ES2562775T3 - Compuestos basados en 4-fenil-6-(2,2,2-trifluoro-1-feniletoxi) pirimidina y métodos para su uso - Google Patents

Compuestos basados en 4-fenil-6-(2,2,2-trifluoro-1-feniletoxi) pirimidina y métodos para su uso Download PDF

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Abstract

Un compuesto de fórmula I:**Fórmula** o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que: A1 es un heterociclo opcionalmente sustituido; cada R1 es independientemente halógeno, hidrógeno, C(O)RA, ORA, NRBRC, S(O2)RA o alquilo C1-4; R2 es independientemente halógeno, hidrógeno, C(O)RA, ORA, NRBRC, S(O2)RA o alquilo C1-4; R3 es hidrógeno, C(O)RA, C(O)ORA o alquilo C1-4; R4 es hidrógeno o alquilo C1-4; cada RA es independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; cada RB es independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; cada RC es independientemente hidrógeno o alquilo C1-4; y m es 1 - 4.

Description

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DESCRIPCION
Compuestos basados en 4-fenil-6-(2,2,2-trifluoro-1-feniletoxi) pirimidina y metodos para su uso
1. Campo de la invencion
Esta invencion se refiere a compuestos basados en 4-fenil-6-(2,2,2-trifluoro-1-feniletoxi) pirimidina, a composiciones que los comprenden y a su uso en el tratamiento, la prevencion y el abordaje de enfermedades y trastornos.
2. Antecedentes
El neurotransmisor serotonina [5-hidroxitriptamina (5-HT)] esta implicado en multiples facetas del sistema nervioso central sobre el control del estado de animo y en la regulacion del sueno, la ansiedad, el alcoholismo, la dependencia de drogas, la ingesta de alimentos y un comportamiento sexual. En los tejidos perifericos, la serotonina esta implicada al parecer en la regulacion del tono vascular, de la motilidad intestinal, de la hemostasia primaria y en las respuestas inmunitarias mediadas por celulas. Walther, D. J., et al., Science 299: 76 (2003).
La enzima hidroxilasa de triptofano (TPH) cataliza la etapa limitante de la velocidad de la biosmtesis de la serotonina. Se han notificado dos isoformas de la TPH: la TPH1, que es expresada en la periferia, principalmente en el tracto gastrointestinal (Gl); y la TPH2, que es expresada en las neuronas serotoninergicas. Id. La isoforma TPH1 esta codificada por el gen tphl; la TPH2 esta codificada por el gen tph2. Id.
Se ha informado de ratones geneticamente deficientes en el gen tphl ("ratones con genes inactivados"). En un caso, al parecer, los ratones expresaban unas cantidades normales de serotonina las regiones cerebrales serotoninergicas clasicas, pero caredan ampliamente de serotonina en la periferia. Id. En otros, los ratones con los genes inactivados mostraban una actividad cardfaca anormal, que era atribuida a una ausencia de serotonina periferica. Cote, F., et al., PNAS 100 (23): 13525 - 13530 (2003).
Debido a que la serotonina esta implicada en tantos procesos bioqmmicos, los farmacos que afectan a los receptores de la serotonina adolecen a menudo de efectos adversos. Por lo tanto, existe una necesidad de nuevas formas de tratar las enfermedades y los trastornos que se ven afectados por, estan mediados por o asociados a, la serotonina.
3. Sumario de la invencion
Esta invencion se refiere, en parte, a los compuestos de formula l:
imagen1
y a las sales y los solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos, en los que: Ai es un heterociclo opcionalmente sustituido; cada Ri es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; R2 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(O2)Ra o alquilo C1-4; R3 es hidrogeno, C(0)Ra, C(0)ORa o alquilo C1-4; R4 es hidrogeno o alquilo C1-4; cada Ra es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rb es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rc es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; y m es 1 - 4.
Los compuestos en particular inhiben la actividad de la TPH (por ejemplo, de la TPH1).
Esta invencion tambien se dirige a composiciones farmaceuticas y se refiere a metodos para el tratamiento, la prevencion y el abordaje de diversas enfermedades y trastornos.
4. Breve descripcion de la figura
La Figura 1 muestra el efecto dependiente de la dosis de un compuesto de la invencion sobre los niveles de 5-HT en el yeyuno de raton. El compuesto se administro por via oral en una solucion de Captisol® al 15 % a 15, 50,
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150 y 300 mpk.
5. Descripcion detallada
Esta invencion se basa, en parte, en el descubrimiento de que la inactivacion del gen tphl en ratones reduce significativamente los niveles de serotonina Gl, y provoca pocos, si los hay, efectos medibles sobre el sistema nervioso central (SNC).
Esta invencion tambien se basa en el descubrimiento de compuestos que inhiben la TPH (por ejemplo, la TPH1). Cuando son administrados a mairnferos, los compuestos preferidos de la invencion reducen los niveles de serotonina, tienen unas propiedades farmacocineticas y farmacodinamicas que permiten su uso practico para el tratamiento, la prevencion y el abordaje de enfermedades y trastornos, y tienen un amplio margen de seguridad entre el efecto farmacologico y la toxicidad o unas reacciones secundarias desfavorables.
5.1. Definiciones
Salvo que se indique de otro modo, el termino "alquenilo" significa un hidrocarburo de cadena lineal, ramificada y/o dclica que tiene entre 2 y 20 (por ejemplo, entre 2 y 10 o entre 2 y 6) atomos de carbono, y que incluye al menos un doble enlace carbono-carbono. Algunas fracciones representativas de alquenilo incluyen vinilo, alilo, 1 -butenilo, 2- butenilo, isobutilenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo, 3-metil-1-butenilo, 2-metil-2-butenilo, 2,3-dimetil-2-butenilo, 1- hexenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 1-heptenilo, 2-heptenilo, 3-heptenilo, 1-octenilo, 2-octenilo, 3-octenilo, 1-nonenilo, 2- nonenilo, 3-nonenilo, 1-decenilo, 2-decenilo y 3-decenilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "alquilo" significa un hidrocarburo de cadena lineal, ramificada y/o dclica ("cicloalquilo") que tiene entre 1 y 20 (por ejemplo, entre 1 y 10 o entre 1 y 4) atomos de carbono. Las fracciones de alquilo que tienen entre 1 y 4 carbonos se denominan "alquilo inferior". Algunos ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, pentilo, hexilo, isohexilo, heptilo, 4,4- dimetilpentilo, octilo, 2,2,4-trimetilpentilo, nonilo, decilo, undecilo y dodecilo. Las fracciones de cicloalquilo pueden ser monodclicas o multidclicas y algunos ejemplos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y adamantilo. Algunos ejemplos adicionales de fracciones de alquilo tienen porciones lineales, ramificadas y/o dclicas (por ejemplo, 1 -etil-4-metil-ciclohexilo). El termino "alquilo" incluye hidrocarburos saturados asf como fracciones alquenilo y alquinilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "alcoxi" significa un grupo -O-alquilo. Algunos ejemplos de grupos alcoxi incluyen -OCH3, -OCH2CH3, -O(CH2)2CH3, -O(CH2)3CH3, -O(CH2)4CH3 y -O(CH2)sCH3.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "alquilarilo" o "alquil-arilo" significa una fraccion alquilo unida a una fraccion arilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "alquilheteroarilo" o "alquil-heteroarilo" significa una fraccion alquilo unida a una fraccion heteroarilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "alquilheterociclo" o "alquil-heterociclo" significa una fraccion alquilo unida a una fraccion heterociclo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "alquinilo" significa un hidrocarburo de cadena lineal, ramificada o dclica que tiene entre 2 y 20 (por ejemplo, entre 2 y 20 o entre 2 y 6) atomos de carbono, y que incluye al menos un triple enlace carbono-carbono. Algunas fracciones representativas de alquinilo incluyen acetilenilo, propinilo, 1- butinilo, 2-butinilo, 1 -pentinilo, 2-pentinilo, 3-metil-1-butinilo, 4-pentinilo, 1 -hexinilo, 2-hexinilo, 5-hexinilo, 1 -heptinilo, 2-heptinilo, 6-heptinilo, 1 -octinilo, 2-octinilo, 7-octinilo, 1 -noninilo, 2-noninilo, 8-noninilo, 1 -decinilo, 2-decinilo y 9- decinilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "arilo" significa un anillo aromatico o un sistema anular aromatico o parcialmente aromatico formado por atomos de carbono y de hidrogeno. Una fraccion arilo puede comprender multiples anillos unidos o condensados entre sf. Algunos ejemplos de fracciones arilo incluyen antracenilo, azulenilo, bifenilo, fluorenilo, indano, indenilo, naftilo, fenantrenilo, fenilo, 1,2,3,4-tetrahidro-naftaleno y tolilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "arilalquilo" o "aril-alquilo" significa una fraccion arilo unida a una fraccion alquilo.
Salvo que se indique de otro modo, los terminos "amida biohidrolizable", "ester biohidrolizable", "carbamato biohidrolizable", "carbonato biohidrolizable", "ureido biohidrolizable" y "fosfato biohidrolizable" significan una amida, un ester, un carbamato, un carbonato, un ureido o un fosfato, respectivamente, de un compuesto que: 1) no interfieren con la actividad biologica del compuesto pero que pueden conferir a ese compuesto unas propiedades ventajosas in vivo, tales como captacion, duracion de la accion o inicio de la accion; o 2) es biologicamente inactivo pero se convierte in vivo en el compuesto biologicamente activo. Algunos ejemplos de esteres biohidrolizables
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incluyen esteres de alquilo inferior, esteres de alcoxiaciloxi, esteres de alquil acilamino alquilo y esteres de colina. Algunos ejemplos de amidas biohidrolizables incluyen amidas de alquilo inferior, amidas de a-aminoacido, alcoxiacil amidas y alquilaminoalquil-carbonil amidas. Algunos ejemplos de carbamates biohidrolizables incluyen alquilaminas inferiores, etilendiaminas sustituidas, aminoacidos, hidroxialquilaminas, aminas heteroctelicas y heteroaromaticas y polieter aminas.
Salvo que se indique de otro modo, las frases "enfermedad o trastorno mediado por la serotonina periferica" y "enfermedad y trastorno mediado por la serotonina periferica" significan una enfermedad y/o un trastorno que tiene uno o mas smtomas, cuya gravedad se ve afectada por los niveles perifericos de serotonina.
Salvo que se indique de otro modo, los terminos "halogeno" y "halo" engloban fluor, cloro, bromo y yodo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "heteroalquilo" se refiere a una fraccion alquilo (por ejemplo, lineal, ramificada o ctelica) en la que al menos uno de sus atomos de carbono se ha reemplazado por un heteroatomo (por ejemplo, N, O o S).
Salvo que se indique de otro modo, el termino "heteroarilo" significa una fraccion arilo en la que al menos uno de sus atomos de carbono se ha reemplazado por un heteroatomo (por ejemplo, N, O o S). Algunos ejemplos incluyen acridinilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, benzoisotiazolilo, benzoisoxazolilo, benzoquinazolinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, furilo, imidazolilo, indolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, ftalazinilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridilo, pirimidinilo, pirimidilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, tetrazolilo, tiazolilo y triazinilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "heteroarilalquilo" o "heteroaril-alquilo" significa una fraccion heteroarilo unida a una fraccion alquilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "heterociclo" se refiere a un anillo o un sistema anular aromatico, parcialmente aromatico o no aromatico monoctelico o polictelico formado por carbono, hidrogeno y al menos un heteroatomo (por ejemplo, N, O o S). Un heterociclo puede comprender multiples (es decir, dos o mas) anillos condensados o unidos entre sf. Algunos heterociclos incluyen heteroarilos. Algunos ejemplos incluyen benzo[1,3]dioxolilo, 2,3-dihidro-benzo[1,4]dioxinilo, cinolinilo, furanilo, hidantoinilo, morfolinilo, oxetanilo, oxiranilo, piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinonilo, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidropiridinilo, tetrahidropirimidinilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo y valerolactamaflo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "heterocicloalquilo" o "heterociclo-alquilo" se refiere a una fraccion heterociclo unida a una fraccion alquilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "heterocicloalquilo" se refiere a un heterociclo no aromatico.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "heterocicloalquilalquilo" o "heterocicloalquil-alquilo" se refiere a una fraccion heterocicloalquilo unida a una fraccion alquilo.
Salvo que se indique de otro modo, los terminos "abordar" y "abordaje" engloban la prevencion de la reaparicion de la enfermedad o del trastorno especificado, o de uno o mas de sus smtomas, en un paciente que ya ha padecido la enfermedad o el trastorno, y/o a la prolongacion del tiempo que permanece en remision un paciente que ha padecido la enfermedad o el trastorno. Los terminos engloban la modulacion del umbral, del desarrollo y/o de la duracion de la enfermedad o del trastorno, o la modificacion de la forma en la que responde un paciente a la enfermedad o el trastorno.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "sales farmaceuticamente aceptables" se refiere a las sales preparadas a partir de acidos o bases no toxicos farmaceuticamente aceptables, que incluyen acidos y bases inorganicos y acidos y bases organicos. Algunas sales de adicion basica adecuadas farmaceuticamente aceptables incluyen sales metalicas elaboradas a partir de aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio y cinc, o sales organicas elaboradas a partir de lisina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocama, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglucamina) y procama. Algunos acidos no toxicos adecuados incluyen acidos inorganicos y organicos tales como los acidos acetico, algmico, antramlico, bencensulfonico, benzoico, canforsulfonico, dtrico, etensulfonico, formico, fumarico, furoico, galacturonico, gluconico, glucuronico, glutamico, glucolico, bromhfdrico, clortedrico, isetionico, lactico, maleico, malico, mandelico, metansulfonico, mucico, mtrico, pamoico, pantotenico, fenilacetico, fosforico, propionico, salidlico, estearico, sucdnico, sulfamlico, sulfurico, acido tartarico y acido p-toluensulfonico. Algunos acidos espedficos no toxicos incluyen clortedrico, bromlddrico, fosforico, sulfurico y metansulfonico. Algunos ejemplos de sales espedficas incluyen por tanto sales de clorhidrato y de mesilato. Otras son bien conocidas en la tecnica. Vease, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1990) y Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a ed. (Mack Publishing, Easton PA: 1995).
Salvo que se indique de otro modo, el termino "potente inhibidor de la TPH1" es un compuesto que tiene una TPH1_CI 50 de menos de aproximadamente 10 pM.
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Salvo que se indique de otro modo, los terminos "prevenir" y "prevencion" contemplan una accion que se produce antes de que un paciente comience a padecer la enfermedad o el trastorno especificado, que inhibe o reduce la gravedad de la enfermedad o del trastorno, o de uno o mas de sus smtomas. Los terminos engloban la profilaxis.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "profarmaco" engloba esteres, carbonatos, tiocarbonatos, derivados de N-acilo, derivados de N-aciloxialquilo, derivados cuaternarios de aminas terciarias, bases de N-Mannich, bases de Schiff, conjugados de aminoacidos, esteres de fosfato, sales metalicas y esteres de sulfonato farmaceuticamente aceptables de los compuestos divulgados en el presente documento. Algunos ejemplos de profarmacos incluyen compuestos que comprenden una fraccion biohidrolizable (por ejemplo, una amida biohidrolizable, un carbamato biohidrolizable, un carbonato biohidrolizable, un ester biohidrolizable, un fosfato biohidrolizable o un ureido biohidrolizable analogo). Los profarmacos de los compuestos divulgados en el presente documento son facilmente visualizados y preparados por los expertos habituales en la tecnica. Vease, por ejemplo, Design of Prodrugs, Bundgaard, A. Ed., Elseview, 1985; Bundgaard, H., "Design and Application of Prodrugs", A Textbook of Drug Design and Development, Krosgaard-Larsen y H. Bundgaard, Ed., 1991, capttulo 5, pags. 113 - 191; y Bundgaard, H., Advanced Drug Delivery Review, 1992, 8, 1 - 38.
Salvo que se indique de otro modo, una "cantidad profilacticamente eficaz" de un compuesto es una cantidad suficiente para prevenir una enfermedad o una afeccion, o uno o mas smtomas asociados con la enfermedad o la afeccion, o para prevenir su reaparicion. Una cantidad profilacticamente eficaz de un compuesto es una cantidad del agente terapeutico, solo o junto con otros agentes, que proporciona un beneficio profilactico en la prevencion de la enfermedad. El termino "cantidad profilacticamente eficaz" puede englobar una cantidad que mejora globalmente la profilaxis o que potencia la eficacia profilactica de otro agente profilactico.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "grupo protector", cuando se usa para referirse a una parte de una molecula sometida a una reaccion qmmica, significa una fraccion qmmica que no es reactiva en las condiciones de esa reaccion qmmica y que puede ser eliminada para proporcionar una fraccion que es reactiva en esas condiciones. Los grupos protectores son bien conocidos en la tecnica. Vease, por ejemplo, Greene, T. W. y Wuts, P. G. M., Protective Groups in Organic Synthesis (3a ed., John Wiley & Sons: 1999); Larock, R. C., Comprehensive Organic Transformations (2a ed., John Wiley & Sons: 1999). Algunos ejemplos incluyen bencilo, difenilmetilo, tritilo, Cbz, Boc, Fmoc, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo y ftalimido.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "pseudohalogeno" se refiere a un anion poliatomico que se parece a un ion haluro en su qmmica acido-base, de sustitucion y redox, generalmente tiene una baja basicidad y forma un radical libre en unas condiciones de polimerizacion radicalaria de transferencia atomica. Algunos ejemplos de pseudohalogenos incluyen iones azida, cianuro, cianato, tiocianato, tiosulfato, sulfonatos y haluros de sulfonilo.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "inhibidor selectivo de la TPH1" es un compuesto que tiene una TPH2_CI 50 que es al menos aproximadamente 10 veces mayor que su TPH1_CIso.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "composicion enriquecida estereomericamente de" un compuesto se refiere a un mezcla del compuesto indicado y de su(s) estereoisomero(s) que contiene mas del compuesto indicado que de su(s) estereoisomero(s). Por ejemplo, una composicion enriquecida estereomericamente de (S)-butan-2-ol engloba las mezclas de (S)-butan-2-ol y (R)-butan-2-ol en unas proporciones de, por ejemplo, aproximadamente 60/40, 70/30, 80/20, 90/10, 95/5 y 98/2.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "mezcla estereoisomera" engloba mezclas racemicas asf como mezclas enriquecidas estereomericamente (por ejemplo, R/S = 30/70, 35/65, 40/60, 45/55, 55/45, 60/40, 65/35 y 70/30).
Salvo que se indique de otro modo, el termino "estereomericamente puro" significa una composicion que comprende un estereoisomero de un compuesto y esta sustancialmente exenta de los otros estereoisomeros de ese compuesto. Por ejemplo, una composicion estereomericamente pura de un compuesto que tiene un estereocentro estara sustancialmente exenta del estereoisomero opuesto del compuesto. Una composicion estereomericamente pura de un compuesto que tiene dos estereocentros estara sustancialmente exenta de los otros diastereomeros del compuesto. Una composicion estereomericamente pura de un compuesto que tiene multiples estereocentros, pero que esta dibujada o designada de una forma tal que estan definidas las estereoqmmicas de menos de todos sus estereocentros, esta sustancialmente exenta de los isomeros del compuesto que tienen unas estereoqmmicas diferentes en los estereocentros para los que se ha definido la estereoqmmica. Por ejemplo, "((1R)-1,2-dicloropropil) benceno estereomericamente puro" se refiere a ((1R)-1,2-dicloropropil) benceno que esta sustancialmente exento de ((1S)-1,2-dicloropropil) benceno.
