KR20130115566A

KR20130115566A - 두족류 추출물 및 발효추출물을 함유하는 피부 화장료

Info

Publication number: KR20130115566A
Application number: KR1020120037962A
Authority: KR
Inventors: 이충우; 강영기; 양수옥; 유병국
Original assignee: 주식회사 유로코스텍
Priority date: 2012-04-12
Filing date: 2012-04-12
Publication date: 2013-10-22

Abstract

본 발명은 두족류(Cephalopod) 추출물 및 발효추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 보다 자세하게는 두족류(頭足類) 낙지, 오징어, 문어, 쭈꾸미 복합 4종 이용한 두족류 추출물 및 고초균, 유산균, 효모 중에서 선택된 1종 이상의 균주를 접종하여 얻은 발효액을 함유한 두족류 발효추출물을 특징으로 하는 피부보습, 피부탄력 강화, 미백 및 주름개선, 육모 효과가 우수한 피부외용제 조성물에 관한 것이다.
(색 인 어)
두족류 추출물, 두족류 발효추출물, 보습, 탄력강화, 미백, 주름개선, 육모 효과, 화장료

Description

두족류 추출물 및 발효추출물을 함유하는 피부 화장료{Cosmetic composition from cephalopod extract and its fermentation}

본 발명은 두족류 추출물 및 발효추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 피부보습, 피부탄력 강화, 미백 및 주름개선, 육모 효과가 우수한 피부외용제 조성물에 관한 것이다.

과거로부터 현재까지 최근 몇 년 동안 경제난 속에서도 현대 사회인의 미욕(美慾)은 더욱 더 증가되고 있다. 이처럼 미(美)와 건강은 개인의 경쟁력, 삶의 질의 핵심이자 기본 욕구가 되었고, 나날이 발전되는 화장품 R&D 소재가 단순히 천연 성분이나 식물성 원료임을 강조하던 것은 옛말이다. 다양한 인증에서부터 함유량, 출신지, 전성분 표시까지 넓어진 스펙트럼만큼이나 범람하고 있는 발효화장품 및 자연주의 화장품 시장의 열기가 여전히 뜨겁게 지속되고 있어, 이 시대에 맞는 화장료 신소재 개발을 확대시킬 필요가 있다.

피부는 외피(integument)라고도 하며, 신체 외부를 덮고 있는 기능 이상을 수행한다. 특히 피부는 인체가 갖고 있는 약 65~70%의 수분이 체외로 증발되는 것을 조절해 주는 중요한 역할을 함으로써 피부가 부드럽고 촉촉한 상태를 유지할 수 있도록 하며, 깊숙한 곳에 있는 신체 기관을 절연시키는 쿠션 역할을 한다. 또한, 피부는 물리, 화학적 손상, 열손상 혹은 자외선이나 세균에 따른 손상, 건조 등으로부터 보호하고 외부 환경에 대한 일차적인 방어기능을 담당하며, 모세혈관망과 한선이 풍부하여 신체 표면의 열 손실을 조절하는데 중요한 역할을 하고, 땀을 통해서 염분, 물을 배출시키는 작용을 한다.

피부는 외부에서부터 순서대로 크게 표피, 진피, 피하지방 조직의 3개 층으로 구분되며, 피부의 구조를 보면 바깥쪽의 표피(Epidermis)는 중층편 평상피로 각화(Keratinizing) 상태이고, 안쪽의 진피(Dermis)는 치밀 결합조직이며, 진피 안쪽에는 피하조직(Subcutaneous tissue 또는 Hypodermis)으로 피부를 안쪽 기관에 고정 시키는 역할을 한다. 이 중 표피는 3개층 중에서 가장 얇은 층으로 피부의 보습 및 보호를 담당하는 중요한 기능을 하고, 피부미용에서도 밀접한 관련을 갖고 있어 많은 연구가 진행되고 있다. 표피층 중 최외각층을 구성하는 각질층의 성분은 케라틴 50%, 지방 20%, 수용액 23%, 수분 7%로, 각질층의 수분 함유상태에 따라 각질층의 두께가 다르고, 수분양이 적어지면 각질 양이 두꺼워져 피부결이 거칠어지며, 각질층의 탄력성 유지를 위해서는 10%이상의 수분함유가 필수적인 것으로 알려져 있다. 또한 표피는 연령, 성별, 구체적 부위, 지속적인 환경자극, 스트레스의 증가 등 외부 자극 누적으로 인해 그 기능이나 구조에도 변화를 일으키게 되며, 이러한 변화를 통해 피부 염증, 노화 등의 반응이 진행되고 피부 보호막으로서의 기능이 저하된다.

