ES2604108T3 - Bloqueo de la señalización de la CCL18 a través del CCR6 como opción terapéutica en las enfermedades fibróticas y el cáncer - Google Patents

Bloqueo de la señalización de la CCL18 a través del CCR6 como opción terapéutica en las enfermedades fibróticas y el cáncer Download PDF

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Abstract

Una composición farmacéutica que comprende un compuesto capaz de inhibir la actividad y/o la expresión de la CCL18 o la CCL20 para uso en tratamiento, en la que el compuesto capaz de inhibir la actividad y/o la expresión de la CCL18 o la CCL20 se selecciona del grupo que consiste en (1) un polipéptido receptor CCR6 soluble aislado que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que se selecciona del grupo que consiste en: (a) una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 80 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 1; y (b) un fragmento de la secuencia de aminoácidos según (a); en el que dicho polipéptido receptor CCR6 soluble aislado es capaz de unirse a la CCL18 y/o la CCL20 y en el que dicho polipéptido receptor CCR6 soluble aislado no comprende un dominio transmembrana; (2) el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según (1), en el que la secuencia de aminoácidos según (a) comprende al menos 8 aminoácidos consecutivos de la secuencia según la SEQ ID NO.: 1.

Description

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El término "aproximadamente" en el contexto de la presente invención denota un intervalo de precisión que un experto en la técnica entenderá que sigue procurando el efecto técnico de la característica en cuestión. El término normalmente engloba una desviación a partir de la cifra indicada de ± 10 % y preferiblemente de ± 5 %.
La determinación de la identidad porcentual entre dos secuencias, preferiblemente se realiza usando el algoritmo matemático de Karlin y Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci USA 90: 5873-5877. Dicho algoritmo está incorporado, p. ej., en los programas BLASTn y BLASTp de Altschul et al. (1990) J. MoI. Biol. 215: 403-410 disponibles en el NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/Blast.cgi).
La determinación de la identidad porcentual preferiblemente se realiza con los parámetros estándar de los programas BLASTn y BLASTp.
Las búsquedas de polinucleótidos en BLAST preferiblemente se realizan con el programa BLASTn.
Para los parámetros generales, el recuadro "Max Target Sequences" se debe ajustar a 100, marcando el recuadro "Short queries", el recuadro "Expect threshold" se debe ajustar a 10 y el recuadro "Word Size" a 28. Para los parámetros de la puntuación, las "Match/mismatch Scores" deben ajustarse a 1,-2 y el recuadro "Gap Costs" ponerse en lineal. En los "Filters" y "Masking parameters", no se debe marcar el recuadro "Low complexity regions", ni el recuadro "Species-specific repeats", ni el "Mask lower case letters" pero sí el "Mask for lookup table only".
Las búsquedas de proteínas en BLAST preferiblemente se realizan con el programa BLASTn.
Para los parámetros generales, el recuadro "Max Target Sequences" debe ajustarse a 100, marcando el recuadro "Short queries", el recuadro "Expect threshold" debe ajustarse a 10 y el recuadro "Word Size" a "3". Para los parámetros de la puntuación, el recuadro "Matrix" debe ajustarse a "BLOSUM62", el recuadro de "Gap Costs" a "Existence: 11 Extension:1" y el recuadro de "Compositional adjustments" a "Conditional compositional score matrix adjustment". En los "Filters" y "Masking parameters", no se debe marcar el recuadro "Low complexity regions", ni el recuadro "Mask for lookup table only", ni el "Mask lower case letters".
La identidad porcentual se determina para la longitud completa de la secuencia de referencia respectiva, es decir, para toda la longitud de la secuencia según la SEQ ID NO o las SEQ ID NO citadas en el contexto respectivo. Por ejemplo, una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 80 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 1 presenta una identidad de al menos el 80 % con la SEQ ID NO.: 1 en la longitud completa de la SEQ ID NO.: 1. En otro ejemplo, una secuencia que presenta una identidad de al menos el 80 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 8 presenta una identidad de al menos el 80 % con la SEQ ID NO.: 8 en la longitud completa de la SEQ ID NO.: 8.
El término "sujeto" como se emplea en la presente memoria se refiere a un humano o a un animal, preferiblemente un mamífero, tal como, p. ej., primates no humanos, ratones, ratas, conejos, cobayas, perros, gatos, bovinos, caballos, ovejas, cerdos, cabras y similares. Preferiblemente un "sujeto" en el contexto de la presente invención es un humano.
Las expresiones "receptor de quimiocinas CCR6" o "receptor CCR6", "ligando de la quimiocina 18" o "CCL18" y"ligando de la quimiocina 20" o "CCL20" que se mencionan en el contexto de la presente invención son conocidas en la técnica. Por tanto, la persona de experiencia ordinaria en la técnica podrá recuperar fácilmente las secuencias de polinucleótidos y aminoácidos del receptor CCR6, de la CCL18 y de la CCL20 y sus isoformas ortólogas y de splicing alternativo de cualquier base de datos pública adecuada tal como, p. ej., la base de datos del NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/). Los términos "receptor CCR6" y "CCR6" se usan indistintamente en la presente memoria.
El "receptor CCR6", la "CCL18" y la "CCL20" como se menciona en el contexto de la presente invención son preferiblemente el receptor CCR6, la CCL18 y la CCL20 humanos, lo más preferiblemente el receptor CCR6 humano y la CCL18 humana o la CCL20 humana. El receptor CCR6 humano se puede encontrar, p. ej., en la base de datos del NCBI con el número de acceso NM_004367,5 (variante de tránscrito 1; SEQ ID NO.: 3) o NM_031409,3 (variante de tránscrito 2; SEQ ID NO.: 4). La CCL18 humana se puede encontrar, p. ej., en la base de datos del NCBI con el número de acceso NM_002988,2 (SEQ ID NO.: 5). La CCL20 humana se puede encontrar, p. ej., en la base de datos del NCBI con el número de acceso NM_004591,2 (variante de tráscrito 1; SEQ ID NO.: 6) o NM_001130046,1 (variante de tráscrito 2; SEQ ID NO.: 7).
