KR101360760B1

KR101360760B1 - 전복 발효추출물 및 이를 함유하는 피부화장료

Info

Publication number: KR101360760B1
Application number: KR1020110108376A
Authority: KR
Inventors: 이충우; 양수옥; 유병국
Original assignee: 이충우
Priority date: 2011-10-21
Filing date: 2011-10-21
Publication date: 2014-02-12
Also published as: KR20130044098A

Abstract

본 발명은 전복 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 (1)전복육과 내장의 급냉 및 동결건조 단계; (2) 건조된 전복육과 내장의 분쇄물을 물과 혼합하고 유산균 및 효모를 접종하여 발효하는 단계; (3) 발효액을 숙성하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 발효방법, 상기 방법에 의하여 제조된 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
[색 인 어]
전복육, 전복내장, 보습, 탄력, 미백, 피부주름 개선

Description

전복 발효추출물 및 이를 함유하는 피부화장료{Fermented ear shell extract and its cosmetic usage}

본 발명은 전복 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 전복 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

발효는 미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해 또는 합성시키는 과정을 의미하며, 대표적인 발효 미생물로는 고초균, 유산균, 누룩균, 효모, 곰팡이, 초산균 등이 있다.

최근 화장품 분야에서는 천연소재들을 이용한 발효 식품 및 화장품에 대한 관심이 증가되면서, 미백, 피부 주름개선, 항산화, 보습, 탄력 등의 연구들이 활기를 띠고 있다.

발효액 추출물은 다른 어떠한 용매를 사용하지 않고, 발효와 숙성과정을 거쳐 천연소재가 함유하고 있는 당성분을 알콜로 변화시키고, 천연소재 속에 들어있는 플라보노이드, 비타민C, 비타민P, 아미노산, 카테킨 등의 유효성분에 대한 추출효율을 높일 수 있다. 또한, 때론 자극적이거나 독성을 줄 수 있는 천연소재는 발효추출법을 통해 천연소재를 안정화시키거나 독성을 줄이거나 안정한 유도체로 전환시키는 방법으로 사용될 수 있으며, 훨씬 뛰어난 미용상의 효과를 얻을 수 있다. 또한, 유산균 및 효모 등의 발효공정에 의해 흡수가 용이한 저분자 물질로의 전환, 불안정하거나 불활성인 형태에서 활성 형태로 전환되는 과정에서 천연소재의 효능을 극대화 시키고, 보습 및 탄력성 증진, 미백, 피부주름 개선 효과를 극대화 시킬 수 있다.

전복[ear shell(Haliotis discus hannai)]은 원시복족목 전복과에 속하는 연체동물의 총칭이며, 바닷물이 깨끗한 암초 주변에서 서식하고, 해조류를 먹이로 이용하는 수산생물로서 칼슘, 인 등의 무기질이 풍부하며, 비타민 B1, B2 및 단백질이 풍부하여 피부미용, 자양강장 및 산후조리 등의 효능이 있다. 특히, 타우린 성분이 풍부하여 간장보호, 피로회복, 심근경색 등에 대한 예방효과가 있으며 간장과 신장을 보호하며 눈을 맑게 하고, 위를 열어주며, 해수를 다스리고, 자양강장, 두통, 현기증 등에 효능이 있으며, 콜라겐 함량이 높아 세포의 재생 및 피부 신진대사를 활성화시켜 피부미용에 도움이 된다. 고급 어패류로서 예로부터 영양양 면에서나 맛에서 다른 해산물과는 비교할 수 없을 정도의 특징을 가지고 있어 우리나라에서는 건강식으로 애용되고 있으나, 가격이 비싸기 때문에 보편화되지는 못하고 있다.

또한, 전복은 산란기가 11월경으로 8월-10월에 가장 맛있고 겨울에는 살이 말라 맛이 없어 계절적인 영향을 받으며, 그 희소성으로 인하여 저장성이 확보되고 한방약재로 활용하고자 가장 기본적인 가공방법인 마른전복으로 가공하는 방법이 이용되고 있다. 이는 전복을 쪄서 말린 것으로 숙포라고 하며, 말린 전복의 경우 마른 오징어처럼 하얀 가루가 생기는데, 이것은 타우린 성분이다.
현재 시중에 판매되고 있는 전복은 1-4년생이 대부분으로, 3년생 이상은 횟감으로 2년생 이하는 전복죽 등 식재료로 사용된다. 그러나 전복의 연령에 따른 육과 내장의 이화학적 특성 비교 연구에 의하면 전복의 연령에 따라 타우린 등을 비롯한 아미노산류, 지방산과 콘드로이친황산 등의 영양성분 및 유효성분의 함량이 다름이 확인된바 있어, 전복의 연령은 원료로써 전복 선정할 시 고려할 사항으로 간주된다.