Un tfpico compuesto estereomericamente puro comprende mas de aproximadamente el 80 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de aproximadamente el 20 % en peso de los otros estereoisomeros del compuesto, mas de aproximadamente el 90 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de aproximadamente el 10 % en peso de los otros estereoisomeros del compuesto, mas de aproximadamente el 95 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de aproximadamente el 5 % en peso de los otros
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estereoisomeros del compuesto, mas de aproximadamente el 97 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de aproximadamente el 3 % en peso de los otros estereoisomeros del compuesto, o mas de aproximadamente el 99 % en peso de un estereoisomero del compuesto y menos de aproximadamente el 1 % en peso de los otros estereoisomeros del compuesto.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "sustituido", cuando se usa para describir una estructura o una fraccion qmmica, se refiere a un derivado de esa estructura o fraccion en el que uno o mas de sus atomos de hidrogeno estan sustituidos por un atomo, una fraccion qmmica o un grupo funcional tal como, pero no se limitan a, alcohol, aldetndo, alcoxi, alcanoiloxi, alcoxicarbonilo, alquenilo, alquilo (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, t-butilo), alquinilo, alquilcarboniloxi (-alquilo OC(O)), amida (-C(O)NH-alquilo- o -alquil-NHC(O)alquilo), amidinilo (-C(NH)NH- alquilo o -C(NR)NH2), amina (primaria, secundaria y terciaria tal como alquilamina, arilamina, arilalquilamina), aroMo, arilo, ariloxi, azo, carbamoMo (-NHC(O)O-alquil- o -OC(O)NH-alquilo), carbamoflo (por ejemplo, CONH2, asf como CONH-alquilo, CONH-arilo y CONH-arilalquilo), carbonilo, carboxilo, acido carboxflico, antndrido de acido carboxflico, cloruro de acido carboxflico, ciano, ester, epoxido, eter (por ejemplo, metoxi, etoxi), guanidino, halo, haloalquilo (por ejemplo, -CCI3, -CF3, -C(CF3)3), heteroalquilo, hemiacetal, imina (primaria y secundaria), isocianato, isotiocianato, cetona, nitrilo, nitro, oxfgeno (es decir, para proporcionar un grupo oxo), fosfodiester, sulfuro, sulfonamido (por ejemplo, SO2NH2), sulfona, sulfonilo (incluyendo alquilsulfonilo, arilsulfonilo y arilalquilsulfonilo), sulfoxido, tiol (por ejemplo, sulfhidrilo, tioeter) y urea (-NHCONH-alquilo-).
Salvo que se indique de otro modo, una "cantidad terapeuticamente eficaz" de un compuesto es una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapeutico en el tratamiento o el abordaje de una enfermedad o de una afeccion, o para retrasar o minimizar uno o mas de los smtomas asociados con la enfermedad o la afeccion. Una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto es una cantidad del agente terapeutico, solo o junto con otras terapias, que proporciona un beneficio terapeutico en el tratamiento o el abordaje de la enfermedad o de una afeccion. El termino "cantidad terapeuticamente eficaz" puede englobar una cantidad que mejore la terapia global, que reduzca o que evite los smtomas o las causas de una enfermedad o de una afeccion, o que potencie la eficacia terapeutica de otro agente terapeutico.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "TPH1_CI5o" es la CI50 de un compuesto para la TPH1 segun se determina mediante el uso del ensayo de inhibicion in vitro descrito en los siguientes Ejemplos.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "TPH2_CI5o" es la CI50 de un compuesto para la TPH2 segun se determina mediante el uso del ensayo de inhibicion in vitro descrito en los siguientes Ejemplos.
Salvo que se indique de otro modo, los terminos "tratar" y "tratamiento" contemplan una accion que se produce mientras un paciente esta padeciendo la enfermedad o el trastorno especificado, que reduce la gravedad de la enfermedad o del trastorno, o uno o mas de sus smtomas, o retrasa o ralentiza la progresion de la enfermedad o del trastorno.
Salvo que se indique de otro modo, el termino "incluye" tiene el mismo significado que "que incluye" y el termino "incluye" tiene el mismo significado que "incluye, pero sin limitacion". De forma analoga, el termino "tal como" tiene el mismo significado que el termino "tal como, pero sin limitacion".
Salvo que se indique de otro modo, debe interpretarse que uno o mas adjetivos que preceden inmediatamente a una serie de nombres se aplican a cada uno de los nombres. Por ejemplo, la frase "alqui, arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido" tiene el mismo significado que "alqui opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido".
Debena apreciarse que una fraccion qmmica que forma parte de un compuesto mayor puede ser descrita en el presente documento mediante el uso del nombre acordado habitualmente para ella cuando exista en forma de una molecula individual o cuando el nombre acordado habitualmente es un radical. Por ejemplo, se acuerda que los terminos "piridina" y "piridilo" tienen el mismo significado cuando se usan para describir una fraccion unida a otras fracciones qmmicas. Por lo tanto, se acuerda que las dos frases "XOH, en el que X es piridilo" y "XOH, en el que X es piridina" tienen el mismo significado y engloban los compuestos piridin-2-ol, piridin-3-ol y piridin-4-ol.
Tambien debena apreciarse que si no esta indicada la estereoqmmica de una estructura o de una porcion de una estructura, por ejemplo, en negrita o con lmeas punteadas, debe interpretarse que la estructura o la porcion de la estructura engloba todos los estereoisomeros de la misma. De forma analoga, los nombres de los compuestos que tienen uno o mas centros quirales que no especifican la estereoqmmica de esos centros engloban los estereoisomeros puros y las mezclas de los mismos. Ademas, se asume que cualquier atomo mostrado en un dibujo con valencias no satisfechas esta unido a los suficientes atomos de hidrogeno como para satisfacer las valencias. Ademas, los enlaces qmmicos representados con una lmea continua paralela a una lmea discontinua engloban tanto enlaces sencillos como dobles (por ejemplo, aromaticos), si las valencias lo permiten.
5.2. Compuestos
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Esta invencion engloba, entre otros, los compuestos de formula I:
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y las sales y los solvatos farmaceuticamente aceptables de los mismos, en los que: Ai es un heterociclo opcionalmente sustituido; cada R1 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; R2 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; R3 es hidrogeno, C(0)Ra, C(0)ORa o alquilo C1-4; R4 es hidrogeno o alquilo C1-4; cada Ra es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rb es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rc es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; y m es 1-4.
En una forma de realizacion, el compuesto es de la formula:
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En otra, es de la formula:
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en las que: cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y n es 1 - 3.
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En otra, es de la formula:
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15 en las que: cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y p es 1 - 4.
En otra, es de la formula:
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en las que: cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y q es 1-2.
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en las que: cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y q es 1-2.
Con respecto a las diversas formulas divulgadas en el presente documento, en particular los compuestos de la 20 invencion, A1 es aromatico. En otras, A1 no es aromatico. En algunas, A1 esta opcionalmente sustituido con uno o
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mas de halogeno o alquilo inferior.
En algunas, R1 es hidrogeno o halogeno.
En algunas, m es 1.
En algunas, R2 es hidrogeno o amino.
En algunas, R3 es hidrogeno o alquilo inferior. En otras, R3 es C(O)ORa y Ra es alquilo C1-4.
En algunas, R4 es hidrogeno o alquilo inferior.
En algunas, R5 es hidrogeno o alquilo inferior (por ejemplo, metilo).
En algunas, n es 1.
En algunas, p es 1.
En algunas, q es 1.
Esta invencion engloba compuestos estereomericamente puros y composiciones estereomericamente enriquecidas de los mismos. Los estereoisomeros pueden ser sintetizados asimetricamente o resueltos mediante el uso de tecnicas convencionales tales como columnas quirales, agentes de resolucion quirales o una resolucion enzimatica. Vease, por ejemplo, Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, Nueva York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33: 2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw Hill, NY, 1962); y Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions, pag. 268 (E. L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972).
Algunos compuestos de la invencion en particular son potentes inhibidores de la TPH1. Algunos compuestos espedficos tienen una TPH1_CI50 de menos de aproximadamente 10, 5, 2,5, 1, 0,75, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1 o 0,05 |jM.
Algunos compuestos en particular son inhibidores selectivos de la TPH1. Algunos compuestos espedficos tienen una TPH1_CI 50 que es aproximadamente 10, 25, 50, 100, 250, 500 o 1.000 veces menor que su TPH2_CI50.
Algunos compuestos en particular no inhiben significativamente la hidroxilasa de tirosina humana (TH). Por ejemplo, algunos compuestos espedficos tienen una CI50 para la TH de mas de aproximadamente 100, 250, 500 o 1.000 jM.
Algunos compuestos en particular no inhiben significativamente la hidroxilasa de fenilalanina humana (PAH). Por ejemplo, algunos compuestos espedficos tienen una CI50 para la PAH de mas de aproximadamente 100, 250, 500 o 1.000 jM.
Algunos compuestos en particular de la invencion no se unen significativamente (por ejemplo, inhiben con una CI50 de mas de aproximadamente 10, 25, 50, 100, 250, 500, 750 o 1.000 jM) a uno o mas de los siguientes: enzima conversora de la angiotensina, receptor de la eritropoyetina (EPO), factor IX, factor XI, integrina (por ejemplo, a4), receptor de fibrinogeno de isoxazolina o isoxazol, metaloproteasa, endopeptidasa neutra (NEP), fosfatasa (por ejemplo, fosfatasa de tirosina), fosfodiesterasa (por ejemplo, PDE-4), polimerasa, PPARy, TNF-a, molecula de adhesion vascular 1 (VCAM-1) o el receptor de la vitronectina. La capacidad de un compuesto para unirse a (por ejemplo, para inhibir) cualquiera de estos objetivos puede ser facilmente determinada mediante el uso de metodos conocidos en la tecnica, segun se describe en las referencias mencionadas anteriormente. Algunos compuestos espedficos de la invencion no inhiben la adhesion celular.
Cuando son administrados a marnfferos (por ejemplo, a ratones, ratas, perros, monos o seres humanos), ciertos compuestos de la invencion no atraviesan facilmente la barrera hematoencefalica (por ejemplo, menos de aproximadamente un 5, 2,5, 2, 1,5, 1, 0,5, o 0,01 por ciento del compuesto que esta en la sangre pasa al cerebro). La capacidad o la incapacidad de un compuesto para atravesar la barrera hematoencefalica puede ser determinada mediante metodos conocidos en la tecnica. Vease, por ejemplo, Riant, P. et al., Journal of Neurochemistry 51: 421 - 425 (1988); Kastin, A. J., Akerstrom, V., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics 294: 633 - 636 (2000); W. A. Banks, W. A., et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics 302: 1062 - 1069 (2002).
5.3. Sintesis de los compuestos
Los compuestos de la invencion pueden ser preparados mediante metodos conocidos en la tecnica y mediante los metodos descritos en el presente documento.
Por ejemplo, los compuestos de formula I pueden ser preparados segun se muestra en el Esquema 1:
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en el que Pi es R1 o un grupo protector; P2 es un grupo protector; P3 es OR2 o un grupo protector; Y1 e Y3 son un halogeno (por ejemplo, Br, Cl) o un pseudohaluro apropiado (por ejemplo, triflato); y cada uno de los grupos Ai, Ri, R2 y R3 se ha definido en cualquier parte del presente documento.
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Los compuestos de la invencion tambien pueden ser preparados mediante la metodolog^a representada a continuacion en el Esquema 2:
imagen15
Las reacciones individuals mostradas en los esquemas anteriores pueden llevarse a cabo mediante el uso de las condiciones conocidas en la tecnica. Por ejemplo, los catalizadores de paladio y las condiciones adecuadas para el acoplamiento de Suzuki del boro y las fracciones que contienen halogeno son bien conocidos, y a continuacion se 5 proporcionan algunos ejemplos. Ademas, los tipos y los usos apropiados de los grupos protectores son bien conocidos, asf como los metodos para su eliminacion y sustitucion por fracciones tal como, pero no se limitan a, hidrogeno (por ejemplo, hidrolisis en condiciones acidas o basicas).
Los derivados de ester de los compuestos de la invencion pueden ser facilmente preparados mediante el uso de 10 metodos tales como los mostrados a continuacion en el Esquema 3:
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SOCb
Etanol. calor
(BoC)oO
THF,
Base
1 r4oh
condiciones de
acoplamiento
2) Desproteccion de Boc
OR4
Esquema 3
Mediante el uso de los metodos conocidos en la tecnica, pueden modificarse facilmente las metodolog^as sinteticas mostradas anteriormente para obtener una amplia variedad de compuestos. Por ejemplo, puede usarse una 5 cromatograffa quiral y otras tecnicas conocidas en la tecnica para la separacion de los estereoisomeros del producto
final. Vease, por ejemplo, Jacques, J., et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley Interscience, Nueva York, 1981); Wilen, S. H., et al., Tetrahedron 33: 2725 (1977); Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw Hill, NY, 1962); y Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions, pag. 268 (E. L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972). Ademas, segun se muestra en algunos de los esquemas 10 anteriores, las smtesis pueden utilizar materiales de partida quirales para producir productos estereomericamente enriquecidos o puros.
5.4. Metodo de uso
15 Esta invencion engloba un metodo para la inhibicion de la TPH, que comprende poner en contacto la TPH con un compuesto de la invencion (es decir, un compuesto divulgado en el presente documento). En un metodo en particular, la TPH es la TPH1. En otro, la TPH es la TPH2. En un metodo en particular, la inhibicion es in vitro. En otro, la inhibicion es in vivo.
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Una forma de realizacion engloba un metodo para la inhibicion de la TPH1 en un mairnfero (por ejemplo, en un ser humano), que comprende la administracion al mai^ero de un compuesto de la invencion. En un metodo en particular, la TPH2 no es inhibida significativamente. En un metodo, el compuesto no atraviesa facilmente la barrera hematoencefalica. En otro, el compuesto es un inhibidor selectivo de la TPH1.
Esta invencion engloba metodos para el tratamiento, la prevencion y el abordaje de diversas enfermedades y trastornos mediados por la serotonina periferica, que comprenden la inhibicion de la actividad de la TPH1 en un paciente en necesidad de dicho tratamiento, prevencion o abordaje. En una forma de realizacion en particular, la inhibicion se lleva a cabo mediante la administracion al paciente de una cantidad terapeuticamente o profilacticamente eficaz de un potente inhibidor de la TPH1. Algunos ejemplos de potentes inhibidores de la TPH1 se divulgan en el presente documento.
Algunas enfermedades y trastornos en particular incluyen el smdrome carcinoide y enfermedades y trastornos gastrointestinales. Algunos ejemplos de enfermedades y trastornos espedficos incluyen dolor abdominal (por ejemplo, asociado con un carcinoma medular de tiroides), ansiedad, smdrome carcinoide, enfermedad celiaca, estrenimiento (por ejemplo, estrenimiento de origen iatrogeno y estrenimiento idiopatico), enfermedad de Crohn, depresion, diabetes, diarrea (por ejemplo, diarrea de acido biliar, diarrea secretora inducida por una enterotoxina, diarrea de origen iatrogeno, diarrea idiopatica (por ejemplo, diarrea secretora idiopatica) y diarrea del viajero), vomitos, dolor abdominal funcional, trastornos anorrectales funcionales, distension funcional, dispepsia funcional, trastornos funcionales de la vesmula biliar, smdrome de intestino irritable (IBS; incluyendo IBD-d, IBS-c e IBS-a), intolerancia a la lactosa, MEN de los tipos I y II, nauseas, smdrome de Ogilvie, smdrome de colera pancreatico, insuficiencia pancreatica, feocromocitoma, esclerodermia, trastorno por somatizacion, trastornos del esfmter de Oddi, colitis ulcerosa y smdrome de Zollinger-Ellison.
Algunas enfermedades y trastornos adicionales incluyen enfermedades y trastornos cardiovasculares y pulmonares tales como hipertension aguda y cronica, enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC), embolia pulmonar (por ejemplo, broncoconstriccion e hipertension pulmonar despues de una embolia pulmonar), hipertension pulmonar (por ejemplo, hipertension pulmonar asociada con una hipertension portal) y neumonitis por radiacion (incluyendo la que provoca o contribuye a una hipertension pulmonar). Otras incluyen migrana abdominal, smdrome de distres respiratorio del adulto (ARDS), crisis carcinoide, smdrome de CREST (calcinosis, fenomeno de Raynaud, disfuncion esofagica, esclerodactilia, telangiectasia), smdrome serotoninergico y hemorragia subaracnoidea.
En algunos metodos en particular de la invencion, el tratamiento, el abordaje y/o la prevencion de una enfermedad o de un trastorno se consiguen evitando los efectos adversos asociados con una alteracion en los niveles de serotonina del sistema nervioso central (SNC). Algunos ejemplos de dichos efectos adversos incluyen agitacion, trastornos por ansiedad, depresion y trastornos del sueno (por ejemplo, insomnio y alteraciones del sueno). En algunos metodos en particular de la invencion, el tratamiento, el abordaje y/o la prevencion de una enfermedad o de un trastorno se consiguen evitando los efectos adversos asociados con una alteracion en los niveles de serotonina del sistema nervioso central (SNC). Algunos ejemplos de dichos efectos adversos incluyen agitacion, trastornos por ansiedad, depresion y trastornos del sueno (por ejemplo, insomnio y alteraciones del sueno).
5.5. Composiciones farmaceuticas
Esta invencion engloba composiciones farmaceuticas que comprenden uno o mas compuestos de la invencion. Algunas composiciones farmaceuticas son formas de dosificacion unitaria individuales adecuadas para su administracion por via oral, mucosal (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal o rectal), parenteral (por ejemplo, subcutanea, intravenosa, inyeccion en bolo, intramuscular o intraarterial) o transdermica a un paciente. Algunos ejemplos de formas de dosificacion incluyen, pero sin limitacion: comprimidos; capsuletas; capsulas, tales como capsulas de gelatina blanda elasticas; obleas; pastillas; tabletas; dispersiones; supositorios; unguentos; cataplasmas (apositos); pastas; polvos; apositos; cremas; tiritas; soluciones; parches; aerosoles (por ejemplo, pulverizadores o inhaladores nasales); geles; formas de dosificacion lfquidas adecuadas para su administracion por via oral o mucosal a un paciente, que incluyen suspensiones (por ejemplo, suspensiones lfquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite en agua o emulsiones lfquidas de agua en aceite), soluciones y elixires; formas de dosificacion lfquidas adecuadas para su administracion por via parenteral a un paciente; y solidos esteriles (por ejemplo, solidos cristalinos o amorfos) que pueden ser reconstituidos para proporcionar formas de dosificacion lfquidas adecuadas para su administracion por via parenteral a un paciente.
