ES2393412T3 - Derivados de fenilo y su uso como inmunomoduladores - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula (I), **Fórmula**en la que el símbolo indica los dos átomos de carbono de la del anillo de fenilo portador de R1, R2 y R3 a cualquiera delas cuales el grupo a se puede unir; y en la queA representa **Fórmula**en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2, y R3.

Description

Derivados de fenilo y su uso como inmunomoduladores

Campo de la invención

La presente invención se refiere a los agonistas del receptor S1P1/EDG1 de la Fórmula (I) y su uso como ingredientes activos en la preparación de composiciones farmacéuticas. La invención también se refiere a aspectos relacionados incluyendo los procesos para la preparación de los compuestos, las composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la Fórmula (I), y su compuestos para mejorar la función vascular y como agentes inmunomoduladores, ya sea solos o en combinación con otros compuestos activos o terapias.

Antecedentes de la invención

El sistema inmunitario humano está diseñado para defender el cuerpo contra microorganismos y sustancias extrañas que causan infección o enfermedad. Los mecanismos reguladores complejos se aseguran de que la inmunorespuesta esté dirigida contra la sustancia o el organismo que invade y no contra el huésped. En algunos casos, estos mecanismos de control no son regulados y pueden desarrollarse respuestas autoinmunes. Una consecuencia de la respuesta inflamatoria no controlada es daño severo de órganos, células, tejido o articulaciones. Con el tratamiento actual, el sistema inmunitario en conjunto se suprime generalmente y la capacidad del cuerpo de reaccionar a las infecciones también se compromete seriamente. Los fármacos típicos en esta clase incluyen azatioprina, clorambucil, ciclofosfamida, ciclosporina, o metotrexato. Los corticoesteroides que reducen la inflamación y suprimen la inmunorespuesta, pueden causar efectos secundarios cuando se utilizan en tratamientos a largo plazo. Los fármacos anti-inflamatorios no esteroides (AINE) pueden reducir dolor e inflamación, sin embargo, exhiben efectos secundarios considerables. Los tratamientos alternativos incluyen agentes que activan o bloquean la señalización de citoquinas.

Los compuestos orales activos con propiedades inmunomoduladoras, sin compromiso de inmunorespuestas y con efectos secundarios reducidos mejorarían significativamente los tratamientos actuales de enfermedades inflamatorias no controladas.

En el campo del trasplante de órganos la respuesta inmune del huésped se debe suprimir para evitar el rechazo de órganos. Los recetores de trasplante de órganos pueden experimentar un cierto rechazo aun cuando están tomando fármacos inmunosupresores. El rechazo ocurre más frecuentemente en las primeras semanas después del trasplante, pero los episodios de rechazo también pueden ocurrir meses o incluso años después del trasplante. Combinaciones de hasta tres o cuatro medicaciones son comúnmente utilizadas para dar protección máxima contra el rechazo mientras que minimizan efectos secundarios. Los fármacos estándares actuales utilizados para tratar el rechazo de órganos trasplantados interfieren con las trayectorias intracelulares discretas en la activación de células de sangre blancas tipo-T

o tipo-B. Ejemplos de tales fármacos son ciclosporina, daclizumab, basiliximab, everolimus, o FK506, que interfieren con la liberación o señalización de citoquinas; azatioprina o leflunomida, que inhiben la síntesis de nucleotidos; o 15desoxispergualina, un inhibidor de la diferenciación de leucocitos.

Los efectos beneficiosos de numerosas terapias inmunosupresoras se relacionan con sus efectos; sin embargo, la inmunosupresión generalizada que estos fármacos producen disminuye las defensas del sistema inmunitario contra la infección y malignidades. Además, los fármacos inmunosupresores estándares son frecuentemente utilizados en altas dosificaciones y pueden causar o acelerar el daño a los órganos.

Zhen Li et al., J. of Med. Chem., 2005, vol. 48, no. 20, páginas 6169-6173 divulgan 3,5-difenil-1,2,4 oxadiazoles y 2-5difenil-1,3,4-oxadiazoles, el documento WO 2005/032465 divulga 1,2,4-oxadiazoles sustituidos con 3,5-arilo, heteroarilo

o cicloalquilo como agonistas del receptor S1P y el documento WO 2005/058848 divulga (3,4 disustituidos)propanoico carboxilatos como agonistas del receptor S1P.

Descripción de la Invención

La presente invención proporciona compuestos nuevos de la Fórmula (I) que son agonistas para el receptor acoplado a proteína G S1P1/EDG1 y tienen un efecto inmunomodulador potente y duradero que se logra reduciendo el número de linfocitos T y B circulantes e infiltrativos, sin afectar su maduración, memoria, o expansión. La reducción de los linfocitos T/B circulantes como resultado del agonismo de S1P1/EDG1, posiblemente en combinación con la mejoría observada de la función de la capa celular endotelial asociada con la activación de S1P1/EDG1, hace tales compuestos útiles para tratar enfermedades inflamatorias no controladas y para mejorar funcionalidad vascular.

Los compuestos de la presente invención se pueden utilizar solos o en combinación con fármacos estándares que inhiben la activación de la célula T, proporcionan una nueva terapia inmunomoduladora con una propensión reducida para las infecciones cuando se compara con la terapia inmunosupresora estándar. Además, los compuestos de la presente invención se pueden utilizar en combinación con dosis reducidas de las terapias tradicionales de inmunosupresor, para proporcionar por una parte una actividad inmunomoduladora eficaz, mientras que por otra parte reducen el daño final del órgano asociado con dosis más altas de fármacos inmunosupresores estándares. La observación de la función de la capa celular endotelial mejorada asociada con la activación de S1P1/EDG1 proporciona beneficios adicionales de compuestos para mejorar la función vascular.

La secuencia de nucleótidos y la secuencia de aminoácidos para el receptor humano de S1P1/EDG1 se conocen en lal técnica previa publicadas en por ejemplo: Hla, T., y Maciag, T. J. Biol Chem. 265 (1990), 9308-9313; el documento WO 91/15583 publicado el 17 de octubre de 1991; el documento WO 99/46277 publicado el 16 de septiembre de 1999. La potencia y eficacia de los compuestos de la fórmula (I) son determinadas utilizando un análisis de GTPyS para determinar los valores de EC50 y midiendo los linfocitos circulantes en la rata después de la administración oral, respectivamente (véase en los Ejemplos).

Los términos generales utilizados en lo que antecede y de aquí en adelante tienen preferentemente, dentro de esta descripción, los significados siguientes, a menos que se indique lo contrario:

En donde la forma plural se utiliza para compuestos, sales, composiciones farmacéuticas, enfermedades y similares, pretende significar, también un solo compuesto, sal, o similares.

Cualquier referencia anterior o más adelante en el presente documento a un compuesto de la fórmula (I) debe ser entendido como que se refiere también a las sales, especialmente sales farmacéuticamente aceptables, de un compuesto de la Fórmula (I), como apropiado y conveniente.

El término alquil-C1-5, solo o en combinación con otros grupos, significa grupos de cadena lineal o ramificada saturados,

o con uno a cinco átomos de carbono. Los ejemplos preferidos de los grupos de alquil-C1-5 son metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, iso-butilo, n-butilo, n-pentilo e iso-pentilo.

Asimismo, el término alquil-C1-4, solo o en combinación con otros grupos, significa grupos de cadena preferentemente lineal o ramificada saturados con uno a cuatro átomos de carbono. Ejemplos preferidos de grupos alquil-C1-4 son metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, e iso-butilo.

Asimismo, el término alquil-C1-3, solo o en combinación con otros grupos, significa grupos de cadena lineal o ramificada saturados con uno a tres átomos de carbono y se representa como un grupo metilo, etilo, n-propilo, o iso-propilo.

Asimismo, el término alquil-C2-5, solo o en combinación con otros grupos, significa grupos de cadena lineal o ramificada saturados con dos a cinco átomos de carbono. Ejemplos preferidos de grupos alquil-C2-5 son, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, iso-butilo, n-pentilo, e iso-pentilo.

Asimismo, el término alquil-C2-4, solo o en combinación con otros grupos, significa grupos de cadena lineal o ramificada saturados con dos a cuatro átomos de carbono. Ejemplos preferidos de grupos alquil-C2-4 son, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, e iso-butilo.

El término alcoxi-C1-4, solo o en combinación con otros grupos, significa un grupo R-O, en donde R es un alquil-C1-4. Ejemplos preferidos de grupos alcoxi-C1-4 son etoxi, propoxi, iso-propoxi, e iso-butoxi.

El término alcoxi-C1-3, solo o en combinación con otros grupos, significa un grupo R-O, en donde R es un alquil-C1-3.

Asimismo, el término alcoxi-C2-5, solo o en combinación con otros grupos, significa un grupo R-O, en donde R es un alquil-C2-5. Ejemplos preferidos de los grupos alcoxi-C2-5 son etoxi, propoxi, iso-propoxi, iso-butoxi, e iso-pentoxi.

El término halógeno significa flúor, cloro, bromo o yodo, preferentemente flúor o cloro.

Las sales son preferentemente las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la Fórmula (I).

La expresión“sales farmacéuticamente aceptables” se refiere a sales de adición de ácido inorgánico u orgánico y/o bases, no tóxicas, Lit.: por ejemplo “Salt selection for basic drugs”, Int. J. Pharm. (1986), 33, 201 -217.

