CN115850281A

CN115850281A - 蝶啶酮衍生物及其应用

Info

Publication number: CN115850281A
Application number: CN202211168250.7A
Authority: CN
Inventors: 李洪林; 赵振江; 陈卓; 徐玉芳; 王操林; 沙文婕; 钱旭红
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2021-09-24
Filing date: 2022-09-23
Publication date: 2023-03-28
Also published as: CN115850282A; WO2023046114A1

Abstract

本发明公开了式I所示的化合物或其药学上可接受的盐。该类化合物表现出了优异的靶向抑制非经典突变EGFR的作用且具有良好的抗肿瘤活性。本发明还公开了所述化合物在制备预防或/和治疗EGFR突变介导的疾病，例如癌症中的应用，以及包含该化合物的药物组合物。

Description

蝶啶酮衍生物及其应用

技术领域

本发明属于药物化学领域；具体地说，本发明涉及靶向EGFR突变蛋白的化合物及其制备方法以及在治疗EGFR介导的疾病，例如肿瘤中的应用。

背景技术

研究发现，在多种癌症的形成和发展中，EGFR都扮演着重要的角色，因此EGFR酪氨酸激酶靶点也就成为癌症靶向治疗的首选作用靶标，特别是在针对非小细胞肺癌的治疗过程中，以EGFR为靶点的小分子抑制剂取得了良好的临床进展，例如第一代可逆抑制剂吉非替尼和埃洛替尼，第二代的不可逆阿法替尼和达可替尼以及具有克服获得性耐药突变EGFRT790M突变活性的第三地奥西替尼。但是并非所有EGFR突变患者都能获益。其中EGFR 20外显子插入突变(EGFR 20ins)的NSCLC对大部分EGFR抑制剂靶向治疗效果差或无效，这些突变常常归为非经典突变。这些非经典突变主要包括18-21外显子的插入突变和点突变，ERBB2的点突变和插入突变。

因此，研究开发靶向非经典突变EGFR抑制剂的药物具有重大的临床意义和应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种靶向抑制非经典突变EGFR的化合物或其药学上可接受的盐。所述化合物应具备优异的抗肿瘤活性。

在第一方面，本发明提供式I所示化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药：

式I中

R₁独立选自氢、取代或未取代的C₁-C_l0烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、任选取代的C₃-C₈环烷基、任选取代或未取代的芳基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基；

R₂、R₃、R₄、R₅独立选自H、卤素、取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)烷氧基或取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)氘代烷氧基、取代或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)烷基、NR_cR_d；其中R_c和R_d各自独立选自氢、C_1-3烷基；

G为苯环、五元或六元杂环或C₃-C₈环烷基或不存在；

R₆独立选自氢、未取代的或卤素取代的C₁-C₄烷基、硝基、氨基、卤素、羟基、C₁-C₆烷氧基、任选取代的C₁-C₆酰氧基、任选取代的C₁-C₆酰氨基、任选取代的C₁-C₆酰基；其中，当G为苯环时，R₆为间位取代；

m为0-3的整数；

R₇独立选自取代或未取代的NH₂、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基、取代或未取代的C₁-C₁₀烷基；

A选自下组或不存在：

X选自下组或不存在：取代或未取代的C_1-3亚烷基(优选-CH₂-)或氘代亚烷基(优选-CD₂-)、-O-、-C(＝O)-、-C(＝O)NHN＝-；

Y选自下组或不存在：-NHC(＝O)-、-C(＝O)NH-、-＝NNHC(＝O)NH-、-CH₂-、-O-；

L选自下组或不存在：C₁-C₁₀亚烷基、C₁-C₁₀亚杂烷基、-A’-(CH₂)_m’-W-(CH₂)_n’-、-(CH₂)_m’-W-(CH₂)_n’-O-(CH₂)_V-和-(CH₂)_m’-W-[(CH₂)_n’-O]_u-(CH₂)_v-；

A’选自下组或不存在：5元亚芳基和6元亚芳基；

W选自：亚苯基、5元亚杂芳基、6元亚杂芳基、C₁-C₁₀亚杂环基和C₁-C₁₀亚烷基；

m’是0、1、2、3、4、5、6、7或8；

n’是0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；

每个独立的u独立地为2、3或4；

v是1、2、3或4

B选自下组或不存在：

R选自：氢、甲基和氟；

Q₁选自：-C(R_2a)＝和-N＝；

Q₂选自：-C(R_2b)＝和-N＝；

Q₃选自：-C(R_2c)＝和-N＝；

R_2a、R_2b、R_2c各自独立选自：氢，-C(＝O)-；

Z选自：-CH₂-，-C(＝O)-。

在具体的实施方式中，所述化合物是下式II所示化合物：

式II中

R⁷独立选自：H、取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)烷基、取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)氘代烷基；

R⁸独立选自：H、取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C₃烷基、取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C₃氘代烷基。

在具体的实施方式中，式II中，

R⁷独立选自：甲基、氘代甲基CD₃、三氟甲基、乙基、氘代乙基(例如，CD₂CH₃、CH₂CD₃)、CH₂CF₃；

R⁸独立选自：氢、甲基、氘代甲基CD₃、乙基、氘代乙基(例如，CD₂CH₃、CH₂CD₃)。

在具体的实施方式中，所述化合物选自：

在第二方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药和任选的药学上可接受的赋形剂。

在第三方面，本发明提供第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药在制备预防或治疗与EGFR蛋白活性异常表达、ERBB2过表达及其点突变相关的疾病的药物中的用途。

在具体的实施方式中，所述EGFR是突变型EGFR。

在具体的实施方式中，所述突变型EGFR包括至少一种以下突变：EGFR敏感性突变L858R和19del，EGFR T790M突变，EGFR 18-21外显子点突变和插入突变，ERBB2过表达及其点突变和插入突变。

在具体的实施方式中，所述EGFR 18-21外显子点突变和插入突变含有：

18外显子G719X、E709X、K716A、K728A点突变与密码子709处缺失突变；

19号外显子插入突变I744-K745insKIPVAI、K745-E746insIPVAIK、K745-E746insVPVAIK、K745-E746insTPVAIK和点突变D761Y；

20号外显子插入突变与点突变包括：A763-Y764insFQEA、A763-Y764insFHEA、V769-D770insASV、V769-D770insDNP、D770-N771insNPG、D770-N771insNPH、D770-N771insSVD、D770-N771insASVDN、D770-N771insG、N771-P772insSVDNP、N771-H773dupNPH、P772-H773insPNP、P772-H773insPR、H773-V774insH、A763-Y764insFQEA、H773-V774insPH、H773-V774insNPH、N771-P772insH、H771-P772insN、H773-V774insAH、D770delinsGY、V774-C775insHV等以及20号外显子点突变S768I；

21号外显子点突变L861Q；

ERBB2的点突变V777L、D769Y、R896C、P1170A和插入突变V777-G778insCG、P780-Y781insGSP等。

在具体的实施方式中，所述疾病为癌症为选自以下的一种或多种：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、神经胶质细胞瘤、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肝癌、肾癌、结肠癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、胃癌或多发性骨髓癌。

