ES2896709T3 - Anticuerpos anti-c-Met y usos de los mismos - Google Patents

Anticuerpos anti-c-Met y usos de los mismos Download PDF

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Abstract

Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de un trastorno isquémico, una apoplejía, una lesión o enfermedad renal, un trastorno de neovascularización retiniana, un trastorno o enfermedad neurológica o una herida, en la que dicha composición comprende: (a) un polipéptido; y (b) un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que el polipéptido comprende: un dominio variable de la cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; y un dominio variable de la cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, en la que dicho polipéptido es un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo, y dicho polipéptido se une a c-Met (factor de transición mesenquimatosa-epitelial).

Description

DESCRIPCIÓN
A n tic u e rp o s a n ti-c -M e t y uso s de los m ism os
Referencia cruzada a solicitudes relacionadas
E sta so lic itu d re iv in d ica p rio rida d y el b en e fic io de la so lic itu d de p a ten te de E s ta d o s U n id os n.° 62 /291.988 p re se n ta d a en la O fic in a de P a te n te s y M a rcas de E s ta d o s U n id os el 5 de fe b re ro de 2016.
Campo técnico
La m a te ria o b je to d e sc rita en el p re se n te d o cu m e n to se re fie re a una co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica para su uso en el tra ta m ie n to de un tra s to rn o isqu ém ico , una a po p le jía , una les ión o e n fe rm e d a d renal, un tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin ia na , un tra s to rn o o e n fe rm e d a d n e u ro ló g ica o una herida.
Antecedentes
E xp re sa d o en la su p e rfic ie ce lu la r, c -M e t (fa c to r de tra n s ic ió n m e se n q u im a to s a -e p ite lia l) es una tiro s in a c ina sa re ce p to ra q ue e stá co d ifica d a p o r el p ro to n co g é n M et. E s tru c tu ra lm e n te , c -M e t es un h e te ro d ím e ro co n e c ta d o p o r d isu lfu ro c o m p u e s to p o r una su b u n id a d a lfa e x tra c e lu la r (50 kD a ) y una su b u n id a d beta tra n s m e m b ra n a ria (140 kDa), que p uede ca ra c te r iza rse con un d o m in io e x tra c e lu la r p a ra la un ión de l ligando , un se g m e n to q ue a b a rca la m e m b ra n a y un m o tivo ca ta lítico tiro s in a c ina sa im p lica d o en la fo s fo r ila c ió n de re s id u o s de tiro s in a d en tro de este d o m in io in trace lu la r. (D ean et al., N ature , 4: 318 (6044 ): 385, 1985; P a rk et al., P N A S , 84 (18): 6379 , 1976; M a g g io ra et al., J. C e ll P hys io l., 173 :183 , 1997).
T ras la un ión a su liga n do H G F (fa c to r de c re c im ie n to de h ep a toc itos ), c -M e t se d im e riza y a u to fo s fo rila en los re s idu os de tiro s in a c ito p la sm á tico s , e n ton ces , a su vez , in te ra c tú a con d ive rsa s p ro te ín a s q ue m e d ian las ru tas de se ñ a liza c ió n p os te rio re s . La a c tiva c ió n de c -M e t p rovo ca una d ive rs id a d de re sp u e s ta s b io ló g ica s q ue dan lu g a r a un c re c im ie n to c e lu la r a u m e n ta d o , d ise m in a c ió n y m o tilid ad , invas ión , p ro te cc ió n con tra apo p tos is , m o rfo g é n e s is ra m ifica n te y a n g io g é n e s is . En co n d ic io n e s pa to ló g ica s , la a c tivac ión in a p ro p ia d a de c -M e t p ue de c o n fe rir ca p a c id a d e s p ro life ra tiva s , de s u p e rv ive n c ia e in va s iva s /m e ta s tá s ica s de cé lu la s ca n ce ro sa s . D ada la d ive rs id a d de fu n c io n e s b io ló g ica s y fis io ló g ica s in flu id a s p o r la a c tiv id a d de c-M et, la p ro te ína c -M e t se ha co n ve rtid o en una d ia n a te ra p é u tica ve rsá til. En el p re se n te d o cu m e n to se d esc rib e n in m u n o g lo b u lin a s con tra c -M e t que se unen a y a c tivan la p ro te ína c-M e t y que son p ro filá c tica y /o te ra p é u tica m e n te e fica ce s en una d ive rs id a d de tra s to rn o s o e n fe rm e d a d e s .
El d o cu m e n to US 2013 /129731 A1 se re fie re a un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t y usos del m ism o. G a llo et al. (C e ll D ea th & D ise ase 5.4 (2014 ): e 1185 -e 1185 ) se re fie re a a n ticu e rp o s a g o n is ta s q ue a c tivan el re ce p to r de M e t y p ro te ge n los ca rd io m io b la s to s de la a p o p to s is ind u c id a p o r c lo ru ro de co b a lto y au to fa g ia . P ra t et al. (B io m e d ic in e s 2.4 (2014 ): 359 ­ 383 ) se re fie re a a n ticu e rp o s m o n o c lo n a le s con tra el re ce p to r de M E T /H G F y su liga n do com o h e rra m ie n ta s m u ltita re a con a p lica c io n e s de in ve s tig a c ió n b ás ica para tra ta m ie n to . El d o cu m e n to W O 2016 /021864 A1 se re fie re a un a n ticu e rp o h u m a n o e sp e c ífico para c -M e t y un m é to do de p re p a ra c ió n de l m ism o. El d o cu m e n to US 2014 /193431 A1 se re fie re a un a n ticu e rp o a n ti-C -M e t q ue tie n e a c tiv id a d H G F y uso de l m ism o. El d o cu m e n to KR 2016 0017918 A se re fie re a un a n ticu e rp o h um a no e sp e c ífico p ara C -M e t y m é to d o de fa b rica c ió n de d ich o an ticue rp o .
Los e je m p lo s a n te rio re s de la té cn ica re la c io n a d a y las lim ita c io n e s re la c io n a d a s con la m ism a e stán d e s tin a d o s a se r ilu s tra tivo s y no e xc lu ye n te s . O tra s lim ita c io n e s de la té c n ica re la c io n a d a lleg a rán a se r e v id e n te s para los e xp e rto s en la m a te ria tra s la lec tu ra de la m e m o ria d e sc rip tiva y un e s tu d io de los d ibu jos .
Breve sumario
La inve n c ió n se d e fine en la re iv in d ica c ió n in d e p e n d ie n te 1. S e d e fine n a sp e c to s y re a liza c io n e s p re fe rid a s a d ic io n a le s en las re iv in d ica c io n e s d e p e n d ie n te s . C u a lq u ie r a sp ec to , re a liza c ió n y e je m p lo de la p re se n te d ivu lg a c ió n q ue no ca iga d en tro de l a lca n ce de las re iv in d ica c io n e s a d ju n ta s no fo rm a p arte de la inve nc ión y se p ro p o rc io n a s im p le m e n te con fin e s ilus tra tivo s .
La inve n c ió n p ro p o rc io n a una co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica para su uso en el tra ta m ie n to de un tra s to rn o isqu ém ico , una a po p le jía , una les ión o e n fe rm e d a d renal, un tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin iana , un tra s to rn o o e n fe rm e d a d n e u ro ló g ica o una herida , en la q ue d ich a co m p o s ic ió n co m p re n d e : (a ) un p o lip ép tid o ; y (b ) un v e h ícu lo fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le , en la que el p o lip é p tid o co m p re n d e : un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p esad a de in m u n o g lo b u lin a q ue co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID NO: 1; y un d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a lige ra de in m u n o g lo b u lin a q ue co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID NO: 2, en la q ue d icho p o lip ép tid o es un a n ticu e rp o o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o, y d ich o p o lip é p tid o se une a c -M e t (fa c to r de tra n s ic ió n m e se n q u im a to sa -e p ite lia l).
En a lg u n a s re a liza c io ne s , la les ión o e n fe rm e d a d rena l es un tra s to rn o fib ró tico .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , la les ión o e n fe rm e d a d rena l se s e le cc io n a de l g rup o que co n s is te en fib ro s is renal, fib ro s is rena l crón ica , n e fro p a tía c ró n ica a so c ia d a con d ia b e tes , lupus, e sc le ro d e rm ia del riñón, n e fritis g lo m e ru la r, e sc le ro s is g lo m e ru la r s e g m e n ta r ia foca l, f ib ro s is rena l p o r n e fro p a tía de IgA a so c ia d a con e n fe rm e d a d rena l c ró n ica (C K D ) hum a na , n e fro p a tía p ro g re s iva c ró n ica (C P N ), f ib ro s is tu b u lo in te rs tic ia l, o b s tru cc ió n u re te ra l, u rem ia c ró n ica , n e fritis in te rs tic ia l c ró n ica , n e fro p a tía p o r ra d ia c ión , g lo m e ru lo e sc le ro s is , g lo m e ru lo n e fro s is p ro g re s iva (P G N ), les ión por m ic ro a n g io p a tía e n d o te lia l/tro m b ó tica , n e fro p a tía a so c ia d a al V IH , y una fib ro s is a so c ia d a con e xp o s ic ió n a una tox in a , un irr ita n te o un a g e n te q u im io te rá p ico .
En a lg u n a s re a liza c io ne s , la h e rida es una h erid a m e cá n ica , q u ím ica , b a c te ria n a o té rm ica .
En a lg u n a s re a liza c io ne s , la h e rida se se le cc io n a del g rup o q ue co n s is te en una inc is ión , una lace ra c ió n , una a b ras ión , una h erid a p un zan te , una h e rida p e n e tra n te y una h erid a de bala.
En a lg u n a s re a liza c io ne s , la h e rida es una h erid a en la piel.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin ia n a e s tá p ro vo ca d o p o r un m ie m b ro se le cc io n a d o del g rup o q ue co n s is te en d e g e n e ra c ió n m acu la r, h is to p la sm o s is , m iop ía pa to ló g ica , e s tría s ang io id es , n e u ro p a tía ó p tica isq u é m ica a n te rio r, e n d o ca rd itis bac te ria n a , e n fe rm e d a d de Best, re tin o co ro id o p a tía en pe rd igo n ad a , h e m a n g io m a co ro id eo , n evos co ro id eo s, a u se n c ia de p e rfu s ió n co ro id e a , o s te o m a s co ro id e o s, ro tu ra co ro idea , co ro id e re m ia , d e sp re n d im ie n to de re tina c ró n ico , co lo b o m a de la re tina , d rusa s, e n d o fta lm itis e n d ó g e n a p o r Candida, h a m a rto m a s e x tra p a p ila re s de l e p ite lio p ig m e n ta d o de la re tina , fo n d o fla v im a cu la d o , o rific io m a cu la r id iopá tico , m e la n o m a m a lign o , g lo m e ru lo n e fr it is m e m b ra n o p ro life ra tiva (de tip o II), cu e rp o s e xó g e n o s in tra o cu la re s m e tá licos , s ín d ro m e de p ap ila de d o n d ie g o de día, s ín d ro m e de m a n ch a s b la n ca s e va n e sce n te s m ú ltip le s (M E W D S ), n e o va scu la r iza c ió n en la ora se rra ta , q u e m a d u ra p o r m ic ro sco p io q u irú rg ico , fo se ta s de la p ap ila óptica, fo to co a g u la c ió n , c o ro id o p a tía in te rna in te rm ite n te , rubéo la , sa rco ido s is , c o ro id itis se rp e n tin a o g eo g rá fica , d re n a je de líqu ido sub re tin ia n o , s ín d ro m e de p ap ila inc lin ad a , re tin o co ro id it is p o r Taxoplasma, tu b e rcu lo s is , s ín d ro m e de V o g t-K o ya n a g i-H a ra d a , re tin o p a tía d ia b é tica , re tin o p a tía no d ia b é tica , o c lu s ió n de la ve n a del ram o, o c lu s ió n de la ve n a re tin ia na cen tra l, re tin o p a tía en re c ién n a c id o s p rem a tu ros , ru b e o s is de l iris, g la u co m a n eo va scu la r, te la n g ie c ta s ia pe rio fove a l, re tin o p a tía de cé lu la s fa lc ifo rm e s , e n fe rm e d a d de Eale, va sc u lit is re tin ia na , e n fe rm e d a d de vo n H ipp e l-L inau, re tin o p a tía de ra d ia c ión , c rio le s ió n re tin iana , re tin itis p ig m e n ta ria , co lo b o m a re tin o co ro id e o , n e o va scu la r iza c ió n de la có rn e a d e b id a a q u e ra titis p o r h e rp e s s im ple , ú lce ra s co rn e a le s , q u e ra to p la s tia , te r ig io y tra u m a tism o .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin ia na es n e o va scu la r iza c ió n co ro id ea .
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el tra s to rn o o e n fe rm e d a d n e u ro ló g ica se se le cc io n a de l g rup o q ue co n s is te en les ión ce re b ra l tra u m á tica , a po p le jía , a n e u rism a ce reb ra l, les ión de la m é du la e sp ina l, e n fe rm e d a d de P a rk inson , e sc le ro s is la te ra l a m io tró fica , e n fe rm e d a d de A lzh e im e r, a tro fia co rtica l ce re b ra l d ifusa , d e m e n c ia con cu e rp o s de Lewy, e n fe rm e d a d de P ick, d e m e n c ia m e so lim b o co rtica l, d e g e n e ra c ió n ta lá m ica , co rea de H un tin g to n , d e g e n e ra c ió n co rtica le s tria ta l-m e d u la r, d e g e n e ra c ió n g a n g lio n a r co rtica l-b a sa l, d e g e n e ra c ió n ce re b ro ce re b e lo sa , d e m e n c ia h e re d ita ria con p a ra p a re s ia e sp ás tica , e n fe rm e d a d de cu e rp o s de p o lig lu co sa n o , s ín d ro m e de S h y -D ra g e r, a tro fia o livo p o n to ce re b e lo sa , p a rá lis is s u p ra n u c le a r p rog re s iva , d is to n ía m u scu la r d e fo rm a n te , e n fe rm e d a d de H a lle rvo rd e n -S pa tz, s ín d ro m e de M e ige , te m b lo re s h ere d ita rio s , s ín d ro m e de G ille s de la T o u re tte , co rea a ca n to c ítica , a ta x ia de F ried re ich , a tro fia c e re b e lo sa co rtica l h e re d ita ria de H o lm es, e n fe rm e d a d de G e rs tm a n n -S tra u ss le r-S ch e in ke r, a tro fia m u sc u la r v e rte b ra l p rog re s iva , p a rá lis is b u lb a r p rog re s iva , e sc le ro s is la te ra l p rim aria , a tro fia m u sc u la r he re d ita ria , p a ra p le jia esp ás tica , a tro fia m u sc u la r p e ronea l, p o lin e u ro p a tía in te rs tic ia l h ip e rtró fica , h e re d o p a tía a tá c tica p o lin e u ritifo rm e , n e u ro p a tía óp tica , o fta lm o p le g ia y d año en la re tina o el n e rv io óptico.
En a lg u n a s re a liza c io n e s , el p o lip é p tid o co m p re n d e un scFv. En o tras re a liza c io n e s m ás, el s cF v co m p re n d e S E Q ID NO: 3.
Breve descripción de los dibujos
Las fig u ra s 1A -1B m u e s tra un e fe c to p ro m o to r de c ica triza c ió n de h e rid as de un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a go n is ta . La figu ra 1A es una fo to g ra fía de una les ión e p id é rm ica en el d ía 10 d e sp u é s de que se p ro d u je ra una h e rid a en ra tones. La figu ra 1B es un g rá fico q ue ilus tra la c in é tica de l c ie rre de h e rid as d u ra n te 14 d ías en ra to n e s tra ta d o s con el a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a go n is ta .
Las fig u ra s 2 A -2 B m u es tra n un e fe c to p ro te c to r de un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a g o n is ta en el m o de lo de n e fro pa tía in d u c id a p o r a d ria m ic in a (A D R ). La figu ra 2 A es un g rá fico q ue m u es tra el ca m b io en los n ive les de n itró g e n o de la u rea en sa n g re (B U N ) y la fig u ra 2B es un g rá fico q ue m u es tra el ca m b io en los n ive les de c re a tin in a en san g re (C re a ) en ra ton es con les ión rena l que se tra ta ro n con a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a go n is ta . V írg e n e s se re fie re a a n im a le s que no se tra ta ro n con A D R ni con a n ticue rp o . P B S se re fie re a a n im a le s tra ta d o s con A D R , d e sp u é s con so lu c ió n sa lin a ta m p o n a d a con fo s fa to (s in a n ticue rp o ).
Las fig u ra s 3 A -3B m u es tra n una im agen de una se cc ió n de te jid o (fig u ra 3 A ) y el g rá fico co rre sp o n d ie n te (fig u ra 3 B ) q ue m u e s tra n el g ra d o de les ión rena l en los ra ton es tra ta d o s con un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a go n is ta .
Las fig u ra s 4 A -4 B m u es tra n un e fe c to p ro te c to r rena l de un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a g o n is ta en el m o d e lo de n e fro p a tía de ra tón in d u c id a p o r o b s tru cc ió n u re te ra l u n ila te ra l (U U O ). La figu ra 4 A m u es tra im á ge ne s re p re se n ta tiva s de se cc io n e s te ñ id a s con tric ro m o de M asso n de te jid o s re na les le s io n a d o s in d u c id o s p o r UUO .
La fig u ra 4B es un g rá fico co rre sp o n d ie n te q ue ilus tra la p u n tu a c ió n de fib ro s is m e d id a en las im á g e n e s de la figu ra
4A.
La figu ra 5 m u e s tra el ca m b io en el ta m a ñ o del in fa rto tra s tra ta m ie n to con un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a go n is ta en
un m o de lo de ra ta de a p o p le jía isqu ém ica .
La fig u ra 6 es un g rá fico q ue m u e s tra la m e d ic ió n de la flu o re sc e n c ia q ue re p re se n ta n e o va scu la r iza c ió n co ro id e a
tra s tra ta m ie n to con un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a g o n is ta en el m o de lo de co n e jo de n e o va scu la r iza c ió n co ro id e a
(C N V ) in d u c id a p o r láser. Las fig u ra s 7 A y 7B m u es tra n los e fe c to s p ro m o to re s de m ig ra c ió n de un a n ticu e rp o a n tic -M e t a g o n is ta en cé lu la s de S ch w a n n (iS c ) en un e n sa yo de T ra n sw e ll.
La fig u ra 7A m u e s tra im á g e n e s de cé lu la s te ñ id a s . La figu ra 7B es una re p re se n ta c ió n cu a n tita tiva de las im á ge ne s
m o s tra d a s en la fig u ra 7A.
Las fig u ra s 8A -8D ilus tran los e fe c to s de un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a g o n is ta sob re la fu n c ió n m o to ra y la su p e rv ive n c ia de ra ton es B6S JL-T g (S O D 1 -G 93 A ). Los re su lta d o s se m u es tra n para e va lu a c ió n se m a n a l de
R o ta rod (fig u ra 8A ), fu e rza de a g a rre (fig u ra 8B), peso co rp o ra l (fig u ra 8C ) y su p e rv ive n c ia (fig u ra 8D).
Breve descripción de las secuencias
S E Q ID NO : 1 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de l d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p e sa d a de 1E4.
S E Q ID NO : 2 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de l d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra de 1E4.
S E Q ID NO : 3 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de la co n s tru cc ió n scF v de 1E4.
S E Q ID NO: 4 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de l d o m in io c o n e c to r en la co n s tru cc ió n s cF v de 1E4.
E ID N n i m in i l DR1 l m in i v la la la
Figure imgf000004_0001
la S E Q ID NO : 9 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de la C D R 2 del d o m in io va r ia b le de la S E Q ID NO: 10 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de la C D R 3 de l d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra de 1E4.
