ES2389042T3

ES2389042T3 - Compuestos de piridina

Info

Publication number: ES2389042T3
Application number: ES09718458T
Authority: ES
Inventors: Martin Bolli; Cyrille Lescop; Boris Mathys; Claus Mueller; Oliver Nayler; Beat Steiner
Original assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2008-03-06
Filing date: 2009-03-03
Publication date: 2012-10-22
Anticipated expiration: 2029-03-03
Also published as: EP2262799B1; US20110028448A1; JP5411877B2; EP2262799A1; TW200942530A; JP2011513384A; CN101965345B; CN101965345A; AR070820A1; WO2009109906A1; CA2714665A1

Abstract

Un compuesto de Fórmula (I) **Fórmula**Fórmula (I)en el queA representa **Fórmula**en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al grupo piridina de Fórmula (I);R1 representa C1-4-alquilo;R2 representa hidrógeno o C1-3-alquilo;o R1 y R2, en conjunto con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo azetidina, o un anillo pirrolidina;R3 representa C1-3-alquilo;R4 representa hidrógeno, metoxilo, o metilo;R5 representa hidrógeno, C1-3-alquilo, o metoxilo;R6 representa -CH2-(CH2)n-NR61R62, -CH2-CH2-CONR61R62, 1-(3-carboxi-azetidinil)-3-propionilo, 1-(2-carboxi-pirrolidinil)-3-propionilo, 1-(3-carboxi-pirrolidinil)-3-propionilo, hidroxilo, hidroxi-C2-4-alcoxilo, di-(hidroxi-C1-2-alquil)-C1-2-alcoxilo, 2,3-dihidroxipropoxilo, -OCH2-(CH2)n-NR61R62, -OCH2-(CH2)n-NHCOR63,2-[(ácido azetidin-3-carboxílico)-1-il]-etoxilo, 2-[(ácido pirrolidin-2-carboxílico)-1-il]-etoxilo, 2-[(ácidopirrolidin-3-carboxílico)-1-il]-etoxilo, -OCH2-CH(OH)-CH2-NR61R62, -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR63, 3-[(ácido azetidin-3-carboxílico)-1-il]-2-hidroxi-propoxilo, 2-hidroxi-3-[(ácido pirrolidin-2-carboxílico)-1-il]-propoxilo, o 2-hidroxi-3-[(ácido pirrolidin-3-carboxílico)-1-il]-propoxilo;R61 representa hidrógeno, metilo, 2-hidroxi-etilo, 2-aminoetilo, 2-(C1-4-alquilamino)etilo, 2-(di-(C1-4-alquil)amino)etilo, carboximetilo, (C1-4-alquilcarboxi)metilo, 2-carboxietilo, o 2-(C1-4-alquilcarboxi)etilo;R62 representa hidrógeno o metilo;R63 representa hidroximetilo, 2-hidroxi-etilo, aminometilo, metilaminometilo, dimetilaminometilo, o 2-metilamino-etilo;n representa el entero 1, ó 2; yR7 representa hidrógeno, metilo, o cloro;o una sal de tal compuesto.

Description

Compuestos de piridina.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a agonistas del receptor S1P1/EDG1 de Fórmula (I) y su uso como ingredientes activos en la preparación de composiciones farmacéuticas. La invención también concierne a aspectos relacionados, incluyendo procedimientos para la preparación de los compuestos, composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de Fórmula (I), y su uso como compuestos que mejoran la función vascular y como agentes inmunomoduladores, ya sea por sí solos o en combinación con otros compuestos activos o con otras terapias.

Antecedentes de la invención

El sistema inmune humano está diseñado para defender al cuerpo de micro organismos y substancias extrañas que causan infecciones o enfermedad. Complejos mecanismos de regulación aseguran que la respuesta inmune esté dirigida en contra de la substancia u organismo intruso y no en contra del huésped. En algunos casos, estos mecanismos de control se desregulan y se pueden desarrollar respuestas autoinmunes. Una consecuencia de una respuesta inflamatoria descontrolada es daño severo de órganos, células, tejidos o articulaciones. Con los tratamientos actuales, frecuentemente se suprime todo el sistema inmune, y la capacidad del cuerpo para reaccionar frente a las infecciones también resulta severamente comprometida. Los fármacos típicos en esta clase incluyen azatioprina, clorambucil, ciclofosfamida, ciclosporina, o metotrexato. Los corticosteroides que reducen la inflamación y suprimen la respuesta inmune, pueden causar efectos secundarios cuando se los emplea en tratamientos de largo plazo. Los fármacos anti–inflamatorios no esteroidales (NSAIDs) pueden reducir el dolor y la inflamación; sin embargo, pueden presentar efectos secundarios considerables. Los tratamientos alternativos incluyen agentes que activan o bloquean la señalización de citoquinas.

Compuestos oralmente activos que tengan propiedades inmunomoduladoras, que no comprometan las respuestas inmunes y que tengan efectos secundarios reducidos, mejorarían significativamente los tratamientos actuales de las enfermedades inflamatorias descontroladas.

En el campo de los transplantes de órganos la respuesta inmune del huésped debe ser suprimida para evitar el rechazo de los órganos. Los receptores de transplantes de órganos pueden sufrir algo de rechazo incluso cuando están tomando fármacos inmunosupresores. El rechazo ocurre más frecuentemente en las primeras pocas semanas después del transplante, pero también pueden ocurrir episodios de rechazo meses o incluso años después del transplante. Comúnmente se emplean combinaciones de tres o cuatro medicamentos para proveer una protección máxima contra el rechazo minimizando los efectos secundarios. Los fármacos actualmente empleados para el tratamiento del rechazo de órganos transplantados interfieren con rutas intracelulares separadas en la activación de glóbulos blancos de tipo T o de tipo B. Los ejemplos de tales fármacos son ciclosporina, daclizumab, basiliximab, everolimus, o FK506, que interfieren con la liberación de citoquina o con su señalización; azatioprina o leflunomida, que inhiben la síntesis de nucleótidos; o 15–deoxispergualin, un inhibidor de la diferenciación de leucocitos.

Los efectos benéficos de terapias inmunosupresivas amplias se relacionan con sus efectos; sin embargo, la inmunosupresión generalizada que producen estos fármacos disminuye la defensa del sistema inmune en contra de infección y enfermedades. Más aún, los fármacos inmunosupresores estándar son frecuentemente empleados en altas dosis, y pueden causar o acelerar el daño de los órganos.

Descripción de la invención

La presente invención provee nuevos compuestos de Fórmula (I) que son agonistas del receptor S1P1/EDG1 acoplado a la proteína G y tienen un efecto inmunomodulador potente y de larga duración que se consigue mediante la reducción del número de linfocitos T y B circulantes e infiltrantes, sin afectar su maduración, memoria o expansión. La reducción de linfocitos T / B circulantes como resultado de agonismo de S1P1/EDG1, posiblemente en combinación con la mejoría observada de la función de capas de las células endoteliales asociada con la activación de S1P1/EDG1, hace útiles tales compuestos para tratar las enfermedades inflamatorias descontroladas y para mejorar la función vascular.

Los compuestos de la presente invención pueden ser empleados por sí solos o en combinación con fármacos estándar que inhiben la activación de células T, para proveer una nueva terapia de inmunomodulación con una propensión reducida a las infecciones cuando se la compara con la terapia de inmunosupresión estándar. Más aún, los compuestos de la presente invención pueden ser empleados en combinación con dosis reducidas de las terapias de inmunosupresión tradicionales, para proveer por una parte una actividad de inmunomodulación efectiva, mientras por otra parte se reduce el daño a los órganos asociado con altas dosis de fármacos inmunosupresores estándar. La observación de la mejoría de la función de capas de células endoteliales asociada con la activación S1P1/EDG1 provee beneficios adicionales de compuestos para mejorar la función vascular.

La secuencia de nucleótidos y la secuencia de aminoácidos para el receptor S1P1/EDG1 humano son conocidas en la técnica, y están publicadas en, por ejemplo: Hla, T., y Maciag, T. J. Biol Chem. 265 (1990), 9308–9313; WO 91/15583 publicado el 17 de octubre de 1991; WO 99/46277 publicada el 16 de septiembre de 1999. La potencia y la eficacia de los compuestos de Fórmula (I) se evalúan, respectivamente, empleando un ensayo GTPyS para determinar los valores EC50 y mediante la medición de los linfocitos en circulación en rata después de administración oral (ver en Ejemplos).

i) La invención se refiere a nuevos compuestos de piridina de Fórmula (I)

R4 R5

R1 N R6N

A R2

R3 R7

Fórmula (I)

en la que

A representa

ON, NOoNN,

en la que el asterisco indica el enlace que está unido al grupo piridina de Fórmula (I); 10 R1 representa C1–4–alquilo;

R2 representa hidrógeno o C1–3–alquilo;

o R1 y R2, en conjunto con el nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo azetidina o un anillo pirrolidina; R3 representa C1–3–alquilo; R4 representa hidrógeno, metoxilo, o metilo (de manera destacable hidrógeno, o metoxilo);

15 R5 representa hidrógeno, C1–3–alquilo, o metoxilo;

R6 representa –CH2–(CH2)n–NR61R62,–CH2–CH2–CONR61R62, 1–(3–carboxi–azetidinil)–3–propionilo, 1–(2–carboxi– pirrolidinil)–3–propionilo, 1–(3–carboxi–pirrolidinil)–3–propionilo, hidroxilo, hidroxi–C2–4–alcoxilo, di–(hidroxi–C1–2– alquil)–C1–2–alcoxilo, 2,3–dihidroxipropoxilo, –OCH2–(CH2)n–NR61R62,–OCH2–(CH2)n–NHCOR63, 2–[(ácido azetidin– 3–carboxílico)–1–il]–etoxilo, 2–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]–etoxilo, 2–[(ácido pirrolidin–3–carboxílico)–1–il]–

20 etoxilo, –OCH2–CH(OH)–CH2–NR61R62,–OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63, 3–[(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–2– hidroxipropoxilo, 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]–propoxilo, o 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–3– carboxílico)–1–il]–propoxilo;

R61

representa hidrógeno, metilo, 2–hidroxietilo, 2–aminoetilo, 2–(C1–4–alquilamino)etilo, 2–(di–(C1–4– alquil)amino)etilo, carboximetilo, (C1–4–alquilcarboxi)metilo, 2–carboxietilo, o 2–(C1–4–alquilcarboxi)etilo; 25 R62 representa hidrógeno o metilo; R63 representa hidroximetilo, 2–hidroxietilo, aminometilo, metilaminometilo, dimetilaminometilo, o 2–metilamino–etilo; n representa el entero 1, ó 2; y R7 representa hidrógeno, metilo, o cloro. Una sub–realización particular que consiste en compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i), en la que

30 R4 representa hidrógeno o metoxilo. Otra sub–realización particular consiste en compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i) en la que R4 representa metilo.

Los términos generales empleados antes y después en este texto tienen de manera preferentemente, en esta divulgación, los siguientes significados, salvo que se indique en contra: El término “Cx–y–alquilo” (x e y siendo cada uno un entero) se refiere a una cadena de hidrocarburos saturada lineal

o ramificada con x a y átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo C1–4–alquilo contiene desde uno hasta cuatro átomos de carbono. Los ejemplos representativos de grupos C1–4–alquilo incluyen metilo, etilo, n–propilo, iso– propilo, n–butilo, iso–butilo, sec–butilo, tert–butilo. Los ejemplos preferidos de grupos C1–4–alquilo son metilo, etilo,

5 n–propilo, iso–propilo, n–butilo, e iso–butilo. Los ejemplos preferidos de grupos C1–3–alquilo son metilo y etilo.

El término “Cx–y–alcoxilo” (x e y siendo cada uno un entero) se refiere a un grupo alquil–O– en el cual el grupo alquilo se refiere a una cadena de hidrocarburos lineal ramificada con x a y átomos de carbono. Por ejemplo, un grupo C2– 4–alcoxilo contiene dos a cuatro átomos de carbono e incluye etoxilo, n–propoxilo, iso–propoxilo, n–butoxilo, iso– butoxilo, sec–butoxilo, y tert–butoxilo. Se prefieren etoxilo, n–propoxilo, e iso–propoxilo. Los grupos C1–2–alcoxilo se

10 refieren a metoxilo y etoxilo.Los ejemplos de grupos “hidroxi–C2–4–alcoxilo” son 2–hidroxi–etoxilo, y 3–hidroxi– propoxilo. Un ejemplo de un grupo “di–(hidroxi–C1–2–alquil)–C1–2–alcoxilo” es di(hidroximetil)–metoxilo.

ii) Una segunda realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i), en la que A representa

ON o NO .

15 iii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i), en los que A representa

iv) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a iii), en la que R1 representa C1–3–alquilo.

20 v) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a iii), en la que R1 representa C2–3–alquilo.

vi) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a v), en la que R2 representa metilo o etilo.

vii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las 25 realizaciones i) a vi), en la que R3 representa metilo o etilo.

viii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a vi), en la que R3 representa metilo.

ix) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a viii), en la que R4 representa hidrógeno.

30 x) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a ix), en la que R4 representa hidrógeno, R5 representa C1–3–alquil o metoxilo, y R7 representa metilo

o cloro.

xi) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con las realizaciones ix) o x), en la que R5 representa C1–2–alquil o metoxilo.

35 xii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con las realizaciones ix) o x), en la que R5 representa etilo o metoxilo.

xiii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con las realizaciones ix) o x), en la que R5 representa etilo, y R7 representa metilo.

xiv) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las

40 realizaciones i) a xiii), en los que R6 representa –CH2–CH2–CONR61R62, 1–(3–carboxi–azetidinil)–3–propionilo, 1–(2– carboxi–pirrolidinil)–3–propionilo, 1–(3–carboxi–pirrolidinil)–3–propionilo, hidroxi–C2–4–alcoxilo, di–(hidroxi–C1–2– alquil)–C1–2–alcoxilo, 2,3–dihidroxipropoxilo, –OCH2–(CH2)n–NR61R62,–OCH2–(CH2)n–NHCOR63, 2–[(ácido azetidin– 3–carboxílico)–1–il]–etoxilo, 2–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]–etoxilo, 2–[(ácido pirrolidin–3–carboxílico)–1–il]– etoxilo, –OCH2–CH(OH)–CH2–NR61R62,–OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63, 3–[(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–2–

45 hidroxipropoxilo, 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]–propoxilo, o 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–3– carboxílico)–1–il]–propoxilo.

xv) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a xiv), en la que R6 representa –CH2–CH2–CONR61R62, 1–(3–carboxi–azetidinil)–3–propionilo, 1–(2– carboxi–pirrolidinil)–3–propionilo, 1–(3–carboxi–pirrolidinil)–3–propionilo, hidroxi–C2–4–alcoxilo, di–(hidroxi–C1–2– alquil)–C1–2–alcoxilo, 2,3–dihidroxipropoxilo, –OCH2–(CH2)n–NHCOR63, 2–[(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–

5 etoxilo, –OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63, o 3–[(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–2–hidroxipropoxilo.

xvi) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a xv), en la que R6 representa –CH2–CH2–CONR61R62, 2,3–dihidroxipropoxilo, o –OCH2–CH(OH)– CH2–NHCOR63.

xvii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las

10 realizaciones i) a xiv), en la que R6 representa di–(hidroxi–C1–2–alquil)–C1–2–alcoxilo, 2,3–dihidroxipropoxilo, –OCH2– CH(OH)–CH2–NR61R62,–OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63, 3–[(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–2–hidroxipropoxilo, 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]–propoxilo, o 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–3–carboxílico)–1–il]– propoxilo.

xviii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las 15 realizaciones i) a xvii), en la que R6 representa 2,3–dihidroxipropoxilo, o –OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63.

xix) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a xviii), en la que R6 representa –OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63.

xx) Otra particular realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a xvii), en la que R61 representa metilo, 2–hidroxietilo, o carboximetilo (de manera especial 2–

20 hidroxietilo, o carboximetilo).

xxi) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a xvii) o xx), en la que R62 representa hidrógeno.

xxii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) a xxi), en la que R63 representa hidroximetilo.

