ES2655704T3 - Derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida sustituidos y su uso como moduladores de canales de calcio y/o sodio - Google Patents

Derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida sustituidos y su uso como moduladores de canales de calcio y/o sodio Download PDF

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Abstract

Un compuesto de la Fórmula general (I): en donde: X es -O-, -S-o -SO2-; Y es hidrógeno, OH u O(C1-C4)alquilo; Z es >=O o >=S; R es (C3-C10)alquilo; ω-trifluoro(C3-C10)alquilo; R1 y R2 son, independientemente, hidrógeno, hidroxi, (C1-C8)alcoxi, (C1-C8) alquiltio, halo, trifluorometilo o 2,2,2- trifluoroetilo; o uno de R1 y R2 está en posición orto respecto a R-X-y, en conjunto con el mismo R-X-, representa un grupo donde R0 es (C2-C9)alquilo; R3 y R'3 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C4)alquilo; R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno, (C1-C4)alquilo; o R4 es hidrógeno y R5 es un grupo seleccionado de -CH2-OH, -CH2-O-(C1-C6)alquilo, -CH(CH3)-OH, -(CH2)2-S-CH3, bencilo y 4-hidroxibencilo; o R4 y R5, en conjunto con el átomo de carbono adyacente, forman un residuo de (C3-C6)cicloalquilo; R6 y R7 son independientemente hidrógeno o (C1-C6)alquilo; o en conjunto con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O-, -S- y -NR8-donde R8es hidrógeno o (C1-C6) alquilo; con la condición de que cuando X es -S-o -SO2-, entonces Y no es OH u O(C1-C4) alquilo; si es el caso, ya sea como isómero óptico único en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.

Description

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DESCRIPCION
Derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida sustituidos y su uso como moduladores de canales de calcio y/o sodio
La presente invención se refiere a derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida sustituidos, sales farmacéuticamente aceptables de estos, composiciones farmacéuticas que los contienen y su uso como moduladores de canales de calcio y/o sodio.
Los derivados, objetos de la invención, son activos como moduladores de canales de calcio y/o sodio y por lo tanto, son útiles para prevenir, mejorar y curar una amplia variedad de patologías, que incluyen, pero sin limitarse a enfermedades neurológicas, cognitivas, psiquiátricas, inflamatorias, urogenitales y gastrointestinales, donde se ha descrito que los mecanismos anteriores juegan un rol patológico.
Los compuestos de esta invención están sustancialmente libres de un efecto inhibitorio de la monoamina oxidasa (MAO), especialmente en las dosis que tienen eficacia terapéutica para prevenir, mejorar y/o curar dichas afecciones. Antecedentes de la invención
Antecedentes químicos
La patente núm. GB 586,645 describe la síntesis de derivados de aminoácidos de la siguiente fórmula general
imagen1
En particular describe la síntesis de N-hidroxialquilamidas que tienen propiedades estimulantes del músculo liso uterino.
La solicitud de patente núm. WO 90/14334 describe derivados de N-fenilalquil alfa-amino carboxamida mono-sustituidos de la siguiente fórmula general
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en donde
R es un (C-i-C8)alquilo, (C3-C8)cicloalquilo, furilo, tienilo, piridilo o un anillo fenilo opcionalmente sustituido por 1 a 4 sustituyentes que se seleccionan independientemente de halo, (C-i-C6)alquilo, (C-i-C6)alcox¡ y trifluorometilo; A es un grupo -(CH2)m-, -(CH2)p-X-(CH2)q- en donde m es un número entero de 1 a 4, uno de p y q es cero y el otro es cero o un número entero de 1 a 4, X es -O-, -S- o -NR4- en el cual R4 es hidrógeno o (Ci-C4)alquilo; n es 0 o 1; cada uno de R1 y R2 independientemente es hidrógeno o (C1-C4)alquilo; R3es hidrógeno, (CrC4)alquilo opcionalmente sustituido por hidroxi o fenilo opcionalmente sustituido como se explicó anteriormente; R3' es hidrógeno o R3 y R3' en conjunto forman un anillo (C3-C6)cicloalquilo; cada uno de R5 y R6 independientemente es hidrógeno o (C1-C6) alquilo, con la condición de que cuando R es (C1-C8)alquilo, entonces A es un grupo -(CH2)p-X-(CH2)q- en el cual p y q ambos son cero y X es - O-, -S- o -NR4-, en el cual R4 es hidrógeno o C1-C4 alquilo para usar como agentes antiepilépticos, antiparkinsonianos, neuroprotectores, antidepresivos, antiespásticos y/o hipnóticos.
Ninguno de los derivados sintetizados en nuestra solicitud de patente se describe ni prepara específicamente en la patente núm. WO 90/14334.
En otras solicitudes de patentes, los compuestos seleccionados que caen en la fórmula general del documento WO 90/14334, se reivindican para usar en composiciones que tienen otras actividades, específicamente:
WO 99/35125
Derivados de alfa-aminoamida útiles como agentes analgésicos
WO 03/020273
Composición farmacéutica que comprende gabapentina o análogo de esta y una alfa aminoamida y su uso analgésico
WO 04/062655
Derivados de alfa-aminoamida útiles como agentes antimigrañosos
WO 05/018627
Derivados de alfa-aminoamida útiles como agentes antiinflamatorios
WO 05/070405
Derivados de alfa-aminoamida útiles en el tratamiento de trastornos del tracto urinario inferior
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WO 05/102300
Derivados de alfa-aminoamida útiles en el tratamiento de trastornos de síndrome de piernas inquietas y aditivos
WO 06/027052
El uso de (halobenciloxi) bencilamino-propanamidas para la fabricación de medicamentos activos como moduladores selectivos de canales de sodio y/o calcio
Solicitud EP. núm. 06012352.8
Derivados de a-aminoamida útiles en el tratamiento de trastornos cognitivos.
En la solicitud de patente WO 98/35957 se describen derivados de amida de la siguiente fórmula general
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y se reivindican como útiles contra trastornos de obesidad y de la alimentación.
Ninguno de los compuestos sintetizados en nuestra solicitud de patente se ha sintetizado actualmente ni se menciona específicamente en WO 98/35957.
En el documento WO 2004/087125, se describen compuestos de la siguiente fórmula general:
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Se reivindica un mecanismo de bloqueo de canales de sodio y numerosas actividades farmacológicas, en particular actividades analgésicas y contra la disfunción de la vejiga.
Debe señalarse que cuando X2 es un alquileno, no puede ser -CH2-CH2- sino solo -CH2-, de manera que ninguno de los derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida de esta solicitud caen dentro de la fórmula general informada anteriormente.
Eleonora Ghidini y otros, en Bioorganic & Medicinal Chemistry 2006, 14, 3263-3274 describe compuestos de la siguiente fórmula general:
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Estos compuestos se han analizado para determinar su actividad anticonvulsiva.
Ninguno de los compuestos descritos y sintetizados en esta solicitud de patente cae dentro de la fórmula general descrita anteriormente.
La solicitud copendiente PCT/EP 2006/011443 (WO 2007/071311) presentada el 29 de Noviembre de 2006, se refiere a derivados de 2-feniletilamino de la siguiente fórmula general:
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Ninguno de los compuestos reivindicados en esta solicitud cae dentro del documento PCT/EP 2006/011443 (WO 2007/071311).
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Antecedentes biológicos
Los canales de sodio juegan un importante rol en la red neuronal mediante la trasmisión de impulsos eléctricos rápidamente a través de todas las células y redes celulares, para coordinar de ese modo procesos superiores que van desde la locomoción hasta la cognición. Estos canales son grandes proteínas de transmembrana, que son capaces de cambiar entre diferentes estados para posibilitar una permeabilidad selectiva a los iones de sodio. Para este proceso se necesita un potencial de acción para despolarizar la membrana, y por lo tanto, estos canales son activados por voltaje. En años recientes se ha logrado una comprensión mucho mejor de los canales de sodio y los fármacos que interactúan con ellos.
Los canales de sodio activados por voltaje se clasificaron originalmente en base a su sensibilidad a la tetrodotoxina, desde un intervalo nanomolar bajo (Sensible a tetrodotoxina, TTXs) hasta micromolar alto (Resistente a tetrodotoxina, TTXr). Hasta el momento, se han identificado 9 subunidades a diferentes del canal de sodio y se han clasificado como Nav1.1 a Nav1.9.
Nav1.1 a Nan1.4, Nav1.6 y Nav1.7 son TTXs, mientras que Nan1.5, Nav1.8 y Nav.1.9 son TTXr, con diferentes grados de sensibilidad. Nav1.1 a Nav1.3 y Nav1.6, se expresan principalmente en el CNS, mientras que Nav1.4 y Nav1.5 se expresan fundamentalmente en músculo (esquelético y cardiaco respectivamente) y Nav1.7, Nav1.8 y Nav1.9 se expresan predominantemente en neuronas sensoriales del DRG.
Ahora se conoce que una serie de fármacos que tienen un mecanismo de acción desconocido actualmente actúan mediante la modulación de la conductancia de los canales de sodio, incluidos los anestésicos locales, antiarrítmicos clase I y anticonvulsivantes. Los bloqueadores de canales de sodio neuronales han encontrado aplicación con su uso en el tratamiento de epilepsia (fenitoína y carbamazepina), trastorno bipolar (lamotrigina), prevención de la neurodegeneración, y en la reducción del dolor neuropático. Varios fármacos antiepilépticos que estabilizan la excitabilidad neuronal son efectivos en el dolor neuropático (p. ej., carbamazepina).
Además, un aumento en la expresión o actividad de los canales de sodio también se ha observado en numerosos modelos de dolor inflamatorio, lo que sugiere un rol de los canales de sodio en el dolor inflamatorio.
Los canales de calcio son proteínas de múltiples subunidades que abarcan la membrana y que permiten la entrada controlada de iones de calcio a las células a partir del fluido extracelular. Comúnmente, los canales de calcio son dependientes del voltaje y se denominan canales de calcio activados por voltaje (VGCC). Los VGCC se encuentran por todo el sistema nervioso de mamíferos, donde regulan los niveles intracelulares de iones de calcio que son importantes para la viabilidad y función celular. Las concentraciones intracelulares del ion calcio participan en una serie de procesos vitales en los animales, tales como la liberación de neurotransmisores, la contracción muscular, la actividad de marcapasos y la secreción de hormonas. Todas las células “excitables” en los animales, tales como las neuronas del sistema nervioso central (CNS), las células nerviosas periféricas, y las células musculares, que incluyen las de los músculos esqueléticos, los músculos cardíacos y los músculos lisos de arterias y venas, tienen canales de calcio dependientes de voltaje.
Los canales de calcio son una gran familia con numerosos subtipos diferentes genética, fisiológica y farmacológicamente. En base a las propiedades biofísicas de las corrientes de calcio registradas en neuronas individuales, se han descrito dos superfamilias: Canales de calcio activados por un alto voltaje (HVA) y activados por un bajo voltaje (LVA). Las corrientes de calcio referidas como de tipo L, Tipo P, Tipo Q, Tipo N, Tipo R son HVA mientras que las de Tipo T son LVA. Con respecto a la identidad molecular, se han identificado, clonado y expresado diez subtipos de canales de calcio diferentes, y se han agrupado en tres familias: La familia Caví (Cav 1.1, 1.2, 1.3, 1.4) se relaciona funcionalmente con la corriente de Ca de tipo L; la familia Cav2 (Cav 2.1, 2.2, 2.3) se relaciona funcionalmente con las corrientes de tipo P/Q, N, R y la familia Cav3 (Cav 3.1, 3.2, 3.3) se relaciona funcionalmente con la corriente de tipo T.
Se cree que los canales de calcio son relevantes en determinados estados patológicos. Se considera que una serie de compuestos útiles en el tratamiento de diversas enfermedades cardiovasculares en mamíferos, que incluyen seres humanos, ejercen sus efectos beneficiosos mediante la modulación de las funciones de los canales de calcio dependientes de voltaje presentes en el músculo cardíaco y/o el vascular liso. Los compuestos con actividad contra los canales de calcio también se han implicado en el tratamiento del dolor. En particular se considera que los canales de calcio tipo N (Cav2.2), responsables de la regulación de la liberación de neurotransmisores, juegan un rol importante en la transmisión nociceptiva, debido a su distribución tisular así como también a los resultados de numerosos estudios farmacológicos. Los canales de calcio tipo N se encontraron regulados positivamente en el asta dorsal ipsilateral en modelos de daño con dolor neuropático (Cizkova D., Marsala J., Lukacova N., Marsala M., Jergova S., Orendacova J., Yaksh T. L. Exp. Brain Res. (2002) 147: 456-463). Los bloqueadores específicos de los canales de calcio tipo N demostraron ser eficaces en la reducción de las respuestas al dolor en modelos de dolor neuropático (Mattews E. A., Dickenson A. H. Pain (2001)92: 235-246), en la fase II de la prueba con formalina (Diaz A., Dickenson A. H. Pain(1997) 69: 93-100) y la hiperalgesia iniciada por inflamación de la articulación de la rodilla (Nebe J., Vanegas H., Schaible H. G. Exp.Brain Res. (1998) 120: 61-69). Se encontró que los ratones mutantes, que carecen de los canales de calcio tipo N, tienen una disminución de la respuesta al dolor persistente como se observa por una disminución en la respuesta al
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dolor durante la fase II de la prueba con formalina (Kim C., Jun K., Lee T., Kim S. S., Mcenery M. W., Chin H., Kim H. L, Park J. M., Kim D. K., Jung S. J., Kim J., Shin H. S. Mol. Cell Neurosci. (2001) 18: 235-245; Hatakeyama S., Wakamori M, Ino M., Miyamoto N., Takahashi E., Yoshinaga T., Sawada K., Imoto K., Tanaka I., Yoshizawa T., Nishizawa Y., Mori Y., Nidome T., Shoji S. Neuroreport (2001) 12: 2423-2427) así como también al dolor neuropático, evaluado por una disminución en la alodinia mecánica e hiperalgesia térmica en el modelo de ligadura de nervio espinal. De manera interesante, estos ratones mostraron además menores niveles de ansiedad en comparación con el tipo silvestre (Saegusa H., Kurihara T., Zong S., Kazuno A., Matsuda Y. Nonaka T., Han W., Toriyama H., Tanabe T., EMBO J. (2001) 20: 2349-2356). La participación de los canales de calcio tipo N en el dolor se ha validado adicionalmente en la clínica por el ziconotide, un péptido obtenido a partir del veneno del caracol marino, Conus Magnus. Una limitación en el uso terapéutico de este péptido es que tiene que ser administrado por vía intratecal en seres humanos (Bowersox S. S. y Luther R. Toxicon, (1998) 36: 1651-1658).
En conjunto estos hallazgos indican que los compuestos con bloqueo de los canales de sodio y/o calcio tienen un gran potencial terapéutico para prevenir, mejorar y curar una amplia variedad de patologías, que incluyen enfermedades neurológicas, psiquiátricas, urogenitales y gastrointestinales, donde se ha descrito que los mecanismos anteriores juegan un papel patológico.
Existen numerosos artículos y patentes que describen moduladores o antagonistas de canales de sodio y/o canales de calcio para el tratamiento o modulación de una plétora de trastornos, tal como su uso como anestésicos locales, antidepresivos antimaníacos, agentes para el tratamiento de depresión unipolar, incontinencia urinaria, diarrea, inflamación, epilepsia, afecciones neurodegenerativas, muerte de células nerviosas, dolor neuropático, migraña, hiperalgesia aguda e inflamación, enfermedad renal, alergia, asma, broncoespasmo, dismenorrea, espasmo esofágico, glaucoma, trastornos del tracto urinario, trastornos de la motilidad gastrointestinal.
Una lista no exhaustiva de tales artículos y patentes/solicitudes de patentes que describen bloqueadores de canales de sodio y/o calcio y el uso de estos incluye las referencias mostradas a continuación:
C. Alzheimer describe en Adv. Exp. Med. Biol. 2002, 513, 161-181, los canales de sodio y calcio como objetivos de sustancias neuroprotectoras.
Vanegas e Schaible (Pain 2000, 85, 9-18) analizan los efectos de antagonistas de canales de calcio sobre los mecanismos espinales del dolor, hiperalgesia y alodinia.
El documento Wo 03/057219 se refiere a bloqueadores de canales de sodio útiles como agentes para tratar o modular un trastorno del sistema nervioso central, tal como dolor neuropático, dolor inflamatorio, dolor relacionado con la inflamación o epilepsia.
El documento WO99/14199 describe 1,2,3,4,5,6-hexahidro-2,6-metano-3-benzazocines-10-oles sustituidos como potentes bloqueadores de canales de sodio útiles para el tratamiento de numerosas enfermedades, tales como enfermedad cerebrovascular, trastornos neurodegenerativos, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y trastornos cardiovasculares.
El documento WO01/74779 describe nuevos bloqueadores de canales de sodio de aminopiridina y su uso como anticonvulsivantes, anestésicos locales, como antiarrítmicos, para el tratamiento o prevención de afecciones neurodegenerativas, tal como la esclerosis lateral amiotrófica (ALS), para el tratamiento o prevención del dolor agudo o crónico, y para el tratamiento o prevención de la neuropatía diabética.
El documento WO04/087125 describe derivados de aminoácidos como inhibidores de canales de sodio de mamíferos, útiles en el tratamiento del dolor agudo y crónico, tinnitus, trastornos intestinales, disfunción de la vejiga y enfermedades desmielinizantes.
La patente de Estados Unidos núm. 5,051,403 se refiere a un método para reducir el daño neuronal asociado con una afección isquémica, tal como una enfermedad cerebrovascular, mediante la administración de péptido de omega- conotoxina deunión/inhibitorio en donde el péptido se caracteriza por la inhibición específica de las corrientes de los canales de calcio activados por voltaje selectivamente en tejidos neuronales.
La patente de Estados Unidos núm. 5,587,454 se refiere a composiciones y métodos para producir analgesia particularmente en el tratamiento de dolor y dolor neuropático.
La patente de Estados Unidos núm. 5,863,952 se refiere a antagonistas de canales de calcio para el tratamiento de la enfermedad cerebrovascular isquémica.
La patente de Estados Unidos núm. 6,011,035 se refiere a bloqueadores de los canales de calcio, útiles en el tratamiento de afecciones tales como la enfermedad cerebrovascular y el dolor.
La patente de Estados Unidos núm. 6,117,841 se refiere a bloqueadores de canales de calcio y su uso en el tratamiento de la enfermedad cerebrovascular, la isquemia cerebral, el dolor, traumatismo craneoencefálico o epilepsia.
La patente de Estados Unidos núm. 6,362,174 se refiere a bloqueadores de canales de calcio tipo N en el tratamiento de enfermedad cerebrovascular, isquemia cerebral, dolor, epilepsia y traumatismo craneoencefálico.
La patente de Estados Unidos núm. 6,420,383 y la patente de Estados Unidos núm. 6,472,530 se refieren a novedosos bloqueadores de canales de calcio, útiles para tratar y prevenir una serie de trastornos tales como hipersensibilidad, alergia, asma, broncoespasmo, dismenorrea, espasmo esofágico, glaucoma, trabajo de parto prematuro, trastornos del tracto urinario, trastornos de la motilidad gastrointestinal y trastornos cardiovasculares.
La patente de Estados Unidos núm. 6,458,781 se refiere a compuestos que actúan para bloquear los canales de calcio y su uso en el tratamiento de la enfermedad cerebrovascular, la isquemia cerebral, el dolor, el traumatismo craneoencefálico o la epilepsia.
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La patente de Estados Unidos núm. 6,521,647 se refiere al uso de bloqueadores de los canales de calcio en el tratamiento de la enfermedad renal en animales, especialmente insuficiencia renal crónica.
El documento WO 97/10210 se refiere a derivados tricíclicos heterocíclicos, y su uso en la terapia, en particular como antagonistas de canales de calcio, p. ej., para el tratamiento de la isquemia, en particular la enfermedad cerebrovascular isquémica.
El documento WO 03/018561 se refiere a compuestos de quinolina como antagonistas de canales de calcio tipo N y métodos para usar tales compuestos en el tratamiento o prevención del dolor o nocicepción.
La monoamina oxidasa (MAO) es una enzima presente en la membrana externa de la mitocondria de células neuronales y no neuronales. Existen dos isoformas de la MAO: MAO-A y MAO-B. Las enzimas MAO son responsables de la desaminación oxidativa de aminas endógenas y xenobióticas, y tienen diferencias en la preferencia por el sustrato, la especificidad de inhibidores, y la distribución tisular. La serotonina, la noradrenalina y la adrenalina son sustratos preferidos por la MAO-A, y la clorgilina es un inhibidor selectivo de la MAO-A; mientras que la MAO-B prefiere p- feniletilamina como un sustrato, y se inhibe con selegilina. La dopamina, la tiramina y la triptamina se oxidan por la MAO-A y la MAO-B, en particular en el cerebro humano la dopamina se desamina en un 80 % por la MAO-B.
La inhibición de la MAO permite que los sustratos endógenos y exógenos se acumulen y, de ese modo, cuando se inhibe casi totalmente (>90 %), puede alterar la dinámica de los transmisores de monoamina regulares. La MAO regula las concentraciones en el cerebro de los neurotransmisores más importantes tales como noradrenalina, serotonina y dopamina que se relacionan con la emoción, la ansiedad y el movimiento. Así, se cree que la MAO está estrechamente implicada en varios trastornos psiquiátricos y neurológicos tales como depresión, ansiedad y enfermedad de Parkinson (PD).
Los inhibidores de la MAO-A se usan fundamentalmente en psiquiatría para el tratamiento del trastorno depresivo mayor, refractario y atípico debido a su capacidad para aumentar los niveles cerebrales reducidos de serotonina y noradrenalina. Más recientemente, los inhibidores de la MAO-A se han usado para tratar pacientes con trastornos de ansiedad tales como fobia social, trastornos de pánico, trastornos de estrés postraumático y trastornos obsesivos compulsivos.
Los inhibidores de la MAO-B se usan fundamentalmente en neurología para el tratamiento de PD.
También existe evidencia reciente e interés en el rol de la MAO-B en otras afecciones patológicas tales como enfermedad de Alzheimer (AD). Hasta el momento no se tiene evidencia sobre la participación de la MAO-B en el metabolismo de los co-transmisores, tales como colecistoquinina, sustancia P, somatostatina y neurotensina, que participan en la modulación de la sensación de dolor. Por esta razón no existe un fundamento científico para el uso de los inhibidores de la MAO-B en los síndromes de dolor. Se han informado reacciones adversas a los fármacos durante la práctica clínica con inhibidores de MAO. La primera generación de los inhibidores de MAO no selectivos e irreversibles, tales como tranilcipromina y fenelzina, tienen efectos secundarios graves, que incluyen hepatotoxicidad, hipotensión ortostática y, más importante aún, crisis hipertensivas que se producen después de la ingestión de alimentos que contienen tiramina (Cooper AJ.- Tyramine and irreversible monoamine oxidase inhibitors in clinical practice.- Br J Psych Suppl 1989:38-45).
Cuando se usan estos inhibidores de MAO no selectivos e irreversibles, debe seguirse una estricta dieta reducida en tiramina. La sensibilidad presora hacia la tiramina se normaliza 4 semanas después del cese de la terapia con tranilcipromina y más de 11 semanas después del cese de la terapia con fenelzina.
La selegilina, un inhibidor irreversible de MAO-B, especialmente cuando se usa en combinación con levodopa, puede causar anorexia/náuseas, sequedad de la boca, discinesia e hipotensión ortostática en pacientes con PD, siendo esto último lo más problemático (Volz H.P. y Gleiter C.H.- Monoamine oxidase inhibitors. A perspective on their use in the elderly.- Drugs Aging 13 (1998), pp. 341-355).
Como monoterapia, la anorexia/náuseas, las lesiones musculoesqueléticas y las arritmias cardíacas se produjeron con mayor frecuencia en los pacientes que recibieron selegilina en comparación con los que recibieron placebo. Además de estos efectos adversos, se observó un aumento en las tasas de los niveles de AST y ALT en suero.
El efecto adverso informado con mayor frecuencia para la moclobemida, un inhibidor selectivo y reversible de la MAO-A, son trastornos del sueño, aumento de la ansiedad, inquietud y cefalea.