Los compuestos de la fórmula (I) pueden contener uno o más centros estereogénicos o asimétricos, tales como uno o más átomos de carbono asimétricos. Los compuestos de la fórmula (I) así pueden estar presentes como mezclas de estereoisómeros o preferentemente como estereoisómeros puros. Un experto en la técnica puede separar las mezclas de estereoisómeros mediante una forma conocida.

i) La invención se refiere a compuestos nuevos de fenilo de la fórmula (I),

Fórmula(I) en la que el símbolo # indica los dos átomos de carbono del anillo fenilo portador de R1, R2 y R3 a cualquiera de las cuales el grupo A se puede unir; y en la que 5 A representa

en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2, y R3;

R1 representa hidrógeno, alquil-C1-3, fluoro, cloro, metoxi, o ciano;

R2 representa alquil-C2-5 o alcoxi-C1-4;

15 R3 representa hidrógeno, y en caso de que el grupo A esté unido a la posición para con respecto a R2 del anillo fenilo de la fórmula (I) portador de R1, R2 y R3, R3 además puede representar un grupo metilo; R4 representa hidrógeno; R5 representa metilo, etilo o metoxi;

R6 representa -CH2-(CH2)k-NR61R62, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NR61R62, -CH2-(CH2)n-NHSO2R63, -(CH2)nCH(OH)-CH2

20 NHSO2R63, -CH2-(CH2)n-NHCOR64, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NHCOR64, hidroxi, hidroxi-alcoxi-C2-5, di-(hidroxi-alquil-C14)alcoxi-C1-4, 2,3-dihidroxipropoxi, 2-hidroxi-3-metoxi-propoxi, -OCH2-(CH2)m-NR611R62, -OCH2-CH(OH)-CH2-NR61R62, OCH2-(CH2)m-NHSO2R63, -OCH2-CH(OH)-CH2-NHSO2R63, -OCH2-(CH2)m-NHCOR64, o -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64;

R61

representa hidrógeno, alquil-C1-3, 2-hidroxietil, 2-hidroxi-1-hidroximetil-etil, 2,3dihidroxipropil, carboximetil, 1(alquilcarboxi-C2-5)metil, 2-carboxietil, o 2-(alquilcarboxi-C1-5)etil; R62 representa hidrógeno, metilo, o etilo; R63 representa alquil-C1-3, metilamino, etilamino, o dimetilamino; 5 R64 representa hidroximetil, 2-hidroxietil, 2-hidroxi-1-hidroximetil-etil, ó 2,3-dihidroxipropil; k representa el número entero 1, 2, ó 3; m representa el número entero 1 ó 2; n representa 0, 1, ó 2; y R7 representa metilo, etilo o halógeno;

10 y sus sales. ii) Una realización particular de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con la realización i), en la que A representa

15 en las que los asteriscos indican el enlace que se une al anillo fenilo de la fórmula (I), que se orienta a R1, R2 y R3 y sus sales.

iii) Otra realización particular de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con la realización i), en la que A representa

20 en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2, y R3, y sus sales.

iv) Otra realización particular de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con la realización i), en la que A representa

en las que los asteriscos indican el enlace que se une al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2, y R3, y sus sales.

v) Otra realización particular de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con la realización i), en la que A representa

y sus sales.

vi) Una realización preferida de la invención se refiere a derivados de fenilo de conformidad con una cualquiera de las realizaciones i) a v), en la que R1 representa un grupo metilo, y sus sales.

vii) Otra realización preferida de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con una cualquiera de las realizaciones i) a vi), en donde R2 representa n-propil, n-butil, isobutilo, isoamilo, propoxi o isopropoxi, y sus sales.

viii) Otra realización preferida de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con una cualquiera de las realizaciones i) a vi), en la que R2 representa isobutilo o isopropoxi, y sus sales.

ix) Una realización preferida de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con una cualquiera de las realizaciones i) a viii), en la que R3 representa hidrógeno, y sus sales.

x) Otra realización preferida de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con cualquiera de las realizaciones i) a ix), en donde R6 representa -CH2-(CH2)k-NR61R62, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NR61R62, -CH2-(CH2)n-NHCOR64, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NHCOR64, hidroxi, hidroxi-alcoxi-C2-5, di-(hidroxi-alquil-C1-4)-alcoxiC1-4, 2,3dihidroxipropoxi, 2-hidroxi-3-metoxi-propoxi, -OCH2-(CH2)m-NR61R62, -OCH2-CH(OH)-CH2-NR61R62, -OCH2-(CH2)m-NHSO2R63, -OCH2-CH(OH)-CH2-NHSO2R63, -OCH2-(CH2)m-NHCOR64, o -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64, y sus sales.

xi) Otra realización preferida de la invención se refiere a derivados de fenilo de conformidad con una cualquiera de las realizaciones i) a ix), en la que R6 representa hidroxi, hidroxi-alcoxi-C2-5, di-(hidroxi-alquil-C1-4)-alcoxi-C1-4, 2,3dihidroxipropoxi, 2-hidroxi-3-metoxi-propoxi, -OCH2-(CH2)m-NHCOR64, o -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64, y sus sales.

xii) Otra realización preferida de la invención se refiere a derivados de fenilo de conformidad con una cualquiera de las realizaciones i) a ix), en la que R6 representa 3-hidroxi-2-hidroximetil-propoxi, 2,3-dihidroxipropoxi, o -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64, y sus sales.

xiii) Otra realización preferida de la invención se refiere a los derivados de fenilo de conformidad con una cualquiera de las realizaciones i) a ix), en la que R6 representa -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64, y R64 representa hidroximetilo, y sus sales.

xiv) Otra realización preferida de la invención se refiere a derivados de fenilo de conformidad con una cualquiera de las realizaciones i) a xiii), en la que el grupo A se une en la posición para con respecto a R2 al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2 y R3, y sus sales.

xv) Una realización especialmente preferida de la invención se refiere a derivados de fenilo de acuerdo con la realización i), en la que A representa

en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2 y R3; R1 representa metilo; R2 representa isobutilo o isopropoxi; R3 representa hidrógeno; R6 representa 3-hidroxi-2-hidroximetilpropoxi, 2,3-dihidroxipropoxi, o -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64; y R7 representa metilo, etilo o cloro; y sus sales.

xvi) Compuestos fenilo especialmente preferidos de conformidad con la Fórmula (I) son: 2-hidroxi-N-((2R)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2S)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, N-((2R)-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida, N-((2S)-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida, 2-hidroxi-N-((2R)-2-hidroxi-3-{4-[5-(3-isopropoxi-4-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2S)-2-hidroxi-3-{4-[5-(3-isopropoxi-4-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2R)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isobutil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2S)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isobutil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2R)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isobutil-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2S)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isobutil-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, N-((2R)-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida,

y N-((2S)-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida, y las sales de estos compuestos. Los compuestos de la Fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables se pueden utilizar como medicamentos, por

ejemplo en la forma de composiciones farmacéuticas para la administración enteral o parental. La producción de las composiciones farmacéuticas puede ser efectuada de una forma que será familiar para cualquier persona experimentada en la técnica (ver por ejemplo Mark Gibson, Editor, Pharmaceutical Preformulation and Formulation, IHS Healt Group, Englewood, CO, USA, 2001; Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Philadelphia Collage of Pharmacy and Science) que producen los compuestos descritos de la Fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables, opcionalmente en combinación con otras sustancias terapéuticamente valiosas, en

una forma de administración galénica junto con materiales portadores sólidos o líquidos apropiados, no tóxicos, inertes, farmacéuticamente aceptables y, si se desea, coadyuvantes farmacéuticamente usuales. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la Fórmula (I) son útiles para la prevención y/o

tratamiento de enfermedades o de los trastornos asociados con un sistema inmunitario activado. Tales enfermedades o trastornos se seleccionan del grupo que consiste en rechazo de órganos, tejido o células trasplantados,; enfermedades del injerto contra el huésped causadas por el trasplante; síndromes autoinmunes que incluyen artritis reumatoide; lupus eritematoso sistémico; síndrome de antifosfolipídico; Tiroiditis de Hashimoto; tiroiditis

linfocítica; esclerosis múltiple; miastenia grave; diabetes tipo I; uveitis; episcleritis; escleritis; Enfermedad de Kawasaki, uveoretinitis; uveitis posterior; uveitis asociada con la enfermedad de Behcet; síndrome de uveomeningitis; encefalomielitis alérgica; vasculopatía del aloinjerto crónica; enfermedades autoinmunes post-infecciosas incluyendo fiebre reumática y glomerulonefritis postinfecciosa; enfermedades de la piel inflamatorias e hiperproliferativas; psoriasis; artritis psoriásica; dermatitis atópica; miopatía; miositis; osteomielitis; dermatitis de contacto; dermatitis eczemosa; dermatitis seborreica; liquen plano; pénfigo; penfigoide bulloso; epidermólisis bullosa; urticaria; angioedema; vasculitis; eritema; eosinofília cutánea; acné; escleroderma; alopecia areata; queratoconjuntivitis; conjuntivitis vernal; queratitis; queratitis herpética; distrofia corneal epitelial; leucoma de córnea; pénfigo ocular; Úlcera de Mooren; queratitis ulcerativa; escleritis; oftalmopatía de Graves; Síndrome de Vogt-Koyanagi Harada; sarcoidosis; alergias de polen; enfermedad obstructiva reversible de las vías aéreas; asma bronquial; asma alérgica; asma intrínseca; asma extrínseca; asma de polvo; asma crónica o inveterada; asma tardía e hiperreactividad de vías aéreas; bronquiolitis; bronquitis; endometriosis; orquitis; úlceras gástricas; enfermedades isquémicas del intestino; enfermedades inflamatorias del intestino; enterocolitis necrotizante; lesiones intestinales asociadas con quemaduras térmicas; enfermedad celíaca; proctitis; gastroenteritis eosinófilica; mastocitosis; Enfermedad de Crohn; colitis ulcerativa; daño vascular causado por enfermedades isquémicas y trombosis; aterosclerosis; corazón adiposo; miocarditis; infarto cardiaco; síndrome de aortitis; caquexia debido a enfermedades virales; trombosis vascular; migraña; rinitis; eczema; nefritis intersticial; nefropatía inducida por IgA; Síndrome de Goodpasture; síndrome urémico hemolítico; nefropatía diabética; glomerulosclerosis; glomerulonefritis; nefritis tubulointerstitial; cistitis intersticial; miositis múltiple; Síndrome de Guillain Barré; Enfermedad de Meniere; polineuritis; neuritis múltiple; mielitis; mononeuritis; radiculopatía; hipertiroidismo; Enfermedad de Basedow; tirotoxicosis; aplasia pura de células rojas; anemia aplastica; anemia hipoplastica; púrpura trombocitopénica idiopática; anemia hemolítica autoinmune; trombocitopenia autoinmune; agranulocitosis; anemia perniciosa; anemia megaloblástica; aneritroplasia; osteoporosis; enfermedad pulmonar fibroide; neumonía intersticial idiopática; dermatomiositis; leucoderma vulgaris; ictiosis vulgaris; sensibilidad fotoalergica; linfoma cutáneo de células T; poliarteritis nodosa; Corea de Huntington; Corea de Sydenham; miocardosis; miocarditis; escleroderma; Granuloma de Wegener; Síndrome de Sjogren; adiposis; fascitis eosinofílica; lesiones gingivales, periodontio, hueso alveolar, sustancia ósea de dentina; alopecia de patrón masculino o alopecia senil; distrofia muscular; pioderma; Síndrome de Sezary; hipofisitis; insuficiencia suprarrenal crónica; Enfermedad de Addison; lesión por isquemia reperfusión de órganos que ocurre en la preservación; choque de endotoxinas; colitis pseudomembranosa; colitis causada por fármacos o radiación; insuficiencia renal aguda isquémica; insuficiencia renal crónica; cáncer de pulmón; malignidad de origen linfoide; leucemias linfocíticas agudas o crónicas; linfoma; enfisema pulmonar; catarata; siderosis; retinitis pigmentosa; degeneración macular senil; fibrosis vítrea; quemadura alcalina de córnea; eritema de la dermatitis; dermatitis; dermatitis por cemento; gingivitis; periodontitis; sepsis; pancreatitis; enfermedad arterial periférica; carcinogénesis; tumores de cáncer sólidos; metástasis de carcinoma; hipobaropatía; hepatitis autoinmune; cirrosis biliar primaria; colangitis esclerosante; resección parcial del hígado; necrosis del hígado aguda; cirrosis; cirrosis alcohólica; insuficiencia hepática; insuficiencia hepática fulminante; insuficiencia hepática de inicio tardío; y insuficiencia de hígado “aguda-a-crónica”.