최근 다양한 피부염이 증가하고 있는데 그 중에서도 피부건조에 의한 트러블 증상이 두드러진다. 건조에 의해 발생한 피부염은 피부의 탈각질화 증세만 나타나는 것이 아니라 염증성 피부병변을 동반하는 경우도 있기 때문에, 화장품 분야에는 피부트러블을 개선하기 위해 보습성분을 가진 천연 추출물 사용되고 있으나, 피부 자극성과 실제 보습에의 유용성에 대한 연구는 미약한 실정이다. 뿐만 아니라, 이러한 추출물을 얻기 위해서는 장시간이 소요되는 등의 문제점이 있어 실용성이 극히 낮은 반면에, 발효액 추출물은 다른 어떠한 용매를 사용하지 않고 발효숙성과정을 통해 천연소재가 함유하고 있는 당류를 알코올로 변화시키고, 천연소재 속에 들어있는 플라보노이드, 비타민C, 비타민P, 아미노산, 카테킨 등의 유효성분에 대한 추출효율을 높임으로써, 천연소재의 효능을 높이고, 피부 안전성 문제를 해결할 수 있다. 또한, 고초균, 유산균 및 효모 등의 발효공정에 의해 고분자 물질을 흡수가 용이한 저분자 물질로의 전환, 불안정하거나 불활성 형태에서 활성 형태로 전환되는 과정에서 천연소재의 효능을 극대화 시키며, 이에 따라 우수한 피부 보습 효과를 얻을 수 있을 뿐만 아니라 추출된 이후에 발생될 수 있는 자극적이거나 독성이 나타날 수 있는 천연소재를 안정화 시키거나 독성을 줄임으로써, 효과적으로 안정한 유도체로 전환시킬 수 있다.

본 발명의 두족류는 연체동물 중 가장 체제가 발달한 무리로, 이동성이 높고 주변환경에 민감하며, 대단히 활동적인 포식자이다. 또한 최종 포식자의 먹이로서 해양 생태계에서 매우 중요한 위치를 차지하고 있으며, 이 동물군에 속하는 많은 종들은 대체로 크기가 크고 육질이 풍부하며, 대부분 해역에서 다량 어획되므로 식량자원으로서의 가치가 매우 높다. 낙지나 오징어에는 성인병 유발의 대표적인 원인물질 중 하나인 콜레스테롤이 많이 함유 되어 있다고 하여 섭취를 기피하는 이들도 많지만, 두족류 연체동물의 유효성분으로 타우린과 베타인류가 다량 함유되어 있고, EPA나 DHA 등은 LDL(Low Density Lipoprotein) 콜레스테롤을 감소시키고 몸에 좋은 HDL(High Density Lipoprotein) 콜레스테롤을 증가시켜 오히려 혈중 콜레스테롤을 저하시킬 뿐 아니라, 혈압정상화, 심장병예방, 인슐린 분비촉진 등 다양한 생리활성 역할을 하여 각종 성인병 예방 및 치료에 효과적이다.

두족류는 종이나 크기에 따라 맛, 향, 질감 등이 각기 다르고 생산량에도 큰 차이가 있는데, 그 중 오징어(학명: Todarodes paci -ficus)와 문어(학명: Paroctopus dofleini), 낙지(학명: Octopus variabilis SASAKI), 쭈꾸미(학명: Octopus ocellatus Gray)만이 가공에 많이 이용 되고 있는 실정이다. 두족류 중 오징어는 국내 해면어업에서 연간 197,084 M/T으로 생산량이 멸치류 다음으로 가장 많고 우리 국민이 좋아하는 수산물중 하나이다. 국내 두족류에 관한 연구 및 특허에 있어서, 가공 중의 성분변화, 건제품가공, 젓갈제조 및 부산물의 이용 등의 오징어 식품가공에 관한 연구가 대부분이고, 문어와 낙지, 쭈꾸미, 꼴뚜기에 대해서는 분류생태나 번식생태에 관한 연구와 식품화학적 연구만 일부 존재한다.

현재까지 화장품 분야에서 두족류를 이용한 연구 및 특허는, 국내 두족류의 먹물추출물을 이용한 염모제 및 모발처리제 조성물(국내특허출원번호: 10-2006-0077500; 10-2007-0050722; 10-2007-0069748) 관련 특허가 유일하며, 낙지, 쭈꾸미, 꼴뚜기 등의 두족류를 이용한 화장료 조성물에 관한 연구는 전무하다.

이에 본 발명은 두족류 4종(낙지, 오징어, 문어, 쭈꾸미)을 이용한 두족류 추출물 및 발효추출물을 함유하는 피부보습, 피부탄력 강화, 미백 및 주름개선, 육모 효과가 우수한 피부외용제 조성물을 개발하게 되었다.

