ES2897473T3

ES2897473T3 - Purificación de derivados de la rapamicina

Info

Publication number: ES2897473T3
Application number: ES14763326T
Authority: ES
Inventors: Margaret W Kayo; Richard S Fornicola; Ivan Kovacik; Leelakrishna Kondaveti; Aniruddh Singh
Original assignee: Biosensors International Group Ltd
Current assignee: Biosensors International Group Ltd
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-17
Publication date: 2022-03-01
Anticipated expiration: 2034-03-17
Also published as: JP2019089848A; US9598439B2; EP2972258A4; US20220024947A1; HK1218959A1; US20170334928A1; EP2972258A1; SG11201507406YA; CA2901162C; WO2014145780A1; JP2023164476A; SG10201707632PA; EP2972258B1; CN108864149A; US11780850B2; JP2016519086A; US20160002262A1; US20190256527A1; US10597406B2; CN105102967A

Abstract

Una forma cristalina de 40-O-(2-etoxietil) rapamicina, en la que el patrón de difracción de rayos X de la misma muestra uno o más picos de difracción en los ángulos (2θ) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, ,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60°, y 32,28°; o o más picos de difracción en los ángulos (2θ) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, ,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, ,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60° y 32,28°; o 25 o más picos de difracción en los ángulos (2θ) seleccionados del grupo formado por 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60° y 32,28°. en el que el patrón de difracción de rayos X de la misma es sustancialmente de acuerdo con lo mostrado en la figura 5; o en el que su espectro infrarrojo muestra uno o más picos en los números de onda seleccionados del grupo que consiste en 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1, y 988,1 cm-1 o cinco o más picos en los números de onda seleccionados del grupo que consiste en 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1, y 988,1 cm-1; o diez o más picos en los números de onda seleccionados del grupo formado por 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1 y 988,1 cm-1; o en el que el espectro infrarrojo se ajusta sustancialmente al mostrado en la Figura 12.

Description

DESCRIPCIÓN

Purificación de derivados de la rapamicina

Referencias cruzadas a solicitudes relacionadas

[0001] La presente solicitud reivindica prioridad a la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos n° 61/799.857, presentada el 15 de marzo de 2013.

Antecedentes de la invención

[0002] Se presenta un medio económico y eficaz para purificar derivados de 40-O-rapamicina no deseados con una polaridad similar generados durante la síntesis. La rapamicina también se conoce como sirolimus, CAS [53123-88-9]). Es un producto natural macrólido disponible comercialmente y sintetizado por Streptomyces hygroscopicus. Un derivado preferido, 40-O-(2-etoxietil) rapamicina, Umirolimus (iNn /USAN), Biolimus A9™ (también conocido como BA9™) es un ingrediente farmacéutico activo desarrollado como recubrimiento farmacológico para los stents coronarios con el fin de prevenir la proliferación de células musculares lisas y la reestenosis. Otros miembros de esta familia de "limusinas" son el everolimus (CAS [159351-69-6]), el zotarolimus (CAS [221877-54-9]) y el temsirolimus (CAS [162635-04-03]). Se sabe que los miembros de la familia poseen actividad inmunosupresora, antifúngica, antitumoral y/o antiinflamatoria in vivo y son útiles en el tratamiento del rechazo de trasplantes, las enfermedades infecciosas, las enfermedades autoinmunes y las afecciones caracterizadas por una proliferación celular excesiva.

[0003] La estructura química de BA9 consiste en una lactona macrólida de 31 miembros que conserva la estructura del anillo central de la rapamicina y difiere únicamente en la adición de una cadena lateral en la posición 40 en la que el grupo hidroxilo de la rapamicina ha sido alquilado con un grupo etoxietilo.

[0004] En la Figura 1 se proporciona la estructura química del BA9 comparada con el sirolimus y otros derivados del sirolimus. El BA9 está estructuralmente relacionado con la rapamicina (también conocida como sirolimus). La estructura consiste en el anillo de macrólido lactona de 31 miembros de la rapamicina con etoxietilación en la posición 40.

[0005] El BA9, al igual que el sirolimus, se une a la proteína inmunofilina intracelular FKBP12. Se cree que el complejo macrólido/FKBP12 resultante se une, de manera similar al sirolimus, a mTOR, una proteína crítica para la progresión del ciclo celular. La inactivación de mTOR provoca la supresión de varias vías de transducción de señales específicas y la detención del ciclo celular en la fase G1 a S.

[0006] Dado el valor terapéutico del BA9 y otros derivados de la rapamicina, se desea mejorar los procesos de preparación de esta familia de agentes activos. La presente invención aborda esta y otras necesidades.

El documento WO 2013/028208 muestra un producto sanitario con una capa superficial externa sin polímeros que comprende un fármaco cristalino seleccionado del grupo consistente en everolimus, tacrolimus, sirolimus, zotarolimus, biolimus y rapamicina. El producto puede elaborarse mediante un método que comprende los pasos de proporcionar un producto sanitario; aplicar una solución del fármaco a dicha porción de la superficie exterior para formar un recubrimiento de fármaco amorfo; y recocido por vapor del fármaco con un vapor disolvente para formar el fármaco cristalino.

El documento US 2013/0035483 presenta un método para convertir un fármaco amorfo, como el everolimus, u otro fármaco inmunosupresor macrólido, en una forma cristalina. El método utiliza una suspensión del fármaco en fase líquida orgánica y envejece la suspensión para lograr la conversión.

El documento US 2008/0146796 presenta un proceso para preparar un derivado de rapamicina O-alquilado, que incluye las etapas de reaccionar la rapamicina con un triflato de alquilo, purificar el producto de reacción resultante con un cromatógrafo de fase normal y purificar aún más un producto purificado, que ha sido purificado con el cromatógrafo de fase normal, con una cromatografía de fase inversa.

Breve resumen de la invención

[0008]

[0009] La presente invención proporciona una forma cristalina de BA9.

Breve descripción de los dibujos

[0010] La Figura 1 muestra las estructuras químicas de sirolimus, Biolimus A9 y derivados relacionados.

[0011] La Figura 2 muestra un esquema para la preparación de derivados de rapamicina y la purificación de los derivados según los métodos de la invención.

[0012] La Figura 3 muestra un patrón de difracción de polvo de rayos X (XRPD) observado para BA9 Lote 2A.

[0013] La Figura 4 muestra un termograma de calorimetría diferencial de barrido (DSC) observado para BA9 Lote 2A.

[0014] La Figura 5 muestra un patrón XRPD observado para el Lote 2B de BA9.