Las enfermedades o trastornos preferidos para ser tratados y/o prevenidos con los compuestos de la Fórmula (I) se seleccionan del grupo consituido por rechazo de órganos trasplantados tales como riñón, hígado, corazón, pulmón, páncreas, córnea, y piel; enfermedades de injerto contra huésped causadas por el trasplante de células madre; síndromes autoinmunes incluyendo artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedades inflamatorias del intestino tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, psoriasis, artritis psoriásica, tiroiditis tal como tiroiditis de Hashimoto, uveoretinitis; enfermedades atópicas tales como rinitis, conjuntivitis, dermatitis; asma; diabetes tipo I; enfermedades autoinmunes postinfecciosas incluyendo fiebre reumática y glomerulonefritis postinfecciosa; cánceres sólido y metástasis de tumor.

Las enfermedades o trastornos particularmente preferidos que serán tratados y/o prevenidos con los compuestos de la Fórmula (I) se seleccionan del grupo consituido por rechazo de órganos trasplantados seleccionados del riñón, hígado, corazón y pulmón; enfermedades del injerto contra huésped causadas por el trasplante de células madre; síndromes autoinmunes seleccionados de artritis reumatoide, esclerosis múltiple, psoriasis, artritis psoriásica, enfermedad de Crohn, y tiroiditis de Hashimoto; y dermatitis atópica.

La presente invención también se refiere a compuestos para la prevención o tratamiento de una enfermedad o trastorno mencionado en el presente documento que comprende administrar a un sujeto una cantidad farmacéuticamente activa de un compuesto de fórmula (I).

Además, los compuestos de la Fórmula (I) también son útiles, en combinación con uno o varios agentes inmunomoduladores, para la prevención y/o tratamiento de las enfermedades y trastornos mencionados aquí. De conformidad con una realización preferida de la invención, los agentes se seleccionan del grupo que consiste en inmunosupresores, corticoesteroides, AINE, fármacos citotóxicos, inhibidores de las moléculas de adhesión, citoquinas, inhibidores de citoquinas, antagonistas del receptor de citoquinas y receptores recombinantes de citoquinas.

La presente invención también se refiere a el uso de un compuesto de la Fórmula (I) para la preparación de una composición farmacéutica, opcionalmente para utilizarse en combinación con uno o varios agentes inmunomoduladores, para la prevención o tratamiento de las enfermedades y de trastornos mencionados en el presente documento,

Los compuestos de la Fórmula (I) pueden fabricarse mediante los procedimientos indicados más adelante, mediante los

5 procedimientos indicados en los ejemplos o mediante procedimientos análogos. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los reactivos o disolventes concretos usados, pero tales condiciones puede determinarlas una persona experta en la técnica mediante procedimientos de optimización rutinarios.

Los compuestos de la Fórmula (I) de la presente invención pueden prepararse de conformidad con la secuencia general de las reacciones resumidas más adelante. Solamente se describen algunas de las posibilidades sintéticas que

10 conducen a los Compuestos de la Fórmula (I).

Estructura 1

Estructura 2

Los compuestos de Fórmula (I) que representan un derivado de [1,2,4]oxadiazol de la Estructura 1 se preparan haciendo reaccionar un compuesto de la Estructura 2 en un disolvente tal como xileno, tolueno, benceno, piridina, DMF, 20 diclorometano, ácido acético, ácido trifluoroacético, etc. a temperatura ambiente o a temperaturas elevadas en presencia

o ausencia de auxiliares tales como ácidos (por ejemplo TFA, ácido acético, HCI, etc.), bases (por ejemplo NaH, NaOAc, Na2CO3, K2CO3, trietilamina, etc.), sales de tetraalquilamonio, o agentes que eliminan agua (por ejemplo cloruro de oxalilo, anhídrido de ácido carboxílico, POCl3, PCl5, P4O10, tamices moleculares, hidróxido trietilamonio de metoxicarbonilsulfamoil (reactivo de Burgess), etc.) (Lit.: por ejemplo C. T. Brain, J. M. Paul, Y. Loong, P. J. Oakley, Tetrahedron Lett. 40 (1999) 3275-3278; A. R. Gangloff, J. Litvak, E. J. Shelton, D. Sperandio, V. R. Wang, K. D. Rice, Tetrahedron Lett. 42 (2001 ), 1441-1443; T. Suzuki, K. Iwaoka, N. Imanishi, Y. Nagakura, K. Miyta, H. Nakahara, M. Ohta, T. Mase, Chem. Pharm. Bull. 47 (1999), 120-122; R. F. Poulain, A. L. Tartar, B. P. Deprez, Tetrahedron Lett. 42 (2001 ), 1495-1498; R. M. Srivastava, F. J. S. Oliveira, D. S. Machado, R. M. Souto-Maior, Synthetic Commun. 29 (1999), 1437-1450; E. O. John, J. M. Shreeve, Inorganic Chemistry 27 (1988), 3100-3104; B. Kaboudin, K. Navaee, Heterocycles 60 (2003), 2287-2292).

Estructura 3 Estructura 4

10 Los compuestos de la estructura 2 pueden prepararse al reaccionar un compuesto de la estructura 3 con un compuesto de la estructura 4 en un disolvente tal como DMF, THF, DCM, etc. en presencia o ausencia de uno o más agentes de acoplamiento tales como TBTU, DCC, EDC, HBTU, PyBOP, CDI, etc. y en presencia o ausencia de una base tal como trietilamina, base de HOnig, NaH, K2CO3, etc.

Estructura 5 Estructura 6

De forma análoga, la cicliación del intermedio éster de hidroxiamidina que se forma al reaccionar una hidroxiamidina de la estructura 5 con un ácido benzoico de la estructura 6 da acceso a los derivados de [1,2,4]oxadiazol de la estructura 7. Estructura 7

Los compuestos de las estructuras 4 y 5 pueden prepararse haciendo reaccionar un compuesto de las estructuras 9 y 8, respectivamente, con hidroxilamina o una de sus sales en un disolvente tal como metanol, etanol, piridina, etc. en presencia o ausencia de una base tal como Na2CO3, K2CO3, terc-butilato de potasio, trietilamina, etc. (Lit.: por ejemplo T. Suzuki, K. Iwaoka, N. Imanishi, Y. Nagakura, K. Miyta, H. Nakahara, M. Ohta, T. Mase, Chem. Pharm. Bull. 47 (1999), 120-122; J. Cui, D. Crich, D. Wink, M. Lam, A. L. Rheingold, D. A. Case, W. T. Fu, Y. Zhou, M. Rao, A. J. Olson, M. E. Johnson, Bioorg. Med. Chem. 11 (2003), 3379-3392; R. Miller, F. Lang, Z. J. Song, D. Zewge, WO 2004/035538 (Merck & Co., Inc., USA); B. Kaboudin, K. Navaee, Heterocycles 60 (2003), 2287-2292).

Estructura 8 Estructura 9

Dependiendo de la naturaleza de las funcionalidades presentes en los residuos R4 a R7 en las Estructuras 1, 2, 4, 6, 7, y 9, estas funcionalidades pueden requerir protección temporal. Un experto en la técnica conoce los grupos de protección adecuados e incluyen, por ejemplo, un grupo bencilo o trialquilsililo o para proteger un alcohol, un cetal para proteger un 15 diol, etc. Estos grupos de protección pueden ser empleados de conformidad con la metodología estándar (por ejemplo T.

W. Greene, P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Edition, Wiley New York, 1991 ; P. J. Kocienski, Protecting Groups, Thieme Stuttgart, 1994). Alternativamente, los residuos deseados R4 a R7, en particular R6, también se pueden introducir en etapas posteriores que siguen al acoplamiento de los compuestos de fenilo de las estructuras 4 y 6 con los derivados de fenilo de las estructuras 3 y 5, respectivamente, usando un precursor apropiado de un

20 compuesto de las estructuras 4 y 6. Los compuestos de fenilo de los precursores de las estructuras 4, 6 y 9 o sus precursores están disponibles comercialmente o se preparan de conformidad con procedimientos conocidos por un experto en la técnica.

Los compuestos de la Fórmula (I) que representan un [1,3,4]oxadiazol o un derivado de [1,3,4]tiadiazol se preparan de manera similar haciendo reaccionar un compuesto de la Estructura 3 con hidrazina (utilizando un reactivo de 5 acoplamiento tal como TBTU, DCC, EDC, HBTU, PyBOP, HOBt, CDI, etc.) para formar un compuesto de la Estructura 10 que después se acopla con un compuesto de la Estructura 6 para dar un compuesto de la Estructura 11. Un compuesto de la Estructura 11 también puede ser preparado siguiendo el orden de la reacción inversa en este caso primero acoplando un compuesto de la Estructura 6 con hidrazina seguido por la reacción del intermediario de hidrazida correspondiente con un compuesto de la Estructura 3. La deshidratación al derivado de [1,3,4]oxadiazol deseado es 10 afectada tratando el compuesto de la Estructura 11 con un reactivo tal como POCl3, CCl4 o CBr4 en combinación con trifenilfosfina, P2O5, reactivo de Burgess, etc. en un disolvente tal como tolueno, acetonitrilo, dioxano, THF, CHCl3, etc. a temperaturas entre 20 y 120°C en presencia o ausencia de irradiación de microondas. (Lit.: e.g. M. A. Garcia, S. Martin-Santamaria, M. Cacho, F. Moreno de Ia Llave, M. Julian, A. Martinez, B. De Pascual-Teresa, A. Ramos, J. Med. Chem. 48 (2005) 4068-4075; C. T. Brain, J. M. Paul, Y. Loong, P. J. Oakley, Tetrahedron Lett. 40 (1999) 3275-3278). Asimismo,

15 los derivados de [1,3,4]tiadiazol son obtenidos al ciclizar un compuesto de la Estructura 11 con el reactivo de Lawesson opcionalmente en combinación con P2S5 en presencia o ausencia de un disolvente tal como piridina, tolueno, THF, acetonitrilo, etc. a temperaturas elevadas con o sin irradiación de microondas (Lit.: por ejemplo A. A. Kiryanov, P. Sampson, A. J. Semilla, J. Org. Quím. 66 (2001) 7925-7929).

