30 (s, 1,5H), 2,57(s, 3H), 2,22(s, 3H), 2,17 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C34H42N9O2 [M+H]+ 608,3461; encontrado, 608,3466.

(E)-8-(1-(dimetilamino)-2-butenoil)-4-piperidinil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-7(8H)pteridinona (Compuesto 30) (Comparativo)

26

Sólidos color rojo (rendimiento 71%). mp 157,3-157,6 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da): 58,86 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,54 (br, 1H), 6,64-6,62(m, 3H), 6,47 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,27 (br, 1H), 4,61-4,58 (m, 1H), 4,21-4,18 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,14(br, 4H), 3,05-3,04 (br, 2H),2,57 (br, 4H), 2,46 (t, J = 4,0 Hz, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,16 (s, 6H), 1,67 (br, 2H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C29H40N9O3, 562,3254; encontrado, 562,3259.

(S,E)-8-(1-(dimetilammo)-2-butenoil)3-pirrolidiml)-2-((2-metoxi-4-(4-metiM -piperaziml)feml)ammo-6-feml-7(8H)pteridinona (Compuesto 31)

sólidos color naranja, rendimiento del 89%. mp 253,1-254,0 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6);59,92 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,80 (d, J= 3,2 Hz, 1H), 8,12-8,11 (m, 2H), 7,31-7,67 (m, 1H), 7,47 (m, 3H), 7,42 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,71-6,62 (m, 1H), 6,59 (br, 1H), 6,46-6,42 (m, 1H), 4,19-4,10 (m, 2H), 3,94-3,89 (m, 1H), 3,71 (t, J =10,8 Hz, 1H), 4,60-3,59 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,14 (br, 4H), 3,09-3,03 (m, 1H), 3,00 (d, J =5,6, 1H), 2,87-2,74 (m, 1H), 2,47 (br, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,13 (s, 3H). Pureza por HPLC: 98,1%, tiempo de retención = 9,63 min.HRMS (ESI)(m/z): [M+H]+ calculado para C34H42N9O3 [M+H]+ 624,3411; encontrado, 624,3413.

N-(3-(6-isopropil-2-((3-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7-oxo -8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 32) (Comparativo)

Sólido color amarillo (rendimiento 69%). mp 249,0-249,5 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,42 (s, 1H), 9,83 (br, 1H), 8,82 (s, 1H), 7,87 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,53 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 7,12 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,04 (br, 1H), 6,96 (br 1H), 6,49-6,42 (m, 2H), 6,26 (dd, J =16,8 Hz, 2,0Hz, 1H), 5,77 (dd, J =10,0 Hz 2,0Hz, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,44 3,39 (m, 1H), 2,82 (br, 4H), 2,42 (br, 4H), 2,21 (s, 3H), 1,25 (d, J = 6,8 Hz, 6H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C30H35NsO3, 555,2832; encontrado, 555,2838.

N-(2-((3-metaxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7-oxo-6-(trifluorometil)-8(7H)-pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 33) (Comparativo)

27

Sólidos color marrón (rendimiento 59%). mp >300 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,44 (s, 1H), 10,40 (s, 1H), 9,00 (s, 1H), 7,88 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,56 (t, J= 8,0 Hz, 1H), 7,14 (d, J= 8,0 Hz, 1H), 7,01 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 6,95 (s 1H), 6,49-6,42 (m, 2H), 6,27 (d, J= 16,4 Hz, 1H), 5,77 (d, J= 10,4 Hz 1H), 3,53 (s, 3H), 2,83 (br, 4H), 2,41 (br, 4H), 2,21 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M+H]+ calculado para C28H28N8O3F3, 581,2236 ; encontrado, 581,2241.

(S)-8-(1 -acriloil-3-pirrolidinil)-2-((3-metil-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil) amino)-7(8H)pteridinona (Compuesto 34) (Comparativo)

Sólido color amarillo (rendimiento 45%). mp 215,5-215,7 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,08 (s, 1H), 8,81 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,47-7,42 (m, 2H), 6,93 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 6,72-6,46 (m, 1H), 6,22-6,14 (m, 1H), 598-5,88 (m, 1H), 5,75-5,64 (m, 1H), 4,20 (t, J= 8,8, 1H), 4,00-3,64 (m, 4H), 3,47-3,40 (m, 1H), 2,78 (br, 4H), 2,45 (s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,20 (br, 4H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C25H31N8O2 475,2570 ; encontrado, 475,2550.

(S)-8-(1-acriloil-30pirrolidinil)-2-((3-metil-4(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 35)

Sólidos color naranja (rendimiento 40%). mp 208,3-208,8 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,10 (s, 1H), 8,88 (d, J = 3,2, 1H), 8,13-8,12 (m, 2H), 7,48 (d, J = 2,4Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,34-7,27 (m, 2H), 6,81 (t, J = 8,4Hz, 1H), 6,74 6,48 (m, 1H), 6,23-6,15 (m, 1H), 6,12-6,04 (m, 1H), 5,76-5,65 (m, 1H), 4,25 (t, J = 9,2, 1H), 4,13-3,76 (m, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,74-3,67 (m, 1H), 3,51-3,44 (m, 1H), 2,91 (br, 4H), 2,44 (br, 4H), 2,21 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C31H35N8O3, 567,2832; encontrado, 567,2835.

