CN101965346A

CN101965346A - 新颖嘧啶-吡啶衍生物

Info

Publication number: CN101965346A
Application number: CN2009801078585A
Authority: CN
Inventors: 马丁·博利; 塞利亚·莱斯高普; 鲍里斯·马泰斯; 克劳斯·米勒; 奥利弗·内勒; 比特·施泰纳
Original assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2008-03-06
Filing date: 2009-03-03
Publication date: 2011-02-02
Also published as: CA2714614A1; AR070801A1; US20110046170A1; EP2262800A1; JP2011513385A; WO2009109907A1; TW200940535A

Abstract

本发明涉及新颖嘧啶-吡啶衍生物、其制备及其作为医药活性化合物的用途。所述化合物尤其可发挥作为免疫调节剂的功用。

式(I)

Description

新颖嘧啶-吡啶衍生物

技术领域

本发明涉及式(I)的S1P1/EDG1受体激动剂及其在药物组合物制备中作为活性成份的用途。本发明亦涉及相关方面，其包括制备该化合物的方法、含有式(I)化合物的药物组合物及其单独或与其它活性化合物或治疗组合作为改善血管功能的化合物及作为免疫调节剂的用途。

背景技术

人类免疫系统用来保护人体以对抗可引起感染或疾病的外来微生物及物质。复杂的调节机制可确保免疫应答靶向对抗入侵物质或有机体而并非对抗宿主。于某些情形下，该控制机制未经调节且可产生自身免疫应答。若不控制炎性应答则可造成严重的器官、细胞、组织或关节损伤。使用目前的治疗，通常会抑制整个免疫系统且亦会严重危害身体对感染的反应能力。属于此类的典型药物包括硫唑嘌呤、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、环孢素或胺甲蝶呤。当在长期治疗中使用可减轻炎症并抑制该免疫应答的肾上腺皮质类固醇时，其可引起副作用。尽管非类固醇类抗炎药(NSAID)可减轻疼痛及炎症，然而其呈现出相当大的副作用。替代治疗包括使用可激活或阻断细胞因子信号转导的药剂。

具有免疫调节特性、不会危害免疫应答且具有减轻的副作用的口服活性化合物会显著改良目前对非受控炎性疾病的治疗。

在器官移植领域，必须抑制宿主的免疫应答以防止器官排斥反应。即使在器官移植接受者服用免疫抑制药物时，其亦会经历某一排斥反应。排斥反应最常发生在器官移植后的前几周，但移植后数月或甚至数年内亦可出现排斥反应发作。通常使用多达三或四种药物的组合来提供最大程度的保护抑制排斥反应，同时使副作用降至最小。目前用于治疗移植器官排斥反应的标准药物在T-型或B-型白血球激活中会干扰各个细胞内通路。该种药物的实例为干扰细胞因子释放或信号转导的环孢素、达克珠单抗(daclizumab)、巴利昔单抗(basiliximab)、依维莫司(everolimus)或FK506；抑制核苷酸合成的硫唑嘌呤或来氟米特(leflunomide)；或15-脱氧精胍菌素(一种白细胞分化的抑制剂)。

广谱免疫抑制疗法的有益效果可体现出其效果；然而，该药物产生的全身免疫抑制可降低免疫系统对感染及恶性肿瘤的防御。此外，标准免疫抑制药物通常以高剂量使用且可能造成或加速器官损伤。

发明内容

本发明提供式(I)的新颖化合物，其为G蛋白偶合受体S1P1/EDG1的激动剂且具有强力且持久免疫调节效果，此效果通过减少循环及浸润T-及B-淋巴细胞的数目而达成，此并不影响其成熟、记忆或扩增。由S1P1/EDG1激动引起的循环T-/B-淋巴细胞的减少(以及可能观察到的涉及S1P1/EDG1激活的内皮细胞层功能的改良)使该种化合物可用于治疗非受控炎性疾病且可用于改良血管功能。

本发明化合物可单独使用或与抑制T-细胞激活的标准药物组合使用以提供一种与标准免疫抑制疗法相比具有降低的感染倾向的新颖免疫调节疗法。此外，本发明化合物可与减少剂量的传统免疫抑制疗法组合使用，以一方面提供有效免疫调节活性，同时另一方面减少与较高剂量标准免疫抑制药物相关的终末器官损伤。与S1P1/EDG1激活有关的经改良内皮细胞层功能的观察结果提供化合物改良血管功能的额外益处。

人类S1P1/EDG1受体的核苷酸序列及胺基酸序列已为本领域技术人员所习知且公布于(例如)：Hla，T.及Maciag，T.J.Biol Chem.265(1990)，9308-9313；WO91/15583(1991年10月17日公开)；WO 99/46277(1999年9月16日公开)中。式(I)化合物的效力及功效使用GTPγS分析测定EC₅₀值及通过测量口服施用后大鼠体内循环淋巴细胞分别来评价(参见实例)。

i)本发明涉及式(I)的新颖嘧啶-吡啶化合物，

式(I)

其中

A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结；

R¹代表C_1-4-烷氧基、C_1-4-烷氨基、N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基、C_3-5-环烷氨基、C_3-5-环烷基甲氨基、吡咯啶基或六氢吡啶基；

R²代表C_1-2-烷基或C_3-4-烷基；且

吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

且若R¹代表C_1-4-烷氨基、N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基、C_3-5-环烷氨基或C_3-5-环烷基甲氨基，则吡啶¹亦可代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表C_1-4-烷基、C_1-3-烷氧基或NR^3aR^3b；

R^3a代表C_1-2-烷基；

R^3b代表氢或甲基；且

R⁴代表氢、氯或C_1-2-烷基；

R⁵代表C_1-4-烷基、C_1-3-烷氧基或NR^5aR^5b；

R^5a代表C_1-3-烷基；

R^5b代表氢或C_1-2-烷基；且

R⁶代表C_1-2-烷基；

R⁷代表C_1-4-烷基，且R⁸代表C_1-2-烷基；或

R⁷代表C_1-2-烷基，且R⁸代表C_1-4-烷基；

R⁹代表C_1-2-烷基；且

R¹⁰代表C_1-4-烷基；

且

R¹¹代表C_1-4-烷基；且

R¹²代表C_1-2-烷基。

除非另外说明，否则在上文及下文中所用的通用术语在本披露内容内优选具有以下含义：

术语C_x-y-烷基(x及y为整数)指具有x至y个碳原子的饱和具支链或直链烷基。同样，术语C_1-4-烷基指具有1个至4个碳原子的饱和具支链或直链烷基。C_1-4-烷基的实例为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基及异丁基(优选为甲基、乙基、正丙基、异丙基或异丁基)。同样，术语C_1-3-烷基指具有1个至3个碳原子的饱和具支链或直链烷基。C_1-3-烷基的实例为甲基、乙基、正丙基及异丙基(优选为甲基或乙基)。

术语C_x-y-烷氧基指R-O基团，其中R为C_x-y-烷基。C_1-4-烷氧基的实例为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基及异丁氧基。

术语C_3-5-环烷基为指具有3个至5个碳原子的饱和环状烃环系统，即环丙基、环丁基或环戊基。

ii)本发明的另一实施例涉及实施例i)的式(I)的嘧啶-吡啶衍生物，其中吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结。

iii)本发明的另一实施例涉及实施例i)或ii)的式(I)的嘧啶-吡啶衍生物，其中A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结。

iv)本发明的另一实施例涉及实施例i)或ii)的式(I)的嘧啶-吡啶衍生物，其中A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结。

v)本发明的另一实施例涉及实施例i)或ii)的式(I)的嘧啶-吡啶衍生物，其中A代表

vi)本发明的另一实施例涉及实施例i)至v)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中R¹代表C_1-4-烷氨基或N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基。

vii)本发明的另一实施例涉及实施例i)至v)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中R¹代表C_1-4-烷氨基。

viii)本发明的另一实施例涉及实施例i)至vii)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中R²代表C_1-2-烷基。

ix)本发明的另一实施例涉及实施例i)至vii)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中R²代表甲基。

x)本发明的另一实施例涉及实施例i)至ix)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表C_1-4-烷基、C_1-3-烷氧基或NR^3aR^3b；

R^3a代表C_1-2-烷基；

R^3b代表氢或甲基；且

R⁴代表氯或C_1-2-烷基；

且

R⁵代表C_1-4-烷基、C_1-3-烷氧基或NR^5aR^5b；

R^5a代表C_1-3-烷基；

R^5b代表氢或C_1-2-烷基；且

R⁶代表C_1-2-烷基。

xi)本发明的另一实施例涉及实施例i)至ix)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表C_1-4-烷基或NR^3aR^3b；

R^3a代表C_1-2-烷基；

R^3b代表氢或甲基；且

R⁴代表甲基；

且

R⁵代表C_1-4-烷基或NR^5aR^5b；

R^5a代表C_1-3-烷基；

R^5b代表氢或甲基；且

R⁶代表甲基。

xii)本发明的另一实施例涉及实施例i)至ix)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表C_1-4-烷基或NR^3aR^3b；

R^3a代表C_1-2-烷基；

R^3b代表氢或甲基；且

R⁴代表甲基。

xiii)本发明的又一实施例涉及实施例i)、ii)及x)至xii)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中

A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结；

R¹代表C_1-2-烷氧基、C_1-2-烷氨基或N-甲基-N-C_1-2-烷基-胺基；且

R²代表甲基。

xiv)本发明的又一实施例涉及实施例xiii)的嘧啶-吡啶衍生物，其中

R¹代表NHCH³、N(CH³)₂或OCH₃。

xv)本发明的又一实施例涉及实施例i)、ii)及x)至xii)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中

A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结；

R¹代表C_3-4-烷氨基或N-C_3-4-烷基-N-C_1-2-烷基-胺基；且

R²代表甲基。

xvi)本发明的另一实施例涉及实施例i)至ix)及xiii)至xv)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中

吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表C_3-4-烷基；且

R⁴代表C_1-2-烷基。

xvii)本发明的另一实施例涉及实施例i)至ix)及xiii)至xv)中任一实施例的嘧啶-吡啶衍生物，其中

吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表CH₃；且

R⁴代表C_1-2-烷基。

xviii)本发明的又一实施例涉及实施例i)或ii)的嘧啶-吡啶衍生物，其中

A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结；

R¹代表C_1-4-烷氨基或N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基；

R²代表C_1-2-烷基；且

吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表甲基、乙基、异丙基、甲氨基或二甲氨基；且

R⁴代表甲基或氯。

xix)本发明的又一实施例涉及实施例i)或ii)的嘧啶-吡啶衍生物，其中

A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结；

R¹代表C_1-4-烷氧基、C_1-4-烷氨基或N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基；

R²代表C_1-2-烷基；且

吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表C_1-4-烷基或NR^3aR^3b；

R^3a代表C_1-2-烷基；

R^3b代表甲基；且

R⁴代表氯或C_1-2-烷基；

且

R⁷及R⁸二者均代表C_1-2-烷基。

xx)本发明的又一实施例涉及实施例i)或ii)的嘧啶-吡啶衍生物，其中

A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结；

R¹代表C_1-4-烷氧基、C_1-4-烷氨基、N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基、环丙氨基、环丙基甲氨基或吡咯啶基；

R²代表C_1-2-烷基或C_3-4-烷基；且

吡啶¹代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

且若R¹代表C_1-4-烷氨基、N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基、环丙氨基或环丙基甲氨基，则吡啶¹亦可代表

其中星号表示用以将吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

R³代表C_1-4-烷基、诸如甲氧基等C_1-3-烷氧基或NR^3aR^3b；

R^3a代表C_1-2-烷基；

R^3b代表氢或甲基；且

R⁴代表氢、氯或诸如甲基等C_1-2-烷基；

R⁵代表诸如异丁基等C_1-4-烷基、诸如异丙氧基等C_1-3-烷氧基或NR^5aR^5b；

R^5a代表诸如异丙基等C_1-3-烷基；

R^5b代表诸如甲基等C_1-2-烷基；且

R⁶代表C_1-2-烷基；

R⁷代表诸如甲基等C_1-2-烷基，且R⁸代表诸如甲基或异丁基等C_1-4-烷基；

R⁹代表诸如甲基等C_1-2-烷基；且

R¹⁰代表诸如甲基或乙基等C_1-4-烷基；

且

R¹¹代表C_1-4-烷基；且

R¹²代表诸如甲基等C_1-2-烷基。

具体实施方式

式(I)化合物可含有一或多个立体或不对称中心，例如一或多个不对称碳原子。因此，式(I)化合物可作为立体异构体的混合物或优选作为纯立体异构体存在。立体异构体的混合物可以本领域技术人员所习知的方式进行分离。

当化合物、盐、药物组合物、疾病及诸如此类以复数形式使用时，此亦欲指单一化合物、盐或诸如此类。

若适合且有利，则上文或下文中任何对式(I)化合物的提及皆应理解为亦指式(I)化合物的盐、尤其医药上可接受的盐。

术语“医药上可接受的盐”指无毒、无机或有机酸及/或碱加成盐。可参照“Salt selection for basic drugs”，Int.J.Pharm.(1986)，33，201-217。

优选化合物的实例选自由下列组成的群：

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-乙基-胺；

乙基-{4-[3-(2-乙基-6-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-丙基-胺；

{4-[3-(2-乙基-6-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-丙基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-异丙基-胺；

{4-[3-(2-乙基-6-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-异丙基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-异丁基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-乙基-甲基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-甲基-丙基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-异丁基-甲基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-乙基-嘧啶-2-基}-乙基-胺；

{4-[5-(2-异丁基-6-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-二甲基-胺；及

{4-[5-(2-异丁基-6-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲氧基-6-甲基-嘧啶。

优选化合物的实例进一步选自由下列组成的群：

异丙基-{4-甲基-6-[3-(2-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-嘧啶-2-基}-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-异丙基-甲基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-二乙基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-乙基-丙基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-乙基-异丙基-胺；

环丙基-{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-胺；

环丙基-{4-[3-(2-乙基-6-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-胺；

异丙基-{4-[3-(2-甲氧基-6-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-胺；

4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-2-异丙氧基-6-甲基-嘧啶；

4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-2-异丁氧基-6-甲基-嘧啶；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-丙基-嘧啶-2-基}-甲基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-丙基-嘧啶-2-基}-二甲基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-乙基-嘧啶-2-基}-丙基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-乙基-嘧啶-2-基}-异丙基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-乙基-嘧啶-2-基}-异丁基-胺；

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-乙基-嘧啶-2-基}-异丁基-甲基-胺；

{4-[5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-丙基-胺；

{4-[5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-异丙基-胺；

{4-[5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-异丁基-甲基-胺；

{4-[5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-二乙基-胺；

{4-[5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-乙基-丙基-胺；及

{4-[5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-乙基-异丙基-胺。

式(I)化合物及其医药上可接受的盐可以药剂、例如适于经肠或肠胃外施用的药物组合物形式使用，且适于减少循环淋巴细胞的数量及预防及/或治疗与激活的免疫系统有关的疾病或病症。

药物组合物的制备可以本领域技术人员习知的任何方式(参见例如Remington，The Science and Practice ofPharmacy，第21版(2005)，第5部分“PharmaceuticalManufacturing”[由Lippincott Williams & Wilkins出版])通过将所述式(I)化合物或其医药上可接受的盐、可选地与其它有治疗价值的物质组合连同适宜无毒惰性医药上可接受的固体或液体载体材料及若需要常用医药佐剂制成盖仑制剂施用形式来实施。