在第四方面，本发明提供一种预防或治疗与EGFR蛋白活性异常表达、ERBB2过表达及其点突变相关的疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药或第二方面所述的药物组合物给予有此需要的对象的步骤。

在优选的实施方式中，所述对象是哺乳动物，优选是人。

在优选的实施方式中，所述EGFR是突变型EGFR。

在优选的实施方式中，所述突变型EGFR包括至少一种以下突变：EGFR敏感性突变L858R和19del，EGFR T790M突变，EGFR 18-21外显子点突变和插入突变，ERBB2过表达及其点突变和插入突变。

在优选的实施方式中，所述EGFR 18-21外显子点突变和插入突变含有：

21号外显子点突变L861Q；

在优选的实施方式中，所述疾病为癌症为选自以下的一种或多种：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、神经胶质细胞瘤、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肝癌、肾癌、结肠癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、胃癌或多发性骨髓癌。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了化合物2、化合物3的动物体内药效(EGFR^L858R/T790M移植瘤)活性；

图2显示了化合物5的动物体内药效(EGFR^L858R/T790M移植瘤)活性；

图3显示了化合物0、1、2、3、4、5在SD大鼠血浆中的药时曲线。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，发现一批结构全新的能够靶向抑制非经典突变EGFR的小分子化合物。这些化合物具有抑制EGFR蛋白的活性以及良好的抗肿瘤活性，因此这些化合物可用于预防或/和治疗多种癌症，在医药领域具有巨大的应用前景。在此基础上完成了本发明。

术语定义：

本文中涉及到的一些基团定义如下:

本文中，“烷基”指碳链长度为1-10个碳原子的饱和的支链或直链烷基，优选的烷基包括长2-8个碳原子、1-6个、1-4个碳原子、1-3个碳原子不等的烷基。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异于基、庚基等。烷基可以被1个或多个取代基取代，例如被卤素或卤代烷基取代。例如，烷基可以是被1-4个氟原子取代的烷基，或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。

本文中，“烷氧基”指被烷基取代的氧基。优选的烷氧基是长1-6个碳原子的烷氧基，更优选为长1-3个碳原子的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、丙氧基等。烷氧基可以被1个或多个取代基取代，例如被卤素或卤代烷基取代。例如，烷氧基可以是被1-4个氟原子取代的烷基，或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。

本文中，“链烯基”通常表示具有至少一个双键的单价烃基，通常含有2-8个碳原子，优选含有2-6个碳原子，可以是直链或支链。链烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、己烯基等等。

本文中，“酰氨基”指结构式为“-R’-NH-C(O)-R”的基团，其中，R’可选自氢或烷基，R可选自烷基、链烯基、炔基、被NRcRd取代的烷基、被NRcRd取代的链烯基和NRcRd取代的炔基、被卤素取代的烷基、被氰基取代的链烯基，其中，Rc和Rd可选自烷基和链烯基。

本文中，“芳基”指含有6到14个碳原子的单环、双环或三环芳族基团，包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、茀基、四氢化萘基、二氢化茚基等。芳基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6烷基、氰基、硝基、氨基、酰胺基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基等、杂环基或杂芳基等。

本文中，“杂环基”包括但不限于含有1-3个选自O、S或N的杂原子的5元或6元杂环基团，包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌啶基、吗啉基等。

本文中，“芳杂环基”是指含有5-14个环原子，并且有6个、10个或14个电子在环体系上共用。而且所含环原子是碳原子和从氧、氮、硫中任选的1-3个杂原子。有用的芳杂环基包括哌嗪基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、噻吩基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、包括但不限制于嘧啶基等。芳杂环基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基。

本文中，“卤素”指氟、氯、溴或碘。

本文中，“任选取代的”指其所修饰的取代基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基。

本发明的化合物

在本文中，本发明的化合物是指以下通式I所示的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药：

式中的取代基如上文所述定义。

进一步地，本发明提供式II所示化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药：

/>

式中的取代基如上文所述定义。

在具体的实施方式中，本发明提供了能够具备EGFR抑制活性的以下化合物，这些化合物对突变型EGFR(L858R/T790M、20ins)具有显著的抑制活性：

基于本发明的教导以及本领域的公知常识，本领域技术人员会理解，本发明化合物中的各基团可以作进一步的取代，从而得到能够具备与本发明具体公开的化合物活性相同或相似的衍生物。本发明化合物中的各基团可以被本领域常规的各种取代基取代，只要这种取代不违反化学合成规则或者化合价规则。

本文所用的术语“取代”是指特定基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所替代。特定的取代基可以是前文中相应描述的取代基，也可以是各实施例中出现的具体取代基或者本领域的常规取代基。因此，在本发明中，通式中的取代基也可以各自独立地为实施例中具体化合物中的相应基团；即，本发明既包括上述通式中各取代基的组合，也包括通式中所示部分取代基与实施例中出现的其它具体取代基的组合。制备具有这样的取代基组合的化合物并检测所得化合物是活性是本领域技术人员基于本领域的惯常技术手段不难做到的。换言之，基于本发明的教导，本领域技术人员能够合成落在本发明的保护范围内的各种化合物，这些化合物并不限于说明书实施例部分公开的具体化合物；本发明的化合物既包括实施例部分公开的具体化合物，也包括这些具体化合物中的某一取代位置的具体取代基与通式中其它取代位置的取代基构成的各种化合物，限于篇幅，不在此一一列举。

本文所用的术语，“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。

除非特别说明，本发明所描述的结构式意在包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构和几何异构体(或构象异构体))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体等。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体、非对映异构体或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。

本文所用的术语，“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1H-吲唑与2H-吲唑。化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。

本文所用的术语，“溶剂化物”是指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。

本文所用的术语，“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。

进一步地，作为一种具备药学活性的化合物，本发明化合物显然能够作为药物应用。因此，除了实施例中已经检测的各种特性，本发明的化合物还能够具备作为药物而固有的各种活性。例如，体内活性、生物利用度、成药性、毒性、差异抑制活性等等。基于本发明的教导和本领域的常规技术手段，本领域技术人员知晓如何获得本发明范围内的各种化合物以及检测本发明范围内的各种化合物的各种活性；换言之，基于本发明的教导和本领域的常规技术手段，本领域技术人员知晓如何重复、验证以及实现本发明。

药物组合物和施用方法

由于本发明化合物具有靶向抑制非经典突变EGFR，特别是对突变型EGFR(L858R/T790M、20ins)具有显著的抑制活性，本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐、前药或溶剂合物或水合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于预防和/或治疗与EGFR蛋白活性异常表达、ERBB2过表达及其点突变相关的疾病。

在具体的实施方式中，所述EGFR是突变型EGFR。例如，所述突变型EGFR包括至少一种以下突变：EGFR敏感性突变L858R和19del，EGFR T790M突变，EGFR18-21外显子点突变和插入突变，ERBB2的点突变和插入突变。

