ES2349322T3 - Sales de 3,7-diamino-10h-fenotiazina y su uso. - Google Patents

Sales de 3,7-diamino-10h-fenotiazina y su uso. Download PDF

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Abstract

Un compuesto seleccionado de compuestos de la siguiente fórmula y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos: en la que: cada uno de R 1 y R 9 se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de R 3NA y R 3NB se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de R 7NA y R 7NB se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de HX 1 y HX 2 es independientemente un ácido prótico.

Description

SOLICITUD RELACIONADA [0001] Esta solicitud está relacionada con la solicitud de patente de Estados Unidos número 60/786.690 presentada el 29 de marzo de 2006; cuyo contenido se incorpora a este documento por referencia en su totalidad. CAMPO TÉCNICO [0002] Esta invención se refiere generalmente al campo de los compuestos de fenotiazina, y más particularmente a ciertos compuestos de fenotiazina reducidos de manera estable, específicamente a ciertos compuestos de 3,7-diamino-10H-fenotiazina (DAPTZ), por ejemplo, bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10Hfenotiazina-3,7-diamina y bis(yoduro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10Hfenotiazina-3,7-diamina. Estos compuestos son útiles como fármacos, por ejemplo, en el tratamiento de tauopatías tales como enfermedad de Alzheimer, y también como profármacos de los fármacos de tioninio oxidados correspondientes (por ejemplo, cloruro de metiltioninio, MTC). ANTECEDENTES [0003] En este documento se citan varias patentes y publicaciones con el fin de describir y desvelar más completamente la invención y el estado de la técnica a la que pertenece la invención. Cada una de estas referencias se incorpora a este documento por referencia en su totalidad en la presente divulgación en la misma medida que si se indicara específica e individualmente cada referencia individual que está incorporada por referencia. [0004] En toda esta memoria descriptiva, que incluye las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto lo requiera de otro modo, la palabra "comprenden" y variaciones tales como "comprende" y "que comprende" se entenderá que implica la inclusión de un número entero o etapa o grupo de número enteros o etapas establecidos, pero no la exclusión de ningún otro número entero o etapa o grupo de número enteros o etapas. [0005] Debe observarse que, como se usa en la memoria descriptiva y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen referentes en plural, a menos que el contexto dicte claramente de otro modo. Por tanto, por ejemplo, referencia a "un vehículo farmacéutico" incluye mezclas de dos o más de tales vehículos, y similares. [0006] Los intervalos se expresan frecuentemente en este documento como de "aproximadamente" un valor particular, y/o a "aproximadamente" otro valor particular.
Cuando se expresa un intervalo tal, otra realización incluye de un valor particular y/o al otro valor particular. Similarmente, cuando los valores se expresan como aproximaciones, por el uso del "aproximadamente" antecedente se entenderá que el valor particular forma otra realización. [0007] Las afecciones de demencia se caracterizan frecuentemente por una acumulación progresiva de depósitos intracelulares y/o extracelulares de estructuras proteináceas tales como placas β-amiloides y ovillos neurofibrilares (NFT) en los cerebros de los pacientes afectados. El aspecto de estas lesiones está ampliamente relacionado con degeneración neurofibrilar patológica y atrofia cerebral, además de con deficiencia cognitiva (véase, por ejemplo, Mukaetova-Ladinska, E.B. y col., 2000, Am. J. Patol., vol. 157, nº 2, pág. 623-636). El cloruro de metiltioninio (MTC) y otras diaminofenotiazinas se han descrito como inhibidores de la agregación de proteínas en tales enfermedades, es decir, enfermedades en las que las proteínas se agregan patológicamente (véanse, por ejemplo, los documentos WO 96/30766 y WO 02/055720). [0008] El cloruro de metiltioninio (MTC) se usa actualmente para tratar la metahemoglobinemia (una afección que se produce cuando la sangre no puede administrar oxígeno cuando se necesita en el cuerpo). El MTC también se usa como colorante médico (por ejemplo, para teñir ciertas partes del cuerpo antes o durante la cirugía); un diagnóstico (por ejemplo, como colorante indicador para detectar ciertos compuestos presentes en la orina); un antiséptico urinario débil; un estimulante para las superficies mucosas; un tratamiento y preventivo para cálculos renales; y en el diagnóstico y el tratamiento de melanoma. [0009] El MTC se ha usado para tratar malaria tanto individualmente (véase, por ejemplo, Guttmann, P. y Ehrlich, P., 1891, "Über die Wirkung des Methylenblau bei Malaria", Berl. Klin. Woschenr., vol. 28, pág. 953-956) o en combinación con cloroquina (véanse, por ejemplo, Schirmer, H., y col., 2003, "Methylene blue as an antimalarial agent", Redox Report, vol. 8, pág. 272-275; Rengelshausen, J., y col., 2004, "Pharmacokinetic interaction of chloroquine and methylene blue combination against malaria", European Journal of Clinical Pharmacology, vol. 60, pág. 709-715). La malaria en seres humanos está producida por una de cuatro especies de protozoos del género Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale o P. malariae. Todas las especies se transmiten por la picadura de un mosquito Anopheles hembra infectado. Ocasionalmente, la transmisión se produce por la transfusión de sangre, el trasplante de órganos, compartir agujas o congénitamente de la madre al feto. La malaria produce 300-500 millones de infecciones en todo el mundo y aproximadamente 1 millón de muertes anualmente. Sin embargo, la resistencia al fármaco es un asunto importante y es mayor para P. falciparum, la especie que se encuentra en la mayoría de todas las muertes relacionadas con la malaria. Los fármacos o combinaciones de fármacos que actualmente se recomiendan para la profilaxis de la malaria incluyen cloroquina/clorhidrato de proguanilo, mefloquina, doxiciclina y primaquina. [0010] El MTC (con el nombre Virostat®, de Bioenvision Inc., Nueva York) ha mostrado una potente actividad viricida in vitro. Específicamente, Virostat® es eficaz contra virus tales como VIH y el virus del Nilo Occidental en pruebas de laboratorio. El virus del Nilo Occidental (VNO) es una enfermedad potencialmente grave que afecta al sistema nervioso central. La gran mayoría de las personas infectadas mostrarán síntomas no visibles o síntomas similares a una gripe leve tales como fiebre y cefalea. Aproximadamente uno de 150 desarrollará síntomas graves que incluyen temblores, convulsiones, debilidad muscular, pérdida de visión, insensibilidad, parálisis o coma. Generalmente, el VNO se propaga por la picadura de un mosquito infectado, pero también puede propagarse por transfusiones de sangre, trasplantes de órganos, lactancia materna o durante el embarazo de la madre al niño. [0011] Virostat® también se usa actualmente en ensayos clínicos para el tratamiento de hepatitis C crónica. La hepatitis C es una infección vírica del hígado. El virus, VHC, es una causa principal de hepatitis aguda y enfermedad hepática crónica que incluye cirrosis y cáncer de hígado. El VHC se propaga principalmente por el contacto directo con sangre humana. La causa principal de infección por VHC en todo el mundo son el uso de trasfusiones de sangre sin analizar y la reutilización de agujas y jeringuillas que no han sido adecuadamente esterilizadas. La Organización Mundial de la Salud ha declarado la hepatitis C un problema de salud global, con aproximadamente el 3% de la población mundial infectada por VHC, y varía considerablemente según la región. La prevalencia en los EE.UU. se estima en el 1,3%
o aproximadamente 3,5 millones de personas. Egipto tiene una población de aproximadamente 62 millones y contiene la mayor prevalencia de hepatitis C en el mundo, estimada en más del 20% de las personas del país, aproximadamente 62 millones de personas. [0012] El MTC, cuando se combina con luz, puede prevenir la replicación de ácido nucleico (ADN o ARN). El plasma, las plaquetas y los glóbulos rojos no contienen ADN o ARN nuclear. Si el MTC se introduce en los componentes sanguíneos, cruza las paredes de las células bacterianas o membrana vírica, por lo que se mueve en el interior de la estructura del ácido nucleico. Si se activa con luz, el compuesto se une entonces al ácido nucleico del patógeno vírico o bacteriano, previniendo la replicación del ADN o ARN. Debido a que el MTC puede inactivar patógenos, tiene la posibilidad de reducir el riesgo de transmisión de patógenos que quedarían sin detectar por las pruebas. [0013] Las formulaciones orales y parenterales de MTC están comercialmente disponibles en los Estados Unidos, normalmente con el nombre Urolene Blue®. RESUMEN DE LA INVENCIÓN [0014] Un aspecto de la invención se refiere a ciertos compuestos, específicamente ciertos compuestos de 3,7-diamino-10H-fenotiazina (DAPTZ), como se describen en este documento. [0015] Otro aspecto de la invención se refiere a una composición que comprende un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. [0016] Otro aspecto de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. [0017] Otro aspecto de la invención se refiere a un procedimiento de preparación de una composición farmacéutica que comprende mezclar un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. [0018] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de invertir y/o inhibir la agregación de una proteína (por ejemplo, una proteína tau, una sinucleína, etc.), por ejemplo, agregación de una proteína asociada a una enfermedad neurodegenerativa y/o demencia clínica que comprende poner en contacto la proteína con una cantidad eficaz de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento in vitro. [0019] También se describe en este documento un procedimiento de tratamiento o profilaxis de un estado de enfermedad en un sujeto que comprende administrar a dicho sujeto una cantidad profilácticamente o terapéuticamente eficaz de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento, preferentemente en forma de una composición farmacéutica. [0020] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento para uso en un procedimiento de tratamiento o profilaxis (por ejemplo, de un estado de enfermedad) del cuerpo humano o animal por terapia. [0021] Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento o la profilaxis de un estado de enfermedad. [0022] En una realización, el estado de enfermedad es una enfermedad de agregación de proteínas. [0023] En una realización, el estado de enfermedad es una tauopatía, por ejemplo, una tauopatía neurodegenerativa, por ejemplo, enfermedad de Alzheimer. [0024] En una realización, el estado de enfermedad es cáncer de piel, por ejemplo, melanoma. [0025] En una realización, el estado de enfermedad es un estado de enfermedad vírica, bacteriana o protozoica, por ejemplo, hepatitis C, VIH, virus del Nilo Occidental (VNO) o malaria. [0026] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de inactivar un patógeno en una muestra (por ejemplo, una muestra de sangre o de plasma) que comprende las etapas de introducir un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento en la muestra y luego exponer la muestra a la luz. [0027] En este documento también se describe un kit que comprende (a) un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento, preferentemente proporcionado como una composición farmacéutica y en un recipiente adecuado y/o con envase adecuado; y (b) instrucciones para uso, por ejemplo, instrucciones escritas sobre cómo administrar el compuesto. [0028] Como será apreciado por un experto en la materia, las características y realizaciones preferidas de un aspecto de la invención también se referirán a otro aspecto de la invención. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
[0029]
La Figura 1 es una gráfica de la forma reducida en porcentaje (%) frente al tiempo (minutos) para cada uno de los tres compuestos, B1 (MTC), B3 (bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7diamina) y B6 (bis(yoduro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10Hfenotiazina-3,7-diamina), como se determina usando absorbancia a 665 nm. La Figura 2 es una gráfica de la forma reducida en porcentaje (%) frente al tiempo (minutos) para cada uno de los tres compuestos, B1, B3 y B6, como se determina usando absorbancia a 610 nm. La Figura 3A muestra los espectros de absorción UV/visible para muestras acuosas de cada uno de los tres compuestos, B1 (círculos abiertos, máximo a 605 nm), B3 (cuadrados abiertos, máximo a 660 nm) y B6 (triángulos abiertos, máximo a 660 nm), después de 20 minutos. La Figura 3B muestra los espectros de absorción UV/visible para muestras acuosas de cada uno de los tres compuestos, B1 (círculos abiertos, máximo a 605 nm), B3 (cuadrados abiertos, máximo a 605 nm) y B6 (triángulos abiertos, máximo a 605 nm), después de 3 horas. La Figura 3C muestra los espectros de absorción UV/visible para muestras acuosas de cada uno de los tres compuestos, B1 (círculos abiertos, máximo a 605 nm), B3 (cuadrados abiertos, máximo a 605 nm) y B6 (triángulos abiertos, máximo a 605 nm), después de 28 horas. La Figura 4 muestra la estructura cristalina del bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina. La Figura 5 muestra la vista de perfil del bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina. La Figura 6 muestra parte de una columna helicoidal de moléculas de bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7diamina en el cristal.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN [0030] El cloruro de metiltioninio (MTC) (también conocido como azul de metileno (MB); cloruro de metiltionina; cloruro de tetrametiltionina; cloruro de 3,7bis(dimetilamino)fenotiazin-5-io; C.I. Basic Blue 9; cloruro de tetrametiltionina; cloruro de 3,7-bis(dimetilamino)fenazationio; Swiss blue; C.I. 52015; C.I. Disolvent Blue 8; anilina violeta; y Urolene Blue®) es un compuesto orgánico tricíclico de bajo peso molecular (319,86) soluble en agua de la siguiente fórmula:
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[0031] El cloruro de metiltioninio (MTC) (también conocidos como azul de
metileno), quizás el colorante de fenotiazina e indicador redox más conocido, también se ha usado como sonda óptica de sistemas biofísicos, como intercalador en materiales nanoporosos, como mediador redox y en la obtención de imágenes fotoelectrocrómicas.
5 [0032] El MTC, una sal de fenotiazin-5-io, puede considerarse convenientemente que es una "forma oxidada" cuando se considera con respecto al compuesto de la 10Hfenotiazina correspondiente, N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina, que puede considerarse convenientemente que es una "forma reducida":
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10 [0033] Se sabe que la "forma reducida" (la "forma leuco") es inestable y se oxida fácilmente y rápidamente dando la forma "oxidada" correspondiente. [0034] May y col. (Am J Physiol Cell Physiol, 2004, vol. 286, pág. C1390-C1398) han mostrado que eritrocitos humanos reducen y absorben secuencialmente MTC; que el propio MTC no es absorbido por las células; que es la forma reducida de MTC la
15 que cruza la membrana celular; que la tasa de absorción depende de enzimas; y que tanto el MTC como el MTC reducido se concentran en células (el MTC reducido se reequilibra una vez dentro de la célula para formar MTC). [0035] El MTC y fármacos similares son absorbidos en el intestino y entran en la circulación sanguínea. El fármaco sin absorber se filtra al tubo digestivo, al intestino
20 distal. Un efecto secundario no deseado importante es el efecto del fármaco sin absorber en el intestino distal, por ejemplo, sensibilización del intestino distal y/o efectos antimicrobianos del fármaco sin absorber sobre la flora en el intestino distal, conduciendo ambos a diarrea. Por tanto, se desea minimizar la cantidad de fármaco que se filtra al intestino distal. Aumentando la absorción de fármaco en el intestino (es
25 decir, aumentando la biodisponibilidad de fármaco), la dosificación puede reducirse, y pueden mejorar los efectos secundarios no deseados, tales como diarrea. [0036] Como es la forma reducida de MTC la que es absorbida por las células, se desearía administrar la forma reducida. Esto también reduciría la dependencia de la etapa limitante de la velocidad de la reducción enzimática.
