ES2625083T3 - Compuestos basados en 4-fenil-6-(2,2,2-trifluoro-1-feniletoxi)-pirimidina y métodos para su uso - Google Patents

Compuestos basados en 4-fenil-6-(2,2,2-trifluoro-1-feniletoxi)-pirimidina y métodos para su uso Download PDF

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    • A61K31/4152—1,2-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. antipyrine, phenylbutazone, sulfinpyrazone

Abstract

Un compuesto de fórmula I:**Fórmula** o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso como un medicamento en el tratamiento, la prevención o la gestión de hipertensión pulmonar, en el que: A1 es heterociclo opcionalmente sustituido; cada R1 es independientemente halógeno, hidrógeno, C(O)RA, ORA, NRBRC, S(O2)RA; o alquilo C1-4; R2 es independientemente halógeno, hidrógeno, C(O)RA, ORA, NRBRC, S(O2)RA o alquilo C1-4; R3 es hidrógeno, C(O)RA, C(O)ORA o alquilo C1-4; R4 es hidrógeno o alquilo C1-4; cada RA es independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; cada RB es independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; cada RC es independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; y m es 1-4.

Description

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DESCRIPCION
Compuestos basados en 4-fenil-6-(2,2,2-trifluoro-1-feniletoxi)-pirimidina y metodos para su uso
La presente solicitud reivindica prioridad de la solicitud provisional de EE.UU. n.° 60/874.596, solicitada el 12 de diciembre de 2006.
1. Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a compuestos basados en 4-fenil-6-(2,2,2-trifluoro-1-feniletoxi)-pirimidina, a composiciones que los comprenden y a su uso en el tratamiento, la prevention y la gestion de enfermedades y trastornos.
2. Antecedentes
El neurotransmisor serotonina [5-hidroxitriptamina (5-HT)] esta implicado en multiples facetas del sistema nervioso del control del humor y en la regulation del sueno, la ansiedad, el alcoholismo, el abuso de drogas, la ingesta de alimentos y el comportamiento sexual. En los tejidos perifericos, la serotonina esta supuestamente implicada en la regulacion del tono vascular, la motilidad intestinal, la hemostasia primaria y las respuestas inmunes mediadas por celulas. Walther, D.J., et al., Science 299:76 (2003).
La enzima triptofano hidroxilasa (TPH) cataliza la etapa limitante de velocidad de la biosmtesis de serotonina. Se han informado dos isoformas de TPH: TPH1, que se expresa en la periferia, principalmente en el tracto gastrointestinal (GI); y TPH2, que se expresa en las neuronas serotonergicas. Id. La isoforma TPH1 esta codificada por el gen tphl; TPH2 esta codificado por el gen thp2. Id.
Se ha informado de ratones geneticamente deficientes para el gen tphl (“ratones knockout”). En un caso, se informo que los ratones expresaron cantidades normales de serotonina en regiones cerebrales serotonergicas clasicas, pero carecian ampliamente de serotonina en la periferia. Id. En otro, los ratones knockout exhibieron actividad cardiaca anormal, que se atribuyo a una carencia de serotonina en la periferia. Cote, F., et al., PNAS 100(23):13525-13530 (2003).
Debido a que la serotonina esta implicada en muchos procesos bioqmmicos, los farmacos que afectan a los receptores de serotonina normalmente estan asistidos por efectos adversos. De esta manera, existe una necesidad de nuevas formas de tratar enfermedades y trastornos que estan afectados por, mediados por o asociados a la serotonina.
Los compuestos derivados de aminoacidos multiciclicos se proponen para su uso en trastornos mediados por serotonina en el documento WO 2007/089335.
3. Sumario de la invencion
La presente invencion se dirige, en parte, a compuestos de Formula I:
imagen1
y sales farmaceuticamente aceptables y solvatos de las mismas para su uso como un medicamento en el tratamiento, la prevencion o la gestion de hipertension pulmonar, en la que: Ai es heterociclo opcionalmente sustituido; cada Ri es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; R2 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; R3 es hidrogeno, C(0)Ra, C(0)ORa o alquilo Cm; R4 es hidrogeno o alquilo C1-4; cada Ra es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rb es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rc es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; y m es 1-4.
Los compuestos particulares inhiben la actividad TPH (por ejemplo, TPH1).
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La presente invencion tambien se refiere a composiciones farmaceuticas y a metodos para tratar, prevenir y gestionar la hipertension pulmonar.
4. Breve descripcion de la figura
La Figura 1 muestra el efecto dependiente de dosis de un compuesto de la invencion en los niveles de 5-HT en el yeyuno de raton. El compuesto se dosifico oralmente en una solucion de Captisol® al 15 % a 15, 150 y 300 mpk.
5. Descripcion detallada
La presente invencion se basa, en parte, en el descubrimiento de que eliminando el gen tphl en ratones reduce significativamente el nivel de serotonina GI, aunque provoca poco, si lo hace, efecto medible en el sistema nervioso central (SNC).
La presente invencion tambien se basa en el descubrimiento de compuestos que inhiben TPH (por ejemplo, TPH1). Cuando se administra a mairnferos, los compuestos preferidos de la invencion reducen los niveles de serotonina, tienen propiedades farmacocineticas y farmacodinamicas que permiten su uso practico para el tratamiento, la prevencion y la gestion de enfermedades y trastornos y tienen un amplio margen de seguridad entre el efecto farmacologico y la toxicidad o las reacciones secundarias desfavorables.
5.1. Definiciones
Salvo que se indique de otra manera, el termino “alquenilo” significa un hidrocarburo de cadena recta, ramificada y/o dclica que tiene de 2 a 20 (por ejemplo, de 2 a 10 o de 2 a 6) atomos de carbono, y que incluye al menos un doble enlace carbono-carbono. Los restos alquenilo representativos incluyen vinilo, alilo, 1 -butenilo, 2-butenilo, isobutenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-metiM-butenilo, 2-metil-2-butenilo, 2,3-dimetil-2-butenilo, 1-hexenilo, 2-hexenilo, 3- hexenilo, 1-heptenilo, 2-heptenilo, 3-heptenilo, 1-octenilo, 2-octenilo, 3-octenilo, 1-nonenilo, 2-nonenilo, 3-nonenilo, 1-decenilo, 2-decenilo y 3-decenilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “alquilo” significa un hidrocarburo de cadena recta, ramificada y/o dclica (“cicloalquilo”) que tiene de 1 a 20 (por ejemplo, de 1 a 10 o de 1 a 4) atomos de carbono. Los restos alquilo que tienen de 1 a 4 carbonos se denominan “alquilo inferior”. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4-dimetilpentilo, octilo, 2,2,4- trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo y dodecilo. Los restos cicloalquilo pueden ser monodclicos o multidclicos, y los ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y adamantilo. Los ejemplos adicionales de restos alquilo tienen porciones lineales, ramificadas y/o dclicas (por ejemplo, 1 -etil-4-metil-ciclohexilo). El termino “alquilo” incluye hidrocarburos saturados asf como restos alquenilo y alquinilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “alcoxi” significa un grupo -O-alquilo. Los ejemplos de grupos alcoxi alquenilo representativos incluyen -OCH3, -OCH2CH3, -O(CH2)2CH3, -O(CH2)3CH3, -O(CH2)4CH3, y -O(CH2)sCH3.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “alquilarilo” o “aril-alquilo” significa un resto alquilo unido a un resto arilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “alquilheteroarilo” o “alquil-heteroarilo” significa un resto alquilo unido a un resto heteroarilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “alquilheterociclo” o “alquil-heterociclo” significa un resto alquilo unido a un resto heterociclo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “alquinilo” significa un hidrocarburo de cadena recta, ramificada o dclica que tiene de 2 a 20 (por ejemplo, de 2 a 20 o de 2 a 6) atomos de carbono, y que incluye al menos un triple enlace carbono-carbono. Los restos alquinilo representativos incluyen acetilenilo, propinilo, 1 -butinilo, 2-butinilo, 1,- pentinilo, 2-pentinilo, 3-metil-1-butinilo, 4-pentinilo, 1 -hexinilo, 2-hexinilo, 5-hexinilo, 1 -heptinilo, 2-heptinilo, 6- heptinilo, 1 -octinilo, 2-octinilo, 7-octinilo, 1 -noninilo, 2-noninilo, 8-noninilo, 1 -decinilo, 2-decinilo y 9-decinilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “arilo” significa un anillo aromatico o un sistema de anillo aromatico o parcialmente aromatico compuesto por atomos de carbono y de hidrogeno. Un resto arilo puede comprender multiples anillos unidos o condensados entre sf. Los ejemplos de restos arilo incluyen antracenilo, azulenilo, bifenilo, fluorenilo, indano, indenilo, naftilo, fenantrenilo, fenilo, 1,2,3,4-tetrahidro-naftaleno y tolilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “arilalquilo” o “aril-alquilo” significa un resto arilo unido a un resto alquilo.
Salvo que se indique de otra manera, las frases “amida biohidrolizable”, “ester biohidrolizable”, “carbamato biohidrolizable”, “carbonato biohidrolizable” “ureido biohidrolizable” y “fosfato biohidrolizable” significan una amida, un
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ester, un carbamato, un carbonato, un ureido o un fosfato, respectivamente, de un compuesto que bien: 1) no interfiere con la actividad biologica del compuesto pero puede conferir a ese compuesto propiedades ventajosas in vivo, tales como captacion, duracion de la accion o aparicion de la accion; o bien 2) es biologicamente inactivo pero se convierte in vivo en el compuesto biologicamente activo. Los ejemplos de esteres biohidrolizables incluyen esteres de alquilo inferior, esteres de alcoxiaciloxi, esteres de alquil acilamino alquilo y esteres de colina. Los ejemplos de aminas biohidrolizables incluyen amidas de alquilo inferior, amidas de a-aminoacidos, amidas de alcoxiacilo y amidas de alquilaminoalquil-carbonilo. Los ejemplos de carbamatos biohidrolizables incluyen alquilaminas inferiores, etilendiaminas sustituidas, aminoacidos, hidroxialquilaminas, aminas heterodclicas y heteroaromaticas y aminas de polieter.
Salvo que se indique de otra manera, las frases “enfermedad o trastorno mediado por serotonina periferica” y “enfermedad y trastorno mediado por serotonina periferica” significan una enfermedad y/o un trastorno que tienen uno o mas smtomas, la gravedad de los cuales esta afectada por los niveles de serotonina periferica.
Salvo que se indique de otra manera, los terminos “halogeno” y “halo” abarcan fluor, cloro, bromo y yodo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “heteroalquilo” se refiere a un resto alquilo (por ejemplo, lineal, ramificado o dclico) en el que al menos uno de sus atomos de carbono se ha reemplazado con un heteroatomo (por ejemplo, N, O o S).
Salvo que se indique de otra manera, el termino “heteroarilo” significa un resto arilo en el que al menos uno de sus atomos de carbono se ha reemplazado con un heteroatomo (por ejemplo, N, O o S). Los ejemplos incluyen acridinilo, benzimidazolilo, benzofuranilo, benzoisotiazolilo, benzoisoxazolilo, benzoquinazolinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, furilo, imidazolilo, indolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, ftalazinilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridilo, pirimidinilo, pirimidilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, tetrazolilo, tiazolilo y triazinilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “heteroarilalquilo” o “heteroaril-alquilo” significa un resto heteroarilo unido a un resto alquilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “heterociclo” se refiere a un anillo o sistema de anillo aromatico, parcialmente aromatico o no aromatico monodclico o polidclico comprendido por carbono, hidrogeno y al menos un heteroatomo (por ejemplo, N, O S). Un heterociclo puede comprender multiples anillos (es decir dos o mas) condensados o unidos entre sf. Los heterociclos incluyen heteroarilos. Los ejemplos incluyen benzo[1,3]dioxilo, 2,3- dihidro-benzo[1,4]dioxinilo, cinolinilo, furanilo, hidantoinilo, morfolinilo, oxetanilo, oxiranilo, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinonilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidropiridinilo, tetrahidropirimidinilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo y valerolactamilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “heterocicloalquilo” o “heterociclo-alquilo” se refiere a un resto heterociclo unido a un resto alquilo.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “heterocicloalquilo” se refiere a un heterociclo no aromatico.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “heterocicloalquilalquilo” o “heterocicloalquilalquilo” se refiere a un resto heterocicloalquilo unido a un resto alquilo.
Salvo que se indique de otra manera, los terminos “gestionar” “gestion” y “la gestion” abarcan prevenir la recurrencia de la enfermedad o trastorno especificados, o de uno o mas de sus smtomas, en un paciente que ya haya padecido la enfermedad o el trastorno, y/o prolongar el tiempo que un paciente que haya padecido la enfermedad o el trastorno se mantiene en remision. Los terminos abarcan modular el umbral, el desarrollo y/o la duracion de la enfermedad o el trastorno, o cambiar el modo en que un paciente responde a la enfermedad o eltrastorno.
Salvo que se indique de otra manera, la frase “sales farmaceuticamente aceptables” se refiere a sales preparadas a partir de acidos o bases no toxicos farmaceuticamente aceptables que incluyen acidos y bases inorganicos y acidos y bases organicos. Las sales de adicion de base farmaceuticamente aceptables incluyen sales metalicas hechas de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc o sales organicas hechas de lisina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocama, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglucamina) y procama. Los acidos no toxicos adecuados incluyen acidos inorganicos y organicos tales como acido acetico, algmico, antramlico, bencensulfonico, benzoico alcanforsulfonico, dtrico etensulfonico, formico, fumarico, furoico, galacturonico, gluconico, glucuronico, glutamico, glucolico, bromhfdrico, clorhfdrico, isetionico, lactico, meico, malico, mandelico, metansulfonico, mucico, mtrico, pamoico, pantotenico, fenilacetico, fosforico, propionico, salidlico, estearico, sucdnico, sulfamlico, tartarico y acido p-toluensulfonico. Los acidos no toxicos espedficos incluyen acidos clorhfdrico, bromhfdrico, fosforico, sulfurico y metansulfonico. Los ejemplos de sales espedficas incluyen de esta manera sales de clorhidrato y mesilato. Otros se conocen bien en la tecnica. Vease, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1990) y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1995).
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Salvo que se indique de otra manera, la frase “inhibidor potente de TPH1” es un compuesto que tiene una CI 50_TPH1 de menos de aproximadamente 10 pM.
Salvo que se indique de otra manera, los terminos “prevenir”, “prevencion” y “la prevencion” contemplan una accion que ocurre antes de que un paciente comience a padecer la enfermedad o el trastorno especificados, que inhibe o reduce la gravedad de la enfermedad o trastorno o de uno o mas de sus smtomas. Los terminos abarcan profilaxis.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “profarmaco” abarca esteres, carbonatos, tiocarbonatos, derivados de N-acilo, derivados de N-aciloxialquilo, derivados cuaternarios de aminas terciarias, bases de N-Mannich, bases de Schiff, conjugados de aminoacidos, esteres de fosfato, sales metalicas y esteres de sulfonato farmaceuticamente aceptables de compuestos desvelados en el presente documento. Los ejemplos de profarmacos incluyen compuestos que comprenden un resto biohidrolizable (por ejemplo, una amida biohidrolizable, un carbamato biohidrolizable, un carbonato biohidrolizable, un ester biohidrolizable, un fosfato biohidrolizable o un analogo de ureida biohidrolizable). Los profarmacos de compuestos desvelados en el presente documento se visualizan y se preparan facilmente por aquellos expertos en la materia. Vease, por ejemplo, Design of Prodrugs,Bundgaard, A. Ed., Elseview, 1985; Bundgaard, H., "Design and Application of Prodrugs," A Textbook of Drug Design and Development, Krosgaard-Larsen y H. Bundgaard, Ed., 1991, Capftulo 5, p. 113-191; y Bundgaard, H., Advanced Drug Delivery Review, 1992, 8, 1-38.
Salvo que se indique de otra manera, una “cantidad profilacticamente eficaz” de un compuesto es una cantidad suficiente para prevenir una enfermedad o afeccion, o uno o mas smtomas asociados a la enfermedad o afeccion, o prevenir su recurrencia. Una cantidad profilacticamente eficaz de un compuesto es una cantidad de agente terapeutico, solo o en combinacion con otros agentes, que proporciona un beneficio profilactico en la prevencion de la enfermedad. La frase “cantidad profilacticamente eficaz” puede abarcar una cantidad que mejore en global la profilaxis o potencie la eficiencia profilactica de otro agente profilactico.
Salvo que se indique de otra manera, la frase “grupo de proteccion” o “grupo protector”, cuando se usan para referirse a parte de una molecula sometida a una reaccion qmmica, significa un resto qmmico que no es reactivo en las condiciones de esa reaccion qmmica, y que pueden retirarse para proporcionar un resto que sea reactivo en esas condiciones. Los grupos protectores se conocen bien en la tecnica. Vease Greene, T.W. y Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis (3a ed., John Wiley & Sons: 1999); Larock, R.C., Comprehensive Organic Transformations (2a ed., John Wiley & Sons: 1999). Algunos ejemplos incluyen bencilo, difenilmetilo, tritilo, Cbz, Boc, Fmoc, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo y ftalimido.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “pseudohalogeno” se refiere a un anion poliatomico que se asemeja a un ion haluro en su qmmica acido-base, de sustitucion y redox, generalmente como baja basicidad, y forma un radical libre en condiciones de polimerizacion de radicales por transferencia de atomo. Los ejemplos de pseudohalogenos incluyen iones azida, cianuro, cianato, tiocianato, tiosulfato, sulfonatos y haluros de sulfonilo.
Salvo que se indique de otra manera, la frase “inhibidor selectivo de TPH1” es un compuesto que tiene una CI50_TPH2 que es al menos 10 veces mayor que su CI50_TPH1.
Salvo que se indique de otra manera, la frase “composicion estereomericamente enriquecida de” un compuesto se refiere a una mezcla del compuesto dicho y su estereoisomero o estereoisomeros que contienen uno o mas del compuesto dicho que de su estereoisomero o estereoisomeros. Por ejemplo, una composicion estereomericamente enriquecida de (S)-butan-2-ol abarca mezclas de (S)-butan-2-ol y (R)-butan-2-ol en relaciones de, por ejemplo, aproximadamente 6o/40, 70/30, 80/20, 90/10, 95/5 y 98/2.
