ES2585352T3

ES2585352T3 - Compuestos bicíclicos heterocíclicos como inhibidores de la proteína tirosina quinasa

Info

Publication number: ES2585352T3
Application number: ES08806575.0T
Authority: ES
Inventors: Gordon Saxty; Valerio Berdini; Christopher William Murray; Charlotte Mary Griffiths-Jones; Emma Vickerstaffe; Gilbert Ebai Besong
Original assignee: Astex Therapeutics Ltd
Current assignee: Astex Therapeutics Ltd
Priority date: 2007-10-12
Filing date: 2008-10-10
Publication date: 2016-10-05
Anticipated expiration: 2028-10-10
Also published as: EP2203449A1; HUE028999T2; JP5562858B2; ME02815B; AU2008309342C1; WO2009047522A1; US20120035152A1; US20100286113A1; JP2011500545A; PT2203449T; EP2203449B1; AU2008309342B2; PL2203449T3; US8859582B2; GB0720038D0; US8071614B2; HRP20160852T1; HK1145496A1; CY1117820T1; AU2008309342A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula (I):**Fórmula** en donde ----------- representa un enlace sencillo o doble, tal que dentro del sistema de anillo de miembros, por lo menos un enlace es un doble enlace; el anillo A puede estar opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 grupos Ra; B representa un grupo heterociclilo en donde dicho grupo heterociclilo puede estar opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 grupos Ra; Ra representa grupos halógeno, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cicloalquilo C3-8, C3-8 cicloalquenilo, - ORx, -O-(CH2)n-ORx, haloalquilo C1-6, haloalcoxi C1-6, alcanol C1-6, >=O, >=S, nitro, Si(Rx)4, -(CH2)s-CN, -S-Rx, - SORx, -SO2-Rx, -CORx, -(CRxRy)s-COORz,-(CH2)s-CONRxRy, -(CH2)s-NRxRy, -(CH2)s-NRxCORy, -(CH2)s- NRxSO2-Ry, -(CH2)s-NH-SO2-NRxRy, -OCONRxRy, -(CH2)s-NRxCO2Ry, -O-(CH2)sCRxRy-(CH2)t-ORz o -(CH2)s- SO2NRxRy; Rx, Ry y Rz representan independientemente hidrógeno, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcanol C1-6, hidroxi, alcoxi C1-6, haloalquilo C1-6, -CO-(CH2)n-alcoxi C1-6, cicloalquilo C3-8 o cicloalquenilo C3-8; R7 y R8 representan independientemente hidrógeno, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, cicloalquilo C3-8, cicloalquenilo C3-8, arilo, heterociclilo o R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos pueden formar un anillo heterociclilo que contiene nitrógeno, en donde dichos alquilo C1-6, arilo y heterociclilo pueden estar opcionalmente sustituidos por 1, 2 o 3 grupos Rb; R1 y Rb representan independientemene un grupo Ra o un grupo -Y-carbocíclico o -Z-heterociclilo en donde dichos grupos carbocíclico y heterociclilo pueden estar opcionalmente sustituidos por 1, 2 o 3 grupos Ra; Y y Z representan independientemente un enlace, -CO-(CH2)s-, -COO-, -(CH2)n-, -NRx-(CH2)s, -(CH2)sNRx-, - CONRx-, -NRxCO-, -SO2NRx-, -NRxSO2-, -NRxCONRy-, -NRxCSNRy-, - O-(CH2)s-, -(CH2)s-O-, S-, -SO- o - (CH2)s-SO2-; n representa un entero de 1-4; s y t representan independientemente un entero de 0-4; q representa un entero de 0-2; o una sal, o solvato de ellos farmacéuticamente aceptables.

Description

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Otros ejemplos de sistemas de anillo cubiertos por las definiciones de X1–X5 se muestran en las siguientes fórmulas (u)–(v):

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5 Como se mencionó arriba, –––––––– representa un enlace sencillo o doble. Será claro para la persona diestra que cuando X4 o X5 representa C=O, X4 y X5 están unidos por un enlace sencillo. En una realización X4 y X5 están unidos por un enlace doble.

En una realización, dos enlaces dentro del sistema de anillo de 5 miembros son dobles enlaces.

Se divulga un compuesto en el cual X1 representa C.

10 Se divulga un compuesto en el cual X1 y X3 representan C, X5 representa CH y X2 y X4 representan nitrógeno (es decir un sistema de anillo de la fórmula (a)).

Se divulga un compuesto en el cual X1 y X3 representan C, X4 y X5 representan CH y X2 representa nitrógeno (es decir un sistema de anillo de la fórmula (e)).

Se divulga un compuesto en el cual X1 y X3 representan C, X4 representa CH y X2 y X5 representan nitrógeno (es 15 decir un sistema de anillo de la fórmula (f)).

Se divulga un compuesto en el cual X1 y X2 representan C, X3 representa nitrógeno, X4 representa CR3 (por ejemplo CH) y X5 representa CR3 (por ejemplo C–Me) (es decir un ejemplo de un sistema de anillo de la fórmula (h)).

En una realización, X1 y X2 representan C, X4 y X5 representan CH y X3 representa nitrógeno (es decir un sistema de anillo de la fórmula (j)).

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En una realización, A representa el grupo A1.

Se divulga un compuesto en el cual A representa a grupo seleccionado de entre cualquiera de las fórmulas A1 a A10 y A12–A15. Se divulga un compuesto en el cual A es seleccionado de entre A2, A14 y A15. Se divulga un compuesto en el cual A es seleccionado de A2.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo aromático de 5 o 6 miembros.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo aromático de 5 miembros.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo no aromático.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo aromático de 6 miembros.

En una realización, A representa fenilo.

Se divulga un compuesto en el cual A representa piridin–3–ilo.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un sistema de anillo monocíclico aromático carbocíclico o heterocíclico que tiene por ejemplo un anillo de 5, 6 o 7 miembros.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un anillo carbocíclico de 6 miembros.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo fenilo (es decir un sistema de anillo de la fórmula A1) opcionalmente sustituido por uno o más (por ejemplo 1, 2 o 3) grupos Ra. En una realización aún adicional, A representa un grupo fenilo (es decir un sistema de anillo de la fórmula A1) opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 grupos Ra. En una realización, A representa fenilo no sustituido o fenilo sustituido con un grupo –(CH2)s–CONRxRy (por ejemplo –CONH2), –(CH2)s–CN (por ejemplo –CN), alquilo C1–6 (por ejemplo metilo) o Alcoy C1–6 (por ejemplo metoxi).

Se divulga un compuesto en el cual A representa un sistema de anillo monocíclico aromático carbocíclico o heterocíclico que tiene por ejemplo un anillo de 5, 6 o 7 miembros. Se divulga un compuesto en el cual A representa un anillo carbocíclico de 6 miembros. Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo fenilo (es decir un sistema de anillo de la fórmula A1) o un grupo piridilo (es decir un sistema de anillo de la fórmula A2 o A3) opcionalmente sustituido uno o más (por ejemplo 1, 2 o 3) grupos Ra. En una realización aún adicional, A representa un grupo fenilo (es decir un sistema de anillo de la fórmula A1) opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 grupos Ra.

En una realización, A representa fenilo no sustituido o fenilo sustituido con un grupo –(CH2)s–CONRxRy (por ejemplo –CONH2), –(CH2)s–CN (por ejemplo –CN), halógeno (por ejemplo flúor), alquilo C1–6 (por ejemplo metilo), alcanol C1– 6 (por ejemplo –CH2OH) o –ORx (por ejemplo metoxi o –OCH(Me)2).

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo diferente de piridilo o pirazinilo cuando B representa fenilo, piridilo o pirazinilo.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo diferente de pirazinilo.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo diferente de pirimidinilo.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un grupo diferente de piridinilo o pirimidinilo. En una realización adicional, A representa fenilo no sustituido.

Se divulga un compuesto en el cual A representa un sistema de anillo carbocíclico o heterocíclico aromático monocíclico de 6 miembros (por ejemplo piridilo), sustituido por NH–B– (R1)q en la posición 3 o posición 5.

En una realización, A representa fenilo sustituido con NH–B–(R1)q en la posición 3 o posición 5. Cuando A representa fenilo, en una realización NH–B–(R1)q está presente en la posición 3 del fenilo con respecto a la posición de unión a X1.

Se divulga un compuesto en el cual A representa sistema de anillo o heterocíclico monocíclico aromático de 6 miembros (por ejemplo, piridilo), sustituido por NH–B–(R1)q en la posición 5 y además opcionalmente sustituido por un grupo Ra individual en la posición 3.

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en donde Xa se selecciona entre NH, CH, y S; Xb se selecciona de C, N, O, y S; Xc se selecciona de N, y O; Xd se selecciona de C, N, O, y S; Xe se selecciona de C y N y

imagen23representa el punto de unión a NH;

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en donde la línea de puntos –––––– puede representar un enlace sencillo o doble; Xa se selecciona de NH, CH, y S; Xb se selecciona de entre C, N, O, y S; Xc se selecciona de C, S y N; Xd se selecciona de C, N, O, y S; Xe se selecciona de C y N; y representa el punto de unión a NH;

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en donde la línea de puntos –––––– puede representar un enlace sencillo o doble; 10 se selecciona de NH, CH, y S; Xb se selecciona de entre C, N, O, y S; Xc se selecciona de C, N, O, y S; Xd se

selecciona de C, N, O, y S; Xe se selecciona de C y N; y representa el punto de unión a NH. En una realización aún todavía adicional, el grupo heterociclilo de B representa oxadiazolilo, imidazolilo, triazolilo o tiadiazolilo. En una realización adicional, el grupo heterociclilo de B representa triazolilo o tiadiazolilo. En una realización todavía aún adicional, el grupo heterociclilo de B representa tiadiazolilo. 15 En una realización, q representa 0 o 1. Cuando q representa 1, en una realización, R1 representa alquilo C1–6 (por

ejemplo metilo). Cuando q representa 1, en una realización alternativa, R1 representa o –(CH2)s–NRxRy (por ejemplo –NH2). En una realización adicional, q representa 0. Se divulga un compuesto en el cual X5 representa CH o nitrógeno. Se divulga un compuesto en el cual X5 representa CH, nitrógeno o C = O.