5 [0037] Los inventores han identificado una clase de compuestos que también puede considerarse que está en la "forma reducida" cuando se considera con respecto a MTC, y que son sorprendentemente e inesperadamente estables. Por tanto, los compuestos pueden describirse como "formas reducidas estabilizadas", por ejemplo, de MTC.
10 [0038] Estos compuestos son por sí mismos activos como fármacos y también pueden servir de profármacos proporcionando tras la oxidación los compuestos oxidados correspondientes (por ejemplo, MTC), que también son activos como fármacos. [0039] Un miembro representativo de esta clase de compuestos se muestra a
15 continuación.
imagen1
[0040] Otro miembro representativo de esta clase de compuestos se muestra a continuación.
imagen1
Los compuestos [0041] En general, la presente invención se refiere a ciertos compuestos de 3,7diamino-10H-fenotiazina de la siguiente fórmula (denominados colectivamente en este
5 documento "compuestos de diamino-fenotiazina" y/o "compuestos de DAPTZ"):
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en la que: cada uno de R1 y R9 se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de R3NA y R3NB se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de R7NA y R7NB se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de HX1 y HX2 es independientemente un ácido prótico;
15 y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos. [0042] Sin desear ceñirse a ninguna teoría particular, los inventores creen que es posible, si no probable, que los compuestos existan en la siguiente forma: [0043] Aunque los compuestos de DAPTZ son por sí mismos sales, también pueden proporcionarse en forma de una sal mixta (es decir, el DAPTZ en combinación con otra sal). Se pretende que tales sales mixtas estén englobadas por el término "y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos". A menos que se especifique lo contrario, una referencia a un compuesto particular también incluye sales del mismo. [0044] Los compuestos de DAPTZ también pueden proporcionarse en forma de un solvato o hidrato. El término "solvato" se usa en este documento en el sentido convencional para referirse a un complejo de soluto (por ejemplo, compuesto, sal de compuesto) y disolvente. Si el disolvente es agua, el solvato puede denominarse convenientemente en lo sucesivo un hidrato, por ejemplo, un mono-hidrato, un di-hidrato, un tri-hidrato, etc. A menos que se especifique lo contrario, una referencia a un compuesto particular también incluye formas de solvato del mismo. [0045] En una realización, los grupos alquilo C1-4 se seleccionan de: grupos alquilo C1-4 lineales tales como -Me, -Et, -nPr, -iPr, y -nBu; grupos alquilo C3-4 ramificados tales como -iPr, -iBu, -sBu, y -tBu; y grupos alquilo C3-4 cíclicos tales como -cPr y -cBu. [0046] En una realización, los grupos alquenilo C2-4 se seleccionan de grupos alquenilo C1-4 lineales tales como -CH=CH2 (vinilo) y -CH2-CH=CH2 (alilo). [0047] En una realización, los grupos alquilo C1-4 halogenados se seleccionan de: CF3, -CH2CF3, y -CF2CF3.
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Los grupos R1 y R9
[0048] En una realización, cada uno de R1 y R9 es independientemente -H, -Me, - Et o -CF3. En una realización, cada uno de R1 y R9 es independientemente -H, -Me o -Et. [0049] En una realización, R1 y R9 son iguales. En una realización, R1 y R9 son diferentes. [0050] En una realización, cada uno de R1 y R9 es independientemente -H. En una realización, cada uno de R1 y R9 es independientemente -Me.
En una realización, cada uno de R1 y R9 es independientemente -Et.
Los grupos R3NA y R3NB
[0051] Cada uno de R3NA y R3NB se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado.
R3NA R3NB
[0052] En una realización, cada uno de y se selecciona independientemente de: alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado. [0053] En una realización, cada uno de R3NA y R3NB es independientemente -Me, - Et, -nPr, -nBu, -CH2-CH=CH2 o -CF3. [0054] En una realización, cada uno de R3NA y R3NB es independientemente -Me, nPr, -nBu, -CH2-CH=CH2 o -CF3.
[0055]
En una realización, cada uno de R3NA y R3NB es independientemente -Me o
-Et.
[0056]
En una realización, R3NA y R3NB son iguales.
En una realización, R3NA y R3NB son diferentes. [0057] En una realización, cada uno de R3NA y R3NB es independientemente -Me. En una realización, cada uno de R3NA y R3NB es independientemente -Et.
Los grupos R7NA y R7NB
[0058] Cada uno de R7NA y R7NB se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado.
R7NA R7NB
[0059] En una realización, cada uno de y se selecciona independientemente de: alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado. [0060] En una realización, cada uno de R7NA y R7NB es independientemente -Me, - Et, -nPr, -nBu, -CH2CH=CH2 o -CF3. [0061] En una realización, cada uno de R7NA y R7NB es independientemente -Me, nPr, -nBu, -CH2CH=CH2 o -CF3. [0062] En una realización, cada uno de R7NA y R7NB es independientemente -Me o -Et. [0063] En una realización, R7NA y R7NB son iguales. En una realización, R7NA y R7NB son diferentes. [0064] En una realización, cada uno de R7NA y R7NB es independientemente -Me. En una realización, cada uno de R7NA y R7NB es independientemente -Et. [0065] En una realización, R3NA y R3NB y R7NA y R7NB son iguales. [0066] En una realización, R3NA y R3NB y R7NA y R7NB son como se definen en este documento, con la condición de que al menos uno de R3NA y R3NB y R7NA y R7NB sea distinto de -Et.
Condiciones opcionales
[0067] En una realización, el compuesto es como se define en este documento, pero con la condición de que: R3NA y R3NB y R7NA y R7NB no sean cada uno -Et. [0068] En una realización, el compuesto es como se define en este documento, pero con la condición de que:
si: cada uno de R1 y R9 es -H; entonces: R3NA y R3NB y R7NA y R7NB no son cada uno -Et.
Los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB)
[0069] En una realización: cada uno de R3NA y R3NB es independientemente alquilo C1-4, alquenilo C2-4
o alquilo C1-4 halogenado; cada uno de R7NA y R7NB es independientemente alquilo C1-4, alquenilo C2-4
o alquilo C1-4 halogenado; opcionalmente con la condición de que al menos uno de R3NA y R3NB y R7NA y R7NB sea distinto de -Et.
[0070] En una realización: cada uno de R3NA y R3NB es independientemente -Me, -Et, -nPr, -nBu, CH2-CH=CH2 o -CF3; cada uno de R7NA y R7NB es independientemente -Me, -Et, -nPr, -nBu, CH2-CH=CH2 o -CF3; opcionalmente con la condición de que al menos uno de R3NA y R3NB y R7NA y R7NB sea distinto de -Et.
[0071] En una realización: cada uno de R3NA y R3NB es independientemente -Me o -Et; cada uno de R7NA y R7NB es independientemente -Me o -Et; opcionalmente con la condición de que al menos uno de R3NA y R3NB y R7NA y R7NB sea distinto de -Et.
[0072] En una realización, los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) son iguales. [0073] En una realización, los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) son diferentes. [0074] En una realización, cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y N(R7NA)(R7NB) se selecciona independientemente de: -NMe2, -NEt2, -N(nPr)2, -N(Bu)2, -NMeEt, -NMe(nPr) y -N(CH2CH=CH2)2. [0075] En una realización, los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) son
iguales y se seleccionan independientemente de: -NMe2, -NEt2. -N(nPr)2, -N(Bu)2, -NMeEt, -NMe(nPr) y -N(CH2CH=CH2)2. [0076] En una realización, los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) son iguales y se seleccionan independientemente de: -NMe2 y -NEt2. [0077] En una realización, cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y N(R7NA)(R7NB) es: -NMe2+. [0078] En una realización, al menos uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y N(R7NA)(R7NB) es distinto de -NEt2. [0079] En una realización, cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y N(R7NA)(R7NB) es distinto de -NEt2. [0080] Por ejemplo, en una realización, los grupos -N(R3NA)(R3NB) y N(R7NA)(R7NB) son iguales y se seleccionan de: =NMe2, -N(nPr)2, -N(Bu)2, -NMeEt, NMe(nPr) y -N(CH2CH=CH2)2.
Los grupos HX1 y HX2
[0081] Cada uno de HX1 y HX2 es independientemente un ácido prótico. [0082] Ejemplos de ácidos próticos incluyen, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como hidrácidos (por ejemplo, HCl, HBr, HI), ácido nítrico (HNO3), ácido sulfúrico (H2SO4) y ácidos orgánicos tales como ácido carbónico (H2CO3) y ácido acético (CH3COOH). [0083] En una realización, cada uno de HX1 y HX2 es independientemente un ácido monoprótico. [0084] En una realización, cada uno de HX1 y HX2 es independientemente un hidrácido. [0085] En una realización, cada uno de HX1 y HX2 se selecciona independientemente de HCl, HBr y HI. [0086] En una realización, HX1 y HX2 son iguales. En una realización, HX1 y HX2 son diferentes. [0087] En una realización, HX1 y HX2 son iguales y se seleccionan independientemente de HCl, HBr y HI. En este caso, el compuesto (un compuesto de diamino-fenotiazina) puede denominarse convenientemente en lo sucesivo una "sal de bis(haluro de hidrógeno) de diamino-fenotiazina". [0088] En una realización, HX1 y HX2 son cada uno HCl. En este caso, el compuesto puede denominarse convenientemente en lo sucesivo una "sal de bis(cloruro de hidrógeno) de diamino-fenotiazina". [0089] En una realización, HX1 y HX2 son cada uno HBr. En este caso, el compuesto puede denominarse convenientemente en lo sucesivo una "sal de bis(bromuro de hidrógeno) de diamino-fenotiazina". [0090] En una realización, HX1 y HX2 son cada uno HI. En este caso, el compuesto puede denominarse convenientemente en lo sucesivo una "sal de bis(yoduro de hidrógeno) de diamino-fenotiazina".
Algunas combinaciones preferidas
[0091] En una realización: cada uno de R1 y R9 es independientemente -H, -Me o -Et; y cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es independientemente -NMe2 o -NEt2.
[0092] En una realización: cada uno de R1 y R9 es independientemente -H, -Me o -Et; y
cada
uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es
independientemente -NMe2.
[0093]
En una realización:
cada uno de R1 y R9 es independientemente -H; y
cada
uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es
independientemente -NMe2 o -NEt2.
[0094]
En una realización:
cada uno de R1 y R9 es independientemente -H; y
cada
uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es
independientemente -NMe2.
[0095]
En una realización:
cada uno de R1 y R9 es independientemente -H, -Me o -Et; y
cada
uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es
independientemente -NMe2 o -NEt2; y
cada uno de HX1 y HX2 se selecciona independientemente de HCl, HBr y HI.
[0096] En una realización: cada uno de R1 y R9 es independientemente -H, -Me o -Et; y cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es independientemente -NMe2; y cada uno de HX1 y HX2 se selecciona independientemente de HCl, HBr y HI.
[0097] En una realización: cada uno de R1 y R9 es independientemente -H; y cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3N8) y -N(R7NA)(R7NB) es independientemente -NMe2 o -NEt2; y cada uno de HX1 y HX2 se selecciona independientemente de HCl, HBr y
5 HI.
[0098] En una realización: cada uno de R1 y R9 es independientemente -H; y cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es independientemente -NMe2; y
10 cada uno de HX1 y HX2 se selecciona independientemente de HCl, HBr y HI.
[0099] En una realización: cada uno de R1 y R9 es independientemente -H; y cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es
15 independientemente -NMe2; y cada uno de HX1 y HX2 es HCl.
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[0100] En una realización: cada uno de R1 y R9 es independientemente -H; y
20 cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es independientemente -NMe2; y cada uno de HX1 y HX2 es HBr.
imagen1
[0101] En una realización: cada uno de R1 y R9 es independientemente -H; y cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) es independientemente -NMe2; y cada uno de HX1 y HX2 es HI.
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Variación isotópica
[0102] En una realización, uno o más de los átomos de carbono del compuesto es 11C, 13C o 14C.
10 En una realización, uno o más de los átomos de carbono del compuesto es 11C. En una realización, uno o más de los átomos de carbono del compuesto es 13C. En una realización, uno o más de los átomos de carbono del compuesto es 14C. En una realización, uno o más de los átomos de nitrógeno del compuesto es 15N. [0103] En una realización, uno o más o todos los átomos de carbono de uno o más
15 o todos los grupos R3NA, R3NB, R7NA, R7NB, R1, R9 y R10 es 11C (o 13C) (o 14C). [0104] En una realización, uno o más o todos los átomos de carbono de uno o más
o todos los grupos R3NA, R3NB, R7NA y R7NB es 11C (o 13C) (o 14C). [0105] En una realización, los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) son iguales, y son: -N(11CH3)2 (o -N(13CH3)2) (o -N(C14CH3)2).
20 Combinaciones compatibles
[0106] Todas las combinaciones compatibles de las realizaciones descritas anteriormente se desvelan explícitamente en este documento como si cada combinación se citara específicamente e individualmente.
Algunas realizaciones preferidas
25 [0107] En una realización, el compuesto se selecciona de los siguientes compuestos, y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
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[0108] En una realización, el compuesto se selecciona de los siguientes compuestos, y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
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[0109] En una realización, el compuesto se selecciona de los siguientes compuestos, y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos.
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Pureza
[0110] Los compuestos de DAPTZ de la presente invención pueden describirse
convenientemente como que están en una "forma reducida estabilizada". Los compuestos se oxidan (por ejemplo, se autooxidan) para dar las formas oxidadas correspondientes. Por tanto, es probable, si no inevitable, que las composiciones que comprenden los compuestos de DAPTZ de la presente invención contengan como impureza al menos algo del compuesto oxidado correspondiente. [0111] Por tanto, otro aspecto de la presente invención se refiere a compuestos de DAPTZ como se describen en este documento en forma sustancialmente purificada y/o en una forma sustancialmente libre de contaminantes (por ejemplo, el compuesto oxidado correspondiente, otros contaminantes). [0112] En una realización, la forma sustancialmente purificada es al menos el 50% en peso pura, por ejemplo, al menos el 60% en peso pura, por ejemplo, al menos el 70% en peso pura, por ejemplo, al menos el 80% en peso pura, por ejemplo, al menos el 90% en peso pura, por ejemplo, al menos el 95% en peso pura, por ejemplo, al menos el 97% en peso pura, por ejemplo, al menos el 98% en peso pura, por ejemplo, al menos el 99% en peso pura. [0113] En una realización, los contaminantes representan no más del 50% en peso, por ejemplo, no más del 40% en peso, por ejemplo, no más del 30% en peso, por ejemplo, no más del 20% en peso, por ejemplo, no más del 10% en peso, por ejemplo, no más del 5% en peso, por ejemplo, no más del 3% en peso, por ejemplo, no más del 2% en peso, por ejemplo, no más del 1% en peso.
