ES2923931T3 - Producto fermentado y método de producción del mismo - Google Patents
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Abstract
La presente invención proporciona un producto fermentado obtenido por fermentación de miel y manzanilla o un producto tratado de los mismos con Lactobacillus kunkeei. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Producto fermentado y método de producción del mismo
Campo técnico
La presente invención se refiere a un producto fermentado y a un método de producción del mismo.
Técnica anterior
Se sabe que la piel, especialmente la epidermis, tiene una función de barrera. La función de barrera es una función para prevenir la sudoración excesiva de agua desde el interior del cuerpo y la invasión de una sustancia extraña tal como bacterias desde el exterior del cuerpo. Se considera que la unión estrecha existente en el estrato granuloso de la epidermis desempeña un papel importante en la función de barrera de la piel. Las uniones estrechas no solo unen estrechamente a las células adyacentes, sino que también establecen un sellado entre las células para controlar la penetración de una sustancia. Son la claudina, la ocludina y las proteínas de unión estrecha, que son proteínas de la membrana celular, las que constituyen las uniones estrechas. Se considera que estas proteínas constituyen esqueletos de hebras de uniones estrechas y controlan la función de barrera de las uniones estrechas. En la bibliografía de patentes 1, se describen un estimulante de la generación de claudina y un estimulante de la generación de ocludina que contienen un extracto vegetal. En la bibliografía de patentes 2, se describe un agente para mejorar la función de barrera de la piel, que consiste en un extracto de fruto de cactus obtenido de los frutos de una planta Cactaceae perteneciente a Opuntia.
Listado de citas
Bibliografía de patentes
Bibliografía de patentes 1: documento JP 5860577B2
Bibliografía de patentes 2: documento JP 2012-121871A
En el documento WO 2008/136730 A1 se divulgan cepas aisladas de Lactobacillus y Bifidobacterium, que se han aislado de miel fresca o del tubo productor de miel de las abejas melíferas.
Sumario de la invención
Problema técnico
En la bibliografía de patentes 1, se divulga que se investigó el efecto de estímulo de la generación de ocludina utilizando un extracto de manzanilla. En la bibliografía de patentes 1, sin embargo, se muestra que el extracto de manzanilla tuvo poco efecto de estímulo de la generación de ocludina.
Un objeto de la presente invención es proporcionar un nuevo producto de miel fermentado que tenga un excelente efecto de mejora de la piel.
Solución al problema
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas. El alcance de la invención no comprende usos terapéuticos. Los presentes inventores han descubierto recientemente que un producto fermentado obtenido por fermentación de miel y manzanilla o un producto tratado de la misma utilizando Lactobacillus kunkeei tiene un excelente efecto de mejora de la piel.
La presente invención proporciona un producto fermentado obtenido por fermentación de miel y manzanilla o un producto tratado de la misma con Lactobacillus kunkeei como se define en las reivindicaciones. El producto fermentado tiene un excelente efecto de mejora de la piel.
En el producto fermentado, es preferible que la manzanilla o el producto tratado de la misma sea polvo seco de flores de manzanilla. Utilizando polvo seco de flores de manzanilla puede obtenerse más fácilmente un producto fermentado con un mayor efecto de mejora de la piel.
En el producto fermentado, es preferible que la relación de masa de la miel con respecto a la manzanilla o el producto tratado de la misma sea de 26:1 a 4:1. Cuando la relación de masa está en el intervalo, se obtiene un efecto de mejora de la piel aún mayor.
El producto fermentado es adecuado para al menos uno seleccionado del grupo que consiste en mejorar la función de barrera de la piel, hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar las arrugas
de la piel, mejorar la piel áspera y seca, el antienvejecimiento de la piel, mejorar la textura de la piel y mejorar la piel sensible.
La presente invención también proporciona un uso de un producto fermentado para mejorar la función de barrera de la piel, hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar las arrugas de la piel, mejorar la piel áspera y seca, el antienvejecimiento de la piel, mejorar la textura de la piel y/o mejorar la piel sensible, en donde el producto fermentado se obtiene fermentando miel y manzanilla o un producto tratado de la misma con Lactobacillus kunkeei como se define en las reivindicaciones.
Además se describe un método para mejorar la función de barrera de la piel, un método para hidratar la piel, un método para mejorar la elasticidad de la piel, un método para mejorar la opacidad de la piel, un método para mejorar las arrugas de la piel, un método para mejorar la piel áspera y seca, un método para el antienvejecimiento de la piel, un método para mejorar la textura de la piel y un método para mejorar la piel sensible, comprendiendo cada uno una etapa de administración por vía oral de un producto fermentado obtenido mediante la fermentación de miel y manzanilla o un producto tratado de la misma con Lactobacillus kunkeei a un sujeto que lo necesite; o una etapa de aplicación del producto fermentado a la piel del sujeto.
La presente invención también puede considerarse como el uso no terapéutico de un producto fermentado obtenido fermentado miel y manzanilla o un producto tratado de la misma con Lactobacillus kunkeei en la producción de al menos uno seleccionado del grupo que consiste en agentes para mejorar la función de barrera de la piel, el antienvejecimiento de la piel, y mejorar la piel sensible, como se define en las reivindicaciones. Además, la presente invención también puede considerarse como el uso del producto fermentado para hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar una arruga de la piel, mejorar la piel áspera y/o mejorar la textura de la piel.
