ES2556216T3 - Métodos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o la biomasa en plantas generadas mediante el mismo - Google Patents

Métodos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o la biomasa en plantas generadas mediante el mismo Download PDF

Info

Publication number
ES2556216T3
ES2556216T3 ES06766224.7T ES06766224T ES2556216T3 ES 2556216 T3 ES2556216 T3 ES 2556216T3 ES 06766224 T ES06766224 T ES 06766224T ES 2556216 T3 ES2556216 T3 ES 2556216T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
plant
plants
seq
sequence
genes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES06766224.7T
Other languages
English (en)
Inventor
Hagai Karchi
Gil Ronen
Rodrigo Yelin
Larisa Rabinovich
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Evogene Ltd
Original Assignee
Evogene Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Evogene Ltd filed Critical Evogene Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2556216T3 publication Critical patent/ES2556216T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8237—Externally regulated expression systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Un método para aumentar la tolerancia de una planta a un estrés abiótico, que comprende expresar en la planta un polinucleótido exógeno que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 90 % homóloga a SEC ID Nº: 12, aumentando de este modo la tolerancia de la planta al estrés abiótico en comparación con la planta no transformada, en el que dicho estrés abiótico se selecciona del grupo que consiste en estrés osmótico, estrés por sequía, salinidad y déficit de nutrientes.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
5
15
25
35
45
55
65
al menos aproximadamente un 98 %, al menos aproximadamente un 99 %, o mejor un 100 % homóloga a la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 12.
La frase "estrés abiótico" usada en el presente documento se refiere a un efecto adverso en el metabolismo, crecimiento, reproducción y/o viabilidad de una planta. Por consiguiente, el estrés abiótico puede inducirse por condiciones ambientales de crecimiento subóptimas, tales como, por ejemplo, salinidad, privación de agua, inundaciones, congelación, temperaturas altas o bajas, toxicidad por metales pesados, anaerobiosis, deficiencia de nutrientes, polución atmosférica o irradiación UV. Las implicaciones del estrés abiótico se discuten en la sección de antecedentes.
La frase "tolerancia al estrés abiótico", tal como se usa en el presente documento, se refiere a la capacidad de una planta para soportar un estrés abiótico sin sufrir una alteración sustancial en el metabolismo, crecimiento, productividad y/o viabilidad. Preferentemente, las plantas modificadas por ingeniería genética de la presente invención muestran al menos un 2% más, 5 % más, 10 % más, 20 % más, 30 % más, 40 % más, 50 % más, 60 % más, 70 % más, 80 % más, 90 % más o una tolerancia incluso mayor al estrés abiótico que las plantas no transgénicas.
Tal como se usa en el presente documento, la expresión "polinucleótido exógeno" se refiere a una secuencia de ácido nucleico que no se expresa de manera natural en la planta pero que, cuando se introduce en la planta de un modo bien estable o transitorio, produce al menos un producto polipeptídico.
La homología (por ejemplo, porcentaje de homología) puede determinarse usando cualquier programa informático de comparación de la homología, incluyendo, por ejemplo, el programa informático BlastP del National Center of Biotechnology Information (NCBI) tal como usando parámetros por defecto.
La identidad (por ejemplo, porcentaje de homología) puede determinarse usando cualquier programa informático de comparación de la homología, incluyendo, por ejemplo, el programa informático BlastN del National Center of Biotechnology Information (NCBI) tal como usando parámetros por defecto.
El polinucleótido de la presente invención se refiere a secuencias de ácido nucleico monocatenarias o bicatenarias que se aíslan y proporcionan en forma de una secuencia de ARN, una secuencia polinucleotídica complementaria (ADNc), una secuencia polinucleotídica genómica y/o secuencias polinucleotídicas compuestas (por ejemplo, una combinación de las anteriores).
Tal como se usa en el presente documento, la frase "secuencia polinucleotídica complementaria" se refiere a una secuencia, que es el resultado de la retrotranscripción de ARN mensajero usando una transcriptasa inversa o cualquier otra ADN polimerasa dependiente de ARN. Dicha secuencia puede amplificarse posteriormente in vivo o in vitro usando una ADN polimerasa dependiente de ADN.
Tal como se usa en el presente documento, la frase "secuencia polinucleotídica genómica" se refiere a una secuencia procedente (aislada) de un cromosoma y por lo tanto representa una porción contigua de un cromosoma.
Tal como se usa en el presente documento, la frase "secuencia polinucleotídica compuesta" se refiere a una secuencia, que es al menos parcialmente complementaria y al menos parcialmente genómica. Una secuencia compuesta puede incluir algunas secuencias exónicas necesarias para codificar el polipéptido de la presente invención, así como algunas secuencias intrónicas interpuestas entre estas. Las secuencias intrónicas pueden ser de cualquier fuente, incluyendo de otros genes, e incluirán típicamente secuencias de señal de corte y empalme conservadas. Dichas secuencias intrónicas pueden incluir además elementos reguladores de la expresión que actúan en cis.
Las secuencias de ácido nucleico de los polipéptidos de la presente invención pueden optimizarse respecto de su expresión. Dichas secuencias optimizadas se proporcionan en las SEC ID Nº: 156, 157, 158 y 159. Los ejemplos de dichas modificaciones de secuencia incluyen, pero sin limitación, un contenido de G/C alterado para aproximarse más al encontrado típicamente en la especie de planta de interés, y la eliminación de codones encontrados de manera atípica en las especies de plantas citada de manera común como optimización por codones.
La frase "optimización por codones" se refiere a la selección de nucleótidos de ADN adecuados para su uso en un gen estructural o un fragmento del mismo que se aproxima al uso de codones en la planta de interés. Por lo tanto, un gen o una secuencia de ácido nucleico optimizada se refieren a un gen en el que la secuencia nucleotídica de un gen nativo o de origen natural se ha modificado para utilizar codones preferidos estadísticamente preferidos o estadísticamente favorecidos en la planta. La secuencia nucleotídica se examina típicamente a nivel de ADN y la expresión en la especie de planta se determina usando cualquier procedimiento adecuado, por ejemplo, tal como se describe en Sardana et al., (1996, Plant Cell Reports 15:677-681). En este método, la desviación estándar del uso de codones, una medición del sesgo del uso de codones, puede calcularse encontrando en primer lugar el cuadrado de la desviación proporcional del uso de cada codon del gen nativo en relación a aquel de genes de plantas altamente expresados, seguido de un cálculo de la desviación cuadrada media. La fórmula usada es: 1 SDCU = n =
5
15
25
35
45
55
65
1 N [ (Xn -Yn ) / Yn ] 2 / N, donde Xn se refiere a la frecuencia del uso del codon n en genes de plantas altamente expresados, donde Yn a la frecuencia del uso del codon n en el gen de interés y N se refiere al número total de codones en el gen de interés. Se compila una tabla del uso de codones de genes altamente expresados de plantas dicotiledóneas usando los datos de Murray et al., (1989, Nuc Acids Res. 17:477-498).
Un método para optimizar la secuencia de ácido nucleico de acuerdo con el uso de codones preferido para un tipo de célula vegetal particular está basado en el uso directo, sin efectuar ningún cálculo estadístico adicional, de las tablas de optimización por codones tales como aquellas proporcionadas on-line en la base de datos de uso de codones a través del banco de ADN del NIAS (National Institute of Agrobiological Sciences) en Japón (http://www.kazusa.or.jp/codon/). La base de datos de uso de codones contiene tablas de uso de codones procedentes de una serie de especies diferentes, habiéndose determinado estadísticamente cada tabla de uso de codones basándose en los datos presentes en GenBank.
Al usar las tablas anteriores para determinar los codones más preferidos o más favorecidos para cada aminoácido en una especie particular (por ejemplo, arroz), una secuencia nucleotídica de origen natural que codifica una proteína de interés puede optimizarse por codones para esa especie de planta particular. Esto se efectúa reemplazando codones que pueden tener una baja incidencia estadística en el genoma de la especie particular con los codones correspondientes, en referencia a un aminoácido, que están más favorecidos estadísticamente. Sin embargo, pueden seleccionarse uno o más codones menos favorecidos para eliminar sitios de restricción existentes, para crear nuevos en uniones potencialmente útiles (extremos 5' y 3' para añadir un péptido de señal o casetes de terminación, sitios internos que pueden usarse para cortar y empalmar segmentos para producir una secuencia de longitud completa correcta), o para eliminar secuencias nucleotídicas que puedan afectar negativamente a la estabilidad o expresión de ARNm.
La secuencia nucleotídica codificante de origen natural puede, además de cualquier modificación, contener una serie de codones que corresponden a un codon estadísticamente favorecido en una especie de planta particular. Por lo tanto, la optimización por codones de la secuencia nucleotídica nativa puede comprender determinar qué codones, dentro de la secuencia nucleotídica nativa, no están estadísticamente favorecidos con respecto a una planta particular, y modificar estos codones de acuerdo con una tabla de uso de codones de la planta particular para producir un derivado optimizado por codones. Una secuencia nucleotídica modificada puede optimizarse total o parcialmente para el uso de codones de plantas siempre que la proteína codificada por la secuencia nucleotídica modificada se produzca a un nivel mayor que la proteína codificada por el gen correspondiente de origen natural o nativo. La construcción de genes sintéticos mediante la alteración del uso de codones se describe en, por ejemplo, la Solicitud de Patente PCT 93/07278.
Por lo tanto, la presente invención abarca secuencias de ácido nucleico descritas anteriormente en el presente documento; fragmentos de los mismos, secuencias hibridables con las mismas, secuencias homólogas con estas, secuencias que codifican polipéptidos similares tal como se caracteriza por las reivindicaciones adjuntas con un uso de codones diferentes, secuencias alteradas mediante mutaciones, tales como eliminación, inserción o sustitución de uno o más nucleótidos, ya sean de origen natural o inducidas por el hombre, bien al azar o de una manera dirigida.
Los polinucleótidos descritos anteriormente también codifican polipéptidos no caracterizados previamente.
Por lo tanto, la presente invención proporciona un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos tal como se describe adicionalmente a continuación en el presente documento, al menos un 90 %, al menos aproximadamente un 91 %, al menos aproximadamente un 92 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 93 %, al menos aproximadamente un 94 %, al menos aproximadamente un 95 %, al menos aproximadamente un 96 %, al menos aproximadamente un 97 %, al menos aproximadamente un 98 %, al menos aproximadamente un 99 %,
o mejor un 100 % homóloga a la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 12.
También se describen en el presente documento fragmentos de los polipéptidos anteriormente descritos y polipéptidos que tienen mutaciones, tales como eliminaciones, inserciones o sustituciones de uno o más aminoácidos, ya sean de origen natural o inducidas por el hombre, bien al azar o de una manera dirigida.
Una planta adecuada para su uso con el método de la presente invención puede ser cualquier planta monocotiledónea o dicotiledónea incluyendo, pero sin limitación, maíz, trigo, cebada, centeno, avena, arroz, soja, cacahuete, guisante, lenteja y alfalfa, algodón, colza, canola, pimiento, girasol, patata, tabaco, tomate berenjena, eucalipto, un árbol, una planta ornamental, una hierba perenne y un cultivo de forraje.
La expresión del polinucleótido exógeno de la presente invención en la planta puede efectuarse transformando una o más células de la planta con el polinucleótido exógeno, seguido de la generación de una planta madura a partir de las células transformadas y cultivar la planta madura en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido exógeno en la planta madura.
imagen6
imagen7
5
15
25
35
45
55
65
Aunque actualmente se prefiere la transformación estable, la transformación estable de las células foliares, las células meristemáticas o la planta completa también se prevén por la presente invención.
La transformación transitoria puede efectuarse mediante cualquiera de los métodos de transferencia directa de ADN descritos anteriormente o mediante infección viral usando virus de plantas modificados.
Los virus que se ha demostrado que son útiles para la transformación de células vegetales incluyen CaMV, TMV y BV. La transformación de plantas usando virus vegetales se describe en la Patente de Estados Unidos n.º 4.855.237 (BGV), EP-A 67.553 (TMV), la Solicitud Japonesa Publicada n.º 63-14693 (TMV), EPA 194.809 (BV), EPA 278.667 (BV); y Gluzman, Y. et al., Communications in Molecular Biology: Viral Vectors, Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York, págs. 172-189 (1988). Las partículas seudovirales para su uso en la expresión de ADN exógeno en muchos hospedadores, incluyendo plantas, se describen en el documento WO 87/06261.