La combinación de inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (SSRI) y moclobemida tiene buena eficacia en casos de depresión refractaria, pero ha generado controversia sobre si los efectos secundarios tóxicos, como el síndrome serotoninérgico, resultan de esta combinación (Baumann P.- Pharmacokinetic-pharmacodynamic relationship of the selective serotonin reuptake inhibitors. Clin Pharmacokinet 31 (1996), pp 444-469). Debido a las arritmias cardíacas y el aumento de los niveles de enzimas hepáticas, el electrocardiograma y los valores de laboratorio deben controlarse regularmente. Muchos tipos de los cambios fisiológicos que ocurren con el envejecimiento afectan la farmacodinamia y la farmacocinética de los inhibidores de la MAO. De hecho, las variables farmacocinéticas en los ancianos son marcadamente diferentes de las de los pacientes más jóvenes. Estas variables, que incluyen la absorción,
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la distribución, el metabolismo y la excreción, deben tenerse en cuenta para evitar o minimizar ciertos efectos adversos y las interacciones medicamentosas. Los pacientes ancianos generalmente son más susceptibles a los efectos secundarios que los pacientes más jóvenes, incluidas las reacciones adversas a medicamentos. La crisis hipertensiva puede ocurrir con mayor frecuencia en los ancianos que en los pacientes más jóvenes, porque los sistemas cardiovasculares de los ancianos ya están comprometidos por la edad.
El uso de fármacos simpaticomiméticos en combinación con inhibidores de MAO también puede elevar la presión sanguínea. Además, en comparación con el placebo, la fenelzina se asoció con una incidencia significativamente mayor de somnolencia, temblor, discinesia, diarrea, dificultades para la micción, efectos ortostáticos, y efectos dermatológicos adversos. Es interesante señalar que en el anciano, el cefalea se informa con una mayor frecuencia que en pacientes más jóvenes durante el tratamiento con moclobemida (Volz H.P. y Gleiter C.H.- Monoamine oxidase inhibitors. A perspective on their use in the elderly. Drugs Aging 13 (1998), pp. 341-355).
Los inhibidores de MAO (preferentemente de la MAO-A, pero también de MAO-A/MAO-B no selectivos) a veces se prescriben para la depresión. Debido al riesgo potencial de suicidio, las reacciones adversas a los medicamentos y la toxicidad debido a sobredosis, estos son factores importantes a considerar cuando se elige un antidepresivo. Además, cuando los inhibidores de MAO se usan en dosis altas, los efectos cardiovasculares adversos parecen aumentar considerablemente; y dado que la selectividad a la MAO se pierde con tales dosis altas, la tiramina puede inducir reacciones hipertensivas potencialmente peligrosas. Una sobredosis aguda con inhibidores de MAO provoca agitación, alucinaciones, hiperpirexia, hiperreflexia y convulsiones. Una presión sanguínea anormal también es un signo tóxico, de manera que puede requerirse un lavado gástrico y mantenimiento de la función cardiopulmonar. Las sobredosis de inhibidores de MAO no selectivos e irreversibles tradicionales son muy peligrosas y a veces fatales (Yamada y Richelson, 1996. Pharmacology of antidepressants in the elderly. En: David JR, Snyder L., editors. Handbook of pharmacology of aging. Boca Raton: CRC Press 1996).
En el tratamiento de las afecciones donde el o los mecanismos de los canales de sodio y calcio juegan un rol patológico, la inhibición de las enzimas MAO no produce beneficios. Además los efectos secundarios de la inhibición de la MAO pueden imponer al menos dos tipos de limitaciones negativas:
1) Dietética: comer alimentos con alto contenido de tiramina puede provocar un aumento grave, incluso mortal de la presión sanguínea sistémica (el denominado “efecto del queso”).
2) Farmacológica: como un ejemplo, el dolor frecuentemente se trata con una combinación de fármacos tales como derivados opioides y antidepresivo tricíclico. Con los inhibidores de MAO tal asociación es peligrosa ya que puede provocar el síndrome serotoninérgico (agitación, temblores, alucinación, hipertermia y arritmias).
Por lo tanto, la eliminación o disminución significativa de la actividad inhibidora de la MAO en medicamentos activos como moduladores de canales de calcio y/o sodio útiles para prevenir, mejorar y curar una amplia variedad de patologías donde dicho(s) mecanismo(s) juega(n) un rol patológico, que incluyen enfermedades neurológicas, psiquiátricas, inflamatorias, urogenitales y gastrointestinales, es un mejoramiento terapéutico inesperado y sustancial frente a los compuestos de eficacia similar pero con los efectos secundarios mencionados anteriormente.
Tomando en cuenta estos hallazgos relacionados con los inhibidores de MAO y, en particular, la falta de evidencia sobre el rol de la MAO-B en afecciones patológicas como dolor, migraña, enfermedades inflamatorias, urogenitales y gastrointestinales, pudiera ser concebible que la inhibición de MAO-B no debe ser una característica esencial para los compuestos indicados para las patologías anteriores, lo que evita cualquier posible efecto secundario durante los tratamientos crónicos y/o a largo plazo.
Una solución ventajosa al problema descrito anteriormente consistiría en proporcionar medicamentos que sean “activos selectivamente como moduladores de sodio y/o calcio” o sean útiles para el “tratamiento selectivo” de afecciones, trastornos o enfermedades en donde el o los mecanismos de los canales de sodio y/o calcio juegan un rol patológico. Con esta expresión se incluyen medicamentos que, cuando se administran a un paciente con necesidad de estos en cantidades que son eficaces en el tratamiento de dichas afecciones anteriores en donde el o los mecanismos anteriores juegan un rol patológico, no exhiben ninguna actividad inhibidora de la MAO o exhiben una actividad inhibidora de MAO significativamente reducida, lo que da como resultado, por lo tanto, lograr evitar los efectos secundarios debidos a una acumulación de transmisores de monoaminas endógenas y exógenas.
Un objetivo primario de esta invención es el uso de derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida para la fabricación de un medicamento activo como modulador de canales de sodio y/o calcio para el tratamiento de patologías donde el o los mecanismos anteriores juegan un rol patológico, que es un trastorno neurológico, cognitivo, psiquiátrico, inflamatorio, urogenital o gastrointestinal, en donde dichos medicamentos están sustancialmente libres de cualquier actividad inhibidora de MAO o tienen una actividad inhibidora de MAO significativamente reducida y por lo tanto, tienen una reducción del potencial de efectos secundarios no deseados. En consecuencia, un objetivo principal de esta invención es proporcionar derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida para usar como medicamentos para el tratamiento de las patologías descritas anteriormente, caracterizado porque dichos medicamentos están sustancialmente libres de cualquier actividad inhibidora de MAO o presentan una actividad inhibidora de MAO significativamente reducida y por lo tanto, tienen una reducción del potencial de efectos secundarios no deseados. Dicho uso proporciona un recurso selectivo mejorado para la prevención, alivio y/o cura de dichas afecciones patológicas anteriores, en particular, en
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pacientes que son particularmente sensibles a los efectos secundarios no deseados debido a una actividad inhibidora de la MAO, tal como los descritos anteriormente en este documento.
Los trastornos neurológicos mencionados anteriormente incluyen dolor de tipo crónico y agudo, en particular dolor neuropático e inflamatorio, cefaleas, migraña, espasmos; trastornos neurodegenerativos tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, epilepsia, síndrome de las piernas inquietas, enfermedad cerebrovascular e isquemia cerebral; trastornos cognitivos tales como deterioro cognitivo leve (MCI) y trastornos psiquiátricos que incluyen depresión, trastornos bipolares, manía, esquizofrenia, psicosis, ansiedad y adicción. Los trastornos inflamatorios mencionados anteriormente incluyen procesos inflamatorios que afectan todos los sistemas corporales, p. ej., procesos inflamatorios del sistema músculo-esquelético, afecciones artríticas, trastornos que afectan la piel y tejidos relacionados; trastornos del sistema respiratorio así como también trastornos del sistema inmunitario y endocrino. A continuación se brinda una explicación más detallada de todas las patologías mencionadas anteriormente.
Descripción de la invención
El objeto de esta solicitud es una nueva clase de derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida muy potentes como moduladores de canales de calcio y/o sodio y sustancialmente libres de cualquier actividad inhibidora de MAO o con una actividad inhibidora de MAO significativamente reducida y, así, tienen efectos secundarios potencialmente reducidos para prevenir, mejorar y curar una amplia variedad de patologías, que incluyen pero sin limitarse a enfermedades neurológicas, cognitivas, psiquiátricas, inflamatorias, urogenitales y gastrointestinales donde se han descrito que los mecanismos anteriores juegan un rol patológico.
En esta descripción y en las reivindicaciones, la expresión “modulador(es) de canales de sodio y/o calcio” se refiere a compuestos capaces de bloquear las corrientes de sodio y/o calcio en una manera dependiente del voltaje.
Por lo tanto, un objeto de la presente invención es un compuesto de la Fórmula general (I)
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en donde:
X es -O-, -S- o -SO2-;
Y es hidrógeno, OH u O(Ci-C4)alquilo;
Z es =Oo =S;
R es (C3-Cio)alquilo; 00- trifluoro(C3-Cio)alquilo;
R1 y R2 son, independientemente, hidrógeno, hidroxi, (Ci-C8)alcoxi, (C1-C8) alquiltio, halo, trifluorometilo o 2,2,2- trifluoroetilo; o uno de Riy R2 está en la posición orto respecto a R-X- y, en conjunto con el mismo R-X-, representa un
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grupo donde Ro es (C2-Cg)alquilo;
R3 y R'3 son, independientemente, hidrógeno o (Ci-C4)alquilo;
R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno, (Ci-C4)alquilo; o R4 es hidrógeno y R5 es un grupo seleccionado de -CH2- OH, -CH2-O-(Ci-C6)alquilo, -CH(CH3)-OH, -(CH2)2-S-CH3, bencilo y 4-hidroxibencilo; o R4y R5, en conjunto con el átomo de carbono adyacente, forman un residuo (C3-C6)cicloalquilo;
R6 y R7 son independientemente hidrógeno o (Ci-C6)alquilo; o en conjunto con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O-, -S- y -NR8- donde R8 es hidrógeno o (Ci-C6) alquilo; con la condición de que cuando X es -S- o -SO2-, entonces Y no es OH u O(Ci-C4) alquilo;
si es el caso, ya sea como isómero óptico único en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Aunque algunos de los compuestos descritos específicamente en esta solicitud caen dentro de la fórmula general del documento WO 90/i4334, ninguno de ellos se ha descrito específicamente en dicha solicitud. Ninguno de los compuestos definidos por la fórmula general (I) de esta solicitud se describe o menciona específicamente en el documento WO 90/i4334. De hecho solo pocos derivados de 2-(2-feniletilamino)alcanoamida se identifican en dicho documento anterior que, sin embargo, tienen un sustituyente benciloxi, bencilamino o bencilo en la posición 4 de la porción fenilo. Además, las siguientes clases seleccionadas de los compuestos de fórmula (I) de esta solicitud no caen dentro de la fórmula general del documento WO 90/i4334:
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a) compuestos donde X es -SO2-;
b) compuestos donde Y es OH u O(Ci-C4)alquilo;
c) compuestos donde Z es =S;
d) compuestos donde R es (Cg-Cio)alquilo o w- trifluoro(C3-Cio)alquilo;
e) compuestos donde Ri y/o R2 son diferentes de hidrógeno;
f) compuestos donde R3 y R'3 son diferentes de hidrógeno
g) compuestos donde R4 y R5 son diferentes de hidrógeno, pero no forman un residuo (C3-C6)cicloalquilo cuando se consideran en conjunto con el átomo de carbono adyacente;
h) compuestos donde R6 y R7, en conjunto con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O-, -S- y -NR8-, donde R8 es hidrógeno o (C1-C6) alquilo.
El término “alquilo” usado en esta descripción y en las reivindicaciones, donde no se especifique de cualquier otra manera, identifica un radical alquilo lineal o ramificado; ejemplos de dichos radicales o motivos incluyen: metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, pentilo, isopentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo y sus isómeros.
El término “alcoxi” usado en esta descripción y en las reivindicaciones identifica un radical alcoxi lineal o ramificado; ejemplos de dichos radicales incluyen: metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, terc-butoxi, pentiloxi, isopentiloxi, hexiloxi, isohexiloxi, heptiloxi, octiloxi y sus isómeros.
El término “(C3-C6)cicloalquilo” identifica un anillo cicloalifático; ejemplos de dichos anillos incluyen: ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo.
El término “halo” se refiere a un radical de un átomo de halógeno tal como flúor, cloro, bromo y yodo. Los ejemplos de heterociclos saturados monocíclicos de 5 o 6 miembros, que contienen opcionalmente un heteroátomo adicional, escogido entre -O-, -S- o -NR8-, donde R8 es hidrógeno o (C1-C6) alquilo son, por ejemplo, pirrolidina, pirazolidina, imidazolidina, oxazolidina, isoxazolidina, piperidina, piperazina, N-metilpiperazina, morfolina y tiomorfolina.
Cuando los compuestos de esta invención contienen uno o más átomos de carbono asimétricos y por lo tanto, pueden existir como isómeros ópticos únicos o una mezcla de estos, la invención incluye dentro de su alcance todos los posibles isómeros ópticos únicos, (p. ej., enantiómeros, diastereoisómeros) de dichos compuestos en la forma aislada y las mezclas de estos en cualquier proporción, que incluyen mezclas racémicas.
Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) son sales con ácidos orgánicos e inorgánicos tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, yodídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, acético, propiónico, tartárico, fumárico, cítrico, benzoico, succínico, cinámico, mandélico, salicílico, glicólico, láctico, oxálico, málico, maleico, malónico, fumárico, tartárico, p- toluenosulfónico, metanosulfónico, glutárico y otros ácidos que, por ejemplo, pueden encontrarse en: P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth “Handbook of pharmaceutical salts: properties, selection and use”, WILEY-VCH, 2002.
Los compuestos de fórmula (I) son activos como moduladores de canales de calcio y/o sodio y por lo tanto, son útiles para prevenir, mejorar y curar una amplia variedad de patologías, que incluyen pero sin limitarse a enfermedades neurológicas, cognitivas, psiquiátricas, inflamatorias, urológicas, y gastrointestinales, donde se ha descrito que los mecanismos anteriores juegan un rol patológico.
Los compuestos preferidos de fórmula (I) son los compuestos en donde:
X es -O-, -S-;
Y es hidrógeno, OH u O(Ci-C3)alquilo;
Z es =O o =S;
R es (C4-C7)alquilo o w- trifluoro(C4-C6)alquilo;
Ri y R2 son, independientemente, hidrógeno, (Ci-C4)alcoxi, halo, trifluorometilo o 2,2,2-trifluoroetilo; o uno de Ri y R2 está en posición orto respecto a R-X- y, en conjunto con el mismo R-X-, representan un
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grupo
R3 y R'3 donde Ro es (C2-C5)alquilo; son, independientemente, hidrógeno o (Ci-C3)alquilo;
R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno o (Ci-C4)alquilo; o R4 es hidrógeno y R5 es un grupo seleccionado de - CH2-OH, -CH2-O-(Ci-C3)alquilo, -(CH2)2-S-CH3, bencilo y 4-hidroxibencilo;
R6 y R7 son, independientemente, hidrógeno o (Ci-C4)alquilo; o en conjunto con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O- y -NR8- donde R8 es hidrógeno o (Ci-C3) alquilo;
con la condición de que cuando X es -S-, entonces Y no es OH u O(Ci-C3) alquilo; si es el caso, ya sea como isómeros
ópticos únicos en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos de mayor preferencia de fórmula (I) son los compuestos en donde:
X es -O-, -S-;
Y es hidrógeno u O(Ci-C3)alquilo;
Z es =O o =S;
R es (C4-C7)alquilo o w- trifluoro(C4-C6)alquilo;
Ri y R2 son, independientemente, hidrógeno, (Ci-C3)alcoxi, flúor, cloro, trifluorometilo o 2,2,2-trifluoroetilo; o uno de Ri y R2 está en posición orto respecto a R-X- y en conjunto con el mismo R-X-, representa un
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grupo donde Ro es (C3-C4)alquilo;
R3 y R'3 son, independientemente, hidrógeno o (Ci-C3)alquilo;
R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C4)alquilo; o R4 es hidrógeno y R5 es un grupo seleccionado de - CH2-OH, -CH2-O-(C1-C3)alquilo, bencilo y 4-hidroxibencilo;
R6 y R7 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C3)alquilo; o en conjunto con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O- y -NR8-, donde R8 es hidrógeno o (C1-C3) alquilo; con la condición de que cuando X es -S-, entonces Y no es O(C1-C3) alquilo;
si es el caso, ya sea como isómeros ópticos únicos en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Los compuestos aún con mayor preferencia de fórmula (I) son los compuestos en donde:
X es -O-;
Y es hidrógeno;
Z es =O;
R es (4-C6)alquilo;
R1 y R2 son, independientemente, hidrógeno o halo, preferentemente flúor;
R3, R'3, R4 y R5 son hidrógeno;
R6 y R7 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C3)alquilo;
si es el caso, ya sea como isómeros ópticos únicos en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables;
Con la máxima preferencia, un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con esta invención se selecciona del grupo que consiste en:
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-acetamida
2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-acetamida
2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-acetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butilsulfonilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-(N'-hidroxi)etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-(N'-metoxi)etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-(N'-propoxi)etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetil-tioacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-2-metilpropilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-{2-[3-(4,4,4-Trifluorobutoxi)fenil]-etilamino}-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butiltiofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxi-2-clorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxi-2-fluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxi-4-metoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dietilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dipropilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dibutilacetamida
2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-1-pirrolidin-1 -il-etan-1 -on
2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-1 -pirrolidin-1 -il-etan-1 -ona
2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-1-pirrolidin-1-il-etan-1-ona
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-3-hidroxi-N,N-dimetilpropanamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-3-metoxi-N,N-dimetilpropanamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-3-propoxi-N,N-dimetilpropanamida
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida
2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida
2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida
(S)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-propanamida
(S)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N-metilpropanamida
(S)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
(R)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-propanamida
(R)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N-metilpropanamida
(R)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
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2-[2-(3-Butoxi-2-trifluorometilfenM)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxi-4-trifluorometilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-[2-(3-Butoxi-5-trifluorometilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
si es el caso, ya sea como isómeros ópticos únicos en la forma aislada o mezclas de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables, preferentemente sus sales con ácido clorhídrico o metanosulfónico.
Los compuestos de esta invención se preparan de acuerdo con procedimientos convencionales que se describen en más detalle en la Parte Experimental.
En particular la mayoría de los compuestos de fórmula (I), donde X es -O- y Y es hidrógeno, objeto de la presente invención, se preparan de acuerdo con un proceso sintético mostrado en el siguiente
Esquema I:
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en donde:
R, R1, R2, R3, R'3, R4, R5, R6 y R7 tienen los mismos significados definidos en la fórmula (I) anteriormente, Ph se refiere a un radical fenilo, boc es un grupo ferc-butoxicarbonilo y EWG significa “Grupo de Extracción de Electrones” tal como, por ejemplo, un grupo de halógeno o un mesiloxi o un tosiloxi o a trifluorometanosulfonato. El reactivo de Lawessons es 2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetano-2,4-disulfuro (The Merck Index, 13ra Ed., 5408, página 966).
De acuerdo con una modalidad preferida de la invención las reacciones de alquilación con R-EWG se llevan a cabo en presencia de una base y, con mayor preferencia, dicha base se selecciona de K2CO3, trietilamina y diisopropiletilamina.
Un método alternativo para la preparación de los compuestos de fórmula (I) donde R, R1, R2, R3, R'3, R4, R5, R6y R7 tienen los mismos significados que en la fórmula (I), X es O y Y es hidrógeno consiste en enviar un aldehído de la fórmula
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a una alquilación reductiva con una a-aminoalcanoamida de fórmula
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El agente reductor puede seleccionarse a partir de NaBH4, NaBHaCN y cianoborohidruro de (poliestirilmetil)- trimetilamonio.
Los compuestos 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida resultantes de fórmula (I) en donde Z es =O pueden transformarse en los compuestos correspondientes donde Z es =S mediante la protección del grupo -NH- con boc2O, hacer reaccionar el derivado protegido N-boc con el reactivo de Lawesson, y finalmente desproteger con HCl como se muestra en el Esquema I.
Como otra alternativa a estos métodos, una amina de fórmula
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se alquila por reacción con un áster de un ácido alcanoico de fórmula
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OtC^-CjJalquilo
en presencia de una base (p. ej., trietilamina) y los derivados del áster alcanoico resultantes de fórmula
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se hacen reaccionar con una amina de fórmula HNR6R7, opcionalmente en presencia de un catalizador de la amidación (p. ej., trimetilaluminio), para producir el compuesto de fórmula (I) donde Y es hidrógeno. Los compuestos de fórmula (I) donde Rses hidrógeno, pueden transformarse opcionalmente en los compuestos correspondientes de fórmula (I) en donde R5 es (C-i-C4)alquilo, -CH2OH, -CH2-O-(C-i-C6) alquilo, -CH(CH3)-OH, -(CH2)2-S-CH3, bencilo, o 4-hidroxibencilo al someter un derivado protegido en N del dicho compuesto anterior de fórmula (I) a un procedimiento de C-alquilación con un agente alquilante de fórmula EWGR5 en donde EWG tiene el mismo significado que se explicó anteriormente y R5 representa uno del grupo mencionado anteriormente en este documento. En este caso, cuando se desea un compuesto final de fórmula (I) donde el grupo R5 contiene un motivo hidroxilo, usualmente se emplea un reactivo EWGR5 donde el motivo hidroxilo correspondiente se protege, p. ej., mediante acetilación. Después todos los grupos protectores se eliminan de los compuestos C-alquilados resultantes. Si se desea, cuando un compuesto de fórmula (I) se obtiene en forma de una base libre puede convertirse en una sal de este (p. ej., con ácido clorhídrico) mediante procedimientos comunes.
Los compuestos de fórmula (I), donde X es S o SO2 y Y es hidrógeno se preparan de acuerdo con un proceso sintético mostrado en el siguiente Esquema II:
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en donde
R, Ri, R2, R3, R'3, R4, R5, R6 y R7 tienen los mismos significados como se define en la fórmula (I), boc es un grupo terc- butoxicarbonilo y EWG tiene el mismo significado que se explicó anteriormente, “oxona" representa peroximonosulfato 5 de potasio y el reactivo de Lawessons es 2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3,2,4-ditiadifosfetano-2,4-disulfuro.
Los compuestos de fórmula (I), donde X es -O- y Y es OH u O(C1-C4)alquilo, se preparan de acuerdo con un proceso sintético mostrado en el siguiente Esquema III:
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en donde
R, R1, R2, R3, R'3, R4, R5, Ra y R7 tienen los mismos significados como se define en la fórmula (I), Ph se refiere a un grupo fenilo, y EWG tiene el mismo significado que se explicó anteriormente. Periodinano de Dress-Martin, véase: Dess, D.B.; Martin, J.C. J. Am. Chem. Soc., 1991, 113, 7277.
Los intermediarios usados en los Esquemas I, II y III están disponibles comercialmente o se preparan a partir de compuestos disponibles comercialmente de acuerdo con métodos bien conocidos.
La evaluación de la utilidad de la protección opcional así como también la selección del agente protector adecuado, de acuerdo con la reacción llevada a cabo en la preparación de los compuestos de la invención y el grupo funcional a proteger, están dentro del conocimiento común del experto.
La eliminación de los grupos protectores opcionales se lleva a cabo de acuerdo con técnicas convencionales.
Para una referencia general al uso de grupos protectores en química orgánica véase Theodora W. Greene y Peter G.M. Wuts “Protective groups in organic synthesis”, John Wiley & Sons, Inc., II Ed., 1991.
La preparación de las sales de los compuestos de fórmula (I) se lleva a cabo de acuerdo con métodos conocidos.
