ES2553404T3 - Nucleósidos para suprimir o reducir el desarrollo de resistencia en el tratamiento con citostáticos - Google Patents

Nucleósidos para suprimir o reducir el desarrollo de resistencia en el tratamiento con citostáticos Download PDF

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ES2553404T3 ES07786668.9T ES07786668T ES2553404T3 ES 2553404 T3 ES2553404 T3 ES 2553404T3 ES 07786668 T ES07786668 T ES 07786668T ES 2553404 T3 ES2553404 T3 ES 2553404T3
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Abstract

Nucleósidos de la fórmula general I**Fórmula** con R1 >= halógeno, R2 seleccionado del grupo consistente en H, halógeno, OR8, CN, N3, NR6R7 y radicales de profármaco unidos a través de un átomo de oxígeno, en donde el radical de profármaco está seleccionado del grupo consistente en**Fórmula** con R10 y R11, de manera independiente entre sí, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo, que también puede tener heteroátomos, R12 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, aralquileno, arilo, que también puede tener heteroátomos, R13 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,**Fórmula** con R10 y R11, de manera independiente entre sí, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo, que también puede tener heteroátomos, R12 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, aralquileno, arilo, que también puede tener heteroátomos, R13 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, R14 >= O-alquilo C1-C8, NH-alquilo C1-C8, N-(alquilo C1-C8)2,**Fórmula** con R15 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,**Fórmula** con R15 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, R16 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, O-arilo**Fórmula** con R17 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, halógeno,**Fórmula** con R18 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo o heteroarilo, R19 >= alquil-CO-, aril-CO-, aminoácido o péptido, con R20 >= alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, R3 >= H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, alquileno C1-C8 de cadena lineal o ramificado, R4 >= H, halógeno, OR8, N3, NR6R7 o bien R4 junto con R1 representan un segundo enlace entre los átomos de C adyacentes a R1 y R4, R5 >= H, alquilo C1-C8 o arilo y R6, R7 y R8, de manera independiente entre sí, H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado o acetilo, estando excluidos los compuestos con los siguientes radicales: R1 >= F, R2 >= OH, R3 >= R4 >= R5 >= H, R1 >= F, R2 >= O-acetilo, R3 >= R4 >= R5 >= H, R1 >= F, R2 >= trifosfato, R3 >= R4 >= R5 >= H, R1 >= Cl, R2 >= OH, R3 >= R4 >= R5 >= H.

Description

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DESCRIPCION
Nucleosidos para suprimir o reducir el desarrollo de resistencia en el tratamiento con citostaticos
La invencion se refiere a nucleosidos especiales asf como a medicamentos que contienen estos nucleosidos. La invencion se refiere, ademas, al uso de tales nucleosidos para preparar un medicamento, en particular para suprimir o reducir el desarrollo de resistencia en el tratamiento con citostaticos.
La quimioterapia es el tratamiento estandar para las enfermedades cancerosas. Los citostaticos influyen en la division celular y por lo tanto son particularmente toxicos para celulas tumorales en crecimiento rapido. Los citostaticos inducen apoptosis, es decir, conducen a la muerte celular de las celulas tumorales. Desafortunadamente, la mayona de las veces el penodo de tratamiento sin resistencia con los citostaticos que se encuentran actualmente en el mercado no es lo suficientemente largo para destruir por completo el tumor. Para mejorar esta situacion, se han desarrollado "quimiosensibilizadores", que contrarrestan la resistencia existente.
Si la resistencia es causada por la amplificacion (multiplicacion) y sobreexpresion del gen de la "resistencia multifarmaco" (MDR-1), esto se puede reducir mediante la inactivacion de su producto genico (glicoprotema P) (Takara K., Sakaeda T., Okumura K., An update on overcoming MDRI-mediated multidrug resistance in cancer chemotherapy. Curr. Pharm. Des. 2006; 12(3):273-86).
Graves efectos secundarios han impedido hasta la fecha el uso de inhibidores de glicoprotema P. Debido a su accion toxica, las sustancias de la tercera generacion solo se pueden utilizar, probablemente, para un tratamiento a corto plazo y tambien solo en el caso de los escasos tumores cuya resistencia se basa exclusivamente en la accion del gen de la "resistencia multifarmaco". Aparte de esto, se han desarrollado inhibidores de los receptores de tirosinacinasa o de la sobreexpresion de oncogenes individuales. Sin embargo, aun solo se tratan unos pocos tumores adecuados (Desoize B., Jardillier J., Multicellular resistance: a paradigm for clinical resistance? Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2000; 36:193-207).
A partir del documento EP 0 806 956 se conocen nucleosidos 5-sustituidos para inhibir el desarrollo de resistencia en el tratamiento con citostaticos. Los compuestos ailt citados son (E)-5'-(2-bromovinil)-2'-desoxiuridina (BVDU) y (E)-5'-(2-bromovinil)uracilo (BVU).
A partir de los documentos WO 2004/084917 A, WO 02/39952 A, WO 2005/012327 A, WO 90/15064 A, EP-A-0 104 857, EP-A-0 097 039, DE 32 33 198 A1, WO 98/42351 y EP-A2-0 368 668 se conocen otros derivados de BVDV.
Estos evitan el desarrollo de resistencia y combaten resistencias que aun no existen. En contraste con los intentos conocidos desde hace decadas y en su mayona sin exito para eludir o reducir quimiorresistencias ya existentes, no existe competencia a nivel mundial para este enfoque tecnologico (Fahrig, R., Heinrich, J.C., Nickel, B., Wilfert, F., Leisser, C., Krupitza, G., Praha, C., Sonntag, D., Fiedler, B., Scherthan, H. y Ernst, H., Inhibition of induced chemoresistance by co-treatment with (E)-5-(2-bromovinyl)-2'-deoxyuridine (RP101), Cancer Res. 63 (2003) 5745-5753). El primer farmaco BVDU demostro una accion estadfsticamente significativa en dos estudios clmicos con pacientes de cancer de pancreas. El efecto del cotratamiento de citostaticos con BVDU era mas eficaz que cualquier otra quimioterapia descrita hasta la fecha.
Por lo tanto, era mision de la presente invencion proporcionar sustancias que tuviesen, frente a los compuestos conocidos del estado de la tecnica, mayor eficacia con respecto a la supresion o reduccion del desarrollo de resistencia en el tratamiento con citostaticos.
Esta mision se consigue mediante los nucleosidos con las caractensticas de la reivindicacion 1 y el medicamento con las caractensticas de la reivindicacion 4. En la reivindicacion 6 se proporciona el uso de tales nucleosidos. Las otras reivindicaciones dependientes exponen realizaciones adicionales ventajosas.
Segun la invencion, se proporcionan nucleosidos de la formula general I
imagen1
con
Ri = halogeno,
R2 seleccionado del grupo consistente en H, halogeno, OR8, CN, N3, NR6R7 y radicales de profarmaco unidos a traves de un atomo de oxfgeno, en donde
el radical de profarmaco esta seleccionado del grupo consistente en
imagen2
con
R10 y R11, de manera independiente entre s^ alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo, que tambien puede tener heteroatomos, R12 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, aralquileno, arilo, que tambien puede tener 10 heteroatomos, R13 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
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con
R10 y R11, de manera independiente entre s^ alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo, que tambien puede tener heteroatomos, R12 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, aralquileno, arilo, que tambien puede tener 15 heteroatomos, R13 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, R14 = O-alquilo C1-C8, NH-alquilo C1-C8, N-(alquilo
C1-C8)2,
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con
20 R15 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
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con
R15 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
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R16 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, O-arilo
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con
R17 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, halogeno;
imagen8
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nhr19
con
R18 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo o heteroarilo, R19 = alquil-CO-, aril-CO-, aminoacido o peptido,
imagen10
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con
R20 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
R3 = H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, alquileno C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
R4 = H, halogeno, OR8, N3, NR6R7 o bien R4 junto con R1 representan un segundo enlace entre los atomos de C adyacentes a R1 y R4,
R5 = H, alquilo C1-C8 o arilo y
R6, R7 y R8, de manera independiente entre s^ H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado o acetilo, estando excluidos los compuestos con los siguientes radicales:
R1 = F, R2 = OH, R3 = R4 = R5 = H,
R1 = F, R2 = O-acetilo, R3 = R4 = R5 = H,
R1 = F, R2 = trifosfato, R3 = R4 = R5 = H,
R1 = Cl, R2 = OH, R3 = R4 = R5 = H.
Asimismo se proporcionan medicamentos que contienen los nucleosidos de la formula general I,
En cuanto al uso, este se refiere en particular a la supresion o reduccion del desarrollo de resistencia en el tratamiento con citostaticos. Se emplean para ello nucleosidos de la formula general I,
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con
Ri = halogeno,
R2 seleccionado del grupo consistente en H, halogeno, OR8, CN, N3, NR6R7 y radicales de profarmaco unidos a traves de un atomo de ox^geno,
R3 = H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, alquileno C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
R4 = H, halogeno, OR8, N3, NR6R7 o bien R4 junto con R1 representan un segundo enlace entre los atomos de C adyacentes a R1 y R4,
R5 = H, alquilo C1-C8 o arilo y
R6, R7 y R8, de manera independiente entre s^ H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado o acetilo, asf como al menos un citostatico.
Otros usos se refieren a la terapia sin resistencia, contra enfermedades infecciosas causadas por bacterias, plasmodios o leishmanias.
La aplicacion puede efectuarse aqu tanto en una formulacion unica, es decir, como preparado combinado, o tambien en formulaciones separadas. En el caso de la formulacion separada, tambien es posible una administracion de las dos formulaciones desplazada en el tiempo.
No existe ningun tipo de restricciones con respecto a la galenica, por lo que pueden utilizarse todas las formas de formulacion conocidas del estado de la tecnica. Entre ellas se cuentan, por ejemplo, comprimidos, capsulas, aerosoles, grageas, emulsiones, Kquidos y ampollas.
Contrariamente al modo de proceder actual para combatir las resistencias existentes, que no ha tenido mucho exito, las sustancias mencionadas segun la invencion entran en escena mucho antes. Impiden la formacion de resistencias. Por tanto, se combaten las causas de una enfermedad y no los smtomas.
El objeto segun la invencion se explicara con mas detalle por medio de las siguientes Figuras y Ejemplos, sin querer limitarlo a las realizaciones especiales que se muestran en la presente memoria.
Las Figuras 1 a 3, 7, 8 y 12 muestran la influencia sobre el recuento celular de celulas AH13r con el transcurso del tiempo, de compuestos segun la invencion en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con la administracion en solitario de MMC o bien con la administracion de MMC con BVDU. En este caso se expusieron celulas AH13r a dosis crecientes del citostatico MMC. Se puede deducir de estas Figuras que el efecto de MMC junto con los compuestos segun la invencion es claramente mas intenso en comparacion con MMC y BVDU.
Ejemplos
Generalidades:
Los eductos 5'-O-(4-clorobenzon)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina (P. Herdewijn, J. Balzarini, E. De Clerq, R. Pauwels, M. Baba, J. Med. Chem. 1987, 30, 1270-1278), 5'-O-metilsulfonil-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina (P.M. Reddy, T.C. Bruice; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13; 1281-1286), 5'-O-tritil-2'-desoxi-5-etil-uridina (C.K. Chu, R.F. Raymond, M.K. Ahn, V. Giliyar, Z.P. Gu, J. Med. Chem. 1989, 32, 612-617), S-(2-hidroxietil)-tiopivaloato (I. Lefebvre, C. Perigaud, A. Pompon, A.-M. Aubertin, J.-L. Girardet, A. Kirn, G. Gilles y J.-L. Imbach, J. Med. Chem. 1995, 38, 3941-3950), 5-(E)-bromoviniluridina (E. De Clercq, C. Desgranges, P. Herdewijn, A.S. Jones, M.J. McLean, R.T. Walker, J. Med. Chem. 1986, 29, 213-217), 5-yodouracilo (J. Asakura, M.J. Robins, J. Org. Chem. 1990, 55, 4928-4933), 2'-desoxi-2'-fluorouridina (Y. Saito, K. Utsumi, T. Maruyama, T. Kimura, I. Yamamoto, D.D. Richman, Chem. Pharm. Bull. 1994, 42, 595-598), 5-yodo-2'-desoxi-2'-fluorouridina (T. Kniess, M. Grote, B. Noll, B. Johannsen, Z. Naturforsch. 2003, 58b, 226-230), ester metilico de acido 3-(2'-desoxi-2'-fluorouridin-5-il)acnlico
(J. Matulic-Adamic, A.T. Daniher, A. Karpeisky, P. Haeberli, D. Sweedler, L. Beigelman, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000, 10, 1299-1302), bromuro de 3,5-di-O-benzon-2-desoxi-2-fluoro-a-D-arabinosilo, 1-(2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-
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S. Manfredini, S.G. Wood, R.J. Wanklin, B.A. Rennie, S.L. Sacks, J. Med. Chem. 1991, 34, 2275-2280), 5'-amino- 2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, 5'-bromo-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, 5'-cloro-2,5'-didesoxi-5-(E)- bromoviniluridina, 5'-azido-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina y 3'-azido-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina (R. Busson, L. Colla, H. Vanderhaeghe, E. De Clercq, Nucleic Acids Research, Symposium Series, 1981, 9, 49-52), 3'-O-(t-butildimetilsilil-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina (P. Herdewijn, R. Ramamurthy, E. De Clercq, W. Pfleiderer, Helv. Chim. Acta 1989, 72, 1739-1748), 2'-desoxi-3'-metoxi-5-(E)- bromoviniluridina (M. Ashwell, A.S. Jones, A. Kumar, J.R. Sayers, R.T. Walker, Tetrahedron 1987, 43, 20, 4601-4608) se sintetizaron de manera analoga a las indicaciones de la bibliograffa mencionada.
Todos los demas eductos de partida estaban disponibles comercialmente.
La purificacion por cromatograffa en columna de las sustancias se efectuo sobre gel de sflice 60 (Fluka,
0. 040 - 0,063 mm) con los eluyentes indicados. Para la cromatograffa en capa fina (CCF) se utilizaron placas de gel de sflice (Merck, gel de sflice 60 F254).
Los espectros de 31P-RMN se midieron con acido fosforico al 85% como estandar externo.
1. Derivados 3'-sustituidos de BVDU
1.1. 3'-Halogeno-BVDU
1.1.1. 2',3'-Didesoxi-3'-bromo-5-(E)-bromoviniluridina
1.1.11. 2,3'-Anhidro-2'-desoxi-5'-O-benzon-5-(E)-bromoviniluridina
A una disolucion de 15,0 g (45 mmol) de BVDU y 17,8 g (68 mmol) de trifenilfosfina se anade gota a gota, en el transcurso de 155 minutos, una disolucion de 13,8 g (68 mmol) de azodicarboxilato de diisopropilo y 8,3 g (68 mmol) de acido benzoico en 75 ml de DMF. Despues de esto se agita durante 30 minutos mas a temperatura ambiente y se anaden nuevamente 17,8 g de trifenilfosfina. Se anade a esto gota a gota, en el transcurso de 10 minutos, una disolucion de 13,8 g (68 mmol) de azodicarboxilato de diisopropilo en 10 ml de DMF y se agita a temperatura ambiente durante 3 horas. El control mediante CCF (diclorometano/metanol 5:1) revela que la reaccion ha terminado. Se vierte la mezcla de reaccion en 1,5 l de eter diefflico, se filtra con succion el precipitado formado y se lava con eter diefflico. Tras secar, el rendimiento asciende a 10,1 g (53,5%).
1.1.12. 2',3'-Didesoxi-3'-bromo-5'-O-benzofl-5-(E)-bromoviniluridina
Se suspenden 3,0 g (7,16 mmol) de 2,3'-anhidro-2'-desoxi-5'-O-benzofl-5-(E)-bromoviniluridina y 2,40 g (15,0 mmol) de hidrobromuro de piridinio en 20 ml de DMF y se calienta a 100°C. Al cabo de 3 horas la reaccion ha terminado (control mediante cCf con diclorometano/metanol 20:1). Se diluye con 200 ml de agua la disolucion obtenida y se extrae con acetato de etilo. Se lavan dos veces las fases de acetato de etilo reunidas, cada vez con 100 ml de acido clortffdrico 0,5 M, y tres veces con 100 ml de disolucion de sal comun, se secan con sulfato de magnesio, se separan por filtracion y se purifican varias veces por cromatograffa en columna, primeramente con diclorometano/acetato de etilo 12:1 y despues con cloroformo/metanol 25:1. El rendimiento asciende a 2,0 g (55,8%) de una espuma incolora.
1.1.13. 2',3'-Didesoxi-3'-bromo-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven 1,92 g (3,84 mmol) de 2,3'-didesoxi-3'-bromo-5'-O-benzofl-5-(E)-bromoviniluridina en 25 ml de THF y se mezclan con 10 ml de agua y con 9,6 ml (19,2 mmol) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio. Al cabo de 2,5 horas la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 15:1). Se vierte la preparacion en 50 ml de disolucion saturada de sal comun y se extrae con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos. Tras filtrar y eliminar por destilacion el disolvente se obtienen, mediante purificacion repetida por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 15:1), 1,3 g (81,2%) de una espuma solida blanca.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,45 (m, 1H); 2,72 (m, 1H); 3,71 (m, 2H); 4,19 (m, 1H); 4,61 (m, 1H); 5,31 (s, 1H); 6,17 (t, 1H); 6,83 (d, 1H); 7,25 (d, 1H); 8,07 (s, 1H); 11,60 (s, 1H) ppm.
La Figura 1 muestra los resultados de este compuesto segun la invencion en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
1.1.2. 1-(3'-Cloro-2,3-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona
1.1.2.1. 1 -(5'-O-(4-Clorobenzofl)-3'-cloro-2,3'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)- pirimidindiona
Se disuelven 2,0 g (4,24 mmol) de 5'-O-(4-clorobenzofl)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina en 40 g de HMPT y se anaden a ello 1,6 g (13,44 mmol) de cloruro de tionilo. Al cabo de 45 minutos la reaccion ha terminado. Se mezcla
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con agua y se extrae con acetato de etilo. Tras secar con sulfato de sodio, filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se purifica por cromatograffa en columna (ciclohexano/acetato de etilo 7:3). Se obtienen 1,32 g (64%) de un solido incoloro de punto de fusion 89-91°C.
1.1.22. 1-(3'-Cloro-2',3'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona
Se disuelven 0,9 g (1,84 mmol) de 1-(5'-O-(4-clorobenzon)-3'-cloro-2,3'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)- (2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona en 50 ml de metanol y se anaden 0,15 g (2,78 mmol) de metoxido de sodio. Al cabo de 2 horas, el control mediante CCF (diclorometano/metanol 95:5) revela que la reaccion ha terminado. Se anade intercambiador de iones (Dowex-H+ 50 WX 4 (Merck, 105238), activado bajo metanol), se filtra y se lava de nuevo con metanol. Despues de eliminar por evaporacion rotativa metanol, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (acetato de etilo). Se obtienen 0,43 g (67%) de un solido incoloro de punto de fusion 183-185°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da): 2,37 (m, 1H); 3,00 (m, 1H); 3,77 (m, 2H); 4,20 (m, 1H); 4,76 (m, 1H); 5,00 (t, 1H); 6,00 (m, 1H); 6,95 (d, 1H); 7,27 (d, 1H); 7,92 (s, 1H); 11,63 (s, 1H) ppm.
1.2. 5'-O-Derivados de 3'-halogeno-BVDU
1.2.1. 5'-O-Acilderivados de 3'-halogeno-BVDU
1.2.1.1. 5'-O-Pivalofl-3'-cloro-2',3'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven 1,25 g (3,55 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina y 0,05 g (0,41 mmol) de 4-dimetilaminopiridina en THF/piridina (5 ml de cada uno), se enfna a 0°C y se mezcla con 0,54 g (4,44 mol) de cloruro de pivaloflo. Se deja calentar hasta la temperatura ambiente. Al cabo de 2 horas la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 20:1). Despues de verter en una disolucion de acido cftrico en 50 ml de agua, se extrae con acetato de etilo y se lavan con tampon de fosfato los extractos reunidos y se secan con sulfato de magnesio. Despues de filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/metanol 75:1). Se obtienen 1,33 g (86,4%) de un solido incoloro de punto de fusion 136°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,14 (s, 9H); 2,57 (m, 1H); 2,71 (m, 1H); 4,28 (m, 3H); 4,70 (m, 1H); 6,23 (m, 1H); 6,90 (d, 1H); 7,29 (s, 1H); 7,76 (s, 1H); 11,65 (s, 1H) ppm.
1.2.12. 5'-O-Etoxicarbonil-(E)-5-(2-bromovinil)-3'-cloro-2',3'-
Se disuelven 310 mg (0,88 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina en diclorometano/piridina (3 ml de cada uno) y se mezclan, a 0°C, con 108 mg (1 mmol) de cloruro de etoxicarbonilo. Al cabo de 2 horas la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 25:1). Se diluye con 20 ml de diclorometano, se lava con acido clorhudrico 1 M y con tampon de fosfato. Tras secar sobre sulfato de magnesio, filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 25:1. Se obtienen 200 mg (53,6%) de un solido incoloro de punto de fusion 181°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,23 (t, 3H); 2,65 (m, 2H); 4,15 (q, 2H); 4,37 (m, 3H); 4,71 (m, 1H); 6,22 (m, 1H); 6,87 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,78 (s, 1H); 11,64 (s, 1H) ppm.
