ES2569196T3 - Compuesto marcado con flúor radiactivo - Google Patents
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Abstract
Un compuesto representado por la siguiente fórmula (1) o una sal del mismo,**Fórmula** de modo que en la fórmula (1) R1 representa un átomo de hidrógeno, un grupo metilo o un grupo hidroximetilo y n es el número entero 1 o 2.
Description
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En este caso, como grupo protector de hidroxilo se pueden usar varios tipos de los que normalmente se emplean para proteger un grupo hidroxilo, pero hay que usar uno que no requiera condiciones ácidas para la desprotección. En una forma de ejecución preferida se puede usar un grupo t-butildimetilsililo como grupo protector. La introducción de un grupo t-butildimetilsililo se puede efectuar, por ejemplo, mediante un método de E. J. Corey y otros (Journal of American Chemical Society, 1972, 94, p. 6190).
Asimismo, la introducción de 2-nitroimidazol en el grupo bromometilo se puede efectuar, por ejemplo, mediante un método de Hay, Michael P y otros (Journal of Medicinal Chemistry, 1995, 38 (11), p. 1928-41).
A continuación el 5-(t-butildimetilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-1,3-dioxano obtenido se hace reaccionar con fluoruro de tetra-n-butilamonio en un disolvente orgánico, por ejemplo mediante un método de
E. J. Corey y otros (Journal of American Chemical Society, 1972, 94, p. 6190), y se purifica para dar 2,2-dimetil-5hidroximetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-1,3-dioxano (FIG. 1, etapa 4).
El 2,2-dimetil-5-hidroximetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-1,3-dioxano obtenido se hace reaccionar con cloruro de p-toluensulfonilo, por ejemplo mediante un método de L. F. Fieser y otros (Reagents for Organic Synthesis, vol.1, Wiley, Nueva York, p. 1179 (1967)) y se purifica para dar el deseado 2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-5(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano (FIG. 1, etapa 5).
Además, al sintetizar 2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano cada uno de los grupos protectores se puede introducir en los respectivos grupos hidroxilo del diol, o bien se puede introducir un solo grupo protector para los dos grupos hidroxilo.
Cuando se obtiene un compuesto en el cual el grupo hidroximetilo en la posición 5 del anillo de dioxano del 2,2dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano está sustituido con un sustituyente distinto de un grupo p-toluensulfoniloxi, es decir, un compuesto representado por la fórmula (2) en que R4 es un sustituyente distinto de un grupo p-toluensulfoniloxi, en la etapa 5 de la FIG. 1 se pueden usar para cualquier fin varios reactivos en lugar del cloruro de p-toluensulfonilo, en un disolvente apropiado. Por ejemplo, para obtener un compuesto representado por la fórmula (2) en el cual R4 sea un grupo trifluorometilsulfoniloxi se puede usar cloruro de metilsulfonilo.
El precursor del compuesto de la presente invención marcado con flúor radiactivo se puede sintetizar combinando reacciones conocidas con el empleo de materiales de partida generalmente asequibles, sin limitarse a los ejemplos anteriores. Por ejemplo, un compuesto representado por la fórmula (2) en el cual R2 y R3 son oxígenos unidos a un grupo 1-metiletan-1,1-diilo, R4 es un grupo p-toluensulfoniloxi, R6 es un grupo metoximetoxi-metilo y n es 1 se puede sintetizar de acuerdo con las etapas de la FIG. 1 arriba descritas, añadiendo una reacción de sustitución del átomo de hidrógeno en la posición 4 del esqueleto de imidazol por un grupo hidroximetilo tras la etapa 3 de la FIG. 1.
Además el precursor del compuesto de la presente invención marcado con flúor radiactivo puede incluir un caso en que el compuesto representado por la fórmula (2) forme una sal. Los ejemplos concretos de dicha sal incluyen una sal inorgánica formada con ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico o ácido fosfórico y una sal orgánica formada con ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido oxálico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido láctico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido aspártico o ácido glutámico.
Como método para sintetizar un compuesto de la presente invención marcado con flúor radiactivo mediante el uso del precursor obtenido se puede mencionar, por ejemplo, un método de síntesis de un compuesto representado por la fórmula (1) o una sal del mismo, que consiste en hacer reaccionar ion fluoruro[F18], obtenido por un método conocido, en presencia de una base, para sintetizar un compuesto representado por la fórmula (3) o una sal del mismo a partir de un compuesto representado por la fórmula (2) o una sal del mismo, y eliminar luego los grupos protectores de hidroxilo independientes entre sí o el grupo protector del diol en R2 y R3 de la fórmula (3).
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Columna: CAPCELL PAK (marca comercial, Shiseido, tamaño: 10 mmø x 250 mm). Detector: absorciómetro de UVvisible (longitud de onda de detección: 280 nm)
3. Medición de la pureza radioquímica de los compuestos 1 al 3 por análisis de CCF
Placa de CCF: Silica Gel 60 F254 (nombre de producto; fabricado por Merck). Fase de desarrollo: acetato de etilo
Detector: Rita Star (nombre de producto; fabricado por Raytest)
Ejemplo 1: producción de 2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano
El 2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano es precursor del compuesto marcado 1. La FIG. 1 muestra el correspondiente esquema de síntesis.
Síntesis de 5-bromometil-2,2-dimetil-5-hidroximetil-1,3-dioxano (FIG. 1, etapa 1)
Se disolvieron 423 mg (2,13 miliequivalentes) de 2-bromometil-2-hidroximetil-1,3-propanodiol en 1,0 ml de acetona, se le añadieron 247 mg (1,07 miliequivalentes) de ácido 10-canforsulfónico y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente (25ºC) durante 2 días. Una vez completada la reacción se agregó trietilamina, se eliminó el disolvente por destilación y luego el producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo (v/v) = 3/1) para obtener 409 mg (1,71 miliequivalentes) de 5-bromometil-2,2-dimetil-5hidroximetil-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 5-bromometil-2,2-dimetil-5-hidroximetil-1,3-dioxano: δ 3,79-3,74 (m, 4H), 3,71 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,56 (s, 2H), 1,59 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 1,41 (s, 3H), 1,41 (s, 3H).
