ES2633474T3 - Determinación del diferencial de glóbulos blancos y recuentos de reticulocitos - Google Patents

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Abstract

Un método de identificación de subpoblaciones diana de células nucleadas (34) contenidas en una muestra quiescente de sangre completa anticoagulada que se mezcla con un colorante fluorescente, en el que la muestra de sangre se diluye en no más de aproximadamente 1:1; en el que dicha muestra de sangre completa anticoagulada se dispersa se dispersa en una cámara de visión (14) que incluye una pluralidad de regiones de diferente grosor, incluyendo: una primera región (A) que tiene un primer grosor a través del plano, entre dos y siete micrómetros, que permite la inclusión de glóbulos rojos individuales (32) y/o monocapas (31) de glóbulos rojos; y una segunda región (B) que tiene un segundo grosor a través del plano, entre siete y cuarenta micrómetros; comprendiendo dicho método: a) la etapa de exploración de campos seleccionados de visión (1, 3, 5) en dichas regiones con un instrumento de exploración óptica (54); b) la etapa de iluminación de dichos campos seleccionados de visión (1, 3, 5) con una fuente de iluminación de una o más longitudes de onda preseleccionadas que son funcionales para causar que dicho colorante fluorescente produzca emisiones fluorescentes en una o más longitudes de onda conocidas, siendo dichas emisiones características de dichas subpoblaciones diana de células nucleadas; y c) debido a la fluorescencia característica de las células a dichas longitudes de onda conocidas incluyendo 530 nm, 585 nm y 660 nm cuando se excitan a la longitud preseleccionada en el intervalo de 485 nm, y a su fluorescencia a dicha otra longitud de onda conocida de 610 nm cuando se excita a la longitud de onda preseleccionada en el intervalo de 560 nm, la etapa de análisis de dichas emisiones a dichas longitudes de onda conocidas para identificar y diferenciar dichas subpoblaciones diana de células nucleadas; en el que la cámara (14) tiene paredes opuestas de contención de la muestra (4, 8), y la expresión "a través del plano" se refiere a una línea de visión que corresponde a la distancia más corta entre las paredes (4, 8) en una región dada de la cámara (14).

Description

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DESCRIPCION
Determinacion del diferencial de globulos blancos y recuentos de reticulocitos Campo tecnico
Esta invencion se refiere a un metodo para analizar una muestra quiescente de sangre completa anticoagulada. Mas particularmente esta invencion se refiere a un metodo para analizar la muestra de sangre en un estado quiescente para proporcionar un recuento diferencial de globulos blancos, un analisis de recuento de reticulocitos, una enumeracion de globulos rojos nucleados, y a la capacidad de detectar celulas en circulacion nucleadas anormales, tales como celulas cancerosas, que son eventos raros.
Tecnica anterior
Los recientes avances en hematologfa analttica han aumentado la cantidad y calidad de la informacion disponible a partir de una muestra de sangre de un paciente. Como resultado, el interes de la comunidad medica en el uso de muestras sangumeas de pacientes como herramienta de diagnostico tambien ha aumentado, siendo el ensayo realizado mas habitualmente sobre sangre completa anticoagulada el recuento de sangre completa o CBC, que es un conjunto de ensayos que pueden incluir, ademas de la enumeracion de los componentes celulares y plaquetas, la metrica de globulos rojos; los recuentos de reticulocitos; y el recuento diferencial de leucocitos (LDC o "Dif") que es la clasificacion de los tipos de globulos blancos presentes en la muestra de sangre. Las propiedades ffsicas generales de la muestra, concretamente diversas celulas o recuentos deben analizarse usando metodos cuantitativos que se refieren a la muestra completa. En instrumentacion y metodos convencionales, esto requiere una medicion y dilucion precisa de la muestra, seguida por un aparato especializado de medicion.
Adicionalmente, el instrumento debe medir aspectos cuantitativos de las celulas individuales, que habitualmente implica proporcionar una alta dilucion de la muestra con un posterior pase del material diluido a traves de una celda de flujo que mide las celulas usando medios electricos u opticos. Ademas, se usan mediciones cualitativas para clasificar el porcentaje de globulos blancos totales que estan compuestos de subpoblaciones espedficas. La cantidad de subpoblaciones depende de la sofisticacion del instrumento implicado, que puede ser tan poco como dos o mas de siete clasificaciones.
Historicamente, los aspectos diferenciales del CBC se han realizado usando metodos diferentes de los usados para la enumeracion. Por ejemplo, la parte LDC de un CBC se realizaba tradicionalmente distribuyendo una pequena cantidad de sangre no diluida sobre un portaobjetos, tinendo el frotis fijado seco y examinando el frotis en un microscopio. Pueden obtenerse resultados razonables a partir de dicho frotis, pero la precision y fiabilidad de los datos depende en gran medida de la experiencia del tecnico y la tecnica. Un problema con dichos frotis es que las celulas deben inactivarse y fijarse, y esto excluye muchos tipos de colorantes supravitales y analisis cuyos resultados dependen de la celula viva, tal como algunos analisis citoqmmicos. Ademas, el uso de frotis sangumeos es muy laborioso y costoso, y generalmente, por lo tanto, no esta favorecido para aplicaciones comerciales.
Otro metodo de realizacion de LDC usa impedancia electrica o citometna de flujo optico. La citometna de flujo implica pasar una muestra diluida de sangre a traves de un pequeno recipiente donde la impedancia electrica o detectores opticos pueden evaluar las celulas constituyentes segun pasan en serie a traves del recipiente. El mismo aparato tambien puede usarse para enumerar simultaneamente y proporcionar datos metricos de las celulas. Para evaluar WBC, la muestra de sangre debe diluirse y la muestra debe tratarse para mitigar la cantidad enorme de las RBC respecto a las WBC. Aunque de forma mas conveniente y coherente que los metodos de frotis descritos anteriormente, la citometna de flujo tambien posee varias desventajas. Una desventaja de la citometna de flujo es el drenaje y los controles de fluidos que son necesarios para controlar el caudal de la muestra de sangre diluida pasados los detectores. El drenaje en citometros de flujo actuales puede, y a menudo lo hace, filtrar, comprometiendo por tanto potencialmente la precision y la seguridad del equipo. Estos analisis tambien son generalmente incapaces de proporcionar ningun tipo de analisis morfometrico, ya que no se obtiene una imagen real de cada celula; solamente puede analizarse la senal total de cualquier celula dada. Otra desventaja de muchos citometros de flujo actuales se refiere a la precision de los controles del flujo de fluido interno y el equipo automatizado de dilucion. La precision del citometro de flujo depende de la precision de los controles del flujo de fluido y el equipo de dilucion de la muestra y su capacidad de permanecer calibrado de forma precisa. Los controles de flujo y el equipo de dilucion requieren recalibrado periodico. La necesidad de recalibrado ilustra el potencial de resultados imprecisos y los indeseables costes de funcionamiento que existen con muchos citometros de flujo actualmente disponibles. Un artfculo autorizado por John L. Haynes y publicado Cytometry Supplement 3: 7-17 en 1988 describe los principios de la citometna de flujo, tanto de impedancia como optica, y la aplicacion de dicha tecnologfa a diversos campos de especialidad. Las muestras de sangre que se examinan en citometros de flujo se diluyen en cualquier lugar de 10:1 a 50.000:1.