该包含式(I)化合物的药物组合物可用于预防及/或治疗与激活的免疫系统有关的疾病或病症。

该与激活的免疫系统有关且拟用式(I)化合物预防/治疗的疾病或病症例如选自由下列组成的群：移植器官、组织或细胞的排斥反应；由移植引起的移植物抗宿主疾病；包括类风湿性关节炎在内的自身免疫综合症；全身性红斑狼疮；抗磷脂综合症；桥本氏甲状腺炎(Hashimoto′s thyroiditis)；淋巴细胞性甲状腺炎；多发性硬化；重症肌无力；I型糖尿病；葡萄膜炎；巩膜外层炎；巩膜炎；川畸氏病(Kawasaki′s disease)、葡萄膜视网膜炎；后葡萄膜炎；与贝切特氏病(Behcet′s disease)有关的葡萄膜炎；眼色素层脑膜炎综合症；变应性脑脊髓炎；慢性同种异体移植血管病变；感染后自身免疫疾病，包括风湿热及感染后肾小球肾炎；炎症性及过度增生性皮肤疾病；牛皮癣；牛皮癣性关节炎；特应性皮炎；肌病；肌炎；骨髓炎；接触性皮炎；湿疹性皮炎；皮脂溢性皮炎；扁平苔癣；天疱疮；大疱性类天疱疮；大疱性表皮松解；风疹；血管性水肿；血管炎；红斑；皮肤嗜酸性粒细胞增多症；痤疮；硬皮症；斑秃；角膜结膜炎；春季结膜炎；角膜炎；疱疹性角膜炎；角膜上皮营养不良；角膜白斑；眼天疱疮；莫伦氏(Mooren)溃疡；溃疡性角膜炎；巩膜炎；格雷夫斯氏(Graves)眼病；伏格特-小柳-原田三氏(Vogt-Koyanagi-Harada)综合症；类肉瘤病；花粉变应性疾病；可逆阻塞性气道疾病；支气管哮喘；变应性哮喘；内源性哮喘；外源性哮喘；粉尘性哮喘；慢性或顽固性哮喘；迟发性哮喘及气道过度反应；细支气管炎；支气管炎；子宫内膜异位；睾丸炎；胃溃疡；局部缺血性肠疾病；炎性肠疾病；坏死性小肠结肠炎；热烧伤伴随的肠损伤；腹部疾病；直肠炎；嗜酸细胞性胃肠炎；肥大细胞增多症；克隆氏病(Crohn′sdisease)；溃疡性结肠炎；由局部缺血疾病及血栓症引起的血管损伤；动脉粥样硬化；脂肪心；心肌炎；心脏梗塞；主动脉炎综合症；病毒疾病所致的恶病质；血管血栓症；偏头痛；鼻炎；湿疹；间质性肾炎；IgA诱导的肾病；古德帕斯彻氏(Goodpasture)综合症；溶血性尿毒症综合症；糖尿病性肾病变；肾小动脉血管球硬化；肾小球肾炎；肾小管间质性肾炎；间质性膀胱炎；多发性肌炎；格-巴二氏(Guillain-Barr)综合症；美尼尔氏(Meniere)病；多发性神经炎；多神经炎；脊髓炎；单神经炎；神经根病；甲状腺机能亢进；巴塞多氏(Basedow)病；甲状腺毒症；单纯红细胞再生障碍；再生障碍性贫血；再生不良性贫血；特发性血小板减少性紫斑症；自身免疫溶血性贫血；自身免疫性血小板减少症；粒细胞缺乏症；恶性贫血；巨幼红细胞性贫血；红细胞发生不能；骨质疏松症；纤维化肺；特发性间质性肺炎；皮肌炎；普通白斑病；普通鳞癣；光变应性敏感性；皮肤T细胞淋巴瘤；结节性多动脉炎；亨廷顿氏(Huntington′s)舞蹈病；西登哈姆氏(Sydenham)舞蹈病；心肌病；心肌炎；硬皮病；韦格纳氏(Wegener)肉芽肿；薛格连氏(Sjogren′s)综合症；肥胖症；嗜酸性筋膜炎；牙龈、牙周膜、牙槽骨、骨质牙的损伤；男性型脱发或老年性脱发；肌肉萎缩症；脓皮病；赛杂瑞氏(Sezary)综合症；垂体炎；慢性肾上腺机能不全；阿狄森氏(Addison)综合症；保存时出现的器官的局部缺血-再灌注损伤；内毒素休克；假膜性结肠炎；由药物或辐射引起的结肠炎；局部缺血性急性肾功能不全；慢性肾功能不全；肺癌；淋巴源性恶性肿瘤；急性或慢性淋巴细胞性白血病；淋巴瘤；肺气肿；白内障；铁质沉着；色素性视网膜炎；老年性黄斑变性；玻璃体瘢痕；角膜碱烧伤；皮炎红斑；大疱性皮炎；水泥皮炎；龈炎；牙周炎；败血病；胰腺炎；周边动脉疾病；癌发生；实体癌瘤；癌瘤转移；低气压病；自身免疫性肝炎；原发性胆汁性肝硬化；硬化性胆管炎；部分肝切除；急性肝坏死；肝硬化；酒精性肝硬化；肝衰竭；暴发性肝功能衰竭；迟发性肝衰竭；及“急慢性”肝衰竭。

拟用式(I)化合物治疗及/或预防的优选疾病或病症选自由下列组成的群：移植器官(例如肾、肝、心脏、肺、胰脏、角膜及皮肤)的排斥反应；由干细胞移植引起的移植物抗宿主疾病；自身免疫综合症，包括类风湿性关节炎、多发性硬化、炎性肠疾病(例如克隆氏病及溃疡性结肠炎)、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、甲状腺炎(例如桥本氏甲状腺炎)、葡萄膜视网膜炎；特应性疾病(例如鼻炎、结膜炎、皮炎)；哮喘；I型糖尿病；感染后自身免疫疾病，包括风湿热及感染后肾小球肾炎；实体癌症及肿瘤转移。

拟用式(I)化合物治疗及/或预防的特别优选疾病或病症选自由下列组成的群：移植器官(选自肾、肝、心脏及肺)的排斥反应；由干细胞移植引起的移植物抗宿主疾病；自身免疫综合症，其选自类风湿性关节炎、多发性硬化、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、克隆氏病及桥本氏甲状腺炎；及特应性皮炎。拟用式(I)化合物治疗及/或预防的非常优选疾病或病症选自多发性硬化及牛皮癣。

本发明亦涉及预防或治疗本文所提及疾病或病症的方法，其包含向个体施用医药活性量的式(I)化合物。

此外，式(I)化合物亦可与一或若干种免疫调节剂组合用于预防及/或治疗本文所提及的疾病及病症。根据本发明的一优选实施例，该药剂选自由下列组成的群：免疫抑制剂、肾上腺皮质类固醇、NSAID、细胞毒性药物、黏附分子抑制剂、细胞因子、细胞因子抑制剂、细胞因子受体拮抗剂及重组细胞因子受体。

本发明亦涉及式(I)化合物用于制备药物组合物的用途，该药物组合物可选地与一或若干种免疫调节剂组合使用来预防或治疗本文所提及的疾病及病症。

式(I)化合物可通过下文所给出的方法、通过实例中所给出的方法或通过类似方法来制造。最佳反应条件可随所用特定反应物或溶剂而有所变化，但该条件可由本领域技术人员通过常规最优化程序来确定。

本发明式(I)化合物可根据下文概述的通用反应次序来制备。仅阐述数种可产生式(I)化合物的合成可能性。

结构1

当式(I)化合物代表5-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物时，其通过在诸如二噁烷、THF、二甲氧基乙烷、二甲苯、甲苯、苯、吡啶、DMF、二氯甲烷、乙酸、三氟乙酸等溶剂中于rt或高温下于存在或不存在诸如酸(例如，TFA、乙酸、HCl等)、碱(例如，NaH、NaOAc、Na₂CO₃、K₂CO₃、三乙胺等)、四烷基铵盐或水去除剂(例如，草酰氯、羧酸酐、POCl₃、PCl₅、P₄O₁₀、分子筛、甲氧基羰基胺磺酰基三乙基氢氧化铵(Burgess试剂)等)等辅助剂下使结构1的化合物反应来制备(文献：例如A.R.Gangloff、J.Litvak、E.J.Shelton、D.Sperandio、V.R.Wang、K.D.Rice，Tetrahedron Lett.42(2001)，1441-1443；T.Suzuki、K.Iwaoka、N.Imanishi、Y.Nagakura、K.Miyta、H.Nakahara、M.Ohta、T.Mase，Chem.Pharm.Bull.47(1999)，120-122；R.F.Poulain、A.L.Tartar、B.P.Déprez，Tetrahedron Lett.42(2001)，1495-1498；R.M.Srivastava、F.J.S.Oliveira、D.S.Machado、R.M.Souto-Maior，Synthetic Commun.29(1999)，1437-1450；E.O.John、J.M.Shreeve，InorganicChemistry 27(1988)，3100-3104；B.Kaboudin、K.Navaee，Heterocycles 60(2003)，2287-2292；C.T.Brain、J.M.Paul、Y.Loong、P.J.Oakley，TetrahedronLett.40(1999)，3275-3278)。

结构2 结构3

结构1的化合物可通过在诸如DMF、THF、DCM等溶剂中于存在或不存在一或多种偶合剂(例如TBTU、DCC、EDC、HBTU、HOBt、CDI、PyBOP等)下且于存在或不存在碱(例如三乙胺、DIPEA、NaH、K₂CO₃等)下使结构2的化合物与结构3的化合物反应来制备(文献：例如A.Hamze、J.-F.Hernandez、P.Fulcrand、J.Martinez，J.Org.Chem.68(2003)，7316-7321；及上文所引用的文献)。

结构4 结构5

当式(I)化合物代表3-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物时，其以类似方式(文献：例如C.T.Brain、J.M.Paul、Y.Loong、P.J.Oakley，Tetrahedron Lett.40(1999)，3275-3278；W.J.Fanshawe、S.R.Safir，美国专利第3,857,843号(美国Cyanamid公司，USA))通过使结构4的化合物与结构5的化合物反应且随后环化对应羟基脒酯中间体来制备。

NC——哌啶¹

结构6结构7

结构3及4的化合物可通过在溶剂(例如甲醇、乙醇、吡啶等)中于存在或不存在碱(例如Na₂CO₃、K₂CO₃、三乙胺、KOtBu等)下分别使结构6及7的化合物与羟胺或其一种盐反应来制备(文献：例如T.Suzuki、K.Iwaoka、N.Imanishi、Y.Nagakura、K.Miyta、H.Nakahara、M.Ohta、T.Mase，Chem.Pharm.Bull.47(1999)，120-122；J.Cui、D.Crich、D.Wink、M.Lam、A.L.Rheingold、D.A.Case、W.T.Fu、Y.Zhou、M.Rao、A.J.Olson、M.E.Johnson，Bioorg.Med.Chem.11(2003)，3379-3392；R.Miller、F.Lang、Z.J.Song、D.Zewge，WO 2004/035538(Merck & Co公司，USA)；B.Kaboudin、K.Navaee，Heterocycles 60(2003)，2287-2292)。

结构6的化合物市面有售或自结构5的化合物根据本文所述的程序或根据本领域技术人员所习知的程序来制备。

实现将结构2的化合物转化成结构7的化合物或相反的方法已为本领域技术人员所习知且在本文中有所阐述。

结构8 结构9

当式(I)化合物代表2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噁二唑或2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噻二唑衍生物时，其以类似方式通过以下来制备：使结构2的化合物与肼反应(通过使用诸如TBTU、DCC、EDC、HBTU、PyBOP、HOBt、CDI等偶合剂)以形成结构8的化合物、结构8的化合物随后与结构5的化合物偶合得到结构9的化合物。结构9的化合物亦可通过以下相反反应顺序制备，即，通过首先使结构5的化合物与肼偶合、随后使对应酰肼中间体与结构2的化合物反应。使结构9的化合物脱水以形成期望的2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噁二唑衍生物通过在溶剂(例如甲苯、乙腈、二噁烷、THF、CHCl₃等)中在介于20℃与120℃间的温度下于存在或不存在微波辐照下用诸如POCl₃、CCl₄或CBr₄等试剂与三苯基膦、P₂O₅、Burgess试剂等处理结构9的化合物来达成。(文献：例如M.A.Garcia、S.Martin-Santamaria、M.Cacho、F.Moreno de la Llave、M.Julian、A.Martinez、B.De Pascual-Teresa、A.Ramos，J.Med.Chem.48(2005)4068-4075；C.T.Brain、J.M.Paul、Y.Loong、P.J.Oakley，Tetrahedron Lett.40(1999)，3275-3278)。同样，2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噻二唑衍生物为通过在存在或不存在溶剂(例如吡啶、甲苯、THF、乙腈等)下在高温下利用或不利用微波辐照用Lawesson试剂(可选地与P₂S₅组合)环化结构9的化合物来获得(文献：例如A.A.Kiryanov、P.Sampson、A.J.Seed，J.Org.Chem.66(2001)7925-7929；Org.Prep.Proc.Int.37(2005)，213-222)。

结构10 结构11

结构2的化合物可通过以下来制备：在酸性介质中于存在或不存在诸如甲醇、乙醇、二噁烷等额外溶剂下优选在高于50℃的温度下使2，4-二侧氧基-链烷酯(结构10，其中R代表C_1-4-烷基(尤其乙基)且R²优选代表甲基或乙基)与脲反应以得到结构11的化合物。可随后使结构11的化合物与POCl₃反应(文献：例如Palanki，M.S.S.、Erdman，P.E.、Gayo-Fung，L.M.、Shelvin，G.I.、Sullivan，R.W.、Suto，M.J.、Goldman，M.E.、Ransone，L.J.、Bennett，B.L.、Manning，A.M.，J.Med.Chem.43(2000)，3995-4004；Z.Budesinsky、F.Roubinek，Collection Czechoslov.Chem.Commun.26(1961)，2871-2885)以得到结构12的化合物，其可水解成结构13的化合物。于存在或不存在诸如THF、二噁烷等额外溶剂下优选在高于50℃的温度下使结构13的化合物与合适胺或醇与诸如Hünig碱或NaOH等碱反应以得到结构2的化合物。

结构12 结构13

若R¹代表单烷氨基，则在式(I)化合物合成期间可能出现的对应单烷氨基-嘧啶衍生物可能需要在仲胺官能团处实施暂时保护。

结构14

容许引入R¹及R²两个残基的上文所述反应次序亦可应用至支架已经进一步复杂化的化合物。例如，亦可在稍后步骤中向结构14的化合物引入期望残基R¹，结构14的化合物可通过与彼等本文所述类似的方法合成，例如通过用结构3的吡啶化合物实施结构13的嘧啶化合物的偶合-环化次序。

或者，结构2的化合物亦可通过以下来制备：于存在或不存在诸如甲醇、乙醇、二噁烷等额外溶剂下优选在高于50℃的温度下使结构10的化合物与S-甲基异硫脲硫酸盐反应以得到结构15的化合物。可随后在碱性条件下使结构15的化合物水解成对应羧酸衍生物，其与诸如mCPBA等氧化剂反应得到结构16的化合物(文献：例如Z.Budesinsky、F.Roubinek，Collection Czechoslov.Chem.Commun.26(1961)，2871-2885)。于存在或不存在诸如THF、二噁烷等额外溶剂下优选在高于50℃的温度下使结构16的化合物与合适胺或醇与诸如Hünig碱或NaOH等碱反应得到结构2的化合物。

结构15 结构16

吡啶¹代表以下的结构5的化合物

可通过于Fe(acac)₃存在下于诸如THF、二噁烷、DMF、NMP或其组合等溶剂中在介于-78℃至25℃的温度下使2，6-二氯-异烟碱酸酯(下文结构17)与烷基格氏(Grignard)试剂反应来制备(Fürstner条件，文献：例如A.Fürstner、A.Leitner、M.Mendez、H.Krause，J.Am.Chem.Soc.124(2002)13856-13863；A.Fürstner、A.Leitner，Angew.Chem.114(2002)632-635)。可选择反应条件以使2-氯-6-烷基-异烟碱酸酯或2，6-二烷基-异烟碱酸酯作为主要产物而获得。2，6-二氯-异烟碱酸酯中的两个氯原子亦可顺序或一步由相同或不同的两个烯-1-基取代，此通过在本领域技术人员所习知的Suzuki偶合条件下用合适烯基硼衍生物处理2，6-二氯-异烟碱酸酯来实施。使所获得的2，6-二-烯基-异烟碱酸酯氢化成对应2，6-二烷基-异烟碱酸酯。另外，可设想顺序使用Fürstner及Suzuki条件的程序。亦可在高温下用醇或醇盐处理2，6-二氯-异烟碱酸酯或2-氯-6-烷基-异烟碱酸酯以提供对应2-氯-6-烷氧基-异烟碱酸酯或2-烷氧基-6-烷基-异烟碱酸酯(文献：例如N.Wild、U.Groth，Eur.J.Org.Chem.2003，4445-4449)。最后，酯官能团裂解释放结构5的化合物。