S E Q ID NO: 11 es la se cu e n c ia de á c id o n u c le ico de l d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a p esad a de 1E4.
S E Q ID NO: 12 es la se cu e n c ia de á c id o n u c le ico de l d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a lige ra de 1E4.
S E Q ID NO: 13 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de una iso fo rm a b de la p ro te ín a c -M e t h um a na com o se d e sc rib e
en G e n B a n k n.° acc. N P _000236).
S E Q ID NO: 14 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de la iso fo rm a a de la p ro te ína c -M e t h u m a n a com o se d e sc rib e
en G e n B a n k n.° acc. N P _ 001120972 ).
S E Q ID NO: 15 es la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de una de p ro te ín a c -M e t de ra tón com o se d e sc rib e en G e n B a n k n.° acc. N P _032617).
Descripción detallada
I. Definiciones
C o m o se usan en la p re se n te m e m o ria d esc rip tiva , las fo rm a s en s in g u la r "u n /o ", "u n a " y "e l/la " inc lu ye n los re fe ren te s en p lu ra l sa lvo que el co n te x to ind iq ue c la ra m e n te lo con tra rio . P o r tan to , p o r e je m p lo , la re fe re n c ia a un "p o lím e ro " inc lu ye un so lo po lím ero , a s í com o dos o m ás de los m ism os p o lím e ro s o d ife re n te s , la re fe re n c ia a un "e xc ip ie n te " inc lu ye un so lo e xc ip ie n te , a s í com o d os o m ás de los m ism o s e xc ip ie n te s o d ife re n te s , y s im ila res .
C u a n d o se p ro p o rc io n a un in te rva lo de va lo re s , se p re te n d e que la d ivu lg a c ió n a b a rq u e cad a v a lo r in te rm e d io e n tre el lím ite s u p e rio r y el lím ite in fe rio r de ese in te rva lo y c u a lq u ie r o tro v a lo r ind icad o o in te rm e d io en e se in te rva lo ind icado .
P o r e je m p lo , si se ind ica un in te rva lo de 1 pm a 8 pm, se p re te n d e que 2 pm , 3 pm, 4 pm , 5 pm , 6 pm y 7 pm estén
d ivu lg a d o s e xp líc ita m e n te , a s í com o el in te rva lo de va lo re s m a yo re s de o igua l a 1 pm y el in te rva lo de va lo re s m e n o r de o igua l a 8 pm.
El té rm in o "c -M e t" en el p re se n te d o cu m e n to se re fie re al p ro to n co g é n M ET, el p ro d u c to p ro te ín ico tiro s in a c ina sa
re ce p to ra q ue ta m b ié n se co n o ce en la té c n ica co m o re ce p to r de l fa c to r de c re c im ie n to de h e p a to c ito s (H G F R ).
E je m p lo s de c -M e t inc luyen , a u n q u e sin lim itac ió n , p ro d u c to s p ro te ín ico s d e sc rito s en G e n B a n k com o n.° de a cce so
N P _ 00236 (iso fo rm a b de c -M e t hum ano , S E Q ID n O: 13), N P _ 001120972 (iso fo rm a a de c -M e t hum a no , S E Q ID NO:
14) y N P _ 032617 (ra tón , S E Q ID NO: 15) y v a r ia n te s de los m ism os q ue se unen p o r p o lip é p tid o s 1E4 d e sc rito s en el p rese n te d ocum e n to .
El té rm in o "a n ticu e rp o " se usa en el p re se n te d o cu m e n to en el se n tid o m ás a m p lio y a b a rca d ive rsa s e s tru c tu ra s de
a n ticue rp o , q ue inc luyen , a u n q u e sin lim itac ió n , a n ticu e rp o s m o n o c lo n a le s , a n ticu e rp o s po lic lon a le s , a n ticu e rp o s
m u ltie sp e c ífico s (p o r e je m p lo , a n ticu e rp o s b ie sp e c ífico s ) y fra g m e n to s de a n ticue rp o , s ie m p re q ue m u es tre n la a c tiv id a d de un ión a a n tíg e n o d esea da .
Un "a n tic u e rp o h u m a no " es un a n ticu e rp o q ue tie n e una se cu e n c ia de a m in o á c id o s q ue se co rre sp o n d e con la de un
a n ticu e rp o p ro d u c id o p o r un se r h um a no o una cé lu la h u m a n a o d e riva d a de una fu e n te no h um a na que u tiliza
re p e rto rio s de a n ticu e rp o s h u m a n o s u o tra s s e cu e n c ia s co d ifica n te s de a n ticu e rp o s h um anos . E s ta d e fin ic ió n de un
a n ticu e rp o h u m a n o e xc lu ye e sp e c ífica m e n te un a n ticu e rp o h u m a n iza d o q ue co m p re n d e re s id u o s de un ión a a n tíg e n o no h um anos .
El té rm in o a n ticu e rp o "q u im é rico " se re fie re a un a n ticu e rp o en el q ue una p arte de la ca d e n a p esad a y /o lige ra d eriva de una fu e n te o e sp e c ie p articu la r, m ie n tra s que el re s to de la ca d e n a p esad a y /o lige ra d eriva de una fu e n te o e sp e c ie d ife ren te .
Las e xp re s io n e s "a n tic u e rp o de lon g itu d com p le ta ", "a n ticu e rp o in tac to ", y "a n tic u e rp o co m p le to " se usan in d is tin ta m e n te en el p re se n te d o cu m e n to para re fe rirse a un a n ticu e rp o q ue tie n e una e s tru c tu ra su s ta n c ia lm e n te s im ila r a una e s tru c tu ra de a n ticu e rp o n a tu ra l o q ue tie n e c a d e n a s p e sa d a s q ue con tien en una re g ión Fc com o se d e fine en el p re se n te d ocum e n to .
La "c la se " de un a n ticu e rp o se re fie re al tip o de d o m in io co n s ta n te o re g ión co n s ta n te q ue tie n e su ca d e n a pesada. H ay c inco c lases p rin c ip a le s de a n ticu e rp o s : IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, y v a r ia s de e s ta s p ue de n d iv id irse a d e m á s en su b c la se s (iso tip os ), p o r e je m p lo , IgG 1, IgG 2, IgG 3, IgG 4, IgA 1 e IgA2. Los d o m in io s co n s ta n te s de la ca d e n a p esad a que co rre sp o n d e n a las d ife re n te s c lases de in m u n o g lo b u lin a s se d e n o m in a n a, 6 , £, y y M, re sp e c tiva m e n te .
Un "fra g m e n to de a n ticu e rp o " se re fie re a una m o lé cu la d is tin ta de un a n ticu e rp o in tac to q ue co m p re n d e una p arte de un a n ticu e rp o in ta c to q ue se une al a n tíg e n o al q ue se une el a n ticu e rp o in tacto . E je m p lo s de fra g m e n to s de a n ticu e rp o inc lu ye n , a u n q u e sin lim itac ió n , Fv, Fab, Fab', F ab '-S H , F (ab ')2 ; d ia cue rp os ; a n ticu e rp o s linea les ; m o lé cu la s de a n ticu e rp o m o n o ca te n a rio (p o r e je m p lo , scF v); y a n ticu e rp o s m u ltie sp e c ífico s fo rm a d o s a p a rtir de fra g m e n to s de a n ticue rp os . La d ig e s tió n con p ap a ína de los a n ticu e rp o s p rod u ce dos fra g m e n to s de un ión a a n tíg e n o idén ticos, d e n o m in a d o s fra g m e n to s "F ab", cad a uno con un so lo s itio de un ión a a n tíg e n o y un fra g m e n to "F c" re s idu a l, cuyo n o m b re re fle ja su cap ac id ad de c ris ta liz a r con fac ilida d . El tra ta m ie n to con p e p s in a p ro d u ce un fra g m e n to F (ab ')2 que tie n e d os s itio s de co m b in a c ió n con a n tíg e n o y to d a v ía p ue de e n tre c ru za rse con el a n tígeno .
El fra g m e n to "F a b " co n tie n e los d o m in io s va r ia b le s de la ca d e n a p e sad a y lige ra y ta m b ié n co n tie n e el d o m in io co n s ta n te de la ca d e n a lige ra y el p rim e r d o m in io co n s ta n te (C H 1 ) de la ca d e n a pesada. Los fra g m e n to s Fab ' d ifie re n de los fra g m e n to s Fab en la a d ic ión de uno s p ocos re s id u o s en el e x tre m o c a rb o x ílico de l d o m in io CH1 de la cad en a pesada, in c lu ye n d o una o m ás c is te ín a s de la re g ión de b isa g ra de l a n ticue rp o . F a b '-S H es la d e n o m in a c ió n en el p rese n te d o cu m e n to p ara Fab ' en q ue el re s idu o o re s id u o s de c is te ín a de los d o m in io s c o n s ta n te s portan un g rupo tio l libre. Los fra g m e n to s de a n ticu e rp o F (ab ')2 o r ig in a lm e n te se p rod u je ro n com o pare s de fra g m e n to s Fab ' q ue tien en c is te ín a s de b isa g ra e n tre e llos. T a m b ié n se con o ce n o tros a co p la m ie n to s q u ím ico s de fra g m e n to s de an ticue rp o .
"S e cu e n c ia fla n q u e a n te " o "F R " se re fie re a re s id u o s de l d o m in io v a r ia b le d is tin to s de los re s id u o s de la reg ión h ip e rva ria b le (H V R ). La FR de un d o m in io va r ia b le q ue co n s is te en g e n e ra l en cua tro d o m in io s FR: FR1, FR2, FR 3 y f R4. P o r con s ig u ie n te , las s e cu e n c ia s de H V R y FR a pa re ce n en g en e ra l en la s ig u ie n te se cu e n c ia en V H (o VL): F R 1 -H 1 (L 1 )-F R 2 -H 2 (L 2 )-F R 3 -H 3 (L 3)-F R 4.
"F v" es el fra g m e n to de a n ticu e rp o m ín im o q ue co n tie n e un s itio de un ión a a n tíg e n o com p le to . En un a sp ec to , una e sp e c ie de F v b ica te n a rio co n s is te en un d ím e ro de un d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a p e sad a y un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra en a so c ia c ió n fu e rte no cova le n te . En una e sp e c ie de F v m o n o ca te n a rio (scF v), un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p esad a y uno de la lige ra se p ueden u n ir c o va le n te m e n te m e d ia n te un c o n e c to r p ep tíd ico flex ib le , de m odo q ue la ca d e n a lige ra y p esad a se p uedan a so c ia r en una e s tru c tu ra "d im é rica " a n á lo g a a la de una e sp e c ie de F v b ica ten a rio . Es en e sta c o n fig u ra c ió n q ue las tre s H V R de cad a d o m in io va r ia b le in te ra c tú a n p ara d e fin ir un s itio de un ión a a n tíg e n o en la s u p e rfic ie del d ím e ro V H -V L . C o le c tiva m e n te , las se is H V R co n fie re n al a n ticu e rp o e sp e c ific id a d de un ión a an tíge no . S in e m ba rg o , inc lu so un so lo d o m in io va r ia b le (o la m itad de un F v q ue co m p re n d e so lo tre s H VR e sp e c ífica s para un a n tíg e n o ) tie n e la ca p a c id a d de re c o n o c e r y u n irse al an tíge no , a u n q u e con una a fin ida d m e n o r que el s itio de un ión com p le to .
La e xp re s ió n "reg ión v a r ia b le " o "d o m in io v a r ia b le " se re fie re al d o m in io de una ca d e n a p esad a o lige ra de a n ticu e rp o que e stá im p lica d o en la un ión de l a n ticu e rp o al a n tígeno . Los d o m in io s va r ia b le s de la ca d e n a p esad a y la ca d e n a lige ra (V H y VL, re sp e c tiva m e n te ) de un a n ticu e rp o n a tu ra l t ie n e n en g e n e ra l e s tru c tu ra s s im ila res , c o m p re n d ie n d o cad a d o m in io cua tro re g io n e s fla n q u e a n te s (F R ) y tre s re g io n e s h ip e rva r ia b le s (H V R ). (V éase , p o r e je m p lo , K in d t et al. K uby Im m u no log y, 6.a ed., W .H . F ree m an and C o., p ág ina 91 (2007 )). Un so lo d o m in io V H o V L p uede s e r su fic ie n te p ara co n fe rir e sp e c ific id a d de un ión a an tíge no . A d e m á s, los a n ticu e rp o s q ue se unen a un a n tíg e n o en p a rticu la r se p ue de n a is la r u sa nd o un d o m in io V H o V L de un a n ticu e rp o que se une al a n tíg e n o para c r ib a r una co le cc ió n de d o m in io s V L o V H co m p le m e n ta rio s , re sp e c tiva m e n te . V éa se , p o r e je m p lo , P o rto la n o et al., J. Im m uno l. 150 :880 -887 (1993 ); C la rkso n et al., N a tu re 352 :624 -628 (1991).
La e xp re s ió n "se une e sp e c ífica m e n te ", o s im ila res , s ig n ifica q ue un a n ticu e rp o o fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o, u o tra co n s tru cc ió n ta l com o un scFv, fo rm a un co m p le jo con un a n tíg e n o q ue es re la tiva m e n te e s ta b le en co n d ic io n e s fis io ló g ica s . La un ión e sp e c ífica p uede c a ra c te r iza rse p o r una co n s ta n te de d iso c ia c ió n en e q u ilib rio de al m e no s a p ro x im a d a m e n te 1 x 10'6 M o m e no s (p o r e je m p lo , una K d m e n o r ind ica una un ión m ás e s tre cha ). Los m é to do s para d e te rm in a r si d os m o lécu la s se unen e sp e c ífica m e n te son b ien co n o c id o s en la té c n ica e inc luyen , p o r e jem p lo , d iá lis is en e qu ilib rio , re so n a n c ia de p la sm ón su p e rfic ia l y s im ila res . Un a n ticu e rp o a is la d o q ue se une e sp e c ífica m e n te a c -M e t h u m a n o p uede m ostra r, sin e m ba rg o , re a c tiv id a d c ru za d a con o tro s a n tíg e n o s ta le s com o m o lé cu la s c -M e t de o tras e sp ec ie s.
"A fin id a d " se re fie re a la fu e rza de la su m a to ta l de in te ra cc io n e s no co va le n te s e n tre un so lo s itio de un ión de una m o lé cu la (p o r e je m p lo , un a n ticu e rp o ) y su co m p a ñ e ro de un ión (p o r e je m p lo , un an tíge no ). S a lvo q ue se ind iq ue de o tro m odo, com o se usa en el p re se n te d o cu m e n to , "a fin id a d de un ió n " se re fie re a la a fin id a d de un ión in trín se ca que re fle ja una in te ra cc ió n 1:1 e n tre m ie m b ro s de un p a r de un ión (p o r e je m p lo , a n ticu e rp o y a n tíge no ). La a fin ida d de una m o lécu la X p or su co m p a ñ e ro Y p uede e s ta r re p re se n ta d a en g e n e ra l p o r la co n s ta n te de d iso c ia c ió n (Kd). La a fin ida d p uede m e d irse m e d ia n te m é to d o s h a b itu a le s co n o c id o s en la té cn ica , in c lu ye n d o a q u e llo s d e sc rito s en el p rese n te d ocum e n to . En lo q ue s igu e se d esc rib e n a sp e c to s e sp e c ífico s ilu s tra tivo s y de e je m p lo para m e d ir la a fin ida d de unión.
U na "ca n tid a d e fica z" o "ca n tid a d te ra p é u tica m e n te e fica z" de un agen te , p o r e je m p lo , una fo rm u la c ió n fa rm a cé u tica , se re fie re a una ca n tid a d e ficaz, a las d o s ifica c io n e s y d u ra n te los p e rio d o s de tie m p o n ecesa rios , para c o n s e g u ir el re su lta d o te ra p é u tico o p ro filá c tico d esea do .
C om o se usa en el p re se n te d ocum e n to , el té rm in o "tra ta r" se usa para re fe rirse ta n to a la p reve nc ión de una e n fe rm e d a d o tra s to rn o co m o al tra ta m ie n to de a fe cc io n e s p re e x is te n te s o d ia g n o s tica d a s .
II. Métodos terapéuticos usando anticuerpos contra c-Met agonistas
A. c -M e t com o d ia n a te ra p é u tica
La p ro te ína re ce p to ra c -M e t, ta m b ié n co n o c id a co m o el re ce p to r del fa c to r de c re c im ie n to de h e p a to c ito s (H G F ), se e xp re sa en la su p e rfic ie de cé lu la s e p ite lia le s de m u ch os ó rga n os , in c lu ye n d o el h ígado , p áncreas , p rós ta ta , riñón, m ú scu lo y m é du la ósea. El lig a n d o de c -M e t es H G F. H G F a ctúa co m o fa c to r p le io tró p ico y c ito c ina , p ro m o v ie n d o la p ro life ra c ió n ce lu la r, su p e rv ive n c ia , m o tilid ad , d isp e rs ió n , d ife re n c ia c ió n y m o rfo g é n e s is en d ive rso s te jid o s del o rga n ism o . A d e m á s, p a re ce q ue H G F d e se m p e ñ a una fu n c ió n p ro te c to ra en v a r ia s e n fe rm e d a d e s , in c lu ye n d o c irro s is hepá tica , f ib ro s is p u lm o n a r y n e fro p a tía s p rog re s iva s . T ra s la un ión de H G F al d o m in io e x tra c e lu la r de c -M et, se fo s fo rila n m ú ltip le s res tos de tiro s in a d en tro de l d o m in io c ito p la sm á tico de c-M et. La fo s fo r ila c ió n de Y 1234 e Y 1235 a ctiva la a c tiv id a d tiro s in a c ina sa de c -M e t y la p o s te rio r fo s fo r ila c ió n de los re s id u o s Y 1349 e Y 1356 (M a tsu m o to et al., 2014, B iom e d ic in e s , 2: 275 -300 ). Los re s id u o s de tiro s in a fo s fo r ila d o s re c lu tan d ive rsa s m o lécu la s de se ñ a liza c ió n in tra ce lu la r q ue p rovo ca n a c tiv id a d e s b io ló g ica s ta le s com o p rom o c ió n de la m ito g é n e s is y la m ig ra c ió n , sup re s ió n de la m u erte c e lu la r e ind u cc ió n de m o rfo g é n e s is e p ite lia l. La in te ra cc ió n de H G F -c -M e t ha d e m o s tra d o d e s e m p e ñ a r una fun c ión en s is te m a s b io ló g ico s d ive rso s inc lu ye nd o , a u n q u e sin lim itac ió n el h ígado, riñón , p ie l, p án crea s , pu lm ón, el s is te m a n erv io so , co razón y s is te m a inm un ita rio .
En el p re se n te d o cu m e n to se d ivu lga n c o m p o s ic io n e s te ra p é u tica s y m é to d o s para a d m in is tra r a un su je to q ue lo n eces ite un p o lip é p tid o q ue se une e sp e c ífica m e n te a la p ro te ín a c -M e t y que a c tiva c -M e t de una m a ne ra q ue p uede se r s im ila r a la a c tiva c ió n p o r la un ión de HG F. A co n tin u a c ió n se p ro p o rc io n a n d a to s para m o s tra r q ue los p o lip é p tid o s que a c tiv a r c -M e t d ivu lg a d o s en el p re se n te d o cu m e n to son te ra p é u tica m e n te e fica ce s en la p reve nc ión o tra ta m ie n to de una d ive rs id a d de a fe cc io n e s in d ica tiva s de e s ta d o s pa to ló g ico s .