20 Estructura 12 Estructura 13

Los compuestos de la Fórmula (I) que representan un oxazol o un derivado de tiazol se preparan tratando un compuesto de la Estructura 12 ó 13 con POCl3, PCl5, I2 en combinación con trifenilfosfina y trietilamina, reactivo de Burgess, anhídrido trifluoracético, etc. en un disolvente tal como tolueno, benceno, dioxano, THF, etc. a temperaturas entre 20 y 120°C, o con el reactivo de Lawesson, opcionalmente en combinación con P2S5, en presencia o ausencia de un 25 disolvente tal como piridina, tolueno, THF, acetonitrilo, etc. a temperaturas elevadas con o sin la irradiación de microondas como se mencionó anteriormente (Lit.: por ejemplo N. Sato, T. Shibata, M. Jitsuoka, T. Ohno, T. Takahashi,

T. Hirohashi, T. Kanno, H. Iwaasa, A. Kanatani, T. Fukami, Takehiro, Bioorg. & Med. Chem. Lett. 14 (2004) 1761 -1764). Los compuestos de la Estructura 12 y 13 se preparan reaccionando un compuesto de la estructura 14 y 15 con un compuesto de la estructura 6 y 3, respectivamente.

30 Las aminocetonas de las Estructuras 14 y 15 se pueden preparar los procedimientos de la literatura (por ejemplo R. A. Glennon, M. L. Bondarev, N. Khorana, R. Young, J. A. May, M. R. Hellberg, M. A. McLaughlin, N. A. Sharif, J. Med. Chem. 47 (2004) 6034 - 6041).

Alternativamente, el enlace entre cualquiera de los dos anillos de fenilo y el anillo heteroaromático de 5 miembros central también puede formarse aplicando reacciones de acoplamiento cruzado catalizadas por paladio.

Los compuestos de las Estructuras 3, 5 y 8 se pueden preparar siguiendo los procedimientos de la literatura (por ejemplo empleando reacciones de acoplamiento catalizadas por paladio de Suzuki, Heck, o Stille, alquilación de Friedel-Crafts, alquilación tipo Grignard, reacción de alquilación de fenol, adición de electrofilos a derivados de fenil litio, etc.) en una o más etapasde precursores disponibles comercialmente. Los expertos en la técnica conocen los procedimientos que efectúan la transformación de un compuesto de la Estructura 3 en un compuesto de la Estructura 8, o el opuesto.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos ilustran la invención pero no limitan el alcance de la misma.

Todas las temperaturas se indican en °C. Los compuestos se caracterican mediante RMN de 1H- (300 MHz) o RMN de 13C- (75 MHz) (Varian Oxford; los desplazamientos químicos se dan en ppm en relación con el disolvente utilizado; multiplicidades: s = singlete, d = doblete, t = triplete, q = quituplete, hex = sextuplete, hept = heptete, m = multiplete, a ancho, las constantes de acoplamiento se dan en Hz); CL-EM (Navegador de Finnigan con bomba binaria de 1100 HP yDAD, columna: 4.6x50 mm, Zorbax SB-AQ, 5 !m, 120 Å, gradiente: 5-95% acetonitrilo en agua, 1 minuto, con 0.04% de ácido trifluoroacético, flujo: 4.5 ml/min), tR se da en minutos; por TLC (placas TLC de Merck, gel de sílice 60 F254); o por punto de fusión. Los compuestos son purificados por HPLC preparatoria (columna: X-terra RP18, 50x19 mm, 5 !m, gradiente: 10-95% acetonitrilo en agua que contiene 0.5% de ácido fórmico) o por MPLC (bomba MD-80-100 de Labomatic, detector lineal UVIS-201, columna: 350x18 mm, Labogel-RP-18-5s-100, gradiente: metanol al 10% en agua hasta 100% de metanol).

Abreviaturas (como se utilizan en el presente documento):

ac.

acuoso

BSA

seroalbúmina bovina

Bu

butilo

CC

cromatografía en columna

CDI

carbonildiimidazol

DCC

dicilohexilcarbidiimida

DCM

diclorometano

DIPEA

diisopropil etilamina, base de Hünig, etil-diisopropilamina

DMF

dimetilformamida

DMSO

dimetilsulfóxido

EA

acetato de etilo

EDC

N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etil-carbodiimida

EtOH

etanol

h

hora(s)

HBTU

hexaflurorofosfato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’N’-tetrametiluronio

HOBt

1-hidroxibenzotriazol

HPLC

Cromatografía líquida de alto rendimiento

HV

condiciones de alto vacío

CL-EM

Cromatografía líquida – espectometría de masas

Lit.

literatura

Min

minuto(s)

MPLC

Cromatografía líquida de presión media

NaOAc

acetato de sodio

NMO

N-metil-morfolina-N-óxido

Org.

Orgánico

Prep.

Preparativa

PyBOP

hexafluoro-fosfato de benzotrizol-1-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio

ta

temperatura ambiente

sat.

Saturado

S1P

esfingosina 1-fosfato

TBTU

tetrafluroborato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,2,3,3-tetrametiluronio

TFA

ácido trifluoroacetico

THF

tetrahidrofurano

TLC

cromatografía en capa fina

tR

tiempo de retención

Ácido 4-Isopropoxi-benzoico

el ácido 4-Isopropoxi-benzoico está disponible comercialmente.

Ácido 4-Isopropoxi-3-metil-benzoico

A una solución de ácido 4-hidroxi-3-metil-benzoico (2,00 g, 13,15 mmol) en DMF (50 ml), se añade K2CO3 (8,17 g, 59,15

5 mmol) seguido por 2-yodopropano (6;70 g, 39,44 mmol). La suspensión se somete a reflujo durante 20 h. La mezcla se filtra y el disolvente del filtrado se evapora. El residuo se disuelve en EA y se lava con agua. El extracto org. se concentra y después se separa por CC en gel de sílice eluyendo con heptano: EA 5:1 para dar 4-isopropoxi-3-metil-benzoato de isopropilo, que se disuelve en metanol (50 ml) y solución de LiOH ac. 2 N. (10 ml). La mezcla se agita a 80°C durante 5 h antes de que acidificarse con HCl ac. 1N, se diluye con agua y se extrae con EA. El extracto org. se lava con agua y se

10 concentra. El producto cristalino se seca en HV para dar ácido 4-isopropoxi-3-metil-benzoico (1,77 g) como cristales blancos; CL-EM: tR = 0,90 minutos, [M+1]+ = 195,14.

Ácido 4-Isopropoxi-3,5-dimetil-benzoico

Una mezcla de 4-bromo-2,6-dimetilfenol (4.69 g, 23.3 mmol), 2-yodo-propano (15.81 g, 93.0 mmol) en isopropanol (200 ml) y NaOH ac. 1 N (50 ml) se agita a rt por 24 horas. La mezcla se diluye con dietil éter, se lava con HCl ac. 1 N y NaOH ac. 1 N., se seca con Na2SO4, se filtra y concentra para dar 5-bromo-2-isopropoxi-1,3-dimetil-benceno crudo (4.62 g) como un aceite anaranjado; CL-EM: tR = 1.07 Min. El arilbromuro se disuelve en THF (100 ml) y se enfría a -78°C. Se 20 agrega lentamente BuLi (15 ml de una solución 1.6 N en hexano) (30 min) y la mezcla se agita a -78°C durante 30 min. La mezcla se transfiere vía aguja a una solución enfriada (0°C) de dimetilcarbonato (10.7 g, 118.8 mmol) en THF (50 ml). La mezcla se agita durante 15 h, se apaga con LiOH ac. 3 N (100 ml) y se agita a 60°C durante 24 h. La mezcla se diluye con éter (200 ml) y NaOH ac. 1 M (100 ml), las fases se separan y la fase org. es reextraída con NaOH (50 ml). Las fases ac. se lavan con dietil éter (2 x 50 ml), acidificadas cuidadosamente a pH 3 con HCl al 25%. La fase org. se

25 desecha. La fase ac. se extrae con DCM (5 x 75 ml). Los extractos org. se secan con Na2SO4, se filtran y se evaporan para dar ácido 4-isopropoxi-3,5-dimetil-benzoico (2,23 g) como un sólido beige; CL-EM: tR = 0,91 min, [M+1]+ = 209,07, RMN de 1H (CDCl3): 0 1,34 (d, J = 6,3 HZ, 6H), 2.34 (s, 6H), 4.32 (hept, J = 6.0 Hz, 1H), 7.81 (s, 2H).

Ácido 3-isopropoxi-4-metil-benzoico

El ácido 3-isopropoxi-4-metil-benzoico (1.70 g) se prepara en analogía a ácido 4-isopropoxi-3-metil-benzoico a partir del ácido 3-hidroxi-4-metil-benzoico (2.00 g); CL-EM: tR = 0,91 min.

Ácido 4-Isobutil-benzoico

El ácido 4-Isobutil-benzoico está disponible comercialmente.