Otro enfoque para el analisis celular es la exploracion capilar volumetrica resumida en las patentes de Estados Unidos n.° 5.547.849; 5.585.246 y otras, donde una muestra relativamente no diluida de sangre completa se coloca en un capilar de volumen y grosor conocidos y se examina mientas la sangre este en un estado quiescente. Esta
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tecnica trata con la presencia de globulos rojos limitando las longitudes de onda de exploracion a aquellas para las que los globulos rojos son relativamente transparentes, y requiere que la muestra se trate de modo que los globulos rojos no se agreguen durante el proceso de medicion. Por tanto, esta tecnica esta limitada al uso de fluorescencia de longitud de onda mas larga, y no existe dotacion para la enumeracion de reticulocitos o globulos rojos nucleados. Adicionalmente, como con la citometna de flujo, no hay informacion morfologica disponible a partir de las exploraciones. Hay varios instrumentos comerciales disponibles para realizar un CBC o ensayos relacionados, pero aquellos que proporcionan mas de unos pocos ensayos CBC se vuelven rapidamente complejos, caros y propensos a mal funcionamiento. Ademas, existen varios metodos propuestos para ensayos hematologicos espedficos, pero estos no proporcionan toda la informacion clmicamente util que se espera en un CBC.
El documento US4790640 describe un portaobjetos de laboratorio para el examen de muestras biologicas, donde el espaciado puede variarse a lo largo de la longitud del canal de flujo. Mas particularmente, el extremo anterior del canal de flujo se dimensiona con una altura relativamente pequena que puede ser algo mayor que una dimension monocelular. Esta dimension de altura puede disminuirse progresivamente o en etapas concretas a lo largo de la longitud del canal de flujo.
Todos los metodos anteriores estan generalmente limitados a un unico modo de analisis, en que una combinacion de tincion histoqmmica y morfologfa celular no es posible. Tener la capacidad de realizar estos dos tipos de ensayos expande la cantidad de grupos que pueden reconocerse por el metodo.
Sena deseable tener un metodo para examinar una muestra quiescente de sangre completa anticoagulada, siendo capaces dicho metodo y aparato de proporcionar resultados precisos para un LDC, enumeracion de reticulocitos y deteccion de globulos rojos nucleadas y celulas nucleadas en circulacion anormales, tales como celulas cancerosas, y que no requiere flujo del fluido de muestra a traves de una camara de muestreo durante el analisis de la muestra.
Descripcion de la invencion
La invencion proporciona un metodo de identificacion de subpoblaciones diana de celulas nucleadas, como se reivindica en la reivindicacion 1.
Se describe un metodo para su uso en el examen y obtencion de informacion a partir de una muestra de sangre completa anticoagulada sustancialmente no diluida quiescente que esta contenida en una camara. La expresion "sustancialmente no diluida" como se usa en relacion con esta invencion describe una muestra de sangre que se diluye en no mas de aproximadamente 1:1, y preferiblemente mucho menos. Generalmente, los unicos reactivos que se usaran en la realizacion del metodo de esta invencion son colorantes, tintes y anticoagulantes, y estos reactivos, incluso si son lfquidos, no estan disenados para diluir la muestra. Las agregaciones y lagunas de globulos rojos, pueden formarse en una capa que tiene un grosor de aproximadamente siete a aproximadamente cuarenta micrometres, dependiendo del hematocrito de la muestra. Tener una profundidad fija hace mas diffcil analizar las muestras que tienen un recuento de globulos blancos ampliamente variable, y la enumeracion simultanea de reticulocitos es imposible en este tipo de camara.
Por consiguiente, se usa una camara que tiene un grosor variable a traves del plano como se describe a continuacion. Las varias regiones en la camara crearan suficientes fuerzas capilares en todas las regiones de la camara para causar propagacion de la muestra de sangre por toda la camara, que finalmente produce una muestra de sangre quiescente en la camara. El unico movimiento en la muestra de sangre en el momento del analisis sera un movimiento browniano de los constituyentes formados de la muestra de sangre, cuyo movimiento no incapacita la utilidad de esta invencion. El aparato incluye una camara portamuestras que tiene paredes opuestas de contencion de la muestra, al menos una de las cuales es transparente, que son paredes que convergen preferiblemente en al menos una parte de la camara. Por consiguiente, el grosor a traves del plano de la camara por tanto vana en diferentes regiones de la camara. Como se usa en esta descripcion la expresion "a traves del plano" se refiere a una lrnea de vision que corresponde a la distancia mas corta entre las paredes convergentes en cualquier region de la camara. El grado de convergencia en las dos paredes, es decir, la distancia entre las dos paredes, en cualquier punto particular en la camara es conocido o puede medirse despues de que la muestra se haya colocado en la camara, como se describira a partir de ahora en este documento.
La region mas delgada en la camara estara dimensionada de modo que se formara una monocapa de celulas de globulos rojos individuales presentes en la muestra cuando la camara se llena con la muestra de sangre. El grosor de esta region de la camara debe ser entre aproximadamente dos y aproximadamente siete micrometros, y es preferiblemente de aproximadamente cinco micrometros. Por tanto, las mediciones de los recuentos de reticulocitos diferenciales de globulos rojos pueden obtenerse en esta region de la camara.
A partir del punto delgado de la camara, el grosor de la camara aumenta para formar regiones progresivamente mas gruesas en la camara que se usan para diferenciar y enumerar de forma diferencial diversos tipos de globulos blancos y globulos rojos nucleados en la muestra de sangre. Los globulos rojos nucleados tienden a ser de aproximadamente el tamano de linfocitos pequenos, pero pueden ser mas grandes. El grosor de la camara en esta
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region de la misma esta tipicamente en el intervalo de entre aproximadamente siete a aproximadamente cuarenta micrometros. La camara esta contenida en un portamuestras en que puede extraerse la muestra de sangre.
La muestra a ensayarse se mezcla con un colorante que puede ser, por ejemplo, un colorante o colorantes fluorescentes, y la mezcla resultante se propaga en la camara para formar una muestra quiescente que tiene un grosor variable debido a la convergencia de las paredes de la camara. El colorante o colorantes pueden anadirse a la muestra antes de la admision de la muestra en la camara, o el colorante puede anadirse a la muestra mientras la muestra esta dentro de los confines de la camara, tal como por recubrimiento en seco del colorante sobre las paredes de la camara. Las regiones de interes en la camara se iluminan selectivamente por una fuente de luz que tiene una longitud de onda o longitudes de onda seleccionadas, que causa que el colorante en la muestra emita fluorescencia. Las regiones en la camara que contienen las monocapas de globulos rojos y los agregados apilados globulos blancos y globulos rojos en la muestra de sangre se exploran de este modo, preferiblemente por un instrumento optico, y los resultados de las exploraciones pueden digitalizarse y analizarse. Los recuentos diferenciales de plaquetas con plaquetas agrupadas por tamano y contenido de ARN, determinados por fluorescencia, tambien pueden obtenerse en la region de la camara donde se forman los agregados apilados y lagunas de globulos rojos. Las plaquetas con ARN aumentado son plaquetas mas jovenes.