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전복에 관한 연구로는 전복의 연령에 따른 육과 내장의 이화학적 특성 비교, 전복 내장 추출물을 유효성분으로 하는 면역 강화 조성물, 전복 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 전복 추출물을 함유하는 화장품 조성물 및 이의 제조방법, 전복 내장 추출물을 유효성분으로 하는 면역 강화 조성물, 조개류추출물 함유 간질환 개선 및 예방용 식품 조성물, 활성 산소종 소거 활성을 갖는 전복 소화 가수분해물, 전복엑기스를 함유하는 기능성 음료조성물과 그 제조방법, 전복 동결건조 육을 함유한 숙취해소음료 및 그 제조방법, 천연재료를 이용한 기능성 화장품 조성물, 증숙 건조 전복의 제조방법 및 그에 의해 제조된 증숙 건조전복, 젖산과 자몽종자추출물을 이용한 항균제 조성물 및 이를 이용한 전복의 가공방법 등 식품 및 음료 뿐만 아니라 화장품 분야까지 확장되고 있지만, 아직 도입 단계이고, 발효 공정을 통해 유효성분을 극대화 시킬 수 있는 전복의 발효 추출물에 관한 연구는 없는 실정이다.

이에 본 발명은 전복추출물이 가지는 생리활성물질 탐색하고, 발효공정을 통한 전복추출물의 유효성분의 함량을 증진시킨 화장료 조성물에 관한 것으로서, 전복 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 개발하게 되었다.
한국 등록특허공고 등록번호 제10-0889035호, 발명의 명칭: 식용동식물 발효물의 제조방법, 이에 의해 제조된 식용동식물 발효물 및 이를 포함하는 식품.

본 발명은 전복 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 유산균 및 효모를 통한 발효공정에 의한 발효물 및 이를 유효성분으로 함유하는 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 발효공정을 통한 전복 발효 추출물을 만들고 이 전복 발효 추출물을 함유한 보습, 탄력, 미백, 피부 주름 개선 활성 갖는 화장료이다.

본 발명에 사용된 전복은 (1) 전복육과 내장의 급냉 및 동결건조 단계; (2) 건조된 전복육과 내장의 분쇄물을 물과 혼합하고 유산균 및 효모를 단독 또는 혼합 접종하여 발효하는 단계; (3) 발효액을 숙성하는 단계; 로부터 얻은 발효액, 또는 그 발효액을 다시 일부 또는 전부 감압농축 및 동결건조 하여 제조하여 얻은 농축물, 또는 발효액 및 농축액 중에 함유되고 있는 주 효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.

전복은 육질과 내장을 분리한 후 수세하였으며, -80도에서 급속냉동 보관하여 동결건조 후 분쇄하여 미세 분말 형태로 제조하였다. 전복을 동결건조하여 분말한 후 사용함으로써 전복의 영양성분 및 기능성 성분을 유지하면서 장시간 보관이 가능하고 보관시 취급이 용이하다는 장점이 있으며, 생리활성 성분의 증가는 물론 전복 양식 생산량의 상당부분을 차지하는 양식 3-4년산 전복의 원활한 원료 공급이 가능하다.

전복 발효 추출물은 동결건조하여 분쇄한 분말시료를 안정적인 온도에서 물에 혼합 후, 유산균 및 효모를 단독 또는 혼합한 발효공정을 통해 발효액을 수득하였으며, 발효 후 발효액을 감압농축 및 동결건조하여 사용하거나, 발효공정 수행 후 저온 숙성 또는 고온 숙성하는 공정을 포함할 수 있다.