结构17 结构18 结构19

R³代表NR^3aR^3b的上文结构5的化合物可通过以下来制备：于存在或不存在诸如THF、二噁烷、乙醇等额外溶剂下优选在高于50℃的温度下使2，6-二氯-异烟碱酸酯(结构17，其中R代表C_1-4-烷基、优选为异丙基或仲丁基)与合适胺NHR^3aR^3b反应得到结构18的化合物。随后使结构18的化合物与合适烷基-Zn试剂(例如Me₂Zn、MeZnCl、Et₂Zn等)在Negishi反应条件下(文献：例如H.Matsushita、E.Negishi，J.Org.Chem.47(1982)4161-4165)反应得到结构19的化合物，其可水解成结构5的化合物。另外，结构19的化合物可通过于Fe(acac)₃存在下在诸如THF、二噁烷、DMF、NMP或其组合等溶剂中在介于-78℃至25℃间的温度下使结构18的化合物与烷基格氏试剂反应来制备(Fürstner条件，参见上文)。若R⁴代表乙基，则对应的结构19的化合物亦可通过以下来制备：在Suzuki条件下使结构18的化合物与烯基硼衍生物(例如2，4，6-三乙烯基-环三硼氧烷)反应(文献：例如F.Kerins、D.F.O′Shea，J.Org.Chem.67(2002)4968-4971)。使所获得的2-胺基-6-烯基-异烟碱酸衍生物氢化成对应的结构19的化合物。

结构20

或者，结构19的化合物亦可通过使结构20的化合物与合适胺NHR^3aR^3b在Buchwald-Hartwig条件下反应来制备(文献：例如J.P.Wolfe、H.Tomori、J.P.Sadighi、J.Yin、S.L.Buchwald，J.Org.Chem.65(2000)1158-1174；S.Wagaw、S.L.Buchwald，J.Org.Chem.61(1996)7240-7241；M.C.Harris、O.Geis、S.L.Buchwald，J.Org.Chem.64(1999)6019-6022；S.R.Stauffer、S.Lee、J.P.Stambuli、S.I.Hauck、J.F.Hartwig，Org.Letters2(2000)1423-1426)。结构20的化合物或其对应酸市面有售或可通过使2，6-二氯-异烟碱酸酯(结构17)与烷基格氏试剂在Fürstner条件(参见上文)下或与烷基-Zn试剂在Negishi条件下反应来制备。使结构17的化合物与烯基硼衍生物在Suzuki条件下反应、在Buchwald-Hartwig条件下用胺NHR^3aR^3b处理对应烯基-氯-异烟碱酸酯并随后氢化亦可得到结构19的化合物。残基R^3a及R^3b亦可通过顺序烷基化及/或还原胺化结构21的化合物来引入(文献：例如N.Finch、T.R.Campbell、C.W.Gemenden、H.J.Povalski，J.Med.Chem.23(1980)1405-1410)，结构21的化合物可通过在诸如水、甲醇、乙醇、THF等溶剂中于高温下使结构20的化合物与氨反应来制备。

结构21

若R^3b代表氢，则在式(I)化合物合成期间可能出现的对应吡啶衍生物可能需要在仲胺官能团处实施暂时保护。

吡啶¹代表以下的结构5的化合物

可通过于Fe(acac)₃存在下于诸如THF、二噁烷、DMF、NMP或其组合等溶剂中在介于-78℃至25℃的温度下使5，6-二氯烟碱酸酯与烷基格氏试剂反应来制备(Fürstner条件，文献：例如A.Fürstner、A.Leitner、M.Mendez、H.Krause，J.Am.Chem.Soc.124(2002)13856-13863；A.Fürstner、A.Leitner，Angew.Chem.114(2002)632-635)。可选择反应条件以使5-氯-6-烷基-烟碱酸酯或5，6-二烷基-烟碱酸酯作为主要产物而获得。5，6-二氯烟碱酸酯中的两个氯原子亦可顺序或一步由相同或不同的两个烯-1-基取代，此通过在本领域技术人员所习知的Suzuki偶合条件下用合适烯基硼衍生物处理5，6-二氯烟碱酸酯来实施。使所获得的5，6-二-烯基-烟碱酸酯氢化成对应5，6-二烷基-烟碱酸酯。另外，可设想顺序使用Fürstner及Suzuki条件的程序。此外，亦可利用Negishi反应(参见上文)将氯烟碱酸转化成对应烷基烟碱酸。亦可在高温下用醇或醇盐处理5，6-二氯烟碱酸酯以提供对应5-氯-6-烷氧基-烟碱酸酯。最后，酯官能团裂解释放结构5的化合物。

或者，R⁶代表甲基的结构5的化合物可自结构22的化合物经由使用本领域技术人员所熟知的方法形成对应6-氯-5-甲基-烟碱酸酯、随后使用上文所述Fürstner或Suzuki条件衍生化并随后裂解酯官能团来制备。结构22的化合物可自习知6-氯-3-甲酰基-5-甲基-吡啶(文献：例如EP-0702003)通过使用本领域技术人员所熟知的氧化试剂(例如存于甲酸中的H₂O₂水溶液、KMnO₄等)于存在或不存在诸如甲苯、THF、乙腈、丙酮等溶剂下在介于0℃与120℃间的温度下将甲酰基氧化成羧酸来制备。R⁶代表甲基的结构6的对应腈可根据文献方法来制备(文献：例如J.B.Paine III，J.Heterocyclic Chem.1987，351-355)。

结构22

吡啶¹代表以下的结构5的化合物

(结构23)市面有售(其中R⁷＝R⁸＝CH₃)或可遵循下文概述的反应次序来制备：

结构23的吡啶甲酸可通过以下来制备：在Suzuki条件下用2，4，6-三乙烯基-环三硼氧烷处理结构24的化合物(市面有售或以与文献程序类似的方式制备，例如T.Kaminski，P.Gros，Y.Fort，Eur.J.Org.Chem.19(2003)3855-3860；U.Ziener、E.Breuning、J.-M.Lehn、E.Wegelius、K.Rissanen、G.Baum、D.Fenske、G.Vaughan，Chemistry-A European Journal 6(2000)4132-4139；R.-A.Fallahpour，Synthesis 2000 1665-1667)以形成结构25的化合物，将结构25的化合物氧化并酯化成结构26的吡啶甲酸。随后使结构26的化合物(其中R代表C_1-2-烷基)经受使用合适2，4，6-三烯基-环三硼氧烷(根据F.Kerins、D.F.O′Shea，J.Org.Chem.67(2002)4968-4971制备)的Suzuki交叉偶合反应条件、氢化及皂化或在皂化的前于Negishi条件下用合适烷基-Zn试剂处理以提供结构23的期望化合物。

吡啶¹代表以下的结构5的化合物

(结构27或结构33)可遵循下文概述的反应次序来制备：

因此，使结构28的化合物(市面有售或可以与文献程序类似的方式制备，例如P.Pierrat、P.Gros、Y.Fort，Synlett 2004，2319-2322)与2，4，6-三乙烯基-环三硼氧烷在Suzuki条件下反应以形成结构29的化合物，将结构29的化合物氧化并酯化成结构30的化合物(其中R代表C_1-2-烷基)。与合适2，4，6-三烯基-环三硼氧烷实施Suzuki反应、氢化及皂化或与合适烷基-Zn试剂实施Negishi反应随后皂化结构31的化合物来提供结构27的化合物。

吡啶¹代表以下的结构5的化合物

(结构32)可遵循下文概述的反应次序来制备：

因此，在Suzuki条件下用2，4，6-三乙烯基-环三硼氧烷处理结构33的化合物得到结构34的化合物。氧化继的酯化得到对应的结构35的化合物(其中R代表C_1-2-烷基)。与合适2，4，6-三烯基-环三硼氧烷实施Suzuki反应、氢化及皂化或与合适烷基-Zn试剂实施Negishi反应随后皂化来提供结构32的期望化合物。R¹²代表甲基的结构33的化合物市面有售。R¹²代表乙基的结构33的化合物可遵循文献程序(例如WO 2006/097817(Pfizer Japan公司)，第84页；S.R.Natarajan等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.13(2003)273-276)如下文所概述自例如市售3-胺基-2，6-二氯吡啶来制备：

当式(I)化合物以对映异构体混合物形式获得时，该对映异构体可使用本领域技术人员所习知的方法加以分离：举例而言，通过形成并分离非对应异构体盐或经由诸如Regis Whelk-O1(R，R)(10μm)柱、DaicelChiralCel OD-H(5-10μm)柱或Daicel ChiralPak IA(10μm)或AD-H(5μm)柱等手性固定相实施HPLC。手性HPLC的典型条件为洗脱剂A(EtOH，于存在或不存在诸如三乙胺或二乙胺等胺下)与洗脱剂B(己烷)的等度混合物，流速为0.8mL/min至150mL/min。

实例

以下实例用于阐释本发明而绝非限制其范围。

所有温度皆以℃表述。化合物通过以下来表征：¹H-NMR(400MHz)或¹³C-NMR(100MHz)(Bruker；化学位移相对于所用溶剂以pp m给出；多重性：s＝单峰、d＝双重峰、t＝三重峰、q＝四重峰、quint＝五重峰、hex＝六重峰、hept＝七重峰、m＝多重峰、br＝宽峰，偶合常数以Hz给出)；LC-MS(Finnigan Navigator，带有HP 1100Binary泵及DAD，柱：4.6×50mm，Zorbax SB-AQ，5μm，

梯度：存于水中的5-95％乙腈，1min，具有0.04％三氟乙酸，流速：4.5mL/min)，标有*的保留时间或LC-MS指LC在碱性条件下运行，即用存于含有13mM氢氧化铵的水中的MeCN梯度实施洗脱，其它条件相同，t_R以min给出；TLC(来自Merck的TLC-板，硅胶60 F₂₅₄)；或熔点。通过制备型HPLC(柱：X-terra RP18，50×19mm，5μm或X-Bridge PrepC18，30×75mm，5μm；梯度：存于含有0.5％甲酸的水中的10-95％乙腈)或通过MPLC(Labomatic MD-80-100泵，Linear UVIS-201检测器，柱：350×18mm，Labogel-RP-18-5s-100，梯度：存于水中的10％甲醇至100％甲醇)来纯化化合物。可通过制备型HPLC(柱：ChiralPaK AD 20×250mm，5μm，存于己烷中的15％乙醇)将外消旋物分离成其对映异构体。

缩写(上文或下文中使用)：

aq.含水

atm大气压

BSA 牛血清白蛋白

CC柱层析

CDI羰基二咪唑

dba二亚苄基丙酮

DCC 二环己基碳二亚胺

DCM二氯甲烷

DEAD偶氮二甲酸二乙酯

DIPEA 二异丙基-乙基胺、Hünig碱、乙基-二异丙基胺

DME 1，2-二甲氧基乙烷

DMF 二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

dppf 1，1′-双(二苯基膦基-κP)二茂铁

EA乙酸乙酯

EDC N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基-碳化二亚胺

eq.当量

Et 乙基

EtOAc乙酸乙酯

Ex.实例

Fe(acac)₃铁(III)乙酰丙酮络合物

h小时

HBTU六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓

HOBt 1-羟基苯并三唑

HPLC高效液相层析

HV高真空条件

i-Bu 异丁基

i-Pr异丙基

KOtBu仲丁醇钾

LC-MS 液相层析-质谱

Lit.文献

mCPBA 间-氯过苯甲酸

Me 甲基

MeOH甲醇

min分钟

MPLC 中压液相层析

NaOAc 乙酸钠

n-BuLi 正丁基锂

NMP N-甲基吡咯啶-2-酮

n-Pr 正丙基

OAc 乙酸酯

org.有机

Ph苯基

PyBOP 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基-叁-吡咯啶基-鏻

prep.制备型

rt 室温

sat.饱和

S1P 1-磷酸鞘胺醇

TBTU四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，2，3，3-四甲基脲鎓

TFA 三氟乙酸

TFAA 三氟乙酸酐

THF 四氢呋喃

TLC 薄层层析

t_R 保留时间

Xantphos 4，5-双(二苯基膦基)-9，9-二甲基呫吨

6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸

a)在0℃下向市售甲基-2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸酯(6.00g，32.15mmol)存于乙腈(500mL)中的溶液中添加1M NaOH水溶液(48.2mL)。将混合物在0℃下搅拌1h，随后用25％HCl水溶液(7mL)酸化。蒸发出挥发物并用乙酸乙酯萃取水性溶液，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到黄色结晶固体状2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(4.22g)；LC-MS：t_R＝0.42min，[M+H]⁺＝172.96；¹H NMR(D₆-DMSO)：δ2.58(s，3H)，7.95(s，1H)，14.1(s br，1H)。

b)将2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(100mg，0.58mmol)及丙胺(0.48mL)存于二噁烷(1mL)中的溶液在70℃下搅拌18h。将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC(XBridge)纯化，得到黄色结晶固体状6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸(81mg)；LC-MS：t_R＝0.56min，[M+H]⁺＝196.08；¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.89(t，J＝7.3Hz，3H)，1.53(m，2H)，2.32(s，3H)，3.25(m，2H)，6.92(s，1H)，7.36(s br，1H)，13.2(s br，1H)。

6-甲基-2-甲氨基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及41％甲胺水溶液开始以黄色固体(230mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.32min，[M+H]⁺＝168.04。

2-乙氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及2M乙胺的THF溶液开始以黄色固体(233mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.47min，[M+H]⁺＝182.05。

2-异丙氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及异丙胺开始以黄色固体(244mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.55min，[M+H]⁺＝196.05。

2-异丁氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及异丁胺开始以黄色固体(271mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.64min，[M+H]⁺＝210.08。

2-二甲氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及2M二甲胺的THF溶液开始以黄色固体(238mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.44min，[M+H]⁺＝182.08。

2-(乙基-甲基-胺基)-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及N-乙基甲基胺开始以黄色固体(235mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.54min，[M+H]⁺＝196.08。

6-甲基-2-(甲基-丙基-胺基)-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(300mg，1.74mmol)及N-甲基丙基胺开始以褐色油状物(285mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.69min，[M+H]⁺＝210.22。¹H NMR(CDCl₃)：δ0.97(t，J＝7.5Hz，3H)，1.68(m，2H)，2.93(s，3H)，3.24(s，3H)，3.67(m，2H)，7.15(s，1H)。

2-二乙氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及二乙胺开始以黄色固体(192mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.64min，[M+H]⁺＝210.07。

2-(异丁基-甲基-胺基)-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(300mg，1.74mmol)及N-异丁基甲基胺开始以黄色固体(235mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.80min，[M+H]⁺＝224.21。

6-甲基-2-吡咯啶-1-基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(200mg，1.16mmol)及吡咯啶开始以黄色固体(200mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.50min，[M+H]⁺＝208.00。

2-环丙氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(500mg，2.90mmol)及环丙胺开始以黄色固体(336mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.44min，[M+H]⁺＝193.98。¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.47(m，2H)，0.66(m，2H)，2.35(s，3H)，2.79(m，1H)，6.99(s，1H)，7.55(s br，1H)。

2-(环丙基甲基-胺基)-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(250mg，1.45mmol)及环丙基甲基胺开始以黄色油状物(230mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.57min，[M+H]⁺＝208.00。

2-(异丙基-甲基-胺基)-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(500mg，2.90mmol)及异丙基甲基胺开始以黄色油状物(640mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.44min，[M+H]⁺＝210.31。¹H NMR(D₆-DMSO)：δ1.15(m，6H)，2.34(m，3H)，2.96(s，3H)，5.09(m，1H)，6.94(s，1H)，13.2(s br，1H)。

2-(乙基-丙基-胺基)-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(500mg，2.90mmol)及N-乙基丙基胺开始以黄色油状物(526mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.61min，[M+H]⁺＝224.29。¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.88(m，J＝7.3Hz，3H)，1.11(t，J＝6.8Hz，3H)，1.58(m，2H)，2.35(s，3H)，3.53(m，2H)，3.62(q，J＝6.8Hz，2H)，6.93(s，1H)，13.1(s br，1H)。

2-(乙基-异丙基-胺基)-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(500mg，2.90mmol)及N-乙基异丙基胺开始以褐色油状物(334mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.74min，[M+H]⁺＝224.03。

2-甲氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

将甲基-2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸酯(5.0g)存于2NNaOH水溶液(67mL)及MeOH(67mL)中的悬浮液在rt下搅拌24h。蒸发出MeOH并在0℃下用25％HCl水溶液酸化水相。榨出灰棕色结晶固体。将其过滤，用水及庚烷冲洗并干燥以得到标题化合物(3.0g)；LC-MS：t_R＝0.55min，[M+H]⁺＝169.01；¹H NMR(D₆-DMSO)：δ2.50(s，3H)，3.94(s，3H)，7.52(s，1H)，13.7(s br，1H)。