Ácido 4-Isobutil-3-metil-benzoico

Una mezcla de 4-bromo-3-metilbenzoato de metilo (9,47 g, 39,3 mmol), ácido 2-metilpropil boronico (2.0 g, 9.62 mmol), K2CO3 (8.13 g, 58.9 mmol) y Ag2O (10.9 g, 47.1 mmol) en dioxano (150 ml) se desgasifica y se fija bajo una atmosfera de N2 antes de que se agregue un complejo de diclorometano de 1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio(II)dicloruro (808 mg, 0.99 mmol). La mezcla se agita a 75°C durante 24 horas. Se agrega otra porción de complejo de diclorometano de 1,1’-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio(II)dicloruro (808 mg, 0.99 mmol) y la agitación continúa a 75°C durante 20 h. La mezcla se filtra con Celita y el disolvente del filtrado se evapora. El producto crudo se purifica por HPLC preparatoria para dar 4-isobutil-3-metil benzoato de metilo (1.65 g) como un aceite incoloro. Este aceite se disuelve en metanol (50 ml) y LiOH 2 N (10 ml) y se agita a ta durante 20 h. La mezcla se acidifica con HCl ac. y se extrae dos veces con EA. Los extractos org. combinados se secan con MgSO4, se filtran y se evaporan para dar ácido 4-isobutil-3-metil-benzoicO (1,65 g) como cristales blancos; CL-EM: tR = 0,93 min, [M+1 +CH3CN]+ = 234,16,RMN de 1H (CDCl3): 0 0,87 (d, J = 6,4 Hz, 6 H), 1,75-1,91 (m, 1 H), 2,29 (s, 3 H), 2,47 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 7,12 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,79 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,82 (s, 1 H).

Ácido 3-Isobutil-benzoico

En un matraz de fondo redondo secada en un horno, virutas de Mg (1,13 g, 46,6 mmol) se suspenden en THF (1 ml). Se agrega cuidadosamente 1-Bromo-3-metilbutano (6,37 g, 46,5 mmol) mientras que la mezcla se calienta inicialmente a reflujo. La mezcla se agita durante aproximadamente 30 minutos hasta que el Mg se ha disuelto. La mezcla después se agrega a una solución fría (5°C) de ZnBr2 (10,47 g, 46.5 mmol) en THF (80 ml). La suspensión espesa se agita a 0°C durante 20 minutos antes de que se enfríe a -75°C. Después se agrega complejo de diclorometano de 1,1’bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio(II)dicloruro (184 mm, 0.225 mmol) seguido por metil-3-bromobenzoato (5,0 g, 23,3 mmol). La mezcla se calienta a ta y se agita durante 24 h. La mezcla de reacción se diluye con agua y se extrae con EA. El extracto org. se seca con MgSO4, se filtra y se evapora. El producto crudo se purifica por CC en gel de sílice eluyendo con heptano:EA 20:1 para dar 3-isobutil-benzoato de metilo (4.34 g) como un aceite incoloro. Este material se disuelve en metanol (50 ml) y LiOH ac. 2N (10 ml) y se agita a ta durante 16 h. La mezcla es acidificada agregando HCl ac. 1N y se extrae con EA. Los extractos org. se secan con MgSO4, se filtran y se evaporan para dar ácido 3-isobutil-benzoico

(3.84 g) como un aceite incoloro; CL-EM: tR = 0.91 min; RMN de 1H (CDCl3): 0 0,87 (d, J = 6,7 Hz, 6 H), 1,77-1,94 (m, 1H), 2,48 (d, J = 7,0 Hz, 2 H), 7,29-7,35 (m, 2 H), 7,86 (s, 1 H), 7,88-7,94 (m, 1 H).

4,N-Dihidroxi-3,5-dimetil-benzamidina

El compuesto del título se prepara a partit de 4-hidroxi-3,5-dimetil-benzonitrilo disponible comercialmente de conformidad con los procedimientos de la literatura (por ejemplo E. Meyer, A. C. Joussef, H. Gallardo, Synthesis 2003, 899-905); RMN de 1H (CD3OD): 0 7,20 (s, 2H), 2,20 (s, 6H).

4-Aliloxi-N-hidroxi-3,5-dimetil-benzamidina

El compuesto del título se prepara mediante la alilación de 4-hidroxi-3,5-dimetil-benzonitrilo disponible comercialmente

10 con alilbromuro en presencia de NaOH en isopropanol a ta. El nitrilo después se transforma a hidroxiamidina de conformidad con los procedimientos de la literatura (por ejemplo E. Meyer, A. C. Joussef, H. Gallardo, Synthesis 2003, 899-905); RMN de 1H (CD3OD): 0 7,27 (s, 2 H), 6,10 (m, 1 H), 5,42 (m, 1 H), 5,26 (m, 1 H), 4,31 (dt, J = 5,6, 1,5 Hz, 2 H), 2,29 (s, 6 H).

3-Etil-4, N-dihidroxi-5-metil-benzamidina

El compuesto del título se prepara a partir del 2-etil-6-metil-fenol disponible comercialmente siguiendo los procedimientos de la literatura (G. Trapani, A. Latrofa, M. Franco, C. Altomare, E. Sanna, M. Usala, G. Biggio, G. Liso, J. Med. Chem. 41 (1998) 1846 - 1854; A. K. Chakraborti, G. Kaur, Tetrahedron 55 (1999) 13265-13268; E. Meyer, A. C. Joussef, H. Gallardo, Synthesis 2003, 899-905); CL-EM: tR = 0,55 min; RMN de 1H (D6-DMSO): 0 9,25 (s a, 1 H), 7,21 (s, 2H), 5,56

20 (s, 2H), 2,55 (c, J = 7,6 Hz, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,10 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

4-Aliloxi-3-etil-N-hidroxi-5-metil-benzamidina

El compuesto del título se prepara mediante la alilación de 3-etil-4-hidroxi-5-metil-benzaldehído que se prepara de 2-etil6-metil-fenol siguiendo los procedimientos de la literatura (ver 3-etil-4,N-dihidroxi-5-metil-benzamidina). El aldehído después se transforma en la hidroxiamidina correspondiente de conformidad con los procedimientos de la literatura (ver 3-etil-4,N-dihidroxi-5-metil-benzamidina); CL-EM: tR = 0,72 min, [M+1]+ = 235,09, RMN de 1H (CD3OD): 0 7,31 (s, 1 H), 7,29 (s, 1 H), 6,10 (m, 1 H), 5,43 (dd, J = 17,0, 1,5 Hz, 1 H), 5,27 (dd, J = 10,3, 1,2 Hz, 1 H), 4,81 (s br, 3H), 4,31 (d, J = 5,6 Hz, 2 H), 2,67 (q, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,30 (s, 3 H), 1,23 (t, J = 7,6 Hz, 4 H).

3,5-Dietil-4,N-dihidroxi-benzamidina

El compuesto del título se prepara a partir de de la 2,6-dietilanilina disponible comercialmente siguiendo los procedimientos de la literatura (G. G. Ecke, J. P. Napolitano, A. H. Filbey, A. J. Kolka, J. Org. Chem. 22 (1957) 639-642; y literatura citada para 3-etil-4,N-dihidroxi-5-metil-benzamidina).

4-Aliloxi-N-hidroxi-2-metoxi-benzamidina

El compuesto del título se prepara a partir del 4-hidroxi-2-metoxi-benzaldehído disponible comercialmente siguiendo los procedimientos de la literatura (referencias citadas para 3-etil-4,N-dihidroxi-5-metil-benzamidina); CL-EM: tR = 0.64 min,

20 [M+1]+ = 223,24, RMN de 1H (D6-DMSO): 0 9,33 (s a, 1 H), 7,30 (d, J =8,2 Hz, 1 H), 6,60 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 6,50 (dd, J = 2,3, 8,2 Hz, 1 H), 6,10-5,94 (m, 1 H), 5,50 (s, 2H), 5,40 (d, J = 17,0 Hz, 1 H), 5,24 (d, J = 10,6 Hz, 1 H), 4,57 (d, J = 4,7 Hz, 2H), 3,76 (s, 3H).

Hidracida del ácido 4-Aliloxi-3,5-dimetil-benzoico

a) Una mezcla de 4-bromo-2,6-dimetil-fenol (20.1 g, 100 mmol) y alilcloruro (32.7 g, 428 mmol) en NaOH ac. 3 N (100 ml) e isopropanol (250 ml) se agita a 60°C durante 15 h antes de que se diluya con NaOH ac. 1N (100 ml). La mezcla se extrae con dietil éter (300 ml, 150 ml) y los extractos org. combinados se lavan con NaOH ac. 1N (2x100 ml), NaH2PO4 ac. 1M (50 ml), secados con Na2SO4, filtrados y concentrados para dar 2-aliloxi-5-bromo-1,3-dimetil-benceno (23.6 g) como un aceite amarillo, CL-EM: tR = 1.08 min, [M+1]+ = 241,20.

b) A una solución de 2-aliloxi-5-bromo-1,3-dimetil-benceno, (23.6 g, 98.0 mmol) en THF (150 ml) se agrega a 75°C una solución de n-BuLi (90 ml, 1.5M en dietil éter). La temperatura permanece a -75°C. La mezcla se agita durante 30 minutos y después es transferida vía cánula de doble punta en una solución enfriada (0°C) de dimetilcarbonato (21.4 g, 238 mmol) en THF (90 ml). La mezcla se agita durante 2 h a 0°C, después se calienta a ta durante 15 horas. El disolvente de la mezcla es evaporado y reevaporado con EtOH (200 ml) para eliminar la mayor parte del producto secundario de butilacetato. La mezcla se trata en LiOH ac. 2N (150 ml) y EtOH (200 ml) y se agita a ta por 2 h después a 60°C por 1 hora. El EtOH se evapora y la mezcla restante se diluye con NaOH ac. 0.5N y se extrae con dietil éter (200 ml). El extracto org. se lava con NaOH ac. 1M (5 x 50 ml) y los lavados ac. combinados se reextraen con éter (100 ml). La fase ac. se acidifica con HCl ac. al 25% y se extrae con DCM (5 x 50 ml). Los extractos org. combinados se secan con Na2SO4, se filtran, se evaporan y se secan en vacío a 60°C por 15 h para dar ácido 4-aliloxi-3,5-dimetil-benzoico

(8.0) como un sólido amarillo-marrón. CL-EM: tR = 0,90 Min.

c) A una solución de ácido 4-aliloxi-3,5-dimetil-benzoico (5.26 g, 25.5 mmol) en CHCl3 (75 ml), se agrega a ta tionilcloruro

(7.5 ml, 103 mmol). La mezcla se refluja durante 2 h antes de que el disolvente se evapore para dar cloruro ácido de 4aliloxi-3,5-dimetil-benzoico crudo como un aceite parduzco. A una solución de cloruro ácido en DCM (50 ml) se agrega a 0°C hidrazina (75 ml de una solución 1 M en THF) en DCM (250 ml). La mezcla se agita a ta durante 15 h antes de que se diluya con dietil éter y se extrae con HCl ac. 1N (75 ml, después 5x50). Los extractos ac. combinados son basificados agregando solución de KOH ac. al 33% y extraídos con DCM (5x50 ml). Los extractos de DCM combinados se secan con Na2SO4, se filtran y se evaporan para dar hidrazida de ácido 4-aliloxi-3,5-dimetil-benzoico (5,39 g) como un sólido blanco; CL-EM: tR = 0.71 minutos, [M+1]+ = 221,20, RMN de 1H (D6-DMSO): 0 2,22 (s, 6 H), 4,28-4,37 (m, 2 H), 4,39 (s, 2 H), 5,19-5,28 (m, 1 H), 5,36-5,47 (m, 1 H), 6,00 - 6,15 (m, 1 H), 7,49 (s, 2 H), 9,55 (s, 1 H).