B. A n tic u e rp o s con tra c -M e t a g o n is ta s
Se g e n e ró una in m u n o g lo b u lin a q ue se une a la p ro te ína c -M e t co m o se d e sc rib e en la so lic itu d P C T n.° P C T /K R 2015 /007899. En re sum e n, se usó una co le cc ió n de p re se n ta c ió n en fa g o s de a n ticu e rp o s m o n o ca te n a rio s co m p le ta m e n te h u m a n iza d o s (scF v ) para b io se le cc ió n para s e le cc io n a r e sp e c ie s de scF v q ue se unían a c -M e t hum a no . El s cF v m e n c io n a d o en el p re se n te d o cu m e n to co m o scF v "1 E 4 " se id e n tificó y se d e m o stró que se une a c-M e t con a lta a fin id a d y tie n e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s p re se n ta d a en el p re se n te d o cu m e n to com o S E Q ID NO: 3. El s cF v 1E4 o va r ia n te s del m ism o p ue de usa rse para tra ta r a un su je to que lo n e ce s ite com o se d e sc rib e en m a yo r d e ta lle a con tin u a c ió n .
T a m b ié n se d e sc rib e en el d o cu m e n to P C T /K R 2015 /007899 la co n s tru cc ió n de una in m u n o g lo b u lin a de lon g itu d co m p le ta q ue tie n e el d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p esad a (S E Q ID NO: 1) y el d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra (S E Q ID NO: 2 ) de l s cF v 1E4, a s í com o el d o m in io co n s ta n te de la ca d e n a lige ra de IgG h um a na y los d o m in io s co n s ta n te s de la ca d e n a p e sa d a de IgG hum ana . El d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a p esad a co m p re n d e una CDR1 (S E Q ID NO: 5), una C d R2 (S E Q ID NO : 6 ) y una C D R 3 (S E Q ID NO: 7). El d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a lige ra co m p re n d e una CDR1 (S E Q ID NO : 8), una C d R2 (S E Q ID NO : 9) y una C D R 3 (S E Q ID NO : 10). Los e xp e rto s en la m a te ria co m p re n d e n que la e sp e c ific id a d de un ión a a n tíg e n o de una in m u n o g lo b u lin a se d e te rm in a en g ran m e d id a p o r las s e cu e n c ia s c D r . P o r co n s ig u ie n te , en a lg u n o s a sp ec tos , los m é to d o s d ivu lg a d o s en la p re se n te a b a rca n el tra ta m ie n to con un a n ticu e rp o q ue co m p re n d e un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p esad a que co m p re n d e las C D R de S E Q ID NO: 5, S E Q ID NO: 6 y S E Q ID NO: 7, y un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra q ue co m p re n d e las C D R de S E Q ID NO: 8 , S E Q ID NO: 9 y S E Q ID NO: 10. En a sp e c to s a d ic ion a le s , el a n ticu e rp o co m p re n d e una ca d e n a p esada de IgG q ue co m p re n d e S E Q ID NO: 1 y una ca d e n a lige ra de IgG q ue co m p re n d e S E Q ID NO: 2. Las s e cu e n c ia s de a m in o á c id o s de las c o n s tru cc io n e s 1E4 d e sc rita s a n te r io rm e n te se p rese n ta n en la ta b la 1.
Figure imgf000007_0001
El a n ticu e rp o 1E4 para su uso en los m é to d o s de tra ta m ie n to d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to se d e n o m in a o p c io n a lm e n te en el p re se n te d o cu m e n to com o un a n ticu e rp o a g o n is ta p o rque el a n ticu e rp o 1E4 ha d e m o stra d o in d u c ir la d isp e rs ió n en M D C K -2 (cé lu la s e p ite lia le s de riñón ca n in o de M a d in -D a rb y -2 ) e in d u c ir la fo s fo r ila c ió n de c-M e t (d o cu m e n to P C T /K R 2015 /007899 ).
El a n ticu e rp o 1E4 ta m b ié n ha d e m o s tra d o u n irse ta n to a c -M e t h u m a n o com o a c -M e t de ra tón. E sp e c ífica m e n te , se re a lizó a n á lis is B IA co re de l a n ticu e rp o 1 E 4 -Ig G (d o cu m e n to P C T /K R 2015 /007899 ) u sa nd o c -M E T ta n to h um a no com o de ratón. Los re su lta d o s de un ión se p rese n ta n a co n tin u a c ió n en la ta b la 2.
Tabla 2
Figure imgf000008_0001
P o r co n s ig u ie n te , en a lg u n o s a sp ec tos , se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to un m é to do para tra ta r a un su je to , que co m p re n d e a d m in is tra r al su je to un a n ticu e rp o que se une a una p ro te ín a c -M e t h u m a n a con una KD m e n o r de o igua l a a p ro x im a d a m e n te 3 x 10 '1° M o q ue se une a una p ro te ín a c -M e t de ra tón con una KD m e n o r de o igua l a a p ro x im a d a m e n te 7 x 10 '10 M, en el q ue el a n ticu e rp o es un a g o n is ta de la fu n c ió n de c-M et.
S a lvo q ue se ind iq ue e sp e c ífica m e n te de o tro m odo, el té rm in o "a n ticu e rp o ", com o se usa en el p re se n te d ocum e n to , d eb e e n te n d e rse q ue a b a rca m o lé cu la s de a n ticu e rp o q ue co m p re n d e n d os ca d e n a s p e sa d a s de in m u n o g lo b u lin a y d os ca d e n a s lige ra s de in m u n o g lo b u lin a (es dec ir, "m o lé cu la s de a n ticu e rp o co m p le to "), a s í com o fra g m e n to s de un ión a a n tíg e n o de las m ism as (p o r e je m p lo , el té rm in o "a n ticu e rp o ", com o se usa en el p re se n te d ocum e n to , d ebe e n te n d e rse que a b a rca p o lip é p tid o s q ue co m p re n d e n un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p esada y un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra ). P o r con s ig u ie n te , el té rm in o "a n ticu e rp o ", com o se usa en el p re se n te d ocum e n to , p uede a b a rca r la co n s tru cc ió n scF v u o tras p ro te ína s de in m u n o g lo b u lin a . Las e xp re s io n e s "p a rte de un ión a a n tíg e n o " de un a n ticue rp o , " fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o " de un a n ticu e rp o y s im ila res , co m o se usan en el p re se n te d ocum e n to , inc lu ye n cu a lq u ie r p o lip é p tid o o g lu co p ro te ín a de o rigen natura l, e n z im á tica m e n te ob ten ib le , s in té tica o g e n é tica m e n te m o d ifica d a q ue se una e sp e c ífica m e n te a un a n tíg e n o p ara fo rm a r un com p le jo . Las e xp re s io n e s "p a rte de un ión a a n tíg e n o " de un a n ticu e rp o o " fra g m e n to de a n ticue rp o ", com o se usan en el p re se n te d ocum e n to , se re fie ren a uno o m ás fra g m e n to s de un a n ticu e rp o q ue co n se rva n la ca p a c id a d de u n irse e sp e c ífica m e n te a la p ro te ín a c-M et. Un fra g m e n to de a n ticu e rp o p uede in c lu ir un fra g m e n to Fab, un fra g m e n to F (ab ')2 , un fra g m e n to Fv, un fra g m e n to dAb, un fra g m e n to q ue co n tie n e una C D R , o una C D R a is lada . P ue d en o b te n e rse fra g m e n to s de un ión a a n tíg e n o de un a n ticue rp o , p o r e je m p lo , de m o lé cu la s de a n ticu e rp o co m p le ta s u sa nd o c u a lq u ie r té c n ica co n ve n c io n a l a d e cu a d a ta l com o d ig e s tió n p ro te o lítica o té cn ica s de ing e n ie ría g e n é tica re co m b in a n te que im p lica n la m a n ip u la c ió n y e xp re s ió n de A D N q ue co d ifica d o m in io s v a r ia b le s y (o p c io n a lm e n te ) co n s ta n te s de a n ticue rp os . D ich o a D n se co n o ce y /o se p ue de a d q u ir ir fá c ilm e n te de, p o r e je m p lo , fu e n te s com e rc ia le s , co le cc io n e s de A D N (in c luyen do , p o r e jem p lo , fa g o te ca s de a n ticu e rp o s ) o p ue de s in te tiza rse . El A D N p uede se c u e n c ia rs e y m a n ip u la rse q u ím ica m e n te o u sa nd o té c n ica s de b io lo g ía m o lecu la r, p o r e je m p lo , para d is p o n e r uno o m ás d o m in io s va r ia b le s y /o co n s ta n te s en una co n fig u ra c ió n a de cu a d a , o para in tro d u c ir cod on es , c re a r re s id u o s de c is te ína , m o d ifica r, a ñ a d ir o e lim in a r a m in o á c id o s , etc.
E je m p lo s no lim ita n te s de fra g m e n to s de un ión a a n tíg e n o inc luyen : (i) fra g m e n to s Fab; (ii) fra g m e n to s F (ab ')2 ; (iii) fra g m e n to s Fd; (iv ) fra g m e n to s Fv; (v) m o lé cu la s F v m o n o ca te n a ria s (scFv); (v i) fra g m e n to s dAb; y (v ii) u n id a d e s de re co n o c im ie n to m ín im o q ue co n s is te n en los re s idu os a m in o a c íd ico s que im itan la reg ión h ip e rva r ia b le de un a n ticu e rp o (p o r e je m p lo , una reg ión d e te rm in a n te de la co m p le m e n ta rie d a d (C D R ) a is lada , ta l com o un p ép tid o C D R 3) o un p ép tid o F R 3 -C D R 3 -F R 4 re s tr ing ido . O tras m o lécu la s g e n o m a n ip u la d a s , ta le s com o a n ticu e rp o s e sp e c ífico s de dom in io , a n ticu e rp o s de un so lo d om in io , a n ticu e rp o s con d o m in io e lim ina do , a n ticu e rp o s q u im é ricos , a n ticu e rp o s in je rta d o s con c D r , d ia cue rp os , tr ia cu e rp o s , te tra cu e rp o s , m in icu e rpo s , n a n o cu e rp o s (p o r e je m p lo , n a n o cu e rp o s m o n o va le n te s , n a n o cu e rp o s b iva len tes , e tc.), a g e n te s in m u n o fa rm a cé u tico s m o d u la re s p e q u e ñ o s (S M IP ) y d om in io s IgN A R v a r ia b le s de tibu ró n , ta m b ié n se inc lu ye n d e n tro de la e xp re s ió n "fra g m e n to de un ión a a n tíge no ", com o se usan en el p re se n te d ocum e n to .
Un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de un a n ticu e rp o n o rm a lm e n te c o m p re n d e rá al m e no s un d o m in io va ria b le . El d o m in io v a r ia b le p uede se r de cu a lq u ie r ta m a ñ o o co m p o s ic ió n de a m in o á c id o s y en g e n e ra l co m p re n d e rá al m enos una C D R , q ue e stá a d ya ce n te o d en tro de l m arco de lec tu ra con una o m ás se cu e n c ia s fla n q u e a n te s . En fra g m e n to s de un ión a a n tíg e n o q ue tie n e n un d o m in io V h a so c ia d o a un d o m in io V l, los d o m in io s V h y V l p ueden s itu a rse uno con re spe cto al o tro en c u a lq u ie r d isp o s ic ió n a de cu a d a . P o r e je m p lo , la re g ión va r ia b le p ue de s e r d im é rica y c o n te n e r los d ím e ro s V h-V h, V h-V l o V l-V l. C om o a lte rn a tiva , el fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de un a n ticu e rp o p ue de c o n te n e r un d o m in io V h o V l m o no m érico .
C om o con las m o lé cu la s de a n ticu e rp o com p le ta s , los fra g m e n to s de un ión a a n tíg e n o p ueden se r m o n o e sp e c ífico s o m u ltie sp e c ífico s (p o r e je m p lo , b ie sp e c ífico s ). Un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o m u ltie sp e c ífico de un a n ticu e rp o n o rm a lm e n te co m p re n d e rá al m e no s dos d o m in io s v a r ia b le s d ife re n te s , en los q ue cada d o m in io va r ia b le p uede un irse e sp e c ífica m e n te a un a n tíg e n o d ife re n te o a un e p íto p o d ife re n te en el m ism o an tíge no . C u a lq u ie r fo rm a to de a n ticu e rp o m u ltie sp e c ífico , in c lu ye n d o los fo rm a to s de a n ticu e rp o b ie sp e c ífico ilu s tra tivo s d ivu lg a d o s en el p re se n te d ocum e n to , p ue de a d a p ta rse para su uso en el co n te x to de un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o de un a n ticu e rp o d escrito en el p re se n te d o cu m e n to u sa n d o té c n ica s ru tin a ria s d isp o n ib le s en la técn ica .
En d e te rm in a d o s a sp ec tos , se co n te m p la n va r ia n te s de se cu e n c ia de a m in o á c id o s de los a n ticu e rp o s d e sc rito s en el p rese n te d ocum e n to . P o r e je m p lo , p uede s e r d e se a b le m e jo ra r la a fin ida d de un ión y /u o tras p ro p ie d a d e s b io ló g ica s del a n ticue rp o . P ueden p re p a ra rse v a r ia n te s de se cu e n c ia de a m in o á c id o s de un a n ticu e rp o in tro d u c ie n d o m o d ifica c io n e s a p ro p ia d a s en la se cu e n c ia de n u c le ó tid o s que co d ifica el a n ticu e rp o o m e d ia n te s ín te s is pep tíd ica . D ich as m o d ifica c io n e s inc lu ye n , p o r e je m p lo , e lim in a c io n e s de y /o in se rc io n e s en y /o s u s titu c io n e s de re s id u o s d en tro de las s e cu e n c ia s de a m in o á c id o s del a n ticue rp o . En a lg u n o s a sp ec tos , un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t com o se usa de a cu e rd o con los m é to d o s d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to co m p re n d e una se cu e n c ia del d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p e sa d a (V H ) que tie n e al m e no s un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de ide n tid ad de se cu e n c ia con la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID NO: 1. En d e te rm in a d o s a sp ec tos , una se cu e n c ia de V H q ue tie n e al m e no s un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de ide n tid ad con S E Q ID NO: 1 con tie n e s u s titu c io n e s (p o r e je m p lo , s u s titu c io n e s co n se rva tiva s ), in se rc io n e s o e lim in a c io n e s con re spe cto a la se cu e n c ia de re fe ren c ia , pero un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t q ue co m p re n d e esa se cu e n c ia co n se rva la ca p a c id a d de u n irse a c -M et. En d e te rm in a d o s a sp ec tos , las su s titu c io n e s , in se rc io n e s o e lim in a c io n e s se p rod u ce n en re g io n e s fu e ra de las C D R (es dec ir, en las re g io n e s fla n q u e a n te s ). O p c io n a lm e n te , el a n ticu e rp o a n ti-c -M e t d e sc rito q ue co m p re n d e la se cu e n c ia de V H inc lu ye m o d ifica c io n e s p o s tra d u cc io n a le s de e sa secu en c ia .
En o tro a sp ec to , un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t com o se usa de a cu e rd o con los m é to d o s d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to co m p re n d e un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra (V L ) q ue tie n e al m e no s un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de ide n tid ad de se cu e n c ia con la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID NO : 2. En d e te rm in a d o s a sp ec tos , una se cu e n c ia de V L que tie n e al m e no s un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de ide n tid ad con S E Q ID NO: 2 co n tie n e s u s titu c io n e s (p o r e je m p lo , su s titu c io n e s co n se rva tiva s ), in se rc io n e s o e lim in a c io n e s con re sp e c to a la se cu e n c ia de re fe ren c ia , pero un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t q ue co m p re n d e e sa se cu e n c ia co n se rva la ca p a c id a d de u n irse a c -M et. En d e te rm in a d o s a sp ec tos , las sus titu c io n e s , in se rc io n e s o e lim in a c io n e s se p rod u ce n en re g io n e s fu e ra de las C D R (es dec ir, en las re g io n e s fla n q u e a n te s ). O p c io n a lm e n te , el a n ticu e rp o a n ti-c -M e t d e sc rito q ue co m p re n d e la se cu e n c ia de V L inc lu ye m o d ifica c io n e s p o s tra d u cc io n a le s de esa secu en cia .
En a lg u n o s a sp ec tos , un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t co m o se usa de a cu e rd o con los m é to do s d e sc rito s en el p rese n te d o cu m e n to co m p re n d e una se cu e n c ia de V H que tie n e al m e no s un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de ide n tid a d con S E Q ID NO: 1 y una se cu e n c ia de V L q ue tie n e al m e no s un 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % o 99 % de id e n tid a d con S E Q ID NO: 2, en el q ue el a n ticu e rp o se une e sp e c ífica m e n te a una p ro te ín a c -M e t q ue tie n e la se cu e n c ia de S E Q ID NO : 13. En o tro s a sp ec tos , el a n ticu e rp o se une a la p ro te ína c -M e t que tie n e la se cu e n c ia de S E Q ID NO: 13 con K d m e n o r de o igua l a a p ro x im a d a m e n te 3 x 10 '10 M. En o tros a sp e c to s m ás, el a n ticu e rp o se une a la p ro te ín a c -M e t q ue tie n e la se cu e n c ia de S E Q ID NO: 15 con K d m e n o r de o igua l a a p ro x im a d a m e n te 7 x 10 '10 M.
P uede re a liza rse c u a lq u ie r co m b in a c ió n de e lim ina c ió n , inse rc ió n y su s titu c ió n para lle g a r a la co n s tru cc ió n fina l, s ie m p re q ue la co n s tru cc ió n fina l p osea las c a ra c te rís tica s d esea da s , p o r e je m p lo , un ión a antígeno .
En d e te rm in a d o s a sp ec tos , se d e sc rib e n en el p re se n te d o cu m e n to va r ia n te s de a n ticu e rp o q ue tie n e n una o m ás su s titu c io n e s a m in o a c íd ica s . S itios de in te ré s para m u ta g é n e s is de sus titu c ió n inc lu ye n las re g io n e s va ria b le s , in c lu ye n d o las re g io n e s fla n q u e a n te s . S e m u es tra n s u s titu c io n e s c o n se rva tiva s en la ta b la 3 ba jo el e n ca b e za d o de "su s titu c io n e s co n se rva tiva s". S e p ro p o rc io n a n ca m b io s m ás su s ta n c ia le s en la ta b la 3 ba jo el e n ca b e za d o "su s titu c io n e s p re fe rid as", y co m o se d e sc rib e n a d ic io n a lm e n te a co n tin u a c ió n en re fe re n c ia a las c lases de las ca d e n a s la te ra le s de a m in o á c id o . Las su s titu c io n e s a m in o a c íd ica s se p ue de n in tro d u c ir en un a n ticu e rp o de in terés, y los p ro d u c to s se p ueden c rib a r p o r una a c tiv id a d d esea da , p o r e je m p lo , un ión a a n tíg e n o co n se rva d a /m e jo ra d a , in m u n o g e n ia re d u c id a o A D C C o C D C m e jo rada .
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co n tin u a c ió n
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Los a m in o á c id o s p ueden a g ru p a rse de a cu e rd o con las p ro p ie d a d e s co m u n e s de la ca d e n a la tera l:
(1 ) h id ró fob os : N o rle u c in a , M et, A la , V a l, Leu, Ile;
(2 ) h id ró filo s n eu tros : C ys, Ser, Thr, A sn , G ln;
(3 ) ác idos : A sp , G lu;
(4 ) bás icos : H is, Lys, A rg ;
(5 ) re s id u o s q ue in fluyen en la o rie n ta c ió n de la cad en a : G ly, Pro;
(6 ) a rom á ticos : T rp, Tyr, Phe.