본 발명은 두족류 추출물 및 발효추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 두족류 추출물 및 고초군, 유산균, 효모 중에서 선택된 1종 이상의 균주를 접종하여 얻은 발효액을 함유한 두족류 발효추출물을 함유하는 피부보습, 피부탄력 강화, 미백 및 주름개선, 육모 효과가 우수한 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 두족류 추출물 및 발효공정을 통한 두족류 발효추출물을 함유한 피부보습, 피부탄력 강화, 미백 및 주름개선, 육모 효과가 우수한 피부외용제 조성물을 제공함을 목적으로 한다.

보다 상세하게는, 본 발명에서 사용된 두족류(낙지, 오징어, 문어, 쭈꾸미)의 외피를 물로 수세하고, 중앙을 따라 안쪽으로 가늘고 얇은 연갑(軟甲)을 수직으로 얕게 칼집을 내어 몸통을 열어 연갑을 발라낸 뒤, 머리 부분에 연결되어 있는 내장이 터지지 않도록 주의하면서 제거한 한 후, 3~4분간 분쇄하여 추출공정에 들어간다. 두족류 중량의 10배 양의 증류수를 가하여 잘 섞어준 후, 80℃에서 3시간 가온 환류 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 추출하였다.

발효방법은 고초균, 유산균, 효모를 이용하여 두족류 추출물을 혼합 발효시키는 공정을 포함하는 것을 특징으로 한다. 배양액을 pH 4.0-5.0 내지 5.0-7.5 로 조정하고, 미리 배양된 고초균, 유산균, 효모를 각각 10⁷-10⁸ CFU/mL 농도가 되도록 첨가한 후, 25℃ 내지 50℃ 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하였다. 얻어진 추출물을 상온까지 자연 냉각시킨다. 발효를 종료하기 위해 80℃에서 10분간 열을 가하여 고초균, 유산균, 효모의 기능상실을 유도하였다. 원심분리기를 이용하여 침전물을 제거하고 상등액을 채취하거나, 여과된 상등액을 사용하였다. 상기 방법으로 얻어진 발효물은 숙성하는 단계를 거칠 수 있으며, 이로부터 얻은 발효물 또는 그 발효물을 다시 일부 또는 전부 감압농축 및 동결건조하여 얻은 농축물, 또는 발효물 및 농축액 중에 함유되고 있는 주 효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 추출물 및 발효추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주된 효과를 손상시키지 않고 주된 효과에 상승효과를 포함하여 상품적 우수성을 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다. 상기 두족류 추출물 및 발효추출물은 조성물 전체에 대하여 동결건조 중량 기준 0.01 내지 100 중량%로 조성물에 존재할 수 있다.

만약 상기 두족류 추출물 및 발효추출물이 나노캡슐, 마이크로캡슐, 나노좀 등의 제형으로 용액 또는 파우더 형태로 존재한다면 당업자는 상기 농도 범위 내에서 본 발명에 따른 조성물 내에 이 용액 또는 파우더의 양을 조절할 수 있을 것이다. 상기한 바와 같이 피부보습, 피부탄력 강화, 미백 및 주름 개선, 육모 효과를 갖는 조성물로 가공처리된 화장품, 식품, 의약품 등에 제공된다.

본 발명의 두족류 추출물 및 발효추출물은 피부외용제로서 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않으며, 유연화장수, 밀크로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터 또는 보디 오일 등의 기초 화장료 및 파운데이션, 립스틱 또는 메이크업 베이스 등의 색조 화장료 형태로 제조할 수 있다. 본 발명의 화장료를 세정제로 사용할 경우, 피부 세안제 및 목욕제를 제조할 수 있다.

이하 본 발명을 하기 위해 실시예와 비교예, 실험예 및 제형예를 통하여 상세하게 설명하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위하여 제시된 것일 뿐, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에서는 두족류 추출물 및 발효추출물을 함유하는 조성물의 피부보습, 피부탄력 강화, 미백 및 주름개선, 육모 효과를 확인하였으며, 인체 피부 자극시험 등의 안전성 평가를 통해 본 발명의 목적을 달성하였다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 두족류 추출물 및 발효추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 두족류 발효추출물의 발효방법은, 두족류 추출물에 고초균, 유산균, 효모 중 1종 이상의 균주를 접종하여 단독 또는 혼합한 발효방법을 이용한다는 특징이 있다. 본 발명의 두족류 추출물 및 발효추출물을 함유하는 화장료 조성물은 우수한 피부 보습성, 미백효과, 콜라겐의 분해를 촉진하는 효소 저해 활성을 통한 피부탄력 강화, 피부 노화방지 및 주름개선과 우수한 육모 효과를 발휘한다.