Salvo que se indique de otra manera, la frase “mezcla esteroisomerica” abarca mezclas racemicas asf como mezclas estereomericamente enriquecidas (por ejemplo, R/S = 30/70, 35/65, 40/60, 45/55, 55/45, 60/40, 65/35 y 70/30).
Salvo que se indique de otra manera, la frase “estereomericamente pura” significa una composicion que comprende un estereoisomero de un compuesto y esta sustancialmente libre de otros estereoisomeros de ese compuesto. Por ejemplo, una composicion estereomericamente pura de un compuesto que tiene un estereocentro estara sustancialmente libre del estereoisomero opuesto del compuesto. Una composicion estereomericamente pura de un compuesto que tiene dos estereocentroes estara sustancialmente libre de otros diastereomeros del compuesto. Una composicion estereomericamente pura de un compuesto que tiene multiples esterecentros, pero se dibuja o se nombra de tal manera que las estereoqmmicas de menos de todos sus estereocentros se definan, esta sustancialmente libre de los isomeros del compuesto que tienen diferentes estereoqmmicas en los estereocentros para los que se define la estereoqmmica. Por ejemplo, “((1-R)-1,2-dicloropropil)benceno estereomericamente puro” se refiere a ((1-R)-1,2-dicloropropil)benceno que esta sustancialmente libre de ((1-S)-1,2-dicloropropil)benceno.
Un compuesto estereomericamente puro tfpico comprende mas de aproximadamente el 80 % en peso de un estereoisomero y el compuesto y menos de aproximadamente el 20 % en peso de otros estereoisomeros del compuesto, mas de aproximadamente el 90 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de
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aproximadamente el 10 % en peso de los otros estereoisomeros del compuesto, mas de aproximadamente el 95 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de aproximadamente el 5 % en peso de los otros estereoisomeros del compuesto, mas de aproximadamente el 97 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de aproximadamente el 3 % en peso de los otros estereoisomeros del compuesto, o mas de aproximadamente el 99 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de aproximadamente el 1 % en peso de los otros estereoisomeros del compuesto.
Salvo que se indique de otra manera, el termino “sustituido”, cuando se usa para describir una estructura o un resto qmmicos, se refiere a un derivado de esa estructura o resto en el que uno o mas de sus atomos de hidrogeno esta sustituido con un atomo, un resto qmmico o un grupo funcional tal como, pero no limitado a, alcohol, aldetndo, alcoxi, alcanoiloxi, alcoxicarbonilo, alquenilo, alquilo (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, t-butilo), alquinilo, alquilcarboniloxi (- OC(O)alquilo), amida (-C(O)NH-alquil- o -alquil-NHC(O)alquilo), amidinilo (-C(NH)NH-alquilo o -C(Nr)NH2), amina (primaria, secundaria y terciaria tales como alquilamino, arilamino, arilalquilamino), aroilo, arilo, ariloxi, azo, carbamoilo (-NHC(O)O-alquil- o -OC(O)NH-alquilo), carbamilo (por ejemplo, CONH2, asf como CONH-alquilo, CONH-arilo, y CONH-arilalquilo), carbonilo, carboxilo, acido carboxflico, antndrido de acido carboxflico, cloruro de acido carboxflico, ciano, ester, epoxido, eter (por ejemplo, metoxi, etoxi), guanidino, halo, haloalquilo (por ejemplo, - CCla, -CF3, -C(CF3)3), heteroalquilo, hemiacetal, imina (primaria y secundaria), isocianato, isotiocianato, cetona, nitrilo, nitro, oxfgeno (es decir, para proporcionar un grupo oxo), fosfodiester, sulfuro, sulfonamido (por ejemplo, SO2NH2), sulfona, sulfonilo (incluyendo alquilsulfonilo, arilsulfonilo y arilalquilsulfonilo), sulfoxido, tiol (por ejemplo, sulfhidrilo, tioeter) y urea (-NHcoNHalquil-).
Salvo que se indique de otra manera, una “cantidad terapeuticamente eficaz” de un compuesto es una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapeutico en el tratamiento o la gestion de una enfermedad o afeccion, o para retrasar o minimizar uno o mas smtomas asociados a la enfermedad o afeccion. Una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto es una cantidad de un agente terapeutico, solo o en combinacion con otras terapias, que proporciona un beneficio terapeutico en el tratamiento o la gestion de la enfermedad o afeccion. La frase “cantidad terapeuticamente eficaz” puede abarcar una cantidad que mejore la terapia global, reduzca o evite los smtomas o las causas de una enfermedad o afeccion, o potencie la eficiencia terapeutica de otro agente terapeutico.
Salvo que se indique de otra manera, la frase CI50_TPH1” es la CI50 de un compuesto para TPH1 como se determina usando el ensayo de inhibicion in vitro que se describe en los Ejemplos, a continuacion.
Salvo que se indique de otra manera, la frase CI5o_TPH2” es la CI50 de un compuesto para TPH2 como se determina usando el ensayo de inhibicion in vitro que se describe en los Ejemplos, a continuacion.
Salvo que se indique de otra manera, los terminos “tratar”, “tratamiento” y “el tratamiento” contemplan una accion que ocurre mientras un paciente esta padeciendo la enfermedad o el trastorno especificados, que reduce la gravedad de la enfermedad o el trastorno, o uno o mas de sus smtomas, o retrasa o ralentiza el avance de la enfermedad o trastorno.
Salvo que se indique de otra manera, la frase “que incluye” tiene el mismo significado que “incluyen” y el termino “incluye” tiene el mismo significado que “incluye, pero no se limita a”. Similarmente, la frase “tal como” tiene el mismo significado que “tal como, pero no limitado a”.
Salvo que se indique de otra manera, uno o mas adjetivos que siguen inmediatamente a una serie de nombres ha de construirse como que se aplica a cada uno de los nombres. Por ejemplo, la frase “alquilo, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido” tiene el mismo significado que “alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido”.
Notese que un resto qmmico que forma parte de un compuesto mas grande puede describirse en el presente documento usando un nombre comunmente acordado cuando existe como una molecula unica o un nombre comunmente acordado de su radical. Por ejemplo, los terminos “piridina” y “piridilo” se acuerdan como el mismo significado cuando se usan para describir un resto unido a otros restos qmmicos. De esta manera las dos frases “XOH, en el que X es piridilo” y “XOH, en el que X es piridina” se acuerdan como el mismo significado, y abarcan los compuestos piridin-2-ol, piridin-3-ol y piridin-4-ol.
Notese tambien que si la estereoqmmica de una estructura o una porcion de una estructura no se indica con, por ejemplo, lmeas en negrita o punteadas, la estructura o la porcion de la estructura ha de interpretarse que abarca todos los estereoisomeros de la misma. Similarmente, los nombres de los compuestos que tienen uno o mas centros quirales que no especifican la estereoqmmica de aquellos centros abarca estereoisomeros puros y mezclas de los mismos. Ademas, cualquier atomo mostrado en un dibujo con valencias sin satisfacer se asume que esta unido a suficientes atomos de hidrogeno para satisfacer las valencias. Ademas, los enlaces qmmicos representados con una lmea solida paralela a una lmea punteada abarca tanto enlaces sencillos como dobles (por ejemplo, aromaticos) si la valencia lo permite.
5.2. Compuestos
La presente invention abarca, entre otros, compuestos de formula I:
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y sales y solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos para su uso como un medicamento en el tratamiento, la prevention o la gestion de hipertension pulmonar, en la que: Ai es heterociclo opcionalmente sustituido; cada R1 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(O)RA, ORA, NRBRc, S(O2)RA; o alquilo C1-4; R2 es 10 independientemente halogeno, hidrogeno, C(O)RA, ORA, NRBRC, S(O2)RA o alquilo C1-4; R3 es hidrogeno, C(O)RA, C(O)ORA o alquilo C1-4; R4 es hidrogeno o alquilo C1-4; cada RA es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rb es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada RC es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; y m es 1-4.
15 En una realization, el compuesto es de formula:
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En otra, es de formula:
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en las que: cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(O)RA, ORA, NRBRC, S(O2)RA o alquilo C1-4; y n es 1-3.
10 En otra, es de formula:
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en las que: cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y p es 1-4.
En otra, es de formula:
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5 en las que: cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y q es 1-2.
En otra, es de formula:
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en las que: cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(O)RA, ORA, NRBRC, S(O2)RA o alquilo Ci-4; y q es 1-2.
Con respecto a las diversas formulas descritas en el presente documento, en particular compuestos de la invencion, Ai es aromatico. En otras, Ai no es aromatico. En algunas, Ai esta opcionalmente sustituido con uno o mas de halogeno o alquilo inferior.
En algunas, R1 es hidrogeno o halogeno.
En algunas, m es 1.
En algunas, R2 es hidrogeno o amino.
En algunas, R3 es hidrogeno o alquilo C1-4. En otras, R3 es C(0)Ra y Ra alquilo C1-4.
En algunas, R4 es hidrogeno o alquilo C1-4.
En algunas, R5 es hidrogeno o alquilo C1-4 (por ejemplo, metilo).
En algunas, n es 1.
En algunas, p es 1.
En algunas, q es 1.
La presente invencion se refiere a compuestos estereomericamente puros y a composiciones estereomericamente enriquecidas de ellos. Los estereoisomeros pueden sintetizarse asimetricamente o resolverse usando tecnicas convencionales tales como columnas quirales, agentes de resolucion quiral o resolucion enzimatica. Vease, por ejemplo, Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, Nueva York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw Hill, NY, 1962); y Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions, p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).
Los compuestos particulares de la invencion son potentes inhibidores de TPH1. Los compuestos espedficos tienen una CI50_TPH1 de menos de aproximadamente 10, 5, 2,5, 1,0,75, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1 o 0,05 ^M.
Los compuestos particulares son inhibidores selectivos de TPH1. Los compuestos espedficos tienen una CI5o_TPH1 que es aproximadamente 10, 25, 50, 100, 250, 500 o 1000 veces menor que su CI50_TPH2.
Los compuestos particulares no inhiben significativamente la tirosina hidroxilasa (TH) humana. Por ejemplo, los compuestos espedficos tienen una CI50 para TH mayor de aproximadamente 100, 250, 500 o 1000 ^M.
Los compuestos particulares no inhiben significativamente la fenilalanina hidroxilasa (PAH) humana. Por ejemplo, los compuestos espedficos tienen una CI50 para PAH mayor de aproximadamente 100, 250, 500 o 1000 ^M.
Los compuestos particulares no se unen significativamente (por ejemplo, inhiben con una CI50 mayor de aproximadamente 10, 25, 50, 100, 250, 500, 750 o 1000 ^M) a uno o mas de los siguientes: enzima convertidora de antgiotensina, receptor de eritropoyetina (EPO), factor iX, factor XI, integrina (por ejemplo a4), receptor de fibrinogeno isoxazolina o isoxazol, metaloproteasa, endopeptidasa neutra (NEP), fosfatasa (por ejemplo, tirosina fosfatasa), fosfodiesterasa (por ejemplo, pDe-4), polimerasa, PPARy, TNF-a, molecula 1 de adhesion a las celulas vasculares (VCAM-1) o el receptor de vitronectina. La capacidad de un compuesto para unirse a (por ejemplo, inhibir) cualquiera de estas dianas puede determinarse facilmente usando metodos conocidos en la tecnica, como se describe en las referencias citadas anteriormente. Los compuestos espedficos de la invencion no inhiben la adhesion celular.
Cuando se administran a mamiferos (por ejemplo, ratones, ratas, perros, monos o humanos), ciertos compuestos de
la invencion no atraviesan facilmente la barrera hematoencefalica (por ejemplo, menos de aproximadamente un 5, 2,5, 2, 1,5, 1, 0,5 o 0,01 por ciento del compuesto en la sangre pasa hacia el cerebro). La capacidad o la incapacidad de un compuesto para cruzar la barrera hematoencefalica pueden determinarse por metodos conocidos en la tecnica. Vease, por ejemplo, Riant, P. et al., Journal of Neurochemistry 51:421-425 (1988); Kastin, A.J., 5 Akerstrom, V., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics 294:633-636 (2000); W. A. Banks, W.A., et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics 302:1062-1069 (2002).
5.3. Sintesis de compuestos
10 Los compuestos de la invencion pueden preparase por metodos conocidos en la tecnica y por metodos descritos en el presente documento.
Por ejemplo, los compuestos de formula I pueden prepararse como se muestra en el Esquema 1:
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en el que P1 es R1 o un grupo protector; P2 es un grupo protector; P3 es OR2 o un grupo protector; Y1 e Y3 son
halogeno (por ejemplo, Br, Cl) o un pseudohaluro apropiado (por ejemplo, triflato); y cada uno de los grupos A1, R1 R2 y R3 se definen en algun lugar en el presente documento.
Los compuestos de la invencion tambien pueden prepararse por la aproximacion representada a continuacion en el Esquema 2:
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Las reacciones individuales mostradas en los esquemas anteriores pueden realizarse usando condiciones conocidas en la tecnica. Por ejemplo, los catalizadores de paladio y las condiciones adecuadas para el acoplamiento de Suzuki 5 de los restos que contienen boro y halogeno se conocen bien y se proporcionan ejemplos a continuacion. Ademas, los tipos y los usos apropiados de los grupos protectores se conocen bien, como lo son metodos de su retirada y reemplazamiento con restos tales como, pero no limitados a, hidrogeno (por ejemplo, hidrolisis en condiciones acidas o basicas).
10 Los derivados ester de compuestos de la invencion pueden prepararse facilmente usando metodos tales como aquellos mostrados a continuacion en el Esquema 3:
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SOC
Etanol. calor
(BoC)20,
THF,
Base
1)R4OH
condiciones de
acoplamiento
2) desproteccion Boc
Esquema 3
Usando metodos conocidos en la tecnica, las aproximaciones sinteticas mostradas anteriormente se modifican facilmente para obtener un amplio intervalo de compuestos. Por ejemplo, pueden usarse cromatografia quiral y otras 5 tecnicas conocidas en la tecnica para separar estereoisomeros del producto final. Vease, por ejemplo, Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, Nueva York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33:2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw Hill, NY, 1962); y Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions, p. 268 (E.L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972). Ademas, como se muestra en algunos de los esquemas anteriores, las smtesis pueden utilizar 10 materiales de partida quirales para producir productos estereomericamente enriquecidos o puros.
5.4. Metodos de uso
La presente invencion se refiere a un metodo para inhibir TPH, que comprende poner en contacto la TPH con un 15 compuesto de la invencion (es decir, un compuesto descrito en el presente documento). En un metodo particular, la TPH es TPH1. En otro, la TPH es TPH2. En un metodo particular, la inhibicion es in vitro. En otro, la inhibicion es in vivo.
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Una realizacion se refiere a un metodo para inhibir TPH1 en un mairnfero (por ejemplo, un humano), que comprende administrar al mairnfero un compuesto de la invencion. En un metodo particular, la TPH2 no se inhibe significativamente. En un metodo, el compuesto no cruza facilmente la barrera hematoencefalica. En otro, el compuesto es un inhibidor selectivo de la TPH1.
La invencion se refiere a metodos para el tratamiento, la prevencion y la gestion de hipertension pulmonar (por ejemplo, hipertension asociada a hipertension portal).
En metodos particulares con respecto a la invencion, el tratamiento, la gestion y/o la prevencion de una enfermedad o trastorno se logra mientras se evitan efectos adversos asociados a la alteracion de los niveles de serotonina del sistema nervioso central (SNC). Los ejemplos de tales efectos adversos incluyen agitacion, trastornos de ansiedad, depresion y trastornos del sueno (por ejemplo insomnio y perturbacion del sueno). En metodos particulares con respecto a la invencion, el tratamiento, la gestion y/o la prevencion de una enfermedad o trastorno se logra mientras se evitan efectos adversos asociados a la alteracion de los niveles de serotonina del sistema nervioso central (SNC). Los ejemplos de tales efectos adversos incluyen agitacion, trastornos de ansiedad, depresion y trastornos del sueno (por ejemplo insomnio y perturbacion del sueno)
5.5. Composiciones farmaceuticas
La presente invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que comprenden uno o mas compuestos de la invencion. Ciertas composiciones farmaceuticas son formas de dosificacion unitaria adecuadas para administracion oral, mucosa (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal o rectal), parenteral (por ejemplo, subcutanea, intravenosa, inyeccion de bolo, intramuscular o intraarterial) o administracion transdermica a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificacion incluyen, pero no se limitan a: comprimidos; comprimidos encapsulados; capsulas, tales como capsulas de gelatina elasticas blandas; obleas; trociscos; pastillas para chupar; dispersiones; supositorios; unguentos; cataplasmas (apositos); pastas; polvos; aderezos; cremas; escayolas; soluciones; aerosoles (por ejemplo, pulverizadores nasales o inhaladores); geles; formas de dosificacion lfquida adecuadas para la administracion mucosa a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo, suspensiones lfquidas acuosas o no acuosas, emulsiones aceite en agua o emulsiones lfquidas agua en aceite), soluciones y elixires; formas de dosificacion lfquida adecuadas para la administracion parenteral a un paciente; y solidos esteriles (por ejemplo, solidos cristalinos o amorfos) que pueden reconstituirse para proporcionar formas de dosificacion lfquidas adecuadas para la administracion parenteral a un paciente.
La formulacion debe adecuarse al modo de administracion. Por ejemplo, la administracion oral de un compuesto susceptible a la degradacion en el estomago puede lograrse usando un recubrimiento enterico. De forma similar, una formulacion puede contener ingredientes que faciliten el transporte del principio o principios activos al sitio de accion. Por ejemplo, los compuestos pueden administrarse en formulaciones liposomicas para protegerlos de las enzimas degradantes, facilitar el transporte en el sistema circulatorio y efectuar su transporte a traves de las membranas celulares.
