CN115850282A

CN115850282A - 靶向降解egfr蛋白的化合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN115850282A
Application number: CN202211170728.XA
Authority: CN
Inventors: 李洪林; 赵振江; 陈卓; 王操林; 王洁; 沙文婕
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2021-09-24
Filing date: 2022-09-23
Publication date: 2023-03-28
Also published as: CN115850281A; WO2023046114A1

Abstract

本发明公开了一种式I或式II所示的靶向EGFR蛋白降解的化合物或其药学上可接受的盐。该类化合物表现出了优异的EGFR降解作用且具有良好的抗肿瘤活性。本发明还公开了所述化合物在制备预防或/和治疗癌症中的应用，以及包含该化合物的药物组合物，用于治疗响应于EGFR的降解的病况或病症，例如癌症。

Description

靶向降解EGFR蛋白的化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物化学领域；具体地说，本发明涉及靶向降解EGFR蛋白的化合物及其制备方法和作为蛋白水解靶向嵌合分子在治疗EGFR介导的疾病，例如肿瘤中的应用。

背景技术

2018年全球肿瘤统计数据显示，全球估计有1819万癌症新增病例以及960万癌症死亡病例。仅我国每天约有1万人确诊癌症，相当于平均每分钟就有7个人确诊癌症。研究发现，在多种癌症的形成和发展中，EGFR都扮演着重要的角色，因此EGFR酪氨酸激酶靶点也就成为癌症靶向治疗的首选作用靶标，特别是在针对非小细胞肺癌的治疗过程中，以EGFR为靶点的小分子抑制剂取得了良好的临床进展，例如第一代可逆抑制剂吉非替尼和埃洛替尼，第二代的不可逆阿法替尼和达可替尼以及具有克服获得性耐药突变EGFR T790M突变活性的第三地奥西替尼。但是癌症随着时间、用药以及其他因数的共同影响下，C797S等耐药突变和EGFR 20ins,G719X，D761Y，S768I等罕见突变出现在EGFR激酶中，由于突变带来的结构不同，导致现有的EGFR小分子抑制剂的治疗效果不佳，不能达到治疗相关疾病的作用。分析EGFR小分子抑制剂的发展进程不难发现，小分子抑制剂开发的速度远远不及EGFR激酶突变的速度，针对相关癌症的治疗急需开发一种全新的治疗策略。

近年来，靶向蛋白质降解(Proteolysis Targeting Chimeras，PROTACs)已成为一种新兴的治疗手段。PROTACs是利用一种双功能小分子，在细胞内PROTACs可以同时与靶蛋白及E3结合，使本来不能与E3结合的靶蛋白泛素化，进而被蛋白酶体识别并降解。自第一个PROTAC分子报道以来，许多E3连接酶，例如von Hippel-Lindau(VHL)，CRBN(cereblon)，Mourine Double Mininute 2(MDM2)和细胞凋亡蛋白1(cIAP1)抑制剂，已被用于设计靶向PROTAC的分子不同的蛋白质。PROTACs分子与经典的抑制剂相比，PROTAC几乎可以完全消除靶蛋白的功能。此外，PROTAC分子通常不需要与目标分子牢固结合和即可实现蛋白质降解，因此，可以有效的避免药物诱导的抗性突变的发生。自2008年Crew课题组报道了首个小分子PROTAC：ARV110以来，到目前为止，PROTAC已有针对多个靶点的药物进入临床实验。目前处于临床一期的两个PROTAC药物ARV-110(靶向雄激素受体，治疗前列腺癌)和ARV-471(靶向雌激素受体，治疗乳腺癌)，都展现了积极的疗效数据。这充分的反应出PROTAC技术在克服耐药和靶向不可成药靶点方面具有非常大的潜力。

因此，运用蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)技术，研究开发可以克服多种非经典突变以及耐药突变C797S的新型靶向药物具有重大的临床意义和应用背景。

发明内容

本发明的目的在于运用蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)技术提供一种能够靶向降解EGFR的小分子，从而克服多种非经典突变以及耐药突变C797S的新型靶向药物。

在第一方面，本发明提供式I或式II所示化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药：

式I和式II中，

R₁独立选自氢、取代或未取代的C₁-C_l0烷基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、任选取代的C₃-C₈环烷基、任选取代或未取代的芳基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基；

R₂、R₃、R₄、R₅独立选自H、卤素、取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)烷氧基或取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)氘代烷氧基、取代或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)烷基、NR_cR_d；其中R_c和R_d各自独立选自氢、C_1-3烷基；

G为苯环、五元或六元杂环或C₃-C₈环烷基或不存在；

R₆独立选自氢、未取代的或卤素取代的C₁-C₄烷基、硝基、氨基、卤素、羟基、C₁-C₆烷氧基、任选取代的C₁-C₆酰氧基、任选取代的C₁-C₆酰氨基、任选取代的C₁-C₆酰基；其中，当G为苯环时，R₆为间位取代；

m为0-3的整数；

R₇独立选自取代或未取代的NH₂、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基、取代或未取代的C₁-C₁₀烷基；