Esta invencion proporciona un metodo para realizar al menos un recuento diferencial de globulos blancos de tres partes en una muestra de sangre completa anticoagulada, incluyendo dicho metodo las etapas de: proporcionar una camara de muestreo que esta dimensionada para posibilitar la agregacion de la poblacion de globulos rojos y la separacion de globulos blancos individuales de los globulos rojos en una muestra de sangre completa anticoagulada sustancialmente no diluida que se introduce en la camara. Una mezcla de un colorante o colorantes fluorescentes y la muestra de sangre completa anticoagulada se forma en la camara de muestreo. El colorante o colorantes son funcionales para poner de relieve de forma diferencial al menos tres diferentes tipos de globulos blancos en la sangre completa, y preferiblemente cinco tipos diferentes de globulos blancos. La mezcla se deja dispersar a traves de la camara para formar grupos quiescentes separados de uno o mas globulos blancos individuales dentro de las lagunas abiertas de plasma en campos de trabajo opticos en la muestra. Debe entenderse que los globulos blancos se excluyen en gran medida de la masa de globulos rojos segun se agregan los ultimos. Sin embargo, para los propositos de esta invencion, los globulos blancos pueden descansar sobre la parte superior de los globulos rojos individuales de los agregados de globulos rojos y aun detectarse y evaluarse siempre que los globulos blancos sean visibles al instrumento de exploracion. Los campos se exploran de forma optica realizando una exploracion campo por campo X-Y-Z de la mezcla dispersada en la camara bajo condiciones adecuadas de iluminacion que causa que se pongan de relieve de forma diferencia al menos tres y preferiblemente cinco o mas tipos diferentes de globulos blancos por dicho colorante o colorantes. Todas las celulas diferencialmente puestas de relieve que se detectan en la mezcla se enumeran, y las celulas enumeradas se agrupan por tipo celular. Pueden usarse los mismos colorantes y condiciones de iluminacion para realizar recuentos de reticulocitos o globulos rojos nucleados en la muestra de sangre debido a la presencia de material nuclear en las celulas. En el caso de los reticulocitos, el material nuclear en las celulas constituye remanentes del nucleo de las celulas, tal como ARN intracelular, y en algunos casos ADN intracelular. El material intracelular de emision diferencial de fluorescencia presente en los reticulocitos puede caracterizarse como "remanentes de material nucleado intracelular". Los analisis de los parametros de reticulocitos y globulos rojos no nucleados se realizan en la region mas delgada de la camara donde puede esperarse que los globulos rojos maduros individuales y monocapas de globulos rojos maduros, asf como reticulocitos, se encuentren debido a su tamano.
Por lo tanto, un objetivo de esta invencion es proporcionar un metodo para su uso en la obtencion de recuentos diferenciales de celulas sangumeas de ciertas celulas sangumeas nucleadas y plaquetas en una muestra de sangre completa anticoagulada quiescente.
Un objetivo adicional de esta invencion es proporcionar un metodo del caracter descrito que posibilite que una muestra de sangre completa sustancialmente no diluida se examine para recuentos diferenciales de subpoblaciones de globulos blancos; recuentos de subpoblaciones totales de globulos blancos; recuentos de reticulocitos; recuentos de globulos rojos nucleados; recuentos de plaquetas; y deteccion de celulas en circulacion nucleadas anormales, tales como celulas cancerosas.
Breve descripcion de los dibujos
Estos y otros objetivos y ventajas de la invencion llegaran a ser mas facilmente evidentes a partir de la siguiente descripcion detallada de varias realizaciones de la invencion cuando se toman junto con los dibujos adjuntos en que:
la FIG. 1 es una vista en perspectiva esquematica de un dispositivo de analisis de muestras sangumeas que
incluye una camara de recepcion de muestras, incluyendo dicha camara regiones de grosor variable a traves del
plano;
la FIG. 2 es un diagrama de la relacion entre el grosor de la camara y la distancia desde la region de grosor mas
pequeno a traves del plano en la camara a cualquier otra region de grosor a traves del plano en la camara,
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siendo el trazo solido representativo de una camara lineal tal como la mostrada en la FIG. 1 y siendo el trazo discontinuo representativo de una camara de grosor variable no lineal;
la FIG. 3 es una vista en planta esquematica de una parte de una camara de grosor variable formada de acuerdo con esta invencion y que ilustra en un sentido esquematico el modo en que los constituyentes formados de diverso tamano en una muestra de sangre quiescente se separaran en las diversas regiones de grosor en la camara para ser individualmente visibles en diferentes campos de vision en la camara;
la FIG. 4 es una vista en planta esquematica de una parte de la camara que muestra cuatro campos diferentes de vision que podnan superponerse por un instrumento de exploracion de muestras;
la FIG. 5 es una vista esquematica de un instrumento de exploracion que puede usarse para identificar, contar y analizar ciertas caractensticas de los componentes formados de una muestra de sangre completa anticoagulada colocada en la camara;
la FIG. 6 es un diagrama bidimensional que muestra el agrupamiento de grupos de globulos blancos en un conjunto espedfico de condiciones de analisis;
la FIG. 7 es un diagrama bidimensional que muestra el subagrupamiento de uno de los grupos re la FIG. 6 en un segundo conjunto de condiciones de analisis; y
la FIG. 8 es un diagrama bidimensional que muestra el subagrupamiento de uno o mas de los grupos de la FIG. 6 en un tercer conjunto de condiciones de analisis.
Descripcion detallada de las realizaciones espedficas de la invencion
Con referencia ahora a los dibujos, la FIG. 1 es una ilustracion esquematica de un dispositivo que se indica generalmente por el numero 2, incluyendo dicho dispositivo 2 una camara que contiene la muestra 14 que tiene un grosor variable a traves del plano. El dispositivo 2 incluye una pared de soporte inferior 4, que por motivos ilustrativos puede ser, por ejemplo, un portaobjetos de microscopio. El dispositivo tambien puede incluir un calzo rectilmeo 6; y una pared superior 8, que por motivos ilustrativos puede ser, por ejemplo, un cubreobjetos de portaobjetos de microscopio. Al menos una de las paredes 4 u 8 debe ser transparente para que la muestra dispuesta entre las mismas pueda examinarse a traves de la pared transparente 4 u 8. Si se desea, las dos paredes 4 y 8 pueden ser transparentes. La pared 8 tiene un borde 10 que descansa sobre, o muy cerca de, la pared 4, y un borde opuesto 12 que esta dispuesto sobre la superficie superior del calzo 6. El resultado de la relacion convergente entre las paredes 4 y 8 es la formacion de un camara 14 que tiene un grosor variable a traves del plano, aumentando el grosor a traves del plano desde el bode 10 hasta el borde opuesto 12 de la pared 8, como se observara en la FIG. 1.