De forma similar, los compuestos escasamente solubles pueden incorporarse en formas de dosificacion lfquidas (y formas de dosificacion adecuadas para reconstitucion) con la ayuda de agentes solubilizantes, emulsionantes y tensioactivos tales como, pero no limitados a, ciclodextrinas (por ejemplo, a-ciclodextrina, p-ciclodextrina, Captisol® y Encapsin™ (vease, por ejemplo, Davis y Brewster, Nat. Rev. Drug Disc. 3:1023-1034 (2004)), Labrasol®, Labrafil®, Labrafac®, cremafor y disolventes no acuosos, tales como, pero no limitados a, alcohol etflico, alcohol isopropflico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bendlico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetil formamida, dimetil sulfoxido (DMSO), aceites biocompatibles (por ejemplo, aceites de semilla de algodon, de cacahuete, de mafz, de germen, de oliva, de ricino y de sesamo), glicerol, alcohol tetrahidrofunlico, polietilenglicoles, esteres de acido graso de sorbitan y mezclas de los mismos (por ejemplo., DMSO:aceite de mafz).
Los compuestos poco solubles en agua tambien pueden incorporarse en suspensiones usando otras tecnicas conocidas en la tecnica. Por ejemplo, las nanopartfculas de un compuesto pueden suspenderse en un lfquido para proporcionar una nanosuspension (vease, por eemplo, Rabinow, Nature Rev. Drug Disc. 3:785-796 (2004)). Las formas de nanopartfculas de los compuestos descritos en el presente documento pueden prepararse por los metodos descritos en las Publicaciones de Patente de EE.UU. n.° 2004-0164194, 2004-0195413, 2004-0251332, 2005-0042177 A1, 2005-0031691 A1 y las Patentes de EE.UU. n.1 5.145.684, 5.510.118, 5.518.187, 5.534.270, 5.543.133, 5.662.883, 5.665.331, 5.718.388, 5.718.919, 5.834.025, 5.862.999, 6.431.478, 6.742.734, 6.745.962. La forma de nanopartfcula puede comprender partfculas que tienen un tamano de partfcula promedio de menos de aproximadamente 2000 nm, menos de aproximadamente 1000 nm o menos de aproximadamente 500 nm.
La composicion, la forma y el tipo de una forma de dosificacion variaran tfpicamente dependiendo del uso. Por ejemplo, una forma de dosificacion usada en el tratamiento agudo de una enfermedad puede contener cantidades mayores de uno o mas de los principios activos que comprende que una forma de dosificacion usada en el tratamiento cronico de la misma enfermedad. Similarmente, una forma de dosificacion parenteral puede contener pequenas cantidades de uno o mas de los ingredientes activos que comprende que una forma de dosificacion oral usada para tratar la misma enfermedad. Como tener en cuenta tales diferencias sera evidente para aquellos
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expertos en la materia. Vease, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).
5.5.1. Formas de dosificacion oral
Las composiciones farmaceuticas con respecto a la invencion adecuadas para la administracion oral pueden presentarse como formas de dosificacion discretas, tales como, pero no se limitan a, comprimidos (por ejemplo, comprimidos masticables), comprimidos encapsulados, capsulas y lfquidos (por ejemplo, jarabes con sabor). Tales formas de dosificacion contienen cantidades predeterminadas de principios activos y pueden prepararse por metodos de farmacia bien conocidos para aquellos expertos en la materia. Vease generalmente, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).
Las formas de dosificacion oral tfpicas se preparan combinando el principio o principios activos en una mezcla mtima con al menos un excipiente de acuerdo con las tecnicas de formacion de compuestos farmaceuticos convencionales. Los excipientes pueden tomar una amplia diversidad de formas dependiendo de la forma de preparacion deseada para la administracion.
Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y las capsulas representan las formas unitarias de dosificacion oral mas ventajosas. Si desea, los comprimidos pueden recubrirse por tecnicas convencionales acuosas o no acuosas. Tales formas de dosificacion pueden prepararse por metodos convencionales de farmacia. En general, las composiciones farmaceuticas y las formas de dosificacion se preparan mezclando uniforme e mtimamente los principios activos con vehnculos lfquidos, vehnculos solidos finamente divididos o ambos, y despues dando forma al producto en la presentacion deseada si es necesario. Pueden incorporarse disgregantes en formas de dosificacion solidas para facilitar la rapida disolucion. Tambien pueden incorporarse lubricantes para facilitar la fabricacion de formas de dosificacion (por ejemplo, comprimidos).
5.5.2. Formas de dosificacion oral
Las formas de dosificacion farmaceutica pueden administrarse a pacientes por diversas vfas incluyendo subcutanea, intravenosa (incluyendo inyeccion de bolo), intramuscular e intraarterial. Debido a que su administracion tfpicamente pasa por alto las defensas naturales de los pacientes contra los contaminantes, las formas de dosificacion parenteral son espedficamente esteriles o capaces de esterilizarse antes de la administracion a un paciente. Los ejemplos de formas de dosificacion parenteral incluyen soluciones listas para inyeccion, productos secos listos para disolverse o suspenderse en un vehnculo farmaceuticamente aceptable para la inyeccion, suspensiones listas para la inyeccion y emulsiones.
Los vehnculos adecuados que pueden usarse para proporcionar formas de dosificacion parenteral de la invencion se conocen bien por aquellos expertos en la materia. Los ejemplos incluyen: Agua para Inyeccion USP; vehnculos acuosos tales como Inyeccion de Cloruro Sodico, Inyeccion de Ringer, Inyeccion de Dextrosa, Inyeccion de Dextrosa y Cloruro Sodico e Inyeccion de Lactato de Ringer; vehnculos miscibles en agua tales como alcohol etflico, polietilenglicol y polipropilenglicol; y vehnculos no acuosos tales como aceite de mafz, aceite de semillas de algodon, aceite de cacahuete, aceite de sesamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo y benzoato de bencilo.
6. EJEMPLOS
6.1. Produccion de ratones con gen tphl interrumpido
El exon 3 del gen TPH1 murino se retiro por marcaje genico esencialmente como se describe por Wattler et al., Biotechniques 26(6):1150-6 (1999). Los animales knockout resultantes mostraron actividad TPH normal en el cerebro pero una expresion de TPH drasticamente reducida en el intestino.
6.2. Efectos fisiologicos de la interrupcion del gen tph1
Se estudiaron ratones homocigotos (-/-) para la interrupcion de tphl junto con ratones heterocigotos (+/-) para la interrupcion del gen, junto con companeros de camada de tipo silvestre (+/+). Durante este analisis, los ratones se sometieron a un tratamiento medico usando un ajuste integrado de procedimientos diagnosticos medicos disenados para evaluar la funcion de los sistemas de organos principales en un sujeto mairnfero. Estudiando los ratones knockout homocigotos (-/-) en los numeros descritos y junto con companeros de camada heterocigotos (+/-) y tipo silvestre (+/+), se obtuvieron datos mas fiables y repetibles.
La interrupcion del gen tphl afecto principalmente a la isoforma del tracto gastrointestinal de TPH (TPH1) y tuvo poco o no tuvo efecto en la isoforma cerebral de TPH (TPH2). La interrupcion del gen no provoco efectos adversos medibles en el sistema nervioso central. Esto se confirmo por inmunoqmmica de serotonina, que mostro que la serotonina se redujo fuertemente o estaba ausente en el estomago, el duodeno, el yeyuno, el Aeon, el ciego y el colon, mientras que los niveles de serotonina no se vieron afectados en las neuronas del rafe.
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Algunos ratones homocigotos (-/-) para la disrupcion del gen tphl exhibieron una disminucion en la trombosis sin un aumento significativo en el sangrado u otras indicaciones adversas.
6.3. Caracterizacion por HPLC
En algunos de los siguientes ejemplos sinteticos, se proporcionan los tiempos de retencion de la cromatografia Kquida de alto rendimiento (HPLC). Las diversas condiciones usadas para obtener esos tiempos de retencion se describen a continuacion:
Metodo A: YMC-PACK ODS-A 3,0x50mm; Disolvente A = H2O, 0,1 % de TFA; Disolvente B = MeOH, 0,1 % de TFA; % de B del 10 al 90 % durante 4 min; caudal = 2 ml/min; longitud de onda de observacion = 220 y 254 nm. Metodo B: YMC-PACK ODS-A 3,0x50mm; Disolvente A = 90 % de agua, 10 % de MeOH con 0,1 % de TFA; Disolvente B = 90 % de MeOH, 10 % de agua con 0,1 % de TFA; % de B del 0 al 100 % durante 4 min; caudal = 2 ml/min; longitud de onda de observacion = 220 y 254 nm.
Metodo C: ShimPack VP ODS 4,6x50mm; Disolvente A = 90 % de H2O, 10 % de MeOH, 1 % de TFA; Disolvente B = 10 % de H2O, 90 % de MeOH, 1 % de TFA; % de B del 0 al 100 % durante 2 min; caudal = 3,5 ml/min; longitud de onda de observacion = 220 y 254 nm.
Metodo D: Shim VP ODS 4,6x50 mm; Disolvente A = H2O con 0,1 % de TFA; Disolvente B = MeOH con 0,1 % de TFA; % de B del 0 al 100 % durante 4 min; caudal = 3 ml/min; longitud de onda de observacion = 254 nm.
Metodo E: YMC Pack ODS-A 4,6 x 33 mm; Disolvente A = H2O, 0,1 % de TFA; Disolvente B = MeOH con 0,1 % de TFA; % de B del 10 al 90 % durante 3 min; caudal 2 ml/min; longitud de onda de observacion 220 y 254 nm. Metodo F: YMC-Pack ODS-A 3,0x50 mm; Disolvente A = 90 % de H2O, 10 % de MeOH, 1 % de TFA; Disolvente B = 10 % de H2O, 90 % de MeOH, 1 % de TFA; % de B del 10 al 90 % durante 4 min; caudal = 2 ml/min longitud de onda de observacion = 220 y 254 nm.
6.4. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-(4-(2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(4-piridin-4-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4- il)fenil)-propi6nico
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Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,027 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) se anadio a una solucion de 4- piridin-4-il-benzaldeddo (500 mg, 2,73 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (485 pl, 3,28 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla resultante se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 5 ml de HCl 1 N y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. El disolvente se evaporo a sequedad, se anadieron 9 ml de solucion acuosa de carbonato sodico 1 M, la fase acuosa se extrajo con cloroformo (3x10 ml) y la capa de cloroformo combinada se lavo con agua, se seco sobre MgSO4. El disolvente organico se retiro al vado para dar 360 mg de 2,2,2-trifluoro-1-(4-piridin-4-il-fenil)etanol, rendimiento: 51 %.
La mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-(4-piridin-4-il-fenil)etanol (100 mg, 0,40 mmol), 2-amino-4,6-dicloropirimidina (60 mg, 0,38 mmol) y carbonato de cesio (468 mg, 1,44 mmol) se disolvio en 2 ml de 1,4-dioxano en un tubo sellado de 50 ml. La mezcla se calento a 110 °C durante toda la noche, despues se enfrio a temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo y despues se filtro a traves de Celite. El filtrado se concentro para dar 120 mg de 4-cloro-6- [2,2,2-trifluoro-1(4-piridin-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina, rendimiento: 80 %.
En un vial de microondas, se mezclaron juntos 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1(4-piridin-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina (30 mg, 0,080 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (21 mg, 0,098 mmol) y 1 ml de acetonitrilo, y 0,7 ml de agua. Despues, se anadio a la mezcla carbonato sodico acuoso 1 N, seguido de un 5 por ciento en moles de dicloro-bis- (trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por LC prep. para dar 6,7 mg de acido (S)-2-Amino-3-(4-(2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1- (4-piridin-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il)fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 8,82 (s, 2h), 8,26 (s, 2H), 8,02 (d, J=8Hz, 2H), 7,97(d, J=8,4Hz, 2H), 7,86 (d, J=8,4Hz, 2H), 7,45 (d, J=8Hz 2H), 6,89(q, J=6,8Hz, 1H), 6,81(d, J=2Hz,1H), 4,29(t, J=1,6Hz, 1H), 3,39(m, 1H), 3,19(m, 1H).
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6.5. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-(4-f6-r2.2.2-trifluro-1-(2-piridin-4-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il)-fenil)- propionico
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Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,027 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 2-piridin-4-il- benzaldeMdo (500 mg, 2,73 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (485 pl, 3,28 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion despues se trato con 5 ml de HCl 1 N y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. El disolvente se evaporo a sequedad, se anadieron 9 ml de una solucion acuosa de carbonato sodico 1 M, la fase acuosa se extrajo con cloroformo (3x10 ml) y la capa organica combinada se lavo con agua, se seco sobre MgSO4. El disolvente organico se evaporo para dar 300 mg de 2,2,2-trifluoro-1-(2-piridin-4-il-fenil)etanol, rendimiento: 43 %.
La mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-(2-piridin-4-il-fenil)etanol (100 mg, 0,40 mmol), 4,6-dicloro-pirimidina (54 mg, 0,38 mmol), carbonato de cesio (468 mg, 1,44 mmol) y 1,4-dioxano (1 ml). La mezcla se calento a 110 °C durante toda la noche. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente. Se anadieron 10 ml de acetato de etilo, y despues la mezcla se filtro a traves de Celite. El filtrado se concentro para dar 110 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trilfuoro-1-(2-piridin- 4-il-fenil)-etoxi]-pirimidina, rendimiento: 76 %.
En un vial de microondas se mezclaron juntos 4-cloro-6-[2,2,2-trilfuoro-1-(2-piridin-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidina (30 mg, 0,082 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (21 mg, 0,098 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. Despues, se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la mezcla, seguido de un 5 por ciento en moles de dicloro-bis- (trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por LC prep. para dar 19 mg de acido (S)-2-Amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluro-1-(2-piridin-4- il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 8,94 (d, J=6Hz, 2H), 8,79(d, J=1,2Hz, 1H), 8,15(m, 4H), 7,84(t, J=5,2Hz, 1H), 7,62(m, 3H), 7,46(m, 3H), 6,66(q, J=6,4Hz, 1H), 4,31(q, J=6Hz, 1H), 3,41(m, 1H), 3,26(m, 1H).
6.6. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-(4-f2-amino-6-r2.2.2-trifluro-1-(2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil1-etoxv)- pirimidin-4-il)-fenili1-propi6nico
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En un vial de microondas, se mezclaron juntos 3-bromo-4-metil-tiofeno (653 mg, 3,69 mmol), acido 2-formil fenilboronico (500 mg, 3,36 mmol, y 7 ml de acetonitrilo. Despues se anadieron 6,7 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la solucion anterior, seguido de un 5 por ciento en moles de diclorobis(trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, se anadieron 50 ml de acetato de etilo, la capa organica se separo, se lavo con agua, se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar el producto bruto, que se purifico por columna ISCO CombiFlash para dar 530 mg de acido 2-(4-metil-tiofen-3-il)benzaldehido, rendimiento: 78 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,013 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 2-(4-metil- tiofen-3-il)benzaldehido (260 mg, 2,29 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (228 pl, 1,54 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion despues se trato con 5 ml de HCl 1 N y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 340 mg de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etanol, rendimiento del 97 %.
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Una mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etanol (100 mg, 0,37 mmol), 2-amino-4,6-dicloro- pirimidina (54 mg, 0,33 mmol), carbonato de cesio (481 mg, 1,48 mmol) y 1,4-dioxano (1 ml) se calento a 110 °C durante toda la noche. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo. Despues la mezcla se filtro a traves de Celite, el filtrado se concentro para dar 110 mg de 4-cloro-6-{2,2,2- trilfuoro-1 -[2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-2-ilamina, rendimiento: 76 %.
En un vial de microondas, se mezclaron juntos 4-cloro-6-{2,2,2-trilfuoro-1-[2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin- 2-ilamina (30 mg, 0,075 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (19 mg, 0,09 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. Despues, se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la mezcla, seguido de un 5 por ciento en moles de dicloro-bis-(trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por HPLC prep. para dar 15,1 mg de acido (S)-2-Amino-3-(4-{2-amino-6- [2,2,2-trifluro-1-(2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxy}-pirimidin-4-il)-fenili]-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 7,94(d, J=8Hz, 2H), 7,80(s, 1H), 7,50(m, 5H), 7,25(m, 2H), 7,03(s, 1H), 6,94(s, 1H), 4,31(t, J=5,6, 1H), 3,48(m, 1H), 3,26(m, 1H), 1,98(s, 3H).
6.7. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-(4-l2-amino-6-r2.2.2-trifluro-1-(2-(5-metil-tiofen-3-ih-fenM1-etoxi}-pirimidin- 4-ih-fenil1-propi6nico
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En un vial de microondas, se mezclaron juntos 4-bromo-2-metil-tiofeno (653 mg, 3,69 mmol), acido 2-formil fenilboronico (500 mg, 3,36 mmol, y 7 ml de acetonitrilo. Se anadieron 6,7 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la solucion anterior, seguido de un 5 por ciento en moles de diclorobis(trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, se anadieron 50 ml de acetato de etilo, la capa organica se separo, se lavo con agua, se seco con sulfato sodico, el disolvente organico se evaporo para dar el producto bruto y el residuo se purifico por ISCO para dar 550 mg de acido 2-(5-metil-tiofen-3-il)benzaldel"Hdo, rendimiento del 81 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,028 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 2-(5-metil- tiofen-3-il)benzaldel"Hdo (550 mg, 1,29 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (483 |jl, 3,27 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion despues se trato con 10 ml de HCl 1 N y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 650 mg de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(5-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etanol, rendimiento: 87 %.
Una mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(5-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etanol (100 mg, 0,37 mmol), 2-amino-4,6-dicloro- pirimidina (54 mg, 0,33 mmol), carbonato de cesio (481 mg, 1,48 mmol) y 1,4-dioxano (2 ml) se calento a 110 °C durante toda la noche. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo. Despues la mezcla se filtro a traves de Celite, el filtrado se concentro para dar 90 mg de 4-cloro-6-{2,2,2- trilfuoro-1 -[2-(5-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-2-ilamina, rendimiento: 68 %.