La presente invención proporciona un alimento, un cosmético, un fármaco o un producto de parafarmacia, que comprende el producto fermentado.
La presente invención proporciona un método para la producción de un producto fermentado, que comprende una etapa de fermentación de miel y manzanilla o un producto tratado de la misma con Lactobacillus kunkeei para obtener un producto fermentado. El producto fermentado obtenido mediante el método de producción tiene un excelente efecto de mejora de la piel.
En el método de producción, es preferible que la manzanilla o el producto tratado de la misma sea polvo seco de una flor de manzanilla.
En el método de producción, es preferible que la relación de masa de la miel con respecto a la manzanilla o el producto tratado de la misma sea de 26:1 a 4:1.
El producto fermentado obtenido en el método de producción es adecuado para al menos uno seleccionado del grupo que consiste en mejorar la función de barrera de la piel, hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar las arrugas de la piel, mejorar la piel áspera y seca, el antienvejecimiento de la piel, mejorar la textura de la piel y mejorar la piel sensible.
La presente invención proporciona un método para la producción de un alimento, un cosmético, un fármaco o un producto de parafarmacia, que comprende una etapa de adición de un producto fermentado obtenido mediante el método de producción.
Efectos ventajosos de la invención
Un producto fermentado de la presente invención tiene un excelente efecto de mejora de la piel.
Descripción de realizaciones
La invención se define en las reivindicaciones adjuntas. El alcance de la invención no comprende usos terapéuticos.
Los aspectos de las realizaciones de la presente invención se describirán en detalle a continuación. En el presente documento, "%" significa "% en masa", a menos que se especifique otra cosa.
Un producto fermentado de acuerdo con la presente realización se obtiene fermentado miel y manzanilla o un producto tratado de la misma (en lo sucesivo en el presente documento también llamado "material de manzanilla") con Lactobacillus kunkeei.
La miel es un producto que las abejas han producido a partir del jarabe recogido del néctar de las plantas, la savia, el fluido de secreción de insectos que son parásitos de las plantas, y similares, como materia prima principal. En la presente realización, el tipo de miel de materia prima sometida a fermentación no está particularmente limitado y los
ejemplos que se pueden utilizar incluyen miel de manuka, miel de acacia, miel de ligamaza, miel de trébol, miel de naranja, miel de orozuz falso, miel de romero, miel de girasol, miel de flor de colza, miel de café. La miel puede utilizarse sola o en combinación de dos o más. El tipo de abejas utilizadas para recoger miel y la zona de producción de miel no están particularmente limitados.
La manzanilla es una planta de las Compositae, y el nombre científico es Matricaria chamomilla L. Las partes de la manzanilla a utilizar no están particularmente limitadas y pueden seleccionarse adecuadamente, y los ejemplos de las mismas incluyen una hoja, un tallo, una raíz, una flor, un brote, una semilla, un fruto, una cáscara, un putamen, una parte terrestre, toda la planta y una mezcla de estos. Es preferible que una parte de la manzanilla a utilizar sean flores.
El material de manzanilla a someter a fermentación puede ser la propia manzanilla obtenida mediante la recogida de manzanilla, o pueden ser los productos tratados de la manzanilla. Los ejemplos del producto tratado de manzanilla incluyen productos tratados obtenidos al someter la manzanilla a un tratamiento tal como secado, pulverización y extracción. Estos tratamientos pueden realizarse solos o en combinación de dos o más. El producto tratado de manzanilla es un producto seco, un producto pulverizado, un producto triturado, polvo o un extracto de manzanilla. La manzanilla se puede secar, por ejemplo, por secado al sol, secado por aire caliente, liofilización, secado por pulverización o similar. Se puede realizar pulverización y triturado, por ejemplo, mediante el uso de una moledora, una trituradora y similares, respectivamente. Es preferible que el material de manzanilla sea polvo seco de manzanilla. El polvo seco de manzanilla puede obtenerse, por ejemplo, secando y pulverizando adicionalmente la manzanilla. Es preferible que la manzanilla se seque inmediatamente después de la recolección y se pulverice. Como producto tratado de manzanilla, se pueden utilizar artículos comerciales.
El extracto de manzanilla puede obtenerse extrayéndolo de la manzanilla mediante un método comúnmente utilizado para la extracción de plantas. Por ejemplo, las partes de extracción de la manzanilla, que es una materia prima de extracción, se alimentan a un tanque de tratamiento lleno de un disolvente de extracción, los componentes solubles se eluyen mientras se agita opcionalmente, si es necesario, a continuación, la mezcla se filtra para eliminar el residuo de extracción y puede obtenerse el extracto líquido.
Como extracto de manzanilla, el extracto líquido obtenido por extracción de la manzanilla puede utilizarse tal cual, por ejemplo, y también puede utilizarse un producto del extracto de manzanilla sometido además a un tratamiento tal como dilución, concentración, secado, filtración o purificación.