La FIG. 2 es una representacion grafica que muestra el modo en que el grosor de la camara 12 puede variar desde el borde mas delgado 10 hasta el borde mas grueso 12. La lmea solida PL muestra una relacion grosor-distancia creada por una configuracion de camara que es lineal; y la lmea discontinua PNL muestra una relacion grosor- distancia creada por una configuracion de camara que es no lineal.
La FIG. 3 es una representacion esquematica de una vista en planta del dispositivo 2 que incorpora la camara 14, y el modo en que cualquier constituyente formado de diferente tamano presente en la muestra de sangre que se esta examinando se distribuira de forma quiescente en la camara 14 cuando la ultima se llena con la muestra. El numero 10 indica una region de grosor menor de la camara 14, y el numero 12 indica una region de grosor mayor de la camara 14. En la representacion del dispositivo 2 mostrado en la FIG. 3, hay tres regiones de diferente grosor, A, B y C en la parte de la camara 14 representada. La region A es una region de grosor menor en la camara 14; la region B es una region de grosor medio en la camara 14; y la region C es la region de grosor mayor en la camara 14. Obviamente, esta cantidad particular de diferentes regiones de grosor se usa simplemente para ilustrar una caractenstica principal de la camara preferida 14 de esa invencion, y no es limitante de la invencion, ya que la camara 14, como se ha indicado anteriormente puede incluir una cantidad esencialmente infinita de regiones de diferente grosor. Tambien existen tres diferentes campos de vision 1, 3 y 5 mostrados en la FIG. 3. Estos campos de vision 1, 3 y 5 estan representados como drculos para ilustrar el campo de vision observado por un instrumento optico, tal como un microscopio. En la ilustracion representada en la FIG. 3, la muestra de sangre ha llenado la camara 14 y ha estado quiescente durante al menos unos pocos segundos. En la region mas delgada A de la camara 14 se encuentran los globulos rojos aplanados, individualmente 32 o en una monocapa 31. Unas pocas plaquetas 30 tambien pueden encontrarse en la region A. Pueden realizarse recuentos de reticulocitos y de globulos rojos no nucleados en la region A de la camara 14, como se describe a continuacion en este documento.
En la parte inferior de la region B, existe suficiente espacio para que los globulos rojos formen agregados apilados u otros agregados 33 que estan rodeados por lagunas de plasma que estan libres de los globulos rejos debido a la formacion de agregados apilados. En el campo de vision 3 hay suficiente volumen de camara para permitir la enumeracion y clasificacion de los globulos blancos 34 y tambien de globulos rojos nucleados. Los globulos blancos
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34 por tanto pueden ensayarse en esta region para sitios de receptores superficiales; pueden tiparse; pueden medirse volumetricamente, pueden estudiarse morfologicamente; y pueden obtenerse cantidades pequenas adicionales de informacion acerca de los globulos blancos 34 a partir de la muestra de sangre en la parte superior de la region B. Segun aumenta el grosor de la camara hasta la mostrada en la region C, los aglomerados de globulos rojos 33 forman una capa confluyente, y se reduce la capacidad de localizar globulos blancos, aunque esta region puede utilizarse para recuentos muy bajos de globulos blancos.
La FIG. 4 es una vista en planta de un fragmento de la camara 14, donde el numero 12 indica un extremo mas grueso de la camara 14 y el numero 10 indica un extremo mas delgado de la camara 14. Una camara 14 que tiene un grosor variable que vana de aproximadamente cero micrometros en su parte mas delgada 10, hasta aproximadamente doscientos micrometros en su parte mas gruesa 12, permitira un intervalo dinamico de factor cien de recuentos por unidad de volumen de la muestra de particulados de la muestra de sangre. Hay cuatro campos esquematicos de vision 7', 7, 9 y 11 mostrados en la FIG. 4. Los constituyentes formados 32 se representan en cada uno de los campos de vision 7, 9 y 11, y ninguno se muestra en el campo de vision 7'. Las lagunas 35 tambien se representan en los campos de vision 7', 7 y 9, pero no en el campo 11.
La FIG. 5 es una representacion esquematica de un ensamblaje de instrumento microscopico colorimetrico automatizado que esta indicado generalmente por el numero 54, y puede usarse para explorar una muestra de sangre que esta contenida en el dispositivo 2 y puede, sin intervencion humana significativa, analizar colorimetricamente longitudes de onda de emisiones de color de diferentes tipos de globulos blancos, reticulocitos y globulos rojos nucleados en la muestra de sangre, identificando de ese modo y diferenciando estos tipos celulares de otros. El ensamblaje de instrumento 54 esta disenado para crear y almacenar o transmitir las imagenes de diferentes tipos de globulos blancos, reticulocitos y globulos rojos nucleados en la muestra de sangre que se esta explorando. El ensamblaje de instrumento 54 incluye una fase 56 que incluye pinzas 58 que acoplan el portamuestras 2 y posibilita que el portamuestras 2 se mueva de forma transversal en las direcciones X e Y segun se exploran los contenidos del portamuestras 2.
Pueden usarse motores electricos reversibles 59 para rotar selectivamente los tornillos atornillados 60 en direcciones opuestas de modo que el portamuestras 2 pueda moverse de forma transversal en las direcciones X e Y. De este modo, pueden explorarse los contenidos completos del portamuestras 2. La realizacion automatica del ensamblaje de instrumento descrito 54 incluye una camara CCD 62, un divisor de haz 64 y un conjunto de lentes 66 que pueden moverse de forma selectiva en la direccion Z para enfocar las partes que contienen la muestra en el ensamblaje portamuestras 2. La camara CCD 62 puede ver y registrar imagenes de la muestra a traves de una pluralidad de filtros de diferente longitud de onda de emision 68, 70 y 72 que pueden montarse sobre una rueda de filtros selectivamente giratoria 74. El ensamblaje de instrumento 54 tambien incluye una fuente de luz de excitacion de alta intensidad 75, tal como una fuente de luz halogena, que dirige un haz de luz de excitacion en el portamuestras 2 a traves del divisor de haz 64 y el conjunto de lentes de enfoque 66. Una serie de filtros de longitud de onda de luz de excitacion 76, 78 y 80 pueden montarse sobre una rueda de filtros selectivamente giratoria 82. El divisor de haz 64 desvfa el haz de luz de excitacion hacia la lente de enfoque 66, y se enfoca sobre el portamuestras 2 por la lente 66. Por tanto, las dos ruedas de filtros 74 y 82 pueden permitir controlar de forma selectiva y variar las longitudes de onda de la fuente de luz de excitacion, asf como de la fuente de luz emitida. Un controlador de procesador pre-programado 84 es funcional para controlar de forma selectiva el movimiento del portamuestras 2; la rotacion de las ruedas de filtros 74 y 82; y el funcionamiento de la camara CCD 62. El controlador 84 por tanto posibilita el funcionamiento completamente automatico del ensamblaje de instrumento 12 sin la necesidad de intervencion humana significativa.
Como se ha indicado anteriormente, segun el instrumento de exploracion examina la camara 14 para regiones utiles en la camara 14 en funcionamiento de un examen de la muestra que implica derivar los recuentos diferenciales de globulos blancos, reticulocitos y globulos rojos nucleados en la camara 14, vera los campos de vision tales como 7', 7, 9 y 11, como se muestra en la FIG. 4.