La formulacion debena adecuarse al modo de administracion. Por ejemplo, la administracion oral de un compuesto susceptible de ser degradado en el estomago puede conseguirse mediante el uso de un recubrimiento enterico. De forma analoga, una formulacion puede contener ingredientes que faciliten la administracion del (los) principio(s) activo(s) en el sitio de accion. Por ejemplo, los compuestos pueden ser administrados en formulaciones liposomicas con objeto de protegerlos de las enzimas degradativas, para facilitar su transporte en el sistema circulatorio y para efectuar su administracion a traves de las membranas celulares.
De forma analoga, los compuestos poco solubles pueden ser incorporados en formas de dosificacion lfquidas (y en formas de dosificacion adecuadas para su reconstitucion) con la ayuda de agentes solubilizantes, emulsionantes y
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tensioactivos tales como, pero no se limitan a, ciclodextrinas (por ejemplo, a-ciclodextrina, p-ciclodextrina, Captisol® y Encapsin™ (vease, por ejemplo, Davis y Brewster, Nat. Rev. Drug Disc. 3: 1023 - 1034 (2004)) Labrasol® Labrafil® Labrafac®, cremafor y disolventes no acuosos, tales como, pero no se limitan a, alcohol etilico, alcohol isopropflico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bendlico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3- butilenglicol, dimetilformamida, dimetilsulfoxido (DMSO), aceites biocompatibles (por ejemplo, aceite de semilla de algodon, de cacahuete, de mafz, de germen, de oliva, de ricino y de sesamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurfunlico, polietilenglicoles, esteres de acidos grasos de sorbitano y mezclas de los mismos (por ejemplo, DMSO:aceite de mafz).
Los compuestos poco solubles tambien pueden ser incorporados en suspensiones mediante el uso de otras tecnicas conocidas en la tecnica. Por ejemplo, las nanopartfculas de un compuesto pueden ser suspendidas en un lfquido para proporcionar una nanosuspension (vease, por ejemplo, Rabinow, Nature Rev. Drug Disc. 3: 785 - 796 (2004)). Las formas de nanopartfcula de los compuestos descritos en el presente documento pueden ser preparadas mediante los metodos descritos en las Publicaciones de Patente de Estados Unidos n° 2004-0164194, 20040195413, 2004-0251332, 2005-0042177 A1, 2005-0031691 A1 y en las Patentes de Estados Unidos n° 5.145.684, 5.510.118, 5.518.187, 5.534.270, 5.543.133, 5.662.883, 5.665.331, 5.718.388, 5.718.919, 5.834.025, 5.862.999, 6.431.478, 6.742.734, 6.745.962, la totalidad de las cuales se incorpora en el presente documento como referencia. En una forma de realizacion, la forma de nanopartfcula comprende partfculas que tienen un tamano medio de partfcula de menos de aproximadamente 2.000 nm, de menos de aproximadamente 1.000 nm o de menos de aproximadamente 500 nm.
La composicion, la forma y del tipo de una forma de dosificacion variaran tfpicamente dependiendo del uso. Por ejemplo, una forma de dosificacion usada para el tratamiento agudo de una enfermedad puede contener grandes cantidades de uno o mas de los principios activos de los que comprende cuando se usa una forma de dosificacion para el tratamiento cronico de la misma enfermedad. De forma analoga, una forma de dosificacion parenteral puede contener unas cantidades menores de uno o mas de los principios activos de las que comprende cuando se usa una forma de dosificacion oral para el tratamiento de la misma enfermedad. La forma de tener en cuenta dichas diferencias sera evidente para los expertos en la tecnica. Vease, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).
5.5.1. Formas de dosificacion orales
Las composiciones farmaceuticas de la invencion adecuadas para su administracion por via oral pueden presentarse en formas de dosificacion individuales, tales como, pero no se limitan a, comprimidos (por ejemplo, comprimidos masticables), capsuletas, capsulas y lfquidos (por ejemplo, jarabes aromatizados). Dichas formas de dosificacion contienen unas cantidades predeterminadas de los principios activos y pueden ser preparadas mediante metodos de Farmacia bien conocidos por los expertos en la tecnica. Vease, de forma general, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).
Las formas de dosificacion orales tfpicas se preparan mediante la combinacion del (los) principio(s) activo(s) en una mezcla mtima con al menos un excipiente de acuerdo con las tecnicas de combinacion farmaceutica convencionales. Los excipientes pueden tomar una gran diversidad de formas dependiendo de la forma de la preparacion deseada para su administracion.
Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y las capsulas representan las formas unitarias de dosificacion oral mas ventajosas. Si se desea, los comprimidos pueden ser recubiertos mediante tecnicas habituales acuosas o no acuosas. Dichas formas de dosificacion pueden ser preparadas mediante los metodos convencionales de Farmacia. En general, las composiciones farmaceuticas y las formas de dosificacion se preparan mezclando uniformemente e mtimamente los principios activos con vehfculos lfquidos, con vehfculos solidos finamente divididos, o con ambos, y moldeando despues el producto en la presentacion deseada si fuera necesario. Pueden incorporarse disgregantes en las formas de dosificacion solidas para facilitar una rapida disolucion. Tambien pueden incorporarse lubricantes para facilitar la elaboracion de las formas de dosificacion (por ejemplo, de comprimidos).
5.5.2. Formas de dosificacion parenterales
Las formas de dosificacion parenterales pueden ser administradas a los pacientes mediante diversas vfas que incluyen subcutanea, intravenosa (incluyendo la inyeccion en bolo), intramuscular e intraarterial. Debido a que su administracion evita tfpicamente las defensas naturales del paciente frente a los contaminantes, las formas de dosificacion parenterales son espedficamente esteriles o susceptibles de ser esterilizadas antes de su administracion a un paciente Algunos ejemplos de formas de dosificacion parenterales incluyen soluciones listas para su inyeccion, productos secos listos para ser disueltos o suspendidos en un veldculo farmaceuticamente aceptable para inyeccion, suspensiones y emulsionas listas para inyeccion.
Algunos veldculos adecuados que pueden ser usados para proporcionar las formas de dosificacion parenterales de la invencion son bien conocidos por los expertos en la tecnica. Algunos ejemplos incluyen: agua para inyeccion USP; vedculos acuosos tales como cloruro de sodio para inyeccion, Ringer para inyeccion, dextrosa para inyeccion,
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dextrosa de cloruro de sodio para inyeccion y Ringer-lactato para inyeccion; vehnculos miscibles con el agua tales como alcohol etflico, polietilenglicol y polipropilenglicol; y vehnculos no acuosos tales como aceite de m^z, aceite de semilla de algodon, aceite de cacahuete, aceite de sesamo, oleato de etilo, miristato de isopropilo y benzoato de bencilo.
6. EJEMPLOS
6.1. Produccion de ratones con el gen tph1 desestabilizado
Se elimino el exon 3 del gen TPH1 murino mediante un direccionamiento genico esencialmente segun se describe en Wattler et al., Biotechniques 26 (6): 1150 - 6 (1999). Los animales con el gen inactivado resultantes mostraban una actividad normal de la TPH en el cerebro pero una expresion radicalmente reducida de la TPH en el intestino.
6.2. Efectos fisiologicos de la desestabilizacion del gen tphl
Se estudiaron ratones homocigoticos (- / -) para la desestabilizacion del tphl junto con ratones heterocigoticos (+ / -) para la desestabilizacion del gen, junto con companeros de camada geneticamente intactos (+ / +). Durante este analisis, los ratones se sometieron a una evaluacion medica mediante el uso de un conjunto integrado de procedimientos diagnosticos medicos disenados para la evaluacion de la funcion de los principales sistemas organicos de un sujeto mairnfero. Mediante el estudio de los ratones homocigoticos (- / -) con el gen inactivado en las cifras descritas y junto con los companeros de camada heterocigoticos (+ / -) y geneticamente intactos (+ / +), se obtuvieron unos datos mas fiables y sistematicos.
La desestabilizacion del gen tphl afecto principalmente a la isoforma de la TPH del tracto GI (TPH1) y tuvo poco o ningun efecto sobre la isoforma cerebral de la TPH (TPH2). La desestabilizacion del gen no provoco ningun efecto secundario medible sobre el sistema nervioso central. Esto se confirmo mediante una inmunoqmmica de la serotonina, que mostro que la serotonina se habfa reducido en gran medida o estaba ausente en el estomago, el duodeno, el yeyuno, el fleo el ciego y el colon, mientras que los niveles de serotonina permanedan invariables en las neuronas del rafe.
Algunos de los ratones homocigoticos (- / -) para la desestabilizacion del gen tphl mostraban una disminucion en la trombosis sin un aumento significativo en las hemorragias ni otras senales adversas.
6.3. Caracterizacion mediante HPLC
En algunos de los siguientes ejemplos sinteticos se proporcionan los tiempos de retencion de la cromatograffa lfquida de alta resolucion (HPLC). Las diversas condiciones usadas para la obtencion de esos tiempos de retencion se describen a continuacion:
Metodo A: YMC-PACK ODS-A de 3,0 x 50 mm; disolvente A = H2O, TFA al 0,1 %; disolvente B = MeOH, TFA al 0,1 %; B % del 10 al 90 % durante 4 min.; caudal = 2 ml/min; observacion de la longitud de onda = 220 y 254 nm. Metodo B: YMC-PACK ODS-A de 3,0 x 50 mm; disolvente A = 90 % de agua, 10 % de MeOH con TfA al 0,1 %; disolvente B = 90 % de MeOH, 10 % de agua con TFA al 0,1 %; B % del 0 al 100 % durante 4 min.; caudal = 2 ml/min.; observacion de la longitud de onda = 220 y 254 nm.
Metodo C: ShimPack VP ODS de 4,6 x 50 mm; disolvente A = 90 % de H2O, 10 % de MeOH, 1 % de TFA; disolvente B = 10 % de H2O, 90 % de MeOH, 1 % de TFA; B % del 0 al 100 % durante 2 min.; caudal = 3,5 ml/min; observacion de la longitud de onda = 220 y 254 nm.
Metodo D: Shim VP ODS 4,6 x 50 mm; disolvente A = H2O con TFA al 0,1 %; disolvente B = MeOH con TFA al 0,1 %; B % del 0 al 100 % durante 4 min; caudal = 3 ml/min.; observacion de la longitud de onda = 254 nm. Metodo E: YMC Pack ODS-A de 4,6 x 33 mm; disolvente A = H2O, TFA al 0,1 %; disolvente B = MeOH con TFA al 0,1 %; B % del 10 al 90 % durante 3 min; caudal 2 ml/min; observacion de la longitud de onda 220 y 254 nm. Metodo F: YMC-Pack ODS-A de 3,0 x 50 mm; disolvente A = 90 % H2O, 10 % de MeOH, 1 % de TfA; disolvente B = 10% de H2O, 90% de MeOH, 1 % de TFA; B% del 10 al 90% durante 4 min; caudal = 2 ml/min, observacion de la longitud de onda = 220 y 254 nm.
6.4. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-r2.2.2-trifluro-1-(4-piridin-4-il-fenih-etoxi1-pirimidin-4-ih- fenih-propionico
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Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,027 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 4-piridin- 4-il- benzaldehndo (500 mg, 2,73 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (485 pl, 3,28 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla resultante se calento hasta la temperatura ambiente y se agito a la temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 5 ml de HCl 1 N y se agito a la temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se evaporo a sequedad, se anadieron 9 ml de una solucion acuosa de carbonato de sodio 1 M, la fase acuosa se extrajo con cloroformo (3x10 ml) y la capa de cloroformo combinada se lavo con agua, se seco sobre MgSO4. El disolvente organico se elimino al vado para dar 360 mg de 2,2,2-trifluoro-1-(4-piridin-4-il-fenil) etanol, rendimiento: 51 %.
La mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-(4-piridin-4-il-fenil) etanol (100 mg, 0,40 mmol), 2-amino-4,6-dicloropirimidina (60 mg, 0,38 mmol) y carbonato de cesio (468 mg, 1,44 mmol) se disolvio en 2 ml de 1,4-dioxano en un tubo precintado de 50 ml. La mezcla se calento a 110 °C durante una noche, despues se enfrio hasta la temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo y despues se filtro a traves de Celite. El filtrado se concentro para dar 120 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-piridin-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina, rendimiento: 80 %.
En un vial para microondas se mezclaron conjuntamente 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-piridin-4-il-fenil)-etoxi]- pirimidin-2-ilamina (30 mg, 0,080 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (21 mg, 0,098 mmol) y 1 ml de actonitrilo y 0,7 ml de agua. Despues se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N a la mezcla, seguido de 5 moles por ciento de dicloro-bis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con una irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una CL Prep para dar 6,7 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluro-1-(4-pirimidin-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}- fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 8,82 (s, 2H), 8,26 (s, 2H), 8,02 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,97 (d, J =
8,4 Hz, 2H), 7,86 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8 Hz 2H), 6,89 (c, J = 6,8 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 2 Hz,1H), 4,29 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 3,39 (m, 1H), 3,19 (m, 1H).
6.5. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-l6-r2.2.2-trifluro-1-(2-piridin-4-il-fenin-etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico
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Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,027 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 2-piridin- 4-il- benzaldehfdo (500 mg, 2,73 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCFg) (485 pl, 3,28 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla forma se calento hasta la temperatura ambiente y se agito a la temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 5 ml de HCl 1 N y se agito a la temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se evaporo a sequedad, se anadieron 9 ml de una solucion acuosa de carbonato de sodio 1 M, la fase acuosa se extrajo con cloroformo (3x10 ml) y la capa organica combinada se lavo con agua, se seco sobre MgSO4. El disolvente organico se evaporo para dar 300 mg de 2,2,2-trifluoro-1-(2-piridin-4-il-fenil) etanol, rendimiento: 43 %.
La mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-(2-piridin-4-il-fenil) etanol (100 mg, 0,40 mmol), 4,6-dicloro-pirimidina (54 mg, 0,38 mmol), carbonato de cesio (468 mg, 1,44 mmol) y 1,4-dioxano (1 ml). La mezcla se calento a 110 °C durante una noche. La mezcla de reaccion se enfrio hasta la temperatura ambiente. Se anadieron 10 ml de acetato de etilo y despues la mezcla se filtro a traves de Celite. El filtrado se concentro para dar 110 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1- (2-piridin-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidina, rendimiento: 76 %.
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En un vial para microondas se mezclaron conjuntamente 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-piridin-4-il-fenil)-etoxi]- pirimidina (30 mg, 0,082 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (21 mg, 0,098 mmol), 1 ml de actonitrilo y 0,7 ml de agua. Despues se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N a la mezcla, seguido de 5 moles por ciento de diclorobis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una CL Prep para dar 19 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluro-1-(2-piridin-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 8,94 (d, J = 6 Hz, 2H), 8,79 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,15 (m, 4H), 7,84 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,62 (m, 3H), 7,46 (m, 3H). 6,66 (c, J = 6,4 Hz, 1H), 4,31 (c, J = 6 Hz, 1H), 3,41 (m, 1H), 3,26 (m, 1H).
6.6. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-r2.2.2-trifluro-1-(2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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En un vial para microondas se mezclaron conjuntamente 3-bromo-4-metil-tiofeno (653 mg, 3,69 mmol), acido 2-formil fenilboronico (500 mg, 3,36 mmol) y 7 ml de actonitrilo. Se anadieron 6,7 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N a la solucion anterior, seguido de 5 moles por ciento de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion se anadieron 50 ml de acetato de etilo, la capa organica se separo, se lavo con agua, se seco con sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar el producto en bruto, que se purifico mediante una columna ISCO CombiFlash para dar 530 mg de 2-(4-metil-tiofen-3-il) benzaldehndo, rendimiento: 78 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,013 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 2-(4- metiltiofen^-iO-benzaldehndo (260 mg, 1,29 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (228 pl, 1,54 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento hasta la temperatura ambiente y se agito a la temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 5 ml de HCl 1 N y se agito a la temperatura ambiente durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 340 mg de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(4-metil-tiofen-3-il)- fenil]-etanol, rendimiento 97 %.
Una mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etanol (100 mg, 0,37 mmol), 2-amino-4,6-dicloro- pirimidina (54 mg, 0,33 mmol), carbonato de cesio (481 mg, 1,48 mmol) y 1,4-dioxano (1 ml) se calento a 110 °C durante una noche. La mezcla de reaccion se enfrio hasta la temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo. Despues, la mezcla se filtro a traves de Celite, el filtrado se concentro para dar 100 mg de 4-cloro-6-{2,2,2- trifluoro-1 -[2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-2-ilamina, rendimiento: 76 %.
En un vial para microondas se mezclaron 4-cloro-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-2- ilamina (30 mg, 0,075 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (19 mg, 0,09 mmol), 1 ml de actonitrilo y 0,7 ml de agua. A la mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N, seguido de 5 moles por ciento de diclorobis- (trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una HPLC Prep para dar 15,1 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluro-1-(2-(4-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 7,94 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,50 (m, 5H), 7,25 (m, 2H), 7,03 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 4,31 (t, J = 5,6, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,26 (m, 1H), 1,98 (s, 3H).
6.7. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-f2-amino-6-r2.2.2-trifluro-1-(2-(5-metil-tiofen-3-ih-fenil1-etoxi}-
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En un vial para microondas se mezclaron 4-bromo-2-metil-tiofeno (653 mg, 3,69 mmol), acido 2-formil fenilboronico (500 mg, 3,36 mmol) y 7 ml de actonitrilo. Se anadieron 6,7 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N a la solucion anterior, seguido de 5 moles por ciento de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 50 ml de acetato de etilo, la capa organica se separo, se lavo con agua, se seco con sulfato de sodio, el disolvente organico se evaporo y el residuo se purifico mediante una ISCO para dar 550 mg de 2- (5-metil-tiofen-3-il) benzaldehndo, rendimiento 81 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,028 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 2-(5- metiltiofen^-iO-benzaldehndo (550 mg, 1,29 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (483 pl, 3,27 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento hasta la temperatura ambiente y se agito a la temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 10 ml de HCl 1 N y se agito a la temperatura ambiente durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 650 mg de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(5-metil-tiofen-3-il)- fenil]-etanol, rendimiento: 87 %.
Una mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(5-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etanol (100 mg, 0,37 mmol), 2-amino-4,6-dicloro- pirimidina (54 mg, 0,33 mmol), carbonato de cesio (481 mg, 1,48 mmol) y 1,4-dioxano (2 ml) se calento a 110 °C durante una noche. La mezcla de reaccion se enfrio hasta la temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo. Despues, la mezcla se filtro a traves de Celite, el filtrado se concentro para dar 90 mg de 4-cloro-6-{2,2,2- trifluoro-1 -[2-(5-metil- tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-2-ilamina, rendimiento: 68 %
En un vial para microondas se mezclaron 4-cloro-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(5-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-2- ilamina (30 mg, 0,075 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (19 mg, 0,09 mmol), 1 ml de actonitrilo y 0,7 ml de agua. Se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N a la mezcla, seguido de 5 moles por ciento de dicloro-bis- (trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una CL Prep para dar 10,1 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluro-1-(2-(5-metil-tiofen-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,63 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,34 (m, 4H), 7,26 (m, 1H), 7,12 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,92 (c, J = 6,8, 1H), 6,82 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,64 (s, 1H), 4,21 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,29 (m, 1H), 3,20 (m, 1H), 2,47 (s, 3H).