在一优选例中，所述EGFR 18-21外显子点突变和插入突变含有：18外显子G719X、E709X、K716A、K728A点突变与密码子709处缺失突变；19号外显子插入突变I744-K745insKIPVAI、K745-E746insIPVAIK、K745-E746insVPVAIK、K745-E746insTPVAIK和点突变D761Y；20号外显子插入突变与点突变包括：A763-Y764insFQEA、A763-Y764insFHEA、V769-D770insASV、V769-D770insDNP、D770-N771insNPG、D770-N771insNPH、D770-N771insSVD、D770-N771insASVDN、D770-N771insG、N771-P772insSVDNP、N771-H773dupNPH、P772-H773insPNP、P772-H773insPR、H773-V774insH、A763-Y764insFQEA、H773-V774insPH、H773-V774insNPH、N771-P772insH、H771-P772insN、H773-V774insAH、D770delinsGY、V774-C775insHV等以及20号外显子点突变S768I；21号外显子点突变L861Q；ERBB2的点突变V777L、D769Y、R896C、P1170A和插入突变V777-G778insCG、P780-Y781insGSP等。

在优选的实施方式中，所述疾病为癌症，例如选自以下的一种或多种：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、神经胶质细胞瘤、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肝癌、肾癌、结肠癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、胃癌或多发性骨髓癌。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如

)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。

联合给药时，所述药物组合物还包括与一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)其他药学上可接受的化合物。该其他药学上可接受的化合物中的一种或多种可与本发明的化合物同时、分开或顺序地施用。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的优点：

1.本发明的化合物具有抑制EGFR蛋白，特别是突变型EGFR(L858R/T790M、20ins)的活性。因此，本发明的化合物可与用于EGFR蛋白异常表达的相关疾病，如各种癌症的治疗。

2.本发明的化合物具有优异的药代动力学性质；

3.本发明的化合物具有优异的抗肿瘤活性抗肿瘤活性，因此在医药领域具有巨大的应用前景。

以下结合具体实施案例对本发明的技术方案进一步描述，但以下实施例不构成对本发明的限制，所有依据本发明的原理和技术手段采用的各种施用方法，均属于本发明范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例1:N-(3-(2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺合成路线(化合物1)：

4-氟-2-(甲氧基-d₃)-1-硝基苯的合成

将NaH(0.20g，8.28mmol)、无水四氢呋喃(3mL)混合于50mL两口瓶，N₂保护，冰浴搅拌。将5-氟2-硝基苯酚(1.00g,6.37mmol)溶于无水四氢呋喃(4mL)，缓慢加入反应液，0℃搅拌10min，快速加入CD₃I(2.78g，19.11mmol)。升温至回流，继续反应19h。冷却至室温，将混合物用水淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析，得产物(0.84g,72.00％)。

1-(3-(甲氧基-d₃)-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪的合成

将4-氟-2-(甲氧基-d₃)-1-硝基苯(11.52g,66.22mmol)、N-甲基哌嗪(6.62g,62.34mmol)、N,N-二异丙基乙胺(12.81g,99.33mmol)和乙腈(20.00mL)混合于100mL的单口瓶中，90℃条件下搅拌12h。反应混合物旋干，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，石油醚重结晶得黄色固体(16.30g，87.00％)。

2-(甲氧基-d₃)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺的合成

将4-氟-2-(甲氧基-d₃)-1-硝基苯(1.67g,6.56mmol)、10％钯碳(0.65g,0.65mmol)和乙醇(8.00mL)混合于50mL的两口瓶中，氢气保护，100℃条件下搅拌24h。反应混合物抽滤，然后用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(PE-DCM:MeOH30:1)，得褐色油状物。

N-(3-((2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的合成

称取2-(甲氧基-d₃)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺(1.22g,5.45mmol)放置于50mL的单口瓶中，加入THF充分搅拌。称取N-(3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(1.67g,5.45mmol)放置于另一个50mL的单口瓶中，加入THF、DIPEA(1.05g,8.17mmol),缓缓滴入，室温搅拌1h。将反应混合物旋干，用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。甲醇重结晶，得红褐色固体。

N-(3-((5-氨基-2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的合成

将N-(3-((2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(1.18g,2.33mmol)、铁粉(0.50g,9.32mmol)、氯化铵(0.62g,11.65mmol)和乙醇：水(8mL,4:1)混合于100mL的单口瓶中，80℃条件下搅拌24h。反应混合物抽滤，滤液调碱，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得紫黑色固体(0.45g，36.00％)。

N-(3-(2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺的合成

将N-(3-((5-氨基-2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(0.36g,0.75mmol)、苯甲酰甲酸乙酯(0.26g,1.12mmol)和乙醇(10mL,4:1)混合于微波反应瓶中，滴加几滴乙酸，微波条件(200PSI,50W,120℃)反应2h。反应混合物调碱，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(DCM:MeOH＝25:1)，得红褐色固体(0.15g，30.00％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.42(s,1H),8.87(s,1H),8.42(s,1H),8.20(dd,J＝6.8,3.1Hz,2H),7.89(d,J＝7.0Hz,1H),7.75(s,1H),7.54(t,J＝8.0Hz,1H),7.51-7.47(m,3H),7.35(d,J＝8.3Hz,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),6.54(d,J＝2.5Hz,1H),6.46(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.27(dd,J＝16.9,2.1Hz,1H),6.04(s,1H),5.78(dd,J＝10.0,2.1Hz,1H),3.05(s,4H),2.45(s,4H),2.23(s,3H).HRMS(ESI):[M+H]⁺calcd for C₃₃H₂₆D₆N₈O₃,592.2864；found 592.2866.HPLC purity:97.54％,retention time＝6.844min.

实施例2:N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺的合成(中间体)

N-(3-硝基苯基)丙烯酰胺的制备

称3-硝基苯胺(10.00g，72.4mmol)置于1000mL三口烧瓶中，加入250mL二氯甲烷，在0℃搅拌，随后滴加三乙胺(14g，108.6mmol)。另取丙烯酰胺(7.8g，86.87mmol)溶于100mL二氯甲烷，并滴加到上述反应液中，滴加完成后，继续在室温下搅拌1h，TLC跟踪原料基本完全转化。减压旋蒸，残留物加入100ml 20％氢氧化钾溶液有大量白色固体析出，超声后抽滤，随后滤饼用50mL二氯甲烷洗涤，真空干燥，，得到粗产品9.4g，产率约68％。减压回收二氯甲烷。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.73(t,J＝2.1Hz,1H),7.98(dd,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.91(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),7.62(t,J＝8.2Hz,1H),6.47(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.31(dd,J＝17.0,1.9Hz,1H),5.81(dd,J＝10.1,1.9Hz,1H).

N-(3-胺基苯基)丙烯酰胺的制备

称取N-(3-硝基苯基)丙烯酰胺(5g，26.1mmol)于250mL圆底烧瓶中，加入溶剂150mL乙醇溶解，20ml水，再加入铁粉(5.8g，104.4mmol)，氯化铵(6.7g，130.5mmol)，80℃搅拌反应，TLC跟踪反应，3h后反应结束。反应液用硅藻土过滤，滤液旋蒸，残留物用EA和20ml20％NaOH水萃取，反复三次。合并有几层，减压旋蒸，得到淡绿色固体3.5g，产率约83％。产品未经纯化，直接用于下步反应。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):¹H NMR(400MHz,DMSO):δ8.73(t,J＝2.1Hz,1H),7.98(dd,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.91(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H),7.62(t,J＝8.2Hz,1H),6.47(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.31(dd,J＝17.0,1.9Hz,1H),5.81(dd,J＝10.1,1.9Hz,1H)，5.62(s,J＝13.2,1.9Hz,1H).