Producto mediante procedimiento [0114] En una realización, el compuesto de DAPTZ es uno que se obtiene por, o puede obtenerse por, un procedimiento como se describe en este documento. Síntesis química [0115] Los procedimientos para la síntesis química de compuestos de DAPTZ de la presente invención se describen en este documento. Estos y/u otros procedimientos muy conocidos pueden modificarse y/o adaptarse de formas conocidas con el fin de facilitar la síntesis de compuestos de DAPTZ adicionales dentro del alcance de la presente invención. [0116] Por ejemplo, una fenotiazina adecuada puede convertirse en la 3,7-dinitrofenotiazina correspondiente, por ejemplo, usando nitrito de sodio con ácido acético y cloroformo. El grupo amino del anillo puede entonces protegerse, por ejemplo, como acetato, por ejemplo, usando anhídrido acético y piridina. Los grupos nitro pueden entonces reducirse a grupos amino, por ejemplo, usando cloruro de estaño (II) con etanol. Entonces, los grupos amino pueden sustituirse, por ejemplo, disustituirse, por ejemplo, disustituirse con metilo, por ejemplo, usando yoduro de metilo, hidróxido sódico, DMSO y bromuro de tetra-n-butilamonio. Entonces, el grupo amino pueden desprotegerse, por ejemplo, el grupo N-acetilo puede eliminarse, por ejemplo, usando ácido clorhídrico acuoso concentrado. Entonces, la sal correspondiente se prepara, por
5 ejemplo, usando ácido clorhídrico acuoso concentrado, por ejemplo, al mismo tiempo que la desprotección. Un ejemplo de un procedimiento tal se ilustra en el siguiente esquema. Esquema 1
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10 [0117] Por tanto, otro aspecto de la invención se refiere a un procedimiento de preparación de un compuesto de 3,7-diamino-10H-fenotiazina (DAPTZ) de la siguiente fórmula:
imagen1
en la que R1, R9, R3NA, R3NB, R7NA, R7NB, HX1 y HX2 son como se definen en este 15 documento (por ejemplo, en la que HX1 y HX2 son cada uno HCl), que comprende la etapa de:
(vi)
formación de la sal (SF). [0118] En una realización, el procedimiento comprende las etapas de:
(v) desprotección del amino del anillo (DP); y
(vi)
formación de la sal (SF). [0119] En una realización, el procedimiento comprende las etapas de:
(iv) sustitución de la amina (AS), opcional (v) desprotección del amino del anillo (DP), y
(vi)
formación de la sal (SF). [0120] En una realización, el procedimiento comprende las etapas de:
(iii) reducción de nitro (NR),
(iv)
sustitución de la amina (AS),
(v)
desprotección del amino del anillo (DP), y
(vi)
formación de la sal (SF).
[0121] En una realización, el procedimiento comprende las etapas de: opcional (ii) protección del amino del anillo (AP),
(iii) reducción de nitro (NR),
(iv)
sustitución de la amina (AS),
(v)
desprotección del amino del anillo (DP), y
(vi)
formación de la sal (SF). [0122] En una realización, el procedimiento comprende las etapas de
(i)
nitración (NO),
(ii)
protección del amino del anillo (AP),
(iii) reducción de nitro (NR),
(iv)
sustitución de la amina (AS),
(v)
desprotección del amino del anillo (DP), y
(vi)
formación de la sal (SF). [0123] En una realización, las etapas se realizan en el orden enumerado (es decir, cualquier etapa en la lista se realiza al mismo tiempo que, o posterior a, la etapa precedente en la lista). [0124] En una realización, la etapa de (v) desprotección del amino del anillo (DP) y la etapa de (vi) formación de la sal (SF) se realizan simultáneamente (es decir, como una etapa). [0125] En una realización, la etapa de nitración (NO) es:
(i) nitración (NO), en la que una 10H-fenotiazina se convierte en una 3,7dinitro-10H-fenotiazina, por ejemplo: [0126] En una realización, la nitración se realiza usando un nitrito, por ejemplo, nitrito de sodio, por ejemplo, nitrito de sodio con ácido acético y cloroformo. En una realización, R10 es -H.
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5 [0127] En una realización, la etapa de protección del amino del anillo (AP) es:
(ii) protección del amino del anillo (AP), en la que el grupo amino del anillo (-NH-) de una 3,7-dinitro-10H-fenotiazina se convierte en un grupo amino del anillo protegido (-NRprot), por ejemplo:
imagen1
10 [0128] En una realización, la protección del amino del anillo se logra en forma de
acetato, por ejemplo, usando anhídrido acético, por ejemplo, usando anhídrido acético y piridina. [0129] En una realización, la etapa de reducción de nitro (NR) es:
(iii) reducción de nitro (NR), en la que cada uno de los grupos nitro (-NO2)
15 de una 3,7-dinitro-10H-fenotiazina protegida se convierte en un grupo amino (-NH2), por ejemplo:
imagen1
[0130] En una realización, la reducción de nitro puede realizarse usando, por ejemplo, cloruro de estaño (II), por ejemplo, cloruro de estaño (II) con etanol.
20 [0131] En una realización, la etapa de sustitución de la amina (AS) es: (iv) sustitución de la amina (AS), en la que cada uno de los grupos amino (-NH2) de una 3,7-diamino-10H-fenotiazina protegida se convierte en grupo amino disustituido, por ejemplo:
imagen2
[0132] En una realización, la sustitución de la amina se realiza usando un haluro de alquilo, por ejemplo, un yoduro de alquilo, por ejemplo, yoduro de metilo, por ejemplo, yoduro de metilo con hidróxido sódico, DMSO y bromuro de tetra-nbutilamonio.
10 [0133] En una realización, la etapa de desprotección del amino del anillo (DP) es:
(v) desprotección del amino del anillo (DP), en la que el grupo protector, RProt, se elimina, por ejemplo:
imagen1
[0134] En una realización, la desprotección del amino del anillo puede realizarse
15 usando ácido, por ejemplo, ácido clorhídrico, por ejemplo, ácido clorhídrico acuoso concentrado. [0135] En una realización, la etapa es:
(vi) formación de la sal (SF), en la que se forma la sal correspondiente, por ejemplo: [0136] En una realización, la formación de la sal puede realizarse usando ácido, por ejemplo, ácido clorhídrico, por ejemplo, ácido clorhídrico acuoso concentrado. [0137] En una realización, las etapas de desprotección de la amina del anillo y
imagen1
5 formación de la sal se realizan simultáneamente (es decir, como una etapa), por ejemplo, el compuesto (1) se forma a partir del compuesto (2) en una etapa. [0138] En otra solución, un cloruro de tioninio adecuado (por ejemplo, cloruro de metiltioninio, MTC, también conocido como azul de metileno) se convierte en el haluro correspondiente, por ejemplo, mediante reacción con yoduro de potasio, por
10 ejemplo, yoduro de potasio acuoso. Entonces, el yoduro de tioninio resultante se reduce, por ejemplo, con yoduro de etilo y etanol, y se forma la sal correspondiente. Un procedimiento similar se describe en Drew, H.D.K, y Head, F.S.H., "Derivatives of Methylene-blue", Journal of the Chemical Society, 1933, pág. 248-253. Un ejemplo de un procedimiento tal se ilustra en el siguiente esquema.
15 Esquema 2
imagen1
[0139] Por tanto, otro aspecto de la invención se refiere a un procedimiento de preparación de un compuesto de 3,7-diamino-10H-fenotiazina (DAPTZ) de la 20 siguiente fórmula:
imagen1
en la que R1, R9, R3NA, R3NB, R7NA, R7NB, HX1 y HX2 son como se definen en este documento (por ejemplo, en la que HX1 y HX2 son cada uno HI), que comprende la etapa de:
5 (ii) reducción y formación de la sal de yoduro (RISF). [0140] En una realización, el procedimiento comprende las etapas de:
(i) intercambio de yoduro (IE); y
(ii) reducción y formación de la sal de yoduro (RISF). [0141] En una realización, las etapas se realizan en el orden enumerado (es decir,
10 cualquier etapa en la lista se realiza al mismo tiempo que, o posterior a, la etapa precedente en la lista). [0142] En una realización, la etapa de intercambio de yoduro (IE) es:
(i) intercambio de yoduro (IE), en la que una sal de 3,7-di(amino disustituido)-tioninio se convierte en el yoduro de 3,7-di(amino
15 disustituido)-tioninio correspondiente, por ejemplo (en la que Y-es un contraión aniónico, por ejemplo, haluro, por ejemplo, cloruro o bromuro):
imagen1
[0143] En una realización, el intercambio de yoduro (IE) se logra mediante reacción con yoduro de potasio, por ejemplo, yoduro de potasio acuoso.
[0144]
En una realización, la etapa de reducción y formación de la sal de yoduro
(RISF) es:
(ii) reducción y formación de la sal de yoduro (RISF), en la que un yoduro
de 3,7-di(amino disustituido)-tioninio
se reduce y se convierte en el
5
compuesto de yoduro de 3,7-diamino-10H-fenotiazina correspondiente, por
ejemplo:
imagen1
[0145] En una realización, la reducción y formación de la sal de yoduro (RISF) se logra mediante reacción con yoduro de etilo, por ejemplo, yoduro de etilo y etanol.
10 [0146] En otra solución, una sal de tioninio apropiada, por ejemplo, cloruro de etiltioninio-semicinc, se reduce simultáneamente y el grupo amino del anillo se protege, por ejemplo, mediante reacción con fenilhidracina, etanol, anhídrido acético y piridina. La sal correspondiente puede entonces prepararse, por ejemplo, usando ácido clorhídrico acuoso concentrado, por ejemplo, al mismo tiempo que la desprotección.
15 Un ejemplo de un procedimiento tal se ilustra en el siguiente esquema.
Esquema 3
imagen1
Esquema 3 [0147] Por tanto, otro aspecto de la invención se refiere a un procedimiento de preparación de un compuesto de 3,7-diamino-10H-fenotiazina (DAPTZ) de la
5 siguiente fórmula:
imagen1
en la que R1, R9, R3NA, R3NB, R7NA, R7NB, HX1 y HX2 son como se definen en este documento (por ejemplo, en la que HX1 y HX2 son cada uno HI), que comprende la etapa de:
10 que comprende la etapa de:
(iv) formación de la sal (SF). [0148] En una realización, el procedimiento comprende las etapas de
(iii) desprotección del amino del anillo (DP), y
(iv) formación de la sal (SF). 15 [0149] En una realización, el procedimiento comprende las etapas de
(ii) protección del amino del anillo (AP),
(iii) desprotección del amino del anillo (DP), y
(iv) formación de la sal (SF).
[0150]
En una realización, el procedimiento comprende las etapas de
(i) reducción (RED)
(ii) protección del amino del anillo (AP),
(iii) desprotección del amino del anillo (DP), y
5
(iv) formación de la sal (SF).
[0151]
En una realización, las etapas se realizan en el orden enumerado (es decir,
cualquier etapa en la lista se realiza al mismo tiempo que, o posterior a, la etapa precedente en la lista). [0152] En una realización, la etapa de (i) reducción (RED) y la etapa de (ii)
10 protección del amino del anillo (AP) se realizan simultáneamente (es decir, como una etapa). [0153] Por ejemplo, en una realización, la etapa de reducción (RED) combinada y la etapa de protección del amino del anillo (AP) es:
(i) reducción (RED) y protección del amino del anillo (AP), en la que una
15 sal de 3,7-di(amino disustituido)-tioninio se reduce para dar la 3,7di(amino disustituido)-10H-fenotiazina correspondiente, y el grupo amino del anillo (-NH-) de la 3,7-di(amino disustituido)-10H-fenotiazina se convierte en un grupo amino del anillo protegido (-Rprot) para dar la 3,7di(amino disustituido)-10H-fenotiazina protegida correspondiente, por
20 ejemplo:
imagen1
[0154] En una realización, Y representa Cl-. [0155] En una realización, la etapa de reducción (RED) combinada y la etapa de protección del amino del anillo (AP) se logra usando fenilhidracina y anhídrido
25 acético, por ejemplo, fenilhidracina, etanol, anhídrido acético y piridina. [0156] En una realización, la etapa de (iii) desprotección del amino del anillo (DP) y la etapa de (iv) formación de la sal (SF) se realizan simultáneamente (es decir, como una etapa). [0157] Por ejemplo, en una realización, la etapa de desprotección del amino del
30 anillo (DP) combinada y la etapa de formación de la sal (SF) es: (ii) desprotección del amino del anillo (DP) y formación de la sal (SF), en la que el grupo protector de una 3,7-di(amino disustituido)-10Hfenotiazina protegida se elimina para dar una 3,7-di(amino disustituido)10H-fenotiazina, y se forma la sal correspondiente, por ejemplo:
imagen2
[0158] En una realización, la etapa de desprotección del amino del anillo (DP) y la etapa de formación de la sal (SF) combinadas pueden realizarse usando ácido, por ejemplo, ácido clorhídrico, por ejemplo, ácido clorhídrico acuoso concentrado. [0159] En una solución similar, un cloruro de tioninio apropiado (por ejemplo,
10 cloruro de metiltioninio, cloruro de etiltioninio) se reduce primero y se acetila para dar la 1-(3,7-bls-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona correspondiente, por ejemplo, mediante reacción con hidracina (NH2NH2), metilhidracina (MeNHNH2) o borohidruro de sodio (NaBH4); y anhídrido acético ((H3CCO)2O); por ejemplo, en presencia de una base adecuada, por ejemplo, piridina (C5H5N) o base de Hunig (diisopropiletilamina,
15 C8H18N), por ejemplo, en un disolvente adecuado, por ejemplo, etanol o acetonitrilo. Entonces, el compuesto reducido y acetilado se desprotege (eliminando el grupo acetilo), por ejemplo, mediante reacción con un hidrácido adecuado, por ejemplo, ácido clorhídrico o ácido bromhídrico, en un disolvente adecuado, por ejemplo, etanol, y opcionalmente con la adición de un éter adecuado, por ejemplo, éter dietílico.