Preferentemente, el virus no es virulento y por lo tanto es incapaz de provocar síntomas graves, tales como una velocidad de crecimiento reducida, mosaicismo, manchas de anillo, enrollamiento de hojas, amarilleamiento, formación de surcos, formación de viruelas, formación de tumores y picaduras. Un virus no virulento adecuado puede ser un virus no virulento de origen natural o un virus atenuado de manera artificial. La atenuación del virus puede efectuarse usando métodos bien conocidos en la técnica incluyendo, pero sin limitación, calentamiento subletal, tratamiento químico o técnicas de mutagénesis dirigida tales como las descritas, por ejemplo, por Kurihara y Watanabe (Molecular Plant Pathology 4:259-269, 2003), Galon et al. (1992), Atreya et al. (1992) y Huet et al. (1994).
Pueden obtenerse cepas de virus adecuadas de fuentes disponibles, tales como, por ejemplo, la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC por sus siglas en inglés, American Type Culture Collection) o mediante aislamiento de plantas infectadas. El aislamiento de virus de tejidos vegetales infectados puede efectuarse mediante técnicas bien conocidas en la técnica, tales como las descritas, por ejemplo, por Foster y Tatlor, Eds. "Plant Virology Protocols: From Virus Isolation to Transgenic Resistance (Methods in Molecular Biology (Humana Pr), Vol 81)", Humana Press, 1998. En resumen, los tejidos de una planta infectada que se cree que contienen una alta concentración de un virus adecuado, preferentemente hojas jóvenes y pétalos de flores, se trituran en una solución tampón (por ejemplo, solución de tampón fosfato) para producir una savia infectada por virus que pueda usarse en inoculaciones posteriores.
La construcción de virus de ARN de plantas para la producción y expresión de secuencias polinucleotídicas exógenas no virales en plantas se demuestra por las referencias anteriores así como por Dawson, W. O. et al., Virology (1989) 172:285-292; Takamatsu et al. EMBO J. (1987) 6:307-311; French et al. Science (1986) 231:12941297; y Takamatsu et al. FEBS Letters (1990) 269:73-76.
Cuando el virus es un virus de ADN, pueden efectuarse modificaciones adecuadas al virus en sí. Como alternativa, el virus puede clonarse en primer lugar en un plásmido bacteriano por la facilidad para construir el vector viral deseado con el ADN exógeno. El virus puede entonces cortarse del plásmido. Si el virus es un virus de ADN, puede unirse un origen de replicación bacteriano al ADN viral, que entonces se replica por la bacteria. La transcripción y traducción de este ADN producirá la proteína de la envuelta que encapsidará al ADN viral. Si el virus es un virus de ARN, el virus se clona generalmente como un ADNc y se inserta en un plásmido. Entonces se usa el plásmido para producir todas las construcciones. EL virus de ARN se produce entonces transcribiendo la secuencia viral del plásmido y traduciendo los genes virales para producir la proteína (o las proteínas) de la envuelta que encapsidan al ARN viral.
La construcción de virus de ADN de plantas para la introducción y expresión en plantas de secuencias polinucleotídicas exógenas no virales, tales como aquellas incluidas en la construcción de la presente invención se demuestra por las referencias anteriores así como en la Patente de Estados Unidos Nº 5.316.931.
En un ejemplo, se proporciona un polinucleótido viral de planta en el que la secuencia codificante de la proteína de la envuelta nativa se ha eliminado del polinucleótido viral, una secuencia codificante de proteína de la envuelta viral de planta no nativa y un promotor no nativo, preferentemente el promotor subgenómico de la secuencia codificante de la proteína de la envuelta no nativa, capaz de expresión en el hospedador vegetal, empaquetando el polinucleótido viral de planta recombinante, y asegurando una infección sistémica del hospedador mediante el polinucleótido viral de planta recombinante. Como alternativa, el gen de la proteína de la envuelta puede inactivarse mediante la inserción de la secuencia polinucleotídica no nativa en este, de tal forma que se produce la proteína. El polinucleótido viral de planta recombinante puede contener uno o más promotores subgenómicos no nativos adicionales. Cada promotor subgenómico no nativo es capaz de transcribir o expresar genes adyacentes o secuencias polinucleotídicas en el hospedador vegetal e incapaz de recombinarse entre sí y con promotores subgenómicos nativos. Las secuencias polinucleotídicas no nativas (exógenas) pueden insertarse adyacentes al promotor subgenómico viral de planta nativo y un promotor subgenómico viral de planta no nativo si se incluye más de una secuencia polinucleotídica. Las secuencias polinucleotídicas no nativas se transcriben o expresan en la planta hospedadora bajo el control del promotor subgenómico para producir los productos deseados. En un segundo ejemplo, se proporciona un polinucleótido viral de planta recombinante como en el primer ejemplo salvo que la secuencia codificante de la proteína de la envuelta nativa se coloca adyacente a uno de los promotores
5
15
25
35
45
55
65
subgenómicos de la proteína de la envuelta no nativos en lugar de la secuencia codificante de la proteína de la envuelta no nativa.
En un tercer ejemplo, se proporciona un polinucleótido viral de planta recombinante en el que el gen de la proteína de la envuelta nativo está adyacente a su promotor subgenómico y se han insertado uno o más promotores subgenómicos no nativos en el polinucleótido viral. Los promotores subgenómicos no nativos insertados son capaces de transcribir o expresar genes adyacentes en un hospedador de planta y son incapaces de recombinar entre sí y con promotores subgenómicos nativos. Las secuencias polinucleotídicas no nativas pueden insertarse adyacentes a promotores virales de planta subgenómicos no nativos de tal forma que las secuencias se transcriben
o expresan en la planta hospedadora bajo el control de promotores subgenómicos para producir el producto deseado.
En un cuarto ejemplo, se proporciona un polinucleótido viral de planta recombinante como en el tercer ejemplo salvo que la secuencia codificante de la proteína de la envuelta se reemplaza por una secuencia codificante de una proteína de envuelta no nativa.
Los vectores virales se encapsidan por las proteínas de envuelta codificadas por el polinucleótido viral de planta recombinante para producir un virus de planta recombinante. El polinucleótido viral de planta recombinante o el virus de planta recombinante se usa para infectar a plantas hospedadoras adecuadas. El polinucleótido viral de planta recombinante es capaz de replicarse en el hospedador, de diseminarse sistémicamente en el hospedador, y de transcripción o expresión de genes exógenos (polinucleótidos exógenos) en el hospedador para producir la proteína deseada.
Las técnicas para la inoculación de virus en plantas pueden encontrarse en Foster y Taylor, eds. "Plant Virology Protocols: From Virus Isolation to Transgenic Resistance (Methods in Molecular Biology (Humana Pr), Vol 81)", Humana Press, 1998; Maramorosh y Koprowski, eds. "Methods in Virology" 7 volúmenes, Academic Press, Nueva York 1967-1984; Hill, S.A. "Methods in Plant Virology", Blackwell, Oxford, 1984; Walkey, D.G.A. "Applied Plant Virology", Wiley, Nueva York, 1985; y Kado y Agrawa, eds. "Principles and Techniques in Plant Virology", Van Nostrand-Reinhold, Nueva York.
Además de lo anterior, el polinucleótido de la presente invención también puede introducirse en un genoma de cloroplasto, permitiendo de este modo la expresión en cloroplastos.
Se conoce una técnica para introducir secuencias polinucleotídicas exógenas al genoma de los cloroplastos. Esta técnica implica los siguientes procedimientos. En primer lugar, las células vegetales se tratan químicamente para reducir el número de cloroplastos por célula a aproximadamente uno. Después, el polinucleótido exógeno se introduce mediante bombardeo de partículas a las células con el objetivo de introducir al menos una molécula de polinucleótido exógeno en los cloroplastos. Los polinucleótidos exógenos se seleccionan de tal modo que son integrables en el genoma del cloroplasto mediante recombinación de homólogos, que se efectúa fácilmente mediante enzimas inherentes al cloroplasto. Para este fin, el polinucleótido exógeno incluye, además de un gen de interés, al menos una serie de polinucleótidos que procede del genoma del cloroplasto. Además, el polinucleótido exógeno incluye un marcador de selección, que sirve como procedimiento de selección secuencial para determinar que la totalidad o prácticamente la totalidad de las copias de los genomas de cloroplasto después de dicha selección incluirán al polinucleótido exógeno. Pueden encontrarse detalles adicionales en referencia a esta técnica en las Patentes de Estados Unidos n.º 4.945.050; y 5.693.507, que se incorporan al presente documento por referencia. Por lo tanto puede producirse un polipéptido mediante el sistema de expresión de proteínas de cloroplastos y quedar integrado en la membrana interna del cloroplasto.
Ya que la tolerancia al estrés abiótico en las plantas puede implicar múltiples genes que actúan de manera aditiva o sinérgica (véase, por ejemplo, en Quesda et al., Plant Physiol. 130:951-063, 2002), la presente invención también prevé la expresión de una diversidad de polinucleótidos exógenos en una sola planta hospedadora para lograr de este modo una tolerancia al estrés abiótico superior.
La expresión de una diversidad de polinucleótidos exógenos en una sola planta hospedadora puede efectuarse introduciendo de manera conjunta múltiples construcciones de ácido nucleico, incluyendo cada una diferentes polinucleótidos exógenos en una sola célula vegetal. La célula transformada puede entonces regenerarse en una planta madura usando los métodos descritos anteriormente en el presente documento.
Como alternativa, la expresión de una diversidad de polinucleótidos exógenos en una sola célula vegetal hospedadora puede efectuarse introduciendo conjuntamente n una sola célula vegetal una sola construcción de ácido nucleico que incluye una diversidad de polinucleótidos exógenos diferentes. Dicha construcción puede diseñarse con una sola secuencia promotora que pueda transcribir un mensaje policistrónico que incluye todas las secuencias polinucleotídicas exógenas diferentes. Para permitir la traducción conjunta de los diferentes polipéptidos codificados por el mensaje policistrónico, las secuencias polinucleotídicas pueden interconectarse mediante una secuencia de sitio de entrada a un ribosoma interno (IRES) que facilita la traducción de secuencias polinucleotídicas posicionadas cadena abajo de la secuencia del IRES. En este caso, una molécula de ARN policistrónico que codifica
imagen8
5
15
25
35
45
55
65
Tal como se usa en el presente documento, la frase "biomasa de planta" se refiere a la cantidad o cuantía de tejido producido por la planta en una temporada de cultivo, que también podría determinar o afectar al rendimiento de la planta o al rendimiento por zona de crecimiento.
Tal como se usa en el presente documento, la frase "vigor de planta" se refiere a la cantidad o cuantía de tejido producido por la planta en un tiempo dado. De este modo, el aumento del vigor podría determinar o afectar al rendimiento de la planta o al rendimiento por tiempo de crecimiento o área de crecimiento.
Tal como se usa en el presente documento, la frase "rendimiento de planta" se refiere a la cantidad o cuantía de tejido producido y cosechado como producto producido por la planta. De este modo, el aumento del rendimiento podría afectar al beneficio económico que podría obtenerse de la planta en un determinado crecimiento y/o tiempo de crecimiento.
Preferentemente, las plantas modificadas por ingeniería genética de la presente invención muestran al menos un 2% más, 5 % más, 10 % más, 20 % más, 30 % más, 40 % más, 50 % más, 60 % más, 70 % más, 80 % más, 90 % o más o incluso una biomasa, vigor y/o rendimiento mayor que las plantas no transgénicas.
Los métodos para ensayar el vigor, rendimiento y biomasa de las plantas se conocen bien en la técnica (véase el ejemplo 10).
Por lo tanto, la presente invención tiene un alto valor agrícola para promover el rendimiento de cultivos deseados comercialmente (por ejemplo, la biomasa de órganos vegetativos, tales como la madera de álamo, o de órganos reproductivos, tales como el número de semillas o la biomasa de las semillas).
Tal como se usa en el presente documento, el término "aproximadamente" se refiere a ± 10 %.
Los objetos, ventajas y características novedosas adicionales de la presente invención serán evidentes para un experto habitual en la materia tras el examen de los siguientes ejemplos. Además, cada una de las diversas realizaciones y aspectos de la presente invención tal como se han descrito anteriormente en el presente documento y tal como se reivindican en la sección reivindicatoria tienen apoyo experimental en los siguientes ejemplos.
Ejemplos
A continuación se hace referencia a los siguientes ejemplos, que junto con las descripciones anteriores ilustran la invención.
