ES2525251T3 - Dabigatrán liofilizado - Google Patents

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Abstract

Procedimiento para fabricar dabigatrán liofilizado de fórmula I**Fórmula** que comprende las etapas de disolver dabigatrán en disolución acuosa ácida, añadir la disolución a plasma anticoagulado humano y liofilizar la disolución así obtenida.

Description

DESCRIPCIÓN
Dabigatrán liofilizado
La invención se refiere a una forma liofilizada de dabigatrán de fórmula I
I 5 NNCH3NONOHONNH2NHH
a su uso como calibrador en los ensayos para determinar los efectos farmacodinámicos del etexilato de dabigatrán, así como a dichos ensayos.
Antecedentes de la invención
10
El etexilato de dabigatrán de fórmula II
II NNCH3NONOONNHNHOOCH3HEt
es un inhibidor directo oral de la trombina útil en la profilaxis de la tromboembolia en pacientes que se someten a sustitución total de la rodilla o la cadera y también es adecuado para la prevención del accidente cerebrovascular, en particular en pacientes con fibrilación auricular. Aunque no es necesario el seguimiento clínico del etexilato de 15 dabigatrán, sería útil un método de laboratorio fiable para medir los efectos farmacodinámicos del etexilato de dabigatrán. Dicho método podría usarse no solo para el seguimiento de la cinética de la actividad del fármaco en el cuerpo, sino también para ajustar la dosificación y posología del fármaco. Mediante dicho método se podría determinar la concentración de fármaco en el cuerpo del paciente, lo que podría ser útil para evitar la administración de sobredosis. Por lo tanto, el objeto general de la invención es proporcionar un ensayo que sea útil para analizar 20 los efectos farmacodinámicos del etexilato de dabigatrán.
Técnica Anterior
 Stangier et al. (Clinical Pharmacokinetics, Vol. 47, Nº 1 (01-01-2008), páginas 47-59 enseña la 25 determinación de dabigatrán en muestras de sangre mediante LC-MS, que implica un isótopo 13C de dabigatrán como patrón interno, para estudiar la farmacocinética y la farmacodinámica de este fármaco.
 El documento WO 2006/031387 describe reactivos de tromboplastina liofilizados para medir el tiempo de coagulación y vigilar la terapia anticoagulante. 30
 El documento WO 2001/07921 describe composiciones de plasma liofilizadas y composiciones de plasma que comprenden inhibidores de la coagulación como disolución patrón para uso en la medición de parámetros de la coagulación.
35
Descripción detallada de la invención
La presente invención se dirige específicamente a un método para la determinación cuantitativa del dabigatrán en muestras de sangre. El método comprende la determinación del tiempo de coagulación que se inicia mediante
trombina humana purificada.
Para determinar las concentraciones de dabigatrán, resultó ser particularmente útil el siguiente principio de ensayo. Para medir la concentración de dabigatrán, se diluye una parte alícuota de la muestra de plasma de ensayo con disolución salina fisiológica. Después se inicia la coagulación por adición de una cantidad constante de trombina 5 humana altamente purificada, en la forma . El tiempo de coagulación medido es directamente proporcional a la concentración de dabigatrán en la muestra ensayada.
Con el fin de poder determinar la concentración del principio activo en la muestra de sangre investigada mediante la estrategia mencionada en lo que antecede, es necesario tener una curva de calibración generada que efectúe una 10 correlación entre el tiempo de coagulación y la concentración de dabigatrán en la posible muestra.
Con el fin de permitir generar dicha curva de calibración, el producto de ensayo tiene que contener patrones de dabigatrán de una concentración definida que se pueden enviar junto con el producto de ensayo. En la presente invención, la expresión "patrón de dabigatrán" también se puede sustituir por la expresión "calibrador de 15 dabigatrán". Dichos patrones tienen que ser estables y la cantidad de fármaco tiene que ser estable cuando el patrón se almacena a -20ºC o superior. Los patrones deben poder aplicarse fácilmente en el sistema de ensayo con el fin de asegurar que se puede establecer fácilmente una curva de calibración fiable.
El compuesto de fórmula I (dabigatrán) es un compuesto que tiende a cristalizar en formas polimórficas diferentes. 20 Además, el compuesto es higroscópico tendiendo, por lo tanto, también a la formación de diferentes formas hidratadas. El compuesto es poco soluble.
El objeto principal de la invención es proporcionar una forma de dabigatrán que se pueda usar como un calibrador o patrón para establecer una curva de calibración en un ensayo de tiempo de coagulación. La presente invención 25 propone como solución a este problema, que el dabigatrán se transfiera a una forma liofilizada como sigue.