El receptor CCR6 a veces también se denomina CD196. La CCL18 a veces también se denomina quimiocina pulmonar y de activación regulada (PARC), quimiocina CC alternativa asociada a la activación de macrófagos 1 (AMAC-1), proteína inflamatoria de macrófagos-4 (MIP-4) o quimiocina derivada de dendritas (DCCK1). Los términos "FPI" (fibrosis pulmonar idiopática) y "NIU" (neumonía intersticial usual) se usan de forma sinónima en la presente memoria.
Los autores de la presente invención sorprendentemente encontraron que la CCL18 es un ligando/un agonista del receptor CCR6, miembro de la familia de los receptores de quimiocinas acoplados a proteínas G con siete dominios transmembrana. Además, los autores sorprendentemente encontraron un polipéptido receptor CCR6 soluble que se
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aminoácidos según (a) comprende al menos 8, al menos 15, al menos 20, al menos 30 o al menos 40 aminoácidos de la secuencia según la SEQ ID NO.: 1.
En otra realización preferida, la secuencia de aminoácidos según (a) presenta una identidad de al menos el 80 %, preferiblemente al menos el 85 %, más preferiblemente al menos el 90 %, más preferiblemente al menos el 91 %, más preferiblemente al menos el 92 %, más preferiblemente al menos el 93 %, más preferiblemente al menos el 94 %, más preferiblemente al menos el 95 %, más preferiblemente al menos el 96 %, más preferiblemente al menos el 97 %, más preferiblemente al menos el 98 %, incluso más preferiblemente al menos el 99 % o lo más preferiblemente el 100 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 1 y comprende al menos 8, más preferiblemente al menos 12, más preferiblemente al menos 15, más preferiblemente al menos 20, más preferiblemente al menos 25, más preferiblemente al menos 30, más preferiblemente al menos 35, más preferiblemente al menos 40 y lo más preferiblemente al menos 45 aminoácidos consecutivos de la secuencia según la SEQ ID NO.: 1.
En otra realización preferida adicional, la secuencia de aminoácidos según (a) presenta una identidad de al menos el 95 % o al menos el 98 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 1 y comprende al menos 20, al menos 25, al menos 30 o al menos 40 aminoácidos consecutivos de la secuencia según la SEQ ID NO.: 1. En la realización más preferida, la secuencia de aminoácidos según (a) presenta una identidad de al menos el 95 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 1 y comprende al menos 20 aminoácidos consecutivos de la secuencia según la SEQ ID NO.: 1 o presenta una identidad de al menos el 98 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 1 y comprende al menos 25 aminoácidos consecutivos de la secuencia según la SEQ ID NO.: 1.
En una realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de menos de 3000 aminoácidos, preferiblemente menos de 2000 aminoácidos, más preferiblemente menos de 1000 aminoácidos, más preferiblemente menos de 500 aminoácidos, más preferiblemente menos de 300 aminoácidos, más preferiblemente menos de 200 aminoácidos, más preferiblemente menos de 100 aminoácidos o lo más preferiblemente menos de 80 aminoácidos.
En otra realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de entre al menos 8 y al menos 3000 aminoácidos, preferiblemente entre al menos 8 y al menos 2000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 8 y al menos 1000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 8 y 500 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 8 y 300 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 8 y 200 aminoácidos, e incluso más preferiblemente entre al menos 8 y 100 aminoácidos o entre al menos 8 y 80 aminoácidos.
En otra realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de entre al menos 20 y al menos 3000 aminoácidos, preferiblemente entre al menos 20 y al menos 2000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 20 y al menos 1000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 20 y 500 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 20 y 300 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 20 y 200 aminoácidos, e incluso más preferiblemente entre al menos 20 y 100 aminoácidos o entre al menos 20 y 80 aminoácidos. En otra realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de entre al menos 30 y al menos 3000 aminoácidos, preferiblemente entre al menos 30 y al menos 2000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 30 y al menos 1000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 30 y 500 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 30 y 300 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 30 y 200 aminoácidos, e incluso más preferiblemente entre al menos 30 y 100 aminoácidos o entre al menos 30 y 80 aminoácidos.
En otra realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de entre al menos 40 y al menos 3000 aminoácidos, preferiblemente entre al menos 40 y al menos 2000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 40 y al menos 1000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 40 y 500 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 40 y 300 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 40 y 200 aminoácidos, e incluso más preferiblemente entre al menos 40 y 100 aminoácidos o entre al menos 40 y 80 aminoácidos. En otra realización preferida adicional, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de entre al menos 50 y al menos 3000 aminoácidos, preferiblemente entre al menos 50 y al menos 2000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 50 y al menos 1000 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 50 y 500 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 50 y 300 aminoácidos, más preferiblemente entre al menos 50 y 200 aminoácidos, e incluso más preferiblemente entre al menos 50 y 100 aminoácidos o entre al menos 50 y 80 aminoácidos. En una realización particularmente preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de entre al menos 20 y al menos 500 aminoácidos.
En otra realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de al menos 8, más preferiblemente al menos 10, más preferiblemente al menos 20, más preferiblemente al menos 30, más preferiblemente al menos 40, más preferiblemente al menos 45 e incluso más preferiblemente al menos 48 aminoácidos. En una realización particularmente preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de al menos 30, al menos 40 o al menos 48 aminoácidos. En una realización particularmente preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención tiene una longitud de 48 aminoácidos.
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Un fragmento es habitualmente una porción de la secuencia de aminoácidos a la que se refiere.
En una realización preferida, el fragmento según (b) tiene al menos 8, al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15, al menos 16, al menos 17, al menos 18, al menos 19, al menos 20, al menos 21, al menos 22, al menos 23, al menos 24, al menos 25, al menos 26, al menos 27 o al menos 28 aminoácidos de longitud. En una realización preferida, el fragmento según (b) tiene una longitud de al menos 10, al menos 15 o al menos o al menos 20 aminoácidos. En una realización particularmente preferida, el fragmento según
(b) tiene una longitud de al menos 15 aminoácidos, más preferiblemente al menos 20, más preferiblemente al menos 30 o lo más preferiblemente al menos 40 aminoácidos. En otra realización particularmente preferida, el fragmento según (b) tiene una longitud de al menos 40 aminoácidos.
