ES2784217T3 - Uso de hidroxiapatita como vehículo de sustancias bioactivas para tratar plantas - Google Patents
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Abstract
Uso de al menos una partícula de hidroxiapatita sustituida que comprende al menos una molécula bioactiva, o de una composición que la contiene, para tratar plantas en donde la partícula de hidroxiapatita está sustituida con al menos un ion carbonato; y en donde la molécula bioactiva es un ion seleccionado entre Cu, Zn, S, P, Ca o aceites esenciales de origen vegetal o mezclas de los mismos; y en donde la molécula bioactiva se adsorbe en la hidroxiapatita sustituida
Description
DESCRIPCIÓN
Uso de hidroxiapatita como vehículo de sustancias bioactivas para tratar plantas
Campo de la invención
La presente invención se refiere al uso de una hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprende al menos una molécula bioactiva para el tratamiento fitosanitario y/o nutricional de plantas, en particular vides.
Antecedentes de la técnica
En agricultura, existe un equilibrio precario entre agentes bióticos como hongos, bacterias, virus y parásitos y las defensas reales de la planta en cuestión.
De hecho, las plantas tienen generalmente una resistencia llamada resistencia preinfección en el sentido de que tienen barreras físicas, como sus paredes de membrana, o barreras químicas obtenidas por la producción y difusión de sustancias antimicrobianas. La resistencia de la planta puede ser suficiente por sí misma y por tanto no requiere ningún tratamiento.
Sin embargo, ciertos patógenos provocan un desequilibrio y las plantas ya no pueden defenderse con sus propios mecanismos. Las enfermedades de la madera son patologías conocidas de las plantas, en particular de vides, que las plantas no pueden combatir usando sus propias defensas naturales. Las enfermedades de la madera más comunes en las vides son mildiu u oidio, que afectan a las hojas de la vid, y la podredumbre gris que afecta a los racimos de uvas.
Los signos de enfermedad pueden aparecer en diferentes formas, como marcas de diferentes colores y formas (en parches o en los bordes), desarrollos de micelio fúngico, necrosis que conduce a la caída de las hojas atacadas, e infecciones de madera, con la madera secándose hasta el punto de comprometer la funcionalidad de los tejidos conductores.
Para vides en particular, esto también afecta en gran medida tanto a la calidad como a la cantidad de vino producido, notablemente cuando el mildiu se extiende a los racimos.
El desarrollo de la enfermedad varía según el crecimiento de la planta y las condiciones climáticas, notablemente dependiendo de las condiciones de temperatura y humedad.
Además, en ocasiones, las enfermedades de las plantas no se notan fácilmente y a menudo requieren atención y observación especiales utilizando una lupa para ser más eficaces e intervenir en la etapa inicial para evitar la proliferación y evitar interrumpir la producción adicional.
Para combatir estas enfermedades, los tratamientos a base de azufre en forma de polvo se conocen desde hace muchos años, en particular para combatir el mildiu polvoriento y tratamientos a base de cobre para combatir otros tipos de infecciones, notablemente infecciones criptogámicas. El cobre es de interés ya que no causa resistencia inducida en patógenos, permaneciendo así igual de activo contra los mismos patógenos con el tiempo.
El cobre causa resistencia mecánica debido al endurecimiento de las paredes de los órganos de la planta, ejerce actividad preventiva contra criptógamas patógenas y previene el desarrollo de colonias bacterianas.
No obstante, el uso repetido de cobre, antes de alcanzar dosis fuertes, conduce a ciertos inconvenientes. El uso intensivo y prolongado de cobre causa fenómenos de toxicidad residual, afecta a la microflora en el suelo y los cultivos que son sensibles a cierta fitotoxicidad.
La agricultura orgánica limita el uso de este compuesto metálico y las dosis se reducen actualmente dos o tres veces. Para algunos trastornos, el uso de cobre debe combinarse con azufre, que actúa como fungicida e insecticida. Por tanto, el azufre actúa contra el mildiu polvoriento en racimos de uvas, pero también contra el desarrollo de oidio. El azufre penetra en la célula fúngica y como es liposoluble, penetra y rompe la membrana, causando pérdida de agua y por tanto la destrucción de dicha célula por deshidratación.
Una vez más, la actividad del azufre está condicionada por la temperatura, niveles de humedad y por su tamaño de partícula ya que el azufre ejerce su acción por sublimación, es decir, pasando directamente del estado sólido al estado gaseoso. Demasiada humedad y temperaturas demasiado bajas reducen la eficacia. Más allá de 28 °C, el azufre incluso se vuelve fitotóxico.
El azufre se conoce en diferentes tamaños de partículas de 5 a 14 mm cuando se obtiene por destilación, de 15 a 150 mm por molienda o incluso en forma coloidal por procesamiento químico. En todos los casos, La eficacia del azufre
está relacionada con un contacto íntimo con las células de los parásitos.
Por tanto, sería interesante poder transportar sustancias activas, como iones metálicos, utilizando un vehículo lo más cerca posible del sitio de ataque de los parásitos, como criptógamas, bacterias, hongos e insectos. Esto también permitiría una reducción muy significativa de las cantidades de sustancia activa consumidas y las cantidades iniciales de sustancia activa requeridas. El problema de la persistencia se resolvería, gracias a una liberación controlada de la sustancia activa, y la aplicación de tales compuestos sería posible en agricultura ecológica. Sería igualmente deseable poder lograr una liberación prolongada y controlada de sustancias nutricionales como fertilizantes o potenciadores del crecimiento a las plantas. Sería igualmente deseable poder controlar el crecimiento de malezas utilizando una cantidad reducida de herbicidas, que pueden ser tóxicos para el medio ambiente.
Los vehículos de hidroxiapatita estequiométrica se conocen por JPH0556105 que describe el uso de hidroxiapatita como vehículo para un ion metálico antimicrobiano seleccionado entre plata, cobre y cinc para esterilizar un suelo de la presencia del hongo patógeno de la planta Pythium. La acción del ión metálico antimicrobiano se limita al suelo ya que la publicación especifica que el agente apenas se absorbe en la planta. EP0640284 describe una arena antimicrobiana recubierta con un vehículo estequiométrico de hidroxiapatita que contiene agentes antimicrobianos, como plata, iones cobre o cinc. La arena antimicrobiana se mezcla con la tierra utilizada para cultivar plantas con flores, como orquídeas, ciclamen, etc., para esterilizar el suelo contra los hongos: Rhizoctonia, Fusarium, Esclerotinia y Pyshium.
EP2029480 describe el uso de hidroxiapatita para aplicaciones dentales, higiene bucal o reconstrucción dental, en forma de nanopartículas biológicamente activas basadas en una hidroxiapatita no estequiométrica sustituida con carbonato que tiene un grado de cristalinidad CD y una relación de aspecto AR (longitud/anchura) dados.
La hidroxiapatita es bien conocida en la técnica anterior en diferentes formas y para diferentes aplicaciones. Por ejemplo, la hidroxiapatita sintética constituye un excelente biomaterial para aplicaciones biomédicas, notablemente para reconstrucción ósea. La hidroxiapatita y la hidroxiapatita sintética sustituida se pueden producir mediante diferentes procesos, por síntesis en estado húmedo, hidrotérmica, electroquímica, sol-gel o en estado sólido. Se puede encontrar en diferentes formas estequiométricas, morfológicas y cristalinas.
Sumario de la invención
Con respecto al uso conocido de hidroxiapatita estequiométrica (es decir, base de hidroxiapatita en iones fosfato de calcio no sustituidos por otros iones), que tiene la fórmula:
Ca-i0(PO4)6(OH)2
como vehículo de iones metálicos para esterilizar la tierra utilizada para cultivar plantas, la presente invención proporciona el uso de hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprende moléculas bioactivas para tratamiento de plantas,
especialmente para aplicaciones en agricultura para fines antibacterianos, antifúngicos y antiparasitarios con propiedades de liberación controlada. Preferentemente, la hidroxiapatita sustituida con carbonato está en forma microcristalina, es decir, en forma de agregados.
En particular, la hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprende moléculas bioactivas está destinada al tratamiento fitosanitario o al tratamiento nutricional de las plantas, en particular de las vides. Otras plantas que pueden tratarse según la invención son: planta de tomate (Solanum lycopersicum), trigo (Triticum spp), peral (Pyrus spp), manzano (Malus domestica) y plantas vegetales, como lechuga, espinaca, cucurbitáceas (por ejemplo, melón, pepino, calabaza, calabaza y sandía), cebolla, puerro, guisantes.
La sustitución con carbonato se produce en el sitio de fosfato de hidroxiapatita (sitio B). La hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprende moléculas bioactivas de la invención se aplica sobre las plantas y penetra en las plantas a través de aberturas naturales, como se explica con detalle a continuación, realizando así un contacto íntimo con las células patógenas que pueden estar presentes tanto en la superficie de la planta como dentro de la planta.
Los documentos JPH0556105 y EP 0640284 de la técnica anterior no describen el uso de hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprende principios activos. La técnica anterior no describe el uso de hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprende sustancias activas para tratamiento de patologías de plantas por aplicación del vehículo en la planta. La técnica anterior solo enseña una forma de esterilizar el suelo utilizado para cultivar las plantas, en particular plantas con flores (no cultivos).
RO122830 describe la hidroxiapatita como un vehículo para agentes activos pesticidas fungicida de tiocarbamato zineb y mancozeb. Este documento no desvela hidroxiapatita sustituida con carbonato.
En la presente invención "molécula bioactiva" pretende hacer referencia a sustancias que tienen actividad fitosanitaria, típicamente actividad antiparasitaria o actividad herbicida. La molécula bioactiva también puede tener actividad
nutricional, por ejemplo, fertilizantes y sustancias potenciadoras del crecimiento. Una molécula bioactiva según la invención también puede tener tanto acción fitosanitaria como acción nutricional.
La molécula bioactiva utilizada en la invención puede tener actividad antiparasitaria, preferentemente actividad antifúngica, antimicrobiana, anti-criptógama e insecticida, y/o nutricional, dependiendo de la dosis de uso. la molécula bioactiva puede ser pequeñas moléculas orgánicas o iones metálicos. Un ejemplo de molécula orgánica pequeña es (N-(fosfonometil)glicina) que tiene actividad herbicida.