El disolvente de extracción puede ser, por ejemplo, un disolvente acuoso, un disolvente orgánico hidrófilo o similar. Los ejemplos del disolvente acuoso incluyen agua pura, agua purificada, agua del grifo, agua de pozo, agua mineral de manantial, agua mineral, agua fuentes de aguas termales, agua de manantial, agua potable, agua caliente, agua de intercambio iónico, solución salina fisiológica, un tampón de fosfato y una solución salina tamponada con fosfato. Los ejemplos de disolventes orgánicos hidrófilos incluyen alcoholes inferiores que tienen de 1 a 5 átomos de carbono tales como metanol, etanol, alcohol propílico y alcohol isopropílico; cetonas alifáticas inferiores tales como acetona y metiletilcetona; y alcoholes polihídricos que tienen de 2 a 5 átomos de carbono tales como 1,3-butilenglicol, propilenglicol y glicerina. Estos disolventes de extracción pueden utilizarse solos o en combinación de dos o más.
La fermentación se realiza utilizando Lactobacillus kunkeei. Es preferible que el Lactobacillus kunkeei utilizado para obtener un producto fermentado de acuerdo con la presente realización muestre capacidad de asimilación de glucosa y fructosa, y es preferible que muestre capacidad de asimilación de glucosa, fructosa, sacarosa, trehalosa y gluconatos. La Lactobacillus kunkeei puede ser Lactobacillus kunkeei BPS402. La Lactobacillus kunkeei BPS402 se ha depositado en el Patent Organism Depositary, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (Chuo 6th, Higashi 1-1-1, Tsukuba-shi, Prefectura de Ibaraki, Japón (código postal 305-8566)) con el número de referencia FERM BP-22177 el 3 de octubre de 2011 y está disponible. La cepa se ha transferido ahora a un depositario internacional y el número de referencia es FERM BP-11439.
La Lactobacillus kunkeei utilizada para la fermentación puede cultivarse de acuerdo con un método convencional. Siempre que la bacteria pueda cultivarse en un medio, el medio no está particularmente limitado, y puede utilizarse un medio natural, un medio sintético, un medio semisintético o similar. Puede utilizarse un medio que contenga una fuente de nitrógeno y una fuente de carbono, los ejemplos de la fuente de nitrógeno incluyen un extracto de carne, peptona, caseína, un extracto de levadura, gluten, harina de soja, hidrolizado de soja y un aminoácido, y los ejemplos de la fuente de carbono incluyen glucosa, lactosa, fructosa, inositol, sorbitol, jarabe de almidón, almidón, líquido de arroz malteado, salvado de trigo, bagazo y melaza. Puede añadirse además materia inorgánica (por ejemplo, sulfato de amonio, fosfato de potasio, cloruro de magnesio, cloruro de sodio, carbonato de calcio, hierro, manganeso, molibdeno), diversas vitaminas o similares.
La temperatura de cultivo puede ser, por ejemplo, de 4 a 45 °C, es preferible que sea de 25 a 40 °C, y es más preferible que sea de 28 a 33 °C. El período de cultivo puede ser de 8 a 72 horas. El cultivo puede realizarse mediante agitación con aireación o batido con aireación. El pH del medio puede ser, por ejemplo, de 4,0 a 9,0, y es preferible que sea de 6,0 a 8,0. Los ejemplos del método de cultivo incluyen inocular la bacteria en un medio MRS y cultivarla a 30 °C durante 48 horas.
El líquido bacteriano obtenido cultivando Lactobacillus kunkeei puede inocularse en un medio de fermentación que contenga miel y un material de manzanilla tal cual y utilizarse para la fermentación, y puede diluirse con un medio o similar y utilizarse.
La miel y un material de manzanilla pueden fermentarse con Lactobacillus kunkeei, por ejemplo, a de 4 a 45 °C, y es preferible fermentarlos a de 25 a 40 °C. El tiempo de fermentación puede ser, por ejemplo, de 12 a 60 horas, y es preferible que sea de 24 a 48 horas. El pH del producto que contiene miel cuando comienza la fermentación puede ser, por ejemplo, de 3 a 8, y es preferible que sea de 4 a 6. La fermentación puede realizarse mediante agitación con aireación o batido con aireación.
La miel y un material de manzanilla pueden fermentarse cultivando Lactobacillus kunkeei en un medio de fermentación que contenga miel y el material de manzanilla. El medio de fermentación que contiene miel y el material de manzanilla pueden estar en una forma en la que el Lactobacillus kunkeei puede fermentar, y pueden estar en una forma tal como un líquido, una pasta o un gel. El medio de fermentación puede ser miel y un material de manzanilla disuelto o suspendido en un disolvente tal como agua.
La concentración de miel en el medio de fermentación cuando comienza la fermentación puede ser, por ejemplo, del 0,1 al 40 %, del 1 al 30 %, o del 8 a 13 % basado en la cantidad total del medio de fermentación. La concentración de miel como contenido sólido en el medio de fermentación cuando comienza la fermentación puede ser, por ejemplo, del 0,08 al 32 %, del 0,8 al 24 %, o del 6,4 a 10,4 % basado en la cantidad total del medio de fermentación.
La concentración del material de manzanilla como contenido sólido en el medio de fermentación cuando comienza la fermentación puede ser, por ejemplo, del 0,01 al 20 %, del 0,1 al 5 %, o del 0,5 a 2 % basado en la cantidad total del medio de fermentación. La relación de masa de miel (cantidad total) con respecto a un material de manzanilla (masa seca) en el medio de fermentación cuando comienza la fermentación puede ser, por ejemplo, de 4000:1 a 1:200 o de 26:1 a 4:1. El medio de fermentación puede contener además nutrientes conocidos necesarios para el cultivo de bacterias del ácido láctico, como vitaminas, aminoácidos, minerales, sales, tensioactivos, ácidos grasos y metales. La miel a utilizar para la fermentación puede someterse a un tratamiento de esterilización por calentamiento o similar.