1.2.2. Esteres de aminoacido de 3'-halogeno-BVDU
1.2.2.1. 5'-O-(t-Butoxicarbonilaminoacetil)-3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 25 ml de diclorometano 1,06 g (3 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina, 0,58 g (3,3 mmol) de N-BOC-glicina, 0,45 g (3,3 mmol) de 1-hidroxibenzotriazol y 0,99 g (3,3 mmol) de metoyoduro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. Transcurridas 8 horas se anaden de nuevo respectivamente las mismas cantidades de N-BOC-glicina, 1-hidroxibenzotriazol y metoyoduro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. Al cabo de otras 16 horas la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 25:1). Se lava con agua la disolucion en diclorometano y se seca con sulfato de sodio. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/metanol 25:1). Se obtienen 1,03 g (68%) de una espuma incolora.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,37 (s, 9H); 2,57 (m, 1H); 2,71 (m, 1H); 3,72 (m, 2H); 4,23 (m, 1H); 4,33 (m, 2H); 4,69 (m, 1H); 6,24 (m, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,26 (t, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,77 (s, 1H); 11,66 (s, 1H) ppm.
1.2.2.2. Trifluoroacetato de 5'-O-(amonioacetil-3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 20 ml de acido trifluoroacetico 0,81 g (1,6 mmol) de 5'-O-(t-butoxicarbonilaminoacetil)-3'-cloro-2',3'- didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. Al cabo de 45 minutos la escision del grupo protector BOC es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 95:5). Se elimina por evaporacion rotativa acido trifluoroacetico, se toma el residuo en una pequena cantidad de metanol y se trata con eter dietflico. Se filtra con succion el precipitado formado, se lava con eter dietflico y se precipita de nuevo en metanol/eter dietflico. Despues de separar por
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filtracion, lavar con eter dietilico y secar, el rendimiento asciende a 0,38 g (45,7%) de un polvo incoloro.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da): 2,59 (m, 1H); 2,75 (m, 1H); 3,87 (m, 2H); 4,26 (m, 1H); 4,44 (m, 2H); 4,73 (m, 1H); 6,24 (m, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,32 (d, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,32 (s, 3H); 11,68 (s, 1H) ppm.
1.2.2.3. 4-(t-Butoxicarbonil)amino-1-(3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridin-5'-il)-butanoato
Se disuelven en 20 ml de diclorometano 2,0 g (9,84 mmol) de acido N-BOC-4-aminobutmco y 1,2 g (9,84 mmol) de 4-dimetilaminopiridina. Se anaden a ello 3,46 g (9,84 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina y, tras enfriar a 0°C, 2,03 g (9,84 mmol) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida. Tras calentar hasta la temperatura ambiente y agitar durante 20 horas a temperatura ambiente la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 20:1). Se filtra la preparacion y se concentra por evaporacion rotativa. Tras disolver en acetato de etilo, se enfna a -20°C, se separa por filtracion el precipitado y se lava con una pequena cantidad de acetato de etilo, enfriado a -20°C. Se concentra por evaporacion rotativa el filtrado y se purifica varias veces por cromatograffa en columna con diclorometano/acetato de etilo (4:1). Se obtienen 3,2 g (60,6%) de una espuma incolora.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,36 (s, 9H); 1,62 (m, 2H); 2,31 (m, 2H); 2,52 (m, 1H); 2,72 (m, 1H); 2,92 (m, 2H);
4.31 (m, 3H); 4,71 (m, 1H); 6,22 (m, 1H); 6,79 (m, 1H); 6,92 (d, 1H); 7,31 (m, 1H); 7,77 (s, 1H); 11,64 (s, 1H).
La Figura 2 muestra los resultados de este compuesto segun la invencion en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
1.2.2.4. Trifluoroacetato de 4-amonio-1-(3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridin-5'-il)-butanoato
Se disuelven en 5 ml de diclorometano 310 mg (0,577 mmol) de 4-(t-butoxicarbonil)amino-1-(3'-cloro-2',3'-didesoxi-5- (E)-bromoviniluridin-5'-il)-butanoato y se mezclan con 5 ml de acido trifluoroacetico. Tras agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente la reaccion es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 20:1). Se eliminan por destilacion diclorometano y acido trifluoroacetico y se mezcla el residuo con 20 ml de eter dietilico. Se agita durante 2 horas hasta que se produce un precipitado fino pulverulento, se filtra, se lava con eter dietflico y se seca en vado. Se obtienen 250 mg (78,7%) de un solido incoloro de punto de fusion 89°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,82 (m, 2H); 2,49 (m, 2H); 2,59 (m, 1H); 2,72 (m, 1H); 2,81 (m, 2H); 4,22 (m, 1H);
4.32 (m, 2H); 4,69 (m, 1H); 6,22 (m, 1H); 6,94 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,73 (s, 3H); 7,78 (s, 1H); 11,65 (s, 1H).
1.2.2.5. 5'-O-(N-t-Butiloxicarbonil-L-valinon)-3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 20 ml de diclorometano, a 0°C, 1,00 g (2,84 mmol) de 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. Despues se anaden 618 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N-t-butiloxicarbonil-L-valina, 347 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N,N-dimetilaminopiridina y tambien 587 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida, y a continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 20 horas a temperatura ambiente. Se separa por filtracion el precipitado resultante y se lava con diclorometano. Se lava el filtrado con disolucion diluida de acido cftrico, disolucion de NaHCO3 y disolucion de NaCl, y a continuacion se seca con Na2SO4. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (CHCh/MeOH, 95/5) proporciona 1,09 g (1,98 mmol, 70%) de 5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valinofl)-3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 75-76°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 0,85 (d, 3H); 0,87 (d, 3H); 1,38 (s, 9H); 1,98 (m, 1H); 2,54 (m, 1H); 2,73 (m, 1H); 3,81 (t, 1H); 4,26 (m, 2H); 4,34 (m, 1H); 4,68 (q, 1H); 6,24 (t, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,21 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,76 (s, 1H); 11,67 (s, 1H) ppm.
1.2.2.6. Trifluoroacetato de 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5'-O-L-valinofl-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de diclorometano, a 0°C, 600 mg (1,09 mmol) de 5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valinofl)-3'-cloro- 2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, se anaden 1,0 ml (14 mmol) de acido trifluoroacetico y a continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 3 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se mezcla con 5 ml de eter dietflico el producto bruto y se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se separa por decantacion el disolvente y se mantiene el residuo en un evaporador rotativo durante 1 hora a 40°C. Resultan 540 mg (956 pmol, 88%) de trifluoroacetato de 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5'-O-L-valinofl-5-(E)-bromoviniluridina en forma de un solido blanco con un punto de fusion de 110-112°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 0,95 (d, 3H); 0,97 (d, 3H); 2,17 (m, 1H); 2,60 (m, 1H); 2,79 (m, 1H); 3,93 (s ancho, 1H); 4,27 (m, 1H); 4,46 (m, 2H); 4,74 (q, 1H); 6,26 (dd, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,32 (d, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,34 (s ancho, 3H); 11,69 (s, 1H) ppm.
1.2.2.7. 5'-O-(N-t-Butiloxicarbonil-L-valil-L-valinofl)-3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 20 ml de diclorometano, a 0°C, 1,00 g (2,84 mmol) de 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5'-(E)-bromoviniluridina. Despues se anaden 880 mg (2,78 mmol, 1,0 eq.) de N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valina, 347 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.)
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de N,N-dimetilaminopiridina y tambien 587 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida, y a continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 3 d^as a temperatura ambiente. Se separa por filtracion el precipitado resultante y se lava con diclorometano. Se lava el filtrado con disolucion diluida de de acido cftrico, disolucion de NaHCO3 y disolucion de NaCl, y posteriormente se seca con Na2SO4. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo, 3/1) proporciona 610 mg (939 |jmol, 33%) de 5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valinoft)-3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 102-103°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 0,81-0,90 (m, 12H); 1,37 (s, 9H); 1,91 (m, 1H); 2,06 (m, 1H); 2,54 (m, 1H); 2,74 (m, 1H); 3,88 (t, 1H); 4,19 (t, 1H); 4,23-4,35 (m, 3H); 4,68 (q, 1H); 6,24 (t, 1H); 6,64 (d, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,77 (s, 1H); 8,03 (d, 1H); 11,67 (s, 1H) ppm.
1.2.2.8. Trifluoroacetato de 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5'-O-(L-valil-L-valinoft)-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de diclorometano, a 0°C, 300 mg (462 jmol), de 5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valinoft)-3'- cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, se anaden 0,5 ml (6,7 mmol) de acido trifluoroacetico y a continuacion se agita la mezcla durante 3 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se mezcla con 5 ml de eter dietflico el producto bruto y se agita durante 1 hora a temperatura ambiente. Se separa por decantacion el disolvente y se mantiene en un evaporador rotativo el residuo durante 1 hora a 40°C. Resultan 280 mg (422 jmol, 91%) de trifluoroacetato de 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5'-O-(L-valil-L-valinoft)-5-(E)-bromoviniluridina en forma de un solido blanco con un punto de fusion de 169-170°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 0,91-0,96 (m, 12H); 2,08-2,14 (m, 2H); 2,59 (m, 1H); 2,76 (m, 1H); 3,71 (t, 1H); 4,22-4,26 (m, 2H); 4,31-4,38 (m, 2H); 4,68 (q, 1H); 6,25 (t, 1H); 6,90 (d, 1H); 7,32 (d, 1H); 7,81 (s, 1H); 8,06 (s ancho, 3H); 8,56 (d, 1H); 11,68 (s, 1H) ppm.
1.2.2.9. 3'-Azido-5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valinoft)-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 20 ml de diclorometano, a 0°C, 1,02 g (2,84 mmol) de 3'-azido-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. Despues se anaden 880 mg (2,78 mmol, 1,0 eq.) de N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valina, 347 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N,N-dimetilaminopiridina y tambien 587 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida, y a continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 24 horas a temperatura ambiente. Se separa por filtracion el precipitado resultante y se lava con diclorometano. Se lava el filtrado con disolucion diluida de acido cftrico, disolucion de NaHCO3 y disolucion de NaCl, y a continuacion se seca con Na2SO4. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo, 3/1) proporciona 550 mg (838 jmol, 30%) de 3'-azido-5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valinoft)-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 95-97°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 0,81-0,91 (m, 12H); 1,37 (s, 9H); 1,91 (m, 1H); 2,07 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 2,51 (m, 1H); 3,88 (t, 1H); 4,01 (q, 1H); 4,19 (t, 1H); 4,30 (m, 2H); 4,45 (q, 1H); 6,12 (t, 1H); 6,64 (d, 1H); 6,92 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,77 (s, 1H); 8,04 (d, 1H); 11,66 (s, 1H) ppm.
1.2.2.10. Trifluoroacetato de 3'-azido-2',3'-didesoxi-5'-O-(L-valil-L-valinoft)-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 4 ml de diclorometano, a 0°C, 200 mg (305 jmol) de 3'-azido-5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L- valinoft)-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, se anaden 0,33 ml (4,47 mmol) de acido trifluoroacetico y a continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 3 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se mezcla con 5 ml de eter dietflico el producto bruto y se agita durante 1 hora a temperatura ambiente. Se separa por decantacion el disolvente y se mantiene el residuo en un evaporador rotativo durante 1 hora a 40°C. Resultan 200 mg (298 jmol, 98%) de trifluoroacetato de 3'-azido-2',3'-didesoxi-5'-O-(L-valil-L-valinoft)- 5-(E)-bromoviniluridina en forma de un solido blanco con un punto de fusion de 113-115°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 0,91-0,96 (m, 12H); 2,08-2,14 (m, 2H); 2,40 (m, 1H); 2,53 (m, 1H); 3,72 (t, 1H); 4,00 (q, 1H); 4,25 (m, 1H); 4,31-4,38 (m, 2H); 4,45 (q, 1H); 6,13 (t, 1H); 6,90 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,08 (m, 3H); 8,58 (d, 1H); 11,67 (s, 1H) ppm.
1.2.3. Fosforamidatos de 3'-halogeno-BVDU
1.2.3.1. (E)-5-(2-Bromovinil)-3'-fluoro-2',3'-didesoxiuridin-5'-[fenil-(metoxi-L-alaninil)]-fosfato
Se disuelven o suspenden en 4 ml de THF 255 mg (1,20 mmol) de diclorofosfato de fenilo y 169 mg (1,20 mmol) de hidrocloruro de ester metflico de L-alanina. Se enfna a -78°C con un bano de hielo seco y, a esta temperatura, se anaden gota a gota 244 mg (2,40 mmol) de trietilamina, que esta disuelta en 4 ml de THF. Al cabo de 30 minutos la adicion gota a gota ha terminado, y se deja calentar poco a poco hasta la temperatura ambiente y se agita durante 24 horas en total. Despues de esto se anaden 270 mg (0,80 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-fluoro-5-(E)-bromoviniluridina y se enfna a -78°C con un bano de hielo seco. A la suspension obtenida se anade gota a gota una disolucion de 265 mg (3,22 mmol) de N-metilimidazol en 5 ml de THF. Al cabo de 30 minutos la adicion gota a gota ha terminado y se deja calentar gradualmente hasta la temperatura ambiente. Al cabo de 48 horas mas la reaccion ha terminado
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(control mediante CCF con cloroformo/acetato de etilo 3: 2). Se vierte la preparacion en una mezcla de 20 ml de tampon de fosfato y 25 ml de acetato de etilo y se extrae dos veces mas la fase acuosa con 20 ml de acetato de etilo cada vez. Despues de secar con sulfato de magnesio, separar por filtracion y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con diclorometano/acetato de etilo 3:2. Se obtienen 180 mg (38,8%) de una espuma incolora.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 1,23 (d, 3H); 2,35 (m, 1H); 2,49 (m, 1H); 3,58 (s, 3H); 3,85 (m, 1H); 4,21 (m, 2H); 4,39 (m, 1H); 5,32 (m, 1H); 6,18 (m, 2H); 6,84 (d, 1H); 7,19 (m, 3H); 7,29 (d, 1H); 7,36 (m, 2H); 7,87 (s, 1H); 11,67 (s, 1H) ppm.
31P-RMN (122 MHz, DMSO-d6): 5,08; 5,29 ppm.
1.2.3.2. (E)-5-(2-Bromovinil)-3'-cloro-2',3'-didesoxiuridin-5'-[fenil-(metoxi-L-alaninil)]-fosfato
Se disuelven o suspenden en 12 ml de THF 1,19 g (5,67 mmol) de diclorofosfato de fenilo y 0,79 g (5,67 mmol) de hidrocloruro de ester metflico de L-alanina. Se enfna a -78°C con un bano de hielo seco y, a esta temperatura, se anaden gota a gota 1,15 g (11,34 mmol) de trietilamina, que esta disuelta en 12 ml de THF. Al cabo de 30 minutos la adicion gota a gota ha terminado, y se deja calentar poco a poco hasta la temperatura ambiente y se agita durante 24 horas en total.
Despues de esto se anaden 1,0 g (2,84 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina y se enfna a -78°C con un bano de hielo seco. A la suspension obtenida se anade gota a gota una disolucion de 1,17 g (14,2 mmol) de N-metilimidazol en 12 ml de THF. Al cabo de 30 minutos la adicion gota a gota ha terminado y se deja calentar gradualmente hasta la temperatura ambiente. Al cabo de 48 horas adicionales la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/acetato de etilo 3:2). Se vierte la preparacion en una mezcla de 75 ml de tampon de fosfato y 50 ml de acetato de etilo, y se extrae la fase acuosa dos veces mas, con 40 ml de acetato de etilo cada vez. Despues de secar con sulfato de magnesio, separar por filtracion y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con diclorometano/acetato de etilo 3:2 y cloroformo/acetona 3:1. Se obtienen 950 mg (56,5%) de una espuma incolora.
1H-NMR (500 MHz, CDCla): 1,37 (m, 3H); 2,38 (m, 1H); 2,62 (m, 1H); 3,71, 3,72 (s, 3H); 3,75, 3,85 (m, 1H); 4,09 (m, 1H); 4,41 (m, 4H); 6,24, 6,32 (m, 1H); 6,71 (m, 1H); 7,41 (m, 6H); 7,66, 7,70 (s, 1H); 8,88, 8,92 (s, 1H) ppm.
31P-RMN (122 MHz, CDCla): 2,87; 2,74 ppm.
La Figura 3 muestra los resultados de este compuesto segun la invencion en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
1.2.3.3. (E)-5-(2-Bromovinil)-3'-cloro-2',3'-didesoxiuridin-5'-[fenil-(benciloxi-L-alaninil)]-fosfato
Se disuelven en 15 ml de THF 606 mg (2,87 mmol) de diclorofosfato de fenilo y 1.010 mg (2,87 mmol) de 4-metilbencenosulfonato de ester bendlico de L-alanina. Se enfna a -78°C con un bano de hielo seco y, a esta temperatura, se anaden gota a gota 582 mg (5,75 mmol) de trietilamina, que estan disueltos en 5 ml de THF. Al cabo de 35 minutos la adicion gota a gota ha terminado, y se deja calentar poco a poco hasta la temperatura ambiente y se agita en total durante 24 horas. Despues se anaden 505 mg (1,44 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-(E)- bromoviniluridina y se enfna a -78°C con un bano de hielo seco. A la suspension obtenida se anade gota a gota una disolucion de 650 mg (8,0 mmol) de N-metilimidazol en 5 ml de THF. Al cabo de 30 minutos la adicion gota a gota ha terminado y se deja calentar gradualmente hasta la temperatura ambiente. Despues de 48 horas mas la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 25:1). Se vierte la preparacion en una mezcla de 50 ml de tampon de fosfato y 50 ml de acetato de etilo y se extrae la fase acuosa dos veces mas, con 25 ml de acetato de etilo cada vez. Tras secar con sulfato de magnesio, separar por filtracion y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/acetato de etilo 3:2. Se obtienen 520 mg (53,0%) de una espuma incolora.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,25 (2 x d, 3H); 2,58 (m, 2H); 3,92 (m, 1H); 4,26 (m, 3H); 4,67 (m, 1H); 5,08 (m, 2H); 6,25 (m, 2H); 6,88 (2 x d, 1H); 7,18 (m, 3H); 7,36 (m, 8H); 7,81 (2 x s, 1H); 11,87 (2 x d, 1H) ppm.
31P-RMN (122 MHz, DMSO-d6): 4,40; 4,57 ppm.
1.2.3.4. (E)-5-(2-Bromovinil)-3'-bromo-2',3'-didesoxiuridin-5'-[fenil-(metoxi-L-alaninil)]-fosfato
Se disuelven o suspenden en 6 ml de THF 401 mg (1,9 mmol) de diclorofosfato de fenilo y 265 mg (1,9 mmol) de hidrocloruro de ester metflico de L-alanina. Se enfna a -78°C con un bano de hielo seco y, a esta temperatura, se anaden gota a gota 385 mg (3,8 mmol) de trietilamina que estan disueltos en 6 ml de THF. Al cabo de 30 minutos la adicion gota a gota ha terminado, y se deja calentar poco a poco hasta la temperatura ambiente y se agita en total durante 24 horas. Despues se anaden 500 mg (1,26 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-bromo-5-(E)-bromoviniluridina y se enfna a -78°C con un bano de hielo seco. A la suspension obtenida se anade a gota a gota una disolucion de 415 mg (5,05 mmol) de N-metilimidazol en 6 ml de THF. Al cabo de 30 minutos la adicion gota a gota ha terminado y
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se deja calentar gradualmente hasta la temperatura ambiente. Al cabo de 48 horas mas la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/acetato de etilo 1:1). Se vierte la preparacion en una mezcla de 25 ml de tampon de fosfato y 25 ml de acetato de etilo, y se extrae la fase acuosa dos veces mas, con 20 ml de acetato de etilo cada vez. Tras secar con sulfato de magnesio, separar por filtracion y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo 3:2). Se obtienen 386 mg (48,1%) de una espuma incolora.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 1,25 (d, 3H); 2,71 (m, 2H); 3,61 (s, 3H); 3,85 (m, 1H); 4,18 (m, 1H); 4,27 (m, 1H); 4,42 (m, 1H); 4,66 (m, 1H); 6,11 (m, 1H); 6,28 (m, 1H); 6,88 (d, 1H); 7,19 (m, 3H); 7,31 (m, 1H); 7,38 (m, 2H); 7,81 (s, 1H); 11,65 (s, 1H) ppm.
31P-RMN (122 MHz, DMSO-d6): 5,04; 5,11 ppm.