상기의 발효를 위해 사용한 유산균은 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플렌타럼(Lactobacillus plantarum), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 바실러스 코아귤런스 (Bacillus coagulance) 이며 효모로는 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis)를 사용하였고, 발효 공정은 이들의 혼합 균주로 이루어진 군에서 선택된 하나 또는 둘 이상인 것을 특징으로 한다. 유산균은 배양액을 pH 4.0-5.0, 효모는 pH 6.5-7.5 로 조정하고, 유산균은 20-37 온도에서 3일 내지 7일간, 효모는 50-60 온도에서 24시간 내지 72시간 배양하였다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기의 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않고 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분등을 함유하는 것도 무방하다. 상기 전복 발효추출물은 조성물 전체에 대하여 동결건조 중량 기준 0.001 내지 80 중량%로 조성물에 존재할 수 있다.

만약 상기 전복 발효 추출물이 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀 등의 제형으로 용액 또는 파우더 형태로 존재한다면 당업자는 상기 농도 범위 내에서 본 발명에 따른 조성물 내에 이 용액 또는 파우더의 양을 조절할 수 있을 것이다. 상기한 바와 같이 보습, 탄력개선 효과가 있는 미백 및 피부주름 개선 활성을 갖는 조성물로 가공된 화장품, 식품, 의약품 등에 제공된다.

본 발명의 전복 발효 추출물은 피부외용제로서 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 유연화장수, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩 또는 보디 오일 등의 기초 화장료 및 파운데이션, 립스틱, 마스카라 또는 메이크업 베이스 등의 색조 화장료 형태로 제조할 수 있다. 본 발명의 화장료를 세정제로 사용할 경우, 세안제 및 목욕제를 제조할 수 있다. 이하 본 발명을 하기 위해 실시예와 실험예를 통하여 상세하게 설명하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 제시된 것일 뿐, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 전복 발효 추출물의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 전복 발효 추출물은 콘트로이친황산을 포함한 유효성분을 포함하고, 유산균 및 효모를 이용한 발효공정을 통하여 생성된 발효액은 발효공정 과정에서 생성되는 효소에 의해 고분자 화합물의 저분자 화합물로의 전환으로 피부에 유용한 물질이 증가하여 보습력, 탄력증진, 미백 효과에서 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다. 또한, 전복육과 내장 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 항산화 활성, 콜라겐의 생성, MMP-1(Matrix metalloproteinase ; 콜라겐의 분해를 촉진하는 효소)의 저해 효과가 우수하여 피부 주름 개선 효과를 발휘한다.

<실시예 1> 실험 준비

전복은 생전복을 구입하여 껍질에 붙어 있는 이물질을 제거한 다음 통째로 세척하였고, 육질과 내장을 분리한 후 한번 더 세척하였다. -80℃에서 급속냉동 보관하여 동결건조 후 분쇄하여 분말 형태로 제조하였다.

<실시예 2> 전복 발효 추출물의 제조

전복육질과 내장 분말의 건조 중량의 10배 양의 증류수를 가하여 잘 섞어준 후, pH를 4.0-5.0 내지 6.5-7.5로 조정하고, 미리 배양된 유산균(Lactobacillus plantarum)과 효모(Bacillus subtilis)를 각각 단독으로 10⁷- 10⁸CFU/mL 농도가 되도록 첨가한다. 유산균은 30-37℃ 온도에서 3 - 7 일간 배양하고, 효모는 50-60℃ 온도에서 24시간 내지 72시간 배양하였다. 발효를 종료하기 위해 80℃에서 10분간 열을 가하여 유산균 및 효모의 기능상실을 유도하였다. 원심분리기를 이용하여 침전물을 제거하고 상등액을 채취하거나, 여과된 상등액을 60℃ 이하에서 감압농축한 후 동결건조된 것을 사용하였다.

<비교예 1> 전복 일반 추출물의 제조

대조군으로 사용된 전복 일반 추출물은 발효 공정 없이 동일한 열수 추출 공정을 통해 수득하였다. 즉, 건조 중량의 10배 양의 증류수를 가하여 잘 섞어준 후, 80℃에서 3시간 가온 환류 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 3회 반복 추출하였다. 각 추출물은 냉침한 후, 8마이크로미터 투과사이즈를 갖는 여과지로 여과하였다. 이 여과된 추출액을 60℃ 이하에서 감압농축한 후 감압건조기를 이용해 완전히 건조시켜 전복 일반 추출물을 수득하였다.

