ES2848724T3 - Compuestos dinucleotídicos cíclicos - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula I **(Ver fórmula)** donde R1 se selecciona del grupo que consiste en H, F, -O-alquiloC1-3 y OH, y R2 es H, o R2 es -CH2- y R1 es -O-, formando en conjunto un puente -CH2-O-, y R3 es una nucleobase de purina seleccionada del grupo que consiste en purina, adenina, guanina, xantina, hipoxantina, conectada a través de su nitrógeno N9, los solvatos e hidratos del mismo, o una sal del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Compuestos dinucleotídicos cíclicos

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos dinucleotídicos cíclicos novedosos ("CDNs") de fórmula I, incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables, que presentan la imidazopiridazinona de nucleobases no purina, una nucleobase de purina y un resto 2',5' fosforotioato no canónico e inducen la producción de citoquinas. La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas y combinaciones que contienen los compuestos de la presente invención, y su uso médico para el tratamiento de enfermedades asociadas con o moduladas por STING (Estimulador del Genes de Interferón, en inglés “Stimulator of Interferon Genes”). Particularmente, las composiciones farmacéuticas de la invención son adecuadas para el tratamiento de la inflamación, enfermedades alérgicas y autoinmunitarias, enfermedades infecciosas, cáncer y como adyuvantes de vacunas.

Antecedentes de la invención

El rol del sistema inmunitario consiste en proteger al cuerpo de los patógenos y las células malignas. Sin embargo, los virus y las células cancerígenas encuentran la manera de evadir el sistema inmunitario. El objetivo de las inmunoterapias es, por ende, iniciar una respuesta inmunitaria específica para un antígeno o reactivar una respuesta preexistente en ciertos tipos celulares del sistema inmunitario contra los invasores patógenos o células cancerosas.

El sistema inmunitario consiste en diversos linajes especializados que pueden agruparse a groso modo en dos grupos, el sistema inmunitario innato y el adaptativo. Para una reacción inmunitaria exitosa, los linajes de ambos grupos deben actuar en sintonía. El rol principal del sistema inmunitario innato consiste en montar una rápida respuesta inmunitaria contra los patógenos o células malignas la cual, a diferencia del sistema adaptativo, no es específica a un antígeno y de larga duración. Además de la matanza directa de los patógenos o células transformadas, el sistema inmunitario innato activa además y posteriormente dirige el sistema inmunitario adaptativo. Las células presentadoras de antígenos tales como las células dendríticas capturan y presentan antígenos en forma de un complejo péptido - complejo mayor de histocompatibilidad (MHC, por sus siglas en inglés) complejado a linfocitos T en tejidos linfoides. Esta presentación de antígenos junto con la secreción de ciertas citoquinas conduce a la activación y diferenciación de linfocitos T CD4 y CD8 efectores específicos para un antígeno. La producción de interferón (IFN) tipo I por células presentadoras de antígenos, y otros tipos de células, es considerada un evento clave en la activación de linfocitos T ya que la falta de IFN tipo I dio como resultado una respuesta inmunitaria dependiente de linfocitos T reducida contra infecciones virales o células tumorales (Zitvogel et al, Nature Reviews Immunology 15, 405 - 414, 2015). Por otro lado, la presencia de una firma de IFN tipo I durante el tratamiento contra el cáncer se asocia con el aumento de las cantidades de linfocitos T de infiltración tumoral y con un resultado clínico potencialmente favorable (Sistigu et al, Nature Medicine 20, 1301 - 1309, 2014). Estudios recientes en ratones han demostrado que la secreción eficaz de IFN tipo I en el microentorno tumoral y la inducción de una respuesta inmunitaria dependiente de linfocitos T contra las células cancerígenas depende de la presencia de la proteína adaptativa estimuladora de genes de interferón (STING, también conocida como Tmem173, MPYS, MITA, ERIS)(Woo et al, Immunity 41, 5, 830 - 842, 2014; Corrales et al, Cell Reports 11, 1018 - 1030, 2015; Deng et al, Immunity 41, 5, 843 - 852, 2014). Se destacó la importancia de la presencia de IFN tipo I por el hecho de que la deleción de STING dio como resultado niveles reducidos de IFN tipo I en el microentorno tumoral y un efecto antitumoral reducido en diversos modelos tumorales de ratón. Por otro lado, la activación específica de STINg dio como resultado una mejora de la respuesta inmunitaria de los linfocitos T específica para un antígeno contra las células cancerígenas. STING pertenece a la familia de sensores de ácido nucleico y es el adaptador para la señalización del ADN citosólico. En su estado basal STING existe como un dímero con su dominio N terminal fijado en el ER y residiendo el dominio C-terminal en el citosol. Los dinucleótidos cíclicos (CDNs), generados por la proteína GMP-AMP Sintasa cíclica (cGAS) son los ligandos naturales de STING (Ablasser et al, Nature 498, 380 - 384, 2013). La unión de los CDNs a STING induce cambios conformacionales lo cual permite la unión y la activación de la quinasa de unión a TANK (TBK1) y el factor regulador de interferón 3 (IRF3) y la relocalización del ER a endosomas perinucleares (Liu et al, Science 347, Issue 6227, 2630-1 - 2630-14, 2015). La fosforilación del factor de transcripción Ir F3 y NF-kB por TBK1 da lugar a la expresión de múltiples citoquinas incluyendo IFN tipo I.

Dada la importancia de IFN tipo I en diversas enfermedades malignas incluyendo las infecciones virales y el tratamiento contra el cáncer, las estrategias que permiten la activación específica de STING son de interés terapéutico.

WO 2014/189805 describe compuestos dinucleótidos cíclicos que presentan dos nucleobases de purina y al menos un resto 2',5' fosfodiéster no canónico o fosforotioato e inducen la producción de citoquinas dependiente de STING.

WO 2015/185565 describe compuestos dinucleótidos cíclicos que presentan dos nucleobases de purina, uno o dos anillos de ciclopentano en lugar de ribosa tetrahidrofurano y un resto 2',5' fosfodiéster no canónico y modulan STING.

WO 2016/120305 describe compuestos dinucleótidos cíclicos que presentan dos nucleobases de purina, un resto ribosa en el cual el 2'-OH es reemplazado con un 2'-F y un resto 2',5' fosfodiéster no canónico y modulan STING.

US 2014/0329889, WO 2014/099824, WO 2015/017652, Cell 154, 748-762 (2013), y Molecular Cell 51, 226-235 (2013) describen el dinucleótido cíclico 2'3'-cGAMP ([G(2',5')pA(3',5')p] cíclico) el cual presenta dos nucleobases de purina, un resto 3',5' canónico y un resto 2',5' fosfodiéster no canónico. El 2'3'-cGAMP no canónicamente ligado se une a STING humana con afinidad superior en comparación con 3'3'-cGAMP canónicamente ligado o c-di-GMP bacteriano simétrico e induce la producción de interferón tipo I. WO 2014/093936 describe compuestos dinucleótidos cíclicos que presentan dos nucleobases de purina y dos restos 3',5' fosfodiéster o fosforotioato canónicos e inducen la producción de citoquinas dependiente de STING.

US 7.709.458 describe compuestos dinucleótidos cíclicos que presentan dos nucleobases de purina y dos restos 3',5' fosfodiéster canónicos y se pueden utilizar para inhibir la proliferación de células cancerígenas o para aumentar la apoptosis de células cancerígenas, en particular el CDN c-di-GMP bacteriano simétrico.

US 7.592.326 describe compuestos dinucleótidos cíclicos inmunoestimuladores que presentan dos nucleobases de purina y dos restos 3',5' fosfodiéster canónicos, en particular el CDN c-di-GMP bacteriano simétrico.

WO 2016/096174 y WO 2016/145102 describen compuestos dinucleótidos cíclicos que presentan dos nucleobases de purina y dos restos 3',5' fosfodiéster o fosforotioato canónicos e inducen la producción de citoquinas dependientes de STING. Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 5631-5634 describe análogos inmunoestimuladores mono- y bifosforotioato de CDN bacteriano simétrico c-di-GMP.

Síntesis de la invención

En un primer aspecto, la invención proporciona compuestos dinucleótidos cíclicos de fórmula I

donde

R1 se selecciona del grupo que consiste en H, F, -O-alquilo-C-i^-3 y OH, y

R2 es H, o

R2 es -CH²- y R1 es -O-, formando en conjunto un puente -CH²-O-("Ácido Nucleico Bloqueado"; "ANB"), y

R3 es una nucleobase de purina seleccionada del grupo que consiste en purina, adenina, guanina, xantina, hipoxantina, conectada a través de su nitrógeno N9;

los tautómeros, estereoisómeros, solvatos, hidratos y las sales de los mismos, particularmente las sales fisiológicamente aceptables de los mismos con bases inorgánicas u orgánicas, o las combinaciones de los mismos.

En un aspecto adicional, la invención proporciona nuevos compuestos de fórmula I, incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables, los cuales inducen la producción de citoquina en forma dependiente de STING in vitro y/o in vivo y los cuales poseen propiedades farmacológicas y farmacocinéticas adecuadas para utilizar en terapia, es decir, para utilizar como medicamentos.

En un aspecto adicional, la invención proporciona nuevos compuestos de fórmula I, incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables, para utilizar en el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con o modulada por STING.

En un aspecto adicional, la invención proporciona nuevos compuestos de fórmula I, o sus sales farmacéuticamente aceptables, para el tratamiento de la inflamación, las enfermedades alérgicas o autoinmunitarias, por ejemplo de la rinitis alérgica o el asma, para el tratamiento de enfermedades infecciosas o de un cáncer, o para el uso como adyuvantes de vacunas.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con o modulada por STING, en un sujeto que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, al sujeto.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para el tratamiento de la inflamación, las enfermedades alérgicas o autoinmunitarias, por ejemplo la rinitis alérgica o el asma, para el tratamiento de enfermedades infecciosas o de un cáncer, en un paciente que lo necesita, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable al paciente.

En un aspecto adicional, la invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

En un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I, incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables, en la fabricación de un medicamento para utilizar en el tratamiento de una enfermedad o afección en la cual la modulación de STING es beneficiosa o para utilizar en el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con o modulada por STING.

En un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I, o sus sales farmacéuticamente aceptables, en la manufactura de un medicamento para utilizar en el tratamiento de la inflamación, enfermedades alérgicas o autoinmunitarias, por ejemplo la rinitis alérgica o el asma, para el tratamiento de enfermedades infecciosas o de un cáncer, o para el uso como adyuvantes de vacunas.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una combinación que comprende un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y al menos un agente terapéutico adicional.

Un objetivo adicional de la presente invención consiste en proporcionar una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y al menos un agente terapéutico adicional y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una combinación que comprende un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y al menos un agente terapéutico adicional para utilizar en terapia.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una combinación que comprende un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y al menos un agente terapéutico adicional para utilizar en el tratamiento de una enfermedad o afección en la cual la modulación de STING es beneficiosa o para utilizar en el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con o modulada por STING.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una combinación que comprende un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y al menos un agente terapéutico adicional para utilizar en el tratamiento de la inflamación, enfermedades alérgicas y autoinmunitarias, enfermedades infecciosas y cáncer.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para el tratamiento de una enfermedad o afección en la cual la modulación de STING es beneficiosa o de una enfermedad o afección asociada con o modulada por STING, en un paciente, que comprende la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y al menos un agente terapéutico adicional. En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para el tratamiento de la inflamación, las enfermedades alérgicas o autoinmunitarias, enfermedades infecciosas o cáncer, en un paciente, que comprende la administración al paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación que comprende un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, y al menos un agente terapéutico adicional.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un adyuvante de vacunas que comprende un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una composición inmunogénica que comprende un antígeno o composición antigénica y un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una composición inmunogénica que comprende un antígeno o composición antigénica y un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, para utilizar en el tratamiento o prevención de una enfermedad.

En un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, para la manufactura de una composición inmunogénica que comprende un antígeno o composición antigénica, para el tratamiento o prevención de una enfermedad.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para el tratamiento o prevención de una enfermedad que comprende la administración a un ser humano que padece o que es susceptible de padecer una enfermedad, de una composición inmunogénica que comprende un antígeno o composición antigénica y un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable.

En un aspecto adicional, la invención proporciona una composición de vacuna que comprende un antígeno o composición antigénica y un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, para utilizar en el tratamiento o prevención de una enfermedad.

En un aspecto adicional, la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable, para la manufactura de una composición de vacuna que comprende un antígeno o composición antigénica, para el tratamiento o prevención de una enfermedad.

En un aspecto adicional, la invención proporciona un método para el tratamiento o prevención de una enfermedad que comprende la administración a un ser humano que padece o que es susceptible de padecer una enfermedad, de una composición de vacuna que comprende un antígeno o composición antigénica y un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable.

Otros objetivos de la presente invención serán evidentes para el experto en la técnica a partir de la descripción que antecede y de la descripción que sigue y los ejemplos.

Los compuestos de la presente invención exhiben diversas ventajas, tales como afinidad de unión favorable a STING humana, actividad celular favorable, es decir, en células que portan alelos diferentes de STING humana, estabilidad favorable en ensayos celulares, y propiedades farmacocinéticas (PK) favorables.

Descripción Detallada

A menos que se indique lo contrario, R1, R2 y R3 son definidos según lo antes mencionado y según lo mencionado a continuación. Algunos significados preferidos de sustituyentes individuales de los compuestos de acuerdo con la invención serán brindados a continuación. Cualquiera y cada una de estas definiciones pueden combinarse entre sí.

R1 y R2:

En una primera realización R1 y R2 se definen como se mencionó anteriormente.

En otra realización R1 y R2 ambos son H.

En aún otra realización R1 es F y R2 es H.

En aún otra realización R1 es -OH y R2 es H.

En aún otra realización R1 es -OCH³ y R2 es H.

En aún otra realización R1 es -O- y R2 es -CH²-, formando en conjunto un puente -O-CH².

R3:

En una primera realización R3 se define como se mencionó anteriormente.

En otra realización R3 es purina, conectada a través de su nitrógeno N9.

En otra realización R3 es adenina, conectada a través de su nitrógeno N9

En aún otra realización R3 es guanina, conectada a través de su nitrógeno N9

En aún otra realización R3 es xantina, conectada a través de su nitrógeno N9

En aún otra realización R3 es hipoxantina, conectada a través de su nitrógeno N9

La siguiente tabla representa otras realizaciones especificadas I-1 a I-16 de los compuestos de fórmula I:

Una subestructura preferida de compuestos de acuerdo con la invención se muestra en la fórmula la,

donde R1 y R2 así como también sus realizaciones se definen según lo descrito anteriormente. Una subestructura preferida de compuestos de acuerdo con la invención se muestra en la fórmula Ib,

donde R1 y R2 así como también sus realizaciones se definen según lo descrito anteriormente. Los siguientes compuestos de acuerdo con la invención son especialmente preferidos:

y

sus tautómeros y estereoisómeros, sus sales, especialmente sus sales fisiológicamente aceptables con bases inorgánicas u orgánicas, sus solvatos o hidratos.

Los compuestos de la presente invención poseen átomos de fósforo quiral con configuración Rp o Sp. Todos los estereoisómeros de los compuestos de fórmula general I, la, Ib, Ia.1, Ia.2, Ia.3 e Ib.1, ya sea en forma sustancialmente pura o como las mezclas de los mismos, están cubiertos por la presente invención. Los compuestos de fórmula general I, la, Ib, la.1, la.2, la.3 e Ib.1 como estereoisómeros (Rp,Rp), (Rp,Sp), (Sp,Rp) o (Sp,Sp) sustancialmente puros son preferidos, especialmente el estereoisómero (Rp,Rp) sustancialmente puro, es decir, ambos átomos de fósforo tienen la configuración Rp.

Los compuestos de acuerdo con la invención sus sus compuestos intermedios pueden obtenerse utilizando métodos de síntesis los cuales son conocidos por el experto en la técnica y son descritos en la bibliografía técnica de la síntesis orgánica. Preferentemente, los compuestos se obtienen de manera análoga a los métodos de preparación explicados en forma más detallada a continuación, en particular según lo descrito en la sección experimental. En algunos casos, la secuencia adoptada para llevar a cabo los esquemas de reacción puede variar. También pueden usarse las variantes de estas reacciones que son conocidas por el experto en la técnica, pero que no se describen en detalle en la presente invención. Los procesos generales para preparar los compuestos de acuerdo con la invención serán evidentes para el experto al estudiar los esquemas que aparecen a continuación. Los compuestos de partida están disponibles en el mercado o se pueden preparar mediante métodos que son descritos en la bibliografía técnica o en la presente invención, o se pueden preparar de la misma manera o de manera similar. Antes de llevar a cabo la reacción, cualquiera de los grupos funcionales correspondientes en los compuestos puede ser protegido utilizando grupos protectores convencionales. Estos grupos protectores pueden ser escindidos nuevamente en una etapa adecuada dentro de la secuencia de reacción utilizando métodos conocidos por el experto en la técnica.

Los dinucleótidos cíclicos descritos en la presente invención pueden ser preparados según lo descrito en detalle a continuación, o mediante otros métodos conocidos los los expertos en la técnica. Una persona con conocimientos normales de la técnica entenderá que estos esquemas no son de ningún modo limitativos y que pueden realizarse variaciones de los detalles sin apartarse de la presente invención.

Los compuestos dinucleótidos cíclicos pueden ser obtenidos mediante métodos descritos en Chem. Rev. 113, 7354-7401 (2013), Org. Lett., 12, 3269-3271 (2010), Tetrahedron 49, 1115-1132 (1993), WO 2014/189805, WO 2016/096174, WO 2015/185565, WO 2016/145102 o WO 2016/120305 y las referencias citadas en dichos documentos.