El producto fermentado de acuerdo con la presente realización puede ser un producto fermentado en sí mismo obtenido por fermentación o también puede ser un producto del producto fermentado sometido además a un tratamiento tal como calentamiento, filtración, purificación, concentración, evaporación a sequedad, liofilización o secado por pulverización. El producto fermentado de acuerdo con la presente realización puede contener células vivas y/o células muertas de Lactobacillus kunkeei, y las células pueden separarse y eliminarse por filtración o similar. Dado que el producto fermentado de acuerdo con la presente realización contiene miel en el medio de fermentación, puede esperarse que componentes tales como una vitamina y un aminoácido aumenten en comparación con una miel de materia prima, y también puede esperarse que se generen ácidos orgánicos que no están contenidos en la miel de materia prima.
El producto fermentado de acuerdo con la presente realización tiene el efecto de estimular la generación de al menos una proteína seleccionada del grupo que consiste en ocludina, claudina 1, claudina 4, proteína de unión estrecha 1, proteína de unión estrecha 2, proteína de unión estrecha 3, una cadena al de colágeno tipo III, colágeno tipo IV, acuaporina 3, serina palmitoil transferasa 2 y TIMP (inhibidor tisular de metaloproteinasa) 2. El producto fermentado de acuerdo con la presente realización también es, por consiguiente, adecuado para estimular la generación de ocludina, claudina 1, claudina 4, proteína de unión estrecha 1, proteína de unión estrecha 2, proteína de unión estrecha 3, una cadena al de colágeno tipo III, colágeno tipo IV, acuaporina 3, serina palmitoil transferasa 2 y/o TIMP2. El producto fermentado también es adecuado para estimular la expresión de genes que codifican estas proteínas.
El producto fermentado de acuerdo con la presente realización tiene el efecto de suprimir la generación de al menos una proteína seleccionada del grupo que consiste en interleucina 1a, interleucina 1p, ciclooxigenasa 2 y metaloproteasa de matriz-9. El producto fermentado de acuerdo con la presente realización es, por consiguiente, adecuado para suprimir la generación de interleucina 1a, interleucina 1p, ciclooxigenasa 2 y/o metaloproteasa de matriz-9. El producto fermentado también es adecuado para suprimir la expresión de genes que codifican estas proteínas.
Se conoce lo siguiente en cuanto a las diversas proteínas mencionadas anteriormente. La ocludina, la claudina 1, la claudina 4, la proteína de unión estrecha 1, la proteína de unión estrecha 2 y la proteína de unión estrecha 3, son proteínas que constituyen las uniones estrechas y se supone que participan en la función de barrera. Las uniones estrechas débiles provocan un aumento de la sudoración de agua, la salida de componentes hidratantes y de iones de calcio, una síntesis deficiente de filagrina y de lípidos intercelulares en relación con la cantidad de agua en las capas córneas, la hiperplasia de queratina o similar, y conduce a una piel seca, piel sensible, piel áspera, falta de transparencia de la piel, la opacidad de la piel, o similares. Al reforzar las uniones estrechas puede esperarse un efecto de prevención de la piel seca, la piel sensible, la piel áspera y la opacidad, una mejora de la transparencia, o similares.
La piel embrionaria contiene una gran cantidad de colágeno tipo III y desempeña un papel en el mantenimiento de la elasticidad de la piel. El colágeno tipo IV es el componente principal de la membrana basal que existe entre la epidermis
y la dermis. La serina palmitoil transferasa 2 es la primera enzima limitante de la velocidad cuando se sintetiza la ceramida. TIMP2 es un inhibidor de la MMP (metaloproteasa de matriz).
Se sabe que la interleucina 1a y la interleucina 1p aceleran la activación de las células inmunitarias y provocan una reacción inflamatoria. En especial, la interleucina 1a existe en los queratinocitos en gran cantidad. Se sabe que la ciclooxigenasa 2 es una sintasa de prostaglandina, la cual se relaciona con la inflamación, y la expresión aumenta por los rayos ultravioleta o similares. La reducción en la generación de ciclooxigenasa 2 suprime la generación de prostaglandina, la cual actúa sobre los melanocitos, y suprime la generación de manchas por los rayos ultravioleta.
Se ha informado que la MMP-9 descompone las proteínas que constituyen la membrana basal y que la expresión aumenta con los rayos ultravioleta. La prevención de un aumento de la MMP-9 suprime la destrucción de la membrana basal y suprime la formación de flacidez y arrugas. La prevención de la destrucción de la membrana basal evita que la melanina formada en la epidermis se desplace hacia el lado dérmico, y por ello se suprime la generación de manchas persistentes.