Síntesis de 5-bromometil-5-(t-butildimetilsiloximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxano (FIG. 1, etapa 2)
Se disolvieron 409 mg (1,71 miliequivalentes) de 5-bromometil-2,2-dimetil-5-hidroximetil-1,3-dioxano en 5 ml de dimetilformamida, se le añadieron 233 mg (3,42 miliequivalentes) de imidazol y 309 mg (2,05 miliequivalentes) de tbutildimetilclorosilano y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente (25ºC) durante 18 horas. Una vez completada la reacción se añadió una solución acuosa saturada de cloruro amónico y agua, y la mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas reunidas de acetato de etilo se lavaron con agua y salmuera, luego se secaron con sulfato magnésico anhidro y a continuación se concentraron al vacío, y el producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo (v/v) = 20/1) para obtener 578 mg (1,64 miliequivalentes) de 5-bromometil-5-(t-butildimetilsiloximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 5-bromometil-5-(t-butildimetilsiloximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxano: δ 3,78-3,70 (m, 4H), 3,59 (s, 2H), 3,54 (s, 2H), 1,40 (s, 3H), 1,40 (s, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).
Síntesis de 5-(t-butildimetilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-1,3-dioxano (FIG. 1, etapa 3)
Se disolvieron 578 mg (1,64 miliequivalentes) de 5-bromometil-5-(t-butildimetilsiloximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxano en 10 ml de dimetilformamida, se le añadieron 186 mg (1,64 miliequivalentes) de 2-nitroimidazol y 680 mg (4,92 miliequivalentes) de carbonato potásico y la mezcla se calentó a 100ºC durante 18 horas. Una vez completada la reacción, el líquido de la misma se enfrió hasta la temperatura ambiente (25ºC), se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro amónico y agua, y la mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas reunidas de acetato de etilo se lavaron con agua y salmuera, luego se secaron con sulfato magnésico anhidro y a continuación se concentraron al vacío, y el producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo (v/v) = 3/1) para dar 363 mg (0,942 miliequivalentes) de 5-(t-butildimetilsiloximetil)2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: dimetilsulfóxido deuterado) del 5-(t-butildimetilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1il)metil]-1,3-dioxano: δ 7,21 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 4,74 (s, 2H), 3,74 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,56 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,48 (s, 2H), 1,42 (s, 3H), 1,42 (s, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,04 (s, 6H).
Síntesis de 2,2-dimetil-5-hidroximetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-1,3-dioxano (FIG. 1, etapa 4)
Se disolvieron 363 mg (0,942 miliequivalentes) de 5-(t-butildimetilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-[(2-nitro-1H-imidazol-1il)metil]-1,3-dioxano en 10 ml de tetrahidrofurano, se le añadieron 0,94 ml (solución 1,0 mol/l, 0,94 miliequivalentes) de una solución de fluoruro de tetrabutilamonio en tetrahidrofurano y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente (25ºC) durante 10 minutos. Una vez completada la reacción se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro amónico y agua, y la mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas reunidas de acetato de etilo se lavaron con agua y salmuera, luego se secaron con sulfato magnésico anhidro y a continuación se concentraron al vacío, y el producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/
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La FIG. 6 muestra el correspondiente esquema de síntesis.
Se pasó H2O18 con contenido de ion fluoruro[F18] (cantidad de radiactividad 2,37 GBq, valor corregido al iniciar la síntesis) a través de una columna de intercambio aniónico (Sep-Pak (nombre comercial registrado) Accell Plus QMA Plus Light (nombre comercial, fabricada por Nihon Waters K.K.) previamente tratada con una solución acuosa de carbonato potásico, para recoger ion fluoruro[F18] por adsorción. Luego se pasó por esta columna una solución acuosa de carbonato potásico (42,4 µmoles/l, 0,3 ml) y una solución de 14 mg (37,2 µequivalentes) de Kryptofix 222 (nombre comercial, Merck) en 0,7 ml de acetonitrilo para eluir el ion fluoruro[F18].
Este producto eluido se calentó en una corriente de gas argón a 110ºC para evaporar el agua, luego se añadió acetonitrilo (0,3 ml x 2) y la mezcla se sometió a destilación azeotrópica hasta sequedad. Se agregaron 0,3 ml de una solución de 5 mg (10 µequivalentes) de 2,2-dimetil-5-[(4-metoximetoximetil-2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-5-(ptoluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano sintetizado en el ejemplo 4, disueltos en acetonitrilo, y la mezcla se calentó a 110ºC durante 10 minutos. A continuación se añadieron 0,3 ml de ácido clorhídrico de 1 mol/l y la mezcla se calentó a 110ºC durante 3 minutos. Una vez completada la reacción, la mezcla se enfrió hasta la temperatura ambiente, se agregó 1,0 ml de agua para la inyección y la mezcla se sometió a HPLC (fase móvil: solución acuosa de ácido trifluoroacético al 0,1% (v/v)/acetonitrilo (con un contenido de 0,1% (v/v) de ácido trifluoroacético) (v/v) = 90/10, caudal: 3,0 ml/min) y se identificó usando el compuesto no radiactivo 2 obtenido en el ejemplo 5, de manera que el pico con un tiempo de retención de 13 minutos fue identificado como una fracción de compuesto 2 y se recogió.