20 Composiciones [0160] Otro aspecto de la invención se refiere a una composición que comprende un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Usos
25 Invertir y/o inhibir la agregación de una proteína [0161] En este documento se describe el uso de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento para regular (por ejemplo, para invertir y/o inhibir) la agregación de una proteína, por ejemplo, agregación de una proteína asociada a una enfermedad neurodegenerativa y/o demencia clínica. La agregación puede ser in vitro o in vivo y puede asociarse a un estado de enfermedad como se trata más adelante. [0162] Por tanto, la memoria descriptiva describe un procedimiento para regular (por ejemplo, invertir y/o inhibir) la agregación de una proteína, por ejemplo, agregación de una proteína asociada a una enfermedad neurodegenerativa y/o demencia clínica que comprende poner en contacto la proteína con una cantidad eficaz de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento. El procedimiento puede realizarse in vitro o in vivo. [0163] Similarmente, la memoria descriptiva describe un procedimiento para regular (por ejemplo, invertir y/o inhibir) la agregación de una proteína en el cerebro de un mamífero, agregación que está asociada a un estado de enfermedad como se describe en este documento, tratamiento que comprende la etapa de administrar a dicho mamífero en necesidad de dicho tratamiento una cantidad profilácticamente o terapéuticamente eficaz de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento que es un inhibidor de dicha agregación. Procedimientos de tratamiento [0164] En este documento también se describe un procedimiento de tratamiento que comprende administrar a un paciente en necesidad de tratamiento una cantidad profilácticamente o terapéuticamente eficaz de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento, preferentemente en forma de una composición farmacéutica. Uso en procedimientos de terapia [0165] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento para uso en un procedimiento de tratamiento (por ejemplo, de un estado de enfermedad) del cuerpo humano o animal por terapia. Uso en la preparación de medicamentos [0166] Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento en la preparación de un medicamento para uso en tratamiento (por ejemplo, de un estado de enfermedad). [0167] En una realización, el medicamento comprende el compuesto de DAPTZ. Estados de enfermedad tratados -enfermedades de la agregación de proteínas [0168] Los compuestos de DAPTZ de la presente invención son útiles en el tratamiento o la profilaxis de enfermedades de agregación de proteínas. [0169] Por tanto, en una realización, el estado de enfermedad es una enfermedad de agregación de proteínas y, por ejemplo, el tratamiento es con una cantidad de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento suficiente para inhibir la agregación de la proteína asociada a dicho estado de enfermedad. [0170] En general, la agregación de proteínas es la que se produce a partir de una interacción de polimerización conformacional inducida, es decir, una en la que un cambio conformacional de la proteína, o en un fragmento de la misma, da lugar a la
5 unión y agregación en plantilla de otras moléculas de proteína (precursoras) en un modo autopropagante. Una vez se inicia la nucleación puede seguirle una cascada de agregación que implica la polimerización conformacional inducida de más moléculas de proteína, conduciendo a la formación de fragmentos de productos tóxicos en agregados que son sustancialmente resistentes a la posterior proteolisis. Se cree que los
10 agregados de proteínas así formados son una causa proximal de estados de enfermedad manifestados como neurodegeneración, demencia clínica y otros síntomas patológicos. [0171] La siguiente tabla proporciona una lista de diversas proteínas de agregación asociadas a enfermedades y las enfermedades correspondientes de la agregación de proteínas.
15
Enfermedades por agregación de proteínas
Proteína
Enfermedad Dominio de agregación y/o mutaciones Tamaño de la subunidad de fibrilla (kDa) Referencia
Trastornos neurodegenerativos
Proteína priónica
Enfermedades de priones Formas heredadas y esporádicas 27 Prusiner (1998)
(CJD, nvCJD, insomnio familiar fatal, síndrome de Gerstmann-Sträussler-Scheinker, kuru)
PrP-27-30; muchas mutaciones.
Dominios
Gasset y col. (1992)
fibrilogénicos:
113-120, 178
191, 202-218.
Proteína tau
Enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down, FTDP-17, CBD, parkinsonismo posencefalítico, enfermedad de Pick, complejo parkinsonismodemencia de Guam Formas heredadas y esporádicas 10-12 Wischik y col. (1988)
Enfermedades por agregación de proteínas
Proteína
Enfermedad Dominio de agregación y/o mutaciones Tamaño de la subunidad de fibrilla (kDa) Referencia
Tau truncada (dominio de unión a tubulina) 297391.
Mutaciones en tau en FTDP17.
Hutton y col. (1998)
Muchas mutaciones en proteínas presenilina.
Czech y col. (2000)
β-proteína amiloide
Enfermedad de Alzheimer, síndrome de Down Formas heredadas y esporádicas 4 Glenner & Wonq. (1984)
β-proteína amiloide; 142(3).
11 mutaciones en APP en familias raras.
Goate y col. (1991)
Huntingtina
Enfermedad de Huntington Extremo N de proteína con repeticiones de glutamina expandidas. 40 DiFiglia y col. (1997)
Enfermedades por agregación de proteínas
Proteína
Enfermedad Dominio de agregación y/o mutaciones Tamaño de la subunidad de fibrilla (kDa) Referencia
Ataxinas (1, 2, 3, 7)
Ataxias espinocerebelosas (SCA1, 2, 3,7) Proteínas con repeticiones de glutamina expandidas. Paulson y col. (1999)
Atrofina
Atrofia dentatorubropalido -luisiana (DRPLA) Proteínas con repeticiones de glutamina expandidas. Paulson y col. (1999)
Receptor de andrógenos
Atrofia muscular espinal y bulbar Proteínas con repeticiones de glutamina expandidas. Paulson y col. (1999)
Neuroserpina
Encefalopatía familiar con cuerpos de inclusión neuronales (FENIB) Neuroserpina; S49P, S52R. 57 Davis y col. (1999)
α-Sinucleína
Enfermedad de Parkinson, demencia con cuerpos de Lewy, atrofia de múltiples sistemas Formas heredadas y esporádicas 19 Spillantini y col. (1998)
Enfermedades por agregación de proteínas
Proteína
Enfermedad Dominio de agregación y/o mutaciones Tamaño de la subunidad de fibrilla (kDa) Referencia
A53T, A30P en familias PD autosómicas dominantes raras.
Polymeropoulos y col. (1997)
Cistatina C
Angiopatía cerebral hereditaria (islandesa) Cistatina C menos de 10 residuos; L68Q. 12-13 Abrahamson y col. (1992)
Superóxido dismutasa 1
Esclerosis lateral amiotrófica Mutaciones SOD1. Shibata y col. (1996)
Trastornos no neurodegenerativos
Hemoglobina
Anemia de células falciformes Cadena beta de hemoglobina (S). Carrell & Gooptu (1998)
Hemolisis de cuerpos de inclusión
Muchas mutaciones.
Serpinas
Deficiencia de α1antitripsina (enfisema, cirrosis) Mutaciones Lomas y col. (1992)
Enfermedades por agregación de proteínas
Proteína
Enfermedad Dominio de agregación y/o mutaciones Tamaño de la subunidad de fibrilla (kDa) Referencia
Deficiencia de antitrombina (enfermedad tromboembólica)
Mutaciones Carrell & Gooptu (1998)
Deficiencia de inhibidor de C1 (angioedema)
Mutaciones Carrell & Gooptu (1998)
Cadena ligera de inmunoglobulina
Discrasias de células plasmáticas (amiloidosis primaria sistémica AL) Cadena ligera o fragmentos. 0,5-25 Westermark y col. (1985)
Suero amiloide A
Amiloidosis reactiva, secundaria, sistémica AA Fragmento de 76 residuos (residuos críticos 2-12). 4,5-7,5 Westermark y col. (1985)
Enfermedad inflamatoria crónica
Transtire-tina
Polineuropatía amiloide familiar (sistémica; FAP I) Tetrámero disociado a variante monomérica conformaciona l. 10-14 Gustavsson y col. (1991)
Enfermedades por agregación de proteínas
Proteína
Enfermedad Dominio de agregación y/o mutaciones Tamaño de la subunidad de fibrilla (kDa) Referencia
Muchas mutaciones (algunas no están asociadas a amiloide; varios tipos diferentes de enfermedad).
Amiloidosis cardiaca senil
Transtiretina normal 10-14 Gustavsson y col. (1991)
Gelsolina
Amiloidosis familiar tipo finlandesa (FAP IV) D187Q conduce a 173225/243 truncado (residuos críticos 182192). 9,5 Maury & Baumann (1990)
β2Microglobulina
Amiloidosis asociada a hemodiálisis β2Microglobulin a 12-25 Gorevic y col. (1985)
Amiloide prostático
Enfermedades por agregación de proteínas
Proteína
Enfermedad Dominio de agregación y/o mutaciones Tamaño de la subunidad de fibrilla (kDa) Referencia
Apolipoproteína A1
Polineuropatía amiloide familiar (sistémica; FAP III) Extremo N 8393 residuos; G26R, W50R, L60R 9 Booth y col. (1997)
Lisozima
Amiloidosis visceral familiar Lisozima o fragmentos (con o sin I56T, D67H) 14 Pepys y col. (1993)
Amilina (polipéptido amiloide del islote)
Diabetes de tipo II (NIDDM) Fragmentos (núcleo crítico de 20-29); sin mutaciones 3,9 Westermark (1990)
Cadena α de fibrinógeno
Amiloidosis renal hereditaria Fragmentos de fibrinógeno 7-10 Uemichi y col. (1992)
Procalcito-nina
Carcinoma medular de la tiroides Fragmentos de calcitonina 3,4 Sletten y col. (1976)
Factor natriurético atrial
Amiloidosis cardiaca ANF, sin mutantes 3,5 Johansson y col. (1987)
Enfermedades por agregación de proteínas
Proteína
Enfermedad Dominio de agregación y/o mutaciones Tamaño de la subunidad de fibrilla (kDa) Referencia
Insulina
Amiloidosis localizada por inyección Insulina Dische y col. (1988)
Otras proteínas que forma amiloide
(in vitro) Otras proteínas Chiti y col. (1999)
Referencias de la tabla anterior
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Westermark, P., Johnson, K.H. & Pitkanen, P. (1985) Systemic amyloidosis: A review with emphasis on pathogenesis. Applied Physiology 3, 55-68. Wischik, CM., Novak, M., Thogersen, H.C., Edwards, P.C., Runswick, M.J., Jakes, R., Walker, J.E., Milstein, C, M., R. & Klug, A. (1988) Isolation of a fragment of tau derived from the core of the paired helical filament of Alzheimer's disease. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA 85, 4506-4510. [0172] Como se describe en el documento WO 02/055720 y la solicitud de patente de EE.UU. número 60/786.700 presentada el 29 de marzo de 2006 (título: Inhibidores de la agregación de proteínas), las diaminofenotiazinas tienen utilidad en la inhibición de tales enfermedades de agregación de proteínas. [0173] Por tanto, se apreciará que, excepto cuando el contexto lo requiera de otro modo, la descripción de realizaciones con respecto a proteína tau o proteínas similares a tau (por ejemplo, MAP2) debe considerarse que se aplica igualmente a las otras proteínas tratadas en este documento (por ejemplo, β-amiloide, sinucleína, prión, etc.) u otras proteínas que pueden iniciar o someterse a agregación patológica similar en virtud de un cambio conformacional en un dominio crítico para la propagación de la agregación, o que confiere estabilidad proteolítica al agregado que éste formó (véase, por ejemplo, el artículo de Wischik y col. en "Neurobiology of Alzheimers Disease", 2ª edición, 2000, Eds. Dawbam, D. y Allen, S.J., The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers, Oxford). Todas aquellas proteínas pueden denominarse en lo sucesivo en este documento "proteínas de enfermedades de agregación". [0174] Asimismo, cuando se hace mención a "agregación de tau-tau" o similares esto también puede considerarse que va aplicarse a otra "agregación de proteínas de agregación" tales como agregación de β-amiloides, agregación de priones, agregación de sinucleínas, etc. Lo mismo aplica para la "degradación proteolítica de tau", etc.
Proteínas de enfermedades de agregación preferidas
[0175] Las realizaciones preferidas de la invención se basan en la proteína tau. El término "proteína tau" como se usa en este documento se refiere generalmente a cualquier proteína de la familia de las proteínas tau. Las proteínas tau se caracterizan por ser una de entre un gran número de familias de proteínas que se copurifican con microtúbulos durante ciclos repetidos de ensamblaje y desensamblaje (véase, por ejemplo, Shelanski y col., 1973, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 70, pág. 765-768) y se conocen como proteínas asociadas a microtúbulos (MAP). Los miembros de la familia tau comparten las características comunes de tener un segmento del extremo N característico, secuencias de aproximadamente 50 aminoácidos insertadas en el segmento del extremo N, que están reguladas evolutivamente en el cerebro, una región de repetición en tándem característica constituida por 3 ó 4 repeticiones en tándem de 31-32 aminoácidos, y una cola del extremo C. [0176] MAP2 es la proteína asociada a microtúbulos predominante en el compartimento somatodendrítico (véase, por ejemplo, Matus, A., en "Microtubules" [Hyams y Lloyd, Eds.] pág. 155-166, John Wiley y Sons, Nueva York, USA). Las isoformas de MAP2 son casi idénticas a la proteína tau en la región de repetición en tándem, pero se diferencian sustancialmente tanto en la secuencia como en la extensión del dominio del extremo N (véase, por ejemplo, Tipoler y Gamer, 1994, Mol. Cerebro Res., vol. 26, pág. 218-224). Sin embargo, la agregación en la región de repetición en tándem no es selectiva para el dominio de repetición de tau. Por tanto, se apreciará que cualquier discusión en este documento en relación con la proteína tau o la agregación de tau-tau deberá considerarse que también se refiere a la agregación de tau-MAP2, agregación de MAP2-MAP2, etc. [0177] En una realización, la proteína es proteína tau. [0178] En una realización, la proteína es una sinucleína, por ejemplo, α-o βsinucleína. [0179] Si la proteína es proteína tau, en una realización de la presente invención se proporciona un procedimiento para inhibir la producción de agregados de proteínas, por ejemplo, en forma de filamentos pareados helicoidales (PHF), opcionalmente en ovillos neurofibrilares (NFT), en el cerebro de un mamífero, siendo el tratamiento como se describe anteriormente.