La capacidad de un polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención de unirse a la CCL18 y/o la CCL20 puede determinarse mediante cualquier método adecuado conocido por el experto en la técnica. Por ejemplo, el experto en la técnica puede determinar si un polipéptido receptor CCR6 soluble según la invención es capaz de unirse a la CCL18 y/o la CCL20 usando un sistema de doble híbrido en levadura o un ensayo bioquímico tal como p.ej. un ensayo de inmunoprecipitación, un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), un ensayo de unión a radioligandos cuantitativo, un ensayo de resonancia de plasmones o cualquier otro método conocido por el experto en la técnica. A la hora de utilizar ensayos de inmunoprecipitación o de resonancia de plasmones, es útil fusionar al menos una de las proteínas a un marcador de afinidad tag como His-Tag, GST-Tag u otro, como es conocido en la técnica de la bioquímica.
En una realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención es capaz de inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20.
La expresión "inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20" como se emplea en la presente memoria quiere decir reducir o anular la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 mediante el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o cualquier otro compuesto capaz de inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 descrito en la presente memoria (tal como p.ej. un anticuerpo específico para la CCL18 y/o la CCL20).
Por ejemplo, en una realización el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención, o cualquier otro compuesto capaz de inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 descrito en la presente memoria, al unirse a la CCL18 y/o la CCL20 puede inhibir la interacción de la CCL18 y/o la CCL20 con el receptor CCR6 unido a la membrana, de tal forma que la CCL18 o la CCL20 no puedan activar dicho receptor. Así, una inhibición de la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 puede deberse, p.ej., a una inhibición de la interacción de la CCL18 y/o la CCL20 con el receptor CCR6 unido a la membrana. En otra realización, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención, o cualquier otro compuesto capaz de inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 descrito en la presente memoria, al unirse a la CCL18 y/o la CCL20 puede inhibir la actividad quimiotáctica de la CCL18 y/o la CCL20. En una realización preferida adicional, el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o cualquier otro compuesto capaz de inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 descrito en la presente memoria al unirse a la CCL18 y/o la CCL20 puede inhibir la interacción de la CCL18 y/o la CCL20 con el receptor CCR6 unido a la membrana y la actividad quimiotáctica de la CCL18 y/o la CCL20. El polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o cualquier otro compuesto capaz de inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 descrito en la presente memoria puede, p.ej., inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 secuestrando dichas proteínas y reduciendo así su biodisponibilidad.
La capacidad del polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o de cualquier otro compuesto a analizar de inhibir la actividad de los ligandos del receptor CCR6 CCL18 y/o CCL20 puede determinarse, p.ej., midiendo la actividad del receptor CCR6 unido a la membrana.
En un ejemplo, el experto en la técnica, p.ej., puede determinar la capacidad del polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o de cualquier otro compuesto a analizar de inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20 incubando células que expresan el receptor CCR6 unido a la membrana en presencia de la CCL18 o la CCL20, y en presencia o ausencia del polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o de cualquier otro compuesto a analizar y posteriormente lisar las células y analizar la fosforilación de la ERK, una molécula situada más abajo en la vía de señalización de CCR6, por Western blot. En este ejemplo un nivel de fosforilación de la ERK en presencia del polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o de cualquier otro compuesto a analizar menor que el nivel de fosforilación de la ERK en ausencia del polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o de cualquier otro compuesto a analizar, indica que el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o el otro compuesto analizado es capaz de inhibir la activación del receptor CCR6 unido a la membrana por la CCL18 y/o la CCL20. Un método para determinar la fosforilación de la ERK por Western blot se describe, p.ej., en Lin et al. J Proteome Res. 2010 ene; 9(1):283-97. En un ejemplo análogo, puede analizarse la fosforilación de otros efectores situados más abajo del receptor CCR6 tales como, p.ej., las cinasas Akt, SAPK/JNK, la fosfatidilinositol 3-cinasa o la fosfolipasa C para determinar si el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención o cualquier otro compuesto a analizar es capaz de inhibir la actividad de la CCL18 y/o la CCL20.
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menos 75 %, más preferiblemente al menos 80 %, más preferiblemente al menos 85 % o lo más preferiblemente al menos 90 % soluble en una solución acuosa, preferiblemente en suero, plasma, lavado broncoalveolar, derrame pleural, esputo, saliva u orina. En una realización particularmente preferida, un "polipéptido receptor CCR6 soluble" en el contexto del método según la invención referido es al menos 75 % soluble en una solución acuosa, preferiblemente en suero, plasma, lavado broncoalveolar, derrame pleural, esputo, saliva u orina. Para determinar la solubilidad porcentual de un "polipéptido receptor CCR6 soluble", el experto en la técnica puede, p. ej., centrifugar una muestra que contiene el polipéptido receptor CCR6 soluble y posteriormente medir la cantidad de dicho polipéptido en el sobrenadante y la cantidad total de dicho polipéptido en la muestra. Entonces puede calcularse la solubilidad porcentual en términos de porcentaje de la cantidad del polipéptido receptor CCR6 presente en el sobrenadante de la cantidad total de polipéptido receptor CCR6 presente en la muestra antes de centrifugar.
En una realización preferida del método según la invención referido, la muestra líquida de un sujeto se selecciona del grupo que consiste en suero, plasma, lavado broncoalveolar, derrame pleural, esputo, saliva y orina. En una realización particularmente preferida, la muestra líquida de un sujeto es suero. Preferiblemente, la muestra está aislada del cuerpo del sujeto del que se obtiene.
En una realización preferida, dicha molécula de captura de (a) y/o dicho agente de detección de (d) es un anticuerpo
o un aptámero.
Un"aptámero" puede ser un aptámero de ADN, ARN o peptídico. Un aptámero polinucleotídico tiene preferiblemente entre aproximadamente 10 y aproximadamente 300 nucleótidos de longitud. Preferiblemente un aptámero tiene entre aproximadamente 30 y aproximadamente 100 nucleótidos de longitud. Lo más preferiblemente un aptámero tiene entre aproximadamente 10 y 60 nucleótidos de longitud. Los aptámeros pueden prepararse por cualquier método conocido en la técnica, como, p. ej., métodos de síntesis, recombinación y purificación.
Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o policlonal. En algunas realizaciones, el anticuerpo también puede seleccionarse de variantes o fragmentos de anticuerpo tales como, p. ej., anticuerpos de cadena sencilla, diacuerpos, minianticuerpos, fragmentos Fv de cadena sencilla (sc(Fv)), anticuerpos sc(Fv)2, fragmentos Fab o fragmentos F(ab')2.
Una molécula de captura o un agente de detección es específico para un compuesto dado, tal como, p. ej., un polipéptido receptor CCR6 soluble o un ligando de un polipéptido receptor CCR6 soluble, si se une a dicho compuesto con una afinidad mayor que a cualquier otro compuesto de una muestra (es decir un compuesto no diana). Preferiblemente, una molécula de captura o un agente de detección es específico para un compuesto dado si se une solo a dicho compuesto y no se une en absoluto a otros compuestos no diana. El agente de detección de (d) comprende un marcador. Se puede emplear cualquier marcador adecuado que pueda unirse al agente de detección. Preferiblemente, el marcador es detectable o cataliza una reacción enzimática del producto que es detectable.
En una realización preferida, el marcador está unido de forma covalente o no covalente al agente de detección. Los ejemplos de marcadores que pueden unirse al agente de detección incluyen, p. ej., tintes fluorescentes tales como, p. ej., tintes de cianina, p. ej., Cyanine 3, Cyanine 5 o Cyanine 7, tintes Alexa Fluor, p. ej., Alexa 594, Alexa 488 o Alexa 532, tintes de la familia de la fluoresceína, R-ficoeritrina, Texas Red, rodamina e isotiocianato de fluoresceína (FITC). Los agentes de detección también pueden marcarse con enzimas tales como, p. ej., peróxidasa de rábano, fosfatasa alcalina o beta-lactamasa, con radioisótopos tales como, p. ej., 3H, 14C, 32P, 33P, 35S o 125I, con metales tales como, p. ej., oro o con biotina. En una realización particularmente preferida, el marcador es un marcador fluorescente. En otra realización, el marcador también puede ser un agente de detección que comprende un marcador como se ha descrito anteriormente en la presente memoria. Preferiblemente un agente de detección secundario es capaz de unirse específicamente al agente de detección descrito anteriormente. En una realización particularmente preferida, un agente de detección secundario es un anticuerpo.
En una realización preferida, el agente de detección de (d) es específico para un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18, la SEQ ID NO.: 19, la SEQ ID NO.: 20 o la SEQ ID NO.: 21. En una realización preferida adicional, el agente de detección de (d) es específico para un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18. En otra realización preferida, el agente de detección de (d) es específico para un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 19. En otra realización preferida más, el agente de detección de (d) es específico para un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 20. En una realización preferida adicional, el agente de detección de (d) es específico para un polipéptido que comprende o
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consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 21.
En la realización más preferida, el agente de detección de (d) es específico para un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18.
Preferiblemente dicho soporte sólido de (a) es una superficie de plástico o vidrio. Para poder inmovilizar una molécula de captura sobre el soporte sólido, en algunas realizaciones, el soporte sólido puede estar previamente recubierto con un reactivo que se selecciona del grupo que consiste en carbodiiminas, imidoésteres o ésteres de succinimidilo, ácido etanosulfónico, glutaraldehído y polilisina.
En una realización preferida, el método según la invención referido se realiza en una microplaca.
En otra realización preferida, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18, la SEQ ID NO.: 19, la SEQ ID NO.: 20 o la SEQ ID NO.:
21. En una realización preferida adicional, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18. En otra realización preferida, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 19. En otra realización preferida más, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 20. En una realización preferida adicional, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 85 %, al menos el 90 %, al menos el 91 %, al menos el 92 %, al menos el 93 %, al menos el 94 %, al menos el 95 %, al menos el 96 %, al menos el 97 %, al menos el 98 %, al menos el 99 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 21.
En una realización particularmente preferida, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que muestra una identidad del 95 %, de al menos el 98 % o del 100 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18, la SEQ ID NO.: 19 o la SEQ ID NO.: 20 o la SEQ ID NO.: 21. En una realización particularmente preferida adicional, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que muestra una identidad del 95 %, de al menos el 98 % o del 100 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18. En otra realización particularmente preferida, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que muestra una identidad del 95 %, de al menos el 98 % o del 100 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 19. En otra realización particularmente preferida más, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que muestra una identidad del 95 %, de al menos el 98 % o del 100 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 20. En otra realización particularmente preferida más, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que muestra una identidad del 95 %, de al menos el 98 % o del 100 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 21.
En una realización particularmente preferida adicional, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 95 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18, la SEQ ID NO.: 19, la SEQ ID NO.: 20 o la SEQ ID NO.: 21.
En otra realización particularmente preferida más, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos que presenta una identidad de al menos el 95 % con la secuencia según la SEQ ID NO.: 18. En la realización más preferida, el ligando según (c) es un polipéptido que comprende o consiste en una secuencia de aminoácidos según la SEQ ID NO.: 18.
El método según la invención referido se puede utilizar para cuantificar la cantidad total de polipéptido receptor CCR6 soluble presente en una muestra líquida de un sujeto o la cantidad de polipéptido receptor CCR6 soluble unido a la CCL18, la CCL20 y/o la beta-defensina presente en una muestra líquida de un sujeto.
Si se va a cuantificar la cantidad total de polipéptido receptor CCR6 soluble en la muestra líquida, es preferible añadir el ligando en la etapa (c) para saturar el polipéptido receptor CCR6 presente en la muestra con ligando. Si se va a cuantificar la cantidad de polipéptido receptor CCR6 soluble unido a la CCL18, la CCL20 y/o la beta defensina
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que el del control. En una realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble es un polipéptido receptor soluble libre de ligando.
En otra realización preferida, el control también puede ser una muestra obtenida de un sujeto que se sabe que padece una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer (sujeto de control), es decir un sujeto que ha sido diagnosticado de una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer, en el que el cáncer es preferiblemente un adenocarcinoma, lo más preferiblemente un adenocarcinoma de pulmón. En estos casos, cuando el nivel del polipéptido receptor CCR6 soluble en la muestra del sujeto es menor que el del control, indica progresión de la enfermedad pulmonar intersticial o del cáncer en el sujeto del que se obtuvo la muestra con respecto al sujeto de control. En una realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble es el polipéptido receptor CCR6 soluble libre de ligando.