Preferentemente la molécula bioactiva es un ion metálico, como Cu, Zn y S. Dichos iones tienen una acción antiparasitaria (especialmente una actividad antifúngica), así como una función nutricional, en particular Zn, dependiendo de la dosis utilizada. Otros ejemplos de moléculas bioactivas útiles para los fines de la invención son fósforo, calcio, carbonato (que actúa como fertilizante) y aceites esenciales de origen vegetal, como menta, tomillo, romero, sésamo, soja, clavos de olor, ajo, limón o canela (que pueden tener actividad nutricional y actividad antiparasitaria leve).
Para tratamiento fitosanitario se pretende el tratamiento o prevención de enfermedades de las plantas causadas por parásitos como criptógamas, bacterias, hongos e insectos. Las enfermedades preferentes tratadas con el producto de la invención son: mildiu de Downey (causado por Plasmopara viticola), mildiu polvoriento (causado por el néctar de Erysiphe), moho gris (causado por Botrytis cinerea), podredumbre negra (causada por Guignardia bidwellii), agalla de la corona de la vid (causada por Agrobacterium vitis), tizón tardío de tomates (causado por Phytophthora infestans), tizón de trigo fusarium (causado por Fusarium graminearum y Fusarium culmorum), sarna de manzana (causada por Venturis inaequalis), sarna de pera (causada por Venturia pirina), mancha marrón de pera (causada por Stemphylium vesicarium), mildiu de lechuga (causado por Bremia lactucae), mildiu de espinaca (causado por Peronospora spinaceae), mildiu de cucurbitáceas (causado por Pseudoperonospora cubensis en melón, pepino, calabaza, calabaza y sandía), mildiu de cebolla (causado por Peronospora schleideni), mildiu de puerro (causado por Phytophtora porri), mildiu de guisantes (causado por Peronospora pisi), enfermedades causadas por los insectos: arañuelo de la vid europea (Eupoecilia ambiguella) y cochinilla (Planococcus ficus).
"Tratamiento fitosanitario" también pretende significar tratamiento herbicida de plantas con el objeto de erradicar las malezas.
La invención también se refiere al uso de una hidroxiapatita de sustituida con carbonato que comprende moléculas bioactivas para tratamiento de plantas, en particular vides, hecha de hidroxiapatita sustituida con al menos un ion carbonato que tiene un grado de cristalinidad comprendido entre 25 y 59 %, preferentemente entre 25 y 40 %. La sustitución con carbonato puede ser una sustitución de iones fosfato (sitio B) y/o de iones hidroxilo (sitio A) de hidroxiapatita; preferentemente la sustitución de carbonato es una sustitución de iones fosfato (sitio B).
La sustitución de carbonato tiene la ventaja de reducir el grado de cristalinidad de hidroxiapatita, que así se vuelve más amorfa. El estado amorfo conduce a un aumento de la solubilidad de la estructura de hidroxiapatita sustituida con carbonato en un entorno biológico, con la ventaja de que la liberación de moléculas bioactivas se mejora y se vuelve más eficaz.
La invención se refiere también a una hidroxiapatita sustituida con carbonato que tiene las características anteriores, que comprende una molécula bioactiva adsorbida a la misma, produciendo así una hidroxiapatita sustituida con carbonato funcionalizada.
Para el alcance de la presente invención, "hidroxiapatita sustituida con carbonato funcionalizada con una molécula bioactiva" es una definición equivalente a decir que la molécula bioactiva está "adsorbida" en la hidroxiapatita sustituida con carbonato.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1 muestra el esquema de referencia para la evaluación de la gravedad de la enfermedad (%) en las hojas; Figura 2 muestra los resultados del primer ensayo de laboratorio en Plasmopara viticola;
Figura 3 muestra los resultados del segundo ensayo de laboratorio en Plasmopara viticola;
Figura 4 muestra los resultados del primer ensayo en invernadero en Plasmopara viticola;
Figura 5 muestra los resultados del segundo ensayo en invernadero en Plasmopara viticola;
Figura 6 muestra los resultados del tercer ensayo en invernadero en Plasmopara viticola;
Figura 7 muestra los resultados el cuarto ensayo en invernadero en Plasmopara viticola;
Figura 8 muestra los resultados del quinto ensayo en invernadero en Plasmopara viticola;
Figura 9 muestra los resultados del ensayo de laboratorio en Erysiphe necator;
Figura 10 muestra los resultados del primer ensayo de laboratorio en Botrytis cinerea;
Figura 11 muestra los resultados del segundo ensayo de laboratorio en Botrytis cinerea;
Figura 12 muestra los resultados del segundo ensayo de laboratorio en Botrytis cinerea;
Figura 13 muestra los resultados del primer ensayo de laboratorio en Guignardia bidwellii;
Figura 14 muestra los resultados del primer ensayo en invernadero en Plasmopara viticola;
Figura 15 muestra los resultados del primer ensayo de laboratorio sobre mortalidad de larvas de Eupoecilia ambiguella;
Figura 16 muestra los resultados del segundo ensayo de laboratorio en mortalidad de larvas de Eupoecilia ambiguella;
Figura 17 muestra los resultados del primer ensayo de laboratorio en Planococcus ficus;
Figura 18 muestra los resultados de ensayos comparativos de la actividad herbicida contra Convolvulus spp del producto de la invención;
Figura 19 muestra los resultados de ensayos comparativos de la actividad herbicida contra Cynodon spp. del producto de la invención;
Figura 20 muestra los resultados de ensayos comparativos de la actividad herbicida contra Sorghum halepense del producto de la invención;
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere al uso de hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprende moléculas bioactivas para tratamiento fitosanitario y/o tratamiento nutricional de plantas, en particular de vides. La invención es adecuada para tratar todo tipo de plantas, particularmente para el tratamiento de vides. Otras plantas que pueden tratarse con la invención son planta de tomate (Solanum lycopersicum), trigo (Triticum spp), peral (Pyrus spp), manzano (Malus domestica) y plantas vegetales, como lechuga, espinaca, cucurbitáceas (por ejemplo, melón, pepino, calabaza, calabaza y sandía), cebolla, puerro, guisantes.
La hidroxiapatita se sustituye con al menos un ion carbonato.
En una realización preferente, la hidroxiapatita de la invención está sustituida por al menos un ion carbonato, y tiene la siguiente fórmula:
Ca(10)(PO4)(6-y)(CO3)y(OH)2
en donde y es un número comprendido entre 0,002 y 0,6 y que tiene un grado de cristalinidad comprendido entre 25 y 59 %, preferentemente entre 25 y 40 %.
En una realización preferente adicional de la invención, la sustitución de carbonato puede ocupar el sitio B (iones fosfato PO43-) según la fórmula general anterior. En la estructura de hidroxiapatita sustituida con carbonato considerada en la presente invención, la sustitución está en el sitio B, con un porcentaje de carbonato que ocupa el sitio B que es mayor o igual al 55 % en peso, incluso más preferentemente comprendido entre 90 y 100 % en peso del peso total de carbonato contenido en la hidroxiapatita sustituida con carbonato.
El contenido total de carbonato en la hidroxiapatita sustituida con carbonato según la invención es de 1 a 20 %, preferentemente de 5 a 15 % en peso de la estructura de hidroxiapatita sustituida con carbonato total.
Las sustituciones de iones carbonato en el sitio B son muy significativas ya que permiten que toda la estructura de hidroxiapatita sustituida con carbonato aumente su solubilidad en un entorno biológico.
Preferentemente, el vehículo de hidroxiapatita sustituida con carbonato está en forma de partículas inferiores a 2 mm, preferentemente con un tamaño entre 0,2 y 0,9 mm. Las partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato están preferentemente en forma cristalina, es decir, se unen para crear agregados de partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato (también denominadas en esta solicitud como "grupos" o "cristales" o "microcristales" o "agregados microcristalinos", todos estos términos tienen el mismo significado que "agregados" según la invención). Estos agregados tienen dimensiones micrométricas, con un tamaño comprendido entre 0,5 y 25 mm, más particularmente entre 0,5 y 5 mm y que tiene un área superficial significativa. En particular, los agregados de hidroxiapatita sustituida con carbonato útiles según la presente invención tienen un área superficial comprendida entre 60 y 120 m2/g, más particularmente entre 70 y 90 m2/g.
Los agregados de hidroxiapatita sustituida con carbonato tienen la ventaja de un área superficial más grande con respecto a las partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato individuales y, por tanto, permiten adsorber principios más activos y/o moléculas bioactivas y controlar la liberación de ellos en el medio ambiente. Por tanto, para una pequeña cantidad de hidroxiapatita sustituida con carbonato, es posible transportar un número significativo de moléculas bioactivas, lo que permite aumentar aún más la actividad y la eficacia biológica de las moléculas.
Las moléculas bioactivas que tienen actividad antifúngica, antimicrobiana, anti-criptógama, insecticida y herbicida usadas en la presente invención puede ser tanto moléculas orgánicas pequeñas como iones metálicos. Un ejemplo de molécula orgánica pequeña es (N-(fosfonometil)glicina) que tiene actividad herbicida.
Preferentemente las moléculas bioactivas son: iones metálicos, como Cu, Zn y S. Tales iones tienen acción antiparasitaria, así como función nutricional, en particular Zn, dependiendo de la dosis utilizada. Otros ejemplos de moléculas bioactivas útiles para los fines de la invención son fósforo, calcio, carbonato (que actúa como fertilizante) y
aceites esenciales de origen vegetal, como menta, tomillo, romero, sésamo, soja, clavos de olor, ajo, limón o canela (que pueden tener actividad nutricional y actividad antiparasitaria leve).
Para tratamiento fitosanitario se pretende el tratamiento o prevención de enfermedades de las plantas causadas por parásitos como criptógamas, bacterias, hongos e insectos. Las enfermedades preferentes tratadas con el producto de la invención son: mildiu de Downey (causado por Plasmopara viticola), mildiu polvoriento (causado por el néctar de Erysiphe), moho gris (causado por Botrytis cinerea), podredumbre negra (causada por Guignardia bidwellii), agalla de la corona de la vid (causada por Agrobacterium vitis), tizón tardío de tomates (causado por Phytophthora infestans), tizón de trigo fusarium (causado por Fusarium graminearum y Fusarium culmorum), sarna de manzana (causada por Venturis inaequalis), sarna de pera (causada por Venturia pirina), mancha marrón de pera (causada por Stemphylium vesicarium), mildiu de lechuga (causado por Bremia lactucae), mildiu de espinaca (causado por Peronospora spinaceae), mildiu de cucurbitáceas (causado por Pseudoperonospora cubensis en melón, pepino, calabaza, calabaza y sandía), mildiu de cebolla (causado por Peronospora schleideni), mildiu de puerro (causado por Phytophtora porri), mildiu de guisantes (causado por Peronospora pisi), enfermedades causadas por los insectos: arañuelo de la vid europea (Eupoecilia ambiguella) y cochinilla (Planococcus ficus).