2-乙氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

将2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及Hünig碱(0.8mL)存于乙醇(1.79mL)中的溶液在70℃下搅拌24h。蒸发出乙醇并将水相在0℃下用25％HCl水溶液酸化，浓缩并通过制备型HPLC(XBridge)纯化，得到黄色固体状2-乙氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸(201mg)；LC-MS：t_R＝0.63min，[M+H]⁺＝183.04。

6-甲基-2-丙氧基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-乙氧基-6-甲基-胺基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及正丙醇开始以黄色固体(174mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.72min，[M+H]⁺＝197.06。

2-异丙氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-乙氧基-6-甲基-胺基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及异丙醇开始以黄色固体(47mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.71min，[M+H]⁺＝197.07。

2-异丁氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-乙氧基-6-甲基-胺基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(265mg，1.54mmol)及异丁醇开始以黄色固体(16mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.80min，[M+H]⁺＝211.03。

6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸

a)将S-甲基异硫脲硫酸盐(874mg，4.65mmol)及2，4-二侧氧基己酸乙基酯(800mg，4.65mmol)存于乙醇(4mL)中的溶液加热至80℃，保持48h。随后将反应混合物过滤，蒸发并通过制备型TLC(使用庚烷/EA 1/1作为洗脱剂)纯化，得到590mg黄色油状6-乙基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸乙基酯。¹H NMR(D₆-DMSO)：δ1.24(t，J＝7.5Hz，3H)，1.34(t，J＝7.0Hz，3H)，2.56(s，3H)，2.81(q，J＝7.5Hz，2H)，4.37(q，J＝7.0Hz，2H)，7.58(s，1H)。

b)向6-乙基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸乙基酯(590mg，2.61mmol)存于乙醇(12mL)及THF(12mL)中的溶液中添加2M LiOH水溶液(4m L)。将混合物在rt下搅拌12h，然后用1N HCl水溶液中和。将水性溶液用乙酸乙酯萃取三次并将合并的有机萃取物蒸发至干燥，得到510mg白色固体状6-乙基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸；LC-MS：t_R＝0.75min，[M+H]⁺＝199.02。

c)向0℃的6-乙基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸(510mg，2.57mmol)存于二氯甲烷(15mL)中的溶液中添加mCPBA(1.33g，5.40mmol)。将反应混合物在rt下搅拌12h，随后用10％Na₂S₂O₃水溶液骤冷并用二氯甲烷(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和NaHCO₃洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下蒸发。随后通过制备型TLC(DCM/MeOH 4/1)对粗物质实施纯化以得到325mg黄色油状标题化合物；LC-MS：t_R＝0.54min，[M+H]⁺＝231.05。

6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸乙基酯

向0℃的6-乙基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸乙基酯(113mg，0.50mmol)存于DCM(5mL)中的溶液中添加mCPBA(258mg，1.05mmol)。将反应混合物在rt下搅拌12h，随后用10％Na₂S₂O₃水溶液骤冷并用DCM(3×20mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下蒸发。随后通过制备型TLC(DCM/MeOH 4/1)对粗物质实施纯化以得到112mg黄色油状标题化合物；LC-MS：t_R＝0.80min，[M+H]⁺＝259.07。

2-甲基硫基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸乙基酯

标题化合物以与6-乙基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸乙基酯类似的方式自2，4-二侧氧基-庚酸乙基酯(4.0g)及S-甲基-异硫脲硫酸盐开始以黄色油状物(3.35g)形式获得；LC-MS：t_R＝0.99min，[M+H]⁺＝240.97。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.00(m，3H)，1.44(m，3H)，1.82(m，2H)，2.64(s，3H)，2.77(m，2H)，4.47(q，J＝7.3Hz，2H)，7.47(s，1H)。

2-甲烷磺酰基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸乙基酯

标题化合物以与6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸乙基酯类似的方式自2-甲基硫基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸乙基酯开始以黄色固体(107mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.85min，[M+H]⁺＝272.96。

2-甲烷磺酰基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-甲基硫基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸乙基酯开始以黄色固体(371mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.65min，[M+H]⁺＝244.95。

6-异丁基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸乙基酯

标题化合物以与6-乙基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸乙基酯类似的方式自6-甲基-2，4-二侧氧基-庚酸乙基酯(3.5g)及S-甲基-异硫脲硫酸盐开始以黄色油状物(2.31g)形式获得；LC-MS：t_R＝1.03min，[M+H]⁺＝254.98。¹HNMR(CDCl₃)：δ0.98(d，J＝6.8Hz，6H)，1.45(t，J＝7.0Hz，3H)，2.20(m，1H)，2.64(s，3H)，2.67(d，J＝7.0Hz，2H)，4.48(q，J＝7.0Hz，2H)，7.44(s，1H)。

6-异丁基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸乙基酯

标题化合物以与6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸乙基酯类似的方式自6-异丁基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸乙基酯开始以黄色固体(107mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.91min，[M+H]⁺＝286.97。

6-异丁基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-异丁基-2-甲基硫基-嘧啶-4-甲酸乙基酯开始以灰棕色固体(610mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.72min，[M+H]⁺＝258.93。

6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸

向6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸(325mg，1.41mmol)存于THF(5mL)中的溶液中添加存于水(2.0mL)中的70％乙胺溶液。将混合物在70℃下搅拌过夜。随后将其蒸发至干燥并通过制备型TLC(DCM/7N NH₃的MeOH溶液4/1)纯化，得到200mg黄色油状6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸；LC-MS：t_R＝0.58min，[M+H]⁺＝194.07。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.34(m，6H)，2.84(d，J＝7.5Hz，2H)，3.64(m，2H)，7.26(s，1H)，11.0(sbr，1H)。

6-乙基-2-甲氨基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸(67mg)及甲胺开始以黄色油状物(14mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.48min，[M+H]⁺＝182.00。

6-乙基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸(50mg)及丙胺开始以黄色油状物(12mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.65min，[M+H]⁺＝210.00。

6-乙基-2-异丙氨基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸(50mg)及异丙胺开始以黄色油状物(10mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.64min，[M+H]⁺＝210.00。

6-乙基-2-异丁氨基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸(50mg)及异丁胺开始以黄色油状物(10mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.71min，[M+H]⁺＝224.03。

2-二甲氨基-6-乙基--嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸(100mg)及二甲胺开始以黄色油状物(20mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.57min，[M+H]⁺＝195.99。

3-乙基-2-(异丁基甲氨基)-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-乙基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸(50mg)及N-甲基-异丁胺开始以黄色油状物(12mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.87min，[M+H]⁺＝238.06。

2-甲氨基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸

将甲胺的40％水溶液(5mL)与2-甲烷磺酰基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸(150mg，0.614mmol)的溶液加热至70℃，保持2h。随后蒸发反应混合物并将粗化合物溶解于3NNaOH溶液(10mL)中。用EtOAc(5mL)洗涤水性溶液，随后用25％HCl水溶液调节至pH3并最后用DCM(3×15mL)萃取。将合并的DCM萃取物经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，得到灰棕色粉末(128m g)状2-甲氨基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸；LC-MS：t_R＝0.56min，[M+H]⁺＝196.00。

2-二甲氨基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-甲氨基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-甲烷磺酰基-6-丙基嘧啶-4-甲酸(154mg)及40％二甲胺水溶液开始以黄色油状物(100mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.68min，[M+H]⁺＝209.97。

6-异丁基-2-甲氨基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-甲氨基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-异丁基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸开始以灰棕色固体(84mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.63min，[M+H]⁺＝209.99。

2-二甲氨基-6-异丁基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-甲氨基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-异丁基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸及40％二甲胺水溶液开始以灰棕色固体(132mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.78min，[M+H]⁺＝224.03。

6-异丁基-2-异丙氨基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-甲氨基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-异丁基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸及异丙胺开始以灰棕色固体(103mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.77min，[M+H]⁺＝238.04。

2-甲氧基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-乙氧基-6-乙基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自2-甲烷磺酰基-6-丙基-嘧啶-4-甲酸乙基酯、KOtBu及甲醇开始以灰棕色固体(84mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.71min，[M+H]⁺＝196.96。

6-异丁基-2-甲氧基-嘧啶-4-甲酸

标题化合物以与2-乙氧基-6-乙基-嘧啶-4-甲酸类似的方式自6-异丁基-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-甲酸乙基酯、KOtBu及甲醇开始以黄色油状物(82mg)形式获得；LC-MS：t_R＝0.77min，[M+H]⁺＝210.96。

2，6-二甲基-异烟碱酸异丙基酯

a)将柠嗪酸(40g，0.258mol)及四甲基氯化铵(29.4g，0.268mol)存于POCl₃(71mL，0.774mol)中的悬浮液加热至130℃，保持16h。随后将混合物冷却至rt并用DCM(250mL)稀释。将此深黑色溶液逐滴添加至异丙醇(1L)中。添加后，通过蒸馏移除溶剂并将粗产物溶解于DCM(200mL)中，并逐滴添加至充分搅拌的200mL10％NaOAc溶液中。通过添加4N NaOH水溶液使pH保持在7-8左右。分离各层并将有机相用水(500mL)、随后用盐水(150mL)洗涤并蒸发至干燥。通过在HV(90℃)下蒸馏来纯化此深黑色固体以产生白色结晶固体状2，6-二氯-异烟碱酸异丙基酯(60g)；LC-MS：t_R＝1.03min，[M+H]⁺＝233.97。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.41(d，J＝6.0Hz，6H)，5.29(m，1H)，7.81(s，2H)。

b)向2，6-二氯-异烟碱酸异丙基酯(5.20g，22.2mmol)存于二噁烷(120mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl₂(185mg，0.266mmol)。将存于甲苯(53mL，66.6mmol)中的1.2M二甲基锌逐滴添加至此混合物中，然后在75℃下于氩气气氛中搅拌18h。将该混合物小心地用水稀释，借助硅藻土过滤并随后用EA萃取。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥、过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 9∶1洗脱对粗产物实施纯化，得到黄色油状2，6-二甲基-异烟碱酸异丙基酯(3.30g)；LC-MS：t_R＝0.58min，[M+H]⁺＝194.07。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.40(d，J＝6.3Hz，6H)，2.61(s，6H)，5.27(m，1H)，7.52(s，2H)。

2-乙基-6-甲基异烟碱酸乙基酯

a)向2-氯-6-甲基异烟碱酸(50g，291.4mmol)存于乙醇(750mL)中的溶液中添加数滴浓硫酸，并将混合物在75℃下搅拌24h。蒸发出溶剂并将残留物溶解于乙酸乙酯(300mL)中并用饱和NaHCO₃水溶液(100mL)、随后盐水(2×70mL)洗涤。将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并蒸发以在自庚烷重结晶后得到白色固体状2-氯-6-甲基异烟碱酸乙基酯(54.9g)；LC-MS：t_R＝0.92min，[M+1]⁺＝200.17。

b)向2-氯-6-甲基-异烟碱酸乙基酯(15g，75.1mmol)存于DME(100mL)中的溶液中添加乙烯基环硼氧烷(18.1g，75.1mmol)，随后添加2M K₂CO₃(15mL)水溶液、Pd(PPh₃)₄(750mg，0.65mmol)及PPh₃(1.0g，6.17mmol)。将混合物在100℃下搅拌15h，随后将其冷却至rt，用二乙基醚(300mL)稀释并用1N NaOH水溶液及盐水洗涤。将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 4∶1洗脱对粗产物实施纯化，得到黄色油状6-甲基-2-乙烯基异烟碱酸乙基酯(10.1g)；LC-MS：t_R＝0.67min，[M+1]⁺＝192.07。

c)将6-甲基-2-乙烯基异烟碱酸乙基酯(10.1g，52.8mmol)溶解于THF(200mL)中，添加Pd/C(300mg，10％Pd)，并将混合物在1atm H₂中于rt下搅拌16h。过滤出触媒并蒸发滤液，得到无色油状2-乙基-6-甲基-异烟碱酸乙基酯(10.0g)；LC-MS：t_R＝0.59min，[M+1]⁺＝194.09。¹H NMR(D₆-DMSO)：δ1.23(t，J＝7.5H z，3H)，1.33(t，J＝7.0Hz，3H)，2.53(s，3H)，2.79(q，J＝7.5Hz，2H)，4.34(q，J＝7.0H z，2H)，7.49(s，1H)，7.51(s，1H)。

6-甲基-2-丙基-异烟碱酸乙基酯

标题化合物以与2-乙基-2-甲基-异烟碱酸乙基酯类似的方式使用反-丙烯基硼酸来制备；无色油状物；LC-MS：t_R＝0.65min；[M+1]⁺＝208.12。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.00(t，J＝7.3Hz，3H)，1.43(t，J＝7.0Hz，3H)，1.77(m，2H)，2.62(s，3H)，2.83(m，2H)，4.42(q，J＝7.3Hz，2H)，7.52(s，1H)，7.54(s，1H)。

2-异丙基-6-甲基-异烟碱酸乙基酯

标题化合物以与2-乙基-2-甲基-异烟碱酸乙基酯类似的方式使用2，4，6-三异丙烯基-环三硼氧烷(以与F.Kerins，D.F.O′Shea J.Org.Chem.67(2002)4968-4971所给出的程序类似的方式制备)来制备；LC-MS：t_R＝0.63min；[M+1]⁺＝208.11。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.24(d，J＝6.8Hz，6H)，1.33(t，J＝7.3Hz，3H)，2.53(s，3H)，3.08(m，1H)，4.34(m，2H)，7.49(s，1H)，7.51(s，1H)。

2-异丁基-6-甲基-异烟碱酸乙基酯

标题化合物以与2-乙基-2-甲基-异烟碱酸乙基酯类似的方式使用2，4，6-三异丙烯基-环三硼氧烷(以与F.Kerins，D.F.O′Shea J.Org.Chem.67(2002)4968-4971所给出的程序类似的方式制备)来制备；无色油状物；LC-MS：t_R＝0.71min；[M+1]⁺＝222.12。¹H NMR(CDCl₃)：δ.0.96(d，J＝6.8Hz，6H)，1.43(t，J＝7.3Hz，3H)，2.13(m，1H)，2.62(s，3H)，2.71(d，J＝7.3Hz，2H)，4.42(q，J＝7.3Hz，2H)，7.48(s，1H)，7.54(s，1H)。

2，6-二甲基-异烟碱酸

将2，6-二甲基-异烟碱酸异丙基酯(1.81g)存于25％HCl水溶液(50mL)中的溶液在65℃下搅拌24h。蒸发溶剂并将产物在HV下干燥，得到白色固体状标题化合物的盐酸盐水合物(1.75g)；LC-MS：t_R＝0.21min，[M+1]⁺＝152.06。

2-异丁基-6-甲基-异烟碱酸

标题化合物的盐酸盐水合物系自2-异丙基-6-甲基-异烟碱酸乙基酯开始以与2，6-二甲基-异烟碱酸类似的方式获得；白色固体；LC-MS：t_R＝0.50min，[M+1]⁺＝194.08。

2-二甲氨基-6-甲基-异烟碱酸

a)将浓H₂SO₄(1.16mL，21.6mmol)逐滴添加至2-氯-6-甲基吡啶-4-甲酸(11.58g，67.49mmol)存于乙醇(100mL)中的悬浮液中。随后将反应混合物在70℃下搅拌24h。缓慢添加饱和NaHCO₃以达到pH 8并用EA将水性溶液萃取三次。收集有机萃取物，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，得到米色固体状2-氯-6-甲基吡啶-4-甲酸乙基酯(11.81g)；LC-MS：t_R＝0.91min，[M+H]⁺＝199.93。

b)在氩气中，将2-氯-6-甲基吡啶-4-甲酸乙基酯(3.42g 16.74mmol)、仲丁醇钠(1.77g，18.4mmol)、Xantphos(967mg，1.67mmol)及Pd(OAc)₂(376mg，1.67mmol)存于2M二甲胺的THF溶液(20mL)中的溶液在110℃下搅拌18h。添加另外10mL 2M二甲胺的THF溶液并将混合物另外搅拌24h。将深黑色反应混合物冷却至rt，用6N HCl水溶液稀释并用二乙基醚萃取(4次)。浓缩有机萃取物，将残留物溶解于6N HCl水溶液中并加热至100℃，保持18h。将橙色悬浮液浓缩，溶解于1N NaOH水溶液中并再次浓缩。将残留物溶解于1N NaOH水溶液及甲醇中并通过MPLC在RP-C₁₈硅胶上分离，得到灰棕色固体状2-二甲氨基-6-甲基-异烟碱酸(0.871g)；LC-MS：t_R＝0.44min，[M+H]⁺＝181.07。