1.2.3.5. [3'-Azido-5-(E)-bromovinil-2',3'-didesoxiuridin]-5'-il-[(metoxi-L-alaninil)-fenil]-fosfato
Se disponen en 7 ml de THF, a -78°C, 600 mg (2,84 mmol, 2 eq.) de diclorofosfato de fenilo y 397 mg (2,84 mmol, 2 eq.) de hidrocloruro de ester metflico de L-alanina. Se disuelven en 7 ml de THF 576 mg (5,69 mmol, 4 eq.) de trietilamina, se anaden gota a gota en el transcurso de 30 minutos y a continuacion se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se enfna la mezcla de reaccion a -78°C y se anaden 509 mg (1,42 mmol) de 3'-azido-2',3'- didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. A la disolucion obtenida se anade gota a gota, en el transcurso de 30 minutos, una disolucion de 700 mg (8,53 mmol, 6 eq.) de N-metilimidazol en 7 ml de THF y a continuacion se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se vierte la preparacion en una mezcla de 25 ml de tampon de fosfato y 25 ml de acetato de etilo y se extrae la fase acuosa dos veces mas con 20 ml de acetato de etilo cada vez. Se seca sobre Na2SO4 la fase organica reunida, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo, 1/1; acetato de etilo) proporciona 250 mg (417 pmol, 29%) de [3'-azido-5-(E)-bromovinil-2',3'-didesoxiuridin]-5'-il-[(metoxi-L-alaninil)-fenil]-fosfato en forma de un solido blanco.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,20 (d, 3H); 1,23* (d, 3H); 2,38-2,47 (m, 4H); 3,57 (s, 3H); 3,59* (s, 3H); 3,80-3,91 (m, 2H); 4,03 (q, 1H); 4,08 (q, 1H); 4,16-4,21 (m, 1H); 4,23-4,29 (m, 3H); 4,45-4,52 (m, 2H); 6,09-6,16 (m, 4H); 6,86-6,89 (m, 2H); 7,16-7,22 (m, 6H); 7,28-7,32 (m, 2H); 7,34-7,38 (m, 4H); 7,82 (s, 2H); 11,65 (s, 1H); 11,66* (s, 1H) ppm. La sustancia consiste en una mezcla de diastereomeros (proporcion aproximada 1,2:1). Las senales marcadas con * se refieren al isomero en defecto.
31P-RMN (122 MHz, DMSO-d6): 5,06; 5,20 ppm
1.2.4. Derivados del acido fosforico de 3'-halogeno-BVDU
1.2.4.1. 3'-Cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-(2-bromoviniluridinil)-5'-il-dietil-fosfato
Se disuelven en 10 ml de THF y 1 ml de piridina 500 mg (1,42 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-(E)- bromoviniluridina. Se enfna a 0°C en un bano de hielo y se anade gota a gota, en el transcurso de 5 minutos, una disolucion de 735 mg (4,3 mmol) de clorofosfato de dietilo. Al cabo de 18 horas se anaden nuevamente 1 ml de piridina y 735 mg de clorofosfato de dietilo y, al cabo de otras 18 horas, la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Se vierte la preparacion en una mezcla de 20 ml de tampon de fosfato y 25 ml de acetato de etilo y se extrae la fase acuosa tres veces mas con 15 ml de acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion mediante repetida cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 15:1). El aceite obtenido solidifica despues de rascar en ciclohexano. Despues de secar se obtienen 510 mg (73,6%) de una espuma incolora.
1H-RMN (300 MHz, CDCla): 1,38 (m, 6H); 2,55 (m, 1H); 2,67 (m, 1H); 4,21 (m, 5H); 4,32 (m, 2H); 4,49 (m, 1H); 6,35 (t, 1H); 6,78, (d, 1H); 7,44 (d, 1H); 7,74 (s, 1H); 8,91 (s, 1H) ppm.
31P-RMN (122 MHz, CDCla): 0,75 ppm.
1.2.4.2. Ciclosaligenil-5'-O-(E)-(2-bromovinil)-3'-cloro-2',3'-didesoxiuridinil-fosfato
Se disuelven en 5 ml de THF 265 mg (2,13 mmol) de alcohol 2-hidroxibendlico, y se enfna a -78°C (acetona/hielo seco). Despues se anaden 327 mg de oxicloruro de fosforo y, finalmente, 5 ml de una disolucion de 431 mg de trietilamina en THF. Al cabo de 20 minutos la adicion ha terminado. Se agita durante 45 minutos mas a -78°C, despues se retira el bano fno y se deja calentar hasta la temperatura ambiente. Se produce una suspension incolora, que se agita durante 2,5 horas a temperatura ambiente.
Despues se enfna nuevamente a -78°C y se anaden 466 mg (5,68 mmol) de N-metilimidazol, disueltos en 2,5 ml de THF. Se disuelven en 10 ml de THF 500 mg (1,42 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina y se anaden gota a gota, en el transcurso de 30 minutos. Se deja calentar gradualmente hasta la temperatura ambiente y se agita durante 18 horas mas a temperatura ambiente. Despues de este tiempo, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 20:1). Se vierte la preparacion en una mezcla de 20 ml de tampon de fosfato
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y 20 ml de MTBE y se extrae varias veces con MTBE, y los extractos reunidos se secan con sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente se obtienen, despues de purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 3: 2), 210 mg (28,5%) de una espuma incolora.
1H-RMN (300 MHz, CDCls): 2,50 (m, 1H); 2,67 (m, 1H); 4,34 (m, 1H); 4,48 (m, 3H); 5,45 (m, 2H); 6,27 (m, 1H); 6,62 (m, 1H); 7,15 (m, 3H); 7,42 (m, 2H); 7,58 (m, 1H); 8,23 (s, 1H) ppm.
31P-RMN (122 MHz, CDCla): -7,84; -7,99 ppm.
I.2.4.3. Fenil-S-pivalofl-2-tioetil-3'-bromo-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridin-5'-il-fosfato
Se disuelven en 80 ml de THF 1,50 g (9,24 mmol) de S-(2-hidroxietil)-tiopivaloato, se enfna a -78°C y se mezcla con 0,95 g (9,44 mmol) de trietilamina. Se disuelven en 5 ml de THF 1,99 g (9,44 mmol) de diclorofosfato de fenilo y se anaden gota a gota, a -78°C. Se agita durante 20 horas y entonces se calienta gradualmente hasta la temperatura ambiente. Despues se filtra, se lava con THF (2 x 10 ml) y se elimina por destilacion el disolvente. Se toma en 50 ml de tetraclorometano el aceite amarillento, se filtra nuevamente y se lava el residuo con tetraclorometano. Despues de eliminar el disolvente, se seca en vacfo el residuo oleoso. Se obtienen 2,55 g de (fenil-S-(2-hidroxietil)- tiopivaloato)-monoclorofosfato como producto bruto, que se utiliza sin purificacion adicional.
Se disuelve en 15 ml de THF el producto bruto antes obtenido (2,55 g) y despues se anaden 1,0 g (2,52 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-bromo-5-(E)-bromoviniluridina. Despues de agitar durante 5 minutos a temperatura ambiente se anaden 1,24 g (15,15 mmol) de N-metilimidazol y se agita durante 3 horas a temperatura ambiente. Despues de esto, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 20:1; diclorometano/acetona 10:1). Se vierte la mezcla de reaccion en una mezcla bifasica de 100 ml de tampon de fosfato y 60 ml de acetato de etilo, y se extrae la fase acuosa dos veces mas con 50 ml de acetato de etilo cada vez. Se lavan con acido cftrico al 5% las fases en acetato de etilo reunidas, despues con disolucion de hidrogenocarbonato de sodio al 5% y finalmente con disolucion saturada de sal comun. Tras secar con sulfato de magnesio, separar por filtracion y eliminar por destilacion el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/acetona 10:1. Se obtienen 920 mg (52,6%) de una espuma de color amarillento claro.
1H-NMR (500 MHz, CDCh): 8,97 (s, 1H); 7,63 y 7,68 (s, 1H); 7,39 (m, 3H); 7,22, (m, 3H); 6,66 (d, 1H); 6,29 (m, 1H); 4,43 (m, 4H); 4,26 (m, 2H); 3,16 (m, 2H); 2,75 (m, 1H); 2,60 (m, 1H); 1,21 y 1,22 (s, 9H) ppm.
31P-RMN (121 MHz, CDCh): -5,67; -5,90 ppm.
1.3. 3'- o 5'-Esteres de aminoacido de BVDU
1.3.1. 5'-O-(N-t-Butiloxicarbonil-£-aminocapron)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 80 ml de DMF, a 0°C, 7,72 g (23,2 mmol) de 5-(E)-bromovinil-2'-desoxiuridina y 9,12 g (34,8 mmol, 1,5 eq.) de trifenilfosfina. Despues se disuelven en 50 ml de DMF 8,04 g (34,8 mmol, 1,5 eq.) de acido N-t-butiloxicarbonil-£-aminocaproico y 7,03 g (34,8 mmol, 1,5 eq.) de azodicarboxilato de diisopropilo, y se anaden gota a gota en el transcurso de 1 hora. A continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 2 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (CHC^MeOH, 95/5, acetato de etilo) proporciona 2,98 g (5,45 mmol, 23%) de 5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-£- aminocapron)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 121-122°C. Se pudieron aislar, como subproducto, 1,05 g (1,92 mmol, 8%) de 3'-O-(N-t-butiloxicarbonil-£-aminocapron)-2'- desoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 204-205°C.
5'-O-(N-t-Butiloxicarbonil-£-aminocaprofl)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina:
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,20-1,26 (m, 2H); 1,31-1,40 (m, 2H); 1,36 (s, 9H); 1,48-1,53 (m, 2H); 2,15-2,26 (m, 2H); 2,28-2,32 (m, 2H); 2,87 (q, 2H); 3,92 (q, 1H); 4,19-4,25 (m, 3H); 5,43 (d, 1H); 6,15 (t, 1H); 6,74 (t, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,77 (s, 1H); 11,62 (s, 1H)ppm.
1.3.2. 3'-O-(-N-t-Butiloxicarbonil-£-aminocapron)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina 3'-O-(N-t-Butiloxicarbonil-£-aminocaprofl)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina:
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,20-1,26 (m, 2H); 1,31-1,40 (m, 2H); 1,36 (s, 9H); 1,47-1,52 (m, 2H); 2,09-2,32 (m, 6H); 2,87 (q, 2H); 3,93-3,97 (m, 2H); 4,10-4,14 (m, 1H); 4,21-4,28 (m, 5H); 5,42 (d, 1H); 5,45 (d, 1H); 6,09-6,12 (m, 1H); 6,18-6,21 (m, 1H); 6,73 (t, 1H); 6,96 (d, 1H); 6,99 (d, 1H); 7,29-7,36 (m, 2H); 7,86 (s, 1H); 8,01 (s, 1H); 11,58 (s, 1H) ppm. Se presenta una mezcla de dos isomeros rotacionales.
1.3.3. Trifluoroacetato de 5'-O-(£-aminocaprofl)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de diclorometano, a 0°C, 300 mg (549 pmol) de 5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-£-aminocapron)-2'-
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desoxi-5-(E)-bromoviniluridina, se anaden 0,4 ml (5,6 mmol) de acido trifluoroacetico y, a continuacion, se agita la mezcla de reaccion durante 2 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se mezcla el producto bruto con 5 ml de eter dietilico y se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se separa por decantacion el disolvente y se mantiene el residuo en un evaporador rotativo durante 1 hora a 40°C. Resultan 300 mg (535 pmol, 98%) de trifluoroacetato de 5'-O-(£-aminocaprofl)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de un solido blanco con un punto de fusion de 169-170°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da): 1,23-1,38 (m, 2H); 1,45-1,58 (m, 4H); 2,12-2,27 (m, 2H); 2,29-2,37 (m, 2H); 2,70-2,80 (m, 2H); 3,89-3,94 (m, 1H); 4,19-4,29 (m, 3H); 5,46 (d, 1H); 6,16 (t, 1H); 6,94 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,69 (s ancho, 3H); 7,77 (s, 1H); 11,62 (s, 1H) ppm.
1.3.4. Trifluoroacetato de 3'-O-(£-aminocaprofl)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de diclorometano, a 0°C, 300 mg (549 pmol) de 5'-O-(N-t-butiloxicarbonil-£-aminocapron)-2'- desoxi-5-(E)-bromoviniluridina, se anaden 0,4 ml (5,6 mmol) de acido trifluoroacetico y a continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 2 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se mezcla el producto bruto con 5 ml de eter dietflico y se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se separa por decantacion el disolvente y se mantiene el residuo en un evaporador rotativo durante 1 hora a 40°C. Resultan 280 mg (500 mmol, 91%) de trifluoroacetato de 3'-O-(£-aminocapron)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de un solido blanco que se descompone a temperaturas por encima de 180°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,21-1,35 (m, 2H); 1,45-1,58 (m, 4H); 2,08-2,38 (m, 6H); 2,70-2,80 (m, 2H); 3,91-3,98 (m, 2H); 4,10-4,32 (m, 6H); 5,41-5,49 (m, 2H); 6,08-6,15 (m, 1H); 6,16-6,23 (t, 1H); 6,95 (d, 1H); 7,00 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,35 (d, 1H); 7,62 (s ancho, 3H); 7,86 (s, 1H); 8,01 (s, 1H); 11,59 (s, 1H) ppm. La sustancia se presenta como mezcla de dos isomeros rotacionales.
1.4. 3'- o 5'-Acetamidoderivados de BVDU
1.4.1. 5'-Acetamido-3'-cloro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
1.4.11. 5'-Acetamido-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 15 ml de DMF, a 0°C, 1,41 g (4,26 mmol) de 5'-amino-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina y se anaden 674 mg (8,52 mmol) de piridina. Se anaden gota a gota 401 mg (5,11 mmol) de cloruro de acetilo en 5 ml de DMF y a continuacion se agita durante 2 horas mas. Se vierte la mezcla de reaccion sobre 50 g de hielo y se ajusta a pH = 7 con acido clorhfdrico concentrado. Se extrae la mezcla tres veces con 100 ml de acetato de etilo cada vez. Se seca con Na2SO4 la fase organica, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (CHCh/MeOH, 9/1) proporciona 870 mg (2,33 mmol, 55%) de 5'-acetamido-2',5'- didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco.
1.4.12. 5'-Acetamido-2',3'-anhidro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 15 ml de DMF 870 mg (2,33 mmol) de 5'-acetamido-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina y se anaden 915 mg (3,49 mmol) de PPh3. A continuacion se disuelven en 5 ml de DMF 705 mg (3,49 mmol) de azodicarboxilato de diisopropilo y se anaden gota a gota. Al cabo de una hora, se vierte la mezcla de reaccion sobre 100 ml de eter dietflico, se filtra con succion el solido resultante y se lava tres veces con 20 ml de eter dietflico. Tras secar resultan 720 mg (2,02 mmol, 87%) de 5'-acetamido-2',3'-anhidro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco.
1.4.13. 5'-Acetamido-3'-cloro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 10 ml de DMF 720 mg (2,02 mmol) de 5'-acetamido-2',3'-anhidro-2',5'-didesoxi-5-(E)- bromoviniluridina y se anaden 467 mg (4,04 mmol) de hidrocloruro de piridina y, a continuacion, se calienta a reflujo durante 2 horas. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (CHCl3/MeOH, 9/1, diclorometano/acetato de etilo 1/2) proporciona 460 mg (1,17 mmol, 58%) de 5'-acetamido-3'- cloro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 163-165°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,83 (s, 3H); 2,47-2,73 (m, 2H); 3,36-3,43 (m, 2H); 4,02 (q, 1H); 4,55 (q, 1H); 6,19 (t, 1H); 6,96 (d, 1H); 7,32 (d, 1H); 7,84 (s, 1H); 8,10 (t, 1H); 11,64 (s, 1H).
1.4.2. 3'-Acetamido-5'-bromo-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
1.4.2.1. 3'-Acetamido-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 40 ml (0,1 M, pH = 7,4) de disolucion tampon de fosfato 1,00 g (2,79 mmol) de 3'-azido-2',3'- didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. Se anaden 638 mg (8,38 mmol) de acido tioacetico y se agita a 60°C durante 30 horas. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (CHCl3/MeOH, 9/1) proporciona 470 mg (1,26 mmol, 45%) de 3'-acetamido-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco.
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1.4.2.2. 3'-Acetamido-5'-O-(metilsulfonil)-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de piridina, a 0°C, 500 mg (1,34 mmol) de 3'-acetamido-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. Se anaden gota a gota 160 mg (1,40 mmol) de cloruro de acido metanosulfonico en 2 ml de THF y, a continuacion, se agita durante 4 horas a temperatura ambiente. Se vierte la mezcla de reaccion sobre hielo, se ajusta a pH = 5 con acido clortndrico concentrado y se extrae tres veces con acetato de etilo. Se lava la fase organica con acido clortndrico diluido y disolucion saturada de NaCl, se seca con Na2SO4 y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Resultan 440 mg (973 pmol, 73%) de 3-acetamido-5-O-(metilsulfonil)-2',3-didesoxi-5-(E)- bromoviniluridina en forma de solido blanco.
1.4.2.3. 3-Acetamido-5-bromo-2',3',5-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de DMF 440 mg (973 pmol) de 3-acetamido-5-O-(metilsulfonil)-2'3-didesoxi-5-(E)- bromoviniluridina. Se anaden 253 mg (2,92 mmol) de LiBr y se calienta la mezcla de reaccion durante 3 horas. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se toma en 20 ml de acetato de etilo la mezcla de reaccion y se lava la fase organica con disolucion de NaCl. Se extrae la fase acuosa tres veces con acetato de etilo. Se lava con disolucion saturada de NaCl la fase organica reunida, se seca con Na2SO4 y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol, 9/1) proporciona 290 mg (663 pmol, 68%) de 3-acetamido-5-bromo-2',3',5-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 178-180°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,84 (s, 3H); 2,15-2,45 (m, 2H); 3,70-3,80 (m, 2H); 3,94 (q, 1H); 4,31 (m, 1H); 6,21 (t, 1H); 6,95 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,87 (s, 1H); 8,30 (t, 1H); 11,63 (s, 1H).
2. Derivados 5'-sustituidos de BVDU y BVRU como compuestos de referencia
2.1. 5'-Halogeno-BVDU
2.1.1. 2',5'-Didesoxi-5'-fluoro-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 50 ml de DMF 3,5 g (7,18 mmol) de 5'-O-metilsulfonil-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina y 9,06 (28,72 mmol) de trishidrato de fluoruro de tetrabutilamonio. Tras anadir 20 g de tamiz molecular (3A) se calienta a 40°C. Al cabo de 4,5 horas, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Se filtra a traves de Celite, se lava despues a fondo con DMF y se elimina DMF por destilacion. Se anade xileno como agente de arrastre. Se disuelve en acetato de etilo el residuo y se lava con acido clortndrico 1 M. Se lava con tampon de fosfato la fase de acetato de etilo y despues con una disolucion saturada de sal comun. Se neutralizan las fases acuosas reunidas y se extraen con acetato de etilo. Se reunen todas las fases de acetato de etilo y se secan sobre sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 15:1). Se obtienen 1,05 g (43,8%) de un solido incoloro de punto de fusion 208°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,18 (m, 2H); 3,93 (m, 1H); 4,27 (m, 1H); 4,60 (m, 2H); 5,45 (d, 1H); 6,18 (d, 1H); 6,92 (d, 1H); 7,28 (d, 1H); 7,74 (s, 1H); 11,60 (s, 1H) ppm.
La Figura 4 muestra los resultados de un compuesto de referencia en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
2.1.2. 3-O-Metil-5-cloro-2',5-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 9 ml de dioxano 0,55 g (1,56 mmol) de 2',5'-didesoxi-5'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina. Se anaden a esto 3 ml de tolueno, 0,03 ml de agua y 0,46 g (8,2 mmol) de hidroxido de potasio. Al cabo de 2 horas se ha formado una suspension fina. Despues se anaden 0,44 g (3,12 mmol) de yodometano. Al cabo de 1 hora se anade la misma cantidad de yodometano y una vez mas despues de una hora adicional. Despues de esto, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Se vierte la preparacion en una mezcla bifasica de 25 ml de acetato de etilo y 25 ml de tampon de fosfato y se extrae con acetato de etilo la fase acuosa. Se secan con sulfato de magnesio las fases organicas reunidas. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 60:1). Se obtienen 430 mg (75,4%) de un solido incoloro de punto de fusion 145°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,30 (m, 2H); 3,31 (s, 3H); 3,86 (m, 2H); 3,99 (m, 1H); 4,11 (m, 1H); 6,12 (m, 1H); 6,90 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,82 (s, 1H); 11,65 (s, 1H) ppm.