<실시예 1> 두족류 발효추출물의 제조

두족류(낙지, 오징어, 문어, 쭈꾸미)의 동량을 가지고 외피를 물로 수세하고, 중앙을 따라 안쪽으로 가늘고 얇은 연갑(軟甲)을 수직으로 얕게 칼집을 내어 몸통을 열어 연갑을 발라낸 뒤, 머리 부분에 연결되어 있는 내장이 터지지 않도록 주의하면서 제거한 한 후, 3~4분간 분쇄하여 추출공정에 들어간다. 두족류 중량의 10배 양의 증류수를 가하여 잘 섞어준 후, 80℃에서 3시간 가온 환류 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 추출하였다.

얻어진 추출물을 상온까지 자연 냉각시킨다. 배양액 pH를 4.0-5.0 내지 5.0-7.5 로 조정하고, 미리 배양된 고초균, 유산균, 효모를 각각 10⁷- 10⁸ CFU/mL 농도가 되도록 첨가한 후, 25℃ 내지 50℃ 온도에서 18시간 내지 120시간 배양하였다. 발효를 종료하기 위해 80℃에서 10분간 열을 가하여 고초균, 유산균, 효모의 기능상실을 유도하였다. 원심분리기를 이용하여 침전물을 제거하고 상등액을 채취하거나, 여과된 상등액을 사용하였다.

<비교예 1> 두족류 추출물의 제조

대조군으로 사용된 두족류 추출물은 발효 공정 없이 동일한 열수 추출 공정을 통해 수득하였고, 전처리 공정은 두족류 발효추출물과 동일하다. 중량의 10배 양의 증류수를 가하여 잘 섞어준 후, 80℃에서 10분간 가온 환류 추출하여 상등액과 침전물을 분리하여 추출하였다. 얻어진 추출물을 상온까지 자연 냉각시킨 후, 원심분리기를 이용하여 침전물을 제거하고 상등액을 채취하거나, 여과된 상등액을 사용하였다.

<실험예 1> 항산화 활성

두족류 추출물과 발효추출물의 항산화 활성을 측정하기 위하여, DPPH(2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 라디칼 소거능을 사용하였다.

500 uM DPPH (2.2-diphenyl-1-picryl hydrezyl) 용액을 에칠 알콜에 녹여 여과한 후 즉시 사용하였다. 제조된 DPPH 용액과 시료 용액을 1:1로 혼합하여 격렬하게 섞은 후, 상온 암소에 20 분간 방치하였다. Microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정한 후, 하기 수학식 1를 통해 DPPH 라디칼 제거율(%)을 산출하였다. 이때 라디칼을 제거하는 양성 대조군(positive control)으로 1 mM의 아스코르브산(ascorbic acid)을 사용하였다.

수학식 1

DPPH 라디칼 제거율(scavenging, %) = (A - B) / A x 100

상기 식에서, A는 공시험액에서 얻은 흡광도이고, B는 검액에서 얻은 흡광도임

두족류 추출물과 발효추출물의 항산화 활성

농도(%)	항산화력(%)
농도(%)	두족류 추출물	두족류 발효추출물
0.005	38%	47%
0.01	59%	66%
0.1	88%	94%

<실험예 2> 피부주름 개선 효과

<2-1> 콜라겐 생합성 평가

시료에 대한 Fibroblast 세포 내에서 새로 생성되는 collagen 양을 측정하기 위해 procollagen assay 를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 Fibroblast를 1% Antibiotic-Antimycotic (AA, Welgene, Korea)과 10% Fetal bovine serum (FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM, Welgene, Korea)을 이용하여 37℃, 5 % CO₂ incubator에서 배양하였다. 2x10⁵ 농도의 Fibroblast 세포를 6 well plate에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 무혈청 배지를 처리하여 24시간 동안 starvation 시킨다. 24시간 후, 무혈청 배지를 제거하고 PBS로 세척한후, UV 312nm 파장에서 12.5mJ로 조사하였다. 그 후, 시료를 phenolred free DMEM 배지에 농도 별로 처리하여 48시간 동안 추가 배양하였다. Ascorbic acid 50 uM 을 positive control 로, UV(+)군을 Negative control 로, 배지만 처리한 그룹을 control 로 사용하여 시료의 결과와 비교하였다. 추출물 처리 후 48시간 동안의 배양이 끝난 후 배지를 수거하였다. 수거한 배지는 Procollagen Type-I C-Peptide (PIP) EIA kit(Takara Bio Inc. MK101) 를 이용하여 콜라겐 양을 측정하였다. Antibody-POD conjugate solution 100ul를 각 well에 첨가하고, sample이나 standard를 20ul씩 넣은 뒤 잘 섞어서 37℃에서 3시간 방치하였다. 반응이 끝나면 내용물을 제거한 뒤 PBS 400ul로 4번 세척하였다. 제거 후 기질용액 100ul를 첨가하여 실온에서 15분간 반응시킨 뒤 stop solution 100ul 첨가하여 부드럽게 섞어주었다, microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정한 후 표준 농도곡선을 작성하여 콜라겐 양을 산정하였다(표 2).