A esta fracción se le añadieron 10 ml de agua y el líquido resultante se pasó a través de una columna Sep-Pak (marca comercial registrada) HLB Plas (nombre comercial, fabricada por Nihon Waters K.K.) para recoger por absorción el compuesto 2 en la columna. Esta columna se lavó con 3 ml de agua y luego se pasaron 2 ml de etanol para eluir el compuesto 2. La cantidad de radiactividad obtenida fue de 143 MBq (87 minutos después del comienzo de la síntesis). Al efectuar el análisis por CCF se encontró una pureza radioquímica del 98%.
Ejemplo 7: síntesis de 2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano
El 2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano es precursor del compuesto marcado 3. La FIG. 7 muestra el correspondiente esquema de síntesis.
Síntesis de 2-(2-benciloxietil)malonato de dietilo (FIG. 7, etapa 1)
Se añadieron 506 mg (al 60% en aceite, 13 miliequivalentes) de hidruro sódico a 5,0 ml de tetrahidrofurano y la mezcla se enfrió a 0ºC aproximadamente en un baño de aceite. Se le agregaron 3,2 ml (20,7 miliequivalentes) de malonato de dietilo (solución A). Se disolvieron 2,3 g (10,7 miliequivalentes) de 2-benciloxi-1-bromoetano en 3,0 ml de tetrahidrofurano; esta disolución se agregó gota a gota a la solución A, a lo largo de 10 minutos, y la mezcla se calentó a reflujo durante la noche. Una vez completada la reacción se añadió gota a gota al líquido de reacción una solución acuosa de ácido clorhídrico 0,5 mol/l y la mezcla se extrajo tres veces con dietiléter. Las capas reunidas de dietiléter se lavaron con salmuera, luego se secaron con sulfato magnésico anhidro y a continuación se concentraron al vacío, y el producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/ acetato de etilo (v/v) = 20/1) para obtener 2,85 g (9,67 miliequivalentes) de 2-(2-benciloxietil)malonato de dietilo.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 2-(2-benciloxietil)malonato de dietilo: δ 7,36-7,28 (m, 5H), 4,48 (s, 2H), 4,21-4,14 (m, 4H), 3,60 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 3,53 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 2,22 (dt, J = 5,5, 7,3 Hz, 2H), 1,25 (t, J = 7,3 Hz, 6H).
Síntesis de 2-(2-benciloxietil)-2-hidroximetilmalonato de dietilo (FIG. 7, etapa 2)
Se disolvieron 2,85 g (9,67 miliequivalentes) de 2-(2-benciloxietil)malonato de dietilo en 20 ml de acetonitrilo, se le añadieron 1,60 g (11,7 miliequivalentes) de bicarbonato potásico y 465 mg (11,7 miliequivalentes, calculado como formaldehído) de paraformaldehido, y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente (25ºC) durante la noche. Una vez completada la reacción se añadió gota a gota al líquido de reacción una solución acuosa de ácido clorhídrico 0,5 mol/l y la mezcla se extrajo tres veces con cloroformo. Las capas reunidas de cloroformo se secaron con sulfato magnésico anhidro y luego se concentraron al vacío, y el producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo (v/v) = 4/1) para obtener 2,78 g (8,76 miliequivalentes) de 2-(2-benciloxietil)-2-hidroximetilmalonato de dietilo.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 2-(2-benciloxietil)-2-hidroximetilmalonato de dietilo: δ 7,36-7,27 (m, 5H), 4,48 (s, 2H), 4,18 (m, 4H), 4,03 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 3,60 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,03 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 2,33 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 7,3 Hz, 6H).
Síntesis de 4-benciloxi-2,2-dihidroximetilbutanol (FIG. 7, etapa 3)
Se disolvieron 1,03 g (3,24 miliequivalentes) de 2-(2-benciloxietil)-2-hidroximetilmalonato de dietilo en 10 ml de metanol y esta disolución se añadió gota a gota a 1,69 g (44,6 miliequivalentes) de borohidruro sódico a lo largo de
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RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 4-benciloxi-2,2-dihidroximetilbutanol: δ 7,36-7,29 (m, 5H), 4,50 (s, 2H), 3,87 (brs, 2H), 3,71-3,65 (m, 2H), 3,59-3,53 (m, 7H), 1,21 (m, 2H).
Síntesis de 5-benciloxietil-2,2-dimetil-5-hidroximetil-1,3-dioxano (FIG. 7, etapa 4)
Se disolvieron 543 mg del producto 4-benciloxi-2,2-dihidroximetilbutanol crudo en 3 ml de acetona, se le añadieron 232 mg (1,0 miliequivalente) de ácido 10-canforsulfónico y se llevó a cabo una reacción a temperatura ambiente (25ºC) por la noche. Una vez completada esta reacción se agregó trietilamina gota a gota y la mezcla se concentró al vacío. El producto crudo así obtenido se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/ acetato de etilo (v/v) = 4/1) para dar 459 mg (1,64 miliequivalentes) de 5-benciloxietil-2,2-dimetil-5-hidroximetil-1,3dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 5-benciloxietil-2,2-dimetil-5-hidroximetil-1,3-dioxano: δ 7,37-7,28 (m, 5H), 4,52 (s, 2H), 3,70 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 3,61-3,57 (m, 6H), 3,15 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 1,74 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 1,40 (s, 6H).