Cuando el instrumento de exploracion ha examinado una cantidad clmicamente significativa de celulas utiles, completara el analisis diferencial de globulos blancos, y el analisis de reticulocitos y globulos rojos nucleados. La determinacion de lo que constituye una cantidad estadfsticamente significativa de constituyentes contados dependera de un margen de error clmicamente aceptable predeterminado para el procedimiento de recuento. Se apreciara que esta cantidad variara dependiendo de los constituyentes que se esten contando.
Los globulos blancos, los globulos rojos nucleados y los reticulocitos que contienen remanentes ribosomicos de material nuclear, que son celulas presentes en la muestra y que se tinen de forma supravital con un colorante, tal como naranja basico 21, pueden identificarse en virtud de la fluorescencia caractenstica de las celulas a 530 nm, 585 nm y 660 nm cuando se excitan por luz en el intervalo de 485 nm, y por su fluorescencia a 610 nm cuando se excitan por luz de 560 nm. Los globulos blancos quiescentes pueden separarse por el instrumento 54 en grupos diferenciados que consisten en linfocitos, monocitos, granulocitos, eosinofilos y basofilos en dicha camara. Pueden usarse otros colorantes tales como naranja de acridina con longitudes de onda similares para realizar un analisis similar.
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El metodo preferido para clasificar o diferenciar las diversas celulas sangumeas es el siguiente. Se iluminan multiples campos que contienen globulos blancos, y que tambien pueden contener globulos rojos nucleados grandes, con una longitud de onda de excitacion de 485 nm, y se localizan los globulos blancos y cualquier globulo rojo nucleado. El algoritmo de localizacion depende del hecho de que los globulos blancos y algunos globulos rojos nucleados grandes son los unicos objetos grandes en cualquier campo que emite fluorescencia. Se localiza la cantidad necesaria de globulos blancos, y se registran cinco valores de emision, donde: Li, L2 y L3 son la emision total de cada celula a 530 nm, 580 nm y 660 nm respectivamente, y donde las emisiones totales se miden sumando las intensidades de los pfxeles de las imagenes de las celulas; AL1 es la intensidad promedio de pixel de cada celula a 530 nm cuando se excita a 485 nm; AL5 es la intensidad promedio de pixel medida para cada celula a 610 nm cuando la celula se excita con luz a 560 nm; y A580 es el area de la celula determinada por la emision a 580 nm cuando se excita a 488 nm. Por tanto, los datos usados para diferenciar los tipos celulares incluyen datos fotometricos (Li, L2 y L3) asf como datos morfometricos (ALi, AL5, A580).
La FIG. 6 muestra las celulas en imagenes por el instrumento 54 presentadas en espacio bidimensional, donde el eje Y es la relacion de L1/L2, y el eje X es la relacion de L2/L3. Usando analisis de agrupacion, las celulas se agrupan en tres poblaciones, donde el grupo 40 representa los neutrofilos y eosinofilos, el grupo 41 representa los monocitos y linfocitos, y el grupo 42 representa los basofilos. Estos son los tipos de separaciones celulares basadas en datos fotometricos solamente. Para obtener una separacion mas definida, la adicion de datos morfometricos subdividira adicionalmente los grupos para permitir la identificacion de mas tipos celulares.
La FIG. 7 muestra el grupo 40 que ahora esta sometido a analisis adicional de agrupacion bidimensional, donde el eje X es la relacion de AL1/AL5, y el eje Y es la relacion de L1/L3. Este analisis de agrupacion ahora permite la division del grupo original 40 en dos grupos diferentes que representan los eosinofilos 43 y los neutrofilos 44.
Si el grupo 41 se somete a analisis adicional de agrupacion como se muestra en la FIG. 8, donde el eje X es A580 y el eje Y es la relacion de L1/L3, el grupo 41 puede separarse en sus dos componentes, los monocitos 46 y los linfocitos 45. Por tanto, las etapas descritas anteriormente son capaces de subdividir una poblacion de globulos blancos en al menos cinco subgrupos. Los diferentes tipos de globulos blancos identificados y enumerados se registran tipicamente como porcentajes de la cantidad total de globulos blancos explorados durante el procedimiento.
La presencia de los reticulocitos dentro de la poblacion de globulos rojos se determina midiendo la intensidad total de la fluorescencia a 585 nm y 660 nm a partir de cada globulo rojo cuando se excita a 485 nm, y esas celulas que tienen una fluorescencia total mayor que la de globulos rojos normales se determinan como reticulocitos. Asimismo, aquellos globulos rojos que muestran una fuerte fluorescencia a 530 nm se consideran globulos rojos nucleados.
Los ejemplos anteriores han usado colorantes supravitales que dan una indicacion del caracter general de las celulas, pero tambien es posible usar agentes de union epitopica espedfica, tales como anticuerpos, que pueden marcarse con colorantes fluorescentes, o marcarse con particulados coloreados o fluorescentes. Estos pueden servir para separar adicionalmente subpoblaciones de las celulas nucleadas basandose en antfgenos superficiales u otros grupos de union. Ejemplos de estos son marcadores que distinguen linfocitos CD4 y CD8 de la poblacion general de linfocitos. El metodo de esta invencion no se ve afectado de forma adversa por la presencia de globulos rojos en campos de vision en la muestra de sangre que se esta explorando, y por tanto no requiere preparacion significativa de la muestra, tal como diluciones o separacion gravimetrica de diversos tipos celulares. La informacion morfometrica tal como el tamano, granularidad, contenidos de material nucleado, receptores superficiales y similares puede detectarse por la tecnica de esta invencion.

Claims (7)

  1. 5
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    40
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    REIVINDICACIONES
    1. Un metodo de identificacion de subpoblaciones diana de celulas nucleadas (34) contenidas en una muestra quiescente de sangre completa anticoagulada que se mezcla con un colorante fluorescente, en el que la muestra de sangre se diluye en no mas de aproximadamente 1:1; en el que dicha muestra de sangre completa anticoagulada se dispersa se dispersa en una camara de vision (14) que incluye una pluralidad de regiones de diferente grosor, incluyendo:
    una primera region (A) que tiene un primer grosor a traves del plano, entre dos y siete micrometros, que permite la inclusion de globulos rojos individuales (32) y/o monocapas (31) de globulos rojos; y
    una segunda region (B) que tiene un segundo grosor a traves del plano, entre siete y cuarenta micrometros; comprendiendo dicho metodo:
    a) la etapa de exploracion de campos seleccionados de vision (1, 3, 5) en dichas regiones con un instrumento de exploracion optica (54);
    b) la etapa de iluminacion de dichos campos seleccionados de vision (1, 3, 5) con una fuente de iluminacion de una o mas longitudes de onda preseleccionadas que son funcionales para causar que dicho colorante fluorescente produzca emisiones fluorescentes en una o mas longitudes de onda conocidas, siendo dichas emisiones caractensticas de dichas subpoblaciones diana de celulas nucleadas; y
    c) debido a la fluorescencia caractenstica de las celulas a dichas longitudes de onda conocidas incluyendo 530 nm, 585 nm y 660 nm cuando se excitan a la longitud preseleccionada en el intervalo de 485 nm, y a su fluorescencia a dicha otra longitud de onda conocida de 610 nm cuando se excita a la longitud de onda preseleccionada en el intervalo de 560 nm, la etapa de analisis de dichas emisiones a dichas longitudes de onda conocidas para identificar y diferenciar dichas subpoblaciones diana de celulas nucleadas;
    en el que la camara (14) tiene paredes opuestas de contencion de la muestra (4, 8), y la expresion "a traves del plano" se refiere a una lmea de vision que corresponde a la distancia mas corta entre las paredes (4, 8) en una region dada de la camara (14).