Por consiguiente, el producto fermentado de acuerdo con la presente realización tiene, por consiguiente, un excelente efecto de mejora de la piel, específicamente, por ejemplo, los efectos de mejorar la función de barrera de la piel, hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar las arrugas de la piel, mejorar la piel áspera y seca, el antienvejecimiento de la piel, mejorar la textura de la piel y mejorar la piel sensible. El producto fermentado de acuerdo con la presente realización es, por tanto, por ejemplo, adecuado para al menos uno seleccionado del grupo que consiste en mejorar la función de barrera de la piel, hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar las arrugas de la piel, mejorar la piel áspera y seca, el antienvejecimiento de la piel, mejorar la textura de la piel y mejorar la piel sensible. El antienvejecimiento de la piel incluye, por ejemplo, la prevención o mejora de una arruga, las manchas, la opacidad, la flacidez, la aspereza, o similares, de la piel; o la mejora de la textura. Una realización de la presente invención es un uso no terapéutico del producto fermentado para mejorar la función de barrera de la piel, el antienvejecimiento de la piel, mejorar la piel sensible, en donde el producto fermentado se obtiene fermentando miel y manzanilla o un producto tratado de la misma con Lactobacillus kunkeei como se define en las reivindicaciones.
Además, se divulga al menos uno seleccionado del grupo que consiste en métodos para mejorar la función de barrera de la piel, hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar las arrugas de la piel, mejorar la piel áspera y seca, el antienvejecimiento de la piel, mejorar la textura de la piel y mejorar la piel sensible, que comprenden: una etapa de administración por vía oral de un producto fermentado obtenido mediante la fermentación de miel y manzanilla o un producto tratado de la misma con Lactobacillus kunkeei a un sujeto que lo necesite; o una etapa de su aplicación en la piel del sujeto.
Una realización de la presente invención es el uso de un producto fermentado obtenido fermentado miel y manzanilla o un producto tratado de la misma con Lactobacillus kunkeei para hidratar la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar las arrugas de la piel, mejorar la piel áspera y seca, y mejorar la textura de la piel, como se define en las reivindicaciones.
El producto fermentado de acuerdo con la presente realización puede ser un componente de un cosmético, un fármaco o un producto de parafarmacia como se define en las reivindicaciones. Un cosmético, un fármaco o un producto de parafarmacia puede estar, por ejemplo, en una forma tal como una solución, una loción lechosa, una pomada, una crema, una pasta, una gelatina, un aerosol, polvo, un aceite, un sólido o una espuma. El producto fermentado puede aplicarse directamente sobre la piel por goteo, pulverización, recubrimiento o similar, o puede administrarse por vía oral. El producto fermentado de acuerdo con la presente realización puede ser una preparación externa para la piel. Los ejemplos del cosmético o producto de parafarmacia incluyen preparaciones para el cuidado de la piel tales como lociones faciales, un limpiador facial, una loción en leche, una crema, un gel, una esencia, un serum, una compresa, una mascarilla, una aceite cosmético y una pomada; cosméticos de maquillaje tales como una base, una barra de labios, un colorete, un carmín, una sombra de ojos, un delineador de ojos, una máscara de pestañas y polvos faciales; un limpiador facial; un agente para masajes; un agente para limpieza; una loción para después del afeitado; una loción para antes del afeitado; una crema de afeitar; jabón para el cuerpo; una crema corporal; un jabón; un champú; un aclarado; un agente de tratamiento del cabello; una loción bronceadora; un loción de protección solar; un crema bronceadora; un crema de protección solar; un gel bronceador; un gel protector solar; un tratamiento para el cabello; un tónico para el cabello; un reparador del cabello; un antitranspirante; una sal de baño; un enjuague bucal; y un colutorio.
Cuando el producto fermentado de acuerdo con la presente realización es un componente de un cosmético, un fármaco, o un producto de parafarmacia, el contenido del producto fermentado puede ser, por ejemplo, del 0,01 al 100 %, es preferible que sea del 0,1 al 50 %, es más preferible que sea del 0,3 al 3,0 %, y es aún más preferible que sea del 0,4 al 1,5 % en un cosmético, un fármaco, o un producto de parafarmacia.
Cuando el producto fermentado de acuerdo con la presente realización es un componente de un fármaco o un producto de parafarmacia, el fármaco o el producto de parafarmacia puede contener, por ejemplo, un componente farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, un vehículo, un material aglutinante, un lubricante, un disgregante, un
emulsionante, un tensioactivo, una base, un agente solubilizante y un agente de suspensión) como otros componentes.
El fármaco o el producto de parafarmacia puede tener cualquier forma, tal como un sólido, un líquido o una pasta, y puede estar en una forma farmacéutica tal como un comprimido (incluyendo un comprimido no recubierto, una gragea, un comprimido efervescente, un comprimido recubierto con película, un comprimido masticable, una pastilla para chupar o similares), una cápsula, una píldora, una sustancia de uso como polvo fino (fármaco en polvo), un granulado fino, un granulado, medicamento líquido, una suspensión, una emulsión, jarabe, una pasta y una inyección (incluido el caso en que se mezcle con agua destilada o una infusión, tal como una infusión de aminoácidos o una infusión de electrolitos, y se prepare como un medicamento líquido en el momento de su uso). Estas diversas preparaciones pueden prepararse, por ejemplo, mezclando el producto fermentado que es un componente activo, con otros componentes si es necesario y formando la forma farmacéutica mencionada anteriormente.
