ES2556232T3

ES2556232T3 - Péptidos antigénicos del cáncer derivados de WT1

Info

Publication number: ES2556232T3
Application number: ES10152702.6T
Authority: ES
Inventors: Haruo Sugiyama
Original assignee: International Institute of Cancer Immunology Inc
Current assignee: International Institute of Cancer Immunology Inc
Priority date: 2004-03-31
Filing date: 2005-03-30
Publication date: 2016-01-14
Anticipated expiration: 2025-03-30
Also published as: US20130196427A1; DK2186896T3; US20100062013A1; JPWO2005095598A1; EP2186896B1; DK1731605T3; HK1144305A1; PL1731605T3; EP1731605B1; JP4886507B2; WO2005095598A1; EP1731605A4; ES2341785T3; SI1731605T1; EP1731605A1; US8388975B2; PT1731605E; EP2186896A1; US7622119B2; US20080152631A1

Abstract

Uso de un péptido de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 3 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento o la prevención del cáncer en un paciente positivo para HLA-A*0201.

Description

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Las células transformadas que contienen el vector divulgado en el presente documento se pueden preparar transformando células huésped con un vector de expresión como el obtenido anteriormente.

Las células hospedadoras útiles en el presente documento incluyen Escherichia coli, levadura, células de insecto y células animales. Los ejemplos de Escherichia coli incluyen las cepas de E. coli K-12 tales como HB101, C600, JM109, DH5α y AD494 (DE3). Los ejemplos de levaduras incluyen Saccharomyces cerevisiae. Los ejemplos de células animales incluyen células L929, BALB/c3T3, C127, CHO, COS, Vero y Hela. Los ejemplos de células de insecto incluyen sf9.

La introducción de un vector de expresión en las células hospedadores se puede llevar a cabo utilizando un método convencional adecuado para las células hospedadoras respectivas anteriores. Específicamente, la introducción se puede llevar a cabo usando el método del fosfato de calcio, el método de DEAE-dextrano, el método de electroporación, y un método que utilice lípidos para la transferencia génica (Lipofectamina, Lipofectina; Gibco-BRL). Las células transformadas que contienen el vector de expresión se pueden seleccionar cultivando las células hospedadoras después de su introducción en un medio convencional que contenga un marcador para la selección.

El péptido de la presente invención se puede producir cultivando las células transformadas bajo condiciones apropiadas (condiciones bajo las cuales pueden expresarse los péptidos). El péptido resultante puede aislarse y purificarse posteriormente según procedimientos bioquímicos de purificación normalizados. Los procedimientos de purificación incluyen desplazamiento salino, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de absorción, cromatografía de afinidad, cromatografía de filtración en gel, y similares. Cuando el polipéptido de la presente invención se ha expresado como un péptido de fusión con tiorredoxina, con una marca de His ("His tag"), GST, o similar, como se ha mencionado anteriormente, el péptido se puede aislar y purificar mediante procedimientos de purificación apropiados que aprovechan las características de la proteína de fusión o de las marcas ("tags").

Se divulga también un anticuerpo que se une específicamente a un péptido de la presente invención. El anticuerpo divulgado en el presente documento no está limitado a ninguna forma y puede ser un anticuerpo policlonal o monoclonal producido contra un péptido de la presente invención como antígeno.

Como se ha mencionado anteriormente, no existe limitación en lo que respecta al anticuerpo divulgado en el presente documento, con la condición de que se una específicamente a un péptido de la presente invención. Los ejemplos de anticuerpo divulgados en el presente documento incluyen los que se unen específicamente a un péptido que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15, preferentemente a un péptido que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8 o 9.

Los métodos de preparación de anticuerpos son bien conocidos en la técnica y los anticuerpos de la presente invención se pueden preparar mediante tales métodos convencionales (Current Protocols in Molecular Biology, edit. Ausubel y col. (1987) Publish. John Wiley and Sons. Sección 11.12-11.13, Antibodies; A Laboratory Manual, Lane, H, D y col., ed., Cold Spring Harber Laboratory Press, Nueva York 1989).