En un vial de microondas, se mezclaron juntos 4-cloro-6-{2,2,2-trilfuoro-1-[2-(5-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin- 2-ilamina (30 mg, 0,075 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (19 mg, 0,09 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. Se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la mezcla, seguido de un 5 por ciento en moles de dicloro-bis- (trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por LC prep. para dar 10,1 mg de acido (S)-2-Amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluro-1- (2-(5-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxy}-pirimidin-4-il)-fenili]-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 7,83(d, J=8,4Hz, 2H), 7,63(d, J=7,2Hz, 1H), 7,34(m, 4H), 7,26(m, 1H), 7,12(d, J=1,2Hz, 1H), 6,92(q, J=6,8, 1H), 6,82(d, J=1,2Hz, 1H), 6,64(s, 1H), 4,21(t, J=5,6Hz, 1H), 3,29(m, 1H), 3,20(m, 1H), 2,47(s, 3H).
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6.8. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-(4-f2-amino-6-r2,2,2-trifluoro-1-(4-furan-3-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-ilV fenil)-propi6nico
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En un vial de microondas, se mezclaron juntos 3-bromo-furano (590 mg, 4,02 mmol), acido 4-formil fenilboronico (600 mg, 4,02 mmol, y 7 ml de acetonitrilo. Se anadieron despues 8 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la mezcla, seguido de un 5 por ciento en moles de diclorobis(trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaction se sello y se calento a 150 °C durante 7 minutos con irradiation microondas. Despues de enfriar, se anadieron 50 ml de acetato de etilo, la capa organica se separo, se lavo con agua, se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar el producto bruto, que se purifico por ISCO para dar 410 mg de 4-furan-3-il-benzaldeWdo, rendimiento: 60 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,024 ml; solution 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solution de 4-furan-3-il- benzalde^do (410 mg, 2,38 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (423 pl, 2,86 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion despues se trato con 5 ml de HCl 1 N y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 480 mg de 2,2,2-trifluoro-1-(4-furan-3-il)-fenil]-etanol, rendimiento: 83 %.
La mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-(4-furan-3-il)-fenil]-etanol (100 mg, 0,4 mmol), 2-amino-4,6-dicloro-pirimidina (60 mg, 0,36 mmol), carbonato de cesio (468 mg, 1,44 mmol) y 1,4-dioxano (1 ml) se calento a 110 °C durante toda la noche. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo. Despues la mezcla se filtro a traves de Celite, el filtrado se concentro para dar 110 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trilfuoro-1-(4-furan-3-il-fenil)- etoxi]-pirimidin-2-ilamina, rendimiento: 72 %.
En un vial de microondas, se mezclaron juntos 4-cloro-6-[2,2,2-trilfuoro-1-(4-furan-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina (30 mg, 0,081 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (20 mg, 0,098 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. Despues, se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la mezcla, seguido de un 5 por ciento en moles de diclorobis- (trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por LC prep. para dar 7,2 mg de acido (S)-2-Amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1- (4-furan-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 7,96(m, 3H), 7,61(m, 5H), 6,81(s,1H), 6,77(d, J=6,8Hz, 1H), 6,74(d, J=4,8Hz, 1H), 4,27(q, J=5,6Hz, 1H), 3,36(m, 1H), 3,21(m, 1H).
6.9. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-r4-f2-amino-6-f1-r2-(5-dimetilaminometil-furan-il)-fenil1-2,2,2-trifluoroetoxi}-
pirimidin-4-il)-fenil1-propionico
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Se anadio triacetoxiborohidruro (844 mg, 4 mmol) a una solucion de 5-bromo-furan-2-carbaldehido (350 mg, 2 mmol) y dimetilamina (2 ml, solucion 2 M en THF) en 10 ml de 1,2-dicloroetano (DCE). Despues se anadieron 0,2 ml de HOAc. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante toda la noche, seguido de la adicion de 15 ml de DCE. La fase organica se lavo con agua, se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 400 mg de (5-bromo-furan-2-ilmetil)-dimetil-amina, rendimiento: 97 %.
En un vial de microondas, se mezclaron juntos (5-bromo-furan-2-ilmetil)-dimetil-amina (385 mg, 1,88 mmol), acido 2- formil fenilboronico (288 mg, 1,93 mmol) y 3,7 ml de acetonitrilo. Despues, se anadieron 3,7 ml de carbonato sodico
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acuoso 1 N a la mezcla, seguido de un 5 por ciento en moles de didorobis(trifenilfosfina)-paladio(N). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, se anadieron 20 ml de HCl 1 N. La mezcla se extrajo por acetato de etilo (3x10 ml) y la capa de acetato de etilo se descarto. Se anadio una solucion de NaOH 1 N a la fase acuosa para ajustar el pH a 10, despues se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). La capa organica combinada se lavo con agua y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se evaporo para dar 300 mg de 2-(4-dimetilaminometil-ciclopenta-1,3-dienil)-benzaldettdo, rendimiento: 69 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,013 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 2-(4- dimetilaminometil-ciclopenta-1,3-dienil)-benzaldehido (287 mg, 1,25) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (222 pl, 1,5 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 5 ml de HCl 1 N y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 250 mg de 1-[2-(5-dimetilaminometil-furan- 2-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol, rendimiento del 66 %.
La mezcla de 1-[2-(5-dimetilaminometil-furan-2-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol (225 mg, 0,75 mmol), 2-amino-4,6- dicloro-pirimidina (111 mg, 0,67 mmol), carbonato de cesio (978 mg, 3,01 mmol) y 1,4-dioxano (3 ml) se calento a 110 °C durante toda la noche. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo. Despues la mezcla se filtro a traves de Celite, el filtrado se concentro para dar 110 mg de 4-cloro-6- {1-[2-(5-dimetilaminometil-furan-2-il)-fenil]2,2,2-trilfuoro-etoxi}-pirimidin-2-ilamina, rendimiento del 87 %.
En un vial de microondas, se mezclaron juntos 4-cloro-6-{1-[2-(5-dimetilaminometil-furan-2-il)-fenil]2,2,2-trilfuoro- etoxi}-pirimidin-2-ilamina (37 mg, 0,087 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (22 mg, 0,10 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. Despues, se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la mezcla, seguido de un 5 por ciento en moles de diclorobis-(trifenilfosfina)-paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por LC prep. para dar 16 mg de acido (S)-2-Amino-3-[4-{2- amino-6-{1-[2-(5-dimetilaminometil-furan-il)-fenil]-2,2,2-trifluoroetoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 6 (ppm) 7,88(d, J=8,4Hz, 2H), 7,71(d, J=7,6Hz, 1H), 7,62(d, J=7,6Hz, 1H), 7,42(m, 2H), 7,40(d, J=1,6Hz,2H), 7,34(d, J=8,4Hz, 1H), 6,89(q, J=3,6Hz,2H), 6,66(s, 1H), 4,54(s, 2H), 4,20(q, J=6Hz, 1H), 3,3(m, 1H), 3,14(m, 1H), 2,84(s, 6H).
6.10. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3r4-(2-amino-6-f1-r2-(6-ciano-piridin-3-il)-fenil1-2.2.2-trifluoro-etoxi)- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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En un vial de microondas, se mezclaron juntos 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-carbonitrilo (279 mg, 1,51 mmol), 2-bromo-benzaldehido (230 mg, 1 mmol) y 2 ml de acetonitrilo. Despues, se anadieron 2 ml de carbonato sodico acuoso 1 N a la mezcla, seguido de un 5 por ciento en moles de diclorobis(trifenilfosfina)- paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 100 °C durante 10 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, se anadieron 50 ml de acetato de etilo, la capa organica se separo, se lavo con agua y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para el producto bruto que se purifico por ISCO para dar 150 mg de 5-(2-formil-fenil)-piridin-2-carbonitrilo, rendimiento del 72 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (5,3 pl; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 5-(2-formil-fenil)- piridin-2-carbonitrilo (110 mg, 0,53 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (120 pl, 0,81 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 5 ml de HCl 1 N y se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 140 mg de 5-[2-(2,2,2-trifluoro-1-hidroxi-etil)-fenil]-piridin-2-carbonitrilo, rendimiento del 95 %.
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Una mezcla de 5-[2-(2,2,2-trifluoro-1-hidroxi-etil)-fenil]-piridin-2-carbonitrilo (46 mg, 0,165 mmol), acido (S)-3-[4-(2- amino-6-doro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (59 mg, 0,15 mmol), carbonato de cesio (175 mg, 0,6 mmol) y 1,4-dioxano (1 ml) se calento a 110 °C durante toda la noche. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente, despues se vertio en 5 ml de agua. Se anadio HCl 1 N para ajustar el pH a 4,5, la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x10 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se evaporo para dar 80 mg de acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{1-[2-(6-cianopiridin-3-il)-fenil]-
2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico bruto, rendimiento del 84 %.
Se disolvieron 80 g de acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{1-[2-(6-cianopiridin-3-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)- fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico en la solucion de acido trifluoroacetico al 30 % en diclorometano (5 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se evaporo y el residuo se purifico por HPLC preparativa para dar 12,6 mg de acido (S)-2-Amino-3[4-(2-amino-6-{1-[2-(6-ciano-piridin-3-il)-fenil]-2,2,2- trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 8,86(s, 1H), 8,17(d, J=2Hz, 1H), 8,15(d, J=2Hz, 1H), 7,96(m,2H), 7,59(m,1H), 7,36(m, 3H), 6,7(s, 1H), 6,65(d, J=6,8Hz, 1H), 4,25(m, 1H), 3,47(m, 1H), 3,23(m, 1H).
6.11. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-(4-f2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4- il}-fenil)-propi6nico
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A 2-imidazol-1-il-benzaldel'ndo (0,344 g, 2 mmol) en THF (8 ml) se anadio trifluorometiltrimetil silano (0,341 g, 2,4 mmol). La mezcla de reaccion se enfrio a 0-5 °C (bano de agua helada) y se anadio fluoruro de tetra-n-butil amonio (0,035 ml, 0,035 mmol, 1 M en THF). El bano de hielo se retiro y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 6 horas. Se anadio HCl 2 N (5 ml) y la mezcla de reaccion se agito adicionalmente durante 3 horas a temperatura ambiente. El disolvente se retiro en el rotavapor a presion reducida. El residuo bruto se retiro para dar 2,2,2-trifluoro-
1- (2-imidazol-1-il-fenil)-etanol (0,45 g, 93 %), que se uso directamente en la siguiente etapa.
2- Amino-4,6-dicloro pirimidina (0,107 g, 0,65 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etanol (0,157 g, 0,65 mmol) y NaH (0,03 g, 0,78 mmol) se anadieron a THF anhidro (10 ml) en nitrogeno. La reaccion se agito a 40-45 °C durante 6 h y despues se enfrio a temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,2 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina bruta (0,24 g, >90 % pura por CLEM), que se uso directamente en la siguiente etapa.
El intermedio bruto anterior (0,24 g), L-p-borono-fenilalanina (0,140 g, 0,67 mmol), carbonato sodico (0,14 g, 1,32 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (II) (15 mg, 0,021 mmol) se disolvieron en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial de microondas. La mezcla de reaccion se sello y se agito en el reactor microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro. El residuo se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico por HPLC preparativa usando MeOH/H2O/TFA como sistema disolvente para dar acido £S)-2-Amino-3-(4-{2-amino-6- [2,2,2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico como una sal de TFA. CLEM: M+1 = 499. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 3,20-3,41 (m, 2H), 4,30 (t, 1H), 6,61 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 7,48 (d, 2H), 7,69 (d, 1H), 7,72-7,81 (m, 2H), 7,83 (m, 1H), 7,98 (m, 3H), 8,02 (m, 1H), 9,40 (m, 1H).
6.12. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-(4-l6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-pirazol-1-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico
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A 2-pirazol-1-il-benzaldel'ndo (0,344 g, 2 mmol) en THF (8 ml) se anadio trifluorometil trimetil silano (0,341 g, 2,4 mmol). La mezcla se enfrio a 0-5 °C (bano de agua helada) y se anadio fluoruro de tetra-n-butil amonio (0,035 ml,
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0,035 mmol, 1 M en THF). El bano de hielo se retiro y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 6 h. Se anadio HCl 2 N (5 ml) y la mezcla de reaccion se agito adicionalmente a temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente se retiro en el rotavapor a presion reducida. El residuo bruto se disolvio en DCM (30 ml), se lavo con agua (20 ml), salmuera (20 ml) y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro al vacio para dar 2,2,2-trifluoro-1-(2- pirazol-1-il-fenil)-etanol (0,45 g, 93 %) bruto que se uso directamente en el siguiente experimento.
4,6-Dicloro pirimidina (0,082 g, 0,55 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-(2-pirazol-1-il-fenil)-etanol (0,121 g, 0,50 mmol), NaH (0,03 g, 0,78 mmol) se anadieron a THF anhidro (10 ml) en atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40-45 °C durante 6 h y despues se enfrio a temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,2 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-pirazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidina bruta (0,20 g, >90 % pura por CLEM), que se uso directamente en la siguiente etapa.
El intermedio bruto anterior (0,20 g), L-p-borono-fenilalanina (0,105 g, 0,50 mmol), carbonato sodico (0,105 g, 1 mmol), diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (II) (15 mg, 0,021 mmol) se disolvieron en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial de microondas. El vial se sello y la mezcla de reaccion se agito en el reactor microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro. El residuo se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y despues se purifico por HPLC preparativa usando MeOH/H2O/TFA como sistema disolvente para dar acido (S)-2- Amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-pirazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico como una sal de TFA. CLEM: M+1 = 484. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 3,20-3,40 (m, 2H), 4,30 (t, 1H), 6,63 (s, 1H), 7,10 (m, 1H), 7,50 (m, 3H), 7,60 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 8,16 (m, 3H), 8,68 (s, 1H).
6.13. Sintesis de acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{2.2.2-trifluoro-1-r2-(3-trifluorometil-pirazol-1-il)-fenil1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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2,2,2-Trifluoro-1-(2-yodo-fenil)-etanol (0,331 g, 1,1 mmol), 3-trifluorometil pirazol (0,136 g, 1,0 mmol), Cul (0,019 g, 0,1 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-ciclohexano-1,2-diamina (0,028 g, 0,2 mmol) y tolueno (10 ml) se combinaron en un tubo de presion de 20 ml. La mezcla se calento a 130 °C (temperatura de bano de aceite) durante 12 h. La mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco por sulfato sodico. La retirada de disolvente dio producto bruto que se purifico por cromatografia en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para dar 140 mg de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-trifluoro metil-pirazol-1-il)-fenil]- etanol.
2-Amino-4,6-dicloro pirimidina (0,074 g, 0,45 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-trifluoro metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (0,140 g, 0,45 mmol), NaH (0,022 g, 0,59 mmol) se anadieron a THF anhidro (10 ml) en atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40-45 °C durante 6 h y despues se enfrio a temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,2 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-trifluorometil-pirazol-1-il)-fenil]-etoxi]- pirimidin-2-ilamina bruta (0,21 g, >90 % pura por CLEM), que se uso directamente en la siguiente etapa.
El intermedio bruto (0,21 g), L-p-borono-fenilalanina (0,1 g, 0,48 mmol), carbonato sodico (0,1 g, 0,94 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (II) (15 mg, 0,021 mmol) se disolvieron en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial de microondas. El vial se sello y la mezcla de reaccion se agito en el reactor microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro para dar el producto bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico por HPLC preparativa usando MeOH/H2O/TFA como sistema disolvente para dar acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-trifluorometil-pirazol-1-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]- propionico como una sal de TFA. CLEM: M+1 = 567. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 3,2 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 4,30 (t, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,98 (d, 1H), 7,45 (d, 2H), 7,59 (m, 1H), 7,68 (m, 2H), 7,88 (m, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,20 (1H).
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6.14. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-l1-r2-(3,5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil1-2,2,2-trifluoroetoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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2,2,2-Trifluoro-1-(2-yodo-fenil)-etanol (0,331 g, 1,1 mmol), 3-trifluorometil pirazol (0,136 g, 1,0 mmol), CuI (0,019 g, 0,1 mmol), K2CO3 (0,290 g, 2,1 mmol), (1R,2R)-N,N’-dimetil-cidohexano-1,2-diamina (0,028 g, 0,2 mmol) y tolueno (10 ml) se combinaron en un tubo de presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura de bano de aceite) durante 12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco por sulfato sodico. La retirada de disolvente dio producto bruto, que se purifico por cromatografla en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para dar 1-[2-(3,5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2- trifluoro-etanol (120 mg).
2-Amino-4,6-dicloro pirimidina (0,074 g, 0,45 mmol), 1-[2-(3,5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil]2,2,2-trifluoroetanol (0,120 g, 0,45 mmol), NaH (0,022 g, 0,59 mmol) se anadieron a THF anhidro (10 ml) en atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40-45 °C durante 6 h y despues se enfrio a temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,2 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar 4-cloro-6-{1-[2-(3,5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi]-pirimidin- 2-ilamina bruta (0,195 g, >90 % pura por CLEM) que se uso directamente en la siguiente etapa.
El intermedio bruto (0,195 g), L-p-borono-fenilalanina (0,1 g, 0,48 mmol), carbonato sodico (0,10 g, 0,95 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (II) (15 mg, 0,021 mmol) se disolvieron en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial de microondas. El vial se sello y la mezcla de reaccion se calento en el reactor microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro para dar el producto bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico por HPLC preparativa usando MeOH/H2O/TFA como sistema disolvente para dar acido (s)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{1-[2-(3,5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoroetoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-
propionico como una sal de TFA. CLEM: M+1 = 527. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 4,32 (t, 1H), 3,39 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 7,92 (m, 3H), 7,68 (m, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,42 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,17 (s, 1H).
6.15. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-{2.2.2-trifluoro-1-r2-(3-fenil-pirazol-1-il)-fenil1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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2,2,2-Trifluoro-1-(2-yodo-fenil)-etanol (0,331 g, 1,1 mmol), 3-fenil pirazol (0,144 g, 1,0 mmol), CuI (0,019 g, 0,1 mmol), K2CO3 (0,290 g, 2,1 mmol), (1R,2R)-N,N’-dimetil-ciclohexano-1,2-diamina (0,028 g, 0,2 mmol) y tolueno (10 ml) se tomaron en un tubo de presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura de bano de aceite) durante 12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato sodico. La retirada de disolvente dio un producto bruto, que se purifico por cromatografla en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para proporcionar 2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-fenil-pirazol-1- il)-fenil]-etanol (75 mg).