20 Se divulga un compuesto en el cual R2 representa un grupo –COORz (por ejemplo, –COOH). En una realización adicional, R2 representa un grupo –CONR7R8.

Se divulga un compuesto en el cual R2 representa un grupo –CORx. En una realización, Rx representa alquilo C1–6 (por ejemplo metilo, etilo o isopropilo) o cicloalquilo C3–8 (por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo o ciclopentilo).

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Se divulga un compuesto en el cual cuando R2 representa un grupo –CORx, Rx representa alquilo C1–6 (por ejemplo metilo, etilo o isopropilo) o cicloalquilo C3–8 (por ejemplo, ciclopropilo, ciclobutilo o ciclopentilo).

Se divulga un compuesto en el cual R6 representa hidrógeno.

Se divulga un compuesto en el cual R6 representa alcoxi (por ejemplo, no alcoxi C1–6 sustituido).

En una realización, R7 y R8 representan ambos hidrógeno o alquilo C1–6 (por ejemplo metilo).

En una realización adicional, uno de R7 y R8 representa hidrógeno y el otro representa alquilo (por ejemplo metilo, etilo o isopropilo) opcionalmente sustituido por un grupo –ORx (por ejemplo, –(CH2)2–O–Me), cicloalquilo C3–8 ( por ejemplo, ciclobutilo) o heterociclilo (por ejemplo, tiofenilo). En una realización adicional, uno de R7 y R8 representa hidrógeno y el otro representa alquilo C1–6 (por ejemplo metilo).

Se divulga un compuesto en el cual R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos forman un anillo heterociclilo que contiene nitrógeno, opcionalmente sustituido por uno o más (por ejemplo 1, 2 o 3) grupos Rb.

En una realización adicional, R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos forma un anillo heterociclilo que contiene nitrógeno, opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 grupos Rb.

Se divulga un compuesto en el cual R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos forman un anillo heterociclilo que contiene nitrógeno, opcionalmente sustituido por uno o más (por ejemplo 1, 2 o 3) grupos Ra.

En una realización adicional, R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos forman un anillo heterociclilo que contiene nitrógeno, opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 grupos Ra.

Se divulga un compuesto en el cual R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos forman un anillo heterociclilo que contiene nitrógeno (por ejemplo azetidinilo o pirrolidinilo) opcionalmente sustituido por uno o más (por ejemplo 1, 2 o 3) grupos Rb (por ejemplo –ORx (por ejemplo –OH), halógeno (por ejemplo flúor), –Y–arilo (por ejemplo –fenilo). En una realización adicional, R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al que están unidos forman un anillo que contiene nitrógeno heterocíclico (por ejemplo azetidina).

En una realización adicional, R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos forman un anillo heterociclilo que contiene nitrógeno (por ejemplo azetidinilo o pirrolidinilo) opcionalmente sustituido por 1, 2 o 3 grupos Rb (por ejemplo –ORx (por ejemplo –OH), halógeno (por ejemplo flúor), –Y–arilo (por ejemplo –fenilo). En una realización adicional, R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual ellos están unidos forman un anillo heterociclilo que contiene nitrógeno (por ejemplo azetidinilo).

En una realización, Y representa –O–(CH2)s– (por ejemplo –O–CH2–).

En una realización, Y y Z representan independientemente un enlace, –CO–(CH2)s–, –COO–, – (CH2)n–, –NRx– (CH2)n–, –(CH2)n–NRx–, –CONRx–, –NRxCO–, –SO2NRx–, –NRxSO2–,–NRxCONRy–, –NRxCSNRy–, –O–(CH2)s, – (CH2)s–O–, S–, –SO o –(CH2)s–SO2–.

En una realización, Y y Z representan independientemente –CO–, –O–(CH2)s– o – NH–(CH2)n– (por ejemplo NH).

En una realización, Y y Z representan independientemente –CO–, –O–(CH2)s– o – NH–(CH2)n–.

En una realización, Z representa un enlace, CO, –(CH2)n– (por ejemplo –CH2–, –(CH2)2 o –(CH2)3) o –O–. En una realización adicional, Z representa –O–. CO o –(CH2)n– (por ejemplo –CH2–). En una realización aún adicional, Z representa –(CH2)n– (por ejemplo –CH2–).

En una realización, Y y Z representan independientemente un enlace.

Se divulga un compuesto en el cual Rb representa independientemente un grupo Ra o un grupo –Y–arilo o –Z– heterociclilo, en donde dichos grupos arilo y heterociclilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o más (por ejemplo 1, 2 o 3) grupos Ra.

En una realización, Rb representa independientemente un grupo Ra o un grupo –Y–arilo o –Z–heterociclilo, en donde dichos grupos arilo y heterociclilo pueden estar opcionalmente sustituidos por 1, 2 o 3 grupos Ra.

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boronato, con grupos funcionales apropiados, pueden reaccionar con los haluros de arilo. Esta transformación, conocida comúnmente como la reacción de Suzuki, ha sido revisada por Rossi et al (2004), Synthesis 15, 2419.

La reacción de Suzuki es llevada a cabo frecuentemente en mezclas de agua y solventes orgánicos. Ejemplos de solventes orgánicos adecuados incluyen tolueno, tetrahidrofurano, 1,4–dioxano, 1,2–dimetoxietano, acetonitrilo, N– metil pirrolidinona, etanol, metanol y dimetilformamida. Típicamente, la mezcla de reacción es sometida a calentamiento, por ejemplo hasta una temperatura por encima de 100 °C. La reacción es llevada a cabo en presencia de una base. Ejemplos de bases adecuadas incluyen carbonato de sodio, carbonato de potasio, carbonato de cesio y fosfato de potasio. Ejemplos de catalizadores adecuados incluyen bis(tri–t–butilfosfina)paladio(0), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0), cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio(II), acetato de paladio(II), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0), bis (triciclohexilfosfina) paladio(0), [1,1’–bis(difenilfosfino)– ferroceno]dicloropaladio(II), diclorobis(tri–o–toluilfosfina)paladio(II), cloruro de 2’–(dimetilamino)–2–bifenilil– paladio(II), complejo de dinorbornilfosfina y complejo de cloruro de 2–(dimetilamino)ferrocen–1–il–paladio(II) y dinorbornilfosfina. En algunos casos pueden añadirse ligandos adicionales, para facilitar la reacción de acoplamiento. Ejemplos de ligandos adecuados incluyen tri–t–butilfosfina, 2,2–bis(difenilfosfino)–1,1–binaftilo, trifenilfosfina, 1,2–bis(difenilfosfino)etano, 1,1’–bis(difenilfosfino)ferroceno, triciclohexilfosfina, 9,9–dimetil–4,5– bis(difenilfosfino)xanteno, 1,3–bis(difenilfosfino)propano, 2–(di–t–butilfosfino)bifenilo, 2–diciclohexilfosfino–2’–(n,n– dimetilamino)–bifenilo, tri–o–tolilfosfina, 2–(diciclohexilfosfino)bifenilo, 2–diciclohexilfosfino–2’,4’,6’–triisopropilbifenilo, tri(2–furil)fosfina, 2–diciclohexilfosfino–2’,6’–dimethoxibifenil y 2–di–tert–butilfosfino–2’,4’,6’–triisopropilbifenilo.

Otros ejemplos de posibles introducciones de grupos funcionales catalizadas por metales en los haluros, son reacciones con reactivos de organo–estaño (la reacción de Stille), con reactivos de Grignard y reacción con nucleófilos de nitrógeno. Una revisión general, y referencias adicionales de estas transformaciones se presentan en ’Palladium Reagents and Catalysts’ [Jiro Tsuji, Wiley, ISBN 0–470–85032–9] y Handbook of Organopalladium Chemistry for Organic Synthesis [volumen 1, editado por Ei–ichi Negishi, Wiley, ISBN 0–471–31506–0].

En particular, una reacción que puede ser utilizada es la reacción de tipo Buchwald–Hartwig (véase Review: J. F. Hartwig (1998), Angew. Chem. Int. Ed. 37, 2046–2067) que suministra un medio para síntesis catalizada por paladio de arilaminas. Los materiales de partida son haluros o pseudohaluros de arilo (por ejemplo triflatos) y aminas primarias o secundarias, en presencia de una base fuerte tal como tert–butóxido de sodio y un catalizador de paladio tal como tris–(dibencilidenacetona)–dipaladio (Pd2(dba)3), o 2,2’–bis(difenilfosfino)–1’1–binaftilo (BINAP).

En particular, para la síntesis de compuestos de la fórmula (I) los haluros de arilo pueden reaccionar con ácido 3– aminobencenoborónico usando un catalizador de metal apropiado, por ejemplo cloruro de bis (trifenilfosfina)paladio(II) para formar el precursor amino para formaciones de enlace de amina secundaria.

Esta secuencia de reacciones delineada en el esquema 1A puede ser alternada como se delinea en el esquema 1B

o 1C.

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Esquema 1B

En el esquema 1B, se añade primero yodo al metiléster de ácido imidazo[1,2–a]piridina–7– carboxílico y se ejecuta la reacción de acoplamiento catalizada por metal, antes de la conversión del metiléster al grupo amida R2.

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El haluro puede ser convertido al nitrilo usando CuCN en N–metilpirrolidina bajo reflujo (por ejemplo como se describe en Funhoff, D.J.H et al, Angew. Chem. Int. Ed. 1986, 25(8), 724) o CuCN en DMF, el cual es entonces hidrolizado con un hidróxido de metal alcalino tal como hidróxido de potasio, para dar el ácido y/o la amida. Donde se forma una mezcla de ácido y amida, ellos pueden ser separados de acuerdo con métodos estándar tales como cromatografía. El ácido puede entonces ser acoplado con una amina de la fórmula bajo condiciones típicas de acoplamiento de amida, del tipo descrito arriba parar el compuesto de la fórmula (I).

De modo alternativo, el haluro puede ser convertido en el ácido usando n–butillitio o magnesio y subsiguiente reacción del intermedio con un agente de carbonilación tal como CO2, para producir el ácido carboxílico para uso como un compuesto de la fórmula (I) o para conversión en la amida o éster. Puede tenerse acceso a la amida directamente desde el haluro bien sea a través de ion transmetalato con nBuLi y subsiguiente detección de la reacción con un isocianato apropiado (Pansegran, P.D. et al, JACS, 1988, 110, 7178) o vía carbonilación con monóxido de carbono y en presencia de la amina apropiada y [P,P’–1,3–bis(di–i–propilfosfino)propano][P–1,3– bis(di–isopropil–fosfino)propano]paladio (0) catalítico, en un solvente tal como xileno, con calentamiento (por ejemplo a 150 °C) (por ejemplo como se describe en Ben–David, Y. et al, JACS, 1989, 111(23), 8742).