"Tratamiento fitosanitario" también pretende significar tratamiento herbicida de plantas con el objeto de erradicar las malezas.
Las moléculas bioactivas se adsorben en el vehículo de hidroxiapatita sustituida con carbonato, obteniendo así una hidroxiapatita sustituida con carbonato funcionalizada.
La absorción de tales sustancias en hidroxiapatita sustituida con carbonato puede realizarse mediante todos los procesos conocidos por un experto en la materia. El agregado de hidroxiapatita sustituida con carbonato cristalizada tiene una zona interna que es puramente cristalina y una zona periférica externa con cargas eléctricas que no son completamente neutras, que permite retener las moléculas bioactivas.
Por ejemplo, en el caso de adsorción de cobre y/o azufre en partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato, se puede obtener la funcionalización de la hidroxiapatita sustituida con carbonato:
- para cobre a partir de: sulfato (II) pentahidratado, cloruro de cobre, oxicloruro de cobre, hidróxido de cobre, óxido de cobre o una mezcla de estos compuestos.
- para azufre a partir de: azufre soluble, azufre micronizado, azufre atomizado o una mezcla de estos compuestos.
La propia hidroxiapatita también tiene efecto en las plantas. De hecho, contiene elementos que contribuyen a mejorar la resistencia natural de la planta. El calcio en particular es uno de los oligoelementos con los que se alimenta la planta, que participa en el equilibrio de las plantas, activa ciertos procesos enzimáticos y elimina ciertos compuestos tóxicos. Además, los cristales de hidroxiapatita tienen su propia actividad antibacteriana.
Además, la absorción de moléculas bioactivas en microcristales de hidroxiapatita sustituida con carbonato, y el uso de hidroxiapatita sustituida con carbonato como vehículo de estas moléculas, conduce a una acción sinérgica en las plantas para una gran eficacia en el tratamiento de la planta, en particular para prevenir y combatir enfermedades fúngicas y bacterianas en plantas. La invención es particularmente adecuada para tratar vides, especialmente para combatir enfermedades localizadas (por ejemplo, mildiu, mildiu polvoriento, podredumbre gris) o enfermedades sistémicas y más complejas.
Para los fines de la presente invención, la hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprende una molécula bioactiva está en forma de agregados de una pluralidad de partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato.
Para el uso según la invención, la hidroxiapatita sustituida con carbonato se integra preferentemente en una composición, preferentemente en forma de agregados microcristalinos. Esta composición puede estar en todas formas, notablemente en polvo, gránulos, líquido o gel. Según una realización preferente, los agregados de hidroxiapatita sustituida con carbonato se dispersan de manera uniforme en agua. El pH de la composición en forma líquida es preferentemente superior a 5 para evitar que los microcristales de hidroxiapatita sustituida con carbonato se sometan a hidrólisis parcial o total.
Tal composición líquida permite aplicación foliar, en particular por pulverización. La estructura y el tamaño micrométrico de los cristales de hidroxiapatita sustituida con carbonato significan que se dispersan uniformemente dentro del volumen de las gotas micronizadas durante la pulverización, permitiendo así una buena distribución en todo el volumen total utilizado para la aplicación y, en consecuencia, una distribución más uniforme en la superficie de aplicación. Según el tipo de atomizador utilizado para la aplicación de hidroxiapatita sustituida con carbonato, es posible tener gotas cuyo diámetro varía entre 50 y 800 mm. Para evitar o limitar la flotación de gotas muy pequeñas y la descarga de gotas muy grandes, y para garantizar una mejor aplicación en la superficie a tratar, es posible utilizar medios de pulverización que permitan obtener gotitas de entre 150 y 250 mm.
Una vez aplicadas, las partículas agregadas se adhieren a la hoja sin necesidad de utilizar agentes antideslizantes en
la composición. De hecho, según su superficie, su tamaño, sus irregularidades morfológicas y sus características electrostáticas, los cristales de hidroxiapatita sustituida con carbonato se adhieren a la superficie de las hojas, asegurando así una resistencia de adhesión óptima para escurrir el agua, a diferencia de los productos existentes actualmente que son arrastrados por la lluvia o el rocío.
El uso de las composiciones, aplicadas por hectárea, debe adaptarse según las condiciones climáticas encontradas, la temporada y las estrategias de protección y nutrición del suelo. A modo de ejemplo para un viñedo, un ejemplo de uso adecuado corresponde a una cantidad de agua utilizada del orden de 250 l/ha para plantas completamente desarrolladas, con una densidad del orden de 4000 tocones/ha, en concentración variable, formuladas de 2,5 a 5 % en partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato en peso en relación con el peso total de la composición líquida.
Una vez aplicadas a la planta, las moléculas bioactivas pueden liberarse directamente o los microcristales de hidroxiapatita sustituida con carbonato pueden transportar estas sustancias a los espacios intercelulares. Las moléculas bioactivas se liberan por hidrólisis, cerca de sus objetivos, en particular cerca de parásitos objetivo como hongos y bacterias.
De hecho, los agregados microcristalinos de hidroxiapatita sustituida con carbonato penetran en la planta según la difusión pasiva después de la descarga de fluidos, como dióxido de carbono y agua, a través de las aberturas naturales de los tejidos vegetales. Dentro de la planta, la hidroxiapatita sustituida con carbonato se comporta como un "sol-gel": no está estancada en un medio líquido, se mueve en el xilema y el floema siguiendo la linfa circulante. Por tanto, no hay riesgo de acumulación en la planta. Cuando la hidroxiapatita sustituida con carbonato se encuentra con un patógeno, el agregado se descompone a medida que la pared más ácida del microorganismo favorece la disolución y la liberación de moléculas bioactivas transportadas por la hidroxiapatita sustituida con carbonato, que por tanto puede actuar contra el patógeno.
Las moléculas bioactivas (por ejemplo, fósforo, calcio y carbonato) siguen el flujo linfático y ejercen su actividad en particular como fertilizantes para mejorar el desarrollo de la planta y/o reforzar sus defensas naturales. A diferencia de los métodos convencionales, por tanto, no hay acción sobre las vías metabólicas intracelulares, sino una acción de contacto entre los elementos funcionales de los agregados de hidroxiapatita sustituida con carbonato y los patógenos a nivel intercelular o en la superficie de las plantas.
Por tanto, los principios activos y las moléculas bioactivas pueden actuar cuando se rocían sobre la superficie, pero también en profundidad en el núcleo de los tejidos vegetales tratados.
Las partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato también se pueden usar para la aplicación en el tronco, en la madera de las plantas o en sus raíces según el objetivo de la aplicación.
La invención se refiere al tratamiento de plantas. Puede referirse a la contribución de nutrientes a las plantas o a iones o moléculas que puedan combatir los patógenos. Por tanto, las partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato se pueden usar para combatir o prevenir ciertas enfermedades. Son adecuadas para todo tipo de plantas, notablemente, pero no solo las vides, y son particularmente útiles para agricultura y viticultura.
Las partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato tienen la siguiente fórmula:
Ca(10)(PO4)(6-y)(CO3)y(OH)2
en donde y es un número comprendido entre 0,002 y 0,6.
El grado de cristalinidad se define por la fórmula proporcionada por Landi et al (J.Eur. Ceram. Soc., 2000, 20, 2377 2387) :
CD= (1-X/Y)*100
donde:
- Y = altura de difracción máxima a 20 = 33°
- X = altura de difracción de fondo a 20 = 33° de un diagrama de difracción de partículas de rayos X.
La hidroxiapatita sustituida con carbonato según la invención tiene un grado de cristalinidad CD comprendido entre 25 y 59 %, preferentemente entre 25 y 40 %.
La hidroxiapatita sustituida con carbonato según la invención comprende del 1 al 20 %, preferentemente del 5 a 15 % en peso de hidroxiapatita sustituida con un ion carbonato del total de la estructura de hidroxiapatita sustituida con carbonato.
En la estructura de hidroxiapatita sustituida con carbonato considerada en la presente invención, la sustitución es
preferentemente en el sitio B.
La relación de sustitución en el sitio A/sustitución en el sitio B está comprendida entre 0,10 y 0,60 e incluso más preferentemente la relación está comprendida entre 0,20 y 0,40. Además, la hidroxiapatita sustituida con carbonato según la invención tiene una alta tasa de sustitución de iones carbonato ya que la sustitución en iones carbonato en el sitio B es mayor o igual al 55 % en peso, incluso más preferentemente comprendida entre 90 y 100 % en peso, del peso total de carbonato contenido en la hidroxiapatita.
Estos parámetros de sustitución de iones carbonato en el sitio B son muy importantes ya que permiten que toda la estructura de hidroxiapatita sustituida con carbonato aumente su solubilidad en un entorno biológico.
Preferentemente, las partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato son inferiores a 2 mm, preferentemente con un tamaño entre 0,2 y 0,9 mm. Están preferentemente en forma cristalina. Los agregados de hidroxiapatita sustituida con carbonato microcristalino según la presente invención tienen un área superficial comprendida entre 60 y 120 m2/g, más particularmente entre 70 y 90 m2/g.