Síntesis de 5-benciloxietil-2,2-dimetil-5-(t-butildifenilsiloximetil)-1,3-dioxano (FIG. 7, etapa 5)
Se disolvieron 459 mg (1,64 miliequivalentes) de 5-benciloxietil-2,2-dimetil-5-hidroximetil-1,3-dioxano en 8 ml de dimetilformamida, se le añadieron 197 mg (3,20 miliequivalentes) de imidazol y 0,51 ml (1,92 miliequivalentes) de tbutildifenilclorosilano, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente (25ºC) durante 22 horas. Una vez completada la reacción se agregó una solución acuosa saturada de cloruro amónico y la mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas reunidas de acetato de etilo se lavaron con agua y salmuera, después se secaron con sulfato magnésico anhidro y luego se concentraron al vacío. El producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo (v/v) = 20/1) para dar 570 mg (1,56 miliequivalentes) de 5-benciloxietil-2,2-dimetil-5-(t-butildifenilsiloximetil)-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 5-benciloxietil-2,2-dimetil-5-(t-butildifenilsiloximetil)-1,3-dioxano: δ 7,68-7,66 (m, 4H), 7,43-7,35 (m, 7H), 7,33-7,25 (m, 4H), 4,39 (s, 2H), 3,79 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,76 (s, 2H), 3,69 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,51 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,66 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,41 (s, 3H), 1,33 (s, 3H), 1,05 (s, 9H)
Síntesis de 5-(t-butildifenilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-hidroxietil-1,3-dioxano (FIG. 7, etapa 6)
Se disolvieron 570 mg (1,56 miliequivalentes) de 5-benciloxietil-2,2-dimetil-5-(t-butildifenilsiloximetil)-1,3-dioxano en 30 ml de acetato de etilo, se le añadieron 100 mg de paladio carbono en atmósfera de argón y la mezcla se agitó a temperatura ambiente (25ºC) bajo atmósfera de hidrógeno durante 22 horas. Una vez completada la reacción se filtró un precipitado y el filtrado se concentró al vacío. El producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo (v/v) = 4/1) para obtener 174 mg (0,41 miliequivalentes) de 5-(t-butildifenilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-hidroxietil-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 5-(t-butildifenilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-hidroxietil-1,3-dioxano: δ 7,687,66 (m, 4H), 7,46-7,38 (m, 6H), 3,85 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,76 (dd, J = 6,0, 6,0 Hz, 2H), 3,64 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 3,62 (s, 2H), 2,89 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 1,61 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 1,41 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 1,08 (s, 9H).
Síntesis de 5-(t-butildifenilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3-dioxano (FIG. 7, etapa 7) Se disolvieron 48 mg (0,112 miliequivalentes) de 5-(t-butildifenilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-hidroxietil-1,3-dioxano en 1 ml de tetrahidrofurano, se le añadieron 32 mg (0,123 miliequivalentes) de trifenilfosfina, 24 µl (0,123 miliequivalentes) de azodicarboxilato de diisopropilo y 38 mg (0,336 miliequivalentes) de 2-nitroimidazol, y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente (25ºC) durante 4 horas. Una vez completada la reacción, la mezcla se concentró al vacío y el producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo (v/v) = 4/1) para obtener 46 mg (0,088 miliequivalentes) de 5-(t-butildifenilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1Himidazol-1-il)etil]-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 5-(t-butildifenilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1il)etil]-1,3-dioxano: δ 7,68-7,66 (m, 4H), 7,46-7,38 (m, 6H), 7,11-7,13 (m, 1H), 6,96 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 4,51-4,47 (m, 2H), 3,83 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 3,69 (s, 2H), 3,69 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 1,89-1,86 (m, 2H), 1,42 (s, 3H), 1,37 (s, 3H), 1,09 (s, 9H).
Síntesis de 2,2-dimetil-5-hidroximetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3-dioxano (FIG. 7, etapa 8)
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Se disolvieron 46 mg (0,088 miliequivalentes) de 5-(t-butildifenilsiloximetil)-2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1il)etil]-1,3-dioxano en 1 ml de tetrahidrofurano, se le añadieron 0,11 ml (solución 1 mol/l, 0,11 miliequivalentes) de una solución de fluoruro de tetrabutilamonio en tetrahidrofurano y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente (25ºC) durante 1 hora. Una vez completada la reacción se eliminó el disolvente por destilación y el producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: cloroformo/metanol (v/v) = 10/1) para dar 25 mg (0,086 miliequivalentes) de 2,2-dimetil-5-hidroximetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 2,2-dimetil-5-hidroximetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3dioxano: δ 7,15-7,14 (m, 2H), 4,59-4,46 (m, 2H), 3,79 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 3,78 (s, 2H), 3,72 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 1,90-1,87 (m, 2H), 1,44 (s, 3H), 1,42 (s, 3H).
Síntesis de 2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano (FIG. 7, etapa 9)
Se disolvieron 25 mg (0,086 miliequivalentes) de 2,2-dimetil-5-hidroximetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3dioxano en 1 ml de diclorometano, se le añadieron 19 mg (0,172 miliequivalentes) de 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octano y 19 mg (0,10 miliequivalentes) de cloruro de p-toluensulfonilo, y la mezcla se agitó a la temperatura ambiente (25ºC) durante 4 horas. Una vez completada la reacción se agregó una solución acuosa saturada de cloruro amónico y la mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas reunidas de acetato de etilo se secaron con sulfato magnésico anhidro y luego se concentraron al vacío. El producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente: hexano/acetato de etilo (v/v) = 1/3) para dar 18 mg (0,041 miliequivalentes) de 2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano: δ 7,82 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,19 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 4,51-4,47 (m, 2H), 4,19 (s, 2H), 3,73 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 3,66 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 2,47 (s, 3H), 1,83-1,86 (m, 2H), 1,40 (s, 3H), 1,28 (s, 3H).
Ejemplo 8: producción de 1-(3,3-dihidroximetil-4-fluorobutil)-2-nitroimidazol
El 1-(3,3-dihidroximetil-4-fluorobutil)-2-nitroimidazol es un compuesto (compuesto 3 no radiactivo) que tiene la misma estructura que la del compuesto 3, con la excepción de que el átomo de flúor del compuesto 3 está cambiado de flúor 18 a flúor 19. La FIG. 8 muestra el correspondiente esquema de síntesis.