Una cantidad definida del fármaco dabigatrán se disuelve en ácido acuoso y se diluye con agua. Esta disolución se usa como una disolución madre para preparar las diferentes muestras de calibrador de dabigatrán. Al plasma anticoagulado humano que se ha obtenido de donantes voluntarios sanos (mezcla de plasma humano) de acuerdo 30 con métodos conocidos en la técnica, se añaden diferentes partes alícuotas de la disolución madre de dabigatrán mencionada en lo que antecede, para dar disoluciones con diferentes concentraciones de dabigatrán. Se transfieren volúmenes específicos de estas disoluciones diferentes a tubos adecuados y se liofilizan hasta sequedad completa en un dispositivo de liofilización adecuado.
35
Por lo tanto, la invención se refiere a un procedimiento para fabricar dabigatrán liofilizado que comprende las etapas de disolver dabigatrán en disolución acuosa ácida, añadir la disolución al plasma anticoagulado humano y liofilizar la disolución así obtenida.
La disolución acuosa ácida usada para la disolución del dabigatrán se caracteriza preferiblemente por un pH < 3, 40 más preferiblemente < 2. Los ácidos se seleccionan preferiblemente de entre ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido acético, ácido fumárico, ácido cítrico, ácido tartárico y ácido maleico. Tiene un interés particular el ácido clorhídrico.
El plasma anticoagulado humano se puede obtener de acuerdo con métodos conocidos en la técnica. 45 Preferiblemente es plasma humano tratado con citrato.
El dabigatrán liofilizado de acuerdo con la invención se reconstituye fácilmente y, por lo tanto, es útil como calibrador para determinar la concentración de dabigatrán en muestras de sangre. Por lo tanto, la invención se refiere además al dabigatrán liofilizado que se puede obtener de acuerdo con el método mencionado en lo que 50 antecede.
Además, la invención se refiere al uso del dabigatrán liofilizado de acuerdo con la invención como un agente calibrador en un ensayo. En particular, la invención se refiere al uso del dabigatrán liofilizado de acuerdo con la invención como un agente calibrador en un ensayo de anticoagulación. 55
La invención se refiere además, a un ensayo para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre, que comprende el uso de dabigatrán liofilizado como calibrador. La invención se refiere además, al ensayo mencionado antes, caracterizado por que la concentración de dabigatrán se determina por medición del tiempo de coagulación de la muestra de sangre. La invención se refiere además, al ensayo mencionado antes, en el que la 60 coagulación se inicia por adición de una cantidad constante de trombina humana altamente purificada en la forma .
En otro objeto de la invención, se proporciona un kit de ensayo que contiene el calibrador dabigatrán de acuerdo con la invención. Por consiguiente, la invención se refiere, además, a un ensayo para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre, que comprende el uso de dabigatrán liofilizado obtenido de acuerdo con el método mencionado en lo que antecede.
5
La invención se refiere además, a un kit que consiste en un ensayo para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre junto con dabigatrán liofilizado obtenido de acuerdo con el método mencionado en lo que antecede.
La invención se refiere además, al kit mencionado antes en el que el ensayo para determinar la concentración de 10 dabigatrán en una muestra de sangre comprende un reactivo 1 que es un plasma anticoagulado humano y un reactivo 2 que comprende trombina humana altamente purificada en la forma . En otra realización preferida, el kit contiene el reactivo 1 y el reactivo 2 en forma liofilizada.
Con las muestras de dabigatrán liofilizadas de concentraciones conocidas está disponible un sistema de control de 15 calidad. La medición del tiempo de coagulación de la muestra de control de calidad y la posterior determinación de la concentración de dabigatrán correspondiente usando la curva de calibración permite la determinación de la exactitud del ensayo. La exactitud del ensayo se evalúa por comparación de la concentración diana conocida de la muestra de control de calidad de dabigatrán y la concentración calculada de esta muestra de control de calidad usando el tiempo de coagulación y la curva de calibración. 20
Por lo tanto, en otra realización la invención se refiere al uso del dabigatrán liofilizado de acuerdo con la invención, para determinar la exactitud de un ensayo. En particular, la invención se refiere al uso del dabigatrán liofilizado de acuerdo con la invención, para determinar la exactitud de un ensayo de anticoagulación.
25
Los Ejemplos que se dan a continuación sirven para ilustrar la presente invención con más detalle.