Específicamente, pueden prepararse anticuerpos inmunizando un animal no humano, tal como un conejo, con un péptido como el divulgado en el presente documento como antígeno, y recuperando los anticuerpos del suero del animal inmunizado de manera convencional. Por otra parte, se pueden obtener anticuerpos monoclonales inmunizando un animal no humano, tal como un ratón, con un péptido como el divulgado en el presente documento, sometiendo los esplenocitos resultantes a fusión celular con células de mieloma, y recuperando los anticuerpos de las células de hibridoma resultantes (Current Protocols en Molecular Biology, edit. Ausubel y col. (1987) Publish. John Wiley and Sons. Sección 11.4-11.11).

Los anticuerpos frente al péptido divulgado en el presente documento también se pueden producir a la vez que se incrementa la respuesta inmunológica utilizando diferentes adyuvantes dependiendo del hospedador. Los ejemplos de adyuvantes incluyen los adyuvantes de Freund; geles minerales tales como hidróxido de aluminio; tensioactivos tales como lisolecitina, polioil Pluronic, polianión, péptido, emulsión oleosa, hemocianina de la lapa californiana y dinitrofenol; adyuvantes humanos tales como BCG (bacilo de Calmette-Guerin) o Corynebacterium, y similares.

Como se ha mencionado anteriormente, los anticuerpos que reconocen un péptido como el divulgado en el presente documento y los anticuerpos que neutralizan la actividad del mismo se pueden preparar fácilmente mediante la inmunización de un animal apropiadamente con un péptido de la presente invención de la manera convencional. Los anticuerpos se pueden utilizar en cromatografía de afinidad, métodos de diagnóstico inmunológicos, y similares. Los métodos de diagnóstico inmunológicos se pueden seleccionar, según sea apropiado, para inmunotransferencia, radioinmunoensayo (RIA), enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA), un ensayo fluorescente o luminiscente, y similares. El método de diagnóstico inmunológico es eficaz en el diagnóstico del cáncer acompañado por una expresión elevada de WT1, por ejemplo, cánceres hematológicos tales como leucemia, síndrome mielodisplásico, mieloma múltiple y linfoma maligno, y cánceres sólidos tales como el cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer embriónico, cáncer hepático, cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de cuello de útero, y cáncer de ovario.

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La presente invención proporciona una célula presentadora de antígeno que presenta un complejo entre un péptido de la presente invención y un antígeno HLA-A26.

Según se muestra en los ejemplos posteriores, la estimulación con un péptido como el divulgado en el presente documento indujo los CTL, lo que indica que existían células presentadoras de antígeno que presentaban un complejo entre un péptido como el divulgado en el presente documento y un antígeno HLA-A26 y que se inducían CTL que reconocían específicamente dichas células presentadoras de antígeno. Tales células presentadoras de antígeno que presentan un complejo entre un péptido de la presente invención y un antígeno HLA-A26 se utilizan eficazmente en terapia celular (terapia DC) según se describe más adelante en el presente documento.

Las células presentadoras de antígenos divulgadas en el presente documento incluyen cualquier célula que presente un complejo de un antígeno HLA-A26 y un péptido antigénico del cáncer como el divulgado en el presente documento, y los ejemplos específicos incluyen células presentadoras de antígenos en las que un complejo de un péptido que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15, preferentemente un péptido que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8 o 9 y un antígeno HLA-A26 se presenta sobre la superficie de células dendríticas.