(S,E)-8-(1-(dimetilamino)-2-butenoil)3-pirrolidinil)-2-((3-metil-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-6-isopropil-7(8H)pteridinona (Compuesto 36) (Comparativo)

28

Sólido color rojo (rendimiento 62%). mp 159,9-160,7 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da): 59,94 (s, 1H), 8,77 (d, J = 3,6Hz, 1H), 7,49-7,40 (m, 2H), 6,94 (d, J = 8,4, 1H), 6,72-6,61 (m, 1H), 6,53 (d, J= 15,2Hz, 0,5H), 6,34 (d, J= 15,2Hz, 0,5H), 6,04-5,91 (m, 1H), 4,22 (t, J= 8,4Hz, 1H), 4,00-3,64 (m, 4H), 3,40-3,35 (m, 2H), 3,22 (t, J = 6,4Hz, 1H), 3,10 (d, J = 6,0Hz, 1H), 2,82 (br, 4H), 2,61 (br, 4H), 2,34 (d, 11,2Hz, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,20 (br, 4H), 2,19 (s, 3H), 1,20 (d, J= 6,8Hz, 6H). HRMS (ESI) (m/z): [M H]+ calculado para C31H44N9O2, 574,3618; encontrado, 574,3584.

N-(3-(6-isopropil-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7-oxo -8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 37) (Comparativo)

Sólidos color naranja (rendimiento 65%). mp 242,9-243,9 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,42 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,87 (d, J= 7,2Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,53 (t, J= 8,0Hz, 1H), 7,34 (d, J= 8,8Hz, 1H), 7,10 (d, J= 8,8Hz, 1H), 6,53 (d, J= 2,0Hz, 1H), 6,46 (dd, J= 16,8Hz, 10,0Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 16,8Hz, 2,0Hz, 1H), 6,12-6,00 (m, 1H), 5,78 (dd, J= 10,0Hz, 2,0Hz), 3,76 (s, 3H), 3,44-3,41 (m, 1H), 3,04 (br, 4H), 2,43 (t, J= 4,8Hz, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,25 (d, J= 6,8Hz, 6H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C30H35N8O3, 555,2832; encontrado, 555,2821.

N-(3-(2-(metoxi-5-metil-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7-oxo-6 -fenil-8(7H)pteridinonil)fenil)acrilamida (Compuesto 38)

Sólido color amarillo (rendimiento 62%). mp 292,9-293,4 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,41 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 8,36 (br, 1H), 8,21-8,18 (m, 2H), 7,84 (d, J= 8,0Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,55 (t, J= 8,0Hz,1H), 7,50-7,48 (m, 3H), 7,33 (s, 1H), 7,16 (d, J= 7,6Hz, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,45 (dd, J=16,8Hz, 10,0Hz, 1H), 6,26 (dd, J=16,8Hz, 1,6Hz), 5,77

29

(dd, J= 10,0Hz, 1,6Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 2,77 (br, 4H), 2,48 (br, 4H), 2,25 (s, 3H), 1,85 (br, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C34H35N8O3, 603,2832; encontrado, 603,2834.

N-(3-(6-isopropil-2-((2-metoxi-5-metil-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 39) (Comparativo)

sólidos color naranja (rendimiento 60%). mp 227,5-228,5 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,40 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,82 (d, J= 8,0Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,53 (t, J= 8,0Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,11 (d, J= 7,6Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,44 (dd, J= 16,8Hz, 10,0Hz, 1H). 6,25 (dd, J = 16,8Hz, 0,8Hz, 1H), 5,75 (d, J = 10,0Hz, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,43-3,39 (m, 1H), 2,77 (br, 4H), 2,26 (s, 3H), 1,85 (br, 3H), 1,24 (d, J = 6,8Hz, 6H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C31H37NsO3, 569,2989; encontrado, 569,2989.

(S)-8-(1-acriloil-3-pirrolidinil)-2-((4-((dimetilamino)etil)(metil)amino) -3-metilfenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 40)

sólidos color rojo (rendimiento 40%). mp 256,1-256,4 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,08 (s, 1H), 8,88 (d, J = 3,2Hz, 1H), 8,13-8,12 (m, 2H), 7,52-7,45 (m, 5H), 7,02 (dd, J = 8,4Hz, 5,6Hz, 1H), 6,74-6,49 (m, 1H), 6,23-6,15 (m, 1H), 6,12-6,02 (m, 1H), 5,75-5,65 (m, 1H), 4,28-4,23 (m, 1H), 4,15-4,12 (m, 1H), 3,94-3,68 (m, 3H), 3,52-3,44 (m, 1H), 2,90 (t, J = 6,8Hz, 2H), 2,61 (s, 3H), 2,35 (t, J = 6,8Hz, 2H), 2,22 (s, 3H), 2,13 (br, 6H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C31H37NsO2, 553,3039; encontrado, 553,3031.

(S)-8-(1-acriloil-3-pirrolidinil)-2-((4-((dimetilamino)etil)(metil)amino) -3-metoxifenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 41)

30

Sólido color rojo oscuro (rendimiento 49%). mp 260,0-260,2 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da): 5 10,09 (s, 1H), 8,88 (d, J = 2,8Hz, 1H), 8,131 (br, 2H), 7,49-7,48 (m, 3H), 7,34-7,25 (m, 2H), 6,81 (t, J = 7,2Hz, 1H), 6,76-6,49 (m, 1H), 6,23-6,05 (m, 2H), 5,75-5,65 (m, 1H), 4,25 (t, J = 8,4Hz, 1H). 4,06-3,82 (m, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,74-3,67 (m, 1H), 3,05 (t, J = 7,2Hz, 2H), 2,94-2,79 (m, 1H), 2,68 (s, 3H), 2,36 (t, J=7,2Hz, 2H), 2,13 (s, 6H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C31H37N8O3, 569,2989; encontrado, 569,2988.