Enfermedades preferidas de agregación de proteínas
[0180] Notablemente, no es sólo en la enfermedad de Alzheimer (AD) en la que la proteína tau (y la función o el procesamiento anómalo de la misma) puede desempeñar una función. La patogénesis de trastornos neurodegenerativos tales como enfermedad de Pick y parálisis supranuclear progresiva (PSP) parece que guarda relación con una acumulación de agregados tau truncados patológicos en el giro dentado y en células piramidales estrelladas de la neocorteza, respectivamente. Otras demencias incluyen demencia fronto-temporal (FTD); parkinsonismo ligado al cromosoma 17 (FTDP-17); complejo de desinhibición-demencia-parkinsonismo-amiotrofia (DDPAC); degeneración pálido-ponto-nigral (PPND); síndrome de Guam-ALS; degeneración de pálido-nigro-luisiana (PNLD); degeneración cortico-basal (CBD) y otros (véanse, por ejemplo, el artículo de Wischik y col. en "Neurobiology of Alzheimer's Disease", 2ª Edición, 2000, Eds. Dawbam, D. y Allen, S.J., The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers, Oxford; especialmente la tabla 5.1). Todas estas enfermedades, que se caracterizan principalmente o parcialmente por la agregación de tau anormal, se denominan en este documento "tauopatías". [0181] Por tanto, en una realización, el estado de enfermedad es una tauopatía. [0182] En una realización, el estado de enfermedad es una tauopatía neurodegenerativa. [0183] En una realización, el estado de enfermedad es enfermedad de Alzheimer. [0184] En una realización, el tratamiento (por ejemplo, tratamiento de una tauopatía neurodegenerativa, por ejemplo, enfermedad de Alzheimer) puede ser opcionalmente en combinación con uno o varios agentes, por ejemplo, uno o más inhibidores de la colinesterasa (tales como donepezilo (también conocido como Aricept™), rivastigmina (también conocida como Exelon™), galantamina (también conocida como Reminil™), antagonistas de receptores de NMDA (tales como memantina (también conocida como Ebixa™, Namenda™), antagonistas de los receptores muscarínicos y/o inhibidores del procesamiento de proteínas precursoras amiloides que conducen a una generación potenciada de beta-amiloide. Estados de enfermedad tratados – Otros estados de enfermedad [0185] En una realización, el estado de enfermedad es cáncer de piel. [0186] En una realización, el estado de enfermedad es melanoma. [0187] En una realización, el estado de enfermedad es un estado de enfermedad vírica, bacteriana o protozoica. [0188] En una realización, el estado de enfermedad (protozoica) es malaria. [0189] En esta realización, el tratamiento puede ser en combinación con uno o más agentes antimicrobianos, por ejemplo, cloroquina y/o atovacuona. [0190] En una realización, el estado de enfermedad (vírica) es producida por hepatitis C, VIH o virus del Nilo Occidental (VNO). Otros usos [0191] Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento en un procedimiento de inactivación de un patógeno en una muestra (por ejemplo, una muestra de sangre o de plasma) que comprende las etapas de introducir el compuesto de DAPTZ en la muestra y exponer la muestra a la luz. [0192] Por ejemplo, en una realización, el procedimiento comprende las etapas de introducir el compuesto de DAPTZ en la muestra y luego exponer la muestra a la luz. Uso como ligandos [0193] Los compuestos de DAPTZ que pueden inhibir la agregación de proteína tau también podrán actuar de ligandos o marcas de proteína tau (o proteína tau agregada). Por tanto, en una realización, el compuesto de DAPTZ es un ligando de proteína tau (o proteína tau agregada). [0194] Tales compuestos de DAPTZ (ligandos) pueden incorporarse, conjugarse a, quelarse con o asociarse de otro modo a otros grupos químicos tales como isótopos detectables estables e inestables, radioisótopos, átomos emisores de positrones, marcas de resonancia magnética, colorantes, marcadores fluorescentes, grupos antigénicos, restos terapéuticos o cualquier otro resto que pueda ayudar en una aplicación pronóstica, diagnóstica o terapéutica. [0195] Por ejemplo, en una realización, el compuesto de DAPTZ es como se define en este documento, pero con la limitación adicional de que el compuesto incorpora, está conjugado a, está quelado con o está asociado de otro modo a una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, etc.) marcas detectables, por ejemplo, isótopos, radioisótopos, átomos emisores de positrones, marcas de resonancia magnética, colorantes, marcadores fluorescentes, grupos antigénicos o restos terapéuticos. [0196] En una realización, el compuesto de DAPTZ es un ligando además de una marca, por ejemplo, una marca para la proteína tau (o proteína tau agregada), e incorpora, está conjugada a, está quelada con o está asociada de otro modo a una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, etc.) marcas detectables. [0197] Por ejemplo, en una realización, el compuesto de DAPTZ es como se define anteriormente, pero con la limitación adicional de que el compuesto incorpora, está conjugado a, está quelado con o está asociado de otro modo a una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, etc.) marcas detectables. [0198] Los compuestos de DAPTZ marcados (por ejemplo, cuando se ligan a proteína tau o proteína tau agregada) pueden visualizarse o detectarse por cualquier medio adecuado, y el experto apreciará que puede usarse cualquier medio de detección adecuado como se conoce en la técnica. [0199] Por ejemplo, el compuesto de DAPTZ (ligando-marca) puede detectarse adecuadamente incorporando un átomo emisor de positrones (por ejemplo, 11C) (por ejemplo, como un átomo de carbono de uno o más sustituyentes de grupos alquilo, por ejemplo, sustituyentes de grupos metilo) y detectando el compuesto usando tomografía de emisión de positrones (PET) como se conoce en la técnica. [0200] Tales compuestos de DAPTZ marcados con 11C pueden prepararse adaptando los procedimientos descritos en este documento de formas conocidas, por ejemplo, en analogía a los procedimientos descritos en los documentos WO 02/075318 (véanse las Figuras 11a, 11b, 12) y WO 2005/030676. [0201] Por tanto, otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de marcado de proteína tau (o proteína tau agregada) que comprende la etapa de: (i) poner en contacto la proteína tau (o proteína tau agregada) con un compuesto de DAPTZ que incorpora, está conjugado a, está quelado con o está asociado de otro modo a una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, etc.) marcas detectables. [0202] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de detectar proteína tau (o proteína tau agregada) que comprende las etapas de: (i) poner en contacto la proteína tau (o proteína tau agregada) con un compuesto de DAPTZ que incorpora, está conjugado a, está quelado con o está asociado de otro modo a una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, etc.) marcas detectables, y (ii) detectar la presencia y/o cantidad de dicho compuesto unido a proteína tau (o proteína tau agregada). [0203] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un procedimiento de diagnóstico o pronóstico de una proteinopatía tau en un sujeto que se cree que padece la enfermedad que comprende las etapas de: (i) introducir en el sujeto un compuesto de DAPTZ que puede marcar proteína tau o proteína tau agregada, particularmente proteína tau (por ejemplo, un compuesto de DAPTZ que incorpora, está conjugado a, está quelado con o está asociado de otro modo a una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, etc.) marcas detectables); (ii) determinar la presencia y/o cantidad de dicho compuesto unido a proteína tau o proteína tau agregada en el cerebro del sujeto; y (iii) establecer una relación entre el resultado de la determinación hecha en (ii) con el estado de enfermedad del sujeto.
[0204] Otro aspecto de la presente invención se refiere a un compuesto de DAPTZ que puede marcar proteína tau o proteína tau agregada (por ejemplo, un compuesto de DAPTZ que incorpora, está conjugado a, está quelado con o está asociado de otro modo a una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, etc.) marcas detectables) para uso en un procedimiento de diagnóstico o pronóstico de una proteinopatía tau. [0205] Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un compuesto de DAPTZ que puede marcar proteína tau o proteína tau agregada, particularmente proteína tau (por ejemplo, un compuesto de DAPTZ que incorpora, está conjugado a, está quelado con o está asociado de otro modo a una o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, etc.) marcas detectables), en un procedimiento de preparación de un reactivo de diagnóstico o pronóstico para uso en el diagnóstico o pronóstico de una proteinopatía tau. [0206] Aquellos expertos en la materia apreciarán que en lugar de administrar ligandos/marcas de DAPTZ directamente podrían administrarse en una forma de precursor para la conversión en la forma activa (por ejemplo, forma de ligación, forma de marca) por un agente de activación presente en, o administrado a, el mismo sujeto. [0207] Los ligandos desvelados en este documento pueden usarse como parte de un procedimiento de diagnóstico o pronóstico. Pueden usarse para seleccionar un paciente para tratamiento o para evaluar la eficacia de un tratamiento o un agente terapéutico (por ejemplo, un inhibidor de la agregación de proteínas tau) administrado al sujeto. Tratamiento [0208] El término "tratamiento" como se usa en este documento en el contexto de tratar una afección se refiere generalmente a tratamiento y terapia tanto de un ser humano como de un animal (por ejemplo, en aplicaciones veterinarias), en el que se consigue algún efecto terapéutico deseado, por ejemplo, la inhibición del progreso de la afección, e incluye una reducción en la tasa de progreso, una detención en la tasa de progreso, regresión de la afección, mejora de la afección y cura de la afección. También se incluye el tratamiento como medida profiláctica (es decir, profilaxis, prevención). [0209] El término "cantidad terapéuticamente eficaz" como se usa en este documento se refiere a que la cantidad de un compuesto de DAPTZ, o un material, composición o dosificación que comprende un compuesto de DAPTZ es eficaz para producir algún efecto terapéutico deseado acorde a una relación de beneficio/riesgo razonable cuando se administra según una pauta de tratamiento deseada.
[0210] Similarmente, el término "cantidad profilácticamente eficaz" como se usa en este documento se refiere a que la cantidad de un compuesto de DAPTZ, o un material, composición o dosificación que comprende un compuesto de DAPTZ es eficaz para producir algún efecto profiláctico deseado acorde a una relación de beneficio/riesgo razonable cuando se administra según una pauta de tratamiento deseada. [0211] El término "tratamiento" incluye tratamientos y terapias de combinación, en el que dos o más tratamientos o terapias se combinan, por ejemplo, secuencialmente
o simultáneamente. Ejemplos de tratamientos y terapias incluyen, pero no se limitan a, quimioterapia (la administración de agentes activos que incluye, por ejemplo, fármacos, anticuerpos (por ejemplo, como en inmunoterapia), profármacos (por ejemplo, como en terapia fotodinámica, GDEPT, ADEPT, etc.); cirugía; radioterapia; y genoterapia. [0212] Por ejemplo, puede ser beneficioso combinar el tratamiento con un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento con uno o varios (por ejemplo, 1, 2, 3, 4) agentes o terapias. [0213] La combinación particular sería a discreción del médico que seleccionaría dosificaciones usando su conocimiento general común y pautas de dosificación conocidas para un médico experto. [0214] Los agentes (es decir, un compuesto de DAPTZ como se describe aquí, más uno o varios agentes) pueden administrarse simultáneamente o secuencialmente, y pueden administrarse en programas de dosis individualmente variables y mediante diferentes vías. Por ejemplo, cuando se administran secuencialmente, los agentes pueden administrarse a intervalos estrechamente separados (por ejemplo, durante un periodo de 5-10 minutos) o a intervalos mayores (por ejemplo, 1, 2, 3, 4 o más horas de separación, o incluso separados periodos más largos si se requiere), siendo la pauta de dosificación precisa acorde a las propiedades del (los) agente(s) terapéutico(s). [0215] Los agentes (es decir, un compuesto de DAPTZ como se describe aquí más uno o varios agentes) pueden formularse juntos en una forma farmacéutica única, o alternativamente, los agentes individuales pueden formularse por separado y presentarse juntos en forma de un kit, opcionalmente con instrucciones para su uso. Vías de administración [0216] El compuesto de DAPTZ, o composición farmacéutica que lo comprende, puede administrarse a un sujeto/paciente por cualquier vía de administración conveniente, tanto sistémicamente/periféricamente como tópicamente (es decir, en el sitio de acción deseado). [0217] Vías de administración incluyen, pero no se limitan a, oral (por ejemplo, por ingestión); bucal; sublingual; transdérmica (incluyendo, por ejemplo, mediante un parche, escayola, etc.); transmucosa (incluyendo, por ejemplo, mediante un parche, escayola, etc.); intranasal (por ejemplo, mediante spray nasal); ocular (por ejemplo, mediante colirios); pulmonar (por ejemplo, por terapia de inhalación o insuflación usando, por ejemplo, un aerosol, por ejemplo, por la boca o la nariz); rectal (por ejemplo, mediante supositorio o enema); vaginal (por ejemplo, mediante pesario); parenteral, por ejemplo, mediante inyección que incluye subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intracardiaca, intratecal, intraespinal, intracapsular, subcapsular, intraorbital, intraperitoneal, intratraqueal, subcuticular, intraarticular, subaracnoidea e intraesternal (incluyendo, por ejemplo, inyección por intracatéter en el cerebro); por implante de un depósito o cisterna, por ejemplo, subcutáneamente o intramuscularmente. El sujeto/paciente [0218] El sujeto/paciente puede ser un animal, un mamífero, un mamífero placentario, un roedor (por ejemplo, una cobaya, un hámster, una rata, un ratón), murino (por ejemplo, un ratón), un lagomorfo (por ejemplo, un conejo), aviar (por ejemplo, un ave), canino (por ejemplo, un perro), felino (por ejemplo, un gato), equino (por ejemplo, un caballo), porcino (por ejemplo, un cerdo), ovino (por ejemplo, una oveja), bovino (por ejemplo, una vaca), un primate, simio (por ejemplo, un simio inferior o simio superior), un simio inferior (por ejemplo, tití, babuino), un simio superior (por ejemplo, gorila, chimpancé, orangután, gibón), o un ser humano. [0219] Además, el sujeto/paciente puede estar en cualquiera de sus formas de desarrollo, por ejemplo, un feto. [0220] En una realización preferida, el sujeto/paciente es un ser humano. [0221] En una realización, el sujeto/paciente no es un ser humano. Formulaciones [0222] Aunque es posible que el compuesto de DAPTZ se use (por ejemplo, se administre) solo, frecuentemente se prefiere que esté presente como una composición o formulación. [0223] En una realización, la composición es una composición farmacéutica (por ejemplo, formulación, preparación, medicamento) que comprende un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
[0224] En una realización, la composición es una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento junto con uno o varios componentes farmacéuticamente aceptables muy conocidos para aquellos expertos en la materia que incluyen, pero no se limitan a, vehículos, diluyentes, excipientes, adyuvantes, cargas, tampones, conservantes, antioxidantes, lubricantes, estabilizadores, solubilizantes, tensioactivos (por ejemplo, agentes humectantes), agentes de enmascaramiento, agentes colorantes, aromatizantes y edulcorantes farmacéuticamente aceptables. [0225] En una realización, la composición comprende además otros agentes activos, por ejemplo, otros agentes terapéuticos o profilácticos. [0226] Los vehículos, diluyentes, excipientes, etc. adecuados pueden encontrarse en textos farmacéuticos convencionales. Véanse, por ejemplo, Handbook of Pharmaceutical Additives, 2ª edición (eds. M. Ash y I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, Nueva York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20ª edición, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; y Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2ª edición, 1994. [0227] Otro aspecto de la presente invención se refiere a procedimientos de preparación de una composición farmacéutica que comprende mezclar al menos un compuesto de DAPTZ radiomarcado con [11C] como se define en este documento junto con uno o varios componentes farmacéuticamente aceptables muy conocidos para aquellos expertos en la materia, por ejemplo, vehículos, diluyentes, excipientes, etc. Si se formula como unidades discretas (por ejemplo, comprimidos, etc.), cada unidad contiene una cantidad predeterminada (dosificación) del compuesto de DAPTZ. [0228] El término "farmacéuticamente aceptable" como se usa en este documento se refiere a compuestos, componentes, materiales, composiciones, formas farmacéuticas, etc., que son adecuados dentro del alcance del juicio médico razonable para uso en contacto con los tejidos del sujeto en cuestión (por ejemplo, ser humano) sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde a un relación de beneficio/riesgo razonable. Cada vehículo, diluyente, excipiente, etc., también deber ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros componentes de formulación. [0229] Las formulaciones pueden prepararse mediante cualquier procedimiento muy conocido en la técnica de la farmacia. Tales procedimientos incluyen la etapa de poner en asociación el compuesto de DAPTZ con un vehículo que constituye uno o más componentes complementarios. En general, las formulaciones se preparan asociando uniforme e íntimamente el compuesto de DAPTZ con vehículos (por ejemplo, vehículos líquidos, vehículo sólido finamente dividido, etc.), y luego moldeando el producto, si fuera necesario. [0230] La formulación puede prepararse para proporcionar liberación rápida o lenta; liberación inmediata, retrasada, pulsada o sostenida; o una combinación de las mismas. [0231] Las formulaciones adecuadas para administración parenteral (por ejemplo, mediante inyección) incluyen líquidos acuosos o no acuosos, isotónicos, libres de pirógenos, estériles (por ejemplo, disoluciones, suspensiones) en los que el compuesto de DAPTZ se disuelve, se suspende o se proporciona de otro modo (por ejemplo, en un liposoma u otra micropartícula). Tales líquidos pueden contener adicionalmente otros componentes farmacéuticamente aceptables tales como antioxidantes, tampones, conservantes, estabilizadores, agentes bacteriostáticos, agentes de suspensión, espesantes y solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre (u otro fluido corporal relevante) del receptor previsto. Ejemplos de excipientes incluyen, por ejemplo, agua, alcoholes, polioles, glicerina, aceites vegetales y similares. Ejemplos de vehículos isotónicos adecuados para uso en tales formulaciones incluyen inyección de cloruro sódico, disolución de Ringer o inyección de Ringer con lactato. Normalmente, la concentración del compuesto de DAPTZ en el líquido es de aproximadamente 1 ng/ml a aproximadamente 10 μg/ml, por ejemplo de aproximadamente 10 ng/ml a aproximadamente 1 μg/ml. Las formulaciones pueden presentarse en dosis unitarias o recipientes cerrados de múltiples dosis, por ejemplo, ampollas y viales, y pueden almacenarse en una condición liofilizada que sólo requiere la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de uso. Las disoluciones y suspensiones para inyección extemporánea pueden prepararse a partir de polvos estériles, gránulos y comprimidos. Ejemplos de algunas formulaciones preferidas [0232] Un aspecto de la presente invención se refiere a una unidad de dosificación (por ejemplo, un comprimido o cápsula farmacéutico) que comprende 20 a 300 mg de un compuesto de DAPTZ como se describe en este documento (por ejemplo, obtenido por, o que puede obtenerse por, un procedimiento como se describe en este documento; que tiene una pureza como se describe en este documento; etc.), y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable. [0233] En una realización, la unidad de dosificación es un comprimido. En una realización, la unidad de dosificación es una cápsula.