6.8. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(4-furan-3-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il}- fenill-propionico
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En un vial para microondas se mezclaron 3-bromo-furano (590 mg, 4,02 mmol), acido 4-formil fenilboronico (600 mg, 4,02 mmol) y 7 ml de actonitrilo. Despues se anadieron 8 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N a la mezcla, seguido de 5 moles por ciento de diclorobis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 7 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 50 ml de acetato de etilo, la capa organica se separo, se lavo con agua, se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar el producto en bruto, que se purifico mediante una ISCO para dar 410 mg de 4-furan-3-il-benzaldel_ndo, rendimiento: 60 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,024 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 4-furan- 3-il- benzaldehndo (410 mg, 2,38 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (423 pl, 2,86 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento hasta la temperatura ambiente y se agito a la temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 5 ml de HCl 1 N y se agito a la temperatura ambiente durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 480 mg de 2,2,2-trifluoro-1-(4-furan-3-il-fenil)-etanol, rendimiento: 83 %.
La mezcla de 2,2,2-trifluoro-1-(4-furan-3-il-fenil)-etanol (100 mg, 0,4 mmol), 2-amino-4,6-dicloro-pirimidina (60 mg, 0,36 mmol), carbonato de cesio (468 mg, 1,44 mmol) y 1,4-dioxano (1 ml) se calento a 110 °C durante una noche. La mezcla de reaccion se enfrio hasta la temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo. Despues, la mezcla se filtro a traves de Celite, el filtrado se concentro para dar 110 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-furan-3-il- fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina, rendimiento: 72 %.
En un vial para microondas se mezclaron 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-furan-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina (30 mg, 0,081 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (20 mg, 0,098 mmol), 1 ml de actonitrilo y 0,7 ml de agua. Despues se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N a la mezcla, seguido de 5 moles por ciento de diclorobis- (trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una CL Prep para dar 7,2 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-furan-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 7,96 (m, 3H), 7,61 (m, 5H), 6,81 (s, 1H), 6,77 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 4,27 (c, J = 5,6 Hz, 1H), 3,36 (m, 1H), 3,21 (m, 1H).
6.9. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-{2-amino-6-{1-r2-(5-dimetilaminometil-furan-2-il)-fenil1-2.2.2-trifluoro- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se anadio triacetoxiborhidruro de sodio (844 mg, 4 mmol) a una solucion de 5-bromo-furan-2-carbaldel'ndo (350 mg, 2 mmol) y dimetilamina (2 ml, solucion 2 M en THF) en 10 ml de 1,2-dicloroetano (DCE). Despues se anadieron 0,2 ml de HOAc. La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante una noche, seguido de la adicion de 15 ml de DCE. La fase organica se lavo con agua, se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino con un rotavapor para dar 400 mg de (5-bromo-furan-2-ilmetil)-dimetil-amina, rendimiento: 97 %.
En un vial para microondas se mezclaron (5-bromo-furan-2-ilmetil)-dimetil-amina (385 mg, 1,88 mmol), acido 2-formil fenilboronico (288 mg, 1,93 mmol) y 3,7 ml de actonitrilo. Despues se anadieron 3,7 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N a la mezcla, seguido de 5 moles por ciento de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 20 ml de HCl 1 N. La mezcla se extrajo con acetato de etilo (3x10 ml) y la capa de acetato de etilo se desecho. Despues se anadio una solucion de NaOH 1 N a la fase acuosa para ajustar el pH a 10, despues se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica combinada se lavo con agua y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporo para dar 300 mg de 2-(4-dimetilaminometil- ciclopenta-1,3-dienil)-benzaldel'ndo, rendimiento: 69 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,013 ml; solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 2-(4- dimetilaminometil-ciclopenta-1,3-dienil)-benzaldel'ndo (287 mg, 1,25) y trifluorometiltrimetilsilano (TMSCF3) (222 pl,
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La mezcla de 1-[2-(5-dimetilaminometil-furan-2-il)-fenil]-2,2,2-trifluoroetanol (225 mg, 0,75 mmol), 2-amino-4,6- dicloro-pirimidina (111 mg, 0,67 mmol), carbonato de cesio (978 mg, 3,01 mmol) y 1,4-dioxano (3 ml) se calento a 110 °C durante una noche. La mezcla de reaccion se enfrio hasta la temperatura ambiente; se anadieron 10 ml de acetato de etilo. Despues, la mezcla se filtro a traves de Celite, el filtrado se concentro para dar 110 mg de 4-cloro-6- {1-[2-(5-dimetilaminometil-furan-2-il)-fenil]2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-2-ilamina, rendimiento 87 %.
En un vial para microondas se mezclaron 4-cloro-6-{1-[2-(5-dimetilaminometil-furan-2-il)-fenil]2,2,2-trifluoro-etoxi}- pirimidin-2-ilamina (37 mg, 0,087 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (22 mg, 0,10 mmol), 1 ml de actonitrilo y 0,7 mol de agua. Despues se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N, seguido de 5 moles por ciento de dicloro- bis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una CL Prep para dar 16 mg del acido (S)-2-amino-3-[4-{2-amino-6-{1-[2-(5-dimetilaminometil-furan-2-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)- fenil]-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 7,88 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,71 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,62 (d, J =
7.6 Hz, 1H), 7,42 (m, 2H), 7,40 (d, J = 1,6 Hz,2H), 7,34 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,89 (c, J = 3,6 Hz,2H), 6,66 (s, 1H), 4,54 (s, 2H), 4,20 (c, J = 6 Hz, 1H), 3,3 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 2,84 (s, 6H).
6.10. Sintesis del acido S)-2-amino-3r4-(2-amino-6-{1-r2-(6-ciano-piridin-3-il)-fenil1-2.2.2-trifluoro-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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En un vial para microondas se mezclaron 5-(4,4,5,5-tetrametil-[1.3.2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-carbonitrilo (279 mg, 1,51 mmol), 2-bromo-benzaldel'ndo (230 mg, 1 mmol) y 2 ml de actonitrilo. Despues se anadieron 2 ml de carbonato de sodio acuoso 1 N, seguido de 5 moles por ciento de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 100 °C durante 10 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 50 ml de acetato de etilo, la capa organica se separo, se lavo con agua y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar un producto en bruto que se purifico mediante una ISCO para dar 150 mg de 5-(2-formil-fenil)-piridin-2-carbonitrilo, rendimiento 72 %.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (5,3 pl, solucion 1,0 M en tetrahidrofurano) a una solucion de 5-(2-formil- fenil)-piridin-2-carbonitrilo (110 mg, 0,53 mmol) y trifluorometiltrimetilsilano (120 pl, 0,81 mmol) en 5 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento hasta la temperatura ambiente y se agito a la temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 5 ml de HCl 1 N y se agito a la temperatura ambiente durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 140 mg de 5-[2-(2,2,2-trifluoro-1-hidroxi-etil)-fenil]- piridin-2-carbonitrilo, rendimiento 95 %.
Una mezcla de 5-[2-(2,2,2-trifluoro-1-hidroxi-etil)-fenil]-piridin-2-carbonitrilo (46 mg, 0,165 mmol), acido (S)-3-[4-(2- amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (59 mg, 0,15 mmol), carbonato de cesio (195 mg, 0,6 mmol) y 1,4-dioxano (1 ml) se calento a 110 °C durante una noche. La mezcla de reaccion se enfrio hasta la temperatura ambiente, despues se vertio en 5 ml de agua. Se anadio HCl 1 N para ajustar el pH a 4,5, la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x10 ml). La capa organica combinada se lavo con salmuera y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporo para dar 80 mg del acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{1-[2-(6-cianopiridin-3- il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico en bruto, rendimiento 84 %.
Se disolvieron 80 mg del acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{1-[2-(6-cianopiridin-3-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)- fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico en la solucion de acido trifluoroacetico al 30 % en diclorometano (5 ml). La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 1 hora. El disolvente se evaporo y el residuo se purifico
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6.11. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-f2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4- il}-fenil)-propi6nico
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A 2-imidazol-1-il-benzaldel'ndo (0,344 g, 2 mmol) en THF (8 ml) se anadio trifluorometiltrimetil silano (0,341 g, 2,4 mmol). La mezcla de reaccion se enfrio a 0 - 5 °C (bano de agua helada) y se anadio fluoruro de tetra-n-butil amonio (0,035 ml, 0,035 mmol, 1 M en THF). El bano de hielo se retiro y la mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 6 horas. Se anadio HCl 2 N (5 ml) y la mezcla de reaccion se agito adicionalmente durante 3 horas a la temperatura ambiente. El disolvente se elimino mediante el rotavapor a presion reducida. El residuo en bruto se disolvio en DCM (30 ml), se lavo con agua (20 ml), salmuera (20 ml) y se seco con sulfato de sodio. El disolvente se elimino para dar el 2,2,2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etanol en bruto (0,45 g, 93 %), que se uso directamente en la siguiente etapa.
Se anadieron 2-amino-4,6-dicloro pirimidina (0,107 g, 0,65 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etanol (0,157 g, 0,65 mmol) y NaH (0,03 g, 0,78 mmol) a THF anhidro (10 ml) en una atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40-45 °C durante 6 h y despues se enfrio hasta la temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,2 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar la 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2- ilamina en bruto (0,24 g, > 90 % pura mediante una CLEM), que se uso directamente en la siguiente etapa.
Se disolvieron el intermedio anterior en bruto (0,24 g), L-p-borono-fenilalanina (0,140 g, 0,67 mmol), carbonato de sodio (0,14 g, 1,32 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (15 mg, 0,021 mmol) en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial para microondas. La mezcla de reaccion se cerro hermeticamente y se agito en el reactor de microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro. El residuo se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico mediante una HPLC preparativa mediante el uso de MeOH / H2O / TFA como sistema disolvente para dar el acido (S)-2-amino-3-(4-[2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-imidazol-1-il-fenil)-etoxi]- pirimidin-4-il]-fenil-propionico en forma de una sal TFA. cLeM: M + 1 = 499. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 3,20 - 3,41 (m, 2H), 4,30 (t, 1H), 6,61 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 7,48 (d, 2H), 7,69 (d, 1H), 7,72 - 7,81 (m, 2H), 7,83 (m, 1H), 7,98 (m, 3H), 8,02 (m, 1H), 9,40 (m, 1H).
6.12. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-f6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-pirazol-1-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il}-fenin- propionico
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A 2-pirazol-1-il-benzaldel'ndo (0,344 g, 2 mmol) en THF (8 ml) se anadio trifluorometil trimetil silano (0,341 g, 2,4 mmol). La mezcla se enfrio a 0 - 5 °C (bano de agua helada) y se anadio fluoruro de tetra-n-butil amonio (0,035 ml, 0,035 mmol, 1 M en THF). El bano de hielo se retiro y la mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 6 h. Se anadio HCl 2 N (5 ml) y la mezcla de reaccion se agito adicionalmente a la temperatura ambiente durante 3 h. El disolvente se elimino mediante el rotavapor a presion reducida. El residuo se disolvio en DCM (30 ml), se lavo con agua (20 ml), salmuera (20 ml) y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino a vacfo para dar el 2,2,2- trifluoro-1 -(2- pirazol-1 -il-fenil)-etanol en bruto (0,45 g, 93 %) que se uso directamente en el siguiente experimento.
Se anadieron 4,6-dicloro pirimidina (0,082 g, 0,55 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-(2-pirazol-1-il-fenil)-etanol (0,121 g,
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0,50 mmol), NaH (0,03 g, 0,78 mmol) a THF anhidro (10 ml) en una atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40 - 45 °C durante 6 h y despues se enfrio hasta la temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,2 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar la 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-pirazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidina en bruto (0,20 g, > 90 % pura mediante una CLEM), que se uso directamente en la siguiente etapa.
Se disolvieron el intermedio en bruto (0,20 g), L-p-borono-fenilalanina (0,105 g, 0,50 mmol), carbonato de sodio (0,105 g, 1 mmol), diclorobis(trifenilfosfina) paladio (ll) (15 mg, 0,021 mmol) en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial para microondas. El vial se cerro hermeticamente y la mezcla de reaccion se calento en un reactor de microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro. El residuo se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y despues se purifico mediante una HPLC preparativa mediante el uso de MeOH / H2O / TFA como sistema disolvente para dar el acido (S)-2-amino-3-(4-[6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-pirazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4- il]-fenil-propionico en forma de una sal TFA. ClEM: M + 1 = 484. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 3,20 - 3,40 (m, 2H), 4,30 (t, 1H), 6,63 (s, 1H), 7,10 (m, 1H), 7,50 (m, 3H), 7,60 (m, 3H), 7,84 (m, 2H), 8,16 (m, 3H), 8,68 (s, 1H).
6.13. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{2.2.2-trifluoro-1-r2-(3-trifluorometil-pirazol-1-ol)-fenil1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se combinaron 2,2,2-trifluoro-1-(2-yodo-fenil)-etanol (0,331 g, 1,1 mmol), 3-trifluorometil pirazol (0,136 g, 1,0 mmol), Cul (0,019 g, 0,1 mmol), K2CO3 (0,290 g, 2,1 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,028 g, 0,2 mmol) y tolueno (10 ml) en un tubo a presion de 20 ml. La mezcla se calento a 130 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12 h. La mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco con sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5-10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para dar 140 mg de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-trifluoro metil-pirazol-1 -il)-fenil]-etanol.
Se anadieron 2-amino-4,6-dicloro pirimidina (0,074 g, 0,45 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-trifluoro metil-pirazol-1 -il)- fenil]-etanol (0,140 g, 0,45 mmol) y NaH (0,022 g, 0,59 mmol) a THF anhidro (10 ml) en una atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40 - 45 °C durante 6 h y despues se enfrio hasta la temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,2 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar la 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-trifluorometil-pirazol- 1-ilo)fenil]-etoxi]-pirimidin-2-ilamina en bruto (0,21 g, > 90 % pura mediante una CLEM), que se uso directamente en la siguiente etapa.
Se disolvieron el intermedio en bruto (0,21 g), L-p-borono-fenilalanina (0,1 g, 0,48 mmol), carbonato de sodio (0,1 g, 0,94 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (15 mg, 0,021 mmol) en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial para microondas. El vial se cerro hermeticamente y la mezcla de reaccion se calento en el reactor de microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla de reaccion se filtro y el filtrado se concentro para dar el producto en bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico mediante una HPLC preparativa mediante el uso de MeOH / H2O / TFA como sistema disolvente para dar el acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-(3- trifluorometil-pirazol-1 -il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il]-fenil-propionico en forma de una sal TFA. CLEM: M + 1 = 567. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 3,2 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 4,30 (t, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,85 (m, 1H), 6,98 (d, 1H), 7,45 (d, 2H), 7,59 (m, 1H), 7,68 (m, 2H), 7,88 (m, 1H), 7,95 (d, 2H), 8,20 (1H).
6.14. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{1-r2-(3.5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil1-2.2.2-trifluoro-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se combinaron 2,2,2-trifluoro-1-(2-yodo-fenil)-etanol (0,331 g, 1,1 mmol), 3,5-dimetil pirazol (0,096 g, 1,0 mmol), CuI (0,019 g, 0,1 mmol), K2CO3 (0,290 g, 2,1 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,028 g, 0,2 mmol) y tolueno (10 ml) en un tubo a presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5-10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para dar el 1-[2- (3,5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol (120 mg).
Se anadieron 2-amino-4,6-dicloro pirimidina (0,074 g, 0,45 mmol), 1-[2-(3,5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro- etanol (0,120 g, 0,45 mmol), NaH (0,022 g, 0,59 mmol) a THF anhidro (10 ml) en una atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40-45 °C durante 6 h y despues se enfrio hasta la temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,2 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar la 4-cloro-6-{1-[2-(3,5-dimetil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro- etoxi]-pirimidin-2-ilamina en bruto (0,195 g, > 90 % pura mediante una CLEM) que se uso directamente en la siguiente etapa.
Se disolvieron el intermedio en bruto (0,195 g), L-p-borono-fenilalanina (0,10 g, 0,48 mmol), carbonato de sodio (0,10 g, 0,95 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (15 mg, 0,021 mmol) en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial para microondas. El vial se cerro hermeticamente y mezcla de reaccion se calento en el reactor de microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro para dar el producto en bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico mediante una HPLC preparativa mediante el uso de MeOH / H2O / TFA como sistema disolvente para dar el acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-[1-(2-(3,5-dimetil-pirazol-1-il)- fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico en forma de una sal TFA. CLEM: M + 1 = 527. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 4,32 (t, 1H), 3,39 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,30 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 7,92 (m, 3H), 7,68 (m, 2H), 7,50 (d, 2H), 7,42 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,17 (s, 1H).
6.15. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{2.2.2-trifluoro-1-r2-(3-fenil-pirazol-1-il)-fenil1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se recogieron 2,2,2-trifluoro-1-(2-yodo-fenil)-etanol (0,331 g, 1,1 mmol), 3-fenil pirazol (0,144 g, 1,0 mmol), CuI (0,019 g, 0,1 mmol), K2CO3 (0,290 g, 2,1 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,028 g, 0,2 mmol) y tolueno (10 ml) en un tubo a presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5-10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para proporcionar
2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-fenil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (75 mg).
Se anadieron 2-amino-4,6-dicloro pirimidina (0,041 g, 0,25 mmol), 2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-fenil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (0,070 g, 0,22 mmol) y NaH (0,012 g, 0,31 mmol) a THF anhidro (7 ml) en una atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40 - 45 °C durante 6 h y despues se enfrio hasta la temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,04 ml).
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La mezcla de reaccion se concentro para dar la 4-cloro-6-{2,2,2-trfluoro-1-[2-(3-fenil-pirazoM-il)-fenil]-etoxi]-pirimidin- 2-ilamina en bruto (0,110 g, > 90 % pura mediante una CLEM), que se uso directamente en la siguiente etapa.
Se disolvieron el intermedio en bruto (0,110 g), L-p-borono-fenilalanina (0,050 g, 0,24 mmol), carbonato de sodio (0,050 g, 0,48 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (8 mg, 0,010 mmol) en una mezcla de MeCN (2,0 ml) y H2O (2,0 ml) en un vial para microondas. El vial se cerro hermeticamente y la mezcla de reaccion se calento en el reactor de microondas a 150 °C durante 6 min. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro para dar un producto en bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico mediante una HPLC preparativa mediante el uso de MeOH / H2O / TFA como sistema disolvente para dar el acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-fenil-pirazol- 1-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico en forma de una sal TFA. CLEM: M + 1 = 575. rMn 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 3,20 (m, 1H), 3,38 (m, 1H), 4,30 (t, 1H), 6,80 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,30 - 7,48 (m, 7H), 7,62 (m, 3H), 7,90 (m, 4H), 8,10 (s, 1H).