A选自下组或不存在：

X选自下组或不存在：取代或未取代的C_1-3亚烷基(优选-CH₂-)或氘代亚烷基(优选-CD₂-)、-O-、-C(＝O)-、-C(＝O)NHN＝-；

Y选自下组或不存在：-NHC(＝O)-、-C(＝O)NH-、-＝NNHC(＝O)NH-、-CH₂-、-O-；

L选自下组或不存在：C₁-C₁₀亚烷基、C₁-C₁₀亚杂烷基、-A’-(CH₂)_m’-W-(CH₂)_n’-、-(CH₂)_m’-W-(CH₂)_n’-O-(CH₂)_V-和-(CH₂)_m’-W-[(CH₂)_n’-O]_u-(CH₂)_v-；

A’选自下组或不存在：5元亚芳基和6元亚芳基；

W选自：亚苯基、5元亚杂芳基、6元亚杂芳基、C₁-C₁₀亚杂环基和C₁-C₁₀亚烷基；

m’是0、1、2、3、4、5、6、7或8；

n’是0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；

每个独立的u独立地为2、3或4；

v是1、2、3或4

B选自下组或不存在：

R选自：氢、甲基和氟；

Q₁选自：-C(R_2a)＝和-N＝；

Q₂选自：-C(R_2b)＝和-N＝；

Q₃选自：-C(R_2c)＝和-N＝；

R_2a、R_2b、R_2c各自独立选自：氢，-C(＝O)-；

Z选自：-CH₂-，-C(＝O)-。

在具体的实施方式中，所述化合物具有式III或式IV所示的结构：

其中，T选自下组：

其中n是0或1。

在优选的实施方式中，R₃、R₄和R₅独立为氢。

在优选的实施方式中，R₂是取代或未取代的C₁-C₃烷氧基、氘代甲氧基、三氟甲氧基、三氟乙氧基。

在优选的实施方式中，R₂是甲氧基。

在具体的实施方式中，所述化合物具有式V或式VI所示结构：

式中，

L选自下组：

其中m是0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；

n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11。

在优选的实施方式中，R₁独立选自氢、任选取代或未取代的芳基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳杂环基。

在具体的实施方式中，所述化合物具有式VII或式VIII所示结构：

在具体的实施方式中，所述化合物具有式IX或式X所示结构：

式中，

L选自下组：

其中m是0、1、2、3、4、5、6、7、8或9；

n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11；

A选自下组：

T选自下组：

其中n是0或1。

在优选的实施方式中，所述化合物中：

A为

R₂选自OCH₃,OCD₃,OCF₃,OCH₂CF₃；

X为-CH₂-或-C(＝O)-；

Y为-NHC(＝O)-或-C(＝O)NH-；

L为C₁-C₁₀亚烷基；

B为

优选地，

A为

X为-CH₂-；

Y为-NHC(＝O)-或-C(＝O)NH-；

L为C₄-C₇亚烷基；

B为

在具体的实施方式中，所述化合物选自：

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在具体的实施方式中，所述化合物选自：

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在第二方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药和任选的药学上可接受的赋形剂。

在第三方面，本发明提供第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药在制备预防或治疗与EGFR蛋白活性异常表达、ERBB2的点突变相关的疾病的药物中的用途。

在具体的实施方式中，所述EGFR是突变型EGFR。

在优选的实施方式中，所述突变型EGFR包括至少一种以下突变：EGFR敏感性突变L858R和19del，EGFR T790M突变，EGFR 18-21外显子点突变和插入突变，ERBB2的点突变和插入突变。

在优选的实施方式中，所述EGFR 18-21外显子点突变和插入突变含有：

18外显子G719X、E709X、K716A、K728A点突变与密码子709处缺失突变；

19号外显子插入突变I744-K745insKIPVAI、K745-E746insIPVAIK、K745-E746insVPVAIK、K745-E746insTPVAIK和点突变D761Y；

20号外显子插入突变与点突变包括：A763-Y764insFQEA、A763-Y764insFHEA、V769-D770insASV、V769-D770insDNP、D770-N771insNPG、D770-N771insNPH、D770-N771insSVD、D770-N771insASVDN、D770-N771insG、N771-P772insSVDNP、N771-H773dupNPH、P772-H773insPNP、P772-H773insPR、H773-V774insH、A763-Y764insFQEA、H773-V774insPH、H773-V774insNPH、N771-P772insH、H771-P772insN、H773-V774insAH、D770delinsGY、V774-C775insHV等以及20号外显子点突变S768I；

21号外显子点突变L861Q；

ERBB2的点突变V777L、D769Y、R896C、P1170A和插入突变V777-G778insCG、P780-Y781insGSP等。

在优选的实施方式中，所述疾病为癌症为非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、神经胶质细胞瘤、头颈部鳞癌、宫颈癌、食管癌、肝癌、肾癌、结肠癌、皮肤癌、白血病、淋巴瘤、胃癌或多发性骨髓癌实体瘤中至少一种或者其组合。

在第四方面，本发明提供治疗与EGFR蛋白活性异常表达、ERBB2的点突变相关的疾病的方法，包括将治疗有效量的第一方面所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药或第二方面所述的药物组合物给予有此需要的受试者。