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2-Amino-4,6-dicloro pirimidina (0,074 g, 0,45 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-fenil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (0,070 g, 0,22 mmol) y NaH (0,012 g, 0,31 mmol) se anadieron a THF anhidro (10 ml) en atmosfera de nitrogeno. La reaction se agito a 40-45 °C durante 6 h y despues se enfrio a temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,04 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar 4-cloro-6-{2,2,2-trfluoro-1-[2-(3-fenil-pirazol-1-il)-fenil]-etoxi]-pirimidin-2-ilamina bruta (0,110 g, >90 % pura por CLEM) que se uso directamente en la siguiente etapa.
El intermedio bruto (0,110 g), L-p-borono-fenilalanina (0,050 g, 0,24 mmol), carbonato sodico (0,050 g, 0,48 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (II) (8 mg, 0,010 mmol) se disolvieron en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial de microondas. El vial se sello y la mezcla de reaccion se calento en el reactor microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro para dar el producto bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico por HPLC preparativa usando MeOH/H2O/TFA como sistema disolvente para dar acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-fenil-pirazol-1-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico como una sal de TFA. CLEM: M+1 = 575. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 3,20 (m, 1H), 3,38 (m, 1H), 4,30 (t, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,30-7,48 (m, 7H), 7,62 (m, 3H), 7,90 (m, 4H), 8,10 (s, 1H).
6.16. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-f2.2.2-trifluoro-1-r5-metoxi-2-(4-metil-pirazol-1-il)-fenil1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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1-(2-Bromo-5-metoxi-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (0,570 g, 2,0 mmol), 4-metil pirazol (0,164 g, 2,0 mmol), Cul (0,057 g, 0,3 mmol), K?CO3 (0,580 g, 4,2 mmol), (1R,2R)-N,N’-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,071 g, 0,5 mmol) y tolueno (10 ml) se combinaron en un tubo de presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura de bano de aceite) durante 12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato sodico. La retirada de disolvente dio un producto bruto, que se purifico por cromatografia en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para proporcionar 2,2,2-trifluoro-1-[5-metoxi-2- (4-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (90 mg).
2,2,2-Trifluoro-1-[5-metoxi-2-(4-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (0,090 g, 0,31 mmol), acido (S)-3-[4-(2-amino-6-cloro- pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (0,122 g, 0,31 mmol), 1,4-dioxano (2 ml), Cs2CO3 (0,503 g, 1,55 mmol), se combinaron en un vial de microondas y se calento a 180 °C durante 45 min. La mezcla se filtro y se concentro. Al residuo, se anadio metanol al 5 % en DCM (50 ml). La mezcla se filtro. El filtrado se concentro para dar producto bruto que se tomo en TFA al 20 % en DCM (30 ml) y se agito durante 30 minutos a temperatura ambiente. La CLEM indico que se completo la reaccion con el producto deseado. La mezcla de reaccion se concentro para dar el producto bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico por HPLC preparativa usando MeOH/H2O/TFA como sistema disolvente para dar acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[5-metoxi-2-(4-metil-pirazol-1- il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico.
CLEM: M+1 = 543. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 2,20 (s, 3H), 3,22 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,35 (t, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,98 (m, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,48 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 7,96 (d, 2H).
6.17. Sintesis de acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-f(R)-2.2.2-trifluoro-1-r2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-etoxil- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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R-1-(2-Bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (1,53 g, 6 mmol), 3-metil pirazol (0,492 g, 6 mmol), Cul (0,456 g, 2,4 mmol), K2c03 (2,07 g, 15 mmol), (1R,2R)-N,N’-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,170 g, 1,2 mmol) y tolueno (10 ml) se combinaron en un tubo de presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura de bano de aceite) durante
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12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato sodico. La retirada de disolvente dio un producto bruto, que se purifico por cromatograffa en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para dar R-2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (1,8 mg).
2-Amino-4,6-dicloro pirimidina (1,12 g, 7,4 mmol), R-2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (1,8 g, 7,03 mmol) y NaH (0,380 g, 10 mmol) se anadieron a THF anhidro (40 ml) en atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40-45 °C durante 6 h y despues se enfrio a temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,1 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar 4-cloro-6-{R-2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etoxi]-pyrimidin-2-ilamine bruta (3,0 g, >90 % pura por CLEM) que se uso directamente en la siguiente etapa.
El intermedio bruto (0,750 g), L-p-borono-fenilalanina (0,420 g, 2,0 mmol), carbonato sodico (0,430 g, 4,0 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (II) (30 mg, 0,043 mmol) se disolvieron en una mezcla de MeCN (7,0 ml) y H2O (7,0 ml) en un vial de microondas. El vial se sello y la mezcla de reaccion se calento en el reactor microondas a 150 °C durante 7 min. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro para dar el producto bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico por HPLC preparativa usando MeOH/H2O/TFA como sistema disolvente para dar acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{(R)-2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-
propionico como una sal de TFA. CLEM: M+1 = 514. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 2,40 (s, 3H), 3,30 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 4,38 (t, 1H), 6,21 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,61 (m, 4H), 7,82 (m, 2H), 7,97 (d, 2H).
6.18. Smtesis de acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-f1-r4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-2.2.2-
trifluoroetoxi)-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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1-(4-Cloro-2-yodo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (0,840 g, 2,5 mmol), 3-metil pirazol (0,230 g, 2,8 mmol), Cul (0,190 g, 1,0 mmol), K2CO3 (0,863 g, 6,25 mmol), (1R,2R)-N,N’-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,071 g, 0,5 mmol) y tolueno (10 ml) se combinaron en un tubo de presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura de bano de aceite) durante 12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato sodico. La retirada del disolvente dio un producto bruto, que se purifico por cromatograffa en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para proporcionar 1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1- il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol (240 mg).
1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol (0,120 g, 0,41 mmol), acido (S)-3-[4-(2-amino-6-cloro- pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (0,176 g, 0,45 mmol), 1,4-dioxano (42 ml) y Cs2CO3 (0,533
g, 1,64 mmol) se combinaron en un tubo sellado de 20 ml y la mezcla se calento a 100 °C durante 12 min. La mezcla concentro. Al residuo, se anadio metanol al 10 % en DCM (50 ml) y la mezcla se filtro. El filtrado se concentro para dar producto bruto que se tomo en THF/HCl 3 N (30 ml/15 ml) y la mezcla resultante se agito a 40-45 °C durante 12
h. La CLEM indico que se completo la reaccion con el producto deseado. La mezcla de reaccion se concentro para dar el producto bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico por HPLC preparativa usando MeOH/H2O/TFA como sistema disolvente para dar acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1- il)-fenil]-2,2,2-trifluoroetoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico como una sal de TFA. CLEM: M+1 = 547. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 2,30 (s, 3H), 3,10-3,30 (m, 2H), 4,20 (t, 1H), 6,32 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 7,0 (q, 1H), 7,38 (d, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,72 (m, 1H), 7,90 (m, 3H).
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6.19. Sintesis de etil ester de acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-{R-1-r4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-
2,2.2-trifluoroetoxil-pi rimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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El compuesto del fitulo se preparo paso a paso, como se describe a continuation:
Etapa 1: Sintesis de 1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-ethanona. A un matraz RB de 2 bocas de 500 ml que conterna metanol anhidro (300 ml) se anadio cloruro de tionilo (29.2 ml. 400 mmol) gota a gota a 0-5 °C (bano de agua helada) durante 10 min. El bano de agua helada se retiro y se anadio acido 2-bromo-4-cloro-benzoico (25 g. 106 mmol). La mezcla se calento a reflujo suave durante 12 h. El progreso de la reaction se monitorizo por TLC y CLEM. Despues de completarse la reaccion. la mezcla de reaccion se concentro. El producto bruto se disolvio en diclorometano (DCM. 250 ml). se lavo con agua (50 ml). NaHCO3 (50 ml). salmuera (50 ml). se seco sobre sulfato sodico y se concentro para dar el metil ester del acido 2-bromo-4-cloro-benzoico (26 g. 99 %). que se uso directamente en la siguiente etapa.
El metil ester del acido 2-bromo-4-cloro-benzoico (12.4 g. 50 mmol) en tolueno (200 ml) se enfrio a -70 °C. y se anadio trifluorometil trimetil silano (13 ml. 70 mmol). Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (1 M. 2.5 ml) gota a gota. y la mezcla se permitio calentar a temperatura ambiente durante 4 h. despues de lo que se agito durante 10 h a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro para dar el [1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-1- metoxietoxi]-trimetil-silano bruto. El intermedio bruto se disolvio en metanol (100 ml) y se anadio HCl 6 N (100 ml). La mezcla se mantuvo a 45-50 °C durante 12 h. Se retiro el metanol y el bruto se extrajo con diclorometano (200 ml). La capa de DCM combinada se lavo con agua (50 ml). NaHCO3 (50 ml). salmuera (50 ml) y se seco sobre sulfato sodico. La retirada del disolvente dio un producto bruto. que se purifico por cromatografia en columna ISCO. usando acetato de etilo al 1-2 % en hexano como disolvente. para proporcionar 1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro- etanona (10 g. 70 %). RMN 1H (300 MHz. CDOb): 5(ppm) 7.50 (d.1H). 7.65(d.1H). 7.80(s.1H).
Etapa 2: Sintesis de R-1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-etanol. A borano catecol (1 M en THF 280 ml. 280 mmol) en un matraz RB de 3 bocas de 2 l se anadio S-2-metil-CBS oxazaborolidina (7.76 g. 28 mmol) en nitrogeno. y la mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 20 min. La mezcla de reaccion se enfrio a -78 °C (bano de hielo seco/acetona) y se anadio gota a gota 1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-etanona (40 g. 139 mmol) en THF (400 ml) durante 2 h. La mezcla de reaccion se dejo calentar a -36 °C y se agito a esa temperatura durante 24 h y se agito adicionalmente a -32 °C durante otras 24 h. Se anadio NaOH 3 N (250 ml) y el bano de enfriamiento se reemplazo por un bano de agua helada. Despues se anadio gota a gota peroxido de hidrogeno al 30 % en agua (250 ml) durante 30 minutos. El bano de agua helada se retiro y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 4 h. La capa organica se separo. se concentro y se re-disolvio en eter (200 ml). La capa acuosa se extrajo con eter (2 x 200 ml). Las capas organicas combinadas se lavaron con NaOH ac. 1 N (4 x 100 ml). salmuera y se seco sobre sulfato sodico. La retirada del disolvente dio producto bruto que se purifico por cromatografia en columna usando acetato de etilo del 2 al 5 % en hexano como disolvente para dar el alcohol deseado 36.2 g (90 %. e.e. > 95 %). El alcohol (36.2 g) se cristalizo a partir de hexano (80 ml) para obtener R-1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-
2.2.2-trifluoro-etanol 28.2 g (70 %; 99-100 % e.c.). RMN 1H (400 MHz. CDCls): 5 (ppm) 5.48 (m. 1H). 7.40 (d. 1H). 7.61 (d. 2H).
Etapa 3: Sintesis de R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-2.2.2-trifluoroetanol. Se combinaron R-1-(2-bromo-4- cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-etanol (15.65 g. 54.06 mmol). 3-metilpirazol (5.33 g. 65 mmol). Cul (2.06 g. 10.8 mmol). K2CO3 (15.7 g. 113.5 mmol). (1R.2R)-N.N’-dimetil-ciclohexan-1.2-diamina (1.54 g. 10.8 mmol) y tolueno (80 ml) en un tubo de presion de 250 ml y se calento a 130 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12 h. La mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (4 x 100 ml). salmuera y se seco sobre sulfato sodico. La retirada de disolvente dio un producto bruto. que se purifico por cromatografia en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para obtener R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2.2.2-trifluoroetanol (13.5 g. 86 %). RMN 1H (400 MHz. CDCh): 5 (ppm) 2.30(s. 3H). 4.90(m. 1H). 6.20(s. 1H). 6.84(d. 1H). 7.20(s. 1H). 7.30(d. 1H). 7.50(d. 1H).
Etapa 4: Sintesis de etil ester del acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-2.2.2- trifluoro-etoxi>-pirimidin-4-il)-fenil>-propionico. R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2.2.2-trifluoroetanol (17.78 g. 61.77 mmol). acido (S)-3-[4-(2-amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilaminopropionico (20.03 g. 51
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mmol), 1,4-dioxano (250 ml) y CS2CO3 (79,5 g, 244 mmol) se combinaron en un matraz RB de 500 ml de 3 bocas y se calento a 100 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12-24 h. El progreso de la reaccion se monitorizo por CLEM. Despues de completarse la reaccion, la mezcla de reaccion se enfrio a 60 °C y se anadieron agua (250 ml) y THF (400 ml). La capa organica se separo y se lavo con salmuera (150 ml). El disolvente se retiro para dar un producto bruto protegido con BOC, que se tomo en THF (400 ml), HCl 3 N (200 ml). La mezcla se calento a 35-40 °C durante 12 h. Se retiro el THF al vado. La capa acuosa restante se extrajo con acetato de isopropilo (2 x 100 ml) y se concentro separadamente para recuperar el alcohol sin reaccionar (3,5 g). Se retiraron las trazas de disolvente organico restantes de la fraccion acuosa al vado.
A un vaso de precipitados de 1 l equipado con un controlador de temperatura y un pH metro, se anadio H3PO4 (40 ml, 85 % en agua) y agua (300 ml) despues NaOH al 50 % en agua para ajustar el pH a 6,15. La temperatura se elevo a 58 °C y la solucion acuosa acida anterior se anadio gota a gota en el tampon con la adicion simultanea de solucion de NaOH al 50 % en agua de tal manera que el pH se mantuvo entre 6,1 y 6,3. Tras completarse la adicion, el solido precipitado se filtro y se lavo con agua caliente (50-60 °C) (2 x 200 ml) y se seco para dar acido (S)-2- amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico bruto (26,8 g; 95 %). Los analisis CLEM y HPLC indicaron que la pureza del compuesto era aproximadamente el 9697 %.
A etanol anhidro (400 ml) se anadio SOCh (22 ml, 306 mmol) gota a gota a 0-5 °C. Se anadio acido bruto (26,8 g) de la reaccion anterior. El bano de agua helada se retiro y la mezcla de reaccion se calento a 40-45 °C durante 6-12 h. Despues de completarse la reaccion, se retiro el etanol al vado. Al resto se anadio agua helada (300 ml) y se extrajo con acetato de isopropilo (2 x 100 ml). La solucion acuosa se neutralizo con Na2CO3 saturado para ajustar el pH a 6,5. La solucion se extrajo con acetato de etilo (2 x 300 ml). La capa de acetato de etilo combinada se lavo con salmuera y se concentro para dar 24 g de ester bruto (pureza de HPLC del 96-97 %). El ester bruto se purifico despues por cromatograffa en columna ISCO usando etanol al 5 % en DCM como disolvente para dar etil ester del acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}- propionico (20,5 g; 70 %; pureza de HPLC del 98 %). CLEM M+1 = 575. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 1,10 (t,
(m, 2H), 7,70 (d, 1H), 7,85 (m, 3H).
6.20. Sintesis de acido (S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-1-(4-cloro-2-(3-metil-1H-pirazol-1-ihfenil)-2.2.2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-ihfenihpropi6nico
El etil ester del acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil}-propionico (22,2 g, 38,6 mmol) se disolvio en THF (200 ml) y agua (50 ml). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 12 h. Se retiro el THF y se anadio agua (100 ml) al residuo para obtener la solucion transparente.
A un vaso de precipitados de 1 l equipado con un con un controlador de temperatura y un pH metro se anadio H3PO4 (40 ml, 85 % en agua), agua (300 ml) y NaOH al 50 % en agua para ajustar el pH a 6,15. La temperatura se elevo a 58 °C y la sal de Li acuosa del compuesto se anadio gota a gota en el tampon con la adicion simultanea de solucion de HCl 3 N de tal manera que el pH se mantuvo de 6,1 a 6,2. Tras completarse la adicion, el solido precipitado se filtro y se lavo con agua caliente (50-60 °C) (2 x 200 ml) y se seco para dar acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1- [4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico bruto (13,39 g; 92 %). Los analisis CLEM y HPLC indicaron que la pureza del compuesto era aproximadamente el 98-99 %. CLEM M+1 = 547. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 2,40 (s, 3H), 3,22-3,42 (m, 2H), 4,38 (t, 1H), 6,42 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,60 (m, 4H), 7,81 (d, 1H), 7,92 (m, 3H).
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O
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5
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A un reactor microondas de 40 ml, se anadieron 1,04 g de acido 2-formil fenilboronico (6,9 mmoles), 1,14 g de 2- bromo tiazol (6,9 mmoles), 240 mg de dicloruro de bistrienil-fosfina paladio (Pd(PPh3)2Cl2, 0,34 mmoles). Despues, se anadieron 13,8 ml de Na2CO31 M (13, 8 mmoles) y 10 ml de CH3CN a la mezcla. El reactor se sello y la reaccion se ejecuto en microondas a 160 °C durante 5 minutos. CLEM muestra que se completa la reaccion con el producto deseado. La mezcla de reaccion despues se vertio en un embudo de separacion. Despues se anadieron 200 ml de cloruro de metileno y 100 ml de agua para la extraccion. La capa de cloruro de metileno se seco sobre MgSO4. La retirada del disolvente dio un producto bruto, que se purifico por cromatograffa en columna en gel de sflice eluyendo con una mezcla de hexanos/acetato de etilo (5/1 a 2/1) para dar 2-tiazol-2-il-benzaldehHdo puro (0,5 g, rendimiento: 38 %).