En general, la nomenclatura usada en el presente documento y los procedimientos de laboratorio utilizados en la presente invención incluyen técnicas moleculares, bioquímicas, microbiológicas y de ADN recombinante. Dichas técnicas se explican exhaustivamente en la bibliografía. Véase, por ejemplo, "Molecular Cloning: A laboratory Manual" Sambrook et al., (1989); "Current Protocols in Molecular Biology" Volúmenes I-III Ausubel, R. M., ed. (1994); Ausubel et al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989); Perbal, "A Practical Guide to Molecular Cloning", John Wiley & Sons, Nueva York (1988); Watson et al., "Recombinant DNA", Scientific American Books, Nueva York; Birren et al. (eds) "Genome Analysis: A Laboratory Manual Series", Volúmenes 1-4, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York (1998); metodologías tal como se exponen en las Patentes de Estados Unidos n.º 4.666.828; 4.683.202; 4.801.531; 5.192.659 y 5.272.057; "Cell Biology: A Laboratory Handbook", Volúmenes I-III Cellis, J. E., ed. (1994); "Current Protocols in Immunology" Volúmenes I-III Coligan J. E., ed. (1994); Stites et al. (eds), "Basic and Clinical Immunology" (8ª edición), Appleton & Lange, Norwalk, CT (1994); Mishell y Shiigi (eds), "Selected Methods in Cellular Immunology", W. H. Freeman and Co., Nueva York (1980); los inmunoensayos disponibles se describen exhaustivamente en la bibliografía de patente y científica, véase, por ejemplo, Patente de Estados Unidos n.º 3.791.932; 3.839.153; 3.850.752; 3.850.578; 3.853.987; 3.867.517; 3.879.262; 3.901.654; 3.935.074; 3.984.533; 3.996.345; 4.034.074; 4.098.876; 4.879.219;
5.011.771 y 5.281.521; "Oligonucleotide Synthesis" Gait, M. J., ed. (1984); "Nucleic Acid Hybridization" Hames, B. D., y Higgins S. J., eds. (1985); "Transcription and Translation" Hames, B. D., y Higgins S. J., eds. (1984); "Animal Cell Culture" Freshney, R. I., ed. (1986); "Immobilized Cells and Enzymes" IRL Press, (1986); "A Practical Guide to Molecular Cloning" Perbal, B., (1984) y "Methods in Enzymology" Vol. 1-317, Academic Press; "PCR Protocols: A Guide To Methods And Applications", Academic Press, San Diego, CA (1990); Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization -A Laboratory Course Manual" CSHL Press (1996); todas las cuales se incorporan por referencia como si se hubiesen expuesto por completo en el presente documento. A lo largo del presente documento se proporcionan otras referencias generales. Se cree que los procedimientos en estos se conocen bien en la técnica y se proporcionan por conveniencia del lector.
A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos utilizados en este documento tienen el mismo significado que el normalmente entendido por un experto habitual en la materia a la cual pertenece esta invención. Aunque pueden usarse métodos y materiales similares o equivalentes a aquellos descritos en el presente documento en la puesta en práctica o la prueba de la presente invención, los métodos y materiales adecuados se describen a continuación.
5
15
25
35
45
55
65
EJEMPLO 1
Identificación de genes de tolerancia al estrés abiótico de monocotiledóneas
Los genes de tolerancia al estrés abiótico (ABST) se identificaron y validaron in vivo tal como se había descrito anteriormente en el documento WO 2004/104162 del presente cesionario. Se identificó una serie de genes de ABS de polipéptidos codificados de este modo de plantas dicotiledóneas (SEC ID Nº: 122-126 y 127-131, respectivamente). La exploración respecto de secuencias ortólogas se llevó a cabo en bases de datos genómicas de monocotiledóneas, NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov), y TIGR (http://www.tigr.org/) bases de datos de maíz, sorgo, arroz y cebada.
Los marcadores de secuencia expresados (EST) y las secuencias de ADNc se agruparon y ensamblaron usando el programa informático LEADS™ (Compugen) y se compararon con las bases de datos de TIGR (http://www.tigr.org/) de las monocotiledóneas anteriores. En su conjunto, el agrupamiento de 372.000 EST de maíz dio como resultado
41.990 grupos siendo 19.870 de estos únicos. En el sorgo se agruparon aproximadamente 190.000 EST en 39.000 agrupamientos, mientras que en la cebada 370.500 EST generaron 50.000 grupos diferentes representando cada un gen diferente. Se encontraron números similares de secuencias y genes agrupados en la base de datos genómica de arroz.
Se compiló un resumen de perfil de expresión digital para cada grupo de acuerdo con todas las palabras clave incluidas en los registros de secuencia que comprenden el agrupamiento. La expresión digital, también conocida como transferencia de Northern digital, es una herramienta que muestra el perfil de expresión virtual basado en las secuencias EST que forman el agrupamiento del gen. La herramienta puede proporcionar el perfil de expresión de un agrupamiento en términos de anatomía de la planta (en qué tejidos/órganos se expresa el gen), estado de desarrollo (los estados de desarrollo en los que puede encontrarse un gen) y el perfil de tratamiento (proporciona las condiciones fisiológicas en las que se expresa un gen, tales como sequía, frío, infecciones por patógenos, etc.). Dada una distribución al azar de los EST en los diferentes agrupamientos, la expresión digital proporciona un valor de probabilidad que describe la probabilidad de que un grupo tenga un total de N EST para que contenga X EST de una determinada colección de bibliotecas. Para los cálculos de probabilidad se tienen en consideración: a) el número de EST en el agrupamiento, b) el número de EST de las bibliotecas implicadas y relacionadas, c) el número total de EST disponibles que representan a la especie. De este modo las agrupaciones con valores de probabilidad bajos están altamente enriquecidos con EST del grupo de las bibliotecas de interés indicando una expresión especializada.
Los conceptos de ortología y paralogía se han aplicado recientemente a las caracterizaciones y clasificaciones funcionales en la escala de comparaciones de genoma completo. Los ortólogos y parálogos constituyen dos tipos principales de homólogos: Los primeros evolucionaron a partir de un ancestro común mediante especialización, y los últimos están relacionados mediante eventos de duplicación. Se asume que es probable que los parálogos que surgen a partir de sucesos de duplicación antiguos hayan divergido en su función mientras que es más probable que los ortólogos retengan una función idéntica a lo largo del tiempo evolutivo.
Para investigar e identificar adicionalmente los genes ortólogos putativos de ABST de especies de monocotiledóneas, se integraron dos métodos asistidos por ordenador:
(i)
Método para alineamientos de secuencias de ortólogos -el método se efectúa construyendo grupos de ortólogos ente diversos taxones eucariotas, usando modificaciones en algoritmo de agrupación de Markov para agrupar ortólogos y parálogos putativos. Estos ortólogos putativos se organizaron en un filograma, un diagrama ramificado (de árbol) que se supone que es una estimación de una filogenia de los genes.
(ii)
Método para generar un perfil de expresión de genes "Expresión digital" -Los presentes inventores han llevado a cabo un trabajo considerable dirigido a anotar secuencias. Los datos de expresión se analizaron y se clasificaron las librerías de EST usando un vocabulario fijo de términos propios, tales como tratamientos experimentales. Las anotaciones de todos los EST agrupados a un gen se analizaron estadísticamente comparando su frecuencia en la agrupación frente a su abundancia en la base de datos, permitiendo construir un perfil de expresión numérico y gráfico de ese gen, lo que se denomina "expresión digital".
El razonamiento para usar estos dos métodos complementarios se basan en la suposición de que los ortólogos auténticos tienen probabilidad de mantener una función idéntica a lo largo del tiempo evolutivo. Estos dos métodos (secuencia y patrón de expresión) proporcionan dos conjuntos diferentes de indicaciones de similitudes de función entre dos genes homólogos, similitudes a nivel de secuencia -aminoácidos idénticos en los dominios de proteína y similitud en los perfiles de expresión.
Cuando se compararon las secuencias de monocotiledóneas con los genes de ABST de tomate, los niveles de homología entre los genes de tomate y su mejor gen ortólogo de monocotiledóneas difirieron dramáticamente, variando del 45% al 88%. Además, el perfil de expresión in silico de los genes de monocotiledónea no siempre se ajusta a un gen implicado en la tolerancia a ABS. De este modo, se efectuó una búsqueda extensiva del ortólogo funcional de monocotiledóneas de cada gen de tomate (SEC ID Nº: 122-131).
En un intento para identificar los mejores ortólogos de los genes de ABST de tomate, se efectuaron dos conjuntos de análisis. En primer lugar, se compararon las secuencias de 5 genes de ABST de tomate (SEC ID Nº: 122-126) y sus secuencias polipeptídicas deducidas (SEC ID Nº: 127-131) con todas las proteínas putativas de monocotiledóneas, codificadas por secuencias de ADN de los grupos de genes mencionados anteriormente. La comparación se efectuó 5 a nivel de proteína en la búsqueda de una identidad mayor del 45 % a lo largo de la secuencia de proteína completa.
La tabla 1 a continuación muestra los mejores genes homólogos y su nivel de identidad con las proteínas de ABST de tomate. A continuación, estas proteínas de monocotiledóneas originarias de diferentes especies de monocotiledóneas (cebada, sorgo y maíz) se exploraron basándose en su patrón de expresión durante el desarrollo 10 de varias especies de monocotiledóneas. Esta exploración se basó en la expresión digital de los genes, tal como se describe anteriormente. La expresión digital representa la distribución de los EST que componen cada gen in silico y la desviación de la distribución real de la distribución al azar. Los genes se seleccionaron basándose en tres criterios: genes con mayor expresión en raíces, tallos y hojas y/o inducidos mediante tratamientos que representan condiciones de estrés en el suelo (sequía, salinidad, deficiencias del suelo). Un aumento en la expresión se
15 consideró únicamente en los casos donde era evidente un aumento de más de 2 veces (en relación a la distribución de EST al azar) con una probabilidad de significación menor de 0,05. La tabla 2 a continuación resume el perfil de expresión de los genes en diferentes órganos o tejidos y los tratamientos que desencadenan una elevación significativa en su nivel de expresión.
20 Tabla 1: Nivel de homología entre los genes ABST de tomate y sus genes homólogos de monocotiledóneas.
SEC ID Nº del gen de tomate
Nombre TIGR/n.º de ref. del gen homólogo Origen de planta Nivel de homología (valor de e) % de identidad (Porcentaje respecto de la secuencia completa de la proteína)
122
TC104838 SEC ID Nº: 1 Sorgo 2E-70 88%
TC103857
Sorgo 2E-70 88%
TC258871
Maíz 1E-69 86%
TC139195
Cebada 5E-69 86%
123
TC94284 SEC ID Nº: 3 Sorgo 3E-43 45%
TC132394
Cebada 6E-40 44%
124
TC102291 SEC ID Nº: 5 Sorgo 1E-72 54%
TC146720
Cebada 3E-99 58%
125
TC92953 SEC ID Nº: 7 Sorgo 7E-59 47%
TC91426 SEC ID Nº: 9
Sorgo 4E-98 74%
TC91474
Sorgo 5E-98 72%
TC263205
Maíz 2E-97 74%
126
TC103772 SEC ID Nº: 11 Sorgo 1E-52 49%
TC148356
Cebada 1E-54 46%
TC260731
Maíz 1E-54 46%
Tabla 2: Perfil de expresión de los genes in silico homólogos de ABST representado por el análisis estadístico de su distribución de EST
Nombre del gen homólogo
Especie de planta Órganos/tejidos con la mayor expresión génica Factor de cambio (Todos los resultados son significativos en valor de P > 0,05) Tratamientos que inducen el nivel de expresión Factor de cambio (Todos los resultados son significativos en valor de P > 0,05)
TC104838 SEC ID Nº: 1
Sorgo Polen en estado pre-antesis 3 Etileno, sequía 2
TC103857
Sorgo Expresión diversa 2 Ninguno* Ninguno*
Nombre del gen homólogo
Especie de planta Órganos/tejidos con la mayor expresión génica Factor de cambio (Todos los resultados son significativos en valor de P > 0,05) Tratamientos que inducen el nivel de expresión Factor de cambio (Todos los resultados son significativos en valor de P > 0,05)
TC258871
Maíz Expresión diversa, preferentemente en la región de lignificación celular de las hojas 2 Ninguno* Ninguno*
TC139195
Cebada En diversos tejidos del grano 2-3,5 Ninguno Ninguno
TC94284 SEC ID Nº: 3
Sorgo Hojas, raíces durante la carga del fruto 4,5 2 Sequía, deficiencias de nitrógeno, acidez del suelo 4 2 2
TC132394
Cebada Hojas, coleoptilo principalmente durante el desarrollo del fruto 2,5 3 Ninguno Ninguno
TC102291 SEC ID Nº: 5
Sorgo Callo y suspensión celular 3 Estrés por salinidad y sequía 3
TC146720
Cebada Semillas, preferentemente en el embrión y escutelo durante la maduración 2 Estrés por frío, infección por Fusarium 3 3,5
TC92953 SEC ID Nº: 7
Sorgo hojas durante la carga del fruto 2 Sequía, Deficiencia de nitrógeno, salinidad (150 mM) 4 4 2,5
TC91426 SEC ID Nº: 9
Sorgo Raíces jóvenes 12 Etileno, etiolación, acidez del suelo 4 3 12
TC91474
Sorgo Plántula completa 2 Etiolación 16
TC263205
Maíz Sistema de raíz primario en estado de plántula 3 Sequía 2
TC103772 SEC ID Nº: 11
Sorgo Raíces jóvenes 2 Sequía, acidez del suelo 2 2
TC148356
Cebada Callo, hojas en el estado vegetativo 4,2 Infección por Blumeria graminis 2
TC260731
Maíz Raíz, preferentemente raíces primarias 2,5 Ninguno Ninguno
Ninguno* -Ninguno de los tratamientos con una elevación significativa en la expresión digital podría considerarse como tratamiento con estrés de suelo
La combinación de la exploración anterior tal como se describe en la tabla 1 y la tabla 2 anteriores reveló la lista final de genes de monocotiledóneas que se predice que son las más relacionadas con los genes de ABST de tomate (SEC ID Nº: 1, 3, 5, 7, 9).