[0234] En una realización, la cantidad es 30 a 200 mg. En una realización, la cantidad es aproximadamente 30 mg. En una realización, la cantidad es aproximadamente 60 mg. En una realización, la cantidad es aproximadamente 100 mg. En una realización, la cantidad es aproximadamente 150 mg. En una realización, la cantidad es aproximadamente 200 mg. [0235] En una realización, el vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable es o comprende uno o ambos de un glicérido (por ejemplo, Gelucire 44/14 ®; glicéridos de lauroil macrogol-32 PhEur, USP) y dióxido de silicio coloidal (por ejemplo, Aerosil 200® al 2%; dióxido de silicio coloidal PhEur, USP). Dosificación [0236] Un experto en la materia apreciará que las dosificaciones apropiadas del compuesto de DAPTZ, y las composiciones que comprenden el compuesto de DAPTZ, pueden variar de paciente a paciente. La determinación de la dosificación óptima implicará generalmente el sopesar el nivel de beneficio terapéutico y cualquier riesgo o efecto secundario perjudicial. El nivel de dosificación seleccionado dependerá de una variedad de factores que incluyen, pero no se limitan a, la actividad del compuesto particular, la vía de administración, la hora de administración, la tasa de eliminación del compuesto, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales usados en combinación, la gravedad de la afección y la especie, sexo, edad, peso, condición, salud general e historia médica anterior del paciente. La cantidad de compuesto y la vía de administración será en último lugar a discreción del médico, veterinario o facultativo, aunque generalmente la dosificación se seleccionará para lograr concentraciones locales en el sitio de acción que logren el efecto deseado sin causar daño sustancial o efectos secundarios perjudiciales. [0237] La administración puede efectuarse en una dosis, continuamente o intermitentemente (por ejemplo, en dosis divididas a intervalos apropiados) durante el transcurso del tratamiento. Los procedimientos para determinar los medios más eficaces y la dosificación de administración son muy conocidos para aquellos expertos en la materia y variarán con la formulación usada para la terapia, el fin de la terapia, la(s) célula(s) diana que está(n) tratándose y el sujeto que está tratándose. Las administraciones únicas o múltiples pueden llevarse a cabo con el nivel y patrón de dosis que selecciona el médico práctico, veterinario o facultativo. [0238] En general, una dosis adecuada del compuesto de DAPTZ está en el intervalo de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 25 mg (más normalmente aproximadamente 1 μg a aproximadamente 10 mg) por kilogramo de peso corporal del sujeto por día. [0239] En una realización, el compuesto de DAPTZ se administra a un paciente humano según la siguiente pauta de dosificación: aproximadamente 100 mg, 3 veces al
5 día. [0240] En una realización, el compuesto de DAPTZ se administra a un paciente humano según la siguiente pauta de dosificación: aproximadamente 150 mg, 2 veces al día. [0241] En una realización, el compuesto de DAPTZ se administra a un paciente
10 humano según la siguiente pauta de dosificación: aproximadamente 200 mg, 2 veces al día. EJEMPLOS [0242] Los siguientes ejemplos se proporcionan únicamente para ilustrar la presente invención y no pretenden limitar el alcance de la invención que se describe en
15 este documento. Síntesis química Síntesis 1 3-Nitro-10H-fenotiazina
[0243]
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20
[0244] Se añadió nitrito de sodio (20,00 g, 210 mmoles) a una mezcla de 10Hfenotiazina (20,00 g, 50 mmoles), cloroformo (100 cm3) y ácido acético (20 cm3) y la mezcla se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Entonces se añadió ácido acético (20 cm3) y la mezcla se agitó durante otras 18 horas. La suspensión se filtró y 25 se lavó con ácido acético, etanol, agua y finalmente etanol para dar un sólido de color púrpura/marrón. El residuo se disolvió en DMF caliente y se dejó enfriar antes de filtrar el compuesto de di-nitro como un sólido de color púrpura. La concentración de la disolución de DMF y el lavado del precipitado con agua y metanol dio el compuesto de mono-nitro del título (15 g, 50%) como un sólido de color marrón; νmáx (KBr)/cm
30 1: 3328 (NH), 3278 (NH), 3229 (NH), 3119 (CH), 3049 (CH), 1557 (NO2), 1531 (NO2); δH (250 MHz; DMSO): 6,64 (5H, m, ArH), 7,68 (1H, d, J 2,5, ArH), 7,79-7,84 (1H,
dd, J 2,75, 6,5, ArH); δC (62,9 MHz; DMSO): 113,3 (ArC), 115,3 (ArC), 116,9 (ArC), 121,8 (ArC), 123,6 (ArC), 123,7 (ArC), 124,6 (ArC), 126,4 (ArC), 128,1 (ArC), 138,8 (ArC), 141,0 (ArC), 147,8 (ArC). Síntesis 2
5 3,11-Dinitro-10H-fenotiazina
[0245]
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[0246] Se siguió el procedimiento para la síntesis de 3-nitro-10H-fenotiazina usando 3-nitro-10H-fenotiazina (10,00 g, 41 mmoles), cloroformo (40 cm3), ácido
10 acético (2 x 10 cm3) y nitrito de sodio (11,86 g, 173 mmoles). El residuo obtenido se recristalizó en DMF dando el compuesto de di-nitro del título (6,60 g, 56%) como agujas de color púrpura; νmáx(KBr)/cm-1: 3331 (NH), 3294 (NH), 3229 (NH), 3101 (CH), 3067 (CH), 1602 (NO2), 1558 (NO2); δH (250 MHz; DMSO): 6,73-6,76 (2H, d, J 9, ArH), 7,78 (2H, s, ArH), 7,89-7,85 (2H, d, J 9, ArH).
15 Síntesis 3 1-(3,7-Dinitro-fenotiazin-10-il)-etanona [0247]
imagen1
[0248] Se agitó una disolución de 3,11-dinitro-10H-fenotiazina (3,00 g, 10,37
20 mmoles), anhídrido acético (15,88 g, 155,50 mmoles) y piridina (30 cm3) a reflujo durante 18 horas. Entonces, la disolución caliente se vertió cuidadosamente sobre agua con hielo. Se formó un precipitado y se filtró, se disolvió en diclorometano, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró dando un sólido de color marrón/naranja que se purificó por cromatografía en columna (SiO2, acetato de etilo:
25 éter de petróleo, 2:3, cargada como una disolución de diclorometano) dando el compuesto del título (2,46 g, 71%) como un sólido de color amarillo claro que pudo recristalizarse en acetona dando agujas de color amarillo claro; νmáx(KBr)/cm-1: 3091 (CH), 3063 (CH), 1680 (C=O), 1575 (NO2), 1510 (NO2); δH (250 MHz; CDCl3): 2,28 (3H, s, CH3), 7,65-7,69 (2H, d, J 9, ArH), 8,22-8,26 (2H, dd, J 2,75, 8,75, ArH), 8,338,32 (2H, d, J 2,5, ArH); δC (62,9 MHz; CDCl3): 168,2 (C=O), 146,3 (ArC), 143,3 (ArC), 133,6 (ArC), 127,8 (ArC), 123,4 (ArC), 122,9 (ArC), 23,1 (CH3); m/z (ES)
5 331,0 (80%, [M]+). Síntesis 4 1-(3,7-Diamino-fenotiazin-10-il)-etanona [0249]
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10 [0250] Se calentó una mezcla de 1-(3,7-dinitro-fenotiazin-10-il)-etanona (2 g, 6,04 mmoles), cloruro de estaño (II) dihidratado (14,17 g, 62,8 mmoles) y etanol (50 cm3) a reflujo y se agitó a esta temperatura durante 5 horas. Entonces, la mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió sobre agua con hielo. El pH se ajustó a 7 con hidrogenocarbonato de sodio al 5% antes de extraer el producto con acetato de etilo (3
15 x 50 cm3). Los extractos se lavaron con salmuera y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron dando el compuesto del título (1,64 g, 100%) como un sólido de color azul púrpura; νmáx (KBr)/cm-1: 3445 (NH), 3424 (NH), 3368 (NH), 3322 (NH), 3203 (NH), 3054 (CH), 2995 (CH), 1706 (C=O), 1650 (NO2), 1590 (NO2); δH(250 MHz; CDCl3): 2,01 (3H, s, CH3), 5,09-5,43 (4H, s a, NH), 6,47-6,51
20 (2H, dd, J 1,5, 8,25, ArH), 6,61 (2H, s, ArH), 7,11-7,15 (2H, d, J 8, ArH); δC (62,9 MHz; CDCl3): 169,1 (C=O), 147,2 (ArC), 128,1 (ArC), 127,6 (ArC), 127,3 (ArC), 112,3 (ArC), 111,5 (ArC), 22,6 (CH3); m/z (ES) 293,9 (95%, [M + H, Na]+), 272,0 (20%, [M + H]+), 227,9 (100%, [M + H, -Ac]+). Síntesis 5
25 Bis(cloruro de hidrógeno) de 3,7-diamino-fenotiazina (B4)
[0251]
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[0252] Se disolvió 1-(3,7-diamino-fenotiazin-10-il)-etanona (0,25 g, 0,921 mmoles) en ácido clorhídrico acuoso (5 N, 10 cm3) y la disolución se calentó a reflujo y se agitó durante 30 minutos. La concentración de la mezcla de reacción dio el compuesto del título como un sólido de color azul claro. δH (250 MHz; D2O): 6,60
5 (2H, d a, ArH), 7,07 (4H, s a, ArH). Síntesis 6 1-(3,7-Bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona [0253]
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10 [0254] Se disolvió 1-(3,7-diamino-fenotiazin-10-il)-etanona (0,25 g 0,92 mmoles) en DMSO (3 cm3). Se añadieron tolueno (10 cm3), yodometano (1,96 g, 13,8 mmoles), bromuro de tetrabutilamonio (50 mg) y finalmente disolución acuosa de hidróxido sódico (50%, 1,25 cm3). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Entonces se añadieron hidróxido sódico acuoso adicional (50%, 1,25 cm3) y
15 yodometano (1,96 g, 13,8 mmoles). La mezcla se dejó en agitación durante otras 3 horas a temperatura ambiente antes de añadirse una tercera alícuota de hidróxido sódico acuoso (50%, 1,25 cm3) y yodometano (1,96 g, 13,8 mmoles) y la mezcla se agitó durante otras 18 horas. La suspensión espesa se lavó con agua (3 x 75 cm3) y se recogió el extracto de tolueno. El agua se extrajo con diclorometano (3 x 50 cm3) y los
20 extractos se combinaron con el tolueno y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron dando un sólido de color púrpura oscuro. El residuo se purificó por cromatografía en columna (SiO2, acetato de etilo: éter de petróleo, 2:3, cargada como una disolución de diclorometano) dando el producto compuesto del título (0,12 g, 40%) como un sólido de color púrpura claro; νmáx(KBr)/cm-1: 2910
25 (CH), 2876 (CH), 2856 (CH), 2799 (CH), 1659 (C=O), 1596 (NO2), 1502 (NO2); δH (250 MHz; CDCl3): 2,16 (3H, s, CH3), 2,93 (12H, s, NCH3), 6,59-6,62 (2H, d, J 8,5, ArH), 6,69-6,71 (2H, d, J 2,75, ArH), 7,08-7,47 (2H, s a, ArH); δC (62,9MHz; CDCl3): 170,3 (C=O), 148,9 (ArC), 127,2 (ArC), 127,1 (ArC), 127,0 (ArC), 110,9 (ArC), 110,7 (ArC), 40,7 (NCH3), 22,9 (CH3).