En el contexto de la presente invención, el control preferiblemente está aislado del cuerpo del sujeto del que se obtiene.
La expresión "determinar el pronóstico de una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer" como se emplea en la presente memoria se refiere a predecir la evolución o del desenlace de una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer diagnosticado o detectado, p. ej., durante un periodo de tiempo concreto, p. ej., durante el tratamiento o después del tratamiento. La expresión también puede referirse a determinar la probabilidad de supervivencia o de recuperación de la enfermedad pulmonar intersticial o el cáncer, además de a predecir el tiempo de supervivencia previsto de un sujeto.
Por ejemplo, se puede determinar el nivel del polipéptido receptor CCR6 soluble en una muestra de un sujeto en un tiempo dado y compararse con el nivel respectivo de polipéptido receptor CCR6 soluble determinado en una muestra del mismo sujeto en un tiempo posterior, donde el aumento o descenso del nivel del polipéptido receptor CCR6 soluble indica mejoría o empeoramiento de la enfermedad. Este enfoque puede emplearse, p. ej., durante el tratamiento médico de un paciente que padece una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer.
Así, en una realización preferida, el método según la invención referido también puede usarse para controlar la eficacia del tratamiento de una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer in vitro. La eficacia del tratamiento de una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer puede controlarse, p. ej., detectando el nivel de polipéptido CCR6 soluble en distintas muestras de un sujeto obtenidas durante un periodo de tiempo dado mientras el sujeto del que se obtuvieron las muestras estaba siendo tratado de una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer. El aumento o descenso del nivel de polipéptido CCR6 soluble presente en las muestras extraídas del sujeto durante un periodo de tiempo dado indicará entonces la eficacia del tratamiento. En una realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble es el polipéptido receptor CCR6 soluble libre de ligando.
En una realización preferida, el nivel del polipéptido receptor CCR6 soluble presente en el control puede determinarse al mismo tiempo que el nivel del polipéptido receptor CCR6 soluble presente en la muestra del sujeto.
En otra realización preferida, el control puede ser un valor predeterminado. Este valor puede basarse, p. ej., en los resultados de los experimentos previos para determinar el nivel del polipéptido receptor CCR6 soluble presente en una o más muestras de un sujeto sano o de un sujeto que se sabe que padece una enfermedad pulmonar intersticial
o un cáncer. En algunas realizaciones puede derivarse un valor predeterminado de una base de datos.
En una realización preferida, el nivel del polipéptido receptor CCR6 soluble puede compararse con más de un control,
p. ej., con 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100 o más de 100 controles.
Preferiblemente, la muestra del sujeto que se usa en los métodos según la invención está aislada del cuerpo del sujeto. La muestra es preferiblemente una muestra líquida. En una realización preferida, la muestra líquida se selecciona del grupo que consiste en sangre, suero, plasma, lavado broncoalveolar, derrame pleural, esputo, saliva u orina. En una realización particularmente preferida, la muestra es suero. Preferiblemente, la muestra está libre de células y de membranas. Para eliminar las células y las membranas celulares de la muestra, el experto en la técnica puede, p. ej., centrifugar la muestra antes de determinar el nivel del polipéptido receptor CCR6 soluble.
En un aspecto adicional, la presente invención también se refiere a un kit de diagnóstico para detectar una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer que comprende un agente de detección específico para el polipéptido receptor CCR6 o para el polipéptido receptor CCR6 soluble.
En una realización preferida, un agente de detección específico para el polipéptido receptor CCR6 soluble se une específicamente al dominio extracelular de CCR6. En una realización particularmente preferida, un agente de detección específico para el polipéptido receptor CCR6 soluble se une específicamente a la secuencia según la SEQ ID NO.: 1.
En una realización preferida, dicho agente de detección es un anticuerpo o un aptámero.
Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o policlonal. En algunas realizaciones, el agente de detección también se puede seleccionar de variantes o fragmentos de anticuerpo tales como, p. ej., anticuerpos de
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cadena sencilla, diacuerpos, minianticuerpos, fragmentos Fv de cadena sencilla (sc(Fv)), anticuerpos sc(Fv)2, fragmentos Fab o fragmentos F(ab')2. En una realización preferida, se pueden emplear anticuerpos específicos para el polipéptido receptor CCR6 o el polipéptido receptor CCR6 soluble.
Un "aptámero" específico para el polipéptido receptor CCR6 o para el polipéptido receptor CCR6 soluble puede ser,
p. ej., un aptámero de ADN, ARN o peptídico.
Un aptámero polinucleotídico tiene preferiblemente entre aproximadamente 10 y aproximadamente 300 nucleótidos de longitud. Preferiblemente un aptámero tiene entre aproximadamente 30 y aproximadamente 100 nucleótidos de longitud. Lo más preferiblemente un aptámero tiene entre aproximadamente 10 y 60 nucleótidos de longitud.
Los aptámeros pueden prepararse por cualquier método conocido, por ejemplo por métodos de síntesis, recombinación o purificación y pueden usarse solos o combinados con otros aptámeros específicos para el polipéptido receptor CCR6 o para el polipéptido receptor CCR6 soluble.
En una realización preferida, el polipéptido receptor CCR6 soluble en el contexto del método descrito anteriormente de la invención es un polipéptido receptor CCR6 soluble libre de ligando.
En una realización preferida del método descrito anteriormente, la enfermedad pulmonar intersticial se selecciona del grupo que consiste en enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa de causa conocida (preferiblemente colagenosis vascular o enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa por exposición ambiental o por toxicidad por fármacos), enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa granulomatosa (preferiblemente sarcoidosis) y otras formas de enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa (preferiblemente linfangioleiomiomatosis (LAM), histiocitosis de células de Langerhans/histiocitosis X (HX) o neumonía eosinófila).
En otra realización preferida del método descrito anteriormente, la enfermedad pulmonar intersticial es una neumonía intersticial idiopática.