N-(3-(3-metaxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7-oxo-6-fenil-8 (7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 42)

sólidos color rojo (rendimiento 81%). mp 264,7-265,5 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,43 (s, 1H), 10,01 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 8,22-8,19 (m, 2H), 7,90 (d, J= 7,6Hz, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,56 (t, J= 8,0Hz, 1H), 7,49 (t, J= 3,2Hz, 1H), 7,17 (d, J= 8,4Hz, 1H), 7,07 (br, 1H), 6,97 (br, 1H), 6,46 (dd, J = 16,8Hz, 10,0Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 16,8Hz, 1,6Hz, 1H), 5,77 (dd, J = 10,0Hz, J = 1,6Hz,1H), 3,56 (s, 3H), 2,83 (br, 4H), 2,41 (br, 4H), 2,21 (s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C33H33N8O3, 589,2676; encontrado, 589,2642.

N-(3-(6-ciclohexil-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 43)

sólidos color amarillo (rendimiento 82%). mp 268,9-269,4 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,40 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,85 (d, J = 8,0Hz, 1H), 7,69 (t, J = 1,6Hz, 1H), 7,52 (t, J = 8,0Hz, 1H), 7,33 (d, J = 9,2Hz, 1H), 7,10 7,08 (m, 1H), 6,53 (d, J = 2,4Hz, 1H), 6,45 (dd, J = 16,8Hz, 10,0Hz, 1H), 6,26 (dd, J = 16,8Hz, 2,0Hz, 1H), 6,06 (br,

31

1H), 5,77 (dd, J = 10,0Hz, 2,0Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,03 (br, 4H), 2,43 (t, J= 4,8Hz, 4H), 2,22 (s, 3H), 3,41 (d, J = 12,0Hz, 2H), 1,82 (d, J = 12,0Hz, 2H), 1,72 (d, J = 12,0Hz, 2H), 1,53-1,23 (m, 6H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C33H39N8O3, 595,3145; encontrado, 595,3141.

(S)-8-((1-acriloil-3-piperidinil)metil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 44)

sólidos color rojo (rendimiento 49%). mp 208,3-209,3 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 68,88 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,18-8,16 (m, 2H), 7,59-7,52 (m, 1H), 7,47 (t, J= 3,2Hz, 3H), 6,75 (dd, J= 16,4Hz, 10,0, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,55 (dd, J=17,2Hz, 8,8Hz, 1H), 6,03 (d, J= 16,4Hz, 1H), 5,58 (dd, J = 32,8Hz, 10,0Hz, 1H), 4,19-4,06 (m, 3H), 3,89-3,83 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,17 (br, 4H), 3,05-2,55 (m, 2H), 2,48 (t, J= 4,8Hz, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (br, 1H), 1,66 (br, 2H), 1,26-1,23 (m, 2H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C33H3gNsO3, 595,3145; encontrado, 595,3157.

(R)-8-(1-acriloil-3-piperidinil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 45)

sólidos color rojo (rendimiento 38%). mp 134,9-135,1 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 69,17 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,11-8,09 (m, 2H), 7,77-7,46 (m, 3H), 7,24 (br, 1H), 6,84-6,63 (m, 2H), 6,49 (s, 1H), 6,06-6,19 (m, 1H), 5,67 (dd, J=37,2Hz, 9,6Hz, 1H), 5,00-4,27 (m, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,14 (s, 4H), 2,49 (s, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,69 (br, 2H), 1,35 (br, 1H), 1,23 (s, 1H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C32H37N8O3, 581,2989; encontrado, 581,2972.

(R)-8-(1-acriloil-3-piperidinil)-6-ciclohexil-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-7(8H)pteridinona (Compuesto 46)

32

sólidos color amarillo (rendimiento 53%). mp 94,2-94,7 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 68,96(s, 1H), 8,65(s, 1H), 7,23 (br, 1H), 6,83-6,61(m, 2H), 6,47 (s, 1H), 6,15-6,08 (m, 1H), 5,66 (dd, J = 36Hz, 9,6Hz, 1H), 4,84 (br, 1H), 4,29 (br, 1H), 3,95 (br, 1H), 3,72 (s, 3H), 3,13 (br, 4H), 2,46 (br, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,81-1,63(m, 7H), 1,44-1,23 (m, 9H). HRMS (ESl)(m/z): [M H]+ calculado para C32H43N8O3, 587,3458; encontrado 587,3458.

N-(3-(3-metil-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-7-oxi-6-fenil-8(7 H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 47)

sólidos color naranja (rendimiento 68%). mp 265,0-265,2 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,43(s, 1H), 10,04(s, 1H), 8,92(s, 1H), 8,22-8,19(m,2H), 7,89(d, J = 8,0Hz, 1H),7,81(s, 1H), 7,57(t, J = 8,0Hz, 1H), 7,50-7,49(m, 3H), 7,25(s, 1H), 7,19(s, 1H), 7,17(s, 1H), 6,71(br, 1H), 6,46(dd, J=16,8Hz, 10,4Hz, 1H), 6,26(dd, J=16,8Hz, 1,6Hz, 1H), 5,77(dd, J= 10,4Hz, 1,6Hz, 1H), 2,7(br, 4H), 2,44(br, 4H), 2,23(s, 3H), 1,98(s, 3H).HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C33H33N8O2, 573,2726; encontrado, 573,2729.