6.16. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-f2.2.2-trifluoro-1-r5-metoxi-2-(4-metil-pirazol-1-il)-fenil1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se combinaron 1-(2-bromo-5-metoxi-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (0,570 g, 2,0 mmol), 4-metil pirazol (0,164 g, 2,0 mmol), Cul (0,057 g, 0,3 mmol), K2CO3 (0,580 g, 4,2 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,071 g, 0,5 mmol) y tolueno (10 ml) en un tubo a presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5 -10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para proporcionar 2,2,2-trifluoro-1-[5-metoxi-2-(4-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (90 mg).
Se combinaron 2,2,2-trifluoro-1-[5-metoxi-2-(4-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (0,090 g, 0,31 mmol), acido (S)-3-[4-(2- amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (0,122 g, 0,31 mmol), 1,4-dioxano (2 ml), Cs2CO3 (0,503 g, 1,55 mmol) en un vial para microondas y se calentaron a 180 °C durante 45 min. La mezcla se filtro y se concentro. Al residuo se anadio metanol al 5 % en DCM (50 ml). La mezcla se filtro. El filtrado se concentro para dar un producto en bruto, que se recogio en TFA al 20 % en DCM (30 ml) y se agito durante 30 minutos a la temperatura ambiente. La CLEM indico la finalizacion de la reaccion con el producto deseado. La mezcla de reaccion se concentro para dar el producto en bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico mediante una HPLC preparativa mediante el uso de MeOH / H2O / TFA como sistema disolvente para dar el acido (S)-2-amino-3- [4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[5-metoxi-2-(4-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etoxi]-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico.
CLEM: M + 1 = 543. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 2,20 (s, 3H), 3,22 (m, 1H), 3,40 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 4,35 (t, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,98 (m, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,48 (d, 2H), 7,66 (d, 2H), 7,96 (d, 2H).
6.17. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-f(R)-2.2.2-trifluoro-1-r2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-etoxi)- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se combinaron R-1-(2-bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (1,53 g, 6 mmol), 3-metil pirazol (0,492 g, 6 mmol), Cul
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(0,456 g, 2,4 mmol), K2CO3 (2,07 g, 15 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,170 g, 1,2 mmol) y tolueno (10 ml) en un tubo a presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperature del bano de aceite) durante 12 h. La mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5 -10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para dar R-2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (1,8 g).
Se anadieron 2-amino-4,6-dicloro pirimidina (1,2 g, 7,4 mmol), R-2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (1,8 g, 7,03 mmol) y NaH (0,380 g, 10 mmol) a THF anhidro (40 ml) en una atmosfera de nitrogeno. La reaccion se agito a 40 - 45 °C durante 6 h y despues se enfrio hasta la temperatura ambiente y se inactivo con agua (0,1 ml). La mezcla de reaccion se concentro para dar proporcionar 4-cloro-6-{R-2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]- etoxi]-pirimidin-2-ilamina (3,0 g, > 90 % pura mediante una CLEM), que se uso directamente en la siguiente etapa.
Se disolvieron el intermedio en bruto (0,750 g), L-p-borono-fenilalanina (0,420 g, 2,0 mmol), carbonato de sodio (0,430 g, 4,0 mmol) y diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (30 mg, 0,043 mmol) en una mezcla de MeCN (7,0 ml) y H2O (7,0 ml) en un vial para microondas. El vial se cerro hermeticamente y la mezcla de reaccion se calento en el reactor de microondas a 150 °C durante 7 min. La mezcla se filtro y el filtrado se concentro para dar un producto en bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico mediante una HPLC preparativa mediante el uso de MeOH / H2O / TFA como sistema disolvente para dar el acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{R-2,2,2-trifluoro-1-[2-(3-metil- pirazol-1-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico en forma de una sal TFA. ClEm: M + 1 = 514. RmN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 2,40 (s, 3H), 3,30 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 4,38 (t, 1H), 6,21 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,18 (m, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,61 (m, 4H), 7,82 (m, 2H), 7,97 (d, 2H).
6.18. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-f1-r4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-2.2.2-trifluoro- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se combinaron 1-(4-cloro-2-yodo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (0,840 g, 2,5 mmol), 3-metil pirazol (0,230 g, 2,8 mmol), Cul (0,190 g, 1,0 mmol), K2CO3 (0,863 g, 6,25 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,071 g, 0,5 mmol) y tolueno (10 ml) en un tubo a presion de 20 ml y la mezcla se calento a 130 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12 h. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (2 x 20 ml), salmuera y se seco sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5 -10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para proporcionar 1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro- etanol (240 mg).
Se combinaron 1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol (0,120 g, 0,41 mmol), acido (S)-3-[4-(2- amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (0,176 g, 0,45 mmol), 1,4-dioxano (4 ml) y Cs2CO3 (0,533 g, 1,64 mmol) en un tubo precintado de 20 ml y la mezcla se calento a 100 °C durante 12 h. La mezcla se concentro. Al residuo se anadio metanol al 10% en DCM (50 ml) y la mezcla se filtro. El filtrado se concentro para dar un producto en bruto, que se recogio en THF / HCl 3 N (30 ml /15 ml) y la mezcla resultante se agito a 40 - 45 °C durante 12 h. La CLEM indico la finalizacion de la reaccion con el producto deseado. La mezcla se concentro para dar un producto en bruto, que se disolvio en MeOH y H2O (1:1) y se purifico mediante una HPLC preparativa mediante el uso de MeOH / H2O / TFA como sistema disolvente para dar el acido (S)-2-amino-3-[4-(2- amino-6-{1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico en forma de una sal TFA. CLEM: M + 1 = 547. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 2,30 (s, 3H), 3,10 - 3,30 (m, 2H), 4,20 (t, 1H), 6,32 (d, 1H), 6,74 (s, 1H), 7,0 (c, 1H), 7,38 (d, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,72 (m, 1H), 7,90 (m, 3H).
6.19. Sintesis del etil ester del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-fR-1-r4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-
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Etapa 1: sintesis de 1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-etanona. A un matraz RB de 500 ml de 2 cuellos que contiene metanol anhidro (300 ml) se anadio cloruro de tionilo (29.2 ml. 400 mmol) gota a gota a 0 - 5 °C (bano de agua helada) durante 10 min. El bano de agua helada se retiro y se anadio acido 2-bromo-4-cloro-benzoico (25 g. 106 mmol). La mezcla se calento a reflujo suave durante 12 h. El progreso de la reaccion se controlo mediante una TLC y una CLEM. Despues de completarse la reaccion. la mezcla de reaccion se concentro. El producto en bruto se disolvio en diclorometano (DCM. 250 ml). se lavo con agua (50 ml). NaHO3 acuoso saturado (50 ml). salmuera (50 ml). se seco sobre sulfato de sodio y se concentro para dar el metil ester del acido 2-bromo-4-cloro-benzoico (26 g. 99 %). que se uso directamente en la siguiente etapa.
El metil ester del acido 2-bromo-4-cloro-benzoico (12.4 g. 50 mmol) en tolueno (200 ml) se enfrio hasta -70 °C y se anadio trifluorometil trimetil silano (13 ml. 70 mmol). Se anadio gota a gota fluoruro de tetrabutilamonio (1 M. 2.5 ml) y la mezcla se dejo calentar hasta la temperatura ambiente durante 4 h. tras lo cual se agito durante 10 h a la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro para dar el bruto [1-(2-bromo-4-cloro-feniI)-2.2.2- trifluoro-1-metoxi-etoxi]-trimetil-silano. El intermedio en bruto se disolvio en metanol (100 ml) y se anadio HCl 6 N (100 ml). La mezcla se mantuvo a 45 - 50 °C durante 12 h. Se elimino el metanol y el bruto se extrajo con diclorometano (200 ml). La capa combinada de DCM se lavo con agua (50 ml). NaHO3 (50 ml). salmuera (50 ml) y se seco sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto. que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO. mediante el uso de un 1 - 2 % de acetato de etilo en hexano como disolvente. para proporcionar 1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-etanona (10 g. 70 %). RMN 1H (300 MHz. CDCh): 8 (ppm) 7.50 (d. 1H). 7.65 (d. 1H). 7.80 (s. 1H).
Etapa 2: sintesis de R-1-(2-bromo-4-cloro-fenil-2.2.2-trifluoro-etanol. A catecol borano (1 M en THF 280 ml. 280 mmol) en un matraz RB de 2 l de 3 cuellos se anadio S-2-metil-CBS oxazaborolidina (7.76 g. 28 mmol) en una atmosfera de nitrogeno. y la mezcla resultante se agito a la temperatura ambiente durante 20 min. La mezcla de reaccion se enfrio hasta -78 °C (bano de hielo seco / acetona) y se anadio gota a gota 1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-
2.2.2-trifluoro-etanona (40 g. 139 mmol) en THF (400 ml) durante 2 h. La mezcla de reaccion se dejo calentar hasta - 36 °C y se agito a esa temperatura durante 24 h y se agito adicionalmente a -32 °C durante otras 24 h. Se anadio NaOH 3 N (250 ml) y el bano de refrigeracion fue sustituido por un bano de agua helada. Despues se anadio gota a gota peroxido de hidrogeno al 30 % en agua (250 ml) durante 30 minutos. El bano de agua helada se retiro y la mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 4 h. La capa organica se separo. se concentro y se redisolvio en eter (200 ml). La capa acuosa se extrajo con eter (2 x 200 ml). Las capas organicas combinadas se lavaron con NaOH 1 N acuoso (4 x 100 ml). salmuera y se secaron sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio el producto en bruto que se purifico mediante una cromatograffa en columna mediante el uso de un 2 a 5 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para dar el alcohol deseado. 36.2 g (90 %. e. e. > 95 %). El alcohol (36.2 g) se cristalizo en hexano (80 ml) para obtener el R-1-(2-bromo-4-cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-etanol 28.2 g (70%; 99 - 100 % de e. e.). RMN 1H (400 MHz. CDCla) 8 (ppm) 5.48 (m. 1H). 7.40 (d. 1H). 7.61 (d. 2H).
Etapa 3: sintesis de R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1-2.2.2-trifluoroetanol. Se combinaron R-1-(2-bromo-4- cloro-fenil)-2.2.2-trifluoro-etanol (15.65 g. 54.06 mmol). 3-metilpirazol (5.33 g. 65 mmol). Cul (2.06 g. 10.8 mmol). K2CO3 (15.7 g. 113.5 mmol). (1R.2R)-N.N'-dimetil-ciclohexan-1.2-diamina (1.54 g. 10.8 mmol) y tolueno (80 ml) en un tubo a presion de 250 ml y se calentaron a 130 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12 h. La mezcla de reaccion se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (4 x 100 ml). salmuera y se seco sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto. que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5 - 10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para conseguir el R-1-[4-cloro-2-(3- metil-pirazol-1 -il)-fenil]-2.2.2-trifluoro-etanol (13.5 g; 86 %). RMN 1H (400 MHz. CDCI3): 8 (ppm) 2.30 (s. 3H). 4.90 (m. 1H). 6.20 (s. 1H). 6.84 (d. 1H). 7.20 (s. 1H). 7.30 (d. 1H). 7.50 (d. 1H).
Etapa 4: sintesis del etil ester del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-(R-1-[4-cloro-2-(3-metiI-pirazoI-1-il)-fenil11-2.2.2- trifIuoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-feniI}-propionico. Se combinaron R-1-[4-cloro-2-(3-metiI-pirazoI-1-il)-fenil]-2.2.2-trifluoro- etanol (17.78 g. 61.17 mmol). acido (S)-3-[4-(2-amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino- propionico (20.03 g. 51 mmol). 1.4-dioxano (250 ml) y Cs2CO3 (79.5 g. 244 mmol) en un matraz RB de 500 ml de 3 cuellos y se calento a 100 °C (temperatura del bano de aceite) durante 12 - 24 h. El progreso de la reaccion se
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controlo mediante una CLEM. Despues de completarse la reaccion, la mezcla se enfrio hasta 60 °C y se anadieron agua (250 ml) y THF (400 ml). La capa organica se separo y se lavo con salmuera (150 ml). El disolvente se elimino para dar el producto en bruto protegido por BOC, que se recogio en THF (400 ml). HCl 3 N (200 ml). La mezcla se calento a 35 - 40 °C durante 12 h. El THF se elimino a vado. La capa acuosa restante se extrajo con acetato de isopropilo (2 x 100 ml) y se concentro por separado para recuperar el alcohol sin reaccionar (3,5 g). La pequena cantidad del resto del disolvente se elimino de la fraccion acuosa al vado.
A un vaso de precipitados de 1 l equipado con un controlador de temperatura y un pehaddmetro se anadio H3PO4 (40 ml, al 85 % en agua) y agua (300 ml), despues NaOH al 50 % en agua para ajustar el pH a 6,15. La temperatura se elevo hasta 58 °C y se anadio gota a gota la anterior solucion acuosa acida en el tampon con la adicion simultanea de una solucion al 50 % de NaOH en agua de forma que el pH se mantuvo entre 6,1 y 6,3. Despues de que se completara la adicion, el solido precipitado se filtro y se lavo con agua caliente (a 50 - 60 °C) (2 x 200 ml) y se seco para dar el acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metN-pirazoM-il)-fenil]-2,2,2-tri1:tuoro-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil}-propionico en bruto (26,8 g; 95 %). El analisis mediante una CLEM y una HPLC indico que la pureza del compuesto era de aproximadamente el 96 - 97 %.
A etanol anhidro (400 ml) se anadio SOCI2 (22 ml, 306 mmol) gota a gota a 0 - 5 °C. Se anadio el acido en bruto (26,8 g) de la reaccion anterior. Se retiro el bano de agua helada y la mezcla de reaccion se calento a 40 - 45 °C durante 6 -12 h. Una vez completada la reaccion el etanol se elimino a vado. Al residuo se anadio agua helada (300 ml) y se extrajo con acetato de isopropilo (2 x 100 ml). La solucion acuosa se neutralizo con Na2CO3 saturado para ajustar el pH a 6,5. La solucion se extrajo con acetato de etilo (2 x 300 ml). La capa combinada de acetato de etilo se lavo con salmuera y se concentro para dar 24 g del ester en bruto (pureza mediante HPLC del 96 - 97 %). El ester en bruto se purifico despues mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5 % de etanol en DCM como disolvente para dar el etil ester del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metN-pirazoM- il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico (20,5 g; 70 %; pureza mediante HPLC del 98 %). CLEM M + 1 = 575. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 1,10 (t, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,85 (m, 2H), 3,65 (m, 1H), 4,00 (q, 2H), 6,35 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,90 (m, 1H), 7,18 (d, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,70 (d, 1H), 7,85 (m, 3H).
6.20. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-1-(4-cloro-2-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-2.2.2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
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Se disolvio el etil ester del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico (22,2 g, 38,6 mmol) en THF (220 ml) y agua (50 ml). Se anadio hidroxido de litio monohidratado (5,56 g, 132 mmol). La mezcla de reaccion se agito a la temperatura ambiente durante 12 h. Se elimino el THF y se anadio agua (100 ml) al residuo para conseguir una solucion clara.
A un vaso de precipitados de 1 l equipado con un controlador de temperatura y un pehaddmetro se anadio H3PO4 (40 ml, al 85 % en agua), agua (300 ml) y NaOH al 50 % en agua para ajustar el pH a 6,15. La temperatura se elevo hasta 58 °C y se anadio gota a gota la sal de Li del compuesto en el tampon con la adicion simultanea de HCl 3 N, de forma que el pH se mantuvo a entre 6,1 y 6,2. Despues de que se completara la adicion, el solido precipitado se filtro y se lavo con agua caliente (a 50 - 60 °C) (2 x 200 ml) y se seco para dar el acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6- {R-1-[4-doro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico (19,39 g; 92 %). El analisis mediante una CLEM y una HPLC indico que la pureza del compuesto era de aproximadamente el 98 - 99 %. CLEM M + 1 = 547. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 2,40 (s, 3H), 3,22-3,42 (m, 2H), 4,38 (t, 1H), 6,42 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,60 (m, 4H), 7,81 (d, 1H), 7,92 (m, 3H).
6.21. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-tiazol-2-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il}- fenih-propionico
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A un reactor de microondas de 40 ml se anadieron 1,04 g de acido 2-formil fenilboronico (6,9 mmol), 1,14 g de 2- bromo tiazol (6,9 mmol), 240 mg de dicloruro de bistrifenil-fosfina paladio (Pd(PPh3)2Cl2, 0,34 mmol). Despues se anadieron a la mezcla 13,8 ml de Na2CO31 M (13,8 mmol) y 10 ml de CH3CN. El reactor se cerro hermeticamente y se llevo a cabo la reaccion bajo microondas a 160 °C durante 5 minutos. La CLEM muestra la finalizacion de la reaccion con el producto deseado. Despues la mezcla de reaccion se vertio en un embudo de separacion. Despues se anadieron 200 ml de cloruro de metileno y 100 ml de agua para la extraccion. La capa de cloruro de metileno se seco sobre MgSO4. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una cromatograffa en columna sobre gel de sflice eluyendo con una mezcla de hexanos / acetato de etilo (desde 5/1 hasta 2/1) para dar 2-tiazol-2-il-benzaldelddo puro (0,5 g, rendimiento: 38 %).
A un matraz de fondo redondo de 50 ml se anadieron 184 mg de 2-tiazol-2-il-benzaldelddo (0,97 mmol) y 10 ml de tetrahidrofurano anhidro (THF). Despues se anadieron a la solucion 145,4 mg de trifluorometiltrimetilsilano (1,02 mmol) y 20 pl de fluoruro de terc-butilamonio 1 M en THF (0,02 mmol). La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante una noche, tras lo cual se anadieron 10 ml de HCl 1 N y la mezcla de reaccion se agito a la t. a. durante 15 minutos. El THF se elimino a vado, y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno (3 x 50 ml). La capa combinada de CH2Cl2 se seco sobre MgSO4. La eliminacion del disolvente dio 262 mg del producto en bruto, que tiene una pureza de aproximadamente el 95 % y se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Se mezclaron entre sf 2,2,2-trifluoro-1-(2-tiazol-2-il-fenil)-etanol (260 mg, 1 mmol), acido (S)-3-[4-(2-amino-6-cloro- pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (390 mg, 1 mmol), carbonato de cesio (1,3 g, 4 mmol) y 10 ml de 1,4-dioxano en un tubo precintado de 50 ml. La mezcla de reaccion se calento a 100 °C durante 3 dfas. Se anadio agua (20 ml) y despues se anadio lentamente HCl 1 N acuoso para ajustar el pH a 4, despues se elimino el 1,4-dioxano a vado y la mezcla resultante se extrajo con cloruro de metileno (3 x 50 ml). La capa combinada de cloruro de metileno se seco sobre MgSO4. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se llevo a la siguiente etapa de reaccion sin purificacion adicional.