Hidracida del ácido 4-benciloxi-3-etil-5-metil-benzoico

5 a) 3-Etil-4-hidroxi-5-metil-benzaldehído se prepara de 2-etil-6-metil-fenol disponible comercialmente siguiendo los procedimientos de la literatura (G. Trapani, A. Latrofa, M. Franco, C. Altomare, E. Sanna, M. Usala, G. Biggio, G. Liso, J. Med. Chem. 41 (1998) 1846-1854; A. K. Chakraborti, G. Kaur, Tetraedron 55 (1999) 13265-13268; E. Meyer, A. C. Joussef, H. Gallardo, síntesis 2003, 899-905); RMN de 1H (CDCl3): 0 9,83 (s, 1 H), 7,58-7,53 (m, 2H), 5,30 (a de s, 1 H), 2,69 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 2,32 (s, 3H), 1,28 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

10 b) A una solución de 3-etil-4-hidroxi-5-metil-benzaldehído (8.00 g, 48.7 mmol) en acetona (130 ml), se agrega K2CO3

(20.2 g, 146.2 mmol) seguido por bencilbromuro (12.5 g, 73.1 mmol). La suspensión se agita a reflujo durante 16 h antes de que se filtre y el disolvente del filtrado se extrae en vacío. El residuo es separado por CC en gel de sílice para dar 4benciloxi-3-etil-5-metil-benzaldehído (9.07 g) como un aceite amarillo claro; CL-EM: tR = 1,09 minutos, [M+1]+ = 255,08.

c) A una solución de 4-benciloxi-3-etil-5-metil-benzaldehído (5.6 g, 22.0 mmol) en acetona (150 ml), se agrega KMnO4

15 (4.52 g, 28.6 mmol). La mezcla se vuelve ligeramente caliente (45°C) y se agita durante 90 minutos a ta. La mezcla se filtra y se evapora el filtrado. El residuo se trata con agua y solución ácido cítrico ac. al 10% y se extrae dos veces con EA. Los extractos org. combinados se secan con MgSO4, se filtran, se concentran y se secan bajo HV para dar ácido 4benciloxi-3-etil-5-metilbenzoico (4.38 g) como un sólido blanco; CL-EM: tR = 1,00 min, [M+1+CH3CN]+ = 312,09.

d) A una solución de ácido 4-benciloxi-3-etil-5-metilbenzoico (4.38 g, 17.2 mmol) en cloroformo (60 ml), se agrega

20 tionilcloruro (5 ml, 68.9 mmol). La mezcla se somete a reflujo durante 2,5 h antes de que el disolvente se evapore en vacío. El aceite rojo restante se disuelve en THF (150 ml) y después se agrega gota a gota a una solución de hidrato de hidrazina (3.46 g, 69.3 mmol) en THF (80 ml). La mezcla se agita 2 h a ta, diluido con dietil éter, lavado con HCl ac. 1N, secada con MgSO4, filtrada, concentrada y secada para dar hidrazida de ácido 4-benciloxi-3-etil-5-metil-benzoico (1.16 g) como un sólido blanco; CL-EM: tR = 0.82 min, [M+1]+ = 285.47, RMN de 1H (CDCl3): 0 0,98 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 1,98

25 (s, 3 H), 2,39 (q, J = 7,3 Hz, 2 H), 4,49 (s, 2 H), 7,20-7,32 (m, 5 H) 7,57 (s, 1 H), 7,65 (s, 1 H), 11,23 (s, 1 H).

2,2-dimetil-[1,3]dioxan-5-ilmetiléster del ácido metanosulfonico

El compuesto del título se prepara siguiendo los procedimientos indcados en B. Xu, A. Stephens, G. Kirschenheuter, A.

F. Greslin, X. Cheng, J. Sennelo, M. Cattaneo, M. L. Zighetti, A. Chen, S. - A. Kim, H. S. Kim, N. Bischofberger, G. Cook, 30 K. A. Jacobson, J. Med. Chem. 45 (2002) 5694-5709.

Ejemplo 1

a) una solución de 4,N-dihidroxi-3,5-dimetil-benzamidina, (2.29 g, 8.88 mmol) y ácido 4-isopropoxi benzoico (2.00 g,

5 mmol 11.1) en DMF (50 ml), TBTU (4.64 g, 14.4 mmol) y DIPEA (5.02 g, 38.8 mmol). La mezcla se agita a ta durante 16 h antes de que el disolvente sea extraído en vacío. El residuo se diluye con EA, se lava con agua, se seca con MgSO4, se filtra y se concentra. El producto crudo se purifica por CC en gel de sílice eluyendo con heptano:EA 4:1 a 1:1 para dar (4,N-dihidroxi-3,5-dimetil-benzamidina)éster del ácido 4-isopropoxi-benzoico (1,36 g) como un sólido anaranjado; CL-EM: tR = 0.93 min, [M+1]+ = 343,19.

10 b) Una solución de (4,N-dihidroxi-3,5-dimetil-benzamidina) éster del ácido 4-isopropoxi-benzoico (1.36 g, 3.97 mmol) en acetonitrilo (25 ml) y tolueno (25 ml) se agita a 90°C durante 72 h. El disolvente se evapora y el producto crudo se purifica por CC en gel de sílice eluyendo con heptano:EA 17:3 para dar 4-[5-(4-isopropoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6dimetil-fenol (380 mg) como un sólido cristalino parduzco; CL-EM: tR = 1.08 min, [M+1]+ = 325.13, RMN de 1H (CDCl3): 0 8,14 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 7,81 (s, 2H), 7,00 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,91 (s br, 1 H), 4,72-4,62 (m, 1 H), 2,32 (s, 6H), 1,39 (s,

15 6H).

Ejemplo 2

a) Una mezcla de 4-[5-(4-isopropoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenol (370 mg, 1.14 mmol) y epiclorohidrina (317 mg, 3.42 mmol) en isopropanol (5 ml) y NaOH ac. 3N (1.5 ml) se agita a ta durante 16 h. La mezcla se diluye con

20 EA, se lava con agua, se seca con MgSO4, se filtra y se concentra. El producto crudo se purifica por cromatografía en Placas de TLC prep. con heptano:EA 3:1 para dar 3-(3,5-dimetil-4-oxiranilmetoxi-fenil)-5-(4-isopropoxi-fenil)[1,2,4]oxadiazol (256 mg) como sólido blanco; CL-EM: tR = 1,14 min, [M+1]+ = 381,18.

b) Una solución de 3-(3,5-dimetil-4-oxiranilmetoxi-fenil)-5-(4-isopropoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol (250 mg, 0.657 mmol) en NH3 7N en metanol (10 ml) se agita a 60°C durante 16 horas. El disolvente se evapora y el residuo restante se seca bajo

25 HV para dar 1-amino-3-{4-[5-(4-isopropoxi-fenil)-[1,2.4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propan-2-ol (278 mg) como aceite beige; CL-EM: tR = 0.86 min, [M+1]+ = 398,44.

Ejemplo 3

Una solución de 1-amino-3-{4[5(4-isopropoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propan-2-ol (277 mg, 0.698 mmol), ácido glicolico (80 mg, 1.05 mmol), DIPEA (362 mg, 2.80 mmol) y TBTU (382 mg, 1.19 mmol) en DMF (10 ml) se agita a ta durante 16 h antes de que se diluya con EA, se lave con agua, y se concentre. El producto crudo se purifica

5 por cromatografía en placas de TLC prep. con DCM que contiene 10% de metanol para dar 2-hidroxi-N-(2-hidroxi-3-{4-[5(4-isopropoxi-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida (64 mg) como sólido amarillo claro, CL-EM: tR = 0.94 min, [M+1]+ = 456,18; RMN de 1H (D6- DMSO): 0 1,30 (d, J = 5,9 Hz, 6 H), 2,31 (s, 6 H), 3,16-3,25 (m, 2 H), 3,63-3,79 (m, 2 H), 3,81 (d, J = 5,6 Hz, 2 H), 3,86-3,97 (m, 1 H), 4,72-4,83 (m, 1 H), 5,28 (d, J = 5,3 Hz, 1 H), 5,54 (t, J = 5,9 Hz, 1 H), 7,14 (d, J = 9,1 Hz, 2 H), 7,68 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 7,73 (s, 2 H), 8,08 (d, J = 9,1 Hz, 2 H).

10 Ejemplos 4 a 9

Los ejemplos siguientes se preparan en analogía a los ejemplos anteriores a partir del ácido 4-isopropoxi-3-metilbenzoico y ya sea 4,N-dihidroxi-3,5-dimetil-benzamidina (ejemplos 4 a 6) o 4,N-dihidroxi-3-etil-5-metil-benzamidina (ejemplos 7 a 9):

Ejemplo

Preparadoen analogía alEjemplo Ra Rb LC-MS tr(min) [M+H]+

4

1 CH3 OH 1,15 339,12

5

2 CH3 0,89 412,21

6

3 CH3 1,02 470,21

7

1 CH2CH3 OH 1,14 353,50

8

2 CH2CH3 0.88 426.62

9

3 CH2CH3 1.04 484.24

Ejemplo 6

RMN de 1H (D6-DMSO): 0 1,31 (d, J = 6,2 Hz, 6 H), 2,21 (s, 3 H), 2,31 (s, 6 H), 3,13 - 3,26 (m, 1 H), 3,36-3,47 (m, 1 H), 3,65-3,78 (m, 2 H), 3,81 (d, J = 5,3 Hz, 2 H), 3,86-3,99 (m, 1 H), 4,69-4,82 (m, 1 H), 5,28 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 5,54 (t, J = 5,9 Hz, 1 H), 7,18 (d, J = 9,4 Hz, 1 H), 7,68 (t, J = 5,9 Hz, 1 H), 7,73 (s, 2 H), 7,94-7,99 (m, 2 H).