El término "grupo protector" en el presente contexto, y a menos que se defina lo contrario, se refiere a un grupo químico funcional que está unido a un átomo de oxígeno, nitrógeno o fósforo para evitar la reacción adicional de ese átomo, o con otros fines. Los expertos en la técnica de la síntesis orgánica conocen una amplia variedad de grupos protectores, y son descritos, por ejemplo, en "Protective Groups in Organic Synthesis" por T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Tercera Edición, 1999.

Los compuestos de formula (I) y sus sales pueden ser preparados mediante la metodología descrita a continuación, la cual constituye otros aspectos de la presente invención.

Los expertos en la técnica reconocerán que cada uno de los restos fosforotioato en la fórmula (I) puede existir en la configuración R (R^p) o en la configuración S (Sp). La metodología descrita a continuación puede proporcionar hasta cuatro diastereómeros con respecto a los átomos de fósforo los cuales pueden ser separados mediante métodos cromatográficos conocidos por el experto en la técnica, por ejemplo cromatografía líquida de alta presión con sistemas de disolventes adecuados y columnas en diferentes etapas de la síntesis. En algunos casos, por ejemplo cuando una etapa de sulfuración procede de forma diastereoselectiva, la metodología descrita a continuación puede proporcionar preferentemente solamente dos diastereómeros los cuales pueden ser separados mediante métodos cromatográficos conocidos por el experto en la técnica en diferentes etapas de la síntesis.

Se entiende que los sustituyentes no especificados explícitamente dentro de los siguientes métodos de preparación cubren las definiciones mencionadas anteriormente en la presente invención bajo el encabezado Síntesis de la invención. Un compuesto de fórmula

donde R4 y opcionalmente R1 son OH, puede ser preparado por desprotección de un compuesto de fórmula (II),

donde R41 y opcionalmente R11 es oxígeno que porta un grupo protector adecuado, tal como ferc-butildimetilsililo (TBS). Por ejemplo, R11 es H, F, O-alquilo o OTBS o, junto con R2, forma un puente -CH²-O-, y R41 es OTBS. Por ejemplo, un compuesto de fórmula (II) es disuelto en un disolvente adecuado, por ejemplo piridina, tratado con una mezcla de trifluorohidrato de trietilamina y trietilamina y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20-60°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 1-6 horas.

Un compuesto de fórmula (II) puede ser preparado mediante desprotección de un compuesto de fórmula (III),

donde R31 denota NH que porta un grupo protector adecuado, tal como benzoílo, y R32 denota H ("adenina protegida") o

R31 denota OH y R32 denota NH que porta un grupo protector adecuado, tal como /so-butirilo ("guanina protegida") o R31 denota OH y R32 denota H ("hipoxantina") o

R3.1 y R3.2 ambos denotan H ("purina").

Por ejemplo, un compuesto de fórmula (III) es disuelto en una mezcla adecuada, por ejemplo metilamina o amoníaco acuoso en metanol o etanol, y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20-60°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 1-24 horas.

Un compuesto de fórmula (III) puede ser preparado mediante ciclación y posterior sulfuración de un compuesto de fórmula (IV), donde R2, R31 ,R3Z, R11 y R41 son definidos según lo mencionado anteriormente:

Por ejemplo, un compuesto de fórmula (IV) es disuelto en un disolvente adecuado, por ejemplo piridina, y tratado con un reactivo de acoplamiento adecuado, por ejemplo 2-óxido de 2-cloro-5, 5-dimetil-1,3,2-dioxafosforinano (DMOCP) o cloruro de pivaloílo o cloruro de adamantoílo, y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 0,1-2 horas. Se templa la reacción de ciclación por tratamiento con un reactivo de sulfuración adecuado, por ejemplo, 3H-1,2-benzoditiol-3-ona o azufre elemental, y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 0,1-2 horas.

Un compuesto de fórmula (IV) puede ser preparado mediante acoplamiento de un compuesto de fórmula (V) con un compuesto de fórmula (VI), donde R2, R31, R3Z, R11 y R41 son definidos según lo mencionado anteriormente:

Por ejemplo, un compuesto de fórmula (VI) es disuelto en un disolvente adecuado, por ejemplo acetonitrilo, y es tratado con una solución de un compuesto de fórmula (V) disuelto en un disolvente adecuado, por ejemplo acetonitrilo, opcionalmente en presencia de un reactivo de acoplamiento adecuado, por ejemplo tetrazol, Activator 42® (solución activadora, que contiene 5-(3,5- bis(trifluorometil)fenil)-1 H-tetrazol en acetonitrilo), dicloroacetato de piridinio o trifluoroacetato de piridinio (o las mezclas de reactivos de acoplamiento), y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 0,1-2 horas. Se templa la reacción de acoplamiento mediante tratamiento con un reactivo de sulfuración adecuado, por ejemplo, 3-((N,N-dimetilaminometilideno)amino)-3H-1,2,4-ditiazol-3-tiona (DDTT) o disulfuro de fenilacetilo (PADS) o 1,1 -dióxido de 3H- 1,2-benzoditiol-3-ona (reactivo de Beaucage), y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 0,1-2 horas. Después de la evaporación del disolvente, el residuo es disuelto en un disolvente adecuado, por ejemplo una mezcla de diclorometano y agua, y es tratado con un reactivo adecuado, por ejemplo ácido dicloroacético, y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 0,1-2 horas. Se obtiene una solución que contiene el producto (IV) mediante la adición de un disolvente adecuado, por ejemplo piridina, y concentración mediante evaporación.

Un compuesto de fórmula (V) puede ser preparado mediante reacción de un compuesto de fórmula (VII), donde R2, R31 ,R32., R11 y R41 son definidos según lo mencionado anteriormente:

Por ejemplo, un compuesto de fórmula (VII) se disuelve en una mezcla adecuada, por ejemplo acetonitrilo que contiene agua, y se trata con trifluoroacetato de piridinio, y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 1-30 minutos. Luego se agrega ferc-butilamina y se agita la mezcla a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 0,1-1 hora. Se aísla el producto mediante evaporación del disolvente y luego se disuelve en un disolvente adecuado, por ejemplo diclorometano que contiene agua, y se trata con ácido dicloroacético y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 0,1-1 hora. Se obtiene una solución concentrada del producto (V) en acetonitrilo, por ejemplo, mediante la adición de piridina seguida por destilación azeotrópica de la mezcla con acetonitrilo.

Un compuesto de fórmula (VI) puede ser preparado mediante reacción de un compuesto de fórmula (VIII), donde R41 se define como se mencionó anteriormente:

Por ejemplo, después de la destilación azeotrópica con un disolvente adecuado, por ejemplo acetonitrilo, se disuelve un compuesto de fórmula (VIII) en un disolvente adecuado, por ejemplo diclorometano, y se hace reaccionar con un reactivo de fosfitilación, por ejemplo N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita de 2-cianoetilo, en presencia de un activador, por ejemplo 1H-tetrazol, y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 1-48 horas.

Un compuesto de fórmula (VIII) puede ser preparado mediante reacción de un compuesto de fórmula (IX):

Por ejemplo, se disuelve un compuesto de fórmula (IX) en un disolvente adecuado, por ejemplo, piridina, y se hace reaccionar con un reactivo de sililación adecuado, por ejemplo cloruro de ferc-butildimetilsililo, en presencia de una base adecuada, por ejemplo imidazol, y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 1-48 horas. Se aíslan los productos 2' y 3'-sililados regioisoméricos después de una elaboración acuosa y se pueden separar, por ejemplo mediante cromatografía de gel de sílice con sistemas disolventes adecuados. Un compuesto de fórmula (IX) puede ser preparado mediante reacción de un compuesto de fórmula (X):

Por ejemplo, se disuelve un compuesto de fórmula (X) en un disolvente adecuado, por ejemplo piridina, y se hace reaccionar con cloruro de 4,4-dimetoxitritilo, y se agita a una temperatura adecuada, por ejemplo 20°C, durante un período de tiempo adecuado, por ejemplo 1-48 horas.

Los compuestos de fórmula general I, o sus compuestos intermedios sintéticos, pueden ser resueltos en sus diastereómeros según lo mencionado a continuación. Las mezclas diastereoméricas de los compuestos de fórmula general I pueden ser resueltas en sus diastereómeros aprovechando sus propiedades físico-químicas diferentes utilizando métodos conocidos per se, por ejemplo, cromatografía y/o cristalización fraccionada.

Según lo mencionado anteriormente, los compuestos de formula I pueden ser convertidos en sales, especialmente para uso farmacéutico en las sales farmacéuticamente aceptables.

Los compuestos de acuerdo con la invención también se pueden obtener, ventajosamente, utilizando los métodos descritos en los ejemplos que siguen, que también pueden combinarse con este fin con métodos conocidos por el experto de la bibliografía técnica.

Términos y definiciones

A los términos que no se definen específicamente en la presente invención se les dará el significado que les daría un experto en la técnica a la luz de la divulgación y el contexto. Sin embargo, como se utilizan en la memoria descriptiva, a menos que se especifique lo contrario, los siguientes términos tienen el significado indicado y y se adhieren a las siguientes convenciones.

Los términos "compuesto (s) de acuerdo con esta invención", "compuesto(s) de fórmula (I)", "compuesto (s) de la invención" y términos similares denotan los compuestos de la fórmula (I) de acuerdo con la presente invención incluyendo sus tautómeros, estereoisómeros y las mezclas de los mismos y las sales de los mismos, en particular las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y los solvatos e hidratos de dichos compuestos, incluyendo los solvatos e hidratos de dichos tautómeros, estereoisómeros y las sales de los mismos.

Los términos "tratamiento" y "tratar" abarcan ambos el tratamiento preventivo, es decir profiláctico, o terapéutico, es decir curativo y/o paliativo. Por lo tanto, los términos "tratamiento" y "tratar" comprenden el tratamiento terapéutico de pacientes que ya han desarrollado dicha afección, en particular en forma manifiesta. El tratamiento terapéutico puede ser un tratamiento sintomático para aliviar los síntomas de la enfermedad específica o un tratamiento causal para revertir o revertir parcialmente las condiciones de la enfermedad o para detener o ralentizar el progreso de la enfermedad. Por lo tanto, las composiciones y los métodos de la presente invención pueden usarse por ejemplo como tratamiento terapéutico durante un período de tiempo así como también para el tratamiento crónico. Adicionalmente, los términos "tratamiento" y "tratar" comprenden el tratamiento profiláctico, es decir, un tratamiento de los pacientes que corren el riesgo de desarrollar una afección mencionada anteriormente, reduciendo así dicho riesgo.

Cuando esta invención hace referencia a pacientes que requieren tratamiento, se refiere principalmente al tratamiento en mamíferos, especialmente en seres humanos.

El término "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un compuesto de la presente invención que (i) trata o previene la enfermedad o afección particular, (ii) atenúa, alivia o elimina uno o más síntomas de la enfermedad o afección particular, o (iii) previene o retrasa el inicio de uno o más síntomas de la enfermedad o afección particular descrita en la presente invención.

Los términos "modulado" o "modular", o "modula(n)", en el presente contexto, a menos que se indique lo contrario, se refieren a la activación de la vía de STING con uno o más compuestos de la presente invención, en este caso que representan los agonistas de STING.

Los términos "mediado" o "mediación" o "mediar', en el presente contexto, a menos que se indique lo contrario, se refieren al (i) tratamiento, incluyendo la prevención de la enfermedad o afección particular, (ii) atenuación, alivio o eliminación de uno o más síntomas de la enfermedad o afección particular, o (iii) prevención o retraso del inicio de uno o más síntomas de la enfermedad o afección particular descrita en la presente invención.

Si un compuesto de la presente invención es representado en forma de un nombre químico y como una fórmula en caso de cualquier discrepancia la fórmula prevalecerá.

Puede utilizarse un asterisco en las subfórmulas para indicar el enlace que está conectado a la molécula núcleo según lo definido.

A menos que se indique específicamente, a lo largo de la memoria descriptiva y de las reivindicaciones adjuntas, una fórmula química determinada o nombre abarcará a los tautómeros y a todos los estereoisómeros, los isómeros ópticos y geométricos (por ejemplo, los enantiómeros, los diastereómeros, los isómeros E/Z etc.) y los racematos de los mismos así como también las mezclas de diferentes proporciones de los enantiómeros individuales, las mezclas de diastereómeros, o las mezclas de cualquiera de las formas antes mencionadas donde existen dichos isómeros y enantiómeros, así como también las sales, incluyendo sus sales farmacéuticamente aceptables y los solvatos de los mismos tal como por ejemplo los hidratos incluyendo los solvatos de los compuestos libres o los solvatos de una sal del compuesto.

El término "sustancialmente puro" en el presente contexto con respecto a los compuestos de fórmula general I se refiere a un diastereómero (Rp,Rp), (Rp,Sp), (Sp,Rp) o (Sp,Sp) el cual es al menos 90% puro en relación con los otros posibles diastereómeros con respecto a los átomos de fósforo. En realizaciones preferidas, un compuesto sustancialmente puro de fórmula general I es al menos 95% puro, al menos 97% puro y al menos 99% puro.

La frase "farmacéuticamente aceptable" se utiliza en la presente invención para hacer referencia a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del criterio médico juicioso, adecuados para utilizar en contacto con los tejidos de los seres humanos y animales sin causar toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica y otro problema o complicación, y acorde con una relación razonable riesgo / beneficio.

En el presente contexto, "sales farmacéuticamente aceptables" se refieren a los derivados de los compuestos descritos donde el compuesto parental es modificado preparando sus sales con bases. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden ser sintetizadas a partir del compuesto parental el cual contiene un resto ácido mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales pueden ser preparadas haciendo reaccionar las formas ácidas libres de estos compuestos con una cantidad suficiente de la base apropiada en agua o en un diluyente orgánico tal como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo, o una mezcla de los mismos. Alternativamente, se pueden preparar las sales por intercambio iónico, por ejemplo tratando las soluciones acuosas de los compuestos de la invención (forma de ácido libre o sal) con un intercambiador catiónico.

Actividad Farmacológica

Los compuestos de acuerdo con la presente invención exhiben afinidad de unión favorable a STING humana. La afinidad de unión puede determinarse, por ejemplo, mediante ensayo de unión por competencia basada en el ensayo de centelleo por proximidad (SPA, por sus siglas en inglés) según lo descrito en Nat. Chem. Biol. 10, 1043-1048 (2014). Alternativamente, se puede determinar la afinidad de unión, por ejemplo, por calorimetría de titulación isotérmica (ITC, por sus siglas en inglés) según lo descrito en Molecular Cell 51, 226-235 (2013). Alternativamente, se puede determinar la afinidad de unión, por ejemplo, mediante resonancia de plasmón superficial (SPR, por sus siglas en inglés) según lo descrito en WO 2016/145102. Alternativamente, se puede determinar la afinidad de unión por fluorimetría diferencia de barrido (DSF, por sus siglas en inglés), por ejemplo según lo descrito en WO 2016/145102.

Los compuestos de acuerdo con la presente invención exhiben actividad celular favorable. La inducción de citoquinas in vitro se puede medir en líneas celulares indicadoras, por ejemplo en células THP1, de manera similar según lo descrito en WO 2016/096174. Los compuestos de acuerdo con la presente invención exhiben actividad celular favorable en células que portan alelos de STING humana diferentes. STING humana existe en al menos cinco variantes conocidas (WT, HAQ, Re F / 232H, AQ, Q / 293 Q). Para analizar la actividad de los diferentes CDNs en las variantes de STING humana, células THP1-STING KO pueden ser transducidas establemente con vectores que codifican para las diferentes variantes de STING. Adicionalmente, se puede medir la inducción de citoquinas in vitro en PBMCs primarias humanas o en células dendríticas humanas.

Los compuestos de acuerdo con la presente invención exhiben estabilidad favorable en ensayos celulares in vitro, por ejemplo con células THP1, células Calu-3 o hepatocitos humanos. Adicionalmente, los compuestos de acuerdo con la presente invención exhiben una estabilidad química favorable en solución y en estado sólido.

Adicionalmente, los compuestos de acuerdo con la presente invención exhiben propiedades farmacocinéticas (PK) favorables. Se pueden determinar las propiedades PK en especies animales preclínicas, por ejemplo ratón, rata, hámster, perro, conejillo de Indias, cerdo miniatura, mono Cynomolgus, mono Rhesus. Se pueden describir las propiedades PK de un compuesto, por ejemplo, mediante los siguientes parámetros: Tiempo medio de residencia (MRT, por sus siglas en inglés), semivida de eliminación (t-i/², es decir el tiempo requerido para que la concentración del fármaco alcance la mitad de su valor original), volumen de distribución (V^d, es decir, el volumen aparente en el cual se distribuye un fármaco), área bajo la curva (AUC, es decir, la integral de la curva concentración-tiempo después de una sola dosis), depuración (CL, es decir, el volumen de plasma depurado del fármaco por unidad de tiempo), según lo descrito en E. Kerns & L. Di (Drug-like properties: concepts, structure design and methods: from ADME to toxicity optimization, Elsevier, 1° ed, 2008).

Ciertos compuestos de acuerdo con la presente invención exhiben actividad farmacológica in vivo favorable, por ejemplo en modelos tumorales MC38, 4T1, Colon26, EMT6 de ratón después de la aplicación intratumoral o intravenosa.

La afinidad de unión favorable en combinación con la actividad celular favorable y/o la estabilidad celular favorable y/o la mejora de las propiedades PK hacen posible dosis más bajas para una eficacia farmacológica. Las dosis más bajas tienen las ventajas de una “carga farmacológica” más baja o “carga de fármaco" (fármaco parental y sus metabolitos) para el paciente que causa potencialmente menos efectos secundarios, y menores costos de producción para el producto farmacológico.