Síntesis de 2,2-dimetil-5-fluorometil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3-dioxano (FIG. 8, etapa 1)
Se disolvieron 5 mg (11,4 µequivalentes) de 2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)1,3-dioxano en 1 ml de acetonitrilo, se le añadieron 14 mg (34,5 µequivalentes) de Kryptofix 222 (nombre comercial, Merck), 0,82 g (14.1 µequivalentes) de fluoruro potásico y 0,4 mg (2,9 µequivalentes) de carbonato potásico y la mezcla se calentó a reflujo durante 5 horas. Una vez completada la reacción se agregó agua y la mezcla se extrajo tres veces con cloroformo. Las capas reunidas de cloroformo se secaron con sulfato magnésico anhidro y luego se concentraron al vacío. El producto crudo resultante se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice y se obtuvieron trazas de 2,2-dimetil-5-fluorometil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3-dioxano.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) de 2,2-dimetil-5-fluorometil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3-dioxano: δ 7,16 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 4,63-4,53 (m, 4H), 3,81-3,72 (m, 4H), 1,91-1,88 (m, 2H), 1,45 (s, 3H), 1,43 (s, 3H).
RMN-F19 (disolvente: cloroformo deuterado) del 2,2-dimetil-5-fluorometil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3dioxano: δ -231,0 (t, JH-F = 49,0 Hz, 1F).
Síntesis de 1-(3,3-dihidroximetil-4-fluorobutil)-2-nitroimidazol (FIG. 8, etapa 2)
Se disolvió 2,2-dimetil-5-fluorometil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)etil]-1,3-dioxano en 0,5 ml de acetonitrilo, se le añadieron 0,5 ml de ácido clorhídrico de 1 mol/l y la mezcla se agitó a 80ºC durante 30 minutos. Una vez completada la reacción la mezcla se concentró al vacío y se obtuvieron trazas de 1-(3,3-dihidroximetil-4-fluorobutil)-2-nitroimidazol.
RMN-H1 (disolvente: cloroformo deuterado) del 1-(3,3-dihidroximetil-4-fluorobutil)-2-nitro-imidazol: δ 7,16 (s, 1H), 7,13 (s, 1H), 4,61-4,57 (m, 2H), 4,51 (d, JH-F = 47,2 Hz, 2H), 3,76-3,67 (m, 4H).
Ejemplo 9: síntesis de 1-(3,3-dihidroximetil-4-[F18]fluorobutil)-2-nitroimidazol (compuesto 3)
La FIG. 9 muestra el correspondiente esquema de síntesis.
Se pasó H2O18 con contenido de ion fluoruro[F18] (cantidad de radiactividad 2,87 GBq, valor corregido al iniciar la síntesis) a través de una columna de intercambio aniónico (Sep-Pak (nombre comercial registrado) Accell Plus QMA Plus Light (nombre comercial, fabricada por Nihon Waters K.K.) previamente tratada con una solución acuosa de
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carbonato potásico, para recoger ion fluoruro[F18] por adsorción. Luego se pasó por esta columna una solución acuosa de carbonato potásico (42,4 µmoles/l, 0,3 ml) y una solución de 14 mg (37,2 µequivalentes) de Kryptofix 222 (nombre comercial, Merck) en 0,7 ml de acetonitrilo para eluir el ion fluoruro[F18].
Este producto eluido se calentó en una corriente de gas argón a 110ºC para evaporar el agua, luego se añadió acetonitrilo (0,3 ml x 2) y la mezcla se sometió a destilación azeotrópica hasta sequedad. Se agregaron 0,3 ml de una solución de 5 mg (10 µequivalentes) de 2,2-dimetil-5-[2-(2-nitro-1H-imidazol-1-il)metil]-5-(p-toluensulfoniloximetil)-1,3-dioxano sintetizado en el ejemplo 7, disueltos en acetonitrilo, y la mezcla se calentó a 110ºC durante 10 minutos. A continuación se añadieron 0,3 ml de ácido clorhídrico de 1 mol/l y la mezcla se calentó a 110ºC durante 3 minutos. Una vez completada la reacción se agregó 1,0 ml de agua para la inyección y la mezcla se sometió a HPLC (fase móvil: solución acuosa de ácido trifluoroacético al 0,1% (v/v)/acetonitrilo (con un contenido de 0,1% (v/v) de ácido trifluoroacético) (v/v) = 85/15, caudal: 2,5 ml/min) y se identificó usando el compuesto no radiactivo 3 obtenido en el ejemplo 8, de manera que el pico con un tiempo de retención de 16 minutos fue identificado como una fracción del compuesto 3 y se recogió.
A esta fracción se le añadieron 10 ml de agua y el líquido resultante se pasó a través de una columna Sep-Pak (marca comercial registrada) HLB Plas (nombre comercial, fabricada por Nihon Waters K.K.) y el compuesto 3 se recogió por absorción en la columna. Esta columna se lavó con 3 ml de agua y luego se pasaron 2 ml de etanol para eluir el compuesto 3. La cantidad de radiactividad obtenida fue de 463 MBq (83 minutos después del comienzo de la síntesis). Al efectuar el análisis por CCF se encontró una pureza radioquímica del 99%.
Ejemplo 10: incorporación a células tumorales
Se estudió la acumulación de compuesto 1, compuesto 2 y compuesto 3 en células tumorales in vivo del modo siguiente, utilizando una línea celular de cáncer mamario obtenida de ratones (EMT6).
(Método)
Preparación de los ratones modelo portadores de tumor: los animales empleados fueron ratones hembra Balb/c nu/nu (obtenidos de Japan SLC). En estos animales se implantó subcutáneamente una suspensión Matrigel (recuento celular 2,5 x 106 células/0,05 ml) de EMT6 – que es una línea celular de cáncer mamario obtenida de ratones (adquirida de ATCC) – en un lugar comprendido entre la costilla derecha y el hombro derecha. Al tercer día después de la implantación se confirmó que las células tumorales se habían fijado y el tumor alcanzó un volumen de 200 a 400 mm3 transcurridos 9 a 11 días desde la implantación.