Ejemplo 9

RMN de 1H (D6-DMSO): 0 1,20 (t, J = 7,3 Hz, 3 H), 1,32 (d, J = 6,2 Hz, 6 H), 2,21 (s, 3 H), 2,32 (s, 3 H), 2,70 (q, J = 7,6 Hz, 2 H), 3,14-3,25 (m, 1 H), 3,37-3,46 (m, 1 H), 3,68-3,77 (m, 2 H), 3,81 (d, J = 5,6 Hz, 2 H), 3,89-3,98 (m, 1 H), 4,694,81 (m, 1 H), 5,27 (d, J = 5,3 Hz, 1 H), 5,52 (t, J = 5,6Hz, 1 H), 7,18 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,66 (t, br, J = 5,9Hz, 1H), 7,74 (s, 2 H), 7,93-8,00 (m, 2 H).

Ejemplo 10

a) A una mezcla de ácido de 4-isopropoxi-3,5-dimetil-benzoico (175 mg, 794 !mol), 4-aliloxi-N-hidroxi-3,5-dimetilbenzamidina (165 mg, 792 !mol) y DIPEA (128 mg, 993 !mol) en DCM (10 ml), TBTU (321 mg, 1,00 mmol) se agregan a 0°C. La mezcla se agita a 0°C por 1 h, después a ta durante 5 h, antes de que se diluya con EA (100 ml) y se lave con Solución NaHCO3 ac. sat. (2 x 30 ml). El extracto org. se seca con Na2SO4, se filtra y se evapora. El residuo se disuelve en dioxano (10 ml) y se agita a 90°C por 2 días. El disolvente se evapora y el residuo se seca para dar 3-(4-aliloxi-3,5-dimetil-fenil)-5-(4-isopropoxi-3,5-dimetil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol crudo (346 mg); CL-EM: tR = 1,25 min, [M+1]+ = 393,47.

b) A una solución del 3-(4-aliloxi-3,5-dimetil-fenil)-5-(4-isopropoxi-3,5-dimetil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol crudo (346 mg, 0.794 mmol) en una mezcla de acetona (10 ml) y agua (1 ml), se agrega NMO (535 mg, 3,96 mmol) y OsO4 (36 mg, 4 !mol, solución al 2.5% en butanol). La mezcla se agita a ta durante 2 días antes de que se diluya con agua (50 ml) y se extrae con EA (100 ml, 2x50 ml). Los extractos org. combinados se secan con Na2SO4, se filtran y se concentran. El producto crudo se purifica mediante CC en gel de sílice eluyendo con EA para dar 3-{4-[5-(4-isopropoxi-3,5- dimetil-fenil)[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propane-1,2-diol (175 mg) como un aceite incoloro que solidifica lentamente; CL-EM: tR = 1,07 min, [M+1]+ = 427,19,RMN de 1H (D6-DMSO): 0 1,27 (d, J = 6,3 Hz, 6 H), 2,31 (s, 6 H), 2,33 (s, 6 H), 3,51 (t, J = 5,5 Hz, 2 H), 3,71 -3,78 (m, 1 H), 3,80-3,89 (m, 2 H), 4,31 (hept, J = 6,0 Hz), 4,64 (t, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,96 (d, J = 5,3 Hz, 1 H), 7,74 (s, 2 H), 7,84 (s, 2 H).

Ejemplo 11

3-{2-Etil-4-[5-(4-isopropoxi-3,5-dimetil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-6-metil-fenoxi}-propano-1,2-diol se prepara en analogía al ejemplo 10 a partir del ácido 4-isopropoxi-3,5-dimetil-benzoico y 4-aliloxi-3-etil-N-hidroxi-5-metil; CL-EM: tR = 1,09 min, [M+1]+ = 441,25.

Ejemplos 12 a 23

Los ejemplos siguientes se preparan en analogía a los ejemplos anteriores a partir de 4,N-dihidroxi-3,5-dimetilbenzamidina y ya sea ácido 3-isopropoxi-4-metil-benzoico (Ejemplos 12 a 14), ácido 4-isobutilbenzoico (ejemplos 15 a 17), ácido 4-isobutil-3-metil-benzoico (ejemplos 18 a 20), o ácido 3-isobutilbenzoico (ejemplos 21 a 23):

Ejemplo

Preparado en analogía al Ejemplo Ra Rb Rc CL-EM tr(min) [M+H]+

12

1 metil Iso-propoxi OH 1,15 339,12

13

2 metil Iso-propoxi 0,89 412,21

14

3 metil Iso-propoxi 1,02 470,21

15

1 isobutil H OH 1,17 323,21

16

2 isobutil H 0,91 396,33

17

3 isobutil H 1,03 454,45

18

1 isobutil metil OH 1,18 337,23

19

2 isobutil metil 0,93 410,06

20

3 isobutil metil 1,06 468,21

21

1 H isobutil OH 1,13 323,14

22

2 H isobutil 0,88 396,23

23

3 H isobutil 1,00 454,18

Ejemplo 12

RMN de 1H (CDCl3: 0 1,40 (d, J = 6,2 Hz, 6 H), 2,28 (s, 3 H), 2,33 (s, 6 H), 4,71 (hept, J = 5,9 Hz, 1 H), 4,98 (s, 1 H), 7,28 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,63 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,69 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1 H), 7,82 (s, 2 H).

5 Ejemplo 15

RMN de 1H (D6-DSMO): 0 0,87 (d, J = 6,4 Hz, 6 H), 1,82-1,96 (m, 1 H), 2,24 (s, 6H), 2,55 (d, J = 7,3 Hz, 2 H), 7,42 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,65 (s, 2 H), 8,06 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 8,95 (s, 1 H).

Ejemplo 20

RMN de 1H (CDCl3: 0 0,95 (d, J = 6.4 Hz, 6 H), 1,82-1,99 (m, 1 H), 2,35 (s, 6 H), 2,39 (s, 3 H), 2,55 (d, J = 7,3 Hz, 2 H),

10 3,41 -3,57 (m, 2 H), 3,71-3,91 (m, 3 H), 4,18 (s, 2 H), 7,04 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 7,25 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,83 (s, 2 H), 7,93 (d, J = 7,9 Hz), 7,97 (s, 1 H).

Ejemplo 24

15 a) A una solución de ácido 4-isopropoxi-3-metil-benzoico (1,35 g, 6,95 mmol) en cloroformo (20 ml), se agrega tionilcloruro (2,48 g, 20,9 mmol). La mezcla se refluja por 2 h antes de que los disolventes se extraigan en vacío para dar cloruro de ácido 4-isopropoxi-3-metil-benzoico crudo; CL-EM: tR = 1,0 min.

b) A una suspensión de hidrazida de ácido 4-benciloxi-3-etil-5-metil-benzoico (1,12 g, 3,95 mmol) en DCM (20 ml), se agrega trietilamina (500 mg, 4,94 mmol). La solución clara se enfría a 5°C antes de una solución de cloruro de ácido 4

20 isopropoxi-3-metil-benzoico (700 mg, 3.29 mmol) en DCM (10 ml) se agregue gota a gota. La suspensión se agita a ta por 1 h antes de que se diluya con EA, se lava con HCl ac. 1N, seguido por agua, se seca con MgSO4, se filtra, se concentra y se seca para dar N’-(4-isopropoxi-3-metil-benzoil)-hidrazida del ácido 4benciloxi-3-etil-5-metil-benzoico (1,57 g) como un sólido blanco; CL-EM: tR = 1,05 min, [M+1]+ = 461,66.

c) Una solución de N’-(4-isopropoxi-3-metil-benzoil)-hidrazida del ácido 4-benciloxi-3-etil-5-metil-benzoico (1,57 g, 3,40

25 mmol) y reactivo de Burgess (1,06 g, 4,43 mmol) en THF (30 ml) se calienta a 110°C bajo irradiación de microondas por 3 min. La mezcla se enfría, diluido con dietil éter, se lava con agua, se seca con MgSO4, se filtra y se concentra. El producto crudo se purifica por CC en gel de sílice eluyendo con heptano:EA 5:1 para dar 2-(4-benciloxi-3-etil-5-metil

fenil)-5(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol (1,25 g) como un aceite incoloro; CL-EM: tR = 1,24 min, [M+1]+ = 443,58.

d) A una solución de 2-(4-benciloxi-3-etil-5-metil-fenil)-5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol (1,25 g, 2,82 mmol) en THF (10 ml), se agrega Pd/C (100 mg, paladio al 10%) en EtOH (10 ml). La mezcla se agita a ta bajo 1 atmósfera de H2 por 16 h antes de que el catalizador sea extraído por filtración. El filtrado se concentra y separado por CC en gel de sílice eluyendo con heptano:EA 4:1 a 1:1 para dar 2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-6-metil-fenol (0,79 g) como un sólido verdoso; CL-EM: tR = 1.12 minutos, [M+1]+ = 353,17,RMN de 1H (D6-DMSO): 0 9.02 (s a, 1H), 7,90-7,86 (m, 2H), 7,70-7,66 (m, 2H), 7,13 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,72 (hept, J = 5,019 Hz, 1H), 2,65 (q, J = 7,6 hertzios, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 1,31 (d, J = 5,9 hertzios, 6 H), 1,17 (t, J = 7,6 Hz, 3H).

Ejemplo 25

1-Amino-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-6-metil-fenoxi}-propan-2-ol se prepara en analogía al ejemplo 2 a partir del 2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol2-il]-6-metil-fenol; CL-EM: tR = 0,84 min, [M+1]+ = 426,45.

Ejemplo 26

N-(3{2-Etil-4-[5(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida se prepara en analogía al ejemplo 3 a partir del 1-amino-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-6metil-fenoxi}-propan-2-ol; CL-EM: tR = 0,98 min, [M+1]+ = 484,24.