En una realización particularmente preferida del método descrito anteriormente, la enfermedad pulmonar intersticial se selecciona del grupo que consiste en fibrosis pulmonar idiopática, neumonía intersticial no específica, neumonía organizada criptogénica, bronquiolitis respiratoria asociada a enfermedad pulmonar intersticial, neumonía intersticial descamativa, neumonía intersticial aguda y neumonía intersticial linfocítica. Lo más preferiblemente, la enfermedad pulmonar intersticial es fibrosis pulmonar idiopática.
En una realización preferida adicional, del método descrito anteriormente el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, neuroblastoma, melanoma, cáncer cerebral, cáncer renal, cáncer de vejiga, cáncer de ovario, cáncer hematológico y cáncer de colon.
En una realización particularmente preferida del método descrito anteriormente, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en adenocarcinoma, preferiblemente adenocarcinoma de pulmón, mesotelioma pleural, carcinoma colorrectal, carcinoma de próstata, carcinoma de mama, carcinoma de células renales, carcinoma hepatocelular, linfoma no Hodgkin y linfoma de Hodgkin. Lo más preferiblemente, el cáncer es adenocarcinoma, preferiblemente adenocarcinoma de pulmón.
La presente invención, en un aspecto adicional, también se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto capaz de inhibir la actividad y/o la expresión de la CCL18 o la CCL20.
Una composición farmacéutica según la invención puede administrarse por vía oral, por ejemplo en forma de píldoras, comprimidos, comprimidos con recubrimiento pelicular, grageas, gránulos, cápsulas de gelatina duras y blandas, soluciones acuosas, alcohólicas u oleosas, jarabes, emulsiones o suspensiones; o por vía rectal, por ejemplo en forma de supositorios. La administración también puede ser por vía parenteral, por ejemplo por vía subcutánea, intramuscular o intravenosa en forma de soluciones para inyección o infusión. Otras formas de administración adecuadas son, por ejemplo, la administración percutánea o tópica, por ejemplo en forma de ungüentos, tinturas, pulverizadores o sistemas terapéuticos transdérmicos o la administración por inhalación en forma de pulverización nasal o mezclas en aerosol.
En una realización preferida, una composición farmacéutica según la invención se administra por vía parenteral, p. ej., en forma de soluciones para inyección o infusión, por vía oral, p. ej., en forma de comprimido, píldora, pastilla o cápsula o por inhalación.
Para la producción de las píldoras, comprimidos, grageas y cápsulas de gelatina duras se puede emplear, por ejemplo, lactosa, almidón, por ejemplo almidón de maíz o derivados de almidón, talco, ácido esteárico o sus sales, etc. Los vehículos para las cápsulas de gelatina blandas y para los supositorios son, por ejemplo, grasas, ceras, polioles semisólidos y líquidos, aceites naturales o hidrogenados, etc. Los vehículos adecuados para la preparación de soluciones, por ejemplo de soluciones inyectables o de emulsiones o jarabes son, por ejemplo, agua, solución de cloruro sódico fisiológica, alcoholes como etanol, glicerol, polioles, sacarosa, azúcar invertida, glucosa, manitol, aceites vegetales, etc.
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En algunas realizaciones, las composiciones farmacéuticas también contienen aditivos, como por ejemplo cargas, disgregantes, aglutinantes, lubricantes, humectantes, estabilizantes, emulsionantes, dispersantes, conservantes, edulcorantes, colorantes, aromas, espesantes, diluyentes, sustancias tamponadoras, disolventes, solubilizadores, agentes para conseguir un efecto retardado (depot), sales para alterar la presión osmótica, agentes de recubrimiento
o antioxidantes.
Pueden encontrarse ejemplos de excipientes adecuados para las distintas formas de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria, p. ej., en el "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 2ª Edición, (1994), Editado por A Wade y PJ Weller.
En una realización preferida, el compuesto capaz de inhibir la actividad y/o la expresión de la CCL18 o la CCL20 se selecciona del grupo que consiste en el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención, una molécula pequeña capaz de unirse a la CCL18 o la CCL20, un aptámero específico para la CCL18 o la CCL20, un anticuerpo específico para la CCL18 o la CCL20, una molécula antisentido adecuada para reducir o inhibir la expresión de la CCL18 o la CCL20 y una molécula de ARNsi adecuada para reducir o inhibir la expresión de la CCL18 o la CCL20.
La expresión "molécula pequeña", como se emplea en la presente memoria, se refiere a compuestos orgánicos pequeños de bajo peso molecular.
Un molécula pequeña puede ser un compuesto sintético que no existe de manera natural o un compuesto natural aislado o que se sabe que existe en fuentes naturales, tales como, p. ej., células, plantas, hongos, animales y similares. Un molécula pequeña en el contexto de la presente invención preferiblemente tiene un peso molecular de menos de 5000 Dalton, más preferiblemente de menos de 4000 Dalton, más preferiblemente de menos de 3000 Dalton, más preferiblemente de menos de 2000 Dalton o incluso más preferiblemente de menos de 1000 Dalton. En una realización particularmente preferida, una molécula pequeña en el contexto de la presente invención tiene un peso molecular de menos de 800 Dalton.
En otra realización preferida, una molécula pequeña en el contexto de la presente invención tiene un peso molecular de 50 a 3000 Dalton, preferiblemente de 100 a 2000 Dalton, más preferiblemente de 100 a 1500 Dalton e incluso más preferiblemente de 100 a 1000 Dalton. Lo más preferiblemente, una molécula pequeña en el contexto de la presente invención tiene un peso molecular de 100 a 800 Dalton.
Las moléculas pequeñas capaces de unirse a la CCL18 o a la CCL20 pueden identificarse, p. ej., mediante búsquedas en bibliotecas de compuestos pequeños.
Un "aptámero" puede ser un aptámero de ADN, ARN o peptítico específico para la CCL18 o para la CCL20.
Un aptámero polinucleotídico tiene preferiblemente entre aproximadamente 10 y aproximadamente 300 nucleótidos de longitud. Preferiblemente un aptámero tiene entre aproximadamente 30 y aproximadamente 100 nucleótidos de longitud. Lo más preferiblemente un aptámero tiene entre aproximadamente 10 y 60 nucleótidos de longitud.