표 2 에 나타난 바와 같이 추출물들의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴본 결과, 두족류 추출물과 발효추출물 모두 콜라겐양이 증가하였고, 그 중에서 두족류 추출물 보다 발효추출물로 처리하였을 때, 새로 생성되는 콜라겐양이 훨씬 더 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

두족류 추출물과 발효추출물의 자외선에 의한 자극에 의한 콜라겐 생합성

시험군	procollagen conc.(ug/ml)
시험군	0.04%	0.2%
UV(+)	77
AS 25uM	101
두족류 추출물	114	123
두족류 발효추출물	122	135

<2-2> MMP-1 저해 평가

Collagen 을 분해하는 효소는 그 종류가 다양하며 가장 많이 알려져 있는 것이 collagen type I을 분해하는 MMP-1 (Matrix metalloproteinase I, collagenase)으로 이를 측정하기 위해 MMP-1 assay 를 실시하였다. 콜라겐 생성에 관여하는 세포주의 하나인 Fibroblast를 1% Antibiotic-Antimycotic (AA, Welgene, Korea)과 10% Fetal bovine serum (FBS, Welgene, Korea)을 포함한 Dulbecco's modified essential medium (DMEM, Welgene, Korea)을 이용하여 37 , 5 % CO₂ incubator에서 배양하였다. 2x10⁵농도의 Fibroblast 세포를 6 well plate에 접종하여 24시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 무혈청 배지를 처리하여 24시간 동안 starvation 시킨다. 24시간 후, 무혈청 배지를 제거하고 PBS로 세척한 후, UV 312nm 파장에서 12.5mJ로 조사하였다. 그 후, 시료를 phenolred free DMEM 배지에 농도 별로 처리하여 48시간 동안 추가 배양하였다. Ascorbic acid 50 uM 을 positive control 로, UV(+)군을 Negative control 로, 배지만 처리한 그룹을 control 로 사용하여 시료의 결과와 비교하였다. 추출물 처리 후 48시간 동안의 배양이 끝난 후 배지를 수거하였다. 수거한 배지는 MMP-1 측정 키트 (RPN 2610, Amersham Bioscience, UK) 를 이용하여 ELISA reader 로 450nm에서 흡광도를 측정하였다. Anti-MMP1 antibody로 코팅된 96 well plate에 buffer를 well 하나에 첨가하여 blank로 삼고, 배지 중에 유리된 샘플과 표준액 100ul를 각각의 well 에 넣는다, 실온에서 shaking 없이 2시간 동안 반응시킨다. Washing buffer로 well을 가득 채워서 3회 반복해서 세척 한 후 물기를 완전히 제거한다. 100ul peroxide conjugate를 첨가하고, 실온에서 shaking 없이 2시간 동안 반응시킨다. Washing buffer로 well을 가득 채워서 30분간 shaking 하면서 반응시킨다. 100ul 1M H2SO4로 반응을 중지시킨 후 microplate reader (Chromate, USA) 를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하여 비교하였다(표 3).

표 3 에 나타난 바와 같이 두족류 추출물과 발효추출물의 자외선에 의한 자극에 의한 항주름 활성을 살펴본 결과, 두족류 추출물에 비해 두족류 발효추출물로 처리했을 때 MMP-1 활성이 더 많이 저해되었고, 이는 콜라겐 생합성 결과(표 3)와 상응하는 양상을 보인다.

두족류 추출물과 발효추출물의 자외선 자극에 의한 MMP-1 활성 저해도

시험군	MMP-1 (% of control)
시험군	0.04%	0.2%
UV(+)	100
AS 50uM	71
두족류 추출물	109	87
두족류 발효추출물	93	78

<실험예 3> 데시게이터를 이용한 보습력 측정

본 발명에 따른 두족류 추출물 및 발효추출물 5 mL를 플레이트에 넣은 후 완전건조 된 CaCl₂를 흡습제로 하여 35 데시케이터에서 무게를 측정하였다. 무게는 총 144시간 동안 측정하였다. 화장품 배합의 보습성분으로서 일반적으로 사용되는 1,3-부틸렌 글리콜(BG)과 혼합추출물을 비교하여 실험결과를 나타내었다. 그 결과를 표 4 에 나타내었다.

수학식 2

보습력(%) = ( 1 - △S/S) x 100

여기서, S는 초기 표본의 무게이고, △S는 초기 표본의 무게에서 최종 표본의 무게를 차감한 값이다.

두족류 추출물과 발효추출물의 데시게이터를 이용한 보습력 측정

시간(hr)	보습력 (%)
시간(hr)	BG	두족류 추출물	두족류 발효추출물
24	100	97	98
48	92	90	94
72	85	85	91
120	82	83	90
144	74	80	88

표 4 에 나타낸 바와 같이, 대조군인 BG에 비해 본 발명에 따른 두족류 추출물과 발효추출물의 보습력이 시간 경과에 따라 유의적으로 높은 것을 알 수 있다.