[0015] La Figura 6 muestra un termograma DSC observado para BA9 Lote 2B.

[0016] La Figura 7 muestra una micrografía óptica observada para el Lote BA92B.

[0017] La Figura 8 muestra un gráfico cinético de sorción dinámica de vapor (DVS) observado para el Lote 2B de BA9.

[0018] La Figura 9 muestra una superposición del patrón XRPD observado para BA9 Lote 2B después de un experimento DVS y un patrón de referencia de BA9 Forma I.

[0019] La Figura 10 muestra una superposición de los patrones XRPD obtenidos de las lechadas de disolvente y un patrón de referencia de la Forma I de BA9.

[0020] La Figura 11 muestra una superposición de los patrones XRPD obtenidos en experimentos de cristalización anti-disolvente y un patrón de referencia de la Forma I de BA9.

[0021] La Figura 12 muestra un espectro infrarrojo de la Forma I de BA9, obtenido utilizando una muestra en un pellet de KBr.

Descripción detallada de la invención

I. Aspectos generales

[0022] La presente especificación describe métodos mejorados para la purificación de derivados de rapamicina, incluyendo Biolimus A9 (BA9). El proceso incluye la solidificación de un derivado de rapamicina a partir de disolventes orgánicos no polares, seguido del aislamiento del producto purificado y la precipitación opcional a partir de una mezcla de un disolvente orgánico polar y agua. En el presente documento se describen los diversos pasos del proceso. Se descubrió que la eliminación eficaz de varias impurezas era el resultado de un proceso sorprendentemente sencillo y económico. Estas ventajas se describen en detalle a continuación.

[0023] El descubrimiento de que una simple solidificación mediante la disminución de la temperatura separaría los derivados 40-O tan limpiamente de las impurezas no deseadas de los derivados 40-O y de los derivados no 40-O fue sorprendente e imprevisible. Es económicamente ventajoso porque los subproductos no deseados son a menudo de una polaridad similar a la del producto deseado y son difíciles de separar utilizando técnicas de cromatografía a gran escala. Los métodos pueden utilizarse para la preparación de una forma cristalina de BA9 que demuestre una estabilidad superior.

II. Definiciones

[0024] El término "purificado" se refiere a un compuesto que ha sido procesado para eliminar impurezas. Las impurezas pueden incluir disolventes, reactivos utilizados para preparar el compuesto, materiales de partida y subproductos de una reacción que da lugar al compuesto. En algunas realizaciones, un compuesto purificado está sustancialmente libre de otras especies.

[0025] El término "compuesto crudo" se refiere a una mezcla que contiene un compuesto deseado (tal como un compuesto de Fórmula I como se describe en el presente documento) y al menos otra especie seleccionada entre un disolvente, un reactivo tal como una base, un material de partida y un subproducto de una reacción que da lugar al compuesto deseado.

[0026] "Alquilo" se refiere a un radical alifático recto o ramificado, saturado, que tiene el número de átomos de carbono indicado. El alquilo puede incluir cualquier número de carbonos, como C^{1 -2}, C^{1 -3}, C^{1 -4}, C^{1 -5}, C^{1 -6}, C^{1 -7}, C^{1 -8}, C^{1 -9}, C^{1 -10}, C^{2 -3}, C^2-4, C^{2 -5}, C^2-6, C^3-4, C^3-5, C^3-6, C^4-5, C^4-6y C^5-6. Por ejemplo, los alquilos C^1-6incluyen, entre otros, el metilo, el etilo, el propilo, el isopropilo, el butilo, el isobutilo, el secobutilo, el tertbutilo, el pentilo, el isopentilo, el hexilo, etc. El alquilo también puede referirse a los grupos alquilo que tienen hasta 20 átomos de carbono, tales como, pero no limitados a heptilo, octilo, nonilo, decilo, etc.

[0027] "Alquileno" se refiere a un radical alifático recto o ramificado, saturado, que tiene el número de átomos de carbono indicado, y que enlaza al menos otros dos grupos, es decir, un radical hidrocarburo divalente. Las dos mitades unidas al alquileno pueden estar unidas al mismo átomo o a diferentes átomos del grupo alquileno. Por ejemplo, un alquileno de cadena recta puede ser el radical bivalente de -(CH²)n-, donde n es 1,2, 3, 4, 5 o 6. Los grupos alquílenos representativos incluyen, pero no se limitan a, metileno, etileno, propileno, isopropileno, butileno, isobutileno, secbutileno, pentileno y hexileno.

[0028] "Alquenilo" se refiere a un hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene al menos 2 átomos de carbono y al menos un doble enlace. El alquenilo puede incluir cualquier número de carbonos, como C², C²-³, C²-⁴, C²-⁵, C²-⁶, C²-⁷, C²-⁸, C²-⁹, C²-¹⁰, C³, C³-⁴, C³-⁵, C³-⁶, C⁴, C⁴-⁵, C⁴-⁶, C⁵, C^5-6y C6. Los grupos alquenilo pueden tener cualquier número adecuado de dobles enlaces, incluyendo, pero sin limitarse a, 1, 2, 3, 4, 5 o más. Los ejemplos de grupos alquenilo incluyen, pero no se limitan a, vinilo (etenilo), propenilo, isopropenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, isobutenilo, butadienilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, isopentenilo, pentadienilo, 1,4-pentadienilo, 1-hexenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 1,3-hexadienilo, hexadienilo, 1,5-hexadienilo, 2,4-hexadienilo o 1,3,5-hexatrienilo.

[0029] "Alquinilo" se refiere a un hidrocarburo de cadena recta o ramificada que tiene al menos 2 átomos de carbono y al menos un triple enlace. El alquino puede incluir cualquier número de carbonos, como C², C²-³, C²-⁴, C²-⁵, C²-⁶, C²-⁷, C²-⁸, C2-9, C²-¹⁰, C³, C³-⁴, C³-⁵, C³-⁶, C⁴, C⁴-⁵, C⁴-⁶, C⁵, C^5-6y C⁶. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, acetilenilo, propinilo, 1 -butilo, 2-butilo, isobutilo, sec-butilo, butadiinilo, 1 -pentilo, 2-pentilo, isopentilo, 1,3-pentadiinilo, 1,4-pentadiinilo, 1 -hexinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 1,3-hexadiinilo, 1,4-hexadiinilo, 1,5-hexadiinilo, 2,4-hexadiinilo o 1,3,5-hexatriinilo.