La unión de los compuestos de la invención a STING humana puede demostrarse utilizando el siguiente ensayo:

FLUORIMETRÍA DIFERENCIAL DE BARRIDO (DSF)

Materiales:

Placas de PCR Hard-Shell® de 384 pocillo, paredes delgadas (Catálogo# HSP3805R, BIO-RAD)

Sellos Adhesivos Microseal®'B' para Placas de PCR (Catálogo# MSB-1001, BIO-RAD) solución naranja SYPRO en DMSO (SIGMA cat.-no. S5692-500UL), concentración "5000x"

Instrumentos: Lector: Sistema de Tiempo Real CFX384 (Bio-Rad)

Robot de Pipeteo: HamiltonStarlet

Amortiguador de ensayo: Tris 20mM, NaCl 150mM pH7,5

Proteína Objetivo: STING humana (hSTING, residuos 155-341, secuencia tipo salvaje con N-termina1His8-tag y sitio de escisión TEV, PM: 23601.5Da)

Solución proteica inicial: solución inicial c = 309 mM en amortiguador de ensayo

Concentraciones Finales del Ensayo de compuestos de prueba: 100uM, proteína objetivo 3uM, "5x" SYPR Naranja Procedimiento de ensayo:

1) Se prepararon soluciones iniciales de compuestos y sus diluciones en amortiguador de ensayo.

2) Se mezclaron 5ul de solución inicial de tinte fluorescente (5000x SYPRO Naranja) con 50ul de la proteína objetivo (309uM) y 945ul de amortiguador.

3) Se agregaron 2ul de esta mezcla de proteína-tinte (25x SYPRO Naranja y 15uM de Proteína) a 8ul de solución de compuesto. El volumen final fue de 10uL.

4) Se utilizaron ciertas posiciones de pocillos como control negativo.

5) Se prepararon las placas para la medición por duplicado y se centrifugaron durante 2 min a 1000g.

6) En la medición, se utilizaron 160 ciclos de 0,5 °C (rampa de temperatura 15s/ciclo, 15 °C a 95 °C).

Análisis de datos: Se procesaron las curvas de disociación en un Administrador CFX de Bio-Rad. Se estableció el tipo de picos en "negativo". En el caso del Ejemplo 1.1, el Ejemplo 2.1 y del Ejemplo 4.1, se promediaron al menos dos mediciones de Tm.

Los cambios en la Tm determinados se muestran en la tabla 1.

continuad ó ni

I u

Se puede demostrar la actividad celular de los compuestos de la invención utilizando el siguiente ensayo de THP1 in vitro:

INDUCCIÓN DE CITOQUINAS IN VITRO

Se han demostrado las actividades de inducción de citoquinas de los compuestos de acuerdo con la presente invención utilizando una línea celular indicadora de THP1.

La activación de la proteína STING expresada en líneas celulares da como resultado un aumento de la producción de interferón. Mediante la integración estable de un constructo indicador de SEAP (fosfatasa alcalina embrionaria secretada) inducible por el factor regulador de interferón (IRF) se puede controlar la ruta de señalización de interferón funcional. Utilizando el ensayo enzimático colorimétrico QUANTI-Blue™ de Invivogen y un lector adecuado de la densidad óptica (DO) se puede detectar y cuantificar la actividad de SEAP. Esta técnica podría utilizarse para caracterizar la modificación farmacológica de la proteína STING. Se realizaron las mediciones de la actividad de SEAp en células de ISG THP1-Blue que expresan establemente la proteína STING humana y el constructo indicador de SEAP IRF-inducible. Se cultivaron las células para la expansión en medio RPMI1640 con suero de ternero fetal 10%, 50 mg/ml de Penicilina-Estreptomicina, 100 mg/ml de Zeocina, y 100 mg/ml de Normocina a 37°, 95% de humedad e incubador de CO² al 5%. Se almacenaron células listas para el ensayo como materiales congelados en preparación para el ensayo, las células se descongelaron en medio libre de Zeocina/ Normocina y se distribuyeron en las placas de ensayo con una densidad de 15000 células/ 15 mL por pocillo. Se prepararon los compuestos mediante una dilución seriada de 8 o 16 puntos en 50% de DMSO acuoso y una etapa de dilución final en medio para asegurar una concentración final de DMSO del 0,5% en el ensayo. Se agregaron 5 mL de compuestos diluidos más 5 mL de medio a las placas, seguido por una incubación de 24 horas a 37°C. El día del ensayo, se agregaron 75 ml por pocillo de reactivo Quanti-Blue a todos los pocillos de la placa y se incubó la placa otros 30 minutos a 37°C. Se midió la DO a 620 nm en el lector EnVision (PerkinElmer).

Se derivados los valores EC⁵⁰ y las pendientes de Hill de ajustes de curvas no lineales de cuatro parámetros de 8 o 16 puntos con el programa informático Megalab (Boehringer Ingelheim) utilizando la DO a 620 nM. Los valores EC⁵⁰ para el Ejemplo 1.1, el Ejemplo 2.1, el Ejemplo 3.1 y el Ejemplo 4.1 son la media de al menos dos mediciones. Véase la Tabla 2.

Tabla 2: Valores EC

En el ensayo de THP1 antes mencionado, Ejemplo 1.1 es más potente que el respectivo Ejemplo 1.2 diastereomérico. Un rayo-X del Ejemplo 1.1 en complejo con STING humana indica que ambos átomos de fósforo tienen la configuración Rp. De manera análoga, se presume por ende que los diastereómeros respectivos más potentes Ejemplo 2.1, Ejemplo 3.1, Ejemplo 4.1 también presentan la configuración Rp en ambos átomos de fósforo.

Se han identificado diversos polimorfismos nucleotídicos simples en el gen STING humano que pueden afectar la respuesta a los dinucleótidos cíclicos. Para determinar la actividad de los compuestos de la invención, se han generado líneas celulares indicadoras THP1-BLUE ISG que expresan las diferentes variantes de STING humano. Para hacerlo, el STING humano endógeno se delecionó en primer lugar utilizando el sistema CRISPR/CAS9: Las células THP1-Blue ISG se sometieron a electroporación con plásmidos ALL-IN-ONE CRISPR que se dirigen hacia el gen STING (adquirido de Sigma que codifica el ARNg y GFP como un gen indicador para la transducción exitosa). Luego, las células GFP positivas se distribuyeron 24 horas luego de la transfección y se expandieron. A continuación, se dispersaron las células en medio methocel semisólido para dar lugar a aislamientos clonales de células simples. Luego se seleccionaron los clones para determinar la capacidad de respuesta a cGAMP utilizando el ensayo indicador Quanti-blue. Posteriormente, se analizaron los clones que no respondieron para determinar la pérdida de STING por inmunotransferencia Western (western blotting) y secuenciación del locus de STING. Para la sobreexpresión de las variantes de STING humano, se transdujo un clon KO de hSTING THP1- Blue ISG confirmado con plásmidos retrovirales individuales (MSCV-ires-GFP-Blasti) que codifican las variantes alélicas de hSTING (WT, HAQ, R232H, AQ y R293Q). Se distribuyeron las células transducidas para diferentes niveles de fluorescencia de GFP y se analizó la expresión de alelos de STING mediante inmunotransferencia Western. Se seleccionaron y utilizaron poblaciones que expresan la proteína STING ectópica (WT, HAQ, R232H, AQ y R293Q) a niveles comparables a niveles de STING endógena de las líneas celulares THP1-Blue ISG parentales, no modificadas para la caracterización de CDN. Los ejemplos de la presente invención exhiben actividad celular en las cinco variantes antes mencionadas.

Se midió la estabilidad celular de los compuestos de la invención de la siguiente manera: se disolvió el compuesto en medio de cultivo celular (MEM suplementado con 10% FCS, 1% de aminoácidos no esenciales y 1% de piruvato) hasta una concentración final de 10 pM y se incubó con la línea celular epitelial pulmonar humana Calu-3 (60000 células/pocillo en placa de 24 pocillos) durante hasta 24 h. Se tomaron muestras de los sobrenadantes de cultivo celular a 1, 6, 24h y se cuantificaron en LC-m S/MS.

Se determinó la PK de ratón de los compuestos de la invención utilizando el siguiente método:

PK DE RATÓN

Experimento animal

Se disolvió el compuesto en una solución de NaCl fisiológico y se administró por vía intravenosa a ratón C57BL/6NRj macho en una dosis de 10 pmol/Kg. Se recolectó una muestra de sangre de 20 pL a 0,25, 0,5, 0,75, 1 y 2 h tomando ETDA como anticoagulante. Se generó un plasma sanguíneo mediante centrifugación y se almacenó a -20 °C. Se determinó la concentración del compuesto mediante LC-MS/MS. Las relaciones concentración- tiempo (media de experimentos por duplicado) se muestran en la tabla 3.

Tabla 3:

Por consiguiente, la presente invención se refiere a los compuestos de fórmula general I como un medicamento.

Además, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula general I o a una composición farmacéutica de acuerdo con esta invención para el tratamiento y/o prevención de enfermedades o afecciones que pueden verse influenciadas por la modulación de STING en un paciente o de enfermedades o afecciones asociadas con o moduladas por STING en un paciente. Preferentemente, el paciente es un ser humano.

En aún otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con o modulada por STING en un mamífero, que necesita de dicho tratamiento, que incluye la etapa de administrar al mamífero, preferentemente a un ser humano, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o de una composición farmacéutica de la presente invención.

Las enfermedades y afecciones que están asociadas con o que son moduladas por, o que pueden verse influenciadas por la modulación de STING incluyen inflamación, enfermedades alérgicas o autoinmunitarias, por ejemplo rinitis alérgica o asma, enfermedades infecciosas o cáncer. Además, debido a su actividad, los compuestos de la presente invención son adecuados como adyuvantes de vacunas.

Las enfermedades autoinmunitarias incluyen, entre otras, lupus sistémico eritematoso, psoriasis, diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM), dermatomiositis y síndrome de Sjogren (SS).

La inflamación representa un grupo de respuestas vasculares, celulares y neurológicas al traumatismo. La inflamación puede ser caracterizada como el movimiento de células inflamatorias tales como monocitos, neutrófilos y granulocitos en los tejidos. Esto generalmente se asocia con una reducción de la función de la barrera endotelial y edema en los tejidos. La inflamación puede ser clasificada como aguda o crónica. La inflamación aguda es la respuesta inicial del cuerpo a estímulos dañinos y se logra por el aumento del movimiento de plasma y los leucocitos de la sangre en los tejidos lesionados. Una cascada de eventos bioquímicos propaga y madura la respuesta inflamatoria, que involucra el sistema vascular local, el sistema inmunitario y diversas células en el tejido lesionado. La inflamación prolongada, conocida como inflamación crónica, conduce a un cambio progresivo en el tipo de células que están presentes en el sitio de inflamación y se caracteriza por la destrucción y curación simultáneas del tejido del proceso inflamatorio.

Cuando ocurre como parte de una respuesta inmunitaria a una infección o como una respuesta aguda a un traumatismo, la inflamación puede ser beneficiosa y normalmente se autolimita. Sin embargo, la inflamación puede ser perjudicial en diversas condiciones. Esto incluye la producción de inflamación excesiva como respuesta a agentes infecciosos, lo que puede conducir a daño orgánico significativo y muerte (por ejemplo, en el escenario de una sepsis). Adicionalmente, la inflamación crónica es generalmente perjudicial y es consecuencia de numerosas enfermedades crónicas, que causan un daño severo e irreversible a los tejidos. En tales situaciones, la respuesta inmunitaria es a menudo dirigida contra tejidos propios (autoinmunidad), si bien las respuestas crónicas a entidades extrañas también pueden conducir al daño acumular a tejidos propios. El objetivo del tratamiento antiinflamatorio es, por ende, la reducción de esta inflamación, para inhibir la autoinmunidad, cuando está presente, y dar lugar al proceso fisiológico o al progreso de la curación y reparación tisular. Los compuestos de la invención pueden ser utilizados para tratar la inflamación de cualquier tejido y órgano del cuerpo, incluyendo la inflamación musculoesquelética, inflamación vascular, inflamación neural, inflamación del sistema digestivo, inflamación ocular, inflamación del sistema reproductivo, y otra inflamación, según lo ejemplificado a continuación. Inflamación musculoesquelética se refiere a cualquier afección inflamatoria del sistema musculoesquelético, particularmente aquellas afecciones que afectan a las articulaciones esqueléticas, incluyendo las articulaciones de la mano, la muñeca, el codo, el hombro, la mandíbula, la columna vertebral, el cuello, la cadera, la rodilla, el tobillo y el pie, y afecciones que afectan los tejidos que conectan los músculos con los huesos tales como los tendones. Los ejemplos de inflamación musculoesquelética que pueden tratarse con los compuestos de la invención incluyen artritis (incluyendo, por ejemplo, osteoartritis, artritis reumatoide, artritis soriásica, espondilitis anquilosante, artritis infecciosa aguda y crónica, artritis asociada con gota y pseudogota, y artritis idiopática juvenil), tendinitis, sinovitis, tenosinovitis, bursitis, fibrositis (fibromialgia), epicondilitis, miositis, y osteítis (incluyendo, por ejemplo, enfermedad de Paget, osteítis púbica, y osteítis fibrosa quística). Inflamación ocular se refiere a la inflamación de cualquier estructura del ojo, incluyendo de los párpados del ojo. Los ejemplos de inflamación ocular que puede tratarse con los compuestos de la invención incluyen blefaritis, blefarochalasis, conjuntivitis, dacrioadenitis, queratitis, queratoconjuntivitis seca (ojo seco), escleritis, triquiasis, y uveítis. Los ejemplos de inflamación del sistema nervioso que puede tratarse con los compuestos de la invención incluyen encefalitis, síndrome de Guillain-Barre, meningitis, neuromiotonia, narcolepsia, esclerosis múltiple, mielitis y esquizofrenia. Los ejemplos de inflamación de la vasculatura o del sistema linfático que puede tratarse con los compuestos de la invención incluyen aterosclerosis, artritis, flebitis, vasculitis y linfangitis.

Los ejemplos de afecciones inflamatorias del sistema digestivo que pueden tratarse con los compuestos de la invención incluyen colangitis, colecistitis, enteritis, enterocolitis, gastritis, gastroenteritis, enfermedad inflamatoria intestinal (tal como enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa), ileítis, y proctitis.

Los ejemplos de afecciones inflamatorias del sistema reproductivo que pueden tratarse con los compuestos de la invención incluyen cervicitis, corioamnionitis, endometritis, epididimitis, onfalitis, ooforitis, orquitis, salpingitis, absceso tubo-ovárico, uretritis, vaginitis, vulvitis, y vulvodinia.

Pueden utilizarse agentes para tratar afecciones autoinmunitarias que tienen un componente inflamatorio. Dichas afecciones incluyen alopecia diseminada aguda universal, enfermedad de Behcet, enfermedad de Chagas, síndrome de fatiga crónica, disautonomía, encefalomielitis, espondilitis anquilosante, anemia aplásica, hidradenitis supurativa, hepatitis autoinmunitaria, ooforitis autoinmunitaria, enfermedad celíaca, enfermedad de Crohn, diabetes mellitus tipo 1, arteritis de células gigantes, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Grave, síndrome de Guillain-Barre, enfermedad de Hashimoto, púrpura de Henoch-Schonlein, enfermedad de Kawasaki, lupus eritematoso, colitis microscópica, poliarteritis microscópica, enfermedad mixta del tejido conectivo, esclerosis múltiple, miastenia grave, síndrome de opsoclonus mioclono, neuritis óptica, tiroiditis de Ord, pénfigo, poliarteritis nodosa, polimialgia, artritis reumatoide, síndrome de Reiter, síndrome de Sjogren, arteritis temporal, granulomatosis de Wegener, anemia hemolítica autoinmune por anticuerpos calientes, cistitis intersticial, enfermedad de Lyme, morfea, psoriasis, sarcoidosis, esclerodermia, colitis ulcerosa y vitiligo. Pueden utilizarse agentes para tratar las enfermedades de hipersensibilidad mediada por linfocitos T con un componente inflamatorio. Dichas afecciones incluyen la hipersensibilidad por contacto, dermatitis de contacto (incluida la debida a hiedra venenosa), urticaria, alergias cutáneas, alergias respiratorias (fiebre del heno, rinitis alérgica) y enteropatía sensible al gluten (enfermedad celíaca).