Para la preparación de un isómero óptico único de un compuesto de fórmula (I) dicho compuesto puede obtenerse a través de una síntesis controlada estéricamente o mediante el uso de reactivos que tienen la quiralidad adecuada o mediante la separación del isómero deseado de la mezcla enantiomérica de estos, de acuerdo con procedimientos convencionales.
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Farmacología
Los compuestos de la invención pueden usarse para la fabricación de un medicamento activo como modulador de canales de sodio y/o calcio contra trastornos provocados por disfunciones de los canales de sodio y/o calcio dependientes de voltaje.Tales compuestos son bloqueadores dependientes de voltaje de los canales de sodio y/o calcio con potencia en el intervalo micromolar bajo como se demuestra por el bloqueo del influjo de sodio y/o calcio (ensayos de fluorescencia) y por el bloqueo dependiente de voltaje de las corrientes (técnicas de fijación de membranas o patch clamp).
La actividad de los compuestos representativos de esta invención se comparó con la de los compuestos conocidos a partir del documento WO 90/14334, que se han desarrollado en la clínica para aplicaciones terapéuticas tales como “ralfinamida” (S)-(+)-2-[4-(2-fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida y/o “safinamida” (S)-(+)-2-[4-(3-fluorobenciloxi)- bencilamino]-propanamida.
La safinamida (NW-1015, FCE-26743A, PNU-151774E) es un bloqueador de canales de sodio, un modulador de canales de calcio, un inhibidor de la monoamino oxidasa B (MAO-B), una inhibidor de la liberación de glutamato y un modulador del metabolismo de la dopamina.
La safinamida es útil en el tratamiento de trastornos del SNC, en particular de epilepsia, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, síndrome de las piernas inquietas (documentos núms. WO 90/14334, WO 04/089353, WO 05/102300) y trastornos cognitivos (Solicitud Ep núm. 06/012352.8).
La ralfinamida (NW-1029, FCE-26742A, PNU-0154339E) es un inhibidor de canales de sodio y calcio y modulador del receptor de NMDA útil en el tratamiento de afecciones de dolor, que incluyen dolor neuropático e inflamatorio tanto de tipo agudo como crónico, migraña, depresiones, trastornos cardiovasculares, inflamatorios, urogenitales, metabólicos y gastrointestinales (documentos núm. WO 99/35125, WO 03/020273, WO 04/062655, WO 05/018627, WO 05/070405, WO 06/02705).
La actividad moduladora sobre los canales de sodio de los derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida se midió a través de un ensayo de influjo de sodio basado en fluorescencia en la línea celular ND7/23 (Tabla 1) y a través de la técnica electrofisiológica de fijación de membranas en neuronas corticales de rata (Tabla 3) y en la línea celular ND7/23 (Tabla 4) respectivamente.
La actividad moduladora sobre los canales de calcio de los derivados de 2-[2-(fenil)etilamino]alcanoamida se midió a través de un ensayo de influjo de calcio basado en fluorescencia (Tabla 2) en la línea celular AtT20.
La actividad sobre la MAO-B de los compuestos anteriores se midió mediante el uso de un ensayo radioenzimático (Tabla 5) en mitocondrias de cerebro de rata.
La actividad analgésica in vivo de los compuestos anteriores se evaluó en la “prueba con formalina” en ratones (Tabla 6) y en el “modelo de dolor neuropático por ligadura de nervio espinal (SNL)” en ratas (Figura 1). La actividad contra el dolor por inflamación se midió mediante el uso del “modelo del adyuvante completo de Freund (CFA)” en ratas.
La actividad contra el dolor visceral se midió mediante el uso del modelo de “dolor visceral inducido por ácido acético” en ratones (Figura 2).
La actividad anticonvulsiva se midió mediante el uso de la “prueba de electroshock máximo” en ratones (Tabla 7 y Tabla 8).
La actividad anti manía se midió mediante el uso del modelo de “hiperlocomoción inducida por anfetamina y clordiazepóxido en ratones” (Figura 3) y en el modelo de “privación del sueño paradójico” en rata.
La actividad antiamnésica se evaluó mediante el uso de la “prueba del laberinto de agua de Morris” en el cual la amnesia se induce por escopolamina en ratas y en la “prueba de Reconocimiento de objetos nuevos” en ratas.
Para investigar la actividad antidepresiva de los compuestos se usó el modelo de la “prueba de suspensión por la cola” en ratones.
La actividad antiesquizofrénica se evaluó mediante el uso de la “prueba de deterioro cognitivo en esquizofrenia” y la “inhibición del sobresalto por prepulso (PPI)” en ratones y en ratas (Figura 4). La “prueba de sensibilización conductual inducida por cocaína” en ratas se usó para evaluar las actividades anti-adicción de los compuestos.
Las pruebas de “irritación aguda de la vejiga por ácido acético en ratas” e “irritación intermedia de la vejiga por ciclofosfamida en ratas” se usaron como modelos de enfermedades urológicas. La actividad antimigrañosa se midió mediante el uso de la “prueba de migraña” en ratas.
En estudios electrofisiológicos de patch clamp, tales sustancias exhiben además una “dependencia del uso y la frecuencia”, es decir, una potenciación del bloqueo durante una estimulación de alta frecuencia cuando existe una gran acumulación de canales en el estado inactivado, tal como en las afecciones patológicas neuronales. Funcionalmente, el bloqueo dependiente del uso da como resultado una depresión de la actividad neuronal en los disparos con alta frecuencia y una menor capacidad de bloqueo a la velocidad de disparo normal, lo que sugiere que los compuestos de esta invención pueden deprimir selectivamente la actividad anormal de los canales de sodio y/o calcio, sin afectar la actividad fisiológica, teniendo así efectos depresores del SNC limitados (W. A. Catterall, Trends Pharmacol. Sci. (1987) 8: 57-65).
Uno de los compuestos más representativos de esta invención es clorhidrato de 2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N- dimetilacetamida (NW-3509) que se observó muy activo en casi todos los modelos experimentales in vitro e in vivo.
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Los compuestos de la invención son activos in vivo cuando se administran por vía oral, intraperitoneal o intravenosa en el intervalo de 0.1 a 100 mg/kg en diferentes modelos animales descritos a continuación.
En vista de los mecanismos de acción descritos anteriormente, los compuestos de la presente invención son útiles en la prevención o el tratamiento del dolor neuropático. Los síndromes de dolor neuropático incluyen, y no se limitan a: neuropatía diabética; ciatalgia; dolor lumbar no específico; dolor por esclerosis múltiple; fibromialgia; neuropatía relacionada con el VIH; neuralgia, tal como neuralgia pos-herpética y neuralgia del trigémino, neuralgia de Morton, causalgia; y dolor resultante de trauma físico, amputación, miembro fantasma, cáncer, toxinas o afecciones inflamatorias crónicas; dolor central como el que se observa en los síndromes talámicos, formas mixtas centrales y periféricas de dolor, como los síndromes de dolor regional complejo (CRPS) también denominados distrofias simpáticas reflejas.
Los compuestos de la invención también son útiles para el tratamiento del dolor crónico. El dolor crónico incluye, y no se limita a, dolor crónico provocado por inflamación o una afección relacionada con la inflamación, osteoartritis, artritis reumatoide, daño o trauma agudo, dolor de espalda superior o dolor de espalda inferior (resultado de enfermedad de la columna vertebral sistemática, regional o primaria tal como radiculopatía), dolor de huesos (debido a la osteoartritis, osteoporosis, metástasis óseas o razones desconocidas), dolor pélvico, dolor asociado a lesiones de la médula espinal, dolor de pecho cardíaco, dolor de pecho no cardíaco, dolor central posterior a una enfermedad cerebrovascular, dolor miofascial, dolor por células falciformes, dolor por cáncer, enfermedad de Fabry, dolor por SIDA, dolor geriátrico o dolor provocado por cefalea, síndrome de la articulación temporomandibular, gota, fibrosis o síndromes del opérculo torácico, en particular artritis reumatoide y osteoartritis.
Los compuestos de la invención también son útiles en el tratamiento del dolor agudo (provocado por daño agudo, enfermedad, lesiones de medicina deportiva, síndrome del túnel carpiano, quemaduras, esguinces y torceduras musculoesqueléticas, tensión musculotendinosa, síndromes de dolor cervicobraquial, dispepsia, úlcera gástrica, úlcera duodenal, dismenorrea, endometriosis o cirugía (tal como cirugía a corazón abierto o derivación), dolor posoperatorio, dolor por cálculo renal, dolor de vesícula biliar, dolor por cálculo biliar, dolor obstétrico o dolor dental.
Los compuestos de la invención son útiles además en el tratamiento de cefaleas, migraña, cefalea tensional, migraña transformada o cefalea evolutiva, cefalea en racimos, así como también trastornos de cefalea secundarios, tales como los derivados de infecciones, trastornos metabólicos u otras enfermedades sistémicas y otras cefaleas agudas y hemicranía paroxística, que resulta de un empeoramiento de las cefaleas primarias y secundarias mencionadas anteriormente.
Los compuestos de la invención son útiles, además, para el tratamiento de afecciones neurológicas tales como epilepsia que incluye convulsiones parciales simples, convulsiones parciales complejas, convulsiones generalizadas secundarias, que incluyen además crisis de ausencia, convulsiones mioclónicas, convulsiones clónicas, convulsiones tónicas, convulsiones tónico clónicas y crisis de atonía. Los compuestos de la invención son útiles, además, para el tratamiento de trastornos neurodegenerativos de diversos orígenes que incluyen enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y otras afecciones de demencia tales como cuerpos de Lewys, demencia fronto-temporal y tauopatías; esclerosis lateral amiotrófica y otros síndromes parkinsonianos; otras de degeneración espino cerebelar y neuropatía de Charcot-Marie-Toot, daño cerebral traumático, enfermedad cerebrovascular e isquemia cerebral.
Los compuestos de la invención son útiles, además, para el tratamiento de trastornos cognitivos y de trastornos psiquiátricos. Los ejemplos de trastornos cognitivos son deterioro cognitivo leve (MCI) y los asociados al autismo, dislexia, trastornos de hiperactividad con déficit de la atención, esquizofrenia, trastornos obsesivos compulsivos, psicosis, trastornos bipolares, depresión, síndrome de Tourette, y trastornos del aprendizaje en niños, adolescentes y adultos, deterioro de la memoria asociado a la edad, deterioro cognitivo asociado a la edad, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, síndrome de Down, daño cerebral traumático, enfermedad de Huntington, parálisis supranuclear progresiva (PSP), VIH, enfermedad cerebrovascular, enfermedades vasculares, enfermedad de Pick o Creutzfeldt-Jacob, esclerosis múltiple (MS) y otros trastornos de la materia blanca y deterioro cognitivo inducido por medicamentos. Los trastornos psiquiátricos incluyen, y no se limitan a depresión mayor, apatía, distimia, manía, trastorno bipolar (tal como trastorno bipolar tipo I, trastorno bipolar tipo II), trastorno ciclotímico, ciclado rápido, ciclado ultrarrápido, manía, hipomanía, esquizofrenia, trastornos esquizofreniformes, trastornos esquizoafectivos, trastornos de la personalidad, trastornos de la atención con o sin comportamiento hiperactivo, trastornos delirantes, trastornos psicóticos breves, trastornos psicóticos compartidos, trastorno psicótico debido a una afección médica general, trastornos psicóticos inducidos por sustancias o un trastorno psicótico no especificado, trastornos de la ansiedad tales como trastorno de ansiedad generalizada, trastornos de pánico, trastorno de estrés postraumático, trastornos del control de impulsos, trastornos fóbicos, estados disociativos y además en adicción al tabaco y a las drogas y alcoholismo. En particular trastornos bipolares, esquizofrenia, psicosis, ansiedad y adicción.
Los compuestos de la invención inhiben procesos inflamatorios que afectan todos los sistemas corporales. Por lo tanto son útiles en el tratamiento de procesos inflamatorios del sistema musculoesquelético de los cuales la siguiente es una lista de ejemplos, pero no es exhaustiva de todos los trastornos objetivo: afecciones artríticas tales como espondilitis alquilosante, artritis cervical, fibromialgia, intestino, artritis reumatoide juvenil, artritis lumbosacra, osteoartritis, osteoporosis, artritis psoriásica, enfermedad reumática; trastornos que afectan la piel y los tejidos relacionados: eczema,
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psoriasis, dermatitis y afecciones inflamatorias tales como quemaduras solares; trastornos del sistema respiratorio: asma, rinitis alérgica y síndrome de dificultad respiratoria, trastornos pulmonares en los que está implicada la inflamación, tales como asma y bronquitis; enfermedad pulmonar obstructiva crónica; trastornos de los sistemas inmunitario y endocrino: periartritis nodosa, tiroiditis, anemia aplástica, esclerodoma, miastenia grave, esclerosis múltiple y otros trastornos desmielinizantes, encefalomielitis, sarcoidosis, síndrome nefrítico, síndrome de Bechet, polimiositis, gingivitis.
Los compuestos de la invención son útiles, además, en el tratamiento de trastornos del tracto gastrointestinal (GI) tales como trastornos inflamatorios intestinales que incluyen pero sin limitarse a colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, ileítis, proctitis, enfermedad celíaca, enteropatías, colitis microscópica o colágena, gastroenteritis eosinofílica, o reservoritis resultante después de proctocolectomía y anastomosis post ileonatal, y síndrome del intestino irritable que incluye cualquier trastorno asociado con dolor abdominal y/o malestar abdominal como piloroespasmo, indigestión nerviosa, colon espástico, colitis espástica, intestino espástico, neurosis intestinal, colitis funcional, colitis mucosa, colitis por uso de laxantes y dispepsia funcional; pero además para el tratamiento de gastritis atrófica, gastritis varialoforme, colitis ulcerativa, ulceración péptica, pirexia y otros daños en el tracto GI, por ejemplo, por Helicobacter pylori, enfermedad de reflujo gastroesofágico, gastroparesia, tal como gastroparesia diabética; y otros trastornos intestinales funcionales, tales como dispepsia no ulcerosa (NUD); vómitos, diarrea e inflamación visceral. Los compuestos de la invención son útiles, además, en el tratamiento de trastornos del tracto genitourinario tales como vejiga hiperactiva, prostatitis (prostatitis crónica bacteriana y crónica no bacteriana), síndrome de vejiga dolorosa, cistitis intersticial, incontinencia urinaria e hiperplasia prostática benigna, anexitis, inflamación pélvica, bartolinitis y vaginitis. En particular vejiga hiperactiva e incontinencia urinaria.
Se apreciará que los compuestos de la invención pueden usarse ventajosamente junto con uno o más de otros agentes terapéuticos. Los ejemplos de agentes adecuados para la terapia adyuvante incluyen un modulador del receptor de serotonina que incluye un agonista de 5HTIB/ID, tal como un triptán (p. ej., sumatriptán o naratriptán); un agonista de adenosina A1; un antagonista de adenosina A2; un antagonista de P2X purinérgico, un ligando de EP; un modulador de NMDA, tal como un antagonista de glicina; un modulador de AMPA; un antagonista de la sustancia P (p. ej., un antagonista de NK1); un cannabinoide; un agonista del receptor nicotínico; un agonista adrenérgico alfa 1 o 2; acetaminofén o fenacetina; un inhibidor de la 5-lipoxigenasa; un antagonista del receptor de leucotrieno; un DMARD (p. ej., metotrexato); gabapentina, pregabalina y compuestos relacionados; agonistas de L-dopa y/o dopamina; un inhibidor de la catecol-O-metiltransferasa; un antidepresivo tricíclico (p. ej., amitriptilina); fármacos antiepilépticos estabilizantes neuronales; un inhibidor de la captación monoaminérgica (p. ej., venlafaxina); un inhibidor de metaloproteinasas de la matriz; un inhibidor de la óxido nítrico sintasa (NOS), tal como un inhibidor de iNOS o nNOS; un limpiador de radicales libres; un inhibidor de la agregación de alfa-sinucleína; un inhibidor de la colinesterasa, un agente que disminuye el colesterol; un modulador de alfa-secretasa; un modulador de beta-secretasa; un inhibidor de la agregación de beta- amiloide; un inhibidor de la liberación, o de la acción, del factor de necrosis tumoral alfa; una terapia con anticuerpos, tal como terapia con anticuerpo monoclonal; un agente antiviral, tal como un inhibidor de nucleósidos (p. ej., lamivudina) o un modulador del sistema inmunitario (p. ej., interferón); un analgésico opioide, tal como morfina; un agonista y antagonista del receptor vanilloide; un analgésico, tal como un inhibidor de la ciclooxigenasa-1 y/o ciclooxigenasa-2; un anestésico local tal como lidocaína y derivados; un estimulante, que incluye cafeína; un antagonista de H2 (p. ej., ranitidina); un inhibidor de la bomba de protones (p. ej., omeprazol); un antiácido (p. ej., hidróxido de aluminio o magnesio; un antiflatulento (p. ej., simeticona); un descongestionante (p. ej., fenilefrina, fenilpropanolamina, pseudoefedrina, oximetazolina, epinefrina, nafazolina, xilometazolina, propilhexedrina o levodesoxefedrina, nafazolina, xilometazolina, propilhexedrina o levo-desoxiefedrina); antitusivo (p. ej., codeína, hidrocodona, carmifeno, carbetapentano o dextrametorfano), un diurético o un antihistamínico sedante o no sedante, un agente antipsicótico, incluidos antipsicóticos típicos y atípicos (p. ej., haloperidol, risperidona, clozapina); un antidepresivo, tal como inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina, inhibidores de la recaptación de serotonina y noradrenalina, inhibidores de MAO y fármacos antidepresivos tricíclicos; un estabilizador del estado de ánimo (p. ej., litio, lamotrigina, valproato); un agente ansiolítico (p. ej., benzodiazepinas, buspirona, antagonistas de receptores beta-adrenérgicos); morfina o derivados de morfina; otros bloqueadores de canales de calcio o sodio.
Debe entenderse que la presente invención cubre el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de este en combinación con uno o más agentes terapéuticos.
Los compuestos de la presente invención son útiles en medicamentos para uso humano y veterinario. Debe entenderse que como se usa en la presente invención los términos “tratamiento” o “tratar” donde quiera que no se defina específicamente de cualquier otra manera, incluyen prevención, alivio y cura de una afección patológica, en particular, incluyen tanto el tratamiento de síntomas establecidos como tratamiento profiláctico. Los compuestos de la presente invención para su uso terapéutico o preventivo en las patologías mencionadas anteriormente se usarán preferentemente como ingredientes activos en una composición farmacéutica.
Por lo tanto, otro objeto de la presente invención son composiciones farmacéuticas que contienen una cantidad con eficacia terapéutica de un compuesto de la invención o una sal de este y una mezcla con un portador farmacéuticamente aceptable.
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En consecuencia, la expresión “con eficacia terapéutica” cuando se refiere a una “cantidad”, una “dosis” o “dosificación” de los compuestos de esta invención está destinada a incluir una “cantidad”, una “dosis” o “dosificación” de cualquiera de dichos compuestos que sea suficiente para usar en el tratamiento de los síntomas establecidos y en el tratamiento profiláctico de dichas afecciones patológicas anteriores.
Las composiciones farmacéuticas objeto de la presente invención pueden administrarse en una variedad de formas de dosificación con liberación inmediata y modificada, p. ej., por vía oral, en la forma de tabletas, pastillas para chupar, cápsulas, tabletas recubiertas con película o azúcar, soluciones líquidas, emulsiones o suspensiones; por vía rectal, en la forma de supositorios; por vía parenteral, p. ej., mediante formulaciones intramusculares y/o de depósito; inyección intravenosa o infusión; por vía local y transdérmica en forma de parche y gel y crema.
Los materiales portadores farmacéuticamente aceptables, terapéuticamente inertes, orgánicos y/o inorgánicos, adecuados y útiles en la preparación de dicha composición incluyen, por ejemplo, agua, gelatina, goma arábiga, lactosa, almidón, celulosa, estearato de magnesio, talco, aceites vegetales, ciclodextrinas, y polialquilenglicoles.
La composición que comprende los derivados de feniletilamino de fórmula (I) como se definió anteriormente puede esterilizarse y puede contener además componentes muy conocidos, tales como, por ejemplo, conservantes, estabilizadores, agentes humectantes o emulsionantes, p. ej., aceite de parafina, monooleato de mannida, sales para ajustar la presión osmótica y tampones.
Por ejemplo, las formas orales sólidas pueden contener, junto con el ingrediente activo, diluyentes, por ejemplo, lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, p. ej., sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o calcio y/o polietilenglicoles; agentes aglutinantes, p. ej., almidones, gomas arábicas, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinil pirrolidona; agentes de desintegración, p. ej., almidón, ácido algínico, alginatos o glicolato de almidón sódico; mezclas efervescentes; materias colorantes; edulcorantes; agentes humectantes tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas utilizadas en formulaciones farmacéuticas. Dichas preparaciones farmacéuticas pueden fabricarse de manera conocida, por ejemplo, por medio de procesos de mezcla, granulación, formación de tabletas, recubrimiento con azúcar o recubrimiento con película.
La preparación de las composiciones farmacéuticas objeto de la invención puede realizarse de acuerdo con técnicas comunes.
Las formulaciones orales comprenden formulaciones de liberación sostenida que pueden prepararse de manera convencional, por ejemplo, mediante la aplicación de un recubrimiento entérico a las tabletas y gránulos.
La dispersión líquida para la administración oral puede ser, por ejemplo, jarabes, emulsiones y suspensiones. Como ejemplo, los jarabes pueden contener, como portador, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y sorbitol.
Las suspensiones y las emulsiones pueden contener, como ejemplos de portadores, goma natural, agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o alcohol polivinílico. Las suspensiones o soluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el compuesto activo, un portador farmacéuticamente aceptable, p. ej., agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, p. ej., propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de clorhidrato de lidocaína. Las soluciones para inyecciones o infusiones intravenosas pueden contener como portador, por ejemplo, agua estéril o, preferentemente, pueden tener la forma de soluciones salinas estériles acuosas, isotónicas.
Los supositorios pueden contener, junto con el ingrediente activo, un portador farmacéuticamente aceptable, p. ej., manteca de cacao, polietilenglicol, un surfactante de éster de ácido graso de polioxietilen sorbitán o lecitina.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden los derivados de feniletilamino de fórmula (I) como se definió anteriormente contendrán, por unidad de dosificación, p. ej., cápsula, tableta, inyección en polvo, cucharadita y supositorio de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 500 mg de uno o más ingredientes activos, con mayor preferencia de 1 a 10 mg.
Las dosis óptimas con eficacia terapéutica a administrar pueden determinarse fácilmente por los expertos en la materia y variarán, básicamente, con la fuerza de la preparación, con el modo de administración y con el avance de la afección o trastorno a tratar. Además, los factores asociados con el sujeto particular que se trata, que incluyen edad, peso, dieta del sujeto y tiempo de administración, darán lugar a la necesidad de ajustar la dosis a un nivel terapéuticamente efectivo adecuado.
Parte experimental
Los espectros de1H-NMR se han determinado en solución de CDC^o DMSO-d6 con un espectrómetro Varian Gemini 200 MHz. Los cambios químicos se definen como 6 con CDCh o DMSO-d6 y D2O como patrón interno.
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Los análisis de HPLC/MS se determinan con un instrumento Gilson mediante la utilización de una columna 18 X-Terra RP (5 |jm, 4.6x50 mm) acoplada a un detector de UV (220 nm) y un espectrómetro de masa Finnigan Aqa (electron spray, modo de ionización positivo). Las condiciones utilizadas para el análisis: flujo: 1.2 ml/min; temperatura de la columna: 50 °C; gradiente de elución A/B (eluyente A: ácido fórmico al 0.1 % en agua; eluyente B: ácido fórmico 0.1 % en acetonitrilo): 5-95 % de B de 0 a 8.0 minutos, 95 % de B de 8.0 a 9.5 minutos.
Para ilustrar mejor la invención, se proporcionan ahora los siguientes ejemplos.
Ejemplo 1
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida El compuesto se sintetizó de acuerdo con el Esquema I.