在优选的实施方式中，所述EGFR是突变型EGFR。

21号外显子点突变L861Q；

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1a-1h显示了本发明的化合物对肺癌H1975细胞中的EGFR^L858R/T790M蛋白的影响。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，发现一批结构全新的能够靶向降解EGFR的小分子化合物。这些化合物具有抑制EGFR蛋白的活性与降解EGFR蛋白的活性以及良好的抗肿瘤活性，因此这些化合物可用于预防或/和治疗多种癌症，在医药领域具有巨大的应用前景。在此基础上完成了本发明。

术语定义：

本文中涉及到的一些基团定义如下:

本文中，“烷基”指碳链长度为1-10个碳原子的饱和的支链或直链烷基，优选的烷基包括长2-8个碳原子、1-6个、1-4个碳原子、1-3个碳原子不等的烷基。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异于基、庚基等。烷基可以被1个或多个取代基取代，例如被卤素或卤代烷基取代。例如，烷基可以是被1-4个氟原子取代的烷基，或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。

本文中，“烷氧基”指被烷基取代的氧基。优选的烷氧基是长1-6个碳原子的烷氧基，更优选为长1-3个碳原子的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、丙氧基等。烷氧基可以被1个或多个取代基取代，例如被卤素或卤代烷基取代。例如，烷氧基可以是被1-4个氟原子取代的烷基，或者烷基可以是被氟代烷基取代的烷基。

本文中，“链烯基”通常表示具有至少一个双键的单价烃基，通常含有2-8个碳原子，优选含有2-6个碳原子，可以是直链或支链。链烯基的例子包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、己烯基等等。

本文中，“酰氨基”指结构式为“-R’-NH-C(O)-R”的基团，其中，R’可选自氢或烷基，R可选自烷基、链烯基、炔基、被NRcRd取代的烷基、被NRcRd取代的链烯基和NRcRd取代的炔基、被卤素取代的烷基、被氰基取代的链烯基，其中，Rc和Rd可选自烷基和链烯基。

本文中，“芳基”指含有6到14个碳原子的单环、双环或三环芳族基团，包括苯基、萘基、菲基、蒽基、茚基、茀基、四氢化萘基、二氢化茚基等。芳基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6烷基、氰基、硝基、氨基、酰胺基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基等、杂环基或杂芳基等。

本文中，“杂环基”包括但不限于含有1-3个选自O、S或N的杂原子的5元或6元杂环基团，包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯烷基、吡唑基、咪唑基、三唑基、噁唑基、吡喃基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌啶基、吗啉基等。

本文中，“芳杂环基”是指含有5-14个环原子，并且有6个、10个或14个电子在环体系上共用。而且所含环原子是碳原子和从氧、氮、硫中任选的1-3个杂原子。有用的芳杂环基包括哌嗪基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、噻吩基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、包括但不限制于嘧啶基等。芳杂环基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基。

本文中，“卤素”指氟、氯、溴或碘。

本文中，“任选取代的”指其所修饰的取代基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、C1-4醛基、C1-6直链或支链烷基、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、卤素取代的烷基(例如三氟甲基)、卤素取代的烷氧基(例如三氟甲氧基)、羧基、C1-4烷氧基、乙氧甲酰基、N(CH3)和C1-4酰基。

本发明的化合物

在本文中，本发明的化合物是指以下通式I-X所示的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药：

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式中的取代基如上文所述定义。

基于本发明的教导以及本领域的公知常识，本领域技术人员会理解，本发明化合物中的各基团可以作进一步的取代，从而得到能够具备与本发明具体公开的化合物活性相同或相似的衍生物。本发明化合物中的各基团可以被本领域常规的各种取代基取代，只要这种取代不违反化学合成规则或者化合价规则。

本文所用的术语“取代”是指特定基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所替代。特定的取代基可以是前文中相应描述的取代基，也可以是各实施例中出现的具体取代基或者本领域的常规取代基。因此，在本发明中，通式中的取代基也可以各自独立地为实施例中具体化合物中的相应基团；即，本发明既包括上述通式中各取代基的组合，也包括通式中所示部分取代基与实施例中出现的其它具体取代基的组合。制备具有这样的取代基组合的化合物并检测所得化合物是活性是本领域技术人员基于本领域的惯常技术手段不难做到的。换言之，基于本发明的教导，本领域技术人员能够合成落在本发明的保护范围内的各种化合物，这些化合物并不限于说明书实施例部分公开的具体化合物；本发明的化合物既包括实施例部分公开的具体化合物，也包括这些具体化合物中的某一取代位置的具体取代基与通式中其它取代位置的取代基构成的各种化合物，限于篇幅，不在此一一列举。

本文所用的术语，“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。

除非特别说明，本发明所描述的结构式意在包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构和几何异构体(或构象异构体))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体等。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体、非对映异构体或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。

本文所用的术语，“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1H-吲唑与2H-吲唑。化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。

本文所用的术语，“溶剂化物”是指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。

本文所用的术语，“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。

进一步地，作为一种具备药学活性的化合物，本发明化合物显然能够作为药物应用。因此，除了实施例中已经检测的各种特性，本发明的化合物还能够具备作为药物而固有的各种活性。例如，体内活性、生物利用度、成药性、毒性、差异抑制活性等等。基于本发明的教导和本领域的常规技术手段，本领域技术人员知晓如何获得本发明范围内的各种化合物以及检测本发明范围内的各种化合物的各种活性；换言之，基于本发明的教导和本领域的常规技术手段，本领域技术人员知晓如何重复、验证以及实现本发明。