Adicionalmente, el haluro puede ser convertido usando monóxido de carbono y catalizador de paladio hasta el aldehído, el cual puede entonces ser oxidado hasta el ácido carboxílico usando un agente oxidante, tal como permanganato o ácido crómico, y entonces soportar conversión a la amida usando condiciones estándar de acoplamiento descritas previamente o ser transformado en el éster. El haluro puede ser convertido también directamente en el éster usando monóxido de carbono, catalizador de paladio y el alcohol apropiado. Este puede entonces ser un compuesto de la fórmula (I) o hidrolizado hasta el ácido, o hidrolizado entonces hasta el ácido y convertido en la amida, o convertido directamente en la amida.

El haluro podría también ser convertido directamente en la dimetilamida usando trimetilsilildimetilamida y haciéndola reaccionar con bis(tri–tbutilfosfina)paladio y calentando a 100 °C como se describe en Cunico, R.F., Organic Letters, 2002, 4 (24), 4357.

Otras conversiones de bromuros aromáticos hasta aldehídos aromáticos pueden tener lugar usando la síntesis de carbonilo de Stille (Stille, JACS, 1983, 105, 7175), o la síntesis de aldehído de Bodroux–Chichibabin descrita en Einchorn, J, Tetrahedron Lett., 1983, 27, 1791. El aldehído puede entonces ser oxidado hasta el ácido y convertido en una amida, como se describió arriba.

2–amino–5–bromopiridinas con varios grupos funcionales o los bromuro aromáticos pueden ser convertidos hasta el aldehído vía formación de tipo Grignard y detención de la reacción con DMF (Misra, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2004, 14(11), 2973) o ellos pueden ser convertidos hasta los ésteres de etilo vía carbonilación estándar con paladio en presencia de alcohol (Cheung, M. Heterocycles, 2001, 55, 1583).

De modo alternativo, la 4–metil–piridin–2–ilamina puede ser usada en la reacción de transformación en ciclo para dar el anillo 7–metil–imidazo[1,2–a]piridina, el cual alternativamente está disponible comercialmente. El metilo puede entonces ser oxidado hasta el aldehído usando la reacción de Etard o ácido carboxílico usando un agente oxidante tal como permanganato. La reacción de Étard involucra la oxidación directa de un grupo metilo unido de modo aromático o heterocíclico a un aldehído, usando cloruro de cromilo.

De modo alternativo, el etilimidazo[1,2–a]piridina–7–carboxilato, el cual está disponible comercialmente, puede ser usado como el punto de partida para la conversión en amida o adiciones de yodo y reacciones catalizadas por metal.

Cetonas, donde R2 es CORx, pueden ser sintetizadas a partir del correspondiente ácido carboxílico vía el producto intermedio ácido N,O–dimetilhidroxámico (amida de vid) o el ácido N–metil,O–t–butil hidroxámico (amida tipo vid) y subsiguiente reacción con la reacción apropiada de Grignard (Labeeuw, O. et al Tetrahedron Lett 2004, 45 (38), 7107–7110.). La formación de derivado hasta la correspondiente amida de vid usa clorhidrato de N,O– dimetilhidroxilamina, como se describe en L. De Luca, G. Giacomelli, M. Taddei, J. Org. Chem., 2001, 66, 2534– 2537. La conversión de la amida de vid estándar aromática hasta una metilcetona requiere metilen–trifenil– lambda*5*–fosfano en un solvente tal como tetrahidrofurano como se reporta en Murphy, J. A. et al Org Lett 2005, 7 (7), 1427–1429.

De modo alternativo, pueden prepararse cetonas a partir del cloruro usando acoplamiento de viniléter estaño (tipo Stille) con compuestos haloaromáticos o haloheteroaromáticos. Como un ejemplo, la acetilcetona puede ser preparada calentando tributil–(1–etoxi–vinil)–estannano, cloruro de litio y tetrakis(trifenilfosfina)–paladio(0) en un solvente tal como acetonitrilo o vía una reacción tipo Heck reportada en Mo, J. Angew Chem, Int Ed, 2006, 45(25), 4152.

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Esquema 5A

Un esquema particular de síntesis para la preparación de pirazolo[1,5–a]pirimidinas disustituidas es delineado en el esquema 5B. El anillo de pirazolopirimidina es formado por reacción de un malonaldehído sustituido como fragmento VII con aminopirazoles. El malonaldehído sustituido puede ser sustituido con metilo, o con un grupo funcional latente por ejemplo un halógeno como en 2–bromo–malonaldehído, lo cual permite la posterior formación del derivado en esta posición como en el esquema mostrado abajo, usando las reacciones delineadas aquí.

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Esquema 5B

10 En la reacción de formación de ciclo, el malonaldehído en solvente es añadido a 3–aminopirazol seguido por un ácido, por ejemplo ácido acético glacial. Los reactivos son entonces transformados en ciclo por calentamiento bajo reflujo. El compuesto de la fórmula (I) puede ser sintetizado entonces usando el proceso oxidativo de acoplamiento delineado aquí.

Los compuestos de la fórmula (VI) y (VII) son compuestos conocidos o pueden ser preparados por analogía con

15 métodos conocidos. Muchos pirazoles de la fórmula (VI) están disponibles comercialmente. De modo alternativo, ellos pueden ser obtenidos de métodos conocidos por ejemplo de cetonas en un proceso descrito en EP308020 (Merck), o los métodos discutidos por Schmidt en Helv. Chim. Acta. (1956), 39, 986–991 y Helv. Chim. Acta. (1958), 41, 1052–1060 o por conversión de los pirazoles de la fórmula (VI) o el compuesto de la fórmula (I) donde Ra es hidrógeno, halógeno, nitro, éster, o amida hasta el grupo funcional R1 deseado, por métodos estándar conocidos por

R1

20 una persona diestra en la técnica. Por ejemplo, donde es halógeno, podrían ejecutarse reacciones de acoplamiento con química de estaño o paladio, como se describe aquí.

De modo alternativo, el ácido pirazolo [1,5–a] pirimidina–6–carboxílico o aldehído están comercialmente disponibles y pueden ser usados en las reacciones descritas aquí para sintetizar pirazolo[1,5–a]pirimidinas disustituidas.

Pirazolo[1,5–a]pirazinas (ejemplo de referencia)

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Esquema 8

Se apreciará que al anillo bicíclico resultante en el esquema 8 pueden introducirse grupos funcionales mediante halogenación o introducción de grupos alquilo y convertirse a R2 como se describe aquí.

Podría prepararse un producto intermedio con más grupos funcionales, por ejemplo como se delinea en el esquema 9A con base en los métodos descritos en US 06723735.

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Esquema 9A

Como se describe aquí, los haluro de arilo similares a los mostrados arriba pueden soportar un rango de reacciones catalizadas por metal, para generar los compuestos requeridos de la fórmula (I).

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Esquema 9B De modo alternativo, ellos podrían ser sintetizados como se delinea arriba en el esquema 9B. Imidazo[4,5–c]piridinas (ejemplo de referencia) Puede construirse un sistema de anillo 3–aril–3H–imidazo[4,5–c]piridina por reacción de 3H–imidazo[4,5–c]piridina

15 Con un yoduro de arilo como se discute en Biorg. Med. Chem. Lett. (2004), 14, 5263 (esquema 10).

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Esquema 10

Se reporta que los productos regioisoméricos pueden ser separados por cromatografía. Abajo se ilustra una posible ruta para elaborar adicionalmente este material para dar el patrón deseado de sustitución (esquema 11).

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Esquema 17

Alternativamente, podría introducirse directamente yodo en la 7–cloro–6H–imidazo[1,2–c]pirimidin–5–ona hasta el producto intermedio de abajo, para uso en las reacciones descritas aquí (esquema 18).

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Esquema 18

Adicionalmente, otros oxo–heterociclos podrían ser sintetizados a partir del derivado apropiado de cloro, por hidrólisis. El compuesto protegido estaría sujeto a hidrólisis básica para suministrar la piridona. Esto podría ser ejecutado con NaOH (o NaOH/ H2O2) en H2O/MeOH o H2O/dioxano siguiendo procedimientos descritos en la

10 literatura para la hidrólisis de cloropiridinas (por ejemplo Australian J. Chem. (1984), 37(12), 2469–2477).

Imidazo [1,2–b]piridazina (ejemplo de referencia)

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Esquema 19

La síntesis del núcleo de imidazo[1,2–b]piridazina puede ser ejecutada como se describe en el esquema 19 usando 15 un derivado de piridazin–3–ilamina.

Muchos compuestos aromáticos bicíclicos o monocíclicos sustituidos con metilo, ácido carboxílico, éster carboxílico

o haluro son disponibles comercialmente. Por eso, estos y otros heterociclos pueden ser sintetizados directamente de los compuestos bicíclicos sustituidos con metilo, ácido carboxílico, éster carboxílico o haluro o de los compuestos monocíclicos aromáticos sustituidos con metilo, ácido carboxílico, éster carboxílico o haluro, usando las reacciones

20 de formación de ciclo descritas aquí.

Otros heterociclos pueden ser sintetizados usando reacciones bien conocidas, como se describe por ejemplo en Comprehensive Heterocyclic Chemistry I (editado por Katritzky, A.R. y Rees, C.W. (1982) Elsevier) y Comprehensive Heterocyclic Chemistry II (editado por Katritzky, A.R., Rees, C.W. y Scriven, E.F.V. (1996) Elsevier, ISBN 0–08– 042072–9).

25 En muchas de las reacciones descritas arriba, puede ser necesario proteger uno o más grupos para prevenir que tenga lugar la reacción en una ubicación no deseable de la molécula. En Protective Groups in Organic Synthesis

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o una forma protegida del mismo, con hidrato de hidrazina y luego cilcización; o

(iii) la reacción de un compuesto de la fórmula (II):

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5 o una forma protegida del mismo, en donde Y es un grupo que se puede convertir en una amida, por ejemplo, de metilo, ácido carboxílico, éster carboxílico, haluro;

y luego convirtiéndolo a una amida;

y después de ello removiendo cualquier grupo protector presente;

en donde X1–5, A, B, R1 y R2 son como se define aquí; y opcionalmente después de ello convirtiendo un compuesto 10 de la fórmula (I) en otro compuesto de la fórmula (I).