2-乙氨基-6-甲基-异烟碱酸甲基酯

在氩气中，将Cs₂CO₃(6.85g，21.0mmol)、Xantphos(1.39g，2.40mmol)及Pd(OAc)₂(314mg，1.40mmol)及2M乙胺的THF(30mL)溶液添加至2-氯-6-甲基吡啶-4-甲酸甲基酯(1.30g，7.00mmol)存于二噁烷(20mL)中的溶液中。将反应混合物在90℃下搅拌15h。随后将反应混合物过滤，并在真空中浓缩。将残留物用水稀释并用EA萃取(两次)。将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤，浓缩并通过CC(用庚烷∶EA 7/3洗脱)实施纯化，得到黄色油状标题化合物(0.6g)；LC-MS：t_R＝0.56min，[M+H]⁺＝195.00。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.28(t，J＝7.0Hz，3H)，2.44(s，3H)，3.33(m，2H)，3.93(s，3H)，4.62(m，1H)，6.76(m，1H)，6.99(s，1H)。

5-乙基-6-(异丙基-甲基-胺基)烟碱酸

a)向5，6-二氯烟碱酸(10.0g，50.0mmol)存于THF(600mL)中的溶液中添加三苯基膦(19.67g，75.0mmol)及乙醇(5.55g，75.0mmol)。将混合物冷却至0℃，随后添加DEAD(32.65g，75.0mmol)。搅拌混合物并升温至rt。搅拌持续16h，然后添加饱和NaHCO₃水溶液。用EA反复萃取该混合物。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥、过滤并浓缩。通过CC(庚烷∶EA 7∶3)对粗产物实施纯化，得到白色固体状5，6-二氯烟碱酸乙基酯(11.4g)；LC-MS：t_R＝0.96min，[M+1]⁺＝220.02。

b)将5，6-二氯烟碱酸乙基酯(2.91g，15.2mmol)与N-异丙基-甲基-胺(44.34g，60.6mmol)的混合物在密封容器中于80℃下搅拌48h。将混合物冷却至rt并浓缩。将残留物溶解于DCM(15mL)中并用1N KHSO₄水溶液(2×50mL)洗涤。用DCM(50mL)反萃取洗涤物。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩并干燥，得到黄色油状5-氯-6-(异丙基-甲基-胺基)-烟碱酸乙基酯(3.42g)；LC-MS：t_R＝1.06min，[M+1]⁺＝257.11；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.25(d，J＝6.5Hz，6H)，1.39(t，J＝7.0Hz，3H)，2.96(s，3H)，4.36(q，J＝7.0Hz，2H)，4.55(m，1H)，8.09(s，1H)，8.72(s，1H)。

c)在氩气中向5-氯-6-(异丙基-甲基-胺基)-烟碱酸乙基酯(3.53g，13.7mmol)存于二噁烷(60mL)中的溶液中添加Pd(dppf)(112mg，0.137mmol)。向该混合物中逐滴添加二乙基锌(10.2g，82.4mmol，呈存于甲苯中的1.1M溶液形式)。将混合物在75℃下搅拌24h，然后添加另一份Pd(dppf)(112mg，0.137mmol)及二乙基锌(5.09g，41.2mmol，呈存于甲苯中的1.1M溶液形式)。在75℃下继续搅拌24h。将反应混合物冷却至rt并小心地用水骤冷。经硅藻土过滤该混合物并用EA将滤液萃取两次。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥、过滤并浓缩。通过CC(庚烷∶EA 9∶1)对粗产物实施纯化，得到浅黄色油状5-乙基-6-(异丙基-甲基-胺基)烟碱酸乙基酯(0.855g)；LC-MS：t_R＝0.78min，[M+1]⁺＝251.19；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.21(d，J＝6.8Hz，6H)，1.27(t，J＝7.3Hz，3H)，1.39(t，J＝7.0Hz，3H)，2.65(q，J＝7.3Hz，2H)，2.83(s，3H)，4.02(m，1H)，4.37(q，J＝7.3Hz，2H)，7.99(d，J＝2.3Hz，1H)，8.74(d，J＝2.3Hz，1H)。

d)将5-乙基-6-(异丙基-甲基-胺基)烟碱酸乙基酯(0.855g)存于25％HCl水溶液(50mL)中的溶液在65℃下搅拌18h。蒸发溶剂并将产物在HV下干燥，得到白色固体状标题化合物的盐酸盐水合物(2.30g)；LC-MS：t_R＝0.63min，[M+1]⁺＝223.14。

6-异丙氧基-5-甲基-烟碱酸

a)向仲丁醇钾(1.26g，11.3mmol)存于异丙醇(30mL)中的溶液中添加2，5-二溴-3-甲基吡啶(2.89g，11.3mmol)。将混合物在80℃下搅拌15h，然后添加另一份仲丁醇钾(2.53g，27.5mmol)。在80℃下持续搅拌24h，然后将混合物用饱和NaHCO₃水溶液稀释。用醚萃取混合物，将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 9∶1洗脱对粗产物实施纯化，得到无色油状5-溴-2-异丙氧基-3-甲基-吡啶(1.24g)；LC-MS：t_R＝1.06min；[M+1]⁺＝230.00；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.35(d，J＝6.3Hz，6H)，2.16(s，3H)，5.27(hept，J＝6.3Hz，1H)，7.48(d，J＝1.5Hz，1H)，8.02(d，J＝2.0Hz，1H)。

b)将5-溴-2-异丙氧基-3-甲基-吡啶(1.24g，5.39mmol)及2，4，6-三乙烯基环三硼氧烷吡啶络合物(1.27g，5.26mmol)存于DME(12mL)及2M K₂CO₃水溶液(5mL)中的溶液脱气并放置于氩气气氛中，然后添加Pd(PPh₃)₄(112mg，0.097mmol)。将混合物于80℃下搅拌15小时，然后将其冷却至rt，用醚(50mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(2×30mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 9∶1洗脱对粗产物实施纯化，得到浅黄色油状2-异丙氧基-3-甲基-5-乙烯基-吡啶(703mg)；LC-MS：t_R＝1.01min；[M+1]⁺＝178.11。

c)向2-异丙氧基-3-甲基-5-乙烯基-吡啶(703mg，3.97mmol)存于丙酮(80mL)中的溶液中添加KMnO₄(1.60g，10.1mmol)并将混合物在rt下搅拌18h。过滤深褐色悬浮液，并将澄清无色滤液蒸发至干燥，得到米色固体状6-异丙氧基-5-甲基-烟碱酸(1.06g，呈钾盐形式)；LC-MS：t_R＝0.86min；[M+1]⁺＝196.09；¹H NMR(D₂O)：δ1.31(d，J＝6.3Hz，6H)，2.14(s，3H)，5.15(hept，J＝7.0Hz，1H)，7.91(s，1H)，8.34(s，1H)。

6-氯-5-甲基-烟碱酸

a)在90℃下加热磷酰氯(183mL，2mol)并缓慢添加市售2-甲基-2-丁烯腈(73g，0.9mol)与DMF(154mL，2mol)的混合物，同时保持温度为100℃-110℃。将混合物在110℃下搅拌15h，冷却至rt并用DCM(500mL)稀释。将混合物在0℃下冷却并小心地用水(500mL)骤冷。分离各相并用DCM(总共800mL)萃取水相。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残留物自环己烷结晶以提供浅黄色晶体状6-氯-3-甲酰基-5-甲基-吡啶(28.3g)；LC-MS：t_R＝0.76min，[M+1]⁺＝156.14。

b)将6-氯-3-甲酰基-5-甲基-吡啶(10g，64mmol)存于甲酸(200mL)中的溶液在0℃下冷却并在该温度下添加50重量％的H₂O₂水溶液(9.6mL，360mmol)。将混合物在0℃下搅拌15h，小心地用水(200mL)稀释并用DCM(8×100mL)萃取。将合并的有机萃取物用1M HCl水溶液(100mL)洗涤(检查是否剩余过氧化物)，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。对残留物实施干燥，得到标题化合物(9.56g)；LC-MS：t_R＝0.72min，[M+1]⁺＝172.0。

6-异丁基-5-甲基-烟碱酸

a)将6-氯-5-甲基-烟碱酸(13.85g，80.75mmol)存于含有数滴浓H₂SO₄的无水乙醇(200mL)中的溶液在回流下搅拌2天。将溶液冷却至rt，蒸发溶剂，并将残留物溶解于EA(200mL)中并用饱和Na₂CO₃水溶液(2×80mL)、1M KHSO₄水溶液(2×80mL)及盐水(50mL)洗涤。将有机相经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，得到固体状6-氯-5-甲基-烟碱酸乙基酯(12.65g)；LC-MS：t_R＝0.92min；[M+1]⁺＝200.10；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.43(t，J＝7.0Hz，3H)，2.46(s，3H)，4.43(q，J＝7.3Hz，2H)，8.16(m，1H)，8.84(d，J＝2.0Hz，1H)。

b)向6-氯-5-甲基-烟碱酸乙基酯(4.98g，24.9mmol)、2，4，6-三-(2-甲基-丙烯基)-环硼氧烷吡啶络合物(5.74g，17.7mmol，以与F.Kerins，D.F.O′Shea J.Org.Chem.67(2002)4968-4971所给出的程序类似的方式制备)及三苯基膦(1.15g，4.4mmol)存于DME(60mL)中的溶液中添加2M K₂CO₃水溶液(20mL)。将混合物脱气并用N₂冲洗，然后添加Pd(PPh₃)₄(460mg，0.4mmol)。将混合物于90℃下搅拌20小时，然后将其冷却至rt，用EA(150mL)稀释并用饱和NaHCO₃水溶液(2×50mL)洗涤。将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并蒸发。通过CC(SiO₂，庚烷-EA)对粗产物实施纯化，得到橙色油状5-甲基-6-(2-甲基-丙烯基)-烟碱酸乙基酯(3.98g)；LC-MS：t_R＝0.72min，[M+1]⁺＝220.15。

c)将5-甲基-6-(2-甲基-丙烯基)-烟碱酸乙基酯(3.98g，18.2mmol)溶解于THF(100mL)及甲醇(100mL)中，添加Pd/C(500mg，10％Pd)并将混合物在1atm H₂中于rt下搅拌15h。过滤触媒并蒸发滤液，得到无色油状6-异丁基-5-甲基-烟碱酸乙基酯(3.76g)；LC-MS：t_R＝0.75min；[M+1]⁺＝222.15；¹H NMR(CDCl₃)：δ0.97(d，J＝6.8Hz，6H)，1.42(t，J＝7.3Hz，3H)，2.20(hept，J＝6.8Hz，1H)，2.38(s，3H)，2.75(d，J＝7.0Hz，2H)，4.41(q，J＝7.3Hz，2H)，8.03(d，J＝1.8Hz，1H)，9.00(d，J＝2.0Hz，1H)。

d)将6-异丁基-5-甲基-烟碱酸乙基酯(3.75g，16.95mmol)存于12.5％HCl水溶液(50mL)中的溶液在65℃下搅拌24h，然后蒸发溶剂。在HV下干燥残留物，得到白色粉末状标题化合物的盐酸盐(3.55g)；LC-MS：t_R＝0.57min，[M+1]⁺＝194.25。

6-异丁基-4-甲基-吡啶-2-甲酸

a)将n-BuLi(21.1mL，33.8mmol，1.6M)存于THF中的溶液冷却至-78℃，然后经20min时间段逐滴添加2，6-二氯吡啶(5.0g，33.8mmol)存于THF(36mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌30min，并随后添加碘甲烷(4.79g，33.8mmol)。将混合物搅拌30min，然后用-78℃的饱和NH₄Cl水溶液骤冷。用二乙基醚萃取混合物，将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 19∶1洗脱对粗产物实施纯化，得到含有区域同分异构体2，6-二氯-3-甲基-吡啶的无色油状2，6-二氯-4-甲基-吡啶(2.34g)；LC-MS：t_R＝0.89min，[M+1]⁺＝161.97。

b)向2，6-二氯-4-甲基-吡啶(2.34g，14.4mmol)及2，4，6-三乙烯基-环三硼氧烷吡啶络合物(1.75g，7.26mmol)存于DME(27mL)中的溶液中添加2M K₂CO₃水溶液(10mL)。将混合物脱气并置于氩气中，然后添加Pd(PPh₃)₄(300mg，0.26mmol)。将混合物于80℃下搅拌3小时，然后将其冷却至rt，用二乙基醚稀释并用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 9∶1洗脱对粗产物实施纯化。将由此获得的产物溶解于EA中，用5％柠檬酸水溶液反复洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并蒸发，得到无色油状6-氯-4-甲基-2-乙烯基-吡啶(1.24g)；LC-MS：t_R＝0.90min，[M+1]⁺＝154.03。

c)向6-氯-4-甲基-2-乙烯基-吡啶(1.24g，8.06mmol)存于水(50mL)及丙酮(50mL)中的溶液中添加KMnO₄(6.53g，41.3mmol)。深黑色混合物升温(40℃)并在rt下搅拌3h，然后经烧结玻璃过滤器过滤。蒸发无色滤液的溶剂，得到无色固体状粗6-氯-4-甲基-吡啶-2-甲酸钾盐(3.2g)；LC-MS：t_R＝67min，[M+1]⁺＝171.99。将此物质悬浮于乙醇(150mL)中并添加H₂SO₄(2mL)，直至形成澄清溶液。将混合物加热至70℃，保持18h。将混合物小心地用饱和NaHCO₃水溶液稀释，直至达到pH9。将该混合物用EA萃取三次。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥、过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 3∶2洗脱对粗产物实施纯化，得到浅黄色油状6-氯-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯(500mg)；LC-MS：t_R＝0.87min；[M+1]⁺＝200.04；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.45(t，J＝7.3Hz，3H)，2.45(s，3H)，4.48(q，J＝6.8Hz，2H)，7.35(s，1H)，7.89(s，1H)。

d)向6-氯-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯(500mg，2.51mmol)及2，4，6-叁-(2-甲基-丙烯基)-环三硼氧烷吡啶络合物(814mg，2.51mmol)存于DME(32mL)中的溶液中添加2M K₂CO₃水溶液(12mL)。将混合物脱气并置于氩气中，然后添加Pd(PPh₃)₄(52mg，0.045mmol)。将混合物于80℃下搅拌6小时，然后将其冷却至rt，用二乙基醚(50mL)稀释并用饱和NaHCO₃水溶液(2×30mL)洗涤。将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 9∶1洗脱对粗产物实施纯化，得到黄色油状4-甲基-6-(2-甲基-丙烯基)-吡啶-2-甲酸乙基酯(176mg)；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.45(t，J＝7.0Hz，3H)，1.97(s，3H)，2.12(s，3H)，2.42(s，3H)，4.46(q，J＝7.0Hz，2H)，6.41(s，1H)，7.17(s，1H)，7.75(s，1H)。

e)向4-甲基-6-(2-甲基-丙烯基)-吡啶-2-甲酸乙基酯(175mg，0.80mmol)存于THF(5mL)及乙醇(5mL)中的溶液中添加Pd/C(50mg，10％Pd)。将混合物在50℃下于1巴H₂中搅拌15h。经硅藻土过滤出触媒并蒸发滤液的溶剂，得到无色油状6-异丁基-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯(174mg)；LC-MS：t_R＝0.84min，[M+1]⁺＝222.48。

f)将6-异丁基-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯(174mg，0.78mmol)存于6N HCl水溶液(20mL)中的溶液在65℃下搅拌18h。蒸发溶剂并将剩余残留物在HV下干燥，得到绿色油状标题化合物的盐酸盐；LC-MS：t_R＝0.58min，[M+1]⁺＝194.09。