Etapa 1: 2-(3-Hidroxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamina Método A
A una suspensión de clorhidrato de 2-(3-benciloxifenil)-etilamina (12.6 g, 47.7 mmol) en H2O (120 ml) y 1M NaOH (95 ml), se añadió una solución de boc2O (15.6 g, 71.5 mmol) en THF (120 ml) por goteo y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. Después de 16 h el solvente orgánico se eliminó a presión reducida, y la mezcla se extrajo con CH2Cl2 (2x100 ml). Las fases orgánicas recogidas se secaron sobre Na2SO4, la solución se filtró y el solvente se evaporó a presión reducida para dar un aceite crudo que se usó sin purificación adicional.
1H NMR (300 MHz, CDCh): 8 7.47-7.28 (m, 5H), 7.22 (m, 1H), 6.87-6.77 (m, 3H), 5.05 (s, 2H), 4.52 (bs, 1H), 3.38 (dt, J = 6.5 Hz, J = 6.5 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H). ESI+MS: calcd para C20H25NO3: 327.43; encontrado: 328,1 (MH+).
La 2-(3-benziloxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamina obtenida en la Etapa 1 y Pd/C al 10 % (1.3 g) en MeOH (240 ml), se hidrogenó en un aparato Parr durante 16 h a 35 psi. El catalizador se eliminó mediante filtración en celita y el solvente se evaporó a presión reducida. El aceite crudo se usó sin purificación adicional.
1H NMR (300 MHz, CDCla): 8 7.19 (dd, J = 7.8 Hz, J = 7.8 Hz, 1H), 6.82 - 6.66 (m, 3H), 4.56 (bs, 1H), 3.39 (dt, J = 7.0 Hz, J = 6.3 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H). ESI+MS: calcd para C13H19NO3: 237.30; encontrado: 238.2 (MH+).
Método B
Una solución al 33 % de HBr en ácido acético (150 ml) se enfrió a 0 °C y se añadió 3-metoxi fenetilamina (10.0 g, 66.0 mmol) en porciones. La mezcla se calentó a 80 °C y se agitó durante 16 h. El solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se disolvió en agua (160 ml). Se añadió NaOH 4 M (15 ml) seguido por 2 M de NaOH (130 ml). Se añadió una solución de boc2O (15.8 g, 72.6 mmol) en THF (160 ml) por goteo y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La capa orgánica superior de la mezcla resultante se separó y la capa acuosa se extrajo con CH2O2 (3x100 ml). Las soluciones orgánicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y el solvente se evaporó a presión reducida. El compuesto crudo del título (16.8 g) se obtuvo como una goma marrón que se usó en las siguientes etapas sin purificación adicional.
ESI+MS: calcd para C13H19NO3: 237.3; encontrado: 182.1 (MH+-f-butilo, fragmento principal).
Etapa 2: 2-(3-Butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamina
A una solución en acetona (240 ml), de 2-(3-hidroxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamina obtenida en la Etapa 1, se añadieron K2CO3O9.8 g) y 1-bromobutano (15 ml). La suspensión se llevó a reflujo durante 3 días y el solvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en H2O (200 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 200 ml). El solvente se eliminó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía rápida (éter de petróleo/EtOAc 85:15) lo que proporciona 1 (11.3 g, 81 % en 3 etapas) del compuesto del título como un aceite incoloro.
1H NMR (300 MHz, CDCh): 8 7.22 (dd, J = 7.6 Hz, J = 7.6 Hz, 1H), 6.81 -6.72 (m, 3H), 4.55 (bs, 1H), 3.97 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.39 (dt, J = 6.5 Hz, J = 6.5 Hz, 2H), 2.78 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 0.99 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
ESI+MS: calcd para C17H27NO3: 293.41; encontrado: 294.1 (MH+).
Etapa 3: 2-[2-(3-Butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida A una suspensión de NaH (60 %, 2.0 g, 51 mmol) en DMF seco (125 ml) enfriado a 0 °C, se añadió una solución de 2-(3-butoxifenil)-(terc- butoxicarbonil)etilamina (7.5 g, 25.5 mmol) en DMF seco (125 ml) por goteo. Después de 1h a temperatura ambiente, se añadió 2-cloro-N,N-dimetilacetamida (5.2 ml, 51 mmol) y la mezcla se agitó durante 16h a temperatura ambiente. Se añadió H2O (10 ml) y el solvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en H2O (150 ml) y se extrajo con CH2Cl2 (2 x 150 ml). Las fases orgánicas recogidas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y evaporaron. El crudo se purificó mediante cromatografía rápida (éter de petróleo/EtOAc 4:6) lo que proporciona el compuesto del título (7.2 g, 75 %) como un aceite amarillo claro.
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1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 7.1 (m, 1H), 6.79 - 6.71 (m, 3H), 3.97 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.40 (dd, J = 8.7 Hz, J = 7.2 Hz, 2H), 2.88 (s, 6H), 2.76 (dd, J = 7.9 Hz, J = 6.4 Hz, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.46 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 0.95 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
ESI+MS: calcd para C21H34N2O4: 378.52; encontrado: 379.0 (MH+).
Etapa 4: Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
Una solución de 2-[2-(3-butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (9.6 g, 25.3 mmol) en HCl/Et2O (127 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 16h. El solvente se evaporó a presión reducida, el residuo se trituró con una mezcla de Et2O/iPr2O 50/50, se filtró y se lavó con Et2O/iPr2O para obtener el compuesto del título como un sólido blanco (1,71 g, rendimiento 95 %).
1H NMR (300 MHz, CDCl3): 5 9.63 (br. s., 1 H), 7.23 (dd, 1 H), 6.83 - 6.91 (m, 2 H), 6.80 (ddd, 1 H), 3.96 (s, 2 H), 3.96 (t, 2 H), 3.32 - 3.44 (m, 2 H), 3.22 - 3.32 (m, 2 H), 2.97 (s, 6 H), 1.70 - 1.83 (m, 2 H), 1.41 - 1.58 (m, 2 H), 0.99 (t, 3 H). ESI+MS: calcd para C16H26N2O2: 278.40; encontrado: 279.3 (MH+).
Análogamente, a partir de los intermediarios apropiados, se prepararon los siguientes compuestos:
Clorhidrato de 2-{2-[3-(4,4,4-trifluorobutoxi)fenil]-etilamino}-N,N-dimetilacetamida 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 9.00 (br. s., 2 H), 7.17 -7.32 (m, 1 H), 6.78 -6.94 (m, 3 H), 4.04 (br. s., 2 H), 3.91 -4.20 (m, 2 H), 3.08 -3.22 (m, 2 H), 2.93 - 3.00 (m, 2 H), 2.94 (s, 3 H), 2.90 (s, 3 H), 2.30 -2.48 (m, 2 H), 1.78 -2.05 (m, 2 H). ESI+MS: calcd para C16H23F3N2O2 (base libre): 332.27; encontrado: 333.25 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 9.03 (br s, 2 H), 7.14 - 7.29 (m, 1 H), 6.70 - 6.88 (m, 3 H), 4.03 (s, 2 H), 3.95 (t, 2 H), 3.06 - 3.21 (m, 2 H), 2.94 (s, 3 H), 2.90 (s, 3 H), 2.81 - 3.02 (m, 2 H), 1.62 - 1.80 (m, 2 H), 1.23 - 1.48 (m, 4 H), 0.90 (t, 3 H).
ESI+MS: calcd para C17H28N2O2 (base libre): 292.42; encontrado: 293.25 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-hexiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 9.01 (br s, 2 H), 7.23 (dd, 1 H), 6.65 - 6.93 (m, 3 H), 4.03 (s, 2 H), 3.95 (t, 2 H), 3.05 - 3.24 (m, 2 H), 2.94 (s, 3 H), 2.91 - 3.01 (m, 2 H), 2.90 (s, 3 H), 1.57 - 1.84 (m, 2 H), 1.35 -1.51 (m, 2 H), 1.22 - 1.36 (m, 4 H), 0.70-1.01 (m, 3 H).
eSi+MS: calcd para C18H30N2O2 (base libre): 306.45; encontrado: 307.32 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dipropilacetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 8.88 (br. s., 2 H), 7.15 - 7.30 (m, 1 H), 6.68 - 6.88 (m, 3 H), 4.02 (s, 2 H), 3.96 (t, 2 H), 3.23 - 3.28 (m, 2 H), 3.09 - 3.22 (m, 4 H), 2.87 - 2.98 (m, 2 H), 1.62 - 1.75 (m, 2 H), 1.35 - 1.62 (m, 6 H), 0.94 (t, 3 H), 0.85 (dt, 6 H).
ESI+Ms: calcd para C20H34N2O2 (base libre): 334.50; encontrado: 335.34 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dibutilacetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 + TFA): 5 8.85 (br. s., 2 H), 7.19 - 7.28 (m, 1 H), 6.62 - 6.88 (m, 3 H), 4.01 (t, 2 H), 3.96 (t, 2 H), 3.30 (t, 2 H), 3.06 - 3.24 (m, 4 H), 2.85 - 3.00 (m, 2 H), 1.61 - 1.82 (m, 2 H), 1.40 - 1.55 (m, 6 H), 1.20 - 1.38 (m, 4 H), 0.94 (t, 6 H), 0.89 (t, 3 H). ESI+MS: calcd para C20H38N2O2 (base libre): 362.55; encontrado: 363.35 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dipropilacetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 + Na2CO3): 5 7.50 (br. s., 1 H) 7.07 - 7.24 (m, 1 H) 6.62 - 6.83 (m, 3 H) 3.93 (t, 2 H) 3.06 - 3.22 (m, 5 H) 2.58 - 2.81 (m, 5 H) 1.62 - 1.78 (m, 2 H) 1.28 -1.56 (m, 8 H) 0.68 - 0.99 (m, 9 H).
ESI+Ms: calcd para C21H36N2O2 (base libre): 348.53; encontrado: 349.28 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-acetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 8.96 (br s, 2 H), 7.87 (br s,1 H), 7.54 (br s,1 H), 7.23 (dd, 1 H), 6.58 - 6.83 (m, 3 H), 3.96 (t, 2 H), 3.70 (s, 2 H), 3.04 - 3.18 (m, 2 H), 2.82 - 3.01 (m, 2 H), 1.57 - 1.80 (m, 2 H), 1.32 - 1.54 (m, 2 H), 0.81 -
1.04 (m, 3 H).
ESI+MS: calcd para C14H22N2O2: 250.34; encontrado: 251.1 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 8.99 (br s, 2 H), 8.39 (q, 1 H), 7.08 - 7.37 (m, 1 H), 6.65 - 6.95 (m, 3 H), 3.96 (t, 2 H), 3.70 (s, 2 H), 3.04 - 3.25 (m, 2 H), 2.79 - 3.04 (m, 2 H), 2.67 (d, 3 H), 1.57 - 1.82 (m, 2 H), 1.44 (sxt, 2 H), 0.94 (t, 3 H). ESI+MS: calcd para C15H24N2O2: 264.37; encontrado: 265.2 (MH+). 1H
Clorhidrato de 2-[2-(3-isopropoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 9.04 (br s, 2 H), 7.12 - 7.32 (m, 1 H), 6.70 - 6.81 (m, 3 H), 4.60 (spt, 1 H), 4.03 (s, 2 H),
3.04 - 3.21 (m, 2 H), 2.94 (s, 3 H), 2.91 - 3.01 (m, 2 H), 2.90 (s, 3 H), 1.26 (d, 6 H).
ESI+MS: calcd para C15H24N2O2: 264.37; encontrado: 265.2 (MH+).
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Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dietilacetamida
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 8.89 8.98 (br s, 2 H), 7.24 (dd, 1 H), 6.72 - 6.88 (m, 3 H), 4.03 (s, 2 H), 3.96 (t, 2 H), 3.34 (q, 2 H), 3.26 (q, 2 H), 3.08 - 3.21 (m, 2 H), 2.86 - 3.03 (m, 2 H), 1.59 - 1.78 (m, 2 H), 1.33 - 1.54 (m, 2 H), 1.13 (t, 3 H), 1.07 (t, 3 H), 0.94 (t, 3 H). ESI+MS: calcd para C18H30N2O2: 306.45; encontrado: 307.2 (MH+).
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-1-pirrolidin-1-il-etanona
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 8.94 (s, 2 H), 7.14 - 7.33 (m, 1 H), 6.64 - 6.93 (m, 3 H), 4.00 (t, 2 H), 3.88 (s, 2 H), 3.33
- 3.45 (m, 4 H), 3.19 - 3.29 (m, 2 H), 2.96 - 3.05 (m, 2 H), 1.78 - 2.00 (m, 4 H), 1.65 - 1.78 (m, 2 H), 1.37 - 1.56 (m, 2 H),
0.96 (t, 3 H).
ESI+MS: calcd para C18H28N2O2: 304.44; encontrado: 305.2 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxi-4-fluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 8.91 (br s, 2 H) 7.15 (dd, 1 H) 7.05 (dd, 1 H) 6.79 (ddd, 1 H) 3.97 -4.12 (m, 4 H) 3.09 -3.21 (m, 2 H) 2.94 (s, 3 H) 2.92 -2.99 (m, 2 H)
2.90 (s, 3 H) 1.65 -1.82 (m, 2 H) 1.36 -1.54 (m, 2 H) 0.87 -1.01 (m, 3 H).
ESI+Ms: calcd para C16H25FN2O2 (base libre): 296.38; encontrado: 297.22 (MH+).
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxi-4-metoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 8.97 (br s,
2 H), 6.90 (d, 1 H), 6.84 (d, 1 H), 6.74 (dd, 1 H), 4.02 (br s, 2 H), 3.94 (t, 2 H), 3.73 (s, 3 H), 3.04 -3.22 (m, 2 H), 2.94 (s,
3 H), 2.90 (s, 3 H), 2.84 -2.92 (m, 2 H), 1.57 -1.84 (m, 2 H), 1.44 (sxt, 2 H), 0.94 (t, 3 H).
ESI+MS: calcd para C17H28N2O3 (base libre): 308.42; encontrado: 309.21 (MH+).
Ejemplo 2
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida Etapa 1: Etil éster de ácido 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-2-metilpropionico
A una solución de clorhidrato de 2-(3-butoxifenil)-etilamina (0.27 g, 1.42 mmol; obtenida del compuesto de la Etapa 2 del Ejemplo 1, de acuerdo con el procedimiento estándar descrito en la Etapa 4 del Ejemplo 1) en acetonitrilo (8 ml), se añadieron etil éster de ácido 2-bromo-2-metilpropionico (0.27 ml, 1.85 mmol) y trietilamina (0.52 ml, 3.70 mmol). La solución se calentó a 100 °C bajo irradiación de microondas durante 3 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se dividió entre agua y CH2Cl2. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y el solvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (sílice, CH2Ch:MeOH de 100:0 a 95:5) lo que proporciona el compuesto del título (0.17 g, 39 % de rendimiento) como un aceite incoloro. ESI+MS: calcd para C18H29NO3: 307.44; encontrado: 308.2 (MH+).
Etapa 2: Clorhidrato de 2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida
A una solución de dimetilamina, se añadió 2 M en THF (0.6 ml, 1.1 mmol) en tolueno (3 ml) trimetilaluminio, 2 M en hexano (1.4 ml, 2.77 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se añadió etil éster de ácido 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-2-metil-propiónico (0.17 g, 0.55 mmol) en tolueno seco (8 ml) y la solución se calentó a 90 °C y se agitó durante 24h. La mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente y el solvente se eliminó a presión reducida. El residuo se dividió entre agua y éter dietílico. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y el solvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía rápida (primera purificación: sílice, CH2Ch:MeOH de 100:0 a 97:3; segunda purificación: sílice, EtOAc) lo que proporciona el compuesto del título que se disolvió en HCl/Et2O y se agitó durante 20 minutos. La sal de clorhidrato resultante se filtró, se lavó con iPr2O y se secó a 40 °C al vacío. El compuesto del título puro (18.5 mg, rendimiento 20 %) se obtuvo como un sólido blanco.
1H NMR (300 MHz, CDCh): 8 9.39 (bs, 2 H), 7.24 (t, 1 H), 6.71-6.97 (m, 3 H), 3.97 (t, 2 H), 3.13-3.36 (m, 4 H), 3.09 (s, 6 H), 1.90 (s, 6 H), 1.69-1.86 (m, 2 H), 1.51 (sxt, 2 H), 0.99 (t, 3 H). eSi+MS: calcd para C18H30N2O2: 306.45; encontrado: 307.32 (MH+).
Ejemplo 3
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
Etapa 1: 2-[2-(3-Butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
Una solución de 2-[2-(3-butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (0.410 g, 1.1 mmol; preparada de acuerdo con la Etapa 3 del Ejemplo 1) en THF seco (5 ml) se enfrió a -78 °C y se añadió LiHMDS (litio hexametildisilazida), 1 M en THF, (1.43 ml, 1.4 mmol) por goteo. La mezcla se agitó 30 min, después se añadió una solución de yoduro de metilo (0.187 g, 1.3 mmol) en THF seco (1ml) por goteo. La mezcla se agitó durante 2h permitiendo que el baño de enfriamiento expirara. El solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se disolvió en EtOAc (15 ml) y se lavó con agua (2 x 15 ml). La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y el solvente se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía rápida (sílice, éter de petróleo:EtOAc de 8:2 a 6:4) lo que proporciona el compuesto del título (0.22 g, 52 % de rendimiento) como un aceite incoloro.
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ESI+MS: calcd para C22H36N2O4: 392.54; encontrado: 393.3 (MH+).
Etapa 2: Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
El compuesto del título se preparó a partir de 2-[2-(3-butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetil-propanamida de acuerdo con el procedimiento estándar descrito en la Etapa 4 del Ejemplo 1. Sólido blanco (rendimiento 47 %).
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 9.16 (br s,1 H), 8.82 (br s,1 H), 7.14 - 7.31 (m, 1 H), 6.64 - 6.93 (m, 3 H), 4.39 (q, 1 H), 3.96 (t, 2 H), 3.08 - 3.22 (m, 1 H), 3.00 (s, 3 H), 2.96 - 3.06 (m, 1 H), 2.87 - 2.96 (m, 2 H), 2.90 (s, 3 H), 1.59 - 1.82 (m, 2 H), 1.37 - 1.53 (m, 2 H), 1.38 (d, 3 H), 0.94 (t, 3 H).
eSi+MS: calcd para C17H28N2O2 (base libre): 292.42; encontrado: 293.25 (MH+).
Ejemplo 4
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-3-hidroxi-N,N-dimetilpropanamida
Etapa 1: 2-[2-(3-Butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-3-acetoxi-N,N-dimetil-propanamida
El compuesto del título se preparó a partir de [2-[2-(3-butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida y bromometil éster de ácido acético de acuerdo con la Etapa 1 del Ejemplo 3. Aceite incoloro (38 % de rendimiento). ESI+MS: calcd para C24H38N2O6 (base libre): 450.58; encontrado: 451.2 (MH+).
Etapa 2: 2-[2-(3-Butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-3-hidroxi-N,N-dimetil-propanamida
La 2-[2-(3-butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-3-acetoxi-N,N-dimetilpropan-amida (0.19 g, 0.42 mmol) se disolvió en 3 % NH4OH/MeOH (15 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 5h. El solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía rápida (sílice, éter de petróleo:EtOAc de 7:3 a 3:7) lo que proporciona el compuesto del título (0.13 g, 66 % de rendimiento) como un aceite incoloro.
ESI+MS: calcd para C22H36N2O5: 408.54; encontrado: 409.2 (MH+).
Etapa 3: Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-3-hidroxi-N,N-dimetilpropanamida
El compuesto del título se preparó a partir de 2-[2-(3-butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-3-acetoxi-N,N- dimetilpropanamida de acuerdo con el procedimiento estándar descrito en la Etapa 4 del Ejemplo 1. Obtenido como un sólido blanco (76 % de rendimiento).
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 8.46 - 9.44 (m, 2 H) 7.10 - 7.33 (m, 1 H) 6.65 - 6.92 (m, 3 H) 5.54 (t, 1 H) 4.44 (t, 1 H) 3.95 (t, 2 H) 3.65 - 3.88 (m, 2 H) 3.11 - 3.22 (m, 1 H) 3.03 -3.09 (m, 1 H) 3.02 (s, 3 H) 2.91 -2.99 (m, 2 H) 2.90 (s, 3 H) 1.61 -1.79 (m, 2 H) 1.35- 1.53 (m, 2 H) 0.86- 1.00 (m, 3 H).
ESI+MS: calcd para C17H28N2O3 (base libre): 308.42; encontrado: 309.21 (MH+).
Ejemplo 5
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxi-4-metilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida Etapa 1: (3-Hidroxi-4-metilfenil)-acetonitrilo
A una solución de 3-metoxi-4-metilfenilacetonitrilo (2.0 g, 12.4 mmol) en CH2Cl2 seco (50 ml) enfriado a -78 °C, se añadió BBr31 M en CH2Ch (27 ml, 27 mmol) por goteo. La mezcla se agitó durante la noche permitiendo que el baño de enfriamiento expirara. La mezcla se vertió lentamente en hielo/agua con agitación. Cuando el hielo se derritió, la fase acuosa se extrajo con EtOAc y la fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y el solvente se evaporó a presión reducida. El compuesto del título crudo (1.7 g, 93 % de rendimiento) se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Etapa 2: (3-Butoxi-4-metilfenil)-acetonitrilo
A una solución de (3-hidroxi-4-metilfenil)-acetonitrilo (1.7 g, 11.5 mmol) en acetona (100 ml), se añadieron K2CO3 (7.9 g, 57.5 mmol) y 1-bromo butano (6.1 ml, 57.5 mmol). La suspensión se llevó a reflujo durante 24h y el solvente se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en CH2Cl2 y se lavó con agua y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y el solvente se evaporó a presión reducida. El crudo se purificó mediante cromatografía rápida (éter de petróleo:EtOAc 9.5:0.5) lo que proporciona el compuesto del título (1.43 g, 61 % de rendimiento) como un aceite incoloro.
ESI+MS: calcd para C13H17NO: 203.29; encontrado: 204.1 (MH+).
Etapa 3: terc-Butil éster de ácido N-[2-(3-butoxi-4-metilfenil)-etil]-carbámico
A una solución de (3-butoxi-4-metilfenil)-acetonitrilo (0.94 g, 5.0 mmol) en metanol (38 ml), se añadieron cloruro de níquel hexahidrato (0.12 g, 0.5 mmol) y boc2O (2.18 g, 10.0 mmol). La solución se enfrió a 0 °C y se añadió borohidruro
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de sodio (1.32 g, 35.0 mmol) en porciones durante 30 minutos. La mezcla se agitó durante la noche permitiendo que el baño de enfriamiento expirara. La reacción se inactivó por adición de dietilentriamina (0.54 ml, 5 mmol) y se agitó durante 30 minutos. El solvente se retiró a presión reducida y el residuo se redisolvió en EtOAc, se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4, se filtró y el solvente se evaporó a presión reducida. El crudo se purificó mediante cromatografía rápida (sílice, éter de petróleo:EtOAc 90:10) para dar el compuesto del título. Aceite incoloro (80 % de rendimiento). ESI+MS: calcd para C18H29NO3: 307.44; encontrado: 308.1 (MH+).
Etapa 4: Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxi-4-metilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
El compuesto del título se preparó a partir de ferc-butil éster de ácido [2-(3-butoxi-4-metilfenil)-etil]-carbámico de acuerdo con los procedimientos estándar descritos en las Etapas 3 y 4 del Ejemplo 1. Obtenido como sólido blanco.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 8.93 (br s, 2 H), 7.08 (dd, 1 H), 6.79 (d, 1 H), 6.69 (dd, 1 H), 4.03 (s, 2 H), 3.97 (t, 2 H), 3.08-3.19 (m, 2 H), 2.93 (s, 3 H), 2.91 -2.97 (m, 2 H), 2.90 (s, 3 H), 2.11 (s, 3 H), 1.65- 1.79 (m, 2 H), 1.39 - 1.54 (m, 2 H), 0.95 (t, 3 H).
eSi+MS: calcd para C17H28N2O2 (base libre): 292.42; encontrado: 293.25 (MH+).