[0030] "Arilo" se refiere a un sistema de anillos aromáticos que tiene cualquier número adecuado de átomos de anillo y cualquier número adecuado de anillos. Los grupos arilo pueden incluir cualquier número adecuado de átomos de anillo, como por ejemplo, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 átomos de anillo, así como de 6 a 10, 6 a 12, o 6 a 14 miembros de anillo. Los grupos arilo pueden ser monocíclicos, fusionados para formar grupos bicíclicos o tricíclicos, o unidos por un enlace para formar un grupo biarilo. Los grupos arilos representativos incluyen el fenilo, el naftilo y el bifenilo. Otros grupos arilo incluyen el bencilo, que tiene un grupo de enlace metileno. Algunos grupos arilo tienen de 6 a 12 miembros de anillo, como el fenilo, el naftilo o el bifenilo. Otros grupos arilo tienen de 6 a 10 miembros de anillo, como el fenilo o el naftilo. Algunos otros grupos arilo tienen 6 miembros de anillo, como el fenilo.

[0031] "Alcoxi" se refiere a un grupo alquilo que tiene un átomo de oxígeno que conecta el grupo alquilo con el punto de unión: alquilo-O-. Al igual que el grupo alquilo, los grupos alcoxi pueden tener cualquier número adecuado de átomos de carbono, como C¹-⁶. Los grupos alcoxi incluyen, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, iso-propoxi, butoxi, 2-butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, tert-butoxi, pentoxi, hexoxi, etc.

[0032] "Carbonilo" se refiere a una fracción que consiste en un doble enlace carbono-oxígeno (es decir, -C(O)-).

[0033] "Acilo" se refiere a una fracción que incluye un grupo carbonilo, como se describe en el presente documento, unido a un grupo alquilo, un grupo alquenilo o un grupo alquinilo, como se describe en el presente documento.

[0034] "Formar una mezcla" y "contactar" se refiere al proceso de poner en contacto al menos dos especies distintas de manera que se mezclen.

[0035] "Disolvente orgánico no polar" se refiere a una sustancia basada en el carbono que es líquida a temperatura ambiente o cerca de ella, sustancialmente libre de agua, y caracterizada por una constante dieléctrica baja (es decir, inferior a aproximadamente 5). Los ejemplos de disolventes orgánicos no polares que son adecuados para su uso en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, hexano, heptano, ligroína, ciclohexano, pentano, n-octano, isooctano, metilciclohexano, aceite mineral, éter dietílico, éter diisopropílico, metil t-butil éter, 1,4-dioxano, cloroformo, disolventes de hidrocarburos aromáticos (como el benceno y el tolueno), ciclopentano, n-octano, iso-octano y metilciclohexano, por ejemplo.

[0036] "Disolvente orgánico alcano" se refiere a un hidrocarburo saturado que es líquido a temperatura ambiente o cerca de ella y que está sustancialmente libre de agua. Los ejemplos de disolventes orgánicos alcanos incluyen hexano, heptano, ligroína, ciclohexano, pentano, n-octano, iso-octano, metilciclohexano y aceite mineral.

[0037] "Disolvente orgánico polar" se refiere a una sustancia basada en el carbono que es líquida a temperatura ambiente o cerca de ella, sustancialmente libre de agua, y caracterizada por una constante dieléctrica de moderada a alta (es decir, mayor que aproximadamente 5). Ejemplos de disolventes orgánicos polares son la dimetilformamida, el dimetilsulfóxido, el carbonato de propileno, el acetonitrilo, el metanol, el etanol, el isopropanol, el r-butanol, el tetrahidrofurano y la acetona.

[0038] "Solubilizar" se refiere al proceso de disolver una forma sólida de una sustancia en un disolvente para formar una solución. Se puede hacer que se disuelva la totalidad de una sustancia sólida, o cualquier fracción de la misma. El material no disuelto puede estar presente en el disolvente en forma de suspensión.

[0039] "Enfriamiento" se refiere al proceso de reducir la temperatura de una sustancia o mezcla de sustancias.

[0040] La "solidificación" se refiere al proceso de hacer que un compuesto en una solución se convierta en una forma sólida de la sustancia. La totalidad de un compuesto en una solución, o cualquier fracción de la misma, puede hacerse solidificar. La forma sólida puede ser una sustancia amorfa o cristalina. "Precipitar" se refiere a solidificar una sustancia en forma amorfa.

[0041] "Sólido" se refiere a una forma condensada de un compuesto que no es un gas, líquido o solución. Un sólido puede incluir una especie o una mezcla de dos o más especies. Un compuesto sólido puede ser una forma cristalina, una forma amorfa, un vidrio, una espuma o una mezcla de dos o más formas.

[0042] La "forma cristalina" se refiere a una forma sólida de un compuesto en la que las moléculas constituyentes están empaquetadas en un patrón regularmente ordenado y repetido. Una forma cristalina puede ser triclínica, monoclínica, ortorrómbica, tetragonal, trigonal, hexagonal o cúbica. Una forma cristalina puede contener una o más regiones, es decir, granos, con límites cristalinos distintos. Un sólido cristalino puede contener dos o más geometrías de cristal.

[0043] La "forma amorfa" se refiere a una forma sólida de un compuesto que no tiene una estructura cristalina definida, es decir, que carece de un patrón de repetición regularmente ordenado de las moléculas constituyentes.

[0044] "No consolidado" se refiere a un compuesto que no está en forma sólida. Un compuesto no consolidado puede estar, por ejemplo, disuelto en una solución o suspendido en un coloide.

[0045] "Separar" se refiere al proceso de aislar al menos una porción de un compuesto de una mezcla que contiene el compuesto y al menos otra sustancia. El compuesto aislado está sustancialmente libre de al menos una de las otras sustancias presentes en la mezcla.

[0046] "Reflujo" se refiere al proceso de ebullición de un disolvente mientras se condensan los vapores del disolvente y se devuelve el disolvente condensado al recipiente de ebullición. El reflujo se lleva a cabo generalmente en o cerca del punto de ebullición de un disolvente o mezcla de disolventes a una presión particular.

[0047] "Secado" se refiere a la eliminación de una especie líquida, como un disolvente, de un compuesto. El secado se lleva a cabo generalmente calentando el compuesto, reduciendo la presión bajo la cual se almacena el compuesto, o ambos.

[0048] Los términos "aproximadamente" y "alrededor", tal como se utilizan aquí para modificar un valor numérico, indican un rango cercano que rodea ese valor explícito. Si "X" fuera el valor, "alrededor de X" o "alrededor de X" indicaría un valor de 0,9X a 1,1X, y más preferiblemente, un valor de 0,95X a 1,05X. Cualquier referencia a "alrededor de X" o "alrededor de X" indica específicamente al menos los valores X, 0,95X, 0,96X, 0,97X, 0,98X, 0,99X, 1,01X, 1,02X, 1,03X, 1,04X y 1,05X. Por lo tanto, "alrededor de X" y "alrededor de X" tienen la intención de enseñar y proporcionar apoyo a la descripción escrita para una limitación de la reivindicación de, por ejemplo, "0,98X".