Método experimental: el compuesto 1, el compuesto 2, el compuesto 3 y fluoro[18]misonidazol ([F18]FMISO), sintetizado de acuerdo con un método de Rasey JS y otros (Int J Radiat Oncol Biol Phys, Nov; 17 (5): 985-991,1989) se diluyeron respectivamente con 10 mg/ml de suero salino fisiológico que contenía ácido ascórbico, para obtener una solución de muestra con la concentración de radiactividad ajustada a 1000 MBq/ml. El ratón modelo portador del tumor preparado de este modo se anestesió con isoflurano y se le administraron aproximadamente 20 MBq de estas soluciones de muestra a través de una vena caudal. Las imágenes estáticas se obtuvieron usando un sistema TEP para animales (modelo: eXplore Vista, fabricado por GE) 60 minutos después de la administración. El tiempo de recolección fue de 20 minutos para un ratón modelo portador de tumor al que se había administrado el compuesto 1 y de 10 minutos para los ratones modelo portadores de tumor a los que se había administrado el compuesto 2, el compuesto 3 o el [F18]FMISO. Los datos así recogidos se reconstituyeron mediante el método OSEM para formar una imagen, y con el programa de análisis de imágenes se formó una imagen tomográfica coronal y una imagen tomográfica axial.
(Resultados)
Los resultados se muestran en las FIGS. 10 a 13. La FIG. 10 es una imagen tomográfica coronal del ratón modelo portador de tumor al que se ha administrado el compuesto 1. La FIG. 11 es una imagen tomográfica axial del ratón modelo portador de tumor al que se ha administrado el compuesto 1. La FIG. 12(a), la FIG. 12(b) y la FIG. 12(c) son imágenes tomográficas coronales de ratones modelo portadores de tumor. La FIG. 12 (a) es una imagen de un ratón al que se ha administrado el compuesto 2, la FIG. 12(b) es una imagen de un ratón al que se ha administrado el compuesto 3 y la FIG. 12(c) es una imagen de un ratón al que se ha administrado el [F18]FMISO. La FIG. 13(a), la FIG. 13(b) y la FIG. 13(c) son imágenes tomográficas axiales de ratones modelo portadores de tumor. La FIG. 13(a) es una imagen de un ratón al que se ha administrado el compuesto 2, la FIG. 13(b) es una imagen de un ratón al que se ha administrado el compuesto 3 y la FIG. 13(c) es una imagen de un ratón al que se ha administrado el [F18]-FMISO. En las FIGS. 11 a 13 la localización de los tumores está marcada por la dirección de los extremos de las flechas.
A partir de la imagen tomográfica coronal (FIG. 10) se halló una acumulación intensa de compuesto 1 en la vejiga y una acumulación del mismo en la vesicular biliar y en el tracto intestinal 60 minutos después de la administración. Estos resultados demuestran que se eliminó a través de los sistemas de evacuación del riñón y del tracto urinario y hepatobiliar como vías de excreción. En comparación con el [F18]FMISO el compuesto 1 tuvo una baja acumulación
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exponer una placa sensible a este corte de tejido tumoral durante 8 a 10 horas se captó una imagen utilizando un analizador de bioimágenes (modelo: BAS-2500, fabricado por FUJIFILM). La imagen así captada se examinó con un programa analizador de imágenes.
Aparte de ello, como método para confirmar una región hipóxica en un tumor, el mismo corte, una vez disminuida la radiactividad, se sometió a una tinción inmunohistoquímica con pimonidazol, que es un marcador hipóxico, por el siguiente procedimiento. El corte de tejido tumoral, una vez fijado y activado, se hizo reaccionar con un anticuerpo policlonal de conejo anti-pimonidazol (obtenido de: Hypoxyprobe, Inc., 1:200) como anticuerpo primario y con un antisuero anticonejo marcado con biotina como anticuerpo secundario que reacciona con el anticuerpo primario, y a continuación se detectó la actividad de PRP (peroxidasa de rábano picante) mediante un reacción de color con DAB (3,3’-diaminobencidina) como substrato, usando estreptavidina marcada con PRP, que reacciona con el anticuerpo secundario y por tanto identifica una región hipóxica del tejido tumoral. Además se usó hematoxilina de Mayer como contratinción nuclear, para teñir el núcleo de las células. Como control negativo se usó un corte adyacente a unos cortes practicados de manera consecutiva, llevando a cabo el mismo experimento anterior sin hacer reaccionar el anticuerpo primario, y se confirmó que no había tenido lugar ninguna reacción inespecífica entre el corte de tejido tumoral y cualquier otro componente que no fuera el anticuerpo primario. Se tomó una imagen entera de una imagen de la muestra obtenida por tinción inmunohistoquímica, empleando un sistema de microscopía (modelo: BZ-9000, fabricado por Keyence Corporation). La imagen entera tomada de este modo se procesó y se extrajo un sito positivo al pimonidazol que indicaba una región hipóxica.
(Resultados)
Los resultados se muestran en las FIGS. 14 a 17. La FIG. 14(b) muestra una autorradiografía de la acumulación del compuesto 1 en el tumor y la FIG. 14(a) muestra una imagen de la tinción inmunohistoquímica del mismo corte de la FIG. 14(b). La FIG. 15(b) muestra una autorradiografía de la acumulación del compuesto 2 en el tumor y la FIG. 15(a) muestra una imagen de la tinción inmunohistoquímica del mismo corte de la FIG. 15(b). La FIG. 16(b) muestra una autorradiografía de la acumulación del compuesto 3 en el tumor y la FIG. 16(a) muestra una imagen de la tinción inmunohistoquímica del mismo corte de la FIG. 16(b). La FIG. 17(b) muestra una autorradiografía de la acumulación del [F18]FMISO en el tumor y la FIG. 17(a) muestra una imagen de la tinción inmunohistoquímica del mismo corte de la FIG. 17(b). Tal como se muestra en las FIGS. 14 a 16, los sitios donde están acumulados los compuestos 1 al 3 coinciden visualmente con la localización del pimonidazol, es decir del marcador hipóxico. Por otra parte, tal como se muestra en la FIG. 17, hubo sitios (encuadrados por líneas de trazos en la FIG. 17) en que el lugar donde se había acumulado el [F18]FMISO no coincidía visualmente con la localización del pimonidazol, es decir con el marcador hipóxico.