5 Las secuencias polinucleotídicas seleccionadas (tabla 3 a continuación) se analizaron respecto de la presencia de ORG usando el paquete informático Vector NTI (InforMax, R.U.) versión 6 (Hasting Software, Inc: www.generunner.com/). Los ORF identificados en cada una de estas secuencias polinucleotídicas se compararon con secuencias de las bases de datos de GenBank, usando Blast (www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/); el ORF que
10 mostraba la mayor homología con una secuencia o secuencias de GenBank se mapeó para identificar un codon de inicio de ATG. La posición del codon de inicio de ATG de este ORF se comparó entonces con la de la secuencia polinucleotídica identificada para verificar que cada una de las cinco secuencias descritas en el presente documento incluye un ORF de longitud completa y un codon de inicio de ATG (por lo tanto puede clasificarse como un "gen de ABST de monocotiledónea putativo").
15
Tabla 3
Genes de ABST de monocotiledóneas
SEC ID Nº: de ABST de tomate
SEC ID Nº: de gen de ABST de monocotiledónea homólogo SEC ID Nº: de gen de ABST* optimizado artificialmente
122
1 156
123
3 157
124
5 158
125
7
125
9
126
11 159
* -Descrito adicionalmente en el ejemplo 2 a continuación.
Los polipéptidos con una homología significativa con los genes de ABST de monocotiledóneas se han identificado a partir de las bases de datos del NCBI usando el programa informático BLAST (Tabla 4).
Tabla 4
Homólogos de ABST
SEC ID Nº: de gen putativo de ABST de monocotiledónea
Homólogo de polipéptido de ABST, codificado por el número de referencia de TIGR/SEC ID Nº: Organismo de origen SEC ID Nº: de homólogo de polipéptido de ABST Homología en la secuencia polipeptídica (%)
1
TC270110/160 Zea mays 13 100
1
TC56855/161 Saccharum officinarum 14 100
1
TC104838/162 sorgo 15 100
1
TC57929/163 Saccharum officinarum 16 98
1
TC103857/164 sorgo 17 98
1
TC262554/165 Oryza sativa 18 98
1
TC258871/166 Zea mays 19 97
1
TC139195/167 Hordeum vulgare 20 96
1
TC262556/168 Oryza sativa 21 95
1
TC232174/169 Triticum aestivum 22 95
1
TC232139/170 Triticum aestivum 23 95
1
TC139194/171 Hordeum vulgare 24 95
1
CA486561/172 Triticum aestivum 25 100
1
TC258873/173 Zea mays 26 100
1
CA187014/174 Saccharum officinarum 27 90
Homólogos de ABST
SEC ID Nº: de gen putativo de ABST de monocotiledónea
Homólogo de polipéptido de ABST, codificado por el número de referencia de TIGR/SEC ID Nº: Organismo de origen SEC ID Nº: de homólogo de polipéptido de ABST Homología en la secuencia polipeptídica (%)
1
TC233455/175 Triticum aestivum 28 96
1
CF063450/176 Zea mays 29 98
1
CA617041/177 Triticum aestivum 30 97,92
3
TC94284/178 sorgo 31 100
3
TC49791/179 Saccharum officinarum 32 96,23
180
TC93449/180 sorgo 33 100
180
TC49718/181 Saccharum officinarum 34 97,74
180
TC49720/182 Saccharum officinarum 35 97,47
7
TC92953/183 sorgo 36 100
7
TC66617/184 Saccharum officinarum 37 90
7
TC273860/185 Zea mays 38 91
7
TC253191/186 Zea mays 39 90
11
TC103772/187 sorgo 40 100
11
TC272084/188 Zea mays 41 92
11
TC60928/189 Saccharum officinarum 42 94
1
TC5422/191, 190 canola 43 88
1
TC904/191 canola 44 88
1
TC121774/192 Solanum tuberosum 45 88
1
TC40342/194, 193 Gossypium 46 88
1
TC40115/194 Gossypium 47 88
1
TC155918/196, 195 Lycopersicon esculentum 48 88
1
TC154398/197, 196 Lycopersicon esculentum 49 88
1
TC154397/198, 197 Lycopersicon esculentum 50 88
1
TC153989/198 Lycopersicon esculentum 51 88
1
TC120511/200, 199 Solanum tuberosum 52 88
Homólogos de ABST
SEC ID Nº: de gen putativo de ABST de monocotiledónea
Homólogo de polipéptido de ABST, codificado por el número de referencia de TIGR/SEC ID Nº: Organismo de origen SEC ID Nº: de homólogo de polipéptido de ABST Homología en la secuencia polipeptídica (%)
1
TC113582/201, 200 Solanum tuberosum 53 88
1
TC112701/202, 201 Solanum tuberosum 54 88
1
TC111912/202 Solanum tuberosum 55 88
1
TC4674/203 Capsicum annum 56 88
1
TC270923/204 Arabidopsis 57 87
1
CD823817/205 canola 58 86
1
TC526/206 canola 59 86
1
TC525/207 canola 60 86
1
BG442528/208 Gossypium 61 87
1
TC33702/209 Gossypium 62 87
TC32714/210
Gossypium 63 87
1
TC270782/211 Arabidopsis 64 87
1
TC225449/212 Glycine max 65 87
1
TC5255/213 Capsicum annum 66 88
1
TC28221/214 Populus 67 84
1
TC108140/215 Medicago 68 85
1
TC28222/216 Populus 69 84
1
TC94402/217 Medicago 70 84
1
TC28223/218 Populus 71 83
1
TC102506/219 Medicago 72 85
1
NP890576/222 Oryza sativa 73 76
1
TC280376/223 Oryza sativa 74 73
1
CN009841/224 Triticum aestivum 75 75
1
BI948270/225 Hordeum vulgare 76 75
1
TC259334/226 Arabidopsis 77 75
1
BQ767154/227 Hordeum vulgare 78 73
1
TC60345/228 Saccharum officinarum 79 73
1
TC138474/229 Hordeum vulgare 80 85
Homólogos de ABST
SEC ID Nº: de gen putativo de ABST de monocotiledónea
Homólogo de polipéptido de ABST, codificado por el número de referencia de TIGR/SEC ID Nº: Organismo de origen SEC ID Nº: de homólogo de polipéptido de ABST Homología en la secuencia polipeptídica (%)
1
TC41472/230 Populus 81 72
1
BJ458177/231 Hordeum vulgare 82 72
1
CB674176/232 Oryza sativa 83 82
1
TC216405/233 Glycine max 84 88
1
AJ777371/234 Populus 85 70
1
CV019213/235 Tabaco 86 85
1
CK215690/236 Triticum aestivum 87 80
1
CD830784/237 canola 88 85
1
CA624722/238 Triticum aestivum 89 85
1
TC32906/239 Populus 90 76
1
CR285127/240 Oryza sativa 91 89
1
TC251945/241 Triticum aestivum 92 62,89
3
TC132394/243 Hordeum vulgare 94 75
3
TC267180/244 Triticum aestivum 95 77
3
TC261921/245 Zea mays 96 87
3
TC267181/246 Triticum aestivum 97 74
3
TC261922/247 Zea mays 98 81
3
TC267182/248 Triticum aestivum 99 73
180
TC249531/249 Zea mays 100 87,89
180
TC232170/250 Triticum aestivum 101 88,64
180
TC146720/251 Hordeum vulgare 102 88,93
180
TC249329/252 Oryza sativa 103 85,99
180
TC249532/253 Zea mays 104 89,72
180
TC232150/254 Triticum aestivum 105 86,18
180
TC249330/256, 255 Oryza sativa 106 78,03
180
CB672603/256 Oryza sativa 107 78,01
Homólogos de ABST
SEC ID Nº: de gen putativo de ABST de monocotiledónea
Homólogo de polipéptido de ABST, codificado por el número de referencia de TIGR/SEC ID Nº: Organismo de origen SEC ID Nº: de homólogo de polipéptido de ABST Homología en la secuencia polipeptídica (%)
180
TC32440/257 Gossypium 108 81
5
TC119105/258 Solanum tuberosum 109 72
7
TC247999/259 Triticum aestivum 110 78
7
TC247359/260 Triticum aestivum 111 77
7
TC132566/261 Hordeum vulgare 112 77
7
TC248676/262 Triticum aestivum 113 74
7
TC249667/263 Oryza sativa 114 77
7
TC66618/264 Saccharum officinarum 115 88
11
TC253495/282 Oryza sativa 116 79,3
11
TC267485/283 Triticum aestivum 117 77
11
TC148621/284 Hordeum vulgare 118 76
11
TC275474/285 Oryza sativa 119 85
9
TC275473/265 Oryza sativa 139 90,53
9
TC224823/266 Glycine max 140 75
9
TC234990/267 Triticum aestivum 141 74
9
TC266178/268 Triticum aestivum 142 73
9
TC119051/269 Solanum tuberosum 143 83
9
TC56409/270 Saccharum officinarum 144 75
9
TC35873/271 Populus 145 80
9
TC119052/272 Solanum tuberosum 146 82
9
TC112169/274 Solanum tuberosum 148 84
9
TC254696/276, 275 Zea mays 149 79
9
TC254696/276 Zea mays 150 82
9
TC248906/277 Oryza sativa 151 77
imagen9
imagen10
5
15
25
35
45
55
65
La transformación de plantas To se efectuó invirtiendo cada planta en suspensión de Agrobacterium, de tal forma que el tejido vegetal por encima del suelo se sumergió durante 3-5 segundos. Cada planta To inoculada se colocó inmediatamente en una bandeja de plástico, después se cubrió con una cubierta de plástico transparente para mantener la humedad y se mantuvo en la oscuridad a temperatura ambiente durante 18 horas, para facilitar la infección y la transformación. Las plantas transformadas (transgénicas) se destaparon y se transfirieron a un invernadero para su recuperación y maduración. Las plantas transgénicas To se cultivaron en el invernadero durante 3-5 semanas hasta que las silicuas estaban marrones y secas. Se cosecharon las semillas de las plantas y se mantuvieron a temperatura ambiente hasta la siembra.
Para generar plantas transgénicas de T1 y T2 que portaban los genes, las semillas recogidas de plantas To transgénicas se esterilizaron superficialmente empapándolas en etanol al 70 % durante 1 minuto, seguido de empapamiento en hipoclorito de sodio al 5 % y triton al 0,05% durante 5 minutos. Las semillas esterilizadas superficialmente se lavaron exhaustivamente en agua destilada estéril y después se colocaron en placas de cultivo que contenían medio Murashige-Skoog de fuerza media (Duchefa); sacarosa al 2%; agar de plantas al 0,8%; kanamicina 50 mM; y carbenicilina 200 mM (Duchefa). Las placas de cultivo se incubaron a 4 °C durante 48 horas y después se transfirieron a una sala de cultivo a 25 °C durante una semana adicional de incubación. Las plantas de Arabidopsis de T1 vitales se transfirieron a placas de cultivo nuevas durante otra semana de incubación. Después de incubar, las plantas de T1se retiraron de las placas de cultivo y se plantaron en mezcla de cultivo contenida en macetas de 250 ml. Se dejaron crecer las plantas transgénicas en un invernadero hasta su madurez. Las semillas cosechadas de T1 se cultivaron hasta la madurez como plantas de T2 en las mismas condiciones usadas para cultivar y crecer las plantas de T1.
EJEMPLO 7
Evaluación de la germinación de plantas transgénicas cultivadas en condiciones de estrés abiótico
La tolerancia al estrés por salinidad u osmótico se dirige a identificar genes que confieren una mejor germinación, vigor de la plántula o crecimiento con alta salinidad, sequía o una combinación de estos y otros estreses ambientales. Las plantas difieren en su tolerancia a la sal (NaCl) dependiendo de su estadío de desarrollo, por lo tanto, se evalúan la germinación de la semilla, el vigor de la plántula y las respuestas al crecimiento de la planta.