A un matraz de fondo redondo de 50 ml, se anadieron 184 mg de 2-tiazol-2-il-benzaldel"Hdo (0,97 mmoles) y 10 ml de tetrahidrofurano (THF) anhidro. Despues, se anadieron 145,4 mg de trifluorometiltrimetilsilano (1,02 mmoles) y 20 |jl de fluoruro de terc-butilamonio 1 M en THF (0,02 mmoles) a la solucion. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante toda la noche, despues de lo que se anadieron 10 ml de HCl 1 N y la mezcla de reaccion se agito a t.a. durante 15 minutos. Se retiro el THF al vado y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (3 x 50 ml). La capa combinada de CH2Ch se seco sobre MgSO4. La retirada del disolvente dio un producto bruto, que fue aproximadamente un 95 % puro, y se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
2,2,2-Trifluoro-1-(2-tiazol-2-il-fenil)-etanol (260 mg, 1 mmoles), acido (S)-3-[4-(2-amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2- terc-butoxicarbonilamino-propionico (390 mg, 1 mmol), carbonato de cesio (1,3 g, 4 mmoles) y 10 ml de 1,4-dioxano se mezclaron juntos en un tubo sellado de 50 ml. La mezcla de reaccion se calento a 100 °C durante 3 dfas. Se anadio agua (20 ml) y despues se anadio lentamente HCl ac. 1 N para ajustar el pH a 4, despues se retiro el 1,4- dioxano al vado y la mezcla resultante se extrajo con cloruro de metileno (3 x 50 ml). La capa de cloruro de metileno combinada se seco sobre MgSO4. La retirada del disolvente dio un producto bruto, que se tomo hacia la siguiente etapa sin purificacion adicional.
El producto bruto anterior se disolvio en 5 ml de cloruro de metileno y se anadieron 0,4 ml de acido trifluoroacetico. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. El acido trifluoroacetico se retiro despues al vado para dar un producto bruto, que se purifico por HPLC prep para dar 63 mg de producto puro. HPLC; YMC Pack ODS-A 3x50 mm, 7um; Disolvente A = agua con TFA al 0,1 %; Disolvente B = metanol con TfA al 0,1 %, Disolvente B del 10 al 90 % durante 4 minutos; Caudal = 2 ml/min; TR = 3 min, pureza de HPLC = 100 %. CLEM: M+1 = 515,9. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 8,06 ppm (2H, m); 7,92 (2H, d, J=8 Hz); 7,84(1H, m); 7,81 (1H, m); 7,77 (1H, d, J = 4
Hz); 7,57 (2H, m); 7,45 (2H, d, J = 8 Hz); 6,84 (1H, s); 4,30 (2H, dd, J = 8 Hz); 3,38 (2H, dd, J = 12, 2 Hz); 3,23 (2H, dd, J = 12, 8 Hz). 6.22. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-{2.2.2-trifluoro-1-r2-(piridin-3-iloxh-fenil1-etoxi}-pirimidin-
4-il)-fenil1-propi6nico; acido
(S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1 -r4-(piridin-3-iloxi)-feniH-etoxi}-
pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico;
acido (S)-2-Amino-3-r4-(6-{2.2.2-trifluoro-1-r4-(piridin-3-iloxi)-fenil1-etoxi>-
pirimidin-4-il) fenil1-propi6nico;
acido (S1-2-Amino-3-(4-{2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(4-tiofen-2-il-fenih-etoxi1-
pirimidin-4-il}-fenil)-propi6nico;
acido (S)-2-Amino-3-(4-{6-r2,2,2-trifluoro-1-(4-imidazol-1-il-fenil)-etoxil-
pirimidin-4-il}-fenil)-propi6nico;
v acido (S1-2-Amino-3-(4-{2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(4-M.2.41triazol-1-il-
fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil)-propi6nico
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Ai
R2
Py O'
NH2
0" 'Oy
NH2
N
H
NH2
N^l XX
H
/^N Ns I TX
NH2
Los compuestos del trtulo se prepararon usando el enfoque general mostrado a continuation:
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5
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50
En este enfoque, se anadio fluoruro de tetra-n-butil amonio (0,05 eq.) a una mezcla de benzaldeddo sustituido (1 eq.) y trifluorometil trimetilsilano (1,2 eq.) en THF a 0 °C. La temperatura despues se dejo calentar a temperatura ambiente. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 h, despues se diluyo con acetato de etilo, se lavo con agua, salmuera y se seco por MgSO4. El disolvente se retiro a presion reducida para dar el trifluoroalcohol como producto bruto, que se uso en la siguiente etapa sin purification adicional.
El alcohol producido anteriormente (1 eq.) se disolvio en 1,4-dioxano anhidro. Se anadio hidruro sodico (60 % en aceite mineral, 1,2 eq.) de una vez, y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se anadio 2- amino-4,6-dicloro-pirimidina (1 eq.) y la mezcla resultante se agito a 80 °C durante 2 h. El disolvente se retiro y el residuo se suspendio en acetato de etilo, que se lavo con agua, se seco sobre MgSO4 y despues se concentro para dar el producto monocloruro deseado, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
El producto bruto anterior (1 eq.) se anadio a un vial de microondas de 5 ml que contiene 4-borono-L-fenilalanina (1 eq.), Na2CO3 (2 eq.), acetonitrilo (2 ml), agua (2 ml) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (0,05 eq.). El vial se tapo y la mezcla se calento a 150 °C durante 5 min en radiation microondas. La mezcla se enfrio, se filtro a traves de un filtro de jeringa y despues se separo por una HPLC preparativa de fase inversa usando una columna YMC-Pack ODS 100x30 mm ID (sistema MeOH/H2O/TFA). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron al vatio. El producto se suspendio despues en 5 ml de agua, se congelo y se liofilizo para dar el producto como una sal de acido trifluoroacetico (TfA).
Acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(piridin-3-iloxi)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico.
RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 3,05-3,40 (m, 2H), 3,81 (m, 1H), 6,64 (s, 1H), 7,01(d, 1H), 7,15-7,54 (m, 7H), 7,74 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 8,35 (m, 2H).
Acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[4-(piridin-3-iloxi)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico.
RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 3,20-3,41 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 6,81 (m, 2H), 7,17 (m, 2H), 7,46-7,69 (m, 6H), 7,93 (d, 2H), 8,41 (s, 2H).
Acido (S)-2-Amino-3-[4-(6-{2,2,2-trifluoro-1-[4-(piridin-3-iloxi)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5: 3,15-3,35 (m, 2H), 4,25 (t, 1H), 6,90 (q, 1H), 7,25 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,71 (m, 3H), 7,99 (m, 3H), 8,14-8,18 (m, 1H), 8,55 (d, 1H), 8,63 (d, 1H), 8,84 (d, 1H).
Acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-(4-tiofen-2-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil}-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 3,03-3,31 (m, 2H), 4,19 (m, 1H), 6,68 (m, 2H), 7,00 (m, 1H), 7,31-7,36 (m, 4H), 7,52 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
Acido (S)-2-Amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-imidazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 3,03-3,31 (m, 2H), 4,19 (m, 1H), 6,88 (m, 1H), 7,32-8,63 (m, 11H), 8,64 (s, 1H), 9,25 (s, 1H).
Acido (S)-2-Amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-[1,2,4]triazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 3,07-3,36 (m, 2H), 4,16 (m, 1H), 6,65 (s, 1H), 6,75 (m, 1H), 7,31 (d, 2H), 7,69 (d, 2H), 7,85 (m, 4H), 8,08 (s, 1H), 9,03 (s, 1H).
6,23, Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-(4-f2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1 -(4-fluoro-2-tiofen-3-il-fenil)etoxil- pirimidin-4-il)-fenil)-propi6nico: acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-f2.2.2-trifluoro-1-r4-fluoro-2-(4-metil-tiofen- 2-il)-fenil1-etoxi)-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico: y acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-f1-(2-(3.5-dimetil-
isoxazol-4-il)-4-fluoro-fenil1-2.2.2-trifluoro-etoxi)-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Ai =
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Los compuestos del tttulo se prepararon usando el enfoque general mostrado a continuacion:
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En este enfoque, el bencil aldehfdo bromo sustituido (1 eq) se anadio a un vial de microondas de 20 ml, que contema acido boronico heterodclico aromatico (1 eq), Na2CO3 (2 eq), acetonitrilo (8 ml) / agua (8 ml) y dicloro- bis(trifenilfosfina)-paladio (0,05 eq). El vial se tapo y se agito a l5o °C durante 6 min en radiacion microondas. La mezcla de reaccion se enfrio, se filtro a traves de un filtro de jeringa y despues se diluyo con acetato de etilo. Se lavo con agua. Se anadio despues gel de sflice para hacer un tapon y se purifico por cromatograffa se eluyo con hexano y acetato de etilo.
Los aldehfdos producidos anteriormente se sometieron a las mismas reacciones descritas anteriormente en el Ejemplo 22.
Acido (S)-2-Amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-tiofen-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 3,08-3,30 (m, 2H), 4,19 (m, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,84 (m, 1H), 7,02-7013 (m, 2H), 7,22 (dd, 1H), 7,32(d, 2H), 7,47 (m, 1H), 7,77 (m, 1H), 7,84 (d, 2H).
Acido (S)-2-Amino-3-(4-{2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(4-metil-tiofen-2-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 2,26 (s, 3H), 3,09-3,30 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,95 (m, 2H), 7,13 (m, 3H), 7,34 (d, 2H), 7,69(m, 1H), 7,83 (d, 2H).
Acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{1-[2-(3,5-dimetil-isoxazol-4-il)-4-fluoro-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)- fenil]-propionico, RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 1,89-2,19 (m, 6H), 2,97-3,30 (m, 2H), 3,83 (m, 1H), 6,55 (d, 1H), 6,74-6,87 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 7,7,24-7,33 (m, 3H), 7,88 (m, 3H).
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La mezcla de metil ester de acido 2-bromo-5-fluoro-benzoico (1 g, 4,292 mmol), NaBH4 (0,423 g, 11,159 mmol) y LiCI (0,474 g, 11,159 mmol) en THF/BtOH (20 ml/10 ml) se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. Se anadio HCl acuoso (10 ml, 2 N) y se agito durante aproximadamente 10 min. Despues se retiro el disolvente organico en bajo vacio. El residuo se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se lavo con NaHCO3 acuoso (10 %), agua y salmuera y despues se seco (MgSO4) y se concentro para producir 852 mg (96,8 % de rendimiento bruto) de producto bruto, (2-bromo-5-fluoro-fenil)metanol, como un solido blanco, que se uso sin purificacion adicional.
A la solucion de (2-bromo-5-fluoro-fenil)metanol (0,852 g, 4,156 mmol) en DCM (15 ml) se anadio MnO2 (4,254 g. 85 %, 41,56 mmol). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante dos dias y despues se filtro y se lavo con DCM. El filtrado se concentro para proporcionar 777 mg de 2-bromo-5-fluoro-benzaldehido (rendimiento del 92 %). El aldehido nuevamente producido (0,777 g, 3,828 mmol) se disolvio despues en THF anhidro (10 ml) y se enfrio a 0 °C. Se anadio trifluorometil trimetilsilano (1,13 ml, 7,656 mmol) y seguido de fluoruro de tetrabutil amonio (0,020 g, 0,076 mmol). La temperatura se dejo calentar despues a temperatura ambiente. La mezcla se agito durante 5 h a temperatura ambiente, despues se diluyo con acetato de etilo, se lavo con agua, salmuera y se seco por MgSO4. El disolvente se retiro a presion reducida para dar 2-bromo-5-fluoro-fenil)2,2,2-trifluoroetanol, 1,1 g (pureza del 90 %) como un producto bruto, que se uso para la siguiente etapa sin purificacion adicional.
2-Bromo-5-fluoro-fenil)2,2,2-trifluoroetanol (0,990 g, 3,263 mmol, 90 %), 3-metil pirazol (0,476 g, 4,895 mmol), Cul (0,367 g, 1,632 mmol), K2CO3 (1,334 g, 8,158 mmol), (1R,2R)-N,N’-dimetil-ciclohexano-1,2-diamina (0,110 g, 0,653 mmol) y tolueno (10 ml) se combinaron en un vial de microondas de 20 ml, que se sello y se calento a 180 °C durante 40 min. La mezcla se filtro y se lavo con acetato de etilo. El filtrado se lavo con agua 3 veces y despues se anadio gel de silice para hacer un tapon. El compuesto se purifico por cromatografia en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para dar 1-(5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil)-2,2,2-trifluoro- etanol 75 mg. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 2,29(s, 3H), 4,90(m, 1H), 6,21(d, 1H), 7,07-7,11 (m, 1H), 7,19-7,22(m, 1H), 7,29-7,32(m, 1H), 7,51 (d, 1H).
El alcohol producido anteriormente (0,075 g, 0,273 mmol) se disolvio en 1,4-dioxano anhidro (3 ml). Se anadio hidruro sodico (0,013 g, 0,328 mmol, 60 % en aceite mineral) de una vez, y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se anadio 2-amino-4,6-dicloro-pirimidina (0,045 g, 0,273 mmol). La mezcla se agito a 80 °C durante aproximadamente 2 horas. El disolvente se retiro y el residuo se suspendio en acetato de etilo, que se lavo con agua, se seco sobre MgSO4 y despues se concentro para dar el producto monocloruro deseado 100 mg (0,249 mmol), que se anadio a un vial de microondas de 5 ml que contenia 4-borono-L-fenilalanina (0,052 g, 0,249 mmol), Na2CO3 (0,053 g, 0,498 mmol), acetonitrilo (2 ml) / agua (2 ml) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (5 mg, 0,007 mmol). El vial se tapo y se agito a 150 °C durante 5 min en radiacion microondas. La mezcla de reaccion se enfrio, se filtro a traves de un filtro de jeringa y despues se separo por una HPLC preparativa de fase inversa usando una columna YMC-Pack ODS 100x30 mm ID (sistema MeOH/H2O/TFA). Las fracciones puras se concentraron al vacio. El producto se suspendio despues en 5 ml de agua, se congelo y se liofilizo para dar acido (S)-2-amino-3-[4- (2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico, 37 mg como una sal trifluoro. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 2,29 (s, 3H), 3,08-3,30 (m, 2H), 4,19 (q, 1H), 6,32 (d, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,85 (m, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,33 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,75 (d, 1H), 7,87 (d, 2H).
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El compuesto del trtulo se preparo a partir de R-1-[5-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol, que se preparo usando el mismo enfoque que se describe anteriormente para R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-
2,2,2-trifluoro-etanol. En particular, R-1-[5-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol (0,959 g, 3,318 mmol) se disolvio en 1,4-dioxano anhidro (8 ml). Se anadio hidruro sodico (0,159 g, 3,982 mmol, 60 % en aceite mineral) de una vez, y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se anadio 2-amino-4,6- dicloro-pirimidina (0,554 g, 3,318 mmol). La mezcla se agito a 80 °C durante aproximadamente 2 horas. El disolvente se retiro y el residuo se suspendio en acetato de etilo, que se lavo con agua, se seco sobre MgSO4 y despues se concentro para dar el producto monocloruro deseado 1,38 g, que se uso directamente sin purification adicional.
El monocloruro (0,460 g, 1,104 mmol) producido anteriormente se anadio a un vial de microondas de 20 ml, que contema 4-borono-L-fenilalanina (0,277 g, 1,325 mmol), Na2CO3 (0,234 g, 2,208 mmol), acetonitrilo (8 ml) / agua (8 ml) y diclorobis(trifenilfosfina)-paladio (0,039 g, 0,055 mmol). El vial se tapo y la mezcla se agito a 150 °C durante 5 min en radiation microondas. La mezcla de reaction se enfrio, se filtro a traves de un filtro de jeringa y despues se separo por una HPLC preparativa de fase inversa usando una columna YMC-Pack ODS 100x30 mm ID (sistema MeOH/H2O/TFA). Las fracciones puras se concentraron al vatio. El producto se suspendio despues en 5 ml de agua, se congelo y se liofilizo para dar 580 mg de acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6{2,2,2-trifluoro-1-[5-cloro-2-(3- metil-pirazol-1 -il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5: 2,40 (s, 3H), 3,29-3,46 (m, 2H), 4,38 (q, 1H), 6,45 (d, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,24 (m, 1H), 7,53-7,70 (m, 4H), 7,82 (s, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,97 (d, 2H).
6.26. Sintesis de acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-f2.2.2-trifluoro-1-r4-(2-oxo-pirrolidin-1-il)-fenM1-etoxi)- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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4-(2-Oxo-pirrolidin-1-il)-benzaldehido (500 mg, 2,64 mmol) en THF (20 ml) se enfrio a 0 °C y se anadio trifluorometil trimetil silano (375 mg, 2,64 mmol). Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (1 M, 0,1 ml) gota a gota y la mezcla se dejo calentar a temperatura ambiente durante 1 h y se agito ademas durante toda la noche a temperatura ambiente. Despues de completarse la reaccion, se anadio HCl 3 N (5 ml) y la mezcla de reaccion se agito durante 2 h. La mezcla se concentro. Se anadio agua (20 ml) y la mezcla se extrajo por EtOAc (2x20 ml) y se lavo con NaHCO3 (20 ml), salmuera (20 ml) y se seco sobre sulfato sodico y se concentro para dar 590 mg de producto deseado, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional (rendimiento de 86 %).
Una solution de 4,6-dicloro-pirimidin-2-ilamina (700 mg, 2,69 mmol), NaH (194 mg, 8,07 mmol, 60 %) y 1-(4-(2,2,2- trifluoro-1 -hidroxi-etil)-fenil)-pirrolidin-2-ona (411 mg, 2,69 mmol) en THF seco (10 ml) se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. Despues de completarse la reaccion, el THF se retiro a presion reducida. Se anadio agua (10 ml) mientras la mezcla se enfrio a 0 °C. La mezcla se extrajo despues con diclorometano (2x40 ml). La solucion organica combinada se seco sobre Na2SO4. La retirada del disolvente dio 498 mg de producto deseado con un 92 % de pureza, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional (rendimiento de 498 mg, 48 %).
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Un vial de proceso Emrys (20 ml) para microondas se cargo con 1-(4-(2-amino-6-cloro-pirimidin-4-iloxi)-2,2,2- trifluoro-etil)-fenil)-pirrolidin-2-ona (200 mg, 0,51 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (108 mg, 0,51 mmol) y 5 ml de acetonitrilo. Se anadieron 5 ml de carbonato sodico acuoso (1 M) a la solucion anterior seguido de un 5 por ciento en moles de dicloro-bis-(trifenilfosfina)-paladio (II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 160 °C durante 7 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 4 ml de metanol y se purifico con LC prep. para dar 153 mg de producto (rendimiento del 58 %). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 2.1 (m, 2H), 2,5 (t, 2H), 3,05-3,4(m, 2H), 3,85 (t, 2H), 4,2 (m, 1H), 6,6(m, 1H), 6,75(s, 1H), 7,3(d, 2H), 7,5 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,9 (d, 2H).