<실험예 1> 전복 발효 추출물에 함유된 성분 및 성분의 함량 측정

<1-1> 총 페놀함량 및 총 플라보노이드 함량 측정

총 페놀 함량 측정은 하기와 같이 수행하였다. 시료 200ul에 1N Folin Ciocalteau 용액 200ul을 넣고 10% 탄산나트륨 용액 200ul을 넣어 상온에서 10분간 방치하였다. 반응액을 150g에서 10분간 원심분리하여 상등액을 microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정한다. 이때 표준곡선은 galic acid 0.1% 농도를 희석하여 작성하였고, 검량선으로부터 시료의 총페놀함량을 산출하였다.

총 플라보노이드 함량 측정은 하기와 같이 수행하였다. 시료용액 1% 100ul과 에탄올 300ul, 10% 질산알루미늄용액 20ul, 1M 초산칼륨용액 20ul, 물 560ul을 가하여 충분히 교반한다. 실온에서 40분간 정치 후 액층을 microplate reader (Chromate, USA)를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정한다. 공시험은 시료 용액 대신 에탄올 용액을 이용하여 동일하게 처리하였고, 시료 blank는 질산알루미늄용액 대신 물을 사용한 것을 사용하였다. 이때 표준곡선은 Quercetin 0.05% 농도를 희석하여 작성하였고, 검량선으로부터 시료의 총플라보노이드 함량을 산출하였다(표1).

총 페놀함량 및 총 플라보노이드 함량

시료명	총 페놀 함량 (ug/mg of extract)	총 플라보노이드 함량 (ug/mg of extract)
전복 발효 추출물(유산균)	20.6	8.6
전복 발효 추출물(효모)	22.1	9.8
전복 일반 추출물	15.3	5.9

<1-2> 콘드로이틴황산 함량

콘드로이친황산은 건강기능식품공전에 따라 측정하였다. 즉, 시료 3g을 물을 가하여 혼합하고 100mL로 하여, 이 액 4mL를 정확히 취하여 물을 가해 20mL로 하고, 정량분석용 여지(Adventec. 5C)를 사용하여 여과한 것을 검액으로 하였다. 별도로 두 개의 비색관에 붕산나트륨황산 시약 5mL를 각각 넣고 얼음물로 충분히 냉각한 후 검액과 표준용액을 1mL를 시약 위에 주의하여 가하고 얼음물 속에서 냉각하였다. 각각에 카바졸시액 0.2mL를 정확히 가하여 혼합하고 수욕상에서 15분간 가열하고 얼음물로 실온까지 냉각한다. 이들의 액에 대하여 물 1mL를 사용하여 동일하게 조작한 것을 대조액으로 하여, microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 530nm에서 흡광도를 측정하였다(표2).

콘드로이친황산 함량

시료명	콘드로이친황산 함량(%)
전복 발효 추출물(유산균)	35
전복 발효 추출물(효모)	40
전복 일반 추출물	14

<실험예 2> 항산화 활성

전복 발효 추출물의 항산화 활성을 측정하기 위하여, DPPH(2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 라디칼 소거능을 사용하였다(표3).

500 uM DPPH (2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 용액을 에칠 알콜에 녹여 여과한 후 즉시 사용하였다. 제조된 DPPH 용액과 시료 용액을 1:1로 혼합하여 격렬하게 섞은 후, 상온 암소에 20 분간 방치하였다. Microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정한 후, 하기 수학식 1를 통해 DPPH 라디칼 제거율(%)을 산출하였다. 이때 라디칼을 제거하는 양성 대조군(positive control)으로 1 mM의 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다.

(수학식 1)

DPPH 라디칼 제거율(scavenging, %) = (A - B) / A x 100

상기 식에서, A는 공시험액에서 얻은 흡광도이고, B는 검액에서 얻은 흡광도임

전복 발효 추출물의 항산화 활성

농도(%)	항산화력(%)
농도(%)	전복 발효 추출물(유산균)	전복 발효 추출물(효모)
0.0004	33%	35%
0.002	57%	68%
0.01	91%	95%