Los aptámeros pueden prepararse mediante cualquier método conocido, por ejemplo métodos de síntesis, recombinación y purificación y pueden usarse solos o combinados con otros aptámeros específicos para la CCL18 o para la CCL20.
Un anticuerpo específico para la CCL 18 o para la CCL20 puede ser un anticuerpo monoclonal o policlonal. En algunas realizaciones, el anticuerpo también puede seleccionarse de variantes o fragmentos de anticuerpo tales como, p. ej., anticuerpos de cadena sencilla, diacuerpos, minianticuerpos, fragmentos Fv de cadena sencilla (sc(Fv)), anticuerpos sc(Fv)2, fragmentos Fab o fragmentos F(ab')2 con la condición de que dichas variantes o fragmentos de anticuerpos sean específicos para la CCL18 o la CCL20.
La expresión "molécula antisentido adecuada para reducir o inhibir la expresión de la CCL18 o la CCL20" se refiere a un polinucleótido que es complementario al ARNm de CCL18 o al ARNm de CCL20 respectivamente. Es preferible que dicha molécula antisentido sea adecuada para usar en una estrategia de molécula antisentido para inhibir la traducción del ARNm de CCL18 o del ARNm de CCL20 en una célula. Dicha molécula antisentido puede ser una molécula de ADN o ARN y puede ser monocatenaria o bicatenaria. En una realización preferida, la molécula antisentido es una molécula de ADN monocatenario o una molécula de ARN monocatenario.
Una molécula antisentido preferiblemente tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 500 nucleótidos, de aproximadamente 11 a aproximadamente 200 nucleótidos, de aproximadamente 12 a aproximadamente 100 nucleótidos, de aproximadamente 13 a aproximadamente 75 nucleótidos o de aproximadamente 14 a aproximadamente 50 nucleótidos, de aproximadamente 15 a aproximadamente 40 nucleótidos, de aproximadamente 16 a aproximadamente 30 nucleótidos o de aproximadamente 17 a aproximadamente 25 nucleótidos.
Una molécula de ARNsi adecuada para reducir o inhibir la expresión de la CCL18 o la CCL20 puede ser una molécula de ARNsi monocatenaria o bicatenaria que sea capaz de hibridarse con el ARNm de CCL18 o el ARNm de
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CCL20, induciendo así una interferencia en el ARN o cualquier otro mecanismo antisentido intracelular que consiga reducir o inhibir la expresión de la proteína CCL18 o la proteína CCL20.
Dicha molécula de ARNsi puede tener cualquier secuencia que permita que la molécula de ARNsi interfiera con el ARN y consiga reducir o inhibir la expresión de la proteína CCL18 o la proteína CCL20.
Preferiblemente, la molécula de ARNsi tiene una longitud de entre 10 y 100, entre 12 y 80, entre 14 y 60, entre 16 y 50, entre 17 y 40, más preferiblemente entre 18 y 30 nucleótidos y lo más preferiblemente entre 18 y 26 nucleótidos.
Un compuesto capaz o adecuado para reducir o inhibir la expresión de la CCL18 o la CCL20 puede reducir o inhibir la expresión de la CCL18 o la CCL20 al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 30 %, al menos un 40 %, al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, más preferiblemente al menos un 80 %, al menos un 90 %, al menos un 91 %, al menos un 92 %, al menos un 93 %, al menos un 94 %, al menos un 95 %, al menos un 96 %, al menos un 97 %, al menos un 98 % o al menos un 99 % respecto a un control. En algunas realizaciones preferidas, un compuesto capaz o adecuado para reducir o inhibir la expresión de la CCL18 o la CCL20 puede reducir o inhibir la expresión de la CCL18 o la CCL20 un 100 %.
En otra realización preferida, una composición farmacéutica según la invención comprende otro compuesto activo adecuado para tratar o prevenir una enfermedad pulmonar intersticial y/o un cáncer.
Los ejemplos de compuestos activos adicionales adecuados para el tratamiento de una enfermedad pulmonar intersticial son, p. ej., fármacos antiinflamatorios tales como, p. ej., prednisona u otros corticosteroides, azatioprina, metotrexato, micofenolato o ciclofosfamida, antioxidantes, tales como, p. ej., acetilcisteína, agentes antifibróticos, tales como, p. ej., bosentán o pirfenidona, minociclina, sildenafilo, talidomida, anticuerpos anti-TNF, tales como, p. ej., Infliximab; etanercept, interferón gamma, anticuerpos anti-IL-13, inhibidores de la endotelina, Zileuton, anticoagulantes, macrólidos, inhibidores de la fosfodiesterasa (PDE) 4, tales como, p. ej., roflumilast, Aviptadil, hormona estimulante de melanocitos alfa (α-MSH), inhibidores de la tirosina cinasa, tales como, p. ej., imatinib, dasatinib y nilotinib.
El compuesto activo adicional adecuado para el tratamiento del cáncer es preferiblemente un agente quimioterapéutico. Los agentes quimioterapéuticos adecuados para el tratamiento del cáncer son conocidos por el experto en la técnica. Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos son, p. ej., temozolomida, adriamicina, doxorubicina, epirubicina, 5-fluorouracilo, arabinósido de citosina ("Ara-C"), ciclofosfamida, tiotepa, busulfán, citoxina, taxoides, p. ej., paclitaxel, Taxotere, metotrexato, cisplatino, melfalán, vinblastina, bleomicina, etopósido, ifosfamida, mitomicina C, mitoxantrona, vincristina, vinorelbina, carboplatino, tenipósida, daunorubicina, carminomicina, aminopterina, dactinomicina, mitomicinas, melfalán y otras mostazas de nitrógeno relacionadas y agentes hormonales que regulan o inhiben la actividad de las hormonas sobre los tumores como tamoxífeno y onapristona.
La composición farmacéutica según la invención puede comprender uno o más de un compuesto activo adicional adecuado para tratar o prevenir una enfermedad pulmonar intersticial y/o uno o más de un compuesto activo adicional adecuado para tratar o prevenir un cáncer. En una realización preferida, la composición farmacéutica según la invención comprende 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más de 10 compuestos activos adicionales adecuados para tratar o prevenir una enfermedad pulmonar intersticial y/o 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más de 10 compuestos activos adicionales adecuados para el tratamiento del cáncer.