N-(3-(2-(2-metoxi-4-(4-(4-metil-1 -piperazinil)piperidinil)fenil)amino)-7-oxo-6-fenil-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 48)

sólidos color rojo (rendimiento 40%). mp>300°C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6 10,44(s, 1H), 8,86(s, 1H), 8,41 (s, 1H), 8,20-8,19(m,2H), 7,90(br, 1H), 7,75(s, 1H), 7,54(t, J = 8,0Hz, 1H), 7,50-7,48(m, 3H), 7,33(d, J = 6,4Hz,1H), 7,15(d,

33

J = 8,0Hz, 1H), 6,52(br, 1H), 6,47(dd, J=16,8Hz, 10,0Hz, 1H), 6,27(dd, J=16,8Hz, 1,6Hz, 1H), 6,04(br, 1H), 5,78(dd, J= 10,0Hz, 1,6Hz), 3,77(s, 3H), 3,61(d, J= 8,4Hz, 2H), 2,60-2,54(m, 5H), 2,39-2,30(m, 5H), 1,81(d, J = 11,6Hz,2H), 1,51-1,43(m, 2H).HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C38H42N9O3, 672,3411; encontrado, 672,3407.

8-(1-acriloil-3-pirrolidinil)-2-((3-metil-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 49)

sólidos color naranja (rendimiento 65%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,08(s, 1H), 8,87(d, J = 2,8Hz,1H), 8,13-8,11(m, 2H), 7,51-7,46(m, 5H), 6,97-6,93(m, 1H), 6,70(dd, J = 16,8Hz, 10,4, 1H), 6,51(dd, J = 16,8Hz, 10,4Hz, 1H), 6,23-6,15(m, 1H), 6,11-6,01(m, 1H), 5,75-5,65(m, 1H), 4,25(t, J = 8,8Hz, 1H), 4,06-3,68(m, 3H), 3,52-3,45(m, 1H), 2,95-2,86(m, 1H), 2,79(br, 4H), 2,46(br, 4H), 2,23(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,17-2,12(m, 1H).HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C3i H3sN8O2, 551,2883; encontrado, 551,2883.

(S)-8-(1-acriloil-3-pirrolidinil)-6-ciclohexil-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7(8H)pteridinona (Compuesto 50)

sólidos color naranja (rendimiento 49%). mp 117,9-118,2 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,71(s, 1H), 8,66(d, J=3,6Hz,1H), 7,39(t, J=8,0Hz,1H), 6,63-6,59(m, 0,5H), 6,57(s, 1H), 6,49-6,45(m, 0,5H), 6,41(d, J = 9,2Hz,1H), 6,20-6,13(m, 1H), 5,82(br, 1H), 5,73-5,63(m, 1H), 4,11(t, J = 9,2Hz, 0,5H), 3,87(dd, J = 12,0Hz, 8,8Hz , 0,5H), 3,69-3,58(m, 2H), 3,18-3,04(m, 5H), 2,80-2,65(m, 1H), 2,45(br, 4H), 2,23(s, 3H), 2,09 (br, 0,5H), 1,99(br, 0,5H), 1,81(t, J = 11,2Hz, 4H), 1,70(d, J = 11,2Hz, 1H), 1,45-1,16(m, 6H). HRMS (ESI) (m/z): [M H]+ calculado para C31H41N8O3, 573,3302; encontrado, 573,3304.

8-(3-aminofenil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 51)

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sólidos color naranja (rendimiento 84%). mp 235,5-235,7 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 58,84 (s, 1H), 8,39 (br, 1H), 8,19-8,17 (m, 2H), 7,49-7,47 (m, 4H), 7,21 (t, J= 8,0Hz, 1H), 6,72 (d, J= 7,2Hz, 1H), 6,571-6,56 (m, 2H), 6,52 (d, J = 8,0Hz, 1H), 6,19 (br, 1H), 5,34 (s, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,08 (br, 4H), 2,45 (t, J = 4,4Hz, 4H), 2,23 (s, 3H). HRMS (ESI) (m/z): [M H]+ calculado para C3oH3i N8O2, 535,2570; encontrado, 535,2569.

N-(3-(6-(4-fluorofenil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 52)

sólidos color naranja (rendimiento 73%). mp 262,3-262,7 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,43(s, 1H), 8,87(s, 1H), 8,44(s, 1H), 8,29(dd, J = 8,4Hz, 6,0Hz, 1H), 7,89(br, 1H), 7,77(s, 1H), 7,55(t, J=8,0Hz, 1H), 7,36-7,31(m, 3H), 7,15(d, J=8,4Hz, 1H), 6,54(s, 1H), 6,47(dd, J=16,8Hz, 10,0Hz, 1H), 6,28(dd, J=16,8Hz, 1,6Hz, 1H), 6,04(br, 1H), 5,78(dd, J= 10,0Hz, 1,6Hz, 1H), 3,78(s, 3H), 3,05(br, 4H), 2,44(t, J= 4,4Hz, 4H), 2,23(s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C33H32NsO3F, 607,2581; encontrado, 607,2589.

(S)-8-((1-acriloil-3-piperidinil)metil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 53)

sólidos color rojo, rendimiento 49%. mp 208,3-209,3 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 58,88 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,18-8,16 (m, 2H), 7,59-7,52 (m, 1H), 7,47 (t, J= 3,2Hz, 3H), 6,75 (dd, J= 16,4Hz, 10,0, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,55 (dd, J=17,2Hz, 8,8Hz, 1H), 6,03 (d, J= 16,4Hz, 1H), 5,58 (m, 1H), 4,19-4,06 (m, 3H), 3,89-3,83 (m, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,17 (br, 4H), 3,05-2,55 (m, 2H), 2,48 (t, J = 4,8Hz, 4H), 2,24 (s, 3H), 2,00 (br, 1H), 1,66 (br, 2H), 1,26-1,23 (m, 2H). Pureza por HPLC: 95,1%, tiempo de retención = 15,82 min. HRMS (ESl)(m/z): [^m+H]+ calculado para C ^ H ^ ^ O ^ 595,3145; encontrado, 595,3157.