Otras afecciones inflamatorias que pueden tratarse con los agentes incluyen, por ejemplo, apendicitis, dermatitis, dermatomiositis, endocarditis, fibrositis, gingivitis, glositis, hepatitis, hidradenitis supurativa, iritis, laringitis, mastitis, miocarditis, nefritis, otitis, pancreatitis, parotitis, percarditis, peritonitis, faringitis, pleuritis, neumonitis, prostatitis, pielonefritis, y estomatitis, rechazo a trasplante (que involucra órganos tales como riñón, hígado, corazón, pulmón, pán­ creas (por ejemplo, células de islote), médula ósea, córnea, intestino delgado, aloinjertos cutáneos, homoinjertos cutáneos y xenoinjertos de válvulas cardíacas, enfermedad del suero, enfermedad del injerto contra el huésped), pancreatitis aguda, pancreatitis crónica, síndrome de dificultad respiratoria aguda, síndrome de Sexary, hiperplasia suprarrenal congénita, tiroiditis no supurativa, hipercalcemia asociada con cáncer, pénfigo, dermatitis herpetiforme bullosa, eritema multiforme severo, dermatitis exfoliativa, dermatitis seborreica, rinitis alérgica estacional o perenne, asma bronquial, dermatitis de contacto, dermatitis atópica, reacciones de hipersensibilidad a fármacos, conjuntivitis alérgica, queratitis, herpes zóster oftálmico, iritis y oiridociclitis, coriorretinitis, neuritis óptica, sarcoidosis sintomática, quimioterapia para tuberculosis pulmonar fulminante o diseminada, púrpura trombocitopénica idiopática en adultos, trombocitopenia secundaria en adultos, anemia hemolítica adquirida (autoinmune), leucemia y linfomas en adultos, leucemia aguda infantil, enteritis regional, vasculitis autoinmune, esclerosis múltiple, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rechazo de trasplante de órganos sólidos, sepsis. Los tratamientos preferidos incluyen el tratamiento del rechazo de trasplantes, artritis reumatoide, artritis soriásica, esclerosis múltiple, diabetes tipo 1, asma, enfermedad inflamatoria intestinal, lupus eritematoso sistémico, psoriasis, enfermedad pulmonar crónica e inflamación que acompaña a enfermedades infecciosas (por ejemplo, sepsis).

En un aspecto, la enfermedad o afección que será tratada mediante los compuestos de la invención es cáncer. Los ejemplos de enfermedades cancerígenas y afecciones en las cuales los compuestos de fórmula I, o sus sales farmacéuticamente aceptables o solvatos pueden tener efectos antitumorales potencialmente beneficiosos incluyen, entre otras, cánceres del pulmón, huesos, páncreas, piel, cabeza, cuello, útero, ovarios, estómago, colon, mama, esófago, intestino delgado, intestino, sistema endocrino, glándula tiroides, glándula paratiroidea, glándula suprarrenal, uretra, próstata, pene, testículos, uréter, vejiga, riñón o hígado; cáncer de recto; cáncer de la región anal; carcinomas de las trompas de Falopio, endometrio, cuello uterino, vagina, vulva, pelvis renal, células renales; sarcoma de tejido blando; mixoma; rabdomioma; fibroma; lipoma; teratoma; colangiocarcinoma; hepatoblastoma; angiosarcoma; hemangioma; hepatoma; fibrosarcoma; condrosarcoma; mieloma; leucemia crónica o aguda; linfomas linfocíticos; linfoma del SNC primario; neoplasias del SNC; tumores del eje espinal; carcinomas de células escamosas; sarcoma sinovial; mesoteliomas pleurales malignos; glioma del tronco encefálico; adenoma pituitario; adenoma bronquial; hamartoma condromatoso; inesotelioma; enfermedad de Hodgkin o una combinación de uno o más de los cánceres antes mencionados.

Los cánceres preferidos, los cuales pueden ser tratados con los compuestos de acuerdo con la invención, son cáncer de piel, pulmón, hígado, colon, cerebro, mama, ovario, próstata, páncreas, riñón, estómago, cabeza, cuello y urotelial, así como también linfoma y leucemia.

Los nuevos compuestos pueden utilizarse para la prevención, el tratamiento a corto plazo o a largo plazo de las enfermedades antes mencionadas, opcionalmente además en combinación con cirugía, radioterapia u otros compuestos “del estado de la técnica", tales como por ejemplo, sustancias citostáticas o citotóxicas, inhibidores de la proliferación celular, sustancias antiangiogénicas, esteroides o anticuerpos.

En su rol de adyuvantes, en ciertas realizaciones, los presentes compuestos y composiciones pueden utilizarse como adyuvantes en una estrategia terapéutica o profiláctica empleando vacuna(s). Por lo tanto, los CDN sustancialmente puros de la presente invención o sus sales farmacéuticamente aceptables, pueden utilizarse junto con una o más vacunas seleccionadas para estimular una respuesta inmunitaria a uno o más antígenos predeterminados. Los CDN sustancialmente puros de la presente invención, o sus profármacos o sales farmacéuticamente aceptables, pueden proporcionarse junto con, o además de, dichas vacunas.

Dicha(s) vacuna (s) pueden comprender bacterias o virus inactivados o atenuados que comprenden los antígenos de interés, antígenos purificados, vectores de administración de virus o bacterias vivos modificados construidos por ingeniería genética recombinantemente para expresar y/o secretar los antígenos, vectores de células presentadoras de antígenos (APC, por sus siglas en inglés) que comprenden células que están cargadas con los antígenos o transfectadas con una composición que comprende un ácido nucleico que codifica los antígenos, vehículos de administración de antígenos liposómicos, o vectores de ácidos nucleicos despojados que codifican los antígenos. Esta lista no pretende ser limitativa. A modo de ejemplo, dicha(s) vacuna(s) también puede(n) comprender una célula tumoral inactivada que expresa y secreta uno o más de GM-CSF, CCL20, CCL3, IL-12p70, ligando FLT-3, citoquinas.

En un aspecto relacionado, la presente invención se refiere a métodos para inducir, estimular o coadyuvar una respuesta inmunitaria en un individuo. Estos métodos comprenden la administración de los CDN sustancialmente puros de la presente invención o sus sales farmacéuticamente aceptables, al individuo.

La dosis de los compuestos de fórmula general I aplicable por día oscila generalmente entre 0,0001 y 10 mg, por ejemplo entre 0,001 y 1 mg. Cada dosis unitaria puede contener convenientemente entre 0,0001 y 10 mg, por ejemplo entre 0,001 y 1 mg.

La cantidad o dosis terapéutica terapéuticamente eficaz real depende, naturalmente, de factores conocidos por los expertos en la técnica tales como la edad y el peso del paciente, la vía de administración y la gravedad de la enfermedad. En cualquier caso, el compuesto o la composición se administrará en dosis y de una manera que permita que una cantidad terapéuticamente eficaz sea administrada sobre la base de la condición única del paciente.

Los compuestos, las composiciones, incluyendo cualquier combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales, de acuerdo con la invención se pueden administrar por la vía de las mucosas (por ejemplo, oral, sublingual, vaginal, nasal, cervical, etc.), intratumoral, peritumoral, transdérmica, inhalativa, o parenteral (por ejemplo, administraciones subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intradérmica, intratecal y epidural). En la mayoría de los casos, una de las vías de administración intravenosa, intratumoral, peri tumoral o subcutánea es adecuada.

Composiciones farmacéuticas

Para los propósitos de esta divulgación, las composiciones farmacéuticas se pueden administrar mediante diversos medios que incluyen no parenteralmente, parenteralmente, por pulverización por inhalación, tópicamente, o rectalmente en formulaciones que contienen portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables. La administración intratumoral (directamente en la masa tumoral) o peritumoral (alrededor de la masa tumoral) de los compuestos de la presente invención puede activar directamente d C de infiltración local, promover directamente la apoptosis de células tumorales o sensibilizar las células tumorales a los agentes citotóxicos.

Las composiciones farmacéuticas de la divulgación pueden estar en forma de una preparación inyectable estéril, tal como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede ser formulada de acuerdo con la técnica conocida utilizando aquellos agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión que han sido mencionados con anterioridad. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico tal como una solución en 1,3-butano-diol o preparado como un polvo liofilizado. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse se encuentran agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro sódico. Además, pueden emplearse convencionalmente los aceites fijos estériles como un disolvente o medio de suspensión. Para este propósito, puede emplearse cualquier aceite fijo blando incluyendo monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, pueden utilizarse igualmente ácidos grasos tales como ácido oleico en la preparación de inyectables.

Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen pastillas para chupar que comprenden el principio activo en una base saborizada, generalmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el principio activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia; y enjuagues bucales que comprenden el principio activo en un portador líquido adecuado.

Las formulaciones adecuadas para la administración vaginal pueden ser presentadas como óvulos vaginales, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones para pulverizar que contienen, además del principio activo, portadores conocidos en la técnica apropiados.

Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones para inyección, estériles, isotónicas, acuosas y no acuosas, las cuales pueden contener antioxidantes, amortiguadores, agentes bacteriostáticos y solutos que tornan a la formulación isotónica con la sangre del supuesto destinatario; y suspensiones estériles, acuosas y no acuosas, las cuales pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones pueden ser presentadas en envases sellados de monodosis o múltiples dosis, por ejemplo, ampollas y frascos, y se pueden almacenar en una condición liofilizada que requiere solamente la adición del portador líquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes del uso. Las soluciones y suspensiones para inyección pueden prepararse a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles del tipo descrito con anterioridad.

Tratamiento combinado

Los compuestos de la invención pueden utilizarse por si solos o pueden combinarse con excipientes farmacéuticamente aceptables, en una cantidad suficiente para inducir, modificar o estimular una respuesta inmunitaria apropiada. La respuesta inmunitaria puede comprender, entre otras, respuesta inmunitaria específica, respuesta inmunitaria no específica, tanto una respuesta específica como no específica, respuesta innata, respuesta inmunitaria primaria, inmunidad adaptativa, respuesta inmunitaria secundaria, respuesta de memoria inmunitaria, activación celular inmunitaria, proliferación de células inmunitarias, diferenciación de células inmunitarias y expresión de citoquinas. En ciertas realizaciones, los compuestos y las composiciones de los mismos que se describen en la presente invención se administran en conjunto con una o más composiciones adicionales que incluyen vacunas destinadas a estimular una respuesta inmunitaria a uno o más antígenos predeterminados; adyuvantes; antagonistas de las vías CTLA-4 y PD-1, lípidos, liposomas, agentes quimioterapéuticos, líneas celulares inmunomoduladoras, etc..

Los compuestos y composiciones de los mismos que se describen en la presente invención pueden administrarse antes, después y/o simultáneamente con una composición o modalidad terapéutica o profiláctica adicional. Estos incluyen, entre otros, la molécula coestimuladora de B7, interleuquina-2, interferón- g, GM-CSF, antagonistas de CTLA-4, ligando OX-40/OX-40, ligando CD40/CD40, sargramostim, levamisol, virus vaccinia, Bacilo Calmette-Guerin (BCG), liposomas, alumbre, adyuvante completo o incompleto de Freund, endotoxinas destoxificadas, aceites minerales, sustancias tensioactivas tales como lipolecitina, polioles plurónicos, polianiones, péptidos, y emulsiones de aceites o hidrocarburos. Se prefieren los portadores para inducir una respuesta inmunitaria de linfocitos T que estimulan preferentemente una respuesta citolítica de linfocitos T contra una respuesta de anticuerpos, si bien pueden utilizarse además aquellos que estimulan ambos tipos de respuesta. En los casos en que el agente es un polipéptido, se puede administrar el propio polipéptido o un polinucleótido que codifica el polipéptido. El portador puede ser una célula, tal como una célula presentadora de antígenos (APC, por sus siglas en inglés) o una célula dendrítica. Las células presentadoras de antígenos incluyen tipos celulares tales como macrófagos, células dendríticas y linfocitos B. Otras células presentadoras de antígenos profesionales incluyen monocitos, células Kupffer de zonas marginales, microglia, células de Langerhans, células dendríticas interdigitantes, células dendríticas foliculares y linfocitos T. También podrán utilizarse células presentadoras de antígenos facultativas. Los ejemplos de células presentadoras de antígenos facultativas incluyen astrocitos, células foliculares, endotelio y fibroblastos. El portador puede ser una célula bacteriana que es transformada para expresar el polipéptido o para administrar un polinucleótido el cual es posteriormente expresado en células de la persona vacunada. Se pueden agregar adyuvantes, tal como hidróxido de aluminio o fosfato de aluminio, para aumentar la capacidad de la vacuna de desencadenar, aumentar o prolongar una respuesta inmunitaria. Los materiales adicionales, tales como las citoquinas, las quimioquinas y las secuencias de ácidos nucleicos de bacterias, como CpG, un agonista del receptor del tipo toll (TLR) 9 así como también agonistas adicionales para TLR 2, TLR 4, TLR 5, TLR 7, TLR 8, TLR9, incluyendo lipoproteína, LPS, lípido A de monofosforilo, ácido lipoteicoico, imiquimod, resiquimod, y además agonistas del gen I inducible del ácido retinoico (RIG-I) tal como poli I:C, utilizados por separado o en combinación con las composiciones descritas son también potenciales adyuvantes. Otros ejemplos representativos de adyuvantes incluyen el adyuvante sintético QS-21 que comprende una saponina homogénea purificada de la corteza de Quillaja saponaria y Corynebacterium parvum (McCune et al., Cancer, 1979; 43:1619).

Los métodos para la administración conjunta con un agente terapéutico adicional son bien conocidos en la técnica (Hardman, et al. (eds.) (2001) Goodman y Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10° ed., McGraw-Hill, Nueva York, NY; Poole y Peterson (eds.) (2001) Pharmacotherapeutics for Advanced Practice:A Practical Approach, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA; Chabner y Longo (eds.) (2001) Cancer Chemotherapy and Biotherapy, Lippincott, Williams & Wilkins, Phila., PA). Generalmente, la administración conjunta o coadministración indica el tratamiento de un sujeto con dos o más agentes, donde los agentes pueden ser administrados en forma simultánea o en tiempos diferentes. Por ejemplo, dichos agentes pueden ser administrados a un solo sujeto como administraciones separadas, que pueden ser esencialmente al mismo tiempo o en momentos diferentes, y que pueden ser por la misma vía o por vías de administración diferentes. Dichos agentes pueden ser administrados a un solo sujeto en la misma administración (por ejemplo, en la misma formulación) de tal modo que sean administrados al mismo tiempo por la misma vía de administración.

Debido a las propiedades adyuvantes de los compuestos de la presente invención, su utilización también puede combinarse con otras modalidades terapéuticas incluyendo otras vacunas, adyuvantes, antígeno, anticuerpos, y moduladores inmunitarios. A continuación se proporcionan ejemplos.

Adyuvantes

Además de los compuestos de la presente invención y las composiciones de los mismos descritas en la presente invención, las composiciones o métodos de la presente invención pueden comprender además una o más sustancias adicionales las cuales, debido a su naturaleza, pueden actuar para estimular o de otro modo utilizar el sistema inmunitario para responder a los antígenos cancerígenos presentes en la(s) célula(s) tumoral(es) objetivo. Dichos adyuvantes incluyen, entre otros, lípidos, liposomas, bacterias inactivadas las cuales inducen inmunidad innata (por ejemplo, Listeria monocytogenes inactivada o atenuada), composiciones las cuales intervienen en la activación inmunitaria innata a través de Receptores del tipo Toll (TLRs), receptores del tipo (NOD) (NLRs), receptores del tipo (RIG-I) basados en genes inducibles de ácido retinoico (RLRs), receptores de lectina tipo C (CLRs) y/o patrones moleculares asociados a patógenos ("PAMPS"). Los ejemplos de PAMPs incluyen lipoproteínas, lipopolipéptidos, peptidoglicanos, zimosan, lipopolisacárido, porinas de Neisseria, flagelina, profilina, galactoceramida, dipéptido de muramilo. Los peptidoglicano, las lipoproteínas y los ácidos lipoteicoicos son componentes de las paredes celulares de bacterias Gram-positivas. Los lipopolisacáridos son expresados por la mayoría de las bacterias, siendo un ejemplo MPL. La flagelina se refiere al componente estructural de flagelos bacterianos que es secretada por bacterias patógenas y comensales. La galactosilceramida es un activador de linfocitos T citolíticos naturales (NKT). El dipéptido de muramilo es un motivo de peptidoglicano bioactivo común para todas las bacterias.

Inhibidores del punto de control inmunitario

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con un inhibidor del punto de control inmunitario, tal como un inhibidor del punto de control inmunitario seleccionado del grupo que consiste en un antagonista de la vía de CTLA-4, un antagonista de la vía de PD-1, un antagonista de la vía de Tim-3, un antagonista de la vía de Vista, un antagonista de la vía de BTLA, un antagonista de la vía de LAG-3, o un antagonista de la vía de TIGIT. En algunas realizaciones, el inhibidor del punto de control inmunitario se selecciona del grupo que consiste en un anticuerpo anti-CTLA-4, un anticuerpo anti-PD-1, un anticuerpo anti-Tim-3, un anticuerpo anti-Vista, un anticuerpo anti-BTLA, un anticuerpo anti-LAG-3, o un anticuerpo anti-TIGIT.

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con antagonistas de la vía CTLA-4. En algunas realizaciones, la combinación se utiliza para tratar un tumor sólido o una enfermedad maligna hematológica. Se cree que CTLA-4 es un regulador negativo importante de la respuesta inmunitaria adaptativa. Los linfocitos T activados regulan en forma ascendente CTLA-4, que se une a CD80 y CD86 en células presentadoras de antígenos con mayor afinidad que CD28, inhibiendo así la estimulación de los linfocitos T, la expresión del gen IL-2 y la proliferación de linfocitos T. Se han observado efectos antitumorales del bloqueo de CTLA4 en modelos murinos de carcinoma de colon, cáncer prostético metastásico y melanoma metastásico. En algunas realizaciones, el antagonista de la vía CTLA-4 es una molécula de anticuerpo anti-CTLA-4 seleccionada del grupo que consiste en tremelimumab e ipilimumab.

Ipilimumab (un anticuerpo de CTLA-4, también conocido como MDX-010, CAS No. 477202-00-9) y tremelimumab (anticuerpo monoclonal de IgG2 anteriormente conocido como ticilimumab, CP-675,206) son anticuerpos monoclonales humanizados que se unen a CTLA4 humano y evitan su interacción con CD80 y CD86. Otros reguladores inmunitarios negativos que pueden ser objeto de una estrategia similar incluyen la muerte celular programada 1 (PD-1), el atenuador de linfocitos B y T, el factor de crecimiento transformante beta, la interleuquina-10 y el factor de crecimiento endotelial vascular.