25 xxiii) Otra realización de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con una cualquiera de las realizaciones i) o iv) a xxi), en la que A representa

NN . xxiv) Una realización adicional de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i), en la que está presente al menos una (preferentemente todas) de las características siguientes: A representa

R1 representa C2–3–alquilo;

R2 representa C1–2–alquilo;

o R1 y R2, en conjunto con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo pirrolidina; 35 R3 representa C1–2–alquilo;

R4 representa hidrógeno;

R5 representa C1–2–alquilo;

R6 representa –CH2–CH2–CONR61R62,–OCH2–CH(OH)–CH2–NH2, 1–(3–carboxi–azetidinil)–3–propionilo, hidroxilo, 2,3–dihidroxipropoxilo, o –OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63; 40 R61 representa hidrógeno, 2–hidroxietilo, o carboximetilo; R62 representa hidrógeno; R63 representa hidroximetilo;

R7 representa metilo.

xxv) Una realización adicional de la invención se refiere a compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i), en la que está presente al menos una (preferentemente todas) de las características siguientes::

• A representa

ON oNN;

• R1 representa C2–3–alquilo;

R2 representa C1–2–alquilo;

o R1 y R2, en conjunto con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo pirrolidina;

•: R3 representa C1–2–alquilo;

•: R4 representa hidrógeno; R5 representa C1–3–alquil o metoxilo; y R7 representa metilo o cloro; o

R4 representa metilo o metoxilo (de manera destacable metoxilo); y R5 y R7 ambos representan hidrógeno;

•: R6 representa –CH2–CH2–CONR61R62,–OCH2–CH(OH)–CH2–NH2,–OCH2–CH(OH)–CH2–NH–CH3,– OCH2–CH(OH)–CH2–NH–CH2–COOH, 1–(3–carboxi–azetidinil)–3–propionilo, hidroxilo, 2,3–dihidroxipropoxilo, o–OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63;

•: R61 representa 2–hidroxietilo, o carboximetilo;

•: R62 representa hidrógeno;

•: R63 representa hidroximetilo.

Los compuestos de Fórmula (I) pueden contener uno o más centros estereogénicos o de asimetría, tales como uno

o más átomos de carbono asimétricos. Por lo tanto, los compuestos de Fórmula (I) pueden estar presentes como mezclas de estereoisómeros, o preferentemente como estereoisómeros puros. De manera especial, los compuestos en los que R6 representa un derivado 2–hidroxi–propoxilo (tal como por ejemplo 2,3–dihidroxipropoxilo o –OCH2– CH(OH)–CH2–NHCOR63) pueden estar en configuración (R) o (S). Las mezclas de estereoisómeros pueden ser separadas en una manera conocida por los expertos en la técnica.

Cuando se emplee la forma plural para los compuestos, sales, composiciones farmacéuticas, enfermedades y similares, también se quiere decir un único compuesto, sal o similar.

Cualquier referencia anterior o posterior en este texto a un compuesto de fórmula (I) se debe comprender como refiriéndose también a sus sales, especialmente a sus sales farmacéuticamente aceptables, o a un compuesto de fórmula (I), según sea apropiado y conveniente.

Preferentemente las sales son las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula (I).

El término “sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a sales de adición no tóxicas, orgánicas o inorgánicas, ácidas y/o básicas. Se puede hacer referencia a “Salt selection for basic drugs”, Int. J. Pharm. (1986), 33, 201–217.

Los ejemplos de los compuestos preferidos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i) son seleccionados desde el grupo que consiste en:

N–[(R)–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)–2– hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–[(S)–3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)– 2–hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida;

(S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–propan–1,2–diol;

N–((R)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

(S)–3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)– propan–1,2–diol;

N–[(R)–3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)– 2–hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida;

N–[(S)–3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)– 2–hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida;

ácido (3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–phenil}– propionilamino)–acético;

3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–phenil)–N–(2– hidroxi–etil)–propionamida; y

ácido [3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–phenil)– propionilamino]–acético.

Ejemplos adicionales de compuestos preferidos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i) se seleccionan entre el grupo que consiste en:

N–((S)–3–{2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2,6–dimetil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{2–cloro–4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–metoxi–6–metil–fenoxi}–2– hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–3–metil–fenoxi}–2–hidroxi–propil)– 2–hidroxi–acetamida;

(S)–3–{2–cloro–4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–propan–1,2– diol; y

(S)–3–{2–cloro–4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metoxi–fenoxi}–propan– 1,2–diol.

Los compuestos de Fórmula (I), de acuerdo con la realización i) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser empleados como medicamentos, por ejemplo, en la forma de una composición farmacéutica para administración entérica o parenteral, y son adecuados para disminuir el número de linfocitos circulantes y para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con un sistema inmune activado.

La producción de composiciones farmacéuticas puede llevarse a cabo de una manera que sea familiar para cualquier experto en la técnica (ver por ejemplo Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 21a edición (2005), Parte 5, “Pharmaceutical Manufacturing” [publicado por Lippincott Williams & Wilkins]) llevando los compuestos de Fórmula (I) descritos o sus sales farmacéuticamente aceptables, opcionalmente en combinación con otras substancias terapéuticamente valiosas, a una forma de administración galénica en conjunto con otros materiales portadores sólidos o líquidos, no tóxicos, inertes adecuados, farmacéuticamente aceptables, y si se desea, con los adyuvantes farmacéuticos acostumbrados.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de Fórmula (I) son útiles para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con un sistema inmune activado.

Tales enfermedades o trastornos incluyen el rechazo de órganos, tejido o células transplantados; enfermedades inserto–versus–huésped producidas por el transplante; síndromes autoinmunes incluyendo artritis reumatoide; lupus sistémico eritematoso; síndrome antifosfolípidos; tiroiditis de Hashimoto; tiroiditis linfocítica; esclerosis múltiple; miastenia gravis; diabetes tipo I; uveitis; episcleritis; escleritis; enfermedad de Kawasaki, uveo–retinitis; uveitis posterior; uveitis asociada con la enfermedad de Behcet; síndrome de uveomeningitis; encefalomielitis alérgica; vasculopatía crónica de aloinjerto; enfermedades autoinmunes post–infecciosas incluyendo fiebre reumática y glomerulonefritis post–infecciosa; enfermedades de la piel inflamatorias e hiperproliferativas; psoriasis; artritis psoriásica; dermatitis atópica; miopatía; miositis; osteomielitis; dermatitis de contacto; dermatitis eczematosa; dermatitis seborreica; liquen planus; pénfigo; bolo penfigoide; epidermolisis bulosa; urticaria; angioedema; vasculitis; eritema; eosinofilia cutánea; acné; escleroderma; alopecia areata; queratoconjuntivitis; conjuntivitis vernal; queratitis; queratitis herpética; distrofia epitelial de la córnea; leucoma de la córnea; pénfigo ocular; úlcera de Mooren; queratitis ulcerante; escleritis; oftalmopatía de Graves; síndrome de Vogt–Koyanagi–Harada; sarcoidosis; alergias al polen; enfermedad reversible obstructiva de las vías respiratorias; asma bronquial; asma alérgico; asma intrínseco; asma extrínseco; asma al polvo; asma crónico o inveterado; asma tardío e hiperrespuesta de la vía respiratoria; bronquiolitis; bronquitis; endometriosis; orquitis; úlceras gástricas; enfermedades isquémicas del intestino; enfermedades inflamatorias del intestino; enterocolitis necrotizante; lesiones intestinales asociadas con quemaduras térmicas; enfermedad celíaca; proctitis; gastroenteritis eosinofílica; mastocitosis; enfermedad de Crohn; colitis ulcerante; daño vascular causado por enfermedades isquémicas y trombosis; aterosclerosis; corazón graso; miocarditis; infarto cardíaco; síndrome de aortitis; cachexia debida a enfermedad viral; trombosis vascular; migraña; rinitis; eczema; nefritis intersticial; nefropatía inducida por IgA; síndrome de Goodpasture; síndrome hemolítico– urémico; nefropatía diabética; glomerulosclerosis; glomerulonefritis; nefritis túbulointersticial; cistitis intersticial; miositis múltiple; síndrome de Guillain–Barré; enfermedad de Meniere; polineuritis; neuritis múltiple; mielitis; mononeuritis; radiculopatía; hipertiroidismo; enfermedad de Basedow; tirotoxicosis; aplasia pura de células rojas; anemia aplásica; anemia hipoplásica; púrpura idiopático trombocitopénico; anemia hemolítica autoinmune; trombocitopenia autoinmune; agranulocitosis; anemia perniciosa; anemia megaloblástica; aneritroplasia; osteoporosis; pulmón fibroide; neumonía idiopática intersticial; dermatomiositis; leucoderma vulgaris; ictiosis vulgaris; sensibilidad fotoalérgica; linfoma cutáneo de células T; poliarteritis nodosa; corea de Huntington; corea de Sydenham; miocardosis; miocarditis; escleroderma; granuloma de Wegener; síndrome de Sjogren; adiposis; fascitis eosinofílica; lesiones de la gingiva, periodoncio, hueso alveolar, substancia ósea dental; alopecia de patrón masculino o alopecia senilis; distrofia muscular; pioderma; síndrome de Sezary; hipofisitis; insuficiencia adenal crónica; enfermedad de Addison; daño de isquemia–reperfusión de los órganos que ocurre durante a conservación; shock de endotoxinas; colitis pseudomembranosa; colitis causada por fármacos o radiación; insuficiencia renal isquémica aguda; insuficiencia renal crónica; cáncer de pulmón; malignidad de origen linfoide; leucemias linfocíticas agudas o crónicas; linfoma; enfisema pulmonar; catarata; siderosis; retinitis pigmentosa; degeneración macular senil; cicatrizamiento vítreo; quemadura alcalina de la córnea; dermatitis eritema; dermatitis ballous; dermatitis del cemento dentario; gingivitis; periodontitis; sepsis; pancreatitis; enfermedad de las arterias periféricas; carcinogénesis; tumores cancerosos sólidos; metástasis de carcinoma; hipobaropatía; hepatitis autoinmune; cirrosis biliar primaria; colangitis esclerosante; resección parcial del hígado; necrosis aguda del hígado; cirrosis; cirrosis alcohólica; fallo hepática; fallo hepática fulminante; fallo hepática de establecimiento tardío; y fallo del hígado “aguda a crónica”.

Las enfermedades o trastornos preferidos a ser tratados y/o prevenidos con los compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i) son seleccionadas entre el grupo que consiste en órganos transplantados tales como riñón, hígado, corazón, pulmón, páncreas, córnea y piel; enfermedades implante versus huésped producidas por el transplante de células madre; síndromes autoinmunes incluyendo artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedades inflamatorias del intestino tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerante, psoriasis, artritis psoriásica, tiroiditis tal como tiroiditis de Hashimoto, uveo–retinitis; enfermedades atópicas tales como rinitis, conjuntivitis, dermatitis; asma; diabetes tipo I; enfermedades autoinmunes post–infecciosas incluyendo fiebre reumática y glómerulonefritis post–infecciosa; cánceres sólidos y metástasis de tumor.

Las enfermedades o trastornos particularmente preferidos a ser tratados y/o prevenidos con los compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i) son seleccionados entre el grupo constituido por el rechazo de órganos transplantados seleccionados de entre riñón, hígado, corazón y pulmón; enfermedades implante versus huésped producidas por el transplante de células madre; síndromes autoinmunes seleccionados de entre artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, artritis psoriásica, enfermedad de Crohn, y tiroiditis de Hashimoto; y dermatitis atópica. Las enfermedades o trastornos muy preferidos para ser tratados y/o prevenidos con los compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i) son seleccionados de entre esclerosis múltiple y psoriasis.

Más aún, los compuestos de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i) también son útiles, en combinación con uno

o más agentes inmunomoduladores, de prevenir y/o tratar las enfermedades y trastornos que se mencionan en este texto. De acuerdo con una realización preferida de la invención, dichos agentes son seleccionados entre el grupo constituido por inmunosupresores, corticosteroides, NSAID’s, fármacos citotóxicos, inhibidores de la adhesión molecular, citoquinas, inhibidores de citoquina, antagonistas de receptor de citoquina y receptores recombinantes de citoquina.

La presente invención también se refiere al uso de un compuesto de Fórmula (I) de acuerdo con la realización i) para la preparación de una composición farmacéutica, opcionalmente en combinación con uno o más agentes inmunomoduladores, para la prevención o el tratamiento de las enfermedades y trastornos que se mencionan en este texto.

Los compuestos de Fórmula (I) pueden ser producidos mediante los procedimientos que se presentan más adelante,

o mediante los procedimientos presentados en los Ejemplos, o mediante procedimientos análogos. Las condiciones óptimas de reacción pueden variar con los reactivos o solventes particulares empleados, pero tales condiciones pueden ser determinadas por un experto en la técnica mediante procedimientos de optimización rutinarios.

Los compuestos de fórmula (I) de la presente invención pueden ser preparados de acuerdo con la secuencia general de reacciones que se indica más adelante. Sólo se describen algunas posibilidades de síntesis que conducen a los compuestos de fórmula (I).

R4 R5

R1N OHN R6

N R2

O NH R3 R7

5 Estructura 1

Los compuestos de Fórmula (I) que representan un derivado 3–[1,2,4]oxadiazol–5–il–piridina, son preparados mediante la reacción de un compuesto de Estructura 1 en un solvente tal como dioxano, THF, dimetoxietano, xileno, tolueno, benceno, piridina, DMF, DCM,ácido acético, ácido trifluoroacético, etc. a temperatura ambiente o a temperaturas elevadas en presencia o ausencia de auxiliares tales como ácidos (por ejemplo, TFA, ácido acético,

10 HCl, etc.), bases (por ejemplo, NaH, NaOAc, Na2CO3, K2CO3, NEt3, etc.), sales tetraalquilamonio, o agentes que retiran el agua (por ejemplo, cloruro de oxalilo, un anhídrido de ácido carboxílico, POCl3, PCl5, P4O10, tamices moleculares, hidróxido de metoxicarbonilsulfamoilo trietilamonio (reactivo de Burgess), etc.) (Lit.: para las condiciones ver la sección experimental o WO2007/080542 y las referencias que allí se citan).

R4 R5

R1N O HN

N R6R2

OH R3 HONH R7

Estructura 2 Estructura 3

15 Los compuestos de Estructura 1 pueden ser preparados mediante la reacción de un compuesto de Estructura 2 con un compuesto de Estructura 3 en un solvente tal como DMF, THF, DCM, etc. en presencia o ausencia de uno o más agentes de acoplamiento tales como TBTU, DCC, EDC, HBTU, HOBt, CDI, PyBOP, etc. y en presencia o ausencia de una base tal como NEt3, DIPEA, NaH, K2CO3, etc. (ver la Bib. citada anteriormente).

R4 R5

R1N NH O

N

R6 R2

HN OH HO

R3 R7

Estructura 4 Estructura 5

20 Los compuestos de Fórmula (I) que representan un derivado 3–[1,2,4]oxadiazol–3–il–piridina son preparados de una manera análoga (ver la Lit. citada anteriormente) mediante la reacción de un compuesto de Estructura 4 con un compuesto de Estructura 5 y ciclización posterior del intermediario éster de hidroxiamidina correspondiente.

R4 R5

R1 N

N

CN

R6

NC

R2 R3 R7

Estructura 6 Estructura 7

Los compuestos de Estructura 3 y 4 pueden ser preparados mediante la reacción de un compuesto de Estructura 6 y 25 7, respectivamente, con hidroxilamina o una de sus sales en un solvente tal como metanol, etanol, piridina, etc. en

presencia o ausencia de una base tal como Na2CO3, K2CO3, NEt3, KOtBu, etc. (ver la Lit. citada anteriormente).

Los procedimientos que llevan a cabo la transformación de un compuesto de Estructura 2 en un compuesto de Estructura 7, o el contrario, son conocidos por los expertos en la técnica.

R4 R5

R2

N O R2N OO N

R6

N R1

HN NH2 R1

HN NH R3 R 3

R7

Estructura 8 Estructura 9

Los compuestos de Fórmula (I) que representan un derivado 3–[1,3,4]oxadiazol–2–il–piridina son preparados de

5 manera similar mediante la reacción de un compuesto de Estructura 2 con hidrazina (mediante el uso de un agente de acoplamiento tal como TBTU, DCC, EDC, HBTU, PyPOB, HOBt, CDI, etc.) para formar un compuesto de Estructura 8 que entonces es acoplado con un compuesto de Estructura 5 para proveer un compuesto de Estructura

9. Un compuesto de Estructura 9 también puede ser preparado siguiendo el orden de reacción inverso i.e. mediante en primer lugar el acoplamiento de un compuesto de Estructura 5 con hidrazina seguido de la reacción del 10 intermediario hidrazida correspondiente con un compuesto de Estructura 2. La deshidratación de un compuesto de Estructura 9 para formar el derivado 3–[1,3,4]oxadiazol–2–il–piridina deseado se lleva a cabo mediante el tratamiento de un compuesto de Estructura 9 con un reactivo tal como POCl3, CCl4 o CBr4 en combinación con trifenilfosfina, P2O5, reactivo de Burgess, etc. en un solvente tal como tolueno, acetonitrilo, dioxano, THF, CHCl3, etc. a temperaturas entre 20 y 120 °C en presencia o ausencia de radiación de microondas. (Lit.por ejemplo, M. A.

15 García, S. Martin–Santamaría, M. Cacho, F. Moreno de la Llave, M. Julián, A. Martinez, B. De Pascual–Teresa, A. Ramos, J. Med. Chem. 48 (2005) 4068–4075, C. T. Brain, J. M. Paul, Y. Loong, P. J. Oakley, Tetrahedron Lett. 40 (1999) 3275–3278).