  2. 2. El metodo de la reivindicacion 1, en el que dicha camara de vision tiene forma sustancialmente de cuna e incluye regiones de grosor adicionales (C) que tienen un grosor a traves del plano que es mayor de aproximadamente cuarenta micrometros.
  3. 3. El metodo de la reivindicacion 1, en el que el colorante es un colorante supravital.
  4. 4. El metodo de la reivindicacion 1, en el que la subpoblacion de celulas nucleadas es una subpoblacion de globulos blancos (34).
  5. 5. El metodo de la reivindicacion 1, en el que la subpoblacion de celulas nucleadas es una subpoblacion de globulos rojos (32).
  6. 6. El metodo de la reivindicacion 1, en el que el colorante es parte de una partfcula de union que esta dirigida contra un epftopo sobre la subpoblacion de celulas nucleadas.
  7. 7. El metodo de la reivindicacion 1, en el que dichas emisiones se caracterizan por caractensticas fotometricas y/o morfometricas que pueden usarse para identificar la subpoblacion en cuestion.
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Families Citing this family (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6908770B1 (en) * 1998-07-16 2005-06-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Fluid based analysis of multiple analytes by a sensor array
US20060263888A1 (en) * 2000-06-02 2006-11-23 Honeywell International Inc. Differential white blood count on a disposable card
US6633369B2 (en) * 2001-01-03 2003-10-14 Becton, Dickinson And Company Method for measuring the volume of individual red blood cells
WO2002101087A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-19 Chemometec A/S A method and a system for counting cells from a plurality of species
US20040019300A1 (en) * 2002-07-26 2004-01-29 Leonard Leslie Anne Microfluidic blood sample separations
EP1673611A4 (en) * 2003-09-18 2011-11-30 Immunivest Corp PROGRAMMABLE SAMPLE ANALYSIS AND PREPARATION SYSTEM INDEPENDENTLY OF THE OPERATOR
US9176121B2 (en) * 2004-02-13 2015-11-03 Roche Diagnostics Hematology, Inc. Identification of blood elements using inverted microscopy
US8101431B2 (en) 2004-02-27 2012-01-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Integration of fluids and reagents into self-contained cartridges containing sensor elements and reagent delivery systems
US8105849B2 (en) * 2004-02-27 2012-01-31 Board Of Regents, The University Of Texas System Integration of fluids and reagents into self-contained cartridges containing sensor elements
ES2548567T3 (es) 2004-04-07 2015-10-19 Levine, Robert Aaron Cámara desechable para analizar fluidos biológicos
US9023641B2 (en) * 2004-05-13 2015-05-05 Advanced Animal Diagnostics Microfluidic device and leucocyte antigen mediated microfluidic assay
SE528697C2 (sv) 2005-03-11 2007-01-30 Hemocue Ab Volymetrisk bestämning av antalet vita blodkroppar i ett blodprov
US8377398B2 (en) 2005-05-31 2013-02-19 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and compositions related to determination and use of white blood cell counts
WO2007002480A2 (en) * 2005-06-24 2007-01-04 Board Of Regents, The University Of Texas System Systems and methods including self-contained cartridges with detection systems and fluid delivery systems
WO2007005666A2 (en) * 2005-07-01 2007-01-11 Board Of Regents, The University Of Texas System System and method of analyte detection using differential receptors
US7731901B2 (en) * 2005-10-19 2010-06-08 Abbott Laboratories Apparatus and method for performing counts within a biologic fluid sample
CN100392403C (zh) * 2005-12-09 2008-06-04 天津理工大学 一种对血液显微图像中白细胞个数自动计数方法
US8337755B2 (en) * 2006-03-13 2012-12-25 Veridex, Llc Operator independent programmable sample preparation and analysis system
WO2007112332A2 (en) * 2006-03-24 2007-10-04 Advanced Animal Diagnostics Microfluidic chamber assembly for mastitis assay
JP4796443B2 (ja) * 2006-06-08 2011-10-19 シスメックス株式会社 試料分析用試薬、試料分析用試薬キット及び試料分析方法
SE530750C2 (sv) * 2006-07-19 2008-09-02 Hemocue Ab En mätapparat, en metod och ett datorprogram
US7738094B2 (en) 2007-01-26 2010-06-15 Becton, Dickinson And Company Method, system, and compositions for cell counting and analysis
WO2008131039A2 (en) * 2007-04-16 2008-10-30 Board Of Regents, The University Of Texas System Cardibioindex/cardibioscore and utility of salivary proteome in cardiovascular diagnostics
CN101349644B (zh) * 2007-07-20 2012-06-27 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 一种白细胞分类试剂和其使用方法
US8102161B2 (en) * 2007-09-25 2012-01-24 Tdk Corporation Stable output in a switching power supply by smoothing the output of the secondary coil
CN105440725A (zh) * 2008-01-04 2016-03-30 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 不对称菁类荧光染料，组合物及在生物样品染色中的用途
JP5184697B2 (ja) * 2008-03-21 2013-04-17 アボット ポイント オブ ケア インコーポレイテッド 血小板を個々に、及び凝集塊として検出及び計数するための方法及び装置
US9602777B2 (en) * 2008-04-25 2017-03-21 Roche Diagnostics Hematology, Inc. Systems and methods for analyzing body fluids
JP2012515931A (ja) * 2008-04-25 2012-07-12 ウィンケルマン、ジェイムズ 全血球数及び白血球百分率を決定するシステム及び方法
CN101602762B (zh) * 2008-06-10 2013-10-16 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 不对称菁类化合物、其制备方法及应用
CN101726579B (zh) * 2008-10-17 2014-06-18 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 血液检测试剂和方法
US8367358B2 (en) * 2008-12-17 2013-02-05 Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd. Reagent, kit and method for differentiating and counting leukocytes
US9395365B2 (en) * 2009-04-02 2016-07-19 Abbott Point Of Care, Inc. Detection of infectious disease in a human or animal by measuring specific phagocytosis in a thin film sample of their anticoagulated blood
CN101988082B (zh) * 2009-07-31 2015-04-08 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 白细胞分类计数试剂、试剂盒及其制备方法和白细胞分类计数的方法
WO2012019118A1 (en) * 2010-08-05 2012-02-09 Abbott Point Of Care, Inc. Method and apparatus for automated whole blood sample analyses from microscopy images
US9522396B2 (en) 2010-12-29 2016-12-20 S.D. Sight Diagnostics Ltd. Apparatus and method for automatic detection of pathogens