<실험예 3> 피부주름 개선 효과

<3-1> 콜라겐 생합성 평가

시료에 대한 Fibroblast 세포 내에서 새로 생성되는 collagen 양을 측정하기 위해 procollagen assay 를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 Fibroblast를 1% Antibiotic-Antimycotic (AA, Welgene, Korea)과 10% Fetal bovine serum (FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM, Welgene, Korea)을 이용하여 37℃, 5 % CO₂incubator에서 배양하였다. 2x10⁵농도의 Fibroblast 세포를 6 well plate에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 무혈청 배지를 처리하여 24시간 동안 starvation 시킨다. 24시간 후, 무혈청 배지를 제거하고 PBS로 세척한후, UV 312nm 파장에서 12.5mJ로 조사하였다. 그 후, 시료를 phenolred free DMEM 배지에 농도 별로 처리하여 48시간 동안 추가 배양하였다. Ascorbic acid 50 uM 을 positive control 로, UV(+)군을 Negative control 로, 배지만 처리한 그룹을 control 로 사용하여 시료의 결과와 비교하였다. 추출물 처리 후 48시간 동안의 배양이 끝난 후 배지를 수거하였다. 수거한 배지는 Procollagen Type-I C-Peptide (PIP) EIA kit(Takara Bio Inc. MK101) 를 이용하여 콜라겐 양을 측정하였다. Antibody-POD conjugate solution 100ul를 각 well에 첨가하고, sample이나 standard를 20ul씩 넣은 뒤 잘 섞어서 37에서 3시간 방치하였다. 반응이 끝나면 내용물을 제거한 뒤 PBS 400ul로 4번 세척하였다. 제거 후 기질용액 100ul를 첨가하여 실온에서 15분간 반응시킨 뒤 stop solution 100ul 첨가하여 부드럽게 섞어주었다, microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정한 후 표준 농도곡선을 작성하여 콜라겐 양을 산정하였다(표 4).

표 4 에 나타난 바와 같이 추출물들의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴보기 위해서, 전복 효모발효 추출물을 처리하였을 경우와 이를 비교하기 위한 전복 일반 추출물(80℃, 3h)을 함께 비교하였다. 전복 일반 추출물(80℃, 3h) 보다 전복 효모발효 추출물로 처리하였을 때, 새로 생성되는 콜라겐양이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

전복 발효 추출물의 자외선에 의한 자극에 의한 콜라겐 생합성

시험군	procollagen conc.(ug/ml)
시험군	0.0004%	0.002%
UV(+)	78
AS 25uM	101
전복육과 내장 효모발효 추출물	125	140
전복 일반 추출물	112	120

<3-2> MMP-1 저해 평가

Collagen 을 분해하는 효소는 그 종류가 다양하며 가장 많이 알려져 있는 것이 collagen type I을 분해하는 MMP-1 (Matrix metalloproteinase I, collagenase)으로 이를 측정하기 위해 MMP-1 assay 를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 Fibroblast를 1% Antibiotic-Antimycotic (AA, Welgene, Korea)과 10% Fetal bovine serum (FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM, Welgene, Korea)을 이용하여 37℃ , 5 % CO₂ incubator에서 배양하였다. 2x10⁵ 농도의 Fibroblast 세포를 6 well plate에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 무혈청 배지를 처리하여 24시간 동안 starvation 시킨다. 24시간 후, 무혈청 배지를 제거하고 PBS로 세척한 후, UV 312nm 파장에서 12.5mJ로 조사하였다. 그 후, 시료를 phenolred free DMEM 배지에 농도 별로 처리하여 48시간 동안 추가 배양하였다. Ascorbic acid 50 uM 을 positive control 로, UV(+)군을 Negative control 로, 배지만 처리한 그룹을 control 로 사용하여 시료의 결과와 비교하였다. 추출물 처리 후 48시간 동안의 배양이 끝난 후 배지를 수거하였다. 수거한 배지는 MMP-1 측정 키트 (RPN 2610, Amersham Bioscience, UK) 를 이용하여 ELISA reader 로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. Anti-MMP1 antibody로 코팅된 96 well plate에 buffer를 well 하나에 첨가하여 blank로 삼고, 배지 중에 유리된 샘플과 표준액 100ul를 각각의 well 에 넣는다, 실온에서 shaking 없이 2시간 동안 반응시킨다. Washing buffer로 well을 가득 채워서 3회 반복해서 세척 한 후 물기를 완전히 제거한다. 100ul peroxide conjugate를 첨가하고, 실온에서 shaking 없이 2시간 동안 반응시킨다. Washing buffer로 well을 가득 채워서 30분간 shaking 하면서 반응시킨다. 100ul 1M H2SO4로 반응을 중지시킨 후 microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다(표 5).