<실험 예 4> 마우스 모발성장 효과 시험

본 실험예는 실시예 및 비교예에서 수득한 두족류 추출물 및 발효추출물 2%를 함유하는 30% 함수 에탄올 용액을 제조하여 시험에 사용하였다. 모발성장 효과 시험은 생후 47~53일의 마우스(ICR)를 사용하여 등 부위 털을 제거하고, 등 부위가 깨끗한 것을 골라 물질군마다 10마리를 사용하여 다음날부터 매일 실시예 및 비교예의 시험물질을 개체당 100씩 도포하였다. 시간 경과에 따른 모발의 길이 및 모발 성장 정도를 모 제거 후 복원 정도에 따라 점수를 부가하여 각각 비교하였다. 모발성장 정도를 비교하기 위하여, 양성 대조군으로 미녹시딜을 사용하였고, 대조군으로는 30% 알코올 용액을 각 개체에 도포하여 성장 상태를 관찰하였다. 실험결과, 두족류 추출물 및 발효추출물에서 우수한 모발성장 촉진효과를 확인하였다(표 5).

두족류 추출물 및 발효추출물 마우스 모발성장 효과

시료명	경과일수
시료명	5일	10일	15일	30일
미녹시딜	0.27	1.01	1.88 ±0.17	3.22 ±0.18
실시예 1	0.22	0.84	1.71 ±0.23	2.85 ±0.13
비교예 1	0.20	0.72	1.37 ±0.11	2.29 ±0.45
대조군	0.08	0.23	0.98 ±0.18	1.85 ±0.21

<제형예 1> 에멀젼 베이스 제조

두족류 추출물 및 발효추출물을 함유한 화장료를 포함한 에멀젼 베이스를 제조하였다. 본 실험에 사용된 화장료는 유화형 화장액 형태이고, 그 조성은 표에 나타낸 바와 같다. 우선 표에 기록되어 있는 두족류 추출물 또는 발효추출물 및 기타 함량을 중량별로 첨가한 후 (가)상을 가열하여 90℃로 유지하고 정제수(30%)를 90℃까지 가열한 후 (가)수상 중에 천천히 첨가하여 호모믹서로 균일하게 유화한다. 그 후 실온까지 냉각하고 남은 (나)상의 정제수를 첨가하고 균일하게 교반하여 화장액을 제조하였다.

에멀전 베이스 제조

원료명	중량%
두족류 추출물 (또는) 두족류 발효추출물	3%
글리세린	3.00
디소듐이디티에이	0.02
폴리글리세릴-3-메틸글루코스 디스테아레이트	1.5
세테아릴알코올	0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	7.0
폴리아크릴아마이드 & C13-14이소파라핀 & 라우레스-7	0.60
방부제	적량
정제수	to 100

<실험예 5> 피부 보습 평가

<5-1> 피부소분 증가효과

본 발명에 따른 피부의 보습력 효과를 측정하기 위하여, 설문조사로 피부가 건조하다고 느끼는 20-40세의 여성 40명을 대상으로 상기 제형예 1에서 제조된 화장료를 1일 2회씩 얼굴에 도포하게 한 후 1개월간 사용하게 하였다. 도포 시작 전 항온, 항습 조건(온도 20-22℃, 상대습도 40%)에서 수분보유측정기(corneometer CM825, courage Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주 경과 후의 피부 전도도를 측정하여 보습의 증가율을 평가하였다. 이때, 양성대조군으로서 추출물 대신 지질혼합물(세라마이드: 콜레스테롤:지방산=2: 1: 1)물을 사용하였다. 그 결과는 하기 표 7에 나타내었으며, 그 결과값은 평균값으로 나타내었다.

피부수분 증가율(%)

시험군	1주 경과	2주 경과	4주 경과
두족류 추출물	44	56	69
두족류 발효추출물	57	62	78
양성대조군	38	46	62

<5-2> 피부건조개선 평가(설문)

상기 실험예 5-1의 시험 대상자에 대한 설문지 조사를 통하여 주관적인 효능 평가를 시행하였으며, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 그 결과, 피검자들의 주관적 건조감 개선평가에서 두족류 추출물 및 발효추출물 모두 우수한 결과를 얻었다.