35

N-(3-(2-(metoxi-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-6-(4-metoxifenil)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 54)

sólidos color naranja (rendimiento 65%). mp 296,5-297,3 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,43(s, 1H), 8,84(s, 1H), 8,34(s, 1H), 8,26(d, J = 8,8Hz, 1H), 7,89(d, J = 7,2Hz, 1H), 7,74(s, 1H), 7,55(t, J = 8,0Hz, 1H), 7,36(d, J = 8,4Hz, 1H),7,15(d, J = 8,4Hz,, 1H),7,05(d, J = 9,2Hz, 1H),6,54(s, 1H), 6,47(dd, J = 16,8Hz, 10,0Hz, 1H),6,27(dd, J = 16,8Hz, 1,6Hz, 1H), 6,06(br, 1H), 5,78(d, J = 10,0Hz, 1,6Hz, 1H), 3,84(s, 3H), 3,78(s, 3H), 3,05(br, 4H), 2,44(br, 4H), 2,23(s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C34H35N8O4, 619,2781; encontrado, 619,2780

N-(3-(6-(3,5-difluorofenN)-2-((2-metoxi-4-(4-metiM-piperazmN)feml)ammo)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 55)

sólidos color rojo (rendimiento 64%). mp 291,2-291,4 °C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,43(s, 1H), 8,92(s, 1H), 8,57(s, 1H), 7,96(d, J = 7,2Hz, 1H), 7,87(br, 1H), 7,77(s, 1H), 7,54(t, J=8,0Hz, 1H), 7,43-7,39(m, 1H), 7,33(s, 1H), 7,14(d, J=7,2Hz, 1H), 6,54(s, 1H), 6,47(dd, J = 16,8Hz, 10,0, 1H), 6,27(dd, J = 16,8Hz, 1,6Hz, 1H), 6,00(br, 1H), 5,78(dd, J = 10,0Hz, 1,6Hz, 1H), 3,77(s, 3H), 3,05(br, 4H), 2,43(br, 4H), 2,22(s, 3H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C33H31N8O3F2, 625,2487; encontrado, 625,2482.

N-(3-(6-(3,4-difluorofenil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 56)

36

sólidos color naranja (rendimiento 67%). Mp>300°C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,43(s, 1H), 8,89(s, 1H), 8,50(br, 1H), 8,28-8,23(m, 1H),8,15(br, 1H), 7,87(s, 1H), 7,77(s, 1H), 7,61-7,52(m, 2H), 7,34(s, 1H), 7,14(d, J = 8,4Hz, 1H), 6,54(s, 1H), 6,47(dd, J = 16,8Hz, 10,0Hz, 1H),6,27(dd, J = 16,8Hz, 1,6Hz, 1H), 6,02(br, 1H), 5,78(dd, J = 10,0Hz, 1,6Hz, 1H), 3,77(s, 3H), 3,05(br, 4H), 2,43(t, J= 4,4Hz, 4H), 2,22(s, 3H).HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C33H31N8O3F2, 625,2487; encontrado, 625,2478.

N-(3-(2-(2-metoxi-4-(4-metil-1 -piperazinil)fenil)amino)-6-(3-metoxifenil)-7-oxo-8(7H)pteridinil)fenil)acrilamida (Compuesto 57)

Sólidos color marrón (rendimiento 52%). Mp>300°C. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 510,42(s, 1H), 8,88(s, 1H), 8,45(s, 1H), 7,89(s, 1H), 7,82-7,81(m,2H), 7,76(s, 1H), 7,55(t, J = 8,0Hz, 1H), 7,41(t, J = 8,0Hz, 1H), 7,36-7,34(br, 1H), 7,16(d, J = 7,6Hz,1H), 7,08(d, J = 8,4Hz,1H), 6,54(s, 1H), 6,47(dd, J = 16,8Hz, 10,4Hz, 1H), 6,28(d, J = 17,2Hz, 1H), 6,04(br, 1H), 5,80(m, 1H), 3,82(s, 3H), 3,78(s, 3H), 3,05(br, 4H), 2,44(br, 4H), 2,23(s, 3H).HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C34H35N8O4, 619,2781; encontrado, 619,2780.

8-(1-acriloil-3-piperidinil)-2-((2-metoxi-4-(4-metil-1-piperazinil)fenil)amino)-6-fenil-7(8H)pteridinona (Compuesto 58)

sólidos color naranja (rendimiento 40%). mp 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 59,19 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,11-8,09 (m, 2H), 7,47-7,46 (m, 3H), 7,22 (br, 1H), 6,88-6,63 (m, 2H), 6,49 (br, 1H), 6,06-6,19 (m, 1H), 5,67 (dd, J=36,8Hz, 10Hz,

37

1H), 4,91-3,99 (m, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,14 (br, 4H), 2,47(br, 4H), 2,24 (s, 3H), 1,69 (br, 2H), 1,35 (br, 1H), 1,23 (s, 1H). HRMS (ESI)(m/z): [M H]+ calculado para C32H37N8O3, 581,2989; encontrado, 581,2992.

Ejemplo 2

Ensayo de bioactividad: Prueba de actividad a nivel molecular (quinasa)

El EGFR-TK cataliza la transferencia de un grupo fosfato del trifosfato de adenosina (ATP) al sustrato polipeptídico, poli(Glu, Tyr)4:1, que está marcado con dos grupos fluorescentes cumarina y fluoresceína. Basado en el procedimiento de transferencia de resonancia de energía de fluorescencia (FRET), el EGFR-TK cataliza una reacción de ATP, lo que resulta en el acercamiento de dos grupos fluorescentes, excitando el donador (cumarina) a 400 nM, liberando parte de la energía (longitud de onda de emisión a 445 nM), y transfiriendo otra parte de la energía a la fluoresceína (longitud de onda de emisión a 520 nM). Diferentes compuestos mostraron diferentes grados de inhibición sobre el EGFR-TK, lo que condujo a diferentes grados de fosforilación del sustrato, de modo que la relación de inhibición de diferentes compuestos puede calcularse midiendo la relación del porcentaje de fosforilación del sustrato catalizado por una enzima.