Las s u s titu c io n e s no co n se rva tiva s im p lica rá n el in te rca m b io de un m ie m b ro de una de e s ta s c lases p o r o tra c lase.
En d e te rm in a d o s a sp ec tos , un a n ticu e rp o d e sc rito en el p rese n te d o cu m e n to se a lte ra para a u m e n ta r o d is m in u ir el g rad o de g lu co s ila c ió n del a n ticue rp o . La a d ic ión o e lim in a c ió n de s itio s de g lu co s ila c ió n a un a n ticu e rp o p uede co n se g u irse co n ve n ie n te m e n te a lte ra n d o la se cu e n c ia de a m in o á c id o s , de m a ne ra q ue se c ree o e lim in e m ás de un s itio de g lu co s ila c ió n .
C u a n d o el a n ticu e rp o co m p re n d e una re g ión Fc, p uede a lte ra rse el ca rb o h id ra to u n ido a la m ism a. El o lig o sa cá rid o p ue de in c lu ir d ive rso s ca rb o h id ra to s , p o r e je m p lo , m a no sa , N -ace til g lu co sa m in a (G lcN A c), g a la c to sa y á c id o s iá lico , a s í co m o fu co sa u n ida a una G lcN A c en el " ta llo " de la e s tru c tu ra de o lig o sa cá rid o b ia n te na ria . En a lg u n o s aspectos , p ueden re a liza rse m o d ifica c io n e s del o lig o sa cá rid o en un a n ticu e rp o d e sc rito en el p re se n te d o cu m e n to para c re a r va r ia n te s de a n ticu e rp o con d e te rm in a d a s p ro p ie d a d e s m e jo rad as . S e d esc ribe n a d ic io n a lm e n te va r ia n te s de a n ticu e rp o en el p re se n te d o cu m e n to con o lig o sa cá rid o s b ise ca d os , p o r e je m p lo , en las q ue se b ise cc io n a un o lig o sa cá rid o b ia n te n a rio u n ido a la reg ión Fc de l a n ticu e rp o m e d ia n te G lcN A c. D ich as va r ia n te s de a n ticu e rp o p ueden te n e r una fu co s ila c ió n re d u c id a y /o una fu n c ió n A D C C m e jo rad a . T a m b ié n se d esc ribe n en el p re se n te d o cu m e n to v a r ia n te s de a n ticu e rp o con al m e no s un re s idu o de g a la c to sa en el o lig o sa cá rid o u n id o a la re g ión Fc.
C. G e n e ra c ió n de in m u n o g lo b u lin a s 1E4 p ara uso te ra p é u tico
La g e n e ra c ió n de un a n ticu e rp o IgG 1E4 h u m a n o de lon g itu d co m p le ta a p a rtir de los d o m in io s v a r ia b le s de la ca d e n a p esad a y lige ra de una co n s tru cc ió n de scF v (S E Q ID NO: 3) se h ace u sa nd o m é to d o s y c o m p o s ic io n e s ru tina ria s. La co n s tru cc ió n de l a n ticu e rp o 1E4 h u m a n o u sado en los m é to do s d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to se d e sc rib e en el e je m p lo 1 a co n tin u a c ió n y en el d o cu m e n to P C T /K R 2015 /007899. Los á c id o s n u c le ico s q ue cod ifica n d o m in io s v a r ia b le s de l a n ticu e rp o 1E4 com o se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to (S E Q ID NO: 11 y 12 y va r ia n te s de las m ism a s) p ueden u sa rse p ara g e n e ra r a n ticu e rp o s de lon g itu d co m p le ta u sa nd o m é to d o s ru tina rio s . En a lg u n o s a sp ec tos , un á c id o n uc le ico q ue co d ifica una ca d e n a p esad a de un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t de la p re se n te d ivu lg a c ió n p uede c o m p re n d e r una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s q ue co d ifica un d o m in io V H de la d ivu lg a c ió n (S E Q ID NO: 11) un ida en el m ism o m arco de lec tu ra a una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s q ue co d ifica un d o m in io co n s ta n te de la ca d e n a p esad a de c u a lq u ie r fuen te . A s im ism o , una m o lé cu la de á c ido n u c le ico q ue co d ifica una ca d e n a lige ra de un a n ticu e rp o a n tic -M e t de la p re se n te d ivu lg a c ió n p ue de c o m p re n d e r una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s q ue co d ifica un d o m in io V L de la d ivu lg a c ió n (S E Q ID NO: 12) u n ida en el m ism o m arco de lec tu ra a una se cu e n c ia de n u c le ó tid o s q ue co d ifica un d o m in io co n s ta n te de la ca d e n a lige ra de c u a lq u ie r fuente .
En un a sp e c to a d ic io n a l de la d ivu lga c ió n , las m o lé cu la s de á c id o n u c le ico q ue cod ifica n el d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p e sad a (V H ) y /o lige ra (V L ) se "co n v ie rte n " en g en es de a n ticu e rp o de lon g itu d com p le ta . En un a sp ec to , las m o lécu la s de á c id o n u c le ico q ue cod ifica n los d o m in io s V H o V L se co n v ie rte n en g en es de a n ticu e rp o de lon g itu d co m p le ta m e d ia n te inse rc ión en un v e c to r de e xp re s ió n q ue ya co d ifica los d o m in io s co n s ta n te s de la ca d e n a p esad a (C H ) o el d o m in io co n s ta n te de la ca d e n a lige ra (C L), re sp e c tiva m e n te , de m o do q ue el se g m e n to V H e sté u n ido de fo rm a fu n c io n a l al uno o m ás s e g m e n to s CH d en tro de l v e c to r y /o el se g m e n to V L está u n ido de fo rm a fu n c io n a l al se g m e n to C L d en tro de l vec to r. En o tro a sp ec to , las m o lé cu la s de á c ido n uc le ico q ue cod ifica n los d o m in io s V H y/o V L se co n v ie rte n en g e n e s de a n ticu e rp o de lon g itu d co m p le ta p o r liga m ie n to , p o r e je m p lo , fijac ión , de una m o lécu la de á c id o n u c le ico q ue co d ifica un d o m in io V H y /o V L a una m o lé cu la de á c id o n u c le ico q ue co d ifica un d o m in io CH y/o C L u sa n d o té c n ica s co n v e n c io n a le s de b io lo g ía m o lecu la r. Las s e cu e n c ia s de á c id o n uc le ico de g e n e s de l d o m in io co n s ta n te de in m u n o g lo b u lin a de la ca d e n a p esad a y lige ra h u m a n a son co n o c id a s en la técn ica . V éa se , p o r e jem p lo , K ab a t et al., S e q u e n ce s o f P ro te in s o f Im m u n o lo g ica l In te rest, 5.a ed., publ. N IH n.° 91 -3242 , 1991. Las m o lé cu la s de ácido n uc le ico q ue cod ifica n las ca d e n a s p esad a y/o lige ra de lon g itu d co m p le ta d e sp u é s p ue de n e xp re sa rse a p a rtir de una cé lu la en q ue se han in trod uc ido y p uede a is la rse el a n ticu e rp o an ti-c -M e t.
Las m o lé cu la s de á c ido n uc le ico p ueden u sa rse para e xp re sa r de fo rm a re co m b in a n te g ra n d e s c a n tid a d e s de a n ticu e rp o s a n ti-c -M e t. Las m o lé cu la s de á c ido n uc le ico ta m b ié n p ueden u sa rse para p ro d u c ir a n ticu e rp o s q u im é ricos , a n ticu e rp o s b ie spe c íficos , a n ticu e rp o s m o n o ca te n a rio s , in m u n o a d h e s in a s , d ia cue rp os , a n ticu e rp o s m u ta d o s y d e riva d o s de a n ticue rp o , co m o se d e sc rib e a d ic io n a lm e n te a n te rio rm e n te .
A s im ism o , en a lg u n o s a sp e c to s , los p o lin u c le ó tid o s que co d ifica n el d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p esad a (S E Q ID NO: 1) y el d om in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra (S E Q ID NO: 2) p ueden u n irse m e d ia n te un p o lin u c le ó tid o que co d ifica un c o n e c to r (p o r e je m p lo , S E Q ID NO: 4), c lo n a rse en un v e c to r de e xp re s ió n y e xp re sa rse a p a rtir de una cé lu la en que se ha in tro d u c id o el v e c to r para p ro d u c ir una co n s tru cc ió n de s cF v para su uso en los m é to d o s de tra ta m ie n to d e sc rito s en el p re se n te d ocum e n to .
D. C ica triza c ió n de h e rid as
En un a sp ec to , se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to un m é to do p ara p ro m o ve r la c ica triza c ió n de h e rid as en un su je to que lo n eces ite , que co m p re n d e a d m in is tra r al su je to una can tida d te ra p é u tica m e n te e fica z de un p o lip é p tid o q ue co m p re n d e los d o m in io s va r ia b le s de la ca d e n a p e sad a y lige ra de l a n ticu e rp o 1E4 co m o se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to . C om o se d e sc rib e en el e je m p lo 2 a co n tin u a c ió n , la a d m in is tra c ió n de a n ticu e rp o 1E4 a las h e rid as de un ra tón p rovo có un tie m p o de c ica triza c ió n m ás ráp ido de las h e rid as en co m p a ra c ió n con la c ica triza c ió n de h e rid as en ra ton es a los q ue no se les a d m in is tró el a n ticu e rp o 1E4. C om o se m u e s tra en la fig u ra 1, la a d m in is tra c ió n tó p ica a una h e rida de la p ie l en un ra tón de 3 |jg , 6 |jg o 12 |jg de a n ticu e rp o 1E4 fue e fica z en re d u c ir el á rea h e rida en al m e no s un 20 % en co m p a ra c ió n con la c ica triza c ió n en a u se n c ia de in m u n o g lo b u lin a 1E4. Un e xp e rto en la m a te ria e n te n d e ría de e se m odo que la a d m in is tra c ió n de una m o lé cu la de in m u n o g lo b u lin a que co m p re n d e los d o m in io s de un ión a c -M e t de 1E4 se ría e fica z en p ro m o v e r la c ica triza c ió n de h e rid as en un su je to .
Se ha d e m o s tra d o que la c ica triza c ió n de h e rid as re q u ie re la ru ta de H G F -c-M e t. P ue d en p ro d u c irse h e rid as a p a rtir de m u ch as fue n te s , in c lu ye n d o una ro tu ra en la p ie l u o tro te jid o u ó rga n o , ta l com o lace ra c io n e s , cortes , ra spa du ra s , a m po llas , a b ra s ion es , q ue m a d u ra s , ú lce ra s d ia b é ticas , ú lce ra s de d ecúb ito , h e rid as q u irú rg ica s y o tra s heridas . T o d a s las heridas, in d e p e n d ie n te m e n te de su na tu ra le za , e xp e rim e n ta n un p roce so s im ila r de c ica triza c ió n de heridas . La c ica triza c ió n de h e rid as se p ro d u ce en cu a tro fa se s d is tin ta s . La p rim e ra fa se es co a g u la c ió n de la sa n g re (h e m o s ta s ia ) cu a n d o las p la q u e ta s llegan en el s itio de la herida , d on de se a c tivan p ara p ro m o ve r la co a g u la c ió n . La se g u n d a fase, la fa se in fla m a to ria , se ca ra c te r iza p o r in fla m ac ió n en el s itio de l tra u m a tism o . E sta fa se es c ru c ia l para la c ica triza c ió n e im p lica a m p lia m ig ra c ió n ce lu la r. La te rce ra fa se de c ica triza c ió n de h e rid as es la fa se p ro life ra tiva , q ue e stá m a rca d a p o r e p ite lia liza c ió n , a n g io g é n e s is , fo rm a c ió n de te jid o g ra n u la d o y d e p ó s ito de co lá ge no . La a n g io g é n e s is , q ue im p lica fo rm a c ió n de n u e vo s cap ila res , se usa p ara su m in is tra r n u trie n te s y m a n te n e r la g ra n u la c ió n . S in la fo rm a c ió n de n u e vo s c a p ila re s en la herida , los n u trie n te s re q u e rid o s no log ran a lc a n z a r la herida , d a n d o com o re su lta d o una h e rida c ró n ica m e n te sin curar. La cua rta y ú ltim a fa se de c ica triza c ió n de h e rid a s es la fa se de m a du ra c ió n , en la q ue los fib ro b la s to s se d ife re n c ia n en co lá ge no . Las c o m p o s ic io n e s y m é to d o s de e sta d ivu lg a c ió n son e fica ce s en una o m ás fase s d is tin ta s de la c ica triza c ió n de heridas . En un a sp ec to , las c o m p o s ic io n e s y m é to d o s de la p re se n te d ivu lg a c ió n d e se n ca d e n a n la se cu e n c ia de c ica triza c ió n a p ro p ia d a re q u e rid a en to d a s las fo rm a s de h e rid as y, p o r lo tan to , e v itan las re a cc io n e s q u ím ica s d e s tru c tiva s n o rm a lm e n te o ca s io n a d a s p o r una herida .
En un a sp ec to , el a n ticu e rp o 1E4 de la d ivu lg a c ió n es e fica z con tra q u e m a d u ra s . H ay d ive rso s tip o s de q ue m ad uras , ta le s com o q u e m a d u ra s ind u c id a s té rm ica m e n te , q u e m a d u ra s co n tro la d a s ind u c id a s té rm ica m e n te , q u e m a d u ra s q u ím icas , q u e m a d u ra s p o r ra d ia c ión , q u e m a d u ra s e lé c tricas , q u e m a d u ra s p o r h ie lo o q u e m a d u ra s p ro vo ca d a s por e xp o s ic ió n a ilum ina c ió n , que p ueden e v ita rse y /o tra ta rs e con las c o m p o s ic io n e s y m é to do s de la p rese n te d ivu lga c ió n . H ay d ive rso s g ra d o s de q u e m a d u ra s , in c lu ye n d o las q ue son q u e m a d u ra s de 1.er g rado , 2.° g rado , 3.er g rad o o 4.° g rad o o c u a lq u ie r co m b in a c ió n de las m ism as.
En o tro a sp ec to , las co m p o s ic io n e s y m é to d o s de la p re se n te d ivu lg a c ió n e v itan d ire c ta o in d ire c ta m e n te q ue los m ic ro o rg a n ism o s inva da n el s itio de h erid a p ro m o v ie n d o la c ica triza c ió n de heridas . P o r lo tan to , los p a c ie n te s ta m b ié n su frirán m e no s p o rq u e p e rm a n e ce n lib res de d ive rsa s in fe cc io n e s h a b itu a lm e n te a so c ia d a s con una h e rida norm a l. La co m p o s ic ió n , p o r tan to , e v ita q ue le s io n e s de h e rid as p rog re sen a m a yo r g rave da d . El uso de c o m p o s ic io n e s y m é to d o s de la p rese n te d ivu lg a c ió n evita , tra ta y /o m e jo ra el d añ o en el te jid o q ue es el a m b ie n te idea l para m ic ro o rg a n ism o s en la m a yo ría de heridas . La ca p a c id a d de in te rfe r ir con el c ic lo de in fe cc ió n p uede d e te n e r el p roce so de e n fe rm e d a d . La ta sa re d u c id a de in fe cc ió n se tra d u ce en g ra ve d a d re d u c id a de la e n fe rm e d a d , tra s to rn o s o d e fo rm id a d e s que son co n se c u e n c ia s n o rm a le s de una herida.
O tras a fe cc io n e s re la c io n a d a s con h e rid as o ú lce ra s que p ue de n tra ta rs e sa tis fa c to ria m e n te o e v ita rse de a cu e rd o con la d ivu lg a c ió n son, a m odo de e je m p lo y no de lim itac ió n , h e rid a s p o r ca rbu nco , té ta n o s , g a n g re n a g aseo sa , e sca rla tin a , e ris ipe las , s ico s is de la barba , fo licu litis , im p é tigo co n ta g io so o im p é tig o e s ta filo có c ico , etc.
En la p rác tica del m é to do de tra ta m ie n to o uso de la p re se n te d ivu lg a c ió n , una ca n tid a d te ra p é u tica m e n te e fica z de una in m u n o g lo b u lin a con tra c -M e t a g o n is ta se a d m in is tra a un su je to q ue n ece s ite c ica triza c ió n de heridas . La in m u n o g lo b u lin a p uede a d m in is tra rse de a cu e rd o con el m é to do de la p re se n te d ivu lg a c ió n en so lita r io o en co m b in a c ió n con o tros tra ta m ie n to s con oc id os . C u a n d o se c o a d m in is tra con uno o m á s tra ta m ie n to s d is tin to s , la in m u n o g lo b u lin a p uede a d m in is tra rse s im u ltá n e a m e n te con el o tro u o tros tra ta m ie n to s , o s e cu e n c ia lm e n te . Si se a d m in is tra s e cu e n c ia lm e n te , el m é d ico re sp o n sa b le d e c id irá sob re la se cu e n c ia a p ro p ia d a de a d m in is tra c ió n , que p ue de s e r a n tes o d e sp u é s de un s e g u n d o tra ta m ie n to .
E. P re ve n c ió n o tra ta m ie n to de d año en te jid o rena l
En un a sp ec to , se d esc rib e n en el p re se n te d o cu m e n to m é to d o s para e v ita r o tra ta r d año en te jid o renal, que co m p re n d e n a d m in is tra r a un su je to q ue lo n eces ite un p o lip é p tid o q ue co m p re n d e los d o m in io s va r ia b le s del a n ticu e rp o 1E4 com o se d e sc rib e en el p re se n te d ocum e n to . Se re a liza ro n e xp e rim e n to s com o se d e sc rib e en el e je m p lo 3 a co n tin u a c ió n para m o s tra r q ue la a d m in is tra c ió n del a n ticu e rp o 1E4 a un a n im a l reduce el d año a te jid o rena l q ue e stá p ro vo ca d o p o r la a d m in is tra c ió n al a n im a l de l fá rm a co q u im io te rá p ico a d ria m ic in a (A D R ). E sp e c ífica m e n te , se tra ta ro n ra to n e s B A L B /c con 2 m g/kg , 5 m g/kg o 10 m g/kg de a n ticu e rp o 1E4 m e d ia n te in ye cc io n e s en la ve n a de la co la . El d ía s igu ien te , se ind u jo les ión rena l m e d ia n te una so la inye cc ió n en la co la de 15 m g /kg de A D R . E n to n ce s a los ra ton es se les inye ctó p o r v ía in tra ve n o sa 2 m g/kg , 5 m g/kg o 10 m g/kg de a n ticu e rp o 1E4 2 y 5 d ías d e sp u é s de la inye cc ió n de A D R . C om o m u es tra n los d a tos en las fig u ra s 2 A y 2B, d os is de 5 m g /kg o m ás de in m u n o g lo b u lin a 1E4 son e fica ce s en re d u c ir los n ive les a u m e n ta d o s de BU N (n itró g e n o de la u rea en sa n g re ) y c re a tin in a . N ive les c re c ie n te s de BU N y c re a tin in a en la sa n g re son in d ica tivo s de m al fu n c io n a m ie n to y d año renal. Las c o n c e n tra c io n e s p la sm á tica s de c re a tin in a y u rea (que d e p e n d e n m u ch o de la filtra c ió n g lo m e ru la r) e m p ie za n una e le va c ió n no linea l según d ism in u ye la fu n c ió n renal. Los c a m b io s en las c o n c e n tra c io n e s de c re a tin in a y u rea son m ín im os en un p rinc ip io ; d e sp u é s los n ive les a u m e n ta n rá p id a m e n te y se a so c ia n h a b itu a lm e n te con m a n ife s ta c io n e s s is té m icas .