AU2012242587B2 (en) 2011-04-15 2015-11-26 Roche Diagnostics Hematology, Inc. Measuring volume and constituents of cells
AU2012287304B2 (en) 2011-07-22 2015-08-13 Roche Diagnostics Hematology, Inc. Identifying and measuring reticulocytes
CN103917870B (zh) 2011-11-16 2016-04-13 贝克顿·迪金森公司 用于检测样品中的分析物的方法和系统
EP2798350B1 (en) 2011-12-29 2021-07-28 Sight Diagnostics Ltd. Methods and systems for detecting a pathogen in a biological sample
EP2929345A4 (en) 2012-12-06 2015-11-18 Abbott Point Of Care Inc ILLUSTRATION OF BIOLOGICAL FLUIDS BY MEANS OF A PREFERRED DISTRIBUTION
BR112015010695B1 (pt) 2013-01-11 2023-03-07 Becton, Dickinson And Company Dispositivo microfluídico e método para realizar um ensaio de uma amostra líquida, método para formar um dispositivo microfluídico, sistema e kit
EP2959276B1 (en) 2013-02-19 2019-01-02 Abbott Point of Care Inc. A method of analysing a biological fluid sample
CN105228749B (zh) 2013-03-13 2018-03-27 塔霍农村卫生研究所有限公司 便携式血细胞计数监测器
EP2999988A4 (en) 2013-05-23 2017-01-11 S.D. Sight Diagnostics Ltd. Method and system for imaging a cell sample
IL227276A0 (en) 2013-07-01 2014-03-06 Parasight Ltd A method and system for obtaining a monolayer of cells, for use specifically for diagnosis
US20150030215A1 (en) * 2013-07-26 2015-01-29 Abbott Point Of Care, Inc. Method and apparatus for producing an image of undiluted whole blood sample having wright stain coloration
WO2015029032A1 (en) 2013-08-26 2015-03-05 Parasight Ltd. Digital microscopy systems, methods and computer program products
ES2856191T3 (es) 2013-11-06 2021-09-27 Becton Dickinson Co Dispositivos microfluídicos y métodos de uso de los mismos
JP6518245B2 (ja) 2013-11-13 2019-05-22 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ 光学撮像システム及びそれを用いた方法
CN103630479B (zh) * 2013-11-15 2015-12-09 江苏大学 一种发动机燃烧排气颗粒数的测量方法
EP3364341B1 (en) * 2014-06-16 2024-07-24 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Analyzing digital holographic microscopy data for hematology applications
CN107077732B (zh) 2014-08-27 2020-11-24 思迪赛特诊断有限公司 用于对数字显微镜计算聚焦变化的系统及方法
US11298061B2 (en) 2014-10-14 2022-04-12 Becton, Dickinson And Company Blood sample management using open cell foam
WO2016060793A1 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Becton, Dickinson And Company Blood sample management using open cell foam
JP6426832B2 (ja) 2015-03-10 2018-11-21 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーＢｅｃｔｏｎ， Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ 生物体液の極微標本管理装置
MX2018001681A (es) 2015-08-10 2018-07-06 Essenlix Corp Dispositivos de ensayos bio/quimicos y metodos para pasos simplificados, muestras pequeñas, velocidad acelerada y facilidad de uso.
EP3344390B1 (en) 2015-09-01 2021-01-20 Becton, Dickinson and Company Depth filtration device for separating specimen phases
JP6710512B2 (ja) * 2015-09-14 2020-06-17 シスメックス株式会社 血液分析装置、血液分析方法及びコンピュータプログラム
EP3341728A4 (en) 2015-09-14 2019-04-17 Essenlix Corp. DEVICE AND SYSTEM FOR ANALYZING A SAMPLE, PARTICULARLY BLOOD AND METHODS OF USING SAME
MX2018003147A (es) 2015-09-14 2018-09-06 Essenlix Corp Dispositivo y sistema para recolectar y analizar condensado de vapor, particularmente condensado de exhalacion de la respiracion y un metodo para usarlo.
WO2017046799A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 S.D. Sight Diagnostics Ltd Methods and apparatus for detecting an entity in a bodily sample
JP6518016B2 (ja) 2015-12-24 2019-05-22 コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェＫｏｎｉｎｋｌｉｊｋｅ Ｐｈｉｌｉｐｓ Ｎ．Ｖ． 細胞懸濁液の決定のための方法及びシステム
EP3408281A4 (en) 2016-01-29 2019-08-14 Advanced Animal Diagnostics, Inc. METHOD AND COMPOSITIONS FOR DETECTING MYCOPLASMA EXPOSURE
WO2017168411A1 (en) 2016-03-30 2017-10-05 S.D. Sight Diagnostics Ltd Image processing device for identifying blood parasites
CA3022770A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 S.D. Sight Diagnostics Ltd Performing optical measurements on a sample
US11307196B2 (en) 2016-05-11 2022-04-19 S.D. Sight Diagnostics Ltd. Sample carrier for optical measurements
JP6231709B1 (ja) * 2016-05-31 2017-11-15 シスメックス株式会社 蛍光画像分析装置および分析方法
WO2018119318A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 Essenlix Corporation Devices and methods for authenticating a sample and use of the same
JP7003158B2 (ja) 2017-02-07 2022-01-20 エッセンリックス コーポレーション 圧縮開放流アッセイおよび使用
US11927560B2 (en) 2017-02-08 2024-03-12 Essenlix Corporation Bio/chemical material extraction and assay
WO2018148470A1 (en) 2017-02-08 2018-08-16 Essenlix Corporation Sample collection and handling for delayed analysis
US12066434B2 (en) 2017-02-08 2024-08-20 Essenlix Corporation QMAX assays and applications
WO2018148609A2 (en) 2017-02-09 2018-08-16 Essenlix Corporation Colorimetric assays
US11940382B2 (en) 2017-02-09 2024-03-26 Essenlix Corporation Assay with amplification
EP3580565B1 (en) 2017-02-09 2024-05-29 Essenlix Corporation Assay using different spacing heights
CA3053301A1 (en) 2017-02-16 2018-08-23 Essenlix Corporation Assay with textured surface
US10718757B2 (en) 2017-04-11 2020-07-21 MEP Equine Solutions LLC Method for the rapid and convenient detection and enumeration of neutrophils in biological samples
US11846579B2 (en) 2017-05-19 2023-12-19 Thrive Bioscience, Inc. Systems and methods for counting cells
WO2019028123A1 (en) 2017-08-01 2019-02-07 Essenlix Corporation COLLECTION, MAINTENANCE AND DETERMINATION OF SAMPLES
US11725227B2 (en) 2017-08-01 2023-08-15 Essenlix Corporation Devices and methods for examining drug effects on microorganisms
US11280706B2 (en) 2017-08-01 2022-03-22 Essenlix Corporation Dilution calibration
US20190056385A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Abbott Point Of Care Inc. Method of imaging assay beads in a biological sample
WO2019035086A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Abbott Point Of Care Inc. SINGLE-USE TEST DEVICE FOR THE IMAGING OF DOSING BALLS