Las células presentadoras de antígeno utilizadas en la terapia celular (terapia DC) se pueden preparar aislando células que tengan capacidad presentadora de antígeno de un paciente con cáncer, sometiendo las células in vitro a un pulso con un péptido como el divulgado en el presente documento, o introduciendo en las células un polinucleótido o un vector de expresión que contenga el mismo según se ha divulgado en el presente documento, y permitiendo que las células presenten el complejo entre un antígeno HLA-A26 y un péptido antigénico del cáncer como el divulgado en el presente documento sobre la superficie celular. Las "células que tienen capacidad presentadora de antígeno" no están limitadas a células particulares y puede ser cualquier célula que exprese un antígeno HLA-A26 que pueda presentar un péptido como el divulgado en el presente documento sobre la superficie celular; sin embargo, se prefieren las células dendríticas, conocidas por tener una capacidad presentadora de antígeno especialmente elevada.

Además, la sustancia con la que las células con capacidad presentadora de antígeno anteriores se someten a un pulso puede ser un péptido de la presente invención, o un polinucleótido que codifique el péptido de la presente invención o un vector de expresión que contenga el mismo.

Las células presentadoras de antígenos divulgadas en el presente documento se pueden preparar, por ejemplo, aislando células que tengan capacidad presentadora de antígeno de un paciente con cáncer, sometiendo las células in vitro a un pulso con un péptido como el divulgado en el presente documento (por ejemplo, un péptido antigénico del cáncer que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15, preferentemente un péptido antigénico del cáncer que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8 o 9), produciendo de este modo un complejo entre un antígeno HLA-A26 y el péptido divulgado en el presente documento (Cancer Immunol. Immunother., 46:82, 1998, J. Immunol., 158: p1796, 1997, Cancer Res., 59: p1184, 1999). Cuando se utilizan células dendríticas, las células presentadoras de antígenos divulgadas en el presente documento se pueden preparar, por ejemplo, aislado linfocitos de la sangre periférica de un paciente con cáncer mediante el método del Ficoll, eliminando las células no adherentes, incubando las células adherentes en presencia de GM-CSF e IL-4 para inducir células dendríticas, y sometiendo las células dendríticas a un pulso mediante incubación con un péptido como el divulgado en el presente documento.

En el caso en que las células presentadoras de antígeno tal como se divulgan en el presente documento se preparen mediante la introducción de un polinucleótido que codifique un péptido de la presente invención (por ejemplo, un polinucleótido que codifica un péptido epitópico que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15, preferentemente la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8 o 9) o un vector de expresión que contenga el mismo en las células anteriormente mencionadas con capacidad presentadora de antígeno, la preparación se puede llevar a cabo en referencia a un método descrito en Cancer Res., 56:p5672, 1996 o J. Immunol., 161:p5607, 1998, o similar, cuando el polinucleótido es ADN. La preparación de las células presentadoras de antígeno se puede realizar utilizando ARN además de ADN de manera análoga, en referencia a J. Exp. Med., 184: p465, 1996, o similar.

Se describen también CTL que reconocen un complejo entre un péptido antigénico del cáncer y un antígeno HLA-A26.

Según se muestra en los ejemplos posteriores, la estimulación con un péptido como el divulgado en el presente documento puede dar como resultado actividad inductora de CTL. Esto indica que existían células presentadoras de antígeno que presentaban un complejo entre un péptido como el divulgado en el presente documento y un antígeno HLA-A26 y que se inducían CTL que reconocían específicamente dichas células presentadoras de antígeno. Tales CTL que reconocen específicamente un complejo entre un antígeno HLA-A26 y un péptido como el divulgado en el presente documento, pueden ser utilizadas eficazmente en inmunoterapia adoptiva según se describe en la presente posteriormente.