药物组合物和施用方法

由于本发明化合物具有诱导EGFR降解的活性，本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐、前药或溶剂合物或水合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于预防和/或治疗与EGFR蛋白活性异常表达、ERBB2的点突变相关的疾病。

在具体的实施方式中，所述EGFR是突变型EGFR。例如，所述突变型EGFR包括至少一种以下突变：EGFR敏感性突变L858R和19del，EGFR T790M突变，EGFR 18-21外显子点突变和插入突变，ERBB2的点突变和插入突变。

在一优选例中，所述EGFR 18-21外显子点突变和插入突变含有：18外显子G719X、E709X、K716A、K728A点突变与密码子709处缺失突变；19号外显子插入突变I744-K745insKIPVAI、K745-E746insIPVAIK、K745-E746insVPVAIK、K745-E746insTPVAIK和点突变D761Y；20号外显子插入突变与点突变包括：

A763-Y764insFQEA、A763-Y764insFHEA、V769-D770insASV、V769-D770insDNP、D770-N771insNPG、D770-N771insNPH、D770-N771insSVD、D770-N771insASVDN、D770-N771insG、N771-P772insSVDNP、N771-H773dupNPH、P772-H773insPNP、P772-H773insPR、H773-V774insH、A763-Y764insFQEA、H773-V774insPH、H773-V774insNPH、N771-P772insH、H771-P772insN、H773-V774insAH、D770delinsGY、V774-C775insHV等以及20号外显子点突变S768I；21号外显子点突变L861Q；ERBB2的点突变V777L、D769Y、R896C、P1170A和插入突变V777-G778insCG、P780-Y781insGSP等。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温

)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。

联合给药时，所述药物组合物还包括与一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)其他药学上可接受的化合物。该其他药学上可接受的化合物中的一种或多种可与本发明的化合物同时、分开或顺序地施用。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的优点：

本发明提供的化合物，具有抑制EGFR蛋白活性与降解EGFR蛋白活性，具有较强亚型选择性。因此本发明可与用于EGFR蛋白异常表达的相关疾病，如各种癌症。

本发明所述的化合物为一种蛋白水解靶向嵌合分子(PROTACs)，可以有效抑制EGFR蛋白，并具有EGFR靶蛋白降解功能。其蛋白降解机理是通过一端与EGFR蛋白底物相结合，一端与E3泛素连接酶结合，利用这种双功能小分子可以将目标蛋白和细胞内的E3泛素连接酶拉近，从而使本来不能与E3结合的EGFR靶蛋白泛素化，进而被蛋白酶体识别并降解。

体外抗肿瘤活性测试及体外EGFR蛋白降解活性表明，所述化合物表现出了良好的抗肿瘤活性，并表现出优异的EGFR蛋白降解作用，可用于预防或/和治疗多种癌症，在医药领域具有巨大的应用前景。

以下结合具体实施案例对本发明的技术方案进一步描述，但以下实施例不构成对本发明的限制，所有依据本发明的原理和技术手段采用的各种施用方法，均属于本发明范围。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例1.12-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)-12-氧十二烷酰胺的合成

12-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)-12-氧十二烷酸的制备

称取3-(4-氨基-1-氧代异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(500mg,1.9mmol)、3,3’-(((氧双(乙烷-2,1-二基))双(氧))二丙酸(1.2g,4.82mmol)、HATU(0.87g,2.28mmol)、DIPEA(0.23g,2.28mmol)置于25mL圆底烧瓶中，加入15mL乙腈溶解，常温搅拌反应.TLC跟踪反应6小时后反应结束，减压旋蒸，残留物用DCM和饱和碳酸氢钠水溶液萃取，水层用1N的HCl盐酸溶液调至pH为酸，再用DCM萃取，反复三次，合并有机层，旋蒸，得到白色固体，786mg，产率88％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.98(s,1H),11.03(s,1H),9.76(s,1H),7.81(dd,J＝6.9,1.9Hz,1H),7.49(q,J＝7.5,7.0Hz,2H),5.15(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.42–4.29(m,2H),2.92(dd,J＝18.0,13.7,5.4Hz,1H),2.61(d,J＝17.8Hz,1H),2.36(q,J＝8.2,7.4Hz,3H),2.18(t,J＝7.4Hz,2H),2.06–1.96(m,1H),1.65–1.55(m,2H),1.52–1.43(m,2H),1.29(s,4H),1.25(s,8H).