N-(3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的制备

称取2,4-二氯-5-硝基嘧啶(5g，25.77mmol)、DIPEA(4.99g，38.66mmol)置于100mL圆底三口烧瓶中，加入40mL DMF溶解并置于常温搅拌反应。称取N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺(4.1g，25.77mmol)于20ml DMF溶解并将混合液缓慢滴加到圆底烧瓶中，TLC检测反应，5h后反应结束。减压旋蒸除去乙腈，残留物用DCM萃取，反复三次。合并有机层，减压旋蒸。残留物用EA:PE＝1:4析晶，抽滤，滤饼用20ml EA:PE＝1:4混合液冲洗，滤渣真空干燥，得到橙红色固体6.1g，产率约84％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),10.33(s,1H),9.15(s,1H),7.96–7.85(m,1H),7.55(dd,J＝7.9,2.1Hz,1H),7.40(t,J＝8.1Hz,1H),7.26(dd,J＝7.8,2.1Hz,1H),6.48(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.28(dd,J＝17.0,2.1Hz,1H),5.78(dd,J＝10.0,2.1Hz,1H).

4-(4-硝基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

称取2-硝基-5-氟苯甲醚(10g，58.47mmol)、DIEA(11.31g，87.7mmol)置于50mL圆底三口烧瓶中，加入100mL DMF溶解，然后再加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(16.31g，87.7mmol)，在90℃条件下搅拌6h后，TLC跟踪至原料完全转化。在室温条搅拌下，向反应液中加入50mL去离子水，有大量黄色固体析出，抽滤，滤饼用50mL去离子水洗涤，真空干燥，得到纯的1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪黄色固体18g，产率约95％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.91(d,J＝9.3Hz,1H),6.59(dd,J＝9.4,2.5Hz,1H),6.53(d,J＝2.5Hz,1H),3.91(s,3H),1.43(s,8H).

4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯

称取1-(3-甲氧基-4-硝基苯基)-4-甲基哌嗪(2.5g，10mmol)于250mL圆底烧瓶中，加入溶剂150mL乙醇溶解，再加入530mg Pd/C(含10％Pd)，用氢气球通入氢气，在常温下搅拌约3h后，TLC跟踪至原料完全转化。反应液用硅藻土抽滤，50mL乙醇洗涤，然后旋转蒸发除去溶剂，得到2-甲氧基-4-(4-甲基-1-哌嗪)苯胺固体，纯度约99％。产品未经纯化，直接用于下步反应。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.52(d,J＝4.5Hz,1H),6.51(d,J＝1.3Hz,1H),6.31(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),4.26(s,2H),3.74(s,3H),3.43(d,J＝10.1Hz,4H),2.87(t,J＝5.1Hz,4H),1.41(s,9H).

N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基酰胺的制备

称取N-(3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(2g，7.38mmol)置于100mL圆底烧瓶中，用50mL四氢呋喃溶解，再加入4-(4-氨基-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.18g，7.38mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.06g，8.3mmol)，氩气保护，在常温下搅拌约8h，TLC跟踪至原料完全转化。在室温条搅拌下，向反应液中加入50mL去离子水，有大量红褐色固体析出，抽滤，滤饼用50mL去离子水洗涤，真空干燥，得红褐色固体3.4g，收率约86％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.30(s,1H),10.19(s,1H),9.22(s,1H),9.04(s,1H),7.70(s,1H),7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.40(d,J＝8.7Hz,1H),7.33(d,J＝8.2Hz,1H),7.19(t,J＝8.1Hz,1H),6.63(s,1H),6.44(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.28(t,J＝13.4Hz,2H),5.77(dd,J＝10.0,2.1Hz,1H),3.76(s,3H),3.46(t,J＝5.0Hz,4H),3.08(s,4H),1.44(s,9H).

4-(4-(((4-((3-丙烯酰胺基苯基)氨基)-5-氨基嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备

称取N-(3-((2-((2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基酰胺(1.5g，2.61mmol)置于100mL圆底烧瓶中，加入溶剂50mL乙醇溶解，10ml水，再加入铁粉(0.58g，10.44mmol)，氯化铵(0.67g，13.05mmol)，80℃搅拌反应，TLC跟踪反应，3h后反应结束。反应液用硅藻土过滤，滤液旋蒸，残留物用EA和10ml 20％NaOH水萃取，反复三次。合并有几层，减压旋蒸，得到淡绿色固体0.92g，产率约61％。产品未经纯化，直接用于下步反应。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(s,1H),8.68(s,1H),8.02–7.95(m,1H),7.90–7.76(m,3H),7.57(t,J＝8.1Hz,1H),7.29(d,J＝8.2Hz,1H),6.63(d,J＝2.5Hz,1H),6.52(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.36(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.30(dd,J＝17.0,1.9Hz,1H),5.81(dd,J＝10.0,2.0Hz,1H),3.79(s,3H),3.45(t,J＝5.1Hz,4H),3.01(t,J＝5.1Hz,4H),2.44(s,3H),1.42(s,9H).

4-(4-(((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备

称取4-(4-(((4-((3-丙烯酰胺基苯基)氨基)-5-氨基嘧啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.5g,2.7mmol)置于50mL圆底烧瓶中，加入1mL冰醋酸、15mL无水乙醇，然后加入苯甲酰甲酸乙酯(515mg,3mmol)，加热至回流搅拌约8h，减压旋蒸除去溶剂，残留物DCM和10ml 20％NaOH水萃取，反复三次，合并有机层，柱层析，得到橙红色固体0.71g，产率40％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),8.87(s,1H),8.44(s,1H),8.20(dd,J＝6.7,3.1Hz,2H),7.89(d,J＝8.0Hz,1H),7.75(d,J＝2.1Hz,1H),7.55(t,J＝8.1Hz,1H),7.51–7.45(m,3H),7.39–7.32(m,1H),7.16(dt,J＝7.9,1.3Hz,1H),6.58(d,J＝2.6Hz,1H),6.47(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.27(dd,J＝16.9,2.1Hz,1H),6.04(d,J＝5.4Hz,1H),5.77(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.78(s,3H),3.45(t,J＝5.1Hz,4H),3.00(s,4H),1.43(s,9H).

N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺的制备

称取4-(4-(((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50mg,0.07mmol)置于25mL圆底烧瓶中，加入20mLDCM溶解，然后加入三氟乙酸(24mg,0.21mmol)，常温搅拌，TLC跟踪反应2小时后反应结束，减压旋蒸，残留物用DCM和饱和碳酸氢钠水溶液萃取，合并有机层，旋蒸，得到红褐色固体，16mg，产率42％，随后立即投下一步。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),8.87(s,1H),8.41(s,1H),8.20(dd,J＝6.5,3.2Hz,2H),7.79–7.70(m,2H),7.49(h,J＝4.1Hz,4H),7.35(dd,J＝22.3,15.9,7.2Hz,3H),7.15(d,J＝8.2Hz,1H),6.51(d,J＝7.8Hz,1H),6.49–6.41(m,1H),6.31–6.22(m,1H),6.04(d,J＝5.4Hz,1H),5.78(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H).