1. Pasos del experimento:

Se añadieron 2,5 pl de compuestos de prueba, 5 pl de mezcla de sustrato de quinasa/péptido y 2,5 pl de solución de ATP en una placa de 384 pocillos, y los 10 pl del sistema de reacción se agitaron durante 30 segundos y se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadieron 5 pl de reactivo de parada, se agitó el sistema de reacción en un volumen total de 20 pl durante 30s y se utilizó un lector de microplacas para detectar las señales de fluorescencia a una longitud de onda de excitación de 400 nm y de emisión de 445 nm y 520 nm, respectivamente. Se determinaron las tasas de inhibición de los compuestos a 7 gradientes de concentración y se calculó el valor IC50 de cada compuesto mediante la curva de ajuste de Origin 8,0. Se utilizaron controles positivos durante el experimento para confirmar la viabilidad del sistema de reacción, y cada experimento se realizó por triplicado.

2. Fórmula de cálculo:

Ensayo de actividad enzimática in vitro : El EGFR de tipo salvaje y varios mutantes (T790M, L858 / T790M) se adquirieron de Invitrogen. Se establecieron 10 gradientes de concentración de 5,1 * 10'11 mol / L a 1,0 * 10'6 mol / L para todos los compuestos a ensayar.

La concentración de las diferentes quinasas se determinó mediante experimentos de optimización y las concentraciones correspondientes fueron EGFR (PV3872, Invitrogen) 0,287 pg/pL, EGFR-T790M (PV4803, Invitrogen) 0,174 pg/pL, EGFR-L858R/T790M (PV4879, Invitrogen) 0,055 pg/pL. Los compuestos se diluyeron en DMSO por tres veces desde 5,1*10-9 M hasta 1*10'4 M. Se disolvieron 4 pl del compuesto en 96 pl de agua para obtener una solución de compuesto 4x. Se disolvieron 40 pM de ATP en tampón de quinasa 1,33x y la mezcla de quinasa / péptido contenía 2x de quinasa, 4 pM de tetrapéptido de tirosina para su uso. La reacción de la quinasa de 10 pL consistió en 2,5 pL de solución de compuesto, 5 pL de mezcla de quinasa/péptido, 2,5 pL de solución de ATP.

10 pL de reacción de la quinasa, incluyendo 2,5 pL de solución de compuesto, 5 pL de mezcla de quinasa / péptido, 2,5 pL de solución de ATP. Se utilizaron 5 pl de solución de péptido fosforilado, en lugar de la mezcla quinasa/péptido, como control de fosforilación al 100%. Se utilizaron 2,5 pl de tampón de quinasa 1,33x, en lugar de la solución de ATP, como control de inhibición al 100% y 2,5 pl de DMSO al 4%, en lugar de la solución de compuesto, como control de inhibición al 0%. Las placas se mezclaron bien y se incubaron a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añadieron 5 pl de solución de desarrollo en cada pocillo y se incubaron durante otra hora a temperatura ambiente; durante este periodo se escindieron los péptidos no fosforilados. Por último, se añadieron 5 pl de reactivo de parada para inactivar la reacción. Las placas se midieron con el EnVision Multilabel Reader (Perkin Elmer). Los datos experimentales se calcularon con GraphPad Prism versión 4.0. Cada experimento se repitió más de 3 veces.

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Ejemplo 3

Prueba de actividad celular (actividad inhibidora de la proliferación celular)

Análisis de inhibición sobre la proliferación y el crecimiento celular: Las células H1975 (células de cáncer de pulmón de células no pequeñas, EGFRL858R / T790M), A431 (células de cáncer de pulmón de células no pequeñas, EGFR de tipo salvaje) se obtuvieron del ATCC. La actividad de proliferación celular se evaluó mediante el ensayo MTS. Las células se expusieron a las condiciones de procesamiento durante 72 horas y el número de células utilizadas en cada experimento para cada línea celular se ajustó en función de los valores de absorbencia (valores de absorbencia a 490 nm, 1,3-2,2). Se establecieron seis gradientes de concentración (0,1 nM - 10 ^M) para los compuestos a ensayar, en los que se utilizaron al menos 6 conjuntos de controles paralelos para cada concentración.

Las células H1975, A431 fueron cultivadas en los medios correspondientes, y las células fueron pasadas al menos dos veces después de la reanimación y luego utilizadas para los experimentos. Las células en fase Log fueron tripsinizadas y resuspendidas en medio de cultivo. Se sembraron H1975 (1.000 células por pozo), A431 (2.000 células por pozo) en placas de 96 pocillos en un volumen de 100 ^L; y se establecieron 6 conjuntos de controles paralelos y 7 columnas. La placa se colocó en una incubadora a 37°C y 5% de CO2 durante la noche. Los compuestos se disolvieron en ^dM^sO hasta una concentración de 10 ^M por litro, y luego la concentración se diluyó gradualmente hasta 10 ^M, 1 ^M, 0,1 ^M, 0,01 ^M, 0,001 ^M, 0,0001 ^M por litro, respectivamente. Se añadieron 2 ^l de la solución del compuesto a 998 ^l de medio, y se mezcló bien la mezcla. Se añadieron 100 ^l de la mezcla a una placa de 96 pocillos. Se utilizaron 2 ^l de DMSO, en lugar de la solución del compuesto, como control de inhibición del 0%. Después de cultivar durante 68 horas, se añadieron 20 ^l de MTT (5 mg / ml). Después de 4 horas, se descartó el sobrenadante y se añadieron 150 ^l de DMSO. Tras agitarla durante 10 minutos, se leyó la placa con Synergy HT (Bio TeK) (OD490). Los datos se calcularon con GraphPad Prism versión 4.0 y los valores IC5o se obtuvieron mediante un modelo de regresión no lineal de la curva de respuesta a la dosis.