Dependiendo de la naturaleza de las funcionalidades presentes en los residuos R4 a R7 in Estructuras 1, 3, 5, y 6, estas funcionalidades pueden requerir protección temporal. Los grupos de protección apropiados son conocidos por 20 los expertos en la técnica e incluyen por ejemplo, un grupo bencilo o un grupo trialquilsililo para proteger un alcohol, un quetal para proteger un diol, etc. Estos grupos protectores pueden ser empleados de acuerdo con la metodología estándar (por ejemplo, T. W. Greene, P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3a Edición, Wiley New York, 1991; P. J. Kocienski, Protecting Groups, Thieme Stuttgart, 1994). De manera alternativa, los residuos deseados R4 a R7, en particular R6, también pueden ser introducidos en las etapas posteriores que siguen al

25 acoplamiento de los compuestos piridina de Estructura 2, 4, ó 8 con los derivados fenilo de Estructura 3 ó 5, respectivamente, mediante el uso de un precursor adecuado de un compuesto de Estructura 3 o 5. Los compuestos fenilo de Estructura 3, 5, y 6 o sus precursores están ya sea disponibles en el comercio o son preparados de acuerdo con procedimientos conocidos por los expertos en la técnica.

De manera alternativa, los enlaces entre la piridina o el anillo fenilo y el oxadiazol central también pueden ser 30 formados mediante la aplicación de reacciones catalizadas con paladio de acoplamiento cruzado.

N

R2 N

R2 N Cl

COOR N COOR N

COOR R1

R1

Cl Cl R3

Estructura 10 Estructura 11 Estructura 12

en las que R representa un grupo C1–4–alquilo, preferentemente iso–propilo o tert.–butilo

Los compuestos de Estructura 2 pueden ser preparados preferentemente mediante la reacción de un éster de ácido 5,6–dicloro–nicotínico ácido (Estructura 10) (preparado a partir del producto comercial ácido 5,6–dicloro–nicotínico) 35 con la amina NHR1R2 apropiada en presencia o ausencia de un solvente adicional tal como THF, dioxano, etanol, etc., preferentemente a temperaturas superiores a 50 °C para proveer un compuesto de Estructura 11. Los compuestos de Estructura 11 pueden entonces hacerse reaccionar con el reactivo alquil–Zn apropiado (por ejemplo, Me2Zn, MeZnCl, Et2Zn, etc.) bajo condiciones de reacción de Negishi (Lit.: por ejemplo H. Matsushita, E. Negishi J. Org. Chem. 47 (1982) 4161–4165) para proveer un compuesto de Estructura 12, que puede ser hidrolizado hasta un 40 compuesto de Estructura 2. De manera alternativa, los compuestos de Estructura 12 pueden ser preparados mediante la reacción de un compuesto de Estructura 11 con un alquilo reactivo de Grignard en presencia de Fe(acac)3 en un solvente tal como THF, dioxano, DMF, NMP, etc., o combinaciones de los mismos, a temperatura en el rango desde –78 hasta 25 °C (condiciones de Fürstner, Lit.: por ejemplo A. Fürstner, A. Leitner, M. Méndez, H. Krause J. Am. Chem. Soc. 124 (2002) 13856–13863; A. Fürstner, A. Leitner Angew. Chem. 114 (2002) 632–635). En 45 el caso en que R3 representa un grupo C2–3–alquilo, los compuestos de Estructura 12 correspondientes también

pueden ser preparados mediante la reacción de un compuesto de Estructura 11 con un derivado alquenil boro (por ejemplo, 2,4,6–trivinil–ciclotriboroxano) bajo condiciones de Suzuki (Lit.: por ejemplo F. Kerins, D. F. O'Shea J. Org. Chem. 67 (2002) 4968–4971). El derivado ácido 6–amino–5–alkenil–nicotínico obtenido es hidrogenado hasta el compuesto de Estructura 12 correspondiente.

N Cl

COOR

R3

5 Estructura 13, en la que R representa un grupo C1–4–alquilo, preferentemente iso–propilo o tert.–butilo

De manera alternativa, los compuestos de Estructura 12 también pueden ser preparados mediante la reacción de un compuesto de Estructura 13 con la amina NHR1R2 apropiada en presencia o ausencia de un solvente tal como metanol, etanol, THF etc. a temperaturas elevadas o bajo condiciones de Buchwald–Hartwig (Lit.: J. P. Wolfe, H.

10 Tomori, J. P. Sadighi, J. Yin, S. L. Buchwald J. Org. Chem. 65 (2000) 1158–1174; S. Wagaw, S. L. Buchwald J. Org. Chem. 61 (1996) 7240–7241; M. C. Harris, O. Geis, S. L. Buchwald J. Org. Chem. 64 (1999) 6019–6022; S. R. Stauffer, S. Lee, J. P. Stambuli, S. I. Hauck, J. F. Hartwig Org. Letters 2 (2000) 1423–1426).

El compuesto de Estructura 13 en la cual R3 representa un grupo metilo puede ser preparado a partir de 6–cloro–3– formil–5–metil–piridina, que es conocida (Lit.: por ejemplo EP–0702003) mediante la oxidación del grupo formilo en

15 el ácido carboxílico empleando reactivos de oxidación bien conocidos en la técnica tales como H2O2 acuosa en ácido fórmico, KMnO4, etc. en presencia o ausencia de un solvente tal como tolueno, THF, MeCN, acetona, etc. a temperaturas entre 0 y 120°C.

Los residuos R1 y R2 también pueden ser introducidos mediante alquilación secuencial y/o aminación reductiva de un compuesto de Estructura 14 (Lit.: por ejemplo N. Finch, T. R. Campbell, C. W. Gemenden, H. J. Povalski J. Med.

20 Chem. 23 (1980) 1405–1410; I.–C. Grig–Alexa; A.–L. Finaru; L. Ivan; P. Caubere; G. Guillaumet; Synthesis 2006, 619–628) que pueden ser preparados mediante la reacción de un compuesto de Estructura 13 o del ácido correspondiente con amoniaco en un solvente tal como agua, metanol, etanol, THF, etc. a temperaturas elevadas.

R4 R5

N

N R6

COOR Cl

AH2N

R3 R3 R7

Estructura 14 Estructura 15

en las que R representa un grupo C1–4–alquilo, preferentemente iso–propil o tert.–butilo.

25 En el caso en el que R1 representa hidrógeno, los derivados monoalquilamino–piridina correspondientes que se pueden producir en el transcurso de la síntesis de los compuestos de Fórmula (I), pueden requerir protección temporal en la segunda función amina secundaria.

Las secuencias de reacción anteriormente descritas que permiten la introducción de dos residuos NR1R2 yR3 también pueden ser aplicadas a un compuesto en el cual el esqueleto ya ha sido aún más elaborado. Por ejemplo, la

30 reacción de Buchwald también puede ser aplicada a un compuesto de Estructura 15.

Cada vez que los compuestos de Fórmula (I) sean obtenidos en la forma de mezclas de enantiómeros, los enantiómeros pueden ser separados empleando procedimientos conocidos por los expertos en la técnica: por ejemplo, mediante la formación y separación de sales diaestereoméricas o mediante HPLC sobre una fase quiral estacionaria tal como una columna Regis Whelk–O1(R,R) (10 µm), una columna Daicel ChiralCel OD–H (5–10 µm),

35 o una columna Daicel ChiralPak IA (10 µm) o AD–H (5 µm). Las condiciones típicas de HPLC quiral son una mezcla isocrática de eluyente A (EtOH, en presencia o ausencia de una amina tal como NEt3, dietilamina) y eluyente B (hexano), a un caudal de 0,8 hasta 150 mL/min.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos ilustran la invención pero no limitan su ámbito de alguna manera.

40 Todas las temperaturas se presentan en °C. Los compuestos son caracterizados mediante 1H–RMN (300 MHz) o 13C–RMN (75 MHz) (Varían Oxford; los corrimientos químicos son presentados en ppm de manera relativa al solvente empleado; multiplicidades: s = singlete, d = doblete, t = triplete, p = pentuplete, h = hexete, hept = heptete, m = multiplete, br = amplio, las constantes de acoplamiento se presentan en Hz; mediante LC–MS (Finnigan Navigator con bomba binaria HP 1100 y DAD, columna: 4,6x50 mm, Zorbax SB–AQ, 5 !m, 120 Å, gradiente: 5–95%

de acetonitrilo en agua, 1 min., con 0,04% de ácido trifluoroacético, flujo: 4,5 mL/min), tR se presenta en min.; los tiempos de retención o LC–MS marcados con * se refieren a LC realizada bajo condiciones básicas, i.e. eluyendo con un gradiente de MeCN en agua que contiene 13 mM de hidróxido de amonio, todas las demás condiciones idénticas; los tiempos de retención o LC–MS marcados con ** se refieren a LC realizada bajo las siguientes 5 condiciones: columna: Ascentis express C18, 4,6 x 30 mm, gradiente: 5–95% de acetonitrilo en agua, 1 min., con 0,04% de ácido trifluoroacético, flujo: 4,5 mL/min.; mediante TLC (placas para TLC de Merck, Sílica gel 60 F254); o mediante punto de fusión. Los compuestos son purificados mediante HPLC preparativa (columna: X–terra RP18, 50x19 mm, 5 µm, gradiente: 10–95% de acetonitrilo en agua que contiene 0,5 % de ácido fórmico) o mediante MPLC (bomba Labomatic MD–80–100, detector lineal UVIS–201, columna: 350x18 mm, Labogel–RP–18–5s–100,

10 gradiente: 10% de MeOH en agua hasta 100% MeOH). Abreviaturas (Tal como se las emplea en este texto y en la descripción anterior): aq. acuoso atm atmósfera BSA albúmina de suero bovino

15 CC cromatografía de columna de gel de sílice CDI carbonil diimidazol DCC diciclohexil carbodiimida DCM diclorometano DEAD dietil azodicarboxilato

20 DIPEA diisopropil–etilamina, base de Hünig, etil–diisopropilamina DMF dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido DPPP 1,3–bis–(difenilfosfin)–propano dppf 1,1'–bis(difenilfosfin)ferroceno

25 EA acetato de etilo EDC N–(3–dimetilaminopropil)–N’–etil–carbodiimida eq. equivalente(s) Et etilo h horas(s)

30 HBTU hexafluorofosfato de O–(benzotriazol–1–il)–N,N,N’,N’–tetrametiluronio HOBt 1–hidroxibenzotriazol HPLC cromatografía líquida de alto rendimiento HV Alto vacío LC–MS cromatografía líquida – espectroscopía de masa

35 Lit. Literatura Me metilo min minuto(s) MPLC cromatografía líquida de presión media NaOAc acetato de sodio

40 NEt3 trietilamina NMP N–metil–pirrolidona

OAc: acetato

Ph: fenilo

prep.: preparativa

PyBOP: benzotriazol–1–il–oxi–tris–pirrolidin–fosfonio–hexafluoro–fosfato

5: rt temperatura ambiente

sat.: saturado

S1P: sfingosin 1–fosfato

TBME: tert–butil metil éter

TBTU: tetrafluoroborato de 2–(1H–benzotriazol–1–il)–1,2,3,3–tetrametiluronio

10: TFA ácido trifluoroacético

THF: tetrahidrofurano

TLC: cromatografía de capa fina

tR: tiempo de retención presentado en minutos

Ácido 6–(etil–metil–amino)–5–metil–nicotínico

15 a) A una solución de ácido 5,6–dicloro nicotínico (12,2 g, 63,5 mmol) en isopropanol (70 mL), se agrega H2SO4 (4 mL) gota a gota. La mezcla es agitada a 80 °C durante 16 h antes de ser enfriada hasta temperatura ambiente y concentrada in vacuo. El residuo es disuelto en dioxano (100 mL) y concentrado nuevamente. El producto crudo es purificado mediante CC (heptano:EA 1:3) para proveer isopropil éster de ácido 5,6–dicloro nicotínico (9,29 g) como un aceite beige pálido; LC–MS: tR = 1,33 min, [M+1]+ = 233,94.

20 b) Una mezcla de isopropil éster de ácido 5,6–dicloro nicotínico (4,76 g, 22,3 mmol) y etilmetilamina (6,88 g, 116,4 mmol) es agitada en un contenedor sellado a 105 °C durante 72 h. La mezcla es enfriada hasta temperatura ambiente, diluida con EA (300 mL) y lavada con solución acuosa saturada de NaHCO3 (3x10 mL) seguido por solución salina (10 mL). El extracto orgánico es secado empleando MgSO4, filtrado, concentrado y secado para dar isopropil éster de ácido 5–cloro–6–(etil–metil–amino)–nicotínico (5,18 g) como un aceite

25 amarillo; LC–MS: tR = 1,38 min, [M+1]+ = 257,02; 1H RMN (D6–DMSO): 5 1,19 (t, J = 6,8 Hz, 3 H), 1,30 (d, J = 6,0 Hz, 6 H), 3,08 (s, 3 H), 3,55 (q, J = 7,0 Hz, 2 H), 5,10 (hept, J = 6,3 Hz, 1 H), 7,98 (s, 1 H), 8,58 (s, 1 H).

c) Una solución de isopropil éster de ácido 5–cloro–6–(etil–metil–amino)–nicotínico (5,18 g, 20,1 mmol), NMP

(3,0 g, 30,2 mmol) y Fe(acac)3 (498 mg, 1,41 mmol) en THF (150 mL) se dispone bajo argón antes de agregar,

gota a gota bromuro de metilmagnesio (3,0 g, 25,2 mmol, solución en éter de dietilo). La solución rojo–marrón

30 obscuro se hace amarilla, luego marrón obscuro nuevamente. La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 2 h antes de agregar otra porción de bromuro de metilmagnesio (1,44 g, 12,1 mmol). La mezcla obscura es agitada a temperatura ambiente durante 16 h. Se agrega otra porción de NMP (3,0 g, 30,2 mmol), Fe(acac)3 (498 mg, 1,41 mmol) y bromuro de metilmagnesio (1,44 g, 12,1 mmol) y se mantiene la agitación a temperatura ambiente por una hora más. La mezcla de reacción es diluida con EA (200 mL) y cuidadosamente

35 apagada con agua–hielo (100 mL). La suspensión se hace alcalina mediante la adición de una solución acuosa 1 N de NaOH (10 mL) y se filtra empleando un pequeño filtro de Hyflo y gel de sílice. La fase orgánica del filtrado es separada y recolectada, y la acuosa es extractada con DCM (3x100 mL). Los extractos orgánicos son combinados, secados empleando MgSO4, filtrados y concentrados. El producto crudo es purificado empleando MPLC preparativa en gel de sílice eluyendo con un gradiente de EA en heptano para proveer

40 isopropil éster de ácido 6–(etil–metil–amino)–5–metil–nicotínico (2,19 g) como un aceite beige; LC–MS: tR = 0,76 min, [M+1]+ = 237,20.

d) Una solución de isopropil éster de ácido 6–(etil–metil–amino)–5–metil–nicotínico (2,19 g, 9,28 mmol) en THF

(40 mL) y HCl acuoso al 25% (5 mL) es agitada a 65 °C durante 3 días antes de ser enfriada hasta temperatura

ambiente y concentrada. El residuo es disuelto en dioxano (50 mL) y concentrado nuevamente. Este

45 procedimiento se repite una vez más antes de que el residuo sea secado bajo alto vacío para proveer el hidrato hidrocloruro del compuesto del título (2,4 g) como un polvo blanco; LC–MS: tR = 0,68 min, [M+1]+ = 195,07; 1H RMN (D6–DMSO): 5 1,13 (t, J = 6,8 Hz, 3 H), 2,28 (s, 3 H), 2,93 (s, 3 H), 3,32 (q, J = 7,0 Hz, 2 H), 7,82 (s, 1 H), 8,52 (s, 1 H).