En algunas realizaciones, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con un anticuerpo anti-CTLA- 4 y un anticuerpo anti-PD-1. En una realización, la combinación incluye una molécula de anticuerpo anti-PD-1, por ejemplo, según lo descrito en la presente invención, y un anticuerpo anti-CTLA-4, por ejemplo, ipilimumab. Los ejemplos de dosis que pueden utilizarse incluyen una dosis de molécula de anticuerpo anti-PD-1 de aproximadamente 1 a 10 mg/kg, por ejemplo, 3 mg/kg, y una dosis de un anticuerpo anti-CTLA-4, por ejemplo, ipilimumab, de aproximadamente 3 mg/kg.

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con antagonistas de la vía PD-1. En algunas realizaciones, la combinación se utiliza para tratar un tumor sólido o una enfermedad maligna hematológica. PD-1 es otro regulador negativo de la respuesta inmunitaria adaptativa que es expresada en linfocitos T activados. PD-1 se une a B7-H1 y B7-DC, y la unión de PD-1 suprime la activación de los linfocitos T. Se han demostrado efectos antitumorales con el bloqueo de la vía de PD-1. En la bibliografía técnica, se ha indicado que las moléculas de anticuerpos anti-PD- 1 (por ejemplo, Nivolumab (Opdivo®), pembrolizumab (Keytruda®), y pidilizumab), y AMP-224 son ejemplos de bloqueadores de la vía de PD-1 que pueden ser útiles en la presente invención. En algunas realizaciones, el antagonista de la vía de PD-1 es una molécula de anticuerpo anti-PD-1 seleccionada del grupo que consiste en nivolumab, pembrolizumab o pidilizumab.

En algunas realizaciones, el antagonista de la vía de PD-1 es una inmunoadhesina (por ejemplo, una inmunoadhesina que comprende una porción extracelular o de unión a PD-1 de PD-LI o PD-L2 fusionado a una región constante (por ejemplo, una región Fc de una secuencia de inmunoglobulina). En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-1 es a MP-224 (B7-DCIg; Amplimmune; por ejemplo, descrito en WO2010/027827 y WO2011/066342) es un receptor soluble de fusión Fc PD-L2 que bloquea la interacción entre PD- 1 y B7-H1.

En algunas realizaciones, el antagonista de la vía de PD-1 es un inhibidor de PD-L1 o PD-L2. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-L1 o PD-L2 es un anticuerpo anti-PD-L1 o un anticuerpo anti-PD-L2. En algunas realizaciones, el inhibidor anti-PD-LI se selecciona entre YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, o MDX-1105. En algunas realizaciones, el inhibidor de PD-L1 es un anticuerpo anti-PD-L1 MSB0010718C. MSB0010718C (también denominado A09-246-2; Merck Serono) es un anticuerpo monoclonal que se une a PD-L1.

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con antagonistas de la vía TIM-3. En algunas realizaciones, la combinación se utiliza para tratar un tumor sólido o una enfermedad maligna hematológica. En algunas realizaciones, el antagonista de la vía TIM- 3 es un anticuerpo anti-TIM-3. En algunas realizaciones, las moléculas de anticuerpo anti-TIM-3 se describen en US 2015/0218274, publicada el 6 de agosto de 2015, titulada “Moléculas de Anticuerpo contra TIM-3 y sus Usos” ("Antibody Molecules to TIM-3 y Uses Thereof').

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con antagonistas de la vía LAG-3. En algunas realizaciones, la combinación se utiliza para tratar un tumor sólido o una enfermedad maligna hematológica. En algunas realizaciones, el antagonista de la vía LAG-3 es aun anticuerpo anti-LAG-3. En algunas realizaciones, las moléculas de anticuerpos anti- LAG-3 se describen en US 2015/0259420, presentada el 13 de marzo de 2015, titulada “Moléculas de Anticuerpo contra LAG-3 y sus Usos” ("Antibody Molecules to LAG-3 y Uses Thereof").

Catabolismo de aminoácidos

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con un inhibidor del metabolismo de aminoácidos tal como un inhibidor de IDO o Arginasal o Arginasa2 para antagonizar el efecto inhibidor inmunitario de células inmunitarias supresivas inmunitarias tales como células supresoras derivadas de mieloide.

Vía de Señalización purinérgica

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con inhibidores de la vía de señalización purinérgica tales como antagonistas de las vías CD39 y CD73 o inhibidores de receptores A2A/A2B.

Quimioquinas y receptores de quimioquinas

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con quimioquina o antagonista del receptor de quimioquina para inhibir el reclutamiento de células inmunitarias supresivas en el microentorno tumoral. Por ejemplo, aunque de manera no exclusiva, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación de antagonista de CCR2 o CCR5 que reducen la infiltración de células supresoras de mieloides y linfocitos T reguladores.

Agonistas de Receptores de linfocitos T

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con un agonista del receptor de linfocitos T, tal como un agonista de CD28, agonista de OX40, agonista de GITR, agonista de CD137, agonista de CD27 o agonista de HVEM.

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con agonista de CD27. Los ejemplos de agonistas de CD27 incluyen un anticuerpo agonista anti-CD27, por ejemplo, según lo descrito en la Publicación PCT No. WO 2012/004367.

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con agonista de GITR. En algunas realizaciones, la combinación se utiliza para tratar un tumor sólido o una enfermedad maligna hematológica. Los ejemplos de agonistas del GITR incluyen, por ejemplo, proteínas de fusión GITR y anticuerpos anti-GITR (por ejemplo, anticuerpos anti-GITR bivalentes).

Agonistas del TLR

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con un agonista del receptor del tipo Toll. El término "receptor del tipo Toll" (o "TLR") en el presente contexto se refiere a un miembro de la familia de proteínas de receptores del tipo Toll o un fragmento de las mismas que detecta un producto microbiano y/o inicia una respuesta inmunitaria adaptativa. En una realización, un TLR activa una célula dendrítica (CD). Los receptores del tipo Toll (TLRs) son una familia de receptores de reconocimiento de patrones que fueron identificados inicialmente como sensores del sistema inmunitario innato que reconocen patógenos microbianos. Los TLR comprenden una familia de moléculas conservadas que abarcan la membrana que contienen un ectodominio de repeticiones ricas en leucina, un dominio de transmembrana y un dominio TIR (Toll/IL-1R) intracelular. Los TLR reconocen distintas estructuras en microbios, a menudo denominadas "PAMPs" (patrones moleculares asociados a patógenos). La unión del ligando a TLR invoca una cascada de vías de señalización intracelulares que inducen la producción de factores involucrados en la inflamación y la inmunidad.

Los agonistas de TLR conocidos en la técnica y que encuentran utilidad en la presente invención incluyen, entre otros, los siguientes:

Pam3Cys, un agonista de TLR-1/2;

CFA, un agonista de TLR-2;

MALP2, un agonista de TLR-2;

Pam2Cys, un agonista de TLR-2;

FSL-1, un agonista de TLR-2;

Hib-OMPC, un agonista de TLR-2;

ácido poliribosínico:poliribocitídico (Poli I:C), un agonista de TLR-3;

poliadenosina- ácido poliuridílico (poli AU), un agonista de TLR-3;

Ácido poliinosínico-policitidílico estabilizado con poli-L-lisina y carboximetilcelulosa (Hiltonol®), un agonista de TLR-3; lípido A de monofosforilo (MPL), un agonista de TLR-4;

LPS, un agonista de TLR-4;

flagelina bacteriana, un agonista de TLR-5;

sialilo-Tn (STn), un carbohidrato asociado con la mucina MUC1 en una cantidad de células cancerígenas humanas y un agonista de TLR-4;

imiquimod, un agonista de TLR-7; resiquimod, un agonista de TLR-7/8;

loxoribina, un agonista de TLR-7/8; y

dinucleótido de CpG no metilado (CpG-ODN), un agonista de TLR-9.

Debido a sus cualidades adyuvantes, los agonistas de TLR se utilizan preferentemente en combinación con otras vacunas, adyuvantes y/o moduladores inmunitarios, y pueden combinarse en diversas combinaciones. Por ende, en ciertas realizaciones, los compuestos mono- o di-FCDN que se unen a STING e inducen la activación de TBK1 dependiente de STING y una célula tumoral inactivada que expresa y secreta una o más citoquinas que estimulan la inducción, el reclutamiento y/o la maduración de células dendríticas, según lo descrito en la presente se pueden administrar junto con uno o más agonistas de TLR con fines terapéuticos.

Agentes terapéuticos de anticuerpos

Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con anticuerpos terapéuticos. En algunas realizaciones, el mecanismo de acción del anticuerpo terapéutico es Citotoxicidad Celular Dependiente de Anticuerpos (ADCC). ADCC es un mecanismo de defensa inmunitaria mediada por células mediante el cual una célula efectora del sistema inmunitario lisa activamente una célula objetivo, cuyos antígenos de la superficie de la membrana se han unido mediante anticuerpos específicos. Es uno de los mecanismos a través del cual los anticuerpos, como parte de la respuesta inmunitaria humoral, pueden actuar para limitar y contener la infección. La ADCC clásica es mediada por linfocitos citolíticos naturales (NK, natural killer en inglés); macrófagos, neutrófilos y eosinófilos también pueden mediar en la ADCC. La ADCC es un mecanismo de acción importante de los anticuerpos monoclonales terapéuticos, incluyendo trastuzumab y rituximab, contra tumores. Los compuestos de la presente invención pueden actuar para potenciar la ADCC.

Lo que sigue es una lista de ejemplos de anticuerpos los cuales pueden utilizarse junto con los compuestos de la presente invención:

Muromonab-CD3, Infliximab, adalimumab, Omalizumab, Daclizumab, Rituximab, Ibritumomab, Tositumomab, Cetuximab, Trastuzumab, Alemtuzumab, Lym-1 Ipilimumab, Vitaxin, Bevacizumab y Abciximab.

Los anticuerpos terapéuticos adicionales que se pueden utilizar en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen un inhibidor del receptor de la prolactina (PRLR), un inhibidor de HER3, un inhibidor de EGFR2 y/o EGFR4, un inhibidor de M-CSF, un anticuerpo anti-APRIL, o un anticuerpo anti-SIRPa o anti-CD47.

Agentes quimioterapéuticos

En realizaciones adicionales de los métodos descritos en la presente invención, los compuestos de la presente invención se utilizan en combinación con agentes quimioterapéuticos (por ejemplo, compuestos farmacéuticos de molécula pequeña). Por lo tanto, los métodos involucran además la administración al sujeto de una cantidad eficaz de uno o más agentes quimioterapéuticos como un tratamiento adicional o un tratamiento combinado. En ciertas realizaciones, uno o más agentes quimioterapéuticos se seleccionan del grupo que consiste en acetato de abiraterona, altretamina, anhidrovinblastina, auristatina, bexaroteno, bicalutamida, BMS 184476, 2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4-metoxifenil)bencensulfonamida, bleomicina, N,N-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-proli- 1-Lprolina-tbutilamida, caquectina, cemadotina, clorambucilo, ciclofosfamida, 3',4'-didehidro-4'- desoxi-8'-norvin-caleucoblastina, docetaxol, doxetaxel, ciclofosfamida, carboplatino, carmustina, cisplatino, criptoficina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina (DTIC), dactinomicina, daunorubicina, decitabina dolastatina, doxorubicina (adriamicina), etopósido, 5-fluorouracilo, finasterida, flutamida, hidroxiurea e hidroxiurea taxanos, ifosfamida, liarozol, lonidamina, lomustina (CCNU), enzalutamida, mecloretamina (mostaza de nitrógeno), melfalan, isetionato de mivobulina, rizoxina, sertenef, estreptozocina, mitomicina, metotrexato, taxanos, nilutamida, onapristona, paclitaxel, prednimustina, procarbazina, RPR109881, fosfato de estramustina, tamoxifeno, tasonermina, taxol, tretinoína, vinblastina, vincristina, sulfato de vindesina, y vinflunina.

En realizaciones adicionales, los métodos descritos en la presente invención, los compuestos de la presente invención se utilizan en combinación con agentes quimioterapéuticos y/o agentes adicionales para el tratamientos de las indicaciones según lo descrito en los métodos de la presente invención. En algunas realizaciones, los compuestos de la presente invención se utilizan en combinación con uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en sotrastaurina, nilotinib, 5-(2,4-dihidroxi-5-isopropilfenil)-N-etil-4-(4-(morfolinometil)fenil)isoxazol-3-carboxamida, dactolisib, 8-(6-Metoxipiridin-3-il)-3-metil-1-(4-piperazin-1-il-3-trifluorometil-fenil)-1,3-dihidro-imidazo[4,5- c]quinolin-2-ona, 3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil)-1-(6-((4-(4-etilpiperazin-1-il)fenil)amino)pirimidin-4-il)-1-metilurea, buparlisib, 8-(2,6-difluoro-3,5-dimetoxifenil)-N-(4-((dimetilamino)metil)-1H-imidazol-2-il)quinoxalin-5-carboxamida, (S)-N1-(4-metil-5-(2-(1,1,1-trifluoro-2-metilpropan-2-il)piridin-4-il)tiazol-2-il)pirrolidin-1,2-dicarboxamida, (S)-1-(4-clorofenil)-7-isopropoxi-6-metoxi-2-(4-(metil-(((1r,4S)-4-(4-metil-3-oxopiperazin-1-il)ciclohexil)metil)amino)fenil)-1,2-dihidroisoquinolin-3(4H)-ona, deferasirox, letrozol, (4S,5R)-3-(2'-amino-2-morfolino-4'-(trifluorometil)-[4,5'-bipirimidin]-6-il)-4-(hidroximetil)-5-metiloxazolidin-2-ona, (S)-5-(5-cloro-1-metil-2-oxo-1,2-dihidropiridin-3-il)-6-(4-clorofenil)-2-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-1-isopropil-5,6-dihidropirrolo[3,4-d]imidazol-4(1H)-ona, 4-((2-(((1R,2R)-2-hi droxiciclohexil)amino)benzo[d]tiazol-6-il)oxi)-N-metilpicolin-amida, mesilato de imatinib, 2-fluoro-N-metil-(7-(quinolin-6-ilmetil)imidazo[1,2-b][1,2,4]triazin-2-il)benzamida, ruxolitinib, panobinostat, osilodrostat, (S)-N-((S)- 1-ciclohexil-2-((S)-2-(4-(4-fluorobenzoil)tiazol-2-il)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-2-(metilamino)propanamida, (S)-N-((S)-1-ciclohexil-2-((S)-2-(4-(4-fluorobenzoil)tiazol-2-il)pirrolidin-1-il)-2-oxoetil)-2-(metilamino)propanamida, fosfato de sonidegib, ceritinib, 7-ciclopentil-N,N-dimetil-2-((5-(piperazin-1-il)piridin-2-il)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida, N-(4-((1R,3S,5S)-3-amino-5-metilciclohexil)piridin-3-il)-6-(2,6-difluorofenil)-fluoropicolinamida, 2-(2',3-dimetil-[2,4'-bipiridin]-5-il)-N-(5-(pirazin-2-il)piridin-2-il)acetamida, encorafenib, 7-ciclopentil-N,N-dimetil-2-((5-((1R,6S)-9-metil-4-oxo-3,9-diazabiciclo[4.2.1]-nonan-3-il)piridin-2-il)amino)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-6-carboxamida, binimetinib, midostaurina, everolimus, 2-amina de 1-metil-5-((2-(5-(trifluorometil)-1H-imidazol-2-il)piridin-4 il)oxi)-N-(4-(trifluorometil)fenil)-1H-benzo[d]imidazol, diaspartato de pasireotida, dovitinib, (R,E)-N-(7-cloro-1-(1-(4-(dimetilamino)but-2-enoil)azepan-3-il)-1H-benzo[d]imidazol-2-il)-2-metilisonicotinamida, N6 -(2-isopropoxi-5-metil-4-(1-metilpiperidin-4-il)fenil)-N4-(2-(isopropilsulfonil)-fenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4,6-diamina, 1,1-dióxido de 3-(4-(4-((5-cloro-4-((5-metil-1 H-pirazol-3-il)amino)pirimidin-2-il)amino)-5-fluoro-2- metilfenil)piperidin-1-il)tietano, 5-cloro-N2-(2-fluoro-5-metil-4-(1-(tetrahidro-2H-piran-4-il)piperidin-4-il)fenil)-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidin-2,4-diamina, 5-cloro-N2-(4-(1-etilpiperidin-4-il)-2-fluoro-5-metilfenil)-N4-(5-metil-1H-pirazol-3-il)pirimidin-2,4-diamina, valspodar, y succinato de vatalanib.

En otras realizaciones, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en combinación con un inhibidor de PKC, un inhibidor de BCR-ABL, un inhibidor de HSP90, un inhibidor de PI3K y/o mTOR, un inhibidor de FGFR, un inhibidor de PI3K, un inhibidor de FGFR, un inhibidor de PI3K, un inhibidor del citocromo P450 (por ejemplo, un inhibidor de CYP17), un inhibidor de HDM2, un inhibidor de aromatasa, un inhibidor de p53 y/o una interacción de p53/Mdm2, o un inhibidor de la tirosina quinasa del CSF-1R.

Las preparaciones adecuadas incluyen, por ejemplo, comprimidos, cápsulas, supositorios, soluciones - especialmente las soluciones para inyección (s.c., i.v., i.m.) e infusión - elíxires, emulsiones o polvos dispersables. El contenido del o de los compuestos farmacéuticamente activos debería estar dentro del intervalo entre 0,1 y 90 % en peso, preferentemente entre 0,5 y 50 % en peso de la composición como una totalidad, es decir, en cantidades que son suficientes para lograr el intervalo de dosificación especificado más adelante. Las dosis especificadas pueden ser administradas, en caso necesario, varias veces al día.