Determinación de la solubilidad en agua: Se pesaron unos 2 mg del compuesto a ensayar en un tubo de centrífuga de 1,5 ml y se añadió 1 ml de tampón PBS (20 mM, pH = 6,8), se sonicó durante 5 minutos (si el compuesto estaba completamente disuelto, se añadieron de nuevo 2 mg del compuesto) y se agitó durante la noche. La suspensión se filtró a través de un filtro de PVDF de 0,22 ^m y, a continuación, se diluyó hasta una concentración adecuada con metanol (v = 50%) y PBS (v = 50%), y se midió la absorbancia con un espectrofotómetro UV. Se pesaron con precisión unos 3 mg de compuesto y se añadió metanol para preparar una solución madre de 1 mg / ml. Se tomó la solución madre anterior y se preparó una solución a concentraciones de 0,05, 0,04, 0,03, 0,02 y 0,01 mg / ml, respectivamente, se añadió solución de PBS (v = 50%) y se midió el valor de absorbancia. Se trazó la concentración c (mg / ml) como ordenada horizontal frente a la absorbancia A como coordenada longitudinal, y se ajustó una línea para obtener una curva estándar (coeficiente de correlación superior a 0,998). La solubilidad de un compuesto en agua se calculó a partir de la curva estándar.

Los resultados de las pruebas se muestran en la siguiente Tabla 1.

Tabla 1. Niveles y selectividad de la quinasa, nivel y selectividad celular, y solubilidad parcial del compuesto

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continuación

40 continuación

41 continuación

42 continuación

43 continuación

44 continuación

45 continuación

46 continuación

47 continuación

48 continuación

La solubilidad del AZD9291 se probó a pH 7,4 (J. Med. Chem., 2014,578249-8267)

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Prueba de cribado de inhibición de la actividad tirosina quinasa del compuesto 53 (antes y después de la resolución)

Ejemplo 4

1. Ensayo de tumor de xenoinjerto de células H1975: Evaluación farmacodinámica en animales Objetivo del experimento: A los ratones BALB/c desnudos trasplantados H1975 se les administró por vía oral (PO) una sustancia que se iba a probar durante 14 días consecutivos. Se observó y registró el peso corporal y el tamaño del tumor de los ratones desnudos. Se observaron los cambios de la actividad fisiológica de los ratones desnudos tras la administración para evaluar la eficacia antineoplásica.

1.1 Preparación de la célula H1975

Las células H1975 se obtuvieron del Instituto de Materia Médica de Shanghai. Las células se cultivaron en 1640 10% FBS (Gibco) a 37°C en una incubadora de dióxido de carbono a temperatura constante con una concentración de CO2 del 5%. Las células fueron cambiadas de fluido y pasadas una vez cada 2-3 días y expandidas. Cuando se alcanzó la cantidad deseada de células, se procedió al trasplante de las mismas. Antes del trasplante, la viabilidad de las células debe mantenerse por encima del 90%, se utilizó el medio 1640 sin suero para suspender las células, y la concentración de células en suspensión fue de 20 millones / ml.

1.2 Modelización del tumor de xenoinjerto H1975

40 ratones desnudos BALB/c macho, de 4-5 semanas de edad y 17-23 g de peso, fueron adquiridos en Shanghai Bikai, colocados en un ambiente de sala de animales durante 2-3 días, y luego sembrados con células. La suspensión celular se inyectó por vía subcutánea en la extremidad anterior del ratón lampiño rica en capilares, y a cada ratón se le inyectó 0,1 ml de suspensión celular.

Condiciones experimentales en la sala de animales:

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Temperatura del laboratorio: 23 ±3°C

Humedad del laboratorio: 30-60%

ritmo de 12 horas día-noche

En aproximadamente 2-3 semanas, se puede encontrar un tumor de xenoinjerto, y los ratones fueron agrupados y administrados con un fármaco cuando el tamaño promedio del tumor alcanzó los 300 mm3

1.3 Formulación de la sustancia que se va a probar

Se pesó una cantidad apropiada de la sustancia que se iba a probary se suspendió en 14 ml de solución salina DMSO-PEG400 (DMSO: PEG400: solución salina = 1:30:69) respectivamente, formulados según la tabla siguiente, suspendidos o disueltos por onda ultrasónica, llenados en viales y sellados, y reservados en un refrigerador a 4°C para su uso posterior.

Grupo experimental Pesaje (mg) Concentración real (mg/ml) Dosis (mg/kg)

1 0 0 0

2 17,5 1,25 5

3 35 2,5 10

4 87,5 6,25 25

5 175 12,5 50

6 350 25 100

1.4 Dosificación y modo de administración

Se administró a los ratones una dosificación de 0,1ml / 25g por vía oral una vez al día, y se observó el estado y las anomalías de los ratones. La longitud y la anchura de un tumor y el peso corporal de un ratón se registraron al menos dos veces por semana. El tamaño del tumor se calcula como V = 0,5 * longitud * anchura * de anchura.

La Figura 2 muestra la comparación farmacodinámica entre el Compuesto 14 y CO-1686 y AZD9291: El compuesto 14 (10 mg/kg) mostró una mejor eficacia que el CO-1686 (50 mg/kg), el compuesto 14 (25 mg/kg) mostró una eficacia comparable a la del AZD9291 (25 mg/kg), ambos pueden reducir eficazmente el tamaño de un tumor, y los ratones siguen vivos y el tumor no reaparece después de suspender la administración durante 1 mes.