Ácido 6–dietilamino–5–metil–nicotínico

a) Se calienta fosforoxicloruro (183 mL, 2 mol) a 90 °C y se agrega lentamente una mezcla del producto disponible en el comercio 2–metil–2–butennitrilo (73 g, 0,9 mol) y DMF (154 mL, 2 mol) mientras se mantiene la temperatura entre 100 a 110 °C. La mezcla es agitada a 110 °C durante 15 h, enfriada hasta temperatura ambiente y diluida con DCM (500 mL). La mezcla es enfriada a 0 °C y cuidadosamente apagada con agua (500 mL). Las fases son separadas y la fase acuosa es extraída con DCM (total de 800 mL). Los extractos orgánicos combinados son secados (Na2SO4), filtrados y evaporados. El residuo es cristalizado a partir de ciclohexano para proveer 6–cloro–3–formil–5–metil–piridina (28,3 g) como cristales levemente amarillos; LC–MS: tR = 0,76 min, [M+1]+ = 156,14.

b) Una solución de 6–cloro–3–formil–5–metil–piridina (10 g, 64 mmol) en ácido fórmico (200 mL) es enfriada hasta 0 °C y se agrega una solución acuosa al 50% en peso de H2O2 en agua (9,6 mL, 360 mmol) a esta temperatura. La mezcla es agitada a 0 °C durante 15 h, diluida cuidadosamente con agua (200 mL) y extraída con DCM (8 x 100 mL). Los extractos orgánicos combinados son lavados con HCl acuoso 1 M (100 mL) (revisión por peróxido remanente), secados (MgSO4), filtrados y evaporados. El residuo es secado para proveer 6–cloro–5–metil–nicotínico ácido (9,56 g); LC–MS: tR = 0,72 min, [M+1]+ = 172,0.

c) A una solución de ácido 6–cloro–5–metil–nicotínico (5,61 g, 32,7 mmol) en isopropanol (120 mL), se agrega gota a gota trimetilclorosilano (35,5 g, 327 mmol). La mezcla es agitada a 70 °C durante 16 h antes de ser enfriada hasta temperatura ambiente, diluida con éter de dietilo (500 mL) y lavada con solución acuosa saturada de NaHCO3 (5x50 mL). Los lavados son extraídos de nuevo con éter de dietilo (100 mL). Los extractos orgánicos combinados son secados empleando MgSO4, filtrados y concentrados. El producto crudo es purificado mediante CC (heptano:EA 9:1) para proveer isopropil éster de ácido 6–cloro–5–metil–nicotínico (4,32 g) como un sólido amarillo, LC–MS: tR = 0,97 min, [M+1]+ = 214,10.

d) Una mezcla de 6–cloro–5–metil–nicotínico isopropil éster de ácido (1,40 g, 6,55 mmol) y dietilamina (4,80 g, 65,5 mmol) es agitada en un contenedor sellado a 100 °C durante 2 semanas antes de ser enfriada hasta temperatura ambiente, diluida con DCM (15 mL) y lavada con una solución acuosa 1 N de KHSO4 (2x50 mL). Los lavados son extraídos de nuevo con DCM (50 mL). Los extractos orgánicos combinados son secados empleando Na2SO4, filtrados y concentrados. El producto crudo es purificado mediante CC (heptano:EA 9:1) para proveer isopropil éster de ácido 6–dietilamino–5–metil–nicotínico (111 mg) como un aceite amarillo pálido; LC–MS: tR = 0,776 min, [M+1]+ = 251,19; 1H RMN (CDCl3): 5 1,17 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 1,36 (d, J = 6,3 Hz, 6 H), 2,31 (s, 3 H), 3,40 (q, J = 7,0 Hz, 4 H), 5,20–5,28 (m, 1 H), 7,89 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,74 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

e) Una solución del éster anterior (111 mg, 0,443 mmol) en HCl acuoso al 25% (10 mL) es agitada a 65 °C durante 18 h. El solvente es evaporado y el residuo es secado bajo alto vacío para proveer el hidrato de clorhidrato del compuesto del título (88 mg) como un sólido blanco; LC–MS: tR = 0,58 min, [M+1]+ = 209,10.

Ácido 6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–nicotínico

El compuesto del título se prepara en analogía con ácido 6–dietilamino–5–metil–nicotínico empleando N–isopropil– metil–amina; LC–MS: tR = 0,58 min, [M+1]+ = 209,10; 1H RMN (D6–DMSO): 5 1,23 (d, J = 6,5 Hz, 6 H), 2,40 (s, 3 H), 2,97 (s, 3 H), 4,22 (hept, J = 6,8 Hz, 1 H), 8,07 (s, 1 H), 8,43 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ácido 5–metil–6–pirrolidin–1–il–nicotínico

El compuesto del título se prepara en analogía con ácido 6–dietilamino–5–metil–nicotínico empleando pirrolidina; LC–MS: tR = 0,55 min, [M+1]+ = 207,10; 1H RMN (D6–DMSO): 5 1,94–2,00 (m, 4 H), 2,54 (s, 3 H), 3,79–3,85 (m, 4 H), 7,99 (s, 1 H), 8,28 (s, 1 H).

Ácido 6–dietilamino–5–etil–nicotínico

a) A una solución de ácido 5,6–dicloronicotínico (10,0 g, 50,0 mmol) en THF (600 mL), se agregan trifenilfosfina (19,67 g, 75,0 mmol) y etanol (5,55 g, 75,0 mmol). La mezcla es enfriada hasta 0 °C antes de agregar DEAD (32,65 g, 75,0 mmol). La mezcla es agitada y entibiada hasta temperatura ambiente. Se mantiene la agitación durante 16 horas antes de agregar solución acuosa saturada de NaHCO3. La mezcla es extraída de manera repetida con EA. Los extractos orgánicos combinados son secados empleando MgSO4, filtrados y concentrados. El producto crudo es purificado mediante CC (heptano:EA 7:3) para proveer etil éster de ácido 5,6–dicloronicotínico (11,4 g) como un sólido blanco; LC–MS: tR = 0,96 min, [M+1]+ = 220,02.

b) Una mezcla de etil éster de ácido 5,6–dicloronicotínico (2,91 g, 15,2 mmol) y dietil–amina (11,1 g, 152 mmol) es agitada en un contenedor sellado a 80 °C durante 72 h. La mezcla es enfriada hasta temperatura ambiente y concentrada. El residuo es disuelto en DCM (15 mL) y lavado con una solución acuosa 1 N de KHSO4 (2x50 mL). Los lavados son retro extraídos con DCM (50 mL). Los extractos orgánicos combinados son secados empleando Na2SO4, filtrados, concentrados y secados para proveer etil éster de ácido 5–cloro–6–dietilamino– nicotínico (3,36 g) como un aceite amarillo; LC–MS: tR = 1,08 min, [M+1]+ = 257,12; 1H RMN (CDCl3): 5 1,26 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 1,39 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 3,62 (q, J = 7,0 Hz, 4 H), 4,36 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 8,07 (s, 1 H), 8,70 (s, 1 H).

c) A una solución de etil éster de ácido 5–cloro–6–dietilamino–nicotínico (2,96 g, 11,5 mmol) en dioxano (50 mL), Pd(dppf) (470 mg, 0,576 mmol) bajo argón. A esta mezcla se agrega gota a gota dietil zinc (8,53 g, 69,1 mmol, como una solución 1,1 M en tolueno). La mezcla es agitada a 75 °C durante 16 h antes de agregar otra porción de Pd(dppf) 94 mg, 0,115 mmol) y dietil zinc (1,42 g, 11,5 mmol, como una solución 1,1 M en tolueno). Se mantiene la agitación a 75 °C durante 24 h. La mezcla de reacción se enfría hasta temperatura ambiente y se apaga cuidadosamente con agua. La mezcla es filtrada a través de celite y el filtrado es extraído dos veces con EA. Los extractos orgánicos combinados son secados empleando MgSO4, filtrados y concentrados. El producto crudo es purificado mediante CC (heptano:EA 9:1) para proveer etil éster de ácido 6–dietilamino–5– etil–nicotínico (2,40 g) como un aceite incoloro; LC–MS: tR = 0,78 min, [M+1]+ = 251,19; 1H RMN (CDCl3): 5 1,15 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 1,27 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 1,40 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 2,65 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,36 (q, J = 7,0 Hz, 4 H), 4,37 (q, J = 7,0 Hz, 2 H), 7,99 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,76 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

d) Una solución de etil éster de ácido 6–dietilamino–5–etil–nicotínico (1,78 g, 5,34 mmol) en HCl acuoso al 25% (50 mL) es agitada a 65 °C durante 18 h. El solvente es evaporado y el producto es secado bajo alto vacío para proveer el clorhidrato hidratado del compuesto del título (2,30 g) como un sólido blanco; LC–MS: tR = 0,62 min, [M+1]+ = 223,15.

Ácido 5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–nicotínico

El compuesto del título se prepara en analogía con ácido 6–dietilamino–5–etil–nicotínico empleando isopropil– metilamina; LC–MS: tR = 0,64 min, [M+1]+ = 223,14.

Ácido 5–etil–6–pirrolidin–1–il–nicotínico

El compuesto del título se prepara en analogía con ácido dietilamino–5–etil–nicotínico empleando pirrolidina; LC– MS: tR = 0,59 min, [M+1]+ = 221,13; 1H RMN (CDCl3): 5 1,23 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 1,96–2,04 (m, 4 H), 2,78 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,68–3,76 (m, 4 H), 7,93 (s, 1 H), 8,77 (d, J = 1,5 Hz, 1 H).

3–etil–4–hidroxi–5–metil–benzonitrilo

El compuesto del título se prepara a partir de 3–etil–4–hidroxi–5–metil–benzaldehído siguiendo procedimientos de la bibliografía (A. K. Chakraborti, G. Kaur, Tetrahedron 55 (1999) 13265–13268); LC–MS: tR = 0,90 min.; 1H RMN (CDCl3): 5 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3 H), 2,26 (s, 3 H), 2,63 (q, J = 7,6 Hz, 2 H), 5,19 (s, 1 H), 7,30 (s, 2 H).

3–cloro–4–hidroxi–5–metil–benzonitrilo

El compuesto del título es preparado a partir del producto comercial 2–cloro–6–metil–fenol en analogía con procedimientos de la bibliografía (ver 3–etil–4–hidroxi–5–metil–benzonitrilo); LC–MS: tR = 0,85 min. 1H RMN (CDCl3): 5 2,33 (s, 3 H), 6,10 (s, 1 H), 7,38 (s, 1 H), 7,53 (d, J = 1,8 Hz, 1 H).

4–hidroxi–2–metoxi–benzonitrilo

El compuesto del título es preparado a partir del producto comercial 4–hidroxi–2–metoxi–benzaldehído en analogía con procedimientos de la bibliografía (ver 3–etil–4–hidroxi–5–metil–benzonitrilo); LC–MS: tR = 0,74 min, 1H RMN (D6–DMSO): 5 3,84 (s, 3 H), 6,47 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 7,49 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 10,6 (s, 1H).

3–cloro–4–hidroxi–5–metoxi–benzonitrilo

El compuesto del título es preparado a partir del producto comercial 3–cloro–4–hidroxi–5–metoxi–benzaldehído en analogía con procedimientos de la bibliografía (ver 3–etil–4–hidroxi–5–metil–benzonitrilo); LC–MS: tR = 0,82 min.; 1H RMN (CDCl3): 5 3,98 (s, 3 H), 6,36 (s, 1 H), 7,04 (s, 1 H), 7,34 (s, 1 H).

4,N–dihidroxi–3,5–dimetil–benzamidina

El compuesto del título es preparado a partir del producto comercial 4–hidroxi–3,5–dimetil–benzonitrilo de acuerdo con procedimientos de la bibliografía (por ejemplo, E. Meyer, A. C. Joussef, H. Gallardo, Synthesis 2003, 899–905); 1H RMN (CD3OD): 5 7,20 (s, 2H), 2,20 (s, 6H).

3–etil–4,N–dihidroxi–5–metil–benzamidina

El compuesto del título es preparado a partir del producto comercial 2–etil–6–metil–fenol siguiendo procedimientos de la bibliografía (G. Trapani, A. Latrofa, M. Franco, C. Altomare, E. Sanna, M. Usala, G. Biggio, G. Liso, J. Med. Chem. 41 (1998) 1846–1854; A. K. Chakraborti, G. Kaur, Tetrahedron 55 (1999) 13265–13268; E. Meyer, A. C. Joussef, H. Gallardo, Synthesis 2003, 899–905); LC–MS: tR = 0,55 min.; 1H RMN (D6–DMSO): 5 9,25 (s br, 1H), 7,21 (s, 2H), 5,56 (s, 2H), 2,55 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,10 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

4,N–dihidroxi–3–metil–5–propil–benzamidina

El compuesto del título es preparado a partir del producto comercial 2–metil–6–propil–fenol en analogía con procedimientos de la bibliografía (por ejemplo B. Roth et al. J. Med. Chem. 31 (1988) 122–129; y la bibliografía citada para 3–etil–4,N–dihidroxi–5–metil–benzamidina); LC–MS: tR = 0,54 min.; [M+1]+ = 209,43; 1H RMN (D6– DMSO): 5 0,90 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 1,48–1,59 (m, 3 H), 2,19 (s, 3 H), 2,56 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 7,37 (s, 1 H), 7,40 (s, 1 H), 9,34 (s, 1 H).

3–cloro–4,N–dihidroxi–5–metil–benzamidina

El compuesto del título es preparado a partir del producto comercial 2–cloro–6–metil–fenol en analogía con procedimientos de la bibliografía (por ejemplo B. Roth et al. J. Med. Chem. 31 (1988) 122–129; y la bibliografía citada para 3–etil–4,N–dihidroxi–5–metil–benzamidina); 3–cloro–4–hidroxi–5–metil–benzaldehído: LC–MS: tR = 0,49 min.; [M+1]+ = 201,00; 1H RMN 5 2,24 (s, 2 H), 2,35 (s, 4 H), 5,98 (s br, 1 H), 7,59 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,73 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 9,80 (s, 1 H); 3–cloro–4,N–dihidroxi–5–metil–benzamidina: 1H RMN (D6–DMSO): 5 2,21 (s, 3 H), 5,72 (s br, 2 H), 7,40 (s, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 9,29 (s br, 1 H), 9,48 (s br, 1 H).

Tert–butil éster de ácido 3–[4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–2,6–dimetil–fenil]–propiónico

a) A una solución enfriada a hielo de 4–hidroxi–3,5–dimetil–metil éster de ácido benzóico (7,52 g, 41,7 mmol) en DCM (250 mL) y piridina (10 mL), se agrega anhídrido de ácido trifluorometansulfónico (13,0 g, 45,9 mmol) durante un período de 20 min. Al completar la adición, el baño de hielo es retirado, y la reacción es agitada durante 1 h adicional a temperatura ambiente. La mezcla es diluida con DCM (150 mL), lavada con solución acuosa al 10% de ácido cítrico seguido por solución salina, secada empleando MgSO4, filtrada y evaporada. El residuo es purificado mediante CC (heptano:EA 9:1) para proveer metil éster de ácido 3,5–dimetil–4– trifluorometanosulfoniloxi–benzóico (11,8 g) como agujas finas incoloras; LC–MS: tR = 1,08 min.

b) A una solución agitada del triflato anterior (11,8 g, 37,8 mmol) en DMF seco (155 mL) se agregan secuencialmente NEt3 (7,6 g, 75,6 mmol), acrilato de tert.–butilo (48,4 g, 378 mmol), DPPP (779 mg, 1,89 mmol) y Pd(OAc)2 (424 mg, 1,89 mmol) bajo nitrógeno. La mezcla es agitada a 115 °C durante 18 h antes de agregar otra porción de DPPP (160 mg, 0,39 mmol) y Pd(OAc)2 (80 mg, 0,36 mmol). Se mantiene la agitación durante 4 h a 115 °C antes de que la mezcla sea enfriada hasta temperatura ambiente, diluida con éter de dietilo (350 mL) y lavada con HC l acuoso 1 N, seguido por solución acuosa saturada de NaHCO3. el extracto orgánico es secado empleando MgSO4, filtrado y evaporado. El residuo es purificado mediante CC (heptano:EA 4:1) para proveer metil éster de ácido 4–(2–tert–butoxicarbonil–vinil)–3,5–dimetil–benzóico (11,21 g) como un sólido incoloro; LC–MS: tR = 1,09 min.

c) A una solución de metil éster de ácido 4–(2–tert–butoxicarbonil–vinil)–3,5–dimetil–benzóico (11,2 g, 38,6 mmol) en etanol (50 mL) y THF (50 mL), se agrega Pd/C (1,0 g, 10% Pd). La mezcla es agitada durante 16 h a temperatura ambiente bajo 2,5 de H2. El catalizador es retirado mediante filtración y el filtrado es concentrado y secado bajo HV para proveer metil éster de ácido 4–(2–tert–butoxicarbonil–etil)–3,5–dimetil–benzóico (10,8 g) como un aceite incoloro; LC–MS: tR = 1,08 min.

d) A una solución de metil éster de ácido 4–(2–tert–butoxicarbonil–etil)–3,5–dimetil–benzóico (10,8 g, 37,0 mmol) en etanol (100 mL) se agrega una solución acuosa 2 M de LiOH (50 mL) a 0 °C. La mezcla turbia es agitada a 0 °C durante 30 min, luego a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla es diluida con solución de ácido cítrico acuoso al 10% y extractada tres veces con éter de dietilo. Los extractos orgánicos combinados son secados empleando MgSO4, filtrados y concentrados. El residuo sólido es suspendido en éter de dietilo /heptano, agitado a temperatura ambiente, y filtrado. El procedimiento de la pasta en éter de dietilo /heptano es repetido. El material sólido es recolectado y secado bajo HV para proveer ácido 4–(2–tert–butoxicarbonil–etil)– 3,5–dimetil–benzóico (5,09 g) como un polvo cristalino blanco; LC–MS: tR = 0,95 min, [M+1]+ = 279,14; 1H RMN (CDCl3): 5 1,47 (s, 9 H), 2,30–2,40 (m, 2 H), 2,39 (s, 6 H), 2,94–3,03 (m, 2 H), 7,75 (s, 2 H).