5-溴-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯

a)向2，5-二溴-4-甲基吡啶(9.00g，35.9mmol)存于DME(96mL)中的溶液中添加2，4，6-三乙烯基-环三硼氧烷吡啶络合物(8.63g，35.9mmol)及2N K₂CO₃水溶液(36mL)。将混合物脱气并置于氩气中，然后添加Pd(PPh₃)₄(746mg，0.646mmol)。将混合物于80℃下搅拌15h，然后将其冷却至rt，用二乙基醚(50mL)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(2×30mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 9∶1洗脱对粗产物实施纯化，得到黄色油状5-溴-4-甲基-2-乙烯基-吡啶(7.04g)；LC-MS：t_R＝0.75min；[M+1]⁺＝198.22；¹HNMR(CDCl₃)：δ2.41(s，3H)，5.50(d，J＝10.8Hz，1H)，6.21(d，J＝17.3Hz，1H)，6.74(dd，J＝17.3，10.8Hz，1H)，7.22(s，1H)，8.59(s，1H)。

b)向5-溴-4-甲基-2-乙烯基-吡啶(7.04g，35.5mmol)存于丙酮(280mL)及水(280mL)中的溶液中添加KMnO₄(28.81g，71.1mmol)。将深黑色混合物在rt下搅拌3天，然后经玻璃过滤器垫过滤。蒸发无色滤液，得到白色固体状粗5-溴-4-甲基-吡啶-2-甲酸(10.9g，呈钾盐形式)；LC-MS：t_R＝0.64min，[M+1]⁺＝215.90。

c)向粗5-溴-4-甲基-吡啶-2-甲酸(10.9g，约35.5mmol)存于乙醇(120mL)中的悬浮液中添加H₂SO₄(0.5mL)。将混合物在70℃下搅拌18h。通过添加饱和NaHCO₃水溶液将澄清溶液的pH调节至pH 9，并用二乙基醚(3×300mL)萃取混合物。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到绿色油状5-溴-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯(8.20g)；LC-MS：t_R＝0.87min，[M+1]⁺＝243.91。

5-溴-6-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯

标题化合物以与5-溴-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯类似的方式自2，5-二溴-6-甲基吡啶制备；LC-MS：t_R＝0.92min，[M+1]⁺＝257.88。

N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒

a)将2，6-二甲基-异烟碱酸异丙基酯(3.03g，15.68mmol)存于7N NH₃的MeOH溶液(200mL)中的溶液在60℃下搅拌20h。随后在减压下浓缩反应混合物，得到白色粉末状粗2，6-二甲基-异烟酰胺(3.0g)。

b)向粗2，6-二甲基-异烟酰胺(2.45g，16.31mmol)存于DCM(40mL)中的悬浮液中添加吡啶(6.4mL，65.2mmol)。将混合物冷却至0℃，然后逐份添加三氟乙酸酐(6.91mL，48.9mmol)。在0℃下持续搅拌24h，然后用水终止反应。用DCM稀释混合物，并分离有机相并用5％柠檬酸水溶液、随后饱和NaHCO₃水溶液洗涤。洗涤物用DCM反萃取两次。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥、过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 9∶1洗脱对粗产物实施纯化，得到黄色粉末状2，6-二甲基-异烟腈(1.58g)；LC-MS：t_R＝0.53min，[M+1]⁺＝133.40。¹H NMR(CDCl₃)：δ2.61(s，6H)，7.21(s，2H)。

c)向仲丁醇钾(1.25g，11.1mmol)存于MeOH(20mL)中的冰冷溶液中添加羟胺盐酸盐(773mg，11.1mmol)。将悬浮液搅拌30min，然后添加2，6-二甲基-异烟腈(490mg，3.71mmol)。将混合物于60℃下搅拌15h，然后将其过滤。蒸发滤液至干燥并将所得固体用水洗涤并随后在HV下干燥，得到白色粉末状N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒(503mg)；LC-MS：t_R＝0.23min；[M+1]⁺＝166.01；¹H NMR(D₆-DMSO)：δ2.43(s，6H)，5.88(s，2H)，7.30(s，2H)，9.90(s，1H)。

2-乙基-N-羟基-6-甲基-异烟碱脒

标题化合物以与N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒类似的方式自2-乙基-6-甲基异烟碱酸乙基酯制备；白色粉末；LC-MS：t_R＝0.31min，[M+1]⁺＝180.07；¹H NMR(D₆-DMSO)：δ1.22(t，J＝7.5Hz，3H)，2.44(s，3H)，2.71(q，J＝7.5Hz，2H)，5.89(s，2H)，7.31(s，2H)，9.87(s br，1H)。

N-羟基-2-异丙基-6-甲基-异烟碱脒

标题化合物以与N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒类似的方式自2-异丙基-6-甲基-异烟碱酸乙基酯制备；LC-MS：t_R＝0.42min，[M+1]⁺＝194.08；¹H NMR(D₆-DMSO)：δ1.22(d，J＝7.0Hz，6H)，2.44(s，3H)，2.91-3.02(hept，J＝7.0Hz，1H)，5.91(s，2H)，7.32(s，2H)，9.88(s，1H)。

N-羟基-2-异丁基-6-甲基-异烟碱脒

标题化合物以与N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒类似的方式自2-异丁基-6-甲基-异烟碱酸乙基酯开始制备；LC-MS：t_R＝0.67min，[M+1]⁺＝208.28；¹H NMR(CDCl₃)：δ0.94(d，J＝6.5Hz，6H)，2.06-2.16(m，1H)，2.59(s，3H)，2.68(d，J＝7.0Hz，2H)，4.91(s，2H)，7.17(s，1H)，7.22(s，1H)，9.00(s br，1H)。

2-氯-N-羟基-6-甲基-异烟碱脒

标题化合物以与N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒类似的方式自2-氯-6-甲基-异烟碱酸乙基酯开始制备；白色固体。LC-MS：t_R＝0.54min，[M+1]⁺＝186.23；¹H NMR(CDCl₃)：δ2.47(s，3H)，6.04(s br，2H)，7.53(s，1H)，7.54(s，1H)，10.1(s，1H)。

2-二甲氨基-N-羟基-6-甲基-异烟碱脒

a)将2，6-二氯异烟腈(2.50g，14.5mmol)存于2NMe₂NH的THF溶液(20mL)中的溶液在密封容器中于105℃下搅拌24h。将深黑色悬浮液冷却至rt，用EA(200mL)稀释，用水(2×50mL)、随后饱和NaHCO₃水溶液(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到粗2-氯-6-二甲氨基-异烟腈；LC-MS：t_R＝0.96min，[M+1]⁺＝182.00。将该物质溶解于二噁烷(100mL)中并添加Pd(dppf)(120mg，0.147mmol)。向该溶液中缓慢添加MeZnCl(5.02g，43.4mmol，存于THF中的2M溶液)。将混合物在rt下搅拌30min，随后在75℃下搅拌16h。将橙色悬浮液冷却至rt，用EA(150mL)稀释并用水(2×50mL)洗涤。通过添加NaOH水溶液来碱化水性洗涤物并过滤出所形成的沉淀。用DCM(3×70mL)萃取滤液。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩。通过MPLC在硅胶上用含有MeOH的EA洗脱对粗产物实施纯化，得到褐色油状2-二甲氨基-6-甲基-异烟腈(699mg)，其缓慢固化；LC-MS：t_R＝0.50min，[M+1]⁺＝162.05。

b)向仲丁醇钾(1.71g，15.2mmol)存于MeOH(50mL)中的冰冷溶液中添加羟胺盐酸盐(905mg，13.02mmol)。将悬浮液搅拌30min，然后添加2-二甲氨基-6-甲基-异烟腈(699mg，4.34mmol)。将混合物回流2h，然后蒸发。将残留物溶解于少量水中并通过MPLC在RP-C₁₈-硅胶上分离，得到褐色树脂状2-二甲氨基-N-羟基-6-甲基-异烟碱脒(284mg)；LC-MS：t_R＝0.60min，[M+1]⁺＝195.42。

2-(乙基-甲基-胺基)-N-羟基-6-甲基-异烟碱脒

标题化合物以与2-二甲氨基-N-羟基-6-甲基-异烟碱脒类似的方式自2，6-二氯-异烟腈开始制备；LC-MS：t_R＝0.45min，[M+1]⁺＝209.10；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.06(t，J＝6.8Hz，3H)，2.29(s，3H)，2.98(s，3H)，3.56(d，J＝6.8Hz，2H)，5.82(s，2H)，6.64(s，1H)，6.69(s，1H)，9.74(s，1H)。

N-羟基-4，6-二甲基-吡啶-2-甲脒

标题化合物以与N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒类似的方式自4，6-二氯-吡啶-2-甲酸甲基酯(自市售酸制备)开始制备；LC-MS：t_R＝0.38min，[M+1]⁺＝166.13。

N-羟基-6-异丁基-5-甲基-烟碱脒

标题化合物以与N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒类似的方式自6-氯-5-甲基-烟碱酸乙基酯开始制备；LC-MS：t_R＝0.55min，[M+1]⁺＝208.04。

2-乙氨基-N-羟基-6-甲基-异烟碱脒

标题化合物以与N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒类似的方式自2-氯-6-甲基-异烟碱酸甲基酯开始制备；LC-MS：t_R＝0.55min，[M+1]⁺＝208.04。

2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

a)将2-氯-6-甲基嘧啶-4-甲酸(4.0g，23.2mmol)及DIPEA(5.95mL，34.8mmol)存于二噁烷(100mL)中的溶液冷却至0℃，然后添加PyBOP(12.06g，23.2mmol)。将混合物搅拌5min并添加0.5M NH₃的二噁烷溶液(93mL，46.4mmol)。持续搅拌48h并随后蒸发反应混合物并通过制备型HPLC(X-Bridge)纯化，得到黄色固体状2-氯-6-甲基-嘧啶-4-甲酸酰胺(1.64g)；LC-MS：t_R＝0.33min。¹H NMR(D₆-DMSO)：δ2.58(s，3H)，7.92(s，1H)，7.99(s br，1H)，8.23(s br，1H)。

b)向2-氯-6-甲基-嘧啶-4-甲酸酰胺(1.60g，9.32mmol)存于DCM(160mL)中的溶液中添加吡啶(3.0mL，37.30mmol)。将混合物冷却至0℃，然后逐份添加三氟乙酸酐(2.59mL，18.64mmol)。在0℃下持续搅拌1h，随后在rt下搅拌6h，然后用水终止反应。用DCM稀释混合物，并分离有机相并用2N HCl水溶液洗涤。将水相用DCM萃取两次并将合并的有机相用水、随后盐水洗涤并最后经MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到黄色固体状2-氯-6-甲基-嘧啶-4-甲腈(1.36g)；LC-MS：t_R＝0.50min。¹H NMR(D₆-DMSO)：δ2.58(s，3H)，8.16(s，1H)。

c)向2-氯-6-甲基-嘧啶-4-甲腈(1.25g，8.14mmol)及三乙胺(3.4mL，24.42mmol)存于乙醇(65mL)中的溶液中添加羟胺盐酸盐(1.13g，16.28mmol)。将反应混合物在rt下搅拌1h并随后蒸发至干燥。将残留物溶解于乙酸乙酯中，用2M Na₂CO₃水溶液、随后盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在HV下蒸发，得到黄色固体状2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒(1.56g)；LC-MS：t_R＝0.34min；[M+1]⁺＝187.41。

N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒

将2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒(100mg，0.536mmol)及丙胺(0.5mL)存于乙腈(2mL)中的溶液在70℃下搅拌过夜。随后经StratoSheres PL-HCO₃ MP SPE 1g，1,8mmol Na₂CO₃滤筒过滤混合物并用2mL乙腈冲洗。将滤液浓缩并在HV下干燥，得到标题化合物(0.12g)；LC-MS：t_R＝0.33min；[M+1]⁺＝210.30。

N-羟基-6-甲基-2-甲氨基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及2N甲胺的THF溶液开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(80mg)；LC-MS：t_R＝0.17min；[M+1]⁺＝182.40。

2-乙氨基-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及2N乙胺的THF溶液开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(117mg)；LC-MS：t_R＝0.25min；[M+1]⁺＝196.40。

N-羟基-2-异丙氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及异丙胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(179mg)；LC-MS：t_R＝0.32min；[M+1]⁺＝210.30。

N-羟基-2-异丁氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及异丁胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(127mg)；LC-MS：t_R＝0.39min；[M+1]⁺＝224.30。

2-二甲氨基-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及2M二甲胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(112mg)；LC-MS：t_R＝0.28min；[M+1]⁺＝196.30。

2-(乙基-甲基-胺基)-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及N-乙基甲基胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(139mg)；LC-MS：t_R＝0.34min；[M+1]⁺＝210.30。

N-羟基-6-甲基-2-(甲基-丙基-胺基)-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及N-乙基丙基胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(141mg)；LC-MS：t_R＝0.42min；[M+1]⁺＝224.30。

N-羟基-2-(异丙基-甲基-胺基)-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及N-异丙基甲基胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(154mg)；LC-MS：t_R＝0.39min；[M+1]⁺＝224.30。

N-羟基-2-(异丁基-甲基-胺基)-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及N-异丁基甲基胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(153mg)；LC-MS：t_R＝0.49min；[M+1]⁺＝238.40。

2-二乙氨基-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及二乙胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(125mg)；LC-MS：t_R＝0.41min；[M+1]⁺＝224.30。

2-(乙基-丙基-胺基)-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及N-乙基丙基胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(128mg)；LC-MS：t_R＝0.50min；[M+1]⁺＝238.30。

2-(乙基-异丙基-胺基)-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及N-乙基异丙基胺开始以与N-羟基-6-甲基-2-丙氨基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(128mg)；LC-MS：t_R＝0.48min；[M+1]⁺＝238.30。

N-羟基-2-甲氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

将氢化钠(54mg，1.34mmol)添加至2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒(100mg，0.536mmol)存于甲醇中的溶液中。将反应混合物在70℃下搅拌过夜，随后用水稀释并用EA萃取(两次)。将有机萃取物用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，随后过滤并蒸发，得到黄色固体状标题化合物(74mg)；LC-MS：t_R＝0.27min；[M+1]⁺＝183.40。

2-乙氧基-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及乙醇开始以与N-羟基-2-甲氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(34mg)；LC-MS：t_R＝0.36min；[M+1]⁺＝197.00。

N-羟基-2-异丙氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及异丙醇开始以与N-羟基-2-甲氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(26mg)；LC-MS：t_R＝0.43min；[M+1]⁺＝211.30。

N-羟基-2-异丁氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒

标题化合物系自2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒及异丁醇开始以与N-羟基-2-甲氧基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒类似的方式获得(26mg)；LC-MS：t_R＝0.53min；[M+1]⁺＝225.30。

2，6-二甲基-异烟碱酸酰肼的盐酸盐

a)向2，6-二甲基-异烟碱酸HCl盐(500mg，2.66mmol)、肼基甲酸仲丁基酯(359mg，2.72mmol)及三乙胺(0.93mL，6.66mmol)存于DMF中的溶液中添加TBTU(1.05g，3.28mmol)。将反应混合物在rt下搅拌5h，并随后用1M NaOH(41mL)稀释并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发，得到黄色油状N-(2，6-二甲基-吡啶-4-羰基)-肼甲酸仲丁基酯；LC-MS：t_R＝0.56min；[M+1]⁺＝265.98。*

b)将N-(2，6-二甲基-吡啶-4-羰基)-肼甲酸仲丁基酯溶解于二噁烷(10mL)中并冷却至0℃，然后添加4N HCl的二噁烷溶液(5mL)。将反应混合物在rt下搅拌18h并随后蒸发。将白色固体在二乙基醚中超音处理，过滤并在HV下干燥，得到呈HCl盐形式的2，6-二甲基-异烟碱酸酰肼(0.70g)；LC-MS：t_R＝0.42min；[M+1]⁺＝165.95。*

N-羟基-2-甲基-异烟碱脒

a)将2-甲基-吡啶-4-甲酸(1.0g，7.29mmol)存于甲醇(50mL)及H₂SO₄(0.5mL)中的悬浮液加热至70℃。固体物质溶解并在70℃下持续搅拌18h。将混合物冷却至rt，过滤，并蒸发滤液。将剩余固体用二乙基醚洗涤并干燥，得到2-甲基-吡啶-4-甲酸甲基酯；LC-MS：t_R＝0.39min，[M+1]⁺＝152.05。将该物质溶解于7N NH₃的甲醇溶液(25mL)中并将混合物在密封小瓶中于60℃下搅拌20h，然后过滤。蒸发滤液，得到褐色固体状粗2-甲基-异烟酰胺(2.12g)。向该物质存于DCM(25mL)中的溶液中添加吡啶(5.24g，54.0mmol)。将混合物冷却至0℃，然后逐份添加TFAA(8.10g，38.6mmol)。在0℃下持续搅拌2h，然后用水终止反应。用D C M稀释混合物，并分离有机相并用5％柠檬酸水溶液、随后饱和NaHCO₃水溶液洗涤。洗涤物用DCM反萃取两次。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥、过滤并浓缩。在制备型TLC板上用庚烷∶EA 4∶1对粗产物实施纯化得到2-甲基-异烟腈(330mg)；LC-MS：t_R＝0.55min，[M+1]⁺＝119.13。

b)向2-甲基-异烟腈(330mg，2.79mmol)存于甲醇(12mL)中的溶液中添加羟胺盐酸盐(388mg，5.59mmol)及NaHCO₃(469mg，5.59mmol)。将混合物在密封小瓶中于60℃下搅拌16h，然后蒸发溶剂。干燥残留物得到N-羟基-2-甲基-异烟碱脒(550mg)；LC-MS：t_R＝0.55min，[M+1]⁺＝152.25。