30 Síntesis 7
Bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina (B3)
[0255]
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[0256] Se disolvió 1-(3,7-bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona (0,5 g, 1,84
5 mmoles) en ácido clorhídrico acuoso (5 N, 15 cm3) y la disolución se calentó a temperatura de reflujo y se agitó durante 30 minutos. La concentración de la mezcla de reacción dio el compuesto del título como un sólido de color verde/azul; δH (250MHz; D2O): 3,18 (12H, s, NCH3), 6,67 (2H, d, J 8,5, ArH), 7,16 (4H, s a, ArH); δC (62,9MHz; D2O): 144,3 (ArC), 138,9 (ArC), 122,4 (ArC), 120,8 (ArC), 120,7 (ArC),
10 117,6 (ArC), 48,9 (NCH3). Síntesis 8 Yoduro de metiltioninio [0257]
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15 [0258] A un matraz redondo se añadió cloruro de metiltioninio (MTC, azul de metileno) (2 g, 6,25 mmoles) y agua (50 cm3) y la mezcla se agitó durante 10 minutos
o hasta que el sólido se disolvió. Entonces se añadió yoduro de potasio (1,56 g, 9,4 mmoles) a la mezcla y se formó una suspensión de color negro verdoso. La reacción se calentó hasta ebullición y se dejó enfriar naturalmente dando el compuesto del título
20 (2,03 g, 79%) como agujas de color verde brillante. Anal. calc. para C16H18N3SI: C, 46,72; H, 4,41; N, 10,22; S, 7,80; I, 30,85. Hallado: C, 46,30; H, 4,21; N, 10,14; S, 7,86; I, 29,34. Síntesis 9 Bis(yoduro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina (B6)
25 [0259]
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[0260] A un matraz redondo se añadió yoduro de metiltioninio (2 g, 4,86 mmoles), etanol (100 cm3) y yoduro de etilo (75,8 g, 486 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo durante 18 horas cuando el color cambió de verde/azul a marrón con
5 un precipitado amarillo. Una vez enfriada hasta temperatura ambiente, la mezcla se filtró y se lavó con éter dietílico (20 cm3) dando el compuesto del título (1,99 g, 76%) como un sólido de color verde claro. δH (250 MHz; D2O): 3,20 (12H, s, NCH3), 6,76 (2H, d, J 8,5, ArH), 7,22 (2H, s a, ArH); δC (62,9 MHz; D2O): 145,0 (ArC), 139,3 (ArC), 122,6 (ArC), 121,1 (ArC), 120,9 (ArC), 117,9 (ArC), 48,9 (NCH3).
10 Síntesis 10 1-(3,7-Bis-dietilamino-fenotiazin-10-il)-etanona [0261]
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[0262] A un matraz redondo de 25 cm3 seco se añadió cloruro de etiltioninio cinc
15 (0,5 g, 1,13 mmoles) y etanol (10 cm3). Entonces se añadió fenilhidracina (0,134 g, 1,24 mmoles) gota a gota bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó a 25°C durante 1 hora y se concentró a alto vacío. Se añadió piridina (50 cm3) y anhídrido acético y la mezcla se agitó durante 18 horas a 60°C. La disolución se abrió a hielo/agua (250 cm3) y los extractos orgánicos se extrajeron en acetato de etilo (3 x 50
20 cm3). Los extractos se lavaron con disolución saturada de sulfato de cobre y se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron dando el producto bruto como un aceite de color marrón que se purificó usando cromatografía ultrarrápida con un eluyente de 40% de acetato de etilo : 60% de esencia de petróleo a 40-60°C y sílice 4063μ 60Å� dando el compuesto del título (0,18 g, 41%) como un sólido vítreo de color verde. δH (250 MHz; CDCl3): 7,0-7,5 (2H, s a, ArH), 6,64 (2H, s, ArH), 6,52 (2H, d, ArH), 3,35 (8H, q, 7, NCH2), 2,18 (3H, s, CH3), 1,16 (12H, t, 7, CH3); δC (62,9 MHz; CDCl3): 12,5 (CH3), 22,9 (CH3), 44,6 (NCH2), 110,1 (ArC), 127,4 (ArC), 146,5 (ArC), 170,2 (C=O).
5 Síntesis 11 Bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetraetil-10H-fenotiazina-3,7-diamina [0263]
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[0264] A un matraz redondo de 25 cm3 se añadió 3,7-dietilamino-10-acetil
10 fenotiazina (0,125 g, 0,33 mmoles) y ácido clorhídrico acuoso (5 M, 5 cm3). La mezcla se calentó a 100°C durante 2 horas antes de enfriarse hasta temperatura ambiente y se concentró dando el compuesto del título (0,11 g, 81%) como un sólido vítreo de color verde amarillento. δH (250 MHz; CD3OD): 7,07 (4H, a, ArH), 6,65 (2H, a, ArH), 3,35 (8H, a, NCH2), 0,97 (12H, a, CH3); δC (62,9 MHz; CD3OD): 10,8 (CH3), 55,1 (NCH2),
15 116,6 (ArC), 120,4 (ArC), 121,5 (ArC), 123,6 (ArC), 132,6 (ArC), 144,5 (ArC). Síntesis 12 1-(3,7-Bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona [0265]
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20 [0266] Síntesis usando metilhidracina/piridina en dos etapas. A un matraz redondo de 250 cm3 situado bajo una atmósfera de argón se añadió cloruro de metiltioninio trihidratado (26,74 mmoles, 10 g), etanol (100 cm3) y metilhidracina (58,83 mmoles, 2,71 g). La mezcla se calentó hasta 40°C y se agitó durante 2 horas. La suspensión de color amarillo/verde se enfrió hasta 5°C y se filtró bajo argón, se lavó con etanol (20
25 cm3) y se secó dando azul de leuco-metileno como un sólido de color verde claro. Al
producto de leuco se añadió anhídrido acético (40 cm3) y piridina (10 cm3) y la disolución se calentó a 100°C durante 18 horas. Entonces, la mezcla enfriada se vertió cuidadosamente sobre agua con hielo mientras se agitaba dando un precipitado, que se filtró, se lavó con agua y se secó a 60°C durante 2 horas dando el compuesto del título 5 (5,82 g, 66%) como un sólido de color marrón claro. Pf 137°C; νmáx(KBr)/cm-1 2910 (CH), 2876 (CH), 2856 (CH), 2799 (CH), 1659 (C=O), 1596 (NO2), 1502 (NO2); δH (250MHz; CDCl3) 2,16 (3H, s, CH3), 2,93 (12H, s, NCH3), 6,59-6,62 (2H, d, J 8,5, ArH), 6,69-6,71 (2H, d, J 2,75, ArH), 7,08-7,47 (2H, s a, ArH); δC (62,9MHz; CDCl3) 170,3 (C=O), 148,9 (ArC), 127,2 (ArC), 127,1 (ArC), 127,0 (ArC), 110,9 (ArC), 110,7 10 (ArC), 40,7 (NCH3), 22,9 (CH3); m/z (ES) 284,2 (100%, [M -OAc]+), 328,1 (15%, [M
+ H]+), 350,1 (41 %, [M + Na]+). Síntesis 13 1-(3,7-Bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona
[0267]
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[0268] Síntesis usando metilhidracina/base de Hunig en una etapa. A un recipiente de reactor de 5000 cm3 bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió cloruro de metiltioninio trihidratado (0,54 moles, 200 g) y acetonitrilo (1000 cm3). Se añadió metilhidracina (1,07 moles, 49,36 g) gota a gota a 1,5 ml por minuto. La temperatura 20 de la mezcla aumentó hasta 32°C y se agitó durante 20 minutos. A la suspensión de color amarillo/verde se añadió anhídrido acético (5,35 moles, 541 g) y luego se añadió base de Hunig (diisopropiletilamina) (1,55 moles, 200 g). La mezcla se calentó a 90°C durante 2 horas. Entonces, la mezcla enfriada se vertió cuidadosamente en agua con hielo (2000 cm3) en diez porciones de 200 cm3 mientras se agitaba dando un 25 precipitado. El precipitado se agitó durante 45 minutos antes de filtrarse, se lavó con agua (3 x 250 cm3) y se secó al aire durante 30 minutos. El material bruto se cristalizó en etanol caliente (2750 cm3) dando el compuesto del título (112,1 g, 64%) como un sólido de color gris claro. Pf 137°C; νmáx(KBr)/cm-1 2910 (CH), 2876 (CH), 2856 (CH), 2799 (CH), 1659 (C=O), 1596 (NO2), 1502 (NO2); δH (250MHz; CDCl3) 2,16 30 (3H, s, CH3), 2,93 (12H, s, NCH3), 6,59-6,62 (2H, d, J 8,5, ArH), 6,69-6,71 (2H, d, J
2,75, ArH), 7,08-7,47 (2H, s a, ArH); δC (62,9MHz; CDCl3) 170,3 (C=O), 148,9 (ArC), 127,2 (ArC), 127,1 (ArC), 127,0 (ArC), 110,9 (ArC), 110,7 (ArC), 40,7 (NCH3), 22,9 (CH3); m/z (ES) 284,2 (100%, [M -OAc]+), 328,1 (15%, [M + H]+), 350,1 (41%, [M + Na]+).
5 Síntesis 14 1-(3,7-Bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona [0269]
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[0270] Síntesis usando metilhidracina/piridina en una etapa. A un matraz redondo
10 de 250 cm3 bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió cloruro de metiltioninio trihidratado (26,74 mmoles, 10 g) y acetonitrilo (50 cm3). Se añadió metilhidracina (53,5 mmoles, 2,46 g) en cuatro porciones iguales durante un periodo de tiempo de 30 minutos. La temperatura de la mezcla se mantuvo a 35°C con un baño de agua fría y se agitó durante 30 minutos. A la suspensión de color amarillo/verde se añadió anhídrido
15 acético (267 mmoles, 27,3 g) y piridina (80,2 mmoles, 6,35 g). La mezcla se calentó a 90°C durante 2 horas. Entonces, la mezcla enfriada se vertió cuidadosamente en agua con hielo (200 cm3) en diez porciones iguales mientras se agitaba dando un precipitado. El precipitado se agitó durante 30 minutos antes de filtrarse, se lavó con agua (3 x 50 cm3) y se secó al aire durante 30 minutos. El material bruto se cristalizó
20 en etanol caliente (120 cm3) dando el compuesto del título (5,97 g, 68%) como un sólido de color gris claro. Pf 137°C; νmáx(KBr)/cm-1 2910 (CH), 2876 (CH), 2856 (CH), 2799 (CH), 1659 (C=O), 1596 (NO2), 1502 (NO2); δH (250MHz; CDCl3) 2,16 (3H, s, CH3), 2,93 (12H, s, NCH3), 6,59-6,62 (2H, d, J 8,5, ArH), 6,69-6,71 (2H, d, J 2,75, ArH), 7,08-7,47 (2H, s a, ArH); δC (62,9MHz; CDCl3) 170,3 (C=O), 148,9
25 (ArC), 127,2 (ArC), 127,1 (ArC), 127,0 (ArC), 110,9 (ArC), 110,7 (ArC), 40,7 (NCH3), 22,9 (CH3); m/z (ES) 284,2 (100%, [M -OAc]+, 328,1 (15%, [M + H]+), 350,1 (41%, [M + Na]+). Síntesis 15 1-(3,7-Bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona
30 [0271]
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[0272] Síntesis usando borohidruro de sodio/piridina en una etapa. A un matraz redondo de 500 cm3 bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió cloruro de metiltioninio trihidratado (0,134 moles, 50 g) y acetonitrilo (250 cm3). Se añadió borohidruro de 5 sodio (0,174 moles, 6,6 g) en cuatro porciones iguales durante un periodo de tiempo de 30 minutos. La temperatura de la mezcla se mantuvo a 35°C con un baño de agua fría y se agitó durante 30 minutos. A la suspensión de color amarillo/verde se añadió anhídrido acético (0,535 moles, 55 g) y piridina (0,174 moles, 13,76 g). La mezcla se calentó a 90°C durante 2 horas. Entonces, la mezcla enfriada se vertió cuidadosamente 10 en agua con hielo (250 cm3) en diez porciones iguales mientras se agitaba dando un precipitado. El precipitado se agitó durante 30 minutos antes de filtrarse, se lavó con agua (3 x 50 cm3) y se secó al aire durante 30 minutos. El material bruto se cristalizó en etanol caliente (500 cm3) dando el compuesto del título (26,7 g, 61%) como un sólido de color gris claro. Pf 137°C; νmáx(KBr)/cm-1 2910 (CH), 2876 (CH), 2856 15 (CH), 2799 (CH), 1659 (C=O), 1596 (NO2), 1502 (NO2); δH (250MHz; CDCl3) 2,16 (3H, s, CH3), 2,93 (12H, s, NCH3), 6,59-6,62 (2H, d, J 8,5, ArH), 6,69-6,71 (2H, d, J 2,75, ArH), 7,08-7,47 (2H, s a, ArH); δC (62,9MHz; CDCl3) 170,3 (C=O), 148,9 (ArC), 127,2 (ArC), 127,1 (ArC), 127,0 (ArC), 110,9 (ArC), 110,7 (ArC), 40,7 (NCH3), 22,9 (CH3); m/z (ES) 284,2 (100%, [M -OAc]+), 328,1 (15%, [M + H]+),
20 350,1 (41%, [M + Na]+). Síntesis 16 1-(3,7-Bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona
[0273]
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25 [0274] Síntesis usando borohidruro de sodio/base de Hunig en una etapa. A un matraz redondo de 500 cm3 bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió cloruro de
metiltioninio trihidratado (80,2 mmoles, 30 g) y acetonitrilo (150 cm3). Se añadió borohidruro de sodio (104 mmoles, 3,94 g) en cuatro porciones iguales durante un periodo de tiempo de 30 minutos. La temperatura de la mezcla se mantuvo a 35°C con un baño de agua fría y se agitó durante 30 minutos. A la suspensión de color 5 amarillo/verde se añadió anhídrido acético (321 mmoles, 32,75 g) y base de Hunig (diisopropiletilamina) (120 mmoles, 15,55 g). La mezcla se calentó a 90°C durante 2 horas. Entonces, la mezcla enfriada se vertió cuidadosamente en agua con hielo (200 cm3) en diez porciones iguales mientras se agitaba dando un precipitado. El precipitado se agitó durante 30 minutos antes de filtrarse, se lavó con agua (3 x 50 cm3) y se secó 10 al aire durante 30 minutos. El material bruto se cristalizó en etanol caliente (300 cm3) dando el compuesto del título (13,55 g, 52%) como un sólido de color gris claro. Pf 137°C; νmáx(KBr)/cm-1 2910 (CH), 2876 (CH), 2856 (CH), 2799 (CH), 1659 (C=O), 1596 (NO2), 1502 (NO2); δH (250MHz; CDCl3) 2,16 (3H, s, CH3), 2,93 (12H, s, NCH3), 6,59-6,62 (2H, d, J 8,5, ArH), 6,69-6,71 (2H, d, J 2,75, ArH), 7,08-7,47 (2H, s
15 a, ArH); δC (62,9MHz; CDCl3) 170,3 (C=O), 148,9 (ArC), 127,2 (ArC), 127,1 (ArC), 127,0 (ArC), 110,9 (ArC), 110,7 (ArC), 40,7 (NCH3), 22,9 (CH3); m/z (ES) 284,2 (100%, [M -OAc]+), 328,1 (15%, [M + H]+), 350,1 (41%, [M + Na]+). Síntesis 17 1-(3,7-Bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona
20 [0275]
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[0276] Síntesis usando hidracina monohidratada/piridina en una etapa. A un matraz redondo de 250 cm3 bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió cloruro de metiltioninio trihidratado (26,74 mmoles, 10 g) y acetonitrilo (50 cm3). Se añadió 25 hidracina monohidratada (58,8 mmoles, 2,95 g) y la mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 10 minutos antes de enfriarse hasta 25°C. A la suspensión de color amarillo/verde se añadió anhídrido acético (424 mmoles, 43,3 g) y piridina (124 mmoles, 9,78 g). La mezcla se calentó a 90°C durante 2 horas. Entonces, la mezcla enfriada se vertió cuidadosamente en agua con hielo (100 cm3) en diez porciones 30 iguales mientras se agitaba dando un precipitado. El precipitado se agitó durante 30
minutos antes de filtrarse, se lavó con agua (3 x 50 cm3) y se secó al aire durante 30 minutos. El material bruto se cristalizó en etanol caliente (100 cm3) dando el compuesto del título (4,87 g, 56%) como un sólido gris claro. Pf 137°C; νmáx(KBr)/cm1 2910 (CH), 2876 (CH), 2856 (CH), 2799 (CH), 1659 (C=O), 1596 (NO2), 1502
5 (NO2); δH (250MHz; CDCl3) 2,16 (3H, s, CH3), 2,93 (12H, s, NCH3), 6,59-6,62 (2H, d, J 8,5, ArH), 6,69-6,71 (2H, d, J 2,75, ArH), 7,08-7,47 (2H, s a, ArH); δC (62,9MHz; CDCl3) 170,3 (C=O), 148,9 (ArC), 127,2 (ArC), 127,1 (ArC), 127,0 (ArC), 110,9 (ArC), 110,7 (ArC), 40,7 (NCH3), 22,9 (CH3); m/z (ES) 284,2 (100%, [M -OAc]+), 328,1 (15%, [M + H]+), 350,1 (41%, [M + Na]+).