Materiales y Métodos:
Los ensayos de coagulación cronométricos se llevaron a cabo con dos coagulómetros de bola Behnk CL4 (Behnk 30 Elektronik, Alemania). Este equipo se usó conforme a las instrucciones de operación del fabricante.
El kit de ensayo del inhibidor de trombina usado en el ensayo de acuerdo con la invención, está disponible en el comercio. Lo fabrica HYPHEN BioMed, Francia, y se puede obtener en el comercio como ensayo de inhibidores de trombina Hemoclot®. Los componentes del kit que se usan en la presente invención son los siguientes 2 reactivos: 35
Reactivo 1: mezcla de plasma normal tratada con citrato, liofilizada
Reactivo 2: trombina cálcica humana altamente purificada (en forma alfa) estabilizada con aditivos y liofilizada.
El comportamiento del ensayo de coagulación con muestras plasmáticas de dabigatrán se evaluó con el programa 40 de evaluación del método analítico "Analyse-it" para Excel, Versión 2.09, Software Analyse-it, Ltd. PO Box 103, Leeds LS27 7WZ Inglaterra, Reino Unido.
A) Preparación de calibradores de dabigatrán liofilizado
45
Se disuelven 5,55 mg de dabigatrán de fórmula I en 200 µL de HCl 1 M y se diluyen en agua ultrapura para dar un volumen final de 50 mL. Esta solución madre de dabigatrán 111 µg/mL se almacena a 4ºC. El plasma humano tratado con citrato de donantes voluntarios sanos (mezcla de plasma humano) se usa para la preparación de calibradores de dabigatrán. Se diluyen partes alícuotas de la disolución madre de dabigatrán en mezcla de plasma humano tratado con citrato para dar disoluciones con diferentes concentraciones finales de dabigatrán, dabigatrán 50 100, 500, 1500 y 2000 nM.
Se transfieren partes alícuotas de 500 µL de volumen de la mezcla de plasma humano con dabigatrán 100, 500, 1500 o 2000 nM a tubos de polipropileno y se liofilizan usando una centrífuga de vacío Christ Alpha RVC, Typ CMC-2 hasta sequedad completa durante aproximadamente 8 horas (presión: 3 mbar). Los calibradores de dabigatrán liofilizados se almacenan a -20°C. 55
B) Preparación de patrones (curva de calibración)
Se añade a cada vial de los calibradores de dabigatrán obtenidos de acuerdo con la etapa A de dabigatrán 0 (blanco), 100, 500, 1500 y 2000 nM, 0,5 mL de agua ultrapura. Se mezclan suavemente. Se incuban durante 15 min 60 a temperatura ambiente.
El plasma calibrador debe diluirse 1:8, por ejemplo, 100 µL de patrón y 700 µL de NaCl fisiológico.
Se añaden con pipeta 50 µL de muestra de calibrador a las cubetas del coagulómetro (determinación por
duplicado).
Se mide cada calibrador como se describe en el "procedimiento de medición".
C) Preparación de Reactivos:
5
Se calcula el volumen necesario de reactivos para la cantidad diaria de muestras. Se disuelve cada vial de reactivo 1 y 2 en 1 mL de agua ultrapura; se mezclan suavemente, se incuban durante 15 min a temperatura ambiente.
Estabilidad de los reactivos preparados:
Reactivo 1: +18 - +25°C 24 h 10
+2 - +8°C 48 h
-20°C 2 meses
Reactivo 2: +18 - +25°C 24 h
+2 - +8°C 48 h
-20°C 2 meses 15
D) Recogida y preparación de muestras de plasma:
Se recogen muestras de sangre en anticoagulante citrato trisódico 0,109 M (proporción 9:1 de sangre/citrato). Se decanta el líquido sobrenadante del plasma después de una centrifugación de 20 min a 2,5 g. 20
Estabilidad del plasma: +18 - +25°C 8 h
+2 - +8°C 24 h
<-20°C hasta 6 meses
25
Se descongelan las muestras a +37°C durante un máximo de 45 min. Las muestras descongeladas se mantienen a temperatura ambiente. El plasma de muestra debe diluirse 1:8, por ejemplo, 100 µL de muestra y 700 µL de NaCl fisiológico.
E) Procedimiento de medición 30
El siguiente procedimiento de medición se realiza primero con las muestras de calibrador preparadas de acuerdo con la etapa B. Después de la preparación de la curva de calibración, las muestras de plasma preparadas de acuerdo con la etapa D se miden de manera correspondiente.