e) A una suspensión de ácido 4–(2–tert–butoxicarbonil–etil)–3,5–dimetil–benzóoico (8,00 g, 28,7 mmol) en isopropanol (100 mL), se agrega HOBt (4,27 g, 31,6 mmol) seguido por clorhidrato de EDC (6,34 g, 33,1 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante 1 h, se agrega amoníaco 25% acuoso (16,1 mL). Se mantiene la agitación durante 30 minutos antes de que el isopropanol sea evaporado bajo presión reducida. La solución remanente es diluida con acetato de isopropilo (200 mL), lavada tres veces con aproximadamente solución acuosa al 0,5 N de NaHCO3 (100 mL) seguido por agua (50 mL), secada empleando MgSO4, filtrado, concentrado y secado para proveer 3–(4–carbamoil–2,6–dimetil–fenil)–propiónico tert–butil éster de ácido (7,5 g) como un sólido blancuzco.

f) A una solución enfriada a hielo de tert–butil éster de ácido 3–(4–carbamoil–2,6–dimetil–fenil)–propiónico (7,00 g, 25,2 mmol) y NEt3 (7,66 g, 75,7 mmol) en DCM (100 mL), se agrega lentamente anhídrido trifluoroacético (6,06 g, 28,8 mmol) de manera que la temperatura de la reacción se mantenga por debajo de los 15 °C. La solución amarillo claro es agitada a temperatura ambiente durante 1 h antes de que sea lavado dos veces con agua (100 mL) y concentrada. El producto crudo es purificado mediante recristalización a partir de metanol para proveer 3–(4–ciano–2,6–dimetil–fenil)–propiónico tert–butil éster de ácido (4,2 g) como un sólido blanco, 1H RMN (CDCl3): 51,48 (s, 9 H), 2,33–2,37 (m, 2 H), 2,38 (s, 6 H), 2,94–3,01 (m, 2 H), 7,31 (s, 2 H).

g) Una solución de tert–butil éster de ácido 3–(4–ciano–2,6–dimetil–fenil)–propiónico (4,1 g, 15,8 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (1,65 g, 23,7 mmol) y NEt3 (3,20 g, 31,6 mmol) en metanol (40 mL) se somete a reflujo durante 2 h antes de que el solvente sea retirado in vacuo. El residuo es dispuesto en acetato de isopropilo (50 mL) y lavado dos veces con agua. El extracto orgánico es secado empleando MgSO4, filtrado, evaporado y secado tert–butil éster de ácido 3–[4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–2,6–dimetil–fenil]–propiónico (4,4 g) como un sólido blanco.

Tert–butil éster de ácido 3–[2–etil–4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–6–metil–fenil]–propiónico

El compuesto del título se prepara en analogía con tert–butil éster de ácido 3–[4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–2,6– dimetil–fenil]–propiónico; 1H RMN (CDCl3): 51,26 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,34–2,41 (m, 5 H), 2,70 (q, J = 7,8 Hz, 2 H), 2,94–3,01 (m, 2 H), 4,85 (s br, 1 H), 7,28 (s, 1 H), 7,32 (s, 1 H).

rac–4–(2,2–Dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N–hidroxi–3,5–dimetil–benzamidina

a) A una solución de 3,5–dimetil–4–hidroxi–benzonitrilo (5,0 g, 34,0 mmol) en THF (40 mL), se agregan rac– (2,2–dimetil–[1,3]dioxolan–4–il)–metanol (4,49 g, 34,0 mmol) seguido por trifenilfosfina (13,4 g, 50,9 mmol). La mezcla es enfriada con un baño de hielo antes de agregar DEAD (8,87 g, 50,9 mmol, 23,4 mL de una solución en tolueno al 40%) gota a gota. La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 1 h, el solvente es retirado in vacuo y el residuo es purificado mediante CC (heptano:EA 99:1 hasta 92:8) para proveer rac–4– (2,2–dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–3,5–dimetil–benzonitrilo (7,20 g) como un aceite amarillo pálido; LC–MS: tR = 0,99 min, [M+1]+ = no detectado.

b) A una solución de tert.–butilato de potasio (6,18 g, 55,1 mmol) en metanol (125 mL), se agrega clorhidrato de hidroxilamina (5,74 g, 82,7 mmol). A esta solución, se agrega una solución de rac–4–(2,2–dimetil– [1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–3,5–dimetil–benzonitrilo (7,20 g, 27,6 mmol) en metanol (40 mL). La mezcla es sometida a reflujo durante 72 h antes de que el solvente sea retirado in vacuo. El residuo es purificado mediante HPLC preparativa (XBridge Prep C18, 30x75 mm, 5 –95% de acetonitrilo en agua que contiene 0,5% de NH3 acuoso saturado) para proveer el compuesto del título (4,85 g) como un sólido amarillo pálido; LC–MS: tR = 0,67 min, [M+1]+ = 295,06; 1H RMN (CDCl3): 51,43 (s, 3 H), 1,48 (s, 3 H), 2,29 (s, 6 H), 3,76–3,81 (m, 1 H), 3,83–3,88 (m, 1 H), 3,93–3,99 (m, 1 H), 4,17–4,23 (m, 1 H), 4,47–4,54 (m, 1 H), 5,02 (s br, 1 H), 7,28 (s, 2H).

(S)–4–(2,2–Dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N–hidroxi–3,5–dimetil–benzamidina

El compuesto del título se prepara en analogía con rac–4–(2,2–dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N–hidroxi–3,5– dimetil–benzamidina empleando (S)–(2,2–dimetil–[1,3]dioxolan–4–il)–metanol; LC–MS: tR = 0,67 min, [M+1]+ = 295,01.

(R)–3–cloro–4–(2,2–dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N–hidroxi–5–metil–benzamidina

El compuesto del título se obtiene como un aceite incoloro (1,39 g) en analogía con rac–4–(2,2–dimetil– [1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N–hidroxi–3,5–dimetil–benzamidina a partir de 3–cloro–4–hidroxi–5–metil–benzonitrilo y L–alfa–beta–isopropiliden glicerol; LC–MS: tR = 0,66 min, [M+H]+ = 314,96.

(R)–4–(2,2–Dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N–hidroxi–2–metoxi–benzamidina

El compuesto del título se obtiene como un aceite beige (2,46 g) en analogía con rac–4–(2,2–dimetil–[1,3]dioxolan– 4–ilmetoxi)–N–hidroxi–3,5–dimetil–benzamidina a partir de 4–hidroxi–2–metoxi–benzonitrilo y L–alfa–beta– isopropiliden glicerol; LC–MS: tR = 0,62 min, [M+H]+ = 296,97.

(R)–3–cloro–4–(2,2–dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N–hidroxi–5–metoxi–benzamidina

El compuesto del título se prepara en analogía con rac–4–(2,2–dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N–hidroxi–3,5– dimetil–benzamidina a partir de 3–cloro–4–hidroxi–5–metoxi–benzonitrilo y L–-,�–isopropiliden glicerol; LC–MS: tR = 0,42 min, [M+H]+ = 331,17; 1H RMN (D6–DMSO): 51,30 (s, 3 H), 1,34 (s, 3 H), 3,86 (s, 3 H), 3,87–3,93 (m, 2 H), 4,00–4,12 (m, 2 H), 4,36 (quint, J = 5,8 Hz, 1 H), 5,90 (s, 2 H), 7,32 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 7,34 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 9,71 (s, 1 H).

rac–2–hidroxi–N–{2–hidroxi–3–[4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–2,6–dimetil–fenoxi]–propil}–acetamida

El compuesto del título se prepara en analogía con N–((S)–3–[2–etil–4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–6–metil–fenoxi]– 2–hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida; LC–MS: tR = 0,48 min, [M+1]+ = 312,05; 1H RMN (D6–DMSO): 52,21 (s, 6 H), 3,14–3,25 (m, 1 H), 3,35–3,46 (m, 1 H), 3,60–3,69 (m, 2 H), 3,80 (s, 2 H), 3,85–3,94 (m, 1 H), 5,69 (s br, 2 H), 7,30 (s, 2 H), 7,63 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 8,11 (s, 1 H).

(S)–4–(3–amino–2–hidroxi–propoxi)–3–etil–5–metilbenzonitrilo

a) A una solución de 3–etil–4–hidroxi–5–metil–benzonitrilo (5,06 g, 31,4 mmol) en THF (80 mL), se agregan PPh3 (9,06 g, 34,5 mmol) y (R)–glicidol (2,29 mL, 34,5 mmol). La mezcla es enfriada hasta 0 °C antes de agregar DEAD en tolueno (15,8 mL, 34,5 mmol). La mezcla es agitada durante 18 h mientras se la entibia hasta temperatura ambiente. El solvente es evaporado y el producto crudo es purificado mediante CC (heptano:EA 7:3) para proveer 3–etil–5–metil–4–oxiranilmetoxi–benzonitrilo (5,85 g) como un aceite amarillo; LC–MS: tR = 0,96 min.; [M+42]+ = 259,08.

b) El epóxido anterior se disuelve en NH3 7 N en metanol (250 mL) y la solución es agitada a 65 °C durante 18

h. El solvente es evaporado para proveer (S)–4–(3–amino–2–hidroxi–propoxi)–3–etil–5–metilbenzonitrilo crudo (6,23 g) como un aceite amarillo; LC–MS: tR = 0,66 min.; [M+1]+ = 235,11.

N–((S)–3–[2–etil–4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–6–metil–fenoxi]–2–hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida

a) A una solución de (S)–4–(3–amino–2–hidroxi–propoxi)–3–etil–5–metilbenzonitrilo (6,23 g, 26,59 mmol), se agregan ácido glicólico (2,43 g, 31,9 mmol), HOBt (4,31 g, 31,9 mmol), y clorhidrato de EDC (6,12 g, 31,9 mmol). La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 18 h antes de que sea diluida con NaHCO3 acuoso saturado y extractada dos veces con EA. Los extractos orgánicos combinados son secados empleando MgSO4, filtrados y concentrados. El producto crudo es purificado mediante CC con DCM que contiene 8% de metanol para proveer (S)–N–[3–(4–ciano–2–etil–6–metil–fenoxi)–2–hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida (7,03 g) como un aceite amarillo; LC–MS: tR = 0,74 min.; [M+1]+ = 293,10; 1H RMN (CDCl3): 5 1,25 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 2,69 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,48–3,56 (m, 3 H), 3,70–3,90 (m, 3 H), 4,19 (s, br, 3 H), 7,06 (m, 1 H), 7,36 (s, 1 H), 7,38 (s, 1 H).

b) El nitrilo anterior es convertido a la N–hidroxi–benzamidina de acuerdo con procedimientos de la bibliografía (por ejemplo, E. Meyer, A. C. Joussef, H. Gallardo, Synthesis 2003, 899–905); LC–MS: tR = 0,51 min.; [M+1]+ = 326,13; 1H RMN (D6–DMSO): 5 1,17 (t, J 7,4Hz, 3 H), 2,24 (s, 3H), 2,62 (q, J 7,4Hz, 2 H), 3,23 (m, 1 H), 3,43 (m, 1 H), 3,67 (m, 2 H), 3,83 (s, 2 H), 3,93 (m, 1 H), 5,27 (s br, 1 H), 5,58 (s br, 1 H), 5,70 (s, 2 H), 7,34 (s, 1 H), 7,36 (s, 1 H), 7,67 (m, 1 H), 9,46 (s br, 1H).

(S)–2–hidroxi–N–{2–hidroxi–3–[4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–2,6–dimetil–fenoxi]–propil}–acetamida

El compuesto del título se prepara en analogía con N–((S)–3–[2–etil–4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–6–metil–fenoxi]– 2–hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida; LC–MS: tR = 0,23 min, [M+1]+ = 312,25.

(S)–N–(3–[2–cloro–4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–6–metil–fenoxi]–2–hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida

El compuesto del título se obtiene como una cera beige (1,1 g) en analogía con N–((S)–3–[2–etil–4–(N–hidroxi– carbamimidoil)–6–metil–fenoxi]–2–hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida a partir de 3–cloro–4–hidroxi–5–metil– benzonitrilo; LC–MS: tR = 0,48 min, [M+H]+ = 331,94.

(S)–2–hidroxi–N–(2–hidroxi–3–[4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–3–metil–fenoxi]–propil)–acetamida

El compuesto del título se obtiene como un aceite beige (1,0 g) en analogía con N–((S)–3–[2–etil–4–(N–hidroxi– carbamimidoil)–6–metil–fenoxi]–2–hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida a partir de 4–hidroxi–2–metil–benzonitrilo; LC–MS: tR = 0,35 min, [M+H]+ = 297,99.

(S)–2–hidroxi–N–(2–hidroxi–3–[4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–2–metoxi–6–metil–fenoxi]–propil)–acetamida

El compuesto del título se obtiene como un aceite rojizo (1,3 g) en analogía con N–((S)–3–[2–etil–4–(N–hidroxi– carbamimidoil)–6–metil–fenoxi]–2–hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida a partir de 4–hidroxi–3–metoxi–5–metil– benzonitrilo; LC–MS: tR = 0,49 min, [M+H]+ = 327,98.

Ácido 4–benciloxi–3–etil–5–metil–benzóico

a) A una solución enfriada a hielo de H2SO4 (150 mL) en agua (250 mL) se agrega 2–etil–6–metilanilina (15,0 g, 111 mmol). La solución es tratada con hielo (150 g) antes de agregar gota a gota una solución de NaNO2 (10,7 g, 155 mmol) en agua (150 mL) y hielo (50 g). La mezcla es agitada a 0 °C durante 1 h. Se agrega H2SO4 acuoso al 50% (200 mL) y se mantiene la agitación a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla es extractada con DCM, los extractos orgánicos son secados empleando MgSO4 y evaporados. El producto crudo es purificado mediante CC eluyendo con heptano:EA 9:1 para proveer 2–etil–6–metil–fenol (8,6 g) como un aceite carmesí; LC–MS: tR = 0,89 min.; 1H RMN (CDCl3): 5 7,03–6,95 (m, 2H), 6,80 (t, J =7,6 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 2,64 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,24 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

b) Una solución de 2–etil–6–metil–fenol (8,40 g, 61,7 mmol) y hexametilen tetraamina (12,97 g, 92,5 mmol) en ácido acético (60 mL) y agua (14 mL) es calentada hasta 115 °C. El agua es retirada mediante destilación a 117 °C y es recolectada con un aparato de Dean–Stark. Luego el separador de agua es reemplazado por un condensador de flujo y la mezcla se somete a reflujo durante 3 h. La mezcla es enfriada hasta temperatura

5 ambiente, diluida con agua (100 mL) y extractada con EA. El extracto orgánico es lavado con NaHCO3 acuoso saturado, secado empleando MgSO4 y evaporado. El sólido remanente es disuelto en EA y tratado con heptano para inicial la cristalización. El material sólido es recolectado y secado para proveer 3–etil–4–hidroxi–5–metil– benzaldehído (3,13 g) como un polvo cristalino incoloro, 1H RMN (CDCl3): 5 9,83 (s, 1H), 7,58–7,53 (m, 2H), 5,30 (s br, 1H), 2,69 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,32 (s, 3H), 1,28 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

10 c) A una solución de 3–etil–4–hidroxi–5–metil–benzaldehído (34,9 g, 0,213 mol) en MeCN (350 mL), se agrega K2CO3 (58,7 g, 0,425 mol) y bromuro de bencilo (36,4 g, 0,213 mol). La mezcla es agitada a 60 °C durante 2 h antes de ser enfriada hasta temperatura ambiente, diluida con agua y extractada dos veces con EA. Los extractos orgánicos son lavados con agua concentrados para proveer 4–benciloxi–3–etil–5–metil–benzaldehído crudo (45 g) como un aceite naranjo. 1H RMN (CDCl3): 5 1,29 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,77 (q, J = 7,8

15 Hz, 2 H), 4,90 (s, 2 H), 7,31–7,52 (m, 5 H), 7,62 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,66 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 9,94 (s, 1 H).

d) A una mezcla de 4–benciloxi–3–etil–5–metil–benzaldehído (132 g, 0,519 mol) y 2–metil–2–buteno (364 g, 5,19 mol) en tert.–butanol (1500 mL), se agrega una solución de NaH2PO4 dihidrato (249 g, 2,08 mol) en agua (1500 mL). A esta mezcla, se agrega NaClO2 (187,8 g, 2,08 mol) en partes. La temperatura de la mezcla de reacción es mantenida por debajo de 30 °C, y se observa la evolución de gas. Al completar la adición, la 20 mezcla naranja de dos fases es bien agitada durante 3 h antes de que sea diluida con TBME (1500 mL). La fase orgánica es separada y lavada con solución acuosa al 20% de NaHS (1500 mL) y agua (500 mL). La fase orgánica es entonces extractada tres veces con NaOH acuoso 0,5 N (1000 mL), la fase acuosa es acidificada con HCl acuoso al 25% (500 mL) y extractada dos veces con TBME (1000 mL). Estos extractos orgánicos son combinados y evaporados a sequedad para proveer ácido 4–benciloxi–3–etil–5–metil–benzóico; 1H RMN (D6–

25 DMSO): 5 1,17 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,31 (s, 3 H), 2,67 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 4,86 (s, 2 H), 7,34–7,53 (m, 5 H), 7,68 (s, 2 H), 12,70 (s, 1 H).