피부건조개선 평가

시험군	응답자수
시험군	매우양호	양호	보통	미흡
두족류 추출물	9	9	2	0
두족류 발효추출물	14	5	1	0
양성대조군	5	5	9	1

<실험예 6> 피부 탄력 효과에 대한 측정

본 발명에 따른 화장품의 피부 탄력 효과에 대한 검사를 측정하기 위하여, 건강한 20-30대 성인 남녀 20명을 대상으로 하였다. 제형예 1에서 제조된 화장품을 이용하였으며, 시험 초기(baseline), 2주, 4주, 6주에 항온항습실(온도 20-22, 상대습도 40%)에서 피검자는 세안 후 1시간 동안 피부를 안정화한 다음, 측정을 수행하였다. 피부의 탄력도는 cutometer SEM 474(Courage+Khasaka, Germany)로 피부 왼쪽안면을 측정하였으며, 측정시 음압은 500 mbar, 흡입시간은 2sec, 반복 측정 횟수는 5회로 측정하여 평균 수치를 이용하였다.

피부 탄력성 측정

시험군	피부탄력도(%)
두족류 추출물	35
두족류 발효추출물	42

Cutometer SEM 474로 측정하여 피부탄력도를 측정한 결과, 두족류 추출물과 발효추출물의 피부탄력도가 우수하였고, 그 중 두족류 발효추출물의 피부탄력도가 좀 더 우수하다는 사실을 확인할 수 있었다.

<실험예 7> 인체 피부에 대한 미백 효과 시험

연구대상은 건강한 30-40대 성인 남녀 10명을 대상으로 피검자의 상박 부위에 직경 1.5의 구멍이 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erythema Dose)의 1.5~2배 정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 흑화를 유도하였다. 조사 후 시험물질 각 2% , 대조군으로 알부틴 2%, 용매(vehicle)만을 바르고, 한곳은 아무 것도 바르지 않고 10 주 동안 상태 변화를 관찰하였다. 1주 단위로 피부의 색깔을 색차계 CR2002(일본, 미놀타 사)로 측정하였다. 도포 개시시점과 완료시점에서의 피부색의 차이(△L*)를 하기 수학식 3에 따라 계산하였고, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 미백효과는 시료 도포 부위와 대조군 부위의 △L*의 비교로 판정하는데, △L* 값이 2 정도일 경우는 침착된 색소의 미백화가 뚜렷한 경우이고, 1.5 정도 이상이면 미백효과가 있다고 판정할 수 있다.

수학식 3

△L* = 도포완료시점에서의 L* 값 - 도포개시 할 때 L* 값

피부에 대한 미백 효과

시험군	멜라닌 생성 억제율(%)
두족류 추출물	1.52 ±0.15
두족류 발효추출물	2.00 ±0.12
용매(Vehicle)	0.50 ±0.23
알부틴	1.50 ±0.15

상기 표 10의 결과로부터, 본 발명에 의한 두족류 발효추출물은 두족류 추출물 뿐만 아니라 양성대조군인 알부틴 보다 우수한 미백 효과를 보이는 것을 확인하였다.

<실험예 8> 인체 피부 자극시험 평가

본 발명에 따른 화장품의 안전도를 평가하기 위해 인체 피부 자극시험 평가를 실시하였다. 시험평가는 인체의 피부 1차 자극 시험으로서 첩포시험(팻치테스트)으로 판별하였다. 연구대상은 건강한 10~30대 피험자 30명을 대상으로 CTFA 가이드 라인(The Cosmetic Toiletry and Frangrance association, Safety testing guidelines)에 따라 실시하였다. 제형예 1에서 제조된 화장액을 각각을 1g씩 적하 시킨 후, 시험 부위인 좌측 상완 내측에 첩포검사를 실시하였다. 첩포는 24시간 도포하며 첩포를 제거한 후는 마킹 펜(marking pen)으로 시험부위를 표시하며 24시간 간격으로 24시간, 48시간, 72시간 후에 각 시험 부위의 염증 및 피부반응을 관찰하여 국제 접촉 피부염 연구회(International Contact Dermatitis Research Group; ICDRG)의 규정에 따라 판정하도록 하였다(표 11, 12). 최종 판독 결과는 모두 음성반응을 보여 피부 안전성이 우수한 것으로 나타났다(표 13).

피부 안전성 판독의 판정기준

반응	가중치	판정의 기준
-	0	무반응
±	0.5	희미한 홍반
+	1	경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부종 및 구진 형성
++	2	뚜렷한 홍반, 구진 및 수포 형성
+++	3	대수포 형성

피부 반응도에 따른 평가 기준(계산값)

시험물질 (Sample)	판정기준
	0.0~0.9	1.0~2.9	3.0~4.9	5.0이상
	무자극	경자극	중자극	강자극

1차 자극 실험 결과, (-:무자극)

분류	실시예 1	비교예 1
적용 농도(%)	3%	3%
의양성 반응(±)	-	-
약양성 반응(+)	-	-
접촉성 피부염 유발확률(%)	0.00	0.00

수학식 4

(Grade x No. of respones) x 100

피부반응도 = -------------------------------------------

3(Maximum. grad) x n(No. of total subjects)