III. Realizaciones de la invención

[0049] La presente invención proporciona una forma cristalina de 40-0-(2-etoxietilo) rapamicina como se define en las reivindicaciones. Se trata de un compuesto que tiene una estructura según la Fórmula I:

donde R1 es Ra-(0)d-Rb, donde Ra es etileno, Rb es etilo, y el subíndice d es 1.

[0050] La forma cristalina puede prepararse mediante un método que incluye:

a) formar una mezcla que comprende un compuesto crudo que tiene la estructura según la Fórmula I y un disolvente orgánico no polar en condiciones suficientes para disolver el compuesto; b) solidificar al menos una porción del compuesto que tiene la estructura según la Fórmula I; c) separar al menos una porción del compuesto solidificado del disolvente en la mezcla; y obtener así el compuesto sólido purificado.

[0051] En algunas realizaciones, los compuestos crudos utilizados en los métodos se preparan según el proceso mostrado en la Figura 2. El proceso incluye la reacción de la rapamicina con un triflato adecuado a una temperatura controlada, seguido por el trabajo y el aislamiento opcional de los productos. Pueden utilizarse materiales de partida etiquetados isotópicamente, como materiales deuterados, para preparar derivados de rapamicina etiquetados isotópicamente. Los métodos generalmente incluyen separar un compuesto de Fórmula I de una mezcla de reacción que incluye disolventes, reactivos, incluyendo bases, y materiales de partida según la Fórmula II y la Fórmula III (véase la Figura 2). Las técnicas de separación adecuadas incluyen, entre otras, la filtración de un compuesto solidificado de Fórmula I, la centrifugación de un compuesto solidificado de Fórmula I, la destilación, la extracción de líquidos, la sublimación y las técnicas cromatográficas. Los ejemplos de técnicas cromatográficas incluyen, pero no se limitan a, cromatografía en columna de fase normal (es decir, cromatografía en columna de gel de sílice), cromatografía en columna de fase inversa y cromatografía en capa fina. Pueden realizarse dos o más técnicas de separación en combinación para separar el compuesto de Fórmula I. En algunas realizaciones, la cromatografía es de gel de sílice con hexano o heptano y acetato de etilo.

[0052] La cromatografía y otras técnicas de separación proporcionan compuestos crudos de Fórmula I con diferentes niveles de pureza. Los compuestos crudos contienen un compuesto de Fórmula I, así como al menos otra especie seleccionada entre un disolvente, un reactivo tal como una base, un material de partida según la Fórmula II o la Fórmula III, y subproductos) de la reacción de derivación de rapamicina. En general, un compuesto crudo contiene al menos un 40% de un compuesto de Fórmula I en peso. En ciertas realizaciones, un compuesto crudo contiene al menos el 50% de un compuesto de Fórmula I en peso. El compuesto crudo puede incluir, por ejemplo, desde aproximadamente el 40% hasta aproximadamente el 99%, o desde aproximadamente el 50% hasta aproximadamente el 99%, o desde aproximadamente el 75% hasta aproximadamente el 95%, de un compuesto de Fórmula I en peso. En algunas realizaciones, el compuesto crudo contiene de aproximadamente 90% a aproximadamente 95% de un compuesto de Fórmula I en peso.

[0053] En los métodos puede utilizarse cualquier disolvente adecuado. En general, los disolventes adecuados son no polares. Los disolventes preferidos incluyen disolventes orgánicos de alcanos (es decir, disolventes de hidrocarburos saturados) y disolventes orgánicos de alquenos. Los ejemplos de disolventes orgánicos de alcanos incluyen, pero no se limitan a, hexano, heptano, ligroína (es decir, éter de petróleo), ciclohexano, octano, pentano y aceite mineral (incluyendo aceites parafínicos y aceites nafténicos). En algunas realizaciones, el disolvente orgánico no polar se selecciona entre hexano, heptano, ligroína, ciclohexano, pentano, n-octano, iso-octano, metilciclohexano, aceite mineral, éter dietílico, éter diisopropílico, metil t-butil éter, 1,4-dioxano, cloroformo, benceno, tolueno, ciclopentano, noctano, iso-octano y metilciclohexano, y sus mezclas. En algunas realizaciones, el disolvente orgánico no polar se selecciona entre hexano, heptano, ligroína, octano, ciclohexano y mezclas de los mismos. En algunas realizaciones, el disolvente orgánico no polar es hexano. En algunas realizaciones, el disolvente orgánico no polar es el heptano. Otros disolventes no polares pueden ser útiles en los métodos de la invención dependiendo de las propiedades del derivado de rapamicina particular.

[0054] Se puede utilizar cualquier cantidad adecuada de disolvente en los métodos. En general, la cantidad de disolvente utilizada es suficiente para disolver el compuesto de Fórmula I. Normalmente, la cantidad de disolvente oscila entre aproximadamente 1 parte y aproximadamente 500 partes, en peso, por parte de compuesto crudo. La relación disolvente:crudo puede ser de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 500:1, o de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 250:1 en peso. La relación disolvente:crudo puede ser de aproximadamente 95:1, o de aproximadamente 100:1, o de aproximadamente 105:1, o de aproximadamente 110:1, o de aproximadamente 115:1, o de aproximadamente 120:1 en peso. En algunas realizaciones, la relación disolvente:crudo es de aproximadamente 110:1 en peso. El peso del crudo en la relación disolvente:crudo puede referirse al peso total de la mezcla cruda o al peso del compuesto de Fórmula I en la mezcla como se determina, por ejemplo, por HPLC u otra técnica analítica.