Se efectúa una prueba de tolerancia a la salinidad tomando plantas en diferentes estados de desarrollo e irrigándolas con concentraciones crecientes de NaCl (por ejemplo, 50 mM, 100 mM, 200 mM, 400 mM). Las plantas transgénicas se comparan con plantas de control en cuanto a su apariencia fenotípica externa, grado de marchitamiento, y éxito general para alcanzar la madurez y rendir una descendencia a concentraciones inhibidoras para las plantas de control. Los parámetros cuantitativos de tolerancia medidos son como para el caso anterior el peso medio húmedo y seco, y el peso de las semillas producidas, el tamaño medio de las semillas y el número de semillas producidas por planta. Los ensayos de estrés osmótico (incluyendo ensayos de NaCl y de manitol) se llevan a cabo para determinar si un fenotipo tolerante al estrés osmótico es específico de NaCl o si es un fenotipo relacionado con el estrés osmótico en general. Las plantas tolerantes al estrés osmótico son en general más tolerantes a la sequía, a la salinidad y a las condiciones heladas y por lo tanto son muy valiosas en cuanto a sus rasgos agrícolas.
Métodos:
El método usado para ensayar las plantas respecto de la tolerancia al estrés abiótico incluye la prueba de la germinación y de crecimiento de la plántula en condiciones adversas, tales como alta salinidad y alta osmoticidad.
Ensayo de germinación -Las pruebas de germinación comparan el porcentaje de semillas de plantas transgénicas que pueden completar el proceso de germinación (protrusión de la radícula desde la envuelta de la semilla y la apertura completa de los cotiledones) al porcentaje de semillas de plantas de control tratadas del mismo modo. La evaluación de la germinación y vigor de la plántula se lleva a cabo durante tres semanas después de plantar. Para medir la germinación y el crecimiento de la plántula, las plantas de T2 se esterilizan superficialmente y se siembran individualmente en placas de agar cuadradas que contienen, por ejemplo, medio basal solidificado suplementado con alta salinidad (por ejemplo, 50 mM, 100 mM, 200 mM, 400 mM) o alta osmoticidad (por ejemplo, 50 mM, 100 mM, 200 mM, 400 mM de manitol). El medio basal es medio Murashige-Skoog al 50 % (MS) + vitaminas suplementado con agar de planta al 0,8 % como agente solidificante. Después de la siembra, las placas se transfieren durante 2-3 días a 4 °C para su estratificación y después se cultivan durante tres semanas.
Para seguir la germinación y crecimiento en condiciones adversas las placas se exploran manualmente o automáticamente y se determina el tamaño de la planta. Pueden analizarse de cinco a diez eventos a partir de cada construcción. Las plantas que expresan los genes de esta invención se comparan con plantas de control sembradas en las mismas placas en las mismas condiciones o con la medida media de todas las construcciones, semillas y eventos sembrados.
imagen11
planta de los diferentes eventos en los diferentes instantes. Los eventos 1, 2, 3 y 4 son significativamente más tolerantes a la osmoticidad (p < 0,05). Otras construcciones de esta solicitud también protegen a las plantas de los efectos de la alta osmoticidad. De nuevo, cuatro de cinco eventos de transformación independientes que expresaban la SEC ID Nº: 159 mostraron una capacidad significativamente aumentada para crecer en condiciones de alta osmoticidad (tabla 5 a continuación, filas 6-10). Además, uno de los eventos que expresaban la SEC ID Nº: 158 mostró una tolerancia significativamente alta a la alta osmoticidad que sus correspondientes plantas de control.
Tabla 5
Media LS de plantas transgénicas de Arabidopsis de T2 cultivadas en presencia de manitol 210 mM
Número de fila
Transgén (SEC ID Nº) n.º de evento Número de plantas ensayadas Media de mínimos cuadrados de áreas medidas (cm2) Error estándar
1
156 Evento 1 n = 6 0,1635 0,0091
2
156 Evento 2 n = 6 0,1566 0,0091
3
156 Evento 3 n = 6 0,1547 0,0091
4
156 Evento 4 n = 6 0,1480 0,0091
5
CONTROL de eventos 1-4 SEC ID Nº: 156 y evento 1, SEC ID Nº: 158 - n = 6 0,1150 0,0091
6
159 Evento 1 n = 6 0,1141 0,0050
7
159 Evento 2 n = 6 0,1104 0,0050
8
159 Evento 3 n = 6 0,1020 0,0050
9
159 Evento 4 n = 6 0,0824 0,0050
10
CONTROL de eventos 1-4 SEC ID Nº: 159 - n = 6 0,0681 0,0050
11
158 Evento 1 n = 6 0,1703 0,0090
10 Los resultados de las pruebas de tolerancia a la salinidad se resumen en la tabla 6 a continuación. Tal como se detalla en la tabla 6 (filas 1-4), tres eventos transgénicos independientes con una construcción que contenía a la SEC ID Nº: 156 mostraron una tolerancia significativamente mayor al estrés por salinidad que las plantas de control en el experimento (p < 0,05). Se obtuvieron resultados similares con plantas que expresaban a la SEC ID Nº: 159. También en este caso, tres eventos transgénicos diferentes mostraron una tolerancia aumentada significativa al
15 estrés por salinidad en comparación con sus plantas de control coincidentes (véase la tabla 6, filas 5-9).
Tabla 6 5
Media LS de plantas transgénicas de Arabidopsis de T2 cultivadas en presencia de NaCl 150 mM
Número de fila
Transgén (SEC ID Nº) Promotor Número de plantas ensayada s Media de mínimos cuadrados de áreas medidas (cm2) Error estándar
1
156 Evento 1 n = 6 0,3146 0,0112
2
156 Evento 2 n = 6 0,2459 0,0112
3
156 Evento 3 n = 6 0,2445 0,0112
4
CONTROL de todos los eventos SEC ID Nº: 156 - n = 48 0,2165 0,003722
5
159 Evento 1 n = 6 0,2541 0,0110
6
CONTROL de evento 1 SEC ID Nº: 159 - n = 6 0,2154 0,0110
7
159 Evento 2 n = 6 0,2278 0,0122
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Media LS de plantas transgénicas de Arabidopsis de T2 cultivadas en presencia de NaCl 150 mM
Número de fila
Transgén (SEC ID Nº) Promotor Número de plantas ensayada s Media de mínimos cuadrados de áreas medidas (cm2) Error estándar
8
159 Evento 3 n = 6 0,2261 0,0122
9
CONTROL de evento 2 y evento 3 SEC ID Nº: 159 - n = 6 0,1906 0,0122
Se llevaron a cabo experimentos independientes para evaluar la capacidad de las construcciones para proporcionar salinidad y alta tolerancia osmótica como parte de este estudio. Se encontró que los genes protegían a las plantas transgénicas contra los efectos perjudiciales de ambos estreses. Estos resultados tomados en su conjunto demuestran claramente la capacidad de los genes y construcciones incluidas en la presente solicitud para proporcionar tolerancia al estrés abiótico.
Ejemplo 9
Evaluación de cambios en la arquitectura de la raíz debido a la expresión de genes de ABST de monocotiledónea
Muchos rasgos clave en la agricultura moderna pueden explicarse mediante cambios en la arquitectura de la raíz. El tamaño de la raíz y la profundidad se correlaciona con la tolerancia a la sequía y la eficacia del uso de fertilizante. Los sistemas radiculares profundos pueden acceder al agua almacenada en capas de suelo más profundas. De manera similar, un sistema radicular altamente ramificado proporciona una mejor cobertura del suelo y por lo tanto puede absorber de manera eficaz todos los macro y micronutrientes disponibles, dando como resultado una eficacia potenciada del uso de fertilizante. Para probar si las plantas transgénicas producen una estructura radicular diferente, las plantas se cultivan en placas de agar situadas verticalmente. Las placas se fotografían cada pocos días y se evalúa el tamaño, la longitud y el área abarcada por las raíces de las plantas. A partir de cada construcción creada, se comprueban varios eventos de transformación independientes. Para evaluar diferencias significativas entre características radiculares, es posible aplicar ANOVA de una y dos vías usando la prueba de la t de Student o la prueba de HSD de Turkey para identificar los eventos que muestran características radiculares sobresalientes y para proporcionar una puntuación estadística a los hallazgos (véase el ejemplo 8 anterior).
Ejemplo 10
Aumento de biomasa de las plantas transgénicas de la presente invención
Las plantas transgénicas de T1 o T2 generadas tal como se describe anteriormente se trasplantan individualmente a macetas que contienen una mezcla de crecimiento de turba y vermiculita (relación de volumen 3:2, respectivamente). Las macetas se cubren durante un periodo de 24 h para el fortalecimiento, después se colocan en el invernadero en un orden completamente aleatorio y se irrigan con agua corriente (proporcionada a través del fondo de la maceta cada 3-5 días) durante siete días. A continuación, se irriga a la mitad de las plantas con una solución salina (NaCl 100 mM y CaCl2 5 mM) para inducir el estrés por salinidad (condiciones de estrés). La otra mitad de las plantas sigue irrigándose con agua corriente (condiciones normales). Todas las plantas se cultivan en el invernadero con una HR del 100 % durante 28 días, después se cosechan (el tejido en la superficie) se pesan (inmediatamente o después de secarlas en un horno a 50°C durante 24 h).
Se apreciará que determinadas características de la invención, que por claridad se describen en el contexto de realizaciones separadas, también pueden proporcionarse en combinación en una sola realización. Por el contrario, diversas características de la invención, que por brevedad, se describen en el contexto de una sola realización, también pueden proporcionarse por separado o en cualquier combinación adecuada.
Referencias citadas
(Se citan referencias adicionales anteriormente en el presente documento)
1.
www.fao.org/ag/agl/agll/spush/degrad.htm.
2.
www.fao.org/ag/agl/aglw/watermanagement/introduc.stm
3.
McCue KF, Hanson AD (1990).Drought and salt tolerance: towards understanding and application. Trends Biotechnol 8: 358-362.
4.
Flowers TJ, Yeo Ar (1995). Breeding for salinity resistance in crop plants: where next? Aust J Plant Physiol 22:875
884.

Claims (1)

  1. imagen1
ES06766224.7T 2005-08-15 2006-08-15 Métodos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o la biomasa en plantas generadas mediante el mismo Active ES2556216T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US70795705P 2005-08-15 2005-08-15
US707957P 2005-08-15
PCT/IL2006/000947 WO2007020638A2 (en) 2005-08-15 2006-08-15 Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants and plants generated thereby

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2556216T3 true ES2556216T3 (es) 2016-01-14

Family

ID=35841516

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES06766224.7T Active ES2556216T3 (es) 2005-08-15 2006-08-15 Métodos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o la biomasa en plantas generadas mediante el mismo

Country Status (10)

Country Link
US (4) US7910800B2 (es)
EP (2) EP2995194A1 (es)
CN (2) CN102260703B (es)
AU (2) AU2005234725B2 (es)
BR (1) BRPI0616523B1 (es)
CA (2) CA3034043A1 (es)
ES (1) ES2556216T3 (es)
MX (1) MX2008002262A (es)
WO (1) WO2007020638A2 (es)
ZA (1) ZA200801467B (es)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2005234725B2 (en) 2003-05-22 2012-02-23 Evogene Ltd. Methods of Increasing Abiotic Stress Tolerance and/or Biomass in Plants and Plants Generated Thereby
US7554007B2 (en) 2003-05-22 2009-06-30 Evogene Ltd. Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants
CN101948846A (zh) 2004-06-14 2011-01-19 伊沃基因有限公司 参与植物纤维发育的多核苷酸和多肽和使用它们的方法
NZ550699A (en) * 2005-10-21 2008-03-28 Fonterra Co Operative Group Compositions and methods for producing plants with stress tolerance
MX350551B (es) 2005-10-24 2017-09-08 Evogene Ltd Polipeptidos aislados, polinucleotidos que los codifican, plantas transgenicas que expresan los mismos y metodos para usarlos.
US7848937B2 (en) * 2006-09-08 2010-12-07 American Well Corporation Connecting consumers with service providers
BRPI0720219A2 (pt) * 2006-12-08 2013-12-24 Univ Iowa State Res Found Inc Genes de planta envolvidos em absorção e metabolismo de nitrato
MX349479B (es) 2006-12-20 2017-07-31 Evogene Ltd Polinucleotidos y polipeptidos involucrados en el desarrollo de fibra vegetal y metodos de uso.
MX2009010858A (es) 2007-04-09 2009-11-02 Evogene Ltd Polinucleotidos, polipeptidos y metodos para aumentar el contenido de aceite, la velocidad de crecimiento y biomasa de las plantas.