N-羟基-5，6-二甲基-吡啶-2-甲脒

a)将二甲基锌(4.58g，48.0mmol)添加至5-溴-6-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯(11.7g，48.0mmol)及Pd(dppf)(392mg，0.48mmol)存于二噁烷(40mL)中的溶液中。混合物升温并在rt下搅拌1h。添加另一份二甲基锌(4.58g，48.0mmol)。将混合物在100℃下搅拌2h，随后在80℃下搅拌72h，然后将其冷却至rt，并用EA(250mL)及冰水(150mL)稀释。用2N HCl水溶液酸化混合物，分离有机相并用EA(3×100mL)及DCM(2×75mL)萃取水相。将合并的有机萃取物经Na₂SO₄干燥、过滤并浓缩。通过MPLC在硅胶(庚烷∶EA梯度)上对粗产物实施纯化得到褐色油状5，6-二甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯(434mg)；LC-MS：t_R＝0.61min，[M+1]⁺＝179.98，¹H NMR(CDCl₃)：δ1.45(t，J＝7.0Hz，3H)，2.37(s，3H)，2.62(s，3H)，4.48(q，J＝7.3Hz，2H)，7.55(d，J＝7.8Hz，1H)，7.90(d，J＝7.8Hz，1H)。

b)标题化合物系自上文5，6-二甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯以与N-羟基-2-甲基-异烟碱脒类似的方式制备；LC-MS：t_R＝0.49min，[M+1]⁺＝166.03。

5-乙基-N-羟基-6-甲基-吡啶-2-甲脒

a)将二乙基锌(9.78g，79.2mmol)添加至5-溴-6-甲基-吡啶-2-甲酸异丙基酯(14.6g，56.5mmol，以与5-溴-6-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯类似的方式制备)及Pd(dppf)(461mg，0.565mmol)存于二噁烷(250mL)中的溶液中。将混合物在80℃下搅拌18h，然后将其冷却至rt，用冰水(150mL)及EA(250mL)稀释并用2N HCl水溶液酸化。分离有机层并用EA(3×100mL)及DCM(4×100mL)萃取水相。通过添加饱和NaHCO₃水溶液来中和水性并再次用DCM(4×75mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥、过滤并浓缩。通过MPLC在硅胶上用存于庚烷中的EA梯度洗脱对粗产物实施纯化，得到浅黄色油状5-乙基-6-甲基-吡啶-2-甲酸异丙基酯(7.08g)；LC-MS：t_R＝0.77min，[M+1]⁺＝207.99。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.25(t，J＝7.5Hz，3H)，1.41(d，J＝6.3Hz，6H)，2.63(s，3H)，2.70(q，J＝7.5Hz，2H)，5.30(hept，J＝6.3Hz，1H)，7.54(d，J＝8.0H z，1H)，7.87(d，J＝8.0Hz，1H)。

b)标题化合物系自上文5-乙基-6-甲基-吡啶-2-甲酸异丙基酯以与N-羟基-2-羟基甲基-6-甲基-异烟碱脒类似的方式制备；LC-MS：t_R＝0.49min，[M+1]⁺＝180.01；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.24(t，J＝7.5Hz，3H)，2.56(s，3H)，2.67(q，J＝7.5Hz，2H)，5.77(s br，2H)，7.46(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(d，J＝7.8Hz，1H)，8.25(s br，1H)。

N-羟基-5-异丁基-6-甲基-吡啶-2-甲脒

标题化合物系自5-异丁基-6-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯以与N-羟基-2-甲基-异烟碱脒类似的方式制备；LC-MS：t_R＝0.72min，[M+1]⁺＝208.52；¹H NMR(CD₃OD)：δ0.96(d，J＝6.5Hz，6H)，1.86-1.97(m，1H)，2.54-2.58(m，5H)，7.49(d，J＝8.0Hz，1H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)。

N-羟基-4，5-二甲基-吡啶-2-甲脒

a)将三甲基环硼氧烷(2.84g，22.6mmol)、Cs₂CO₃(9.58g，29.4mmol)及三-仲丁基膦(183mg，905μmol)添加至5-溴-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯(5.52g，22.6mmol)存于二噁烷(100mL)中的溶液中。将混合物脱气并置于氩气中，然后添加Pd₂(dba)₃(414mg，452μmol)。将灰色悬浮液在100℃下搅拌18h。过滤混合物并向滤液中添加另一份三甲基环硼氧烷(2.84g，22.6mmol)、Cs₂CO₃(9.58g，29.4mmol)、Pd₂(dba)₃(414mg，452μmol)及三-仲丁基膦(183mg，905μmol)。将混合物于100℃下搅拌72h，然后再次将其过滤。将滤液浓缩，用DCM稀释并用饱和Na₂CO₃溶液(2×25mL)、随后盐水(2×25mL)洗涤。将有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤并浓缩，得到粗5，6-二甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯；LC-MS：t_R＝0.57min，[M+1]⁺＝166.04。

b)标题化合物系自上文5，6-二甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯以与N-羟基-2-甲基-异烟碱脒类似的方式制备；LC-MS：t_R＝0.48min，[M+1]⁺＝166.05；¹H NMR(CD₃OD)：δ2.31(s，3H)，2.33(s，3H)，7.66(s，1H)，8.29(s，1H)。

5-乙基-N-羟基-4-甲基-吡啶-2-甲脒

标题化合物系自5-溴-4-甲基-吡啶-2-甲酸乙基酯以与5-乙基-N-羟基-6-甲基-吡啶-2-甲脒类似的方式制备；LC-MS：t_R＝0.54min，[M+1]⁺＝180.01；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.25(t，J＝7.5Hz，3H)，2.35(s，3H)，2.69(q，J＝7.5Hz，2H)，5.77(s br，2H)，6.44(s br，1H)，7.75(s，1H)，8.32(s，1H)。

N-羟基-6-异丁基-4-甲基-吡啶-2-甲脒

标题化合物系自6-异丁基-4-甲基-吡啶-2-甲酸以与N-羟基-2-甲基-异烟碱脒类似的方式制备；LC-MS：t_R＝0.63min，[M+1]⁺＝208.29。

N-羟基-2-甲氧基-6-甲基-异烟碱脒

a)将硫酸(1mL)添加至2-氯-6-甲氧基-异烟碱酸(4.16g，22.2mmol)存于乙醇(20mL)中的悬浮液中。将澄清溶液在70℃下搅拌18h。通过添加饱和NaHCO₃水溶液中和混合物并随后用EA(3×250mL)萃取三次。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥，过滤，浓缩并干燥，得到白色固体状2-氯□6-甲氧基-异烟碱酸乙基酯(4.32g)；LC-MS：t_R＝1.00min，[M+1]⁺＝215.89。

b)在氩气中，将二甲基锌(14.26g，149mmol，124mL1.2M存于甲苯中的溶液)逐滴添加至2-氯-6-甲氧基-异烟碱酸乙基酯(5.37g，24.9mmol)及Pd(dppf)(203mg，0.249mmol)存于二噁烷(120mL)中的溶液中。将混合物加热至75℃并搅拌18h，然后再次将其冷却至rt。通过小心地添加水终止反应。将混合物进一步用水稀释，经硅藻土过滤并用EA(2×250mL)萃取滤液。将合并的有机萃取物经MgSO₄干燥、过滤并浓缩。通过CC在硅胶上用庚烷∶EA 4∶1洗脱对粗产物实施纯化得到无色油状2-甲氧基-6-甲基-异烟碱酸乙基酯(4.10g)；LC-MS：t_R＝0.92min，[M+1]⁺＝195.93。¹H NMR(CDCl₃)：δ1.41(t，J＝7.3Hz，3H)，2.52(s，3H)，3.97(s，3H)，4.39(q，J＝7.3Hz，2H)，7.12(s，1H)，7.28(s，1H)。

c)标题化合物以与N-羟基-2-甲基-烟碱脒类似的方式自上文2-甲氧基-6-甲基-异烟碱酸乙基制备；LC-MS：t_R＝0.43min，[M+1]⁺＝181.96。¹H NMR(CDCl₃)：δ2.49(s，3H)，3.95(s，3H)，4.89(s，2H)，6.75(s，1H)，6.98(s，1H)，8.03(s br，1H)。

制备5-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物的通用方法

向合适嘧啶甲酸(1当量)及DIPEA(2当量)存于DMF中的溶液中添加HOBt(1.2当量)及EDC(1.1当量)或TBTU(1.2当量)。将混合物于rt下搅拌15min。添加合适N-羟基吡啶-甲脒(1当量)并在rt下持续搅拌1-8h。酰胺键结的形成系通过LC-MS来检测。转化完成后，将反应物加热至85℃并搅拌24-48h。噁二唑的环化系通过LC-MS来检测。蒸发混合物并通过硅胶上的CC、制备型TLC板上的层析或通过HPLC对粗产物实施纯化，得到期望的5-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物，产率为22-82％。

实例1至57

遵循制备5-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物的通用方法来制备以下实例：

实例8：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ1.17(t，J＝7.0Hz，3H)，2.42(s，3H)，2.56(s，6H)，3.38(m，2H)，7.30(s，1H)，7.68(m，3H)。

实例15：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.92(t，J＝7.0Hz，3H)，1.59(m，2H)，2.42(s，3H)，2.56(s，6H)，3.30(m，2H)，7.30(s，1H)，7.69(m，3H)。

实例21：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ1.19(d，J＝6.3Hz，6H)，2.42(s，3H)，2.56(s，6H)，4.16(m，1H)，7.29(s，1H)，7.58(s br，1H)，7.68(s，2H)。

实例51：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.90(d，J＝6.5Hz，6H)，2.12(m，1H)，2.44(s，3H)，2.56(s，6H)，3.19(s，3H)，3.32(s，2H)，3.53(d，J＝7.3Hz，2H)，7.31(s，1H)，7.68(s，2H)。

实例58至78

实例79

{4-[3-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-乙基-嘧啶-2-基}-乙基-胺

标题化合物系自6-乙基-2-乙氨基-嘧啶-4-甲酸及N-羟基-2，6-二甲基-异烟碱脒使用通用程序来制备；LC-MS：t_R＝0.75min，[M+1]⁺＝325.16；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.30(t，J＝7.3Hz，3H)，1.36(t，J＝7.8Hz，3H)，2.65(s，6H)，2.77(q，J＝7.3Hz，2H)，3.60(m，2H)，5.36(sbr，1H)，7.32(s，1H)，7.75(s，2H)。

实例80

{4-[3-(4，6-二甲基-吡啶-2-基)-[1，2，4]噁二唑-5-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-丙基-胺

标题化合物系自2-丙氨基-6-甲基-嘧啶-4-甲酸及N-羟基-4，6-二甲基-吡啶-2-甲脒使用通用程序来制备；LC-MS：t_R＝0.96min，[M+1]⁺＝325.19；¹H NMR(CDCl₃)：δ1.01(t，J＝7.5Hz，3H)，1.67(m，2H)，2.42(s，3H)，)，2.47(s，3H)，2.66(s，3H)，3.50(m，2H)，5.53(m，1H)，7.15(s，1H)，7.38(s，1H)，7.90(s，1H)。

制备3-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物的通用方法

方法A

向合适吡啶甲酸(1当量)及DIPEA(2当量)存于DMF中的溶液中添加HOBt(1.2当量)及EDC(1.1当量)或TBTU(1.2当量)。将混合物于rt下搅拌15min。添加2-氯-N-羟基-6-甲基-嘧啶-4-甲脒(1当量)并在rt下持续搅拌1-8h。酰胺键结的形成通过LC-MS来检测。转化完成后，将反应物加热至85℃并搅拌24-48h。噁二唑的环化系通过LC-MS来检测。蒸发混合物并通过硅胶上的CC、制备型TLC板上的层析或通过HPLC对粗产物实施纯化，得到期望的氯嘧啶基-吡啶-[1，2，4]噁二唑，产率为15％。随后将化合物溶解于乙腈中并在介于rt至60℃间的温度下与过量合适胺或醇反应(对于醇的反应使用NaH)。蒸发混合物并通过硅胶上的CC、制备型TLC板上的层析或通过HPLC对粗产物实施纯化以得到期望化合物，产率为22-74％。

方法B

向合适吡啶甲酸(1当量)及DIPEA(2当量)存于DMF中的溶液中添加HOBt(1.2当量)及EDC(1.1当量)或TBTU(1.2当量)。将混合物于rt下搅拌15min。添加合适N-羟基嘧啶-甲脒(1当量)并在rt下持续搅拌1-8h。酰胺键结的形成通过LC-MS来检测。转化完成后，将反应物加热至85℃并搅拌24-48h。噁二唑的环化系通过LC-MS来检测。蒸发混合物并通过硅胶上的CC、制备型TLC板上的层析或通过HPLC对粗产物实施纯化，得到期望的3-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物。

实例81至98

使用方法A来制备以下3-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物：

实例82：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.93(d，J＝6.8Hz，6H)，1.16(t，J＝7.3Hz，3H)，2.11(m，1H)，2.40(s，3H)，2.60(s，3H)，2.72(d，J＝7.3Hz，2H)，3.37(m，2H)，7.18(s，1H)，7.52(s br，1H)，7.72(s，1H)，7.80(s，1H)。

实例83：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.92(m，9H)，1.58(m，2H)，2.11(m，1H)，2.40(s，3H)，2.60(s，3H)，2.73(d，J＝7.3Hz，2H)，3.31(m，2H)，7.17(s，1H)，7.53(sbr，1H)，7.72(s，1H)，7.79(s，1H)。

实例85：¹H NMR(D₇-DMF)：δ1.34(m，12H)，2.33(m，1H)，2.53(m，1H)，2.81(s，3H)，3.02(s，3H)，3.14(d，J＝7.0Hz，2H)，3.59(t，J＝6.3H z，2H)，7.58(s，1H)，8.00(s br，1H)，8.14(s，1H)，8.21(s，1H)。

实例87：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.93(d，J＝6.5Hz，6H)，1.15(t，J＝7.0H z，3H)，2.12(m，1H)，2.43(s，3H)，2.61(s，3H)，2.73(d，J＝7.0Hz，2H)，3.16(s，3H)，3.73(q，J＝7.0Hz，2H)，7.19(s，1H)，7.73(s，1H)，7.80(s，1H)。

实例89：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.93(d，J＝6.5Hz，6H)，1.18(d，J＝6.8Hz，6H)，2.12(m，1H)，2.43(s，3H)，2.61(s，3H)，2.73(d，J＝7.3Hz，2H)，3.02(s，3H)，5.14(m，1H)，7.18(s，1H)，7.73(s，1H)，7.80(s，1H)。

实例91：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.93(d，J＝6.8Hz，6H)，1.17(t，J＝6.8Hz，6H)，2.12(m，1H)，2.42(s，3H)，2.61(s，3H)，2.73(d，J＝7.3Hz，2H)，3.67(q，J＝7.3Hz，4H)，7.17(s，1H)，7.72(s，1H)，7.79(s，1H)。

实例94：¹H NMR(D₆-DMSO)：δ0.93(d，J＝6.5Hz，6H)，2.12(m，1H)，2.57(s，3H)，2.61(s，3H)，2.73(d，J＝7.3Hz，2H)，4.01(s，3H)，7.75(s，1H)，7.77(s，1H)，7.79(s，1H)。