[0055] La mezcla que contiene el compuesto crudo de la Fórmula I y el disolvente orgánico no polar se forma en condiciones suficientes para disolver el compuesto crudo. La mezcla puede calentarse, si es necesario, para disolver el compuesto. Cualquier temperatura adecuada puede ser utilizada para disolver el compuesto de Fórmula I. Un experto en la materia de la técnica apreciará que la temperatura de calentamiento dependerá, en parte, de uno o más factores que incluyen la polaridad del disolvente, la cantidad de disolvente, el nivel de pureza del compuesto crudo y la estructura específica del compuesto de Fórmula I. Dichos factores también determinarán, en cierta medida, el tiempo necesario para disolver el compuesto crudo. Se puede utilizar cualquier duración adecuada del tiempo, desde unos minutos hasta varias horas. Por ejemplo, la mezcla que contiene el compuesto crudo y el disolvente orgánico puede mezclarse, con o sin calentamiento, durante unos 10 minutos, o unos 20 minutos, o 30 minutos, o unos 40 minutos, o una hora. En consecuencia, en algunas realizaciones del método para obtener un compuesto sólido purificado de Fórmula I como se ha descrito anteriormente, la formación de la mezcla que contiene el compuesto crudo y el disolvente orgánico incluye el calentamiento de la mezcla. En algunas realizaciones, la formación de la mezcla incluye calentar la mezcla a una temperatura de aproximadamente 35°C a aproximadamente 100°C. En algunas realizaciones, la formación de la mezcla incluye calentar la mezcla a reflujo.

[0056] Para separar el compuesto purificado de Fórmula I de los otros componentes en el material crudo, el compuesto de Fórmula I se solidifica y se aísla del licor madre de la mezcla de disolventes orgánicos. La solidificación del compuesto de Fórmula I puede incluir el enfriamiento de la mezcla. La mezcla puede enfriarse a cualquier temperatura adecuada. Un experto en la materia apreciará que la temperatura de enfriamiento puede depender, en parte, de la solubilidad del compuesto de Fórmula I en el disolvente orgánico, así como de la cantidad de disolvente utilizada en el proceso. En algunas realizaciones, el enfriamiento de la mezcla incluye enfriar la mezcla a una temperatura de aproximadamente -78°C a aproximadamente 25°C. En algunas realizaciones, el enfriamiento de la mezcla incluye el enfriamiento de la mezcla a una temperatura de aproximadamente 15°C. El enfriamiento puede llevarse a cabo durante cualquier periodo de tiempo adecuado, que suele oscilar entre unos pocos minutos y varias horas. Por ejemplo, la mezcla puede enfriarse lentamente hasta la temperatura deseada durante un período de tres a cuatro horas. Después de que la mezcla alcance la temperatura deseada, puede mantenerse a esa temperatura o alrededor de ella durante un período adicional que puede variar desde unos pocos minutos hasta varias horas.

[0057] La separación del compuesto solidificado del disolvente orgánico puede llevarse a cabo mediante varias técnicas, incluyendo el paso de la mezcla a través de un filtro para aislar el material sólido del licor madre o la centrifugación de la mezcla y la eliminación del sobrenadante del licor madre. El material sólido separado puede triturarse con porciones adicionales del disolvente orgánico para eliminar las impurezas residuales, si están presentes. Sin embargo, el licor madre puede incluir cantidades variables del compuesto de Fórmula I que no se solidificó. Si el licor madre contiene dicho material no consolidado, el material no consolidado puede recuperarse, por ejemplo, mediante la eliminación del disolvente orgánico al vacío, y someterse de nuevo a las etapas de disolución/solidificación. En consecuencia, algunos métodos como los descritos anteriormente incluyen además aislar cualquier compuesto crudo no consolidado que tenga una estructura según la Fórmula I. En algunas realizaciones, el método incluye además llevar a cabo los pasos a), b) y c), como se ha descrito anteriormente, con el compuesto crudo no consolidado.

[0058] El compuesto sólido purificado se obtiene en forma cristalina. Una forma cristalina se caracteriza por moléculas constituyentes que se empaquetan en un patrón regularmente ordenado y repetitivo y que generalmente se extiende en las tres dimensiones espaciales.

[0059] Un experto en la materia apreciará que la forma sólida del compuesto purificado dependerá en cierta medida de la estructura del compuesto y de las características del disolvente utilizado en las etapas de disolución/solidificación. El compuesto sólido purificado -obtenido en una forma particular como se ha descrito anteriormente- puede ser procesado adicionalmente para obtener una forma sólida más preferida si es necesario. En algunas realizaciones, el método descrito anteriormente incluye además: d) solubilizar el compuesto solidificado en un disolvente orgánico polar para formar una solución; e) poner en contacto la solución con agua para precipitar al menos una parte del compuesto; y f) secar el compuesto precipitado.

[0060] Se puede utilizar cualquier disolvente orgánico polar adecuado para disolver el compuesto sólido purificado. En general, los disolventes orgánicos polares más adecuados son miscibles con el agua. Los ejemplos de disolventes orgánicos polares incluyen, pero no se limitan a, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, carbonato de propileno, acetonitrilo, metanol, etanol, isopropanol, r-butanol, tetrahidrofurano, acetona y mezclas de los mismos. Los disolventes orgánicos polares preferidos tienen puntos de ebullición inferiores a 100 °C. En algunas realizaciones, el disolvente orgánico polar se selecciona entre metanol, etanol, isopropanol, t-butanol, tetrahidrofurano y acetona. En algunas realizaciones, el disolvente orgánico polar es el metanol. En general, la relación entre el disolvente orgánico polar y el compuesto sólido purificado oscila entre aproximadamente 1:1 en peso y aproximadamente 500:1 en peso. La relación entre el disolvente orgánico polar y el compuesto sólido purificado puede ser, por ejemplo, de aproximadamente 2:1 en peso o de aproximadamente 3:1 en peso.

[0061] Se añade agua a la solución del compuesto purificado de Fórmula I en el disolvente orgánico polar, generalmente en una cantidad suficiente para precipitar el compuesto de Fórmula I de la solución. Se puede utilizar cualquier cantidad adecuada de agua en los métodos de la invención. Normalmente, la proporción de agua con respecto al disolvente orgánico polar oscila entre aproximadamente 1:20 y aproximadamente 20:1 en volumen. La proporción de agua con respecto al disolvente orgánico polar puede ser, por ejemplo, de aproximadamente 10:1. Tras la precipitación, el compuesto precipitado puede aislarse mediante filtración o centrifugación, como se ha descrito anteriormente. Alternativamente, la mezcla puede congelarse y la mezcla de disolvente y agua puede eliminarse del precipitado mediante sublimación. En algunas realizaciones, el compuesto precipitado se seca a presión reducida. Se puede utilizar cualquier presión y tiempo de secado adecuados para eliminar los restos de agua y disolvente de los compuestos precipitados. El secado puede llevarse a cabo, por ejemplo, bajo presión reducida hasta que el peso del compuesto precipitado permanezca constante.