La dosificación para los socios de combinación mencionados anteriormente es generalmente 1/5 de la dosis más baja normalmente recomendada hasta 1/1 de la dosis normalmente recomendada.

En aún otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para el tratamiento de una enfermedad o afección asociada con o modulada por, o que puede verse influenciada por la modulación de STING en un paciente, dicho método incluye la etapa de administrar al paciente, preferentemente un ser humano, que necesita de dicho tratamiento una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes terapéuticos adicionales descritos anteriormente.

El uso del compuesto de acuerdo con la invención en combinación con el agente terapéutico adicional puede tener lugar simultáneamente o en momentos escalonados.

El compuesto de acuerdo con la invención y uno o más agentes terapéuticos adicionales ambos pueden estar presentes en forma conjunta en una formulación o por separado en dos formulaciones idénticas o diferentes, por ejemplo como lo que se conoce como kit de partes.

En consecuencia, en otro aspecto, esta invención se refiere a una composición farmacéutica la cual comprende un compuesto de acuerdo con la invención y uno o más agentes terapéuticos adicionales descritos en lo que antecede y en lo que sigue, opcionalmente junto con uno o más portadores inertes y/o diluyentes.

Otras características y ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de los siguientes ejemplos más detallados los cuales ilustran, a modo de ejemplo, los principios de la invención.

Síntesis de los compuestos de acuerdo con la presente invención

OBSERVACIONES TÉCNICAS GENERALES

Los términos "temperatura ambiente" y "temperatura ambiente" [en inglés son términos diferentes: “ambient temperature” y “room temperature”] se utilizan de manera indistinta y designan una temperatura de aproximadamente 20 °C, por ejemplo, 15 a 25 °C.

Como regla, se han obtenido los espectros de 1H RMN y/o los espectros masales de los compuestos preparados. A menos que se indique lo contrario, todas las operaciones cromatográficas se realizaron a temperatura ambiente. Durante la síntesis de dinucleótidos cíclicos, se realizó típicamente la evaporación de disolventes por evaporación rotativa bajo presión reducida con temperaturas del baño de agua que no excedieron 35°C. Además, durante la síntesis de dinucleótidos cíclicos, se llevaron a cabo reacciones bajo nitrógeno o argón.

Espectros de resonancia magnética nuclear (RMN): Para los espectros de 1H, las desviaciones químicas se referenciaron a la señal del disolvente DMSO (2,50 ppm) o, para las mediciones en D²O, a DSS (ácido 4,4-dimetil-4-silapentano-1-sulfónico). Los espectros de 31P RMN se referenciaron indirectamente por comparación de las frecuencias absolutas de 1H/31P (Bruker BioSpin GmbH, Software : TopSpin, au programa: xsi). Todos los espectros de 31P RMN se registraron con desacoplamiento protónico.

Lista de Abreviaturas

ACN acetonitrilo

ac. acuoso

°C grados Celsius

DA arreglo de diodos

DBU diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno

CEP (2-cianoetil)-(N,N-diisopropil)]-fosforamidita

DCM diclorometano

DDTT 3- ((N,N-dimetil-aminometiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazol-3-tiona

DIPEA diisopropiletilamina

DMAP 4- dimetilaminopiridina

DMF N,N-dimetilformamida

DMOCP 2-cloro-5,5-dimetil-2-oxo-1,3,2-dioxafosforinano

DMT 4,4'-dimetoxitritilo

ESI-MS espectrometría de masas con ionización por electropulverización

EtOAc acetato de etilo

eq equivalente

FC cromatografía flash, se utiliza SiO² en caso de no proporcionarse más detalles

h hora

HCl cloruro de hidrógeno

HATU Hexafluorofosfato de [dimetilamino-(1,2,3-triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)-metilen]-dimetil-amonio HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento

L litro

LiHMDS Hexametildisilazida de litio

m/z relación masa a carga

MeOH metanol

min minuto

mL mililitro

MS espectro de masa

n. d. no determinado

NH4OH solución de NH3 en agua

Pd-PEPPSI-Ipent™ dicloro[1,3-bis(2,6-Di-3-pentilfenil)imidazol-2-iliden](3-cloropiridil)paladio(II)

psi ibra por pulgada cuadrada

TA temperatura ambiente (aproximadamente 20°C)

SEM 2-(trimetilsilil)etoximetilo

Sol disolvente

TBS terc-butil-dimetilsililo

TEA trietilamina

TEAF formiato de trietilamonio

TF / TFA ácido trifluoroacético

TFAA anhídrido del ácido trifluoroacético

THF tetrahidrofurano

tR tiempo de retención en minutos

Configuraciones de HPLC analítica:

Configuración A (HPLC en gradiente):

VWR / Hitachi: Bomba L-2130; VWR / Hitachi: Automuestreador L-2200; VWR / Hitachi: Horno de Columna L-2350 (fijado en 30°C); VWR / Hitachi: L-2400 detector de UV/Vis de longitud de onda variable; versión del software EZChrom 3.3.1 SP1.

YMC*GEL ODS-A 12 nm (10 pm; 250 x 0,4 mm)) canal A= TEAF 20 mM (pH 6,8) en agua; canal B= 100 % de acetonitrilo, TEAF 20 mM (pH 6,8). Gradiente: 0 min 100 % A; 30 min 100 % B; 40 min 100 % B, 30°C; índice de flujo: 1,0 mL/min; UV 261 nm;

Configuración B (HPLC ¡socrática):

VWR / Hitachi: Bomba L-7100; VWR / Hitachi: L-7400 detector de UV/Vis de longitud de onda variable; VWR / Hitachi: Integrador D7500.

HPLC Analítica (configuración C; YMC*GEL ODS-A 12 nm (10 mm; 250 x 0,4 mm)) 11 % de acetonitrilo, TEAF 20 mM (pH 6,8) en agua; índice de flujo: 1,0 mL/min; UV 264 nm;

Análisis LC-MS:

Sistema de HPLC: VWR / Hitachi: Bomba L-2130; VWR / Hitachi: Automuestreador L-2200; VWR / Hitachi: L-2300 Horno de Columna; VWR / Hitachi: L-2450 Detector con Arreglo de Diodos; Agilent: OpenLab

Sistema de EM: espectrómetro Bruker Esquire LC 6000

Sistema A

Columna: Kromasil 100-5 C8, 5 mm, 50 mm x 3 mm.

Índice de flujo: 0,4 mL/min, 35°C, rango de detección de UV: 220 - 300 nm

Espectro de masas: Registrado en un espectrómetro de masas utilizando ionización por electropulverización negativa y positiva

Disolventes: A: acetonitrilo

B: agua

C: 20 mM NH⁴ HCO³ (pH 7) en agua

Gradiente: Tiempo A% B% C%

0 20 75 5

20 95 0 5

23 95 0 5

24 20 75 5

30 20 75 5

Preparación de muestras: Se disolvieron las muestras (2 mL - 10 mL) en 175 pL de acetonitrilo y 175 pL de agua, volumen de inyección 2 pL - 10 pL.

Sistema B

Columna: ACE 3 AQ 110-3 C¹⁸, 5 mm, 50 mm x 3 mm.

Índice de flujo: 0,4 mL/min, 35°C, rango de detección UV: 220 - 300 nm

Espectro de masas: Registrado en un espectrómetro de masas utilizando ionización por electropulverización negativa y positiva

Disolventes: A: acetonitrilo

B: agua

C: 20 mM NH⁴HCO³ (pH 7) en agua

Gradiente: Tiempo A% B% C%

0 2 93 5

20 60 35 5

23 95 0 5

24 2 93 5

30 2 93 5

continuación

(continuación)

SINTESIS DE COMPUESTOS INTERMEDIOS COMPUESTO INTERMEDIO 1.1

Imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido (1-(p-D-ribofuranosil)imidazo[4.5-d1piridazin-4(5H)-ona)

Se preparó el compuesto del título según lo descrito en J. Chem. Soc. Perkin Trans. 11989. 1769-1774 COMPUESTO INTERMEDIO 1.2

5'-DMT-im¡dazop¡r¡daz¡non-B -D-ribofuranósido

Imidazopiridazinon-p-D-ribofuranósido (COMPUESTO INTERMEDIARIO 1.1. 4.00 g. 14.9 mmol) se destiló azeotrópicamente con piridina anhidra (3 x 20 mL). se secó in vacuo y se disolvió en piridina anhidra (25 mL). A esta solución se le agregó una solución de cloruro de 4.4'-dimetoxitritilo (5.05 g. 14.9 mmol) en piridina anhidra (15 mL) y se agitó la mezcla de reacción durante 1 h a temperatura ambiente. Se evaporó la mezcla de reacción bajo presión reducida y se purificó el residuo resultante por HPLC de fase inversa preparativa (X-Bridge C18. acetonitrilo/ agua / NH³) LC-MS (sistema D):

tRet = 0,82 min; ESI-MS: 571 [M+H]+

COMPUESTO INTERMEDIO 1.3-a y COMPUESTO INTERMEDIO 1.3-b

5'-DMT-2'-TBS-¡m¡dazop¡r¡daz¡non-B-D-ribofuranós¡do (COMPUESTO INTERMEDIO 1.3-a) y 5'-DMT-3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido (COMPUESTO INTERMEDIO 1.3-b)

5'-DMT-¡m¡dazop¡r¡daz¡non-p-D-r¡bofuranós¡do (COMPUESTO INTERMEDIO 1.2, 5,30 g, 9,29 mmol) se destiló azeotrópicamente con piridina anhidra (3 x 30 mL), se secó in vacuo y se disolvió en piridina anhidra (20 mL). A esta solución se le agregó imidazol (1,90 g, 27,9 mmol) y ferc-butilclorodimetilsilano (1,54 g, 10,2 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante 6 h a temperatura ambiente. Se repartió la mezcla de reacción entre diclorometano y agua. Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con diclorometano. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salmuera, se secaron utilizando una frita hidrófoba y se evaporó bajo presión reducida. Se purificó el residuo resultante por cromatografía en columna de presión media (gel de sílice, gradiente de 5-20% de acetona en diclorometano).

LC-MS (sistema F):

COMPUESTO INTERMEDIO 1.3-a: tRet = 1,57 min; ESI-MS: 685 [M+H]+ COMPUESTO INTERMEDIO 1.3-b: tRet = 1,67 min; ESI-MS: 685 [M+H]+ COMPUESTO INTERMEDIO 1.4

5'-DMT-3'-TBS-2'-CEP-¡m¡dazop¡ridaz¡non-B-D-r¡bofuranós¡do

5'-DMT-3'-TBS-im¡dazop¡r¡daz¡non-p-D-r¡bofuranósido (COMPUESTO INTERMEDIO 1.3-b, 1,75 g, 2,56 mmol) se destiló azeotrópicamente con acetonitrilo anhidro (3 x 25 mL), se secó in vacuo y se disolvió en diclorometano anhidro (45 mL). A esta solución se le agregó N,N,N',N'-tetraisopropilfosforod¡am¡d¡ta de 2-cianoetilo (1,62 mL, 5,12 mmol) y tetrazol (5,69 mL de una solución 0,5 M en acetonitrilo, 2,85 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 4 h. Se diluyó la mezcla de reacción con diclorometano y se lavó con solución acuosa de hidrógeno carbonato sódico. Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con diclorometano. Se secaron los extractos orgánicos combinados utilizando una frita hidrófoba y se evaporó bajo presión reducida. Se purificó el residuo resultante por cromatografía en columna de presión media (gel de sílice (desactivado con trietilamina en diclorometano), gradiente de 20-100% de acetato de etilo (3% de trietilamina) en ciclohexano). Se obtuvo el producto como una mezcla de diastereoisómeros. LC-MS (sistema D):

tRet = 1,33 min; ESI-MS: 885 [M+H]+

31P RMN (162 MHz, 303 K, CDCla) 8150,9 y 149,7 ppm.

COMPUESTO INTERMEDIO 1.5

5'-OH-2'-TBS-3'-H-fosfonato-N6-Bz-adenosina

Se disolvió N6-Bz-5'-DMT-2'-TBS-3'-CEP-adenosina (obtenida de ChemGenes, 0,890 g, 0,90 mmol) en acetonitrilo (15 mL) y agua (0,033 mL, 1,83 mmol, 2 eq.) a temperatura ambiente. Se agregó trifluoroacetato de piridinio (0,210 g, 1,09 mmol, 1,2 eq.) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se agregó ferc-butilamina (10 mL, 95,7 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporó la mezcla de reacción bajo presión reducida, se redisolvió en acetonitrilo anhidro (25 mL) y se evaporó bajo presión reducida para proporcionar una espuma blanca a incolora. Se disolvió el residuo en diclorometano (25 mL) y agua (0,162 mL, 9 mmol, 10 eq.). Se agregó ácido dicloroacético (0,670 mL, 8,12 mmol, 9 eq.) en diclorometano (25 mL) y se agitó la solución naranja resultante a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se agregó piridina (1,31 mL, 16,23 mmol, 18 eq.) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 5 minutos.

El análisis LC-MS de la materia prima confirmó la presencia de COMPUESTO INTERMEDIO 1.5. LC-MS (sistema A): tRet = 3,10 min; ESI-MS: 550 [M+H]+

Se tapó el frasco, se selló cuidadosamente y se almacenó a 2°C durante 16 horas. Se evaporaron los disolventes bajo presión reducida y el residuo se destiló azeotrópicamente con acetonitrilo anhidro (4 x 15 mL). Durante el último procedimiento de evaporación, se concentró la solución hasta aproximadamente 5 mL de azeótropo final. La solución anhidra resultante de COMPUESTO INTERMEDIO 1.5 se utilizó inmediatamente en la siguiente secuencia de reacciones. COMPUESTO INTERMEDIO 1.6

Dímero lineal 5'-OH-3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5')-cianoetil-fosforotioato-2'-TBS-3'-H-fosfonato-N6-Bz-adenosina

5'-DMT-3'-TBS-2'-CEP-imidazopiridazinon-p-D-ribofuranósido (COMPUESTO INTERMEDIO 1.4, 1,340 g, 1,51 mmol, 1,7 eq.) se destiló azeotrópicamente con acetonitrilo anhidro (4x10 mL). Durante el último procedimiento de evaporación, se concentró la solución hasta aproximadamente 3 mL del azeótropo final. Se agregó la solución resultante a 5'-OH-2'-TBS-3'-H- fosfonato-N6-Bz-adenosina (COMPUESTO INTERMEDIO 1.5) disuelta en aproximadamente 5 mL de acetonitrilo anhidro (cantidad teórica de material deseado: 0,495 g, 0,90 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se agregó ((W,A/-dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tiona (DDTT) (0,203 g, 0,99 mmol, 1,1 eq.) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporaron los volátiles bajo presión reducida y se disolvió el residuo en diclorometano (25 mL) y agua (0,162 mL, 9 mmol, 10 eq.). Se agregó ácido dicloroacético (1,340 mL, 16,24 mmol, 18 eq.) en diclorometano (25 mL), y se agitó la solución naranja a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se agregó piridina (10 mL) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 5 minutos. El análisis LC-MS de la materia prima confirmó la presencia de COMPUESTO INTERMEDIO 1.6 como una mezcla de diastereoisómeros.

LC-MS (sistema A):

COMPUESTO INTERMEDIO 1.6-a: tRet = 7,36 min; COMPUESTO INTERMEDIO 1.6-b: tRet = 7,57 min;

ESI-MS: 1063 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

Se tapó el frasco, se selló cuidadosamente y se almacenó a 2°C durante 16 horas. Se evaporó la mezcla bajo presión reducida y se evaporó el residuo en conjunto con piridina anhidra (2 x 20 mL) bajo presión reducida. Se agregó otra porción de 40 mL de piridina anhidra y se concentró el residuo bajo presión reducida hasta un volumen total de aproximadamente 20 mL. La solución anhidra resultante de COMPUESTO INTERMEDIO 1.6 se utilizó inmediatamente en la siguiente secuencia de reacciones.

COMPUESTO INTERMEDIO 1.7

Dímero cíclico 3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5')-cianoetil-fosforotioato-2'-TBS- N6-Bz-adenosina-(3'^5')-fosforotioato

Se agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosforinano (DMOCP) (0,581 g, 3,15 mmol, 3,5 eq.) a 5'-OH-3'-TBS-imidazopiridazinon-p-D-ribofuranósido-(2'^5')-CE-PS-2'-TBS-3'-H-fosfonato-N6-Bz-adenosina en bruto (COMPUESTO INTERMEDIO 1.6) (cantidad teórica de material deseado en preparación en bruto: 0,957 g, 0,90 mmol) en piridina anhidra en un volumen total de aproximadamente 20 mL. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se agregaron agua (0,570 mL, 31,6 mmol, 35,1 eq.) y 3H-1,2-benzoditiol-3-ona (0,230 g, 1,37 mmol, 1,5 eq.) y se siguió agitando a temperatura ambiente. Después de 20 minutos, se vertió la mezcla de reacción en una solución de hidrógeno carbonato sódico (4,500 g, 53,6 mmol) en 150 mL de agua y se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos, seguido por la adición de una mezcla de acetato de etilo / metil-ferc-butiléter (150 mL, 1:1). Se separó la fase orgánica y se extrajo adicionalmente la fase acuosa dos veces con acetato de etilo / metil-ferc-butiléter (2 x 75 mL, 1:1). Se secaron las fases orgánicas combinadas con sulfato de magnesio anhidro, seguido por evaporación de los disolventes bajo presión reducida y una evaporación conjunta final con 100 mL de tolueno anhidro. Se purificó la materia prima mediante cromatografía flash preparativa (160 g de gel de sílice, gradiente de 0-12,5% MeOH en diclorometano) para proporcionar 0,78 g de COMPUESTO INTERMEDIO 1.7 de pureza enriquecida (mezcla de diastereómeros).