Hidrazida de ácido 4–benciloxi–3–etil–5–metil–benzóico

A una solución de ácido 4–benciloxi–3–etil–5–metil–benzóico (8,3 g, 30,7 mmol) en DCM (300 mL) se agrega DIPEA (10,7 mL) y la mezcla es enfriada hasta 0 °C antes de agregar PyBOP (14,5 g, 33,8 mmol). Después de 10 min, se

30 agrega gota a gota una solución de hidrazina 1 M en THF (100 mL) y la mezcla es entibiada lentamente hasta temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción es entonces lavada con NaHCO3 acuoso saturado seguido por solución salina. La fase orgánica es recolectada, secada empleando MgSO4, filtrada y evaporada para proveer el compuesto del título (24 g, 40% de pureza) como una cera amarilla; LC–MS: tR = 0,82 min.; [M+H]+ = 285,10.

35 Ejemplo de Referencia A

Ácido 3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenil)– propiónico

O

NN

N

OH

O

tert–butil éster de ácido 3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–

40 metil–fenil)–propiónico se prepara a partir de tert–butil éster de ácido 3–[2–etil–4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–6– metil–fenil]–propiónico y ácido 6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–nicotínico en analogía con el Ejemplo 1 más adelante; LC–MS: tR = 1,22 min.; [M+1]+ = 479,33. Este derivado tert.butil éster es entonces tratado con HCl acuoso 6 N a 65 °C durante 18 h para proveer el compuesto del título como un sólido blanco; LC–MS: tR = 1,02 min.; [M+1]+ = 423,27; 1H RMN (D6–DMSO): 5 1,17–1,26 (m, 9 H), 2,37–2,43 (m, 8 H), 2,72 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,88 (s, 3 H),

45 2,91–2,99 (m, 2 H), 4,20–4,29 (m, 1 H), 7,72 (s, 1 H), 7,73 (s, 1 H), 8,11 (d, J = 1,8 Hz), 8,76 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

Ejemplo de Referencia B

Ácido 3–{2–etil–6–metil–4–[5–(5–metil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–fenil}–propiónico

O

N

OH

O

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo de Referencia A comenzando con 5–metil–6– pirrolidin–1–il–nicotínico ácido; LC–MS: tR = 0,86 min.; [M+1]+ = 421,22.

Ejemplo de Referencia C Ácido 3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenil}–propiónico

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo de Referencia A comenzando con 6–dietilamino–5– etil–nicotínico ácido; LC–MS: tR =1,06 min.; [M+1]+ = 437,29.

Ejemplo de Referencia D

10 Ácido 3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenil)– propiónico

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo de Referencia A comenzando con 5–etil–6–(isopropil– metil–amino)–nicotínico ácido; LC–MS: tR = 1,07 min.; [M+1]+ = 437,26. 15 Ejemplo 1 2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenol

A una solución de ácido 6–(etil–metil–amino)–5–metil–nicotínico (762 mg, 3,30 mmol) y NEt3 (1,17 g, 11,6 mmol) en DMF (50 mL), se agrega TBTU (706 mg, 3,63 mmol) y la mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 5 min 20 antes de agregar una solución de 3–etil–4,N–dihidroxi–5–metil–benzamidina (642 mg, 3,30 mmol) en DMF (5 mL). La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 16 h antes de agregar otra porción de TBTU (71 mg, 0,36 mmol) y 3–etil–4,N–dihidroxi–5–metil–benzamidina (64 mg, 0,33 mmol). Se mantiene la agitación durante 2 h. La mezcla es diluida con EA (200 mL) y lavada con solución acuosa saturada de NaHCO3 (2x50 mL) seguida por solución salina (50 mL): El extracto orgánico es secado empleando Na2SO4, filtrado y concentrado para proveer el 25 intermediario éster de hidroxiamidina crudo; LC–MS: tR = 0,76 min.; [M+1]+ = 371,11. Este material es disuelto en dioxano (50 mL) y la solución resultante es agitada a 95 °C durante 72 h. El solvente es entonces retirado in vacuo y el producto crudo es purificado mediante MPLC preparativa en sílica gel eluyendo con un gradiente de EA en

heptano para proveer el compuesto del título (868 mg) como un sólido beige; LC–MS: tR = 0,99 min.; [M+1]+ = 353,13; 1H RMN (CDCl3): 5 1,26 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 1,33 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 2,36 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,73 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,06 (s, 3 H), 3,44 (q, J = 6,8 Hz, 2 H), 4,96 (s, 1 H), 7,84 (s, 2 H), 8,07 (s, 1 H), 8,89 (s, 1 H).

Ejemplo 2

(R)–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)– propan–1,2–diol

O

N

OH

O OH

A una solución de 2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenol (150 mg, 0,426 mmol) en isopropanol (5 mL) y solución acuosa 3 N de NaOH (1 mL), se agrega (R)–3–cloro–1,2– 10 propanediol (940 mg, 8,5 mmol). La mezcla es agitada a 60 °C durante 16 h antes de agregar otra porción de solución acuosa 3 N de NaOH (1 mL), (R)–3–cloro–1,2–propanediol (940 mg, 8,5 mmol). Se mantiene la agitación a 60 °C durante 48 h. Se agrega otra porción de solución acuosa 3 N de NaOH (1 mL), (R)–3–cloro–1,2–propanediol (940 mg, 8,5 mmol) y la mezcla es agitada a 60 °C durante 3 días adicionales. La mezcla es diluida con EA (100 mL) y lavada con solución acuosa 1 N de NaOH (20 mL) seguida por solución salina (20 mL). El extracto orgánico es

15 secado empleando MgSO4, filtrados y concentrados. El producto crudo es purificado mediante MPLC preparativa en sílica gel eluyendo con un gradiente de EA en heptano para proveer el compuesto del título (80 mg) como un sólido blanco; LC–MS: tR = 0,89 min.; [M+1]+ = 427,16; 1H RMN (CDCl3): 5 1,26 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 1,31 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,34 (s br, 1 H), 2,39 (s, 6 H), 2,75 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 2,92 (s br, 1 H), 3,05 (s, 3 H), 3,43 (q, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,79– 4,02 (m, 4 H), 4,11–4,21 (m, 1 H), 7,85 (s, 1 H), 7,87 (s, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 8,88 (s, 1 H).

20 Ejemplo 3

(S)–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)–

propan–1,2–diol

O

N

OH OH El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 2 empleando (S)–3–cloro–1,2–propandiol; LC–MS: tR 25 = 0,89 min.; [M+1]+ = 427,15.

O

Ejemplo 4 (R)–1–amino–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil– fenoxi)–propan–2–ol O

N N

N

NH2 OH

30 a) A una solución de 2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil– fenol (150 mg, 0,426 mmol) en isopropanol (20 mL) y solución acuosa 3 N de NaOH (5 mL), se agrega (S)– epiclorohidrina (525 mg, 5,68 mmol). La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 16 h antes de agregar otra porción de (S)–epiclorohidrina (525 mg, 5,68 mmol) y se mantiene la agitación durante 24 h. La mezcla es diluida con EA (200 mL) y lavada con solución acuosa 1 N de NaOH (2x25 mL) y solución salina. El

35 extracto orgánico es secado empleando MgSO4, filtrado y concentrado para proveer etil–{5–[3–(3–etil–5–metil– 4–oxiranilmetoxi–fenil)–[1,2,4]oxadiazol–5–il]–3–metil–piridin–2–il}–metil–amina cruda (271 mg); LC–MS: tR = 1,08 min.; [M+1]+ = 409,15.

b) El epóxido anterior (271 mg, 0,56 mmol) es disuelto en NH3 7 N en metanol (6 mL) y la solución resultante es agitada en un contenedor sellado a 60 °C durante 6 h. La mezcla es concentrada para proveer el 5 compuesto del título como un aceite amarillo; LC–MS: tR = 0,77 min.; [M+1]+ = 426,12.

Ejemplo 5

(S)–1–amino–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil– fenoxi)–propan–2–ol

O

N N

N

N NH2 OH 10 El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 4 empleando (R)–epiclorohidrina; LC–MS: tR = 0,77 min.; [M+1]+ = 426,16.

Ejemplo 6

N–[(R)–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)–2– hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida

Una solución de (R)–1–amino–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6– metil–fenoxi)–propan–2–ol (238 mg, 0,560 mmol), ácido glicólico (51 mg, 0,672 mmol), DIPEA (290 mg, 2,24 mmol) y HOBT (95 mg, 0,70 mmol) en THF (20 mL) es agitada a temperatura ambiente durante 15 min antes de agregar EDC HCl (134 mg, 0,70 mmol). La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 16 h antes de ser diluida con 20 EA 8100 mL) y lavada con solución acuosa 1 N de NaOH (3x25 mL) y solución salina (25 mL). El extracto orgánico es secado empleando Na2SO4, filtrado y concentrado. El producto crudo es purificado mediante HPLC preparativa en sílica gel eluyendo con un gradiente de EA en heptano para proveer el compuesto del título (34 mg) como una resina incolora; LC–MS: tR = 0,85 min.; [M+1]+ = 484,31; 1H RMN (CD3OD): 5 1,26 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 1,31 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,41 (s, 3 H), 2,43 (s, 3 H), 2,80 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 3,07 (s, 3 H), 3,44–3,52 (m, 3 H), 3,66 (dd, J = 13,0,

25 4,3 Hz, 1 H), 3,85–3,91 (m, 2 H), 4,04 (s, 2 H), 4,12–4,18 (m, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 7,85 (s, 1 H), 8,12 (s, 1 H), 8,81 (s, 1 H).

Ejemplo 7

N–[(S)–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)–2– hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 6 a partir del Ejemplo 5; LC–MS: tR = 0,85 min.; [M+1]+ = 484,30.

Ejemplo 8

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida

A una solución de ácido 6–dietilamino–5–metil–nicotínico (88 mg, 0,36 mmol) y HOBT (53 mg, 0,396 mmol) en THF

5 (5 mL), se agrega EDC HCl (76 mg, 0,396 mmol). La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 5 min antes de agregar N–((S)–3–[2–etil–4–(N–hidroxi–carbamimidoil)–6–metil–fenoxi]–2–hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida 129 mg, 0,396 mmol). La reacción es agitada a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla es diluida con solución acuosa saturada de NaHCO3 y extractada dos veces con EA. Los extractos orgánicos combinados son secados empleando MgSO4, filtrados y evaporados para proveer el intermediario éster de hidroxiamidina crudo; LC–

10 MS: tR = 0,71 min.; [M+1]+ = 516,33. Este intermediario es disuelto en dioxano (10 mL) y la mezcla es agitada a 80 °C durante 16 h. El solvente es evaporado y el producto crudo es purificado en TLC preparativa empleando DCM que contiene 10% de metanol para proveer el compuesto del título (38 mg) como una resina incolora; LC–MS: tR = 0,88 min.; [M+1]+ = 498,27;

Ejemplo 9

15 2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenol

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 1 a partir de ácido 6–(isopropil–metil–amino)–5–metil– nicotínico; LC–MS: tR = 1,03 min.; [M+1]+ = 367,23; 1H RMN (CDCl3): 5 1,26 (d, J = 6,5 Hz, 6 H), 1,33 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,36 (s, 3 H), 2,39 (s, 3 H), 2,73 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,91 (s, 3 H), 4,13–4,21 (m, 1 H), 4,96 (s, 1 H), 7,83 (s, 2 H),

20 8,08 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 8,90 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplos 10 a 15

Los siguientes Ejemplos son preparados a partir del Ejemplo 9 en analogía con Ejemplos previos.

Ejemplo: Preparado en analogía con Ejemplo R LC–MS tR (min) [M+H]+

10: 2 O OH OH 0,92 441,26

11: 2 O OH OH 0,92 441,26

12: 4 OH O NH2 0,78 440,29

13: 4 OH O NH2 0,78 440,28

14: 6 O OH N H O OH 0,88 498,28

15: 6 O OH N H O OH 0,88 498,30

Ejemplo 15

1H RMN (CDCl3): 5 1,26 (d, J = 6,8 Hz, 6 H), 1,32 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,39 (s, 6 H), 2,57 (s br, 1 H), 2,75 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,91 (s, 3 H), 3,33 (s br, 1 H), 3,48–3,57 (m, 1 H), 3,77–3,86 (m, 2 H), 3,90 (m, 1 H), 4,14–4,25 (m, 4 H), 6,99 (t br, J = 6,3 Hz, 1 H), 7,85 (s, 1 H), 7,87 (s, 1 H), 8,07 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8,90 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplo 16 2–etil–6–metil–4–[5–(5–metil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–fenol

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 1 a partir de ácido 5–metil–6–pirrolidin–1–il–nicotínico; 10 LC–MS: tR = 0,87 min.; [M+1]+ = 365,22.

Ejemplos 17 a 21

Los siguientes Ejemplos son preparados a partir del Ejemplo 16 en analogía con Ejemplos previos.

Ejemplo: Preparado en analogía con Ejemplo R LC–MS tR (min) [M+H]+

17: 2 O OH OH

18: 4 OH O NH2 0,70 438,24

19: 4 OH O NH2 0,70 438,24

20: 6 OH O N H O OH 0,76 496,30

21: 6 OH O N H O OH 0,76 496,29

Ejemplo 21

1H RMN (CDCl3): 5 1,31 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 1,97–2,03 (m, 4 H), 2,38 (s, 3 H), 2,49 (s, 3 H), 2,74 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,41 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,48–3,56 (m, 1 H), 3,71–3,77 (m, 4 H), 3,77–3,92 (m, 3 H), 4,17–4,24 (m, 3 H), 7,02 (t br, J = 6,0 Hz, 1 H), 7,84 (s, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 7,96 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 8,82 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

Ejemplo 22 4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenol

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 1 a partir de 6–dietilamino–5–etil–nicotínico ácido; 10 LC–MS: tR = 1,07 min.; [M+1]+ = 381,29.

Ejemplos 23 a 28

Los siguientes Ejemplos son preparados a partir del Ejemplo 22 en analogía con Ejemplos previos.

Ejemplo: Preparado en analogía con Ejemplo R LC–MS tR (min) [M+H]+

23: 2 O OH OH 0,97 455,30

24: 2 O OH OH 0,98 455,30

25: 4 OH O NH2 0,82 454,29

26: 4 OH O NH2 0,82 454,31

27: 6 O OH N H O OH 0,93 512,37

28: 6 O OH N H O OH 0,92 512,37

Ejemplo 28

1H RMN (CDCl3): 5 1,20 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 1,29–1,37 (m, 6 H), 2,39 (s, 3 H), 2,51 (t, J = 5,0 Hz, 1 H), 2,68–2,79 (m, 4 H), 3,32 (d, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,43 (q, J = 7,0 Hz, 4 H), 3,49–3,57 (m, 1 H), 3,77–3,87 (m, 2 H), 3,88–3,93 (m, 1 H), 4,19–4,24 (m, 3 H), 6,97 (t br, J = 6,5 Hz, 1 H), 7,87 (s, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 8,14 (s br, 1 H), 8,92 (d, J = 1,8 Hz, 1 H).

Ejemplo 29 2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenol

NO

N

N N

OH

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 1 a partir de ácido 5–etil–6–(isopropil–metil–amino)– 10 nicotínico; LC–MS: tR = 1,08 min.; [M+1]+ = 381,28.

Ejemplos 30 a 35

Los siguientes Ejemplos son preparados a partir del Ejemplo 29 en analogía con Ejemplos previos.

Ejemplo: Preparado en analogía con Ejemplo R LC–MS tR (min) [M+H]+

30: 2 O OH OH 0,98 455,30

31: 2 O OH OH 0,98 455,30

32: 4 OH O NH2

33: 4 OH O NH2 0,82 454,32

34: 6 O OH N H O OH 0,93 512,38

35: 6 O OH N H O OH 0,94 512,38

Ejemplo 31

1H RMN (CDCl3): 5 1,25 (d, J = 6,8 Hz, 6 H), 1,33 (t, J = 7,5 Hz, 6 H), 2,05 (t, J = 5,8 Hz, 1 H), 2,41 (s, 3 H), 2,70– 2,81 (m, 5 H), 2,89 (s, 3 H), 3,82–3,92 (m, 2 H), 3,94–3,98 (m, 2 H), 4,09–4,20 (m, 2 H), 7,88 (s, 1 H), 7,89 (s, 1 H), 8,15 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8,91 (d, J = 1,8 Hz, 1 H).