2.1.3. 3-O-Metil-5-fluoro-2',5-didesoxi-3-metil-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 40 ml de dioxano 1,24 g (3,7 mmol) de 2',5'-didesoxi-5'-fluoro-5-(E)-bromoviniluridina y se mezclan con 15 ml de tolueno. Despues se anaden 1,12 g (20 mmol) de hidroxido de potasio y 65 pl de agua. Se agita durante 2 horas a temperatura ambiente y se obtiene una suspension fina. Se anaden a ello 1,57 g de yoduro de metilo y, al cabo de 2 horas y de 4 horas de agitacion, nuevamente la misma cantidad de yoduro de metilo. Al cabo de 16 horas de agitacion a temperatura ambiente, la conversion es completa (control mediante CCF con
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cloroformo/metanol 10:1). Se vierte la mezcla de reaccion en 100 ml de disolucion tampon de fosfato y se extrae con acetato de etilo (3 x 50 ml). Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetona 50:1; ciclohexano/acetato de etilo 1:1). Con ciclohexano se precipita de la disolucion concentrada el producto, y se seca. Se obtienen 0,63 g (46,9%) de un solido incoloro de punto de fusion 95°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 2,24 (m, 1H); 2,35 (m, 1H); 3,18 (s, 3H); 3,30 (s, 3H); 4,05 (m, 1H); 4,19 (m, 1H); 4,61 (m, 1H); 4,71 (m, 1H); 6,15 (t, 1H); 6,94 (d, 1H); 7,33 (d, 1H); 7,82 (s, 1H) ppm.
2.1.4. 3'-O-Metil-5'-fluoro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
21.4.1. 5'-O- (4,4'-Dimetoxitritil)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 100 ml de piridina 8,20 g (24,6 mmol) de 2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina. Se anaden a esto 0,75 g (6,15 mmol) de 4-N,N-dimetilaminopiridina y 5,06 g (50 mmol) de trietilamina. Se enfna a 0°C y se anaden dos porciones de 5 g cada una (en total 10,0 g, 29,51 mmol) de cloruro de 4,4-dimetoxitritilo. Se agita durante 30 minutos, se retira el bano refrigerante y se calienta hasta la temperatura ambiente. Al cabo de 22 horas la conversion es completa (control mediante cCf con diclorometano/metanol 15:1). Tras anadir 30 ml de etanol y agitar durante 20 minutos, se elimina piridina por destilacion repetida con tolueno. Se disuelve en acetato de etilo (200 ml) el aceite de color pardo oscuro obtenido y se lava con disolucion de hidrogenocarbonato de potasio al 5%. Se extrae la fase acuosa tres veces mas con acetato de etilo, y se reunen todas las fases de acetato de etilo y se secan con sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por destilacion el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/metanol 35:1 con 1% de trietilamina). Se obtienen 13,57 g (86,8%) de una espuma incolora.
2.1.4.2. 3'-O-Metil-5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven 7,5 g (11,8 mmol) de 5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina en una mezcla de 150 ml de dioxano y 50 ml de tolueno, y se anaden a ello 3,37 g (60 mmol) de hidroxido de potasio y 0,29 ml de agua. Tras agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, se obtiene una suspension fina incolora. Se anaden 6,71 g (47,3 mmol) de yoduro de metilo y se agita durante 1 hora. Despues se anade otra vez la misma cantidad de yoduro de metilo y, transcurridas 2 horas mas, la mitad de la cantidad de yoduro de metilo. Al cabo de 1,5 horas la conversion es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 20:1; cloroformo/metanol 20:1). Se vierte la preparacion en 200 ml de disolucion tampon de fosfato y despues se extrae varias veces con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos y, tras eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/metanol 50:1). Se obtienen 6,32 g (82,5%) de una espuma amarillenta.
2.1.4.3. 3'-O-Metil-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 120 ml de cloroformo 6,32 g (9,72 mmol) de 3'-O-metil-5'-O-(4,4'-dimetoxitritil)-2'-desoxi-5-(E)- bromoviniluridina. Se anaden a esto 60 ml de metanol y, tras enfriar a 0°C, 1,85 g (9,72 mmol) de monohidrato de acido 4-metilsulfonico. Al cabo de 1 hora (control mediante CCF con diclorometano/metanol 15:1) la reaccion ha terminado. Se anaden 2,3 g (23 mmol) de hidrogenocarbonato de potasio, se agita durante 5 minutos y se mezcla con 200 ml de disolucion saturada de sal comun. Se extrae con cloroformo y acetato de etilo, se reunen todos los extractos y se secan con sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por destilacion del disolvente, se efectua extraccion con ciclohexano, filtracion y lavado del residuo con ciclohexano. Tras secar, se obtienen 3,33 g (98,5%) de un solido incoloro.
2.1.4.4. 5'-O-(4-Metilbencenosulfonil)-3'-O-metil-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 30 ml de piridina 3,33 g (9,6 mmol) de 3'-O-metil-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina y se enfna a 0°C la disolucion obtenida. Despues se anaden 2,2 g de cloruro de 4-metilbencenosulfonilo, se agita durante 30 minutos a 0°C y despues se calienta hasta la temperatura ambiente. Transcurridas 7 horas, se anaden otra vez 1,55 g (8,13 mmol) de cloruro de 4-metilbencensulfonilo y se agita durante 20 horas. Entonces la conversion es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 15:1). Se vierte sobre hielo, se agita durante 30 minutos y se acidifica con acido clortudrico 6 M. Tras extraer con acetato de etilo, se lavan los extractos reunidos con acido clortudrico 1 M y despues con tampon de fosfato, y se secan con sulfato de magnesio. Tras eliminar por destilacion el disolvente y purificar por cromatograffa en columna (ciclohexano/acetona 2:1) se obtienen 3,32 g (68,9%) de un solido incoloro.
2.1.4.5. 3'-O-Metil-5'-fluoro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 40 ml de DMF 2,5 g (4,98 mmol) de 5'-O-(4-metilbencenosulfonil)-3'-O-metil-2'-desoxi-5-(E)- bromoviniluridina, y se anaden 6,27 g (20 mmol) de trishidrato de fluoruro de tetra-n-butilamonio y 15 g de tamiz molecular (3 A). Se calienta a 35°C. Al cabo de 1 hora, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con ciclohexano/acetato de etilo 1:1). Se filtra a traves de Celite y se lava de nuevo con DMF. Se elimina DMF mediante separacion por destilacion con xileno, se disuelve en acetato de etilo el residuo y se lava con acido clortudrico 1 M (80 ml). Se extrae con acetato de etilo la fase acuosa y se lavan con disolucion tampon de fosfato todas las fases de acetato de etilo reunidas. Tras secar la fase organica con sulfato de magnesio y eliminar por destilacion el
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disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con ciclohexano/acetato de etilo 1:1. Se obtienen 0,99 g (56,9%) de un solido incoloro de punto de fusion 177°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 2,23 (m, 1H); 2,34 (m, 1H); 3,30 (s, 3H); 4,14 (m, 1H); 4,32 (m, 1H); 4,58 (m, 1H); 4,68 (m, 1H); 6,12 (m, 1H); 6,81 (d, 1H); 7,28 (d, 1H); 7,76 (s, 1H); 11,63 (s, 1H) ppm.
2.2. Esteres de 5'-halogeno-BVDU
2.2.1. 3'-O-Acetil-5'-fluoro-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se suspenden 300 mg (0,9 mmol) de 2',5'-didesoxi-5'-fluoro-5-(E)-bromoviniluridina en una mezcla de 5 ml de diclorometano y 1 ml de piridina, se enfna a 0°C y se mezcla con 190 mg (2,4 mmol) de cloruro de acetilo. Al cabo de 2 horas la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 15:1). Se diluye con 25 ml de acetato de etilo y se lava con 2 x 25 ml de acido clorlffdrico 0,1 M la fase organica. Se lava hasta neutralidad con tampon de fosfato. Tras secar sobre sulfato de magnesio, separar por filtracion y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo 4:1). Tras reprecipitar en eter t-butilmefflico/ciclohexano, se obtienen 90 mg (27%) de un solido incoloro con punto de fusion 81°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,07 (s, 3H); 2,42 (m, 2H); 4,25 (m, 1H); 4,70 (m, 2H); 5,24 (m, 1H); 6,16 (m, 1H); 6,92 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,81 (s, 1H); 11,66 (s, 1H) ppm.
2.2.2. Esteres de aminoacido de 5'-halogeno-BVDU
2.2.2.1. 4-(t-Butoxicarbonil)amino-1-(5'-fluoro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridin-3'-il)-butanoato
Se disuelven en 20 ml de diclorometano 280 mg (1,33 mmol) de acido N-BOC-4-aminobuffrico y 290 mg (2,39 mmol) de 4-dimetilaminopiridina. Se anaden a ello 400 mg (1,19 mmol) de 2',5'-didesoxi-5'-fluoro-5-(E)-bromoviniluridina y 280 mg (1,34 mmol) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida. Al cabo de 2 horas, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 15:1). Se filtra la preparacion y se somete a evaporacion rotativa. Tras disolver en acetato de etilo, se enfna hasta -20°C, se separa por filtracion el precipitado y se lava con una pequena cantidad de acetato de etilo enfriado a -20°C. Se somete a evaporacion rotativa el filtrado y se purifica varias veces por cromatograffa en columna con diclorometano/metanol (30:1). Se obtienen 400 mg (64,1%) de una espuma incolora.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,37 (s, 9H); 1,62 (m, 2H); 2,37 (m, 2H); 2,40 (m, 1H); 2,51 (m, 1H); 2,94 (m, 2H); 4,25 (m, 1H); 4,68 (m, 2H); 5,24 (m, 1H); 6,18 (m, 1H); 6,84 (t, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,28 (d, 1H); 7,83 (s, 1H); 11,66 (s, 1H) ppm.
2.2.2.2. Trifluoroacetato de 4-amonio-1-(5'-fluoro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridin-3'-il)-butanoato
Se disuelven en 5 ml de diclorometano 290 mg (0,56 mmol) del producto de 2.2.2.1. y se mezclan con 5 ml de acido trifluoroacetico. Al cabo de 30 minutos la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 25:1). Tras someter varias veces a evaporacion rotativa con diclorometano, se trata con eter diefflico el residuo y se separa por filtracion el residuo incoloro y se lava con eter diefflico. Tras secar, se obtienen 270 mg (90,6%) de un polvo incoloro con punto de fusion 129°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 11,75 (s, 1H); 7,82 (s, 1H); 7,71 (s (ancho), 3H); 7,29 (d, 1H); 6,91 (d, 1H); 6,18 (m, 1H); 5,27 (m, 1H); 4,74 (m, 1H); 4,67 (m, 1H); 4,24 (m, 1H); 2,83 (m, 2H); 2,44 (m, 3H); 2,37 (m, 1H); 1,80 (m, 2H) ppm.
2.2.2.3. 4-(t-Butoxicarbonil)amino-1-(5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridin-3'-il)-butanoato
Se anaden a 12 ml de diclorometano 500 mg (1,42 mmol) de 5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, 290 mg (1,42 mmol) de acido N-BOC-4-aminobuffrico y 175 mg (1,42 mmol) de 4-dimetilaminopiridina, se enfna a 0°C la suspension obtenida y se anaden despues 423 mg (1,42 mmol) de metoyoduro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3- etilcarbodiimida. Despues de retirar el bano fno, se agita durante 6 horas. Transcurrido este tiempo, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Se elimina por evaporacion rotativa el diclorometano y se toma en acetato de etilo el residuo. Se lava varias veces la fase organica con disolucion saturada de sal comun. Se extraen con acetato de etilo las fases acuosas reunidas. Se reunen todas las fases organicas y se secan con sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/metanol 50:1; ciclohexano/acetato de etilo 1:1). Se obtienen 520 mg (68,2%) de una espuma incolora.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,37 (s, 9H); 1,64 (m, 2H); 2,36 (m, 3H); 2,51 (m, 1H); 2,94 (m, 2H); 3,91 (m, 2H); 4,21 (m, 1H); 5,24 (m, 1H); 6,18 (m, 1H); 6,82 (t, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,87 (s, 1H); 11,67 (s, 1H) ppm.
2.2.2.4. Trifluoroacetato de 4-amonio-1-(5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridin-3'-il)-butanoato
Se disuelven en 4 ml de diclorometano 200 mg (0,372 mmol) de 4-(t-butoxicarbonil)amino-1-(5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-
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(E)-bromoviniluridin-3'-il)-butanoato y se anaden despues 7 ml de acido trifluoroacetico. Al cabo de 30 minutos todo se ha transformado (control mediante CCF con ciclohexano/acetato de etilo 1:1). Tras multiple evaporacion rotativa con diclorometano, se trata el residuo con eter dietflico y se separa por filtracion y se seca el precipitado incoloro. Se obtienen 160 mg (78,0%) de un polvo incoloro con punto de fusion 148°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 11,75 (s, 1H); 7,87 (s, 1H); 7,72 (s, 3H); 7,30 (d, 1H); 6,91 (d, 1H); 6,20 (m, 1H); 5,25 (m, 1H); 4,21 (m, 1H); 3,91 (m, 2H); 2,83 (m, 2H); 2,35 (m, 4H); 1,81 (m, 2H) ppm.
La Figura 5 muestra los resultados de un compuesto de referencia en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
2.2.2.5. 3'-O-(N-t-Butiloxicarbonil-L-valinoft)-5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 20 ml de diclorometano, a 0°C, 1,00 g (2,84 mmol) de 5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. A continuacion se anaden 618 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N-t-butiloxicarbonil-L-valina, 347 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N,N-dimetilaminopiridina y 587 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida, y despues se agita la mezcla de reaccion durante 20 horas a temperatura ambiente. Se separa por filtracion el precipitado resultante y se lava con diclorometano. Se lava el filtrado con disolucion diluida de acido cftrico, disolucion de NaHCO3 y disolucion de NaCl, y a continuacion se seca con Na2SO4. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (CHCh/MeOH, 95/5, acetato de etilo/diclorometano, 3/1) proporciona 1,00 g (1,82 mmol, 64%) de 3'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valinoft)-5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 87-88°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 0,89-0,91 (m, 6H); 1,39 (s, 9H); 2,03 (m, 1H); 2,31 (m, 1H); 2,53 (m, 1H); 3,83 (t, 1H); 3,88-3,91 (m, 2H); 4,12 (m, 1H); 5,28 (m, 1H); 6,22 (t, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,32 (d, 1H); 7,87 (s, 1H); 11,68 (s, 1H) ppm.
2.2.2.6. Trifluoroacetato de 5'-cloro-2',5'-didesoxi-3'-O-L-valinoft-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de diclorometano, a 0°C, 600 mg (1,09 mmol) de 3'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valinoft)-5'-cloro- 2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, se anaden 1,0 ml (14 mmol) de acido trifluoroacetico y a continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 2 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se mezcla con 5 ml de eter dietflico el producto bruto y se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se separa por decantacion el disolvente y se mantiene el residuo en un evaporador rotativo durante 1 hora a 40°C. Resultan 450 mg (797 pmol, 73%) de trifluoroacetato de 5'-cloro-2',5'-didesoxi-3'-O-L-valinoft-5-(E)-bromoviniluridina en forma de un solido blanco con un punto de fusion de 108-109°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 0,97-1,01 (m, 6H); 2,19 (m, 1H); 2,37 (m, 1H); 2,58 (m, 1H); 3,89-3,97 (m, 2H); 4,00 (s ancho, 1H); 4,27 (m, 1H); 5,39 (m, 1H); 6,25 (dd, 1H); 6,92 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,87 (s, 1H); 8,37 (s ancho, 3H); 11,71 (s, 1H) ppm.
2.2.2.7. 3'-O-(N-t-Butiloxicarbonil-L-valil-L-valinoft)-5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 20 ml de diclorometano, a 0°C, 1,00 g (2,84 mmol) de 5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. A continuacion se anaden 900 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valina, 347 mg (2,84 mmol,
1,0 eq.) de N,N-dimetilaminopiridina y 587 mg (2,84 mmol, 1,0 eq.) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida, y despues se agita la mezcla de reaccion durante 24 horas a temperatura ambiente. Se separa por filtracion el precipitado resultante y se lava con diclorometano. Se lava el filtrado con disolucion diluida de acido cftrico, disolucion de NaHCO3 y disolucion de NaCl, y despues se seca con Na2SO4. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo, 3/1) proporciona 850 mg (1,31 mmol, 46%) de 3'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valinoft)-5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 114-116°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 0,83-0,93 (m, 12H); 1,37 (s, 9H); 1,91 (m, 1H); 2,09 (m, 1H); 2,30 (m, 1H); 3,88-3,91 (m, 3H); 4,13-4,22 (m, 2H); 5,27 (m, 1H); 6,20 (m, 1H); 6,70 (m, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,87 (s, 1H); 8,15 (m, 1H); 11,68 (s, 1H) ppm.
2.2.2.8. Trifluoroacetato de 5'-cloro-2',5'-didesoxi-3'-O-(L-valil-L-valinoft)-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de diclorometano, a 0°C, 200 mg (308 pmol) de 3'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valinoft)-5'- cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, se anaden 0,35 ml (4,7 mmol) de acido trifluoroacetico y despues se agita la mezcla de reaccion durante 3 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se mezcla con 5 ml de eter dietflico el producto bruto y se agita durante 1 hora a temperatura ambiente. Se separa por decantacion el disolvente y se mantiene el residuo en un evaporador rotativo durante 1 hora a 40°C. Resultan 180 mg (271 pmol, 88%) de trifluoroacetato de 5'-cloro-2',5'-didesoxi-3'-O-(L-valil-L-valinoft)-5-(E)- bromoviniluridina en forma de un solido blanco con un punto de fusion de 135-136°C.
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2.2.2.9. 5'-Azido-3'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valinofl)-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 20 ml de diclorometano, a 0°C, 1,10 g (3,07 mmol) de 5'-azido-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. A continuacion se anaden 950 mg (3,07 mmol, 1,0 eq.) de N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valina, 375 mg (3,07 mmol,
1,0 eq.) de N,N-dimetilaminopiridina y 634 mg (3,07 mmol, 1,0 eq.) de N,N'-diciclohexilcarbodiimida, y despues se agita la mezcla de reaccion durante 2 dfas a temperatura ambiente. Se separa por filtracion el precipitado resultante y se lava con diclorometano. Se lava el filtrado con disolucion diluida de acido cftrico, disolucion de NaHCO3 y disolucion de NaCl, y a continuacion se seca con Na2SO4. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo, 2/1) proporciona 600 mg (914 pmol, 30%) de 5'-azido-3'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L-valinon)-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 133-135°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 0,83-0,94 (m, 12H); 1,38 (s, 9H); 1,93 (m, 1H); 2,10 (m, 1H); 2,34 (m, 1H); 2,53 (m, 1H); 3,58-3,76 (m, 2H); 3,91 (m, 1H); 4,04-4,24 (m, 2H); 5,24 (m, 1H); 6,22 (m, 1H); 6,72 (m, 1H); 6,94 (d, 1H); 7,32 (d, 1H); 7,92 (s, 1H); 8,14 (m, 1H); 11,70 (s, 1H) ppm. Esta presente una mezcla de dos rotameros en proporcion 1:1, por lo que algunas senales aparecen dos veces.
2.2.2.10. Trifluoroacetato de 5'-azido-2',5'-didesoxi-3'-O-(L-valil-L-valinofl)-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 5 ml de diclorometano, a 0°C, 200 mg (305 pmol) de 5'-azido-3'-O-(N-t-butiloxicarbonil-L-valil-L- valinon)-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, se anaden 0,33 ml (4,47 mmol) de acido trifluoroacetico y a continuacion se agita la mezcla de reaccion durante 4 horas a temperatura ambiente. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se mezcla con 5 ml de eter dietflico el producto bruto y se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se separa por decantacion el disolvente y se mantiene el residuo en un evaporador rotativo durante 1 hora a 40°C. Resultan 160 mg (239 pmol, 78%) de trifluoroacetato de 5'-azido-2',5'-didesoxi-3'-O-(L-valil-L- valinofl)-5-(E)-bromoviniluridina en forma de un solido blanco con un punto de fusion de 122-124°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 0,92-0,99 (m, 12H); 2,09-2,18 (m, 2H); 2,25-2,40 (m, 1H); 2,50-2,62 (m, 1H); 3,56-3,80 (m, 3H); 4,04-4,15 (m, 1H); 4,22-4,29 (m, 1H); 5,25 (m, 1H); 6,20 (m, 1H); 6,92 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,91 (s, 1H); 8,10 (s ancho, 3H); 8,68 (d, 1H); 11,69 (s, 1H) ppm. Se presenta una mezcla de dos rotameros en proporcion 1:2, por lo que algunas senales aparecen dos veces.
2.2.3. Fosforamidatos de 5'-halogeno-BVDU
2.2.3.1. (E)-5-(2-Bromovinil)-5'-cloro-2',5'-didesoxiuridin-3'-[fenil-(metoxi-L-alaninil)]-fosfato
Se disuelven o suspenden en 15 ml de diclorometano 1,55 g (7,35 mmol) de diclorofosfato de fenilo y 1,03 g (7,35 mmol) de hidrocloruro de ester metflico de L-alanina, y se enfna a -78°C. Se disuelve trietilamina (1,52 g (15 mmol)) en 15 ml de diclorometano y se anade gota a gota, a -78°C, en el transcurso de 2 horas. Despues de la adicion gota a gota se calienta hasta la temperatura ambiente y se agita durante 18 horas. Se elimina diclorometano por evaporacion rotativa, se toma el residuo en eter dietflico y se separa por filtracion la parte no disuelta. Despues se elimina eter dietflico y, sin purificacion, se continua el tratamiento del producto bruto oleoso.