35
Se mezclan las muestras (calibrador o plasma) por agitación suave. Se transfieren 50 µL de cada muestra de plasma (obtenida de acuerdo con la Etapa B o D) a 2 cubetas (cada muestra se mide por duplicado). Se añaden con pipeta 100 µL de Reactivo 1 (preincubado a 37ºC) a la cubeta. Al mismo tiempo, se inicia un periodo de incubación de 1 minuto activando un temporizador. Al final del tiempo de incubación, se añaden 100 µL de Reactivo 2 (preincubado a 37ºC) a la cubeta. Se inicia un cronómetro. Se mide el tiempo hasta que se detiene la rotación de 40 la bola en el coagulómetro de bola Behnk CL4 (tiempo de coagulación [s]). El software del instrumento calcula el tiempo de coagulación medio [s] de la medición por duplicado. El resultado de ambas determinaciones y el tiempo de coagulación medio se documentan en papel impreso.
F) Generación de la curva de calibración: 45
Los tiempos de coagulación obtenidos por medición de las muestras de calibrador con 0 (muestra en blanco), 100, 500, 1500 y 2000 nM (son posibles intervalos de concentraciones más amplios y concentraciones adicionales, por ejemplo, de 250 nM) se representan gráficamente frente a la concentración de calibrador de dabigatrán en una gráfica de dispersión usando un programa de hoja de cálculo (MS Excel o similar). Se establece una curva de 50 calibración por análisis de regresión lineal simple.
A modo de ejemplo, en la figura 1 se representa una curva de calibración basada en los patrones de dabigatrán con concentraciones de 50, 100, 250, 500, 1000, 1500 y 2000 nM, respectivamente.
Determinando el tiempo de coagulación, la concentración de dabigatrán correspondiente en una muestra de plasma 55 se puede determinar directamente a partir de la línea de calibración.
Con muestras de dabigatrán liofilizado de concentraciones definidas, por ejemplo, de 100, 500 y 1500 nM, está disponible un sistema de control de calidad. La medición del tiempo de coagulación de la muestra de control de calidad y la posterior determinación de la concentración de dabigatrán correspondiente usando la curva de 60 calibración permite la determinación de la exactitud del ensayo. La exactitud del ensayo se evalúa por comparación de la concentración diana conocida de la muestra de control de calidad de dabigatrán y la concentración calculada de esta muestra de control de calidad usando el tiempo de coagulación y la curva de calibración.

Claims (16)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Procedimiento para fabricar dabigatrán liofilizado de fórmula I
    I
    que comprende las etapas de disolver dabigatrán en disolución acuosa ácida, añadir la disolución a plasma 5 anticoagulado humano y liofilizar la disolución así obtenida.
  2. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque la disolución acuosa ácida usada para la disolución de dabigatrán tiene un pH < 3.
    10
  3. 3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la disolución acuosa ácida se prepara usando ácidos seleccionados de entre ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido acético, ácido fumárico, ácido cítrico, ácido tartárico y ácido maleico.
  4. 4. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque la disolución acuosa ácida se prepara usando 15 ácido clorhídrico.
  5. 5. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-4, caracterizado porque el plasma anticoagulado humano es plasma humano tratado con citrato o plasma anticoagulado con EDTA.
    20
  6. 6. El dabigatrán liofilizado que se puede obtener de acuerdo con el procedimiento según una de las reivindicaciones 1-5.
  7. 7. Uso de dabigatrán liofilizado según la reivindicación 6 como un agente calibrador.
    25
  8. 8. Uso según la reivindicación 7, como un agente calibrador en un ensayo de anticoagulación.
  9. 9. Ensayo para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre, que comprende el uso de dabigatrán liofilizado según la reivindicación 6.
    30
  10. 10. Ensayo según la reivindicación 9, caracterizado porque la concentración de dabigatrán se determina por medición del tiempo de coagulación de la muestra de sangre.
  11. 11. Ensayo según la reivindicación 10, caracterizado porque la coagulación se inicia por adición de una cantidad constante de trombina humana altamente purificada en la forma . 35
  12. 12. Un kit para determinar la concentración de dabigatrán en una muestra de sangre en un ensayo según las reivindicaciones 9 a 11, que comprende dabigatrán según la reivindicación 6.
  13. 13. Un kit según la reivindicación 12 para uso en el ensayo según las reivindicaciones 9 a 11 que comprende un 40 reactivo 1 que es plasma anticoagulado humano y un reactivo 2 que comprende trombina humana altamente purificada en la forma .