Ejemplo 36 2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenol

10 El compuesto del título (791 mg) es obtenido como un sólido blancuzco en analogía con Ejemplo 1 a partir de ácido 5–etil–6–pirrolidin–1–il–nicotínico (1,80 g, 8,17 mmol) y 3–etil–4,N–dihidroxi–5–metil–benzamidina (1,59 g, 8,17 mmol); LC–MS: tR = 0,91 min.; [M+1]+ = 379,29; 1H RMN (CDCl3): 5 1,27 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 1,33 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 1,98–2,05 (m, 4 H), 2,36 (s, 3 H), 2,73 (q, J = 7,8 Hz, 2 H), 2,82 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 3,67–3,73 (m, 4 H), 4,96 (s, 1 H), 7,84 (s, 2 H), 8,04 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,85 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

Ejemplo 37

3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenil)–N–(2– hidroxi–etil)–propionamida

A una solución de 3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–

5 fenil)–propiónico ácido (73 mg, 0,172 mmol) y DIPEA (67 mg, 0,515 mmol) en DMF (5 mL), se agrega PyBOP (117 mg, 0,189 mmol). La mezcla es agitada durante 15 min a temperatura ambiente antes de agregar etanolamina (42 mg, 0,682 mmol) y se mantiene la agitación durante 15 h a temperatura ambiente. La reacción es apagada mediante la adición de agua y de una solución acuosa saturada de NaHCO3 y la mezcla es extractada dos veces con EA. Los extractos orgánicos combinados son secados empleando MgSO4, filtrados y concentrados. El sólido obtenido es

10 lavado con éter, luego purificado adicionalmente mediante HPLC preparativa para proveer el compuesto del título (14 mg) como un sólido blanco; LC–MS: tR = 0,92 min.; [M+1]+ = 466,26; 1H RMN (CDCl3): 5 1,27 (d, J = 6,8 Hz, 6 H), 1,32 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,40–2,45 (m, 2 H), 2,46 (s, 3 H), 2,78 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,92 (s, 3 H), 3,08–3,14 (m, 2 H), 3,46 (q, J = 5,3 Hz, 2 H), 3,73–3,78 (m, 2 H), 4,15–4,23 (m, 1 H), 5,82 (t br, J = 5,0 Hz, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 7,85 (s, 1 H), 8,09 (d, J = 1,0 Hz, 1 H), 8,91 (d, J = 1,0 Hz, 1 H).

15 Ejemplo 38

ácido [3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenil)– propionilamino]–acético

O

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 37 mediante el acoplamiento de glicina a ácido 3–(2–

20 etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenil)–propiónico; LC–MS: tR = 0,93 min.; [M+1]+ = 480,29; 1H RMN (CDCl3): 5 1,26 (d, J = 6,5 Hz, 6 H), 1,31 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,39 (s, 3 H), 2,43–2,50 (m, 5 H), 2,77 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,91 (s, 3 H), 3,07–3,14 (m, 2 H), 4,11–4,20 (m, 3 H), 6,04 (t br, J = 4,3 Hz, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 7,84 (s, 1 H), 8,09 (s, 1 H), 8,92 (d, J = 1,8 Hz, 1 H).

Ejemplo 39

25 ácido 1–[3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil– fenil)–propionil]–azetidin–3–carboxílico

COOH

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 37 mediante el acoplamiento de ácido azetidin–3– carboxílico a ácido 3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–

30 fenil)–propiónico; LC–MS: tR = 0,94 min.; [M+1]+ = 506,31; 1H RMN (CDCl3): 5 1,26 (d, J = 6,8 Hz, 6 H), 1,31 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,27–2,34 (m, 2 H), 2,39 (s, 3 H), 2,45 (s, 3 H), 2,77 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 2,91 (s, 3 H), 3,05–3,12 (m, 2 H), 3,35–3,44 (m, 1 H), 4,01–4,07 (m, 1 H), 4,10–4,20 (m, 2 H), 4,20–4,27 (m, 2 H), 7,81 (s, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 8,08 (d, J = 1,0 Hz, 1 H), 8,90 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplos 40 a 42

Los siguientes Ejemplos son preparados en analogía con Ejemplos previos a partir del Ejemplo de Referencia B.

Ejemplo: R En analogía con Ejemplo LC–MS tR [min] [M+H]+

40: HN OH 37 0,79 464,27

41: HN OH O 38 0,80 478,30

42: N COOH 39 0,78 504,36

Ejemplos 43 a 45

Los siguientes Ejemplos son preparados en analogía con Ejemplos previos a partir del Ejemplo de Referencia C.

Ejemplo: R En analogía con Ejemplo LC–MS tR [min] [M+H]+

43: HN OH 37 0,97 480,34

44: HN OH O 38 0,97 494,33

45: N COOH 39 0,98 520,37

Ejemplo 44

1H RMN 5 (CDCl3): 1,20 (t, J = 6,8 Hz, 6 H), 1,33 (q, J = 7,5 Hz, 6 H), 2,45 (s, 3 H), 2,46–2,50 (m, 2 H), 2,69–2,81 10 (m, 4 H), 3,08–3,14 (m, 2 H), 3,44 (q, J = 7,0 Hz, 4 H), 4,14–4,18 (m, 2 H), 6,03 (t br, J = 4,8 Hz, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 7,85 (s, 1 H), 8,16 (d, J = 0,8 Hz, 1 H), 8,94 (d, J = 0,5 Hz, 1 H).

Ejemplos 46 a 48

Los siguientes Ejemplos son preparados en analogía con Ejemplos previos a partir del Ejemplo de Referencia D.

Ejemplo: R En analogía con Ejemplo LC–MS tR [min] [M+H]+

46: HN OH 37 0,98 480,34

47: HN OH O 38 0,98 494,34

48: N COOH 39 0,99 520,38

Ejemplo 46

5 1H RMN (CDCl3): 5 1,25 (d, J = 6,5 Hz, 6 H), 1,29–1,36 (m, 6 H), 2,39–2,45 (m, 2 H), 2,46 (s, 3 H), 2,73 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,78 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,89 (s, 3 H), 3,08–3,15 (m, 2 H), 3,46 (q, J = 5,3 Hz, 2 H), 3,72–3,79 (m, 2 H), 4,13 (hept, J = 6,8 Hz, 1 H), 5,83 (t br, J = 4,5 Hz, 1 H), 7,84 (s, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 8,15 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8,91 (d, J = 1,8 Hz, 1 H).

Ejemplo 49

10 (R)–3–{2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–propan–1,2– diol

El compuesto del título (97 mg) se obtiene como un aceite incoloro a partir del Ejemplo 36 (129 mg, 0,341 mmol) siguiendo el procedimiento presentado para el Ejemplo 2; LC–MS: tR = 0,81 min.; [M+1]+ = 453,09.

15 Ejemplo 50

(S)–3–{2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–propan–1,2– diol

El compuesto del título (117 mg) se obtiene como un aceite incoloro a partir del Ejemplo 36 (132 mg, 0,348 mmol) 20 siguiendo el procedimiento presentado para el Ejemplo 3; LC–MS: tR = 0,81 min.; [M+1]+ = 453,10; 1H RMN (CDCl3): 5 1,27 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 1,32 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 1,98–2,04 (m, 4 H), 2,13 (s br, 1 H), 2,40 (s, 3 H), 2,72–2,87 (m, 5 H), 3,67–3,73 (m, 4 H), 3,83–3,99 (m, 4 H), 4,14–4,21 (m, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 8,03 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,85 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplo 51

(R)–1–amino–3–{2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}– propan–2–ol

O

N

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 4 a partir del Ejemplo 36; LC–MS: tR = 0,72 min.; [M+1]+ = 452,11.

10 Ejemplo 52

(S)–1–amino–3–{2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}– propan–2–ol

O

N

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 5 a partir del Ejemplo 36; LC–MS: tR = 0,72 min.; 15 [M+1]+ = 452,13.

Ejemplo 53

N–((R)–3–{2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–2– hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida

O

N O

20 El compuesto del título (110 mg) se obtiene como un sólido blanco en analogía con Ejemplo 6 a partir del Ejemplo 52 (123 mg, 272 µmol); LC–MS: tR = 0,78 min.; [M+1]+ = 510,15; 1H RMN (CDCl3): 5 1,27 (t, J = 7,8 Hz, 3 H), 1,31 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 1,97–2,05 (m, 4 H), 2,38 (s, 3 H), 2,74 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,82 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,93 (t br, J = 4,3 Hz, 1 H), 3,46–3,55 (m, 2 H), 3,67–3,73 (m, 4 H), 3,77–3,86 (m, 2 H), 3,89 (dd, J = 9,8, 4,8 Hz, 1 H), 4,17–4,23 (m, 3 H), 7,06 (t br, J = 6,0 Hz, 1 H), 7,84 (s, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 8,03 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 8,84 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

25 Ejemplo 54

N–((S)–3–{2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida

O

N O

El compuesto del título (110 mg) se obtiene como un sólido blanco en analogía con Ejemplo 6 a partir del Ejemplo 53 (138 mg, 306 –MS: tR = 0,78 min.; [M+1]+ = 510,15.

Ejemplos 55 a 58

O NO

Ra

OH

N N

N N O

H OH Rb

Los siguientes Ejemplos son preparados en analogía con el Ejemplo 8 a partir de ácido 6–dietilamino–5–metil– nicotínico y la N–hidroxi–benzamidina apropiada.

Ejemplo: Ra Rb Rc LC–MS** tR [min] [M+H]+

55: CH3 CH3 H 0,63 484,33

56: CH3 Cl H 0,66 504,17

57: CH3 OCH3 H 0,62 500,25

58: H H CH3 0,60 470,29

Ejemplo 55

1H RMN (CDCl3): 5 1,22 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 2,37 (s, 6 H), 2,38 (s, 3 H), 2,83 (t, J = 5,3 Hz, 1 H), 3,43–3,56 (m, 6 H), 10 3,76–3,86 (m, 2 H), 3,90 (dd, J = 9,5, 4,5 Hz, 1 H), 4,16–4,24 (m, 3 H), 7,05 (t, J = 5,8 Hz, 1 H), 7,84 (s, 2 H), 8,05 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,89 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplo 56

1H RMN (CDCl3): 5 1,22 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 2,38 (s, 3 H), 2,42 (s, 3 H), 2,94 (s br, 1 H), 3,48 (q, J = 7,3 Hz, 4 H), 3,53–3,65 (m, 2 H), 3,81 (ddd, J = 14,1, 6,5, 3,5 Hz, 1 H), 3,99 (dd, J = 9,3, 6,0 Hz, 1 H), 4,05 (dd, J = 9,5, 4,8 Hz, 1 15 H), 4,18–4,26 (m, 3 H), 7,10 (t, J = 5,5 Hz, 1 H), 7,91 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8,03 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,04 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,87 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplo 57

1H RMN (CDCl3): 5 1,22 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 2,38 (s, 3 H), 2,39 (s, 3 H), 2,93 (t br, J = 5,3 Hz, 1 H), 3,48 (q, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,51 (s, 3 H), 3,75 (ddd, J = 13,8, 6,5, 3,3 Hz, 1 H), 3,89–3,97 (m, 2 H), 3,98 (s, 3 H), 4,07–4,14 (m, 2 H), 20 4,18 (d, J = 4,8 Hz, 2 H), 7,04 (t br, J = 5,8 Hz, 1 H), 7,56 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 8,05 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,89 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplo 58

1H RMN (CDCl3): 5 1,22 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 2,38 (s, 3 H), 2,66 (s, 3 H), 3,17 (s br, 1 H), 3,47 (q, J = 6,8 Hz, 4 H), 3,49–3,56 (m, 1 H), 3,69–3,78 (m, 1 H), 3,99–4,07 (m, 2 H), 4,15–4,22 (m, 3 H), 6,84–6,89 (m, 2 H), 7,10 (t, J = 6,0 25 Hz, 1 H), 8,00–8,07 (m, 2 H), 8,89 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplos 59 a 60

Los siguientes Ejemplos son preparados en analogía con el Ejemplo 8 a partir de ácido 6–dietilamino–5–metil– nicotínico y la 4,N–dihidroxi–benzamidina apropiada.

Ejemplo: R LC–MS tR [min] [M+H]+

59: Cl 0,78 373,24

60: n–propil 0,80 381,22

Ejemplo 60

1H RMN (CDCl3): 5 1,04 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 1,22 (t, J = 6,5 Hz, 6 H), 1,68–1,79 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 2,38 (s, 3 H), 2,68 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,47 (q, J = 6,8 Hz, 4 H), 4,99 (s, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 8,07 (s, 1 H), 8,90 (s, 1 5 H).

Ejemplo 61

(R)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2,6–dimetil–fenoxi}–propan–1,2–diol

10 a) A una solución de clorhidrato de ácido 6–dietilamino–5–metil–nicotínico ácido (120 mg, 490 µmol) en DMF, se agrega DIPEA (190 mg, 1,47 mmol) seguido por TBTU (165 mg, 515 µmol). La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 30 min antes de agregar (S)–4–(2,2–Dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–N– hidroxi–3,5–dimetil–benzamidina (152 mg, 515 µmol). La mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 1 h antes de que sea diluida con EA, lavada con solución acuosa saturada de NaHCO3, secada empleando

15 MgSO4, filtrada y concentrada. El residuo es disuelto en dioxano (5 mL) y la solución resultante es agitada a 80 °C durante 16 h. El solvente es evaporado y el producto crudo es purificado mediante HPLC preparativa para proveer (5–{3–[4–(S)–(2,2–dimetil–[1,3]dioxolan–4–ilmetoxi)–3,5–dimetil–fenil]–[1,2,4]oxadiazol–5–il}–3–metil– piridin–2–il)–dietil–amina (90 mg) como un aceite incoloro; LC–MS: tR = 0,88 min.; [M+1]+ = 467,27.

b) El acetal anterior (90 mg, 193 µmol) es disuelto en HCl acuoso al 25% HCl (3 mL) y dioxano (3 mL) y la

20 mezcla es agitada a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla es concentrada y el producto crudo es purificado en TLC preparativa empleando DCM:metanol 92:8 para proveer el compuesto del título () como un sólido blanco; LC–MS: tR = 0,66 min.; [M+1]+ = 427,26, 1H RMN (CDCl3): 5 1,22 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 2,13 (s br, 1 H), 2,39 (s, 3 H), 2,39 (s, 6 H), 2,78 (d br, J = 3,5 Hz, 1 H), 3,48 (q, J = 7,0 Hz, 4 H), 3,82–3,97 (m, 4 H), 4,13– 4,20 (m, 1 H), 7,85 (s, 2 H), 8,06 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,89 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

25 Ejemplos 62 a 64

O

N

Rc N N

OH N

O OH Rb

Los siguientes Ejemplos son preparados en analogía con el Ejemplo 61 empleando las hidroxi–benzamidinas apropiadas.

Ejemplo: Ra Rb Rc LC–MS** tR [min] [M+H]+

62: OCH3 H H 0,55 429,19

63: H CH3 Cl 0,70 447,14

64: H OCH3 Cl 0,69 463,16

Ejemplo 63

1H RMN (CDCl3): 5 1,22 (t, J = 6,8 Hz, 6 H), 2,11 (t br, J = 5,3 Hz, 1 H), 2,39 (s, 3 H), 2,44 (s, 3 H), 2,86 (d br, J = 4,8 Hz, 1 H), 3,49 (q, J = 6,8 Hz, 4 H), 3,83–3,95 (m, 2 H), 4,08–4,14 (m, 2 H), 4,15–4,22 (m, 1 H), 7,93 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,04 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,07 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,89 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

Ejemplo 65 4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,3,4]oxadiazol–2–il]–2–etil–6–metil–fenol

a) A una solución de 6–dietilamino–5–metil–nicotínico ácido (420 mg, 1,72 mmol) y DIPEA (665 mg, 5,15 mmol, 881 µL) en DMF (12 mL) se agrega PyBOP (999 mg, 1,92 mmol) a 0 °C. La mezcla es agitada a 0 °C durante 10 15 min antes de agregar hidrazida de ácido 4–benciloxi–3–etil–5–metil–benzóico (1040 mg, 1,92 mmol). Se mantiene la agitación a 0 °C durante 4 h, luego a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción es apagada con agua (2 mL) y extractada con éter de dietilo. El extracto orgánico es lavado con solución acuosa saturada de NaHCO3, secado empleando MgSO4, filtrado, y concentrado. El material es disuelto en DCM (60 mL) y se agregan piridina (678 mg, 8,58 mmol) seguido por anhídrido de ácido trifluorometanosulfónico (726 mg, 2,57

15 mmol) a 0 °C. La mezcla es agitada y entibiada hasta temperatura ambiente durante toda la noche. La mezcla es lavada con HCl acuoso 1 N y agua, secada empleando MgSO4, filtrada y concentrada. El producto crudo es purificado mediante CC eluyendo con heptano:EA 9:1 para proveer {5–[5–(4–benciloxi–3,5–dimetil–fenil)– [1,3,4]oxadiazol–2–il]–3–metil–piridin–2–il}–dietil–amina (217 mg) como un aceite incoloro; LC–MS: tR = 0,87 min.; [M+1]+ = 457,23.

b) A una solución del éter de bencilo anterior (217 mg, 475 µmol) en THF (5 mL) y etanol (5 mL), se agrega cuidadosamente Pd/C (50 mg, 10% de Pd). La pasta es agitada a temperatura ambiente durante 15 h bajo 5 bar de H2. El catalizador es retirado mediante filtración y el filtrado es concentrado y secado para proveer el compuesto del título (160 mg) como un sólido blanco; LC–MS: tR = 0,67 min.; [M+1]+ = 367,24.