Análogamente, a partir de (2,6-difluoro-3-metoxifenil)-acetonitrilo se preparó el siguiente compuesto:
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxi-2,6-difluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 9.16 (br s, 2 H), 7.07 -7.18 (m, 1 H), 6.96 -7.07 (m, 1 H), 4.07 (s, 2 H), 4.02 (t, 2 H), 3.08 (s, 4 H), 2.93 (s, 3 H), 2.90 (s, 3 H), 1.63 -1.76 (m, 2 H), 1.36 -1.51 (m, 2 H), 0.93 (t, 3 H).
ESI+MS: calcd para C16H24F2N2O2 (base libre): 314.37; encontrado: 315.20 (MH+).
Ejemplo 6
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-2-metilpropilamino]-N,N-dimetilacetamida Etapa 1: 2-(3-Metoxifenil)-2-metilpropionitrilo
A una solución de (3-metoxifenil)-acetonitrilo (8.0 g, 0.054 mol) en DMF (25 ml) enfriado a 0 °C, se añadió NaH (1.3 g, 0.054 mol). La reacción se agitó durante 30 min, y se añadió Mel (3.3 ml, 0.054 mol). La reacción se agitó 1 h a temperatura ambiente. Después de este periodo, la mezcla de reacción se enfrió nuevamente a 0 °C, se añadió NaH (1.3 g, 0.054 mol) seguido por Mel (3.3 ml, 0.054 mol) después de 30 minutos. La reacción se agitó a temperatura ambiente toda la noche. El DMF se evaporó y el crudo se diluyó con salmuera y se extrajo con Et2O. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre Na2SO4, el solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía rápida (éter de petróleo:AcOEt 95:5) para dar el compuesto del título (4 g, 42 % de rendimiento) como un aceite incoloro. EsI+MS: calcd para C11H13NO: 175.23; encontrado: 176.1 (MH+).
Etapa 2: Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-2-metilpropilamino]-N,N-dimetilacetamida
El compuesto del título se preparó a partir de 2-(3-metoxifenil)-2-metilpropionitrilo de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 5.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8 8.44 (br. s., 2 H), 7.28 (t, 1 H), 6.90 - 7.04 (m, 2 H), 6.77 - 6.90 (m, 1 H), 3.99 (t, 2 H), 3.88 (s, 2 H), 3.16 (s, 2 H), 2.88 (s, 6 H), 1.64 - 1.78 (m, 2 H), 1.42 - 1.55 (m, 2 H), 1.36 - 1.42 (m, 6 H), 0.90 - 1.04 (m, 3 H).
ESI+MS: calcd para C18H30N2O2 (base libre): 306.45; encontrado: 307.26 (MH+).
Ejemplo 7
Clorhidrato de 2-[2-(3-butiltiofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida Etapa 1: (3-Butiltiofenil)-acetonitrilo
A una solución de (3-iodofenil)-acetonitrilo (2.0 g, 8.2 mmol) y S-butil éster de ácido acético (2.4 ml, 24.6 mmol) en n- BuOH (5 ml), se añadieron Cul (0.156 g, 0.8 mmol), etilenglicol (0.96 ml, 1.7 mmol) y K2CO3 (2.4 g, 17.3 mmol) y la mezcla se calentó bajo irradiación de microondas a 110 °C durante 1h. La mezcla de reacción se diluyó con AcOEt y se filtró a través de una almohadilla de celita. La fase orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y el solvente se evaporó a presión reducida. El crudo se purificó mediante cromatografía rápida (éter de petróleo:AcOEt de 10:0 a 9:1) para dar el compuesto del título puro como un aceite amarillo pálido (1.0 g, 64 % de rendimiento), usado sin purificación adicional en la siguiente etapa.
ESI+MS: calcd para C12H15NS: 205.32, sin masa detectable.
Etapa 2: Clorhidrato de 2-[2-(3-butiltiofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
El compuesto del título se preparó a partir de (3-butiltiofenil)-acetonitrilo de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 5.
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1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 9.08 (br. s., 2 H), 7.23 - 7.36 (m, 1 H), 7.15 - 7.23 (m, 2 H), 6.95 - 7.11 (m, 1 H), 4.03 (s, 2 H), 3.08 - 3.21 (m, 2 H), 2.92 - 3.02 (m, 4 H), 2.94 (s, 3 H), 2.90 (s, 3 H), 1.49 - 1.67 (m, 2 H), 1.30 - 1.49 (m, 2 H), 0.89 (t, 3 H).
ESI+Ms: calcd para C16H26N2OS (base libre): 294.46; encontrado: 295.20 (MH+).
Ejemplo 8
Clorhidrato de 2-[2-(3-butilsulfonilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
Etapa 1: 2-[2-(3-Butilsulfonilfenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida
A una solución de clorhidrato de 2-[2-(3-butiltiofenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (0.25 g, 0.62 mmol; preparado a partir del compuesto de la Etapa 2 del Ejemplo 7, por reacción con boc2O de acuerdo con el procedimiento descrito en la primera parte de la Etapa 1 del Ejemplo 1) en acetonitrilo (20 ml)/agua (10 ml), se añadió una mezcla de oxona (0.92 g, 1.5 mmol) y NaHCO3 (0.2 g, 2.3 mmol) en porciones durante 5 minutos. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se particionó entre agua y CH2Cl2, la parte orgánica se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 y el solvente se evaporó a presión reducida. El crudo se purificó mediante cromatografía rápida (éter de petróleo:AcOEt 3:7) para dar el compuesto del título puro como un aceite incoloro (0.20 g, 75 % de rendimiento).
ESI+MS: calcd para C21H34N2O5S: 426.58; encontrado: 427.1 (MH+).
Etapa 2: Clorhidrato de 2-[2-(3-butilsulfonilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
El compuesto del título se preparó a partir de 2-[2-(3-butilsulfonilfenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N- dimetilacetamida de acuerdo con el procedimiento estándar descrito en la Etapa 4 del Ejemplo 1.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 + TFA): 5 8.84 - 9.10 (m, 2 H), 7.74 - 7.86 (m, 2 H), 7.57 - 7.71 (m, 2 H), 4.06 (t, 2 H), 3.03 - 3.34 (m, 6 H), 2.95 (s, 3 H), 2.91 (s, 3 H), 1.45 - 1.63 (m, 2 H), 1.24 - 1.42 (m, 2 H), 0.84 (s, 3 H).
ESI+MS: calcd para C16H26N2OS (base libre): 294.46; encontrado: 295.20 (Mh+).
Ejemplo 9
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetiltioacetamida
Etapa 1:2-[2-(3-Butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetiltioacetamida A una solución de 2-[2-(3- butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (0.38 g, 1.0 mmol) en tolueno seco (20 ml), se añadió reactivo de Lawesson (0.58 g, 1.2 mmol) en un recipiente y la mezcla se calentó hasta el reflujo y se agitó durante 2h. El solvente se evaporó a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía rápida (éter de petróleo:AcOEt de 9:1 a 8:2) para dar el compuesto del título puro como un aceite incoloro (0.11 g, 28 % de rendimiento).
ESI+MS: calcd para C21H34N2O3S: 394.58; encontrado: 395.1 (MH+).
Etapa 2: Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetiltioacetamida
El compuesto del título se preparó a partir de 2-[2-(3-butoxifenil)-(terc-butoxicarbonil)etilamino]-N,N-dimetiltioacetamida de acuerdo con el procedimiento estándar descrito en la Etapa 4 del Ejemplo 1. Obtenido como sólido blanco.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): 5 8.88 (s, 2 H), 7.16 - 7.34 (m, 1 H), 6.73 - 6.88 (m, 3 H), 4.17 (s, 2 H), 3.96 (dd, 2 H), 3.43 (s, 3 H), 3.31 (s, 3 H), 3.16 - 3.26 (m, 2 H), 2.92 - 3.04 (m, 2 H), 1.62 - 1.76 (m, 2 H), 1.36 - 1.50 (m, 2 H), 0.94 (t, 3 H).
ESI+MS: calcd para C16H26N2OS (base libre): 294.46; encontrado: 295.22 (MH+).
Ejemplo 10
2-[2-(3-Butoxifenil)]-(N'-metoxi)etilamino]-N,N-dimetilacetamida Etapa 1: 2-(3-Butoxifenil)-acetaldehído
A una solución de 2-(3-butoxifenil)-etanol (3.00 g, 15.4 mmol; preparado a partir de 2-(3-hidroxifenil)-etanol de acuerdo con el procedimiento descrito en la Etapa 2 del Ejemplo 1) en CH2Cl2 (100 ml), se añadió reactivo de periodinano de Dess-Martin (8.5 g, 20.1 mmol) y la reacción se dejó a temperatura ambiente durante la noche. La solución se vertió en una solución saturada de NaHCO3 que contenía Na2S2O3 (35 g), y la mezcla se agitó durante 30 min. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se evaporó a presión reducida.
El residuo que contenía el compuesto del título (2.9 g, 99 % de rendimiento) se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Etapa 2: 2-(3-Butoxifenil)-(N-metoxi)etilamina
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55
A una suspensión de 2-(3-butoxifeni)-acetaldehído (2.00 g, 10.4 mmol) y clorhidrato de O-metoxiamina (1.12 g, 13.4 mmol) en agua (13 ml), se añadió una solución de Na2CO3 (0.66 g, 6.2 mmol) en agua (20 ml) por goteo bajo agitación a 0 °C. La reacción se dejó a temperatura ambiente durante la noche y después se extrajo con dietiléter. La capa orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y evaporó a presión reducida.
El residuo que contenía la oxima intermedia deseada (2.24 g, 10.2 mmol) se disolvió en metanol (60 ml) y se añadió ácido acético (8.8 ml, 153.0 mmol). La solución se enfrió a 0 °C y se añadió NaCNBH3 en porciones. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche, después el solvente se retiró a presión reducida y el residuo se dividió entre solución de NaHCO3 al 5 % y acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró hasta la sequedad al vacío. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en columna, (éter de petróleo: acetato de etilo 9:1) para producir 0.88 g (38 % de rendimiento) del compuesto del título.
Etapa 3: 2-[2-(3-Butoxifenil)]-(N'-metoxi)etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2-(3-Butoxifenil)-(N-metoxi)etilamina (0.5 g, 2.25 mmol), obtenida como se describe en la Etapa 2, se disolvió en acetonitrilo (15 ml) y se añadió etildiisopropilamina (1.95 ml, 11.25 mmol) seguido por 2-cloro-N,N-dimetilacetamida (1.15 ml, 11.25 mmol). La solución se calentó a 130 °C bajo irradiación de microondas durante 6 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, el solvente se retiró a presión reducida y el residuo se particionó entre NaHCO3 al 5 % y acetato de etilo. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró hasta la sequedad al vacío. El residuo crudo se purificó mediante cromatografía en columna, (éter de petróleo: acetato de etilo 1:1) para producir 0.25 g (36 % de rendimiento) del compuesto del título.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 + TFA): 7.17 (t, 1 H), 6.61 - 6.89 (m, 3 H), 3.94 (t, 2 H), 3.56 (s, 2 H), 3.47 (s, 3 H), 2.98 (s, 3 H), 2.89 - 2.97 (m, 2 H), 2.80 (s, 3 H), 2.72 - 2.86 (m, 2 H), 1.58 - 1.77 (m, 2 H), 1.34 - 1.53 (m, 2 H), 0.93 (t, 3 H). ESI+MS: calcd para C17H28N2O3 (base libre): 308.42; encontrado: 309.18 (MH+).
Ejemplo 11: Ensayo del influjo de canales de sodio TTXs
La línea celular ND7/23 derivada de ganglio de la raíz dorsal de rata expresa endógenamente una población mixta de canales de sodio TTXs. Estas células carecen de canales de sodio TTXr como se muestra por la ausencia de sus transcritos respectivos.
Las células ND7/23 se cultivaron en DMEM suplementado con FBS al 10 % y piruvato de sodio 1 mM. Las células se sembraron a 50,000 células/pocillo en placas de 96 pocillos recubiertos con poli-L-lisina y se incubaron adicionalmente durante 18-24h antes del uso.
El Ensayo con el Kit del Potencial de Membrana (Molecular Devices), en base a un colorante fluorescente cargado negativamente capaz de monitorear los cambios en el potencial de membrana provocados por el influjo de sodio debido a la apertura de los canales, se usó para el ensayo.
Las células se incubaron con la carga del colorante durante 30 minutos a 25 °C. Después, 100 nM de la toxina de Anemonia sulcata (usada como potenciador de la respuesta al abridor del canal) sola o en presencia de TTX (como estándar de referencia) o el compuesto de prueba se añadieron durante otros 15 minutos.
La fluorescencia (longitud de onda de excitación: 530nm, emisión: 565 nm) se midió antes y después (40-45 s) de la inyección automatizada del abridor de canales de sodio veratridina (100 |jM) mediante el uso de un lector de placas Victor (Perkin Elmer).
Las curvas de inhibición se calcularon para 5 concentraciones, cada una por triplicado, y la IC50 se determinó mediante el uso de un análisis de regresión lineal.
Los compuestos de la presente invención inhiben los canales de sodio TTXs con valores de IC50 farmacológicamente significativos.
Los resultados, obtenidos con algunos compuestos que son representativos de toda la clase de compuestos de la invención, en comparación con los estándares ralfinamida y safinamida, se reportan en la Tabla 1.
Tabla 1
Compuesto
Influjo de Na+ IC50 JM
Clorhidrato de 2-[2-(3-hexiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
0.5
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dipropilacetamida
0.5
Clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
0.5
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dietilacetamida
0.6
5
10
15
20
25
Compuesto
Influjo de Na+ IC50 JM
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida
0.7
Clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dipropilacetamida
1.1
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
1.1
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dibutilacetamida
1.2
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetiltioacetamida
1.2
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
1.5
Clorhidrato de 2-[2-(3 -butoxifenil)-etilamino] -1-pirrolidin-1-il-etanona
2.1
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxi-2,6-difluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2.6
(S)-(+)-2-[4-(2-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (ralfinamida)*
9.5
(S)-(+)-2-[4-(3-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (safinamida)*
7.4
* como la sal con ácido metanosulfónico
Ejemplo 12: Ensayo del influjo del canal de calcio
La línea celular AtT20/D16v-F2 de tumor de la glándula pituitaria de ratón expresa preferentemente canales de calcio tipo L.
Las células AtT20 se cultivaron en DMEM con FBS al 10 %, glutamina 4mM. Las células se sembraron a 200,000 células/pocillo en placas de 96 pocillos recubiertas con poli-L-lisina y se incubaron adicionalmente durante 18-24h, antes del uso.
El Ensayo con el kit para Ca++ (Molecular Devices), que se basa en un indicador de calcio fluorescente para detectar el influjo de calcio determinado mediante condiciones despolarizantes, se usó para el ensayo.
Las células se incubaron con la carga del colorante de calcio durante 30 min a 37 °C. Después, se añadieron u>- conotoxina sola (1 |jM) o en presencia de nifedipina (como estándar de referencia) o el compuesto de prueba durante otros 15 min.
La fluorescencia (longitud de onda de excitación: 485-emisión: 535 nm) se midió antes y después (30-40 seg) de la inyección automatizada de la solución despolarizante de KCl 100 mM mediante el uso de un lector de placas Victor (Perkin Elmer).
Las curvas de inhibición se calcularon para 5 concentraciones, cada una por triplicado, y la IC50 se determinó mediante el uso de un análisis de regresión lineal.
Los resultados, obtenidos con algunos compuestos que son representativos de toda la clase de compuestos de la invención, en comparación con los estándares ralfinamida y safinamida, se reportan en la Tabla 2.
Tabla 2
Compuesto
Influjo de Ca++ IC50 JM
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dipropilacetamida
1.1
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dibutilacetamida
1.8
Clorhidrato de 2-[2-(3-hexiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
4.0
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dietilacetamida
6.7
Clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dipropilacetamida
6.9
Clorhidrato de 2-[2-(3-butiltiofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
7.2
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetiltioacetamida
7.6
Clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
8.3
Clorhidrato de 2-{2-[3-(4,4,4-trifluorobutoxi)fenil]-etilamino}-N,N-dimetilacetamida
9.3
(S)-(+)-2-[4-(2-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (ralfinamida)*
26.0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
Compuesto
Influjo de Ca++ IC50 jM
(S)-(+)-2-[4-(3-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (safinamida)*
33.0
* como la sal con ácido metanosulfónico
Ejemplo 13: Evaluación por patch clamp del bloqueo de las corrientes de Na+ en neuronas corticales de rata Preparación de las células y cultivo
Los procedimientos que implican animales y su cuidado se realizaron de acuerdo con las directrices institucionales en el cumplimiento de las leyes y políticas nacionales (D.L. n.116, G.U., suppl.40, Feb. 18, 1992) e internacionales (Directiva del Consejo del a EEC 86/609, OJL358.1, 12 de Dic de 1987; Guía para el Cuidado y uso de animales de Laboratorio, Consejo Nacional de Investigación de los EE. UU., 1996). Las neuronas corticales se prepararon a partir de embriones de ratas Wistar (E17-E19). Una rata hembra en fecha 17-19 de embarazo se anestesió y sacrificó. Los fetos (n= 4-5) se disecaron y se sembraron en solución de Hank fría (solución de Hank (Life tech.14170-088) + glucosa 30 % + Pen-Strep 100x (Life Tech. 15140-122) 100U-100|jg/ml y Hepes-NaOH 5mM). El útero y la placenta se extrajeron, los fetos se decapitaron y las cabezas se colocaron en solución de Hank fría.
La piel de la cabeza se retiró mediante el uso de una pinza, el cuero cabelludo se abrió mediante corte lateral a partir de la parte posterior hasta los ojos, y el cerebro se extrajo mediante el uso de una pinza curva.
El cerebro se cortó en dos mitades, la membrana externa de tejido conectivo se retiró con una pinza, y, con el cerebro hacia abajo, se extrajeron el cerebelo, el tronco cerebral y el diencéfalo mediante el uso de una pinza curva tratando de limpiar tanto como fue posible la parte interna de la corteza.
Cada corteza se cortó en partes más pequeñas con una tijera, las piezas se transfirieron a un tubo de centrífuga de 15 ml mediante el uso de una pipeta de 5 ml y se lavaron dos veces con solución de Hank.
La solución se retiró excepto 1-2 ml y el tejido se disgregó primero con una pipeta de 5 ml después con dos pipetas Pasteur pulidas al fuego (abertura media y pequeña, respectivamente). Después de la disociación mecánica, se añadieron 5 ml de DMEM completo (medio de Eagle modificado por Dulbecco) (Gibco 41966-029) + FBS (Hyclone) 10 % + Glutamina (Life Tech. 25030-024) 2mM + Pen-Strep 100U-100 jg/ml, y la suspensión celular se centrifugó durante 5 min a 1000 rpm. El sobrenadante se retiró y se añadieron 5 ml de medio Neurobasal completo (medio NB (Life tech.21103-049) + B27 (Life tech.17504-044) 2 % + Glutamina 2mM + Pen-Strep 100U-100 qg/ml).
Las células se contaron y se diluyeron en medio Neurobasal a una concentración de 400000 células por placa Petri tratada con poli-D-lisina 5 jg/ml.
Las neuronas corticales se usaron a partir del 6to día hasta el 11no día después de sembrar, y el medio Neurobasal se cambió una vez a la semana.
Registros de Patch Clamp de células enteras
Los experimentos en neuronas corticales se realizaron mediante el uso de métodos estándar de patch clamp en células enteras (Hamill y otros, PFUGHERS ARCH., 1981 Ago, 391(12), 85-100). Las corrientes de la membrana se registraron y se filtraron en 5 kHz con un amplificador Axon Axopatch 200B y los datos se digitalizaron con un Axon Digidata 1322A (Axon Instruments, CA, USA). La ejecución del protocolo y la adquisición de datos se controlaron en línea con el programa informático Axon pClamp8. Las mediciones y los electrodos de referencia fueron electrodos AgCl-Ag. Un tirador P-87 de Sutter Instrument (CA, USA) se usó para estirar las pipetas para patch clamp con una resistencia de 2-3 MQ a partir de tubos de vidrio de borosilicato de Harward. Las células se superfundieron continuamente con soluciones extracelulares, mediante el uso de un intercambiador de soluciones Biologic RSC-200.
Protocolos de voltaje y análisis de datos
Para probar el efecto de los compuestos sobre las corrientes de sodio en las neuronas corticales, las células se sometieron a -90 mV, después se usó un protocolo de dos etapas para determinar la dependencia del bloqueo con el voltaje. Las corrientes de sodio se activaron mediante un pulso de paso de 30 ms a -10 mV (pulso de prueba) a partir de un potencial de precondicionamiento de 2000 ms de -110 mV (condición de reposo) y un potencial de —50 mV (la mitad del valor máximo de la condición de estado estable).
El bloqueo tónico de las corrientes de reposo y de despolarización a una determinada concentración del fármaco, se calculó como la diferencia entre la corriente máxima de Na+ en la solución del baño externo de control y las corrientes máximas con la sustancia de prueba dividido por el máximo del control.
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Las curvas de inhibición frente a la concentración del fármaco se obtuvieron al graficar los bloqueos tónicos en la condición de reposo y de despolarización, en función de las concentraciones del fármaco. Las curvas de dosis- respuesta se ajustaron a los datos de bloqueo tónico, de acuerdo con la ecuación logística: y = A2+(A1- A2)/[1+(x/IC50)p]. A1 y A2 son valores fijos de 0 y 1 correspondientes a un 0 y 100 % de inhibición de la corriente, x es la concentración del fármaco, IC50 es la concentración del fármaco que da como resultado 50 % de inhibición de la corriente y p es el factor de la pendiente correspondiente.
La afinidad aparente del fármaco para el estado inactivado (Ki) se calculó de acuerdo con la ecuación 1/Kdesp=h/Kr + (1 -h)/Ki donde Kr es la afinidad del fármaco para el estado de reposo/cerrado; Kdesp es la IC50 en la condición de despolarización, h y (1-h) son las fracciones de canales presentes en los potenciales de reposo y desp., respectivamente.
Soluciones y fármacos
La solución del baño de control contenía (mM): NaCl 60, ColinaCl 60, CaCl2 1.3, MgCl2 2, KCl 2, CdCl2 0.4, NiCl2 0.3, TEACl 20, Hepes 10, Glucosa 10.
La solución interna de la pipeta consistió en (mM): CsF 65, CsCl 65, NaCl 10, CaCl21.3, MgC^2, Hepes 10, EGTA 10, MgATP 1.
Los compuestos se disolvieron como soluciones de reserva (20 mM) en DMSO. Se diluyeron hasta las concentraciones finales en la solución externa.
Resultados
Los compuestos de esta invención son capaces de bloquear las corrientes de Na+ en las neuronas corticales de rata. Los resultados obtenidos con clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida (NW-3509), un compuesto representativo de la clase química de esta invención, en comparación con nuestros estándares safinamida y ralfinamida, se reportan en la Tabla 3.
Tabla 3
Compuesto
IC50de reposo (Kr)(jM) IC50 de despolarización (|jM) Ki
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
25 0.8 0.4
(S)-(+)-2-[4-(3-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (safinamida)*
> 100 (180) 7.0 3.6
(S)-(+)-2-[4-(2-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (ralfinamida)*
> 100 (213) 9.0 4.7
* como la sal con ácido metanosulfónico
Los datos expresados como el valor de IC50 en la concentración M, así como la afinidad para el estado inactivado (Ki) demuestran que el compuesto de esta invención es un bloqueador de canales de sodio muy potente y dependiente del voltaje.
Ejemplo 14: Evaluación por patch clamp del bloqueo de las corrientes de Na+ en la línea celular ND7/23 Mantenimiento de la línea celular
ND7/23 (ECACC No 92090903 de SIGMA), es una línea celular híbrida obtenida a partir de un DRG de rata neonatal fusionado con el neuroblastoma de ratón N18Tg2 (Wood y otros, Proc. Biol. Sci. 22 de Sept. de 1990, 241 (1302), 187194). Las células ND7/23 exhiben propiedades similares a las neuronas sensoriales y expresan corrientes sensibles a la tetrodotoxina (TTX-s) pero no resistentes a la tetrodotoxina (TTX-r) (Zhou y otros, J. Pharmacol. Exp. Ther., 2003, agosto, 306(2), 498-504; John y otros, Neuropharmacology, 2004, marzo, 46(3), 425-439). La ausencia de corrientes TTX-r es consistente con la ausencia de transcritos de los canales TTX-r en estas células.