12-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)-12-氧十二烷酰胺(化合物1)

称取N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(20mg,0.03mmol)、12-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)氨基)-12-氧十二烷酸(25mg,0.05mmol)、HATU(19mg,0.05mmol)、DIPEA(6mg,0.05mmol)置于25mL圆底烧瓶中，加入10mL乙腈溶解，常温搅拌反应，TLC跟踪反应6小时后反应结束，减压旋蒸，柱层析分离，得到红褐色固体，10mg，产率31％。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),8.88(s,1H),8.86(d,J＝4.1Hz,1H),8.72(d,J＝8.5Hz,1H),8.49(s,1H),8.19(s,3H),7.76(s,1H),7.74(s,1H),7.66(dd,J＝8.5,4.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.1Hz,1H),7.51–7.47(m,4H),7.41–7.38(m,1H),7.36(s,1H),7.22(s,1H),7.11(d,J＝8.2Hz,1H),6.69–6.64(m,2H),5.32(t,J＝5.0Hz,3H),4.13(q,J＝5.2Hz,1H),3.97(s,2H),3.78(s,2H),3.67(s,4H),2.69(s,9H),2.36(q,J＝7.6Hz,3H),1.99(dt,J＝19.8,7.0Hz,9H),1.71(s,1H),1.49–1.40(m,4H),1.08(q,J＝7.8Hz,4H).

以下化合物的合成均采用与上述合成步骤相同或相似的路线合成:

11-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)-11-氧杂癸酰胺(化合物2)

橙色固体(产率35％).¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ10.92(s,1H),8.86(s,1H),8.49–8.35(m,1H),8.20–8.16(m,1H),7.95(s,1H),7.83(d,J＝2.0Hz,1H),7.52(t,J＝8.1Hz,1H),7.49–7.46(m,2H),7.38–7.32(m,1H),7.29–7.23(m,1H),7.12(dd,J＝7.9,2.0,1.0Hz,1H),6.68–6.60(m,1H),6.59–6.54(m,1H),6.25(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),6.06(s,1H),5.73(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),5.35–5.27(m,1H),3.77(s,2H),3.56(q,J＝5.6Hz,3H),3.02(d,J＝32.7Hz,4H),2.34(t,J＝7.5Hz,2H),1.99(dq,J＝17.0,7.0,6.6Hz,2H),1.51(t,J＝7.1Hz,2H),1.45(p,J＝6.4,5.4Hz,1H),1.29(q,J＝6.5,5.0Hz,6H),1.25(s,1H),1.23(d,J＝4.0Hz,7H),0.85(t,J＝6.9Hz,1H).

10-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)-10-氧十二烷酰胺(化合物3)

橙色固体(产率33％).¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),8.88(s,1H),8.86(d,J＝4.1Hz,1H),8.72(d,J＝8.5Hz,1H),8.49(s,1H),8.19(s,3H),7.76(s,1H),7.74(s,1H),7.66(dd,J＝8.5,4.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.1Hz,1H),7.51–7.47(m,4H),7.41–7.38(m,1H),7.36(s,1H),7.22(s,1H),7.11(d,J＝8.2Hz,1H),6.69–6.64(m,2H),5.32(t,J＝5.0Hz,3H),4.13(q,J＝5.2Hz,1H),3.97(s,3H),3.67(s,4H),2.69(s,9H),2.36(q,J＝7.6Hz,3H),1.99(dt,J＝19.8,7.0Hz,9H),1.71(s,1H),1.49–1.40(m,4H),1.08(q,J＝7.8Hz,4H).

7-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)-7-氧庚酰胺(化合物4)

橙色固体(产率41％).¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.03(s,1H),10.41(s,1H),9.79(s,1H),8.88(s,1H),8.44(s,1H),8.20(dd,J＝6.4,3.2Hz,2H),7.89(s,1H),7.84–7.79(m,1H),7.73(t,J＝2.0Hz,1H),7.55(t,J＝8.0Hz,1H),7.52–7.46(m,4H),7.36(d,J＝8.6Hz,1H),7.16(dd,J＝7.8,2.0,1.0Hz,1H),6.60–6.55(m,1H),6.46(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.27(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),6.05(s,1H),5.77(d,J＝14.7Hz,1H),5.15(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.37(q,J＝17.4Hz,2H),3.78(s,2H),3.57(d,J＝5.3Hz,3H),3.02(d,J＝33.2Hz,3H),2.92(dd,J＝17.2,13.5,5.4Hz,2H),2.61(d,J＝17.0Hz,1H),2.38(t,J＝7.5Hz,4H),2.03(dd,J＝12.2,6.3,3.6Hz,1H),1.65(p,J＝7.5Hz,2H),1.57(p,J＝7.7Hz,2H),1.36(td,J＝13.6,11.8,6.2Hz,2H),1.24(d,J＝4.6Hz,4H).

实施例2.8-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)辛酰胺的合成

8-溴-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)辛酰胺的合成

称取原料8-溴辛酸(0.60g,2.28mmol)放置于25mL的单口瓶中，加入3.00mL的DCM、SOCl₂(0.54g,4.54mmol),最后加入10滴DMF，80℃搅拌至无气泡产生。混合物旋干，再用DCM溶解，滴入反应体系(2)中。称取原料来那度胺(0.5g,2.09mmol)放置于50mL的单口瓶中,加入DCM、DIPEA(1.46g，11.36mmol)，将反应体系(1)缓缓滴入，5h后反应结束。将反应混合物用稀HCl调成pH 1-2，乙酸乙酯和水萃取，食盐水洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥，真空浓缩，硅胶柱色谱法纯化残余物(DCM:MeOH 50:1-15:1)，得白色固体.