Los agregados de hidroxiapatita sustituida con carbonato en sí mismos tienen un pH que está sujeto a variaciones a lo largo del tiempo y que también varía según las moléculas adsorbidas a los mismos. Por ejemplo, los cristales de hidroxiapatita sustituida con carbonato según la invención funcionalizados con sulfato de cobre tienen un pH comprendido entre 3 y 4,5. Sin embargo, cuando los microcristales de hidroxiapatita sustituida con carbonato se ponen en solución, el pH de la solución debe ser superior a 5 para mantener la estabilidad estructural y funcional de la hidroxiapatita sustituida con carbonato. El pH de la solución está comprendido preferentemente entre 5,5 y 7,5. Según otro aspecto, la invención se refiere a partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato que comprenden al menos una sustancia bioactiva. La hidroxiapatita sustituida con carbonato comprende iones cobre y/o iones azufre y/o iones cinc adsorbidos a la misma. Preferentemente, la hidroxiapatita sustituida con carbonato contiene además aceites esenciales uno o más aceites esenciales de origen vegetal como menta, tomillo, romero, sésamo, soja, clavos de olor, ajo, limón o canela.
Los agregados de partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato tienen un tamaño comprendido entre 0,5 y 25 mm, preferentemente comprendido entre 0,5 y 5 mm.
Una composición que comprende al menos una partícula de hidroxiapatita sustituida con carbonato o al menos un agregado de partículas de hidroxiapatita sustituida con carbonato según la invención se funcionaliza con moléculas bioactivas. Preferentemente, dicha composición comprende entre 5 y 70 % en peso de partículas y/o agregados de hidroxiapatita sustituida con carbonato en relación con el peso total del material seco de la composición, incluso más preferentemente entre 6 y 60 %.
La invención se ilustra ahora mediante ejemplos de procesos de fabricación, ejemplos de composición y ejemplos de usos.
Ejemplo de fabricación 1.
La hidroxiapatita sustituida con carbonato se sintetiza mezclando ácido fosfórico con una composición que comprende hidróxido cálcico y carbonato cálcico previamente dispersado en una cantidad adecuada de agua.
La reacción requiere aproximadamente 12 a 48 horas, más particularmente de aproximadamente 15 a 30 horas. Después de la suspensión de microcristales, se añade una solución de sulfato (II) pentahidratado y cloruro de cobre, previamente disuelto en una cantidad adecuada de agua.
Una vez que estas dos soluciones se combinan, se mezclan para permitir la adsorción de iones cobre en los cristales inorgánicos de hidroxiapatita sustituida con carbonato.
La reacción de funcionalización por la solución de cobre tarda aproximadamente 12 a 72 horas, más particularmente de 24 a 60 horas.
Ejemplo de fabricación 2
La hidroxiapatita sustituida con carbonato se sintetiza mezclando ácido fosfórico con una composición que comprende hidróxido cálcico y carbonato cálcico, previamente dispersado en una cantidad adecuada de agua.
La reacción requiere aproximadamente 12 a 48 horas, más particularmente de aproximadamente 15 a 30 horas. Después de la suspensión de microcristales, se añade una suspensión de azufre y azufre micronizado dispersado en un volumen adecuado de agua.
Una vez que estas dos soluciones se combinan, se mezclan para permitir la adsorción de iones azufre en los cristales inorgánicos de hidroxiapatita sustituida con carbonato.
La reacción requiere de aproximadamente 2 a 10 horas, más particularmente de aproximadamente 4 a 6 horas. Ejemplo de fabricación 3
La hidroxiapatita sustituida con carbonato se sintetiza mezclando ácido fosfórico con una composición que comprende hidróxido cálcico y carbonato cálcico, previamente dispersado en una cantidad adecuada de agua.
La reacción requiere aproximadamente 12 a 48 horas, más particularmente de aproximadamente 15 a 30 horas. Después de la suspensión de microcristales, se añade una suspensión de aceites esenciales dispersos en un volumen adecuado de agua.
Una vez que estas dos soluciones se combinan, se mezclan para permitir la adsorción de aceites esenciales en los cristales inorgánicos de hidroxiapatita sustituida con carbonato.
La reacción requiere de aproximadamente 2 a 10 horas, más particularmente de aproximadamente 4 a 6 horas. Ejemplos de composición
Una composición basada en azufre puede comprender la siguiente formulación:
- Hidroxiapatita de azufre al 60 % (hidroxiapatita sustituida con carbonato con iones azufre adsorbidos a la misma) - Agua destilada 32,9 %
- Goma de xantano 1 %
- Glicerina 4 %
- Ácido benzoico 2 %
Una composición a base de cobre puede comprender la siguiente formulación:
- Hidroxiapatita de cobre al 10 % (hidroxiapatita sustituida con carbonato con iones cobre adsorbidos a la misma) - Agua destilada 78 %
- Goma de xantano 1 %
- Glicerina 4 %
- Ácido benzoico 1,5 %
Una composición según la invención también puede ser una composición que comprende una mezcla de las dos composiciones descritas previamente.
Ejemplo de uso
Para optimizar las propiedades funcionales y la estabilidad estructural de las composiciones líquidas que comprenden las partículas de hidroxiapatita, un uso se puede implementar según las siguientes recomendaciones en particular: - Agitar la composición antes de usar para volver a suspender las partículas y/o agregados de partículas en la composición;
- Usar un atomizador que asegure una humectación completa y uniforme de la vegetación y evite volúmenes demasiado bajos o demasiado altos;
- Usar cantidades de agua que varían de 60 l/ha a 250 l/ha en plantas completamente desarrolladas, evitando cantidades excesivas de agua que crean escorrentía;
- Reducir la cantidad de producto por hectárea en caso de aplicación manual;
- Controlar el pH de la solución en agua para que sea superior a 5.
continuación
1. INTRODUCCION
Varias formulaciones basadas en hidroxiapatita sustituidas con iones carbonato y funcionalizadas con cobre, cinc, azufre y/o aceites esenciales se probaron contra hongos patógenos de vides e insectos que afectan a las vides. Los resultados se refieren a los ensayos realizados en laboratorio y/o en invernadero, dependiendo de las condiciones de crecimiento y desarrollo requeridas por cada objetivo considerado (patógeno fúngico/insecto).
Se realizaron ensayos en laboratorio e invernadero para obtener una primera indicación sobre la eficacia biológica de los agentes de ensayo, en condiciones estándar y repetibles, mediante protocolos rápidos que están cualificados para una evaluación general de la eficacia biológica de los agentes de ensayo.
Para ensayos en laboratorio, los agentes de ensayo se aplicaron en las formas fúngicas de reproducción (conidios o zoosporas) y en los insectos en un estadio específico, que se cultivaron en un medio adecuado durante un periodo de tiempo; por tanto, los resultados se refieren a la eficacia biológica de los agentes de ensayo en hongos patógenos e insectos desarrollados en las condiciones más favorables de crecimiento, no comparables a las condiciones ambientales.
Los ensayos en invernadero se realizaron tratando vides en macetas (véase. Riesling), en la etapa fenológica correspondiente a BBCH 16 (cinco a diez hojas), usando un rociador comparable en términos de presión (250 kPa (2,5 bares)), rápido (2 km/h) y tipo de boquilla (0,15 - verde), con el equipo empleado generalmente para aplicación en viñedo (SprayLab®, Schachtner, Alemania). Las vides en maceta tratadas se inocularon con una concentración determinada de esporas, y luego se respetó un ambiente favorable y un tiempo preciso para la incubación de la enfermedad. Estas condiciones permitieron lograr resultados más relacionados con la acción real de los agentes de ensayo en viñedos. Basándose en protocolos precisos del Institut für Phytomedizin, los ensayos eninvernadero se realizaron solo en dos hongos patógenos: Plasmopara vitícola y Guignardia bidwellii. No obstante, todas las formulaciones se probaron en invernadero en Plasmopara viticola para evaluar su conformidad con la nebulización en términos de flujo a través de las boquillas y la homogeneidad de distribución en los tejidos foliares tratados.
La gravedad de la enfermedad (%) se atribuyó a hojas predeterminadas en cada planta al comparar las hojas con un esquema de referencia (véase Fig. 1). La gravedad promedio de la enfermedad se calculó en cada planta y entre repeticiones de cada tratamiento, mientras que la desviación estándar se calculó entre los promedios de las repeticiones. Los resultados se presentan por objetivo, incluyendo una breve descripción de los materiales y métodos empleados para realizar los ensayos experimentales.
2. CÁLCULO DE LA CANTIDAD BASE
La cantidad base se determinó respetando los criterios expuestos en la directriz "Rebschutz 2014" editada por el Regierungsprasidium Darmstadt (Alemania). Incluye el listado de fungicidas e insecticidas que se utilizarán como agente de comparación en los ensayos y anuncia el factor de correlación entre la cantidad creciente de agua por hectárea y la cantidad creciente de agente de ensayo por hectárea durante el ciclo fenológico (Código BBCH): al comienzo del ciclo se requiere la cantidad mínima de agente de ensayo (cantidad base) rociada por una cantidad mínima de agua; en toldo completo, la cantidad inicial de agente de ensayo y agua se multiplica por factor 4. Finalmente, considerando la cantidad de agua empleada, se definen tres grados de concentración.
El esquema de la cantidad base se respetó para los agentes de comparación, mientras que los agentes de ensayo se examinaron según las dosis de ensayo expresadas en volumen/volumen, para definir finalmente la cantidad base recomendada expresada en peso, debido a la clasificación como fertilizantes, a pesar de que se administran en forma líquida. Las dosis de ensayo se establecieron teniendo en cuenta los resultados alcanzados por las aplicaciones previas de los agentes de ensayo en viñedos experimentales con 4.000-6.000 vides/ha, empleando un rociador clásico de bajo volumen y usando 250 Uha de agua en plena vegetación (BBCH 75).
En los ensayos en invernadero, los agentes de ensayo se compararon con agua y con agentes de comparación, que se aplicaron respetando cada cantidad base, multiplicado por el factor 1,25 que correlaciona el aumento de la cantidad base con la etapa fenológica correspondiente (BBCH 16) de las vides en maceta. Las mismas cantidades básicas de los agentes de comparación y las concentraciones de los agentes de ensayo se aplicaron para ensayos en laboratorio.