25 Ejemplo 66

(S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,3,4]oxadiazol–2–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–propan–1,2–

diol

El compuesto del título (51 mg) es preparado en analogía con Ejemplo 3 a partir del Ejemplo 65 (50 mg, 136 µmol);

30 LC–MS**: tR = 0,60 min.; [M+1]+ = 441,20; 1H RMN (CDCl3): 5 1,20 (t, J = 6,8 Hz, 6 H), 1,32 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,17 (t br, J = 5,8 Hz, 1 H), 2,38 (s, 3 H), 2,41 (s, 3 H), 2,77 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,44 (q, J = 7,3 Hz, 4 H), 3,58–3,76 (m, 2 H), 3,82–3,98 (m, 2 H), 4,15–4,21 (m, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 8,05 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 8,82 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

Ejemplo 67

35 1–amino–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,3,4]oxadiazol–2–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–propan– 2–ol

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 5 a partir del Ejemplo 65; LC–MS**: tR = 0,51 min.; [M+1]+ = 440,27; 1H RMN (CDCl3): 5

1,20 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 1,32 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,38 (s, 3 H), 2,41 (s, 3 H), 2,77 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,95 (dd, J = 12,8, 7,3 Hz, 1 H), 3,06 (dd, J = 12,8, 4,0 Hz, 1 H), 3,43 (q, J = 7,0 Hz, 4 H), 3,87–3,90 (m, 2 H), 4,01–4,06 (m, 1 H), 7,81 (s, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 8,05 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 8,82 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

Ejemplo 68

N–((2S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,3,4]oxadiazol–2–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2– hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida

N NO

OH

N O N N

H OH

El compuesto del título (16 mg) es preparado en analogía con Ejemplo 7 a partir del Ejemplo 67 (15 mg, 33 µmol); LC–MS**: tR = 0,57 min.; [M+1]+ = 497,88; 1H RMN (CDCl3): 5 1,21 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 1,31 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,39 (s, 6 H), 2,71 (s br, 1 H), 2,75 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,41–3,49 (m, 5 H), 3,49–3,57 (m, 1 H), 3,78–3,88 (m, 2 H), 3,91 (dd, J = 9,5, 4,8 Hz, 1 H), 4,19–4,26 (m, 3 H), 7,04 (t, J = 6,0 Hz, 1 H), 7,81 (s, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 8,05 (s, 1 H), 8,82 (s, 1 H).

Ejemplo 69

(S)–1–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,3,4]oxadiazol–2–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–3–metilamino– propan–2–ol

N

N N O N N

H OH

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 5 a partir del Ejemplo 65 empleando metilamina en la etapa de abertura de epóxido (etapa b); LC–MS**: tR = 0,52 min.; [M+1]+ = 454,39; 1H RMN (CDCl3): 5 1,20 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 1,32 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,08 (s br, 2 H), 2,38 (s, 3 H), 2,41 (s, 3 H), 2,54 (s, 3 H), 2,78 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,81–2,91 (m, 2 H), 3,43 (q, J = 7,0 Hz, 4 H), 3,89 (d, J = 5,0 Hz, 2 H), 4,11–4,17 (m, 1 H), 7,81 (s, 1 H), 7,83 (s, 1 H), 8,05 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 8,82 (d, J = 2,3 Hz, 1 H).

Ejemplo 70

N–((2S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,3,4]oxadiazol–2–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2– hidroxi–propil)–2–hidroxi–N–metil–acetamida

N NO

OH

N O N N OH

El compuesto del título se prepara en analogía con el Ejemplo 7 a partir del Ejemplo 69; LC–MS**: tR = 0,61 min.; [M+1]+ = 512,31; 1H RMN (CDCl3): 5 1,21 (t, J = 7,0 Hz, 6 H), 1,32 (t, J = 7,5 Hz, 3 H), 2,38 (s, 3 H), 2,40 (s, 3 H), 2,76 (q, J = 7,5 Hz, 2 H), 3,10 (s, 3 H), 3,22 (d, J = 4,5 Hz, 1 H), 3,44 (q, J = 6,8 Hz, 4 H), 3,51 (t, J = 4,5 Hz, 1 H), 3,74–3,78 (m, 2 H), 3,80–3,88 (m, 1 H), 3,91 (dd, J = 9,5, 4,5 Hz, 1 H), 4,24–4,27 (m, 2 H), 4,29–4,37 (m, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 7,84 (s, 1 H), 8,05 (d, J = 0,8 Hz, 1 H), 8,82 (d, J = 2,0 Hz, 1 H).

Ejemplo 71: ensayo GTP6para determinar valores EC50:

Se llevan a cabo ensayos de unión GTPyS en placas de microtitulación de 96 pocillos (Nunc, 442587) en un volumen final de 200 µl, empleando preparaciones de membrana de células CHO que expresan el receptor S1P1 humano recombinante. Las condiciones de ensayo son 20 mM de Hepes (Fluka, 54461), 100 mM de NaCl (Fluka, 71378), 5 mM de MgCl2 (Fluka, 63064), 0,1% de BSA (Calbiochem, 126609), 1 µM de GDP (Sigma, G–7127), 2,5% de DMSO (Fluka, 41644), 50 pM de 35S–GTPyS (Amersham Biosciences, SJ1320). El pH es 7,4. Los compuestos de ensayo se disuelven y se diluyen en 100% de DMSO y se pre–incuban a temperatura ambiente durante 30 min. en 150 µl del tampón de ensayo anterior, en ausencia de 35S–GTPyS. Después de la adición de 50 µl de 35S–GTPyS, el ensayo es incubado durante 1 h a temperatura ambiente. El ensayo se termina mediante la transferencia de la mezcla de reacción a una placa Multiscreen (Millipore, MAHFC1H60) empleando un cosechador de células de

5 Packard Biosciences, y las placas son lavadas con 10 mM de Na2HPO4/NaH2PO4 (70%/30%) frío a hielo, son secadas, selladas en la parte inferior y, después de la adición de 25 µl de MicroScint20 (Packard Biosciences, orden número 6013621), selladas en la parte superior. Se mide el 35S–GTPyS unido a la membrana con un TopCount de Packard Biosciences.

EC50 es la concentración de agonista que induce un 50% de la unión específica 35S–GTPyS máxima. La unión

10 específica se determina mediante la resta de la unión no específica de la unión máxima. La unión máxima es la cantidad de cpm unida a la placa Multiscreen en presencia de 10 µM de S1P. La unión no específica es la cantidad de unión en ausencia de un agonista en el ensayo.

Los valores EC50 de los compuestos de los Ejemplos 4, 5, 9 y 36 no son medidos. Los valores EC50 de los compuestos de los ejemplos 18 y 19 han sido medidos como mayores que 10 µM. Los valores EC50 de todos los

15 demás compuestos ejemplo se encuentran en el rango desde 0,2 nM hasta 6750 nM con un promedio de 571 nM. Las actividades agonísticas, determinadas de acuerdo con el procedimiento descrito anteriormente, de algunos compuestos de la presente invención se presentan en la Tabla 1.

Tabla 1:

Compuesto del Ejemplo: EC50 [nM]

6: 3

15: 20

24: 12

27: 8

28: 2

31: 17

34: 3

44: 4

46: 5

54: 5

55: 0,9

56: 1,3

58: 14

63: 5,2

64: 8,9

68: 21,2

Ejemplo 72: evaluación de la eficacia in vivo:

20 La eficacia de los compuestos de fórmula (I) se evalúa mediante la medición de los linfocitos circulantes después de la administración oral de 3 a 30 mg/kg de un compuesto de fórmula (I) en ratas Wistar macho normotensas. Los animales son alojados en condiciones de clima controlado con un ciclo de 12 h de luz/oscuridad, y tienen libre acceso a comida normal para ratas y a agua bebestible. Se recolecta sangre antes y 3, 6 y 24 h después de la administración del fármaco. Se somete la sangre entera a hematología empleando un sistema de hematología Advia

25 (Bayer Diagnostics, Zurich, Suiza).

Todos los datos son presentados como promedios ± SEM. Los análisis estadísticos se llevan a cabo mediante análisis de la varianza (ANOVA) empleando Statistica (StatSoft) y el procedimiento de Student–Newman–Keuls para comparaciones múltiples. La hipótesis nula se rechaza cuando p < 0,05.

Como un ejemplo, la Tabla 2 presenta el efecto en los conteos de linfocitos 6 h después de la administración oral de 10 mg/kg de los compuestos de la presente invención a ratas Wistar macho normotensas en comparación con un grupo de animales tratado sólo con vehículo.

Tabla 2:

Compuesto de Ejemplo: Conteo de linfocitos

8: –66 %

27: –55 %

28: –56 %

54: –57%

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula (I) R4 R5

R1 N

R6

N

A

R2

R3 R7 Fórmula (I) en el que A representa

ON, NOoNN,

en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al grupo piridina de Fórmula (I); 10 R1 representa C1–4–alquilo;

R2 representa hidrógeno o C1–3–alquilo;

o R1 y R2, en conjunto con el nitrógeno al que están unidos, forman un anillo azetidina, o un anillo pirrolidina;

R3 representa C1–3–alquilo; R4 representa hidrógeno, metoxilo, o metilo; 15 R5 representa hidrógeno, C1–3–alquilo, o metoxilo;

R6 representa –CH2–(CH2)n–NR61R62,–CH2–CH2–CONR61R62, 1–(3–carboxi–azetidinil)–3–propionilo, 1–(2– carboxi–pirrolidinil)–3–propionilo, 1–(3–carboxi–pirrolidinil)–3–propionilo, hidroxilo, hidroxi–C2–4–alcoxilo, di– (hidroxi–C1–2–alquil)–C1–2–alcoxilo, 2,3–dihidroxipropoxilo, –OCH2–(CH2)n–NR61R62,–OCH2–(CH2)n–NHCOR63, 2–[(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–etoxilo, 2–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]–etoxilo, 2–[(ácido

20 pirrolidin–3–carboxílico)–1–il]–etoxilo, –OCH2–CH(OH)–CH2–NR61R62, –OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63, 3– [(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–2–hidroxi–propoxilo, 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]– propoxilo, o 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–3–carboxílico)–1–il]–propoxilo;

R61

representa hidrógeno, metilo, 2–hidroxi–etilo, 2–aminoetilo, 2–(C1–4–alquilamino)etilo, 2–(di–(C1–4– alquil)amino)etilo, carboximetilo, (C1–4–alquilcarboxi)metilo, 2–carboxietilo, o 2–(C1–4–alquilcarboxi)etilo;

25 R62 representa hidrógeno o metilo; R63 representa hidroximetilo, 2–hidroxi–etilo, aminometilo, metilaminometilo, dimetilaminometilo, o 2–metilamino– etilo;

n representa el entero 1, ó 2; y R7 representa hidrógeno, metilo, o cloro; 30 o una sal de tal compuesto.
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que A representa

ON ;

o una sal de tal compuesto.
3. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2, en el que R1 representa C1–3–alquilo;

o una sal de tal compuesto.
4. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R4 representa hidrógeno;

o una sal de tal compuesto.
5. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que R4 representa hidrógeno, R5 representa etilo, y R7 representa metilo;

o una sal de tal compuesto.
6. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R6 representa –CH2–CH2– CONR61R62, 1–(3–carboxi–azetidinil)–3–propionilo, 1–(2–carboxi–pirrolidinil)–3–propionilo, 1–(3–carboxi– pirrolidinil)–3–propionilo, hidroxi–C2–4–alcoxilo, di–(hidroxi–C1–2–alquil)–C1–2–alcoxilo, 2,3–dihidroxipropoxilo, – OCH2–(CH2)n–NR61R62,–OCH2–(CH2)n–NHCOR63, 2–[(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–etoxilo, 2–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]–etoxilo, 2–[(ácido pirrolidin–3–carboxílico)–1–il]–etoxilo, –OCH2–CH(OH)–CH2– NR61R62,–OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63, 3–[(ácido azetidin–3–carboxílico)–1–il]–2–hidroxi–propoxilo, 2– hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–2–carboxílico)–1–il]–propoxilo, o 2–hidroxi–3–[(ácido pirrolidin–3–carboxílico)–1–il]– propoxilo;

o una sal de tal compuesto.
7. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que R6 representa –CH2–CH2– CONR61R62, 2,3–dihidroxipropoxilo, o –OCH2–CH(OH)–CH2–NHCOR63;

o una sal de tal compuesto.
8. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que R61 representa 2–hidroxi– etilo, o carboximetilo; R62 representa hidrógeno; y R63 representa hidroximetilo;

o una sal de tal compuesto.
9. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que R6 representa –OCH2– CH(OH)–CH2–NHCOR63;

o una sal de tal compuesto.
10. Un compuesto de Fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 seleccionado del grupo que consiste en:

N–[(R)–3–(2–etil–4–{5–[6–(etil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)–2– hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–[(S)–3–(2–etil–4–{5–[6–(isopropil–metil–amino)–5–metil–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil– fenoxi)–2–hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida;

(S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–propan–1,2– diol;

N–((R)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

(S)–3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenoxi)– propan–1,2–diol;

N–[(R)–3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil– fenoxi)–2–hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida;

N–[(S)–3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil– fenoxi)–2–hidroxi–propil]–2–hidroxi–acetamida;

ácido (3–{4–[5–(6–dietilamino–5–etil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–etil–6–metil–fenil}– propionilamino)–acético;

3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenil)–N–(2– hidroxi–etil)–propionamida; y

ácido [3–(2–etil–4–{5–[5–etil–6–(isopropil–metil–amino)–piridin–3–il]–[1,2,4]oxadiazol–3–il}–6–metil–fenil)– propionilamino]–acético;

o una sal de tal compuesto.
11. Un compuesto de Fórmula (I) de acuerdo con la reivindicación 1 seleccionado entre el grupo que consiste en:

N–((S)–3–{2–etil–4–[5–(5–etil–6–pirrolidin–1–il–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–2– hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2,6–dimetil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{2–cloro–4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–2– hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–2–metoxi–6–metil–fenoxi}–2– hidroxi–propil)–2–hidroxi–acetamida;

N–((S)–3–{4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–3–metil–fenoxi}–2–hidroxi– propil)–2–hidroxi–acetamida;

(S)–3–{2–cloro–4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metil–fenoxi}–propan– 1,2–diol; y

(S)–3–{2–cloro–4–[5–(6–dietilamino–5–metil–piridin–3–il)–[1,2,4]oxadiazol–3–il]–6–metoxi–fenoxi}–propan– 1,2–diol;

o una sal de tal compuesto.
12.

Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
13.

Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 12, para su uso como medicamento.
14.

El uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención o el tratamiento de una enfermedad o trastorno asociado con un sistema inmune activado.
15.

El uso de acuerdo con la reivindicación 14 para la prevención o el tratamiento de una enfermedad o trastorno seleccionado del grupo que consiste en el rechazo de órganos transplantados tales como riñón, hígado, corazón, pulmón, páncreas, córnea y piel; enfermedades implante–versus–huésped producidas por el transplante de células madre; síndromes autoinmunes incluyendo artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedades inflamatorias del intestino tales como la enfermedad de Crohn y colitis ulcerante, psoriasis, artritis psoriásica, tiroiditis tal como tiroiditis de Hashimoto, uveo–retinitis; enfermedades atópicas tales como rinitis, conjuntivitis, dermatitis; asma; diabetes de tipo I; enfermedades autoinmunes post–infecciosas incluyendo fiebre reumática y glomerulonefritis post–infecciosa; cánceres sólidos y metástasis tumoral.
16.

Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la prevención o el tratamiento de una enfermedad o trastorno listado en la reivindicación 15.