El producto fermentado de acuerdo con la presente realización puede utilizarse como alimento tal cual, y puede utilizarse añadiéndolo al alimento. La mejora de la piel descrita anteriormente puede esperarse mediante la ingestión del producto fermentado. Son preferibles los alimentos en los que se enfatiza la función terciaria de los alimentos (función de ajuste del estado físico). Los ejemplos de alimentos en los que se enfatiza la función terciaria del alimento incluyen un alimento saludable, un alimento funcional, una composición nutritiva, un complemento nutritivo, un complemento, un alimento de uso sanitario, alimentos para un uso sanitario especificado, un alimento nutritivo funcional o un alimento con declaraciones de funciones.
Cuando el producto fermentado se utilice añadiéndolo a los alimentos, los alimentos pueden contener componentes aceptados como alimentos. Los ejemplos de los componentes aceptados como alimentos incluyen minerales, vitaminas, flavonoides, quinonas, polifenoles, un aminoácido, un ácido nucleico, un ácido graso esencial, un refrigerante, un agente aglutinante, un edulcorante, un disgregante, un lubricante, un colorante, un aroma, un estabilizante, un antiséptico, un agente de ajuste de la liberación sostenida, un tensioactivo, un resolutivo y un agente humectante.
Los ejemplos de los alimentos incluyen lo siguiente, el producto fermentado se mezcla con un producto intermedio o un producto final durante los procesos para producirlos, y se pueden obtener alimentos que se utilizarán para los fines mencionados anteriormente: bebidas tales como café, refrescos tales como zumos y bebidas de té, bebidas de leche, bebidas con bacterias del ácido láctico, bebidas de yogur, bebidas carbonatadas, bebidas alcohólicas tales como un sake, una bebida alcohólica occidental, un vino de frutas y un hidromiel; productos para untar tales como crema pastelera; pastas tales como pasta de frutas; dulces de estilo occidental tales como un chocolate, un dónut, un pastel, un bollo de nata, un chicle, una gelatina, un caramelo, una galleta, un pastel y un pudin; dulces de estilo japonés, tales como una tora de arroz rellena de judías dulces, una torta de arroz, un bollo al vapor, tarta tipo Castella, anmitsu y una gelatina dulce de judías adzuki; helados tales como un helado cremoso, un polo y un sorbete; alimentos precocinados tales como el curry, un bol de carne, gachas de arroz, sopa de miso, una sopa, salsa de carne, pasta, encurtidos y mermelada; y condimentos tales como aderezos, un condimento de arroz, un potenciador del sabor y sopa instantánea.
Un alimento, un cosmético, un fármaco o producto de parafarmacia que consiste en el producto fermentado de acuerdo con la presente realización; o el uso del alimento, cosmético, fármaco o producto de parafarmacia que comprende el producto fermentado para mejorar la función de barrera de la piel, hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar las arrugas de la piel, mejorar la piel áspera y seca, el antienvejecimiento de la piel, mejorar la textura de la piel y/o mejorar la piel sensible como se define en las reivindicaciones. El alimento, cosmético, fármaco o producto de parafarmacia mencionado anteriormente puede ser para estimular la generación de ocludina, claudina 1, claudina 4, proteína de unión estrecha 1, proteína de unión estrecha 2, proteína de unión estrecha 3, una cadena al de colágeno tipo III, colágeno tipo IV, acuaporina 3, serina palmitoil transferasa 2 y/o TIMP2, y puede ser para estimular la expresión de los genes que codifican estas proteínas. El alimento, cosmético, fármaco o producto de parafarmacia mencionado anteriormente puede ser para suprimir la generación de interleucina 1 a, interleucina 1 p, ciclooxigenasa 2 y/o metaloproteasa de matriz-9, y puede ser para suprimir la expresión de los genes que codifican estas proteínas.
Un alimento, un cosmético, un fármaco o un producto de parafarmacia que consiste en o que comprende un producto fermentado de acuerdo con la presente realización puede tener, por ejemplo, reclamos tales como la mejora de uniones estrechas; la mejora de la permeabilidad de una vía paracelular; de aclarar la piel; hidratar la piel; prevenir la disminución de la elasticidad y la resistencia de la piel, la sequedad de la piel, la piel áspera y seca, una arruga y el envejecimiento; reafirmar la piel; mejorar la textura y la opacidad de la piel; mejorar la piel sensible; y prevenir el fotoenvejecimiento. Prevenir el fotoenvejecimiento significa específicamente prevenir o mejorar síntomas como las manchas y una arruga por la influencia de la luz, tal como los rayos ultravioleta.
Ejemplos
En lo sucesivo se describirá la presente invención basándose en los Ejemplos de forma más específica.
[Preparación de líquido fermentado de miel y polvo de flores de manzanilla]
Se preparó una solución acuosa (pH 5) que contenía miel de acacia de Rumania (Yamada Bee Company, Inc.) al 10 % (p/p) y polvo de flores de manzanilla al 1 % (p/p). La solución acuosa se trató a 110 °C durante 5 minutos y se esterilizó para obtener un líquido de prefermentación.
Se sometió Lactobacillus kunkeei BPS402 a un cultivo estacionario en un medio de MRS con agar a 30 °C durante 48 horas. Se obtuvo una solución de precultivo mediante la inoculación de un asa de bacterias de las colonias formadas en 50 ml del líquido de prefermentación y se sometió a cultivo con agitación a 30 °C durante 24 horas.