制备2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噁二唑衍生物的通用方法

向合适嘧啶甲酸(1当量)及DIPEA(3当量)存于DMF中的溶液中添加合适吡啶甲酸酰肼(2当量)，随后添加TBTU(1.5当量)。将混合物在rt下搅拌3-12h。酰肼键结的形成系通过LC-MS来检测。随后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用NaHCO₃、随后盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残留物溶解于DCM中。添加吡啶(5当量)并将反应混合物冷却至0℃，然后添加TFAA(1.1当量)且随后在rt下搅拌。噁二唑的环化通过LC-MS来检测。向混合物中添加水，收集有机相，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发并通过硅胶上的CC、制备型TLC板上的层析或通过HPLC对粗产物实施纯化，得到期望的2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噁二唑衍生物。

实例99及100

使用上文程序来制备2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噁二唑衍生物：

实例99：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.05(t，J＝7.3Hz，3H)，1.71(m，2H)，2.49(s，3H)，2.67(s，6H)，3.52(m，2H)，5.33(s b r，1H)，7.31(s，1H)，7.73(s，2H)。

实例100：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.31(d，J＝6.5Hz，6H)，2.48(s，3H)，2.67(s，6H)，4.32(m，1H)，5.20(d，J＝6.8Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.73(s，2H)。

实例101至137

实例113：¹H NMR(CDCl₃)：δ0.58(m，2H)，0.88(m，2H)，2.52(s，3H)，2.63(s，6H)，2.93(m，1H)，5.62(s，1H)，7.35(s，1H)，7.71(s，2H)。

实例117：¹H NMR(CDCl₃)：δ0.32(m，2H)，0.58(m，2H)，1.13(m，1H)，1.37(t，J＝7.5Hz，3H)，2.51(m，3H)，2.66(s，3H)，2.92(q，J＝7.5Hz，2H)，3.41(t，J＝6.3Hz，2H)，5.56(s br，1H)，7.33(s，1H)，7.76(s，2H)。

实例131：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.24(t，J＝7.0Hz，6H)，1.30(t，J＝7.3Hz，3H)，2.46(s，3H)，2.47(s，3H)，3.38(m，2H)，3.74(q，J＝7.0Hz，4H)，4.68(t，J＝5.3Hz，1H)，6.94(s，1H)，7.19(s，1H)，7.21(s，1H)。

实例132：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.47(d，J＝6.3Hz，6H)，2.63(s，3H)，2.66(s，6H)，5.48(m，1H)，7.70(s，1H)，7.75(s，2H)。

实例136：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.31(t，J＝7.0Hz，3H)，1.46(d，J＝6.0Hz，6H)，2.47(s，3H)，2.62(s，3H)，3.38(m，2H)，4.68(t，J＝5.0Hz，1H)，5.48(m，1H)，6.94(s，1H)，7.19(s，1H)，7.69(s，1H)。

实例137：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.48(d，J＝0.5Hz，6H)，2.58(s，3H)，2.63(s，3H)，4.02(s，3H)，5.48(m，1H)，7.33(d，J＝0.5Hz，1H)，7.50(s，1H)，7.70(s，1H)。

实例138至150

实例139：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.04(t，J＝7.3Hz，3H)，1.84(m，2H)，2.66-2.74(m，8H)，3.32(s，6H)，7.24(s，1H)，7.77(s，2H)。

实例140：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.05(t，J＝7.3Hz，3H)，1.88(m，2H)，2.67(s，6H)，2.86(m，2H)，4.17(s，3H)，7.73(s，1H)，7.76(s，2H)。

实例144：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.03(d，J＝6.8Hz，6H)，2.28(m，1H)，2.67(s，6H)，2.75(d，J＝7.3Hz，2H)，4.17(s，3H)，7.71(s，1H)，7.76(s，2H)。

实例149：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.36(t，J＝7.5Hz，3H)，2.66(s，6H)，2.77(q，J＝7.5Hz，2H)，3.32(s，6H)，7.25(s，1H)，7.75(s，2H)。

实例151至159

实例151：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.28(t，J＝7.3Hz，3H)，2.42(s，3H)，2.47(s，3H)，2.66(s，3H)，3.58(m，2H)，5.58(m，1H)，7.15(s，1H)，7.38(s，1H)，7.90(s，1H)。

实例153：¹H NMR(CDCl₃)：δ0.97(d，J＝6.5Hz，6H)，1.28(t，J＝7.0Hz，3H)，2.21(m，1H)，2.43(s，3H)，2.48(s，3H)，2.77(d，J＝7.3H z，2H)，3.57(m，2H)，5.44(t，J＝5.0Hz，1H)，7.10(s，1H)，7.37(s，1H)，7.91(s，1H)。

实例156：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.30(m，9H)，2.48(s，3H)，2.69(s，3H)，2.75(q，J＝7.5Hz，2H)，4.32(m，1H)，5.25(m，1H)，7.38(s，1H)，7.63(d，J＝7.8Hz，1H)，8.04(d，J＝7.8Hz，1H)。

实例160至205

遵循制备3-嘧啶-4-基-[1，2，4]噁二唑衍生物的方法B来制备以下实例：

实例206至237

实例238至255

实例256至260

遵循制备2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噁二唑衍生物的通用方法来制备以下实例：

实例256：¹H NMR(CDC1₃)：δ2.49(s，3H)，2.68(s，6H)，3.32(s，6H)，7.25(s，1H)，7.72(s，2H)。

实例259：¹H NMR(CDCl₃)：δ0.99(d，J＝6.5Hz，6H)，2.19(m，1H)，2.49(s，3H)，2.68(s，3H)，2.76(d，J＝7.3Hz，2H)，3.32(s，6H)，7.25(s，1H)，7.67(s，1H)，7.72(s，1H)。

制备2-嘧啶-4-基-[1，3，4]噻二唑衍生物的通用方法

向合适嘧啶甲酸(1当量)及DIPEA(3当量)存于DMF中的溶液中添加合适吡啶甲酸酰肼(2当量)，随后添加TBTU(1.5当量)。将混合物在rt下搅拌3-12h。酰肼键结的形成系通过LC-MS来检测。随后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用NaHCO₃、随后盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残留物溶解于THF中。添加Lawesson试剂(2当量)并将反应混合物在110℃下于微波条件下加热40min。噻二唑的环化通过LC-MS来检测。用DCM稀释反应混合物并将有机溶液用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发并通过硅胶上的CC、制备型TLC板上的层析或通过HPLC对粗产物实施纯化，得到期望的5-嘧啶-4-基-[1，3，4]噻二唑衍生物，产率为6-26％。

实例261至265

遵循制备5-嘧啶-4-基-[1，3，4]噻二唑衍生物的通用方法来制备以下实例：

实例263：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.04(d，J＝6.8Hz，6H)，1.97(m，1H)，2.48(s，3H)，2.66(s，6H)，3.35(t，J＝6.3Hz，2H)，5.36(m，1H)，7.44(s，1H)，7.61(s，2H)。

实例265：¹H NMR(CD₃OD)：δ1.46(d，J＝6.3Hz，6H)，2.59(s，3H)，2.62(s，6H)，5.39(m，1H)，7.74(s，2H)，7.81(s，1H)。

实例266至268

遵循制备5-嘧啶-4-基-[1，3，4]噁二唑衍生物的通用方法来制备以下实例：

实例266：¹H NMR(CDCl₃)：δ1.00(d，J＝6.8Hz，6H)，1.30(d，J＝6.5Hz，6H)，2.24(m，1H)，2.44(s，3H)，2.50(s，3H)，2.79(d，J＝7.3H z，2H)，4.32(m，1H)，5.31(m，1H)，7.31(s，1H)，8.23(s，1H)，9.18(d，J＝1.8Hz，1H)。

实例269：GTPγS分析以测定EC₅₀值

GTPγS结合分析系于96孔微量滴定板(Nunc，442587)中以200μl的最终体积使用表现重组人类S1P1受体的CHO细胞的膜制备物来实施。分析条件为20mMHepes(Fluka，54461)、100mM NaCl(Fluka，71378)、5mM MgCl₂(Fluka，63064)、0.1％BSA(Calbiochem，126609)、1μM GDP(Sigma，G-7127)、2.5％DMSO(Fluka，41644)、50pM ³⁵S-GTPγS(AmershamBiosciences，SJ1320)。pH值为7.4。将测试化合物溶解并稀释于100％DMSO中并在rt下在150μl上文分析缓冲液中于不存在³⁵S-GTPγS下预孵育30min。在添加50μl³⁵S-GTPγS后，将分析物在rt下孵育1h。该分析通过以下操作来终止：使用得自Packard Biosciences的细胞收获器将反应混合物转移至MultiScreen板(Millipore，MAHFC1H60)中，并将该板用冰冷的10mMNa₂HPO₄/NaH₂PO₄(70％/30％)进行洗涤，干燥，于底部密封，并添加25μl MicroScint20(Packard Biosciences，序号6013621)，然后于顶部密封。用自PackardBiosciences购得的TopCount测量膜结合的³⁵S-GTPγS。

EC₅₀系可诱导50％的最大特异性³⁵S-GTPγS结合的激动剂浓度。特异性结合通过最大结合减去非特异性结合来测定。最大结合为在10μM S1P存在下结合至MultiScreen板的cpm的量。非特异性结合为在该分析中于不存在激动剂下的结合量。

实例58、70、78、180、224、227、229、231、232、237、240、241、242、245、246、247、248、249、250、253、254、255及257显示EC₅₀值大于10μM。所有其它例示性化合物的EC₅₀值在0.5至8887nM范围内，平均值为1079nM。根据上文所述方法测定的一些式(I)化合物的激动活性展示于表1中。

表1：

实例化合物	EC₅₀[nM]
		9	21.0

12	27.0
		21	1.6
25	46
		27	8.0
51	7.8
		60	126
79	1.2
		81	30
94	27
		100	128
101	11
		109	1.3
116	2.1
		118	186
119	30
		126	39
132	44
		135	142
138	9.8
		142	26
147	0.7

149	63
		155	20
159	53
		162	5890
166	2150
		168	38
174	34
		177	11
178	11
		182	395
185	22
		187	31
188	560
		196	241
200	94
		201	1140
205	3040
		206	5778
211	795
		214	720
220	231

223	4160
		228	3220
233	190
		238	402
243	318
		251	201
261	331
		266	161
268	152

实例270：活体内功效的评价

式(I)化合物的功效通过将3至30mg/kg式(I)化合物口服施用至血压正常的雄性Wistar大鼠后测量循环的淋巴细胞来评价。将动物圈养在具有12小时明/暗循环的气候受控条件下，并留出通往正常大鼠饲料及饮用水的自由通道。于药物施用前及施用后3、6及24h采集血液。使用Advia血液分析系统(Bayer Diagnostics，Zürich，Switzerland)对全血进行血液分析。

所有数据皆以平均值±SEM表示。使用Statistica(StatSoft)及Student-Newman-Keuls程序通过方差分析(ANOVA)实施统计分析以进行多重比较。当p＜0.05时，拒绝虚无假设。

作为实例，表2显示与一组仅用媒剂处理的动物相比向血压正常的雄性Wistar大鼠口服施用10mg/kg一些式(I)化合物6h后对淋巴细胞计数的影响。

表2：

实例化合物	淋巴细胞计数
		8	-67±2％
15	-69±1％
		21	-71±2％

51	-67±3％
		79	-70±2％
110	-67±2％
		169	-65±3％

Claims

1.一种式(I)化合物，

式(I)

其中

A代表

其中星号表示连接至式(I)的嘧啶基团的键结；

R²代表C_1-2-烷基或C_3-4-烷基；且

吡啶¹代表

其中该等星号表示用以将该吡啶环与式(I)的环A连结的键结；

其中该星号表示用以将该吡啶环与式(I)的该环A连结的键结；

R³代表C_1-4-烷基、C_1-3-烷氧基或NR^3aR^3b；

R^3a代表C_1-2-烷基；

R^3b代表氢或甲基；且

R⁴代表氢、氯或C_1-2-烷基；

R⁵代表C_1-4-烷基、C_1-3-烷氧基或NR^5aR^5b；

R^5a代表C_1-3-烷基；

R^5b代表氢或C_1-2-烷基；且

R⁶代表C_1-2-烷基；

R⁷代表C_1-4-烷基，且R⁸代表C_1-2-烷基；或

R⁷代表C_1-2-烷基，且R⁸代表C_1-4-烷基；

R⁹代表C_1-2-烷基；且

R¹⁰代表C_1-4-烷基；

且

R¹¹代表C_1-4-烷基；且

R¹²代表C_1-2-烷基；

或其盐。

2.如权利要求1的化合物，其中吡啶¹代表

其中该星号表示用以将该吡啶环与式(I)的该环A连结的键结。

3.如权利要求1或2的化合物，其中A代表

其中该星号表示连接至式(I)的该嘧啶基团的键结；或其盐。

4.如权利要求1或2的化合物，其中A代表

其中该星号表示连接至式(I)的该嘧啶基团的键结；或其盐。

5.如权利要求1至4中任一项的化合物，其中R¹代表C_1-4-烷氨基或N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基；或其盐。

6.如权利要求1至4中任一项的化合物，其中R¹代表C_1-4-烷氨基；或其盐。

7.如权利要求1至6中任一项的化合物，其中R²代表C_1-2-烷基；或其盐。

8.如权利要求1至7中任一项的化合物，其中吡啶¹代表

其中该星号表示用以将该吡啶环与式(I)的该环A连结的键结；

R³代表C_1-4-烷基或NR^3aR^3b；

R^3a代表C_1-2-烷基；

R^3b代表氢或甲基；且

R⁴代表甲基；

或其盐。

9.如权利要求1、2或8的化合物，其中

A代表

其中该星号表示连接至式(I)的该嘧啶基团的键结；

R²代表甲基；

或其盐。

10.如权利要求1、2或8的化合物，其中

A代表

其中该星号表示连接至式(I)的该嘧啶基团的键结；

R¹代表C_3-4-烷氨基或N-C_3-4-烷基-N-C_1-2-烷基-胺基；且

R²代表甲基；

或其盐。

11.如权利要求1至7及9至10中任一项的化合物，其中

吡啶¹代表

其中该星号表示用以将该吡啶环与式(I)的该环A连结的键结；

R³代表C_3-4-烷基；且

R⁴代表C_1-2-烷基；

或其盐。

12.如权利要求1至7及9至10中任一项的化合物，其中

吡啶¹代表

其中该星号表示用以将该吡啶环与式(I)的该环A连结的键结；

R³代表CH₃；且

R⁴代表C_1-2-烷基；

或其盐。

13.如权利要求1或2的化合物，其中

A代表

其中该星号表示连接至式(I)的该嘧啶基团的键结；

R¹代表C_1-4-烷氨基或N-C_1-4-烷基-N-C_1-3-烷氨基；

R²代表C_1-2-烷基；且

吡啶¹代表

其中该星号表示用以将该吡啶环与式(I)的该环A连结的键结；

R³代表甲基、乙基、异丙基、甲氨基或二甲氨基；

且

R⁴代表甲基或氯；

或其盐。

14.如权利要求1或2的化合物，其选自由下列组成的群：

{4-[5-(2-异丁基-6-甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲氧基-6-甲基-嘧啶；

或该化合物的盐。

15.如权利要求1或2的化合物，其选自由下列组成的群：

{4-[5-(2，6-二甲基-吡啶-4-基)-[1，2，4]噁二唑-3-基]-6-甲基-嘧啶-2-基}-乙基-异丙基-胺；

或该化合物的盐。

16.一种药物组合物，其包含如权利要求1至15中任一项的化合物或其医药上可接受的盐及医药上可接受的载体。

17.如权利要求1至15中任一项的化合物或其医药上可接受的盐或如权利要求16的药物组合物，其用作药剂。

18.一种如权利要求1至15中任一项的化合物或其医药上可接受的盐的用途，其用以制备用于预防或治疗与激活的免疫系统有关的疾病或病症的药物组合物。

19.如权利要求18的用途，其用于预防或治疗选自由下列组成的群的疾病或病症：诸如肾、肝、心脏、肺、胰脏、角膜及皮肤等移植器官的排斥反应；由干细胞移植引起的移植物抗宿主疾病；自身免疫综合症，包括类风湿性关节炎、多发性硬化、诸如克隆氏病及溃疡性结肠炎等炎性肠疾病、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、诸如桥本氏甲状腺炎等甲状腺炎、葡萄膜视网膜炎；诸如鼻炎、结膜炎、皮炎等特应性疾病；哮喘；I型糖尿病；感染后自身免疫疾病，包括风湿热及感染后肾小球肾炎；实体癌症及肿瘤转移。