El anterior producto en bruto se disolvio en 5 ml de cloruro de metileno y se anadieron 0,4 ml de acido trifluoroacetico. La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante una noche. Despues se elimino el acido trifluoroacetico a vado para dar un producto en bruto, que se purifico mediante una HPLC prep para dar 63 mg del producto en bruto. HPLC; YMC Pack ODS-A de 3 x 50 mm, 7 |im; disolvente A = agua con TFA al 0,1 %; disolvente B = metanol con TFA al 0,1 %. Disolvente B del 10 al 90% durante 4 minutos; caudal = 2 ml/min; TR = 3 min. Pureza mediante HPLC = 100 %. CLEM: M + 1 = 515,9. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8 8,06 ppm (2H, m); 7,92 (2H, d, J = 8 Hz); 7,84 (1H, m); 7,81 (1H, m); 7,77 (1H, d, J = 4 Hz); 7,57 (2H, m); 7,45 (2H, d, J = 8 Hz); 6,84 (1H, s); 4,30 (2H, dd, J = 8 Hz); 3,38 (2H, dd, J = 12, 2 Hz); 3,23 (2H, dd, J = 12, 8 Hz).
6.22. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-l4-(2-amino-6-l2.2.2-trifluoro-1-r2-(piridin-3-iloxh-fenM1-etoxi}-pirimidin- 4-il)-fenil1-propi6nico: del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-l2.2.2-trifluoro-1-r4-(piridin-3-iloxi)-feniH-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico: del acido (S)-2-amino-3-r4-(6-l2.2.2-trifluoro-1-r4-(piridin-3-iloxi)-fenM1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico: del acido (S)-2-amino-3-(4-l2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(4-tiofen-2-il-fenil)- etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil)-propi6nico: del acido (S)-2-amino-3-(4-l6-r2.2.2-trifluoro-1-(4-imidazol-1-il-fenil)- etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil)-propi6nico: y del acido (S)-2-amino-3-(4-l2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(4-
n.2.41triazol-1-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil)-propi6nico
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Los compuestos del tttulo se prepararon mediante el uso de la metodolog^a general mostrada continuacion:
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En esta metodologfa se anadio fluoruro de tetra-n-butil amonio (0,05 eq) a una mezcla de benzaldehndo sustituido (1 eq) y trifluorometil trimetilsilano (1,2 eq) en THF a 0 °C. Despues la temperatura se dejo calentar hasta la temperatura ambiente. La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 5 h, despues se diluyo con acetato de etilo, se lavo con agua, salmuera y se seco con MgSO4. El disolvente se elimino a presion reducida para dar el
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trifluoro-alcohol en forma de un producto en bruto, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
El alcohol elaborado anteriormente (1 eq) se disolvio en 1,4-dioxano anhidro. Se anadio de una vez hidruro de sodio (al 60 % en aceite mineral, 1,2 eq) y la mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 30 minutos. Se anadio 2- amino-4,6-dicloro-pirimidina (1 eq) y la mezcla resultante se agito a 80 °C durante 2 h. El disolvente se elimino y el residuo se suspendio en acetato de etilo, que se lavo con agua, se seco sobre MgSO4 y despues se concentro para dar el producto deseado de monocloruro, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Se anadio el anterior producto en bruto (1 eq) a un vial de microondas de 5 ml que contiene 4-borono-L-fenilalanina (1 eq), Na2CO3 (2 eq), acetonitrilo (2 ml), agua (2 ml) y diclorobis(trifenilfosfina) paladio (0,05 eq). El vial se tapo y la mezcla se calento a 150 °C durante 5 min bajo radiacion de microondas. La mezcla se enfrio, se filtro a traves de un filtro de jeringa y despues se separo mediante una HPLC preparativa en fase inversa mediante el uso de una columna YMC-Pack ODS de 100 x 30 mm de DI (sistema disolvente de MeOH / H2O / TFA). Las fracciones puras se combinaron y se concentraron a vacfo. Despues el producto se suspendio en 5 ml de agua, se congelo y se liofilizo para dar el producto en forma de la sal del acido trifluoro acetico (TFA).
Acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(piridin-3-iloxi)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8: 3,05 - 3,40 (m, 2H), 3,81 (m, 1H), 6,64 (s, 1H), 7,01 (d, 1H), 7,15 - 7,54 (m, 7H), 7,74 (d, 1H), 7,94 (d, 2H), 8,35 (m, 2H).
Acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[4-(piridin-3-iloxi)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8: 3,20 - 3,41 (m, 2H), 4,30 (m, 1H), 6,81 (m, 2H), 7,17 (m, 2H), 7,46 - 7,69 (m, 6H), 7,93 (d, 2H), 8,41 (s, 2H).
Acido (S)-2-amino-3-[4-(6-{2,2,2-trifluoro-1-[4-(piridin-3-iloxi)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8: 3,15 - 3,35 (m, 2H), 4,25 (t, 1H), 6,90 (c, 1H), 7,25 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,71 (m, 3H), 7,99 (m, 3H), 8,14 - 8,18 (m, 1H), 8,55 (d, 1H), 8,63 (d, 1H), 8,84 (d, 1H).
Acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-(4-tiofen-2-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil}-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8: 3,03 - 3,31 (m, 2H), 4,19 (m, 1H), 6,68 (m, 2H), 7,00 (m, 1H), 7,31 - 7,36 (m, 4H), 7,52 (m, 2H), 7,62 (d, 2H), 7,85 (d, 2H).
Acido (S)-2-amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-imidazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8: 3,03-3,31 (m, 2H), 4,19 (m, 1H), 6,88 (m, 1H), 7,32-8,63 (m, 11H), 8,64 (s, 1H), 9,25 (s, 1H).
Acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-[1,2,4]triazol-1-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8: 3,07 - 3,36 (m, 2H), 4,16 (m, 1H), 6,65 (s, 1H), 6,75 (m, 1H), 7,31 (d, 2H), 7,69 (d, 2H), 7,85 (m, 4H), 8,08 (s, 1H), 9,03 (s, 1H).
6.23. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-l2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-tiofen-3-il-fenil)etoxil- pirimidin-4-il}-fenil)-propi6nico: del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-l2.2.2-trifluoro-1-r4-fluoro-2-(4-
metilltiofen-2-ih-fenil1-etoxi}-pirimidin-4-ih-fenil1-propi6nico: y del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-l1-r2- (3.5-dimetil-isoxazol-4-ih-4-fluoro-fenil1-2.2.2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-ih-fenil1-propi6nico
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En esta metodologfa se anadio el aldehndo de bencilo bromo sustituido (1 eq) a un vial de microondas de 20 ml, que contema el acido boronico heterodclico aromatico (1 eq), Na2CO3 (2 eq), acetonitrilo (8 ml) / agua (8 ml) y dicloro- bis(trifenilfosfina) paladio (0,05 eq). El vial se tapo y se agito a 150 °C durante 6 min bajo radiacion de microondas. La mezcla de reaccion se enfrio, se filtro a traves de un filtro de jeringa y despues se diluyo con acetato de etilo. Se lavo con agua. Despues se anadio gel de sflice para formar un tapon, y se purifico mediante una cromatograffa eluyendo con hexano y acetato de etilo.
Los aldehfdos elaborados anteriormente experimentaron despues las mismas reacciones descritas anteriormente en el Ejemplo 22.
Acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-tiofen-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8: 3,08 - 3,30 (m, 2H), 4,19 (m, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,84 (m, 1H), 7,02 - 7013 (m, 2H), 7,22 (dd, 1H), 7,32 (d, 2H), 7,47 (m, 1H), 7,77 (m, 1H), 7,84 (d, 2H).
Acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(4-metil-tiofen-2-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8: 2,26 (s, 3H), 3,09 - 3,30 (m, 2H), 4,20 (m, 1H), 6,64 (s, 1H), 6,95 (m, 2H), 7,13 (m, 3H), 7,34 (d, 2H), 7,69(m, 1H), 7,83 (d, 2H).
Acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{1-[2-(3,5-dimetil-isoxazol-4-il)-4-fluoro-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)- fenil]-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD) 8: 1,89 - 2,19 (m, 6H), 2,97 - 3,30 (m, 2H), 3,83 (m, 1H), 6,55 (d, 1H), 6,74-6,87 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 7,7,24-7,33 (m, 3H), 7,88 (m, 3H).
6.24. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-l2.2.2-trifluoro-1-r5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenM1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se agito la mezcla del metil ester del acido 2-bromo-5-fluoro-benzoico (1 g, 4,292 mmol), NaBH4 (0,423 g, 11,159 mmol) y LiCI (0,474 g, 11,159 mmol) en THF / EtOH (20 ml / 10 ml) a la temperatura ambiente durante una noche. Se anadio HCl acuoso (10 ml, 2 N) y se agito durante aproximadamente 10 min. Despues el disolvente organico se elimino a bajo vado. El residuo se diluyo con agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se lavo con NaHO3 acuoso (al 10 %), agua y salmuera y despues se seco (MgSO4) y se concentro para proporcionar 852 mg (96,8 % de rendimiento en bruto) del producto en bruto, el (2-bromo-5-fluoro-fenil) metanol, en forma de un solido de color blanco, que se uso sin purificacion adicional.
A la solucion de (2-bromo-5-fluoro-fenil) metanol (0,852 g, 4,156 mmol) en DCM (15 ml) se anadio MnO2 (4,254 g, 85 %, 41,56 mmol). La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante dos dfas y despues se filtro y se lavo con DCM. El filtrado se concentro para proporcionar 777 mg de 2-bromo-5-fluoro-benzaIdel'ndo (92 % de rendimiento). El recien elaborado aldelddo (0,777 g, 3,828 mmol) se disolvio despues en THF anhidro (10 ml) y se enfrio hasta 0 °C. Se anadio trifluorometil trimetilsilano (1,13 ml, 7,656 mmol) y seguido por fluoruro de tetrabutil amonio (0,020 g, 0,076 mmol). Despues la temperatura se dejo calentar hasta la temperatura ambiente. La mezcla se agito durante 5 h a la temperatura ambiente, despues se diluyo con acetato de etilo, se lavo con agua, salmuera y se seco con MgSO4. El disolvente se elimino a presion reducida para dar 2-bromo-5-fluoro-fenil)2,2,2-trifluoro-etanol, 1,1 g (90 % de pureza) en forma de un producto en bruto, que se uso para la siguiente etapa sin purificacion adicional.
Se combinaron 2-bromo-5-fluoro-fenil)2,2,2-trifluoro-etanol (0,990 g, 3,263 mmol, 90 %), 3-metil pirazol (0,476 g, 4,895 mmol), Cul (0,367 g, 1,632 mmol), K2CO3 (1,334 g, 8,158 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetiI-cicIohexan-1,2-diamina (0,110 g, 0,653 mmol) y tolueno (10 ml) en un vial de microondas de 20 ml, que despues se precinto y se calento a 180 °C durante 40 min. La mezcla se filtro y se lavo con acetato de etilo. El filtrado se lavo con agua 3 veces y despues se anadio gel de sflice para formar un tapon. El compuesto se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5 - 10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para conseguir 75 mg del 1-(5-fluoro-2-(3-metiI-pirazoI-1-il)-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 8: 2,29 (s, 3H), 4,90 (m, 1H), 6,21 (d, 1H), 7,07-7,11 (m, 1H), 7,19-7,22 (m, 1H), 7,29 - 7,32 (m, 1H), 7,51 (d, 1H).
Se disolvio el alcohol elaborado anteriormente (0,075 g, 0,273 mmol) en 1,4-dioxano anhidro (3 ml). Se anadio de una vez hidruro de sodio (0,013 g, 0,328 mmol, al 60 % en aceite mineral) y la mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 30 minutos. Se anadio 2-amino-4,6-dicloro-pirimidina (0,045 g, 0,273 mmol). La mezcla se agito a 80 °C durante aproximadamente 2 horas. El disolvente se elimino y el residuo se suspendio en acetato de etilo, que se lavo con agua, se seco sobre MgSO4 y despues se concentro para dar 100 mg del producto deseado de monocloruro (0,249 mmol), que se anadio a un vial de microondas de 5 ml que contema 4-borono-L-fenilaIanina (0,052 g, 0,249 mmol), Na2CO3 (0,053 g, 0,498 mmol), acetonitrilo (2 ml) / agua (2 ml) y diclorobis(trifenilfosfina)- paIadio (5 mg, 0,007 mmol). El vial se tapo y se agito a 150 °C durante 5 min bajo radiacion de microondas. La mezcla de reaccion se enfrio, se filtro a traves de un filtro de jeringa y despues se separo mediante una HPLC preparativa en fase inversa mediante el uso de una columna YMC-Pack ODS de 100 x 30 mm de DI (sistema disolvente de MeOH / H2O / TFA). Las fracciones puras se concentraron a vado. Despues el producto se suspendio en 5 ml de agua, se congelo y se liofilizo para dar el acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{(R)-1-[5-fluoro-2-(3-metiI- pirazoI-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico, 37 mg en forma de una sal de trifluoruro. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 2,29 (s, 3H), 3,08- 3,30 (m, 2H), 4,19 (c, 1H), 6,32 (d, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,85 (m, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,33 (d, 2H), 7,42 (m, 2H), 7,75 (d, 1H), 7,87 (d, 2H).
6.25. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6l2.2.2-trifluoro-1-r5-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil1- etoxi}-pirimidin-4-il)-feniH-propi6nico
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Los compuestos del tttulo se prepararon a partir de R-1-[5-cloro-2-(3-metiI-pirazoI-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol, que se preparo mediante el uso de la misma metodologfa a la descrita anteriormente para el R-1-[4-cloro-2-(3-metiI- pirazoI-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol. En particular, se disolvio R-1-[5-cloro-2-(3-metiI-pirazoI-1-il)-fenil]-2,2,2- trifluoro-etanol (0,959 g, 3,318 mmol) en 1,4-dioxano anhidro (8 ml). Se anadio de una vez hidruro de sodio (0,159 g, 3,982 mmol, al 60% en aceite mineral) y la mezcla se agito a la temperatura ambiente durante 30 minutos. Se anadio 2-amino-4,6-dicloro-pirimidina (0,544 g, 3,318 mmol). La mezcla se agito a 80 °C durante aproximadamente 2 horas. El disolvente se elimino y el residuo se suspendio en acetato de etilo, que se lavo con agua, se seco sobre
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MgSO4 y despues se concentro para dar el producto, 1,38 g del monocloruro deseado, que se uso directamente sin purificacion adicional.
El monocloruro (0,460 g, 1,104 mmol) elaborado anteriormente se anadio a un vial de microondas de 20 ml, que contema 4-borono-L-fenilalanina (0,277 g, 1,325 mmol), Na2CO3 (0,234 g, 2,208 mmol), acetonitrilo (8 ml) / agua (8 ml) y diclorobis(trifenilfosfina) paladio (0,039 g, 0,055 mmol). El vial se tapo y la mezcla se agito a 150 °C durante 10 minutos bajo radiacion de microondas. La mezcla se enfrio, se filtro a traves de un filtro de jeringa y despues se separo mediante una HPLC preparativa en fase inversa mediante el uso de una columna YMC-Pack ODS de 100 x 30 mm de DI (sistema disolvente de MeOH / H2O / TFA). Las fracciones puras se concentraron a vado. Despues el producto se suspendio en 5 ml de agua, se congelo y se liofilizo para dar 580 mg del acido (S)-2-amino-3-[4-(2- amino-6-{R-1-[5-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil}-propionico. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 2,40 (s, 3H), 3,29 - 3,46 (m, 2H), 4,38 (c, 1H), 6,45 (d, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,24 (m, 1H), 7,53 - 7,70 (m, 4H), 7,82 (s, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,97 (d, 2H).
6.26. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{2.2.2-trifluoro-1-r4-(2-oxo-pirrolidin-1-il)-fenil1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se enfrio 4-(2-oxo-pirrolidin-1-il)-benzaldel'ndo (500 mg, 2,64 mmol) en THF (20 ml) a 0 °C y se anadio trifluorometil trimetil silano (375 mg, 2,64 mmol). Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (1 M, 0,1 ml) se anadio gota a gota y la mezcla se dejo calentar hasta la temperatura ambiente durante 1 h y se agito adicionalmente hasta el dfa siguiente a la temperatura ambiente. Despues de completarse la reaccion se anadio HCl 3 N (5 ml) y la mezcla de reaccion se agito durante 2 h. La mezcla se concentro. Se anadio agua (20 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc (2 x 20 ml) y se lavo con NaHCO3 (20 ml), salmuera (20 ml) y se seco sobre sulfato de sodio y se concentro para dar 590 mg del producto deseado, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional (rendimiento del 86 %).
Se agito una solucion de 4,6-dicloro-pirimidin-2-ilamina (700 mg, 2,69 mmol), NaH (194 mg, 8,07 mmol, 60 %) y 1-(4- (2,2,2-trifluoro-1-hidroxi-etil)-fenil)-pirrolidin-2-ona (441 mg, 2,69 mmol) en THF seco (10 ml) a la temperatura ambiente durante una noche. Despues de completarse la reaccion, se elimino el THF a presion reducida. Se anadio agua (10 ml) mientras la mezcla se enfriaba a 0 °C. La mezcla se extrajo despues con diclorometano (2 x 40 ml). La solucion organica combinada se seco sobre Na2SO4. La eliminacion del disolvente dio 498 mg del producto deseado con una pureza del 92 %, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion adicional (rendimiento de 498 mg, 48 %).
Se cargo un vial de proceso de Emrys (20 ml) para microondas con 1-(4-(2-amino-6-cloro-pirimidin-4-iloxi)-2,2,2- trifluoro-etil)-fenil)-pirrolidin-2-ona (200 mg, 0,51 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (108 mg, 0,51 mmol) y 5 ml de
acetonitrilo. A la solucion anterior se anadieron 5 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M) seguido de 5 mol % de
dicloro-bis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 160 °C durante 7 min con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 4 ml de metanol y se purifico mediante una CL Prep para dar 153 mg de producto (rendimiento 58 %). RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 2,1 (m, 2H), 2,5 (t, 2H), 3,05 - 3,4 (m, 2H),
3,85 (t, 2H), 4,2 (m, 1H), 6,6 (m, 1H), 6,75 (s, 1H), 7,3 (d, 2H), 7,5 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 7,9 (d, 2H).
6.27. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6l(R)-2.2.2-trifluoro-1-r5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenM1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se recogieron R-1-(2-bromo-5-fluoro-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (4,0 g, 14,65 mmol), 3-metil pirazol (1,56 g,
19,04 mmol), CuI (0,557 g, 2,93 mmol), K2CO3 (4,25 g, 30,76 mmol), (1R,2R)-N,N'-dimetil-ciclohexan-1,2-diamina (0,416 g, 2,93 mmol) y tolueno (15 ml) en un tubo precintado de 50 ml y la mezcla resultante se calento a 130 °C (temperature del bano de aceite) durante 2 dfas. La mezcla se diluyo con acetato de etilo y se lavo con H2O (4 x 30 ml), salmuera y se seco sobre sulfato de sodio. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una cromatograffa en columna ISCO mediante el uso de un 5 -10 % de acetato de etilo en hexano como disolvente para dar 1,75 g de R-2,2,2-trifluoro-1-[5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (Rendimiento: 44 %). RMN 1H (400 MHz, CDCla): 8 (ppm) 2,35 (s, 3H), 5,0 (m, 1H), 6,3 (s, 1H), 7,1 (m, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,50 (s, 1H).