Ejemplo 13: correlación entre la intensidad de la señal de cada uno de los compuestos marcados en la imagen autorradiográfica y la localización del entorno hipóxico.
Para evaluar si el compuesto de la presente invención podía o no podía visualizar cuantitativamente una región hipóxica de un tumor, se llevó a cabo el siguiente experimento con los compuestos 1 al 3 y el [F18]FMISO.
(Método)
Con un sistema de microscopía (modelo: BZ-9000, fabricado por Keyence Corporation) se tomó una imagen muy ampliada de un sitio positivo al pimonidazol, utilizando la imagen entera de una imagen patológica obtenida por tinción inmunohistoquímica en el ejemplo 12 y una lente objetivo 10x. La imagen muy ampliada se formó respecto a una zona de la misma seleccionada al azar. Al mismo tiempo, el sitio de adquisición de la imagen se registró como imagen de navegación mediante el empleo de la función navegadora del sistema de microscopía. La imagen muy ampliada tomada de este modo se sometió a un procesador de imágenes y en ella se comprobó la presencia de un área positiva al pimonidazol.
La imagen autorradiográfica y la imagen teñida de cada uno de los compuestos marcados utilizados fueron las que se tomaron en ejemplo 12. La resolución de la imagen de navegación se igualó con la resolución de la imagen autorradiográfica y las posiciones geométricas de las dos imágenes se alinearon mediante un programa de análisis de imágenes.
En la imagen autorradiográfica se estableció una RDI para el sitio que coincidía con el sitio de adquisición de la imagen muy ampliada y se determinó el valor LFE (luminiscencia fotoestimulada) de la RDI. También se estableció una RDI para un sitio de la misma imagen que no contenía ninguna muestra y el valor LFE correspondiente a ella se definió como el fondo. El valor LFE del fondo se sustrajo del valor LFE de la imagen muy ampliada para obtener el valor LFE neto. El área positiva al marcador hipóxico pimonidazol se representó en el eje de abscisas y el valor LFE de la imagen autorradiográfica se representó en el eje de ordenadas, y se determinó el factor de correlación. Esta serie de operaciones se efectuó para cada uno de los compuestos marcados.
(Resultados)
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Los resultados se muestran en la FIG. 18 y en la tabla 3. La FIG. 18 es un gráfico que representa la correlación entre la intensidad de la señal y el área de una región hipóxica en la autorradiografía de la acumulación de los compuestos 1 al 3 y del [F18]FMISO en el tumor. La tabla 3 muestra el factor de correlación entre la imagen inmunohistoquímica y la autorradiografía. Como se desprende de la FIG. 18, en el caso del [F18]FMISO algunas zonas en las que se había observado localización del marcador hipóxico pimonidazol presentaron un valor LFE bajo y hubo otras zonas donde el valor LFE y la región hipóxica (sitio de localización del pimonidazol) no coincidían visualmente entre sí. También se desprende de la FIG. 18 y de la tabla 3 que hubo grandes variaciones en las representaciones gráficas del [F18]-FMISO en una gráfica de dispersión donde la intensidad de acumulación correspondía a la proporción ocupada por el entorno hipóxico. Por otra parte la acumulación de cada uno de los compuestos marcados mostró un valor LFE elevado en los sitios en que se había observado localización del marcador hipóxico, coincidiendo así visualmente de manera similar a los resultados del ejemplo 12. De la FIG. 18 se deduce claramente que hubo una correlación entre la intensidad de acumulación de cada uno de los compuestos marcados y la proporción ocupada por el entorno hipóxico en la misma posición. Además todos los compuestos marcados de la presente invención presentaron un factor de correlación mayor que el del [F18]FMISO. Estos resultados sugieren que la intensidad de acumulación de cada uno de los compuestos marcados en un tumor refleja más cuantitativamente que el [F18]FMISO el nivel de una región hipóxica en un tumor.
Tabla 3
- Compuesto
- Coeficiente de correlación
- [F18]FMISO
- 0,55
- Compuesto 1
- 0,85
- Compuesto 2
- 0,80
- Compuesto 3
- 0,61
Ejemplo 14: examen de la distribución de cada compuesto marcado en el cuerpo
Se midió la biodistribución de los compuestos 1 al 3 y del [F18]FMISO en un tumor y en cada uno de los órganos de un ratón portador de tumor.
(Método)
Los ratones modelo portadores de tumor utilizados en este experimento fueron los mismos que se prepararon para el ejemplo 10 y de cada grupo se escogieron 3 o 4 casos en que el volumen del tumor llegaba a 200 hasta 400 mm3. El ratón modelo portador de tumor se anestesió con isoflurano; se le administró pimonidazol, que es un marcador de hipoxia, a través de una vena caudal y 10 minutos más tarde el respectivo compuesto marcado. El ratón modelo portador de tumor se sacrificó a los 60 minutos y a los 120 minutos tras la administración. Todos los ratones modelo portadores de tumor se sacrificaron por sangrado de la aorta abdominal o por cardiocentesis e inmediatamente después se diseccionaron. Aparte del tumor se tomaron muestras de sangre, del corazón, del pulmón, del estómago, del hígado, de la vesícula biliar, del riñón, del intestino delgado y del intestino grueso, del músculo y de orina, y los demás tejidos fueron definidos como cuerpo total restante. Después de pesar cada muestra de tejido se midió la cantidad de radiactividad del tejido utilizando un contador gamma y se comparó la biodistribución de cada uno de los compuestos marcados convirtiéndola en % de DI/g (% de dosis inyectada/g de órgano) para cada tejido.