Se disuelven en 15 ml de THF 0,57 g (1,62 mmol) de 2',5'-didesoxi-5'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina y el producto bruto anteriormente obtenido, y se enfna la disolucion a -78°C. Se disuelven en 5 ml de THF 0,82 g (10 mmol) de N-metilimidazol y se anaden gota a gota en el transcurso de 20 minutos. Se deja calentar gradualmente hasta la temperatura ambiente y se agita durante 20 horas mas a esta temperatura. Transcurrido este tiempo, la reaccion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Se vierte la preparacion en una mezcla bifasica de tampon de fosfato y acetato de etilo y se extrae varias veces con acetato de etilo la fase acuosa. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos, se filtran y se elimina por evaporacion rotativa el disolvente. Tras purificar por cromatograffa en columna (diclorometano/metanol 30:1; cloroformo/acetona 5:1) se obtienen 0,62 g (64,6%) de una espuma incolora.
1H-NMR (500 MHz, CDCla): 8,56 (s, 1H); 8,55* (s, 1H); 7,66 (s, 1H); 7,63* (s, 1H); 7,35 (m, 3H); 7,22 (m, 3H); 6,68 (d, 1H); 6,66* (d, 1H); 6,30 (m, 1H); 5,11 (m, 1H); 4,50* (m, 1H); 4,37 (m, 1H); 4,02 (m, 1H); 3,91* (m, 2H); 3,83 (m, 2H), 3,76* (s, 3H); 3,73 (s, 3H); 3,71* (m, 1H); 3,63 (m, 1H); 2,65 (m, 1H); 2,58* (m, 1H); 2,25 (m, 1H): 1,40 (d, 3H) ppm.
La sustancia consiste en una mezcla de diastereomeros (proporcion aproximada 1,2:1). Las senales de RMN marcadas con un * se refieren al diastereomero que esta presente en menor proporcion.
31P-RMN (202 MHz, CDCla); 2,31; 1,61 ppm
La Figura 6 muestra los resultados de un compuesto de referencia en combinacion con mitomicina C (MMC),
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comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
2.2.3.2. [5-(E)-Bromovinil-5'-fluoro-2',5'-didesoxiuridin]-3'-il-(metoxi-L-alaninil)-fenil-fosfato
Se disponen en 7 ml de THF, a -78°C, 600 mg (2,84 mmol, 2 eq.) de diclorofosfato de fenilo y 397 mg (2,84 mmol, 2 eq.) de hidrocloruro de ester metilico de L-alanina. Se disuelven en 7 ml de THF 576 mg (5,69 mol, 4 eq.) de trietilamina, se anaden gota a gota en el transcurso de 30 minutos y despues se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se enfna a -78°C la mezcla de reaccion y se anaden 477 mg (1,42 mmol) de 2',5'-didesoxi-5'- fluoro-5-(E)-bromoviniluridina. A la suspension obtenida se anade a gota a gota, en el transcurso de 30 minutos, una disolucion de 700 mg (8,53 mmol, 6 eq.) de N-metilimidazol en 7 ml de THF, y despues se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se vierte la preparacion en una mezcla de 25 ml de tampon de fosfato y 25 ml de acetato de etilo y se extrae dos veces la fase acuosa, con 20 ml de acetato de etilo cada vez. Se seca sobre Na2SO4 la fase organica combinada, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo, 1/1; acetato de etilo) proporciona 310 mg (523 pmol, 37%) de [5-(E)- bromovinil-5'-fluoro-2',5'-didesoxiuridin]-3'-il-[(metoxi-L-alaninil)-fenil]-fosfato en forma de solido blanco.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,22 (d, 3H); 1,25* (d, 3H); 2,40-2,59 (m, 4H); 3,61 (s, 3H); 3,62 (s, 3H); 3,81-3,98 (m, 2H); 4,19-4,35 (m, 2H); 4,52-4,82 (m, 4H); 5,00-5,12 (m, 2H); 6,13-6,26 (m, 4H); 6,89* (d, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,16-7,43 (m, 12H); 7,79* (s, 1H); 7,80 (s, 1H), 11,67* (s, 1H); 11,68 (s, 1H)ppm.
La sustancia consiste en una mezcla de diastereomeros (proporcion aproximada 1,2:1). Las senales designadas con
* se refieren al isomero en defecto.
31P-RMN (122 MHz, DMSO-d6): 3,91; 4,54 ppm.
2.2.3.3. [5'-Azido-5-(E)-bromovinil-2',5'-didesoxiuridina]-3'-il-(metoxi-L-
Se disponen en 7 ml de THF, a -78°C, 600 mg (2,84 mmol, 2 eq.) de diclorofosfato de fenilo y 397 mg (2,84 mmol, 2 eq.) de hidrocloruro de ester metflico de L-alanina. Se disuelven en 7 ml de THF 576 mg (5,69 mmol, 4 eq.) de trietilamina, se anaden gota a gota en el transcurso de 30 minutos, y despues se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se enfna a -78°C la mezcla de reaccion y se anaden 509 mg (1,42 mmol) de 5'-azido-2',5'- didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. A la suspension obtenida se anade gota a gota, en el transcurso de 30 minutos, una disolucion de 700 mg (8,53 mmol, 6 eq.) de N-metilimidazol en 7 ml de THF, y a continuacion se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Se vierte la preparacion en una mezcla de 25 ml de tampon de fosfato y 25 ml de acetato de etilo y se extrae la fase acuosa dos veces mas, con 20 ml de acetato de etilo cada vez. Se seca sobre Na2SO4 la fase organica reunida, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo, 1/1; acetato de etilo) proporciona 160 mg (267 pmol, 19%) de [5'-azido-5-(E)-bromovinil-2',5'-didesoxiuridin]-3'-il-[(metoxi-L-alaninil)-fenil]-fosfato en forma de solido blanco.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,22 (d, 3H); 1,25* (d, 3H); 2,35-2,58 (m, 4H); 3,57-3,70 (m, 4H); 3,62 (s, 6H); 3,87-3,92 (m, 2H); 4,13-4,18 (m, 2H); 4,94-4,99* (m, 1H); 5,00-5,05 (m, 1H); 6,14-6,22 (m, 4H); 6,90* (d, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,16-7,24 (m, 6H); 7,28-7,32 (m, 2H); 7,36-7,42 (m, 4H), 7,88* (s, 1H); 7,89 (s, 1H); 11,69 (s, 2H) ppm.
La sustancia consiste en una mezcla de diastereomeros (proporcion aproximada 1,5:1). Las senales designadas con
* se refieren al isomero en defecto.
31P-RMN (122 MHz, DMSO-d6): 3,93; 4,54 ppm.
2.3. 5'-Bromo-5'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
2.3.1. 2',3'-O-Isopropiliden-5-(E)-bromoviniluridina
Se suspenden en 15 ml de acetona 1,0 g (2,86 mmol) de 5-(E)-bromoviniluridina. Se anaden a ello 3,13 g (30 mmol) de 2,2-dimetoxipropano y 0,05 g de acido p-toluensulfonico. Al cabo de 2 horas la reaccion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 20:1). Se anaden 0,50 g de hidrogenocarbonato de potasio, 20 ml de agua y 25 ml de acetato de etilo, se separan las fases y se extrae varias veces con acetato de etilo la acuosa. Se secan con sulfato de magnesio las fases organicas reunidas. Despues de separar por filtracion el agente desecante y eliminar por destilacion el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 30:1. Se obtienen 0,57 g (51,2%) de una espuma incolora.
2.3.2. 2',3'-O-Isopropiliden-5'-bromo-5'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 12 ml de piridina 0,57 g (1,46 mmol) de 2',3'-O-isopropiliden-5-(E)-bromoviniluridina y 0,81 g (3,1 mmol) de trifenilfosfina. A ello se anade gota a gota una disolucion de 0,92 g (2,77 mmol) de tetrabromometano en 8 ml de piridina. Al cabo de 90 minutos la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 30:1). Se elimina piridina por destilacion con acetato de etilo y se purifica el residuo por cromatograffa en columna con diclorometano/acetato de etilo 12:1. Se obtienen 380 mg (57,7%) de una espuma incolora.
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2.3.3. 5'-Bromo-5'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 5 ml de acido trifluoroacetico y 1 ml de agua 0,38 g (0,84 mmol) de 2',3'-O-isopropiliden-5'-bromo-5'- desoxi-5-(E)-bromoviniluridina, y se agita durante 30 minutes a temperatura ambiente. Transcurrido este tiempo, la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 30:1). Se concentra a sequedad por evaporacion, se toma varias veces en metanol y se evapora de nuevo. Tras purificar por cromatograffa en columna se obtienen 0,25 g (72,2%) de un solido incoloro con punto de fusion 201°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 3,71 (m, 1H); 3,81 (m, 1H); 3,99 (m, 2H); 4,19 (m, 1H); 5,41 (d, 1H); 5,55 (d, 1H); 5,82 (d, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,81 (s, 1H); 11,68 (s, 1H) ppm.
2.4. 5'- o 3'-Fosforamiditas de BVDU
2.4.1. [5-(E)-Bromovinil-5'-metoxi-2'-desoxiuridin]-3'-il-(2-cianoetil)-diisopropilfosforamidita
24.1.1. 3'-O-(t-Butildimetilsilil)-5'-metoxi-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 17 ml de dioxano y 6 ml de tolueno 1,33 g (2,97 mmol) de 3'-O-(t-butildimetilsilil)-2'-desoxi-5-(E)- bromoviniluridina, y se anaden 0,88 g (15,6 mmol) de KOH y 60 pl (3,3 mmol) de agua. Se agita la mezcla de reaccion durante 2^ horas a temperatura ambiente y despues se anaden 0,85 g (6,0 mmol) de Mel. Tras agitar durante 3 horas mas, se anaden 120 ml de disolucion tampon de fosfato (pH = 7) y se extrae la mezcla tres veces con 50 ml de acetato de etilo. Se seca sobre MgSO4 la fase organica combinada, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 100/1) proporciona 1,04 g (2,25 mmol, 76%) de 3'-O-(t-butildimetilsilil)-5'-metoxi-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco.
2.4.1.2. 2'-Desoxi-5'-metoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 25 ml de THF 26,2 g (5,68 mmol) de 3'-O-(t-butildimetilsilil-5'-metoxi-2'-desoxi-5-(E)- bromoviniluridina y se anaden, gota a gota, 2,69 g (8,52 mmol) de fluoruro de tetrabutilamonio en 25 ml de THF. Se agita la mezcla de reaccion durante 4 horas a temperatura ambiente y a continuacion se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 25/1) proporciona 1,73 g (4,98 mmol, 88%) de 2'-desoxi-5'-metoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco.
2.4.1.3. [5-(E)-Bromovinil-5'-metoxi-2'-desoxiuridin]-3'-il-(2-cianoetil)-diisopropilfosforamidita
Se disuelven en 5 ml de diclorometano 200 mg (574 pmol) de 2'-desoxi-5'-metoxi-5-(E)-bromoviniluridina y se anaden 200 pl (1,15 mmol) de diisopropiletilamina. Se enfna a 0°C la mezcla de reaccion y despues se anaden 192 pl (861 pmol) de 2-cianoetil-diisopropilclorofosforamidita. Al cabo de 3 horas a 0°C se elimina en un evaporador rotativo el disolvente, se toma el residuo en 50 ml de disolucion de NaHCO3 y se extrae tres veces con 50 ml de acetato de etilo. Se lava con 50 ml de disolucion saturada de NaCl la fase organica combinada, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 9/1, ciclohexano/acetato de etilo 1/1) proporciona 130 mg (237 pmol, 41%) de [5-(E)-bromovinil- 5'-metoxi-2'-desoxiuridin]-3'-il-(2-cianoetil)diisopropilfosforamidita en forma de solido blanco.
1H-RMN (300 MHz, CDCla): 1,19 (d, 12H); 2,17-2,24 (m, 1H); 2,41-2,58 (m, 1H); 2,64 (t, 2H); 3,46-3,47 (2 x s, 3H); 3,55-3,91 (m, 6H); 4,16-4,23 (m, 1H); 4,57-4,61 (m, 1H); 6,30-6,36 (m, 1H); 6,63 (d, 1H); 7,33 (d, 1H); 7,92-7,94 (2 x s, 1H); 8,23 (s ancho, 1H) ppm.
La sustancia consiste en una mezcla de diastereomeros (proporcion aproximada 1:1).
31P-RMN (122 MHz, CDCla): 149,45; 149,51 ppm.
2.4.2. [5-(E)-Bromovinil-3'-metoxi-2'-desoxiuridin]-5'-il-(2-cianoetil)-diisopropilfosforamidita
Se disuelven en 5 ml de diclorometano 200 mg (574 pmol) de 2'-desoxi-3'-metoxi-5-(E)-bromoviniluridina y se anaden 200 pl (1,15 mmol) de diisopropiletilamina. Se enfna a 0°C la mezcla de reaccion y despues se anaden 192 pl (861 pmol) de 2-cianoetil-diisopropilclorofosforamidita. Al cabo de 2 horas a 0°C se elimina en un evaporador rotativo el disolvente, se toma el residuo en 50 ml de disolucion de NaHCO3 y se extrae tres veces con 50 ml de acetato de etilo. Se lava con 50 ml de disolucion saturada de NaCl la fase organica reunida, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 9/1, diclorometano/acetato de etilo 1/1) proporciona 120 mg (219 pmol, 38%) de [5-(E)- bromovinil-3'-metoxi-2'-desoxiuridin]-5'-il-(2-cianoetil)-diisopropilfosforamidita en forma de solido blanco.
1H-RMN (300 MHz, CDCls): 1,17-1,26 (m, 12H); 1,96-2,17 (m, 1H); 2,45-2,57 (m, 1H); 2,65-2,74 (m, 2H); 3,35-3,37 (2 x s, 3H); 3,55-3,65 (m, 2H); 3,81-4,09 (m, 5H); 4,17-4,25 (2 x m, 1H); 6,20-6,34 (2 x m, 1H); 6,74-6,83 (2 x d, 1H); 7,40-7,42 (2 x d, 1H); 7,85, 8,10 (2 x s, 1H); 8,03 (s ancho, 1H) ppm.
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La sustancia consiste en una mezcla de diastereomeros (proporcion aproximada 1:1).
31P-RMN (122 MHz, CDCla): 150,02; 150,48 ppm.
3. 3',5'-Dihalogenoderivados de BVDU
3.1. 3',5'-Difluoro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
3.1.1. 5'-O-Tritil-2,3'-anhidro-2'-desoxi-5-etiluridina
Se disuelven en 170 ml de THF 17,84 g (35,78 mmol) de 5'-O-tritil-2'-desoxi-5-etil-uridina y 14,08 g (53,67 mmol) de trifenilfosfina. Se anade gota a gota a esta disolucion, en el transcurso de 40 minutos, una disolucion de 10,85 g (53,67 mmol) de azodicarboxilato de diisopropilo en 120 ml de THF. Tras agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Despues de concentrar por evaporacion rotativa se obtienen, tras purificar por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 10:1), 13,00 g (75,6%) de una espuma incolora.
3.1.2. 1-(5-O-Tritil-2-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-etil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona
Se calientan a ebullicion durante 90 minutos 14,24 g (29,63 mmol) de 5-O-tritil-2,3'-anhidro-2-desoxi-5-etil-uridina en una mezcla de 500 ml de etanol y 140 ml de agua, con 3,03 g (75,85 mmol) de hidroxido de sodio. Transcurrido este tiempo, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Se concentra por evaporacion rotativa la disolucion, se trata con tampon de fosfato y acetato de etilo, y se separan las fases. Se extrae varias veces con acetato de etilo la fase acuosa. Se secan con sulfato de magnesio las fases de acetato de etilo reunidas. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se seca el producto obtenido y se obtienen 13,25 g (90,4%) de un solido incoloro.
3.1.3. 5'-O-Tritil-3'-fluoro-2',3'-didesoxi-5-etiluridina
Se disuelven en 130 ml de diclorometano 7,73 g (15,51 mmol) de 1-(5'-O-tritil-2-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5- etil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona y, a 0°C, se anade gota a gota, en el transcurso de 30 minutos, una disolucion de
5,0 g (31,02 mmol) de dietilaminosulfotrifluoruro (DAST). Despues de agitar durante 1 hora a 0°C, la conversion es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 20:1). Se vierte la preparacion en disolucion de hidrogenocarbonato de sodio (al 5%) enfriada con hielo, se separan las fases y se extrae la fase acuosa dos veces mas, con 50 ml de diclorometano cada vez. Se secan con sulfato de magnesio las fases organicas reunidas y, tras filtrar y someter a evaporacion rotativa, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo 5:1). Se obtienen 5,17 g (66,6%) de una espuma incolora.
3.1.4. 3'-Fluoro-2',3'-didesoxi-5-etiluridina
Se disuelven en 70 ml de acido acetico 4,69 g (9,37 mmol) de 5'-O-tritil-3'-fluoro-2',3'-didesoxi-5-etiluridina y se anaden lentamente 18 ml de agua. Se calienta durante 20 minutos a 90°C, tras de lo cual la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 15:1). Se pone la preparacion en un bano de hielo durante 1 hora, se filtra, y se lava con acido acetico al 80% el residuo. Se diluye con 400 ml de agua el filtrado y se extrae varias veces con acetato de etilo. Se lavan con disolucion saturada de sal comun los extractos reunidos y se secan con sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 15:1). Se obtienen 1,33 g (55,0%) de un solido incoloro.
3.1.5. 5-O-Metilsulfonil-3-fluoro-2',3-didesoxi-5-etiluridina
Se disuelven en 8 ml de piridina 1,33 g (5,15 mmol) de 3'-fluoro-2',3'-didesoxi-5-etil-uridina y a ello se anade gota a gota, a 0°C y en el transcurso de 20 minutos, una disolucion de 1,78 g (15,5 mmol) de cloruro de metilsulfonilo en 2,5 ml de THF. Se deja calentar hasta la temperatura ambiente. Despues de esto, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Se vierte en agua de hielo la preparacion y se agita durante 15 minutos. Despues de acidificar (pH aproximadamente 1,5) se extrae con acetato de etilo, y se lavan con tampon de fosfato los extractos reunidos. Tras secar con sulfato de magnesio, filtrar y eliminar por destilacion el disolvente, se obtienen 1,68 g (97,1%) de una espuma incolora.
3.1.6. 3',5'-Difluoro-2',3',5'-tridesoxi-5-etil-uridina
Se disuelven en 30 ml de DMF 1,68 g (4,99 mmol) de 5-O-metilsulfonil-3-fluoro-2',3-didesoxi-5-etiluridina y 6,30 g (20,00 mmol) de trishidrato de fluoruro de tetrabutilamonio, y se anaden 20 g tamiz molecular (3A). Tras calentar durante 1,5 horas a 40°C, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 20:1). Se elimina DMF con xileno y se disuelve en acetato de etilo el residuo. Se lava con acido clortudrico 1 M y tampon de fosfato la fase de acetato de etilo. Se neutralizan las fases acuosas reunidas y se extraen con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio todas las fases de acetato de etilo reunidas y, despues de filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se purifica varias veces por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 30:1; cloroformo/acetato de etilo 3:1). Se obtienen 0,52 g (40,0%) de un solido incoloro.
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3.1.7. 3',5'-Difluoro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven 520 mg (1,99 mmol) de 3',5'-difluoro-2',3',5'-tridesoxi-5-etil-uridina en 15 ml de cloroformo y se calienta a ebullicion. Se anaden 10 mg de azo-bis-isobutironitrilo (AIBN), y se anade gota a gota una disolucion de 702 mg de bromo en 2 ml de cloroformo. Durante la adicion gota a gota, se irradia con una lampara de 500 W. Al cabo de 40 minutos se ha anadido todo el bromo, y se calienta a reflujo durante 1 hora mas. Despues de enfriar, se hace pasar argon a traves de la disolucion y se anaden 304 mg de trietilamina. Tras agitar durante 1,5 horas a temperatura ambiente, se extrae por agitacion con tampon de fosfato y se extrae de nuevo la fase acuosa varias veces con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio las fases organicas reunidas. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion multiple por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 25:1; cloroformo/acetato de etilo 5:1) y posterior recristalizacion en etanol y metanol/agua. Se obtienen 211 mg (31,3%) de un solido incoloro con punto de fusion 177-180°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 2,38 (m, 2H); 4,43 (m, 1H); 4,69 (m, 2H); 5,42 (m, 1H); 6,19 (m, 1H); 6,89 (d, 1H);
7,29 (d, 1H); 7,79 (s, 1H); 11,69 (s, 1H) ppm.