En otras realizaciones preferidas, se puede administrar una o más composiciones distintas, que comprenden un compuesto activo adecuado para tratar o prevenir una enfermedad pulmonar intersticial y/o un compuesto activo adecuado para tratar o prevenir un cáncer, a un sujeto, preferiblemente a un sujeto humano, combinadas con una composición farmacéutica según la invención que comprende un compuesto capaz de inhibir la actividad y/o la expresión de la CCL18 o la CCL20.
En una realización preferida, la enfermedad pulmonar intersticial se selecciona del grupo que consiste en enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa de causa conocida (preferiblemente colagenosis vascular o enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa por exposición ambiental o por toxicidad por fármacos), enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa granulomatosa (preferiblemente sarcoidosis) y otras formas de enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa (preferiblemente linfangioleiomiomatosis (LAM), histiocitosis de células de Langerhans/histiocitosis X (HX) o neumonía eosinófila).
En otra realización preferida, la enfermedad pulmonar intersticial es una neumonía intersticial idiopática.
En una realización particularmente preferida, la enfermedad pulmonar intersticial se selecciona del grupo que consiste en fibrosis pulmonar idiopática, neumonía intersticial no específica, neumonía organizada criptogénica, bronquiolitis respiratoria asociada a enfermedad pulmonar intersticial, neumonía intersticial descamativa, neumonía intersticial aguda y neumonía intersticial linfocítica. Lo más preferiblemente, la enfermedad pulmonar intersticial es fibrosis pulmonar idiopática.
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En una realización preferida, el agente de detección es un anticuerpo o un aptámero.
Un"aptámero" puede ser un aptámero de ADN, ARN o peptídico. Un aptámero polinucleotídico tiene preferiblemente entre aproximadamente 10 y aproximadamente 300 nucleótidos de longitud. Preferiblemente un aptámero tiene entre aproximadamente 30 y aproximadamente 100 nucleótidos de longitud. Lo más preferiblemente un aptámero tiene entre aproximadamente 10 y 60 nucleótidos de longitud. Los aptámeros pueden prepararse por cualquier método conocido en la técnica, como, p. ej., métodos de síntesis, recombinación y purificación.
Preferiblemente, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o policlonal. En algunas realizaciones, el agente de detección también se puede seleccionar de variantes o fragmentos de anticuerpo tales como, p. ej., anticuerpos de cadena sencilla, diacuerpos, minianticuerpos, fragmentos Fv de cadena sencilla (sc(Fv)), anticuerpos sc(Fv)2, fragmentos Fab o fragmentos F(ab')2. El agente de detección preferiblemente comprende un marcador detectable. Anteriormente en la presente memoria se han descrito marcadores adecuados.
Un agente de detección es específico para el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención, si se une al polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención con una afinidad mayor que a cualquier otro compuesto presente en una muestra (es decir un compuesto no diana). Preferiblemente, un agente de detección es específico para el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención si se une solo al polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención y no se une en absoluto a un compuesto no diana.
En una realización preferida, la enfermedad pulmonar intersticial se selecciona del grupo que consiste en enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa de causa conocida (preferiblemente colagenosis vascular o enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa por exposición ambiental o por toxicidad por fármacos), enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa granulomatosa (preferiblemente sarcoidosis) y otras formas de enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa (preferiblemente linfangioleiomiomatosis (LAM), histiocitosis de células de Langerhans/histiocitosis X (HX) o neumonía eosinófila).
En otra realización preferida, la enfermedad pulmonar intersticial es una neumonía intersticial idiopática.
En una realización particularmente preferida, la enfermedad pulmonar intersticial se selecciona del grupo que consiste en fibrosis pulmonar idiopática, neumonía intersticial no específica, neumonía organizada criptogénica, bronquiolitis respiratoria asociada a enfermedad pulmonar intersticial, neumonía intersticial descamativa, neumonía intersticial aguda y neumonía intersticial linfocítica. Lo más preferiblemente, la enfermedad pulmonar intersticial es fibrosis pulmonar idiopática.
En una realización preferida adicional, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, neuroblastoma, melanoma, cáncer cerebral, cáncer renal, cáncer de vejiga, cáncer de ovario, cáncer hematológico y cáncer de colon.
En una realización particularmente preferida, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en adenocarcinoma, preferiblemente adenocarcinoma de pulmón, mesotelioma pleural, carcinoma colorrectal, carcinoma de próstata, carcinoma de mama, carcinoma de células renales, carcinoma hepatocelular, linfoma no Hodgkin y linfoma de Hodgkin. Lo más preferiblemente, el cáncer es adenocarcinoma, preferiblemente adenocarcinoma de pulmón.
En un aspecto adicional, la presente invención también se refiere a un agente de detección específico para el receptor CCR6 o para el polipéptido receptor CCR6 soluble aislado según la invención para uso en la detección de una enfermedad pulmonar intersticial o un cáncer en una muestra de un sujeto.
En una realización preferida, la enfermedad pulmonar intersticial se selecciona del grupo que consiste en enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa de causa conocida (preferiblemente colagenosis vascular o enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa por exposición ambiental o por toxicidad por fármacos), enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa granulomatosa (preferiblemente sarcoidosis) y otras formas de enfermedad parenquimatosa pulmonar difusa (preferiblemente linfangioleiomiomatosis (LAM), histiocitosis de células de Langerhans/histiocitosis X (HX) o neumonía eosinófila).
En otra realización preferida, la enfermedad pulmonar intersticial es una neumonía intersticial idiopática.
En una realización particularmente preferida, la enfermedad pulmonar intersticial se selecciona del grupo que consiste en fibrosis pulmonar idiopática, neumonía intersticial no específica, neumonía organizada criptogénica, bronquiolitis respiratoria asociada a enfermedad pulmonar intersticial, neumonía intersticial descamativa, neumonía intersticial aguda y neumonía intersticial linfocítica. Lo más preferiblemente, la enfermedad pulmonar intersticial es fibrosis pulmonar idiopática.
En una realización preferida adicional, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, neuroblastoma, melanoma, cáncer cerebral, cáncer renal, cáncer de vejiga, cáncer de ovario, cáncer hematológico y cáncer de colon.
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