Para examinar un estado hipóxico en un tumor se realizó una tinción inmunohistoquímica de una muestra del mismo con el fin de determinar si el interior del tumor era o no era hipóxico. La muestra del tumor se fijó con un tampón de formalina al 20% y se preparó un bloque de parafina empleando un aparato automático de inclusión en parafina (modelo: VIP-5-Jr-J0, Sakura Finetek). Se preparó un corte (espesor: 3 µm) por medio de un microtomo (modelo: Tissue-Tek Feather Trustome, Sakura Finetek). La tinción inmunohistoquímica se llevó a cabo por el mismo método que en el ejemplo 12.
(Resultados)
Los resultados se muestran en las tablas 4 y 5. La tabla 4 muestra el % de DI/g para cada tejido transcurridos 60 minutos después de la administración. La tabla 5 muestra el % de DI/g para cada tejido transcurridos 120 minutos después de la administración, pero en las tablas 4 y 5 la orina está indicada en % de DI. Además en las tablas 4 y 5 T/S se refiere a la relación tumor/sangre y T/M se refiere a la relación tumor/músculo. La radioacumulación de cada uno de los compuestos marcados en el tumor del ratón modelo portador de tumor fue inferior a la del [F18]FMISO, pero las concentraciones de distribución del compuesto 1 y del compuesto 3 en la sangre fueron del 1,70% de DI/g y del 2,81% de DI/g respectivamente a los 60 minutos tras la administración de los respectivos compuestos marcados y disminuyeron a 0,75% de DI/g y 1,14% de DI/g respectivamente a los 120 minutos tras la administración de los respectivos compuestos marcados. Además las concentraciones de distribución en la orina fueron del 62,13% de DI y del 45,80% de DI respectivamente a los 60 minutos tras la administración de los respectivos compuestos marcados y aumentaron hasta 77,76% de DI y 68.78% de DI respectivamente a los 120 minutos tras la administración de los respectivos compuestos marcados. Con estos resultados se confirmó que la eliminación de la sangre y la excreción urinaria del compuesto 1 y del compuesto 3 fueron rápidas en comparación con el [F18]FMISO. Por otra parte el compuesto 2 dio una concentración de distribución del 0,60% de DI/g en la sangre y del 80,42% de DI en la orina a
los 60 minutos tras la administración del compuesto marcado. Por tanto se confirmó que su eliminación de la sangre y su excreción urinaria fueron aún más rápidas. La relación tumor/sangre entre los 60 y los 120 minutos después de la administración de cada uno de los compuestos marcados fue mayor que la del [F18]FMISO. Con el resultado de la tinción inmunohistoquímica se confirmó que interior del tumor era o hipóxico.
Tabla 4
- Sangre
- Corazón Pulmón Hígado Estómago Intestino delgado Intestinogrueso Vesícula biliar Riñón Músculo Orina Tumor T/S T/M
- Compuesto 1
- Error estándarde la media 1,700,14 2,350,25 1,960,12 3,340,18 1,530,15 3,720,29 3,710,18 26,3412,62 4,230,90 1,710,06 62,131,74 2,380,07 1,420,08 1,390,05
- Compuesto 2
- Error estándarde la media 0,600,09 1,320,12 0,890,04 1,140,03 0,480,03 2,350,07 0,960,05 7,541,54 1,860,05 1,250,08 80,420,88 1,130,02 2,110,47 0,910,07
- Compuesto 3
- Error estándarde la media 2,810,93 3,461,09 2,920,83 4,461,90 1,990,82 4,681,15 5,400,71 16,719,17 9,953,35 2,660,79 45,8012,76 2,050,31 0,860,20 0,870,18
- [F 18]FMISO
- Error estándarde la media 4,450,14 5,120,05 4,410,05 5,840,15 4,170,34 5,760,06 13,761,51 12,921,25 8,521,79 3,800,08 34,985,09 4,710,09 1,060,02 1,240,01
Tabla 5
- Sangre
- Corazón Pulmón Hígado Estómago Intestino delgado Intestinogrueso Vesícula biliar Riñón Músculo Orina Tumor T/S T/M
- Compuesto 1
- Error estándarde la media 0,750,14 1,900,21 0,890,14 4,312,79 0,880,03 2,780,24 2,370,65 8,210,78 2,910,86 0,840,09 77,763,85 1,650,08 2,470,45 2,030,18
- Compuesto 2
- Error estándarde la media 0,250,01 0,740,12 0,340,02 0,540,04 0,250,03 1,630,12 0,880,12 7,332,28 0,820,05 0,470,05 90,920,24 0,780,02 3,180,06 1,680,10
- Compuesto 3
- Error estándarde la media 1,140,55 1,820,97 1,380,73 2,131,17 1,260,68 3,661,16 6,891,58 15,453,95 9,207,68 1,440,66 68,7814,09 1,930,49 2,110,43 1,620,31
- [F 18]FMISO
- Error estándarde la media 2,260,16 3,330,38 2,690,27 3,850,34 1,850,38 4,630,36 21,161,79 43,4329,12 3,890,57 2,290,18 41,452,15 4,280,19 1,910,07 1,880,07
Los anteriores resultados sugieren que el compuesto de la presente invención marcado con flúor radiactivo puede proporcionar una imagen que refleja con gran contraste un estado hipóxico dentro de un tumor al cabo de un tiempo relativamente breve tras la administración.
APLICABILIDAD INDUSTRIAL
El compuesto de la presente invención marcado con flúor radiactivo se puede aplicar en el campo de los agentes diagnósticos por imagen en la medicina nuclear.
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-
imagen1 imagen2
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