La Figura 7 muestra los resultados de este compuesto segun la invencion en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
3.2. 3'-Fluoro-5'-cloro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 7 ml de DMF 190 mg (0,57 mmol) de 3'-fluoro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina y 200 mg (0,76 mmol) de trifenilfosfina. y se anaden a ello 440 mg (2,83 mmol) de tetraclorometano. Tras agitar durante 18 horas a temperatura ambiente se anaden 100 mg (0,38 mmol) de trifenilfosfina y 220 mg (1,42 mmol) de tetraclorometano. Al cabo de 22 horas la reaccion es completa (control mediante CCF con diclorometano/acetato de etilo 4:1). Se elimina DMF por destilacion con xileno y se purifica el residuo por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo 5:1). Se obtienen 60 mg (30%) de un solido cristalino con punto de fusion 203°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,36 (m, 2H); 3,88 (m, 2H); 4,36 (m, 1H); 5,35 (d, 1H); 6,21 (m, 1H); 6,89 (d, 1H); 7,28 (d, 1H); 7,85 (s, 1H); 11,69 (s, 1H) ppm.
3.3. 3',5'-Dicloro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 10 ml de DMF 0,70 g (2,0 mmol) de 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina y 0,70 g (2,7 mmol) de trifenilfosfina, y se anaden a ello 1,59 g (10,0 mmol) de tetraclorometano. Tras agitar durante 24 horas a temperatura ambiente, la reaccion es completa (control mediante CCF con diclorometano/acetato de etilo 4:1). Se elimina DMF por destilacion con xileno y se purifica el residuo por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo 4:1). Tras recristalizar en n-hexano/acetato de etilo se obtienen 180 mg (24,3%) de un solido cristalino con punto de fusion 184°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,59 (m, 1H); 2,76 (m, 1H); 3,94 (m, 2H); 4,27 (m, 1H); 4,71 (m, 1H); 6,26 (m, 1H); 6,90 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,81 (s, 1H); 11,67 (s, 1H) ppm.
3.4. 3'-Azido-5'-fluoro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
3.4.1. 2',3'-Didesoxi-3'-azido-5'-O-(4-metilfenilsulfonil)-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 20 ml de piridina, a 0°C, 2,54 g (7,09 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-azido-5-(E)-bromoviniluridina, y a ello se anaden 2,56 g (13,42 mmol) de cloruro de 4-metil-fenilsulfonilo. Se deja calentar hasta la temperatura ambiente y se agita durante 20 horas. Al cabo de este tiempo, la reaccion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 20:1). Se vierte la preparacion en 80 ml de agua de hielo y se acidifica con acido clorhudrico 6 M. Se extrae con acetato de etilo y se lavan con disolucion saturada de sal comun los extractos reunidos y se secan con sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, el rendimiento asciende a 3,32 g (91,5%) de una espuma incolora.
3.4.2. 3'-Azido-5'-fluoro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 50 ml de DMF 3,32 g (6,48 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-azido-5'-O-(4-metilfenilsulfonil)-5-(E)- bromoviniluridina, y se anaden a ello 20 g de tamiz molecular (3A) y 8,17 g de trishidrato de fluoruro de tetrabutilamonio. Tras calentar durante 6 horas a 40°C, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con ciclohexano/acetato de etilo 1:1). Se elimina DMF con xileno y se disuelve en acetato de etilo el residuo pardo oleoso y se lava con 100 ml de acido clorhfdrico 1 M, dos veces con 50 ml de tampon de fosfato cada vez, y con disolucion saturada de sal comun. Se reunen las fases acuosas, se neutralizan y se extraen con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio todas las fases organicas reunidas. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo 5:1; ciclohexano/acetato de etilo 1,2:1). Se obtienen 0,72 g (19,2%) de un solido incoloro con un punto de fusion de 135°C.
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3.5. 3'-Cloro-5'-bromo-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
3.5.1. 2',3'-Didesoxi-3'-cloro-5'-O-metilsulfonil-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 5 ml de THF/piridina (1:1) 1,0 g (2,84 mmol) de 3'-cloro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina y, a 0°C, se anaden gota a gota 1,10 g (9,6 mmol) de cloruro de metilsulfonilo, disueltos en 5 ml de THF. Se deja calentar hasta la temperatura ambiente y se agita en total durante 20 horas. Transcurrido este tiempo, la conversion es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 15:1). Se vierte la preparacion en agua de hielo y se agita durante 15 minutos. Se acidifica con acido clortndrico 2 M y se extrae con acetato de etilo el aceite que precipita. Se lavan con tampon de fosfato las fases de acetato de etilo reunidas y se secan con sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por destilacion el disolvente se obtienen 1,22 g (rendimiento cuantitativo) de una espuma incolora.
3.5.2. 3-Cloro-5-bromo-2',3',5-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se calientan durante 3 horas 510 mg (1,18 mmol) de 3'-cloro-5'-O-(metilsulfonil)-5-(E)-bromoviniluridina con 515 mg (6 mmol) de bromuro de litio. Transcurrido este tiempo, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 25:1). Se elimina DMF por destilacion con xileno y se purifica el residuo por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 60:1, diclorometano/metanol 40:1 y ciclohexano/acetato de etilo 1,2:1. Se obtienen 240 mg (49,1%) de un solido incoloro de punto de fusion 149°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,52 (m, 1H); 2,76 (m, 1H); 3,73 (m, 1H); 3,81 (m, 1H); 4,27 (m, 1H); 4,68 (m, 1H); 6,27 (m, 1H); 6,90 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,82 (s, 1H); 11,67 (s, 1H) ppm.
3.5.3. 5-Azido-3-cloro-2',3',5-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se calientan en 20 ml DMF, durante 1 hora, 3,50 g (8,15 mmol) de 3-cloro-5'-O-(metilsulfonil)-2',3-didesoxi-5-(E)- bromoviniluridina con 1,20 g (24,4 mmol, 3,0 eq.) de azida de litio. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol, 12/1) proporciona 2,12 g (5,63 mmol, 69%) de 5-azido-3-cloro-2',3',5-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 58-60°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,58 (m, 1H); 2,75 (m, 1H); 3,60 (m, 1H); 3,71 (m, 1H); 4,19 (m, 1H); 4,71 (m, 1H); 6,25 (dd, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,86 (s, 1H); 11,69 (s, 1H) ppm.
3.5.4. 3-Azido-5-cloro-2',3',5-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
3.5.4.1. 5-Cloro-3-O-(metilsulfonil)-2',5-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 10 ml de piridina, a 0°C, 1,00 g (2,84 mmol) de 5'-cloro-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina. Se anaden gota a gota 0,34 g (2,99 mmol) de cloruro de acido metanosulfonico en 5 ml de THF, y a continuacion se agita durante 4 horas a temperatura ambiente. Se vierte la mezcla de reaccion sobre hielo, se ajusta a pH = 5 con acido clortndrico concentrado y se extrae tres veces con acetato de etilo. Se lava con acido clortndrico diluido y disolucion saturada de NaCl la fase organica, se seca con Na2SO4 y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Resultan 1,03 g (2,40 mmol, 84%) de 5-cloro-3-O-(metilsulfonil)-2',5-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco.
3.5.4.2. 2,3'-Anhidro-2'-desoxi-5'-cloro-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 10 ml de THF 800 mg (1,86 mmol) de 5-cloro-3'-O-(metilsulfonil)-2',5-didesoxi-5-(E)- bromoviniluridina. Se anaden 340 mg (2,23 mmol) de 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) y se calienta a reflujo durante 4 horas. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol, 9/1) proporciona 470 mg (1,41 mmol, 76%) de 2,3'-anhidro-2'-desoxi-5'-cloro-5-(E)- bromoviniluridina en forma de solido blanco.
3.5.4.3. 3'-Azido-5'-cloro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disponen en 10 ml de DMF 470 mg (1,41 mmol) de 2,3'-anhidro-5'-cloro-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina. Se anaden 345 mg (7,05 mmol) de LiN3 y se calienta la mezcla de reaccion durante 20 horas. Se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se toma la mezcla de reaccion en 50 ml de acetato de etilo y se lava con disolucion de NaCl la fase organica. Se extrae tres veces con acetato de etilo la fase acuosa. Se lava con disolucion saturada de NaCl la fase organica reunida, se seca con Na2SO4 y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 9/1) proporciona 370 mg (982 pmol, 70%) de 3-azido-5-cloro-2',3',5-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en forma de solido blanco con un punto de fusion de 124-125°C.
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50
3.6. 3',5'-Dibromo-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 15 ml de piridina 0,52 g (1,31 mmol) de 2',3'-didesoxi-3'-bromo-5-(E)-bromoviniluridina, y a ello se anaden 0,69 g (2,62 mmol) de trifenilfosfina. A esta disolucion se anade gota a gota, en el transcurso de 10 minutos, una disolucion de 0,79 mg (2,36 mmol) de tetrabromometano en 5 ml de piridina. Al cabo de 1 hora, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 20:1). Se vierte sobre hielo y se acidifica con acido clorhudrico del 37%. Siguen extraccion con acetato de etilo (3 * 40 ml), lavado de las fases de acetato de etilo reunidas con acido clorhudrico 1M y con disolucion saturada de sal comun. Tras secar con sulfato de magnesio y filtrar, se purifica la sustancia bruta por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo 4:1) y se reprecipita en ciclohexano/acetato de etilo. Tras secar, se obtienen 0,21 g (35,0%) de un solido incoloro de punto de fusion 153°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,68 (m, 1H); 2,81 (m, 1H); 3,74 (m, 1H); 3,82 (m, 1H); 4,38 (m, 1H); 4,65 (m, 1H); 6,27 (m, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,82 (s, 1H); 11,66 (s, 1H) ppm.
La Figura 8 muestra los resultados de este compuesto segun la invencion en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
4. 2',3'-Dideshidro-2',3',5'-tridesoxi-5'-bromo-5-(E)-bromoviniluridina como compuesto de referencia
4.1. 2',3'-Dideshidro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
4.1.1. 1-(2'-Desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4(1H,3H)-pirimidindiona
Se suspenden en 400 ml de etanol 20,07 g (47,87 mmol) de 2,3'-anhidro-2'-desoxi-5'-O-benzofl-5-(E)- bromoviniluridina y se mezclan con una disolucion de 4,78 g (120 mmol) de hidroxido de sodio en 95 ml de agua. Se calienta a ebullicion durante 2,5 horas, transcurridas las cuales la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 10:1). Tras neutralizar con acido clorhudrico, se elimina el disolvente por destilacion a sequedad y se extrae varias veces el residuo con mezcla de acetona/acetato de etilo (1:1). Se obtienen 13,5 g (84,6%) de producto.
4.1.2. 5'-O-Benzofl-1-(2'-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4(1H,3H)-pirimidindiona
Se disuelven en 125 ml de piridina 5,0 g (15,00 mmol) de 1-(2'-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)- 2,4(1H,3H)-pirimidindiona y se enfna a 0°C. Se anade a ello, gota a gota y a esta temperatura, una disolucion de 2,53 g (18,0 mmol) de cloruro de benzoflo en 30 ml de piridina. Transcurridos 60 minutos, la adicion gota a gota ha terminado. Se agita durante 60 minutos mas a 0°C. Despues de esto, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 20:1). Se vierte la preparacion en 400 ml de agua con hielo, se extrae con 4 x100 ml de acetato de etilo, y se lavan los extractos reunidos con hidrogenocarbonato de potasio al 5% y disolucion saturada de sal comun. Tras secar con sulfato de magnesio, separar por filtracion y eliminar por destilacion el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 20:1). Se obtienen 5,52 g (84,1%) de un solido incoloro.
4.1.3. 3'-O-(Metilsulfonil)-5'-O-benzofl-1-(2'-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4(1H,3H)- pirimidindiona
Se disuelven en 15 ml de piridina 3,50 g (8,00 mmol) de 5'-O-benzofl-1-(2'-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2- bromovinil)-2,4(1H,3H)-pirimidindiona y se mezclan, a 0°C, con 1,14 g (10,00 mmol) de cloruro de acido metanosulfonico. Al cabo de 18 horas la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 12:1). Despues se vierte sobre hielo la preparacion y se deja reposar durante 20 minutos. Se acidifica con acido clorhudrico 6 M y se extrae con acetato de etilo (3 x 50 ml). Se lavan hasta neutralidad los extractos reunidos y se secan con sulfato de magnesio. Despues de separar por filtracion y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se obtienen 3,95 g (95,8%) de una espuma amarillenta.
4.1.4. 5'-O-Benzofl-2',3'-dideshidro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 120 ml de THF 3,38 (6,56 mmol) de 3'-O-(metilsulfonil)-5'-O-benzofl-1-(2'-desoxi-p-D-treo- pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4(1H,3H)-pirimidindiona. Se anaden a ello 6,20 g (19,68 mmol) de trishidrato de fluoruro de tetra-n-butilamonio y 25,0 g de tamiz molecular (3A), y se agita durante 20 horas a temperatura ambiente. Transcurrido este tiempo, la reaccion es completa (control mediante CCF con diclorometano/acetato de etilo 3:1). Se separa por filtracion a traves de Celite, lavando a fondo con acetato de etilo, se concentra a 80 ml y se lava con 3 x 80 ml de disolucion saturada de sal comun. Tras secar con sulfato de magnesio, separar por filtracion y purificar por cromatograffa en columna, se obtienen 2,20 g (80,0%) de un solido incoloro.
4.1.5. 2',3'-Dideshidro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
5
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20
25
30
35
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50
Se suspenden en 70 ml de THF 2,47 g (5,89 mmol) de 5'-O-benzofl-2',3'-dideshidro-2',3'-didesoxi-5-(E)- bromoviniluridina y se mezclan con 8,8 ml (17,6 mmol) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio. Al cabo de 5 horas la conversion es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 20:1). Se vierte la preparacion en 100 ml de disolucion tampon de fosfato (pH = 7) y se extrae con 5 x 50 ml de acetato de etilo. Despues de secar con sulfato de magnesio y eliminar por destilacion el disolvente se obtienen, tras purificar por cromatograffa en columna con cloroformo/acetona 3:1, 1,73 g (93,0%) de un solido incoloro con punto de fusion >250°C (con descomposicion).
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 3,63 (m, 2H); 4,81 (m, 1H); 5,09 (t, 1H); 5,92 (m, 1H); 6,42 (m, 1H); 6,75 (d, 1H); 6,82 (m, 1H); 7,17 (d, 1H); 8,04 (s, 1H); 11,59 (s, 1H)ppm.
4.2. 2',3'-Dideshidro-2',3',5'-tridesoxi-5'-bromo-5-(E)-bromoviniluridina
4.2.1. 5'-O-(4-Metilfenilsulfonil)-2',3'-dideshidro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 5 ml de piridina 0,55 g (1,75 mmol) de 2',3'-dideshidro-2',3'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina y se mezcla, a 0°C, con 0,67 g (3,5 mmol) de cloruro de 4-metilfenilsulfonilo. Al cabo de 20 horas la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 20:1). Se vierte sobre hielo, se agita durante 20 minutos y se filtra. Despues de lavar a fondo con agua, se seca sobre cloruro de calcio. Tras purificar por cromatograffa en columna con ciclohexano/acetona 2:1 se obtienen 0,65 g (79,4%) de un solido incoloro.
4.2.2. 2',3'-Dideshidro-2',3',5'-tridesoxi-5'-bromo-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 10 ml de DMF 0,65 g (1,39 mmol) de 5'-O-(4-metilfenilsulfonil)-2',3'-dideshidro-2',3'-didesoxi-5-(E)- bromoviniluridina y 0,87 g (10,00 mmol) de bromuro de litio, y se calienta a 50°C. Al cabo de 3,5 horas se anaden otra vez 400 mg (4,6 mmol) de bromuro de litio y, despues de otros 60 minutos, la conversion es completa. Se vierte la preparacion en 40 ml de agua, se separa por filtracion el precipitado formado y se seca sobre cloruro de calcio. Tras purificar por cromatograffa en columna con ciclohexano/acetona 2:1 se obtienen 510 mg (97,3%) de un solido incoloro con punto de fusion >150°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,75 (m, 2H); 5,03 (m, 1H); 6,06 (m, 1H); 6,47 (m, 1H); 6,82 (m, 1H); 6,96 (d, 1H);
7,29 (d, 1H); 7,65 (s, 1H); 11,68 (s, 1H) ppm.
5. 2'-Fluoroderivados de BVDU
5.1. 2'-Fluoro-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
5.1.1. Acido 3-(2'-desoxi-2'-fluorouridin-5-il)-acnlico
Se disuelven 2,2 g (6,66 mmol) de ester metflico de acido 3-(2'-desoxi-2'-fluorouridin-5-il)acnlico en 20 ml (40 mmol) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio. Despues de 3 horas, se acidifica con acido clorhndrico 12 M y se enfna durante una hora en un bano de hielo. Despues de filtrar, lavar con agua de hielo y secar en un desecador, se obtienen 1,31 g (62,1%) de un solido incoloro.
5.1.2. 2'-Fluoro-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 40 ml de DMF 1,31 g (3,97 mmol) de acido 3-(2'-desoxi-2'-fluorouridin-5-il)acnlico, y despues se anaden 1,58 g (16,04 mmol) de hidrogenocarbonato de potasio. Tras agitar durante 20 minutos a temperatura ambiente se anaden gota a gota, en el transcurso de 30 minutos, 0,86 g (4,81 mmol) de N-bromosuccinimida, disueltos en 20 ml de DMF. Tras agitar durante 4 horas a temperatura ambiente, se separa por filtracion, se lava el residuo con DMF y se elimina DMF por destilacion con xileno. El residuo se purifica por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 9:1. Tras digerir en eter dietflico y secar, se obtienen 0,84 g (62,7%) de un producto incoloro con punto de fusion 182°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,63 (m, 1H); 3,85 (m, 1H); 3,89 (m, 1H); 4,17 (m, 1H); 5,04 (dd, 1H); 5,35 (t, 1H); 5,61 (d, 1H); 5,88 (d, 1H); 6,75 (d, 1H); 7,21 (d, 1H); 8,19 (s, 1H); 11,65 (s, 1H) ppm.
5.2. 2'-Fluoro-5'-bromo-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 10 ml de piridina 0,25 g (0,71 mmol) de 2'-fluoro-2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina y 0,37 g (1,42 mmol) de trifenilfosfina. Se disuelven en 5 ml de piridina 0,42 g (1,28 mmol) de tetrabromometano y se anaden gota a gota, en el transcurso de 5 minutos Al cabo de 1 hora, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Tras eliminar la piridina con tolueno, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 30:1. Se obtienen 0,23 g (78%) de un solido incoloro con punto de fusion 223°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,78 (m, 1H); 3,85 (m, 1H); 4,0 (m, 1H); 4,13 (m, 1H); 5,19 (dd, 1H); 5,87 (d, 1H); 5,91 (dd, 1H); 6,89 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,77 (s, 1H); 11,72 (s, 1H) ppm.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
5.3. 5-(E)-2-Bromovinil)-1-(2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)uracilo
5.3.1. 5-Yodo-1-(2'-desoxi-2'-fluoro-3',5'-di-O-benzofl-p-D-arabinofuranosil)uracilo
Se suspenden en 105 ml de 1,2-dicloroetano 7,08 g (29,75 mmol) de 5-yodouracilo. Se anaden a ello 13,32 g (65,47 mmol) de N,O-bis-trimetilsililacetamida (BSA), y se agita durante 5 horas a temperatura ambiente. Se origina una disolucion transparente e incolora. Se anaden a esto 11,40 g (26,9 mmol) de 3,5-di-O-benzofl-2-desoxi-2-fluoro- a-D-arabinosil-bromuro. Se calienta a reflujo durante 22 horas. Transcurrido este tiempo, la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 100:1). Se diluye con 450 ml de acetato de etilo la preparacion y se trata con 400 ml de tampon de fosfato (pH = 7). Se separa la fase organica y se extrae con 3 x 150 ml de acetato de etilo la acuosa. Tras secar con sulfato de magnesio las fases organicas reunidas, separar por filtracion el agente desecante y eliminar por destilacion el disolvente, se recristaliza en alcohol isopropflico. Se obtienen 8,47 g (54,3%) de un producto incoloro.
5.3.2. 5-Yodo-1-(2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)uracilo
Se disuelven en 250 ml de THF 8,14 g (14,03 mmol) de 5-yodo-1-(2'-desoxi-2'-fluoro-3',5'-di-O-benzofl-p-D- arabinofuranosil)uracilo y se mezclan con 50 ml (100 mmol) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio. Al cabo de 4 horas, la reaccion ha terminado. Se neutraliza la disolucion y se extrae varias veces con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 10:1). Se obtienen 4,80 g (91,8%) de un solido incoloro.
5.3.3. Ester mefflico de acido 3-((2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)uracil-5-il)acfflico
Se calientan a 80°C, en 160 ml de 1,4-dioxano, 0,75 g (2,84 mmol) de trifenilfosfina, 0,34 g (1,52 mmol) de acetato de paladio(II) y 6,17 g (61 mmol) de trietilamina. Se produce una profunda coloracion roja oscura. Se calienta durante 10 minutos a esta temperatura y luego se anaden 6,54 g (76 mmol) de ester mefflico de acido acfflico, 4,80 g (12,9 mmol) de 5-yodo-1-(2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)uracilo y 40 ml de 1,4-dioxano. Tras calentar a reflujo durante 1 hora, la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 9:1). Despues de enfriar, se separa por filtracion a traves de Celite la parte no disuelta y se lava a fondo con THF hasta que el filtrado sale incoloro. Se somete el filtrado a evaporacion rotativa y se purifica por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 10:1 el residuo oleoso. Se obtienen 2,72 g (54,4%) de un solido incoloro.