3. DOWNY MILDEW {Plasmopara viticola)
3.1 Ensayo de laboratorio
Evaluar la eficacia biológica de los agentes de ensayo in vitro, se prepararon cuatro placas de Petri que contenían medio de agar agua para cada tratamiento: control (agua), agente de comparación y agentes de ensayo. Para la preparación del inóculo, se recogieron hojas de parra con síntomas frescos y prominentes de Plasmopara viticola de vides en macetas infectadas cultivadas en invernadero. Se cortaron discos de 2 cm de diámetro de las hojas infectadas, teniendo cuidado de seleccionar la superficie inferior de la hoja rica en esporulación como blanca, crecimiento algodonoso. Se imprimió un disco de hoja en cada placa de Petri para transferir la esporulación en el medio de agar con agua. Después de quitar los discos de hojas, se llenaron cuatro gotas de cada producto de ensayo por encima del inóculo, que luego se cubrió con un cubreobjetos. Las placas de Petri se incubaron a temperatura ambiente y en la oscuridad y finalmente se observaron al microscopio (aumento 40x) después de 1, 3 y 20 horas.
En la última observación, la eficacia biológica de los agentes de ensayo se determinó en términos de liberación de zoosporas, evaluando la relación entre esporangios completos (inactivos o degenerados) y esporangios vacíos (que han liberado zoosporas activamente) de cien esporangios.
En el primer ensayo, Las eficacias biológicas de los siguientes tratamientos se compararon después de 1,3 y 20 horas:
• Control (agua): se observó un buen valor de liberación de zoosporas;
• Folpan 80 WDG® (a.i. Folpet) (0,323 % p/v): no se liberaron zoosporas;
• PV1 (2,4 % v/v): dentro de las primeras 3 horas se detuvo la liberación de zoosporas, con un aumento mínimo en 20 horas; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
• PV2 (2,4 % v/v): dentro de las primeras 3 horas se detuvo la liberación de zoosporas, con un notable aumento en 20 horas; PV2 difiere de PV1 para una menor concentración de cobre (5 g/kg) y presencia de cinc (18 g/kg).
Véase Fig. 2 para una vista esquemática de los resultados.
En el segundo ensayo, las eficacias biológicas de los siguientes tratamientos se compararon después de 20 horas:
Control (agua): se observó un valor de liberación de zoosporas muy bueno;
Cuprozin Progress® (abr. CP) (a.i. Hidróxido de cobre) (0,323 % v/v): no se liberaron zoosporas;
PV1 (2,4 % v/v): no se liberaron zoosporas, este resultado refuerza el resultado positivo mostrado por el ensayo previo; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
PV3 (2,4 % v/v): no se liberaron zoosporas; PV3 difiere de PV1 por la presencia de un agente de suspensión; PV4 (2,4 % v/v): no se liberaron zoosporas; PV4 difiere de PV2 por la presencia de un agente de suspensión y una mayor concentración de cobre (25 g/kg);
PV5 (PV1 1,2 % PV22,4 % v/v): no se liberaron zoosporas;
PV6 (2,4 % v/v); no se liberaron zoosporas; PV6 difiere de PV1 por la presencia de una mezcla de fertilizantes.
Véase Fig. 3 para una vista esquemática de los resultados.
3.2 Ensayo en invernadero
El ensayo en invernadero se realizó para evaluar la eficacia protectora de los agentes de ensayo. Para realizar este ensayo, se emplearon 6 vides en maceta por cada tratamiento: control (agua), agente de comparación y agentes de ensayo. Las vides en macetas se seleccionaron con una altura adecuada, buen estado de salud y número de hojas desplegadas (mínimo cinco). Se prepararon para el tratamiento, atando el brote justo encima de las primeras cinco hojas elegibles para la evaluación final de la enfermedad. El día "1", las vides en maceta se trataron con el pulverizador experimental (SprayLab®; Schachtner, Alemania) y después de 24 horas se realizó la inoculación del patógeno fúngico en las plantas tratadas.
El inóculo se preparó recolectando hojas con síntomas frescos y prominentes de Plasmopara vitícola de vides en macetas infectadas cultivadas en invernadero. Las hojas infectadas se lavaron con agua, rociadas manualmente en la superficie baja, para obtener una solución acuosa rica en esporangios. La concentración de esporangios se ajustó en una cámara Thoma® en el microscopio (aumento de 40x), a 1 *106 esporangios/ml (mínimo). La suspensión de esporangios se roció manualmente sobre las plantas tratadas con cuidado de humedecer la superficie inferior de las cinco hojas debajo del punto de unión del brote de manera homogénea.
Después de inoculación, la mesa con enredaderas en macetas se cubrió con una lona de plástico negro y se dejó en el sótano durante el primer día de incubación. Para evaluar la eficacia curativa de los agentes de Ensayo, la inoculación con P. vitícola se realizó el primer día y después de 24 horas de incubación se realizaron los tratamientos (una vez que la superficie de las hojas estuvo lo más seca posible).
El tercer día, las plantas tratadas, inoculadas e incubadas se descubrieron y se transfirieron y se cultivaron en invernadero en condiciones de crecimiento controlado. El octavo día, las vides en macetas estaban abundantemente húmedas, rociando agua sobre el follaje, entonces, se cubrieron nuevamente con una lona de plástico negro y se transfirieron al sótano para favorecer la esporulación. Tras 24 horas, las plantas se descubrieron. La gravedad de la enfermedad se determinó observando las cinco hojas debajo del punto de unión del brote en cada vid en maceta. Los posibles síntomas de fitotoxicidad se monitorizaron en cada ensayo.
En un ensayo, simultáneamente a la evaluación de la eficacia protectora, se realizó un ensayo de estabilidad a lluvia para calcular la resistencia de los agentes de ensayo a la escorrentía causada por la lluvia: Para realizar este ensayo, 3 horas después de la aplicación de agentes de ensayo, agua y agentes de comparación, un número igual de vides en macetas se sometieron a una lluvia de agua comparable a un suceso de lluvia de 18 mm de precipitación.
En el primer ensayo, se compararon las eficacias protectoras de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): valor de gravedad de enfermedad muy bueno;
• Folpan 80 WDG® (a.i. Folpet) (0,323 % p/v): buena eficacia protectora;
• PV1 (2,4 % v/v): buena eficacia protectora, similar a la del agente de comparación; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
• PV2 (2,4 % v/v): eficacia protectora inaceptable; PV2 difiere de PV1 para una menor concentración de cobre (5 g/kg) y presencia de cinc (18 g/kg).
Véase Fig. 4 para una vista esquemática de los resultados.
En el segundo ensayo, se compararon las eficacias protectoras en combinación con la precipitación (estabilidad de la lluvia) de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): valor de gravedad de enfermedad muy bueno;
• Cuprozin Progress® (a.i. Hidróxido de cobre) (0,323 % v/v): eficacia protectora satisfactoria y buena estabilidad a la lluvia;
• PV1 (2,4 % v/v): eficacia protectora muy buena y estabilidad a la lluvia muy buena, ambas significativamente más altas que las del agente de comparación; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
• PV3 (2,4 % v/v): no estaba conforme para ser rociado debido a la formación de flóculos una vez que la formulación se diluyó;
• PV4 (2,4 % v/v): eficacia protectora inaceptable; PV4 difiere de PV1 por la presencia de un agente de suspensión,, menor concentración de cobre (25 g/kg) y presencia de cinc (18 g/kg);
• PV5 (PV1 1,2 % PV2 2,4 % v/v): Eficacia protectora muy buena a la lluvia, que es similar al agente de comparación.
Véase Fig. 5 para una vista esquemática de los resultados.
En el tercer ensayo, se compararon las eficacias protectoras de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): valor de gravedad de enfermedad muy bueno;
• PV1 (1,2 % v/v): eficacia protectora muy buena, que se consiguió aplicando la mitad de la concentración que los ensayos anteriores; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
• PV6 (1,25 % v/v): buena eficacia protectora; PV6 difiere de PV1 por la presencia de una mezcla de fertilizantes;
• PV7 (1,2 % v/v): eficacia protectora muy buena, comparable a PV1; PV7 difiere de PV1 para una coformulación diferente;
• PV8 (1,2 %v/v): eficacia protectora inaceptable; PV8 difiere de PV1 para una coformulación diferente y para la presencia de hidróxido de cobre en lugar de sulfato de cobre;
• PV8/2 (2,4 % v/v): eficacia protectora inaceptable, a pesar de que se aplicó en doble concentración, demostró la mayor gravedad de la enfermedad del ensayo; PV8/2 difiere de PV1 para una coformulación diferente y para la presencia de hidróxido de cobre en lugar de sulfato de cobre;
• PV9 (1,2 % v/v): eficacia protectora muy buena, comparable a PV1; PV7 difiere de PV1 para una coformulación diferente y para la presencia de hidróxido de cobre en lugar de sulfato de cobre, en mayor concentración (Cu 100 g/g);
• BRBC (1,2 % v/v): buena eficacia protectora; BRBC difiere de PV1 por la presencia de extractos vegetales; • BRBC2 (1,2 % v/v) buena eficacia protectora; BRBC2 difiere de BRBc para una menor concentración de cobre (20 g/kg) y la presencia de cinc (10 g/kg).
Véase Fig. 6 para una vista esquemática de los resultados.
En el cuarto ensayo, se compararon las eficacias curativas de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): valor de gravedad de la enfermedad muy bajo, probablemente debido a la falta de frescura del inóculo o a las condiciones no ideales de incubación;
• PV1 (2,4 % v/v): el valor absoluto muestra una eficacia curativa satisfactoria, pero no es significativamente diferente del control; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
• PV1 MDE (1,6 % 0,8 % v/v): el valor absoluto muestra una buena eficacia curativa, pero no es significativamente diferente del control; MDE difiere del PV1 por una menor concentración de cobre (45 g/kg) y la presencia de extractos vegetales;
• PV1 BRBC2 (1,6 % 0,8 % v/v): el valor absoluto muestra una eficacia curativa inaceptable, la gravedad de la enfermedad es comparable al control; BRBC2 difiere de PV1 para una menor concentración de cobre (20 g/kg) y la presencia de cinc (10 g/kg) y extractos vegetales.
Véase Fig. 7 para una vista esquemática de los resultados.