De acuerdo con un aspecto adicional, se suministra un nuevo producto químico intermedio como se define aquí.

Sales, solvatos o derivados de ellos farmacéuticamente aceptables

En esta sección, como en todas las otras secciones de esta solicitud, a menos que el contexto indique de otro modo, las referencias a la fórmula (I) incluyen referencias a todos los otros subgrupos, preferencias y ejemplos de ellos 15 como se define aquí.

A menos que se especifique de otro modo, una referencia a un compuesto particular incluye también formas iónicas, sales, solvatos, isómeros, tautómeros, N–óxidos, ésteres, promedicamentos, isótopos y formas protegidas de ellos, por ejemplo, como se discute abajo; preferiblemente, las formas iónicas, o sales o tautómeros o isómeros o N– óxidos o solvatos de ellos; y más preferiblemente, las formas iónicas, o sales o tautómeros o solvatos o formas

20 protegidas de ellos. Muchos compuestos de la fórmula (I) pueden existir en la forma de sales, por ejemplo sales de adición ácida o, en ciertos casos sales de bases orgánicas e inorgánicas tales como sales de carboxilato, sulfonato y fosfato. Todas estas sales están dentro del alcance de esta invención, y las referencias a los compuestos de la fórmula (I) incluyen la forma salina de los compuestos.

Las sales de la presente invención pueden ser sintetizadas a partir del compuesto progenitor que contiene una mitad 25 básica o ácida, mediante métodos químicos convencionales tales como métodos descritos en Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3–90639–026–8,

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Como una alternativa a la cromatografía quiral, los isómeros ópticos pueden ser separados formando sales diastereoisoméricas con ácidos quirales tales como ácido (+)–tartárico, ácido (–)–piroglutámico, ácido (–)–di–toluil– L–tartárico, ácido (+)–mandélico, ácido (–)–málico, y ácido (–)–alcanforsulfónico, separando los diastereoisómeros mediante cristalización preferencial, y luego disociando las sales para dar los enantiómeros individuales de la base libre.

Donde existen compuestos de la fórmula (I) como dos o más formas isoméricas ópticas, un enantiómero en un par de enantiómeros puede exhibir ventajas sobre el otro enantiómero, por ejemplo, en términos de actividad biológica. Así, en ciertas circunstancias, puede ser deseable usar como un agente terapéutico sólo uno de un par de enantiómeros, o sólo uno de una pluralidad de diastereoisómeros. De acuerdo con ello, la invención suministra composiciones que contienen un compuesto de la fórmula (I) que tiene uno o más centros quirales, en donde por lo menos 55% (por ejemplo por lo menos 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95%) del compuesto de la fórmula

(I): está presente como un isómero óptico individual (por ejemplo enantiómero o diastereoisómero). En una realización general, 99% o más (por ejemplo sustancialmente todo) de la cantidad total del compuesto de la fórmula

(I): puede estar presente como un isómero óptico individual (por ejemplo enantiómero o diastereoisómero).

Los compuestos de la invención incluyen compuestos con una o más sustituciones isotópicas, y una referencia a un elemento particular incluye dentro de su alcance todos los isótopos del elemento. Por ejemplo, una referencia a hidrógeno incluye dentro de su alcance 1H, 2H (D), y 3H (T). Similarmente, las referencias a carbono y oxígeno incluyen dentro de su alcance respectivamente 12C, 13C y 14C y 16O y 18O.

Los isótopos pueden ser radioactivos o no radioactivos. En una realización de la invención, los compuestos contienen isótopos no radioactivos. Tales compuestos son preferidos para uso terapéutico. En otra realización, sin embargo, el compuesto puede contener uno más radioisótopos. Los compuestos que contienen tales radioisótopos pueden ser útiles en un contexto diagnóstico.

Los ésteres tales como ésteres de ácidos carboxílicos y aciloxi ésteres de los compuestos de la fórmula (I) que portan un grupo ácido carboxílico o un grupo hidroxilo son abarcados también por la fórmula (I). En una realización de la invención, la fórmula (I) incluye dentro de su alcance ésteres de compuestos de la fórmula (I) que portan un grupo ácido carboxílico o un grupo hidroxilo. En otra realización de la invención, la fórmula (I) no incluye dentro de su alcance ésteres de compuestos de la fórmula (I) que portan un grupo ácido carboxílico o un grupo hidroxilo. Ejemplos de ésteres son compuestos que contienen el grupo –C(=O)OR, en donde R es un sustituyente éster, por ejemplo un grupo alquilo C1–7, un grupo heterociclilo C3–20, o un grupo arilo C5–20, preferiblemente un grupo alquilo C1–7. Los ejemplos particulares de grupos éster incluyen, pero no están limitados a, –C (=O) OCH3, – C(=O)OCH2CH3, –C(=O)OC(CH3)3, y – C(=O)OPh. Ejemplos de grupos aciloxi (ésteres inversos) están representados por –OC(=O)R, en donde R es un sustituyente aciloxi, por ejemplo, un grupo alquilo C1–7, un grupo heterociclilo C3–20, o un grupo arilo C5–20, preferiblemente un grupo alquilo C1–7. Ejemplos particulares de grupos aciloxi incluyen, pero no están limitados a, –OC(=O)CH3 (acetoxi), –OC(=O)CH2CH3, –OC(=O)C(CH3)3, –OC(=O)Ph, y –OC(=O)CH2Ph.

También son abarcadas por la fórmula (I) las formas polimórficas de los compuestos, solvatos (por ejemplo hidratos), complejos (por ejemplo complejos de inclusión o clatratos con compuestos tales como ciclodextrinas, o complejos con metales) de los compuestos, y promedicamentos de los compuestos. Se entiende por "promedicamentos" por ejemplo cualquier compuesto que es convertido in vivo en un compuesto biológicamente activo de la fórmula (I).

Por ejemplo, algunos promedicamentos son ésteres del compuesto activo (por ejemplo un éster metabólicamente lábil y fisiológicamente aceptable). Durante el metabolismo, el grupo éster (–C (=O) OR) es escindido para dar el medicamento activo. Tales ésteres pueden ser formados por esterificación, por ejemplo, de cualquiera de los grupos ácido carboxílico (–C (=O)OH) en el compuesto progenitor con, donde sea apropiado, protección previa de cualquier otro grupo reactivo presente en el compuesto progenitor, seguido por desprotección, si se requiere.

Ejemplos de tales ésteres metabólicamente lábiles incluyen aquellos de la fórmula –C(=O)OR en donde R es:

alquilo C1–7 (por ejemplo –Me, –Et, –nPr, –iPr, –nBu, –sBu, –iBu, –tBu);

Aminoalquilo C1–7 (por ejemplo aminoetilo; 2–(N,N–dietilamino)etilo; 2–(4–morfolino)etilo); y

aciloxi alquilo C1–7 (por ejemplo aciloximetilo; aciloxietilo; pivaloiloximetilo; acetoximetilo; 1–acetoxietilo; 1–(1– metoxi–1–metilo)etilo–carboniloxietilo; 1–(benzoiloxi)etilo; isopropoxi–carboniloximetilo;

1–isopropoxi–carboniloxietilo; ciclohexil–carboniloximetilo; 1–ciclohexilcarboniloxietilo; ciclohexiloxi– carboniloximetilo;

1–ciclohexiloxi–carboniloxietilo; (4–tetrahidropiraniloxi) carboniloximetilo; 1–(4–tetrahidropiraniloxi)carboniloxietilo;

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Batchelor et al. (Batchelor et al., 2007, Cancer Cell, 11(1), 83–95) suministran evidencia de normalización de vasos sanguíneos de glioblastoma en pacientes tratados con un inhibidor de receptor de tirosina quinasa pan–VEGF, AZD2171, en un estudio de fase 2. El razonamiento para usar AZD2171 se basó parcialmente en los resultados que muestran un descenso en la perfusión y densidad de vasos en un modelo in vivo de cáncer de mama (Miller et al., 2006, Clin. Cancer Res. 12, 281–288). Además, usando un modelo de glioma ortotópico, se había identificado previamente la ventana óptima de tiempo para entregar anticuerpo anti–VEGFR2 para alcanzar un efecto sinérgico con radiación. Durante la ventana de normalización, hubo oxigenación mejorada, aumento en la cobertura de pericitos, y sobreregulación de angiopoyetina–1 que conduce a un descenso en la presión intersticial y permeabilidad dentro del tumor (Winkler et al., 2004, Cancer Cell 6, 553–563). La ventana de normalización puede ser determinada cuantitativamente usando imágenes de resonancia magnética (MRI) usando eco de gradiente de MRI, eco de giro, y mejora en el contraste para medir el volumen de sangre, tamaño relativo de vaso, y permeabilidad vascular.

Se mostró que el progreso en el tratamiento con AZD2171 estuvo asociado con un incremento en CECs, SDF1, y FGF2, mientras el progreso después de las interrupciones de medicamentos tuvo correlación con incrementos en células progenitoras circulantes (CPCs) y niveles de plasma FGF2. El incremento en niveles de plasma de SDF1 y FGF2 tuvo correlación con mediciones MRI, demostró un incremento en la densidad relativos de vasos y tamaño. Así, la determinación MRI de normalización de vasos en combinación con biomarcadores circulantes, suministra un medio efectivo para evaluar la respuesta a los agentes antiangiogénicos.