LC-MS (sistema A):

COMPUESTO INTERMEDIO 1.7-a: tRet = 7,56 min; COMPUESTO INTERMEDIO 1.7-b: tRet = 8,18 min;

COMPUESTO INTERMEDIO 1.7-c: tRet = 9,02 min; COMPUESTO INTERMEDIO 1.7-d: tRet = 10,17 min;

ESI-MS: 1077 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

COMPUESTO INTERMEDIO 1.8

Dímero cíclico 3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5')-fosforotioato-2'-TBS-adenosina-(3'^5')-fosforotioato

Se agregaron 125 mL de metilamina al 33 % en etanol absoluto al 3'-TBS-¡m¡dazop¡r¡daz¡non-p-D-ribofuranós¡do-(2'^5')-c¡anoet¡l-fosforot¡oato-2'-TBS-N6-Bz-adenos¡na-(3^5')-fosforot¡oato de pureza enriquecida (COMPUESTO INTERMEDIO 1.7; 0,780 g) y se agitó la solución resultante a temperatura ambiente durante 4 horas. Se evaporaron todos los volátiles bajo presión reducida y se secaron in vacuo para proporcionar 0,758 g de COMPUESTO INTERMEDIO 1.8 en bruto (mezcla de diastereómeros), el cual se utilizó directamente en la siguiente reacción.

LC-MS (sistema A):

COMPUESTO INTERMEDIO 1.8-a: tRet = 1,47 min; COMPUESTO INTERMEDIO 1.8-b: tRet = 3,60 min;

COMPUESTO INTERMEDIO 1.8-c: tRet = 3,90 min; COMPUESTO INTERMEDIO 1.8-d: tRet = 5,53 min;

ESI-MS: 920 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

COMPUESTO INTERMEDIO 2.1

5'-OH-2'-F-3'-H-fosfonato-N6-Bz-2'-desoxiadenos¡na

Se disolvió N6-benzoil-5'-DMT-2'-F-2'-desoxiadenosina-3'-CEP (obtenida de Alfa Aesar) (1,05 g, 1,20 mmol) en acetonitrilo (6 mL) y agua (0,043 mL, 2,40 mmol, 2 eq.) a temperatura ambiente. Se agregó trifluoroacetato de piridinio (278 mg, 1,44 mmol, 1,2 eq.) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 5 minutos. Luego, se agregó terc-butilamina (6,0 mL, 57,1 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se evaporó la mezcla de reacción in vacuo, se volvió a disolver (2x) en acetonitrilo anhidro (12 mL) y se evaporó nuevamente in vacuo para proporcionar una espuma blanca a incolora. Se disolvió el residuo en diclorometano (14,4 mL) y agua (0,22 mL, 12,0 mmol, 10 eq.). Se agregó ácido dicloroacético en diclorometano (6%, 14,4 mL) y se agitó la solución naranja resultante a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se agregó piridina (1,64 mL, 20,3 mmol, 17 eq.) y se evaporó la mezcla de reacción in vacuo y se destiló azeotrópicamente con acetonitrilo anhidro (3 x 11 mL). Finalmente, se secó el producto en bruto remanente en alto vacío durante 30 min. adicionales y se utilizó sin más purificación. El análisis LC-MS de la materia prima confirmó la presencia de COMPUESTO INTERMEDIO 2.1.

LC-MS (sistema E):

tRet = 0,64 min ESI-MS: 438 [M+H]+ .

COMPUESTO INTERMEDIO 2.2

Dímero lineal 5'-OH-3'-TBS-¡m¡dazop¡r¡daz¡non-B-D-r¡bofuranós¡do-(2'^5')-c¡anoetil-fosforot¡oato-2'-F-3'-H-fosfonato-N6-Bz-2'-desoxiadenos¡na

Se disolvió 5'-DMT-3'-TBS-2'-CEP-imidazopiridazinon-p-D-ribofuranósido (COMPUESTO INTERMEDIO 1.4, 1,38 g, 1,56 mmol, 1,0 eq.) en acetonitrilo anhidro (10 mL) y se evaporó azeotrópicamente in vacuo. Esta operación se repitió otras tres veces dejando aproximadamente 5 mL de azeótropo en el frasco en la última evaporación. Se agregaron 10 piezas de tamiz molecular (3Á) y se agregó la mezcla resultante a 5'-OH-2'-F-3'-H-fosfonato-N⁶-Bz-2'-desoxiadenosina (COMPUESTO INTERMEDIO 2.1) disuelta en aproximadamente 3 mL de acetonitrilo anhidro (cantidad teórica de material deseado: 523 mg, 1,20 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se agregó ((A/,W-dimetilamino-metiliden)amino)-3H-1,2,4-ditiazolin-3-tiona (DDTT) (275 mg, 1,34 mmol, 0,9 eq.) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se evaporaron los volátiles in vacuo y se disolvió el residuo en diclorometano (20 mL) y agua (0,216 mL, 12 mmol, 7,7 eq.). Se agregó ácido dicloroacético en diclorometano (⁶ %, 19,2 mL) y se agitó la solución naranja resultante a temperatura ambiente durante 10 minutos. Luego de este período, se agregó piridina (12 mL) y se evaporó la mezcla de reacción in vacuo. Finalmente, se secó el producto en bruto remanente en alto vacío durante otros 30 min. y se utilizó sin más purificación y caracterización.

COMPUESTO INTERMEDIO 2.3

Dímero cíclico 3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5')-cianoetil-fosforotioato-2'-F-N⁶-Bz-2'-desoxiadenosina-(3'^5')-fosforotioato

Se disolvió el COMPUESTO INTERMEDIO 2.2 en bruto (cantidad máxima teórica de material deseado: 1,48 g, 1,56 mmol) en 36 mL de piridina anhidra y se redujo hasta aproximadamente 20 mL in vacuo. Se agregó 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosforinano (DMOCP) (775 mg, 4,20 mmol, 2,7 eq.) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se agregaron agua (0,75 mL, 41,3 mmol, 26,5 eq.) y 3H-1,2-benzoditiol-3-ona (0,302 g, 1,80 mmol, 1,15 eq.) y se siguió agitando a temperatura ambiente. Después de 5 minutos, se vertió la mezcla de reacción en una solución de hidrógeno carbonato sódico (4,00 g, 47,6 mmol) en 140 mL de agua y se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos, seguido por la adición de una mezcla de acetato de etilo / metil-terc-butiléter (140 mL, 1:1). Se separó la fase orgánica y se extrajo adicionalmente la fase acuosa con acetato de etilo / metil-terc-butiléter (1:1). Se combinaron las fases orgánicas y se eliminó el disolvente in vacuo.

Se disolvió el residuo remanente en un volumen mínimo de diclorometano y se purificó por cromatografía flash preparativa (gel de sílice, DCM/MeOH: 100/0 ^ 80/20). Se analizaron las fracciones por HPLC-MS. Se combinaron las fracciones que contenían producto y se eliminó el disolvente in vacuo para proporcionar 900 mg de una mezcla de diastereoisómeros. El análisis LC-MS del material confirmó la presencia de los COMPUESTOS INTERMEDIOS 2.3-a/b/c/d.

LC-MS (sistema E):

COMPUESTO INTERMEDIO 2.3-a: tRet = 0,95 min; COMPUESTO INTERMEDIO 2.3-b: tRet = 0,98 min;

COMPUESTO INTERMEDIO 2.3-c: tRet = 1,00 min; COMPUESTO INTERMEDIO 2.3-d: tRet = 1,03 min;

ESI-MS: 965 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

COMPUESTO INTERMEDIO 2.4

Dímero cíclico 3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5')-fosforotioato-2'-F-2'-desoxiadenosina-(3'^5')-fosforotioato

A 10 mL de metanol y 10 mL de amoníaco ac. (30-33%) se le agregaron 300 mg (cantidad teórica máx. de material deseado: 0,31 mmol) de COMPUESTO INTERMEDIO 2.3. Se agitó la mezcla resultante a 50 °C durante 15 h. Se enfrió la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla durante 30 min. Se eliminó el disolvente in vacuo, se volvió la disolver la mezcla en acetonitrilo anhidro (30 mL) y se evaporó nuevamente in vacuo. Se trituró el residuo con acetonitrilo anhidro, se filtró, se lavó con 5ml de ACN y se secó durante toda la noche a temperatura ambiente. Se disolvió el producto en bruto en DMF y se purificó por HPLC preparativa (X-Bridge C-18; acetonitrilo/H²O/NH³). Se recogieron las fracciones que contenían producto y se eliminó el disolvente por liofilización. Mediante este método, se pudieron separar los cuatro diastereoisómeros.

El análisis LC-MS del material confirmó la presencia de los COMPUESTOS INTERMEDIOS 2.4-a/b/c/d.

LC-MS (sistema C):

COMPUESTO INTERMEDIO 2.4-a: tRet = 1,04 min; COMPUESTO INTERMEDIO 2.4-b: tRet = 1,10 min;

COMPUESTO INTERMEDIO 2.4-c: tRet = 1,13 min; COMPUESTO INTERMEDIO 2.4-d: tRet = 1,15 min;

ESI-MS: 808 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

COMPUESTO INTERMEDIO 3.1

5'-OH-3'-H-fosfonato-N⁶-Bz-LNA-adenina

Se preparó el COMPUESTO INTERMEDIO 3.1 de manera análoga al COMPUESTO INTERMEDIO 2.1 utilizando "LNA-A amidita" (EQ-0063-1000, obtenida de Exiqon) como material de partida.

El análisis LC-MS de la materia prima confirmó la presencia de COMPUESTO INTERMEDIO 3.1.

LC-MS (sistema E):

tRet = 0,63 min; ESI-MS: 448 [M+H]+

COMPUESTO INTERMEDIO 3.2

Dímero lineal 5'-OH-3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5') c¡anoet¡l-fosforotioato-3'-H-fosfonato-N⁶-Bz-LNA-adenina

Se preparó el COMPUESTO INTERMEDIO 3.2 análogamente al COMPUESTO INTERMEDIO 2.2 utilizando el COMPUESTO INTERMEDIO 3.1 y el COMPUESTO INTERMEDIO 1.4 como materiales de partida.

COMPUESTO INTERMEDIO 3.3

Dímero cíclico 3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5')-cianoetil-fosforo-tioato-N⁶--Bz- LNA-adenina-(3'^5')-fosforotioato

Se preparó el COMPUESTO INTERMEDIO 3.3 de manera análoga al COMPUESTO INTERMEDIO 2.3 utilizando el COMPUESTO INTERMEDIO 3.2 como material de partida.

El análisis LC-MS del material confirmó la presencia de los COMPUESTOS INTERMEDIOS 3.3-a/b/c/d.

LC-MS (sistema E):

COMPUESTO INTERMEDIO 3.3-a: tRet = 0,94 min; COMPUESTO INTERMEDIO 3.3-b: tRet = 0,98 min;

COMPUESTO INTERMEDIO 3.3-c: tRet = 0,99 min; COMPUESTO INTERMEDIO 3.3-d: tRet = 1,03 min;

ESI-MS: 975 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

COMPUESTO INTERMEDIO 3.4

Dímero cíclico 3'-TBS-¡m¡dazop¡r¡daz¡non-B-D-r¡bofuranós¡do-í2'^5')-fosforot¡oato-LNA-aden¡na-í3'^5')-fosforot¡oato

Se preparó el COMPUESTO INTERMEDIO 3.4 de manera análoga al COMPUESTO INTERMEDIO 2.4 ut¡l¡zando el COMPUESTO INTERMEDIO 3.3 como mater¡al de part¡da.

El anál¡s¡s LC-MS del mater¡al conf¡rmó la presenc¡a de los COMPUESTOS INTERMEDIOS 3.4-a/b/c/d.

LC-MS (s¡stema C):

COMPUESTO INTERMEDIO 3.4-a: tRet = 0,81 m¡n; COMPUESTO INTERMEDIO 3.4-b: tRet = 0,89 m¡n;

COMPUESTO INTERMEDIO 3.4-c: tRet = 0,91 m¡n; COMPUESTO INTERMEDIO 3.4-d: tRet = 0,99 m¡n;

ESI-MS: 818 [M+H]+ para cada d¡astereo¡sómero.

COMPUESTO INTERMEDIO 4.1

5'-OH-2'-TBS-3'-H-fosfonato-pur¡na-B-D-r¡bofuranós¡do

Se preparó el COMPUESTO INTERMEDIO 4.1 de manera análoga al COMPUESTO INTERMEDIO 1.5 ut¡l¡zando 5'-DMT-2'-TBS-3'-CEP-pur¡na-p-D-r¡bofuranós¡do como mater¡al de part¡da el cual se puede preparar según lo descr¡to en Fu et al. B¡ochem¡stry 1993, 32, 10629 - 10637. A d¡ferenc¡a del COMPUESTO INTERMEDIO 1.5 este compuesto ¡ntermed¡o no se almacenó durante toda la noche s¡no que se ut¡l¡zó ¡nmed¡atamente en la s¡gu¡ente secuenc¡a de reacc¡ones. El anál¡s¡s LC-MS de la mater¡a pr¡ma conf¡rmó la presenc¡a del COMPUESTO INTERMEDIO 4.1. LC-MS (s¡stema B): tRet = 8,56 m¡n; ESI-MS: 431 [M+H]+

COMPUESTO INTERMEDIO 4.2

Dímero l¡neal 5'-OH-3'-TBS-¡m¡dazop¡r¡daz¡non-B-D-r¡bofuranós¡do-(2'^5') c¡anoet¡l-fosforot¡oato-2'-TBS-3'-H-fosfonatopur¡na-B-D-r¡bofuranós¡do

Se preparó el COMPUESTO INTERMEDIO 4.2 de manera análoga al COMPUESTO INTERMEDIO 1.6 utilizando el COMPUESTO INTERMEDIO 1.4 y el COMPUESTO INTERMEDIO 4.1 antes descrito como materiales de partida. El análisis LC-MS de la materia prima confirmó la presencia del COMPUESTO INTERMEDIO 4.2 como una mezcla de diastereoisómeros.

LC-MS (sistema B):

COMPUESTO INTERMEDIO 4.2-a: tRet = 14,86 min; COMPUESTO INTERMEDIO 4.2-b: tRet = 15,01 min;

ESI-MS: 944 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

COMPUESTO INTERMEDIO 4.3

Dímero cíclico 3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5')-cianoetil-fosforo-tioato-2'-TBS-purina-B-D-ribofuranósido-(3'^5')-fosforotioato

Se preparó el COMPUESTO INTERMEDIO 4.3 (como mezcla de diastereómeros) de manera análoga al COMPUESTO INTERMEDIO 1.7 utilizando el COMPUESTO INTERMEDIO 4.2 como material de partida.

LC-MS (sistema B):

COMPUESTO INTERMEDIO 4.3-a: tRet = 15,76 min; COMPUESTO INTERMEDIO 4.3-b: tRet = 16,61 min;

COMPUESTO INTERMEDIO 4.3-c: tRet = 17,68 min; COMPUESTO INTERMEDIO 4.3-d: tRet = 19,26 min;

ESI-MS: 958 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

COMPUESTO INTERMEDIO 4.4

Dímero cíclico 3'-TBS-imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5') fosforotioato-2'-TBS-purina-B-D-ribo- furanósido-(3'^5')-fosforotioato

Se preparó el COMPUESTO INTERMEDIO 4.4 (como mezcla de diastereómeros) de manera análoga al COMPUESTO INTERMEDIO 1.8 utilizando el COMPUESTO INTERMEDIO 4.3 como material de partida.

LC-MS (sistema B):

COMPUESTO INTERMEDIO 4.4-a: tRet = 10,31 min; COMPUESTO INTERMEDIO 4.4-b: tRet = 11,82 min;

COMPUESTO INTERMEDIO 4.4-c: tRet = 12,26 min; COMPUESTO INTERMEDIO 4.4-d: tRet = 14,47 min;

ESI-MS: 905 [M+H]+ para cada diastereoisómero.

SÍNTESIS DE COMPUESTOS DE ACUERDO CON LA PRESENTE INVENCIÓN

Observación general: Los siguientes pares de compuestos son diastereómeros y difieren con respecto a la configuración de al menos un átomo de fósforo, respectivamente:

EJEMPLO 1.1 y EJEMPLO 1.2;

EJEMPLO 2.1 y EJEMPLO 2.2;

EJEMPLO 3.1 y EJEMPLO 3.2;

EJEMPLO 4.1 y EJEMPLO 4.2.

EJEMPLO 1.1 y EJEMPLO 1.2

(Imidazopiridazinon-p-D-ribofuranósido-(2'^5')-fosforotioato-adenosina-(3'^5')-fosforotioato) cíclico

Se agregaron 30 mL de piridina anhidra y 15 mL de trietilamina anhidra a 3'-TBS-imidazopiridazinon-p-D-ribofuranósido-(2'^5')-fosforotioato-2'-TBS-adenosina-(3'^5')-fosforotioato en bruto (COMPUESTO INTERMEDIO 1.8; 0,76 g). Se concentró la solución resultante bajo presión reducida hasta un volumen total de aproximadamente 5 mL, seguido por la adición simultánea de trifluorohidrato de trietilamina (3,590 mL, 21,7 mmol) y ¹¹ mL de trietilamina anhidra. Se agitó esta solución a 50°C durante 3,5 horas. Después de enfriamiento hasta temperatura ambiente, se templó la reacción con metoxitrimetilsilano (10 mL, 72,4 mmol) y se siguió agitando a temperatura ambiente hasta consumir cualquier exceso de HF. Después de 30 minutos, se evaporaron todos los componentes volátiles bajo presión reducida, seguido por una evaporación conjunta final con 50 mL de tolueno anhidro bajo presión reducida. Se secó el residuo aún más in vacuo para proporcionar la mezcla en bruto que contenía el Ejemplo 1.1 y el Ejemplo 1.2.