En el quinto ensayo, se compararon las eficacias protectoras de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): valor bajo pero aceptable de gravedad de enfermedad;
• PV1 (1,2 % v/v): eficacia protectora muy buena; forma significativamente diferente del control a pesar de su bajo valor; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
• MDE (1,2 % v/v): buena eficacia protectora; forma significativamente diferente del control a pesar de su bajo valor;
MDE difiere del PV1 por una menor concentración de cobre (45 g/kg) y la presencia de extractos vegetales; • FDLN (1,2 % v/v): eficacia protectora satisfactoria; FDLN difiere de PV1 por la presencia de extractos vegetales;
• FDLN2 (1,2 % v/v): eficacia protectora inaceptable; FDLN2 difiere de FDLN para la concentración más baja de cobre (20 g/kg) y la presencia de cinc (10 g/kg);
• FDLN3 (1,2 % v/v): eficacia protectora inaceptable; FDLN3 difiere de FDLN para una menor concentración de cobre
(20 g/kg), presencia de cinc (10 g/kg) y extractos vegetales en polvo; el agente de ensayo no se ajustó completamente para ser rociado debido a la detención de la boquilla;
• FDLN4 (1,2 % v/v): eficacia protectora inaceptable: FDLN4 difiere de FDLN para una menor concentración de cobre (20 g/kg), presencia de cinc (10 g/kg) y extractos vegetales hidroalcohólicos; el agente de ensayo no se ajustó completamente para ser rociado debido a la detención de la boquilla; BC (1,2 % v/v): eficacia protectora inaceptable: BC difiere de PV1 por ausencia de cobre y presencia de cinc (20 g/kg) y de extractos vegetales; • BC2 (1,2 % v/v): eficacia protectora inaceptable: BC2 difiere de BC para una coformulación diferente.
Véase Fig. 8 para una vista esquemática de los resultados.
4. MILDEW POLVORIENTO (Erysiphe necator)
4.1 Ensayo en laboratorio
La evaluación de la eficacia biológica de los agentes de ensayo contra Erysiphe necator se realizó solo en laboratorio mediante un ensayo in vitro. Con este objetivo, se sumergieron varios portaobjetos de microscopio en un vaso de precipitados que contenía medio de agar con agua y luego se colocaron en placas de Petri.
Una vez que el medio de agar agua se solidificó en el portaobjetos de microscopio, se llenó un vaso de precipitados por cada factor con la solución respectiva (agua, agente de comparación y agente de ensayo). Los portaobjetos del microscopio cubiertos con medio de agar agua se retiraron inmediatamente de las placas de Petri para sumergirse durante unos segundos en los vasos de precipitados; Se prepararon seis portaobjetos por cada solución.
Se recogieron hojas de vid con síntomas frescos y prominentes de Erysiphe necator de vides en macetas infectadas cultivadas en un ambiente controlado. Se cortaron discos de 2 cm de diámetro de las hojas infectadas, teniendo cuidado de seleccionar las áreas de la superficie de la hoja superior ricas en conidios de mildiu polvoriento visibles como blanco, masas pulverulentas de micelio. Una vez que los portaobjetos del microscopio se secaron, se imprimió un disco de hoja en cada portaobjetos para transferir el micelio al medio de agar con agua. Después de retirar los discos de hojas, se cubrieron tres portaobjetos de microscopio por factor fueron con un cubreobjetos y tres quedaron sin cubrir, entonces, se llenaron cuatro gotas de agua desmineralizada junto al portaobjetos de microscopio en cada placa de Petri.
Las placas de Petri, cerradas con Parafilm, se incubaron a 20 °C, bajo la luz amarilla, luego se observaron al microscopio (aumento de 40x) después de 20 horas.
La eficacia biológica de los agentes de ensayo se determinó en términos de germinación de conidios, evaluando la relación entre conidios no germinados (inactivos o degenerados) y conidios germinados (activos después de haber emitido el tubo de germinación) de cien conidios.
En el primer ensayo, las eficacias biológicas de los siguientes tratamientos se compararon después de 20 horas:
• Control (agua): se observó un número muy bajo de conidios germinados, probablemente debido a razones relacionadas con el ciclo biológico de los hongos y su baja tasa de germinación en ambiente controlado;
• Vivando (a.i. Metrafenona) (0,064 % v/v): no se observaron conidios germinados;
• OT (2 % v/v): no se observaron conidios germinados; OT está constituido por azufre (400 g/kg).
Véase Fig.9 para una vista esquemática de los resultados.
Hay que informar que la baja tasa de germinación mostrada por el control, redujo la fiabilidad del ensayo, a pesar del control total de patógenos mostrado por el agente de comparación y el agente de ensayo. Contextualmente para probar, se observó la mayor tasa de germinación de los conidios sobre los portaobjetos del microscopio incubados sin cubreobjetos.
5. MOHO GRIS (Botrytis cinerea)
5.1 Ensayo en laboratorio
La evaluación de la eficacia biológica de los agentes de ensayo contra Botrytis cinerea se realizó solo en laboratorio mediante un ensayo in vitro. Para este objetivo, se sumergieron varios portaobjetos de microscopio en un vaso de precipitados que contenía medio de agar con agua y luego se colocaron en placas de Petri.
El inóculo de conidios se preparó seleccionando tres cultivos (placas de Petri) de Botrytis cinerea: se vertieron 10 ml de agua destilada en cada placa de Petri y se extendieron con una espátula sobre toda la superficie del micelio. La suspensión de conidios obtenida se filtró a través de un tubo de plástico estéril lleno de fibra de vidrio para separar partes del micelio de los conidios. La concentración de conidios se ajustó a 1*106 conidios/ml (mínimo) contando en una cámara Thoma® en el microscopio (aumento de 40x) finalmente se logró diluir con agua destilada. Una vez que
el medio de agar agua se solidificó en los portaobjetos de microscopio, se llenaron 50 ml de la suspensión de conidios en cada portaobjetos de microscopio, sobre los cuales, se añadieron 50 ml de la solución que representa cada factor (agua, agente de comparación y agente de ensayo) en la superficie del agar. Finalmente, los portaobjetos del microscopio se cubrieron con cubreobjetos. Se prepararon seis placas de Petri por cada factor.
Las placas de Petri se incubaron en una caja húmeda a 25 °C (intervalos día/noche 12/12). Después de 48 horas, se observaron en el microscopio (aumento de 40x). La eficacia biológica de los agentes de ensayo se determinó en términos de germinación de conidios, evaluando la relación entre conidios no germinados (inactivos o degenerados) y conidios germinados (activos después de haber emitido el tubo de germinación) de cien conidios.
En el primer ensayo, las eficacias biológicas de los siguientes tratamientos se compararon después de 20 horas:
• Control (agua): se observó un número muy alto de conidios germinados;
• Switch® (a.i. Cyprodinil y Fludioxonil) (0,194 % p/v): se observó un bajo número de conidios germinados;
• BRBC (1 % v/v): se observó un número muy bajo de conidios germinados; BRBC está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg) y extractos vegetales;
• BC (1 % v/v): un bajo número de conidios germinados, comparable al agente de comparación, se observó; BC está constituido por sulfato de cinc (Zn 20 g/kg) y extractos vegetales.
Véase Fig. 10 para una vista esquemática de los resultados
En el segundo ensayo, las eficacias biológicas de los siguientes tratamientos se compararon después de 20 horas:
• Control (agua): se observó un bajo número de conidios germinados, probablemente debido a razones relacionadas con el ciclo biológico de los hongos y su baja tasa de germinación en ambiente controlado;
• Switch® (a.i. Cyprodinil y Fludioxonil) (0,194 % p/v): no se observaron conidios germinados;
• BRBC (1 % v/v): menos de la mitad de los conidios germinados mostrados por el control, se observó; BRBC está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg) y extractos vegetales;
• BC (1 % v/v): el número de conidios germinados es comparable al control e inaceptable; se observa la constitución de BC; BC está constituido por sulfato de cinc (Zn 20 g/kg) y extractos vegetales.
Véase Fig. 11 para una vista esquemática de los resultados
En el tercer ensayo, las eficacias biológicas de los siguientes tratamientos se compararon después de 20 horas:
• Control (agua): se observó un bajo número de conidios germinados, probablemente debido a razones relacionadas con el ciclo biológico de los hongos y su baja tasa de germinación en ambiente controlado;
• Switch® (a.i. Cyprodinil y Fludioxonil) (0,194 % p/v): no se observaron conidios germinados;
• BRBC (1 % v/v): menos de la mitad de los conidios germinados mostrados por el control, se observó; BRBC está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg) y extractos vegetales;
• BRBC2 (1 % v/v): casi la mitad de los conidios germinados mostrados por el control, se observó; BRBC2 difiere de BRBC para una menor concentración de cobre (20 g/kg) y la presencia de cinc (10 g/kg);
• BRBC2/2 (2 % v/v): el agente de ensayo mostró aproximadamente la ausencia de conidios germinados; BRBC2/2 difiere de BRBC2 por su aplicación en doble concentración.
Véase Fig. 12 para una vista esquemática de los resultados
6. PODREDUMBRE NEGRA (Guignardia bidwellii)
6.1 Ensayo en laboratorio
La evaluación de la eficacia biológica de los agentes de ensayo contra Guignardia bidwellii se realizó en laboratorio con un ensayo in vitro. Con este objetivo, se sumergieron varios portaobjetos de microscopio en un vaso de precipitados que contenía medio de agar con agua y luego se colocaron en placas de Petri. El inóculo de conidios se preparó seleccionando tres cultivos (placas de Petri) de Guignardia bidwellir. Se vertieron 10 ml de agua destilada en la primera placa de Petri y se extendieron con una espátula sobre toda la superficie del micelio. Después de 10 minutos, la suspensión obtenida se vertió en la segunda placa de Petri y luego en la tercera y finalmente se filtró a través de un tubo de plástico estéril lleno de fibra de vidrio para separar el micelio de los conidios. La concentración de conidios se ajustó a 1 *106 conidios/ml (mínimo), contando en una cámara Thoma® al microscopio (aumento de 40x), finalmente se logró diluir con agua destilada.
Una vez que el medio de agar agua se solidificó en los portaobjetos de microscopio, se llenaron 50 ml de la suspensión de conidios en cada portaobjetos de microscopio, sobre los cuales, se añadieron 50 ml de la solución que representa cada factor (agua, agente de comparación y agente de ensayo) en la superficie del agar. Finalmente, los portaobjetos del microscopio se cubrieron con cubreobjetos. Se prepararon seis placas de Petri por cada factor.
Las placas de Petri se incubaron en una caja húmeda a 25 °C (intervalos día/noche 12/12). Después de 48 horas, se observaron en el microscopio (aumento de 40x).