PDGFR

Un tumor maligno es el producto de la proliferación celular no controlada. El crecimiento celular es controlado por un delicado balance entre factores de promoción de crecimiento e inhibición de crecimiento. En tejido normal, la producción y actividad de estos factores da como resultado el crecimiento de células diferenciadas de una manera controlada y regulada, que mantiene la integridad y funcionamiento normal del órgano. La célula maligna ha evadido este control; el balance natural es perturbado (a través de una variedad de mecanismos) y desregulado, ocurre crecimiento celular aberrante. Un factor de crecimiento importante en el desarrollo del tumor es el factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF) que incluye una familia de factores de crecimiento de péptido que da señal a través de receptores tirosina quinasa de la superficie celular (PDGFR) y estimula varias funciones celulares incluyendo crecimiento, proliferación y diferenciación. Se ha demostrado la expresión de PDGF en un número de diferentes tumores sólidos incluyendo glioblastomas y carcinomas de próstata. El inhibidor de tirosina quinasa imatinib mesilato, que tiene el nombre químico 4–[(4–metil–1–piperazinil)metil]–N–[4–metil–3–[[4–(3–piridinil)– 2– ilpiridinil]amino]–fenil]benzamida metanosulfonato, bloquea la actividad de la oncoproteína Bcr–Abl y el kit–c receptor de la tirosina quinasa de superficie celular, y como tal está aprobado para el tratamiento de leucemia mieloide crónica y tumores gastrointestinales estromales. Imatinib mesilato es también un potente inhibidor de quinasa de PDGFR y está siendo evaluado actualmente para el tratamiento de leucemia mielomonocítica crónica y glioblastoma multiforme, basado en evidencia en estas enfermedades de mutaciones de activación en PDGFR. Adicionalmente, sorafenib (BAY 43–9006) que tiene el nombre químico 4–(4–(3–(4–cloro–3 (trifluorometil)fenil)ureido)fenoxi)–N2– metilpiridina–2–carboxamida, tiene como objetivo la ruta de señalización Raf para inhibir la proliferación celular y las cascadas de señalización VEGFR/PDGFR para inhibir la angiogénesis de tumor. Sorafenib está siendo investigado para el tratamiento de un número de cánceres incluyendo cáncer de hígado y riñón.

Existen condiciones que son dependientes de la activación de PDGFR tales como síndrome hipereosinofílico. La activación de PDGFR está asociada también con otras malignidades, que incluyen leucemia mielomonocítica crónica (CMML). En otro desorden, dermatofibrosarcoma protuberans, un tumor infiltrativo de la piel, una transposición recíproca que involucra la codificación de gene de ligando de PDGF–B da como resultado secreción constitutiva del ligando quimérico y activación del receptor. Imatinib tiene lo que es un inhibidor conocido de PDGFR, tiene actividad contra todas estas tres enfermedades.

Ventajas de un inhibidor selectivo

El desarrollo de inhibidores de quinasa de FGFR con un perfil de selectividad diferenciada suministra una nueva oportunidad para usar estos agentes objetivo en subgrupos de pacientes cuya enfermedad es conducida por desregulación de FGFR. Los compuestos que exhiben acción inhibidora reducida sobre quinasas adicionales, particularmente VEGFR2 y PDGFR–beta, ofrecen la oportunidad de tener un efecto lateral o perfil de toxicidad diferenciados y como tal permiten un tratamiento más efectivo de estas indicaciones. Los inhibidores de VEGFR2 y PDGFR–beta están asociados con toxicidades tales como hipertensión o edema respectivamente. En el caso de inhibidores de VEGFR2, este efecto hipertensivo es frecuentemente limitante de la dosificación, puede ser contraindicado en ciertas poblaciones de pacientes y requiere gestión clínica.

Actividad biológica y usos terapéuticos

Los compuestos de la invención, y subgrupos de ellos, tienen actividad inhibidora o moduladora de receptor de factor de crecimiento de fibroblasto (FGFR) y/o actividad inhibidora o moduladora de receptor de factor de

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Se prevé también que los compuestos de la invención serán útiles en el tratamiento de otras condiciones que resultan de desórdenes en la proliferación, tales como diabetes mellitus tipo II o no dependiente de insulina, enfermedades autoinmunes, trauma de cabeza, infarto, epilepsia, enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Alzheimer, enfermedad motorneurona, parálisis supranuclear progresiva, degeneración corticobasal y enfermedad de Pick, por ejemplo enfermedades autoinmunes y enfermedades neurodegenerativas.

Un subgrupo de estados y condiciones de enfermedad donde se prevé que los compuestos de la invención serán útiles, consiste en enfermedades inflamatorias, enfermedades cardiovasculares y curación de heridas.

Se sabe también que FGFR, VEGFR y PDGFR juegan un papel en apoptosis, angiogénesis, proliferación, diferenciación y transcripción y por ello los compuestos de la invención podrían también ser útiles en el tratamiento de las siguientes enfermedades diferentes a cáncer; enfermedades inflamatorias crónicas, por ejemplo lupus sistémico eritematoso, glomerulonefritis autoinmune mediada, artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad inflamatoria de intestino, diabetes mellitus autoinmune, reacciones de hipersensibilidad a eczema, asma, COPD, rinitis, y enfermedad del tracto respiratorio superior; enfermedades cardiovasculares por ejemplo hipertrofia cardíaca, restenosis, aterosclerosis; desórdenes neurodegenerativos, por ejemplo enfermedad de Alzheimer, demencia relacionada con el sida, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrópica, retinitis pigmentosa, atrofia muscular espinal y degeneración del cerebelo; glomerulonefritis; síndromes mielodisplásicos, infarto de miocardio asociado con daño isquémico, ataque fulminante y daño con reperfusión, arritmia, aterosclerosis, enfermedades del hígado inducidas por toxina o relacionadas con alcohol, enfermedades hematológicas, por ejemplo, anemia crónica y anemia aplásica; enfermedades degenerativas del sistema musculoesquelético, por ejemplo, osteoporosis y artritis, rinosinusitis sensible a la aspirina, fibrosis quística, esclerosis múltiple, enfermedades del riñón y dolor por cáncer.

Adicionalmente, las mutaciones de FGFR2 están asociadas con varias anormalidades severas en el desarrollo del esqueleto humano y así los compuestos de la invención podrían ser útiles en el tratamiento de anormalidades en el desarrollo del esqueleto humano, incluyendo osificación anormal de las suturas craneales (craneosinostosis), síndrome de Apert (AP), síndrome de Crouzon, síndrome de Jackson–Weiss, síndrome de cutis gyrate de Beare– Stevenson, y síndrome de Pfeiffer.

Se prevé además que los compuestos de la invención que tienen actividad inhibidora FGFR tal como FGFR2 o FGFR3, serán particularmente útiles en el tratamiento o prevención de enfermedades del esqueleto. Son enfermedades particulares del esqueleto acondroplasia o dwarfismo tanatofórico (también conocido como displasia tanatofórica).

Se prevé además que el compuesto de la invención que tiene actividad inhibidora de FGFR tal como FGFR1, FGFR2 o FGFR3, será particularmente útil en el tratamiento o prevención en patologías en las cuales la fibrosis progresiva es un síntoma. Las condiciones fibróticas en las cuales los compuestos de la invención pueden ser útiles en el tratamiento incluyen enfermedades que exhiben anormal o excesiva deposición de tejido fibroso, por ejemplo en cirrosis de hígado, glomerulonefritis, fibrosis pulmonar, fibrosis sistémica, artritis reumatoide, así como el proceso natural de curación de heridas. En particular, los compuestos de la invención pueden ser también útiles en el tratamiento de fibrosis pulmonar, en particular en fibrosis idiopática pulmonar.

La sobreexpresión y activación de FGFR y VEGFR en vasculatura asociada con tumor ha sugerido también un papel para los compuestos de la invención, en la prevención e interrupción del inicio de angiogénesis de tumor. En particular, los compuestos de la invención pueden ser útiles en el tratamiento de cáncer, metástasis, leucemias tales como CLL, enfermedades oculares tales como degeneración macular relacionada con la edad, en particular forma húmeda de degeneración macular relacionada con la edad, retinopatías isquémicas proliferativas tales como retinopatía de condición prematura (ROP) y retinopatía diabética, artritis reumatoide y hemangioma.

Puesto que los compuestos de la invención inhiben PDGFR, ellos pueden también ser útiles en el tratamiento de un número de tumores y tipos de leucemia, incluyendo glioblastomas tales como glioblastoma multiforme, carcinomas de próstata, tumores gastrointestinales estromales, cáncer de hígado, cáncer de riñón, leucemia mieloide crónica, leucemia mielomonocítica crónica (CMML) así como síndrome hipereosinofílico, un raro desorden hematológico proliferativo y dermatofibrosarcoma protuberans, un tumor infiltrativo de la piel.

La actividad de los compuestos de la invención como inhibidores de FGFR1–4, VEGFR y/o PDGFR A/B puede ser medida usando los ensayos expuestos en los ejemplos abajo, y el nivel de actividad exhibida por un compuesto dado puede ser definido en términos del valor IC50. Los compuestos preferidos de la presente invención son compuestos que tienen un valor IC50 inferior a 1mM, más preferiblemente inferior a 0.1 µM.

La invención suministra compuestos que tienen actividad inhibidora o moderadora de FGFR, y que se prevé serán útiles en la prevención o tratamiento de estados de enfermedad o condiciones mediadas por quinasas de FGFR.

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En una realización, se suministra un compuesto como se define aquí para uso en terapia. En una realización adicional, se suministra un compuesto como se define aquí, para uso en la profilaxis o tratamiento de un estado de enfermedad o condición mediada por una quinasa de FGFR.

Así, por ejemplo se prevé que los compuestos de la invención serán útiles en el alivio o reducción de incidencia de cáncer. Por ello, en una realización adicional, se suministra un compuesto como se define aquí para uso en la profilaxis o tratamiento de cáncer.

De acuerdo con ello, en un aspecto, la invención suministra el uso de un compuesto para la manufactura de un medicamento para la profilaxis o tratamiento de un estado de enfermedad o condición mediada por una quinasa de FGFR, donde el compuesto tiene la fórmula (I) como se define aquí.

En una realización, se suministra el uso de un compuesto como se define aquí para la manufactura de un medicamento para la profilaxis o tratamiento de un estado de enfermedad o condición, como se describe aquí.

En una realización adicional, se suministra el uso de un compuesto como se define aquí para la manufactura de un medicamento para la profilaxis o tratamiento de cáncer.

De acuerdo con ello, la invención suministra, entre otros:

Un compuesto de la fórmula (I) para uso en un método para la profilaxis o tratamiento de un estado de enfermedad o condición mediada por una quinasa de FGFR, método que comprende la administración a un sujeto que lo requiere, de un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí.

En una realización, se suministra un compuesto de la fórmula (I) para uso en un método para la profilaxis o tratamiento de un estado de enfermedad o condición como se describe aquí, método que comprende la administración a un sujeto que lo requiere, de un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí.