D e sp u é s de la a d m in is tra c ió n de A D R , los a n im a le s tra ta d o s con P B S e xp e rim e n ta b a n so la m e n te a u m e n to s en BUN y ta m b ié n c re a tin in a (fig u ra s 2 A y 2B, "P B S " en co m p a ra c ió n a n im a le s "v írg e n e s " q ue no se tra ta ro n con A D R o a n ticue rp o ). S in e m ba rg o , la a d m in is tra c ió n de 5 m g /kg o 10 m g /kg de a n ticu e rp o 1E4 p rovo có n ive le s d ism in u id o s de BUN y ta m b ié n c re a tin in a en co m p a ra c ió n con n ive les en a n im a le s no tra ta d o s con a n ticu e rp o 1E4. A d e m á s, se o b se rvó re d u cc ió n s ig n ifica tiva de les ión en te jid o rena l en p rese nc ia de al m e no s 5 m g/kg de in m u n o g lo b u lin a 1E4 m e d ia n te a n á lis is h is to ló g ico (vé a se el e je m p lo 3).
La fib ro s is rena l re su lta de una a cu m u la c ió n e xce s iva de m a triz e x tra c e lu la r que se p ro d u ce en cas i c u a lq u ie r tip o de n e fro pa tía c ró n ica y f in a lm e n te da lu g a r a in su fic ie n c ia rena l en fa se fina l. A lg u n o s cre en que la fib ro s is rena l es un p roce so fra ca sa d o de c ica triza c ió n de h e rid as de l te jid o re na l d e sp u é s de les ión c ró n ica m a n ten id a . El e je m p lo 4 a co n tin u a c ió n d e sc rib e el uso de un m o d e lo a n im a l p a ra fib ro s is rena l y m u es tra q ue la a d m in is tra c ió n de l a n ticu e rp o 1E4 d ism in u ía el g rad o de le s io n e s fib ró tica s en el te jid o renal. P o r con s ig u ie n te , en a lg u n o s a sp e c to s es un m é to do para tra ta r o e v ita r d año en te jid o renal, que co m p re n d e a d m in is tra r una in m u n o g lo b u lin a 1E4.
Los m é to d o s y c o m p o s ic io n e s de la p re se n te d ivu lg a c ió n son a p lica b le s al tra ta m ie n to y p reve nc ión de d ive rsa s e n fe rm e d a d e s re na les y le s io n e s rena les , ta n to p rim a ria s co m o secu n d a ria s . Las e n fe rm e d a d e s re n a le s se cu n d a ria s inc lu ye n a q u e lla s e n fe rm e d a d e s re su lta n te s de una a fe cc ió n p re e x is te n te ta l com o d ia b e te s o h ip e rten s ió n . Los m é to do s y c o m p o s ic io n e s d e sc rita s en el p re se n te d o cu m e n to e n cu e n tra n a p lica c ió n p a rticu la rm e n te en e n fe rm e d a d e s in fla m a to ria s o a u to in m u n ita r ia s c ró n ica s c a ra c te r iza d a s p o r ca m b io s p a to ló g ico s de n e fro pa tía tu b u lo in te rs tic ia l o g lo m e ru lo n e fro p a tía y p o r p ro te inu ria . Las e n fe rm e d a d e s inc lu ye n , a u n q u e sin lim itac ión , g lo m e ru lo e sc le ro s is se g m e n ta r ia foca l, g lo m e ru lo n e fritis , e n fe rm e d a d rena l d ia b é tica , e n fe rm e d a d rena l h ip e rten s iva , in su fic ie n c ia renal, e n fe rm e d a d rena l en fa se fina l y a fe cc io n e s re lac io na da s.
A d ic io n a lm e n te , la in su fic ie n c ia rena l c ró n ica p uede s e r el re su lta d o de c u a lq u ie r ca u sa p rinc ip a l de d is fu n c ió n renal. La ca u sa m ás com ún de e n fe rm e d a d rena l ne fa se fin a l es n e fro p a tía d ia b é tica , se g u id a de n e fro a n g io e sc le ro s is h ip e rte n s iva y d ive rsa s g lo m e ru lo p a tía s p rim a ria s y secu n d a ria s . O tras ca u sa s inc luyen , a u n q u e sin lim itac ión , g lo m e ru lo p a tía s , p o r e je m p lo , n e fro p a tía de IgA, g lo m e ru lo e sc le ro s is foca l, n e fro p a tía m e m b ra n o sa , g lo m e ru lo n e fr it is m e m b ra n o p ro life ra tiva , g lo m e ru lo n e fr it is s e m ilu n a r id io p á tica , d ia b e te s mellitus, g lo m e ru lo n e fr it is p os in fe cc io sa , lupus e rite m a to so s is té m ico , g ra n u lo m a to s is de W e g e n e r, s ín d ro m e u ré m ico hem o lítico , a m ilo id os is ; n e fro p a tía s tu b u lo in te rs tic ia le s c ró n icas ; n e fro p a tía s h ere d ita ria s , p o r e je m p lo , e n fe rm e d a d rena l p o liq u ís tica , s ín d ro m e de A lpo rt, e n fe rm e d a d q u ís tica m edu la r, s ín d ro m e o n ico rro tu lia n o ; h ip e rten s ió n , p o r e je m p lo , n e fro a n g io e sc le ro s is , g lo m e ru lo e sc le ro s is m a ligna ; e n fe rm e d a d m a cro v a sc u la r renal; y u ro p a tía o bs truc tiva , p o r e je m p lo , o b s tru cc ió n u re te ra l, re flu jo v e s ico u re te ra l, h ip e rp la s ia b e n ig n a de p rós ta ta ; y s im ila res .
En la p rác tica del m é to do de tra ta m ie n to o uso de la p re se n te d ivu lg a c ió n , una ca n tid a d te ra p é u tica m e n te e fica z de una in m u n o g lo b u lin a con tra c -M e t a g o n is ta se a d m in is tra a un su je to a fe c ta d o con una e n fe rm e d a d o tra s to rn o re la c io n a d o con p é rd ida de fu n c ió n renal. La in m u n o g lo b u lin a p ue de a d m in is tra rse de a cu e rd o con el m é to do de la p re se n te d ivu lg a c ió n en so lita r io o en co m b in a c ió n con o tros tra ta m ie n to s con oc id os . C u a n d o se co a d m in is tra con uno o m ás tra ta m ie n to s d is tin to s , la in m u n o g lo b u lin a p uede a d m in is tra rse s im u ltá n e a m e n te con el o tro u o tros tra ta m ie n to s , o s e cu e n c ia lm e n te . Si se a d m in is tra se cu e n c ia lm e n te , el m é d ico re sp o n sa b le d e c id irá sob re la se cu e n c ia a p ro p ia d a de a d m in is tra c ió n , que p uede se r a n tes o d e sp u é s de un se g u n d o tra ta m ie n to .
F. T ra ta m ie n to o p re ve n c ió n de d año en el te jid o d e b id o a isq u e m ia
En un a sp ec to , se d esc ribe n en el p re se n te d o cu m e n to m é to d o s p ara e v ita r o tra ta r d año isq u é m ico en te jid o , que co m p re n d e n a d m in is tra r a un su je to q ue lo n eces ite un p o lip é p tid o q ue co m p re n d e los d o m in io s va r ia b le s del a n ticu e rp o 1E4 com o se d e sc rib e en el p re se n te d ocum e n to . Se d e m o stró q ue el a n ticu e rp o 1E4 era e fica z para re d u c ir la les ión d e b id a a a p o p le jía isqu ém ica en un m o de lo a n im a l (vé a se el e je m p lo 5). S e usó un m o de lo a n im a l en que se o c lu yó la a rte ria ce re b ra l cen tra l en ra tas a las que se les hab ía a d m in is tra d o 10 m g /kg de a n ticu e rp o 1E4 1 d ía antes. A las ra tas e n to n ce s se les a d m in is tró p o r v ía in tra ve n o sa 10 m g /kg de a n ticu e rp o 1E4 1 hora d e sp u é s en los d ías 3, 10, 17 y 24 d e sp u é s de la o c lu s ió n . S e re a lizó a n á lis is del te jid o ce re b ra l u sa nd o M RI p ara m e d ir el g rad o del in fa rto . Los re su lta d o s m o stra ro n q ue la a d m in is tra c ió n de l a n ticu e rp o 1E4 era e fica z en re d u c ir el ta m a ñ o del in fa rto en el m o de lo de o c lu s ió n (vé a se la fig u ra 5).
Isq u em ia se re fie re a una re d u cc ió n o su p re s ió n de l a p o rte s a n g u ín e o a un te jid o . Los p o lip é p tid o s de in m u n o g lo b u lin a y m é to d o s d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to p ue de n u sa rse para tra ta r le s io n e s a so c ia d a s con isqu em ia , o " le s io n e s isqu ém ica s". Las les io ne s isq u é m ica s p ue de n in c lu ir le s io n e s en, p o r e je m p lo , el riñón, h ígado, p u lm o ne s, páncreas, m ú scu lo e sq u e lé tico , in te s tin os , co ra zó n y cereb ro . Las le s io n e s isq u é m ica s p ueden e s ta r a so c ia d a s con o p ro vo ca d a s por, p o r e je m p lo , apo p le jía , in fa rto a g u d o de m io ca rd io , a n g io p la s tia p ro g ra m a da , in je rto de re va scu la riza c ió n co ron a ria , c iru g ía que im p lica d e riva c ió n ca rd ía ca o tra sp la n te de ó rg a n o o te jid o (p o r e je m p lo , tra sp la n te ca rd íaco ), re cha zo de te jid o d e sp u é s de tra sp la n te , e n fe rm e d a d de in je rto con tra h o sp e d a d o r, tra u m a tism o c ra ne a l, a ho g a m ie n to , sep tice m ia , p a ro ca rd íaco , co n m o c ió n , a te ro e sc le ro s is , h ip e rten s ió n , c a rd io p a tía in d u c id a p o r coca ín a , c a rd io p a tía ind u c id a p o r ta b a q u ism o , in su fic ie n c ia ca rd íaca , h ip e rte n s ió n p u lm o na r, h em o rrag ia , s ín d ro m e de e x tra va sa c ió n ca p ila r (ta l com o s ín d ro m e de d ificu lta d re sp ira to ria in fa n til y en el a du lto ), in su fic ie n c ia s is té m ica m u ltio rg á n ica , un e s ta do de ba ja p res ión o n có tica co lo id e (ta l co m o ina n ic ió n , a n o re x ia n e rv io sa o in su fic ie n c ia h ep á tica con p rod u cc ió n d ism in u id a de p ro te ína s sé rica s ), a na fila x ia , h ip o te rm ia , les ión p o r frío (p o r e je m p lo , d e b id o a p e rfu s ió n h ip o té rm ica o sab añ on es ), s ín d ro m e h ep a to rre n a l, delirium tremens, una les ión p o r a p la s ta m ie n to , in su fic ie n c ia m e se n té rica , va sc u lo p a tía p erifé rica , c la u d ica c ió n , q u e m a d u ra s , e le c tro cu c ió n , va s o d ila ta c ió n e xce s iva ind u c id a p or fá rm aco s, va so co n s tr ic c ió n e xce s iva ind u c id a p o r fá rm a co s , e xp o s ic ió n a ra d ia c ión (p o r e je m p lo , d u ra n te flu o ro sco p ia o im á g e n e s ra d io g rá fica s ), o e xp o s ic ió n a a lta ene rg ía , p o r e je m p lo , e xp o s ic ió n a luz láser. La va so d ila ta c ió n e xce s iva ind u c id a p or fá rm a co s p uede e s ta r p ro vo ca d a por, p o r e je m p lo , n itrop ru s ia to , h id ra lazo na , d ia zóx ido , un b lo q u e a n te del can a l de ca lc io o un a n e s té s ico g en era l. La va so co n s tr ic c ió n e xce s iva in d u c id a p o r fá rm a co s p ue de e s ta r p ro vo ca d a por, p o r e je m p lo , n e o s in e fr in a , iso p ro te re n o l, d op a m in a , d o b u ta m in a o coca ína.
A p o p le jía es un té rm in o g e n e ra l para d añ o ce re b ra l a g u d o re su lta n te de e n fe rm e d a d o les ión de los v a so s san gu íne os . La a p o p le jía p uede c la s ifica rse en al m e no s dos ca te g o ría s p rinc ip a le s : a p o p le jía h e m o rrá g ica (re su lta n te de e x tra va sa c ió n de sa n g re fu e ra de los v a so s sa n g u ín e o s n o rm a le s ) y a p o p le jía isq u é m ica ( isq u e m ia c e re b ra l d e b id a a a use n c ia de a po rte de sangre ). A lg u n o s a co n te c im ie n to s q ue p u e d e n p ro vo ca r a p o p le jía isq u é m ica inc lu ye n tro m b o s is , e m b o lia e h ip o p e rfu s ió n s is té m ica (con isq u e m ia e h ip o x ia re su ltan tes ). La a p o p le jía en g e n e ra l p rovo ca m u erte n eu ro n a l y les ión en el ce re b ro p o r p rivac ión de o x íg e n o y a co n te c im ie n to s se cu n d a rio s . La z o n a del ce re b ro que m u ere com o re su lta d o de la a u se n c ia de a po rte de sa n g re u o tro d añ o se d e n o m in a in fa rto . En a lg u n o s casos, los tra ta m ie n to s d e sc rito s en el p re se n te d o cu m e n to p ueden u sa rse para re d u c ir o m in im iza r el ta m a ñ o de un in farto , p o r e je m p lo , re d u c ie n d o los a co n te c im ie n to s se cu n d a rio s q ue p ro vo ca n m u erte o les ión neu rona l.
La o b s tru cc ió n de una a rte ria ce re b ra l re su lta n te de un tro m b o q ue se ha a cu m u la d o en la pared de una a rte ria ce reb ra l en g e n e ra l se d e n o m in a tro m b o s is ce reb ra l. En e m b o lia ce reb ra l, el m a te ria l o c lu ye n te q ue b lo q u e a la a rte ria ce reb ra l su rge de m a ne ra a n te ró g ra d a en la c ircu la c ió n (p o r e je m p lo , un é m b o lo se tra n sp o rta a la a rte ria ce re b ra l d e sd e el co razón ). C om o es d ifíc il d is c e rn ir si una a p o p le jía e stá p ro vo ca d a p o r tro m b o s is o e m bo lia , el té rm in o tro m b o e m b o lia se usa para c u b rir e stos dos tip o s de apo p le jía . La h ip o p e rfu s ió n s is té m ica p uede s u rg ir com o c o n se cu e n c ia de n ive les sa n g u ín e o s d ism in u id o s , h e m a to c rito re duc ido , h ip o te n s ió n a rte ria l o in ca p a c id a d del co ra zó n de b o m b e a r la san g re a de cu ad am en te .
En la p rác tica del m é to do de tra ta m ie n to o uso de la p re se n te d ivu lg a c ió n , una ca n tid a d te ra p é u tica m e n te e fica z de una in m u n o g lo b u lin a con tra c -M e t a g o n is ta se a d m in is tra a un su je to a fe c ta d o con una e n fe rm e d a d o tra s to rn o re la c io n a d o con isqu em ia . La in m u n o g lo b u lin a p uede a d m in is tra rse de a cu e rd o con el m é to do de la p rese n te d ivu lg a c ió n en so lita r io o en co m b in a c ió n con o tros tra ta m ie n to s con oc id os . C u a n d o se co a d m in is tra con uno o m ás tra ta m ie n to s d is tin to s , la in m u n o g lo b u lin a p uede a d m in is tra rse s im u ltá n e a m e n te con el o tro u o tros tra ta m ie n to s , o s e cu e n c ia lm e n te . Si se a d m in is tra s e cu e n c ia lm e n te , el m é d ico re sp o n sa b le d e c id irá sob re la se cu e n c ia a p ro p ia d a de a d m in is tra c ió n , q ue p uede s e r a n tes o d e sp u é s de un se g u n d o tra ta m ie n to .
G. T ra ta m ie n to de n e o va scu la r iza c ió n re tin ia n a p a to ló g ica
En un a sp ec to , se d esc rib e n en el p re se n te d o cu m e n to m é to d o s para e v ita r o tra ta r una e n fe rm e d a d re tin ia n a n e o va scu la r re la c io n a d a con n e o va scu la r iza c ió n p a to ló g ica en la re tina , q ue co m p re n d e n a d m in is tra r a un su je to que lo n e ce s ite un p o lip é p tid o q ue co m p re n d e los d o m in io s va r ia b le s de l a n ticu e rp o 1E4 com o se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to . El e je m p lo 6 a co n tin u a c ió n d e sc rib e el tra ta m ie n to s a tis fa c to rio de n e o va scu la r iza c ió n p a to ló g ica en un m o d e lo a n im a l. E sp e c ífica m e n te , se usó un m o de lo de n e o va scu la r iza c ió n c o ro id e a (C N V ) ind u c id a p o r lá se r con ch in ch illa s en que se c re a ro n m a n ch a s de fo to co a g u la c ió n a lre d e d o r de l n e rv io óp tico . El tra ta m ie n to de los co n e jo s con 50 |jg de a n ticu e rp o 1E4 p or a d m in is tra c ió n d irec ta al h u m o r v itre o p rovo có inh ib ic ió n de la fo rm a c ió n de C N V in d u c id a p o r lá se r (vé a se la fig u ra 6 ), lo que da so p o rte a a sp e c to s en q ue un su je to q ue lo n e ce s ite se tra ta con c o m p o s ic io n e s de in m u n o g lo b u lin a 1E4 para el tra ta m ie n to o p re ve n c ió n de n e o va scu la r iza c ió n p a to ló g ica en la re tina .
El c re c im ie n to p a to ló g ico de n u e vo s v a so s sa n g u ín e o s (n e o v a s c u la riz a c ió n ) en y a lre d e d o r de los te jid o s de l o jo está a so c ia d o con una d ive rs id a d de e n fe rm e d a d e s o cu la res . En p articu la r, se sabe q ue la h ip o x ia es el e s tím u lo p rinc ip a l para n e o va scu la r iza c ió n p a to ló g ica de la co ro id e s y la m e m b ra n a de B ruch que da com o re su lta d o la p é rd ida de v is ió n a m e nu do c a ta s tró fica a so c ia d a con re tin o p a tía d ia b é tica , re tin o p a tía de l p re m a tu ro y la fo rm a h úm e da de A M D .
En el p re se n te d o cu m e n to se d ivu lga n m é to do s p ara el tra ta m ie n to de e n fe rm e d a d e s o a fe cc io n e s del ojo, e sp e c ia lm e n te re tino pa tía s , e d e m a o cu la r y n e o va scu la r iza c ió n ocu lar. E je m p lo s no lim ita n te s de e s ta s e n fe rm e d a d e s o a fe cc io n e s inc lu ye n e d e m a m a cu la r d ia b é tico , d e g e n e ra c ió n m a cu la r sen il (fo rm a h úm e da ), n e o va scu la r iza c ió n co ro id ea , re tin o p a tía d ia b é tica , isq u e m ia ocu lar, uve ítis , o c lu s io n e s de la ve n a re tin ia n a (ce n tra l o ram o), tra u m a tism o ocu lar, e de m a ind u c id o p o r c irug ía , n e o va scu la r iza c ió n ind u c id a p o r c irug ía , e d e m a m a cu la r qu is to id e , isqu em ia ocu lar, u ve ítis y s im ila res . E s ta s e n fe rm e d a d e s o a fe cc io n e s se ca ra c te riza n p o r ca m b io s en la v a s c u la tu ra o cu la r sea p ro g re s iva o no p rog re s iva , sea un re su lta d o de una e n fe rm e d a d o a fe cc ió n a guda , o una e n fe rm e d a d o a fe cc ió n crón ica . En o tro s a sp ec tos , el su je to e stá p a d e c ie n d o n e o va scu la r iza c ió n ind u c id a p or isquem ia . La n e o va scu la r iza c ió n in d u c id a p o r isq u e m ia no tie n e q ue e s ta r p ro vo ca d a n e ce sa ria m e n te p o r e n fe rm e d a d . P o r e jem p lo , una les ión o a g re s ió n al te jid o o cu la r p uede d a r lu g a r a h ip o x ia de los te jid o s o cu la re s y, de e se m odo, p ro vo ca r n e o va scu la r iza c ió n in d u c id a p o r isq u e m ia q ue p ro vo ca p é rd ida de v is ión .