EP2064330A2 (en) * 2007-05-22 2009-06-03 BASF Plant Science GmbH Plants with increased tolerance and/or resistance to environmental stress and increased biomass production
BR122020022203B1 (pt) 2007-07-24 2021-04-20 Evogene Ltd método de aumento da taxa de crescimento de uma planta
CN101977928B (zh) 2007-12-27 2014-12-10 伊沃基因有限公司 用于改进植物的水分利用效率、肥料利用效率、生物/非生物胁迫耐受性、产量和生物量的分离多肽、多核苷酸
CA3148194A1 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and peptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
BRPI0912898B1 (pt) 2008-08-18 2022-04-12 Evogene Ltd Método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio e/ou tolerância à deficiência de nitrogênio de uma planta
EP2347014B1 (en) 2008-10-30 2016-09-21 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficieny
JP5212955B2 (ja) 2008-11-11 2013-06-19 トヨタ自動車株式会社 植物のバイオマス量を増産させる遺伝子及びその利用方法
MX340023B (es) 2008-12-29 2016-06-22 Evogene Ltd Polinucleotidos, polipeptidos codificados, y metodos para utilizarlos para aumentar la tolerancia al estres abiotico, biomasa y/o rendimiento en plantas que los expresan.
CA3123543A1 (en) 2009-03-02 2010-09-10 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
EP2440033B1 (en) 2009-06-10 2017-03-15 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing nitrogen use efficiency, yield, growth rate, vigor, biomass, oil content, and/or abiotic stress tolerance
US8937215B2 (en) 2009-08-04 2015-01-20 Evogene Ltd. Polynucleotides and polypeptides for increasing desirable plant qualities
JP5454086B2 (ja) 2009-10-30 2014-03-26 トヨタ自動車株式会社 植物に環境ストレス耐性を付与する遺伝子及びその利用方法
EP2519097B1 (en) 2009-12-28 2016-03-02 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
AU2011246876B2 (en) 2010-04-28 2016-06-23 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
BR112013004851A2 (pt) 2010-08-30 2016-06-07 Evogene Ltd método de aumento de eficiência do uso de nitrogênio, rendimento, biomassa, taxa de crescimento, vigor, conteúdo de óleo, rendimento da fibra e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, polinucleotídeo isolado, estrutura de ácido nucleio, polipeptídeo isolado, célula vegetal e planta transgêncica
BR122021002248B1 (pt) 2010-12-22 2022-02-15 Evogene Ltd Método para aumentar a tolerância ao estresse abiótico, produção, biomassa, e/ou taxa de crescimento de uma planta
WO2012150598A2 (en) 2011-05-03 2012-11-08 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
CN102229937B (zh) * 2011-06-07 2012-12-12 山东冠丰种业科技有限公司 玉米bHLH类转录因子基因ZmMIT1及其编码蛋白的应用
WO2013027223A2 (en) 2011-08-23 2013-02-28 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
CN104254242A (zh) 2011-11-21 2014-12-31 先正达参股股份有限公司 用于增强植物中的线虫抗性的组合物和方法
WO2013080203A1 (en) 2011-11-28 2013-06-06 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing nitrogen use efficiency, yield, growth rate, vigor, biomass, oil content, and/or abiotic stress tolerance
BR122020022832B1 (pt) 2011-12-28 2021-08-17 Evogene Ltd Método para aumentar a produção, taxa de crescimento, biomassa, energia e/ou produção de semente de uma planta em comparação com uma planta nativa, e, construção de ácido nucleico isolado
WO2013128448A1 (en) 2012-02-29 2013-09-06 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
CA2873846A1 (en) 2012-05-28 2013-12-05 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
BR122019028124B1 (pt) 2012-08-27 2022-08-09 Evogene Ltd Método para aumentar o rendimento, taxa de crescimento, biomassa, vigor, capacidade fotossintética, eficiência do uso de nitrogênio, e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, método para produzir uma colheita, construto de ácido nucleico, e, método de cultivar uma cultura
BR112015015415B1 (pt) 2012-12-25 2022-08-16 Evogene Ltd. Métodos para aumentar a eficiência no uso do nitrogênio, taxa de crescimento, biomassa, rendimento da semente, capacidade fotossintética e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, para produzir de uma cultura, para cultivar uma colheita, e, para selecionar uma planta
BR122020018366B1 (pt) 2012-12-26 2022-03-29 Evogene Ltd Método para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio, rendimento, taxa de crescimento, biomassa, vigor, capacidade fotossintética e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, e, construto de ácido nucleico isolado
US9243258B2 (en) 2013-03-12 2016-01-26 Pioneer Hi Bred International Inc Root-preferred promoter and methods of use
CA2910097A1 (en) 2013-05-22 2014-11-27 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
CA2916060A1 (en) 2013-08-27 2015-03-05 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
US9101100B1 (en) 2014-04-30 2015-08-11 Ceres, Inc. Methods and materials for high throughput testing of transgene combinations
AU2015265412B2 (en) 2014-05-28 2021-03-25 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides, polypeptides and methods of using same for increasing abiotic stress tolerance, biomass and yield of plants
US10858403B2 (en) 2014-08-27 2020-12-08 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
US10766935B2 (en) 2015-12-28 2020-09-08 Evogene Ltd. Plant traits conferred by isolated polynucleotides and polypeptides
US10404635B2 (en) 2017-03-21 2019-09-03 Bank Of America Corporation Optimizing data replication across multiple data centers
WO2019089517A1 (en) * 2017-10-30 2019-05-09 CO2 Solved, LLC Compositions and methods for enhanced co2 capture and storage
US10990875B2 (en) 2018-11-28 2021-04-27 International Business Machines Corporation Neural network forecasting for tiered hydroponic natural farming configurations
CN112521467B (zh) * 2019-09-17 2022-09-09 中国科学技术大学 一种与植物抗逆性相关基因agl103及其编码蛋白与应用
CN111122877A (zh) * 2020-01-14 2020-05-08 西南民族大学 一种绵羊肺炎支原体抗体间接elisa检测试剂盒
CN112345413B (zh) * 2020-09-18 2021-12-17 武汉大学 微喷灌溉条件下入渗水和无机溶质全局性分布测试方法
CN113234734B (zh) * 2021-03-22 2022-10-25 成都大学 一种可提高植物抗性的甜橙基因CsMYB30及其应用
CN113846106B (zh) * 2021-10-13 2023-08-29 杭州三叶青农业科技有限公司 基因PnDCD及其在调控皂苷合成中的应用
CN114574463B (zh) * 2022-04-07 2024-02-20 广西大学 一种玉米丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因及其在提高植物耐旱性和耐盐性的应用
CN118140797B (zh) * 2024-05-10 2024-07-05 中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所 一种作物盐碱抗性锻炼方法及系统

Family Cites Families (197)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154600B (nl) * 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
NL154599B (nl) * 1970-12-28 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen, alsmede testverpakking.
US3901654A (en) * 1971-06-21 1975-08-26 Biological Developments Receptor assays of biologically active compounds employing biologically specific receptors
US3853987A (en) * 1971-09-01 1974-12-10 W Dreyer Immunological reagent and radioimmuno assay
US3867517A (en) 1971-12-21 1975-02-18 Abbott Lab Direct radioimmunoassay for antigens and their antibodies
NL171930C (nl) * 1972-05-11 1983-06-01 Akzo Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van haptenen, alsmede testverpakkingen.
US3850578A (en) 1973-03-12 1974-11-26 H Mcconnell Process for assaying for biologically active molecules
US3935074A (en) 1973-12-17 1976-01-27 Syva Company Antibody steric hindrance immunoassay with two antibodies
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4034074A (en) * 1974-09-19 1977-07-05 The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG)
US3984533A (en) * 1975-11-13 1976-10-05 General Electric Company Electrophoretic method of detecting antigen-antibody reaction
US4098876A (en) * 1976-10-26 1978-07-04 Corning Glass Works Reverse sandwich immunoassay
US4879219A (en) 1980-09-19 1989-11-07 General Hospital Corporation Immunoassay utilizing monoclonal high affinity IgM antibodies
CA1192510A (en) 1981-05-27 1985-08-27 Lawrence E. Pelcher Rna plant virus vector or portion thereof, a method of construction thereof, and a method of producing a gene derived product therefrom
US5504200A (en) 1983-04-15 1996-04-02 Mycogen Plant Science, Inc. Plant gene expression
JPS6054684A (ja) 1983-09-05 1985-03-29 Teijin Ltd 新規ｄνａ及びハイブリツドｄνａ
US5011771A (en) 1984-04-12 1991-04-30 The General Hospital Corporation Multiepitopic immunometric assay
US4666828A (en) 1984-08-15 1987-05-19 The General Hospital Corporation Test for Huntington's disease
US4945050A (en) * 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US5420034A (en) 1986-07-31 1995-05-30 Calgene, Inc. Seed-specific transcriptional regulation
US4943674A (en) 1987-05-26 1990-07-24 Calgene, Inc. Fruit specific transcriptional factors
CA1288073C (en) 1985-03-07 1991-08-27 Paul G. Ahlquist Rna transformation vector
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4801531A (en) 1985-04-17 1989-01-31 Biotechnology Research Partners, Ltd. Apo AI/CIII genomic polymorphisms predictive of atherosclerosis
US5569597A (en) 1985-05-13 1996-10-29 Ciba Geigy Corp. Methods of inserting viral DNA into plant material
GB8608850D0 (en) 1986-04-11 1986-05-14 Diatech Ltd Packaging system
JPS6314693A (ja) 1986-07-04 1988-01-21 Sumitomo Chem Co Ltd 植物ウイルスｒｎａベクタ−
US5268463A (en) 1986-11-11 1993-12-07 Jefferson Richard A Plant promoter α-glucuronidase gene construct
US5608142A (en) 1986-12-03 1997-03-04 Agracetus, Inc. Insecticidal cotton plants
EP0278667B1 (en) 1987-02-09 1994-07-20 Mycogen Plant Science, Inc. Hybrid RNA virus
US5316931A (en) 1988-02-26 1994-05-31 Biosource Genetics Corp. Plant viral vectors having heterologous subgenomic promoters for systemic expression of foreign genes
US5693507A (en) 1988-09-26 1997-12-02 Auburn University Genetic engineering of plant chloroplasts
US5597718A (en) 1988-10-04 1997-01-28 Agracetus Genetically engineering cotton plants for altered fiber
US5495070A (en) * 1988-10-04 1996-02-27 Agracetus, Inc. Genetically engineering cotton plants for altered fiber
US5272057A (en) * 1988-10-14 1993-12-21 Georgetown University Method of detecting a predisposition to cancer by the use of restriction fragment length polymorphism of the gene for human poly (ADP-ribose) polymerase
US5302523A (en) * 1989-06-21 1994-04-12 Zeneca Limited Transformation of plant cells
US6329570B1 (en) 1989-07-19 2001-12-11 Calgene, Llc Cotton modification using ovary-tissue transcriptional factors
US5192659A (en) * 1989-08-25 1993-03-09 Genetype Ag Intron sequence analysis method for detection of adjacent and remote locus alleles as haplotypes
US5859330A (en) 1989-12-12 1999-01-12 Epitope, Inc. Regulated expression of heterologous genes in plants and transgenic fruit with a modified ripening phenotype
ES2187497T3 (es) 1990-04-12 2003-06-16 Syngenta Participations Ag Promotores preferentemente en tejidos.
US5498830A (en) 1990-06-18 1996-03-12 Monsanto Company Decreased oil content in plant seeds
US5187267A (en) 1990-06-19 1993-02-16 Calgene, Inc. Plant proteins, promoters, coding sequences and use
KR0178536B1 (ko) * 1991-03-11 1999-04-15 강진구 동종 프로그램 채널 선택방법
US5399680A (en) * 1991-05-22 1995-03-21 The Salk Institute For Biological Studies Rice chitinase promoter
DE69230290T2 (de) * 1991-08-27 2000-07-20 Novartis Ag, Basel Proteine mit insektiziden eigenschaften gegen homopteran insekten und ihre verwendung im pflanzenschutz
EP0612208B1 (en) 1991-10-04 2004-09-15 North Carolina State University Pathogen-resistant transgenic plants
UA48104C2 (uk) 1991-10-04 2002-08-15 Новартіс Аг Фрагмент днк, який містить послідовність,що кодує інсектицидний протеїн, оптимізовану для кукурудзи,фрагмент днк, який забезпечує направлену бажану для серцевини стебла експресію зв'язаного з нею структурного гена в рослині, фрагмент днк, який забезпечує специфічну для пилку експресію зв`язаного з нею структурного гена в рослині, рекомбінантна молекула днк, спосіб одержання оптимізованої для кукурудзи кодуючої послідовності інсектицидного протеїну, спосіб захисту рослин кукурудзи щонайменше від однієї комахи-шкідника
US5356816A (en) * 1991-11-19 1994-10-18 Board Of Trustees Operating Michigan State University Method and compositions using polypeptides of arabidopsis thaliana
US5281521A (en) * 1992-07-20 1994-01-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modified avidin-biotin technique
US5296462A (en) * 1992-11-19 1994-03-22 Board Of Trustees Operating Michigan State University Method and compositions using polypeptides of arabidopsis thaliana
US5521708A (en) 1992-11-25 1996-05-28 Canon Information & Systems, Inc. Correlated color temperature detector
ZA939767B (en) 1993-01-21 1994-09-14 Univ North Carolina State Nematode-resistant transgenic plants
EP0670670A4 (en) 1993-09-30 1996-04-24 Agracetus HETEROLOGICAL PEROXIDASE PROCESSING TRANSGENIC COTTON PLANTS.