6.27. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-f(R)-2.2.2-trifluoro-1-r5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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R-1-(2-Bromo-5-fluoro-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (4,0 g, 14,65 mmol), 3-metil pirazol (1,56 g, 19,04 mmol), Cul (0,557 g, 2,93 mmol), K2CO3 (4,25 g, 30,76 mmol), (1R,2R)-N,N’-dimetil-ciclohexano-1,2-diamina (0,416 g, 2,93 mmol) y tolueno (15 ml) se tomaron en un tubo sellado de 50 ml y la mezcla resultante se calento a 130 °C (temperatura de bano de aceite) durante 2 dias. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (4 x 30 ml), salmuera y se seco sobre sulfato sodico. La retirada del disolvente dio un producto bruto, que se purifico por cromatografia en columna ISCO usando acetato de etilo al 5-10 % en hexano como disolvente para dar 1,75 g de R-
2.2.2- trifluoro-1-[5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (Rendimiento: 44 %). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 2,35(s, 3H), 5,0(m, 1H), 6,3(s, 1H), 7,1(m, 1H), 7,20(s, 1H), 7,35(d, 1H), 7,50(s, 1H).
Una solucion de 4,6-dicloro-pirimidin-2-ilamina (938 mg, 5,72 mmol), NaH (188 mg, 1,5 eq. 8,17 mmol, 60 %) y R-
2.2.2- trifluoro-1-[5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (1,5 g, 1 eq. 5,45 mmol) en THF seco (10 ml) se agito a temperatura ambiente a 50 °C durante toda la noche. Despues de completarse la reaccion, el THF se retiro a presion reducida. Se anadio agua (10 ml) mientras para inactivar la reaccion. La mezcla se extrajo despues con diclorometano (2x40 ml). La solucion organica combinada se seco sobre Na2SO4. La retirada del disolvente dio el producto deseado con un 92 % de pureza, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional (rendimiento: 85 %).
Un vial de proceso Emrys (20 ml) para microondas se cargo con cloro-6-R-2,2,2-trifluoro-1-(5-fluoro-2-(3-metil- pirazol-1-il)-fenil)-etoxi)-pirimidin-2-ilamina (2,18 g, 5,45 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (1,13 g, 5,45 mmol), se anadio carbonato sodico (1 M 10,90 ml, 2 eq.) a la solucion anterior seguido de un 5 por ciento en moles de diclorobis (trifenilfosfina)-paladio (II) (191 mg, 0,27 mmol) y 5 ml de acetonitrilo y 5 ml de H2O. El recipiente de reaccion se sello y se calento a 160 °C durante 10 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en H2O (10 ml) y se extrajo con eter. La capa eterea se descarto. Despues la mayoria del agua en la fase acuosa se retiro al vacio seguido de la adicion de 10 ml de metanol. El producto bruto se purifico con HPLC prep. para dar 1,163 g de producto (rendimiento del 75 %). RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 2,4 (s, 3H), 3,35 (m, 1H), 3,5 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 6,4 (s, 1H), 7,0 (s, 1H), 7,1 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,55 (m, 4H), 7,85 (s, 1H), 8,0 (d, 2H).
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Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 4-(6-metoxi-piridin-2-il)- benzaldeMdo (213 mg, 1 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (0,2 ml, 1,2 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento a temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 12 ml de HCl 1 M y se agito durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 0,25 g de 1-[4-(6-metoxi-piridin-2- il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol que se uso directamente en la siguiente etapa sin purification. Rendimiento: 90 %.
Se anadio Cs2cO3 (375 mg, 1 mmol) a una solucion de 1-[4-(6-metoxi-piridin-2-il)-fenil]-2,2,2-trifluoroetanol (67 mg, 0,2 mmol) en 10 ml de 1,4-dioxano anhidro. La mezcla se agito durante 5 min, despues se anadio acido (S)-3-[4-(2- amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (78 mg, 0,2 mmol) y la mezcla se calento a 110 °C durante toda la noche. Despues de enfriar, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 112 mg de acido (S)-3-[4-(2-Amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[4-(6-metoxi-piridin-2-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc- butoxicarbonilamino-propionico (rendimiento: 88 %).
El producto anterior (112 mg) se anadio en 5 ml de una solucion de TFA/DCM al 30 %. Tras completarse la reaccion, el disolvente se evaporo para dar un producto bruto, que se purifico por HPLC preparativa para dar 5 mg de acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[4-(6-metoxi-piridin-2-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico.RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 8,18 (d, J=8,4Hz, 2 H), 7,94 (d, J=8,4Hz, 2 H), 7,74 (m, 3 H), 7,60 (d, J=8,4Hz, 2 H), 7,52 (d, J=7,2Hz, 1 H), 7,08 (s, 1 H), 6,86 (m, 1H), 6,82 (d, J=8,1Hz 1H), 4,37 (t, 1 H), 4,03(s, 3 H), 3,5 (m, 2 H).
6.29. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-f2.2.2-trifluoro-1-r2-fluoro-4-(5-metoxi-piridin-3-il)-fenil1- etoxi)-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se anadio TBAF (0,1 ml) a una solucion de 4-bromo-2-fluoro-benzaldehido (2,03 g, 10 mmol) y TMSCF3 (20 ml, 12 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento a temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 12 ml de HCl 3 M y se agito durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 2,4 g de 1-(4-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,2-trifluoroetanol (rendimiento: 90 %).
Se anadio Cs2cO3 (8,45 g, 26 mmol) a una solucion de 1-(4-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (1,4 g, 5,2 mmol) en 10 ml de 1,4-dioxano anhidro, la mezcla se agito durante 5 minutos, despues se anadio acido (S)-3-[4-(2- amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (2,0 g, 5 mmol) y la mezcla resultante se calento a 110 °C durante toda la noche. Despues de enfriar, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 2,6 g de acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[1-(4-bromo-2-fluorofenil)-2,2,2-trifluoro-etoxi]-pirimidin-4- il}fenil)2tercbutoxicarbonilamino-propionico (rendimiento: 82 %).
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Un vial de microondas (2 ml) se cargo con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[1-(4-bromo-2-fluorofenil)-2,2,2-trifluoro-etoxi]- pirimidin-4-il}fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (130 mg, 0,2 mmol), 3-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridina (70 mg, 0,3 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 14 mg (5 % en moles) de didorobis(trifenilfosfina)paladio(N). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico con HPLC prep. para dar 51 mg de acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-fluoro-4-(5-metoxi-piridin-3-il)-fenil]- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico.
El producto anterior (51 mg) se disolvio en 5 ml de una solucion de TFA/DCM al 30 %. La mezcla se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. La retirada del disolvente dio un producto bruto, que se purifico por HPLC preparativa para dar 17 mg de acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-fluoro-4-(5-metoxi- piridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 8,73 (s, 1 H), 8,56 (s, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 7,94 (d, J=8,2Hz, 2 H), 7,77(m, 3H), 7,55 (d, J=8,4Hz, 2 H), 7,16 (m, 1H), 7,00(s, 1H), 4,35 (t, 1 H), 4,09(s, 3 H), 3,4 (m, 2 H).
6.30. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-f4-(2-amino-6-f(S)-2.2.2-trifluoro-1 -f4-f2-fluoro-piridin-4-ih-fenil1-etoxi)- pirimidin-4-ih-fenil1-propi6nico
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Se anadio Cs2cO3 (16,25 g, 50 mmol) a la solucion de (S)-1-(4-bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (2,55 g, 11,0 mmol) en 10 ml de 1,4-dioxano anhidro y la mezcla se agito durante 5 minutos, despues de lo que se anadio acido (S)-3-[4- (2-amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (3,92 g, 10 mmol). La mezcla resultante se calento a 110 °C durante toda la noche. Despues de enfriar, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 5,2 g de acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etoxi)-pirimidin-4-il}fenil)-2-terc- butoxicarbonilamino-propionico (rendimiento: 82 %).
Un vial de microondas (2 ml) se cargo con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etoxi)- pirimidin-4-il}fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (139 mg, 0,23 mmol), acido 2-fluoropiridin-4-boronico (40 mg, 0,27 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla, se anadieron 0,4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 14 mg (5 % en moles) de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(N). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico con HPLC prep. para dar 51 mg de acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(2-fluoro-piridin-4-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-
butoxicarbonilamino-propionico.
El producto anterior (70 mg) se disolvio en 5 ml de TFA al 30 % en DCM. La mezcla de reaccion se agito a t.a. durante toda la noche. La retirada del disolvente dio producto bruto que se purifico por HPLC preparativa para dar 52 mg de acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(2-fluoro-piridin-4-il)-fenil]-otoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]- propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 8,17 (d, J=5,7Hz, 1 H), 7,85 (d, J=8,4Hz, 2 H), 7,77(d, J=6,9Hz ,2H), 7,67(d, J=8,2Hz ,2H), 7,53 (m, 1 H), 7,38 (d, J=8,4Hz,, 2H), 7,30(s, 1H), 6,76 (m, 2H), 4,21 (t, 1 H), 3,2 (m, 2 H).
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Un vial de microondas (2 ml) se cargo con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromo-fenil}-2,2,2-trifluoroetoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (139 mg, 0,23 mmol), 3-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]- dioxaborolan-2-il)-piridina (69 mg, 0,27 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla, se anadieron 0,4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 14 mg (de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(M). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico con HPLC prep. para dar 60 mg de acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(5-metoxi-piridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]- 2-terc butoxicarbonilamino-propionico.
El producto anterior (60 mg) se disolvio en 5 ml de TFA al 30 % en DCM. La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante toda la noche. La retirada del disolvente dio un producto bruto que se purifico por HPLC preparativa para dar 48 mg de acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(5-metoxi-piridin-3- il)-feniletoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. rMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 8,54 (d, J=1,5Hz, 1 H), 8,37 (d, J=2,7Hz, 1 H), 8,03 (dd, J=2,7Hz, 1,5Hz, 1H), 7,84 (d, J=8,2Hz, 2 H), 7,78(d, J=8,4Hz, 2H), 7,70(d, J=8,4Hz ,2H), 7,41 (d, J=8,4Hz,, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,75 (m, 1H), 4,22 (t, 1 H), 3,95 (t, 3 H), 3,25 (m, 2 H).
6.32. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-r4-(2-amino-6-f(S)-2.2.2-trifluoro-1-r4-(4-trifluorometil-piridin-3-il)-fenill- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Un vial de microondas (2 ml) se cargo con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromofenil)-2,2,2-trifluoroetoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (139 mg, 0,23 mmol), acido 4-trifluorometilpiridin-3- boronico (61 mg, 0,3 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 14 mg (de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(N). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico con HPLC preparativa para dar 20 mg de acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(4-trifluorometil-piridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc butoxicarbonilamino-propionico.
El producto anterior (20 mg) se disolvio en 5 ml de TFA al 30 % en DCM. La mezcla de reaccion se agito a t.a. durante toda la noche. La retirada del disolvente dio un producto bruto que se purifico por HPLC preparativa para dar 10 mg de acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(4-trifluorometil-piridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin- 4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 8,72 (d, J=5,1Hz, 1 H), 8,55 (s, 1 H), 7,87 (d, J=8,2, 2H), 7,72 (d, J=5,0Hz, 1 H), 7,63(d, J=8,2Hz ,2H), 7,36(m, 4H), 6,81 (m, 1H), 6,70 (s, 1H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
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Un vial de microondas (2 ml) se cargo con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromofenil)-2,2,2-trifluoroetoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (139 mg, 0,23 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-isoxazol (57,5 mg, 0,3 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 14 mg de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(N). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico por HPLC preparativa para dar 20 mg de acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-2,2,2-trifluoro-1-(4-isoxazol-4-il-fenil)-etoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino propionico.
El producto anterior (20 mg) se disolvio en 5 ml de TFA al 30 % en DCM. La mezcla de reaccion se agito a t.a. durante toda la noche. La retirada del disolvente dio un producto bruto, que se purifico por HPLC preparativa para dar 10 mg de acido (S)-2-Amino-3-(4-{2-amino-6-[(S)-2,2,2-trifluoro-1-(4-isoxazol-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 9,03 (s, 1H), 8,77(s, 1H), 7,84 (m, 2H), 7,63 (d, J=8,2, 1H), 7,56 (d, J=8,4Hz, 1 H), 7,50(m, 1H), 7,37(m, 3H), 6,70(m, 2H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
6.34. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-l4-(2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il-fenih-etoxi1-pirimidin-4- il}-fenil)-propi6nico
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Un vial de microondas (20 ml) se cargo con acido 2-formilfenilboronico (290 mg, 2,0 mmol), 5-bromo-pirimidina (316 mg, 2,0 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 100 mg de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se extrajo con etilacetato. La capa organica se evaporo para proporcionar un material bruto, que se purifico por ISCO para dar 220 mg de 2-pirimidin-5- il-benzaldefdo.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-pirimidin-5-il- benzaldehfdo (184 mg, 1 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (TMSCF3, 0,2 ml, 1,2 mmol) en 10 ml de tHf a 0 °C. La mezcla se calento a temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 0,21 g de 2,2,2-trifluoro-1-(2- pirimidin-5-il-fenil)-etanol (rendimiento: 84 %), que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion.
Se anadio Cs2cO3 (375 mg, 1,0 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il-fenil)-etanol (72 mg, 0,28 mmol) en 10 ml de 1,4-dioxano anhidro. La mezcla se agito durante 20 min, se anadio 2-amino-4,6-dicloro-pirimidina (36,7 mg, 0,22 mmol) y despues la mezcla se calento a 110 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de enfriar a temperatura ambiente, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 76 mg de 4-cloro-6- [2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina bruta (rendimiento: 92 %).
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Un vial de microondas (2 ml) se cargo con el intermedio bruto anterior (38 mg, 0,1 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (31 mg, 0,15 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 4 mg, 5 % en moles de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(N). El recipiente de reaction se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiation microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por HPLC preparativa para dar 10 mg de acido (S)-2-Amino-3-{4-(2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 9,21 (s, 1 H), 8,87 (s, 2 H), 7,86 (d, J=8,4, 2H), 7,75 (m, 1 H), 7,53(m, 2H), 7,37(d, J=8,2, 1H), 7,33 (m, 1H), 6,72(s, 1H), 6,58 (m, 1H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
6.35. Si'ntesis de acido (S)-2-amino-3-(4-f2-amino-6-f2.2.2-trifluoro-1-(2-tiofen-3-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il)- fenih-propionico
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Un vial de microondas (20 ml) se cargo con acido 2-formilfenilboronico (290 mg, 2,0 mmol), 3-bromo-tiofeno (326 mg, 2,0 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 50 mg de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(N). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se extrajo con etilacetato. La capa organica se evaporo para proporcionar un material bruto, que se purifico por ISCO para dar 211 mg de 2-tiofen-3-il- benzaldeido.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) (0,1 ml de 1 M en THF) a una solution de 2-tiofen-3-il-benzaldehido (100 mg, 0,53 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (0,1 ml, 0,64 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento a temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 0,12 g de 2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il- fenil)-etanol, que se uso directamente en la siguiente etapa sin purification (rendimiento: 89 %).
Se anadio Cs2cO3 (375 mg, 1,0 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-(2-tiofen-3-il-fenil)-etanol (72 mg, 0,28 mmol) en 10 ml de THF anhidro y la mezcla se agito durante 20 min. Se anadio despues 2-amino-4,6-dicloro- pirimidina (36,7 mg, 0,22 mmol) y la mezcla se calento a 110 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de enfriar, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 67 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2- pirimidin-5-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina (rendimiento: 78 %).
Un vial de microondas (2 ml) se cargo con el intermedio bruto anterior (40 mg, 0,1 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (31 mg, 0,15 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 5 % en moles de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(N). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por HPLC preparativa para dar 10 mg de acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-tiofen-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 5 (ppm) 7,84 (d, J=8,0 Hz, 2H), 7,66 (d, J=7,6 Hz, 1 H), 7,53(m, 1H), 7,40(m, 5H), 7,30 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 6,91 (m, 1H), 6,82(s, 1H), 4,23 (t, 1 H), 3,25 (m, 2 H).
6.36. Sintesis de acido (S)-2-Amino-3-f4-(2-amino-6-f2.2.2-trifluoro-1-f2-(1-metil-1H-Pirazol-4-il)-fenil1-etoxi)- pirimidin-4-il)-fenill-propi6nico
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Un vial de microondas (20 ml) se cargo con acido 2-formilfenilboronico (208 mg, 1,0 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5- tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (222 mg, 1,2 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron
2,4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 50 mg de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se extrajo con etilacetato. La capa organica se evaporo para proporcionar un material bruto que se purifico por ISCO para dar 181 mg de 2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-benzaldel'ndo (rendimiento del 96 %).
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)- benzaldehndo (100 mg, 0,53 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (0,12 ml, 0,6 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento a temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato despues con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 0,12 g de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(1-metil-1H- pirazol-4-il-fenil)-etanol, que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion (rendimiento: 89 %).
Se anadio Cs2cO3 (325 mg, 1,0 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(1-metil-1H-pirazol-4-il-fenil)-etanol (60 mg, 0,2 mmol) en 10 ml de THF anhidro y la mezcla se agito durante 20 min. Se anadio 2-amino-4,6-dicloro- pirimidina (36,7 mg, 0,22 mmol) y despues la mezcla se calento a 110 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de enfriar, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 67 mg de 4-cloro-6-{2,2,2- trifluoro-1 -[2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-2-ilamina (rendimiento: 92 %).
Un vial de microondas (2 ml) se cargo con el intermedio bruto anterior (38 mg, 0,1 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (31 mg, 0,15 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 5 % en moles de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por HPLC preparativa para dar 5,6 mg de acido (S)-2-Amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(1-metil-1H-Pirazol-4-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]- propionico.