<제형예 2> 스킨로션 제조 (유연화장수)

스킨로션 제조

원료명	중량%
두족류 추출물 (또는) 두족류 발효추출물	1.0
부틸렌글리콜	2.5
올레일알코올	1.5
에탄올	10.0
폴리솔베이트 80	0.5
PEG 12 노닐페닐에테르	0.2
카르복실비닐 폴리머	0.1
글리세린	3.5
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

<제형예 3> 밀크로션 제조 (영양화장수)

밀크로션 제조

원료명	중량%
두족류 추출물 (또는) 두족류 발효추출물	1.0
스쿠알란	5.0
밀납	3.8
솔비탄세스퀴올레이트	1.2
유동파라핀	0.5
폴리솔베이트 60	1.5
부틸렌글리콜	3.2
카프릭트리글리세라이드	5.0
프로필렌글리콜	3.0
글리세린	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

<제형예 4> 에센스 제조

에센스 제조

원료명	중량%
두족류 추출물 (또는) 두족류 발효추출물	5.0
부틸렌글리콜	3.0
글리세린	3.0
알란토인	0.5
판테놀	0.2
EDTA-2Na	0.05
에탄올	5.0
트리에탄올아민	1.5
스쿠알란	2.0
밀납	2.0
폴리솔베이트60	3.0
카르복실비닐폴리머	1.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.8
방부제, 색소, 향	적량
정제수	to 100

<제형예 5> 맛사지크림 제조

맛사지크림 제조

원료명	중량%
두족류 추출물 (또는) 두족류 추출물	5.0
밀납	10.0
폴리솔베이트 60	2.0
PEG 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	1.0
유동파라핀	30.0
스쿠알란	5.0
카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.5
프로필렌글리콜	3.5
트리에탄올아민	0.3
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

<제형예 6> 바디클린져 제조

바디클린져 제조

원료명	중량%
두족류 추출물 (또는) 두족류 발효추출물	5.0
알킬에텔상산염 (30%)	32.0
알킬에텔설포석신산염 (30%)	18.0
알킬아미도베타인 (30%)	4.0
프로필렌글리콜	5.0
라우라미드디이에이	4.5
베타인	5.0
셀룰로스검	0.1
가수분해단백질	0.2
염화나트륨	미량
구연산	미량
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

<제형예 7> 겔 제조

겔 제조

원료명	중량%
두족류 추출물 (또는) 두족류 발효추출물	0.8
에틸렌디아민초산나트륨	0.08
글리세린	5.0
카르복시비닐폴리머	0.5
에탄올	5.0
트리에탄올아민	0.5
PEG 60 경화피마자유	0.5
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	to 100

Claims

두족류 추출물을 함유한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
두족류 발효추출물을 함유한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항 내지 2항에 있어서, 두족류 추출물 및 발효추출물의 건조 중량을 기준으로 조성물 전체에 대해 0.01 내지 100 중량% 를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 두족류 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부보습, 피부탄력 강화, 미백 및 주름개선용, 헤어 육모용 화장료 조성물.
제 2항에 있어서, 두족류 추출물에 고초균, 유산균, 효모로 단독 또는 2종 이상을 발효공정으로 발효시킨 것을 특징으로 하는 피부보습, 피부 탄력강화, 미백, 주름개선용, 헤어 육모용 화장료 조성물.
제 2항에 있어서, 두족류 발효추출이 함유하는 유효성분에 대한 추출수율 증가 및 발효과정을 통한 생리활성 기능을 갖는 고분자 화합물의 저분자 화합물로의 전환을 특징으로 하는 피부보습, 탄력개선, 헤어 육모용 화장료 조성물.
제 1항 내지 제 2항 중 어느 한 항에 있어서, 약제학적 또는 화장학적으로 허용되는 담체 또는 첨가제를 추가로 함유하여 단위투여 제형으로 제형화 되는 조성물.
제 1항 내지 2항에 있어서, 유연 화장수, 영양 화장수(밀크로션), 겔, 수용성 리퀴드, 영양크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이크림, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O)형의 에멀젼, 고체 무수 생성물, 소구체를 사용한 수성 상에서의 오일 분산물, 이온성 또는 비이온성 형태의 지질 소포체의 형태, 연고, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 보디오일 등의 기초 화장료, 수중유형 또는 유중수형 메이크업베이스, 파운데이션, 스킨커버, 립스틱, 립그로스, 페이스파우더, 투웨이케익, 아이섀도우, 마스카라, 치크칼라 및 아이브로우펜슬류로 이루어진 색조화장료 제형 등의 색조 화장료 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 피부보습, 피부 탄력강화, 미백, 주름개선용 화장료 조성물.
제 1항에 내지 2항에 있어서, 두족류 추출물 및 발효추출물로 제조된 화장품, 식품, 의약품 또는 생활용품.