Un a sp e c to de los m é to d o s d ivu lg a d o s se re fie re a e n fe rm e d a d e s q ue son un re su lta d o d ire c to o in d ire c to de d ia b e tes , in c lu ye n d o e d e m a m a cu la r d ia b é tico y re tin o p a tía d ia b é tica . O tra a fe cc ió n que p uede p ro d u c irse es re tin o p a tía no p ro life ra tiva en que p ueden p ro d u c irse ca m b io s va scu la re s , ta le s com o m ic ro a n e u rism a s , fu e ra de la re g ión m a cu la r del ojo. E s ta s a fe cc io n e s p ue de n p ro g re s a r o no a re tin o p a tía p ro life ra tiva d ia b é tica que se ca ra c te r iza p o r n e o va scu la riza c ió n . N o rm a lm e n te , los su je to s que tie n e n e d e m a m a cu la r d ia b é tico e s tán p a d e c ie n d o la fa se no p ro life ra tiva de re tin o p a tía d ia b é tica ; s in e m ba rg o , no es in fre cu e n te q ue los su je tos so la m e n te e m p ie ce n a m a n ife s ta r e de m a m a cu la r al in ic io de la fa se p ro life ra tiva .
En la p rác tica del m é to do de tra ta m ie n to o uso de la p re se n te d ivu lg a c ió n , una ca n tid a d te ra p é u tica m e n te e fica z de una in m u n o g lo b u lin a con tra c -M e t a g o n is ta se a d m in is tra a un su je to a fe c ta d o con una e n fe rm e d a d o tra s to rn o re la c io n a d o con n e o va scu la r iza c ió n re tin ia n a pa to ló g ica . La in m u n o g lo b u lin a p ue de a d m in is tra rse de a cu e rd o con el m é to do de la p re se n te d ivu lg a c ió n en so lita r io o en co m b in a c ió n con o tro s tra ta m ie n to s con oc id os . C u a n d o se co a d m in is tra con uno o m ás tra ta m ie n to s d is tin to s , la in m u n o g lo b u lin a p uede a d m in is tra rse s im u ltá n e a m e n te con el o tro u o tros tra ta m ie n to s , o se cu e n c ia lm e n te . Si se a d m in is tra s e cu e n c ia lm e n te , el m é d ico re sp o n sa b le d e c id irá sob re la se cu e n c ia a p ro p ia d a de a d m in is tra c ió n , q ue p ue de s e r a n tes o d e sp u é s de un se g u n d o tra ta m ie n to .
H. T ra ta m ie n to de e n fe rm e d a d e s n e u ro n a le s
En un a sp ec to , se d esc rib e n en el p re se n te d o cu m e n to m é to do s para e v ita r o tra ta r una e n fe rm e d a d o tra s to rn o neu rona l, q ue co m p re n d e n a d m in is tra r a un su je to q ue lo n e ce s ite un p o lip é p tid o que co m p re n d e los d om in io s v a r ia b le s de l a n ticu e rp o 1E4 com o se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to . La a c tivac ión de c -M e t p o r la un ión de H G F d e se m p e ñ a una fu n c ió n en el d e sa rro llo y m a n te n im ie n to de l s is te m a n erv io so , ya q ue c -M e t se e xp re sa en ce re b ro s en d e sa rro llo y adu ltos , in c lu ye n d o n eu ro n a s de la co rte za ce reb ra l, h ip o ca m po , ce reb e lo , n úc leo m o to r del tro n co ence fá lico , re tina y g a n g lio s sen s itivo s , y la m é du la e sp ina l, a s í com o cé lu la s no n e u ro n a le s ta le s com o a stro c ito s reactivos , p ro g e n ito re s de o lig o d e n d ro c ito s , o lig o d e n d ro c ito s y m ic ro g lía (vé ase F u n a ko sh i y N akam ura , 2011 , C u rre n t S igna l T ra n sd u c Ther, 6 :156 -167 para una rev is ión ).
Los e xp e rim e n to s d e sc rito s en el e je m p lo 7 se re a liza ro n para e s tu d ia r los e fe c to s de la a d m in is tra c ió n de l a n ticu e rp o 1E4 a g o n is ta sob re la m ig ra c ió n de cé lu la s de S chw an n . Se sab e q ue las cé lu las de S ch w a n n d e se m p e ñ a n fu n c io n e s im p o rta n te s en el d e sa rro llo del s is te m a nerv ioso , su fu n c ió n y m a n te n im ie n to . P o r e je m p lo , la re m ie lin iza c ió n de nerv io s d a ñ a d o s re qu ie re la m ig ra c ió n de cé lu la s de S ch w a n n a los n e rv io s d añados . C om o se d e m u e s tra en el e je m p lo 7 y se m u es tra en las fig u ra s 7 A y 7B, la a d m in is tra c ió n de a n ticu e rp o 1E4 a cé lu la s de S ch w a n n de ra ta en cu ltivo a u m e n tó s ig n ifica tiva m e n te la a c tiv id a d de m ig ra c ió n de e stas cé lu la s en co m p a ra c ió n con cé lu la s tra ta d a s ú n ica m e n te con tam p ón .
Se e s tu d ia ro n a d e m á s los e fe c to s de un a n ticu e rp o con tra c -M e t a g o n is ta com o se d ivu lg a en el p re se n te d o cu m e n to u sa nd o un m o d e lo a n im a l para e sc le ro s is la te ra l a m io tró fica . Se a ce p ta n los ra to n e s B6S JL-T g (S O D 1 -G 93 A ) que e xp re sa n SO D1 m u ta n te h u m a n a co m o m o de lo a n im a l para e s tu d ia r el e fe c to te ra p é u tico de a g e n te s sob re A L S y o tras e n fe rm e d a d e s n e u ro m u scu la re s . Se d e scu b rió q ue ra ton es tra ta d o s con a n ticu e rp o 1E4 p o r v ía in tra te ca l e in tra p e rito n e a l com o se d e sc rib e en el e je m p lo 8 te n ía n fu n c ió n m o to ra m e jo ra d a cu a n d o se les a d m in is tra b a a n ticu e rp o 1E4 en co m p a ra c ió n con ra ton es a los que se les a d m in is tra b a ta m p ó n en so lita r io (fig u ra s 8A y 8B). El tra ta m ie n to con a n ticu e rp o 1E4 ta m b ié n m e jo ra b a las ta sa s de s u p e rv ive n c ia (fig u ra 8D).
Los d a tos e xp e rim e n ta le s p ro p o rc io n a d o s en los e je m p lo s 7 y 8 m u es tra n q ue c o m p o s ic io n e s q ue co m p re n d e n a n ticu e rp o s con tra c -M e t a g o n is ta s com o se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to p ueden usa rse p ara tra ta r a su je tos q ue p ad ecen tra s to rn o s que im p lican cé lu la s n eu ro ló g ica s .
La p os ib le fu n c ió n de H G F y c -M e t en los s is te m a s n e u ro n a le s se ha re su m id o en F u n a ko sh i y N akam ura , 2011, C u rre n t S ig n a l T ra n sd u c Ther, 6 : 156 -167. C o m o un e je m p lo , los e s tu d io s han d e m o s tra d o lo s igu ien te . M u ta c io n e s en los g e n e s de H G F y c -M e t se han a so c ia d o con a u tism o, e sq u izo fre n ia y p é rd ida de a u d ic ió n no s ind ró m ica . N ive les sé rico s a u m e n ta d o s de H G F se han a so c ia d o con e fica c ia del tra ta m ie n to a n tid e p re s ivo en p a c ie n te s con tra s to rn o de ang us tia . Se ha d e m o s tra d o q ue H G F a ctúa com o un p o ten te a g e n te c e re b ro p ro te c to r para la re cu p e ra c ió n fu n c io n a l d e sp u é s de le s io n e s ce re b ra le s isqu ém ica s. Se ha d e m o s tra d o q ue H G F e v ita la m u erte de las cé lu la s n e u ro n a le s in h ib ie n d o la a po p tos is . Se ha d e m o s tra d o que H G F tie n e e fe c to s b e n e fic io so s sob re las n e u ro n a s m o to ra s in vitro e in vivo y d ich o s e fe c to s se han c o n s id e ra d o in d ica tivo s de un p os ib le v a lo r te ra p é u tico en el tra ta m ie n to de e sc le ro s is la te ra l a m io tró fica (A LS ). Se ha in fo rm a d o de e fe c to s b e n e fic io so s en d ive rso s e stu d io s, q ue a u m e n ta b a n los n ive les de H G F en el h ip o ca m p o de an im a les , lo que su g ie re una fu n c ió n te ra p é u tica para un a g o n is ta de c -M e t en el tra ta m ie n to de e n fe rm e d a d de A lzh e im e r. A d ic io n a lm e n te , se ha in fo rm a d o de e fe c to s n e u ro tró fico s de H G F en n e u ro n a s d o p a m in é rg ica s p rim a ria s de l m e se n cé fa lo y e fe c to s b e n e fic io so s de un a g o n is ta de c -M e t en e n fe rm e d a d de P ark inson . La a p lica c ió n de g en es e xó g e n o s de h G f en la m é du la e sp in a l les io na da p rom ov ía la s u p e rv ive n c ia de n e u ro n a s m o to ra s y re d u c ía el ta m a ñ o de la zo n a d añ ad a , lo que a po ya el p os ib le uso de un a n ticu e rp o con tra c -M e t a g o n is ta para tra ta r una les ión de la m é du la esp ina l.
C om o la a c tiva c ió n de c -M e t se ha a so c ia d o con una serie d ive rsa de e fe c to s b e n e fic io so s sob re e n fe rm e d a d o d año n eu rona l, En la p rác tica de l m é to d o de tra ta m ie n to o uso de la p re se n te d ivu lga c ió n , se a d m in is tra una can tida d te ra p é u tica m e n te e fica z de una in m u n o g lo b u lin a con tra c -M e t a g o n is ta a un su je to a fe c ta d o con una ind icac ión que es una e n fe rm e d a d , tra s to rn o o les ión n eu rona l. D ich as in d ica c io n e s inc lu ye n , a u n q u e sin lim itac ió n , les ión ce reb ra l isqu ém ica , e n fe rm e d a d de A lzh e im e r, e n fe rm e d a d de P a rk inson , e sc le ro s is la te ra l a m io tró fica , les ión de la m é du la esp ina l, e sc le ro s is m ú ltip le , con vu ls ión , h id ro ce fa lia , les ión en la re tina , d e fic ie n c ia a ud itiva , les ión de un n e rv ios p e rifé rico y n eu ro pa tía , y d o lo r n eu ro pá tico .
I. C o m p o s ic io n e s fa rm a cé u tica s
En un a sp e c to ad ic ion a l, la p rese n te d ivu lg a c ió n p ro p o rc io n a una co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica que co m p re n d e un a n ticu e rp o o un c o n ju g a d o del m ism o y un ve h ícu lo fa rm a c é u tic a m e n te a ce p tab le .
En a lg u n o s a sp ec tos , una co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a p ara tra ta r un tra s to rn o isqu ém ico , una a po p le jía , una les ión o e n fe rm e d a d renal, un tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin iana , un tra s to rn o o e n fe rm e d a d n e u ro ló g ica o una herida, que co m p re n d e un a n ticu e rp o o fra g m e n to de l m ism o q ue se une a c -M e t (fa c to r de tra n s ic ió n m e se n q u im a to sa -e p ite lia l) co m o in g re d ie n te a c tivo y un ve h ícu lo fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le se d e sc rib e en el p re se n te d ocum e n to , en la q ue el a n ticu e rp o com p re nd e : un d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a p esad a q ue co m p re n d e una C DR 1 de S E Q ID NO: 5, una C D R 2 de S E Q ID NO: 6 y una C D R 3 de S E Q ID NO: 7; y un d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a lige ra que co m p re n d e una CDR1 de S E Q ID NO: 8 , una C D R 2 de S E Q ID NO: 9 y una C D R 3 de S E Q ID NO: 10.
En a lg u n o s a sp ec tos , el d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a p esad a co m p re n d e S E Q ID NO: 1 y el d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra co m p re n d e S E Q ID NO : 2.
En a lg u n o s a sp ec tos , una co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a p ara tra ta r un tra s to rn o isqu ém ico , una a po p le jía , una les ión o e n fe rm e d a d renal, un tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin iana , un tra s to rn o o e n fe rm e d a d n e u ro ló g ica o una herida, que co m p re n d e un s cF v q ue se une a c -M e t com o in g re d ie n te a c tivo y un v e h ícu lo fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le se d e sc rib e en el p rese n te d ocum e n to , en la q ue el s cF v co m p re n d e : un d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a p esad a que co m p re n d e S E Q ID NO: 1 y el d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra que co m p re n d e S E Q ID NO : 2.
En a lg u n o s a sp ec tos , el s cF v co m p re n d e S E Q ID NO: 3.
La co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica p uede p on e rse en co n ta c to con el o rg a n ism o a tra vé s de d ive rsa s v ía s de a d m in is tra c ió n , in c lu ye n d o a d m in is tra c ió n in traven o sa , a d m in is tra c ió n in tra m u scu la r, a d m in is tra c ió n in traa rte ria l, a d m in is tra c ió n in tram e du la r, a d m in is tra c ió n in tra teca l, a d m in is tra c ió n in traca rd ía ca , a d m in is tra c ió n in trav ítrea , a d m in is tra c ió n p e rcu tá n ea , a d m in is tra c ió n h ip o d é rm ica , a d m in is tra c ió n in tra p e rito n e a l, a d m in is tra c ió n sub ling ua l, sub cu tán ea , tra n s d é rm ica y a d m in is tra c ió n tóp ica .
P ara d ich a a d m in is tra c ió n c lín ica , la co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a d e sc rita en el p re se n te d o cu m e n to p ue de p re p a ra rse en un p ro d u c to a d e cu a d o u sa nd o té cn ica s co n ve n c io n a le s .
Las fo rm u la c io n e s fa rm a c é u tic a s de un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t com o se d e sc rib e en el p re se n te d o cu m e n to se p rep a ran m e zc la n d o d ich o a n ticu e rp o que tie n e el g rad o d e se a d o de p u re za con uno o m ás v e h ícu lo s fa rm a cé u tica m e n te a ce p ta b le s o p c io n a le s (R e m in g to n 's P h a rm a ce u tica l S c ie n ce s 16.a e d ic ión , O so l, A. Ed. (1980 )), en fo rm a de fo rm u la c io n e s lio filiza d a s o s o lu c io n e s a cu osa s. Los v e h ícu lo s fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le s en g e n e ra l son a tó x ico s para los d e s tin a ta rio s a las d o s ifica c io n e s y c o n c e n tra c io n e s e m p le ad as , e inc lu ye n , a u n q u e sin lim itac ió n : ta m p o n e s , ta le s com o fos fa to , c itra to y o tro s á c id o s o rgá n ico s ; a n tio x id a n te s , in c lu ye n d o á c id o a scó rb ico y m e tion ina ; co n se rva n te s (ta le s com o c lo ru ro de o c ta d e c ild im e tilb e n c il a m on io ; c lo ru ro de h exam e ton io ; c lo ru ro de ben za lcon io ; c lo ru ro de b en ce ton io ; feno l, a lco h o l b u tílico o b en cílico ; a lqu il p a ra b en os , ta le s com o m e til o p rop il p a ra b en o ; ca teco l; re sorc in o l; c ic lo h e xa n o l; 3 -pe n ta no l; y m -creso l); p o lip é p tid o s de bajo peso m o le cu la r (m e n o s de a p ro x im a d a m e n te 10 re s idu os); p ro te ína s, ta le s com o se ro a lb ú m in a , g e la tin a o in m u n o g lo b u lin a s ; p o lím e ro s h id ró filo s ta le s com o p o liv in ilp irro lid o n a ; a m in o á c id o s ta le s com o g lic ina , g lu ta m in a , a sp a rag ina , h is tid ina , a rg in in a o lis ina; m o no sa cá rid o s , d isa cá rid o s y o tro s c a rb o h id ra to s in c lu ye n d o g lucosa , m a n o sa o d ex trina s ; a g e n te s q u e la n te s ta le s co m o ED TA; g lú c id o s ta le s com o saca rosa , m an ito l, tre h a lo s a o so rb ito l; co n tra io n e s fo rm a d o re s de sa les, ta le s com o sod io; co m p le jo s m e tá lico s (p o r e je m p lo , co m p le jo s de Z n -p ro te ín a ); y /o te n s io a c tiv o s no ión icos , ta le s com o p o lie tile n g lico l (P E G ). Los v e h ícu lo s fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le s ilu s tra tivo s en el p re se n te d o cu m e n to inc lu ye n a d e m á s a g e n te s para la d isp e rs ió n in te rs tic ia l de fá rm a co s ta le s com o las g lu co p ro te ín a s de h ia lu ro n id a sa n e u tra s -a c tiva s (sH A S E G P ), p o r e je m p lo , g lu co p ro te ín a s de h ia lu ro n id a sa P H -20 so lu b le s h um a na s , ta le s com o rH u P H 2 O (H Y L E N E X ® , B a x te r In te rn a tion a l, Inc.). D e te rm in a d o s sH A S E G P ilu s tra tivo s y m é to d o s de uso, in c lu ye n d o rH u P H 2O, se d esc rib e n en las p u b lica c io n e s de p a ten te de los E s ta d os U n id os n.° 2005 /0260186 y 2006 /0104968. En un a sp ec to , un sH A S E G P se co m b in a con una o m ás g lu c o s a m in o g lu ca n a s a s a d ic ion a le s , ta le s com o con d ro itin a sa s .
Los in g re d ie n te s a c tivos p ueden a tra p a rse en m ic ro cá p su la s p rep a rad a s, p o r e je m p lo , p o r té c n ica s de co a ce rva c ió n o m e d ia n te p o lim e riza c ió n in te rfac ia l, p o r e je m p lo , m ic ro cá p su la s de h id ro x im e tilce lu lo sa o g e la tin a y m ic ro cá p su la s de p o li(m e tilm e ta c ila to ), re sp e c tiva m e n te , en s is te m a s de a d m in is tra c ió n de fá rm a c o s co lo id a le s (p o r e jem p lo , lipo som a s, m ic ro e s fe ra s de a lb ú m ina , m ic ro e m u ls io n e s , n a n o p a rtícu la s y n a n o cá p su la s ) o en m a c ro e m u ls io n e s . D ich as té c n ica s se d ivu lg a n en R e m in g to n 's P h a rm a ce u tica l S c ie n ce s 16.a e d ic ión , O so l, A. Ed. (1980 ).
Se p ueden p re p a ra r p re p a ra c io n e s de lib e ra c ió n m a n ten id a . E je m p lo s a d e cu a d o s de p re p a ra c io n e s de libe ra c ión m a n te n id a inc lu ye n m a trice s se m ip e rm e a b le s de p o lím e ro s h id ró fo b o s s ó lid o s que co n tie n e n el a n ticue rp o , te n ie n d o d ich a s m a trice s la fo rm a de a rtícu lo s co n fo rm a d o s , p o r e je m p lo , p e lícu la s o m ic ro cá p su la s .