6.37. Sintesis de acido (S)-2-amino-3-(4-l6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenin-etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico
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Un vial de microondas (20 ml) se cargo con acido 2-formilfenilboronico (298 mg, 2,0 mmol), 3-bromo-furano (350 mg,
2,4 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 100 mg de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se extrajo con etilacetato. La capa organica se evaporo para proporcionar un material bruto que se purifico por ISCO para dar 110 mg de 2-furan-3-il- benzaldehfdo (rendimiento del 30 %).
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-furan-3-il-benzaldel'ndo (110 mg, 0,64 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (109 mg, 0,78 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento a temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato despues con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 0,130 g de 2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil)-etanol, que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion (rendimiento: 90 %).
Se anadio NaH al sesenta por ciento (12 mg, 0,3 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil)-etanol (54 mg, 0,2 mmol) en 10 ml de THF anhidro. La mezcla se agito durante 20 min, despues de lo que se anadio 2- amino-4,6-dicloro-pirimidina (30 mg, 0,2 mmol). La mezcla se calento despues a 70 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de enfriar, se anadieron 5 ml de agua para inactivar la reaccion y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 67 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidina (rendimiento: 94 %).
Un vial de microondas (2 ml) se cargo con el material bruto anterior (38 mg, 0,1 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (31 mg, 0,15 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 5 % en moles de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla se evaporo a
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sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por HPLC preparativa para dar 6 mg de acido (S)-2-amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 8,82 (s, 1 H), 8,13 (d, J=8,4Hz, 2H), 7,73 (m, 2H), 7,46 (m, 6H), 6,82 (m, 1 H), 6,54(s, 1H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
6.38. Sintesis de acido (S)-2-amino-3-(4-l6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-furan-2-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico
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Un vial de microondas (20 ml) se cargo con acido 2-formilfenilboronico (298 mg, 2,0 mmol), 2-bromo-furano (350 mg,
2,4 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 100 mg de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla de reaccion se extrajo con etilacetato. La capa organica se evaporo para proporcionar un material bruto que se purifico por ISCO para dar 123 mg de 2-furan-2-il- benzaldehndo (rendimiento del 34 %).
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-furan-2-il-benzaldel'ndo (123 mg, 0,71 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (120 mg, 0,86 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento a temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato despues con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante toda la noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3x20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato sodico. El disolvente organico se evaporo para dar 0,150 g de 2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-2-il-fenil)-etanol, que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion (rendimiento: 90 %).
Se anadio NaH al sesenta por ciento (12 mg, 0,3 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-2-il-fenil)-etanol (55 mg, 0,2 mmol) en 10 ml de THF anhidro. La mezcla se agito durante 20 min, despues de lo que se anadio 4,6- dicloro-pirimidina (29 mg, 0,2 mmol). La mezcla se calento despues a 110 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de enfriar, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato sodico. El disolvente se retiro por rotavapor para dar 60 mg de 4-cloro-6-[2,2,2- trifluoro-1 -(2-furan-2-il-fenil)-etoxi]-pirimidina (rendimiento del 80 %).
Un vial de microondas (2 ml) se cargo con el material bruto anterior (60 mg, 0,2 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (62 mg, 0,3 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,6 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato sodico acuoso (1 M), seguido de 5 % en moles de diclorobis(trifenilfosfina)paladio(II). El recipiente de reaccion se sello y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion microondas. Despues de enfriar, la mezcla se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico por HPLC preparativa para dar 6 mg de acido (S)-2- amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-2-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RmN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 8,66 (s, 1 H), 8,11 (d, J=8,4Hz, 2H), 7,77 (m, 2 H), 7,54 (m, 6H), 6,86 (d, J=3,3Hz, 1 H), 6,66(m, 1H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
6.39. Compuestos adicionales
Los compuestos adicionales preparados usando metodos conocidos en la tecnica y/o descritos en el presente documento se listan a continuacion:
Compuesto
CLEM (M+1) Metodo de HPLC (Tiempo (min))
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(piridin-3- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
510 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(2-metilpiridin-4- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
524 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(4-metiltiofen-3- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
529 A --
acido (2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-pirazol-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)-2- aminopirimidin-4- il)fenil)-2-aminopropanoico
499 A (2,86)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(furan-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
499 A --
Compuesto
CLEM (M+1) Metodo de HPLC (Tiempo (min))
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(piridin-3- iloxi)fenil)etoxi)pirimidin-4- il)fenil)propanoico
512 A (1,36)
acido (2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-1,2,4-triazol-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)-2- aminopirimidin-4-il)fenil)-2-aminopropanoico
500 A (2,17)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(furan-3- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
499 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(furan-2-il)-3- metoxifenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
529 A (3,32)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(5-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(furan-2-il)fenil)etoxi)pirazin- 2- il)fenil)propanoico
484 E --
acido (2S)-3-(4-(5-(1-(2-(1H-pirazol-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)pirazin-2- il)fenil)- 2-aminopropanoico
484 E --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(4,5-diirietoxi-2-(1H-pirazol-1- il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
559 A (2,86)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(2-iTietil-1H- imidazol-1- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
513 A (2,30)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(5-iTietiltiofen-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
529 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(2-(5-(diirietilcarbaiTioil)furan-2- il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
570 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(tiofen-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
533 A (1,61)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(tiofen-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
518 A (1,65)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(tiofen-3- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
518 A (3,76)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(4-irietiltiofen-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
532 A (3,88)
acido (S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-2,2,2-trifluoro-1-(4-(6-fluoropindin- 3- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
528 A (2,96)
acido (2S)-3-(4-(6-(1-(4-(1H-imidazol-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)-2- aminopirimidin- 4-il)fenil)-2-aminopropanoico
499 A (2,07)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(tiofen-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4- il)fenil)propanoico
500 A (3,74)
acido (S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-2,2,2-trifluoro-1-(4-(piriiTiidin-5- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
511 A (2,67)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(1-(2-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-4-fluorofenil)- 2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
531 A (1,55)
acido (S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-2,2,2-trifluoro-1-(4-(2-iTietilpiridin-4- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
524 A (2,28)
acido (2S)-3-(4-(6-(1-(4-(1H-1,2,4-triazol- 1-il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4- il)fenil)-2-aminopropanoico
485 A (1,24)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(piperidin-1- ilmetil)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
530 B (3,00)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-fluoro-4-(2- metilpiridin-4- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
542 A (2,42)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(4-(6-cloropiridazin-3-il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
545 A (3,33)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(4-(4-tert-butiltiazol-2-il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
572 A (1,82)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(3'-metoxi-3-(3-metil- 1H-pirazol- 1-il)bifenil-4-il)etoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
619 A (3,54)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(5-cloro-2-(3-meti-1H-pirazol-1- il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico
547 A (3,20)
6.40. Ensayos de inhibicion in vitro
TPH1, TPH2, tirosina hidroxilasa (TH) y fenilalanina hidroxilasa (PH) humanas se generaron todas usando genes 5 que tienen los siguientes numeros de acceso, respectivamente: X52836, AY098914, X05290 y U49897.
La secuencia codificante de longitud completa de la TPH1 humana se clono en el vector de expresion bacteriano pET24 (Novagen, Madison, WI, EE.UU.). Una unica colonia de celulas BL21(DE3) que portaba el vector de
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expresion se inoculo en 50 ml de medio caldo L (LB)-kanamicina y se credo a 37 °C durante toda la noche con agitacion. La mitad del cultivo (25 ml) se transfirio entonces a 3 l de medio que contema un 1,5 % de extracto de levadura, un 2 % de Peptona Bacto, triptofano 0,1 mM, sulfato amonico ferroso 0,1 mM y tampon fosfato 50 mM (pH 7,0) y se crecio a una DO600 = 6 a 37 °C con oxfgeno suplementado al 40 %, pH mantenido a 7,0 y glucosa anadida. La expresion de TPH1 se indujo con D-lactosa al 15 % durante un periodo de 10 horas a 25 °C. Las celulas se giraron y se lavaron una vez con solucion salina tamponada con fosfato (PBS).
TPH1 se purifico por cromatograffa de afinidad basada en su union a pterina. El sedimento celular se resuspendio en un tampon de lisis (100 ml/20 g) que contema Tris-Cl 50 mM, pH 7.6, NaCl 0,5 M, Tween-20 al 0,1 %, EDTA 2 mM, DTT 5 mM, mezcla inhibidora de proteasa (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, EE.UU.) y fluoruro de fenilmetansulfonilo (PMSF) 1 mM y las celulas se lisaron con un microfluidizador. El lisado se centrifugo y el sobrenadante se cargo en una columna de sefarosa 4B acoplada a pterina que se equilibro con un tampon que contema Tris 50 mM, pH 8,0, NaCl 2 M, Tween-20 al 0,1 %, EDTA 0,5 mM y dTt 5 mM. La columna se lavo con 50 ml de este tampon y se eluyo TPH1 con un tampon que contema NaHCO3 30 mM, pH 10,5, NaCl 0,5 M, Tween-20 al 0,1 %, EDTA 0,5 mM, DTT 2 mM y glicerol al 10 %. La enzima eluida se neutralizo inmediatamente con KH2PO 200 mM, pH 7,0, NaCl 0,5 M, DTT 20 mM, EDTA 0,5 mM y glicerol al 10 % y se almaceno a -80 °C.
La triptofano hidroxilasa tipo II (TPH2), la tirosina hidroxilasa (TH) y la fenilalanina hidroxilasa (PAH) humanas se expresaron y se purificaron esencialmente del mismo modo, excepto por que las celulas se suplementaron con tirosina para TH y fenilalanina para PAH durante el crecimiento.
Las actividades TPH1 y TPH2 se midieron en una mezcla de reaccion que contema acido 4-morfolinpropansulfonico (MOPS) 50 mM, pH 7,0, triptofano 60 pM, sulfato amonico 100 mM, sulfato amonico ferroso 100 pM, tris(2- carboxietil)fosfina (TCEP) 0,5 mM, 6-metil tetrahidropterina 0,3 mM, catalasa 0,05 mg/ml y DTT 0,9 mM. Las reacciones se iniciaron anadiendo TPH1 a una concentracion final de 7,5 nM. La velocidad inicial de las reacciones se determino siguiendo el cambio de la fluorescencia a 360 nm (longitud de onda de excitacion = 300 nm). La inhibicion de TPH1 y TPH2 se determino midiendo sus actividades en diversas concentraciones de compuestos y la potencia de un compuesto dado se calculo usando la ecuacion:
imagen59
donde v es la velocidad inicial a una concentracion C de un compuesto dado, v0 es la v cuando C = 0, b es la senal de fondo, D es la pendiente de Hill que es aproximadamente igual a 1 e Ic50 es la concentracion del compuesto que inhibe la mitad de la actividad enzimatica maxima.
Las actividades de TH y PAH humanas se determinaron midiendo la cantidad de 3H2O generada usando L-[3,4-3H]- tirosina y L-[4-3H]-fenilalanina, respectivamente. La enzima (100 nM) se incubo en primer lugar con su sustrato a 0,1 nM durante aproximadamente 10 minutos y se anadio a una mezcla de reaccion que contema MOPS 50 mM, pH 7,2, sulfato amonico 100 mM, Tween-20 al 0,05 %, TCEP 1,5 mM, sulfato amonico ferroso 100 pM, tirosina o fenilalanina 0,1 mM, 6-metil tetrahidropterina 0,2 mM, 0,05 mg/ml de catalasa y DTT 2 mM. Las reacciones se dejaron avanzar durante 10-15 minutos y se pararon mediante la adicion de HCl 2 M. Las mezclas se filtraron despues a traves de carbon activado y la radiactividad en el filtrado se determino por recuento de centelleos. Las actividades de los compuestos de TH y PAH se determinaron usando este ensayo y se calcularon de la misma manera que TPH1 y TPH2.
6.41. Ensayos de inhibicion basados en celulas
Se usaron dos tipos de lmeas celulares para la exploracion: RBL2H3 es una lmea celular de mastocitoma de rata, que contiene TPH1 y produce 5-hidroxitriptoamina (5HT) espontaneamente; BON es una lmea celular de carcinoma humano, que contiene TPH1 y produce 5-hidroxitriptofano (5HTP). Los EBC se realizaron en un formato de placa de 96 pocillos. La fase movil usada en la HPLC contema un 97 % de acetato sodico 100 mM, pH 3,5 y acetonitrilo al 3 %. Se uso una columna Waters C18 (4,6 x 50 mm) con HPLC Waters (modelo 2795). Se uso un fluorometro multicanal (modelo 2475) para monitorizar el flujo a traves ajustando a 280 nm como la longitud de onda de excitacion y 360 nm como la longitud de onda de emision.
EBC RBL: Las celulas se hicieron crecer en medio completo (que contema suero bovino al 5 %) durante 3-4 horas para permitir a las celulas fijarse a los pocillos de las placas (7K celulas/pocillo). Los compuestos se anadieron despues a cada pocillo en el intervalo de concentracion de 0,016 pM a 11,36 pM. Los controles fueron celulas en medio completo sin ningun compuesto presente. Las celulas se recolectaron despues de 3 dfas de incubacion a 37 °C. Las celulas conflrnan al >95 % sin compuesto presente. Los medios se retiraron de las placas y las celulas se lisaron con volumen igual de NaOH 0,1 N. Una gran porcion del lisado celular se trato mezclando con igual volumen
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de TCA 1 M y despues se filtro a traves de fibra de vidrio. Los filtrados se cargaron en HPLC de fase inversa para analizar las concentraciones de 5HT. Tambien se tomo una pequena porcion del lisado celular para medir la concentracion proteica de las celulas que refleja la citotoxicidad de los compuestos a la concentracion usada. La concentracion proteica se midio usando un metodo BCA.
El promedio del nivel de 5HT en las celulas sin compuesto tratado se uso como el valor maximo en la derivacion IC50 de acuerdo con la ecuacion proporcionada anteriormente. El valor mmimo de 5HT se establece bien a 0 o bien a partir de las celulas que se trataron con la concentracion mas alta de compuesto si un compuesto no es citotoxico a esa concentracion.
EBC BON: Las celulas se hicieron crecer en volumen igual de DMEM y se anadieron F12K con suero bovino al 5 % durante 3-4 horas (20K celulas/pocillo) y compuesto a un intervalo de concentracion de 0,07 pM a 50 pM. Las celulas se incubaron a 37 °C durante toda la noche. Se tomaron despues cincuenta pM del sobrenadante del cultivo para la medicion de 5HTP. El sobrenadante se mezclo con igual volumen de TCA 1 M, despues se filtro a traves de fibra de vidrio. El filtrado se cargo en HPLC de fase inversa para la medicion de la concentracion de 5HTP. La viabilidad celular se midio tratando las celulas restantes con el Ensayo de Viabilidad Celular Luminiscente Promega Celltiter-Glo. La potencia del compuesto se calculo despues de la misma manera que en el ECB RBL.
6.42. Efectos in vivo
Los efectos in vivo de compuesto se determinaron formulandolos para proporcionar soluciones, que despues se dosificaron oralmente. En general, se dosificaron ratones albinos C57 machos de 14 semanas una vez al dfa por alimentacion forzada oral a 5-10 ml/kg durante cuatro dfas consecutivos. Cinco horas despues de la ultima dosis, los animales se sacrificaron rapidamente. Cada animal se anestesio usando isoflurano, la sangre se extrajo por el metodo del palillo cardfaco usando jeringas de 1 ml y una aguja 25 5/8, se colocaron 250 pl de sangre en tubos Capiject que contienen EDTA que se mantienen en rotacion suave. Despues se decapito al animal, se tomo el cerebro entero y se congelo instantaneamente, se limpiaron el yeyuno, el fleon y el colon de grasa y el contenido de la luz, se congelaron instantaneamente. Se extrajo 5-HT de la sangre o de los tejidos y se midio por cromatograffa lfquida de alto rendimiento (HPLC) equipada con un detector de fluorescencia en lmea. Las muestras de sangre se tomaron para el analisis de exposicion. Todos los estudios animales se llevaron a cabo con protocolos aprobados por The Institutional Animal Care and Use Committee.
La Figura 1 muestra el efecto dependiente de la dosis de un compuesto de la invencion en los niveles de 5-HT en ratones.

Claims (15)

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    REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de formula I:
    imagen1
    o una sal o solvato farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso como un medicamento en el tratamiento, la prevention o la gestion de hipertension pulmonar, en el que:
    Ai es heterociclo opcionalmente sustituido;
    cada Ri es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra; o alquilo C1-4;
    R2 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4;
    R3 es hidrogeno, C(0)Ra, C(0)ORa o alquilo C1-4;
    R4 es hidrogeno o alquilo C1-4;
    cada Ra es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rb es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rc es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; y m es 1-4.
  2. 2. El uso de la reivindicacion 1, en el que el compuesto es de formula:
    imagen2
    en la que:
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRC, S(02)Ra o alquilo C1-4; y n es 1-3.
  3. 3. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es de formula:
    imagen3
    en la que:
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y n es 1-3.
  4. 4. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es de formula:
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    imagen4
    en la que:
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y n es 1-3.
  5. 5. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es de formula:
    imagen5
    en la que:
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y p es 1-4.
  6. 6. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es de formula:
    imagen6
    en la que:
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(O)RA, ORa, NRbRC, S(02)Ra o alquilo C1-4; y q es 1-2.
  7. 7. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es de formula:
    imagen7
    en la que:
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y
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    q es 1-2.
  8. 8. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es de formula:
    imagen8
    en la que:
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y q es 1-2.
  9. 9. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que R1 es hidrogeno o halogeno.
  10. 10. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que R2 es hidrogeno o amino.
  11. 11. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que R3 es hidrogeno o alquilo C^.
  12. 12. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que R4 es hidrogeno o alquilo C^.
  13. 13. El compuesto para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2-8, en el que R5 es hidrogeno o alquilo C^.
  14. 14. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es acido (S)-2-amino-3-(4- (2-amino-6-((R)-1-(4-cloro-2-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil)propanoico o etil ester del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)- fenil]-propionico.
  15. 15. El compuesto para su uso de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que el compuesto es acido (S)-2-amino-3-[4- (2-amino-6-{1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico o etil ester del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]- propionico.
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