8-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)辛酰胺(化合物5)

称取N-(3-(2-((2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(20mg,0.03mmol)、8-溴-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基)辛酰胺(40mg,0.05mmol)、K₂CO₃(20mg,0.15mmol)、KI(1mg,0.003mmol)置于25mL圆底烧瓶中，加入10mL乙腈溶解，常温搅拌反应，TLC跟踪反应6小时后反应结束，减压旋蒸，柱层析分离，得到橙色固体，10mg，产率29％。

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.93(s,1H),11.04(s,1H),10.45(s,1H),9.81(s,1H),8.87(s,1H),8.43(s,1H),8.24–8.15(m,2H),7.93(d,J＝36.1Hz,1H),7.82(d,J＝7.3Hz,1H),7.75(s,1H),7.56–7.51(m,1H),7.49(h,J＝4.8,3.2Hz,5H),7.35(d,J＝14.7Hz,1H),7.20–7.12(m,1H),6.55(s,1H),6.48(dd,J＝16.7,10.2Hz,1H),6.27(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),6.04(s,1H),5.77(dd,J＝10.3,2.0Hz,1H),5.15(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.43–4.31(m,2H),3.78(s,3H),3.03(s,4H),2.92(dd,J＝18.4,13.7,5.5Hz,1H),2.61(d,J＝18.1Hz,2H),2.41–2.33(m,4H),2.18(t,J＝7.4Hz,1H),2.05–1.96(m,2H),1.63(d,J＝9.6Hz,2H),1.50–1.43(m,3H),1.34(d,J＝5.1Hz,4H).HRMS(ESI)(m/z):(M+H)+calcd for C₅₃H₅₆N₁₁O₇958.4286,found,958.4296.

7-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)庚酰胺(化合物6)

橙色固体(产率30％).¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.03(s,1H),10.41(s,1H),9.79(s,1H),8.88(s,1H),8.44(s,1H),8.20(dd,J＝6.4,3.2Hz,2H),7.89(s,1H),7.84–7.79(m,1H),7.73(t,J＝2.0Hz,1H),7.55(t,J＝8.0Hz,1H),7.52–7.46(m,4H),7.36(d,J＝8.6Hz,1H),7.16(dd,J＝7.8,2.0,1.0Hz,1H),6.60–6.55(m,1H),6.46(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.27(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),6.05(s,1H),5.77(d,J＝14.7Hz,1H),5.15(dd,J＝13.3,5.2Hz,1H),4.37(q,J＝17.4Hz,2H),3.78(s,2H),3.57(d,J＝5.3Hz,3H),3.02(d,J＝33.2Hz,3H),2.92(dd,J＝17.2,13.5,5.4Hz,2H),2.61(d,J＝17.0Hz,1H),2.38(t,J＝7.5Hz,4H),2.03(dd,J＝12.2,6.3,3.6Hz,1H),1.65(p,J＝7.5Hz,2H),1.57(p,J＝7.7Hz,2H),1.36(td,J＝13.6,11.8,6.2Hz,2H),1.24(d,J＝4.6Hz,4H).

6-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)己酰胺(化合物7)

橙色固体(产率48％).¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.03(s,1H),10.82(s,1H),10.03(d,J＝24.9Hz,1H),8.87(s,1H),8.41(s,1H),8.19(s,2H),7.94(d,J＝12.8Hz,1H),7.84(d,J＝10.1Hz,2H),7.57–7.42(m,6H),7.35(s,1H),7.25(d,J＝14.5Hz,1H),7.14(d,J＝7.9Hz,1H),6.60(dd,J＝17.1,10.3Hz,1H),6.53(s,1H),6.26(d,J＝17.0Hz,1H),6.03(s,1H),5.80–5.71(m,1H),4.55–4.31(m,2H),3.78(s,3H),3.51(s,1H),3.04(s,4H),2.92(t,J＝14.1Hz,1H),2.37–2.23(m,4H),2.07–1.94(m,3H),1.70–1.61(m,2H),1.51(s,2H),1.36(s,2H),1.24(d,J＝10.1Hz,7H).HRMS(ESI)(m/z):(M+H)+calcd forC₅₁H₅₂N₁₁O₇930.3973,found,930.4073.

N-(3-(2-((4-(4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-4-基]氨基)乙氧基)乙氧基)乙基哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶啶-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺(化合物8)

橙色固体(产率25％).¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.01(s,1H),10.41(s,1H),9.73(s,1H),8.87(s,1H),8.44(s,1H),8.19(t,J＝3.8Hz,2H),7.89(s,1H),7.78–7.72(m,2H),7.58–7.47(m,6H),7.35(d,J＝9.1Hz,1H),7.16(dd,J＝7.8,2.0,1.0Hz,1H),6.57(s,1H),6.46(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.27(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),6.04(s,1H),5.80–5.74(m,1H),5.14(dd,J＝13.4,5.2Hz,1H),4.39(d,J＝18.1Hz,2H),4.27(t,2H),4.17(t,2H),4.02(d,2H),3.77(s,3H),3.72–3.68(m,2H),3.53(t,2H),3.03(d,J＝25.7Hz,4H),2.94–2.88(m,1H),1.99(s,2H),1.76(p,J＝6.3Hz,1H),1.67–1.61(m,1H),1.57–1.50(m,1H),0.88(t,J＝7.4Hz,2H).