5.3.4. Acido 3-((2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)uracil-5-il)-acfflico
Se disuelven 2,72 g (8,25 mmol) de ester mefflico de acido 3-((2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)uracil-5-il)- acfflico en 40 ml (80 mmol) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio. Al cabo de 4 horas, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 8:1). Se acidifica con acido clorhffdrico 12 M y se deja reposar durante 1 hora en un bano de hielo. Se filtra con succion el precipitado, se lava con agua de hielo y se seca en un desecador. Se obtienen 2,61 g (100%) de un producto incoloro.
5.3.5. 5-(E)-(2-Bromovinil)-1-(2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-uracilo
Se disuelven en 60 ml de DMF 2,61 g (7,9 mmol) de acido 3-((2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)uracil-5-il)- acfflico y se mezcla con 3,2 g (32 mmol) de hidrogenocarbonato de potasio. Se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos y despues se anade gota a gota, en el transcurso de 50 minutos, una disolucion de 1,78 g (10 mmol) en 30 ml de DMF. Despues de agitar a temperatura ambiente durante 3,5 horas mas, se separa por filtracion la parte no disuelta, se lava a fondo con acetona/metanol 1:1 el residuo y se somete a evaporacion rotativa. Se elimina DMF por destilacion con xileno. Tras purificar por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 9:1 y diclorometano/acetato de etilo 1:2, se obtienen 1,51 g (54,5%) de un solido incoloro de punto de fusion 202°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,62 (m, 1H); 3,65 (m, 1H); 3,81 (m, 1H); 4,25 (dq, 1H); 5,06 (dt, 1H); 5,14 (t, 1H); 5,89 (d, 1H); 6,11 (dd, 1H); 6,88 (d, 1H); 7,27 (d, 1H); 7,99 (s, 1H); 11,75 (s, 1H).
5.4. 5-(E)-(2-Bromovinil)-1-(2',5'-didesoxi-2'-fluoro-5'-bromo-l3-D-arabinofuranosil)-uracilo
Se disuelven en 10 ml de piridina 0,60 g (1,71 mmol) de 5-(E)-(2-bromovinil)-1-(2'-desoxi-2'-fluoro-p-D- arabinofuranosil)-uracilo y 950 mg (3,62 mmol) de trifenilfosfina. Despues se anade gota a gota, en el transcurso de 10 minutos, una disolucion de 1,08 g (3,25 mmol) de tetrabromometano en 10 ml de piridina. Al cabo de 1,5 horas la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 10:1). Se elimina piridina por destilacion con tolueno y se purifica el residuo por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 30:1. Se obtienen 0,63 g (89,0%) de un producto incoloro con punto de fusion 237°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 3,79 (m, 2H); 4,07 (m, 1H); 4,26 (dq, 1H); 5,09 (ddd, 1H); 6,16 (d, 1H); 6,23 (dd, 1H); 6,98 (d, 1H); 7,30 (d, 1H); 7,74 (d, 1H); 11,80 (s, 1H) ppm.
6. 2',2'-Difluoroderivados de BVDU como compuestos de referencia
6.1. 1-(2'-Desoxi-2',2'-difluoro-alfa-D-eritro-pentofuranos-1'-il)-5-(E)-bromoviniluracilo y 1-(2'-desoxi-2',2'-difluoro- l3-D-eritro-pentofuranos-1'-il)-5-(E)-bromoviniluracilo
6.1.1. 1-(3',5'-Di-O-benzofl-2',2'-difluoro-a-D-pentofuranos-1'-il)-5-(E)-bromoviniluracilo y 1-(3',5'-di-O-benzofl-2',2'- difluoro-l3-D-pentofuranos-1'-il)'-5-(E)-bromoviniluracilo
5 Se suspenden 1,89 g (8,70 mmol) de 5-(E)-bromoviniluracilo en 40 ml de 1,2-dicloroetano y se anaden 4,28 g (19,23 mmol) de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo y 2,14 g (177 mmol) de 2,4,6-colidina. Al cabo de 1 hora, se obtiene una disolucion transparente. Se disuelven 3,98 g (8,7 mmol) de 2-desoxi-2,2-difluoro-D-ribofuranosa-3,5- dibenzoato-1-metanosulfonato (mezcla a/p) en 25 ml de 1,2-dicloroetano y se anaden gota a gota en el transcurso de 20 minutos. Despues se anade gota a gota, en el transcurso de 10 minutos, una disolucion de 1,94 g (8,7 mmol) 10 de trifluorometanosulfonato de trimetilsililo en 15 ml de 1,2-dicloroetano, y se calienta a reflujo durante 18 horas. El control mediante CCF (cloroformo/metanol 10:1 y 100:1) revela que la conversion es completa. Se elimina por destilacion el disolvente y se disuelve en 80 ml de acetato de etilo el residuo oleoso. Tras lavar con 2 x 80 ml de acido clorhudrico 1 M, 2 x 80 ml de disolucion saturada de sal comun y 1 x 80 ml de tampon de fosfato, se efectua secado con sulfato de magnesio. Tras filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se purifica la sustancia 15 bruta por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 125:1. Se obtienen 3,1 g (61,7%) de una espuma incolora (a/p = 1,2).
La separacion de los anomeros a y p se efectua por repetida cromatograffa en columna con ciclohexano/acetato de etilo 3:1.
Se obtienen 1,49 g de anomero a y 1,15 g de anomero p.
20 6.1.2. 1-(2'-Desoxi-2',2'-difluoro-a-D-eritro-pentofuranos-1'-il)-5-(E)-bromoviniluracilo
Se disuelven 1,49 g (2,58 mmol) de 1-(3',5'-di-O-benzofl-2',2'-difluoro-a-D-pentofuranos-1'-il)-5-(E)-bromoviniluracilo en 55 ml de THF y se anaden 13 ml (26 mmol) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio. Al cabo de 3 horas se neutraliza y se extrae con acetato de etilo. Tras secar con sulfato de magnesio, filtrar y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 20:1 y 25 diclorometano/metanol 20:1. Tras secar, se obtienen 0,82 g (86%) de un solido incoloro de punto de fusion 192°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,56 (m, 1H); 3,65 (m, 1H); 4,35 (m, 2H); 5,08 (s, 1H); 6,22 (m, 1H); 6,34 (d, 1H); 7,02 (d, 1H); 7,32 (d, 1H); 7,85 (s, 1H); 11,81 (s, 1H) ppm.
6.1.3. 1-(2'-Desoxi-2',2'-difluoro-l3-D-eritro-pentofuranos-1'-il)-5-(E)-bromoviniluracilo
Se disuelven en 55 ml de THF 1,15 g (1,99 mmol) de 1-(3',5'-di-O-benzofl-2',2'-difluoro-l3-D-pentofuranos-1'-il)-5-(E)- 30 bromoviniluracilo y se mezcla con 10 ml (20 mmol) de disolucion de hidroxido de sodio. La elaboracion y la purificacion por cromatograffa en columna se efectuan de forma analoga a como se ha descrito anteriormente para el anomero a. Se obtienen 740 mg (100%) de un solido incoloro con punto de fusion189°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,64 (m, 1H); 3,81 (m, 1H); 3,87 (m, 1H); 4,22 (m, 1H); 5,36 (t, 1H); 6,06 (t, 1H); 6,33 (d, 1H); 6,83 (d, 1H); 7,27 (d, 1H); 8,05 (s, 1H); 11,86 (s, 1H) ppm.
35 6.1.4. 1-(5'-Cloro-2',5'-didesoxi-2',2'-difluoro-a-D-eritro-pentofuranos-1'-il)-5-(E)-bromoviniluracilo
Se disuelven en 8 ml de DMF 350 mg (0,95 mmol) de 1-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-alfa-D-eritro-pentofuranos-1'-il)-5-(E)- bromoviniluracilo. Se anaden 337 mg (1,29 mmol) de trifenilfosfina y despues 729 mg (4,74 mmol) de tetraclorometano. Despues de agitar durante 20 horas a temperatura ambiente, la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 15:1). Tras anadir 2 ml de metanol, se elimina DMF con xileno y se purifica 40 varias veces por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 30:1 el residuo marron. Se obtienen 240 mg (65,2%) de un producto incoloro con punto de fusion 208°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,87 (m, 1H); 3,94 (m, 1H); 4,42 (m, 1H); 4,61 (m, 1H); 6,31 (m, 1H); 6,61 (s (ancho), 1H); 6,99 (d, 1H); 7,33 (d, 1H); 7,89 (d, 1H); 11,82 (s (ancho), 1H) ppm.
6.1.5. 1-(5'-Cloro-2',5'-didesoxi-2',2'-difluoro-p-D-eritro-pentofuranos-1'-il)-5-(E)-bromoviniluracilo
45 Se hacen reaccionar 520 mg (1,41 mmol) de 1-(2'-desoxi-2',2'-difluoro-l3-D-eritro-pentofuranos-1'-il)-5-(E)- bromoviniluracilo y 500 mg (1,90 mmol) de trifenilfosfina con 1.083 mg (7,04 mmol) de tetraclorometano, y se elaboran de manera analoga a como se ha descrito anteriormente. Tras multiple purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 20:1 se obtienen 460 mg (84,1%) de un producto incoloro con punto de fusion 191°C.
50 1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,99 (m, 2H); 4,05 (m, 1H); 4,25 (m, 1H); 6,17 (t, 1H); 6,57 (d, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,33
(d, 1H); 7,76 (s, 1H); 11,90 (s, 1H) ppm.
7. 1-(p-D-Arabinofuranosil)-5-(E)-bromoviniluracilo como compuesto de referencia
5
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50
7.1. Ester metilico de acido 3-(1-(2,3,6-tri-O-acetil-p-D-arabinofuranosil)-uracil-5-il)-acnlico
Se calientan a 70°C 0,84 g (3,2 mmol) de acetato de paladio(II), 0,89 g (3,38 mmol) de trifenilfosfina y 7,35 g (73,56 mmol) de trietilamina en 135 ml de dioxano. Se origina un disolucion de profundo color rojo oscuro. Se calienta durante 10 minutos a esta temperatura, se anaden primeramente 22,74 g (264 mmol) de ester metflico de acido acnlico y despues 9,0 g (18,13 mmol) de 1-(2,3,6-tri-O-acetil-p-D-arabinofuranosil)-5-yodouracilo, asf como tambien 90 ml de dioxano. Despues de calentar a reflujo durante 2,5 horas, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/acetato de etilo 5:2). Tras enfriar, se diluye con acetato de etilo, se separa por filtracion de la parte no disuelta y se evapora el filtrado. Se purifica por cromatograffa en columna (diclorometano/acetato de etilo 5:2) el residuo. Se obtienen 6,3 g (76,5%) de una espuma incolora.
7.2. Acido 3-(1-(p-D-arabinofuranosil)-uracil-5-il)-acnlico
Se disuelven en 140 ml de THF 6,3 g (13,86 mmol) de ester metflico de acido 3-(1-(2,3,6-tri-O-acetil-p-D- arabinofuranosil)-uracil-5-il)-acnlico y se mezclan con 140 ml (280 mmol) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio. Transcurridas 5 horas, se concentra la disolucion y se acidifica con acido clorhndrico 12 M. Se mantiene la preparacion durante 1 hora en un bano de hielo y se filtra con succion el precipitado y se lava con agua de hielo. Despues de secar en un desecador se obtienen 3,45 g (79,4%) de un solido incoloro.
7.3. 1-(p-D-Arabinofuranosil)-5-(E)-bromoviniluracilo
Se disuelven en 100 ml de DMF 3,46 g (11,01 mmol) de acido 3-(1-(p-D-arabinofuranosil)-uracil-5-il)-acnlico, y se anaden 5,51 g (55,05 mmol) de hidrogenocarbonato de potasio. Despues de agitar durante 30 minutos a t.a. se anade gota a gota, en el transcurso de 1 hora, una disolucion de 2,37 g (13,4 mmol) de N-bromosuccinimida. Tras agitar durante 4,5 horas a temperatura ambiente, se elimina DMF con xileno y se purifica por cromatograffa en columna con diclorometano/metanol 10:1 el residuo. Despues de recristalizar en metanol, se obtiene un producto cristalino incoloro (0,84 g, 21,8%).
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 3,63 (m, 2H); 3,74 (m, 1H); 3,91 (m, 1H); 4,03 (m, 1H); 5,11 (t, 1H); 5,45 (d, 1H); 5,55 (d, 1H); 5,97 (d, 1H); 6,87 (d, 1H); 7,24 (d, 1H); 7,89 (s, 1H); 11,57 (s, 1H) ppm.
8. 5'-Desoxi-BVDU y 3',5'-didesoxi-3'-halogeno-BVDU como compuesto de referencia
8.1. 5'-Desoxi-BVDU
8.1.1. 2',5'-Didesoxi-5'-yodo-5-etil-uridina
Se disuelven en 50 ml de piridina 8,0 g (31,22 mmol) de 2'-desoxi-5-etil-uridina y 10,66 g (40,64 mmol) de trifenilfosfina. Se anaden a ello, en varias porciones, 10,32 g (40,64 mmol) de yodo. Al cabo de 4 horas la conversion es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 15:1). Se separa piridina por destilacion en vado y se disuelve en acetato de etilo el residuo y se lava con acido clortndrico 1 M. Se extrae varias veces con acetato de etilo la fase acuosa y se lavan con tampon de fosfato las fases de acetato de etilo reunidas. Tras secar con sulfato de magnesio, separar por filtracion y lavar con acetato de etilo, se separa el disolvente por destilacion a sequedad y se lava con tolueno y diclorometano el residuo. Se obtienen 7,5 g (65,6%) de un producto ligeramente amarillento.
8.1.2. 2',5'-Didesoxi-5-etil-uridina
Se disuelven en 280 ml de etanol 4,68 g (12,78 mmol) de 2',5'-didesoxi-5'-yodo-5-etil-uridina y 1,08 g (27,0 mmol) de hidroxido de sodio, se mezcla con 780 mg de catalizador de hidrogenacion (paladio sobre carbon activo, 10% de Pd) y se hidrogena durante 12 horas. Transcurrido este tiempo, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 10:1). Despues de separar por filtracion el catalizador de hidrogenacion, se concentra por evaporacion a sequedad y se mezcla el residuo con tampon de fosfato. Se filtra con succion el precipitado, se lava con agua de hielo y se seca sobre hidroxido de potasio. Se extrae varias veces con acetato de etilo el filtrado. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos. Tras separar por filtracion el agente desecante y lavar con acetato de etilo, se evapora a sequedad. Se obtienen en total 2,97 g (96,7%) de un solido incoloro.
8.1.3. 2',5'-Didesoxi-3'-O-benzofl-5-etil-uridina
Se disuelven en 35 ml de piridina 3,28 g (13,65 mmol) de 2',5'-didesoxi-5-etil-uridina y se mezclan, a 0°C, con 2,14 g (15,21 mmol) de cloruro de benzoflo. Despues de 30 minutos se retira el bano frio y se agita durante 1 hora mas a temperatura ambiente. Transcurrido este tiempo, la conversion es completa. Se elimina piridina con tolueno y se disuelve en cloroformo el residuo. Se lava con acido clorhndrico 0,1 M y se lava hasta neutralidad con tampon de fosfato. Tras secar la fase organica con sulfato de magnesio, separar por filtracion el agente desecante y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con diclorometano/acetona 10:1. Se obtienen 3,82 g (81,3%) de una espuma blanca.
8.1.4. 2',5'-Didesoxi-3'-O-benzofl-5-(E)-bromoviniluridina
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y se calienta a ebullicion. Se anade a ello gota a gota, en el transcurso de 1,5 horas, una disolucion de 2,88 g (18 mmol) de bromo en 15 ml de cloroformo. Se calienta a reflujo durante 0,5 horas y, tras enfriar a temperatura ambiente, se hace pasar argon a traves de la disolucion durante 1 hora. Despues se anaden a la disolucion 2,88 g (19,8 mmol) de trietilamina y se agita durante 1 hora a temperatura ambiente. Se elimina por destilacion cloroformo y se toma en acetato de etilo el residuo y se lava con disolucion saturada de sal comun. Despues de secar la fase organica con sulfato de magnesio, separar por filtracion el agente desecante y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con diclorometano/acetona 20:1. Se obtienen 1,97 g (57,8%) de una espuma blanca.
8.1.5. 2',5'-Didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 25 ml de THF 2,48 g (5,88 mmol) de 2',5'-didesoxi-3'-O-benzofl-5-(E)-bromoviniluridina y se mezclan con 15 ml (30 mmol) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio. Tras agitar durante 3 horas a temperatura ambiente, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/acetona 10:1). Se mezcla con 80 ml de tampon de fosfato y se extrae varias veces con acetato de etilo. Tras secar la fase organica con sulfato de magnesio, separar por filtracion el agente desecante y eliminar por evaporacion rotativa el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 20:1. Se obtienen 1,65 g (88,7%) de un solido incoloro con punto de fusion 174°C (con descomposicion).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da): 2,11 (d, 3H); 2,15 (m, 2H); 3,81 (m, 1H); 3,98 (m, 1H); 5,26 (d, 1H); 6,09 (m, 1H); 6,99 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,76 (s, 1H); 11,58 (s, 1H) ppm.
8.2. 3'-Cloro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
8.2.1. 2,3'-Anhidro-1-(2',5'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-bromoviniluracilo
Se disuelven en 40 ml de THF 1,47 g (4,64 mmol) de 2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina y 1,83 g (6,96 mmol) de trifenilfosfina, y a esta disolucion se anade gota a gota, en el transcurso de 20 minutos, una disolucion de 1,44 g (7,16 mmol) de azodicarboxilato de diisopropilo en 10 ml de THF. Al cabo de 4 horas, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 15:1). Se separa THF por destilacion y se toma en tolueno el residuo. Se separa por filtracion y se lava varias veces con tolueno el residuo. Se obtiene un solido incoloro (1,19 g, 85,7%).
8.2.2. 3'-Cloro-2',3',5'-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se suspenden en 5 ml de DMF 0,59 g (1,97 mmol) de 2,3'-anhidro-1-(2',5'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)- bromoviniluracilo y 0,5 g (4,33 mmol) de hidrocloruro de piridina, y se calienta a 90°C. Al cabo de 1 hora, la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 15:1). Se separa DMF por destilacion con xileno, y se trata el residuo con acetato de etilo y disolucion saturada de sal comun. Se extrae varias veces con acetato de etilo la fase acuosa y se secan con sulfato de magnesio las fases de acetato de etilo reunidas. Despues de separar por filtracion el agente desecante, lavar con acetato de etilo y eliminar por destilacion el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 100:1 y cloroformo/acetato de etilo 5:1. Se obtienen 0,25 g (37,8%) de un solido incoloro de punto de fusion 134°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,34 (d, 3H); 2,58 (m, 1H); 2,66 (m, 1H); 4,03 (m, 1H); 4,44 (m, 1H); 6,17 (dd, 1H); 6,97 (d, 1H); 7,31 (d, 1H); 7,77 (s, 1H); 11,62 (s, 1H) ppm.
8.3. 3'-Bromo-2',3',5-tridesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se hacen reaccionar en DMF 0,59 g (1,97 mmol) de 2,3'-anhidro-1-(2',5'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)- bromoviniluracilo y 0,96 (6,0 mmol) de hidrobromuro de piridina, y se elabora como se ha descrito anteriormente en
8.2.2. Se purifica varias veces el producto por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 70:1, y se obtienen 0,22 g (29,4%) de un solido incoloro de punto de fusion 128°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,35 (d, 3H); 2,65 (m, 2H); 4,12 (m, 1H); 4,41 (m, 1H); 6,15 (dd, 1H); 6,98 (d, 1H);
7,30 (d, 1H); 7,76 (s, 1H); 11,62 (s, 1H) ppm.
9. 1-[2',5'-Didesoxi-p-D-glicero-pent-4-enofuranosil]-5-(E)-bromoviniluracilo como compuesto de referencia
9.1. 2',5'-Didesoxi-5'-yodo-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 30 ml de piridina 3,0 g (9,0 mmol) de 2'-desoxi-5-(E)-bromoviniluridina y 3,07 g (11,7 mmol) de trifenilfosfina, y se enfna a 10°C. Se anaden a ello, en varias porciones, 2,97 g (11,7 mmol) de yodo. Se deja calentar hasta la temperatura ambiente. Al cabo de 6 horas, la conversion es completa (control mediante CCF con diclorometano/metanol 15:1). Se separa piridina por destilacion y se toma el residuo en acetato de etilo/2-butanona (2:1) y se lava con disolucion de disulfito de sodio. Se extrae varias veces con acetato de etilo la fase acuosa y se secan con sulfato de magnesio las fases organicas reunidas. Despues de separar por filtracion el agente desecante
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y eliminar por destilacion el disolvente, se trata con tolueno/diclorometano 1:1 el residuo, y se seca el solido obtenido. Se obtienen 3,77 g (94,5%) de un solido incoloro.