En una realización adicional, se suministra un compuesto de la fórmula (I) para uso en un método para la profilaxis o tratamiento de cáncer, método que comprende la administración a un sujeto que lo requiere, de un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí.

Un compuesto de la fórmula (I) para uso en un método para el alivio o reducción de incidencia de un estado de enfermedad o condición mediada por una quinasa de FGFR, método que comprende la administración a un sujeto que lo requiere, de un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí.

Un compuesto de la fórmula (I) para uso en un método de inhibición de una quinasa de FGFR, método que comprende poner en contacto la quinasa con un compuesto inhibidor de quinasa de la fórmula (I) como se define aquí.

Un compuesto de la fórmula (I) para uso en un método para la modulación de un proceso celular (por ejemplo división celular) inhibiendo la actividad de una quinasa de FGFR, usando un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí.

Un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí, para uso como un modulador de un proceso celular (por ejemplo división celular), inhibiendo la actividad de una quinasa de FGFR.

Un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí para uso como un modulador (por ejemplo inhibidor) de FGFR.

El uso de un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí, para la manufactura de un medicamento para la modulación (por ejemplo inhibición) de la actividad de FGFR.

Uso de un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí, en la manufactura de un medicamento para la modulación de un proceso celular (por ejemplo división celular) inhibiendo la actividad de una quinasa de FGFR.

El uso de un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí, para la manufactura de un medicamento para profilaxis o tratamiento de una enfermedad o condición caracterizada por sobrerregulación de una quinasa de FGFR (por ejemplo FGFR1 o FGFR2 o FGFR3 o FGFR4).

El uso de un compuesto de la fórmula (I) como se define aquí, para la manufactura de un medicamento para la profilaxis o tratamiento de un cáncer, donde el cáncer es uno que se caracteriza por la sobreregulación de una quinasa de FGFR (por ejemplo FGFR1 o FGFR2 o FGFR3 o FGFR4).

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Así, el recubrimiento puede ser seleccionado para que se degrade bajo ciertas condiciones de pH dentro del tracto gastrointestinal, liberando así de modo selectivo el compuesto en el estómago o en el íleo o duodeno.

En lugar de, o adicionalmente a, un recubrimiento, el medicamento puede ser presentado en una matriz sólida que incluye un agente de control de liberación, por ejemplo un agente de retardo de liberación que puede ser adaptado para liberar de manera selectiva el compuesto bajo condiciones de acidez o alcalinidad variables en el tracto gastrointestinal. De modo alternativo, el material de la matriz o recubrimiento de retardo de liberación puede tomar la forma de un polímero erosionable (por ejemplo un polímero de anhídrido maleico) que es erosionado de manera sustancialmente continua, a medida que la forma de dosificación pasa a través del tracto gastrointestinal. Como una alternativa adicional, el compuesto activo puede ser formulado en un sistema de entrega que suministra control osmótico de la liberación del compuesto. las formulaciones de liberación osmótica y otra liberación retrasada o liberación sostenida pueden ser preparadas de acuerdo con métodos bien conocidos por aquellos diestros en la técnica.

Las composiciones farmacéuticas incluyen desde aproximadamente 1% hasta aproximadamente 95%, preferiblemente desde aproximadamente 20% hasta aproximadamente 90% de ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden estar, por ejemplo, en forma de dosificación unitaria, tal como en la forma de ampollas, viales, supositorios, grageas, tabletas o cápsulas.

Las composiciones farmacéuticas para administración oral pueden ser obtenidas combinando el ingrediente activo con vehículos sólidos, si se desea formando gránulos de una mezcla resultante, y procesando la mezcla, si se desea o es necesario, después de la adición de los excipientes apropiados, hasta formar tabletas, núcleos de grageas o cápsulas. Es posible también incorporarlas dentro de vehículos plásticos que permitan que los ingredientes activos se difundan o sean liberados en cantidades medidas.

Los compuestos de la invención pueden ser formulados también como dispersiones sólidas. Las dispersiones sólidas son fases dispersas de manera homogénea extraordinariamente finas, de dos o más sólidos. Las soluciones sólidas (sistemas molecularmente dispersos), un tipo de dispersión sólida, son bien conocidas para uso en la tecnología farmacéutica (véase (Chiou y Riegelman (1971), J. Pharm. Sci., 60, 1281–1300) y son útiles para incrementar las velocidades de disolución e incrementar la biodisponibilidad de medicamentos con poca solubilidad en agua.

Esta invención suministra también formas sólidas de dosificación que incluyen la solución sólida descrita arriba. Las fórmulas sólidas de dosificación incluyen tabletas, cápsulas y tabletas masticables. Los excipientes conocidos pueden ser mezclados con la solución sólida para suministrar la forma deseada de dosificación. Por ejemplo, una cápsula puede contener la solución sólida mezclada con (a) un agente de desintegración y un lubricante, o (b) un agente de desintegración, un lubricante y un surfactante. Una tableta puede contener la solución sólida mezclada con por lo menos un agente de desintegración, un lubricante, un surfactante, y un deslizante. La tableta masticable puede contener la solución sólida mezclada con un agente de relleno, un lubricante, y si se desea un agente endulzante adicional (tal como un edulcorante artificial), y sabores adecuados.

Las formulaciones farmacéuticas pueden ser presentadas a un paciente en "paquetes de paciente" que contienen una ruta entera de tratamiento en un solo empaque, usualmente un empaque en ampolla. Los paquetes de paciente tienen una ventaja sobre las prescripciones tradicionales, donde un farmacéutico divide el suministro para un paciente de una forma farmacéutica de suministro a granel, en que el paciente tiene siempre acceso a la hoja suelta del paquete contenida en el paquete para paciente, normalmente inexistente en las prescripciones del paciente. Se ha mostrado que la inclusión de una hoja suelta en el paquete mejora el cumplimiento del paciente con las instrucciones del médico.

Las composiciones para uso tópico incluyen ungüentos, cremas, atomizados, parches, geles, gotas líquidas e inserciones (por ejemplo inserciones intraoculares). Tales composiciones pueden ser formuladas de acuerdo con métodos conocidos.

Ejemplos de formulaciones para administración rectal o intra–vaginal incluyen pesarios y supositorios que pueden ser, por ejemplo, de una forma moldeable o material de cera que contiene el compuesto activo.

Las composiciones para administración mediante inhalación pueden tener la forma de composiciones en polvo inhalables o atomizados líquidos o en polvo, y pueden ser administrados en forma estándar usando dispositivos para inhalación de polvos o dispositivos para dispensar aerosoles. Tales dispositivos son bien conocidos. Para administración por inhalación, las formulaciones en polvo incluyen típicamente el compuesto activo junto con un diluyente en polvo solido inerte, tal como lactosa.

Los compuestos de la fórmula (I) serán presentados generalmente en forma de dosificación unitaria y, como tal, típicamente contendrán suficiente compuesto para suministrar un nivel deseado de actividad biológica. Por ejemplo, una formulación puede contener desde 1 nanogramo a 2 gramos de ingrediente activo, por ejemplo de 1 nanogramo

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a 2 miligramos de ingrediente activo. Dentro de este rango, son rangos particulares de compuesto 0.1 miligramos a 2 gramos de ingrediente activo (más usualmente de 10 miligramos a 1 gramo, por ejemplo 50 miligramos a 500 miligramos), o 1 microgramo a 20 miligramos (por ejemplo 1 microgramo a 10 miligramos, por ejemplo 0.1 miligramos a 2 miligramos de ingrediente activo).

Para composiciones orales, una forma de dosificación unitaria puede contener de 1 miligramo a 2 gramos, más típicamente 10 miligramos a 1 gramo, por ejemplo 50 miligramos a 1 gramo, por ejemplo 100 miligramos a 1 gramo, de compuesto activo.

El compuesto activo será administrado a un paciente que lo necesita (por ejemplo un paciente humano o animal) en una cantidad suficiente para lograr el efecto terapéutico deseado.

La persona entrenada tendrá el conocimiento para seleccionar las cantidades apropiadas de ingrediente para uso en las formulaciones. Por ejemplo tabletas y cápsulas contienen típicamente 0–20% de agentes de desintegración, 0– 5% de lubricantes, 0–5% de ayudas de fluidez y/o 0–100% de agentes de relleno/ o materiales de relleno (dependiendo de la dosificación del medicamento). Ellos pueden contener también 0–10% de polímero de unión, 0– 5% de antioxidantes, 0–5% de pigmentos. Las tabletas de liberación lenta contendrían adicionalmente 0–100% de polímeros (dependiendo de la dosificación). Los recubrimientos en película de la tableta o cápsula contienen típicamente 0–10% de polímeros, 0–3% de pigmentos, y/o 0–2% de suavizantes.

Las formulaciones parenterales contienen típicamente 0–20% de amortiguadores, 0–50% de cosolventes, y/o 0– 100% de agua para inyección (WFI) (dependiendo de la forma de dosificación y si han sido secados por congelación). Las formulaciones para aplicación intramuscular pueden contener también 0–100% de aceites.

Ejemplos de formulaciones farmacéuticas

(i): Formulación en tableta

Se prepara una composición de tableta, que contiene un compuesto de la fórmula (I) mezclando 50 mg del compuesto con 197 mg de lactosa (BP) como diluyente, y 3 mg de estearato de magnesio como un lubricante y comprimiendo para formar una tableta de la manera conocida.

(ii): Formulación en cápsula

Se prepara una formulación en cápsula mezclando 100 mg de un compuesto de la fórmula (I) con 100 mg de lactosa y empacando la mezcla resultante dentro de cápsulas estándar opacas de gelatina dura.

(iii) Formulación inyectable I

Puede prepararse una composición parenteral para administración por inyección, disolviendo un compuesto de la fórmula (I) (por ejemplo en una forma de sal) en agua que contiene 10% de propilenglicol, para dar una concentración de compuesto activo de 1.5 % en peso. Se esteriliza la solución por filtración, se empaca en una ampolla y se sella.