La identidad molecular de los canales responsables de la conductancia de TTX-s no se conoce pero se presume que es probable que se derive de la actividad de una población mixta de canales de sodio. Las células se mantienen rutinariamente en DMEM con FBS al 10 %, glutamina 4 mM, piruvato de sodio 1 mM. El día antes del experimento de patch clamp las células se desprenden y se siembran a 100,000 células / placa Petri de 35 mm recubierta con polilisina.
Registros de Patch Clamp de células enteras
Los experimentos en células ND7/23 se realizaron mediante el uso de métodos estándar de patch clamp de células enteras (Hamill y otros, PFUGHERS ARCH, agosto, 1981, 391(12), 85-100), como se describe en la sección anterior.
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Protocolos de voltaje y análisis de datos
Para probar el efecto de los compuestos sobre las corrientes de sodio en las células ND7/23, el potencial de membrana de mantenimiento se estableció en -90 mV, después se usó un protocolo de dos etapas para determinar la dependencia del bloqueo con el voltaje. Las corrientes de sodio se activaron mediante un pulso de paso de 30 ms a 0 mV (pulso de prueba) a partir de un potencial de precondicionamiento de 2000 ms de -110 mV (condición de reposo) y un potencial de ~ -70 mV (la mitad del valor máximo de la condición de estado estable).
El bloqueo tónico de las corrientes de reposo y de despolarización a una determinada concentración del fármaco se calculó como la diferencia entre la corriente máxima de Na+ en la solución del baño externo de control y las corrientes máximas con la sustancia de prueba dividida por el máximo del control.
Las curvas de inhibición frente a la concentración del fármaco se obtuvieron al graficar los bloqueos tónicos en la condición de reposo y de despolarización, en función de las concentraciones del fármaco. Las curvas de dosis- respuesta se ajustaron a los datos de bloqueo tónico, de acuerdo con la ecuación logística: y = A2+(A1- A2)/[1+(x/IC50)p]. A1 y A2 son valores fijos de 0 y 1 correspondientes a un 0 y 100 % de inhibición de la corriente, x es la concentración del fármaco, IC50 es la concentración del fármaco que da como resultado 50 % de inhibición de la corriente y p es el factor de la pendiente correspondiente.
La afinidad de fármaco aparente para el estado inactivado (Ki) se calculó de acuerdo con la ecuación 1/Kdesp=h/Kr + (1 -h)/Ki donde Kr es la afinidad del fármaco para el estado de reposo/cerrado; Kdesp es la IC50 en la condición de despolarización, h y (1-h) son las fracciones de canales presentes en los potenciales de reposo y desp., respectivamente.
Soluciones y fármacos
La solución del baño de control contenía (mM): NaCl 80, Colina HCl 40, CaCl2 1.3, MgCl2 2, KCl 2, CdC12 0.4, NiCl2 0.3, TEACl 20, Hepes 10, Glucosa 10.
La solución interna de la pipeta consistió en (mM): CsF 65, CsCl 65, NaCl 10, CaCl21.3, MgC^2, Hepes 10, EGTA 10, MgATP 1.
Los compuestos se disolvieron como soluciones de reserva (20 mM) en DMSO. Se diluyeron hasta las concentraciones finales en la solución externa.
Resultados
Los compuestos de esta invención son capaces de bloquear las corrientes de Na+ en las células ND7/23. Los resultados obtenidos con clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida NW-3525 y 2-[2-(3-butoxi- 2-fluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida, compuestos representativos de la clase química de esta invención, en comparación con nuestro estándar ralfinamida, se reportan en la Tabla 4.
Tabla 4
Compuesto
IC50de reposo (Kr) (pM) IC50 de despolarización (pM) Ki
Clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
2.9 0.7 0.5
2-[2-(3-Butoxi-2-fluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
13 1.7 1
(S)-(+)-2-[4-(2-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (ralfinamida)*
149.0 15.0 8.3
* como la sal con ácido metanosulfónico
Los datos expresados como el valor de IC50 a una concentración en pM, así como también la afinidad para el estado inactivado (Ki) demuestran que los dos compuestos de esta invención son bloqueadores de canales de sodio muy potentes y dependientes de voltaje.
Ejemplo 15: Ensayo de la actividad enzimática de MAO-B in vitro Preparación de las membranas (crudo de fracción mitocondrial)
Las ratas Wistar macho (Harlan, Italia con peso de 175-200 g) se sacrificaron bajo anestesia ligera y los cerebros se extrajeron rápidamente y se homogenizaron en 8 volúmenes de tampón de sacarosa 0.32 M frío que contenía EDTA 0.1 M, pH 7.4. El homogenado crudo se centrifugó a 2220 rpm durante 10 minutos y se recuperó el sobrenadante. El
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sedimento se homogenizó y centrifugó nuevamente. Los dos sobrenadantes se mezclaron y centrifugaron a 9250 rpm durante 10 minutos at +4 °C. El sedimento se resuspendió en tampón fresco y se centrifugó a 11250 rpm durante 10 minutos at +4 °C. El sedimento resultante se almacenó a -80 °C.
Ensayo de actividad enzimática in vitro
La actividad enzimática se evaluó con un ensayo radioenzimático mediante el uso del sustrato 14C-feniletilamina (PEA) específico para MAO-B.
El sedimento de mitocondrias (500 |jg de proteína) se resuspendió en tampón de fosfato 0.1 M (pH 7.4). Se añadieron 200 jl de la suspensión a una solución de 50 jl del compuesto de prueba o tampón, y se incubaron durante 30 min a 37 °C (preincubación) después se añadió el sustrato (50 jl). La incubación se realizó durante 10 minutos a 37 °C (14C-PEA, 0.5 jM).
La reacción se detuvo mediante la adición de 0.2 ml de ácido perclórico. Después de la centrifugación, los metabolitos desaminados se extrajeron con 3 ml de tolueno y la fase orgánica radioactiva que contenía los metabolitos neutros y/o ácidos formados como resultado de la actividad de la MAO-B se midieron mediante espectrometría de centelleo líquida a un 90 % de eficiencia.
La actividad de la MAO-B se expresó como nmoles de sustrato transformado/mg de proteína/min.
Los compuestos representativos de toda la clase química de esta invención no muestran inhibición de MAO-B, a concentraciones relevantes, como se informa en la Tabla 5 como valores de IC50 (la concentración del compuesto capaz de inhibir un 50 % de la Actividad enzimática de la MAO-B).
De hecho una inhibición significativa de la MAO-B se considera cuando los valores de IC50 están en el sub-intervalo micromolartal como nuestros estándares safinamida y ralfinamida.
Tabla 5
Compuesto
IC50jM de MAO-B
2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
110
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
231
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxi-2,6-difluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
>300
2-[2-(3-Butoxi-4-metoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
>300
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
>300
(S)-(+)-2-[4-(3-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (safinamida)*
0.1
(S)-(+)-2-[4-(2-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (ralfinamida)*
0.2
* como la sal con ácido metanosulfónico
Ejemplo 16: Prueba con formalina
De acuerdo con un protocolo modificado de Rosland y otros (Rosland J. H., Tjolsen A., Maehle B., Hole K. Pain (1990) 42: 235-242), los ratones se inyectaron por vía subcutánea (s.c.) con 20 jl de una solución de formalina al 2.7 % en la superficie plantar de la pata trasera izquierda y se colocaron inmediatamente en cámaras de PVC limpias para la observación (23 x 12 x 13 cm). El comportamiento de dolor se cuantificó mediante el conteo del tiempo de lamido (s) acumulativo de la pata inyectada. Las mediciones se realizaron durante la fase temprana (0-5 min) y la fase tardía (2040 min) después de la inyección de formalina (Tjolsen A., Berge O. G., Hunskaar S., Rosland J. H., Hole K. Pain (1992) 51: 5-17).
El compuesto de prueba se administró por vía p.o. o s.c. 5-45 minutos antes de la inyección de formalina en un volumen de 10 ml/kg de peso corporal a grupos de 10 ratones por dosis. El grupo control se trató con vehículo.
Los compuestos de la invención administrados por vía oral y subcutánea pueden encontrarse activos en este modelo experimental.
Los resultados expresados como valor de ED50, obtenidos con un compuesto administrado a 0.6-20 mg/kg por vía p.o. y s.c., que es representativo de toda la clase de compuestos de la invención, e informado en la Tabla 6 demuestran que este compuesto tiene una buena actividad analgésica.
Compuesto
ED50 (mg/kg) p.o.
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Compuesto
ED50 (mg/kg) p.o.
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
14.9
(S)-(+)-2-[4-(2-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (ralfinamida)*
29.3
(S)-(+)-2-[4-(3-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (safinamida)*
69.4
* como la sal con ácido metanosulfónico
Ejemplo 17: Modelo de dolor neuropático por ligadura de nervio espinal
Los efectos sobre el dolor neuropático se prueban en el modelo de ligadura de nervio espinal (SNL) (Kim S. H. y Chung J. M. (Pain (1992) 50: 355-363).
Animales: Se usaron ratas Wistar macho adultas con peso de 175-200 g. Todos los animales se alojaron en grupos de 8/10 en una habitación con control de la temperatura (22±0.5 °C) y la humedad relativa (60-70 %) en un ciclo de 12 h de luz/oscuridad (luces encendidas entre las 6 a.m. y las 6 p.m.) y con libre acceso al agua y a una dieta estándar para roedores.
Fármacos: Después de la medición de un umbral alodínico basal, los compuestos de prueba disueltos en agua destilada se administraron oralmente a la dosis de 0.5-100 mg/kg en un volumen de 2 ml/kg. Las ratas control se trataron con vehículo.
Ligadura del nervio espinal: La neuropatía se produjo de acuerdo con un método modificado descrito por Kim S. H. y Chung J. M. (Pain (1992) 50: 355-363). Brevemente, los animales se anestesiaron con tiopental sódico a 35 mg/kg i.p. (más una dosis adicional en caso de ser necesario) y después de la exposición de la columna vertebral dorsal de L4 a S2, los nervios espinales de L5 y L6 se ligaron fuertemente con sutura de seda 4-0, y se cerró la incisión. Se permitió la recuperación de las ratas después de la cirugía durante aproximadamente 5-14 días antes de las pruebas.
Alodinia mecánica: Los umbrales de alodinia mecánica se determinaron de acuerdo con el método de Chaplan y otros (Chaplan S. R., Bach F. W., Pogrel J. W., Chung J. M. y Yaksh T. L. J. Neurosc. Method. (1994) 53: 55-63). Las ratas se colocaron en cajas plásticas individuales de 24 x 10 x 15 cm sobre un suelo de malla metálica y se les permitió adaptarse durante aproximadamente 30 min antes de las pruebas. Los umbrales de retirada de la pata para las patas traseras de las ratas se determinaron en respuesta al sondeo con 8 filamentos de von Frey calibrados (Stoelting, Wood Dale, IL) con una rigidez creciente logarítmicamente que varió de 0.41 a 15 g (4 a 150 mN). Cada filamento se aplicó perpendicularmente a la superficie plantar de la pata ligada de las ratas. Se usó un valor de corte máximo de 15 g. Los umbrales de retirada se determinaron al aumentar y disminuir secuencialmente la resistencia del estímulo (método “arriba-abajo”), se analizaron con el uso de una prueba no paramétrica de Dixon, y se expresaron como el umbral medio de retirada (Dixon W. J. Am. Stat. Assoc. (1965) 60: 967-978). Los umbrales de alodinia mecánica en los animales falso lesionados y operados se midieron antes (pre-fármaco) y a los 15, 30, 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360 y 420 min después del tratamiento p.o. También se midió un umbral a las 24 h en ambos esquemas de tratamiento. La prueba se realizó entre las 9 a.m. y 6 p.m. Los observadores no conocían las condiciones experimentales y de tratamiento.
Hiperalgesia térmica: La hiperalgesia térmica se evaluó mediante el uso de la prueba plantar (Ugo Basile, Varese, Italia). Las ratas se colocaron en recintos de Plexiglas sobre una placa de vidrio limpia. Con la rata de pie relativamente quieta, una fuente de calor radiante debajo del suelo de vidrio se dirigió a la superficie plantar de la pata trasera, y se midió la latencia de la retirada. Antes de la evaluación de la hiperalgesia térmica, la intensidad del calor radiante se ajustó para producir una latencia inicial de aproximadamente 20 segundos a partir de ratas vírgenes con el valor de corte automáticamente ajustado en 30 segundos para evitar daño tisular.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental.
(Figura 1: Efecto de clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida (NW-3509) administrado oralmente en hiperalgesia térmica en ratas con SNL. ED50 = 10.58 mg/kg (6.7-16.6). Los valores representan la media ±SEM de 10 animales por grupo)
Ejemplo 18: Modelo de dolor crónico inflamatorio con adyuvante completo de Freund
La monoartritis se indujo en ratas (200 g de peso) mediante una inyección intra-plantar en la pata trasera izquierda de 100 |jl del adyuvante completo de Freund (CFA, Sigma) que contenía Mycobacterium tubercolosis muertas por calor y secas en una mezcla de aceite de parafina y un agente emulsionante, monooleato de mannida. Un grupo de ratas vírgenes se usaron como control. La inyección de CFA produjo un área de edema e inflamación localizados pocas horas después de la inyección, con una reducción progresiva en el umbral de retirada mecánica.
Se dejó que cada animal desarrollara artritis en un periodo de 8-9 días antes de las pruebas.
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Alodinia mecánica: Los umbrales de alodinia mecánica se determinaron de acuerdo con el método de Chaplan y otros (Chaplan S. R., Bach F. W., Pogrel J. W., Chung J. M. y Yaksh T. L. J. Neurosc. Method. (1994) 53: 55-63). Las ratas se colocaron en cajas plásticas individuales de 24 x 10 x 15 cm sobre un suelo de malla metálica y se les permitió adaptarse durante aproximadamente 30 min antes de las pruebas. Los umbrales de retirada de la pata para las patas traseras de las ratas se determinaron en respuesta al sondeo con 8 filamentos de von Frey calibrados (Stoelting, Wood Dale, IL) con una rigidez creciente logarítmicamente que varió de 0.41 a 15 g (4 a 150 mN). Cada filamento se aplicó perpendicularmente a la superficie plantar de la pata ligada de las ratas. Se usó un valor de corte máximo de 15 g. Los umbrales de retirada se determinaron al aumentar y disminuir secuencialmente la resistencia del estímulo (método “arriba-abajo”), se analizaron con el uso de una prueba no paramétrica de Dixon, y se expresaron como el umbral medio de retirada (Dixon W. J. Am. Stat. Assoc. (1965) 60: 967-978). Los umbrales de alodinia mecánica en los animales falso lesionados y operados se midieron antes (pre-fármaco) y a los 15, 30, 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360 y 420 min después del tratamiento p.o. También se midió un umbral a las 24 h en ambos esquemas de tratamiento. La prueba se realizó entre las 9 a.m. y 6 p.m. Los observadores no conocían las condiciones experimentales y de tratamiento.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental.
Ejemplo 19: Modelo de dolor visceral inducido por ácido acético en ratones
El dolor visceral sigue siendo una de las formas más comunes de dolor, que necesita atención médica. A pesar de la creencia convencional de que el dolor visceral es una variante de dolor somático, difiere en los mecanismos neurológicos y las vías de transmisión. El dolor visceral se caracterizapor una hiperalgesia referida y además no siempre se vincula con daño tisular.
El modelo de dolor visceral inducido por ácido acético se usa ampliamente en la investigación experimental para producir contracciones abdominales (Korster R y otros, Fed. Pro. (1959) 18: 412; Friese N y otros, Life Sci. (1997) 60: 625-634) El modelo consiste en una inyección intraperitoneal (i.p) de un irritante que induce un síndrome denominado 'contorsiones', que consiste en contracciones del abdomen, torsiones y giros del tronco, arqueamiento de la espalda y extensión de las extremidades posteriores.
Animales y Procedimiento: Se usaron ratones CD1 machos con peso de 25-33 g. Cada grupo tratado se dejó habituarse 30 min al ambiente del laboratorio en cajas transparentes de polipropileno individuales. El dolor visceral se calificó mediante el conteo del número de contorsiones durante 10 min después de la inyección i.p. de ácido acético al 0.6 % (10 ml/kg de peso corporal). Se evaluó el número de contorsiones después de la administración de ácido acético. Se contaron los estiramientos del cuerpo completo (contorsión completa) o estiramiento parcial con una contracción evidente del abdomen (contorsión parcial).
Los grupos separados de 10 ratones cada uno se administró oralmente con vehículo (10 ml/kg), o diferentes dosis del compuesto de prueba disuelto en vehículo (10 ml/kg), 5 min antes de la inyección de ácido acético. Los datos se expresan como la media del número de contorsiones durante el periodo de observación de 10 min.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental al disminuir el número de contorsiones inducidas por ácido acético.
(Figura 2: Efecto de clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (NW-3509) administrado oralmente a 20 mg/Kg p.o. en la prueba de dolor visceral inducido por ácido acético. ***p<0.01 vs. vehículo en la prueba t. Los valores representan la media±SEM de n = 10 animales por grupo. ***p<0.01 prueba de Dunnet)
Ejemplo 20: Prueba de electroshock máximo (MES) en ratones
La prueba de electroshock máximo (MES) se usa comúnmente en la búsqueda de fármacos antiepilépticos en modelos en roedores.
Los animales y el aparato: Se usaron ratones CD1 machos con peso de 25 g. Se siguió el procedimiento descrito por White y otros (White H. S., Woodhead J. H., Franklin M. R., Swinyard E. A., y Wolf H. H. Antiepileptic Drugs (1995) 4ta ed: 99-110, Raven Press, Ltd., Nueva York). Un generador electroconvulsivo Ugo Basile (Modelo ECT UNIT 7801) se usó para suministrar un estímulo eléctrico suficiente para producir una respuesta extensora tónica de las extremidades posteriores en al menos el 97 % de los animales control. El estímulo se suministró intra-auralmente a través de electrodos de presilla en ratones (0.7 s de un shock de 40 mA, con un tren de pulsos de 80 Hz y una duración del pulso de 0.4 ms). El efecto agudo de los compuestos administrados intraperitonealmente (i.p), por vía subcutánea (s.c.), intravenosa (i.v) u oral (p.o.) 5-120 minutos antes de la inducción de mEs se examinaron y se compararon con un grupo control de vehículo. Se estudiaron diez ratones por grupo. La supresión completa del componente extensor tónico de las extremidades posteriores de las convulsiones se consideró como evidencia de actividad anticonvulsiva.
Los compuestos de la invención se administraron por vía p.o. o i.v., a la dosis de 0,1 -100 mg/kg.
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Los resultados, expresados como valores de ED50 obtenidos con algunos compuestos representativos de toda la clase química de la invención, se reportan en la Tabla 7 y en la Tabla 8, y demuestran que estos compuestos son activos como fármacos anticonvulsivos.
Tabla 7
Compuesto
% de protección 10 mg/kg p.o. ED50 (mg/kg po.)
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
100 4.3
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
30 12.1
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxi-2,6-difluorofenil)-etilamino]-N,N- dimetilacetamida
100 2.0
Clorhidrato de 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
100 2.8
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
60 6.5
Clorhidrato de 2-[2-(3-hexiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
100 4.6
Tabla 8
Compuesto
MES ED50 mg/kg i.v.
Clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
0.2
(S)-(+)-2-[4-(2-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (ralfinamida)*
2.7
(S)-(+)-2-[4-(3-Fluorobenciloxi)-bencilamino]-propanamida (safinamida)*
4.0
* como la sal con ácido metanosulfónico
Ejemplo 21: Hiperlocomoción inducida por anfetamina y clordiazepóxido en ratones
En este modelo, los ratones se tratan con una mezcla de d-anfetamina más una dosis ansiolítica de la benzodiazepina, clordiazepóxido (Rushton R, Steinberg H. Combined effects of chlordiazepoxide and d-amphetamine on activity of rats in an unfamiliar environment. Nature 1966; 211:1312-3;. R. Arban, G. Maraia, K. Brackenborough, L. Winyard, A. Wilson, P. Gerrard, C. Large. Evaluation of the effects of lamotrigine, valproate and carbamazepine in a rodent model of mania Behavioural Brain Research, 158: 123-132). Se ha planteado que el modelo imita algunos aspectos de la manía en el trastorno bipolar. Es importante señalar que la hiperactividad inducida por la mezcla de d-anfetamina y clordiazepóxido podría prevenirse por administración previa de litio como un estabilizador del estado de ánimo establecido, así como también otros fármacos estabilizadores del estado de ánimo (p. ej., valproato de magnesio y carbamazepina). Por lo tanto, este modelo tiene validez aparente y predictiva como un modelo de trastorno bipolar y representa una valiosa herramienta para determinar, si un compuesto de prueba podría ser un posible fármaco candidato como estabilizador del estado de ánimo.
La anfetamina (AMP) (2.5 mg/kg) más el clorhidrato de clordiazepóxido (CDZ) (3 mg/kg/ip) se administraron a ratones Swiss Albinos machos (25-32 g) en un volumen de 10 ml/kg. La actividad locomotora se registró mediante el uso del Sistema Opto-M3 (Columbus Instruments) que es un monitor multi-canal de la actividad. El sistema opto-M3 tiene 10 emisores infrarrojos y una cantidad respectiva de receptores (0.5” de separación del haz), unidos a la computadora y calcula tanto la actividad exploratoria como el conteo total. Por lo tanto el sistema diferencia la locomoción hacia adelante (exploración) respecto de un movimiento del tipo estereotipado (conteos totales). Los ratones se trataron previamente con el compuesto de prueba (0.5-20 mg/kg) y 10 min más tarde, con AMP (2.5 mg/kg) o AMP junto con CDZ (3 mg/kg). Después de 30 min. sucesivos los ratones se trataron nuevamente con la misma dosis del compuesto de prueba y se colocaron individualmente en las cajas para la actividad motora. La actividad locomotora (exploración y conteo de la actividad total) se evaluó durante 30 min. Cada grupo consistió en 8-10 ratones.
Análisis estadístico: los datos se evaluaron mediante un análisis de varianza (ANOVA), seguido, cuando fue apropiado, por una comparación individual con el control mediante el uso de la prueba de Dunnett.
Los resultados muestran que la administración de anfetamina y anfetamina-clordiazepóxido (CDZ) indujo un aumento significativo en la actividad locomotora.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental al disminuir la hiperactividad inducida por anfetamina y anfetamina-clordiazepóxido.
Figura 3: Exploración en 30 min.
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a) clordiazepóxido (3.0 mg/Kg ip); b) clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (NW-3509) (20.0 mg/Kg po); c) anfetamina (2.5 mg/kg i.p).
La anfetamina sola y la mezcla de anfetamina + clordiazepóxido aumentaron significativamente la actividad locomotora **p<0.001 prueba de Dunnet vs. vehículo.
El clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (NW-3509) redujo la hiperactividad inducida tanto por anfetamina sola como por la mezcla de anfetamina y clordiazepóxido de una manera estadísticamente significativa ##p<0.001 prueba de Dunnet vs. anfetamina o anfetamina + clordiazepóxido. Los datos representan la media ± SEM de n=10 ratones por grupo.)
Ejemplo 22: Prueba del laberinto de agua de Morris (amnesia inducida por escopolamina en rata)
El método que detecta la actividad antiamnésica, sigue el descrito por Morris (Learn. Motiv., 12, 239-260, 1981,). El laberinto de Morris consiste en un tanque de agua circular (diámetro = 150 cm) lleno de agua y mantenido a 26-28 °C con una plataforma de escape (diámetro = 15 cm) 18 cm desde el perímetro y siempre en la misma posición 1.5 cm por debajo de la superficie del agua. El agua se vuelve opaca mediante la adición de un agente colorante no tóxico (p. ej., leche en polvo) lo que hace que la plataforma se vuelva invisible.