Las fo rm u la c io n e s a u sa r p ara la a d m in is tra c ió n in vivo son, en g en era l, e sté riles . La e s te rilid a d p ue de co n se g u irse fá c ilm e n te , p o r e je m p lo , m e d ia n te filtra c ió n a tra vé s de m e m b ra n a s de filtra c ió n e sté riles .
P ara una m e jo r a d m in is tra c ió n , la co m p o s ic ió n p ue de c o m p re n d e r a d e m á s al m e no s un tip o de v e h ícu lo fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le a d e m á s de los in g re d ie n te s a c tivos d e sc rito s a n te rio rm e n te . E je m p lo s de d ich os v e h ícu lo s inc lu ye n so lu c ió n sa lina , a gu a esté ril, so lu c ió n de R inger, so lu c ió n sa lin a ta m p o n a d a , so lu c ió n de d ex trosa , so lu c ió n (a cu o sa ) de m a lto de x tr ina , g lice ro l, e tano l y m e zc la s de los m ism os. Si fu e se n ecesa rio , p ueden a ñ a d irse a d itivo s n orm a le s, ta le s co m o un a n tio x id a n te , un ta m p ó n , un a g e n te b a c te rio s tá tico y s im ila res . A d e m á s, la co m p o s ic ió n p ue de p ro d u c irse fa rm a c é u tic a m e n te p ara inye cc ió n en fo rm a de una so lu c ió n acu osa , susp en s ió n , e m u ls ió n y s im ila re s a ñ a d ie n d o m ás a d itivos , ta le s com o, un a ge n te d ilu yen te , un a ge n te d isp e rsa n te , un te n s io a c tivo , un a ge n te de un ión y un lub rica n te .
J. D os ifica c ió n
Las d o s ifica c io n e s e fica ce s y p a u ta s para a d m in is tra r el a n ticu e rp o co n tra c -M e t 1E4 p ueden d e te rm in a rse e m p írica m e n te , y re a liza r d ich a s d e te rm in a c io n e s p e rte n e ce a las h a b ilid a d e s de la té cn ica . Los e xp e rto s en la m a te ria c o m p re n d e rá n que la d o s ifica c ió n de l a g e n te que d ebe a d m in is tra rse va r ia rá d e p e n d ie n d o de, p o r e je m p lo , el su je to que re c ib irá el a ge n te , la v ía de a d m in is tra c ió n , el tip o p a rtic u la r de a g e n te u sado y o tro s fá rm a c o s que se estén a d m in is tra n d o al su je to . P o r e je m p lo , se e n cu e n tra n d ire c trice s sob re la se le cc ió n de dos is a p ro p ia d a s para a n ticu e rp o s en la b ib lio g ra fía sob re usos te ra p é u tico s de a n ticu e rp o s , p o r e je m p lo , H a n d b o o k o f M o n o c lo n a l A n tib o d ie s , F e rro n e et al., eds., N og es P u b lica tio n s , P a rk R idge, N .J., (1985 ) cap. 22 y pág. 303 -357 ; S m ith et al., A n tib o d ie s in H um a n D ia g n o s is and T h e ra p y , H a b e r et al., eds., R aven P ress, N ue va Y o rk (1977 ) pág. 365 -389. U na d os is n orm a l de l a g e n te u sa do en so lita r io p od ría v a r ia r de a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g /kg h as ta 500 m g /kg de peso co rp o ra l o m ás al día, o de a p ro x im a d a m e n te 0,01 m g /kg a a p ro x im a d a m e n te 50 m g/kg , o de 0,1 m g /kg a a p ro x im a d a m e n te 50 m g/kg , o de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g/kg hasta a p ro x im a d a m e n te 10 m g/kg , o de a p ro x im a d a m e n te 0,1 m g/kg h asta a p ro x im a d a m e n te 5 m g/kg , o de a p ro x im a d a m e n te 5 m g/kg hasta a p ro x im a d a m e n te 10 m g /kg o de a p ro x im a d a m e n te 0,2 m g /kg a a p ro x im a d a m e n te 1 m g /kg , d e p e n d ie n d o de los fa c to re s m e n c io n a d o s a n te rio rm e n te .
Las p au ta s de d o s ifica c ió n para la a d m in is tra c ió n de un a n ticu e rp o 1E4 inc lu ye n , a u n q u e sin lim itac ió n , una ve z al día, tre s v e ce s a la sem a na , d os v e ce s a la sem a na , una ve z a la sem a na , tre s vece s, d os v e ce s al m es, una v e z al m es y una ve z en m e se s a lte rnos.
IV. Ejemplos
Los s ig u ie n te s e je m p lo s son de n a tu ra le za ilu s tra tiva y de n in g u n a m a n e ra se p re te n d e q ue sean lim itan tes .
Ejemplo 1
P re p a ra c ió n de un a n ticu e rp o con tra c -M e t
El a n ticu e rp o IgG1 1E4 u sado en los e je m p lo s a co n tin u a c ió n se g e n e ró p or e xp re s ió n re co m b in a n te en cé lu la s H E K -293T . S e co n s tru yó un v e c to r p Ig G H D (A p ro ge n , C o rea de l S u r) para q ue co n tu v ie ra el á c id o n u c le ico q ue co d ifica la ca d en a p e sa d a del a n ticu e rp o 1E4 de lon g itu d com p le ta y se co n s tru yó un v e c to r p IgG LD se p a ra d o (A p ro ge , C orea del S u r) p a ra q ue co n tu v ie ra el á c id o n uc le ico q ue co d ifica la ca d e n a lige ra del a n ticu e rp o 1E4 de lon g itu d com p le ta . Los á c id os n uc le ico s q ue cod ifica n los d o m in io s va r ia b le s de la ca d e n a p esad a y lige ra de l a n ticu e rp o 1E4 se hab ía o b te n id o de p o lip é p tid o s de scF v g e n e ra d o s p o r b io se le cc ió n de una co le cc ió n de p re se n ta c ió n en fagos . Esta g e n e ra c ió n de los d o m in io s va r ia b le s de la ca d e n a p esad a y lige ra de 1E4 se d e sc rib e en la so lic itud P C T n.° P C T /K R 2015 /007899. El d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra de 1E4 tie n e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s d e sc rita en el p re se n te d o cu m e n to com o S E Q ID NO: 2 y el d o m in io v a r ia b le de la ca d e n a p e sad a de 1E4 tie n e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s d e sc rita en el p re se n te d o cu m e n to com o S E Q ID NO: 1. El á c ido n u c le ico q ue co d ifica el d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra de 1E4 se ligó con el v e c to r p Ig G L D que se hab ía d ig e rid o con la e n d o n u c le a sa S fil, y el á c ido n uc le ico q ue co d ifica el d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p esad a de 1E4 se ligó con el v e c to r p Ig G H D q ue se hab ía d ig e rid o con la e n d o n u c le a sa SfiI. P ara e xp re sa r de fo rm a re co m b in a n te el a n ticu e rp o 1E4 de lon g itu d co m p le ta u sado para los e je m p lo s a co n tin u a c ió n , el v e c to r p Ig G H D se d ig irió con la e n d o n u c le a sa SfiI y el v e c to r p Ig G L D se d ig irió con la e n d o n u c le a sa BstX I. P ara p ro d u c ir el a n ticu e rp o IgG 1E4, las cé lu la s H E K -293 T se co n tra n s fe c ta ro n con ca n tid a d e s igu a les de los ve c to re s de e xp re s ió n de la ca d e n a lige ra y la ca d e n a pesada.
Las cé lu la s co tra n s fe c ta d a s se incu ba ro n en m e d io sin sue ro fre e s ty le 293 m e d ia (37 °C, 5 % de C O 2), d e sp u é s se re cog ió el m ed io . El a n ticu e rp o IgG 1E4 se p u rificó de l so b re n a d a n te de m e d io p or c ro m a to g ra fía de a fin id a d con p ro te ín a (G E hea lth ca re , EE. UU .), s ig u ie n d o el p ro to co lo de l fab rica n te : el so b re n a d a n te se e q u ilib ró con fo s fa to de sod io 20 m M (pH 7 ,0 ) y N aC l 100 mM , se inye ctó en una co lu m n a de p ro te ín a A, la co lu m n a se lavó con fo s fa to de sod io 20 m M (pH 7,0), E D T A 1 mM , N aC l 500 mM , d e sp u é s el a n ticu e rp o se e lu yó de la co lu m n a con g lic in a -H C l 0,1 M (pH 3 ,3 ) q ue co n te n ía N aC l 100 mM . La p ro te ín a e lu id a se n e u tra lizó con so lu c ió n de T ris 1 M. La p ro te ína n e u tra liza d a e n to n ce s se m e zc ló con fo s fa to de sod io 5 m M (pH 6 ,0 ) a una re lac ión de 1:1, d e sp u é s se inye ctó en una co lu m n a de S P -se p h a ro se p re v ia m e n te co m p a c ta d a (G E h e a lth ca re ) e q u ilib ra d a con fo s fa to de sod io 5 m M (pH 6 ,0 ) q ue co n te n ía N aC l 50 mM . La p ro te ína u n ida a la co lu m n a se e lu yó u sa nd o ta m p ó n de fo s fa to de sod io (pH 7 ,0 ) que co n te n ía N aC l 50 m M , y la p ro te ín a no u n ida se o b tu vo de una co lu m n a de Q -se p h a ro se p re v ia m e n te co m p a c ta d a (G E h e a lth ca re ) que se hab ía e q u ilib ra d o con ta m p ó n de libe ra c ión . El e lu id o p ro te ín ico se co n ce n tró con v iva s p in 20 de 30 kDa (S a rto riu s ) y se d ia lizó con PBS.
Ejemplo 2
E fe c to s de a n ticu e rp o s a n ti-c -M e t a g o n is ta s en la c ica triza c ió n de he rid as
Se e s tu d ió la ca p a c id a d del a n ticu e rp o 1E4 de p ro m o ve r la c ica triza c ió n de h e rid as en un an im a l. En co n d ic ió n esté ril, se a n e s te s ia ro n ra ton es (B a lb /C , h e m b ra de 8 se m a n a s de edad). D e sp u é s de d e p ila c ió n del p e la je dorsa l, se h ic ie ron h e rid as c ircu la re s de 6 m m en cada lado de la p ie l d o rsa l de los ra ton es u sa nd o un s a ca b o ca d o s de b io p s ia de 6 m m (In te g ra M iltex, n.° cat. 11L48). P ara c o n s e rv a r la fo rm a o rig in a l de la h e rida y m e d ir un e fe c to c ica triza n te de h e rid as de la su s ta n c ia de e n sa yo de fo rm a m ás p rec isa , el s itio de la h e rida se u n ió y se lló con la fé ru la para h e rid as (d iá m e tro in te rio r de 7 mm , G race B io -La bs , n.° cat. 1213138 ) com o se d e sc rib e en G a lia n o et al. (W o u n d R e p a ir R eg en Ju l-A go ; 12 (4): 485 -92 , 2004; ta m b ié n v é a se Li et al., J D ia b e te s R es 2015 : 512959 , 2015). Se a p lica ro n u n ifo rm e m e n te 20 |jl de P B S (para el c o n tro l) o 1E4 a la z o n a de la h e rida en d ife re n te s d os is (3 |jg , 6 |jg , 12 |jg p o r h e rida p o r d ía ) u sa nd o una m ic ro p ip e ta . El s itio de la h e rida e n to n ce s se cu b rió con T e g a D e rm (3M , n.° cat. 2016 -07 P K ) para p ro te g e r la zo n a les io na da . Se a d m in is tró P B S o d os is de 1E4 d ia ria m e n te d u ra n te 14 d ías. S e ca p tu ra ro n im á g e n e s cad a 2 a 3 d ía s para a n a liza r la p rog re s ió n de c ie rre de la herida.
Se p ro p o rc io n a n fo to g ra fía s de la h erid a a n tes y d u ra n te el tra ta m ie n to en la figu ra 1A. S e p ro p o rc io n a n m e d ic io n e s c o rre sp o n d ie n te s de c ie rre de la h e rida en el g rá fico m o s tra d o en la fig u ra 1B. C om o se ilus tra en las fig u ra s 1A y 1B, el a n ticu e rp o a n ti-c -M e t re d u c ía e fica zm e n te el á rea de la h e rida en al m e no s un 20 % m ás q ue P B S a to d a s las dos is del an ticue rp o . P o r co n s ig u ie n te , el a n ticu e rp o a n ti-c -M e t es e fica z en p o te n c ia r el p roce so de c ica triza c ió n de heridas.
Ejemplo 3
E fec tos n e fro p ro te c to re s de a n tic u e rp o s a n ti-c -M e t a g o n is ta s
Se ha in fo rm a d o de que el fá rm a co a n tin e o p lá s ico a d ria m ic in a (A D R ) es n e fro tó x ico y, cu a n d o se a d m in is tra a ra tones, los n ive les ta n to de n itró g e n o de la u rea en sa n g re (B U N ) com o de c re a tin in a en san g re a um e n ta n d eb ido al d año rena l re su ltan te , com o m u ch o s e s tu d io s han d e m o s tra d o (R o ssm a n n et al. J P atho l. 169 (1 ):99 -108 , 1993; W a n g et al.; K id n e y Int. 58(4 ): 1797-1804 , 2000 ; O ku da et al. K id n e y In t 29, 502 -510 , 1986.). S e h ic ie ro n e s tu d io s p ara e n sa ya r la ca p a c id a d de un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a g o n is ta de p ro te g e r los riñ on es de d a ñ o s ta le s com o los ca u sa d o s p o r un q u im io te rá p ico .
A n te s de la a d m in is tra c ió n de l a n ticu e rp o 1E4, los ra ton es B A L B /c (m a ch o s de 6 se m a n a s de e d a d ) e xp e rim e n ta ro n un p e rio do de a c lim a ta c ió n d u ra n te una sem a na . D e sp u é s de e llo , se a d m in is tró P B S (co n tro l) o d ife re n te s d os is de 1E4 (2 m g/kg , 5 m g/kg y 10 m g /kg ) a tra vé s de in ye cc io n e s en la v e n a de la co la (d ía -1). El s ig u ie n te d ía (d ía 0), se indu jo les ión rena l m e d ia n te una so la inye cc ió n en la co la de 15 m g/kg de A D R en to d o s los a n im a le s . D os y c inco d ías d e sp u é s de la inye cc ió n de A D R (d ías 2 y 5, re sp e c tiva m e n te ), se a d m in is tró p o r v ía in tra ve n o sa P B S o dos is c o rre sp o n d ie n te s de 1E4 a los ra tones, re sp e c tiva m e n te . En el d ía 7 d e sp u é s de la inye cc ió n de A D R , to d o s los a n im a le s se sa c rifica ro n y se re co g ie ro n m u e s tra s de san g re para e va lu a r los n ive les de B U N y c re a tin in a en la sangre . D e sp u é s se a b rió q u irú rg ica m e n te el a b d o m e n y se e sc in d ió un riñón y se fijó en fo rm a ld e h íd o al 4 %. Se p rep a ra ron va ria s se cc io n e s de cada riñón y se tiñ e ro n con h e m a to x ilin a y e o s in a (H y E) para e xa m e n h is to ló g ico ru tina rio u sando un m ic ro sco p io óptico.
La a d m in is tra c ió n de 5 m g/kg o m ás del a n ticu e rp o 1E4 re du jo e fica zm e n te los n ive les c re c ie n te s de BU N (fig u ra 2 A ) y c re a tin in a (fig u ra 2 B ) en el m o de lo a n im a l de les ión rena l in d u c id a p o r A D R . A d e m á s, se o b se rvó q ue la a d m in is tra c ió n de 1E4 a d os is de 5 m g /kg y 10 m g /kg m e jo rab a s ig n ifica tiva m e n te la a lte ra c ió n h is to ló g ica en el riñón. Se m u es tra n im á g e n e s de se cc io n e s re na les te ñ id a s con H y E para te jid o s de a n im a le s v írg e n e s , a n im a le s tra ta d o s con PBS, y a n im a le s tra ta d o s con 10 m g/kg de a n ticu e rp o 1E4 (fig u ra 3A). El a n á lis is h is to ló g ico inc lu ía a s ig n a r p u n tu a c io n e s a los te jid o s de los q ue se to m a ro n im á ge ne s com o se m u es tra en la fig u ra 3B. La p u n tu a c ió n de 1 s ig n ifica q ue el á rea le s io n a d a e stá p o r d e b a jo de un 10 % de l te jid o rena l en con jun to ; la p un tu ac ió n de 2 s ign ifica que el á rea les io n a d a e stá e n tre un 10-40 % del te jid o rena l en con jun to ; la p u n tu a c ió n de 3 s ig n ifica q ue el á rea les io n a d a e stá e n tre un 40 -70 % del te jid o rena l en con jun to ; la p un tu ac ió n de 4 s ig n ifica q ue el á re a les io n a d a es m ás de un 70 % de l te jid o rena l en con jun to . El a s te risco ind ica una d ife re n c ia s ig n ifica tiva en p > 0 ,05 en co m p a ra c ió n con tra ta m ie n to con P B S (s in a n ticu e rp o ). A u n q u e a q u í no se p ro p o rc io n a una im a ge n para te jid o de a n im a le s tra ta d o s con 5 m g /kg de a n ticu e rp o 1E4, el a n á lis is h is to ló g ico de e s to s a n im a le s m o stró q ue el te jid o de a n im a le s tra ta d o s con 5 m g /kg de a n ticu e rp o 1E4 te n ía una p un tu ac ió n de 2 ,44 con una d ife re n c ia s ig n ifica tiva de p<0 ,05 , que m u es tra que ta n to 5 m g /kg com o 10 m g /kg de 1E4 son e fica ce s en re d u c ir la les ión rena l in d u c id a p o r A D R .
Ejemplo 4
E fec tos a n tif ib ró tico s de a n ticu e rp o s a n ti-c -M e t a g o n is ta s
La o b s tru cc ió n u re te ra l u n ila te ra l (U U O ) es un m o de lo b ien d e sc rito de fib ro s is renal, un ra sgo p a to ló g ico de e n fe rm e d a d rena l c ró n ica (K la h r et al. A m P h ys io lo g ica l Soc, vo l. 283 n.° 5, F 861 -F 875 , 2002 ; K la h r et al. N e p h ro lo g y Fo rum , K idn e y Int 54 :286 -300 , 1998). P o r con s ig u ie n te , este m o de lo a n im a l se usó para e s tu d ia r los e fe c to s de a n ticu e rp o s a n ti-c -M e t que tie n e n e fe c to s a g o n is ta s sob re le s io n e s fib ró tica s en los riñones.
Un d ía a n tes de la c iru g ía de UUO , se inye cta ro n 10 m g /kg de 1E4 en la ve n a de la co la de ra ton es B A LB /c . El s igu ien te día, se re a lizó la c iru g ía de U U O en co n d ic io n e s e sté riles . Se h izo una inc is ión en la línea m e d ia en el a bd om e n , y se ligó el u ré te r izq u ie rd o en d os pun tos. D e sp u é s de ello, se e sc in d ió el se g m e n to p ro x im a l e n tre los d os p un tos de liga m ie n to . D e sp u é s de la d ise cc ió n , se ce rró el a bd om e n . D e sp u é s de eso, se a d m in is tró 1E4 s e m a n a lm e n te a tra vé s de la ve n a de la co la . A las 3 se m a n a s d e sp u é s de la c irug ía , se re tiró el riñón izq u ie rd o y se fijó en fo rm a ld e h íd o al 4 %. D espués, se e va lu ó el á rea de la les ión fib ró tica en las m u e s tra s de te jid o p o r t in c ió n con tric ro m o de M a sso n y se to m a ro n im á g e n e s de las se cc io n e s rena les.