US5598515A (en) 1994-01-10 1997-01-28 Gen Tech Corp. System and method for reconstructing surface elements of solid objects in a three-dimensional scene from a plurality of two dimensional images of the scene
KR0165159B1 (ko) * 1994-07-28 1999-02-01 사또 후미오 반도체 기억 장치
US5608144A (en) 1994-08-12 1997-03-04 Dna Plant Technology Corp. Plant group 2 promoters and uses thereof
US7262055B2 (en) 1998-08-25 2007-08-28 Gendaq Limited Regulated gene expression in plants
US6310194B1 (en) 1994-09-26 2001-10-30 Carnegie Institution Of Washington Plant fatty acid hydroxylases
US5961466A (en) 1995-01-03 1999-10-05 Omnicorder Technologies, Inc. Method of detection of cancerous lesions by their effect on the spatial distribution of modulation of temperature and homogeneity of tissue
US5659026A (en) * 1995-03-24 1997-08-19 Pioneer Hi-Bred International ALS3 promoter
CA2221747A1 (en) 1995-06-07 1996-12-19 Kevin Mcbride Cotton fiber transcriptional factors
JPH0967270A (ja) 1995-08-31 1997-03-11 Res Dev Corp Of Japan 水晶体混濁の予防および治療法、並びにそのための薬 剤
US6084153A (en) 1996-02-14 2000-07-04 The Governors Of The University Of Alberta Plants having enhanced nitrogen assimilation/metabolism
JPH1094392A (ja) 1996-09-20 1998-04-14 Nisshinbo Ind Inc ワタ遺伝子
EP0905242A4 (en) 1996-10-24 2001-11-07 Japan Tobacco Inc METHOD FOR CONTROLLING THE WATER CONTENT OF A PLANT
IL119831A (en) 1996-12-15 2002-12-01 Cognitens Ltd A device and method for three-dimensional reconstruction of the surface geometry of an object
US5879219A (en) * 1997-01-17 1999-03-09 Penjuke; Daniel Balloon inflation and illumination device
CA2278796A1 (en) 1997-01-21 1998-07-23 Monsanto Company Strawberry promoters and genes
TR200000547T2 (tr) 1997-08-27 2001-05-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Lignin biyosentezi için enzimleri kodlayan genler ve bunların kullanımı.
US6201541B1 (en) 1997-12-11 2001-03-13 Cognitens, Ltd. System and method for “Stitching” a plurality of reconstructions of three-dimensional surface features of object(s) in a scene defined relative to respective coordinate systems to relate them to a common coordinate system
US20090093620A1 (en) 2000-09-05 2009-04-09 David Kovalic Annotated Plant Genes
ATE528401T1 (de) 1998-08-04 2011-10-15 Cropdesign Nv Gene, welche an der toleranz gegenüber umweltstress beteiligt sind
US6313375B1 (en) * 1998-08-13 2001-11-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize aquaporins and uses thereof
US6313376B1 (en) * 1998-08-14 2001-11-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize aquaporins and uses thereof
US7511190B2 (en) 1999-11-17 2009-03-31 Mendel Biotechnology, Inc. Polynucleotides and polypeptides in plants
US6717034B2 (en) 2001-03-30 2004-04-06 Mendel Biotechnology, Inc. Method for modifying plant biomass
JP3178672B2 (ja) 1998-10-14 2001-06-25 農林水産省国際農林水産業研究センター所長 環境ストレス耐性植物
EP1033405A3 (en) 1999-02-25 2001-08-01 Ceres Incorporated Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby
WO2000066610A1 (en) 1999-04-30 2000-11-09 Agritope, Inc. Apple promoters for expression of transgenes in plants
US20110214206A1 (en) 1999-05-06 2011-09-01 La Rosa Thomas J Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants
US20040031072A1 (en) * 1999-05-06 2004-02-12 La Rosa Thomas J. Soy nucleic acid molecules and other molecules associated with transcription plants and uses thereof for plant improvement
US20100293669A2 (en) * 1999-05-06 2010-11-18 Jingdong Liu Nucleic Acid Molecules and Other Molecules Associated with Plants and Uses Thereof for Plant Improvement
US20030233670A1 (en) * 2001-12-04 2003-12-18 Edgerton Michael D. Gene sequences and uses thereof in plants
US8877916B2 (en) 2000-04-26 2014-11-04 Ceres, Inc. Promoter, promoter control elements, and combinations, and uses thereof
US6559363B1 (en) 1999-07-05 2003-05-06 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Cotton plants with improved cotton fiber characteristics and method for producing cotton fibers from these cotton plants
WO2001006006A1 (fr) * 1999-07-19 2001-01-25 Japan Science And Technology Corporation Gene de resistance au stress ambiant
US6472588B1 (en) 1999-09-10 2002-10-29 Texas Tech University Transgenic cotton plants with altered fiber characteristics transformed with a sucrose phosphate synthase nucleic acid
US6359196B1 (en) 1999-09-23 2002-03-19 Finn Lok Germination-specific plant promoters
US6403862B1 (en) 1999-09-24 2002-06-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Seed-preferred promoter from maize
IT1313518B1 (it) 1999-10-22 2002-07-24 Meta Instr S R L Metodi ed apparecchiatura per la misura della distribuzionetridimensionale delle temperature all'interno dei mezzi dielettrici.
US6828476B1 (en) 1999-12-02 2004-12-07 The Regents Of The University Of California Cotton transcription factors and their uses
GB2358752A (en) 2000-01-31 2001-08-01 Tricorder Technology Plc Surface or volumetric data processing method and apparatus
JP3807721B2 (ja) 2000-02-21 2006-08-09 シャープ株式会社 画像合成装置
DE60141547D1 (de) 2000-04-07 2010-04-22 Basf Plant Science Gmbh Stress-gekoppelte Protein-Phosphatase und ihre Verwendung in Pflanzen
US20110131679A2 (en) * 2000-04-19 2011-06-02 Thomas La Rosa Rice Nucleic Acid Molecules and Other Molecules Associated with Plants and Uses Thereof for Plant Improvement
US7834146B2 (en) * 2000-05-08 2010-11-16 Monsanto Technology Llc Recombinant polypeptides associated with plants
US20040181830A1 (en) * 2001-05-07 2004-09-16 Kovalic David K. Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement
US6701081B1 (en) 2000-06-06 2004-03-02 Air Controls, Inc. Dual camera mount for stereo imaging
AU8681101A (en) 2000-08-24 2002-03-04 Scripps Research Inst Stress-regulated genes of plants, transgenic plants containing same, and methodsof use
TW519485B (en) 2000-09-20 2003-02-01 Ind Tech Res Inst Infrared 3D scanning system
US20020170088A1 (en) * 2000-11-03 2002-11-14 The Regents Of The University Of California Novel auxin binding proteins and uses thereof
JP2002164066A (ja) 2000-11-22 2002-06-07 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 積層型熱交換器
CA2430642A1 (en) 2000-12-01 2003-02-20 John B. Ohlrogge Plant seed specific promoters
CN1326996C (zh) 2000-12-08 2007-07-18 联邦科学及工业研究组织 蔗糖合酶的基因表达在植物组织中的修饰及其用途
US7214786B2 (en) 2000-12-14 2007-05-08 Kovalic David K Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement
US6801257B2 (en) 2001-01-12 2004-10-05 Cognitens Ltd. Optical three-dimensional digital imaging and mensuration system for industrial applications
ATE540575T1 (de) 2001-03-16 2012-01-15 Basf Plant Science Gmbh Regulatoren des zucker- und lipidstoffwechsels in pflanzen
JP4739569B2 (ja) 2001-04-09 2011-08-03 パナソニック株式会社 運転支援装置
WO2002082988A2 (en) 2001-04-16 2002-10-24 The Johns Hopkins University Method for imaging and spectroscopy of tumors and determination of the efficacy of anti-tumor drug therapies
AU2002302595B2 (en) 2001-05-03 2006-07-13 Vlaams Interuniversitair Instituut Voor Biotechnologie Vzw Freeze-tolerant eukaryotic cells
WO2003020025A2 (en) 2001-08-31 2003-03-13 The Dow Chemical Company Nucleic acid compositions conferring insect control in plants
US7038111B2 (en) 2001-09-06 2006-05-02 The Arizona Board Of Regents Method for increasing stress tolerance in plants
DE10150918C2 (de) 2001-10-18 2003-10-09 Inframedic Ag Verfahren zur Auswertung von Wärmebildern einer weiblichen oder männlichen Brust
US20050108791A1 (en) 2001-12-04 2005-05-19 Edgerton Michael D. Transgenic plants with improved phenotypes
AU2003233489B2 (en) 2002-04-08 2008-10-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Enhanced silk exsertion under stress
CN1653174A (zh) 2002-05-08 2005-08-10 巴斯福植物科学有限公司 用于提高植物含油量的方法
US20030221218A1 (en) 2002-05-17 2003-11-27 The Regents Of The University Of California Bioengineering cotton fiber properties
JP2005185101A (ja) 2002-05-30 2005-07-14 National Institute Of Agrobiological Sciences 植物の全長ｃＤＮＡおよびその利用
ATE495259T1 (de) 2002-07-10 2011-01-15 Basf Plant Science Gmbh Verwendung eines gens um den ölgehalt in pflanzen zu erhöhen
WO2004053055A2 (en) 2002-12-04 2004-06-24 Monsanto Technology Llc Transgenic maize with enhanced phenotype
DE10260903A1 (de) 2002-12-20 2004-07-08 Henkel Kgaa Neue Perhydrolasen
BRPI0408735A (pt) 2003-03-12 2006-03-07 Evogene Ltd polinucleotìdeo isolado, construção de ácido nucléico, célula transgênica, organismo transgênico, vegetal transgênico, método para produzir um vegetal transgênico, método para expressar um polinucleotìdeo de interesse em uma célula, e método para co-expressar dois polinucleotìdeos de interesse em uma célula
AU2004230490C1 (en) 2003-04-15 2012-08-16 Basf Plant Science Gmbh Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response and plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress
WO2004092367A1 (en) 2003-04-16 2004-10-28 Basf Plant Science Gmbh Use of genes for increasing the oil content in plants
US7554007B2 (en) 2003-05-22 2009-06-30 Evogene Ltd. Methods of increasing abiotic stress tolerance and/or biomass in plants
AU2005234725B2 (en) * 2003-05-22 2012-02-23 Evogene Ltd. Methods of Increasing Abiotic Stress Tolerance and/or Biomass in Plants and Plants Generated Thereby
BR122016024209B1 (pt) 2003-05-22 2019-08-20 Evogene Ltd. Método para aumentar a biomassa e/ou tolerância de uma planta ao estresse salino e construto de ácido nucleico
JP3819377B2 (ja) 2003-06-18 2006-09-06 株式会社東芝 半導体集積回路の静電放電の解析方法
EP1636333A4 (en) * 2003-06-19 2007-10-24 Evogene Ltd NUCLEOTIDE SEQUENCES FOR REGULATING GENE EXPRESSION IN VEGETABLE TRICHROMES, AND HYBRID GENES AND METHODS IN WHICH THEY INTERVENE
JP4452876B2 (ja) 2003-08-06 2010-04-21 国立大学法人 香川大学 ＬＫＰ２部分ｃＤＮＡを用いた遺伝子導入による植物体の種子収量、乾燥重量の制御
US7884261B2 (en) 2004-06-30 2011-02-08 CERES,Inc. Nucleotide sequences and corresponding polypeptides conferring modulated plant growth rate and biomass in plants
US7803983B2 (en) 2004-06-30 2010-09-28 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and corresponding polypeptides conferring modulated plant growth rate and biomass in plants
US20060150283A1 (en) 2004-02-13 2006-07-06 Nickolai Alexandrov Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby
US7989676B2 (en) 2006-08-31 2011-08-02 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and corresponding polypeptides conferring modulated plant characteristics
US20060143729A1 (en) 2004-06-30 2006-06-29 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and polypeptides encoded thereby useful for modifying plant characteristics
US20060048240A1 (en) 2004-04-01 2006-03-02 Nickolai Alexandrov Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby
US20060107345A1 (en) 2003-09-30 2006-05-18 Nickolai Alexandrov Sequence-determined DNA fragments and corresponding polypeptides encoded thereby
EP2302062A1 (en) 2003-10-20 2011-03-30 CropDesign N.V. Identification of E2F target genes and uses thereof
US20050096515A1 (en) 2003-10-23 2005-05-05 Geng Z. J. Three-dimensional surface image guided adaptive therapy system
WO2005084331A2 (en) 2004-03-01 2005-09-15 Syngenta Participations Ag Sorghum gene expression profiling
US8049069B2 (en) 2004-03-31 2011-11-01 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Genes involved in plant fibre development
AU2005229157B2 (en) 2004-03-31 2011-07-21 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Genes involved in plant fibre development
DE602005027191D1 (de) * 2004-04-23 2011-05-12 Ceres Inc Nukleotidsequenzen und davon kodierte polypeptide zur änderung von leistungseigenschaften der stickstoffverwendung bei pflanzen
CA2564202A1 (en) 2004-05-05 2005-11-17 The Royal Veterinary And Agricultural University Ammonium/ammonia transporter
CN101948846A (zh) * 2004-06-14 2011-01-19 伊沃基因有限公司 参与植物纤维发育的多核苷酸和多肽和使用它们的方法
JP2008505684A (ja) 2004-07-07 2008-02-28 リアル イメージング リミテッド ３ｄサーマル乳癌検出
MX2007004884A (es) 2004-10-22 2007-06-22 Agrinomics Llc Generacion de plantas con contenido alterado de aceite.