(iv) Formulación inyectable II

Se prepara una composición parenteral para inyección, disolviendo en agua un compuesto de la fórmula (I) (por ejemplo en forma de sal) (2 mg/ml) y manitol (50 mg/ml), filtrando en condiciones estériles la solución y empacando dentro de viales o ampollas sellables de 1 ml.

v) Formulación inyectable III

Puede prepararse una formulación para entrega intravenosa por inyección o infusión, disolviendo el compuesto de la fórmula (I) (por ejemplo en una forma de sal) en agua a 20 mg/ml. Se sella entonces el vial y se esteriliza en el autoclave.

vi) Formulación inyectable IV

Puede prepararse una formulación para entrega intravenosa por inyección o infusión, disolviendo el compuesto de la fórmula (I) (por ejemplo en una forma de sal) en agua que contiene un amortiguador (por ejemplo acetato 0.2 M de pH 4.6) a 20 mg/ml. Se sella entonces el vial y se esteriliza entonces en el autoclave.

(vii) Formulación para inyección subcutánea

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Las pruebas de diagnóstico y criba son conducidas típicamente sobre una muestra biológica seleccionada de muestras de biopsia de tumor, muestras de sangre (aislamiento y enriquecimiento de células tumorales de cobertizo), biopsia de heces, esputo, análisis de cromosomas, fluido pleural, fluido peritoneal, espigos bucales, biopsia u orina. Los métodos de identificación y análisis de mutaciones y sobrerregulación de proteínas son conocidos por una persona diestra en la técnica. Los métodos de criba podrían incluir, pero no están limitados a, métodos estándar tales como reacción en cadena de polimerasa transcriptasa inversa (RT–PCR) o hibridación in– situ tal como hibridación in situ por fluorescencia (FISH).

La identificación de un individuo que lleva una mutación en FGFR, VEGFR y/o PDGFR puede significar que el paciente sería particularmente adecuado para el tratamiento con un inhibidor de FGFR, VEGFR y/o PDGFR. Los tumores pueden ser cribados preferencialmente buscando presencia de una variante de FGFR, VEGFR y/o PDGFR antes del tratamiento. El proceso de criba involucrará típicamente la determinación directa de secuencia, análisis de microarreglo de oligonucleótidos, o un anticuerpo específico de mutante. Adicionalmente, el diagnóstico de tumores con tales mutaciones podría ser ejecutado utilizando técnicas conocidas por una persona diestra en la técnica y como se describe aquí, tal como RT–PCR y FISH.

Adicionalmente, las formas mutantes de, por ejemplo FGFR o VEGFR2, pueden ser identificadas por determinación directa de secuencia de, por ejemplo, biopsias de tumor usando PCR y métodos para determinar la secuencia de productos de PCR directamente como se describió aquí antes. El técnico entrenado reconocerá que todas esas técnicas bien conocidas para detección de la sobreexpresión, activación o mutaciones de las proteínas mencionadas previamente podrían ser aplicables en el presente caso.

En la criba por RT–PCR, se evalúa el nivel de mARN en el tumor, creando una copia de cADN del mARN seguido de amplificación del cADN por PCR. Los métodos de amplificación por PCR, la selección de cebadores, y condiciones de amplificación, son conocidas por una persona entrenada en la técnica. Las manipulaciones de ácido nucleico PCR son llevadas a cabo mediante métodos estándar, como se describe por ejemplo en Ausubel, F.M. et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc., o Innis, M.A. et al., eds. PCR Protocols: a guide to methods y applications, 1990, Academic Press, San Diego. Las reacciones y manipulaciones que involucran técnicas de ácido nucleico son descritas también en Sambrook et al., 2001, 3ª ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. De modo alternativo, puede usarse un kit disponible comercialmente para RT–PCR (por ejemplo Roche Molecular Biochemicals), o metodología como se expone en las patentes de Estados Unidos 4,666,828; 4,683,202; 4,801,531; 5,192,659, 5,272,057, 5,882,864, y 6,218,529 e incorporadas aquí por referencia. Un ejemplo de una técnica de hibridación in–situ para evaluar la expresión de mARN sería hibridación in situ por fluorescencia (FISH) (véase Angerer (1987) Meth. Enzymol., 152: 649).

Generalmente, la hibridación in situ incluye los siguientes pasos principales: (1) fijación de tejido que va a ser analizado; (2) tratamiento de hibridación previa de la muestra para incrementar la accesibilidad del ácido nucleico objetivo, y reducir la unión no especifica; (3) hibridación de la mezcla de ácidos nucleicos hasta el ácido nucleico en la estructura o tejido biológicos; (4) lavado después de la hibridación para remover fragmentos de ácido nucleico no unidos en la hibridación, y (5) detección de los fragmentos de ácido nucleico hibridados. Las muestras usadas en tales aplicaciones son etiquetadas típicamente, por ejemplo con radioisótopos o reporteros fluorescentes. Las muestras preferidas son suficientemente largas, por ejemplo, de aproximadamente 50, 100, o 200 nucleótidos a aproximadamente 1000 o más nucleótidos, para habilitar hibridación específica con los ácidos nucleicos objetivo bajo condiciones rigurosas. Los métodos estándar para llevar a cabo FISH son descritos en Ausubel, F.M. et al., eds. Current Protocols in Molecular Biology, 2004, John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview por John M. S. Bartlett in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2a ed.; ISBN: 1–59259–760–2; marzo de 2004, páginas 077–088; serie: Methods in Molecular Medicine.

(DePrimo et al. (2003), BMC Cancer, 3:3) describen métodos para hacer el perfil de expresión de genes. Brevemente, el protocolo es como sigue: se sintetiza cADN de doble cuerda a partir de ARN total usando un oligómero (dT)24 para cebar la síntesis de cADN de primera cadena, seguido por síntesis de cADN de segunda cadena con cebadores aleatorios hexaméricos. El cADN de doble cuerda es usado como un patrón para la transcripción in vitro de cARN usando ribonucleótidos que tienen unida biotina. El cARN es fragmentado químicamente de acuerdo con protocolos descritos por Affymetrix (Santa Clara, CA, EEUU), y luego hibridados durante la noche sobre Arreglos de Genoma Humano.

De modo alternativo, los productos de proteína expresados de los mARNs pueden analizarse por immunohistoquímica de muestras de tumor, inmunoensayo de fase sólida con placas de microtitulación, aplicación de prueba de Mancha Occidental, electroforesis en gel bidimensional de SDS–poliacrilamida, ELISA, citometría de flujo y otros métodos conocidos en la técnica para determinación de proteínas específicas. Los métodos de detección incluirían el uso de anticuerpos de sitio específico. La persona entrenada reconocerá que todas estas técnicas bien conocidas para la detección de sobrerregulación de FGFR, VEGFR y/o PDGFR, o detección de FGFR, VEGFR y/o variantes o mutantes de PDGFR podrían ser aplicables en el presente caso.

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Pueden medirse niveles anormales de proteínas tales como FGFR o VEGFR usando ensayos enzimáticos estándar, por ejemplo, aquellos ensayos descritos aquí. Podría detectarse también activación o sobreexpresión en una muestra de tejido, por ejemplo un tejido de tumor, midiendo la actividad de tirosina quinasa con un ensayo tal como el de Chemicon International. La tirosina quinasa de interés sería inmunoprecipitada a partir del lisado de la muestra y su actividad medida.

Los métodos alternativos para la medición de la sobreexpresión o activación de FGFR o VEGFR incluyendo las isoformas de ellos, incluyen la medición de densidad en microrrecipientes. Esta puede ser medida por ejemplo usando métodos descritos por Orre y Rogers (Int J Cancer (1999), 84(2) 101–8). Los métodos de ensayo incluyen también el uso de marcadores, por ejemplo, en el caso de VEGFR estos incluyen CD31, CD34 y CD105 (Minao et al. (2004) J Clin Pathol. 57(6), 591–7).

Por ello, todas estas técnicas podrían ser usadas también para identificar tumores particularmente adecuados para el tratamiento con los compuestos de la invención.

Los compuestos de la invención son particularmente útiles en el tratamiento de un paciente que tiene un FGFR mutado. La mutación G697C en FGFR3 es observada en el 62% de carcinomas de célula escamosa oral y causa activación constitutiva de la actividad de quinasa. Las mutaciones activadoras de FGFR3 han sido identificadas también en casos de carcinoma de vejiga. Estas mutaciones fueron de 6 tipos con grados variables de prevalencia: R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q. Adicionalmente, se ha encontrado que un polimorfismo Gly388Arg en FGFR4 está asociado con un aumento en la incidencia y agresividad de cáncer de próstata, colon, pulmón y mama.

Por ello, en un aspecto adicional la invención incluye el uso de un compuesto de acuerdo con la invención, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de un estado de enfermedad o condición en un paciente que se ha sometido a criba y que se ha determinado que sufre de, o está en riesgo de sufrir de, una enfermedad o condición que sería susceptible de tratamiento con un compuesto que tiene actividad contra FGFR.

En mutaciones particulares un paciente es sometido a criba para incluir las mutaciones G697C, R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q en FGFR3 y polimorfismo Gly388Arg en FGFR4.

En otro aspecto de la invención incluye un compuesto de la invención, para uso en la profilaxis o tratamiento de cáncer en un paciente seleccionado de una subpoblación que tiene una variante del gen FGFR (por ejemplo mutación G697C en FGFR3 y polimorfismo Gly388Arg en FGFR4).

La determinación MRI de normalización de vasos (usando por ejemplo eco de gradiente de MRI, eco de giro, y mejora del contraste para medir el volumen sanguíneo, tamaño relativo de vaso, y permeabilidad vascular) en combinación con biomarcadores circulantes (células progenitoras circulantes (CPCs), CECs, SDF1, y FGF2) pueden ser usados también para identificar tumores resistentes a VEGFR2, para el tratamiento con un compuesto de la invención.

Rutas de síntesis general

Sistema de análisis LC–MS y descripción del método

En los ejemplos se realizó la caracterización de los compuestos preparados, mediante cromatografía líquida y espectroscopia de masas usando sistemas comercialmente disponibles (sistema LC–MS Waters Platform, sistema LC–MS Waters Fractionlynx LC–MS), condiciones estándar de operación y columnas disponibles comercialmente (Fenomenex, Waters etc) pero una persona diestra en la técnica apreciará que podrían usarse en sistemas y métodos alternativos. Donde están presentes átomos con diferentes isótopos y se cita una sola masa, la masa citada para el compuesto es la masa monoisotópica (es decir 35Cl; 79Br etc.).