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En melanomas, se ha observado efecto terapéutico en inmunoterapia adoptiva en la cual se extraen de un paciente linfocitos T que se infiltran en el tumor y se cultivan ex vivo en grandes cantidades, y posteriormente se devuelven al mismo paciente (J. Natl. Cancer. Inst., 86: 1159, 1994). Además, en melanoma de ratón, se ha observado supresión de metástasis cuando se estimulan esplenocitos in vitro con el péptido antigénico del cáncer TRP-2 para amplificar los CTL específicos del péptido antigénico del cáncer, y los CTL se administran a un ratón con un injerto de melanoma (J. Exp. Med., 185:453, 1997). Esto fue el resultado de la proliferación in vitro de los CTL que reconocían específicamente un complejo entre un antígeno HLA de las células presentadoras de antígeno y un péptido antigénico del cáncer. Por consiguiente, se cree que es eficaz un método terapéutico que comprende la estimulación in vitro de linfocitos de sangre periférica de un paciente con un péptido o con un polinucleótido o con un vector de expresión como el divulgado en el presente documento para hacer proliferar CTL específicos contra el cáncer, y la devolución de los CTL en el paciente. Por tanto, los CTL que se han divulgado en el presente documento se pueden utilizar como ingrediente activo de una vacuna contra el cáncer en inmunoterapia adoptiva.

La vacuna contra el cáncer que contiene como ingrediente activo los CTL divulgados en el presente documento contiene preferiblemente solución salina fisiológica, solución salina tamponada con fosfato (PBS), medio, o similar, para mantener de manera estable los CTL. Se puede administrar, por ejemplo, por vía intravenosa, subcutánea o intradérmica. La dosis es similar a la descrita en las referencias citadas anteriormente.

Cuando la vacuna contra el cáncer se devuelve a un paciente positivo para HLA-A26 y positivo para WT1, la acción citotóxica de los CTL sobre las células cancerosas queda potenciada en el organismo del paciente, y las células cancerosas son destruidas. De esta forma, se puede tratar el cáncer. La vacuna contra el cáncer que comprende como ingrediente activo los CTL que se han divulgado en el presente documento se puede utilizar en la prevención o el tratamiento de un cáncer acompañado por un nivel de expresión elevado del gen WT1, por ejemplo, cánceres hematológicos tales como leucemia, síndrome mielodisplásico, mieloma múltiple y linfoma maligno, y cánceres sólidos tales como el cáncer gástrico, cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer embriónico, cáncer hepático, cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer de útero, cáncer de cuello de útero, y cáncer de ovario.

También se describe un monómero de HLA, un dímero de HLA, un tetrámero de HLA o un pentámero de HLA que contiene un péptido antigénico del cáncer de la presente invención y un antígeno HLA-A26.

En la inmunoterapia contra el cáncer, el examen de la frecuencia o de la cantidad de células precursoras de CTL dirigidas a un antígeno del cáncer (péptido antigénico del cáncer) en un paciente antes del tratamiento, o el examen de la frecuencia o de la cantidad de CTL en un paciente durante el tratamiento con un antígeno del cáncer (péptido antigénico del cáncer), puede proporcionar una indicación significativa para la selección de pacientes altamente sensibles al antígeno del cáncer (péptido antigénico del cáncer), la monitorización de los efectos terapéuticos, o la evaluación de la idoneidad del tratamiento. Un monómero de HLA, un dímero de HLA, un tetrámero de HLA y un pentámero de HLA conteniendo cada uno de ellos un péptido antigénico tumoral junto con un antígeno HLA son útiles como reactivo para la detección de CTL específicos del antígeno (péptido antigénico), específicamente, para la medida de la frecuencia o de la cantidad de los CTL.

Tal como se usa en el presente documento, el tetrámero de HLA se refiere a un tetrámero preparado biotinilando un complejo (monómero de HLA) obtenido por la asociación de la cadena α de un antígeno HLA y una β2microglobulina con un péptido (péptido antigénico), y permitiendo la unión a avidina para la tetramerización (Science,

279: 2103-2106 (1998); y Science 274: 94-96 (1996)).

El monómero de HLA es un monómero que se utiliza en la preparación del tetrámero de HLA anteriormente mencionado y se forma mediante la biotinilación de una asociación de la cadena α de un antígeno HLA, β2microglobulina y el péptido antigénico.