实施例3:N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(4-(甲基-d₃)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺合成(化合物2)：

将NaH(0.20g，8.28mmol)、无水四氢呋喃(3mL)混合于50mL两口瓶，N₂保护，冰浴搅拌。将N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(3.66g,6.37mmol)溶于无水四氢呋喃(4mL)，缓慢加入反应液，0℃搅拌10min，快速加入CD₃I(2.78g，19.11mmol)。升温至回流，继续反应19h。冷却至室温，将混合物用水淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析，得产物(1.21g,32.00％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.41(s,1H),8.86(s,1H),8.42(s,1H),8.19(s,2H),7.88(d,J＝7.7Hz,1H),7.75(s,1H),7.54(t,J＝8.1Hz,1H),7.51-7.46(m,3H),7.35(d,J＝8.3Hz,1H),7.15(d,J＝8.2Hz,1H),6.54(s,1H),6.46(dd,J＝16.9,10.1Hz,1H),6.27(d,J＝18.1Hz,1H),6.06(s,1H),5.78(d,J＝10.4Hz,1H),3.77(s,3H),3.05(s,4H),2.45(s,4H).HRMS(ESI):[M+H]⁺calcd for C₃₃H₂₆D₆N₈O₃,592.2864；found 592.2862.HPLC purity:98.77％,retention time＝6.839min.

化合物2的甲磺酸盐合成：

称取化合物化合物2(100mg,17mmol)于100mL的圆底烧瓶中，加入10mL二氯甲烷形成橙红色浑浊，在30℃下搅拌10min，加入甲磺酸(16mg,17mmol)，混合物逐渐变成橙黄色澄清溶液，3min后缓慢变浑浊，继续室温搅拌1h后停止，室温静置过夜，少量的二氯甲烷挥发，壁上有黄色固体析出，超声后抽滤并用少量二氯甲烷洗涤，得到112mg黄色固体，产率96.5％。

其它化合物盐也采用类似方法获得。

实施例4:N-(3-(2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(4-(甲基-d₃)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H))-基)苯基)丙烯酰胺合成路线(化合物3)：

4-(3-(甲氧基-d₃)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

将4-氟-2-(甲氧基-d₃)-1-硝基苯(14.90g,66.22mmol)、叔丁氧羰基哌嗪(11.60g,62.34mmol)、N,N-二异丙基乙胺(12.81g,99.33mmol)和乙腈(20.00mL)混合于100mL的单口瓶中，90℃条件下搅拌12h。反应混合物旋干，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，石油醚重结晶得黄色固体(19.60g，87.00％)。

4-(4-氨基-3-(甲氧基-d₃)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

将4-(3-(甲氧基-d₃)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.21g,6.56mmol)、10％钯碳(0.65g,0.65mmol)和乙醇(8.00mL)混合于50mL的两口瓶中，氢气保护，100℃条件下搅拌24h。反应混合物抽滤，然后用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(PE-DCM:MeOH30:1)，得褐色油状物。

4-(4-((4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-2-基)氨基)-3-(甲氧基-d₃)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

(1)称取4-(4-氨基-3-(甲氧基-d₃)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.74g,5.45mmol)放置于50mL的单口瓶中，加入THF充分搅拌，然后滴入反应体系(2)中。

(2)称取N-(3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(1.67g,5.45mmol)放置于50mL的单口瓶中，加入THF、DIPEA(1.05g,8.17mmol),将反应体系(1)缓缓滴入，室温搅拌1h。将反应混合物旋干，用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。甲醇重结晶，得红褐色固体。

4-(4-((4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-氨基嘧啶-2-基)氨基)-3-(甲氧基-d₃)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

将4-(4-((4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-2-基)氨基)-3-(甲氧基-d₃)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.38g,2.33mmol)、铁粉(0.50g,9.32mmol)、氯化铵(0.62g,11.65mmol)和乙醇：水(8mL,4:1)混合于100mL的单口瓶中，80℃条件下搅拌24h。反应混合物抽滤，滤液调碱，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得紫黑色固体(0.47g，36.00％)。

叔丁基4-(4-((8-(3-丙烯酰胺苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-(甲氧基-d₃)苯基)哌嗪-1-羧酸酯的合成

将4-(4-((4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-氨基嘧啶-2-基)氨基)-3-(甲氧基-d₃)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.42g,0.75mmol)、苯甲酰甲酸乙酯(0.26g,1.12mmol)和乙醇(10mL,4:1)混合于微波反应瓶中，滴加几滴乙酸，微波条件(200PSI,50W,120℃)反应2h。反应混合物调碱，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(DCM:MeOH＝25:1),得红褐色固体(0.15g，30.00％)。

N-(3-(2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺的合成

将叔丁基4-(4-((8-(3-丙烯酰胺苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-(甲氧基-d₃)苯基)哌嗪-1-羧酸酯(0.42g,0.75mmol)、二氯甲烷(3mL)混合于25mL反应瓶中，冰浴下滴加几滴三氟乙酸，常温反应。反应混合物调碱，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(DCM:MeOH＝25:1),得红褐色固体(0.30g，70.00％)。

N-(3-(2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(4-(甲基-d₃)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H))-基)苯基)丙烯酰胺的合成(化合物3)

将NaH(0.20g，8.28mmol)、无水四氢呋喃(3mL)混合于50mL两口瓶，N₂保护，冰浴搅拌。将N-(3-(2-((2-(甲氧基-d₃)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(3.66g,6.37mmol)溶于无水四氢呋喃(4mL)，缓慢加入反应液，0℃搅拌10min，快速加入CD₃I(2.78g，19.11mmol)。升温至回流，继续反应19h。冷却至室温，将混合物用水淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析，得产物(1.21g,32.00％)。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ10.42(s,1H),8.87(s,1H),8.41(s,1H),8.19(s,2H),7.89(s,1H),7.75(s,1H),7.54(t,J＝8.1Hz,1H),7.51-7.47(m,3H),7.35(s,1H),7.15(d,J＝7.8Hz,1H),6.53(d,J＝2.6Hz,1H),6.46(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.27(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),6.02(s,1H),5.78(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),3.05(s,4H),2.46(s,4H).HRMS(ESI):[M+H]⁺calcd for C₃₃H₂₆D₆N₈O₃,595.3052；found 595.3057.HPLC purity:98.82％,retention time＝6.825min.