Sistema LC–MS dirigida de masa

LC–MS preparativa (o HPLC) es un método estándar y efectivo usado para la purificación de moléculas orgánicas pequeñas tales como los compuestos descritos aquí. Los métodos para la cromatografía líquida (LC) y espectrometría de masas (MS) pueden ser variados para suministrar mejor separación de los materiales crudos y detección mejorada de las muestras por MS. la utilización del método LC de gradiente preparativo involucrará columnas variables, eluyentes volátiles y modificadores, y gradientes. En la técnica son bien conocidos métodos para la optimización de métodos LC–MS preparativos y luego usarlos para purificar compuestos. Tales métodos son descritos en Rosentreter U, Huber U.; Optimal fraction collecting in preparative LC/MS; J Comb Chem.; 2004; 6(2), 159–64 y Leister W, Strauss K, Wisnoski D, Zhao Z, Lindsley C., Development of a custom high–throughput preparative liquid chromatography/mass spectrometer platform for the preparative purification and analytical analysis of compound libraries; J Comb Chem.; 2003; 5(3); 322–9.

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Preparado usando la ruta general A procedimiento A1, sustituyendo 2–aminoisonicotinamida por metil 2– aminopiridin–4–carboxilato. 1H RMN (400 MHz, DMSO–d6): 8.59 (1H, d), 8.16 (1H, s), 8.13 (1H, s), 8.05 (1H, s),

7.71 (1H, s), 7.52 (1H, s), 7.32 (1H, dd). MS: [M+H]+ 162.

Procedimiento B2 – amida de ácido 3–yodoimidazo[1,2–a]piridin–7–carboxílico

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Preparado usando la ruta general A procedimiento A4, sustituyendo imidazo[1,2–a]piridin–7–amida por metil imidazo[1,2–a]piridin–7–carboxilato. 1 H RMN (400 MHz, DMSO–d6): 8.39 (1 H, d), 8.25–8.09 (3H, m), 7.86 (1H, s), 7.56–7.45 (1 H, dd). MS: [M+H]+ 288.

Procedimiento B3 – acoplamiento de Suzuki

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Se acopló anida de ácido 3–yodoimidazo[1,2–a]piridin–7–carboxílico como se describe en la ruta general A, procedimiento A5.

Boronato: Producto

imagen69: Amida de carboxílico ácido 3–[3–([1,3,4]–Tiadiazol–2–ilamino)–fenil]–imidazo[1,2–a]piridini–7–

Ejemplos 1 a 4

Siguiendo los métodos descritos arriba, se prepararon los compuestos de los Ejemplos 1 a 4 establecidos en la tabla abajo.

Número de ejemplo: Estructura Nombre Método Datos de RMN Datos de MS

1: imagen70 Clorhiidrato de dimetilamida de ácido 3–[3–([1,3,4]Tiadiazol–2–ilamino)– fenil]–imidazo[1,2–a]piridin–7– carboxílico Ruta General A 1H NMR (400 MHz, Me–d3–OD): 8.80 (1H, s), 8.63 (1H, d), 8.05 (1H, s), 7.78 (1H, s), 7.70 (1H, s), 7.55 (1H, d), 7.48 (1H, t), 7.27 (1H, d), 7.04 (1H, d), 3.13 (6H, s). [M+H] + 365

2: Azetidin–1–il–{3–[3–([1,3,4]tiadiazol– Ruta 1H NMR (400 MHz, [M+H]

2– ilamino)–fenil]–imidazo[1,2–: General DMSO–d6): 10.63 + 377

a]piridin– 7–il)–metanona: A (1H, s), 8.98–8.91 (1H, m), 8.64 (1H, d), 8.04–7.97 (1H, m), 7.97–7.92 (1H, m), 7.90 (1H, s), 7.71 (1H, d), 7.61–7.50 (1H, m), 7.32 (1H, d), 7.24–7.13 (1H, m), 4.47 (2H, s), 4.10 (2H, d), 3.43 (2H, s), 2.37–2.25 (2H, m).

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3: imagen71 Amida de ácido 3–[3–([1,3,4]– Tiadiazol–2–ilamino)–fenil]– imidazo[1,2–a]piridin–7–carboxílico Ruta General B 1H NMR (400 MHz, DMSO–d6): 8.68 (1H, s), 8.64 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.20 (1H, s), 7.90 (2H, s), 7.56 (2H, d), 7.51–7.38 (3H, m), 7.17 (1H, d). [M+H] + 337

4: imagen72 Metilamida de ácido 3–[3–([1,3,4]– Tiadiazol–2–ilamino)–fenil]– imidazo[1,2–a]piridin–7–carboxílico Ruta General A 1H NMR (400 MHz, DMSO–d6): 8.93– 8.85 (1 H, m), 8.72– 8.62 (1H, m), 8.20 (1H, s), 8.03–7.95 (1H, m), 7.92 (1H, s), 7.67 (1H, d), 7.57– 7.51 (1H, m), 7.41 (1H, dd), 7.29 (1H, d), 3.30 (1H, s), 2.88–2.79 (3H, m). [M+H] + 351

Ensayos biológicos

Ensayos de actividad inhibidora de quinasa de FGFR3 y PDGFR in vitro

Se prepararon enzimas (de Upstate) a una concentración final 2x en amortiguador de ensayo de quinasa 1 x (como 5 se describe abajo). Se incubaron entonces las enzimas con los compuestos, se unió de modo biotina al sustrato Flt3 (biotina–DNEYFYV) (Cell Signalling Technology Inc.) y ATP. Se dejó transcurrir la reacción por 3 horas (FGFR3) o

2.5 horas (PDGFR–beta) a temperatura ambiente sobre un agitador de placa a 900 rpm, antes de detenerla con 20 µl de EDTA 35 mM, pH 8 (FGFR3) o EDTA 55 mM, pH 8 (PDGFR–beta). Se añadió entonces a cada pozo 20 µl de mezcla de detección 5x (HEPES 50mM pH 7.5, 0.1% BSA, Eu–anti–pY 2nM (PY20) (PerkinElmer) SA–XL665 15nM

10 (Cisbio) para FGFR3 y HEPES 50 mM, pH 7.5, KF 0.5 M, 0.1% BSA, Euanti–pY 11.34 nM (PT66) (Perkinelmer), SA– XL665 94nM (Cisbio) para PDGFR–beta) y se selló la placa y se incubó a temperatura ambiente por una hora sobre un agitador de placa a 900 rpm. Se leyó entonces la placa sobre un lector de placas Packard Fusion en modo TRF.

Enzima: Amortiguador de ensayo 1 x Concentración de sustrato Flt3 Concentración de ATP

FGFR3: A 0.125 µM 8 µM

PDGFR–beta: B 0.15 µM 30 µM

Los amortiguadores de ensayo de quinasa fueron:

15 A: HEPES 50 mM pH 7.5, MnCl2 6 mM, DTT 1 mM, TritonX–100 0.1 %

B: MOPS 20 mM pH 7.0, MnCl2 10 mM, Triton X–100 0.01%, DTT 1 mM, ortovanadato de sodio 0.1 mM

Los compuestos de la invención tienen valores IC50 inferiores a 10 µM o suministran una inhibición de por lo menos 50% de la actividad de FGFR3 a una concentración de 10 µM. Los compuestos preferidos de la invención (por ejemplo, Ejemplos 1–4) tienen valores IC50 inferiores a 1 µM en el ensayo FGFR3.

20 Ensayo in vitro de actividad inhibidora de quinasa de VEGFR2

Se ajustaron en presencia del compuesto, ensayos de reacciones que contenían enzima VEGFR2 (comprada de Upstate), y sustrato Poly (Glu,Tyr) (CisBio) 250 µM 4:1, en HEPES 50 mM, pH 7.5, 6 mM MnCl2, DTT 1 mM, TritonX–100 0.01%, ATP 5 µM (2.8 Ci/mmol). Las reacciones fueron detenidas después de 15 minutos por adición de un exceso de ácido fosfórico. Se transfirió entonces la mezcla de reacción a una placa de filtro Millipore MAPH,

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Se hace seguimiento a la florescencia por 20 minutos a intervalos de 30 segundos, en un lector de placa de fluorescencia Molecular Devices Gemini. Las longitudes de onda de excitación y emisión son 390 nm y 460 nm para 1A2, 2C19 y 3A4, 390 nm y 485 nm para 2D6 y 485 nm y 530 nm para 2C9. Se determinan las relaciones iniciales de las curvas de progreso.

5 El compuesto de prueba es hecho en metanol o acetonitirilo y probado contra las CYP450s a una concentración de 10 µM.

Ensayos de proliferación celular Ba/F3–TEL–FGFR3 & Ba/F3 (WT)

Se inocularon en placa células Ba/F3–TEL–FGFR3 con transfección estable, y en placas de cultivo de tejido negro de 96 pozos con fondo claro en medio RPMI que contenía FBS 10% y 0.25 mg/ml de G418 a una densidad de 5 x 10 103 células/pozo (200 µl por pozo). Las células progenitoras tipo silvestre Ba/F3 (DSMZ no.: ACC 300) fueron colocadas en placas de cultivo de tejido negro de 96 pozos con fondos claros en medio RPMI que contenía FBS 10% y 2 ng/ml de IL–3 de ratón (R&D Sysems) a una densidad de 2.5 x 103 células/pozo (200 µl por pozo). Se colocaron las placas en un incubador durante la noche, antes de añadir los compuestos el día siguiente. Se hicieron diluciones de los compuestos en DMSO, partiendo de 10 mM y se diluyeron dentro de los pozos para dar una

15 concentración final de DMSO de 0.1% en el ensayo. Los compuestos fueron dejados sobre las células por 72 horas antes de que las placas fueran removidas del incubador y se añadieron 20 µl de Alamar Blue™ (Biosource) a cada pozo. Se colocaron las placas en el incubador por 4–6 horas antes de hacer la lectura de las placas a 535 nm (excitación) / 590 nm (emisión) sobre un lector de placas Fusion (Packard).

Se espera que muchos compuestos de la invención sean más activos contra líneas de células Ba/F3–TEL–FGFR3

20 que la línea de células progenitoras tipo silvestre Ba/F3, por ejemplo sobre 5 veces, en particular 10 veces más activos contra la línea de células Ba/F3–TEL–FGFR3 que la línea de células progenitoras tipo silvestre Ba/F3.

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Claims

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