Ejemplo 27: Ensayo de GTPyS para determinar los valores CE50

Los análisis de unión de GTPyS se realizan en placas de microtiltulación de 96 pocllos (Nunc, 442587) en un volumen final de 200 !l, utilizando preparaciones de membrana de células de CHO que expresan receptor S1P1 humano recombinante. Las condiciones del análisis son 20 mM de Hepes (Fluka, 54461), 100 mM de NaCl (Fluka, 71378), 5 mM de MgCl2 (Fluka, 63064), BSA al 0.1% (Calbiochem, 126609), 1 !M de GDP (sigma, G-7127), DMSO al 2.5% (Fluka, 41644), 50 pM de 35S-GTPyS (Amersham Biosciences, SJ1320). El pH es 7.4. Los compuestos de la prueba se disuelven y se diluyen en DMSO al 100% y se preincuban a temperatura ambiente por 30 minutos en 150 !l de la solución amortiguadora del análisis anterior, en ausencia de 35S-GTPyS. Después de la adición de 50 !l de 35S-GTPyS, el análisis se incuba por 1 h a ta. El análisis se termina por la transferencia de la mezcla de reacción a una placa Multiscreen (Millipore, MAHFC1 H60) utilizando una cosechadora celular de Packard Biosciences, y las placas se lavan con 10 Mm Na2HPO4/NaH2PO4 helado (70%/30%), se secan, se sellan en el fondo y, después de la adición de 25 !l de MicroScint20 (Packard Biosciences, order# 6013621), se sellan en la tapa. 35S-GTPyS unido a la membrana se mide con un contador TopCount de Packard Biosciences.

CE50 es la concentración del agonista que induce el 50% de la unión de 35S-GTPyS máxima específica. La unión específica se determina restando la unión no específica de la unión máxima. La unión máxima es la cantidad de cpm unida a la placa Multiscreen en presencia de 10 !M de S1P. La unión no específica es la cantidad de unión en ausencia de un agonista en el análisis.

La tabla 1 muestra el valor de CE50 de algunos compuestos de la presente invención. Los valores de EC50 fueron determinados de conformidad con el método descrito arriba:

Tabla 1:

Compuesto del Ejemplo

CE50[nM]

6

0,1

20

0,8

5 Ejemplo 28: Determinación de la eficacia In vivo

La eficacia de los compuestos de la Fórmula (I) es determinada midiendo los linfocitos que circulan después de la administración oral de 3 hasta 30 mg/kg de un compuesto de la Fórmula (I) a ratas Wistar machos normotensivas. Los animales son alojados en condiciones de clima controlado con un ciclo de 12 h luz-oscuro, y tienen acceso libre alimento comercial para rata normal y agua potable. La sangre se recolecta antes y 3, 6 y 24 h después de la administración del

10 fármaco. La sangre completa se somete a hematología utilizando el sistema de la hematología Advia (Bayer Diagnostics, Zürich, Suiza).

Todos los datos se presentan como promedio ± SEM. Los análisis estadísticos son realizados por el análisis de la variación (ANOVA) utilizando estadística (StatSoft) y el procedimiento de Student-Newman-Keuls para comparaciones múltiples. Se rechaza la hipótesis nula cuando p < 0,05.

15 Como ejemplo, la Tabla 2 muestra el efecto sobre los conteos de linfocitos 6 h después de la administración oral de 10 mg/kg de un compuesto de la presente invención a las ratas Wistar macho normotensivas con respecto a un grupo de animales tratados con el vehículo solamente.

Tabla 2:

Compuesto del ejemplo

Recuento de Linfocitos

9

-70±2%

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de Fórmula (I),

   Fórmula(I)

   en la que el símbolo # indica los dos átomos de carbono de la del anillo de fenilo portador de R1, R2 y R3 a cualquiera de las cuales el grupo a se puede unir; y en la que A representa

   20 en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2, y R3; R1 representa hidrógeno, alquil-C1-3, fluoro, cloro, metoxi, o ciano;

   R2 representa alquil-C2-5 o alcoxi-C1-4;

   R3 representa hidrógeno, y en caso de que el grupo A esté unido a la posición para con respecto a R2 del anillo fenilo de 25 fórmula (I) portador de R1, R2 y R3, R3 además puede representar un grupo metilo;

   R4 representa hidrógeno, ;

   R5 representa metilo, etilo o metoxi;

   R6 representa -CH2-(CH2)k-NR61R62, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NR61R62, -CH2-(CH2)n-NHSO2R63, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NHSO2R63, -CH2-(CH2)n-NHCOR64, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NHCOR64, hidroxi, hidroxi-C2-5-alcoxi,

   30 di-(hidroxi-C1-4-alquil)-C1-4-alcoxi, 2,3-dihidroxipropoxi, 2-hidroxi-3-metoxi-propoxi, -OCH2-(CH2)m-NR61R62, -OCH2CH(OH)-CH2-NR61R62, -OCH2-(CH2)m-NHSO2R63, -OCH2-CH(OH)-CH2-NHSO2R63, -OCH2-(CH2)m-NHCOR64, o -OCH2CH(OH)-CH2-NHCOR64;

   R61

   representa hidrógeno, alquil-C1-3, 2-hidroxietilo, 2-hidroxi-1-hidroximetil-etilo, 2,3-dihidroxipropilo, carboximetilo, 1(alquil-C1-5carboxi)metilo, 2-carboxietilo o 2-(alquil-C1-5carboxi)etilo; R62 representa hidrógeno, metilo, o etilo; R63 representa alquil-C1-3, metilamino, etilamino, o dimetilamino; 5 R64 representa hidroximetil, 2-hidroxietil, 2-hidroxi-1-hidroximetil-etil, ó 2,3-dihidroxipropil; k representa el número entero 1, 2, ó 3; m representa el número entero 1 ó 2; n representa 0, 1, ó 2; y R7 representa hidrógeno, alquil-C1-3, o halógeno; 10 y sus sales.
2. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en el que A representa

   en las quelos asteriscos indican el enlace que se une al anillo fenilo de la fórmula (I), portadores de R1, R2, y R3 y sus 15 sales.
3. 3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en el que A representa

   en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al anillo fenilo de la Fórmula (I) portadores de R1, R2, y R3, y sus sales.

   20 4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en el que A representa

   en las quelos asteriscos indican el enlace que se une al anillo fenilo de la Fórmula (I) portadores de R1, R2, y R3, y sus sales.
4. 5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en el que A representa

   y sus sales.

5. 6.

   Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R1 representa un grupo metilo, y sus sales.

6. 7.

   Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que R2 representa n-propilo, nbutilo, isobutilo, isoamilo, propoxi o isopropoxi, y sus sales.

7. 8.

   Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que R2 representa isobutilo o isopropoxi, y sus sales.

8. 9.

   Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que R3 representa hidrogeno y sus sales.

9. 10.

   Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R6 representa -CH2(CH2)k-NR61R62, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NR61R62, -CH2-(CH2)n-NHCOR64, -(CH2)nCH(OH)-CH2-NHCOR64, hidroxi, hidroxialcoxi-C2-5, di-(hidroxi-alquil-C1-4)-alcoxiC1-4, 2,3-dihidroxipropoxi, 2-hidroxi-3-metoxi-propoxi, -OCH2-(CH2)m-NR61R62, OCH2-CH(OH)-CH2-NR61R62, -OCH2-(CH2)m-NHSO2R63, -OCH2-CH(OH)-CH2-NHSO2R63, -OCH2-(CH2)m-NHCOR64, o -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64, y sus sales.

10. 11.

    Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R6 representa hidroxi, hidroxi-alcoxi-C2-5, di-(hidroxi-alquil-C1-4)-alcoxi-C1-4, 2,3-dihidroxipropoxi, 2-hidroxi-3-metoxi-propoxi, -OCH2-(CH2)m-NHCOR64, o -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64, y sus sales.

11. 12.

    Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R6 representa 3-hidroxi-2hidroximetil-propoxi, 2,3-dihidroxipropoxi, o -OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64, y sus sales.

12. 13.

    Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R6 representa -OCH2CH(OH)-CH2-NHCOR64, y R64 representa hidroximetil, y sus sales.

13. 14.

    Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que el grupo A se une en la posición para con respecto a R2 al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2 y R3, y sus sales.

14. 15.

    Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, en el que A representa

    o

    en las que los asteriscos indican el enlace que está unido al anillo fenilo de la Fórmula (I) portador de R1, R2 y R3; R1 representa metilo; R2 representa isobutilo o isopropoxi; R3 representa hidrógeno; R4 representa hidrógeno o metoxi; R5 representa hidrógeno, metilo, etilo o metoxi; R6 representa 3-hidroxi-2-hidroximetil-propoxi, 2,3-dihidroxipropoxi, o -OCH2CH(OH)-CH2-NHCOR64; y R7 representa hidrógeno, metilo, etilo o cloro; y sus sales.
15. 16. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en: 2-hidroxi-N-((2R)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2S)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, N-((2R)-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida, N-((2S)-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida, 2-hidroxi-N-((2R)-2-hidroxi-3-{4-[5-(3-isopropoxi-4-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2S)-2-hidroxi-3-{4-[5-(3-isopropoxi-4-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2R)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isobutil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2S)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isobutil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2R)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isobutil-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, 2-hidroxi-N-((2S)-2-hidroxi-3-{4-[5-(4-isobutil-3-metil-fenil)-[1,2,4]oxadiazol-3-il]-2,6-dimetil-fenoxi}-propil)-acetamida, N-((2R)-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida,

    y N-((2S)-3-{2-etil-4-[5-(4-isopropoxi-3-metil-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-6-metil-fenoxi}-2-hidroxi-propil)-2-hidroxi-acetamida, y las sales de estos compuestos.

16. 17.

    Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmaceuticamente aceptable.

17. 18.

    Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 17, para su uso como un medicamento.

18. 19.

    Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 17, para su uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de enfermedades o trastornos asociados con un sistema inmunitario activado.

19. 20.

    Un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 17, para uso en un procedimiento de prevención o tratamiento de enfermedades o trastornos seleccionados del grupo que consiste en rechazo de órganos trasplantados tales como riñón, hígado, corazón, pulmón, páncreas, córnea, y piel; enfermedades de injerto contra huésped causadas por el trasplante de células madre; síndromes autoinmunes incluyendo artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedades inflamatorias del intestino tales como enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa, psoriasis, artritis psoriásica, tiroiditis tal como tiroiditis de Hashimoto, uveoretinitis; enfermedades atópicas tales como rinitis, conjuntivitis, dermatitis; asma; diabetes tipo I; enfermedades autoinmunes postinfecciosas incluyendo fiebre reumática y glomerulonefritis postinfecciosa; cánceres sólido y metástasis de tumor.