Se inoculó 1 ml de la solución de precultivo en 1000 ml del líquido que contenía el sustrato de fermentación y se realizó un cultivo agitado a la temperatura óptima durante 24 horas. El líquido fermentado obtenido se esterilizó por 5 minutos a 110 °C, luego se filtró y se le añadió fenoxietanol para que esté en una concentración del 0,5 % de fenoxietanol para obtener un líquido fermentado de miel y polvo de flores de manzanilla para las pruebas.
[Prueba de micromatrices de ADN]
Se realizaron pruebas de micromatrices de ADN utilizando un kit de modelo tridimensional de piel humana (EFT-412, fabricado por KURABO INDUSTRIES LTD.). En conformidad con el protocolo, el modelo de piel se trasladó a una placa de 6 pocillos y se precultivó a 37 °C en CO2 al 5 % durante una noche utilizando un medio de ensayo. Después del precultivo, se añadieron 200 pl del líquido fermentado al lado de la capa córnea, se añadieron 2,5 ml del medio de ensayo al lado dérmico y se continuó el cultivo durante 3 días. Después del cultivo, los tejidos de la piel se lavaron con PBS (-), y se realizó el análisis por micromatrices de ADN después de recoger los tejidos usando sacabocados dérmicos (8 mm de diámetro). El análisis se realizó de la misma manera utilizando agua purificada a la que se le añadió fenoxietanol al 0,5 % como control. La citotoxicidad de la sustancia de prueba para el modelo tridimensional de piel se evaluó mediante el método del MTT.
Se realizó un análisis exhaustivo de 42450 genes, mediante el tratamiento con líquido fermentado en comparación con el control, de modo que los genes que aumentaron su expresión 1,5 veces o más fueron 3012 genes, y los genes que disminuyeron su expresión a la mitad o menos fueron 2826 genes. Entre ellos se seleccionaron genes que codifican 15 proteínas, como se muestra en la Tabla 1, como genes relacionados con la función de la piel. No se observó citotoxicidad del líquido fermentado.
[Tabla 1]
Como se muestra en la Tabla 1, al utilizar el líquido fermentado de miel y polvo de flor de manzanilla, se observó que la expresión aumenta significativamente 1,5 veces o más en comparación con el agua purificada en los genes que codifican proteínas, tales como una proteína que constituye uniones estrechas, un colágeno, acuaporina 3 y una enzima limitante de la velocidad de síntesis de ceramida, que participan en la mejora de la retención de la humedad o una función de barrera de la piel. Al mismo tiempo, se observó que el líquido fermentado de miel y polvo de flores de manzanilla suprimía significativamente la expresión de los genes que codifican la interleucina 1, que participa en la
reacción inflamatoria, la ciclooxigenasa 2, que, según se ha informado, aumenta con los rayos ultravioleta, y la MMP-9, que descompone la proteína que constituye la membrana basal de la piel.
[Prueba de estímulo de la generación de proteínas]
El líquido fermentado de miel y polvo de flores de manzanilla y agua con miel al 10 % (miel de acacia de Rumanía al 10 % y agua purificada al 90 %) se utilizaron como sustancias de prueba. Además, se utilizaron para las siguientes pruebas soluciones acuosas en las que las concentraciones de estas sustancias de prueba se ajustaron al 1,0 % o al 0,5 %.
<Prueba de estímulo de la generación de ocludina>
Se cultivaron queratinocitos epidérmicos de lactante recién nacido humanos normales (los NHEK, forma siglada de Normal human newborn infant epidermal keratinocytes) utilizando un medio de crecimiento de queratinocitos (MCQ) epidérmicos humanos normales y las células se recogieron después mediante tratamiento con tripsina. Las células recogidas se diluyeron con MCQ a una concentración de 2 x 105 células/ml, a continuación, las células diluidas se inocularon en una placa de 96 pocillos en una cantidad de 100 gl por pocillo y las células inoculadas se cultivaron durante una noche. Después del cultivo, se añadieron a cada pocillo 100 gl de la muestra de prueba disuelta en MCQ y las células se cultivaron durante 24 horas. Después del cultivo, se retiró el medio y se midió la cantidad de ocludina expresada en las superficies de las células mediante ELISA utilizando un anticuerpo policlonal anti-ocludina humana con las células fijadas a la placa. Un método para calcular la relación de estímulo de la ocludina generada es el siguiente. En la Tabla 2 se muestra el resultado.
Relación de estímulo de ocludina generada (%) = A/B x 100
A: Absorbancia a una longitud de onda de 405 nm cuando se añadió la muestra de prueba
B: Absorbancia a una longitud de onda de 405 nm cuando no se añadió la muestra de prueba (control)
[Tabla 2]
Media ± D.T. n = 6, *: p<0,05, ***: p<0,001
Se observó un alto efecto de estímulo de la generación de ocludina en el líquido fermentado de miel y polvo de flores de manzanilla a concentraciones de 0,5 % y 1,0 %.