实施例5:N-(3-(7-氧代-6-苯基-2-((4-(哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)氨基)蝶啶-8(7H))-基)苯基)丙烯酰胺的合成(中间体2)

4-(4-硝基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

将4-氟-1-硝基-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯(1.00g,4.184mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.17g,6.276mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.648g,5.021mmol)和DMF(15.00mL)混合于100mL的单口瓶中，90℃条件下搅拌12h。反应混合物旋干，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得黄色纯产物(2.2g，90.2％)。

4-(4-氨基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

将4-(4-硝基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.52g,3.76mmol)、10％钯碳(0.39g,0.38mmol)和乙醇(8.00mL)混合于100mL的三口瓶中，氢气保护，80℃条件下搅拌24h。反应混合物抽滤，然后用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(DCM:MeOH＝50:1)，得产物(1.02g,78％)。

4-(4-((4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-2-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

称取4-(4-氨基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.90g,2.42mmol)放置于50mL的单口瓶中，加入THF充分搅拌，然后滴入反应体系中。称取N-(3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(0.78g,2.42mmol)放置于100mL的单口瓶中，加入THF、DIPEA(0.47g,3.63mmol),将反应体系缓缓滴入，室温搅拌1h。将反应混合物旋干，用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。甲醇的水溶液重结晶，得红褐色固体(0.70g,50.72％)。

4-(4-((4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-5-氨基嘧啶-2-基)氨基)-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

将N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2三氟乙氧基)苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(0.80g,1.22mmol)、铁粉(0.27g,4.90mmol)、氯化铵(0.33g,6.12mmol)和乙醇：水(25mL,4:1)混合于100mL的单口瓶中，80℃条件下搅拌24h。反应混合物抽滤，滤液调碱，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得深褐色固体(0.56g,75.75％)。

N-(3-(7-氧代-6-苯基-2-((4-(哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)氨基)蝶啶-8(7H))-基)苯基)丙烯酰胺的合成

将N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2三氟乙氧基)苯基)氨基)-5-胺基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(0.33g,0.52mmol)、苯甲酰甲酸乙酯(0.19g,1.05mmol)和乙醇混合于微波反应瓶中，滴加几滴乙酸，微波条件(200PSI,50W,100℃)反应2h。反应混合物调碱，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(DCM:MeOH＝25:1),得红褐色固体(0.3g,78.78％)。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.43(s,1H),8.90–8.80(m,1H),8.40(s,1H),8.18(dd,J＝6.1,2.6Hz,2H),7.84(d,J＝8.1Hz,1H),7.74(s,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.51–7.47(m,3H),7.33(s,1H),7.13(d,J＝7.6Hz,1H),6.65(s,1H),6.45(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.30–6.23(m,1H),6.17(s,1H),5.78(d,J＝10.0Hz,1H),4.71(q,J＝8.9Hz,2H),3.06(s,4H),2.44(s,4H).

实施例6:N-(3-(2-((4-(4-(甲基-d3)哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶啶)-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺的合成(化合物4)

将NaH(0.20g，8.28mmol)、无水四氢呋喃(3mL)混合于50mL两口瓶，N₂保护，冰浴搅拌。将N-(3-(7-氧代-6-苯基-2-((4-(哌嗪-1-基)-2-(2,2,2三氟乙氧基)苯基)氨基)蝶啶-8(7H)-基))苯基)丙烯酰胺(4.10g,7.12mmol)溶于无水四氢呋喃(4mL)，缓慢加入反应液，0℃搅拌10min，快速加入CD₃I(2.78g，19.11mmol)。升温至回流，继续反应19h。冷却至室温，将混合物用水淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析，得产物(1.21g,32.00％)。

LC-MS:m/z＝660[M+H]⁺.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),8.88(s,1H),8.37(s,1H),8.21(dd,J＝6.7,3.1Hz,2H),7.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.76(d,J＝2.2Hz,1H),7.54(t,J＝8.1Hz,1H),7.52–7.45(m,3H),7.43–7.27(m,1H),7.15(dd,J＝7.8,1.9Hz,1H),6.69(s,1H),6.48(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.28(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),6.23–6.09(m,1H),5.79(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),4.75(q,J＝8.9Hz,2H),3.09(s,4H),2.49(s,4H).

实施例7:N-(3-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶啶-8(7H))-基)苯基)丙烯酰胺的合成(化合物5)

4-(4-硝基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的合成

将4-氟-1-硝基-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯(1.00g,4.184mmol)、N-甲基哌嗪(0.63g,6.276mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.648g,5.021mmol)和DMF(15.00mL)混合于100mL的单口瓶中，90℃条件下搅拌12h。反应混合物旋干，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得黄色纯产物(1.20g，90.2％)。

LC-MS:m/z＝320[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.91(d,J＝9.4Hz,1H),6.69(dd,J＝9.4,2.4Hz,1H),6.63(d,J＝2.3Hz,1H),4.92(q,J＝8.8Hz,2H),3.47–3.42(m,4H),2.44–2.40(m,4H),2.22(s,3H).

4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯胺的合成

将1-甲基-4-(4-硝基-3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)哌嗪(1.20g,3.76mmol)、10％钯碳(0.39g,0.38mmol)和乙醇(8.00mL)混合于100mL的三口瓶中，氢气保护，80℃条件下搅拌24h。反应混合物抽滤，然后用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(DCM:MeOH＝50:1)，得产物(0.85g,78％)。

N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的合成

称取4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯胺(0.70g,2.42mmol)放置于50mL的单口瓶中，加入THF充分搅拌。称取N-(3-((2-氯-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(0.78g,2.42mmol)放置于100mL的单口瓶中，加入THF、DIPEA(0.47g,3.63mmol)，将反应液混合，室温搅拌反应1h。将反应混合物旋干，用二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩。甲醇:水重结晶，得红褐色固体(0.70g,50.72％)。

N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2三氟乙氧基)苯基)氨基)-5-胺基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺

将N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2三氟乙氧基)苯基)氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(0.70g,1.22mmol)、铁粉(0.27g,4.90mmol)、氯化铵(0.33g,6.12mmol)和乙醇：水(25mL,4:1)混合于100mL的单口瓶中，80℃条件下搅拌24h。反应混合物抽滤，滤液调碱，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得深褐色固体(0.50g,75.75％)。

N-(3-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶啶-8(7H))-基)苯基)丙烯酰胺

将N-(3-((2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2,2,2三氟乙氧基)苯基)氨基)-5-胺基嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(0.28g,0.52mmol)、苯甲酰甲酸乙酯(0.19g,1.05mmol)和乙醇混合于微波反应瓶中，滴加几滴乙酸，微波条件(200PSI,50W,100℃)反应2h。反应混合物调碱，二氯甲烷萃取，饱和氯化钠水溶液洗涤3次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，柱层析(DCM:MeOH＝25:1),得红褐色固体(0.26g,78.78％)。

LC-MS:m/z＝657[M+H]⁺.¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.43(s,1H),8.86(s,1H),8.41(s,1H),8.18(dd,J＝6.8,3.0Hz,2H),7.84(d,J＝8.3Hz,1H),7.74(t,J＝2.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.51–7.46(m,3H),7.33(s,1H),7.13(d,J＝8.2Hz,1H),6.65(s,1H),6.45(dd,J＝17.0,10.2Hz,1H),6.26(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),6.15(s,1H),5.78(dd,J＝10.0,2.1Hz,1H),4.71(q,J＝8.9Hz,2H),3.06(s,4H),2.44(t,J＝5.0Hz,4H),2.22(s,3H),1.22(d,J＝2.6Hz,3H).