N-(3-(2-((4-(4-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1-氧化异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺的合成(化合物9)

橙色固体(产率33％).¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.01(s,1H),10.41(s,1H),9.73(s,1H),8.87(s,1H),8.44(s,1H),8.19(t,J＝3.8Hz,2H),7.89(s,1H),7.78–7.72(m,2H),7.58–7.47(m,6H),7.35(d,J＝9.1Hz,1H),7.16(dd,J＝7.8,2.0,1.0Hz,1H),6.57(s,1H),6.46(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.27(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),6.04(s,1H),5.80–5.74(m,1H),5.14(dd,J＝13.4,5.2Hz,1H),4.39(q,J＝17.4Hz,3H),4.27(s,2H),4.17(s,2H),3.99(t,J＝6.6Hz,1H),3.77(s,3H),3.75–3.72(m,2H),3.72–3.68(m,2H),3.54(d,J＝21.0Hz,4H),3.03(d,J＝25.7Hz,4H),2.91(m,J＝17.3,13.7,5.4Hz,2H),2.59(d,J＝16.1Hz,2H),2.44–2.32(m,2H),2.25(dd,J＝7.3,1.8Hz,1H),1.99(s,2H),1.76(p,J＝6.3Hz,1H),1.67–1.61(m,1H),1.57–1.50(m,1H),1.46(dt,J＝12.8,6.8Hz,1H),1.37(dd,J＝16.3,8.8Hz,1H),1.35–1.29(m,2H),1.28–1.21(m,6H),1.20–1.12(m,1H),1.09(dd,J＝19.3,6.8Hz,1H),1.00(dt,J＝14.5,7.2Hz,1H),0.93–0.83(m,3H).

N-(3-(2-((4-(4-(2-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-2-氧代乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酰基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-7-氧代-6-苯基蝶呤-8(7H)-基)苯基)丙烯酰胺的合成(化合物10)

¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ11.01(s,1H),10.40(s,1H),9.68(s,1H),8.87(s,1H),8.44(s,1H),8.20(d,J＝6.1Hz,2H),7.89(s,1H),7.74(d,J＝7.7Hz,2H),7.58–7.46(m,6H),7.35(s,1H),7.18–7.13(m,1H),6.58(s,1H),6.46(dd,J＝16.9,10.2Hz,2H),6.27(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),6.04(s,1H),5.79–5.75(m,1H),5.14(dd,J＝13.3,5.1Hz,1H),4.43–4.33(m,3H),4.15(q,J＝3.7,3.1Hz,4H),3.98(q,J＝6.9Hz,1H),3.77(s,3H),3.71(dd,J＝5.9,3.4Hz,2H),3.65(dd,J＝5.8,3.5Hz,2H),3.60(d,J＝4.7Hz,4H),3.55(s,2H),3.49(s,2H),3.03(d,J＝21.4Hz,4H),2.91(m,J＝18.0,13.5,5.3Hz,2H),2.58(s,2H),2.41–2.34(m,2H),2.27–2.23(m,1H),2.03–1.96(m,4H),1.58–1.50(m,2H),1.46(q,J＝7.4,6.9Hz,1H),1.33(dt,J＝14.9,7.5Hz,3H),1.23(s,7H),1.16–1.10(m,1H),0.98–0.84(m,4H).

7-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶啶-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)庚酰胺(化合物6)的合成

(4S)-1-((R)-2-(6-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺苯基)7-氧-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基))氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成(化合物11)

橙色固体(产率30％).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.43(s,1H),δ8.99(s,1H),8.87(s,1H),8.58(t,J＝6.1Hz,1H),8.41(s,1H),8.20(dd,J＝6.5,3.2Hz,2H),7.89(d,J＝9.3Hz,1H),7.79–7.70(m,2H),7.49(h,J＝4.1Hz,4H),7.41(q,J＝8.3Hz,4H),7.35(dd,J＝22.3,15.9,7.2Hz,3H),7.15(d,J＝8.2Hz,1H),6.51(d,J＝7.8Hz,1H),6.49–6.41(m,1H),6.31–6.22(m,1H),6.04(d,J＝5.4Hz,1H),5.78(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),5.15(d,J＝3.5Hz,1H),4.55(d,J＝9.4Hz,1H),4.43(td,J＝8.6,4.5Hz,2H),4.35(s,1H),4.22(dd,J＝15.9,5.5Hz,1H),3.78(s,3H),3.68–3.64(m,2H),3.61(t,J＝6.6Hz,2H),3.59(m,J＝6.7,4.0Hz,4H),3.11(m,J＝7.3,4.0Hz,4H),2.45(s,3H),2.27(dt,J＝14.8,7.6Hz,1H),2.14(dt,J＝14.2,7.2Hz,1H),2.03(dt,J＝14.5,9.3,4.6Hz,1H),1.71(p,J＝7.1Hz,2H),1.51(p,J＝13.5,6.6Hz,3H),1.41–1.31(m,3H),0.94(s,9H).HRMS(ESI)(m/z):(M+H)+calcdfor C60H69N12O7S 1100.5055,found,1100.5085.