[0062] Los métodos pueden utilizarse para purificar una serie de derivados de macrólidos. Los macrólidos, incluidos los que tienen estructuras según la Fórmula II de la Figura 2, son productos naturales policétidos y análogos sintéticos caracterizados por un anillo de lactona macrocíclico. Los métodos son particularmente útiles para la preparación de los derivados de rapamicina Biolimus A9 (BA9), everolimus, zotarolimus y temsirolimus. La invención proporciona un compuesto sólido purificado de Fórmula I como se ha descrito anteriormente, en el que R1 es CH²-CH²-O-CH²-CH³cuyo compuesto se define además como en las reivindicaciones adjuntas. Otros derivados de macrólidos también pueden purificarse utilizando los métodos.

[0063] Los métodos proporcionan compuestos altamente puros de Fórmula I. En general, los compuestos sólidos purificados tienen una pureza de al menos el 90%. En algunas realizaciones, los compuestos sólidos purificados tienen una pureza de al menos el 95%. En algunas realizaciones, la pureza del compuesto sólido purificado se incrementa entre un 1% y un 20% con respecto al compuesto crudo. Los métodos pueden proporcionar mayores incrementos en la pureza del compuesto sólido purificado dependiendo, en parte, de factores tales como la estructura del derivado de rapamicina particular y la pureza inicial del material crudo. En algunas realizaciones, la pureza del compuesto sólido purificado se incrementa entre un 1% y un 10% con respecto al compuesto crudo. En algunas realizaciones, la pureza del compuesto sólido purificado se incrementa aproximadamente un 3% con respecto al compuesto crudo.

[0064] En algunas realizaciones, los métodos también incluyen el contacto del compuesto sólido purificado con una composición antisolvente. Los métodos pueden incluir la combinación de una solución del compuesto purificado con una composición antisolvente. En general, la composición antisolvente contiene un disolvente orgánico no polar en el que el compuesto es insoluble o poco soluble a temperatura ambiente o inferior. La composición antisolvente puede contener, por ejemplo, éter dietílico, éter diisopropílico, éter metil t-butil, ligroína, ciclohexano, octano, hexano, heptano y mezclas de los mismos. En algunas realizaciones, la composición antisolvente incluye éter dietílico, éter diisopropílico, hexano, heptano o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la composición antisolvente incluye hexano, heptano, ligroína, octano, ciclohexano, y mezclas de los mismos. En algunas realizaciones, los métodos incluyen poner en contacto el compuesto purificado con una composición antisolvente y obtener una forma sólida cristalina del compuesto.

[001] La invención proporciona una forma cristalina de 40-O-(2-etoxietil) rapamicina. La forma cristalina exhibe una estabilidad superior en comparación con la forma amorfa.

[002] La forma cristalina de 40-O-(2-etoxietil) rapamicina puede ser tal que el termograma de calorimetría diferencial de barrido de la misma muestra uno o más mínimos locales a alrededor de 138°C y alrededor de 192°C. El termograma puede mostrar mínimos locales en torno a 137,9°C y 191,6°C. El termograma puede estar sustancialmente de acuerdo con la Figura 6, como se muestra en el presente documento.

[003] La forma cristalina de 40-O-(2-etoxietil) rapamicina es tal que el espectro infrarrojo de la misma muestra uno o más picos en o alrededor de los números de onda seleccionados de

2967.1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1,

1451.2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1 y 988,1 cm-1; o cinco o más picos en o alrededor de los números de onda seleccionados entre 2967 1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1 y 988,1 cm-1; o diez o más picos en o alrededor de los números de onda seleccionados de 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1, y 988,1 cm-1; o está sustancialmente de acuerdo con la Figura 12 como se muestra aquí.

[004] De forma adicional o alternativa, la forma cristalina de 40-O-(2-etoxietil) rapamicina es tal que el patrón de difracción de polvo de rayos X del mismo muestra uno o más picos de difracción en o alrededor de los ángulos (20) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13, 15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60°, y 32,28°; o 10 o más picos de difracción en o alrededor de los ángulos (20) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60°, y 32,28°; o 25 o más picos de difracción en o alrededor de los ángulos (20) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60° y 32,28°. En algunas realizaciones, el patrón de difracción de rayos X muestra uno o más picos de difracción en o alrededor de los ángulos (20) mostrados en la Tabla 4. En algunas realizaciones, el patrón de difracción de rayos X muestra 10 o más, o 25 o más, picos de difracción en o alrededor de los ángulos (20) mostrados en la Tabla 4. Adicional o alternativamente, el patrón de difracción de polvo de rayos X está sustancialmente de acuerdo con la Figura 5 como se muestra en este documento.

IV. Ejemplos

Ejemplo 1 Purificación de BA9.

[005] Tras la síntesis de BA9 según la Figura 2, se utilizó un gradiente de cromatografía que contenía n-hexano y acetato de etilo en varias proporciones como primer paso de purificación. Se recogieron noventa fracciones durante la cromatografía. Las fracciones 15-30 se combinaron para formar el lote A (que contenía 3,6 g de BA9). Las fracciones 31-50 se combinaron para formar el lote B (que contenía 4,6 g de BA9). Las fracciones 51-70 se combinaron para formar el lote C (que contiene 3,4 g de BA9). Las fracciones 1-14 y 71-90 se combinaron para formar el lote E (que contiene 2,2 g de BA9). Los distintos lotes contenían un 92,0-94,9% de BA9, según se determinó por HPLC y se resumió en la Tabla 1 que figura a continuación. Las cantidades relativas se expresan como AUC% (área bajo la curva), es decir, la fracción de la señal total que corresponde a un solo pico (correspondiente, a su vez, a una sola especie, o a dos o más especies con longitudes de onda y tiempos de retención de absorbancia similares/idénticos) en un cromatograma determinado. Las impurezas 1 -9 mostradas en la Tabla 1 están numeradas según el aumento del tiempo de retención; los tiempos de retención fueron reproducibles en todos los experimentos.

Tabla 1: Lotes de BA9 purificada de la segunda columna cromatográfica

[0070] Al lote B, un material crudo viscoso que contenía 4,6 g de BA9, se añadió n-hexano (490 g) a temperatura ambiente. Mientras la mezcla se agitaba vigorosamente, se calentó a reflujo (~ 70 °C) en 30 minutos. El material viscoso se convirtió en un polvo suspendido de fácil agitación a ~ 56 °C y luego en una solución clara después de ~ 5 minutos de agitación a reflujo. El sistema se sometió a reflujo durante 20 minutos y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente en 3 horas. El enfriamiento provocó la precipitación de un sólido blanco. La suspensión se agitó adicionalmente a 25-15 °C durante 2 horas. A continuación se filtró la suspensión y el sólido aislado se lavó en el filtro con 50 g de n-hexano. A continuación, el sólido se secó al vacío hasta alcanzar un peso constante (rendimiento = 3,4 g, recuperación del 74% de BA9).