El dímero de HLA es un dímero preparado fusionando la cadena α de un antígeno HLA e Ig (inmunoglobulina, por ejemplo, IgG1), y uniendo la fusión resultante a β2-microglobulina y al péptido antigénico (Proc. Natl. Acad. Sci. USA

90: 6671-6675 (1993)). Los CTL específicos del péptido antigénico unidos al dímero de HLA se pueden detectar, por ejemplo, permitiendo que un anticuerpo contra IgG1 marcado se una a IgG1.

El pentámero de HLA es una técnica desarrollada recientemente y se refiere a un pentámero en el cual cinco moléculas de un complejo que comprende un antígeno HLA y un péptido antigénico se polimerizan a través del dominio de hélice enrollada ("coiled-coil"). Como el complejo antígeno HLA-péptido antigénico se puede marcar con fluorescencia o similar, el análisis se puede llevar a cabo mediante citometría de flujo o un método similar de manera análoga al tetrámero de HLA (véase, http://www.proimmune.co.uk/).

El monómero, el dímero, el tetrámero y el pentámero de HLA anteriormente mencionados están disponibles mediante producción por encargo de fabricantes tales como ProImmune o BD Biosciences. Actualmente, los tetrámeros de HLA y similares, que contienen diferentes péptidos antigénicos, están disponibles comercialmente (Medical & Biological Laboratories Co., Ltd., etc.)

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Los ejemplos del monómero, del dímero, del tetrámero y del pentámero de HLA divulgados en el presente documento incluyen, específicamente, monómeros, dímeros, tetrámeros y pentámeros de HLA que contienen cada uno de ellos un péptido con una secuencia de aminoácidos como la expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15, preferentemente la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 2, 8 o 9 y un antígeno HLA-A26. Preferentemente, en la detección de los CTL se utiliza un tetrámero de HLA o un pentámero de HLA y, más preferiblemente, un tetrámero de HLA.

El monómero de HLA, el tetrámero de HLA y el pentámero de HLA preferentemente se marcan con fluorescencia para que los CTL unidos se pueden seleccionar o detectar fácilmente mediante una medida de detección conocida tal como citometría de flujo, microscopía de fluorescencia, y similares. Los ejemplos incluyen monómeros, tetrámeros y pentámeros de HLA marcados con ficoeritrina (PE), isotiocianato de fluoresceína (FITC), proteína peridinil clorofila (PerCP), aloficocianina (APC), o similar.

El antígeno HLA-A26 (cadena α del antígeno HLA-A26), que es un componente del monómero, del dímero, del tetrámero y del pentámero de HLA de la presente invención, puede ser clonado fácilmente mediante un método convencional tal como PCR sobre la base de la información sobre la secuencia de bases conocida del HLA-A26, etcétera, descrita en el Nº de Acceso del GenBank D 14350.

La β2-microglobulina, que es un componente del monómero, del dímero, del tetrámero y del pentámero de HLA de la presente invención procede preferiblemente de un ser humano. La β2-microglobulina humana se puede clonar fácilmente mediante un método convencional tal como PCR sobre la base de la información sobre la secuencia de bases conocida de la β2-microglobulina humana descrita en el Nº de Acceso del GenBank AB021288.

El proceso para la preparación del monómero, el dímero, el tetrámero y el pentámero de HLA es bien conocido a partir de las bibliografías respectivas anteriormente mencionadas; sin embargo, la preparación se describirá brevemente más adelante en el presente documento en lo que se refiere al tetrámero de HLA.