표 5 에 나타난 바와 같이 추출물들의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴보기 위해서, 전복 효모발효 추출물을 처리하였을 경우와 이를 비교하기 위한 전복 일반 추출물(80℃, 3h)을 함께 비교하였다. 전복 일반 추출물(80℃, 3h)에 비해 전복 효모발효 추출물로 처리했을 때 새로 MMP-1 활성이 저해되었고, 이는 콜라겐 생합성 결과(표 5)와 일치하는 양상을 보인다.

전복 효모발효 추출물의 자외선에 의한 자극에 의한 MMP-1 활성 저해도

시험군	MMP-1 (% of control)
시험군	0.0004%	0.002%
UV(+)	100
AS 50uM	73
전복 효모발효 추출물	98	82
전복 일반 추출물	114	90

표 5. 에 나타난 바와 같이 추출물들의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴보기 위해서, 전복 발효 추출물을 처리하였을 경우와 이를 비교하기 위한 전복 일반 추출물(80℃, 3h)을 함께 비교하였다. 전복 일반 추출물(80℃, 3h)로 처리했을 때보다 전복 발효 추출물로 새로 생성되는 콜라겐양이 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이는 표 4 의 콜라겐 생합성에 상응하는 결과를 보여준다.

<실험예 4> 데시게이터를 이용한 보습력 측정

본 발명에 따른 전복 일반 추출물 및 전복 효모발효 추출물 5 mL를 플레이트에 넣은 후 완전건조 된 CaCl₂를 흡습제로 하여 35 데시케이터에서 무게를 측정하였다. 무게는 총 144시간 동안 측정하였다. 화장품 배합의 보습성분으로서 일반적으로 사용되는 1,3-부틸렌 글리콜(BG)과 혼합추출물을 비교하여 실험결과를 나타내었다. 그 결과를 표 6 에 나타내었다.

(수학식 2)

보습력(%) = ( 1 - S/S) x 100

여기서, S는 초기 표본의 무게이고, S는 초기 표본의 무게에서 최종 표본의 무게를 차감한 값이다.

전복 발효 추출물의 데시게이터를 이용한 보습력 측정

시간(hr)	보습력 (%)
시간(hr)	BG	전복 일반추출물	전복 효모발효 추출물
24	100	100	100
48	92	87	93
72	85	75	92
120	82	70	90
144	74	58	87

표 6 에 나타낸 바와 같이, 전복 일반 추출물과 BG에 비해 본 발명에 따른 전복 효모발효 추출물의 보습력이 시간 경과에 따라 유의적으로 높은 것을 알 수 있다.

<실험예 5> 에멀젼 베이스 제조

전복 발효 추출물을 함유한 화장료를 포함한 에멀젼 베이스를 제조하였다. 본 실험에 사용된 화장료는 유화형 화장액 형태이고, 그 조성은 표에 나타낸 바와 같다. 우선 표에 기록되어 있는 전복 효모발효 추출물 및 기타 함량을 중량별로 첨가한 후 (가)상을 가열하여 90℃로 유지하고 정제수(30%)를 90℃까지 가열한 후 (가)수상 중에 천천히 첨가하여 호모믹서로 균일하게 유화한다. 그 후 실온까지 냉각하고 남은 (나)상의 정제수를 첨가하고 균일하게 교반하여 화장액을 제조하였다(표7).

에멀전 베이스 제조

구분	성분	중량%
가	전복 효모발효 추출물	2%
	글리세린	3.00
	디소듐이디티에이	0.02
	폴리글리세릴-3-메틸글루코스 디스테아레이트	1.5
	세테아릴알코올	0.5
	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	7.0
	폴리아크릴아마이드 & C13-14이소파라핀 & 라우레스-7	0.60
	방부제	적량
나	정제수	to 100

<실험예 6> 피부 탄력 효과에 대한 측정

본 발명에 따른 화장품의 피부 탄력 효과에 대한 검사를 측정하기 위하여, 건강한 30-40대 성인 남녀 10명을 대상으로 하였다. 실험예 5에서 제조된 화장품을 이용하였으며, 시험 초기(baseline), 2주, 4주, 6주에 항온항습실(온도 20-22℃, 상대습도 40-60%)에서 피검자는 세안 후 1시간 동안 피부를 안정화한 다음, 측정을 수행하였다. 피부의 탄력도는 cutometer SEM 474(Courage+Khasaka, Germany)로 눈가 부위를 측정하였으며, 측정시 음압은 500 mbar, 흡입시간은 2sec, 반복 측정 횟수는 5회로 측정하여 평균 수치를 이용하였다(표8).