WO2006076099A2 (en) 2004-12-08 2006-07-20 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and corresponding polypeptides conferring modulated plant size and biomass in plants
WO2008069878A2 (en) 2006-10-27 2008-06-12 Ceres, Inc. Modulating lignin in plants
PT1827078E (pt) 2004-12-21 2014-05-26 Monsanto Technology Llc Plantas transgénicas com características agronómicas melhoradas
US20080148432A1 (en) 2005-12-21 2008-06-19 Mark Scott Abad Transgenic plants with enhanced agronomic traits
EP1681128A1 (de) * 2005-01-14 2006-07-19 Siemens Aktiengesellschaft Verfahren zur Herstellung eines Lochs und Vorrichtung
EP1882392A4 (en) 2005-05-10 2009-07-01 Monsanto Technology Llc GENES AND THEIR USES FOR PLANT IMPROVEMENTS
US20060288451A1 (en) 2005-05-26 2006-12-21 Monsanto Technology, L.L.C. Elevation of oil in monocot plants
WO2006138012A1 (en) 2005-06-17 2006-12-28 Ceres Inc. P450 substrates and methods related thereto
US20080301839A1 (en) * 2005-08-30 2008-12-04 Ravanello Monica P Transgenic plants with enhanced agronomic traits
MX350551B (es) * 2005-10-24 2017-09-08 Evogene Ltd Polipeptidos aislados, polinucleotidos que los codifican, plantas transgenicas que expresan los mismos y metodos para usarlos.
CA2644675A1 (en) 2006-01-13 2007-07-26 Greg Nadzan Nucleotide sequences and corresponding polypeptides conferring improved nitrogen use efficiency characteristics in plants
EP2010661A2 (en) 2006-03-24 2009-01-07 BASF Plant Science GmbH Proteins associated with abiotic stress response and homologs
MX349479B (es) 2006-12-20 2017-07-31 Evogene Ltd Polinucleotidos y polipeptidos involucrados en el desarrollo de fibra vegetal y metodos de uso.
MX2009010858A (es) 2007-04-09 2009-11-02 Evogene Ltd Polinucleotidos, polipeptidos y metodos para aumentar el contenido de aceite, la velocidad de crecimiento y biomasa de las plantas.
EP2573178A3 (en) 2007-07-10 2013-07-24 Monsanto Technology LLC Transgenic plants with enhanced agronomic traits
BR122020022203B1 (pt) 2007-07-24 2021-04-20 Evogene Ltd método de aumento da taxa de crescimento de uma planta
US8362325B2 (en) 2007-10-03 2013-01-29 Ceres, Inc. Nucleotide sequences and corresponding polypeptides conferring modulated plant characteristics
CN101977928B (zh) 2007-12-27 2014-12-10 伊沃基因有限公司 用于改进植物的水分利用效率、肥料利用效率、生物/非生物胁迫耐受性、产量和生物量的分离多肽、多核苷酸
EP2238572B1 (en) 2007-12-31 2014-07-09 Real Imaging Ltd. Method apparatus and system for analyzing thermal images
EP2231011A1 (en) 2007-12-31 2010-09-29 Real Imaging Ltd. System and method for registration of imaging data
WO2009118721A1 (en) 2008-03-28 2009-10-01 Real Imaging Ltd. Method apparatus and system for analyzing thermal images
CA3148194A1 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and peptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
EP2297336A1 (en) 2008-05-29 2011-03-23 Vib Vzw Minichromosome maintenance complex interacting protein involved in cancer
BRPI0912898B1 (pt) 2008-08-18 2022-04-12 Evogene Ltd Método para aumentar a eficiência de uso do nitrogênio e/ou tolerância à deficiência de nitrogênio de uma planta
EP2347014B1 (en) 2008-10-30 2016-09-21 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficieny
MX340023B (es) 2008-12-29 2016-06-22 Evogene Ltd Polinucleotidos, polipeptidos codificados, y metodos para utilizarlos para aumentar la tolerancia al estres abiotico, biomasa y/o rendimiento en plantas que los expresan.
CA3123543A1 (en) 2009-03-02 2010-09-10 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
EP2440033B1 (en) 2009-06-10 2017-03-15 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing nitrogen use efficiency, yield, growth rate, vigor, biomass, oil content, and/or abiotic stress tolerance
US8937215B2 (en) 2009-08-04 2015-01-20 Evogene Ltd. Polynucleotides and polypeptides for increasing desirable plant qualities
US20110080674A1 (en) 2009-10-02 2011-04-07 Joel Durand Magnetic azimuth adjustment for tonearm
EP2519097B1 (en) 2009-12-28 2016-03-02 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
AU2011246876B2 (en) 2010-04-28 2016-06-23 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
BR112013004851A2 (pt) 2010-08-30 2016-06-07 Evogene Ltd método de aumento de eficiência do uso de nitrogênio, rendimento, biomassa, taxa de crescimento, vigor, conteúdo de óleo, rendimento da fibra e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, polinucleotídeo isolado, estrutura de ácido nucleio, polipeptídeo isolado, célula vegetal e planta transgêncica
BR122021002248B1 (pt) 2010-12-22 2022-02-15 Evogene Ltd Método para aumentar a tolerância ao estresse abiótico, produção, biomassa, e/ou taxa de crescimento de uma planta
WO2012150598A2 (en) 2011-05-03 2012-11-08 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
WO2013027223A2 (en) 2011-08-23 2013-02-28 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
CN104254242A (zh) 2011-11-21 2014-12-31 先正达参股股份有限公司 用于增强植物中的线虫抗性的组合物和方法
WO2013080203A1 (en) 2011-11-28 2013-06-06 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing nitrogen use efficiency, yield, growth rate, vigor, biomass, oil content, and/or abiotic stress tolerance
BR122020022832B1 (pt) 2011-12-28 2021-08-17 Evogene Ltd Método para aumentar a produção, taxa de crescimento, biomassa, energia e/ou produção de semente de uma planta em comparação com uma planta nativa, e, construção de ácido nucleico isolado
WO2013128448A1 (en) 2012-02-29 2013-09-06 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides and methods of using same for increasing plant yield, biomass, growth rate, vigor, oil content, abiotic stress tolerance of plants and nitrogen use efficiency
CA2873846A1 (en) 2012-05-28 2013-12-05 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
BR122019028124B1 (pt) 2012-08-27 2022-08-09 Evogene Ltd Método para aumentar o rendimento, taxa de crescimento, biomassa, vigor, capacidade fotossintética, eficiência do uso de nitrogênio, e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, método para produzir uma colheita, construto de ácido nucleico, e, método de cultivar uma cultura
BR112015015415B1 (pt) 2012-12-25 2022-08-16 Evogene Ltd. Métodos para aumentar a eficiência no uso do nitrogênio, taxa de crescimento, biomassa, rendimento da semente, capacidade fotossintética e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, para produzir de uma cultura, para cultivar uma colheita, e, para selecionar uma planta
BR122020018366B1 (pt) 2012-12-26 2022-03-29 Evogene Ltd Método para aumentar a eficiência do uso de nitrogênio, rendimento, taxa de crescimento, biomassa, vigor, capacidade fotossintética e/ou tolerância ao estresse abiótico de uma planta, e, construto de ácido nucleico isolado
CA2910097A1 (en) 2013-05-22 2014-11-27 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
CA2916060A1 (en) 2013-08-27 2015-03-05 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
AU2015265412B2 (en) 2014-05-28 2021-03-25 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides, polypeptides and methods of using same for increasing abiotic stress tolerance, biomass and yield of plants
US10858403B2 (en) 2014-08-27 2020-12-08 Evogene Ltd. Isolated polynucleotides and polypeptides, and methods of using same for increasing plant yield and/or agricultural characteristics
US10766935B2 (en) 2015-12-28 2020-09-08 Evogene Ltd. Plant traits conferred by isolated polynucleotides and polypeptides

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200801467B (en) 2010-12-29
AU2006281018C1 (en) 2013-05-02
EP1945021A2 (en) 2008-07-23
CN101437947A (zh) 2009-05-20
US7910800B2 (en) 2011-03-22
US20170051303A1 (en) 2017-02-23
EP1945021B1 (en) 2015-11-11
CN102260703B (zh) 2014-06-11
CN102260703A (zh) 2011-11-30
BRPI0616523A2 (pt) 2011-06-28
US20110126323A1 (en) 2011-05-26
BRPI0616523B1 (pt) 2021-01-12
AU2006281018A1 (en) 2007-02-22
US10214749B2 (en) 2019-02-26
CA2619114A1 (en) 2007-02-22
AU2005234725B2 (en) 2012-02-23
MX2008002262A (es) 2008-04-22
EP2995194A1 (en) 2016-03-16
WO2007020638A3 (en) 2009-02-05
US20190161767A1 (en) 2019-05-30
CA3034043A1 (en) 2007-02-22
WO2007020638A2 (en) 2007-02-22
US20090089898A1 (en) 2009-04-02
US10829777B2 (en) 2020-11-10
AU2006281018B2 (en) 2012-07-12
US9487796B2 (en) 2016-11-08
EP1945021A4 (en) 2010-03-03
AU2005234725A1 (en) 2005-12-15
CA2619114C (en) 2019-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2556216T3 (es) Métodos para aumentar la tolerancia al estrés abiótico y/o la biomasa en plantas generadas mediante el mismo
RU2350653C2 (ru) Способы повышения толерантности к абиотическому стрессу и/или биомассы у растений и получаемые таким образом растения
ES2459369T3 (es) Plantas transgénicas con rasgos agronómicos potenciados
JP6675332B2 (ja) ナス科に属するフィトフトラ抵抗性植物
CN107383179A (zh) 一种与植物耐逆性相关蛋白GsSLAH3及其编码基因与应用
CN107974459B (zh) 提高植物非生物胁迫耐性的构建体和方法
WO2023065966A1 (zh) Bfne基因在番茄株型改良和生物产量提高中的应用
EP3362469A1 (en) Generating maize plants with enhanced resistance to northern leaf blight
CN102041248A (zh) 植物耐逆性相关蛋白GmSIK1及其编码基因与应用
CN113372420B (zh) OsSG2在调控植物种子粒型中的应用
CN107304422A (zh) 控制水稻纹枯病抗性的OsSBR1基因及其RNA干扰片段的应用
RU2451079C2 (ru) Сорго, устойчивое к ацетолактатсинтазному гербициду
CN117305354B (zh) 水稻OsMYB-Hv1基因及其编码蛋白与应用
CN112410370B (zh) 玉米10kDa热激蛋白基因ZmHsp10在改变植物抗逆性中的应用
CN111187784B (zh) 氨基酰化酶-1的用途
CN107663232A (zh) 植物抗逆相关蛋白OsIAA18及其编码基因与应用
CN113604475A (zh) 棉花gh_d03g1517基因在促进抗旱和耐盐中的应用
CN113755510A (zh) 一种编码大豆FtsH金属蛋白酶基因GmFtsH25及其应用
CN103709237B (zh) 植物光合作用相关蛋白OsPSF1及其编码基因和应用
NL2027897A (en) Use of gmaap protein and gmaap gene in breeding soybeans
CN106906228B (zh) 能显著提高棉花抗病性的GhLMM基因及其应用
Dabauza et al. Response of sweet pepper (Capsicum annuum L.) genotypes to Agrobacterium tumefaciens as a means of selecting proper vectors for genetic transformation
CN104341491B (zh) 植物耐旱性相关蛋白OsERF62及其编码基因与应用
KR101326019B1 (ko) 남세균 유래 내염성 ＳｙＤＢＳＰ 유전자 및 이의 용도
KR20120044070A (ko) 남세균 유래 내염성 ＳｙＧＴ 유전자 및 이의 용도