Los animales reciben 4 sesiones de entrenamiento durante 4 días consecutivos (Día 1 al Día 4). Cada sesión de entrenamiento consiste en 4 ensayos en el laberinto de Morris, con 1 minuto entre cada ensayo. Para cada prueba el animal se coloca en el laberinto en uno de cuatro puntos de inicio distribuidos por igual alrededor del laberinto y se les permite que encuentren la plataforma de escape. El animal se deja en la plataforma de escape durante 60 segundos antes de regresarlo a su caja. Si el animal no encuentra la plataforma en 120 segundos el investigador lo retira del agua y lo coloca en la plataforma durante 60 segundos antes de regresarlo de vuelta a su caja. Durante los 4 ensayos los animales entran al laberinto una vez de cada punto de inicio en un orden determinado aleatoriamente por animal.
Los ensayos se registran en videos y el comportamiento de los animales se analiza mediante el uso de un sistema de seguimiento por video (Panlab: SMART). La medición principal registrada es la latencia de escape en cada prueba. Otras mediciones son la velocidad de nado y la distancia recorrida.
Los animales tratados con escopolamina (0.5 mg/kg i.p., administrada 30 minutos antes de cada sesión) muestran amnesia en esta tarea según se indica por la incapacidad para reducir sus latencias de escape entre pruebas y entre sesiones. Una prueba de sondeo se realizará en el Día 5. La plataforma se retira del laberinto y el animal se deja nadar libremente en el laberinto durante 60 segundos. La medida principal registrada es el tiempo pasado en el cuadrante objetivo (es decir, donde estaba previamente la plataforma), que se compara con el tiempo pasado en los otros cuadrantes y con el valor esperado por azar (es decir 25 % de la duración de la prueba de sondeo). Se estudian doce ratas tratadas con escopolamina por grupo. El experimento incluye, además, un grupo control normal que recibe solución salina en lugar de escopolamina. La sustancia de prueba se evalúa en 3 dosis, administradas por vía p.o. 5-60 minutos antes de cada sesión de entrenamiento y de la prueba de sondeo, es decir 30 minutos antes de la escopolamina, y se compara con un grupo control de vehículo. Por lo tanto, el experimento incluirá 5 grupos.
Los datos se analizan mediante la comparación de los grupos tratados con control de escopolamina mediante el uso de pruebas t de Student no pareadas.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental.
Ejemplo 23: Modelo de cognición - Prueba de reconocimiento de objetos nuevos
La prueba de reconocimiento de objetos consiste en un ensayo de muestra y una prueba de elección separada de un intervalo inter-ensayo (ITI). En la prueba de muestra, se presentan dos objetos idénticos. En la prueba de elección, uno de los objetos presentados en la prueba de muestra (denominados como objetos familiares) se sustituye por un objeto nuevo. Las ratas son capaces de discriminar entre el objeto familiar y el objeto nuevo cuando el ITI es de 1 h o menos, pero no con un ITI de 24 h (Deschaux O, y otros, 1997, Neurosci. Lett. 222, 159-162; Ennaceur A, y otros, 1989., Behav. Brain Res. 33, 197-207; Puma C, Bizot jC, 1998, Neurosci. Lett. 248, 183-186). Por lo tanto, la tarea de reconocimiento de objetos con un ITI de 1 h permite detectar el efecto amnésico de un fármaco y si este efecto amnésico es reducido por otro fármaco. La prueba de reconocimiento de objetos con un ITI de 24 h permite detectar una mejora de la memoria inducida por un fármaco. Numerosos estudios se han realizado para evaluar los efectos de los fármacos sobre la memoria. Por ejemplo, estudios anteriores demostraron que la nicotina mejora la memoria en la condición de un ITI de 24 h y disminuye la amnesia inducida por escopolamina en la condición de ITI de 1 h.
Métodos: La tarea de reconocimiento de objetos se ejecuta como se describe en Bizot JC, y otros, 2005 Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 29:928-935.
Sujetos: Se usaron ratas Wistar viejas, macho, de 8 semanas de edad
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Aparato: El aparato de la tarea de reconocimiento de objetos es una caja abierta fabricada de Plexiglás opaco y gris (40 cm L, 40 cm W, 40 cm H). Los objetos a discriminar (3.5 cm L, 6 cm H) difieren tanto en color como n forma. Son una forma redonda blanca de botón de puerta y una forma de estrella gris de botón de puerta. Aparentemente, no tienen importancia natural para las ratas y nunca se han asociado con el reforzamiento. Para descartar la posibilidad de restos de olores en los objetos y por lo tanto, la dependencia de la capacidad de reconocimiento de las ratas en la señal olfativa, los objetos y el suelo de la caja se lavan con agua limpia y se secan entre cada prueba. Una cámara de video se fija al techo encima de la caja para monitorear la actividad del animal.
Los experimentos se realizaron en 2 días (amnesia inducida por escopolamina) o 3 días (olvido natural). La prueba consiste en una prueba de habituación de 15-min (día 1), una prueba de muestra de 3 min (día 2) y una prueba de elección de 3 min (día 2 o día 3).
Experimento de amnesia inducida por escopolamina. Este experimento se realiza en ratas subdivididas al azar en diferentes grupos (n= 12/grupo) que reciben:
- grupo control: 1 inyección intraperitoneal (IP) de solución salina 30 min antes de la prueba (prueba de muestra) 1 inyección per-os (PO) de solución salina 15 min antes de la prueba y.
- Grupo de escopolamina: 1 Inyección IP de escopolamina (0.1 mg/kg) 30 min antes de la prueba y 1 inyección PO de solución salina 15 min antes de la prueba (prueba de muestra)
- Grupo de escopolamina + Nicotina: 1 inyección IP de escopolamina (0.1 mg/kg) 30 min antes de la prueba y 1 inyección IP de nicotina (0.4 mg/kg) 20 min antes de la prueba (prueba de muestra)
- Grupos de escopolamina + compuesto de prueba representativo: 1 inyección IP de escopolamina (0.1 mg/kg) 30 min antes de la prueba (prueba de muestra) y 1 inyección PO de diferentes dosis del compuesto de prueba 15 min antes de la prueba (prueba de muestra).
En el Día 1 La rata se deja explorar el aparato durante 15 min. (prueba de habituación). En el día 2 la rata se coloca en el aparato con dos objetos idénticos presentados en dos esquinas de la caja durante 3 min (prueba de muestra). Después de 1 hr la rata se coloca en el aparato con dos objetos; uno de los objetos presentados en la prueba de muestra (denominado como objeto familiar) se sustituye por un nuevo objeto. (Prueba de elección).
Experimento de olvido natural: Este experimento se realiza en ratas subdivididas aleatoriamente en diferentes grupos (n= 12/grupo) que reciben
- Grupo control: 1 inyección intraperitoneal (IP) de solución salina 20 min antes de la prueba y 1 inyección per-os (PO) de solución salina 15 min antes de la prueba.
- Grupo de nicotina: 1 inyección IP de nicotina (0.2 mg/kg) 20 min antes de la prueba y 1 inyección PO de solución salina 15 min antes de la prueba.
- Grupo del compuesto de prueba representativo: 1 inyección IP de solución salina 20 min antes de la prueba y 1 inyección PO del compuesto de prueba a varias dosis 15 min antes de la prueba.
En el Día 1 La rata se deja explorar el aparato durante 15 min. (prueba de habituación). En el día 2 la rata se coloca en el aparato con dos objetos idénticos presentados en dos esquinas de la caja durante 3 min (prueba de muestra). Veinticuatro horas más tarde (día 3) la rata se coloca en el aparato con dos objetos; uno de los objetos presentados en la prueba de muestra (denominado objeto familiar) se sustituye por un objeto nuevo.
Datos: La medición básica es el tiempo que las ratas dedican a explorar los objetos durante la prueba de muestra y durante la prueba de elección. Los índices de las tareas de reconocimiento de objetos incluyen los siguientes parámetros:
- El tiempo total de exploración en la prueba de muestra,
- El tiempo total de exploración en la prueba de elección.
- La diferencia entre el tiempo de exploración del nuevo objeto y el objeto familiar en la prueba de elección (N-F).
- El índice de discriminación, que es 100*(N-F) dividido por el tiempo total de exploración en la prueba de elección.
Los datos se analizan mediante ANOVA y prueba t de Student.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental al disminuir la amnesia inducida por escopolamina en la tarea de reconocimiento de objetos con un intervalo entre pruebas de 1 h (ITI 1hr) y mejorar la memoria en una situación de olvido natural, es decir, en la tarea de reconocimiento de objetos con un intervalo entre pruebas de 24 horas (ITI 24hr).
Ejemplo 24: Prueba de depresión: Prueba de suspensión por la cola en el ratón
La prueba de suspensión por la cola es uno de los modelos denominados de “desesperación conductual” y se usan para la búsqueda de fármacos antidepresivos. Se basan en un fenómeno común: un animal normal sometido a una situación adversa sin solución alterna entre agitación e inmovilidad. El motivo de la agitación es la búsqueda, donde se consume gran cantidad de energía, mientras que el propósito de la inmovilidad es la conservación de la energía. Los animales
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después de un tratamiento antidepresivo luchan más incluso en una situación desesperada, y dedican menos tiempo a la inmovilidad. Algunos aspectos de la depresión neurótica pueden estudiarse con ayuda de estos modelos.
El presente método detecta actividad antidepresiva y ansiolítica y sigue el descrito por Stéru y otros, (Psychopharmacology, 85, 367-370, 1985;. Los roedores, suspendidos por la cola, se inmovilizan rápidamente. Los antidepresivos disminuyen la duración de la inmovilidad, mientras que los agentes tranquilizantes aumentan la duración de la inmovilidad. El comportamiento del animal se registra durante 6 minutos automáticamente mediante el uso de un dispositivo computarizado (Itematic-TST) desarrollado por Stéru y otros, (Prog. Neuropsychopharmacol. Exp. Psychiatry, 11, 659-671, 1987;. Se estudian 6 ratones simultáneamente. Se registran dos parámetros:
- Duración de la inmovilidad: este parámetro es análogo al usado en la prueba de “desesperación conductual” (Arch. Int. Pharmacodyn. Ther., 229, 327-336, 1977;.
- Energía de los movimientos: este parámetro, basado en la energía gastada por el animal, es independiente de la duración de la actividad.
Se estudian 10 ratones por grupo. La prueba no se realiza a ciegas pero el esquema de aleatorización generado por Itematic-TST asegura una distribución homogénea de los tratamientos tanto en el tiempo como en la posición de cada animal en el aparato. La sustancia de prueba se evalúa en 3 dosis, administradas por vía p.o. 5-60 minutos antes de la prueba, y se compara con un grupo control de vehículo. La imipramina (128 mg/kg p.o.) y el diazepam (8 mg/kg p.o.), administrados en las mismas condiciones experimentales, se usan como sustancias de referencia.
Por lo tanto, el experimento, incluye 6 grupos. Los datos se analizan mediante la comparación de los grupos tratados con el control de vehículo con el uso de pruebas t de Student no pareadas.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental.
Ejemplo 25: Deterioro cognitivo en método de esquizofrenia
El deterioro cognitivo se asocia frecuentemente con esquizofrenia y ha llegado a reconocerse como un elemento central del trastorno, teniendo en cuenta la recuperación del paciente y su reintegración a la sociedad.
Recientemente un modelo farmacológico de disfunciones cognitivas en esquizofrenia ha atraído particular interés, el cual se basa en los efectos de antagonistas del receptor de NMDA de glutamato tal como fenciclidina (PCP) y ketamina (Javitt y otros, Am. J. Psychiatry, 1991 Octubre, 148(10), 1301-1308) que deterioran la atención y aumentan la “impulsividad” y la perseveración “compulsiva” en ratones que realizan una tarea compleja (Greco y otros, Psychopharmacology (Berl), 2005 Abr, 179(1), 68-76).
Materiales y Métodos
Animales: Se usaron ratones DBA/2 N machos (Charles River, Italia). Los ratones pesaban 25-30 g al inicio de los experimentos, y se alojaron en condiciones controladas de temperatura (21 °C) con un ciclo de 12 h luz y 12 h oscuridad (luz a las 7:00 am-7:00 pm). El alimento (Rieper, Italia) estuvo disponible ad libitum. Los animales tenían dos horas de acceso al agua al final de cada prueba diaria.
El aparato para la tarea del tiempo de reacción en serie con cinco elecciones: El aparato de prueba consistió en cuatro cámaras de 21.6 x 17.8 x 12.7 cm (Med Associates Inc. EE. UU.), como se describió previamente (Greco y otros, Psychopharmacology (Berl), 2005, abril, 179(1), 68-76). Los estímulos y el registro de las respuestas, se gestionaron mediante un paquete SmartCtrl™ 8 In/16 Out (Med Associates Inc. USA) con interfase adicional mediante MED-PC para Windows (Med Associates Inc. EE. UU.). El programa de ejecución para la tarea de 5-CSRT se escribió especialmente.
Procedimientos conductuales: habituación al reforzador de líquido y a la punción de la nariz en los orificios. Los ratones se manipularon durante una semana y se registró su peso corporal. Después se les privó de agua al permitirles acceso al agua durante 2 h por la tarde hasta que su peso corporal se estabilizó (8 días). Después, durante los dos días siguientes los ratones se habituaron en sus cajas al reforzador (solución de sacarosa al 10 %) usado posteriormente en los procedimientos operantes. En los dos días siguientes los ratones se habituaron a las cajas operantes. Durante esta etapa, la solución de sacarosa al 10 % estuvo disponible en una pequeña taza colocada debajo del orificio del receptáculo de la caja. Primero, los ratones tenían que aprender que cada 5 seg la recompensa de líquido estaba disponible en un pequeño vaso en el orificio del receptáculo. Durante este periodo se registraron las entradas de la cabeza. Durante el siguiente periodo, los ratones fueron entrenados para introducir sus narices en los orificios iluminados. Inmediatamente después de meterse en el receptáculo de agua se encendía un LED en la parte posterior de uno de los orificios. La acción de introducir la nariz en el orificio iluminado extinguía el estímulo luminoso y el cazo con líquido proporcionaba una recompensa de 0.01 ml de líquido en el orificio del receptáculo. Cualquier respuesta en uno de los otros cuatro orificios no tenía consecuencias y no se registraba. El estímulo luminoso se presentó en todos los cinco orificios en orden aleatorio. Un ratón se cambió a la tarea de 5-CSRT después que había completado al menos 50 ensayos de introducir la nariz con recompensa en una sesión de 30 min.
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Tarea del tiempo de reacción en serie con cinco opciones. El inicio de la sesión se indicó mediante la iluminación de la luz de la caja y el suministro de una recompensa de 0.01 ml de líquido. Con la introducción de la nariz en el orificio del receptáculo comenzó la primera prueba. Después de un retardo fijo (el intervalo entre pruebas, ITI), el LED en la parte posterior de uno de los orificios se encendió durante un corto periodo. El estímulo del lEd se presentó el mismo número de veces en cada orificio durante una sesión completa, con el orden de presentación aleatorizado por la computadora. Mientras la luz estaba encendida, y durante un corto periodo después de eso (la espera limitada), las respuestas en el orificio que estaba iluminado (respuesta correcta) resultó en la recompensa de líquido. Las respuestas en los orificios que no estaban iluminados (respuestas incorrectas) o la falta de respuesta dentro de la espera limitada (omisiones) provocaron que las luces de la caja se apagaran durante un periodo corto (tiempo de espera). Las respuestas en los orificios mientras la luz de la caja estaba apagada reinician el tiempo de espera. Después de la entrega de la recompensa de líquido, o al final del tiempo de espera, el ratón comenzó la prueba siguiente al introducir su nariz en el orificio del receptáculo. Las respuestas en los orificios después de una respuesta correcta (respuestas perseverantes), o después del final del tiempo de espera antes de introducir la nariz en el orificio del receptáculo, resultaron en un periodo de tiempo de espera. Las respuestas en los orificios durante el ITI (respuestas anticipadas) también resultaron en un periodo de tiempo de espera. Después de las respuestas anticipadas una introducción de la nariz en el orificio del receptáculo reinicia la prueba actual. Cada sesión diaria consistió en 100 ensayos o 30 min de pruebas, lo que se completase primero, después de lo cual todas las luces se apagaron y ninguna otra respuesta tenía efecto. En la primera sesión del programa de pruebas, cada uno de los estímulos y la espera limitada duró 1 min y, en dependencia del desempeño individual, se redujeron progresivamente a 1 seg. La duración del estímulo se redujo en la siguiente secuencia: 60, 30, 10, 5, 2.5, 2, 1.5 y 1 seg (línea de referencia). El ITI y el tiempo de espera ambos duraron 2 seg durante la primera sesión y el ITI se aumentó a un 5 seg en sesiones posteriores; el tiempo de espera no se cambió. A lo largo de todo el periodo de entrenamiento y de los experimentos cada ratón tuvo una sesión por día en una tarea de 5-CSRT.
Fármacos y esquemas de tratamiento. El compuesto de prueba se disuelve en agua y se administra intraperitonealmente (i.p) a la dosis de 10 mg/kg. Cinco minutos después del tratamiento los ratones se inyectaron con vehículo (solución salina) o PCP (1.5 mg/kg) y 10 min más tarde comenzaron la sesión de prueba. En cada experimento las diversas combinaciones del compuesto de prueba con vehículo o PCP se administran de acuerdo con un diseño de cuadrado Latino. Se dejan al menos 48 h entre los días de pruebas con el fármaco. Durante estos días intermedios los ratones se prueban en la tarea de 5-CSRT para reestablecer el desempeño de referencia y para comprobar cualquier efecto residual de los fármacos.
Análisis estadístico: Las principales variables dependientes seleccionadas para el análisis son: (a) el porcentaje de respuestas correctas (total de respuestas correctas/total de respuestas correctas + total de incorrectas x 100); (b) porcentaje de omisiones (total de omisiones/ total de respuestas correctas + total de respuestas incorrectas + total de omisiones x 100); (c) el número de respuestas anticipadas en los orificios durante el ITI; (d) el número de respuestas perseverantes en los orificios después de una respuesta correcta. Las respuestas correctas y las omisiones, como porcentaje, se transforman de acuerdo con la fórmula 2arcsen(SQRT (%X/100)), para normalizar las distribuciones de acuerdo con el modelo de ANOVA (Winer, 1971).
Los efectos del compuesto de prueba (n=12) en déficits inducidos por PCP en la tarea de 5-CSRT se analizaron independientemente mediante un ANOVA 2x2 dentro de los sujetos con los factores Fármaco (compuesto de prueba) y PCP. Posteriormente la media del grupo de tratamiento se compara mediante el uso de una prueba post-hoc de Tukey- Kramer. El programa informático de estadística (SAS Institute Inc., USA) se ejecutó en una computadora Micro vAx 3500 (Digital, Estados Unidos).
La PCP provoca un profundo efecto en el desempeño atencional de los ratones DBA/2 N al aumentar las respuestas anticipadas y perseverantes.
Los compuestos representativos de esta invención, administrados a 10 mg/Kg i.p., revirtieron el aumento inducido por PCP en las respuestas anticipadas y perseverantes, lo que apoya el uso de este tipo de compuestos para el tratamiento de trastornos psiquiátricos.
Ejemplo 26: Inhibición del sobresalto por prepulso en ratones y ratas.
La inhibición por prepulsos (PPI) es un fenómeno entre especies (es decir, está presente en mamíferos desde ratones hasta seres humanos), sin embargo está relativamente ausente en pacientes esquizofrénicos. Se considera que la capacidad disminuida para filtrar entre una estimulación auditiva irrelevante es una característica que contribuye a determinadas manifestaciones de estas afecciones que incluyen falta de atención, distracción, y déficits cognitivos. El procedimiento de PPI se usa para evaluar la capacidad del sujeto para “dejar entrar” o filtrar la información ambiental. En la acústica (modelo de sobresalto) de la regulación sensorimotora un estímulo acústico débil (prepulso) disminuye la respuesta refleja de estremecimiento (sobresalto) producida por un segundo estímulo, más intenso (el pulso). Los fármacos como la dizocilpina (MK-801) o anfetamina interrumpen la PPI y representan un modelo animal de esquizofrenia. Los fármacos antipsicóticos son capaces de impedir el déficit de PPI. La prueba es muy útil en la búsqueda de fármacos antipsicóticos potenciales.
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Similarmente algunas cepas de ratones tales como los DBA/J muestran un deterioro espontáneo de la PPI que puede invertirse por los fármacos antipsicóticos y también se usan como modelo animal de esquizofrenia.
PPI en rata: Se usaron ratas Wistar o Sprague-Dawley (con peso de 200 a 300 g) o ratones DBA/2J de 3 semanas de edad. El aparato de sobresalto (San Diego Instruments, CA) consistió en 12 cajas plásticas transparentes, colocadas individualmente en gabinetes a prueba de sonidos, equipadas con una plataforma móvil como suelo unida a un sensor que registra los movimientos verticales de la plataforma. La reacción de sobresalto se evocó mediante estímulos acústicos emitidos por un altavoz suspendido encima de las cajas y conectado a un generador acústico. La fuerza transitoria que resulta de los movimientos de la plataforma evocados por la reacción de sobresalto se registró con una computadora durante una ventana de registro de 200 ms medida a partir del inicio del estímulo acústico, digitalizada y almacenada en la computadora para una evaluación adicional. La amplitud de la respuesta de sobresalto se midió durante toda la ventana de registro (200 ms) y se tomó un valor promedio de la amplitud para una evaluación adicional. Las ratas control y tratadas se colocaron en las cajas de pruebas individualmente. Después de 5 min de habituación (ruido blanco de fondo, 65 dB), se usaron dos tipos de estímulos acústicos en orden aleatorio: un estímulo acústico solo [120 dB, 40 ms, (P)] o el estímulo precedido por un prepulso [75 dB, 20 ms (PP)] aplicado 100 ms antes del estímulo. Durante cada sesión experimental se presentaron 20 ensayos de cada tipo con un intervalo entre estímulos de 20 s. Las amplitudes se promediaron para cada animal individual, separadamente para ambos tipos de ensayos (estímulo solo o estímulo precedido por el prepulso). El por ciento de PPI se calculó con la siguiente fórmula: 100 -[(media de la amplitud del sobresalto para los ensayos con prepulso + pulso/media de la amplitud del sobresalto para los ensayos con pulso solamente) x 100] es decir 100 -(PP/P) x 100. Un valor alto del %PPI calculado indicó que el prepulso inhibió la respuesta a un estímulo con pulso, mientras que un valor bajo indicó una inhibición más débil por el prepulso. Los déficits de regulación sensorimotora se indujeron por MK-801 (0.2 mg/kg) administrado ip 5 min antes de la prueba o anfetamina (2.5 mg/kg) administrada sc 10 min antes de la prueba. Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental, al revertir el déficit de PPI inducido por MK-801 (Figura 4) o por anfetamina.
PPI en ratones DBA: Se usaron ratones DBA/2J y C57BL/6J machos de 3 semanas de edad.
La detección de la respuesta de sobresalto por estímulo acústico y PPI se realizó como se describe en Bortolato y otros, Psychopharmacology, 2007, Oct; 194(3): 361-9.
En cada experimento, los ratones se asignaron para recibir los compuestos de la invención o el vehículo y se probaron en la sesión de PPI mediante el uso de un diseño entre sujetos.
El por ciento de PPI se calculó con la siguiente fórmula: 100 -[(media de la amplitud del sobresalto para los ensayos con prepulso + pulso/media de la amplitud del sobresalto para los ensayos con pulso solamente) x 100] es decir 100 -(PP/P) x 100. La magnitud de la respuesta de sobresalto al estímulo acústico se evaluó como la respuesta promedio a todos los ensayos con pulso solamente, excluyendo el primer y último bloques de los cinco ensayos con pulso solamente presentados.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental al disminuir el déficit de PPI de los ratones BDA/2J.
(Figura 4: Efecto de clorhidrato de 2-[2-(3-butoxifenil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (NW-3509) en la interrupción de la PPI por MK-801 en ratas. Los datos se expresan como media + SEM de n = 10 animales. p<0.01 indica una diferencia estadísticamente significativa entre el vehículo y MK-801. *p<0.05 **p<0.01 indican diferencias estadísticamente significativas entre los animales tratados con vehículo + MK-801 y los animales tratados con clorhidrato de 2-[2-(3- butoxifenil)etilamino]-N,N-dimetilacetamida (NW-3509).