Se agito una solucion de 4,6-dicloro-pirimidin-2-ilamina (938 mg, 5,72 mmol), NaH (188 mg, 1,5 eq 8,17 mmol, 60 %) y R-2,2,2-trifluoro-1-[5-fluoro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-etanol (1,5 g, 1 eq 5,45 mmol) en THF seco (10 ml) a la temperature ambiente a 50 °C durante una noche. Despues de completarse la reaccion, el THF se elimino a presion reducida. Se anadio agua (10 ml) para inactivar la reaccion. Despues la mezcla se extrajo con diclorometano (2 x 40 ml). La solucion organica combinada se seco sobre Na2SO4. La eliminacion del disolvente dio el producto deseado con una pureza del 92 %, que se uso en la siguiente etapa sin purificacion (rendimiento: 85 %).
Se cargo un vial de proceso de Emrys (20 ml) para microondas con cloro-6-R-2,2,2-trifluoro-1-(5-fluoro-2-(3-metil- pirazol-1-il)-fenil)-etoxi)-pirimidin-2-ilamina (2,18 g, 5,45 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (1,13 g, 5,45 mmol), se anadio carbonato de sodio (1 M 10,90 ml, 2 eq) a la solucion anterior seguido de 5 mol % de diclorobis (trifenilfosfina) paladio (II) (191 mg, 0,27 mmol) y 5 ml de acetonitrilo y 5 ml de H2O. El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y la mezcla se calento a 160 °C durante 10 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en H2O (10 ml) y se extrajo con eter. La capa de eter se desecho. Despues la mayor parte del agua de la fase acuosa se elimino a vacfo, seguido de la adicion de 10 ml de metanol. El producto en bruto se purifico mediante una Prep-HPLC para dar 1,163 g (rendimiento 75 %) del producto. RMN 1H (400 MHz, CD3OD): 8 (ppm) 2,4 (s, 3H), 3,35 (m, 1H), 3,5 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 6,4 (s, 1H), 7,0 (s, 1H), 7,1 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,55 (m, 4H), 7,85 (s, 1H), 8,0 (d, 2H).
6.28. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-f2.2.2-trifluoro-1-r4-(6-metoxi-piridin-2-il)-fenil1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 4-(6-metoxi-piridin-2-il)- benzaldetndo (213 mg, 1 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (0,2 ml, 1,2 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento hasta la temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 12 ml de HCl 1 M y se agito durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 0,25 g de 1-[4-(6-metoxi- piridin-2-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion. Rendimiento: 90 %.
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Se anadio CS2CO3 (375 mg, 1 mmol) a una solucion de 1-[4-(6-metoxi-piridin-2-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etanol (67 mg, 0,2 mmol) en 10 ml de 1,4-dioxano anhidro. La mezcla se agito durante 5 min, despues se anadio acido (S)-3-[4-(2- amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (78 mg, 0,2 mmol) y la mezcla se calento a 110 °C durante una noche. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino mediante un rotavapor para dar 112 mg del acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[4-(6-metoxi-piridin-2-il)-fenil]- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (rendimiento: 88 %).
El producto anterior (112 mg) se anadio a 5 ml de una solucion al 30% de TFA / DCM. Una vez finalizada la reaccion, el disolvente se evaporo para dar un producto en bruto, que se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 5 mg del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[4-(6-metoxi-piridin-2-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4- il)-fenil] propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 8,18 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,94 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,74 (m, 3 H), 7,60 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,52 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 7,08 (s, 1 H), 6,86 (m, 1H), 6,82 (d, J = 8,1 Hz 1H), 4,37 (t, 1 H), 4,03 (s, 3 H), 3,5 (m, 2 H).
6.29. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{2.2.2-trifluoro-1-r2-fluoro-4-(5-metoxi-piridin-3-il)-fenil1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se anadio TBAF (0,1 ml) a una solucion de 4-bromo-2-fluoro-benzaldel'ndo (2,03 g, 10 mmol) y TMSCF3 (20 ml, 12 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla formada se calento hasta la temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 12 ml de HCl 3 M y se agito durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 2,4 g de 1-(4-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (rendimiento: 90 %).
Se anadio Cs2CO3 (8,45 g, 26 mmol) a la solucion de 1-(4-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (1,4 g, 5,2 mmol) en 10 ml de 1,4-dioxano anhidro, la mezcla se agito durante 5 minutos, despues se anadio acido (S)-3-[4- (2-amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (2,0 g, 5 mmol) y la mezcla resultante se calento a 110 °C durante una noche. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino mediante un rotavapor para dar 2,6 g del acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[1-(4-bromo-2-fluorofenil)-2,2,2-trifluoro- etoxi]-pirimidin-4-il}fenil)2tertbutoxicarbonilamino-propionico (rendimiento: 82 %).
Se cargo un vial de microondas (2 ml) con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[1-(4-bromo-2-fluoro-fenil)-2,2,2-trifluoro-etoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (130 mg, 0,2 mmol), 3-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-
[1.3.2]dioxaborolan-2-il)-piridina (70 mg, 0,3 mmol) 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 14 mg (5 mol %) de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico mediante una HPLC Prep para dar 51 mg del acido (S)-3-[4-(2-amino-6- {2,2,2-trifluoro-1-[2-fluoro-4-(5-metoxipiridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilaminopropionico.
El producto anterior (51 mg) se disolvio en 5 ml de una solucion al 30 % de TFA / DCM. La mezcla se agito a la temperatura ambiente durante una noche. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una HPLC Prep para dar 17 mg del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-fluoro-4-(5- metoxi-piridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm): 8,73 (s, 1 H), 8,56 (s, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 7,94 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,77 (m, 3H), 7,55 (d, J = 8,4 Hz, 2 H), 7,16 (m, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,35 (t, 1 H), 4,09 (s, 3 H), 3,4 (m, 2 H).
6.30. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-f(S)-2.2.2-trifluoro-1 -r4-(2-fluoro-piridin-4-ih-fenil1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se anadio CS2CO3 (16,25 g, 50 mmol) a la solucion de (S)-1-(4-bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro-etanol (2,55 g, 11,0 mmol) en 10 ml de 1,4-dioxano anhidro y la mezcla se agito durante 5 minutos, tras lo cual se anadio acido (S)-3-[4-(2- amino-6-cloro-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (3,92 g, 10 mmol). La mezcla resultante se calento a 110 °C durante una noche. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino mediante un rotavapor para dar 5,2 g del acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromo-fenil)-2,2,2-trifluoro- etoxi]-pirimidin-4-il}fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico (rendimiento: 82 %).
Se cargo un vial de microondas (2 ml) con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromofenil)-2,2,2-trifluoro-etoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilaminopropionico (139 mg, 0,23 mmol), acido 2-fluoropiridin-4-boronico (40 mg, 0,27 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 14 mg (5 mol %) de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad y el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol. El producto se purifico mediante una HPLC Preparativa para dar 70 mg del acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2- trifluoro-1 -[4-(2-fluoro-piridin-4-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc-butoxicarbonilamino-propionico.
El producto anterior (70 mg) se disolvio en 5 ml de TFA al 30 % en DCM. La mezcla de reaccion se agito a la t. a. durante una noche. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto que se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 52 mg del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(2-fluoro-piridin-4-il)-fenil]- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 8,17 (d, J = 5,7 Hz, 1 H), 7,85 (d, J =
8,4 Hz, 2 H), 7,77 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 7,67 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,53 (m, 1 H), 7,38 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,30 (s, 1H), 6,76 (m, 2H), 4,21 (t, 1 H), 3,2 (m, 2 H).
6.31. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{(S)-2.2.2-trifluoro-1-r4-(5-metoxi-piridin-3-il)-fenil1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se cargo un vial de microondas (2 ml) con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromofenil)-2,2,2-trifluoroetoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilaminopropionico (139 mg, 0,23 mmol), 3-metoxi-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]- dioxaborolan-2-il)-piridina (69 mg, 0,27 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 14 mg de diclorobis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 60 mg del acido (S)-3-[4-(2-amino-6-(S)-2,2,2- trifluoro-1 -[4-(5-metoxi-piridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc butoxicarbonilamino-propionico.
El producto anterior (60 mg) se disolvio en 5 ml de TFA al 30% en DCM. La mezcla de reaccion se agito a la
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temperature ambiente durante una noche. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto que se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 48 mg del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(5- metoxi-piridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (300 mHz, CD3OD) 8 (ppm): 8,54 (d, J =
1,5 Hz, 1 H), 8,37 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 8,03 (dd, J = 2,7 Hz, 1,5 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,70 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,75 (m, 1H), 4,22 (t, 1 H), 3,95 (t, 3 H), 3,25 (m, 2 H).
6.32. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{(S)-2.2.2-trifluoro-1-r4-(4-trifluorometil-piridin-3-il)-fenil1- etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se cargo un vial de microondas (2 ml) con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromofenil)-2,2,2-trifluoroetoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilaminopropionico (139 mg, 0,23 mmol), acido 4-trifluorometilpiridin-3-boronico (61 mg, 0,3 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato de sodio
acuoso (1 M), seguido de 14 mg de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro
hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 20 mg del acido (S)-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(4- trifluorometil-piridin-3-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-2-terc butoxicarbonilamino-propionico
El producto anterior (20 mg) se disolvio en 5 ml de TFA al 30 % en DCM. La mezcla de reaccion se agito a la t. a.
durante una noche. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto que se purifico mediante una HPLC
preparativa para dar 10 mg del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{(S)-2,2,2-trifluoro-1-[4-(4-trifluorometil-piridin-3-il)- fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm): 8,72 (d, J = 5,1 Hz, 1 H), 8,55 (s, 1 H), 7,87 (d, J = 8,2, 2H), 7,72 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 7,63 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,36 (m, 4H), 6,81 (m, 1H), 6,70 (s, 1H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
6.33. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-l2-amino-6-r(S)-2.2.2-trifluoro-1-(4-isoxazol-4-il-fenin-etoxi1-pirimidin- 4-il}-fenil)-propi6nico
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Se cargo un vial de microondas (2 ml) con acido (S)-3-(4-{2-amino-6-[(S)-1-(4-bromofenil)-2,2,2-trifluoroetoxi]- pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilaminopropionico (139 mg, 0,23 mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil-
[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-isoxazol (57,5 mg, 0,3 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 14 mg de diclorobis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 20 mg del acido (S)-3-(4-{2- amino-6-[(S)-2,2,2-trifluoro-1-(4-isoxazol-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-2-terc-butoxicarbonilamino propionico.
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El producto anterior (20 mg) se disolvio en 5 ml de TFA al 30 % en DCM. La mezcla se agito a la t. a. durante una noche. La eliminacion del disolvente dio un producto en bruto, que se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 10 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[(S)-2,2,2-trifluoro-1-(4-isoxazol-4-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 9,03 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 7,84 (m, 2H), 7,63 (d, J = 8,2, 1H), 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,50 (m, 1H), 7,37 (m, 3H), 6,70 (m, 2H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
6.34. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-l2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4- il}-fenil)-propi6nico
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Se cargo un vial de microondas (20 ml) con acido 2-formilfenilboronico (290 mg, 2,0 mmol), 5-bromo-pirimidina (316 mg, 2,0 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 100 mg de diclorobis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se evaporo para proporcionar un material en bruto, que se purifico mediante una ISCO para dar 220 mg de 2-pirimidin-5-il-benzaldel'ndo.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF, 0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-pirimidin-5-il-benzaldel'ndo (184 mg, 1 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (TMSCF3, 0,2 ml, 1,2 mmol) en 10 ml de ThF a 0 °C. La mezcla se calento hasta la temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato despues con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 0,21 g de 2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il- fenil)-etanol (rendimiento: 84 %), que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion.
Se anadio Cs2CO3 (325 mg, 1,0 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il-fenil)-etanol (72 mg, 0,28 mmol) en 10 ml de THF anhidro. La mezcla se agito durante 20 min, se anadio 2-amino-4,6-dicloro-pirimidina (36,7 mg, 0,22 mmol) y despues la mezcla de reaccion se calento a 110 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de enfriar hasta la temperatura ambiente, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino mediante un rotavapor para dar 76 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina en bruto (rendimiento: 92 %).
Se cargo un vial de microondas (2 ml) con el intermedio anterior en bruto (38 mg, 0,1 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (31 mg, 0,15 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 4 mg, 5 mol % de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 10 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2-trifluoro-1- (2-pirimidin-5-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm) 9,21 (s, 1 H), 8,87 (s, 2 H), 7,86 (d, J = 8,4, 2H), 7,75 (m, 1 H), 7,53 (m, 2H), 7,37(d, J = 8,2, 1H), 7,33 (m, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,58 (m, 1H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
6.35. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-l2-amino-6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-tiofen-3-il-fenin-etoxi1-pirimidin-4-il}- fenih-propionico
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Se cargo un vial de microondas (20 ml) con acido 2-formilfenilboronico (290 mg, 2,0 mmol), 3-bromo-tiofeno (326 mg, 2,0 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 50 mg de diclorobis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se evaporo para proporcionar un material en bruto, que se purifico mediante una ISCO para dar 211 mg de 2-tiofen-3-il-benzaldel_ndo.
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF, 0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-tiofen-3-il-benzaldel"ndo (100 mg, 0,53 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (0,1 ml, 0,64 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento hasta la temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato despues con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 0,12 g de 2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il- fenil)-etanol, que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion (rendimiento: 89 %).
Se anadio Cs2CO3 (325 mg, 1,0 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-(2-tiofen-3-il-fenil)-etanol (72 mg, 0,28 mmol) en 10 ml de THF anhidro y la mezcla se agito durante 20 minutos. Despues se anadio 2-amino-4,6- dicloro-pirimidina (36,7 mg, 0,22 mmol) y la mezcla se calento a 110 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino mediante un rotavapor para dar 67 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-pirimidin-5-il- fenil)-etoxi]-pirimidin-2-ilamina (rendimiento: 78 %).
Se cargo un vial de microondas (2 ml) con el anterior material en bruto (40 mg, 0,1 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (31 mg, 0,15 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 5 mol % de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad. El residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una HPLC preparativa para proporcionar 11,8 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{2-amino-6-[2,2,2- trifluoro-1 -(2-tiofen-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm): 7,84 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,53 (m, 1H), 7,40 (m, 5H), 7,30 (m, 1H), 7,17 (m, 1H), 6,91 (m, 1H), 6,82 (s, 1H), 4,23 (t, 1 H), 3,25 (m, 2 H).
6.36. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-r4-(2-amino-6-{2.2.2-trifluoro-1-r2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-fenil1-etoxi}- pirimidin-4-il)-fenil1-propi6nico
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Se cargo un vial de microondas (20 ml) con 2-bromo-benzaldehndo (208 mg, 1,0 mmol), 1-metil-4-(4,4,5,5-tetrametil-
[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (222 mg, 1,2 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 2,4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 50 mg de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se evaporo para proporcionar un material en bruto que se purifico mediante una ISCO para dar 181 mg de 2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)- benzaldehfdo (96 % de rendimiento).
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Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)- benzaldehndo (100 mg, 0,53 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (0,12 ml, 0,6 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento hasta la temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato despues con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 0,12 g de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(1- metil-1H-pirazol-4-il-fenil)-etanol, que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion (rendimiento: 89 %).
Se anadio Cs2CO3 (325 mg, 1,0 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-[2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-fenil]-etanol (60 mg, 0,2 mmol) en 10 ml de THF anhidro y la mezcla se agito durante 20 minutos. Se anadio 2-amino-4,6-dicloro- pirimidina (32 mg, 0,2 mmol) y despues la mezcla de reaccion se calento a 110 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino mediante un rotavapor para proporcionar 70 mg de 4-cloro-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-2-ilamina (rendimiento: 92 %).
Se cargo un vial de microondas (2 ml) con el material anterior en bruto (38 mg, 0,1 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (31 mg, 0,15 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 5 mol % de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 5,6 mg del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{2,2,2-trifluoro-1-[2-(1-metil- 1H-pirazol-4-il)-fenil]-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico.
6.37. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-f6-r2.2.2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil)-etoxi1-pirimidin-4-il}-fenil- propionico
imagen54
Se cargo un vial de microondas (20 ml) con acido 2-formilfenil boronico (298 mg, 2,0 mmol), 3-bromo-furano (350 mg, 2,4 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 100 mg de diclorobis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se evaporo para proporcionar un material en bruto que se purifico mediante una ISCO para dar 110 mg de 2-furan-3-il-benzaldel_ndo (30 % de rendimiento).
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-furan-3-il-benzaldel_ndo (110 mg, 0,64 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (109 mg, 0,78 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento hasta la temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla se trato despues con 3 ml de HCl 1 M y se agito durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 0,130 g de 2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil)- etanol, que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion (rendimiento: 90 %).
Se anadio NaH al sesenta por ciento (12 mg, 0,3 mmol) a una solucion de 2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil)-etanol (54 mg, 0,2 mmol) en 10 ml de THF anhidro. La mezcla se agito durante 20 minutos, tras lo cual se anadio 4,6- dicloro-pirimidina (30 mg, 0,2 mmol). Despues, la mezcla se calento a 70 °C hasta que se completo la reaccion. Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 5 ml de agua para inactivar la reaccion y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino mediante un rotavapor para dar 67 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidina (rendimiento: 94 %).
Se cargo un vial de microondas (2 ml) con el material anterior en bruto (38 mg, 0,1 mmol), 4-borono-L-fenilalanina (31 mg, 0,15 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,7 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,3 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 5 mol % de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y despues se purifico mediante una HPLC preparativa para proporcionar 6 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluoro-1-(2- furan-3-il-fenil)-etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm): 8,82 (s, 1 H), 8,13 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,73 (m, 2H), 7,46 (m, 6H), 6,82 (m, 1 H), 6,54 (s, 1H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
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6.38. Sintesis del acido (S)-2-amino-3-(4-l6-l2.2.2-trifluoro-1-(2-furan-2-il-fenil)-etoxil-pirimidin-4-il}-fenil)- propionico
imagen55
Se cargo un vial de microondas (20 ml) con acido 2-formilfenil boronico (298 mg, 2,0 mmol), 2-bromo-furano (350 mg, 2,4 mmol) y 8 ml de acetonitrilo. A esta mezcla se anadieron 4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 100 mg de diclorobis-(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se extrajo con acetato de etilo. La capa organica se evaporo para proporcionar un material en bruto, que se purifico mediante una ISCO para dar 123 mg de 2-furan-2-il-benzaldehndo (34 % de rendimiento).
Se anadio fluoruro de tetrabutilamonio (0,1 ml de 1 M en THF) a una solucion de 2-furan-2-il-benzaldel_ndo (123 mg, 0,71 mmol) y trifluorometil trimetilsilano (120 mg, 0,86 mmol) en 10 ml de THF a 0 °C. La mezcla se calento hasta la temperatura ambiente y se agito durante 4 horas. La mezcla de reaccion se trato despues con 3 ml de HCI 1 M y se agito durante una noche. El producto se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). La capa organica se separo y se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente organico se evaporo para dar 0,150 g de 2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-3-il-fenil) etanol, que se uso directamente en la siguiente etapa sin purificacion (rendimiento: 90 %).