(4S)-1-((R)-2-(7-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺苯基)-7-氧-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基))氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)庚酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成(化合物12)

橙色固体(产率35％).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.43(s,1H),δ8.99(s,1H),8.87(s,1H),8.58(t,J＝6.1Hz,1H),8.41(s,1H),8.20(dd,J＝6.5,3.2Hz,2H),7.89(d,J＝9.3Hz,1H),7.79–7.70(m,2H),7.49(h,J＝4.1Hz,4H),7.41(q,J＝8.3Hz,4H),7.35(dd,J＝22.3,15.9,7.2Hz,3H),7.15(d,J＝8.2Hz,1H),6.51(d,J＝7.8Hz,1H),6.49–6.41(m,1H),6.31–6.22(m,1H),6.04(d,J＝5.4Hz,1H),5.78(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),5.15(d,J＝3.5Hz,1H),4.55(d,J＝9.4Hz,1H),4.43(td,J＝8.6,4.5Hz,2H),4.35(s,1H),4.22(dd,J＝15.9,5.5Hz,1H),3.78(s,3H),3.68–3.64(m,2H),3.61(t,J＝6.6Hz,2H),3.59(m,J＝6.7,4.0Hz,4H),3.35(t,J＝6.6Hz,2H)3.11(m,J＝7.3,4.0Hz,4H),2.45(s,3H),2.27(dt,J＝14.8,7.6Hz,1H),2.14(dt,J＝14.2,7.2Hz,1H),2.03(dt,J＝14.5,9.3,4.6Hz,1H),1.71(p,J＝7.1Hz,2H),1.51(p,J＝13.5,6.6Hz,3H),1.41–1.31(m,3H),0.94(s,9H).HRMS(ESI)(m/z):(M+H)+calcd for C61H71N12O7S 1114.5211,found,1114.5318.

以下化合物的合成均采用与12-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺基苯基)-7-氧代-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-3-氧代异吲哚-4-基)-12-氧十二烷酰胺相同或相似的路线合成：

N1-(2-(4-(4-((8-(3-丙烯酰胺苯基))-7-oxo-6-苯基-7,8-二氢蝶呤-2-基)氨基)-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙基)-N5-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基))-1-氧代异吲哚啉-4-基)戊二酰胺的合成(化合物13)

橙色固体(产率25％).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.03(s,1H),10.82(s,1H),10.03(d,J＝24.9Hz,1H),8.87(s,1H),8.41(s,1H),8.19(s,2H),7.94(d,J＝12.8Hz,1H),7.84(d,J＝10.1Hz,2H),7.57–7.42(m,6H),7.35(s,1H),7.25(d,J＝14.5Hz,1H),7.14(d,J＝7.9Hz,1H),6.60(dd,J＝17.1,10.3Hz,1H),6.53(s,1H),6.26(d,J＝17.0Hz,1H),6.03(s,1H),5.80–5.71(m,1H),4.55–4.31(m,2H),3.78(s,3H),3.59(m,J＝6.7,4.0Hz,4H),3.11(m,J＝7.3,4.0Hz,4H),2.42(t,J＝7.4Hz,3H),2.21(dt,J＝21.0,7.4Hz,3H),1.99(dt,J＝17.4,7.0Hz,4H),1.87(p,J＝7.4Hz,2H),1.52–1.41(m,3H).HRMS(ESI)(m/z):(M+H)+calcd for C52H53N12O8 972.4031,found,972.4123.Chemical

实施例3.化合物对肺癌H1975细胞中的EGFR^L858R/T790M蛋白表达的影响

使用常规Western Blot(免疫印迹法)进行检测，具体如下。将H1975细胞按一定数量的接种于6孔板，培养箱内贴壁培养过夜后，换液成无血清培养基，饥饿8h，后加入一定浓度的化合物作用12h。用RIPA裂解液裂解细胞收样。然后取适量样品进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后用湿转移系统将蛋白转移至PVDF膜(即聚偏二氟乙烯膜，使用前需在甲醇中活化3min)，转膜结束后将PVDF膜置于封闭液(5％BSA稀释于含0.1％Tween 20的TBS)中室温封闭2h，然后将膜分别于一抗溶液(1:1000稀释于含0.1％Tween 20的TBS)中4℃孵育过夜。用含0.1％Tween 20的TBS洗涤三次，每次7min。将膜置于二抗溶液(辣根过氧化物酶标记羊抗兔的IgG，1:10000稀释于含0.1％Tween 20的TBS)中室温反应2h。同上洗膜三次后，用ECLPlus试剂发色，Tanon 5200s拍照。

图中可以看出化合物5、6、7分别在10nM和33nM对L858R/T790M EGFR表现出降解活性；化合物4在33nM对L858R/T790M EGFR表现出降解活性。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.式I或式II所示化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或前药：

式I和式II中

R₂、R₃、R₄、R₅独立选自H、卤素、取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C ₆(优选C₁-C₃)烷氧基或取代(优选卤素取代，更优选氟取代)或未取代的C₁-C ₆(优选C₁-C₃)氘代烷氧基、取代或未取代的C₁-C₆(优选C₁-C₃)烷基、NR_cR_d；其中R_c和R_d各自独立选自氢、C_1-3烷基；

G为苯环、五元或六元杂环或C ₃-C₈环烷基或不存在；