2. Ensayo de tumor de xenoinjerto de células A431:

Objetivo del experimento: A los ratones BALB/c con xenoinjertos tumorales A431 se les administró por vía oral (PO) una sustancia que se iba a probar durante 14 días consecutivos. Se observó y registró el peso corporal y el tamaño del tumor de los ratones desnudos. Se observaron los cambios de la actividad fisiológica de los ratones desnudos tras la administración para evaluar la eficacia antineoplásica.

2.1 Preparación de la célula A431

Las células A431 pertenecen a nuestro laboratorio, y en octubre de 2015 se confirmó mediante el experimento de STR. Las células se cultivaron en 1640 10% FBS (Gibco) a 37°C en una incubadora de dióxido de carbono a temperatura constante con una concentración de CO2 del 5%. Las células fueron cambiadas de fluido y pasadas una vez cada 2-3 días y expandidas. Cuando se alcanzó la cantidad deseada de células, se procedió al trasplante de las mismas. Antes del trasplante, la viabilidad de las células debía mantenerse por encima del 90%, se utilizó un medio 1640 sin suero para suspender las células y la concentración de células en suspensión fue de 20 millones/ml.

2.2 Modelización del tumor de xenoinjerto A431

Se adquirieron 40 ratones desnudos BALB/c machos, de 4-5 semanas de edad y 17-23 g de peso, en Shanghai Bikai, se colocaron en un entorno de sala de animales durante 2-3 días y luego se sembraron con células. La suspensión celular se inyectó por vía subcutánea en la extremidad anterior del ratón lampiño rica en capilares, y a cada ratón se le inyectó 0,1 ml de suspensión celular.

Condiciones experimentales en la sala de animales:

Temperatura del laboratorio: 23 ±3°C

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Humedad del laboratorio: 30-60%

ritmo de 12 horas día-noche

En aproximadamente 2-3 semanas, se puede encontrar un tumor de xenoinjerto, y los ratones fueron agrupados y administrados con un fármaco cuando el tamaño medio del tumor alcanzó los 500 mm3

2.3 Formulación de la sustancia que se va a probar

Grupo experimental Pesaje (mg) Concentración real (mg/ml) Dosis (mg/kg)

1 0 0 0

2 17,5 1,25 5

3 35 2,5 10

4 87,5 6,25 25

5 175 12,5 50

6 350 25 100

2.4 Dosificación y modo de administración

La figura 3 muestra que el compuesto 14 mostró una mejor selectividad sobre el EGFR de tipo salvaje. Se administró a ratones desnudos el modelo de xenoinjerto de células EGFR de tipo salvaje A431 durante 14 días por vía oral, el compuesto 14 (25 mg/kg) mostró un rendimiento comparable al de la misma dosis de AZD9291, es decir, el tamaño del tumor no cambió substacialmente, y la selectividad fue significativamente mejor que la de afatinib (un medicamento de 2a generación).

Ejemplo 4

1. Evaluación de la toxicidad aguda del compuesto: se seleccionó una dosis 10 veces mayor de AZD9291 para el ensayo de toxicidad aguda en ratones ICR. En cambio, ZW-W-33 a 100 mg / kg, 250 mg / kg y 500 mg / kg mostró una toxicidad comparable a la misma dosis de AZD9291 con una ligera disminución del peso corporal.

2. La figura 5 muestra el análisis patológico de los ratones portadores de tumores tras 14 días consecutivos de administración.

Conclusión: después de la administración a largo plazo (14 días) de la dosis de tratamiento continuo, no se observó ningún cambio patológico evidente en todos los órganos, y los efectos secundarios fueron comparables a los de la misma dosis del fármaco positivo AZD9291.

Además, debe entenderse que después de leer las enseñanzas anteriores de la presente invención, los expertos en la materia pueden hacer varias modificaciones o cambios a la presente invención.

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Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula I o una sal farmacéutica aceptable del mismo:

donde

m es un número entero de 0 a 3;

R1 es fenilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo C3-C8 opcionalmente sustituido;

R7 se selecciona del grupo que consiste en

R3, R4, R5 y R6 se seleccionan de forma independiente entre el grupo que consiste en H, un alcoxi C1-C6 sustituido o no sustituido, un alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido,

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el alcoxi C1-C6 sustituido o no sustituido es un alcoxi C1-C3; y el alquilo C1-C6 sustituido o no sustituido es un alquilo C1-C3.

3. El compuesto o una sal farmacéutica aceptable del mismo de la reivindicación 1, seleccionado del siguiente grupo

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4. El compuesto de la reivindicación 1, en el que

R1 es fenilo sustituido o no sustituido;

n = 0;

A' es un anillo de benceno o un heterociclo de cinco miembros que contiene nitrógeno;

m es un número entero de 0 a 2;

R7 se selecciona entre

5. El compuesto o una sal farmacéutica aceptable del mismo de la reivindicación 1, seleccionado del siguiente grupo

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6. Una composición farmacéutica, que comprende el compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.

7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para su uso en el tratamiento o la prevención de enfermedades mediadas por el EGFR, o la inhibición del EGFR, en el que la enfermedad mediada por el EGFR es el cáncer.

8. El compuesto para uso de la reivindicación 7, en el que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de pulmón de células pequeñas, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de células escamosas de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, glioblastoma, cáncer de ovario, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer de cuello uterino, cáncer de esófago, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de páncreas, cáncer de colon, cáncer de piel, leucemia, linfoma, cáncer de estómago, mieloma múltiple y tumores sólidos.

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