<Prueba de estímulo de la generación claudina 4>
Se cultivaron queratinocitos epidérmicos de lactante recién nacido humanos normales (los NHEK) utilizando un medio de crecimiento de queratinocitos (MCQ) epidérmicos humanos normales y las células se recogieron después mediante tratamiento con tripsina. Las células recogidas se diluyeron con MCQ a una concentración de 2 x 105 células/ml, a continuación, las células diluidas se inocularon en una placa de 96 pocillos en una cantidad de 100 gl por pocillo y las células inoculadas se cultivaron durante una noche. Después del cultivo, se añadieron a cada pocillo 100 gl de la muestra de prueba disuelta en MCQ y las células se cultivaron durante 24 horas. Después del cultivo, se retiró el medio y se midió la cantidad de claudina 4 expresada en las superficies de las células mediante ELISA utilizando un anticuerpo monoclonal anti-claudina 4 humana con las células fijadas a la placa. Un método para calcular la relación de estímulo de la claudina 4 generada es el siguiente. En la Tabla 3 se muestra el resultado.
Relación de estímulo de claudina 4 generada (%) = A/B x 100
A: Absorbancia a una longitud de onda de 405 nm cuando se añadió la muestra de prueba
B: Absorbancia a una longitud de onda de 405 nm cuando no se añadió la muestra de prueba (control)
[Tabla 3]
Media ± D.T., n=6, *: p<0,05, **: p<0,01
El efecto de estímulo de la claudina 4 generado se observó en el líquido fermentado de miel y polvo de flores de manzanilla a concentraciones de 0,5 % y 1,0 %.
<Prueba de estímulo de la generación de proteína de unión estrecha 2>
Se cultivaron queratinocitos epidérmicos de lactante recién nacido humanos normales (los NHEK) utilizando un medio de crecimiento de queratinocitos (MCQ) epidérmicos humanos normales y las células se recogieron después mediante tratamiento con tripsina. Las células recogidas se diluyeron con MCQ a una concentración de 2 x 105 células/ml, a continuación, las células diluidas se inocularon en una placa de 96 pocillos en una cantidad de 100 pl por pocillo y las células inoculadas se cultivaron durante una noche. Después del cultivo, se añadieron a cada pocillo 100 pl de la muestra de prueba disuelta en MCQ y las células se cultivaron durante 24 horas. Después del cultivo, se retiró el medio y se midió la cantidad de ZO-2 expresada en las superficies de las células mediante ELISA utilizando un anticuerpo policlonal anti-ZO-2 humana con las células fijadas a la placa. La proteína de unión estrecha-2 también se llama ZO-2. Un método para calcular la relación de estímulo de la ZO-2 generada es el siguiente. En la Tabla 4 se muestra el resultado.
Relación de estímulo de la ZO-2 generada (%) = A/B x 100
A: Absorbancia a una longitud de onda de 405 nm cuando se añadió la muestra de prueba
B: Absorbancia a una longitud de onda de 405 nm cuando no se añadió la muestra de prueba (control)
[Tabla 4]
Media ± D.T., n=6, *: p<0,05
El efecto de estímulo de la ZO-2 generado se observó en el líquido fermentado de miel y polvo de flores de manzanilla a una concentración del 0,5 %.
Como se ha mencionado anteriormente, los efectos de estímulo de la generación de ocludina y claudina 4 se observaron a concentraciones de 0,5 % y 1,0 %, y los efectos de estímulo de la generación de ZO-2 se observaron a una concentración de 0,5 % en el líquido fermentado de miel y polvo de flores de manzanilla. Al mismo tiempo, aunque el agua con miel al 10 % aumentó la generación de ocludina a una concentración del 1,0 %, no afectó las cantidades de claudina 4 y ZO-2 generadas.
Claims (10)
1. Un producto fermentado obtenido por fermentación de miel y manzanilla o un producto tratado de manzanilla con Lactobacillus kunkeei, en donde el producto tratado de manzanilla es un producto seco, un producto pulverizado, un producto triturado, polvo o un extracto de manzanilla.
2. El producto fermentado de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la manzanilla o el producto tratado de la misma es polvo seco de una flor de manzanilla.
3. El producto fermentado de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde una relación de masa de la miel con respecto a la manzanilla o el producto tratado de la misma es de 26:1 a 4:1.
4. Un uso no terapéutico del producto fermentado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para mejorar la función de barrera de la piel, el antienvejecimiento de la piel, y/o mejorar la piel sensible.
5. Uso del producto fermentado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para hidratar la piel, mejorar la elasticidad de la piel, mejorar la opacidad de la piel, mejorar una arruga de la piel, mejorar la piel áspera y seca, y/o mejorar la textura de la piel.
6. Un alimento, un cosmético, un fármaco o un producto de parafarmacia, que comprende el producto fermentado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.
7. Un método para la producción de un producto fermentado, que comprende una etapa de fermentación de miel y manzanilla o un producto tratado de manzanilla con Lactobacillus kunkeei para obtener un producto fermentado, en donde el producto tratado de manzanilla es un producto seco, un producto pulverizado, un producto triturado, polvo o un extracto de manzanilla.
8. El método de producción de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la manzanilla o el producto tratado de la misma es polvo seco de una flor de manzanilla.
9. El método de producción de acuerdo con la reivindicación 7 u 8, en donde una relación de masa de la miel con respecto a la manzanilla o el producto tratado de la misma es de 26:1 a 4:1.
10. Un método para la producción de un alimento, un cosmético, un fármaco o un producto de parafarmacia, que comprende una etapa de adición del producto fermentado obtenido mediante el método de producción de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9.
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