实施例8.激酶和细胞活性测试

测试方法

a)激酶活性测试方法

EGFR-TK能催化三磷酸腺昔(ATP)的一个磷酸基团转移到多肤底物poly(Glu,Tyr)_4:1上，而多肤底物标记有两个荧光基团香豆素(coumarin)和荧光素(fluorescein)。基于荧光能量共振转移(FRET)的方法，EGFR-TK催化ATP发生反应导致两个荧光基团接近，供体(coumarin)在400nM处被激发，部分能量释放，发射波长为445nM，另一部分能量转移到fluorescein，发射波长为520nM。不同化合物对EGFR-TK的抑制程度不同，导致底物磷酸化的程度不同，从而通过测定酶催化底物磷酸化百分比的比值，计算不同化合物的抑制率。

在384孔板中加入2.5μL Test Compounds，5μL Kinase/Peptide SubstrateMixture，2.5μL ATP Solution，10μL反应体系振荡30s混匀，室温孵育1h；加入匀5μLDevelopment Solution，15μL反应体系振荡30s混匀，室温孵育1h；加入5μLStop Reagent，总体积20μL反应体系振荡30s混匀，使用酶标仪进行荧光信号的检测，激发波长为400nm，发射波长分别为445nm和520nm。测定化合物在7个浓度梯度下的抑制率，通过Origin8.0拟合曲线计算各个化合物的IC₅₀值。实验过程进行阳性对照确证反应体系可行性，每次实验三个平行。

体外酶活性分析：野生型及突变型(L858/T790M，Del19)EGFR均购自于Invitrogen。为所有的待测试化合物设置了从5.1×10^-11mo1/L到1.0×10^-6mo1/L的10个浓度梯度。

不同激酶的浓度由优化实验决定，化合物在DMSO中从5.1x10^-9M到1x10^-4M稀释三倍。4μL化合物溶于96μL水，得到4x的化合物溶液。40μM ATP溶于1.33x激酶缓冲液，激酶/肽混合物包含2x激酶、4μM醋氨酸4肽准备好待用。10μL激酶反应包括2.5μL化合物溶液，5μL激酶/肽混合物，2.5μL ATP溶液。5μL磷酸化肽溶液代替激酶/肤混合物用作100％磷酸化对照。2.5μL 1.33x激酶缓冲液代替ATP溶液用作100％抑制对照，2.5μL 4％DMSO代替化合物溶液用作0％抑制对照。板内溶液充分混合后在室温下培养1.5小时。每孔加入5μLDevelopment Solution后继续在室温下培养1小时，非磷酸化肤在此时间内被裂解。最后，加入5μL Stop Reagent结束反应。孔板用EnVisionMultilabel Reader(Perkin Elmer)进行测量。实验数据使用GraphPad Prismversion 4.0进行计算。每次实验均重复3次以上。

b)细胞增殖抑制活性测试方法

细胞增殖及生长抑制分析:H1975(EGFR^L858R/T790M)细胞均从ATCC获得。细胞增殖活性采用MTS分析法进行评估。细胞暴露在处理条件下72小时，各细胞系每次实验所使用的细胞数根据吸光度值(490nm处的吸光度值为1.3-2.2)进行调整。为待测试化合物设置了6个浓度梯度(0.1nM-10μM)，每个浓度值至少使用6组平行对照。

H1975细胞在相应的培养基中培养，细胞在复苏后至少传代两次，然后用于实验使用。对数期的细胞受膜蛋白酶作用并在培养基中再悬浮。H1975(每孔1000细胞)播种于96孔板中，体积100μL；设置6组平行及7列。孔板放于37℃5％二氧化碳的培养箱中过夜。将化合物溶于DMSO，配制浓度为每升10μM，随后将化合物浓度逐步稀释得到的化合物浓度分别为每升10μM、1μM、0.1μM、0.01μM、0.001μM、0.0001μM。2μL化合物溶液加到998μL的培养基中，混合物经充分混合。100μL的混合物加入96孔板中。2μL DMSO代替化合物溶液用作0％抑制对照。培养68小时之后，加入20μL MTT(5mg/mL)。4小时后，抛弃上清液并加入150μL DMSO。摇振10分钟之后，孔板用Synergy HT(Bio TeK)(OD490)读取数据。数据使用GraphPadPrism version 4.0进行计算，IC₅₀值通过使用剂量反应曲线的非线性回归模型调整得到。

结果如表1所示：

表1.化合物对EGFR(L858R/T790M)激酶和H1975细胞的抑制活性

表中数据可以看出，本发明的氘代化合物在激酶水平对EGFR L858R/T790M抑制IC₅₀(nM)在1.0-1.5之间，与非氘代化合物相似。说明氘代衍生物不影响抑制剂和激酶相互作用。而三氟乙氧基取代后的化合物4和化合物5会导致激酶抑制活性下降1倍左右，较大基团引入导致二者相互作用降低是可以理解的。

本发明的化合物对H1975细胞的抑制活性表现规律性不强，这与衍生物的理化性质和代谢性质改变有关，因素较多。氘代化合物与非氘代化合物的细胞活性相似。

实施例9.EGFR 20ins及罕见突变激酶活性测试结果

EGFR 20ins及罕见突变激酶活性测试(委托国外测试公司：Reaction Biology检测，国内代理公司：科瑞斯生物)

测试方法：

RBC--EGFR罕见突变激酶检测方案(Protocol)

a)在新制备的反应缓冲液中制备底物

b)将任何所需的辅因子输送到上述底物溶液中

c)将激酶输送到底物溶液中并轻轻混合

d)通过Acoustic将100％DMSO中的化合物输送到激酶反应混合物中技术(Echo550；纳升范围)，在室温下孵育20分钟

e)将33P-ATP输送到反应混合物中以启动反应

f)室温孵育2小时

g)P81过滤结合法检测激酶活性

从上表的数据可以看出，本发明的化合物对EGFR罕见突变和20ins插入突变的激酶的抑制活性表现优异，比2021年上市的20ins插入突变阳性药TAK788要好。其中化合物2表现最好，有良好应用前景。

实施例10.动物体内药效(EGFR L858R/T790M移植瘤)活性测试结果

动物体内活性评价方法(化合物对H1975细胞移植瘤的体内药效评价)：

实验目的：连续14天口服(PO)给予H1975移植瘤BALB/c裸鼠受试物，随时间记录观察裸鼠体重和肿瘤大小变化，并观察裸鼠给药后的生理活动变化，用以考察受试物抗肿瘤药效。

H1975细胞准备

H1975细胞为上海中科院药物所协议转让。细胞培养基条件为1640+10％FBS(Gibco)，培养箱条件为37℃恒温二氧化碳培养箱，二氧化碳浓度为5％，细胞2-3天换液传代一次并不断扩大培养。待传至所需细胞量进行细胞移植，用胰酶消化细胞4min，然后使用培养基终止消化。收集所得的细胞，1000r/min，3min离心，去除上清，用无血清的1640洗涤2次，移植前细胞活力应保持在95％以上，并用无血清1640做溶媒悬浮细胞，悬液细胞浓度为2000万/mL，将配好的细胞悬液放在冰上待用，为保持细胞活力，细胞悬液应在0.5-1h内接种完成。

H1975移植瘤建模

雄性BALB/c裸鼠72只，4-5周月龄，体重17-23g，由江苏集萃药康生物科技股份有限公司购买，适应动物房环境2-3天后便进行细胞接种。选择裸鼠前肢上侧毛细血管丰富处进行皮下注射细胞悬液，每只注射细胞悬浮液量为0.1mL。