Se anadio NaH al sesenta por ciento (12 mg, 0,3 mmol) a una solucion de 2,2,2-trif!uoro-1-(2-furan-2-il-fenil) etanol (55 mg, 0,2 mmol) en 10 ml de THF anhidro. La mezcla se agito durante 20 minutos, tras lo cual se anadio 4,6-
dicloro-pirimidina (29 mg, 0,2 mmol). Despues, la mezcla se calento a 110 °C hasta que se completo la reaccion.
Despues de un periodo de refrigeracion, se anadieron 5 ml de agua y se uso acetato de etilo (20 ml) para extraer el producto. La capa organica se seco sobre sulfato de sodio. El disolvente se elimino mediante un rotavapor para dar 60 mg de 4-cloro-6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-2-il-fenil)-etoxi]-pirimidina (rendimiento 80 %).
Se cargo un vial de microondas (2 ml) con el material anterior en bruto (60 mg, 0,2 mmol), 4-borono-L-fenilaIanina (62 mg, 0,3 mmol), 1 ml de acetonitrilo y 0,6 ml de agua. A esta mezcla se anadieron 0,4 ml de carbonato de sodio acuoso (1 M), seguido de 5 mol % de diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II). El recipiente de reaccion se cerro hermeticamente y se calento a 150 °C durante 5 minutos con irradiacion de microondas. Despues de un periodo de refrigeracion, la mezcla de reaccion se evaporo a sequedad, el residuo se disolvio en 2,5 ml de metanol y se purifico mediante una HPLC preparativa para dar 6 mg del acido (S)-2-amino-3-(4-{6-[2,2,2-trifluoro-1-(2-furan-2-il-fenil)- etoxi]-pirimidin-4-il}-fenil)-propionico. RMN 1H (300 MHz, CD3OD) 8 (ppm): 8,66 (s, 1 H), 8,11 (d, J = 8,4 Hz, 2H),
7,77 (m, 2 H), 7,54 (m, 6H), 6,86 (d, J = 3,3 Hz, 1 H), 6,66 (m, 1H), 4,20 (t, 1 H), 3,22 (m, 2 H).
6.39. Compuestos adicionales
Los compuestos adicionales preparados mediante el uso de metodos conocidos en la tecnica y/o descritos en el presente documento se enumeran a continuacion:
Compuesto
CLEM (M + 1) Metodo de HPLC (Tiempo (min))
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(piridin-3-il)fenil)etoxi)pirimidin- 4-il)fenil) propanoico
510 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(2-metiIpiridin-4- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
524 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(4-metiItiofen-3- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
529 A --
acido (2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-pirazoI-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)-2-aminopirimidin-4- il)fenil)-2-aminopropanoico
499 A (2,86)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(furan-2-il)fenil)etoxi)pirimidin-4- il)fenil) propanoico
499 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(piridin-3-iloxi)fenil)etoxi)pirimidin-4- il)fenil) propanoico
512 A (1,36)
acido (2S)-3-(4-(6-(1-(2-(1H-1,2,4-triazoI-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)-2-aminopirimidin- 4-il)fenil)-2-aminopropanoico
500 A (2,17)
Compuesto
CLEM (M + 1) Metodo de HPLC (Tiempo (min))
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(furan-3-il)fenil)etoxi)pirimidin-4- il)fenil) propanoico
499 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(furan-2-il)-3- metoxifenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
529 A (3,32)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(5-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(furan-2-il)fenil)etoxi)pirazin-2-il)fenil) propanoico
484 E --
acido (2S)-3-(4-(5-(1-(2-(1H-pirazoM-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)pirazin-2-il)fenil)-2- aminopropanoico
484 E --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(4,5-dimetoxi-2-(1H-pirazoM-il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
559 E (2,86)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(2-metil-1H-imidazoM- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
513 A (2,30)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-(5-metiltiofen-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
529 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(2-(5-(dimetilcarbamoil)furan-2-il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
570 A --
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(tiofen-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
533 A (1,61)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(tiofen-2-il)fenil)etoxi)pirimidin-4- il)fenil) propanoico
518 A (1,65)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(tiofen-3-il)fenil)etoxi)pirimidin-4- il)fenil) propanoico
518 A (3,76)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-fluoro-2-(4-metiltiofen-2- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
532 A (3,88)
(S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-2,2,2-trifluoro-1-(4-(6-fluoropiridin-3- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
528 A (2,96)
acido (2S)-3-(4-(6-(1-(4-(1H-imidazol-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)-2-aminopirimidin-4- il)fenil)-2-aminopropanoico
499 A (2,07)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(tiofen-2-il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
500 A (3,74)
(S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-2,2,2-trifluoro-1-(4-(pirimidin-5-il)fenil)etoxi)pirimidin-4- il)fenil) propanoico
511 A (2,67)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(6-(1-(2-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-4-fluorofenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
531 A (1,55)
(S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-2,2,2-trifluoro-1-(4-(2-metilpiridin-4- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
524 A (2,28)
acido (2S)-3-(4-(6-(1-(4-(1H-1,2,4-triazol-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil)- 2-aminopropanoico
485 A (1,24)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(4-(piperidin-1- ilmetil)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
530 B (3,00)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(2-fluoro-4-(2-metilpiridin-4- il)fenil)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
542 A (2,42)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(4-(6-cloropiridazin-3-il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
545 A (3,33)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(4-(4-terc-butiltiazol-2-il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
572 A (1,82)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(2,2,2-trifluoro-1-(3'-metoxi-3-(3-metil-1H-pirazoM- il)bifenil-4-il)etoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
619 A (3,54)
acido (2S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-(1-(5-cloro-2-(3-metil-1H-pirazol-1-il)fenil)-2,2,2- trifluoroetoxi)pirimidin-4-il)fenil) propanoico
547 A (3,20)
6.40. Ensayos de inhibicion in vitro
Se generaron la TPH1 humana, la TPH2, la hidroxilasa de tirosina (TH) y la hidroxilasa de fenilalanina (PH) mediante 5 el uso de genes que tienen los siguientes numeros de registro, respectivamente: X52836, AY098914, X05290 y U49897.
Se clono la secuencia codificante completa de la TPH1 humana en el vector de expresion bacteriano pET24 (Novagen, Madison, Wl, Estados Unidos). Se inoculo una unica colonia de celulas BL21 (DE3) portadoras del vector 10 de expresion en 50 ml de medio de caldo L (LB)-kanamicina y se cultivaron a 37 °C durante una noche con agitacion. Despues se transfirio la mitad del cultivo (25 ml) a 3l de medio que contema un 1,5% de extracto de
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levadura, un 2 % de Bacto Peptone, triptofano 0,1 mM, sulfato de amonio ferroso 0,1 mM y tampon de fosfato 50 mM (a pH 7,0) y se cultivo hasta una DO600 = 6 a 37 °C con un complemento de oxfgeno al 40 %, el pH mantenido a 7,0 y la adicion de glucosa. La expresion de la TPH1 se indujo con D-lactosa al 15 % durante un periodo de 10 horas a 25 °C. Las celulas se centrifugaron y se lavaron una vez con solucion salina tamponada con fosfato (PBS).
La TPH1 se purifico mediante una cromatograffa de afinidad basada en su union a la pterina. El sedimento de celulas se resuspendio en un tampon de lisis (100 ml / 20 g) que contema 50 mM Tris-Cl, a pH 7,6, NaCl 0,5 M, Tween-20 al 0,1 %, EDTA 2 mM, DTT 5 mM, una mezcla inhibidora de la proteasa (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, Estados Unidos) y fluoruro de fenilmetansulfonilo 1 mM (PMSF) y las celulas se lisaron con un microfluidificador. El lisado se centrifugo y el sobrenadante se cargo en una columna de sefarosa acoplada a pterina 4B que se habfa equilibrado con un tampon que contema Tris 50 mM, a pH 8,0, NaCl 2 M, Tween-20 al 0,1 %, EDTA 0,5 mM y DTT 2 mM. La columna se lavo con 50 ml de este tampon y la TPH1 se eluyo con un tampon que contema NaHCO3 30 mM, a pH 10,5, NaCl 0,5 M, Tween-20 al 0,1 %, EDTA 0,5 mM, DTT 2 mM y glicerol al 10 %. La enzima eluida fue neutralizada inmediatamente con KH2PO4 200 mM, a pH 7,0, NaCl 0,5 M, DTT 20 mM, EDTA 0,5 mM y glicerol al 10 % y se almaceno a -80 °C.
La hidroxilasa de triptofano humana de tipo ll (TPH2), la hidroxilasa de tirosina (TH) y la hidroxilasa de fenilalanina (PAH) fueron expresadas y purificadas esencialmente de la misma forma, excepto porque las celulas se complementaron con tirosina para la TH y con fenilalanina para la PAH durante el cultivo.
Las actividades de la TPH1 y de la TPH2 se midieron en una mezcla de reaccion que contema acido 4- morfolinpropansulfonico 50 mM (MOPS), a pH 7,0, triptofano 60 pM, sulfato de amonio 100 mM, sulfato de amonio ferroso 100 pM, tris(2-carboxietil) fosfina (TCEP) 0,5 mM, 6-metil tetrahidropterina 0,3 mM, 0,05 mg/ml de catalasa y DTT 0,9 mM. Las reacciones se iniciaron mediante la adicion de la TPH1 a una concentracion final de 7,5 nM. La velocidad inicial de las reacciones se determino mediante el seguimiento del cambio en la fluorescencia a 360 nm (longitud de onda de excitacion = 300 nm). La inhibicion de la TPH1 y de la TPH2 se determino mediante la medicion de sus actividades a diversas concentraciones del compuesto, y la potencia de un compuesto dado se calculo mediante el uso de la ecuacion:
imagen56
en la que v es la velocidad inicial a una concentracion dada de compuesto C, v o es la v cuando C = 0, b es la senal de fondo, D es la pendiente, que es aproximadamente igual a 1, e Ic50 es la concentracion del compuesto que inhibe la mitad de la actividad maxima de la enzima.
Las actividades de la TH y de la PAH humana se determinaron mediante la medicion de la cantidad de 3H2O generada mediante el uso de L-[3,4-3H]-tirosina y L-[4-3H]-fenilaIanina, respectivamente. La enzima (100 nM) se incubo en primer lugar con su sustrato a 0,1 mM durante aproximadamente 10 minutos y se anadio a la mezcla de reaccion que contema MOPS 50 mM, a pH 7,2, sulfato de amonio 100 mM, Tween-20 al 0,05%, TCEP 1,5 mM, sulfato de amonio ferroso 100 pM, tirosina o fenilalanina 0,1 mM, 6-metil tetrahidropterina 0,2 mM, 0,05 mg/ml de catalasa y DTT 2 mM. Las reacciones se dejaron proceder durante 10 - 15 minutos y se detuvieron mediante la adicion de HCI 2 M. Despues las mezclas se filtraron a traves de carbon vegetal activado y se determino la radioactividad del filtrado mediante un recuento de centelleo. Las actividades de los compuestos sobre la TH y la PAH se determinaron mediante el uso de este ensayo, y se calcularon de la misma forma que con la TPH1 y la TPH2.
6.41. Ensayos de inhibicion basados en celulas
Se usaron dos tipos de lmeas celulares para el cribado: la RBL2H3 es una lmea celular de mastocitoma de rata que contiene la TPH1 y crea espontaneamente 5-hidroxitriptamina (5HT); la BON es una lmea celular carcinoide humana que contiene la TPH1 y crea 5-hidroxitriptofano (5HTP). Los CBAs se llevaron a cabo en un formato de placa de 96 pocillos. La fase movil usada en la HPLC contema un 97% de acetato de sodio 100 mM, a pH 3,5 y un 3% de acetonitrilo. Se uso una columna Waters C18 (de 4,6 x 50 mm) con una HPLC Waters (modelo 2795). Se uso un fluonmetro multicanal (modelo 2475) para monitorizar el caudal mediante el establecimiento de 280 nm como la longitud de onda de excitacion y de 360 nm como la longitud de onda de emision.
RBL CBA: las celulas se cultivaron en medio completo (que contema un 5 % de suero bovino) durante 3-4 horas para permitir que las celulas se adhirieran a los pocillos de las placas (7K celula/pocillo). Despues se anadieron los compuestos a cada pocillo en el intervalo de concentracion de entre 0,016 pM y 11,36 pM. Los controles eran celulas en medio completo sin ningun compuesto presente. Las celulas se recogieron despues de 3 dfas de incubacion a 37 °C. Las celulas eran confluyentes a >95 % sin ningun compuesto presente. Se retiraron los medios de la placa y las celulas se lisaron con un volumen igual de NaOH 0,1 N. Una gran porcion del lisado celular se trato
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mezclandolo con un volumen igual de TCA 1 M y despues se filtro a traves de fibra de vidrio. Los filtrados se cargaron en una HPLC de fase inversa para el analisis de las concentraciones de 5HT. Tambien se tomo una pequena porcion del lisado celular para la medicion de la concentracion proteica de las celulas, que refleja la citotoxicidad de los compuestos a la concentracion usada. La concentracion de protemas se midio mediante el uso del metodo BCA.
El nivel promedio de 5HT en las celulas sin compuesto tratadas se uso como el valor maximo en la derivacion de la CI 50 de acuerdo con la ecuacion proporcionada anteriormente. El valor irnnimo de la 5HT se establece bien a 0 o bien a partir de las celulas que son tratadas con la mayor concentracion del compuesto si un compuesto no es citotoxico a esa concentracion.
BON CBA: las celulas se cultivaron en un volumen igual de DMEM y F12K con un 5 % de suero bovino durante 3-4 horas (20K celula/pocillo) y el compuesto se anadio a un intervalo de concentracion de entre 0,07 pM y 50 pM. Las celulas se incubaron a 37 °C durante una noche. Despues se tomaron 50 pM del sobrenadante del cultivo para una medicion de la 5HTP. El sobrenadante se mezclo con un volumen igual de TCA 1 M, despues se filtro a traves de fibra de vidrio. El filtrado se cargo en una HPLC de fase inversa para la medicion de la concentracion de 5HTP. La viabilidad celular se midio mediante el tratamiento del resto de las celulas con Promega Celltiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay. La potencia del compuesto se calculo despues de la misma forma que en el RBL CBA.
6.42. Efectos in vivo
Los efectos in vivo del compuesto se determinaron formulandolos para proporcionar soluciones, que despues fueron administradas por via oral. En general, a ratones C57 albino machos de 14 semanas de edad se les administraron una vez al dfa mediante una sonda oral 5-10 ml/kg durante cuatro dfas consecutivos. Cinco horas despues de la ultima dosis, los animales fueron rapidamente sacrificados. Cada animal fue anestesiado mediante el uso de isoflurano, se extrajo sangre mediante el metodo de puncion cardfaca mediante el uso de jeringas de 1 ml y de agujas de calibre 25 5/8, se pusieron 250 pl de sangre en tubos que conteman EDTA capiject que se mantuvieron en una rotacion suave. Despues el animal fue decapitado, se extrajo el cerebro completo y se ultracongelo, el yeyuno, el fleo y el colon fueron limpiados de grasa y el contenido de la luz se ultracongelo. La 5-HT se extrajo a partir de la sangre o de los tejidos y se midio mediante una cromatograffa lfquida de alta resolucion (HPLC) equipada con un detector de fluorescencia en lmea. Se tomaron muestras sangumeas para el analisis de exposicion. Todos los estudios con animales se llevaron a cabo con los protocolos aprobados por The Institutional Animal Care and Use Committee.
La Figura 1 muestra el efecto dependiente de la dosis de un compuesto de la invencion sobre los niveles de la 5-HT en ratones.
Todas las publicaciones (por ejemplo, las patentes y las solicitudes de patente) divulgadas anteriormente se incorporan al presente documento como referencia en su totalidad.

Claims (16)

  1. 5
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    REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de formula I:
    imagen1
    o una sal o un solvato farmaceuticamente aceptable del mismo, en la que:
    Ai es un heterociclo opcionalmente sustituido;
    cada Ri es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; R2 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4;
    R3 es hidrogeno, C(0)Ra, C(0)ORa o alquilo C1-4;
    R4 es hidrogeno o alquilo C1-4;
    cada Ra es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rb es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; cada Rc es independientemente hidrogeno o alquilo C1-4; y m es 1-4.
  2. 2. El compuesto de la reivindicacion 1, que es de la formula:
    en la que:
    imagen2
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y n es 1-3.
    imagen3
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y n es 1-3.
  3. 4. El compuesto de la reivindicacion 1, que es de la formula:
    5
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    20
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    en la que:
    imagen4
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y n es 1-3.
  4. 5. El compuesto de la reivindicacion 1, que es de la formula:
    imagen5
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y p es 1 - 4.
  5. 6. El compuesto de la reivindicacion 1, que es de la formula:
    en la que:
    imagen6
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y q es 1 - 2.
  6. 7. El compuesto de la reivindicacion 1, que es de la formula:
    imagen7
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y q es 1 - 2.
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    25
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  7. 8. El compuesto de la reivindicacion 1, que es de la formula:
    imagen8
    en la que:
    cada R5 es independientemente halogeno, hidrogeno, C(0)Ra, ORa, NRbRc, S(02)Ra o alquilo C1-4; y q es 1 - 2.
  8. 9. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que R1 es hidrogeno o halogeno.
  9. 10. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que R2 es hidrogeno o amino.
  10. 11. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que R3 es hidrogeno o alquilo C1-4.
  11. 12. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que R4 es hidrogeno o alquilo C1-4.
  12. 13. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 2-8, en el que R5 es hidrogeno o alquilo C1-4.
  13. 14. El compuesto de la reivindicacion 1, que es el acido (S)-2-amino-3-(4-(2-amino-6-((R)-1-(4-cloro-2-(3-metil-1H- pirazol-1-il)fenil)-2,2,2-trifluoroetoxi)pirimidin-4-ilo)fenil) propanoico o el etil ester del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino- 6-{R-1-[4-cloro-2-(3-metilpirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxil-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico.
  14. 15. El compuesto de la reivindicacion 1, que es el acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{1-[4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1- il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico o el etil ester del acido (S)-2-amino-3-[4-(2-amino-6-{R-1- [4-cloro-2-(3-metil-pirazol-1-il)-fenil]-2,2,2-trifluoro-etoxi}-pirimidin-4-il)-fenil]-propionico.
  15. 16. Una composicion que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y un excipiente o un diluyente farmaceuticamente aceptable.
  16. 17. Un compuesto de una de las reivindicaciones 1 a 15, o una composicion de la reivindicacion 16, para su uso como un medicamento en el tratamiento, la prevencion o el abordaje de una enfermedad o de un trastorno seleccionado de entre el grupo que consiste en crisis carcinoide, smdrome carcinoide, enfermedad de Crohn, enfermedad o trastornos cardiovasculares o pulmonares, smdrome de intestino irritable, esclerodermia, smdrome serotoninergico y colitis ulcerosa.
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