En primer lugar, una célula hospedadora apropiada tal como E. coli o células de mamífero que puede expresar una proteína se transforma con un vector de expresión de la cadena α de HLA-A26 y un vector de expresión de β2microglobulina, y se permite la expresión. En el presente documento se utiliza preferiblemente E. coli (por ejemplo, BL21). El complejo resultante de HLA-A26 monomérico y un péptido de la presente invención se mezclan posteriormente para formar un complejo HLA-péptido soluble. La secuencia del extremo C de la cadena α de HLA-A26 del complejo HLA-péptido resultante se biotinila con la enzima BirA. Cuando un complejo HLA-péptido biotinilado y avidina marcada fluorescentemente se mezclan en una relación molar de 4:1, se forma un tetrámero de HLA. Se prefiere purificar la proteína resultante mediante filtración en gel o similar en cada una de las etapas anteriores.

El monómero, el dímero, el tetrámero y el pentámero de HLA descritos anteriormente se utilizan eficazmente como agentes de detección de los CTL específicos de péptidos antigénicos del cáncer que se unen a HLA-A26.

El agente detector de CTL de la presente invención se puede utilizar, por ejemplo, para los fines siguientes.

1) Se puede utilizar para examinar la frecuencia o la cantidad de precursores de CTL dirigidos a un péptido antigénico del cáncer como el divulgado en el presente documento antes del tratamiento con el péptido antigénico del cáncer. Esto hace posible evaluar la sensibilidad de un paciente al péptido antigénico del cáncer. 2) Puede utilizarse para examinar la frecuencia o la cantidad de CTL en un paciente durante el tratamiento con un péptido antigénico del cáncer de la presente invención. Esto hace posible monitorizar los efectos terapéuticos, evaluar la idoneidad del tratamiento, y confirmar que el tratamiento transcurre favorablemente, y similares.

La detección de los CTL se puede llevar a cabo, específicamente, aislando una muestra biológica (por ejemplo, PBMC) que contenga CTL de un sujeto paciente, poniendo en contacto un tetrámero de HLA o similar como el que se ha divulgado en el presente documento con la muestra biológica, y midiendo la frecuencia o la cantidad existente de CTL específicos del péptido de la presente invención unidos al tetrámero de HLA o similar mediante citometría de flujo, o similar.

Los presentes inventores también han descubierto, por primera vez, que un péptido que contiene la secuencia de aminoácidos de Asp Leu Asn Ala Leu Pro Ala Val (SEC ID Nº: 3) es un péptido antígeno del cáncer que se une a HLA-A*0201. Aunque la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 3 se ha divulgado en el documento WO 00/18795, se han descrito por primera vez los siguientes hallazgos divulgados por la presente invención: dicho péptido tiene actividad como péptido antigénico del cáncer que se une a HLA-A*0201, dicho péptido se genera mediante procesamiento intracelular de la proteína WT1, un complejo de dicho péptido con un antígeno HLA-A*0201 se presenta sobre la superficie celular, y se reconoce por los CTL, y dicho péptido es un péptido antigénico del cáncer terapéuticamente eficaz.

Por tanto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que contiene uno cualquiera de los siguientes a) a f):

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a) un péptido que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 3, b) un péptido epitópico que comprende el péptido descrito en el punto a) anterior, c) un vector de expresión que contiene un polinucleótido que codifica el péptido de los puntos a) o b) anteriores, d) una célula que contiene el vector de expresión descrito en el punto c) anterior, e) una célula presentadora de antígeno sobre la cual se presenta un complejo entre un péptido como el descrito en el punto a) anterior y un antígeno HLA-A* 0201, y f) un CTL que reconoce el complejo entre el péptido del punto a) anterior y un antígeno HLA-A* 0201,

junto con un transportador farmacéuticamente aceptable.