  14. 14. Un kit según la reivindicación 13, en el que el reactivo 1 es plasma anticoagulado humano, y el reactivo 2 que comprende trombina humana altamente purificada en la forma  están liofilizados. 45
  15. 15. Uso del dabigatrán liofilizado según la reivindicación 6, para determinar la exactitud de un ensayo.
  16. 16. Uso según la reivindicación 15, para determinar la exactitud de un ensayo de anticoagulación.
ES10701670.1T 2009-02-02 2010-01-27 Dabigatrán liofilizado Active ES2525251T3 (es)

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EP09151865 2009-02-02
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2288335A1 (en) * 2008-03-28 2011-03-02 Boehringer Ingelheim International GmbH Process for preparing orally administered dabigatran formulations
TWI436994B (zh) 2008-07-14 2014-05-11 Boehringer Ingelheim Int 製備含有達比加群（ｄａｂｉｇａｔｒａｎ）之藥物組合物的新穎方法
AU2009315729A1 (en) 2008-11-11 2010-05-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh Method for treating or preventing thrombosis using dabigatran etexilate or a salt thereof with improved safety profile over conventional warfarin therapy
JP5801826B2 (ja) * 2010-03-01 2015-10-28 ラティオファルム ゲー・エム・ベー・ハー ダビガトランエテキシラートを含有する経口用医薬組成物
US20130345262A1 (en) 2012-06-25 2013-12-26 Boehringer Ingelheim International Gmbh Method for prevention of stroke
CN102793699B (zh) * 2012-08-06 2014-06-04 严轶东 一种含有达比加群酯的药用组合物
US9176154B2 (en) * 2012-12-12 2015-11-03 Bio-Rad Laboratories, Inc. Calibration process and system
JP6278454B2 (ja) * 2013-03-29 2018-02-14 株式会社Ｌｓｉメディエンス 生体試料中の直接トロンビン阻害薬の測定試薬及び測定方法
JP7110360B2 (ja) 2017-10-09 2022-08-01 テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー 凍結乾燥方法
US11604026B2 (en) 2019-03-14 2023-03-14 Terumo Bct Biotechnologies, Llc Lyophilization loading tray assembly and system

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6087380A (en) 1949-11-24 2000-07-11 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Disubstituted bicyclic heterocycles, the preparations and the use thereof as pharmaceutical compositions
PE121699A1 (es) * 1997-02-18 1999-12-08 Boehringer Ingelheim Pharma Heterociclos biciclicos disustituidos como inhibidores de la trombina
US5858289A (en) * 1997-02-24 1999-01-12 Global Consulting, Inc. Process for preparing compressed shape of ceramic fiber
US6414008B1 (en) 1997-04-29 2002-07-02 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Disubstituted bicyclic heterocycles, the preparation thereof, and their use as pharmaceutical compositions
WO2001007921A2 (en) 1999-07-23 2001-02-01 Medical Analysis Systems, Inc. Stabilized coagulation control reagent
CN1234363C (zh) * 2003-04-15 2006-01-04 上海医药工业研究院 含有右雷佐生的冻干组合物及其制备方法
US7148067B2 (en) * 2004-08-31 2006-12-12 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Thromboplastin reagents
DE102005020002A1 (de) * 2005-04-27 2006-11-02 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Physiologisch verträgliche Salze von 3-[(2-{[4-(Hexyloxycarbonylamino-imino-methyl)-phenylamino]-methyl}-1-methyl-1H-benzimidazol-5-carbonyl)-pyridin-2-yl-amino]-propionsäure-ethylester
DE102005028018A1 (de) * 2005-06-16 2006-12-21 Dade Behring Marburg Gmbh Verfahren zur Standardisierung von Gerinnungstesten
CN1786023A (zh) * 2005-07-27 2006-06-14 西安绿谷制药有限公司 灵芝多糖肽标准品及其制备方法与应用
US8158152B2 (en) * 2005-11-18 2012-04-17 Scidose Llc Lyophilization process and products obtained thereby
CN101489549A (zh) * 2006-07-17 2009-07-22 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 直接凝血酶抑制剂在心血管领域的新的适应症
CA2657269A1 (en) * 2006-07-17 2008-01-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh New indications for direct thrombin inhibitors
CN101313912A (zh) * 2007-05-31 2008-12-03 复旦大学附属中山医院 松果菊苷在制备治疗帕金森病的药物中的应用
CN101105498B (zh) * 2007-08-08 2011-06-01 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 人、大鼠、小鼠hsp70双抗夹心法检测试剂盒
CN101135688A (zh) * 2007-09-27 2008-03-05 宁波美康生物科技有限公司 血清中果糖胺nbt测定方法

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