Análisis de varianza seguido por prueba de Dunnet).
Ejemplo 27: Deprivación del sueño paradójico en ratas.
Las relaciones psicopatológicas y neurobiológicas entre el sueño y los fenómenos psicóticos se han evidenciado mediante un número de observaciones clínicas clásicas e informes psicológicos. Los pacientes esquizofrénicos exhiben un insomnio severo, junto con una serie de alteraciones estructurales de la arquitectura del sueño, tal como una reducción en la latencia y duración del sueño REM, así como también una disminución en el tiempo de SWS (Sueño de onda lenta). Numerosos estudios han demostrado que la deprivación prolongada del sueño de hecho conduce a una serie de trastornos psicológicos transitorios, que incluyen alteración de las construcciones verbales, pensamiento desorganizado, despersonalización y cambios perceptuales, que van desde trastornos menores y sensaciones corporales anormales hasta alucinaciones acústicas y visuales complejas. Típicamente, estos trastornos son indistinguibles de los fenómenos psicóticos, pero normalmente se extinguen después de un sueño de recuperación prolongado. Numerosos estudios han documentado que después de un periodo de deprivación forzada del sueño, las ratas exhiben durante un tiempo limitado una serie paradójica de cambios conductuales, tales como conducta estereotipada e hiperactividad. Además, la deprivación del sueño en las ratas potencia la reacción de sobresalto e interrumpe la PPI, este efecto es dependiente del tiempo y reversible por los fármacos antipsicóticos (Gessa, GL y otros
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(1995) European Neuropsychopharmacology 5, 89-93). Tales fenómenos se interpretan comúnmente como relevantes para la psicosis, ya que también se producen típicamente por los agentes psicotomiméticos en ratas. El modelo de deprivación del sueño en ratas puede considerarse un modelo de manía.
Animales: Se usaron ratas Sprague-Dawley (con un peso de 200 a 300 gramos).
Métodos: El procedimiento para inducir privación del sueño paradójico (SD) en ratas se basa en el método de la plataforma (modificado por Jouvet, y otros (1964). Journal of Physiology (Paris), 56, 381). Las ratas se mantuvieron en una pequeña plataforma de Plexiglas (7 cm de diámetro) dentro de un tanque profundo lleno con agua. Cada plataforma estaba rodeada por agua hasta 1 cm, por debajo de la superficie. Los gránulos de comida y las botellas de agua se ubicaron en una cuadrícula en la parte superior del tanque. Durante todo el estudio de Sd, la temperatura de la habitación de experimentación y el agua dentro del tanque se mantuvieron a 23 ±1 °C. Las ratas control se ponen en la habitación de experimentación, en sus cajas o en tanques de agua equivalentes a los usados para la SD, pero con una plataforma de 12 cm de diámetro, lo cual posibilita que puedan alcanzar el sueño REM sin caer en el agua. Al final del periodo de SD (72 hr), las ratas se secaron inmediatamente y se colocaron en las cámaras de sobresalto (para la medición de PPI) o en las cajas de actividad (hiperactividad) para las pruebas conductuales. El agua en el tanque se cambió diariamente a lo largo del periodo de SD. Las ratas control se mantuvieron en la misma habitación que las ratas con deprivación del sueño en toda la duración de su SD. Los compuestos a analizar se administraron antes de las pruebas de PPI o conductuales.
Análisis de datos: Para cada animal, la media de las amplitudes del sobresalto para la primera y segunda mitades del segundo periodo de la sesión (bloques, seis ensayos con pulso solamente cada una) se analizaron con un análisis de varianza de dos vías o de tres vías (ANOVA), con pretratamiento (donde estuvo presente) y tratamiento como factores entre sujetos y los bloques como medidas repetidas. El por ciento de PPI se calculó con la siguiente fórmula: 100 - [(media de la amplitud del sobresalto para ensayos con prepulso + pulso/media de la amplitud del sobresalto para ensayos con pulso solamente) x 100] es decir 100 -(PP/P) x 100 y se analizó en ANOVA multifactorial (con diseño específico y comparaciones señaladas más adelante para cada experimento) con las diferentes combinaciones de inyecciones para el pretratamiento y tratamiento como factores entre sujetos y tipos de ensayos como medidas repetidas. Los análisis post hoc se realizaron mediante el uso de la prueba de Tukey. Los datos de actividad locomotora se analizaron mediante el uso del análisis de varianza (ANOVA) de una y dos vías para medidas repetidas cuando fue apropiado, seguido por la prueba de Tukey como pruebas post-hoc.
Los compuestos representativos administrados por vía oral o intraperitoneal o subcutánea de esta invención fueron activos en este modelo experimental al disminuir el déficit de PPI y la hiperactividad inducida por la deprivación del sueño.
Ejemplo 28: Prueba de sensibilización conductual inducida por cocaína
La drogadicción es un comportamiento patológico caracterizado por la búsqueda y consumo compulsivos del fármaco. Un modelo animal de estos cambios conductuales es el aumento duradero en la actividad locomotora inducido por la administración repetida de fármacos psicoestimulantes en roedores (Robinson T. E. y Berridge K.C. Brain Res. Brain Res. Rev. (1993) 18, 247-91) conocido como sensibilización conductual inducida por fármacos. El efecto de los compuestos de prueba se evaluó en un modelo de sensibilización conductual inducida por cocaína en rata.
Aparato de actividad locomotora: Se usaron ratas Wistar machos con peso de 200-250 g a su llegada.
La actividad locomotora se midió en dieciséis cajas colgantes idénticas con alambre metálico cada una que medía 36 cm (L) x 25 cm (W) x 20 cm (H). Cada caja contenía dos conjuntos de fotoceldas con emisor-detector de luz infrarroja ubicadas a lo largo del eje longitudinal 1 cm por encima del suelo de rejilla y 8 cm de la parte frontal y posterior de la caja. El ruido de fondo se proporcionó por un generador de ruido blanco. El movimiento dentro de las cajas produjo interrupciones de las fotoceldas, que se registraron automáticamente por una computadora compatible con IBM.
Procedimiento de sensibilización y tratamiento: Los animales se habituaron a las cámaras de actividad locomotora durante 2-3 días consecutivos antes del experimento. Las ratas recibieron 5 inyecciones i.p. de cocaína diariamente (15 mg/kg) o solución salina y el compuesto de prueba (0.1-100 mg/kg) o su vehículo y la actividad locomotora se registró durante 3 h. Diez días después de la última inyección de cocaína o solución salina (día 15), los animales se retaron con 15 mg/kg de cocaína en ausencia del compuesto de prueba y la actividad locomotora se registró nuevamente durante 3 h.
Hacia el quinto día de tratamiento con cocaína, los animales pretratados i.p. con vehículo mostraron un aumento de la respuesta locomotora (20 % mayor que el primer día, p < 0.05). Diez días después de la última inyección de cocaína o solución salina, los animales se retaron con 15 mg/kg de cocaína en ausencia del compuesto de prueba y la actividad locomotora se registró nuevamente durante 3 h. Se espera que las ratas tratadas previamente con cocaína y que no han recibido el compuesto de prueba muestren un incremento de la respuesta de la actividad locomotora a la cocaína (30 % mayor que el primer día, p <0.05). Si las ratas que se han pretratado con el compuesto de prueba durante el tratamiento de 5 días con cocaína no mostraron un aumento en la actividad locomotora, se considera que el compuesto de prueba
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tiene un efecto de prevención de la adicción a fármacos psicoestimulantes. (Koob G. F., Sanna P. P., Bloom F. E. Neuron (1998) 21: 467-476; Robinson T. E., Berridge K. C. Brain Res Brain Res Rev (1993) 18: 247-291).
Análisis estadístico: Los datos (número total de interrupciones de los haces en 3 horas) se analizaron mediante el uso de un ANOVA de dos vías con medidas repetidas en un factor incluidos los cuatro grupos experimentales (es decir, solución salina/vehículo, solución salina/compuesto de prueba, cocaína/vehículo y cocaína/compuesto de prueba) y dos puntos de tiempo (día 1 y día 5) seguido por un análisis de efectos simples. Un segundo ANOVA de dos vías con medidas repetidas en un factor se usó para comparar el día 1 y el día del reto seguido por una prueba post hoc de Newman-Keuls.
Los compuestos administrados oralmente representativos de esta invención fueron activos en este modelo experimental.
Ejemplo 29: Irritación aguda de la vejiga por ácido acético en ratas
Los experimentos se realizaron mediante el uso de ratas Sprague Dawley hembras adultas anestesiadas (170-200 g). Se insertó un catéter (PE-50) por medio de una incisión abdominal en la línea media hacia la vejiga a través del domo vesical, y después se midió presión intravesical para registrar la actividad de la vejiga durante la infusión continua de ácido acético al 0.15 %. La infusión intravesical continua de ácido acético irrita la vejiga y disminuye los intervalos de intercontracción (ICI) en las ratas anestesiadas. Los ICI, la presión de contracción máxima, y los umbrales de presión que inducen la contracción refleja de la vejiga se midieron antes y después la infusión intravesical de ácido acético en las ratas tratadas con compuestos de la invención.
Los compuestos representativos de esta invención administrados por vía intraperitoneal o intravenosa fueron activos en este modelo experimental.
Ejemplo 30: Irritación intermedia de la vejiga mediante ciclofosfamida (CYP) en ratas
Los experimentos se realizaron mediante el uso de ratas Sprague Dawley hembras adultas despiertas y anestesiadas (170-200 g). La cistitis química se indujo mediante CYP, que se metaboliza a acroleína, un irritante que se elimina en la orina. La CYP (150 mg/kg/i.p.) se administró un día antes del experimento. El pre-tratamiento con CYP provoca la irritación de la vejiga y vaciamientos muy frecuentes con un ICI de aproximadamente 150-200 segundos entre vaciados.
Los compuestos representativos de esta invención administrados por vía intraperitoneal o intravenosa aumentaron los ICI en las ratas despiertas y anestesiadas usadas en este modelo experimental.
Ejemplo 31: Prueba de migraña en ratas
Animales y cirugía: Las ratas Wistar macho (250-350 g) se anestesiaron con pentobarbital sódico (50 mg/kg i.p) disuelto en solución salina.
La tráquea y la arteria femoral izquierda se canularon para la ventilación artificial (55 pulsos/min) y para la medición de la presión sanguínea media (MBP) respectivamente. La vena femoral se canuló para la administración intravenosa de los agentes de prueba.
La temperatura corporal se mantuvo en 37-38 °C mediante el control automático de una manta térmica. Los animales se colocaron en un marco estereotáxico y se realizó una incisión longitudinal en el cuero cabelludo. Se realizó una trepanación en el cráneo y se introdujo un electrodo bipolar de acero inoxidable (Plastic One MS 306) en la rama oftálmica izquierda del ganglio trigémino (3.8 mm dorsal a bregma, 2.5 mm lateral a la línea media y 9.5 mm por debajo de la superficie dural) y se aseguró con cemento dental. La ubicación correcta del electrodo se confirmó mediante una breve estimulación eléctrica, que provocó el movimiento de la mandíbula debido una activación de las fibras del trigémino. Después de extraer el cerebro, se verificó visualmente la posición correcta del electrodo en la fibra, al final de cada experimento.
Se realizó un segundo orificio ipsilateral al electrodo (1.5 mm rostral a bregma, y 1.5 mm lateral a la sutura sagital) y se fijó una sonda de aguja (diámetro de la punta de 0.8 mm) de un flujómetro de láser Doppler apuntando con su punta a la rama de la arteria cerebral media (MCA) y el cambio del flujo sanguíneo cerebral (CBF) se registró en línea mediante el sistema de Laser Doppler PeriFlux 4001.
Los artefactos de la lectura del láser Doppler durante la estimulación eléctrica del ganglio trigémino debido a los movimientos musculares se evitaron mediante un bolo de inyección i.v. del bloqueador neuromuscular bromuro de pancuronio (0.6 mg/kg i.v).
La anestesia y el bloqueo neuromuscular se mantuvieron a lo largo del experimento con una infusión de pentobarbital sódico y pancuronio (12.5 mg/kg/h + 2.4 mg/kg/h, respectivamente).
Protocolo experimental: Al final de la cirugía, se realizó una pausa de treinta minutos para estabilizar los parámetros medidos.
El CBF en reposo se incrementó mediante la estimulación eléctrica con un pulso rectangular de 0.5 ms de duración, 15 10 Hz, 0.5-1 mA por periodos de 30 s. Después de promediar dos estimulaciones previas al fármaco, se administraron el
vehículo o los fármacos.
Los compuestos representativos de esta invención administrados por vía intravenosa redujeron el aumento del flujo sanguíneo inducido por la estimulación del trigémino.
10

Claims (31)

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    50
    Reivindicaciones
    1.
    Un compuesto de la Fórmula general (I):
    imagen1
    en donde:
    X es -O-, -S-o -SO2-;
    Y es hidrógeno, OH u O(C1-C4)alquilo; Z es =O o =S;
    R es (C3-C1ü)alquilo; w-trifluoro(C3-C10)alquilo;
    R1 y R2 son, independientemente, hidrógeno, hidroxi, (C1-C8)alcoxi, (C1-C8) alquiltio, halo, trifluorometilo o 2,2,2- trifluoroetilo; o uno de R1 y R2 está en posición orto respecto a R-X-y, en conjunto con el mismo R-X-, representa un
    imagen2
    grupo donde R0 es (C2-Cg)alquilo;
    R3 y R'3 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C4)alquilo;
    R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno, (C1-C4)alquilo; o R4 es hidrógeno y R5 es un grupo seleccionado de -CH2-OH, -CH2-O-(C1-Ca)alquilo, -CH(CH3)-OH,
    -(CH2)2-S-CH3, bencilo y 4-hidroxibencilo; o R4 y R5, en conjunto con el átomo de carbono adyacente, forman un residuo de (C3-Ca)cicloalquilo;
    Ra y R7 son independientemente hidrógeno o (C1-Ca)alquilo; o en conjunto con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O-, -S- y -NR8-donde R8es hidrógeno o (C1-Ca) alquilo;
    con la condición de que cuando X es -S-o -SO2-, entonces Y no es OH u O(C1-C4) alquilo; si es el caso, ya sea como isómero óptico único en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.
  2. 2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:
    X es -O-, -S-;
    Y es hidrógeno, OH u O(C1-C3)alquilo;
    Z es =O o =S;
    R es (C4-C7)alquilo o w-trifluoro(C4-Ca)alquilo;
    R1 y R2 son, independientemente, hidrógeno, (C-i-C4)alcoxi, halo, trifluorometilo o 2,2,2-trifluoroetilo; o uno de R1 y R2 está en posición orto respecto a R-X-y, en conjunto con el mismo R-X-, representan un
    o
    imagen3
    grupo donde R0 es (C2-C5)alquilo;
    R3 y R'3 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C3)alquilo;
    R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C4)alquilo; o R4 es hidrógeno y R5 es un grupo seleccionado de-CH2-OH, -CH2-O-(C1-C3)alquilo, -(CH2)2-S-CH3, bencilo y 4-hidroxibencilo;
    Ra y R7 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C4)alquilo; o en conjunto con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-a miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O- y -NR8-donde R8 es hidrógeno o (C1-C3) alquilo; con la condición de que cuando X es -S-, entonces Y no es OH u O(C1-C3) alquilo;
    si es el caso, ya sea como isómero óptico único en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.
    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde: X es -O-, -S-;
    Y es hidrógeno u O(C1-C3)alquilo;
    Z es =O o =S;
    R es (C4-C7)alquilo o w-trifluoro(C4-Ca)alquilo;
    R1 y R2 son, independientemente, hidrógeno, (C1-C3)alcoxi, flúor, cloro, trifluorometilo o 2,2,2-trifluoroetilo; o uno de R1 y R2está en posición orto respecto a R-X- y en conjunto con el mismo R-X-, representa un
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    grupo donde Ro es (C3-C4)alquilo;
    R3 y R'3 son, independientemente, hidrógeno o (Ci-C3)alquilo;
    R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C4)alquilo; o R4 es hidrógeno y R5 es un grupo seleccionado de -CH2-OH, -CH2-O-(C1-C3)alquilo, bencilo y 4-hidroxibencilo;
    R6 y R7 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C3)alquilo; o en conjunto
    con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O- y -NR8-, donde R8 es hidrógeno o (C1-C3) alquilo; con la condición de que cuando X es -S-, entonces Y no es O(C1-C3) alquilo;
    si es el caso, ya sea como isómero óptico único en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.
    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:
    X es -O-;
    Y es hidrógeno;
    Z es =O;
    R es (C4-C6)alquilo;
    R1 y R2 son, independientemente, hidrógeno o halo, preferentemente flúor;
    R3, R'3, R4 y R5 son hidrógeno;
    R6 y R7 son, independientemente, hidrógeno o (C1-C3)alquilo;
    si es el caso, ya sea como isómero óptico único en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.
    Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que se selecciona de:
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-acetamida
    2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-acetamida
    2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-acetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
    2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
    2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-N-metilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butilsulfonilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-(N'-hidroxi)etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-(N'-metoxi)etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-(N'-propoxi)etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetil-tioacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-2-metilpropilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-{2-[3-(4,4,4-Trifluorobutoxi)fenil]-etilamino}-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butiltiofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxi-2-clorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxi-2-fluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxi-4-metoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dietilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dipropilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dibutilacetamida
    2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-1-pirrolidin-1 -il-etan-1 -ona
    2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-1 -pirrolidin-1 -il-etan-1 -ona
    2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-1-pirrolidin-1-il-etan-1-ona
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-3-hidroxi-N,N-dimetilpropanamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-3-metoxi-N,N-dimetilpropanamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-3-propoxi-N,N-dimetilpropanamida
    2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida
    2-[2-(3-Pentiloxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida
    2-[2-(3-Hexiloxifenil)-etilamino]-2,N,N-trimetilpropanamida
    (S)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-propanamida
    (S)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N-metilpropanamida
    (S)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
    (R)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-propanamida
    (R)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N-metilpropanamida
    (R)-2-[2-(3-Butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilpropanamida
    2-[2-(3-Butoxi-2-trifluorometilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxi-4-trifluorometilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
    2-[2-(3-Butoxi-5-trifluorometilfenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida
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    si es el caso, ya sea como isómero óptico único en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables, preferentemente su sal con ácido clorhídrico o metanosulfónico.
  3. 6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 que es 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida, 2-
    [2-(3-butoxi-2,6-difluorofenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida, 2-[2-(3-pentiloxifenil)-etilamino]-N,N-
    dimetilacetamida, o 2-[2-(3-hexiloxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida, y las sales farmacéuticamente aceptables de estos.
  4. 7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 6 que es 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida o una sal farmacéuticamente aceptable de este.
  5. 8. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 6 y 7 en donde la sal farmacéuticamente aceptable es la sal de clorhidrato o de metanosulfonato.
  6. 9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:
    X es -SO2-; o
    Y es OH u O(C-i-C4)alquilo; o Z es =S; o
    R es (Cg-Cio)alquilo o w-trifluoro(C3-Cio)alquilo; o Ri y/o R2 son diferentes de hidrógeno; o R3 y R'3 son diferentes de hidrógeno; o
    R4 y R5 son diferentes de hidrógeno, pero no forman un residuo (C3-C6)cicloalquilo cuando se toman en conjunto con el átomo de carbono adyacente; o
    R6 y R7, en conjunto con el átomo de nitrógeno adyacente forman un heterociclo saturado monocíclico de 5-6 miembros, que contiene opcionalmente un heteroátomo adicional escogido entre -O-, -S- y -NRa-, donde Re es hidrógeno o (C1-C6) alquilo;
    con la condición de que cuando X es -S-o -SO2-, entonces Y no es OH u O(Ci-C4)alquilo;
    si es el caso, ya sea como isómero óptico único en la forma aislada o mezcla de estos en cualquier proporción y sus sales farmacéuticamente aceptables.
  7. 10. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación de la 1 a la 9 para usar como un medicamento.
  8. 11. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 para usar como un medicamento activo como modulador de canales de sodio y/o calcio para el tratamiento de patologías donde dichos mecanismo(s) anteriores juega(n) un rol patológico, que es un trastorno neurológico, cognitivo, psiquiátrico, inflamatorio, urogenital o gastrointestinal, donde dicho medicamento está sustancialmente libre de cualquier actividad inhibidora de MAO o con una actividad inhibidora de MAO significativamente reducida.
  9. 12. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 2, 3 y 4 para usar de acuerdo con la reivindicación 11.
  10. 13. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 para usar de acuerdo con la reivindicación 11.
  11. 14. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 6 para usar de acuerdo con la reivindicación 11.
  12. 15. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 7 para usar de acuerdo con la reivindicación 11.
  13. 16. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la
    reivindicación 11, en donde el trastorno es un trastorno neurológico seleccionado de dolor y migraña.
  14. 17. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación 16 en donde el dolor es un síndrome de dolor neuropático o un síndrome de dolor inflamatorio.
  15. 18. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación 16 en donde el dolor es un dolor agudo o crónico.
  16. 19. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el trastorno es un trastorno neurológico seleccionado de enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, epilepsia, síndrome de piernas inquietas, enfermedad cerebrovascular o isquemia cerebral.
  17. 20. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el trastorno es un proceso inflamatorio que afecta todos los sistemas corporales que se selecciona de una afección artrítica, un trastorno que afecta la piel y tejidos relacionados, un trastorno del sistema respiratorio o un trastorno del sistema inmunitario y endocrino.
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  18. 21. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el trastorno es un trastorno cognitivo y/o psiquiátrico seleccionado de deterioro cognitivo leve, depresión, trastorno bipolar, manía, esquizofrenia, psicosis, ansiedad y adicción.
  19. 22. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el trastorno es un trastorno urogenital.
  20. 23. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el trastorno es un trastorno gastrointestinal.
  21. 24. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con cualquiera de las
    reivindicaciones 11 y de la 16 a la 23, en donde dicho compuesto se asocia con uno o más de otros agentes
    terapéuticos.
  22. 25. Una composición farmacéutica que contiene, como el ingrediente activo, un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 junto con materiales portadores orgánicos o inorgánicos terapéuticamente inertes y aceptables farmacéuticamente.
  23. 26. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación
    21, en donde dicho compuesto se asocia con uno o más de otros agentes terapéuticos de acuerdo con la
    reivindicación 24, en donde el otro agente terapéutico es un agente antipsicótico típico o atípico.
  24. 27. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 26 en donde el agente antipsicótico típico es haloperidol y el agente antipsicótico atípico se selecciona de risperidona y clozapina.
  25. 28. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 26, en donde dicho compuesto es 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]- N,N-dimetilacetamida o una sal farmacéuticamente aceptable de este, el agente antipsicótico típico es haloperidol y el agente antipsicótico atípico se selecciona de risperidona y clozapina.
  26. 29. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 26, en donde dicho compuesto es el clorhidrato o metanosulfonato de 2-[2-(3-butoxifenil)-etilamino]-N,N-dimetilacetamida y el agente antipsicótico típico es haloperidol y el agente antipsicótico atípico se selecciona de risperidona y clozapina.
  27. 30. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el trastorno es un trastorno del sistema inmunitario.
  28. 31. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 30, en donde el trastorno del sistema inmunitario es esclerosis múltiple u otros trastornos desmielinizantes.
  29. 32. Un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación de la 1 a la 9 para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones de la 11 a la 24 y de la 26 a la 31 donde los pacientes afectados por el (los) trastorno(s) son particularmente sensibles a los efectos secundarios no deseados debidos a una actividad inhibidora de MAO.
  30. 33. El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9 para la fabricación de un medicamento activo como modulador de canales de sodio y/o calcio para el tratamiento de patologías donde dichos mecanismo(s) anteriores juega(n) un rol patológico, que es un trastorno neurológico, cognitivo, psiquiátrico, inflamatorio, urogenital o gastrointestinal, donde dicho medicamento está sustancialmente libre de cualquier actividad inhibidora de MAO o tiene una actividad inhibidora de MAO significativamente reducida.
  31. 34. Uso de acuerdo con la reivindicación 33 en donde e trastorno es como se define en cualquier reivindicación de la 16 a la 23.
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