피부 탄력성 측정

시험군	피부탄력도(%)
전복 효모발효 추출물	35
전복 일반 추출물	12

Cutometer SEM 474로 측정하여 피부탄력도를 측정한 결과, 전복 일반 추출물에 비해 전복 효모발효 추출물이 피부탄력도가 3배 정도 더 뛰어나다는 사실을 확인할 수 있었다.

<실험예 7> 피부 안전도 시험

본 발명에 따른 화장품의 피부 안전성 검사를 측정하기 위하여 통상의 패취(patch test) 테스트를 실시하였다. 연구대상은 건강한 30-40대 성인 남녀 10명을 대상으로 팔 하박부 안쪽에 실험예 5에서 제조된 화장품을 첩포한 후 48시간 후에 첨포를 제거하여 피부의 상태(자극 정도)를 관찰하였다. 그 결과는 하기 표 9에 나타내었다.

피부 안전도 측정

시험군	패취테스트(사람수)
시험군		***	**	*
전복 효모발효 추출물	48시간 후	0	0	15
전복 일반 추출물	48시간 후	0	1	14

*** : 매우 자극이 심함.

** : 약간의 자극이 있음

* : 자극이 없음(음성)

<실험예 8> 인체 피부에 대한 미백 효과 시험

연구대상은 건강한 30-40대 성인 남녀 10명을 대상으로 피검자의 상박 부위에 직경 1.5의 구멍이 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erythema Dose)의 1.5~2배 정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 흑화를 유도하였다. 조사 후 시험물질 각 1% (용매는 1,3-부틸렌글리콜:에탄올=7:3), 대조군으로 알부틴 2%, 용매(vehicle)만을 바르고, 한곳은 아무 것도 바르지 않고 10 주 동안 상태 변화를 관찰하였다. 1주 단위로 피부의 색깔을 색차계 CR2002(일본, 미놀타 사)로 측정하였다. 도포 개시시점과 완료시점에서의 피부색의 차이(L*)를 하기 수학식 3에 따라 계산하였고, 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다. 미백효과는 시료 도포 부위와 대조군 부위의 L*의 비교로 판정하는데, L* 값이 2 정도일 경우는 침착된 색소의 미백화가 뚜렷한 경우이고, 1.5 정도 이상이면 미백효과가 있다고 판정할 수 있다.

수학식 3

L* = 도포완료시점에서의 L* 값 - 도포개시 할 때 L* 값

피부에 대한 미백 효과

시험군	멜라닌 생성 억제율(%)
전복 효모발효 추출물	1.80 +/- 0.13
전복 일반 추출물	1.16 +/- 0.25
용매(Vehicle)	0.50 +/- 0.15
알부틴	1.56 +/- 0.11

상기 표 10의 결과로부터, 본 발명에 의한 전복 효모발효 추출물은 전복 일반 추출물뿐만 아니라 양성대조군인 알부틴 보다 우수한 미백 효과를 보이는 것을 확인하였다

Claims

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전복육과 내장의 분쇄물을 물과 혼합하고 효모를 접종하여 발효시키고, 그로부터 수득되는 발효액을 숙성시켜서 수득되는 전복 효모발효 추출물의 건조 중량을 기준으로 조성물 전체에 대해 0.001 내지 80 중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 전복 효모발효 추출물이 발효액 또는 추출 후 감압농축 및 동결건조된 것을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 발효가 배양액의 pH를 6.5 내지 7.5로 조정하고, 50 내지 60℃ 온도에서 24시간 내지 72시간 배양하는 것을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 전복 효모발효 추출물이 함유하는 유효성분에 대한 추출수율 증가 및 발효과정을 통한 생리활성 기능을 갖는 고분자 화합물의 저분자 화합물로의 전환을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 화장료 조성물이 상기 전복 효모발효 추출물을 함유하는 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀 등의 제형으로 되는 것을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 화장료 조성물의 제형이 유연 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O)형의 에멀젼, 페이스크성 또는 고체 무수 생성물, 소구체를 사용한 수성 상에서의 오일 분산물, 이온성 또는 비이온성 형태의 지질 소포체의 형태, 연고, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩 또는 보디오일 등의 기초 화장료, 수중유형 또는 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도우, 마스카라, 치크칼라 및 아이브로우펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 등의 색조 화장료 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 상기 화장료 조성물.
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