Con respecto a un antígeno HLA-A2 como el antígeno HLA-A* 0201, se conocen algunas reglas (motivos de unión) en la secuencia de un péptido antigénico que se puede unir a dicho antígeno HLA y que se puede presentar. Esto es, se sabe que el motivo de unión del péptido que se une a HLA-A2, en los péptidos que constan de 8-11 aminoácidos, el resto de aminoácido en la posición 2 es leucina, metionina, valina, isoleucina o glutamina, y el aminoácido en el extremo C es valina o leucina (Immunogenetics, 41, p178, 1995, J. Immunol., 155: p4749, 1995). Por consiguiente, el resto de aminoácido en la posición 2 y/o en el extremo C del péptido anteriormente mencionado mostrado en la SEC ID Nº: 3 se puede sustituir por otro resto de aminoácido disponible a la vista de los motivos anteriormente mencionados. Por tanto, no solamente el péptido mostrado en la SEC ID Nº: 3, sino también la variante expuesta en la SEC ID Nº: 4 que está bajo la regla de los motivos anteriormente mencionados (con la condición de que péptido expuesta en la SEC ID Nº: 3 queda excluido) se puede utilizar en una composición farmacéutica similar a la anterior siempre que dicha variante tenga actividad como péptido antigénico del cáncer.

Por tanto, también se divulga una composición farmacéutica que contiene uno cualquiera de los siguientes a) a f):

a)' un péptido antigénico del cáncer que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 4, b)' un péptido epitópico que comprende el péptido descrito en el punto a)' anterior, c)' un vector de expresión que contiene un polinucleótido que codifica el péptido de los puntos a)' o b)' anteriores, d)' una célula que contiene el vector de expresión descrito en el punto c)' anterior, e)' una célula presentadora de antígeno sobre la cual se presenta un complejo entre un péptido como el descrito en el punto a)' anterior y un antígeno HLA-A* 0201, y f)' un CTL que reconoce el complejo entre el péptido del punto a) anterior y un antígeno HLA-A* 0201,

junto con un transportador farmacéuticamente aceptable.

El método para preparar o medir la actividad de las respectivas sustancias descritas en a) -f) y a)’ -f)’, y su uso como inductor de CTL o como vacuna del cáncer es el mismo que el descrito con respecto al péptido de la presente invención que tiene actividad como péptido antigénico del cáncer que se une a HLA-A26. Sin embargo, el péptido mostrado en la SEC ID Nº: 3 o 4 se utiliza en lugar del péptido mostrado en la SEC ID Nº: 2, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 y que el antígeno HLA-A*0201 se utiliza en lugar del antígeno HLA-A26. El antígeno HLA-A*0201 se conoce con el nº de Acceso del GenBank M84379.

La presente invención también proporciona un monómero de HLA, un dímero de HLA, un tetrámero de HLA o un pentámero de HLA que contiene un péptido que tiene la secuencia de aminoácidos Asp Leu Asn Ala Leu Pro Ala Val expuesta en la SEC ID Nº: 3, y un antígeno HLA-A*0201; y un agente para la detección de CTL que es específico de un péptido antigénico del cáncer que se une a HLA-A*0201 derivado de WT1 que comprende el mismo como ingrediente. La descripción proporcionada anteriormente con respecto a un péptido que tiene actividad como péptico antigénico del cáncer que se une a HLA-A26 se puede aplicar a este monómero de HLA, dímero de HLA, tetrámero de HLA y pentámero de HLA, y agente para la detección de CTL. Sin embargo, el péptido mostrado en la SEC ID Nº: 3 o 4 se utiliza en lugar del péptido mostrado en la SEC ID Nº: 2, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15 y que el antígeno HLAA*0201 se utiliza en lugar del antígeno HLA-A26.

Ejemplos

La presente invención se ilustra adicionalmente mediante los ejemplos siguientes, pero no queda limitada por estos ejemplos de forma alguna.

Ejemplo 1

Identificación de péptidos antigénicos que se unen a HLA-A*0201

Un péptido con la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº: 3, que corresponde a la secuencia en posición 7-15 de la secuencia de aminoácidos del WT1 humano (Cell, 60: 509, 1990, SEC ID Nº: 1) se sintetizó mediante síntesis en fase sólida.

Después de obtener el consentimiento informado, se extrajo sangre de sujetos sanos positivos para HLA-A*0201 y se aislaron las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) utilizando la solución de separación Ficoll

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Claims

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