Se p ro p o rc io n a n im á g e n e s de la tin c ió n con tr ic ro m o de M asso n en la figu ra 4 A con el co rre sp o n d ie n te a ná lis is cu a n tita tivo re p re se n ta d o en la fig u ra 4B. C om o se m u e s tra en las fig u ra s 4 A y 4B, la a d m in is tra c ió n de 1E4 es te ra p é u tica m e n te e fica z en p ro te g e r el riñón fre n te a fib ro s is renal.
Ejemplo 5
T ra ta m ie n to de a p o p le jía isqu ém ica u sa n d o a n ticu e rp o s a n ti-c -M e t a g o n is ta s
El m o de lo de o c lu s ió n de la a rte ria ce re b ra l cen tra l (M C A O ) es un m o de lo a m p lia m e n te u tilizad o en el ca m p o de in ve s tig a c ió n de apo p le jía . E s te m o de lo s irve co m o e xce le n te h e rra m ie n ta para in v e s tig a r los m e ca n ism o s s u b ya ce n te s de a p o p le jía isq u é m ica y un e fe c to te ra p é u tico de una su s ta n c ia de e n sa yo o fá rm a
e n fe rm e d a d . (B a d r et al. A m P h ys io lo g ica l Soc, vol. 280 n.° 3 :R 766 -R 770 , 2001; Z h a o et al. B lood , 114(15): 3329 ­ 3334, 2009). Se re a liza ro n e s tu d io s para e n s a y a r la ca p a c id a d de l a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a g o n is ta 1E4 de m in im iza r el d año al te jid o d e b id o a a p o p le jía isq u é m ica u o tros tra s to rn o s re la c io n a d o s con isquem ia .
El e s tu d io se re a lizó en ra tas W is ta r (7 se m a n a s de edad). Un d ía a n tes de la ind u cc ió n de M C A O , se a d m in is tra ro n 10 m g/kg de 1E4 a las ra tas a tra vé s de la ve n a de la co la . El d ía s igu ien te , los a n im a le s se a n e s te s ia ro n y se a fe itó el p e la je en la reg ión ve n tra l de l cue llo . D e sp u é s de la d ep ila c ió n , cad a ra ta se puso en p os ic ió n sup ina . Se h izo una inc is ión en la línea m e d ia p o r e n c im a de la c la v ícu la d e re cha . Se ide n tificó la a rte ria ca ró tid a com ún d e re ch a (C C A ) y se se g re g ó de l n e rv io va g o a dyace n te . Las ram as d is ta le s de C C A que a sc ie n d e n d e sd e el co razón se e n la za ro n de fo rm a sue lta con h ilo de seda 2-0. En g en era l, la a rte ria c a ró tid a com ú n se b ifu rca en dos ram as, la a rte ria ca ró tid a e x te rna (E C A ) y la a rte ria ca ró tid a in te rn a (IC A ). La E C A se ligó fu e rte m e n te en dos p u n to s u sa nd o el h ilo de seda, m ie n tra s q ue la IC A se a n u d o de fo rm a flo ja . P o s te rio rm e n te , la E C A se co rtó e n tre los nudos. Se inse rtó una sonda de n a ilon 4 -0 con su p arte fro n ta l re cu b ie rta con s ilic io en el va so s a n g u ín e o ce rce n a d o d u ra n te 30 m inu tos . D espu és de re tira r la sonda , se su tu ró co m p le ta m e n te el s itio de inse rc ión . 1 h o ra d e sp u é s de la in d u cc ió n de M C A O , se inye cta ro n p o r v ía in tra ve n o sa 10 m g /kg de 1E4 u sa nd o una b om b a de in fus ión . Se re a lizó o tra a d m in is tra c ió n in tra ve n o sa de la m ism a d os is de 1E4 3 d ía s d e sp u é s de la ind u cc ión de M C A O . D e sp u é s de eso, se inye ctó 1E4 de la m ism a d os is a in te rva lo s de 7 días, en el d ía 10, 17 y 24. S e cu a n tificó el g rad o de in fa rto u sa nd o M RI (M A G N E T O M E S S E N Z A 1,5 tes la , S IE M E N S Co., A le m a n ia ) en el d ía 3, 7, 14, 21 y 28 d e sp u é s de la c irug ía .
Los e fe c to s m e d id o s p o r M RI se m u es tra n com o la m e d ic ión del ta m a ñ o de l in fa rto en a n im a le s q ue no se tra ta ro n o se tra ta ro n con P B S o 1E4 (fig u ra 5). Los d a tos m u es tra n que 1E4 re du ce e fica zm e n te el d año ce re b ra l p ro vo ca d o p o r isq u e m ia en el m o de lo de M C AO .
Ejemplo 6
T ra ta m ie n to de e n fe rm e d a d e s re tin ia na s n e o va scu la re s u sa n d o a n ticu e rp o s a n ti-c -M e t a g o n is ta s
El m o de lo de n e o va scu la r iza c ió n co ro id e a (C N V ) ind u c id a p o r lá se r p ro p o rc io n a una p la ta fo rm a e xce le n te para e xa m in a r un e fe c to te ra p é u tico de un fá rm a co sob re la n e o va scu la r iza c ió n p a tó g e n a en la re tina . (M a ra n o et al. G ene T h e ra p y , 12, 1544-1550 , 2005; Z h an et al. A rch O fta lm o l, Oct; 127 (10): 1329-35 , 2009). El m o de lo de C N V , p o r tan to , se usó p ara e s tu d ia r los e fe c to s de un a n ticu e rp o a n ti-c -M e t a g o n is ta sob re la n e o va scu la r iza c ió n re tin iana .
D e sp u é s de e x p e rim e n ta r d ila ta c ió n p a p ila r con la a p lica c ió n tó p ica de co lir io M yd ria cy l al 1 %, las ch in ch illa s (m acho , 2 -2 ,5 kg, co lo re a d o s ) se a n e s te s ia ro n . Se usó un s is te m a de lá se r (E lite , L um e n is , EE. U U .) para in d u c ir fo to co a g u la c ió n (532 nm de lon g itu d de onda, 150 m W de po tenc ia , 0,1 se g u n d o de d u ra c ió n ) en el ojo. P o r co n s ig u ie n te , se c reó un to ta l de 6 m a n ch a s de fo to co a g u la c ió n en la p os ic ió n de se is en pun to a lre d e d o r del n e rv io óp tico . En el d ía de la ind u cc ió n de C N V , se a d m in is tra ro n d ire c ta m e n te 50 |jg de 1E4 al h u m o r v ítreo . En el d ía 0, 3, 7, 10 y 14, los a n im a le s se so m e tie ro n a a n e s te s ia d e sp u é s de ins tilac ió n con co lir io M yd ria cy l al 1 % al o jo dere cho . Los a n im a le s re c ib ie ro n 1 ml de so lu c ió n de sal só d ica de flu o re sc e ín a al 2 % a tra vé s de una inye cc ió n en la v e n a de la cola . El fo n d o se v isu a liz ó con un o fa lm o sco p io (T R C -50 IX , T O P C O N , Jap ón ), y se ca p tu ra ro n im á g e n e s en dos m in u tos d e sp u é s de la inye cc ió n . S e d e te rm in ó la fo rm a c ió n de C N V y la e fica c ia de l fá rm a co m id ie n d o el g rad o de d ifu s ió n de la flu o re sc e n c ia en la fo to g ra fía de l fondo . Las im á g e n e s de l fo n d o se e va lu a ro n u sa n d o el p rog ra m a in fo rm á tico Im ageJ (N IH , B e th esd a , M D ) p ara c u a n tif ica r la in te ns id ad de flu o re sc e n c ia en la reg ión con C N V . En cada im agen, la in te ns id ad de flu o re sc e n c ia en la reg ión con v a so s s a n g u ín e o s n o rm a le s o sin v a so s sa n g u ín e o s se co n v irtió en el m ism o va lo r. El ca m b io en el v a lo r de C N V fina l se o b tu vo co m p a ra n d o cad a v a lo r con el de l con tro l v irgen .
El a n á lis is de los d a tos se p ro p o rc io n a en la fig u ra 6 y m u es tra q ue el a n ticu e rp o 1E4 tie n e e fe c to s in h ib id o re s so b re la fo rm a c ió n de C N V in d u c id a p o r láser.
Ejemplo 7
T ra ta m ie n to de e n fe rm e d a d e s n e u ro n a le s u sa n d o a n ticu e rp o s a n ti-c -M e t a g o n is ta s
Se sabe que las cé lu las de S ch w a n n d e se m p e ñ a n fu n c io n e s im p o rta n te s en d ive rso s a sp e c to s de l s is te m a n e rv io so ta l com o el d e sa rro llo n e rv ioso , su co n d u cc ió n (a tra vé s de m ie lin iza c ió n ) y re ge n e ra c ió n . En co n d ic io n e s p a to ló g ica s , las cé lu la s de S ch w a n n m ig ran para re m ie lin iz a r n e rv io s d a ñ a d o s (W h a lle y K a th erine , 2014 , N a t R ev N eu ro sc i.; 15 (11): 698 -99 , 2014; Je sse n K R et al., 2015, C o ld S pring H arb P e rsp e c t B io l.; 7 (7 ):a 020487 , 2015). P ara e xa m in a r el im p ac to de l a n ticu e rp o a n ti-c -M e t 1E4 sob re la m ig ra c ió n de cé lu la s de S chw an n , se cu ltiva ro n cé lu la s de S ch w a n n de ra ta (iS C ) en m e d io co m p le to que co n te n ía m e d io de E ag le m o d ifica d o p o r D u lb ecco co m p le m e n ta d o con su e ro b ov ino fe ta l (F B S ) al 10 %, g lu ta m in a , p e n ic ilin a /e s tre p to m ic in a y H E P E S . P ara el e n sa yo de m ig ra c ió n , se re cub rie ro n las p ie zas T ra n sw e ll (C o rn in g , 3422 ) con g e la tin a al 0,1 % (S igm a , G 1393 ) d u ra n te 45 m in en e s tu fa de incu b a c ió n ce lu la r (37 °C y 5 % de C O 2). Las cé lu la s de S ch w a n n de ra ta se se m b ra ro n en los co m p a rtim e n to s su p e rio re s del s is te m a T ra n sw e ll en 100 ul de m e d io co m p le to d e sp u é s de d ig e s tió n m e d ia n te tr ip s in a -E D T A al 0 ,25 %. Las cá m a ra s in fe rio re s se llen a ron con 600 j l de m e d io de c re c im ie n to co m p le to con FB S al 2 %. El s is te m a T ra n sw e ll e n to n ce s se incu bó d u ra n te 50 m in a 37 °C y 5 % de C O 2 para q ue las cé lu la s se d im e n ta ra n . P o s te rio rm e n te , el m e d io de

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. U na co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso en el tra ta m ie n to de un tra s to rn o isqu ém ico , una a po p le jía , una les ión o e n fe rm e d a d rena l, un tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin ia na , un tra s to rn o o e n fe rm e d a d n e u ro ló g ica o una herida, en la q ue d ich a co m p o s ic ió n com p re nd e : (a ) un po lip ép tid o ; y (b ) un ve h ícu lo fa rm a c é u tic a m e n te a ce p ta b le , en la que el p o lip é p tid o com p re nd e :
un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a p esad a de in m u n o g lo b u lin a q ue co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID NO: 1; y un d o m in io va r ia b le de la ca d e n a lige ra de in m u n o g lo b u lin a q ue co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID NO: 2, en la que d icho p o lip é p tid o es un a n ticu e rp o o un fra g m e n to de un ión a a n tíg e n o del m ism o, y d ich o p o lip é p tid o se une a c -M e t (fa c to r de tra n s ic ió n m e se n q u im a to sa -e p ite lia l).
2. La co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la q ue el p o lip é p tid o co m p re n d e un scFv.
3. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 2, en la q ue el s cF v co m p re n d e la se cu e n c ia de a m in o á c id o s de S E Q ID NO: 3.
4. La co m p o s ic ió n fa rm a cé u tica para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la q ue el tra s to rn o isqu ém ico se s e le cc io n a de l g ru p o q ue co n s is te en isq u e m ia de te jid o ce reb ra l, te jid o ca rd íaco , te jid o rena l o te jid o in tes tina l.
5. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la q ue la a p o p le jía es una a p o p le jía e m b ó lica o una a p o p le jía tro m bó tica .
6. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la que la les ión o e n fe rm e d a d rena l es un tra s to rn o fib ró tico .
7. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la que la les ión o e n fe rm e d a d rena l se se le cc io n a del g rup o que co n s is te en fib ro s is renal, fib ro s is rena l c ró n ica , n e fro pa tía c ró n ica a so c ia d a con d ia b e tes , lupus, e sc le ro d e rm ia de l riñón , n e fritis g lo m e ru la r, e sc le ro s is g lo m e ru la r s e g m e n ta r ia foca l, fib ro s is rena l p o r n e fro pa tía de IgA a so c ia d a con e n fe rm e d a d rena l c ró n ica (C K D ) hum ana , n e fro p a tía p ro g re s iva c ró n ica (C P N ), fib ro s is tu b u lo in te rs tic ia l, o b s tru cc ió n ure te ra l, u rem ia c ró n ica , n e fritis in te rs tic ia l c ró n ica , n e fro p a tía p o r rad iac ión , g lo m e ru lo e sc le ro s is , g lo m e ru lo n e fro s is p ro g re s iva (P G N ), les ión p o r m ic ro a n g io p a tía e n d o te lia l/tro m b ó tica , n e fro pa tía a so c ia d a al V IH , y una fib ro s is a so c ia d a con e xp o s ic ió n a una to x in a , un irr ita n te o un a g e n te q u im io te rá p ico .
8. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la que el tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin ia n a e stá p ro vo ca d o p o r un m ie m b ro s e le cc io n a d o de l g rup o q ue co n s is te en d e g e n e ra c ió n m acu la r, h is to p la sm o s is , m io p ía pa to ló g ica , e s tría s ang io id es , n e u ro p a tía ó p tica isq u é m ica a n te rio r, e n d o ca rd itis b ac te ria n a , e n fe rm e d a d de Best, re tin o co ro id o p a tía en p e rd ig o n a d a , h e m a n g io m a co ro id eo , n evos co ro id eo s, a u se n c ia de p e rfu s ió n co ro id ea , o s te o m a s co ro id eo s, ro tu ra co ro id ea , co ro id e re m ia , d e sp re n d im ie n to de re tina crón ico , co lo b o m a de la re tina , d rusas, e n d o fta lm itis e n d ó g e n a p o r Candida, h a m a rto m a s e x tra p a p ila re s de l e p ite lio p ig m e n ta d o de la re tina , fo n d o fla v im a cu la d o , o rific io m a cu la r id io p á tico , m e la n o m a m a ligno , g lo m e ru lo n e fr it is m e m b ra n o p ro life ra tiva (d e tip o II), cu e rp o s e xó g e n o s in tra o cu la re s m e tá licos , s ín d ro m e de p ap ila de d o n d ie g o de día, s ín d ro m e de m a n ch a s b la n ca s e va n e sce n te s m ú ltip le s (M E W D S ), n e o va scu la r iza c ió n en la ora serra ta , q u e m a d u ra p o r m ic ro sco p io q u irú rg ico , fo se ta s de la p ap ila óp tica , fo to co a g u la c ió n , co ro id o p a tía in te rn a in te rm ite n te , rubéo la , sa rco ido s is , c o ro id itis se rp e n tin a o g eo g rá fica , d re n a je de líqu ido sub re tin ia n o , s ín d ro m e de p ap ila inc linada , re tin o co ro id itis p o r Taxoplasma, tu b e rcu lo s is , s ín d ro m e de V o g t-K o ya n a g i-H a ra d a , re tin o p a tía d ia b é tica , re tino pa tía no d ia b é tica , o c lu s ió n de la ve n a del ram o, o c lu s ió n de la ve n a re tin ia n a cen tra l, re tin o p a tía en re c ién n ac ido s p rem a tu ros , ru b e o s is del iris, g la u co m a n eo va scu la r, te la n g ie c ta s ia pe rio fove a l, re tin o p a tía de cé lu la s fa lc ifo rm es , e n fe rm e d a d de Eale, va sc u lit is re tin iana , e n fe rm e d a d de von H ip p e l-L in a u , re tin o p a tía de ra d ia c ión , c rio le s ió n re tin iana , re tin itis p ig m e n ta ria , co lo b o m a re tin o co ro id e o , n e o va scu la r iza c ió n de la có rn e a d e b id a a q u e ra titis p o r h e rpes s im p le , ú lce ra s co rn e a le s , q u e ra to p la s tia , te r ig io y tra u m a tism o .
9. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la que el tra s to rn o de n e o va scu la r iza c ió n re tin ia n a es n e o va scu la r iza c ió n co ro idea .
10. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la que el tra s to rn o o e n fe rm e d a d n e u ro ló g ica se se le cc io n a de l g rup o q ue co n s is te en les ión ce re b ra l tra u m á tica , a po p le jía , a n e u rism a cereb ra l, les ión de la m é d u la esp ina l, e n fe rm e d a d de P ark inson , e sc le ro s is la te ra l a m io tró fica , e n fe rm e d a d de A lzh e im e r, a tro fia co rtica l c e re b ra l d ifusa , d e m e n c ia con cu e rp o s de Lew y, e n fe rm e d a d de P ick, d e m e n c ia m e so lim b o co rtica l, d e g e n e ra c ió n ta lá m ica , co rea de H un tin g to n , d e g e n e ra c ió n co rtica l-e s tr ia ta l-m e d u la r, d e g e n e ra c ió n g a n g lio n a r co rtica l-b a sa l, d e g e n e ra c ió n ce re b ro ce re b e lo sa , d e m e n c ia h e re d ita ria con p a ra p a re s ia esp ás tica , e n fe rm e d a d de cu e rp o s de p o lig lu co sa n o , s ín d ro m e de S h y -D ra g e r, a tro fia o livo p o n to ce re b e lo sa , p a rá lis is s u p ra n u c le a r p rog re s iva , d is to n ía m u scu la r d e fo rm a n te , e n fe rm e d a d de H a lle rvo rd e n -S p a tz , s ín d ro m e de M e ige , te m b lo re s h e re d ita rio s , s ín d ro m e de G ille s de la T o u re tte , co rea a ca n to c ítica , a ta x ia de F ried re ich , a tro fia ce re b e lo sa co rtica l h e re d ita ria de H o lm es, e n fe rm e d a d de G e rs tm a n n -S tra u ss le r-S ch e in ke r, a tro fia m u scu la r v e rte b ra l p rog re s iva , p a rá lis is b u lb a r prog re s iva , e sc le ro s is la te ra l p rim aria , a tro fia m u sc u la r h e re d ita ria , p a ra p le jia e sp ás tica , a tro fia m u scu la r peronea l, p o lin e u ro p a tía in te rs tic ia l h ip e rtró fica , h e re d o p a tía a tá c tica p o lin e u ritifo rm e , n e u ro p a tía óp tica , o fta lm o p le g ia y d añ o en la re tina o el n e rv io óptico.
11. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la q ue la h e rida es una h e rida m e cá n ica , q u ím ica , b a c te ria n a o té rm ica .
12. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la q ue la h e rida se se le cc io n a del g rup o que co n s is te en una inc is ión , una lace ra c ió n , una a b ra s ión , una h e rida p un za n te , una h e rida p e n e tra n te y una h e rida de bala.
13. La co m p o s ic ió n fa rm a c é u tic a para su uso de a cu e rd o con la re iv in d ica c ió n 1, en la que la h erid a es una h erid a en la piel.
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