La eficacia biológica de los agentes de ensayo se determinó en términos de germinación de conidios, evaluación de la relación entre conidios no germinados (inactivos o degenerados) y conidios germinados (activos después de haber emitido el tubo de germinación y el apresorio) de cien conidios.
En el primer ensayo, las eficacias biológicas de los siguientes tratamientos se compararon después de 48 horas:
• Control (agua): se observó un bajo número de conidios germinados, probablemente debido a razones relacionadas con el ciclo biológico de los hongos y su baja tasa de germinación en ambiente controlado;
• Polyram® (a.i. Metiram) (0,645 % p/v): no se observaron conidios germinados;
• PV1 (2,4 % v/v): no se observaron conidios germinados; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
• BRBC2 (1,2 % v/v): se observaron pocos conidios germinados (sin apresorio); BRBC2 está constituido por sulfato de cobre (Cu 20 g/kg), sulfato de cinc (Zn 10 g/kg) y extractos vegetales.
Véase Fig. 13 para una vista esquemática de los resultados
6.2 Ensayo en invernadero
El ensayo en invernadero se realizó para evaluar la eficacia protectora de los agentes de ensayo. Para este objetivo, se emplearon seis vides en macetas por cada factor: control (agua), agente de comparación y agentes de ensayo. Las vides en macetas se seleccionaron por altura correcta, buen aspecto y número de hojas (mínimo siete) y se prepararon para tratamiento, atando el brote justo debajo de las últimas cuatro hojas elegibles para la evaluación final de la enfermedad. El primer día, las vides en macetas se trataron con el pulverizador experimental y después de 24 horas se realizó la inoculación del patógeno fúngico en las plantas tratadas. El inóculo de conidios se preparó seleccionando tres cultivos (placas de Petri) de Guignardia bidwellir. Se vertieron 10 ml de agua destilada en la primera placa de Petri y se extendieron con una espátula sobre toda la superficie del micelio. Después de 10 minutos, la suspensión obtenida se vertió en la segunda placa de Petri y luego en la tercera, finalmente se filtró a través de un tubo de plástico estéril lleno de fibra de vidrio para separar el micelio de los conidios. La concentración de conidios se ajustó a 1 *104 conidios/ml (mínimo), contando en una cámara Thoma® al microscopio (aumento de 40x), finalmente se logró diluir con agua destilada.
La suspensión de conidios se roció manualmente sobre las plantas tratadas con cuidado de humedecer homogéneamente la superficie superior de las tres hojas por encima del punto de unión del brote. Después de la inoculación, la mesa con enredaderas en macetas se cubrió con una lona de plástico negro, se llenó en la base con agua y se transfirió al invernadero para incubación de la enfermedad.
El tercer día, las plantas tratadas, las plantas inoculadas e incubadas se descubrieron y se dejaron crecer bajo condiciones de control. El duodécimo día, la gravedad de la enfermedad se determinó observando en cada vid en maceta las cuatro hojas de arriba y las tres debajo del punto de unión del brote. La fitotoxicidad y la presencia de picnidios se forman dentro de las lesiones (en zarcillos, tallos de las hojas y brotes), también se monitorizaron.
En el primer ensayo, se compararon las eficacias protectoras de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): buen valor de gravedad de la enfermedad;
• Polyram® (a.i. Metiram) (0,645 % p/v): eficacia protectora muy buena;
• PV1 (2,4 % v/v): buena eficacia protectora, no comparable con el agente de comparación; PV1 está constituido por sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
• BRBC2 (1,2 % v/v): eficacia protectora satisfactoria; no comparable con el agente de ensayo PV1; BRBC2 está constituido por sulfato de cobre (Cu 20 g/kg), sulfato de cinc (Zn 10 g/kg) y extractos vegetales.
Véase Fig. 14 para una vista esquemática de los resultados
Sin fitotoxicidad en las hojas y sin picnidios formados dentro de las lesiones (en zarcillos, tallos de las hojas y brotes), BHT como estabilizador.
7. ARAÑUELO DE LA VID EUROPEA (Eupoecilia ambiguella)
7.1 Ensayo en laboratorio
La evaluación de la eficacia biológica de los agentes de ensayo contra Eupoecilia ambiguella se realizó en laboratorio evaluando la tasa de mortalidad después de un tratamiento directo del primer estadio de E. ambiguella. Para este objetivo, varias macetas pequeñas se llenaron con una dieta artificial adecuada, en donde se pusieron 3 larvas recién nacidas por maceta individual. Se prepararon treinta réplicas para cada factor: control (agua), agente de comparación convencional (insecticida Steward®) y agentes de ensayo.
Inmediatamente después de eso, las macetas de cada factor se colocaron en una placa que se colocó en el túnel del rociador experimental empleado para el ensayo en invernadero (descrito en la introducción). Cada placa se trató con la solución que representa el factor apropiado. Después de esto, se cerraron pequeñas macetas y se colocaron en una sala de almacenamiento a una temperatura de 25 °C (día) y 20 °C (noche) y una humedad del 40 %.
La tasa de mortalidad se determinó monitorizando la mortalidad de las larvas cinco días y diez días después del tratamiento. Los datos se analizaron estadísticamente.
En el primer ensayo, se compararon las eficacias de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): buen valor de mortalidad después de 5 y 10 días;
• Steward® (a.i. Indoxacarb) (0,0125 % p/v): muy buen valor de mortalidad, significativamente diferente del control, después de cinco y diez días;
• NEW REP (1 % v/v): valor de mortalidad muy bajo, no significativamente diferente del control, después de 5 y 10 días; el agente de ensayo mostró una baja tendencia a disminuir la mortalidad de las larvas; NEW REP está constituido por sulfato de cinc (Zn 20 g/kg), azufre (200 g/kg) y extractos vegetales.
Véase Fig. 15 para una vista esquemática de los resultados
En el segundo ensayo, se compararon las eficacias de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): buen valor de mortalidad después de 5 y 10 días;
• Steward® (a.i. Indoxacarb) (0,0125 % p/v): buen valor de mortalidad, significativamente diferente del control después de diez días;
• REP (1 % v/v): bajo valor de mortalidad, no significativamente diferente del control, después de 5 y 10 días; el agente de ensayo solo mostró una tendencia a disminuir la mortalidad de las larvas; REP está constituido por sulfato de cinc (Zn 20 g/kg) y extractos vegetales.
Véase Fig. 16 para una vista esquemática de los resultados
8. COCHINILLA (Planococcus ficus)
8.1 Ensayo en laboratorio
La evaluación de la eficacia biológica de los agentes de ensayo contra Planococcus ficus se realizó en laboratorio evaluando la tasa de mortalidad después de un tratamiento directo del primer estadio de P. ficus. Para ello, varias cajas de plástico, apropiadas para conservar hojas frescas, se prepararon colocando hojas de avina (Müller Thurgau) en el recipiente de cristal lleno de agua. A continuación, diez lombrices vivas de P. ficus se transfirieron, usando un cepillo especial, desde los cultivos de patata a cada hoja superior, que luego se cubrió con la caja de plástico adecuada. Se prepararon diez cajas de plástico como réplicas por cada factor: control, agente de comparación convencional (insecticida Confidor®) y agentes de ensayo. Al día siguiente, cada hoja se monitorizó bajo el microscopio estereoscópico para verificar la cantidad de rastreadores que aún estaban vivos. El mismo día, se descubrieron cajas de plástico y las hojas se trataron manualmente con un equipo de laboratorio que simula las nebulizaciones del pulverizador clásico empleado en la viña. Después del tratamiento, las hojas se cerraron en cajas de plástico y se colocaron en una sala de almacenamiento a una temperatura de 25 °C (día) y 20 °C (noche) y una humedad del 40 %.
La tasa de mortalidad se determinó mediante la monitorización de la mortalidad larval, cuatro días y ocho días después del tratamiento.
Los datos se analizaron estadísticamente.
En el primer ensayo, se compararon las eficacias de los siguientes tratamientos:
• Control (agua): buen valor de mortalidad después de cuatro y ocho días;
• Confidor® (a.i. Imidacloprid) (0,02 % p/v): muy buen valor de mortalidad, significativamente diferente del control, después de cuatro y ocho días;
• REP (1 % p/v): bajo valor de mortalidad, no significativamente diferente del control, después de cuatro y ocho días; el agente de ensayo mostró solo una tendencia a disminuir la fertilidad instantánea; REP está constituido por sulfato de cinc (Zn 20 g/kg) y extractos vegetales.
• NEW REP (1 % v/v): bajo valor de mortalidad, significativamente diferente del control después de ocho días; NEW REP difiere de REP por la presencia de azufre (200 g/kg).
Véase Fig. 17 para una vista esquemática de los resultados
ENSAYOS EXPERIMENTALES EN VIDES, TOMATERA, TRIGO, MANZANO, PERAL Y VEGETALES
CODIFICACIÓN DEL AGENTE DE ENSAYO
a) La muestra de MDE está constituida por agua, extractos naturales de origen vegetal e hidroxiapatita sustituida con carbonato funcionalizada con sulfato de cobre (Cu 45 g/kg);
b) La muestra PV1 está constituida por agua e hidroxiapatita sustituida con carbonato funcionalizada con sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
c) La muestra BRBC está constituida por agua, extractos naturales de origen vegetal e hidroxiapatita sustituida con carbonato funcionalizada con sulfato de cobre (Cu 50 g/kg);
1. AGALLA DE LA CORONA DE LA VID (Agrobacterium vitis)
Planta: Vitis vinifera - Vid
A) ENSAYO IN VITRO: La muestra MDE se probó in vitro contra el agente de agallade la corona de la vida, Agrobacterium vitis. Después de incubación en condiciones estándar, el crecimiento de los patógenos fue inhibido por la muestra MDE (5-10 % v/v). Se informa del papel positivo de HA en el ensayo, optimizando significativamente el efecto de la molécula funcional (cobre como fungicida) en comparación con las sustancias activas convencionales (agentes biocidas) que no pudieron inhibir el crecimiento de patógenos.
En particular, HA adsorbe iones cobre en su superficie específica, que está siendo muy alto (100 m2/g), mantiene y libera una gran cantidad de iones.
b) ENSAYO EN VIVERO: en rizomas de vid 41B infectados naturalmente por Agrobacterium vitis y tratados durante el proceso de rehidratación con la muestra MDE (2 % v/v). El análisis molecular en los rizomas tratados mostró una reducción significativa de la presencia de patógenos dentro de las muestras tratadas, confirmando el efecto de translocación de HA.