Se agregaron 65 mL de agua y se colocó la suspensión resultante en un baño ultrasónico a temperatura ambiente. Después de 15 minutos, se vertió esta suspensión en 60 mL de cloroformo y se separó la fase orgánica. Se repitió esta extracción otras dos veces con cloroformo. Se extrajeron las fases orgánicas combinadas con 50 mL de agua y se filtró la fase acuosa que contenía el producto combinada con un filtro de jeringa CME de 0,45 mm Rotilabo® (diámetro exterior: 33 mm) para eliminar los componentes en partículas. Se diluyó la solución de producto con agua hasta 500 mL y se aplicó a una columna de intercambio aniónico Q Sepharose™ Fast Flow (40 - 165 mm; 125 x 35 mm; -120 mL) forma Cl', previamente regenerada con cloruro sódico 2 M y se lavó con agua. Se lavó la columna con agua (2 volúmenes de la columna), seguido por un gradiente de amortiguador de bicarbonato de trietilamonio 0 - 1 M (TEAB, pH 7) en agua sobre 25 volúmenes de columna (longitud de onda de detección 254 nm). El EJEMPLO 1.1 y el EJEMPLO 1.2 eluyeron como una mezcla de isómeros con -TEAB 0,6 M. Las fracciones que contenían producto se concentraron cuidadosamente hasta un volumen final de aproximadamente 10 mL bajo presión reducida.

Se logró la separación del EJEMPLO 1.1 (cuarta elución) y del EJEMPLO 1.2 (tercera elución) mediante purificaciones repetidas por HPLC de fase inversa semi-preparativa. Se aplicó la solución de producto a una columna YMC*GEL ODS-A 12 nm (1o pm; 250 x 16 mm; -50 mL), previamente equilibrada con 4 % de acetonitrilo, formiato de trietilamonio 20 mM (TEAF, pH ⁶ ,⁸ ) en agua. La elución se realizó con un gradiente de etapas de 4 %, ⁶ % y 20 % de acetonitrilo, TEAF 20 mM (pH ⁶ ,⁸ ) en agua

Preparación del EJEMPLO 1.1, sal sódica ("cuarto diastereómero en eluir")

La desalación del EJEMPLO 1.1, sal de TEA, se llevó a cabo mediante cromatografía líquida de presión mediana (MPLC) en fase inversa, preparativa. Se aplicó la solución de producto (-40 mL) a una columna Merck LiChroprep®RP-18 (15 - 25 pm; 450 x 25 mm; -220 mL), previamente equilibrada con agua. Se lavó la columna con agua para eliminar el exceso de amortiguador de TEAF. Luego, se utilizó 2 % de 2-propanol en agua para eluir el EJEMPLO 1.1 desalado. Se concentraron parcialmente las fracciones que contenían producto bajo presión reducida y posteriormente se aplicaron a una columna de intercambio catiónico SP Sepharose™ Fast Flow (45 - 165 mm; 125 x 35 mm; -120 mL) forma Na+, previamente regenerada con cloruro sódico 2 M y lavada con agua. Se lavó la columna con agua hasta que ya no se pudo detectar absorbancia de UV (longitud de onda de detección 254 nm). Se evaporaron cuidadosamente las fracciones que contenían producto bajo presión reducida y se secaron adicionalmente in vacuo para proporcionar el EJEMPLO 1.1 como sal disódica.

HPLC (configuración A): tRet = 8,56 min;

ESI-MS: 692 [M+H]+

¹H RMN (400 MHz, 318 K, 500 pL (CDa^SO 30 pL D²O) ⁸ 8,70 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 6,07 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,91 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,07 - 4,99 (m, 2H), 4,95 (dd, J = 7,5, 4,5 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,33 - 4,21 (m, 3H), 4,05 - 3,93 (m, 1H), 3,92 - 3,77 (m, 2H) ppm.

³¹P RMN (162 MHz, D²O): ⁸ 52,4 (s, 1P), 55,3 (s, 1P) ppm.

Preparación del EJEMPLO 1.2, sal sódica ("tercer diastereómero en eluir")

Se realizó la desalación y el cambio de sal de TEA a sodio del EJEMPLO 1.2, sal de TEA de manera similar a lo descrito para el EJEMPLO 1.1, sal TEA.

HPLC (configuración A): tRet = 7,75 min;

ESI-MS: 692 [M+H]+

¹H RMN (400 MHz, 318 K, 500 pL (CDa^SO 30 pL D²O) ⁸ 8,72 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 6,04 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,25 (dd, J = 8,5, 4,4 Hz, 1H), 5,08 (ddd, J = 11,2, 8,4, 4,5 Hz, 1H), 4,92 (dd, J = 8,2, 4,3 Hz, 1H), 4,37 - 4,27 (m, 1H), 4,27 - 4,21 (m, 3H), 4,08 (dd, J = 11,0, 4,2 Hz, 1H), 3,82 - 3,77 (m, 1H), 3,67 - 3,60 (m, 1H) ppm.

³¹P RMN (162 MHz, D²O): ⁸ 55,8 (s, 1P), 57,0 (s, 1P) ppm.

EJEMPLO 2.1 y EJEMPLO 2.2

(Imidazopiridazinon-p-D-ribofuranósido-(2'^5')-fosforotioato-2'-F-2'-desoxiadenosina-(3'^5')-fosforotioato cíclico

Se agregaron 16 mg (19 |jmol) del COMPUESTO INTERMEDIO 2.4-d a 1 mL de piridina anhidra y 4 mL de acetonitrilo anhidro y se evaporó azeotrópicamente el disolvente in vacuo. Se resuspendió dos veces el residuo en 10 mL de acetonitrilo anhidro y nuevamente se evaporó azeotrópicamente in vacuo. Se agregaron 80,7 jL (^{1 , 0} mmol) de piridina anhidra y 168 jL (1,2 jm ol) de TEA al residuo antes de agregarse cuidadosamente por medio de una jeringa 103 jL (0,63 mmol) TEA*3HF. Se agitó la mezcla resultante a 50 °C durante 90 min. Después de enfriamiento hasta temperatura ambiente, se templó la reacción mediante la adición de 20 mL de una solución ac. de carbonato de trietilamonio (conc.= 1 mol/L). Se agitó la mezcla resultante durante otros 15 min a temperatura ambiente. Se cargó cuidadosamente la mezcla en un cartucho Water Sep Pak C18 © (5g de material C18, preacondicionado con, en primer lugar, 25 mL de acetonitrilo y luego con 25 mL de agua) y se lavó con 60 mL de agua. Luego, se eluyó el producto del cartucho utilizando 100 mL de una mezcla de acetonitrilo/acetato de trietilamonio /agua (preparada agregando 1 mL de una solución ac. de acetato de trietilamonio (conc= 1 mol/L) a 100 mL de agua y 25 mL de acetonitrilo). Se combinaron las fracciones que contenían producto y se eliminó el disolvente por liofilización.

Se purificó aún más el producto resultante por HPLC prep. (Atlantis C18; NH4Oac ac. 20 mM / acetonitrilo = 98/2 80/20.). Luego de la eliminación de los disolventes por liofilización, se disolvió el producto en 2 mL de agua y se vertió en una columna Spin de BioRad (cargada con 250 mg de BT AG 50W-2 resina Forma de hidrógeno de 100-200 de Malla, acondicionada con 3 mL de NaOH ac. 1M y luego se lavó con ⁶ mL de agua dando como resultado pH~7)) y se eluyó con 12 mL de agua. Se combinaron las fracciones que contenían el producto final y se eliminó el disolvente por liofilización.

EJEMPLO 2.1:

LC-MS (sistema C):

tRet = 0,61 min; ESI-MS: 694 [M+H]+

1H RMN (400 MHz, 303 K, D²O) ⁸ ppm 8,73 (s, 1 H), 8,53 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 7,96 (s, 1 H), 6,40 (d, J=15,9 Hz, 1 H), 6,26 (d, J=^{8 , 6} Hz, 1 H), 5,55 (dd, J=51,1, 3,8 Hz, 1 H), 4,83 - 4,99 (m, 2 H), 4,75 (d, J=4,2 Hz, 1 H), 4,65 (ddd, J=12,2, 9,0, 2,2 Hz, 1 H), 4,53 - 4,59 (m, 2 H), 4,43 - 4,48 (m, 1 H), 4,16 - 4,24 (m, 2 H)

³¹P RMN (162 MHz, D²O): ⁸ 55,7 (s, 1P), 52,2 (s, 1P) ppm.

EJEMPLO 2.2

Se preparó el EJEMPLO 2.2 de manera análoga al EJEMPLO 2.1 utilizando el COMPUESTO INTERMEDIO 2.4-c como material de partida.

LC-MS (sistema C):

tRet = 0,30 min; ESI-MS: 694 [M+H]+

1H RMN (400 MHz, 303K, D²O) ⁸ ppm 8,80 (s, 1 H), 8,55 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 8,24 (s, 1 H), 6,44 (d, J=15,0 Hz, 1 H), 6,28 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 5,54 - 5,73 (m, 1 H), 4,99 - 5,10 (m, 2 H), 4,64 - 4,70 (m, 1 H), 4,58 (d, J=4,4 Hz, 1 H), 4,52 - 4,57 (m, 2 H), 4,37 - 4,45 (m, 1 H), 4,22 (ddd, J=12,3, 3,5, 1,1 Hz, 1 H), 4,08 (ddd, J=11,7, 3,6, 1,7 Hz, 1 H)

³¹P RMN (162 MHz, D²O): ⁸ 55,5 (s, 1P), 55,9 (s, 1P) ppm.

EJEMPLO 3.1 y EJEMPLO 3.2

(Imidazopiridazinon-p-D-ribofuranósido-(2'^5')-fosforotioato-LNA-adenina-(3'^5')-fosforotioato cíclico), sal sódica

Se prepararon los EJEMPLOS 3.1 y 3.2 de manera análoga al EJEMPLO 2.1 y 2.2 utilizando el COMPUESTO INt Er Me DIO 3.4-d (para el EJEMPLO 3-1) y 3.4-c (para el EJEMPLO 3-2) como material de partida, respectivamente. EJEMPLO 3.1:

LC-MS (sistema E):

tRet = 0,37 min; ESI-MS: 704 [M+H]+

1H RMN (400 MHz, 303 K, D²O) ⁸ ,ppm 8,79 (s, 1 H), 8,53 (s, 1 H), 8,22 (s, 1 H), 7,95 (s, 1 H), 6,26 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 6,14 (s, 1 H), 5,08 (s, 1 H), 4,97 (ddd, J=9,6, 8,4, 4,4 Hz, 1 H), 4,81 (d, J=5,4 Hz, 1 H), 4,82 - 4,70 (m, 3 H), 4,55 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 4,35 (dd, J=11,9, 2,7 Hz, 1 H), 4,25 - 4,16 (m, 3 H), 4,08 (d, J=8,5 Hz, 1 H)³¹P RMN (162 MHz, D²O): ⁸ 56,0 (s, 1P), 53,0 (s, 1P) ppm.

EJEMPLO 3.2:

LC-MS (sistema E):

tRet = 0,29 min; ESI-MS: 704 [M+H]+

1H RMN (400 MHz, 303 K, D²O) ⁸ ppm 8,85 (s, 1 H), 8,56 (s, 1 H), 8,23 (s, 1 H), 8,15 (s, 1 H), 6,26 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 6,16 (s, 1 H), 5,20 (s, 1 H), 5,00 (ddd, J=13,0, 8,4, 4,5 Hz, 1 H), 4,87 (d, J=5,0 Hz, 1 H), 4,83 - 4,73 (m, 2 H), 4,62 (d, J=4,5 Hz, 1 H), 4,54 - 4,52 (m, 1 H), 4,47 (dd, J=11,3, 5,0 Hz, 1 H), 4,27 - 4,20 (m, 2 H), 4,12 (dd, J=11,3, 3,1 Hz, 1 H), 4,10 (d, J=8,5 Hz, 1 H).

³¹P RMN (162 MHz, D²O): ⁸ 57,3 (s, 1P), 55,8 (s, 1P) ppm.

EJEMPLO 4.1 y EJEMPLO 4.2

(Imidazopiridazinon-B-D-ribofuranósido-(2'^5')-fosforotioato-purina-B-D ribofuranósido-(3'^5')-fosforotioato) cíclico, sal sódica

Se prepararon los EJEMPLOS 4.1 y 4.2 de manera análoga al EJEMPLO 1.1 y 1.2 utilizando el COMPUESTO INt Er Me DIO 4.4-d y el COMPUESTO INTERMEDIO 4.4-c como material de partida. Además del procedimiento descrito para los EJEMPLOS 1.1 y 1.2, antes del comienzo de la reacción, se destiló azeotrópicamente una vez el material de partida utilizando una mezcla ^{2 : 1} de piridina anhidra y trietilamina anhidra.

EJEMPLO 4.1:

HPLC (configuración B): tRet = 10,22 min; ESI-MS: 677 [M+H]+

¹H RMN (400 MHz, 318 K, 500 pL (CDa^SO 30 pL D²O) ⁸ 9,16 (s, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,82 (s, 1H), ^{8 , 68} (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 6,06 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 5,11 - 4,98 (m, 3H), 4,44 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,34 - 4,25 (m, 3H), 4,08 - 3,97 (m, 1H), 3,93 - 3,83 (m, 1H), 3,84 - 3,77 (m, 1H).

³¹P RMN (162 MHz, D²O): ⁸ 55,3 (s, 1P), 52,6 (s, 1P) ppm.

EJEMPLO 4.2:

HPLC (configuración B): tRet = 5,50 min;

ESI-MS: 677 [M+H]+

H RMN (400 MHz, 318 K, 500 pL (CDa^SO 30 pL D²O) ⁸ 9,16 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,59 (s, H), 6,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,03 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,30 (dd, J = 8,5, 4,3 Hz, 1H), 5,09 (ddd, J = 11,3, 8,4, 4,6 Hz, 1H), ,01 (dd, J = 8,2, 4,3 Hz, 1H), 4,45 - 4,32 (m, 1H), 4,32 - 4,19 (m, 3H), 4,13 (dd, J = 11,0, 4,1 Hz, 1H), 3,84 - 3,75 (m, 1H), ,71 - 3,61 (m, 1H).

¹P RMN (162 MHz, D²O): ⁸ 55,8 (s, 1P), 57,8 (s, 1P) ppm.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES

   

   R1 se selecciona del grupo que consiste en H, F, -O-alquiloCi^-3 y OH, y

   R2 es H, o

   R2 es -CH²- y R1 es -O-, formando en conjunto un puente -CH²-O-, y

   R3 es una nucleobase de purina seleccionada del grupo que consiste en purina, adenina, guanina, xantina, hipoxantina, conectada a través de su nitrógeno N9,

   los solvatos e hidratos del mismo, o una sal del mismo.

   2. Un compuesto de fórmula Ia de acuerdo con la reivindicación 1

   

   los solvatos e hidratos del mismo, o una sal del mismo.

   3. Un compuesto de fórmula Ib de acuerdo con la reivindicación 1

   

   los solvatos e hidratos del mismo, o una sal del mismo.

   4. El compuesto de fórmula la.1 de acuerdo con la reivindicación 2

   

   los solvatos e hidratos del mismo.

   5. El compuesto de fórmula la.2 de acuerdo con la reivindicación 2

   

   los solvatos e hidratos del mismo.

   ⁶. El compuesto de fórmula la.3 de acuerdo con la reivindicación 2

   

   los solvatos e hidratos del mismo.

   7. El compuesto de fórmula Ib.1 de acuerdo con la reivindicación 3

   

   los solvatos e hidratos del mismo.

   ⁸. Un estereoisómero (Sp,Sp), (Rp,Rp), (Sp,Rp), o (Rp,Sp) sustancialmente puro de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, el cual es al menos 90% puro en relación con los otros posibles diastereómeros, o una sal del mismo.

   9. Un estereoisómero (Rp,Rp) sustancialmente puro de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, el cual es al menos 90% puro en relación con los otros posibles diastereómeros, o una sal del mismo.

   10. Una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.

   11. Una sal sódica de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, 5, ⁶ o 7.

   12. Una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una o más sales farmacéuticamente aceptables de acuerdo con la reivindicación 10, opcionalmente junto con uno o más portadores inertes y/o diluyentes.

   13. Una vacuna que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

   14. Un Compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para utilizar como adyuvantes de vacunas.

   15. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para utilizar como un medicamento. 16. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para utilizar en el tratamiento de enfermedades o afecciones seleccionadas entre inflamación, enfermedades alérgicas, enfermedades autoinmunitarias, enfermedades infecciosas y cáncer.

   17. Una composición farmacéutica que comprende uno o más compuestos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones ¹ a ¹⁰ y uno o más agentes terapéuticos adicionales, opcionalmente junto con uno o más portadores inertes y/o diluyentes.

   18. Una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 17 que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones ¹ a ¹⁰ y uno o más agentes terapéuticos adicionales.