9.2. 2',5'-Didesoxi-3'-O-acetil-5'-yodo-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 20 ml de piridina 2,48 g (5,59 mmol) de 2',5'-didesoxi-5'-yodo-5-(E)-bromoviniluridina, y se mezclan con 3,20 g (31,34 mmol) de anhndrido acetico. Al cabo de 90 minutos la reaccion ha terminado (control mediante CCF con diclorometano/metanol 10:1). Se vierte la preparacion en disolucion tampon de fosfato y, despues de 15 minutos, se extrae varias veces con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos y, tras la elaboracion habitual, se purifican por cromatograffa en columna con cloroformo/acetona 10:1. Se obtienen 2,14 g (78,7%) de un solido incoloro.
9.3. 1-[3'-O-Acetil-2',5'-didesoxi-p-D-glicero-pent-4-enofuranosil]-5-(E)-bromoviniluracilo
Se disuelven en 45 ml de acetonitrilo 2,14 g (4,41 mmol) de 2',5'-didesoxi-3'-O-acetil-5'-yodo-5-(E)-bromoviniluridina y se mezclan con 2,08 g (13,73 mmol) de DBU (1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno). Tras agitar durante 18 horas a temperatura ambiente, la conversion es completa (control mediante CCF con ciclohexano/acetato de etilo 1:1). Se vierte en tampon de fosfato y se extrae varias veces con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos y, tras la elaboracion usual, se purifican por cromatograffa en columna con ciclohexano/acetato de etilo 1:1 y cloroformo/acetona 8:1. Se obtienen 1,24 g (77,3%) de un solido incoloro con punto de fusion 148°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-da): 2,07 (s, 3H); 2,44 (m, 1H); 2,71 (m, 1H); 4,27 (dd, 1H); 4,47 (d, 1H); 5,78 (m, 1H); 6,37 (t, 1H); 6,88 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,90 (s, 1H), 11,70 (s, 1H) ppm.
9.4. 1-[2',5'-Didesoxi-p-D-glicero-pent-4-enofuranosil]-5-(E)-bromoviniluracilo
Se disuelven en 10 ml de metanol 0,86 g (2,41 mmol) de 1-[3'-O-acetil-2',5'-didesoxi-p-D-glicero-pent-4- enofuranosil]-5-(E)-bromoviniluracilo, y se mezclan con 15 ml de una disolucion saturada de amomaco en metanol. Al cabo de 7 horas la reaccion ha terminado (control mediante CCF con cloroformo/metanol 15:1). Se elimina el disolvente y se purifica el residuo por cromatograffa en columna con cloroformo/metanol 15:1 y diclorometano/acetato de etilo 1:1. Se obtienen 210 mg (27,6%) de una sustancia incolora de punto de fusion 128°C (con descomposicion).
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,21 (m, 1H); 2,48 (m, 1H); 4,16 (d, 1H); 4,31 (d, 1H); 4,72 (m, 1H); 5,56 (d, 1H); 6,39 (t, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,80 (s, 1H); 11,66 (s, 1H) ppm.
10. 5'-Ciano-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina como compuesto de referencia
10.1. 5'-Ciano-2',5'-didesoxi-5-etiluridina
Se disuelven en 50 ml de DMSO 2,54 g (6,93 mmol) de 5'-yodo-2',5'-didesoxi-5-etiluridina, y se anaden a ello 0,52 g (10,61 mmol) de cianuro de sodio. Al cabo de 18 horas la conversion es completa (control mediante CCF con acetato de etilo). Se vierte la preparacion en disolucion saturada de sal comun y se extrae varias veces con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos y, tras la elaboracion usual, se purifican por cromatograffa en columna con acetato de etilo. Se obtienen 0,96 g (52,1%) de una sustancia incolora.
10.2. 3'-O-Acetil-5'-ciano-2',5'-didesoxi-5-etiluridina
Se disuelven en 15 ml de piridina 0,96 g (3,62 mmol) de 5'-ciano-2',5'-didesoxi-5-etiluridina, y se mezclan con 1,77 g (17,35 mmol) de anhndrido acetico. Al cabo de 1 hora la conversion es completa (control mediante CCF con acetato de etilo). Se vierte la preparacion en tampon de fosfato y se extrae varias veces con acetato de etilo. Se secan con sulfato de magnesio los extractos reunidos y, tras la elaboracion usual, se purifican por cromatograffa en columna con diclorometano/acetato de etilo. Se obtienen 0,82 g (73,7%) de una sustancia incolora.
10.3. 3'-O-acetil-5'-ciano-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 30 ml de cloroformo 0,82 g (2,67 mmol) de 3'-O-acetil-5'-ciano-2',5'-didesoxi-5-etiluridina y 0,01 g de AIBN (azo-bis-isobutironitrilo), y se calienta a ebullicion. Se anade a ello, gota a gota, una disolucion de 0,94 g (5,87 mmol) de bromo en 10 ml de cloroformo. Al cabo de 65 minutos la adicion gota a gota ha terminado. Se calienta a reflujo durante 1 hora mas, se deja enfriar hasta la temperatura ambiente, y se anaden 0,66 g (6,52 mmol) de trietilamina. Al cabo de 1 hora, se elimina por destilacion el disolvente y se trata con acetato de etilo y tampon de fosfato el residuo. Se extrae varias veces con acetato de etilo la fase acuosa, y se secan con sulfato de magnesio las fases de acetato de etilo reunidas. Despues de la elaboracion normal, se efectua purificacion por cromatograffa en columna con ciclohexano/acetato de etilo 2:3. Se obtienen 0,62 g (59,7%) de una sustancia incolora de punto de fusion 96°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 2,07 (s, 3H); 2,39 (m, 1H); 2,53 (m, 1H); 3,08 (m, 2H); 4,21 (m, 1H); 5,16 (m, 1H); 6,17 (t, 1H); 6,88 (d, 1H); 7,28 (d, 1H); 7,88 (s, 1H); 11,68 (s, 1H) ppm.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
10.4. 5'-Ciano-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina
Se disuelven en 20 ml de metanol 0,41 g (1,07 mmol) de 3'-O-acetil-5'-ciano-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina, y se mezclan con 10 ml de una disolucion saturada de cloruro de hidrogeno en metanol. Al cabo de 36 horas la conversion es completa (control mediante CCF con cloroformo/metanol 15:1). Tras eliminar por destilacion el disolvente, se efectua purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol 15:1). Se obtienen 0,35 g (95,9%) de una sustancia incolora con punto de fusion 177°C (con descomposicion).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da): 2,15 (m, 1H); 2,29 (m, 1H); 2,99 (m, 2H); 3,92 (m, 1H); 4,18 (m, 1H); 5,55 (d, 1H); 6,19 (t, 1H); 6,91 (d, 1H); 7,29 (d, 1H); 7,80 (s, 1H); 11,63 (s, 1H) ppm.
11. 1-(2'-Desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindionas sustituidas como compuestos de referencia
11.1 1-(5'-Yodo-2',5'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona
11.1.1. 1-(2'-Desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona
Se calientan a reflujo durante 1 hora 15,8 g (37,6 mmol) de 2,3'-anhidro-5'-O-benzofl-2'-desoxi-5-(E)- bromoviniluridina con 65,7 ml (132 mmol, 3,5 eq.) de disolucion 2 M de hidroxido de sodio en 600 ml de una mezcla de etanol/agua (5/1). Tras enfriar la mezcla de reaccion a la temperatura ambiente, se neutraliza con acido clorhndrico concentrado y, a continuacion, se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (acetato de etilo/metanol, 9/1 y cloroformo/metanol, 7/1) proporciona 10,9 g (32,7 mmol, 87%) de 1-(2'-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona en forma de solido blanco.
11.1.2. 1-(5'-Metilsulfonil-2'-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona
Se disponen en 100 ml de piridina, a 0°C, 10,9 g (32,7 mmol) de 1-(2'-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2- bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona. Se disuelven en 50 ml de THF 3,94 g (34,4 mmol, 1,05 eq.) de cloruro de metilsulfonilo, y se anaden lentamente gota a gota. A continuacion, se agita la mezcla de reaccion a 0°C durante 3 horas mas. Se vierte la preparacion sobre 300 g de hielo, se ajusta a pH = 5 con acido clorhndrico concentrado y se extrae la mezcla con 3 x 100 ml de acetato de etilo. Se lava la fase organica reunida con acido clorhndrico 1 M y tambien disolucion de NaCl, se seca con Na2SO4, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Resultan 11,8 g (28,7 mmol) de 1-(5'-metilsulfonil-2'-desoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4- (1H,3H)-pirimidindiona en forma de solido blanco. Se hace reaccionar el producto bruto sin purificacion adicional.
11.1.3. 1- (5'-Yodo-2',5'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona
Se calientan en 10 ml DMF, durante 20 horas, 0,50 g (1,22 mmol) de 1-(5'-metilsulfonil-2'-desoxi-p-D-treo- pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona con 911 mg (6,08 mmol, 5,0 eq.) de yoduro de sodio. Se toma la mezcla de reaccion en 50 ml de acetato de etilo, se lava con agua y disolucion de NaCl, se seca con Na2SO4, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol, 9/1) proporciona 130 mg (293 pmol, 24%) de 1-(5'-yodo-2',5'-didesoxi-p-D-treo-pentofuranosil)- 5-(E)-(2-bromovinil)-2,4-(1H,3H)-pirimidindiona en forma de un solido ligeramente amarillento con un punto de fusion de 79-81°C.
1H-RMN (500 MHz, DMSO-d6): 2,04 (d, 1H); 2,58 (m, 1H); 3,43-3,53 (m, 2H); 4,16 (m, 1H); 4,26 (m, 1H); 5,44 (d, 1H); 6,06 (dd, 1H); 6,93 (d, 1H); 7,24 (d, 1H); 7,98 (s, 1H); 11,57 (s, 1H) ppm.
12. 1-(2',3'-dideshidro-2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo como compuesto de referencia
12.1. 1- (2'-Desoxi-2'-fluoro-5'-O-tritil-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo
Se suspenden en 200 ml de piridina 22,8 g (83,2 mmol) de 1-(2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo y se anaden 25,5 g (91,6 mmol) de cloruro de tritilo. Se agita la mezcla de reaccion durante 24 horas a temperatura ambiente y, a continuacion, se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. Se toma el residuo en 300 ml de acetato de etilo y se lava con acido clorhfdrico diluido, disolucion de NaHCO3 y disolucion de NaCl. Se seca con Na2SO4 la fase organica, se filtra y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol, 9/1) proporciona 26,1 g (50,5 mmol, 61%) de 1-(2'-desoxi-2'-fluoro- 5'-O-tritil-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo en forma de solido blanco.
12.2. 2,3'-Anhidro-1-(2'-desoxi-2'-fluoro-5'-O-tritil-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo
Se disponen en 300 ml de DMF 26,1 g (50,5 mmol) de 1-(2'-desoxi-2'-fluoro-5'-O-tritil-p-D-arabinofuranosil)-5- etiluracilo y se anaden 19,9 g (75,7 mmol) de PPh3. A continuacion se disuelven en 50 ml de DMF 15,3 g (75,7 mmol) de azodicarboxilato de diisopropilo, y se anaden gota a gota. Al cabo de dos horas se elimina en un evaporador rotativo el disolvente, se toma el residuo en 1 l de eter dietflico y se agita vigorosamente durante
5
10
15
20
25
30
16 horas. Se filtra con succion el solido resultante y se lava tres veces con 50 ml de eter dietilico. La recristalizacion en ciclohexano/acetato de etilo proporciona 25,5 g (50,5 mmol, 100%) de 2,3-anhidro-1-(2-desoxi-2'-fluoro-5-O-tritil- p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo en forma de solido blanco.
12.3. 1-(2',3-Dideshidro-2-desoxi-2-fluoro-5-O-tritil-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo
Se disuelven en 600 ml de etanol 25,5 g (50,5 mmol) de 2,3-anhidro-1-(2-desoxi-2'-fluoro-5-O-tritil-p-D- arabinofuranosil)-5-etiluracilo, se anaden 125 ml de agua y 62,5 ml (126 mmol) de disolucion 2 M de NaOH y se calienta a reflujo durante 2 horas la mezcla de reaccion. Se elimina en gran medida el etanol en un evaporador rotativo. Se neutraliza el residuo con acido clorhndrico diluido y se extrae con acetato de etilo. Se lavan con disolucion de NaCl las fases organicas reunidas, se secan con Na2SO4, se filtran y se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol, 95/5) proporciona 19,6 g (39,2 mmol, 78%) de 1-(2',3-dideshidro-2-desoxi-2'-fluoro-5-O-tritil-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo en forma de solido blanco.
12.4 1-(2',3'-Dideshidro-2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo
Se disuelven en 50 ml de dioxano 5,00 g (10,0 mmol) de 1-(2',3-dideshidro-2-desoxi-2'-fluoro-5-O-tritil-p-D- arabinofuranosil)-5-etiluracilo, y se enfna a 0°C. Se anaden lentamente, gota a gota, 4,2 ml (20,0 mmol) de HCl 4,8 M en dioxano. Se retira el bano refrigerante y se agita la mezcla de reaccion durante 2 horas. A continuacion se elimina en un evaporador rotativo el disolvente. La purificacion por cromatograffa en columna (cloroformo/metanol, 9/1) proporciona 2,06 g (8,04 mmol, 80%) de 1-(2',3'-dideshidro-2'-desoxi-2'-fluoro-p-D-arabinofuranosil)-5-etiluracilo en forma de solido blanco con un punto de fusion de 145-146°C.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6): 1,02 (t, 3H); 2,20 (q, 2H); 3,55-3,65 (m, 2H); 4,76-4,84 (m, 1H); 5,16 (t, 1H); 5,95-6,05 (m, 1H); 6,75-6,80 (m, 1H); 7,86 (s, 1H); 11,42 (s, 1H).
La Figura 12 muestra los resultados de otro compuesto segun la invencion. Las Figuras 9 a 11 muestran los resultados de compuestos de referencia.
La Figura 9 muestra los resultados de 5'-bromo-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
La Figura 10 muestra los resultados de 5'-azido-2',5'-didesoxi-5-(E)-bromoviniluridina en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
La Figura 11 muestra los resultados de 1-(3'-azido-2',3'-didesoxi-p-D-eritro-pentofuranosil)-5-(E)-(2-bromovinil)- 2,4(1H,3H)-pirimidindiona en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.
La Figura 12 muestra los resultados de 3'-Cl-BVDU en combinacion con mitomicina C (MMC), comparados con MMC sola y MMC en combinacion con BVDU.

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Nucleosidos de la formula general I
    imagen1
    con
    5 Ri = halogeno,
    R2 seleccionado del grupo consistente en H, halogeno, OR8, CN, N3, NR6R7 y radicales de profarmaco unidos a traves de un atomo de oxfgeno, en donde
    el radical de profarmaco esta seleccionado del grupo consistente en
    imagen2
    10 con
    R10 y R11, de manera independiente entre s^ alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo, que tambien puede tener heteroatomos, R12 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, aralquileno, arilo, que tambien puede tener heteroatomos, R13 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    imagen3
    15 con
    R10 y R11, de manera independiente entre s^ alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo, que tambien puede tener heteroatomos, R12 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, aralquileno, arilo, que tambien puede tener heteroatomos, R13 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, R14 = O-alquilo C1-C8, NH-alquilo C1-C8, N-(alquilo
    Cl-C8)2,
    imagen4
    imagen5
    con
    R15 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    imagen6
    5 con
    R15 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    R16 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, O-arilo
    imagen7
    con
    10 R17 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, halogeno,
    imagen8
    con
    R18 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo o heteroarilo, R19 = alquil-CO-, aril-CO-, aminoacido o peptido,
    imagen9
    imagen10
    15 con
    R20 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    R3 = H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, alquileno C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    R4 = H, halogeno, OR8, N3, NR6R7 o bien R4 junto con R1 representan un segundo enlace entre los atomos de C
    adyacentes a Ri y R4,
    R5 = H, alquilo C1-C8 o arilo y
    R6, R7 y R8, de manera independiente entre s^ H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado o acetilo, estando excluidos los compuestos con los siguientes radicales:
    5 R1 = F, R2 = OH, R3 = R4 = R5 = H,
    R1 = F, R2 = O-acetilo, R3 = R4 = R5 = H,
    R1 = F, R2 = trifosfato, R3 = R4 = R5 = H,
    R1 = Cl, R2 = OH, R3 = R4 = R5 = H.
    10
  2. 2. Nucleosido segun la reivindicacion 1, caracterizado por la formula II:
    imagen11
    o
    por la formula III:
    15 o
    por la formula IV:
    o
    por la formula V:
    imagen12
    imagen13
    imagen14
    o
    por la formula VI:
    imagen15
    5 o
    por la formula VII:
    imagen16
    o
    por la formula VIII:
    imagen17
  3. 3. Nucleosido de la formula general IX:
    5
    10
    15
    20
    25
    imagen18
    con
    R1 y R2, de manera independiente entre sf, seleccionados del grupo consistente en H, halogeno, OR8, CN, N3, NR6R7 y radicales de profarmaco unidos a traves de un atomo de ox^geno,
    R4 = halogeno,
    R5 = H, alquilo C1-C8 o arilo y
    R6, R7 y R8, de manera independiente entre sf, H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado o acetilo.
  4. 4. Medicamento que contiene al menos un nucleosido segun una de las reivindicaciones precedentes.
  5. 5. Medicamento segun la reivindicacion 4, caracterizado por que el medicamento contiene ademas al menos un citostatico.
  6. 6. Uso de al menos un nucleosido de la formula general I
    imagen19
    con
    R1 = halogeno,
    R2 seleccionado del grupo consistente en H, halogeno, OR8, CN, N3, NR6R7 y radicales de profarmaco unidos a traves de un atomo de oxfgeno,
    R3 = H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, alquileno C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    R4 = H, halogeno, OR8, N3, NR6R7 o bien R4 junto con R1 representan un segundo enlace entre los atomos de C adyacentes a R1 y R4,
    R5 = H, alquilo C1-C8 o arilo y
    R6, R7 y R8, de manera independiente entre sf, H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado o acetilo,
    asf como al menos un citostatico para preparar un medicamento para suprimir o reducir el desarrollo de resistencia en el tratamiento con citostaticos.
  7. 7. Uso segun la reivindicacion 6,
    caracterizado por que el radical de profarmaco esta seleccionado del grupo consistente en
    imagen20
    con
    R10 y R11, de manera independiente entre sf, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo, que tambien puede tener heteroatomos, R12 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, aralquileno, arilo, que tambien puede tener 5 heteroatomos, R13 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    imagen21
    con
    R10 y R11, de manera independiente entre s^ alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo, que tambien puede tener heteroatomos, R12 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, aralquileno, arilo, que tambien puede tener 10 heteroatomos, R13 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, R14 = O-alquilo C1-C8, NH-alquilo C1-C8, N-(alquilo
    Cl-C8)2,
    imagen22
    imagen23
    con
    15 R15 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    imagen24
    con
    R15 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    R16 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, O-arilo
    imagen25
    con
    R17 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, halogeno,
    imagen26
    con
    R18 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, arilo o heteroarilo, R19 = alquil-CO-, aril-CO- o aminoacido,
    imagen27
    5
    con
    10 R20 = alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado.
  8. 8. Uso de al menos un nucleosido de la formula general IX segun la reivindicacion 3,
    imagen28
    con
    Ri y R2, de manera independiente entre sf, seleccionados del grupo consistente en H, halogeno, OR8, CN, N3, 15 NR6R7 y radicales de profarmaco unidos a traves de un atomo de ox^geno,
    R4 = halogeno,
    R5 = H, alquilo C1-C8 o arilo y
    R6, R7 y R8, de manera independiente entre sf, H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado o acetilo,
    asf como al menos un citostatico para preparar un medicamento para suprimir o reducir el desarrollo de resistencia 20 en el tratamiento con citostaticos.
  9. 9. Uso segun una de las reivindicaciones 6 o 7, caracterizado por que se emplean nucleosidos de la formula X
    imagen29
  10. 10. Uso segun una de las reivindicaciones 6 a 9,
    5 caracterizado por que se emplean el al menos un nucleosido y el al menos un citostatico en una sola formulacion o por que se emplean el al menos un nucleosido y el al menos un citostatico en formulaciones separadas.
  11. 11. Uso de al menos un nucleosido de la formula general I
    imagen30
    con
    10 Ri = halogeno,
    R2 seleccionado del grupo consistente en H, halogeno, OR8, CN, N3, NR6R7 y radicales de profarmaco unidos a traves de un atomo de oxfgeno,
    R3 = H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado, alquileno C1-C8 de cadena lineal o ramificado,
    R4 = H, halogeno, OR8, N3 o NR6R7,
    15 R5 = H, alquilo C1-C8 o arilo y
    R6, R7 y R8, de manera independiente entre s^ H, alquilo C1-C8 de cadena lineal o ramificado o acetilo,
    asf como al menos una sustancia activa para preparar un medicamento para terapia sin resistencia, contra enfermedades infecciosas causadas por bacterias, plasmodios o leishmanias.
  12. 12. Uso segun la reivindicacion 11,
    20 caracterizado por que el al menos un nucleosido y el al menos un citostatico se emplean en una sola formulacion.
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