[0071] Los resultados de la purificación se muestran en la Tabla 2. El procedimiento de precipitación redujo las cantidades de las impurezas BA9 de elución tardía (es decir, las impurezas 5-9). La cantidad de la impureza 4, así como de otras impurezas más polares, fueron similares para el lote inicial y el lote purificado/precipitado de BA9.

Tabla 2: Análisis por HPLC del lote B de BA9 (véase la tabla 1) purificado por precipitación a partir de n-hexano caliente

[0072] Los lotes A, C y E también se precipitaron a partir de n-hexano en reflujo. Para ello, se utilizó una relación de peso similar de 1:110 entre el peso de BA9 (establecido por el análisis cuantitativo de HPLC) y el n-hexano. Las cantidades y purezas de los cuatro lotes de BA9 obtenidos por la purificación en n-hexano se resumen en la Tabla 3. Como se desprende de la Tabla 3, la purificación de porciones de BA9 por precipitación a partir de n-hexano a reflujo generó dos nuevos lotes A y B (presentados en la Tabla 3) que contienen BA9 con niveles de pureza mejorados (es decir, >95%). Los lotes se obtuvieron utilizando el método sorprendentemente sencillo y económico de la invención.

La Tabla 3 muestra los valores mejorados en relación con la Tabla 1.

Tabla 3: Análisis por HPLC de porciones de BA9 purificada por precipitación a partir de n-hexano a reflujo - se refieren a las porciones correspondientes de la Tabla 1.

1) Producto de la precipitación de n-hexano

[0073] El descubrimiento de que una simple solidificación mediante la disminución de la temperatura separaría los derivados del 40-O tan limpiamente de las impurezas/ subproductos no deseados fue sorprendente e imprevisible. Es económicamente ventajoso porque los subproductos no deseados son a menudo de una polaridad similar a la del producto deseado y requieren técnicas de cromatografía a gran escala, de alto coste y muy laboriosas para su eliminación.

Ejemplo 2 Preparación y caracterización de las formas sólidas de BA9.

[0074] Métodos de perfilado de lotes y cribado de polimorfos. Los Lotes 2A y 2B de BA9 se purificaron mediante precipitación a partir de w-hexanos como se ha descrito anteriormente. Después del proceso de purificación, el lote 2A (82,9 g) se disolvió en metanol (190 g) y se precipitó añadiendo la solución de metanol al agua. La solución metanólica combinada se transfirió a un embudo de adición y, a continuación, se cargó lentamente en el plazo de 1 hora y 15 minutos en agua para inyección agitada enérgicamente (2,18 kg) en un reactor a una temperatura de 0-5 °C. Una vez completada la adición de la solución metanólica de BA9, la suspensión blanca resultante se agitó durante 15 minutos más en el mismo rango de temperatura. El BA9 precipitado se aisló en un rendimiento del 84,8% (la pureza fue del 96,3% según se determinó por HPLC). La suspensión se filtró y el sólido blanco aislado se lavó en el filtro. El lote 2A se caracterizó por XRPD y DSC y el lote 2B se caracterizó por XRPD, DSC, microscopía óptica y espectroscopia infrarroja (IR). El lote 2A resultó ser amorfo, según la XRPD. El lote 2B resultó ser cristalino, según la evaluación por XRPD, y la forma cristalina se designó como Forma I. Se realizó un experimento de sorción dinámica de vapor (DVS) con el lote 2B.

[0075] Se prepararon dos soluciones madre de BA9 Lote 2A en EtOAc y acetona. Estas soluciones se dispensaron en viales de vidrio y se colocaron en un horno de vacío para su evaporación hasta la sequedad. Los sólidos obtenidos tras el secado se disolvieron en diferentes mezclas de disolventes/disolventes y se agitaron durante la noche. Los sólidos obtenidos tras el proceso de disolución-recristalización se analizaron como torta húmeda mediante XRPD.

[0076] Se llevaron a cabo experimentos de cristalización antisolvente disolviendo el lote 2A en 6 disolventes orgánicos diferentes. Se añadió hexano como antisolvente. Si no se observaban sólidos, las soluciones se dejaban agitar a temperatura ambiente.

Resultados y discusión

[0077] Perfilado de lotes. El lote 2A de BA9 se caracterizó por XRPD (Figura 3) y DSC (Figura 4) y el lote 2B se caracterizó por XRPD (Figura 5), DSC (Figura 6) microscopía óptica (Figura 7) y espectroscopía infrarroja (Figura 12). El lote 2A es amorfo por XRPD. El lote 2B es cristalino por XRPD y fue designado como Forma I.

Los ángulos de difracción (20) de la Forma I se enumeran en la Tabla 4.

Tabla 4. Datos XRPD de la Forma I de BA9

[0078] Se realizó un experimento de DVS con el lote 2B. El aumento de la masa de la muestra fue de ~ 0,5% al 90% ^dehR. ^{El gráfico cinético se muestra en la Figura 8. La muestra posterior a la DVS se analizó mediante XRPD y se}confirmó que era la Forma I. La Figura 9 muestra una superposición de los patrones XRPD de la muestra post-DVS y un patrón de referencia de la Forma I.

[0079] Cribado de polimorfos. Se prepararon dos soluciones madre del lote 2A de BA9 (100 mg/ml) en acetato de etilo (Stock A en la Tabla 4) y acetona (Stock B en la Tabla 4) disolviendo ~ 380 mg del material en 3,8 ml de los respectivos disolventes. Estas soluciones se dispensaron en 22 viales de vidrio (0,4 ml en cada vial, 11 viales por solución madre) y se colocaron en una estufa de vacío a temperatura ambiente para su evaporación hasta la sequedad. Después de 2 días de secado, se obtuvieron ~ 40 mg de material en cada vial como un gel agrietado.

[0080] Se añadieron once mezclas diferentes de disolventes/disolventes a los viales (160 pl cada uno) y se dejaron agitar las soluciones obtenidas a temperatura ambiente. Después de la agitación durante la noche, si los sólidos habían precipitado, se filtró la suspensión y los sólidos obtenidos se analizaron como torta húmeda por XRPD. Los resultados de estos experimentos se muestran en la Tabla 5. La Figura 10 muestra una superposición de los patrones XRPD obtenidos en los experimentos de recristalización y un patrón de referencia de la Forma I.