2) TIZÓN TARDÍO DE TOMATES (Phytophthora infestans)
Planta: Solanum lycopersicum - Tomate
El ensayo se realizó en invernadero, tratando platos de tomate en macetas, con la muestra PV1, antes (preventivo, dosis 2,5 % v/v) y después (curativo, 5 % v/v) la inoculación artificial del patógeno Phytophthora infestans. Los resultados mostraron una eficacia preventiva del tratamiento muy buena, confirmando el efecto superficial de HA. 3) TIZÓN DE TRIGO FUSARIUM (Fusarium graminearum y Fusarium culmorum)
Planta: Triticum spp - TrigO
A) ENSAYO IN VITRO: La muestra BRBC fue probada in vitro contra el tizón de trigo Fusarium de agentes de trigo, Fusarium graminearum y Fusarium culmorum. Después de 5 días de incubación en condiciones estándar, el crecimiento de los patógenos fue inhibido por la muestra BRBC (2 % v/v). Se informa del papel positivo de HA en el ensayo, optimizando el efecto de la molécula funcional (extractos naturales y cobre como fungicidas).
b) ENSAYO EN CAMPO: tratar el trigo con la muestra BRBC (2 % v/v) en el momento de la floración cuando aproximadamente el 40 % de las anteras eran visibles, como ensayo preventivo. En otra maceta se inoculó una suspensión de Fusarium graminearum y Fusarium culmorum, para establecer una cura, seguido por la aplicación de la muestra BRBC. El tratamiento detuvo en promedio el desarrollo (preventivo) y la difusión (curativa) de la enfermedad de un oído a otro, confirmando el efecto superficial de HA.
4) SARNA DE MANZANA (Venturia inaequalis)
Planta: Malus domestica - Manzano
El ensayo curativo se realizó en el campo, tratando, con una solución de 1 kg/ha de MDE 5 kg/ha de PV1, manzanos infectados naturalmente por Venturia inaequalis. Después de 7 días se realizó un segundo tratamiento. La enfermedad de la sarna de la manzana se detuvo inmediata y significativamente por los tratamientos basados en HA, mientras que los tratamientos convencionales no pudieron detener el desarrollo de la enfermedad. Los resultados confirmaron la superficie y el efecto de translocación de HA.
5) SARNA DE PERA (Venturia pirina)
Planta: Pyrus spp - Peral (pero)
El ensayo curativo se realizó en el campo, tratando, con una solución de 1 kg/ha de MDE 5 kg/ha de PV1, perales infectados naturalmente por Venturia pirina. Después de 7 días se realizó un segundo tratamiento. La enfermedad de la sarna de la pera fue inmediatamente y significativamente detenida por los tratamientos basados en HA, mientras
que los tratamientos convencionales no pudieron detener el desarrollo de la enfermedad. Los resultados confirmaron la superficie y el efecto de translocación de HA.
6) MANCHA MARRÓN DE PERA (Stemphylium vesicarium)
Planta: Pyrus spp - Peral (pero)
El ensayo curativo se realizó en el campo, tratando, con una solución de 1 kg/ha de MDE 5 kg/ha de PV1, perales infectados naturalmente por Stemphylium vesicarium. Después de 7 días se realizó un segundo tratamiento. La enfermedad de la sarna de la pera fue inmediatamente y significativamente detenida por los tratamientos basados en HA, mientras que los tratamientos convencionales no pudieron detener el desarrollo de la enfermedad. Los resultados confirmaron la superficie y el efecto de translocación de HA.
7) ENSAYOS EN VEGETALES
Un fungicida eficaz contra el mildiu en la vid (peronospora della vite), normalmente es eficaz contra las otras formas de moho en las verduras (variedad peronospore degli ortaggi).
Este es el caso de la muestra PV1, basada en HA, que han mostrado resultados positivos en ésa is protectores y curativos realizados en el campo, aplicando una dosis variable entre 1-6 kg/ha (en función de la cantidad de agua utilizada por aplicación) y para una serie de aplicaciones variables en función de la gravedad de la enfermedad. La eficacia se debe al efecto superficial del H.
Bajo la enfermedad controlada en varios vegetales:
- Mildiu de lechuga causado por Bremia lactucae en lechuga;
- Mildiu de espinacas causado por Peronospora spinaceae;
- Mildiu de cucurbitáceas causado por Pseudoperonospora cubensis en melón, pepino, calabaza, calabaza y sandía; - Mildiu de cebolla causado por Peronospora schleideni;
- Mildiu de puerro causado por Phytophtora porri;
- Mildiu de guisantes causado por Peronospora pisi.
ENSAYOS EXPERIMENTALES EN MALEZAS
Tres formulaciones que contienen agua, hidroxiapatita sustituida con carbonato (HCA) se funcionalizaron con un herbicida.
El ensayo se evaluó comparando el producto comercial que contiene glifosato (N- (fosfonometil)glicina) y diferentes suspensiones de hidroxiapatita sustituida con carbonato (HCA) funcionalizadas por la misma molécula activa según el siguiente esquema:
A) CONTROL Glifosato 480 g/l (aplicación en solución 5 % v/v)
B) BLDS HCA funcionalizado con glifosato 160 g/l (aplicación en solución 5 % v/v)
C) BLDS HCA funcionalizado con glifosato 240 g/l (aplicación en solución 5 % v/v).
Los ensayos se realizaron en diferentes malezas:
• Cynodon spp.
• Sorghum halepense
• Convolvulus spp.
1) Ensayos en Convolvulus spp.:
La Figura 18 muestra cómo el HCA funcionalizado por diferentes concentraciones de herbicida glifosato es capaz de matar la maleza en menos tiempo que el producto comercial y con menos concentración de principio activo.
Incluso reduciendo el contenido de principio activo al 50 % de la dosis estándar, e1HCA funcionalizado muestra un mejor efecto desde el comienzo de la prueba hasta el final (99 % de amarillamiento frente a 63 % de amarillamiento para el control después de 9 días).
2) Ensayos en Cynodon spp.
La Figura 19 muestra cómo el HCA funcionalizado por diferentes concentraciones de glifosato de herbicida puede matar la maleza en menos tiempo que el producto comercial y con menos concentración de principio activo.
Incluso reduciendo el contenido de principio activo al 50 % de la dosis estándar, e1HCA funcionalizado muestra un
mejor efecto desde el comienzo de la prueba hasta el final (88 % de amarillamiento frente a 47 % de amarillamiento para el control después de 9 días).
3) Ensayos en Sorghum halepense.
La Figura 20 muestra cómo el HCA funcionalizado por diferentes concentraciones de glifosato de herbicida puede matar la hierba en menos tiempo que el producto comercial y con menos concentración de principio activo.
Incluso reduciendo el contenido de principio activo al 50 % de la dosis estándar, e1HCA funcionalizado muestra un mejor efecto desde el comienzo del ensayo hasta el final (97 % de amarillamiento frente a 64 % de amarillamiento para el control después de 9 días).
Claims (10)
1. Uso de al menos una partícula de hidroxiapatita sustituida que comprende al menos una molécula bioactiva, o de una composición que la contiene, para tratar plantas en donde la partícula de hidroxiapatita está sustituida con al menos un ion carbonato; y
en donde la molécula bioactiva es un ion seleccionado entre Cu, Zn, S, P, Ca o aceites esenciales de origen vegetal o mezclas de los mismos; y
en donde la molécula bioactiva se adsorbe en la hidroxiapatita sustituida.
2. El uso según la reivindicación 1, para el tratamiento fitosanitario y/o nutricional de plantas.
3. El uso según las reivindicaciones 1 y 2, en donde las plantas son vides, planta de tomate (Solanum lycopersicum), trigo (Triticum spp), peral (Pyrus spp), manzano (Malus domestica) y plantas vegetales, como lechuga, espinaca, cucurbitáceas, cebolla, puerro, guisantes.
4. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la molécula bioactiva tiene una actividad antiparasitaria, preferentemente contra hongos, bacterias, criptógamas e insectos, y/o una actividad nutricional como fertilizante o potenciador del crecimiento.
5. El uso según la reivindicación 4, en donde la actividad antiparasitaria de la molécula bioactiva es para la prevención y tratamiento del mildiu (causado por Plasmopara viticola), mildiu polvoriento (causado por el néctar de Erysiphe), moho gris (causado por Botrytis cinerea), podredumbre negra (causada por Guignardia bidwellii), agalla de la corona de la vid (causada por Agrobacterium vitis), tizón tardío de tomates (causado por Phytophthora infestans), tizón de trigo fusarium (causado por Fusarium graminearum y Fusarium culmorum), sarna de manzana (causada por Venturis inaequalis), sarna de pera (causada por Venturia pirina), mancha marrón de pera (causada por Stemphylium vesicarium), mildiu de lechuga (causado por Bremia lactucae), mildiu de espinaca (causado por Peronospora spinaceae), mildiu de cucurbitáceas (causado por Pseudoperonospora cubensis en melón, pepino, calabaza, calabaza y sandía), mildiu de cebolla (causado por Peronospora schleideni), mildiu de puerro (causado por Phytophtora porri), mildiu de guisantes (causado por Peronospora pisi), enfermedades causadas por los insectos: arañuelo de la vid europea (Eupoecilia ambiguella) y cochinilla (Planococcus ficus).
6. El uso según la reivindicación 1, en donde los aceites esenciales de origen vegetal se seleccionan entre menta, tomillo, romero, sésamo, soja, clavos de olor, ajo, limón o canela.
7. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la partícula de hidroxiapatita está sustituida con al menos un ion carbonato que responde a la fórmula:
Ca(10)(PO4)(6-y)(CO3)y(OH)2
en donde y es un número comprendido entre 0,002 y 0,6,
y que tiene un grado de cristalinidad comprendido entre 25 y 59 %, preferentemente entre 25 y 40 %.
8. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la partícula de hidroxiapatita es inferior a 2 mm.
9. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la partícula de hidroxiapatita se usa en forma de agregados de una pluralidad de partículas de hidroxiapatita.
10. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la partícula de hidroxiapatita se aplica a las plantas en una composición líquida opcionalmente como una pulverización sobre las hojas, tronco, madera o raíces de las plantas a tratar.
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