动物房实验条件：实验室温度:23±3℃

实验室湿度：30-60％

各12小时开灯/关灯设置

1-2周左右可见移植瘤成型，待肿瘤平均大小达100-200mm³时进行随机分组，每组8只小鼠，使得每组肿瘤体积基本一致。然后可以给药，按照各组别的给药化合物、给药剂量，给药方式进行给药。之后每天给药，2天1次记录肿瘤体积和小鼠体重，溶剂对照给等量溶剂(0.1mL)。给药前需要记录小鼠的肿瘤体积，小鼠重量。数据使用GraphPad Prismversion 4.0画图。整个实验过程中，隔天测量移植瘤直径，同时称量小鼠体重。肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为：TV＝1/2×L×W2，其中L、W分别表示长、宽，单位mm。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为肿瘤体积增长抑制率TGI，计算公式如下：％TGI＝{[1-(TVt/TV0)/(CVt/CV0)]/(1-CV0/CVt)}×100，TVt＝治疗组在t时的肿瘤体积均值,TV0＝治疗组在加药前的肿瘤体积均值，CVt＝溶剂对照组在t时的肿瘤体积均值，CV0＝溶剂对照组在加药前的肿瘤体积均值。

结果见图1和图2。

从图1看出，化合物2、化合物3动物体内药效(EGFR L858R/T790M移植瘤)活性优异，化合物3(10mg/Kg)活性TGI就达到了96.2％，接近100％；化合物2(10mg/Kg)活性TGI就达到了106.2％。化合物2(5mg/Kg)活性TGI也达到了近80％，效果很明显。

从图2看出，化合物5动物体内药效(EGFR L858R/T790M移植瘤)活性表现一般。

实施例11.化合物对Her2高表达细胞：乳腺癌细胞SKBR3、肺癌细胞H2170、胃癌细胞N87的抑制活性

细胞增殖抑制活性测试方法

细胞增殖及生长抑制分析：乳腺癌细胞SKBR3、肺癌细胞H2170、胃癌细胞N87均从中科院细胞库获得。细胞增殖活性采用CCK8分析法进行评估。细胞暴露在处理条件下72小时，各细胞系每次实验所使用的细胞数根据吸光度值(450nm处的吸光度值为1-1.2)进行调整。为待测试化合物设置了8个浓度梯度(0.1nM-10μM)，每个浓度值至少使用6组平行对照。

细胞在相应的培养基中培养，细胞在复苏后至少传代两次，细胞生长处在对数生长期，然后用于实验使用。SKBR3细胞3000个/孔，H2170细胞6000/孔，N87细胞9000/孔，铺在96孔板中，体积90μL；设置6组平行及7列。孔板放于37℃5％二氧化碳的培养箱中过夜。

将化合物溶于DMSO，关于SKBR3细胞株，配制母液浓度为每升10mM，随后用培养基将化合物稀释100倍，得到最大浓度100μM，然后化合物浓度2倍梯度稀释逐步稀释8个浓度梯度；关于H2170细胞株，配制母液浓度为每升100μM，随后用培养基将化合物稀释100倍，得到最大浓度1μM，然后化合物浓度3倍梯度稀释逐步稀释8个浓度梯度；关于N87细胞株，配制母液浓度为每升100μM，随后用培养基将化合物稀释100倍，得到最大浓度1μM，然后化合物浓度5倍梯度稀释逐步稀释8个浓度梯度；10μL化合物溶液加到铺好的96孔板中。对照补10ul含1％DMSO的培养基代替化合物溶液用作0％抑制对照。培养72小时之后，加入10μlCCK8。1.5小时后，孔板用酶标仪读取数据。数据使用GraphPad Prism version 4.0进行计算，IC₅₀值通过使用剂量反应曲线的非线性回归模型调整得到。

化合物	SKBR3(μM)	H2170(nM)	N87(nM)
				Poziotinib	11.16±3.27	0.74±0.086	0.069±0.035
化合物0	2.68±0.91	17.51±3.09	3.39±1.26
				化合物1	2.37±0.79	24.67±4.16	2.72±0.70
化合物2	2.14±0.60	20.29±3.64	2.95±1.36
				化合物3	1.92±0.41	21.77±6.91	2.92±1.65
化合物4	2.79±0.76	25.68±4.45	8.02±2.43
				化合物5	3.32±0.91	35.73±2.34	8.29±3.22

从上表的数据可以看出，在肺癌H2170、胃癌N87细胞上，化合物1、化合物2、化合物3的细胞活性最优。相比Poziotinib，氘代化合物的细胞活性略低。在乳腺癌SKBR3细胞上，氘代化合物的抑制活性IC₅₀在2-3μM之间，相比于Poziotinib的IC₅₀(11μM)活性更好。

实施例12.化合物的药代动力学性质测试

本发明化合物的药代动力学性质测试委托杭州先导医药科技有限公司和美迪西普亚医药科技(上海)有限公司进行。

如上所述，化合物1-化合物6的药代性质都有明显改善。以在双突变EGFR L858R/T790M表现良好，在EGFR 20ins主要插入突变中表现最好的化合物2为例，其生物利用度达到29.4％；Cmax为223.96ng/mL；AUC_(0-∞)为2643.35ng/mL*h。作为化合物2的盐形式，其甲磺酸盐的药代动力学性质会更好。这些性质对该类型抑制剂在后期临床应用中具有极大优势，且在降低有效剂量，改善安全性方面优势更为明显。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.式I所示化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药：

式I中

G为苯环、五元或六元杂环或C₃-C₈环烷基或不存在；

m为0-3的整数；

A选自下组或不存在：

A’选自下组或不存在：5元亚芳基和6元亚芳基；

m’是0、1、2、3、4、5、6、7或8；

n’是0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；

每个独立的u独立地为2、3或4；

v是1、2、3或4

B选自下组或不存在：

R选自：氢、甲基和氟；

Q₁选自：-C(R_2a)＝和-N＝；

Q₂选自：-C(R_2b)＝和-N＝；

Q₃选自：-C(R_2c)＝和-N＝；

R_2a、R_2b、R_2c各自独立选自：氢，-C(＝O)-；

Z选自：-CH₂-，-C(＝O)-。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药，其特征在于，所述化合物是下式II所示化合物：

式II中

3.如权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药，其特征在于，式II中，

4.下组所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药，其特征在于，所述化合物选自：

5.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1-4中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药和任选的药学上可接受的赋形剂。

6.如权利要求1-4中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药在制备预防或治疗与EGFR蛋白活性异常表达、ERBB2过表达及其点突变相关的疾病的药物中的用途。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述EGFR是突变型EGFR。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述突变型EGFR包括至少一种以下突变：EGFR敏感性突变L858R和19del，EGFR T790M突变，EGFR 18-21外显子点突变和插入突变，ERBB2过表达及其点突变和插入突变。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述EGFR 18-21外显子点突变和插入突变含有：

21号外显子点突变L861Q；

10.如权利要求6-9中任一项所述的用途，其特征在于，所述疾病为癌症为选自以下的一种或多种：非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、神经胶质细胞瘤、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肝癌、肾癌、结肠癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、胃癌或多发性骨髓癌。