Tabla 5. Resumen de los experimentos de disolución/recristalización

[0081] Los experimentos de cristalización con antisolventes se llevaron a cabo disolviendo ~ 40 mg de cada lote 2A en 6 disolventes orgánicos diferentes (200 pl cada uno). Se añadió hexano como antisolvente en pasos de 200 pl hasta que se precipitaron los sólidos o se añadieron 1,6 ml de hexano. Si no se observaban sólidos, las soluciones se dejaban agitar a temperatura ambiente. Los resultados de estos experimentos se muestran en la Tabla 6. La Figura 11 muestra una superposición de los patrones XRPD obtenidos en los experimentos de cristalización anti-solvente y un patrón de referencia de la Forma I.

Tabla 6. Resumen de los experimentos de cristalización con disolventes.

Ejemplo 3 El BA9 cristalino presenta una estabilidad superior.

[0082] Se realizaron estudios de fotólisis en el BA9 amorfo y cristalino (es decir, la Forma I). Después de la exposición a un mínimo de 1,2 millones de horas lux y no menos de 200 Whoras/m2 según la norma ICH Q1B, tanto la BA9 cristalina como la amorfa exhibieron aumentos significativos en los compuestos de degradación con tiempos de retención similares. Sin embargo, la fotólisis de la BA9 cristalina dio lugar a menos degradantes principales en general, según lo determinado por HPLC, véase la Tabla 7. Además, las mediciones de ensayo de pureza mostraron que después de la fotólisis, el BA9 cristalino se ensayó con un 70,2% de pureza, que fue sustancialmente mayor que el 16,3% de pureza de ensayo del BA9 amorfo.

[0083] La mejora en la estabilidad del BA9 cristalino en comparación con el BA9 amorfo es apoyada además por la comparación de los Controles Oscuros, los cuales fueron mantenidos a temperatura estándar de laboratorio y en las mismas condiciones que las muestras de prueba con la excepción de la exposición a la luz durante la duración del estudio. El Control Oscuro cristalino (ensayo del 98,0%) también mostró una mayor estabilidad en comparación con el Control Oscuro amorfo (88,2%). Por lo tanto, el BA9 cristalino demostró ser significativamente más estable que el BA9 amorfo bajo la fotólisis y el almacenamiento en condiciones de laboratorio.

Tabla 7. Resumen de los experimentos de fotoestabilidad

[0084] Se realizaron estudios de oxidación en el BA9 amorfo y cristalino. Después de la exposición al 30% de H²O²durante 3 horas, tanto el BA9 cristalino como el amorfo mostraron aumentos en los compuestos de degradación con tiempos de retención de HPLC similares. Sin embargo, la degradación oxidativa de la BA9 cristalina dio lugar a niveles más bajos de los principales degradantes en general. Además, las mediciones de los ensayos mostraron que después de la degradación oxidativa, la BA9 cristalina exhibió una pérdida de peso del 3,4% (en relación con una muestra de control), que fue sustancialmente menor que la pérdida de peso del 6,5% exhibida por la BA9 amorfa. Por lo tanto, es evidente que el BA9 amorfo es más susceptible a la degradación oxidativa.

[0085] La superior fotoestabilidad y estabilidad química del BA9 cristalino puede evitar la pérdida de material valioso durante el almacenamiento y la fabricación de productos sanitarios recubiertos. Las ventajas de la nueva forma cristalina, así como la economía y la sorprendente simplicidad de los métodos de preparación de la forma cristalina, ayudan a mantener la integridad de los productos recubiertos de fármacos, al tiempo que disminuyen el coste y la complejidad de su producción.

[0086] Aunque lo anterior se ha descrito con cierto detalle a modo de ilustración y ejemplo para fines de claridad y comprensión, un experto en la materia apreciará que ciertos cambios y modificaciones pueden practicarse dentro del ámbito de las reivindicaciones adjuntas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una forma cristalina de 40-O-(2-etoxietil) rapamicina, en la que el patrón de difracción de rayos X de la misma muestra uno o más picos de difracción en los ángulos (20) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60°, y 32,28°; o 10 o más picos de difracción en los ángulos (20) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60° y 32,28°; o 25 o más picos de difracción en los ángulos (20) seleccionados del grupo formado por 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60° y 32,28°.

en el que el patrón de difracción de rayos X de la misma es sustancialmente de acuerdo con lo mostrado en la figura 5; o

en el que su espectro infrarrojo muestra uno o más picos en los números de onda seleccionados del grupo que consiste en 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1, y 988,1 cm-1 o cinco o más picos en los números de onda seleccionados del grupo que consiste en 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1, y 988,1 cm-1; o diez o más picos en los números de onda seleccionados del grupo formado por 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1 y 988,1 cm-1; o

en el que el espectro infrarrojo se ajusta sustancialmente al mostrado en la Figura 12.

2. La forma cristalina de la reivindicación 1, en la que el patrón de difracción de rayos X de la misma muestra uno o más picos de difracción en los ángulos (20) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60° y 32,28°; o 10 o más picos de difracción en los ángulos (20) seleccionados del grupo formado por 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°,18,57°, 19,42°, 19,81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24, 26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60°, y 32,28°; o 25 o más picos de difracción en los ángulos (20) seleccionados del grupo que consiste en 5,00°, 7,06°, 9,22°, 10,07°, 10,50°, 11,94°, 12,71°, 13,15°, 14,73°, 16,33°, 16,80°, 17,07°, 18,01°, 18,57°, 19,42°, 19, 81°, 20,16°, 20,44°, 20,93°, 21,55°, 22,29°, 22,58°, 23,92°, 24,26°, 24,83°, 25,17°, 26,32°, 27,48°, 28,60° y 32,28°.

3. La forma cristalina de la reivindicación 1, en la que el patrón de difracción de rayos X de la misma es sustancialmente conforme al mostrado en la Figura 5.

4. La forma cristalina de la reivindicación 1, en la que el espectro infrarrojo de la misma muestra uno o más picos en los números de onda seleccionados del grupo que consiste en 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745.9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1 y 988,1 cm-1; o cinco o más picos en los números de onda seleccionados del grupo que consiste en 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073.9 cm-1 y 988,1 cm-1; o diez o más picos en los números de onda seleccionados del grupo que consiste en 2967,1 cm-1, 2931,7 cm-1, 2863,3 cm-1, 1745,9 cm-1, 1718,8 cm-1, 1645,7 cm-1, 1619,0 cm-1, 1451,2 cm-1, 1378,2 cm-1, 1189,4 cm-1, 1073,9 cm-1 y 988,1 cm-1.

5. La forma cristalina de la reivindicación 1, en la que el espectro infrarrojo se ajusta sustancialmente al mostrado en la Figura 12.