US11067526B2 (en) 2017-08-17 2021-07-20 Abbott Point Of Care Inc. Devices, systems, and methods for performing optical and electrochemical assays
EP3669171A1 (en) 2017-08-17 2020-06-24 Abbott Point of Care Inc. A single-use test device for imaging blood cells
US11253852B2 (en) 2017-08-17 2022-02-22 Abbott Point Of Care Inc. Devices, systems, and methods for performing optical assays
US20190056304A1 (en) 2017-08-17 2019-02-21 Abbott Point Of Care Inc. Method of imaging blood cells
CN110869746B (zh) 2017-08-17 2023-08-11 雅培医护站股份有限公司 利用通用电路系统执行光学和电化学测定的技术
WO2019075415A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Essenlix Corporation DEVICES AND METHODS FOR AUTHENTICATING MEDICAL ANALYSIS AND USES THEREOF
US10807095B2 (en) 2017-10-26 2020-10-20 Essenlix Corporation Making and tracking assay card
US11609224B2 (en) 2017-10-26 2023-03-21 Essenlix Corporation Devices and methods for white blood cell analyses
US11237113B2 (en) 2017-10-26 2022-02-01 Essenlix Corporation Rapid pH measurement
JP7214729B2 (ja) 2017-11-14 2023-01-30 エス．ディー．サイト ダイアグノスティクス リミテッド 光学測定用試料収容器
WO2019118652A1 (en) 2017-12-12 2019-06-20 Essenlix Corporation Sample manipulation and assay with rapid temperature change
US11510608B2 (en) 2017-12-14 2022-11-29 Essenlix Corporation Devices, systems, and methods for monitoring hair
WO2019140334A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Essenlix Corporation Homogeneous assay (ii)
CN108535145A (zh) * 2018-03-09 2018-09-14 深圳市瑞图生物技术有限公司 快速检测外周血液中网织红细胞数量的方法及装置
US11885952B2 (en) 2018-07-30 2024-01-30 Essenlix Corporation Optics, device, and system for assaying and imaging
USD898224S1 (en) 2018-11-15 2020-10-06 Essenlix Corporation Assay plate with sample landing mark
USD897555S1 (en) 2018-11-15 2020-09-29 Essenlix Corporation Assay card
USD898221S1 (en) 2018-11-15 2020-10-06 Essenlix Corporation Assay plate
USD898939S1 (en) 2018-11-20 2020-10-13 Essenlix Corporation Assay plate with sample landing mark
USD893469S1 (en) 2018-11-21 2020-08-18 Essenlix Corporation Phone holder
USD910202S1 (en) 2018-11-21 2021-02-09 Essenlix Corporation Assay plate with sample landing mark
USD910203S1 (en) 2018-11-27 2021-02-09 Essenlix Corporation Assay plate with sample landing mark
USD893470S1 (en) 2018-11-28 2020-08-18 Essenlix Corporation Phone holder
USD912842S1 (en) 2018-11-29 2021-03-09 Essenlix Corporation Assay plate
USD898222S1 (en) 2019-01-18 2020-10-06 Essenlix Corporation Assay card
USD1003453S1 (en) 2019-05-14 2023-10-31 Essenlix Corporation Assay card hinge
CN110082265A (zh) * 2019-05-21 2019-08-02 广东药科大学 基于线粒体膜电位变化检测网织红细胞的方法

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4207554A (en) * 1972-08-04 1980-06-10 Med-El Inc. Method and apparatus for automated classification and analysis of cells
US4125828A (en) * 1972-08-04 1978-11-14 Med-El Inc. Method and apparatus for automated classification and analysis of cells
US3916205A (en) * 1973-05-31 1975-10-28 Block Engineering Differential counting of leukocytes and other cells
US4146604A (en) * 1973-05-31 1979-03-27 Block Engineering, Inc. Differential counting of leukocytes and other cells
US3961346A (en) * 1975-01-30 1976-06-01 Miles Laboratories, Inc. Liquid inspection slide
US4765899A (en) * 1983-10-11 1988-08-23 E. I. Du Pont De Nemours And Company Apparatus for continuous separation of leukocyte/platelet-enriched fraction from whole blood
US4558947A (en) * 1983-11-07 1985-12-17 Wardlaw Stephen C Method and apparatus for measuring blood constituent counts
US4596695A (en) * 1984-09-10 1986-06-24 Cottingham Hugh V Agglutinographic reaction chamber
US4790640A (en) * 1985-10-11 1988-12-13 Nason Frederic L Laboratory slide
US4950455A (en) * 1987-12-22 1990-08-21 Board Of Regents, University Of Texas System Apparatus for quantifying components in liquid samples
US5200152A (en) * 1988-03-28 1993-04-06 Cytonix Corporation Miniaturized biological assembly
US5188968A (en) * 1989-12-28 1993-02-23 Olympus Optical Co., Ltd. Method and reaction kit for agglutination detection
DE69118295T2 (de) * 1990-10-01 1996-09-19 Canon Kk Vorrichtung und Verfahren zur Messung einer Probe
US5460945A (en) * 1991-05-30 1995-10-24 Center For Blood Research, Inc. Device and method for analysis of blood components and identifying inhibitors and promoters of the inflammatory response
GB9201348D0 (en) * 1992-01-22 1992-03-11 Rooney Matthew N Assessment of characteristics of fluids
ES2151494T3 (es) * 1992-03-05 2001-01-01 Becton Dickinson Co Metodo para la preparacion y analisis de leucocitos en sangre completa mediante la utilizacion de citometria de flujo.
US5547849A (en) * 1993-02-17 1996-08-20 Biometric Imaging, Inc. Apparatus and method for volumetric capillary cytometry
US5585246A (en) * 1993-02-17 1996-12-17 Biometric Imaging, Inc. Method for preparing a sample in a scan capillary for immunofluorescent interrogation
WO1997002482A1 (en) * 1995-06-30 1997-01-23 Biometric Imaging, Inc. Volumetric cell quantification method and system
JP2000501184A (ja) * 1995-11-30 2000-02-02 クロマビジョン メディカル システムズ，インコーポレイテッド 生体標本の自動画像分析の方法および装置
JP2002505441A (ja) * 1998-03-02 2002-02-19 コンピュサイト コーポレイション 選択的細胞分析
US6004821A (en) * 1998-03-07 1999-12-21 Levine; Robert A. Method and apparatus for performing chemical, qualitative, quantitative, and semi-quantitative analyses of a urine sample
US6127184A (en) * 1998-03-07 2000-10-03 Robert A. Levine Calibration of a whole blood sample analyzer
US5948686A (en) * 1998-03-07 1999-09-07 Robert A. Leuine Method for performing blood cell counts
US6235536B1 (en) * 1998-03-07 2001-05-22 Robert A. Levine Analysis of quiescent anticoagulated whole blood samples
US6180314B1 (en) * 1998-05-27 2001-01-30 Becton, Dickinson And Company Method for preparing thin liquid samples for microscopic analysis
US6358475B1 (en) * 1998-05-27 2002-03-19 Becton, Dickinson And Company Device for preparing thin liquid for microscopic analysis

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