10 Síntesis 18 1-(3,7-Bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)-etanona [0277]
imagen1
[0278] Síntesis usando hidracina monohidratada/base de Hunig en una etapa. A un
15 matraz redondo de 250 cm3 bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió cloruro de metiltioninio trihidratado (80,2 mmoles, 30 g) y acetonitrilo (150 cm3). Se añadió hidracina monohidratada (176,5 mmoles, 8,84 g) y la mezcla se calentó a reflujo y se agitó durante 10 minutos antes de enfriarse hasta 25°C. A la suspensión de color amarillo/verde se añadió anhídrido acético (794 mmoles, 81,2 g) y base de Hunig
20 (diisopropiletilamina) (232 mmoles, 29,97 g). La mezcla se calentó a 90°C durante 2 horas. Entonces, la mezcla enfriada se vertió cuidadosamente en agua con hielo (400 cm3) en diez porciones iguales mientras se agitaba dando un precipitado. El precipitado se agitó durante 30 minutos antes de filtrarse, se lavó con agua (3 x 100 cm3) y se secó al aire durante 30 minutos. El material bruto se cristalizó en etanol caliente (400 cm3)
25 dando el compuesto del título (17,15 g, 65%) como un sólido de color gris claro. Pf 137°C; νmáx(KBr)/cm-1 2910 (CH), 2876 (CH), 2856 (CH), 2799 (CH), 1659 (C=O), 1596 (NO2), 1502 (NO2); δH (250MHz; CDCl3) 2,16 (3H, s, CH3), 2,93 (12H, s, NCH3), 6,59-6,62 (2H, d, J 8,5, ArH), 6,69-6,71 (2H, d, J 2,75, ArH), 7,08-7,47 (2H, s a, ArH); δC (62,9MHz; CDCl3) 170,3 (C=O), 148,9 (ArC), 127,2 (ArC), 127,1 (ArC),
30 127,0 (ArC), 110,9 (ArC), 110,7 (ArC), 40,7 (NCH3), 22,9 (CH3); m/z (ES) 284,2 (100%, [M -OAc]+), 328,1 (15%, [M + H]+), 350,1 (41%, [M + Na]+). Síntesis 19 3,11-Dinitro-10H-fenotiazina
[0279]
imagen2
[0280] Se añadieron 10H-fenotiazina (20,00 g, 100 mmoles), diclorometano (100 cm3) y ácido acético (40 cm3) a nitrito de sodio (20,07 g, 300 mmoles) y la mezcla se agitó durante 10 minutos a temperatura ambiente. Entonces se añadió más ácido acético (40 cm3), diclorometano (100 cm3) y nitrito de sodio (20,07 g, 300 mmoles). Se 10 añadieron otros 120 cm3 de ácido acético para intentar romper la espesa mezcla de reacción. La mezcla se agitó durante 3 horas. La suspensión se filtró y se lavó con 100 cm3 de cada uno de etanol, agua y finalmente etanol dando un sólido de color púrpura/marrón. El residuo se agitó en DMF caliente y se dejó enfriar antes de filtrar el producto de dinitro, que se lavó con etanol (150 cm3) y se secó dando el compuesto del
15 título (24,88 g, 86%) como un sólido de color marrón; νmáx(KBr)/cm-1 3331 (NH), 3294 (NH), 3229 (NH), 3101 (CH), 3067 (CH), 1602 (NO2), 1558 (NO2); δH (250MHz; DMSO) 6,73-6,76 (2H, d, J 9, ArH), 7,78 (2H, s, ArH), 7,89-7,85 (2H, d, J 9, ArH). Síntesis 20 1-(3,7-Bis-dietilamino-fenotiazin-10-il)-etanona
20 [0281]
imagen1
[0282] A un matraz redondo de 250 cm3 bajo una atmósfera de nitrógeno se añadió nitrato de etiltioninio monohidratado (7,13 mmoles, 3 g) y acetonitrilo (20 cm3). Se añadió hidracina monohidratada (16,4 mmoles, 0,82 g) y la mezcla se calentó 25 a reflujo y se agitó durante 10 minutos antes de enfriarse hasta 25°C. A la disolución de color marrón se añadió anhídrido acético (114 mmoles, 11,65 g) y base de Hunig (diisopropiletilamina) (21,4 mmoles, 2,77 g). La mezcla se calentó a 90°C durante 2
horas. Entonces, la mezcla enfriada se vertió cuidadosamente en agua con hielo (40 cm3) en diez porciones iguales mientras se agitaba dando un precipitado. El precipitado se agitó durante 30 minutos antes de filtrarse, se lavó con agua (3 x 25 cm3) y se secó al aire durante 30 minutos. El material bruto se cristalizó en etanol caliente (50 cm3)
5 dando el compuesto del título (1,73 g, 63%) como un sólido de color gris claro. δH (250 MHz; CDCl3) 7,0-7,5 (2H, s a, ArH), 6,64 (2H, s, ArH), 6,52 (2H, d, ArH), 3,35 (8H, q, 7, NCH2), 2,18 (3H, s, CH3), 1,16 (12H, t, 7, CH3); δC (62,9 MHz; CDCl3) 12,5 (CH3 ), 22,9 (CH3), 44,6 (NCH2), 110,1 (ArC), 127,4 (ArC), 146,5 (ArC), 170,2 (C=O).
10 Síntesis 21 Bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetraetil-10H-fenotiazina-3,7-diamina [0283]
imagen1
[0284] A un matraz redondo se añadió 1-(3,7-bis-dietilamino-fenotiazin-10-il)
15 etanona (0,5 g, 1,30 mmoles), etanol (5 cm3) y ácido clorhídrico (37%, 1,3 cm3) y la disolución se calentó a 80°C durante 1 hora. Una vez enfriada hasta temperatura ambiente, la mezcla se concentró dando el compuesto del título (0,54 g, 100%) como un cristal de color verde claro. δH (250 MHz; CD3OD) 7,07 (4H, a, ArH), 6,65 (2H, a, ArH), 3,35 (8H, a, NCH2), 0,97 (12H, a, CH3); δC (62,9 MHz; CD3OD) 10,8 (CH3),
20 55,1 (NCH2), 116,6 (ArC), 120,4 (ArC), 121,5 (ArC), 123,6 (ArC), 132,6 (ArC), 144,5 (ArC). Síntesis 22 Bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetraetil-10H-fenotiazina-3,7-diamina [0285]
imagen4
[0286] A un matraz redondo se añadió 1-(3,7-bis-dietilamino-fenotiazin-10-il)
etanona (0,5 g, 1,30 mmoles), etanol (5 cm3) y ácido bromhídrico (48%, 0,75 cm3) y la disolución se calentó a 80°C durante 1 hora. Una vez enfriada hasta temperatura ambiente, la mezcla se concentró dando el compuesto del título (0,65 g, 100%) como un cristal de color amarillo claro. δH (250 MHz; D2O) 7,05 (4H, a, ArH), 6,79 (2H, d a,
5 ArH), 3,43 (8H, a, NCH2), 1,05 (12H, t a, CH3); δC (62,9 MHz; D2O) 12,3 (CH3), 56,2 (NCH2), 117,9 (ArC), 121,4 (ArC), 122,4 (ArC), 124,5 (ArC), 133,5 (ArC), 145,1 (ArC). Síntesis 23 Bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina
10 [0287]
imagen1
[0288] A un matraz redondo se añadió 1-(3,7-bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)etanona (1 g, 3,05 mmoles), etanol (10 cm3) y ácido clorhídrico (37%, 3 cm3) y la disolución se calentó a 80°C durante 1 hora. Una vez enfriada hasta temperatura 15 ambiente se añadió éter dietílico mientras se agitaba hasta que se obtuvo una disolución turbia constante. Después de algún tiempo se formó un precipitado, que se filtró y se lavó con éter dietílico (10 cm3) dando el compuesto del título (0,98 g, 90%) como un sólido de color verde claro. Pf (ºC) 230°C; νmáx (KBr)/cm-1 3500-3229 (NH), 3061 (CH), 3021 (CH), 2948 (CH), 2879 (CH), 2679 (CH), 2601 (CH), 1604 (CH),
20 1483 (CH), 1318 (CH); δH (250MHz; D2O) 3,18 (12H, s, NCH3), 6,67 (2H, d, J 8,5, ArH), 7,16 (4H, s a, ArH); δC (62,9MHz; D2O) 144,3 (ArC), 138,9 (ArC), 122,4 (ArC), 120,8 (ArC), 120,7 (ArC), 117,6 (ArC), 48,9 (NCH3); m/z (ES) 286,1 (100%, [M -H, 2Cl]+, 285,1 (40%), 284,1 (41%, [M -3H, 2Cl]+). Síntesis 24
25 Bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina
[0289]
imagen1
[0290] A un matraz redondo se añadió 1-(3,7-bis-dimetilamino-fenotiazin-10-il)
etanona (1 g, 3,05 mmoles), etanol (10 cm3) y ácido bromhídrico (48%, 4 cm3) y la
disolución se calentó a 80°C durante 1 hora. Una vez enfriada hasta temperatura
ambiente se formó un precipitado, que se filtró y se lavó con éter dietílico (10 cm3)
5 dando el producto (1,22 g, 89%) como un sólido de color mostaza claro. Pf (ºC)
230°C; νmáx (KBr)/cm-1 3500-3229 (NH), 3061 (CH), 3021 (CH), 2948 (CH), 2879
(CH), 2679 (CH), 2601 (CH), 1604 (CH), 1483 (CH), 1318 (CH); δH (250MHz; D2O)
3,18 (12H, s, NCH3), 6,66 (2H, d, J 8,75, ArH), 7,15 (4H, s, ArH); δC (62,9MHz; D2O)
144,3 (ArC), 138,9 (ArC), 122,4 (ArC), 120,8 (ArC), 120,7 (ArC), 117,6 (ArC), 48,9 10 (NCH3).
Síntesis 25
Bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetraetil-10H-fenotiazina-3,7-diamina
[0291]
imagen1
15 [0292] A un matraz redondo se añadió 1-(3,7-bis-dietilamino-fenotiazin-10-il)etanona (1,0 g, 2,60 mmoles), metanol (10 cm3) y ácido bromhídrico (48%, 2,94 cm3) y la disolución se calentó a 80°C durante 1 hora. Una vez enfriada hasta 5°C, a la mezcla se añadió éter dietílico, dando una disolución turbia. La disolución se agitó durante 30 minutos y dio el compuesto del título (0,83 g, 63%) como un sólido de
20 color amarillo claro. δH (250 MHz; D2O) 7,05 (4H, a, ArH), 6,79 (2H, d a, ArH), 3,43 (8H, a, NCH2), 1,05 (12H, t a, CH3); δC (62,9 MHz; D2O) 12,3 (CH3 ), 56,2 (NCH2), 117,9 (ArC), 121,4 (ArC), 122,4 (ArC), 124,5 (ArC), 133,5 (ArC), 145,1 (ArC). Estudios de estabilidad [0293] Los compuestos de DAPTZ de la presente invención están establemente
25 reducidos (es decir, están en forma establemente reducida). Por ejemplo, son estables en forma sólida, por ejemplo, durante al menos 1 semana, por ejemplo, al menos 2 semanas, por ejemplo, al menos 1 mes, por ejemplo, al menos 2 meses, por ejemplo, al menos 1 año (por ejemplo, a temperatura ambiente, por ejemplo, 18-25°C, por ejemplo, en un recipiente cerrado).
30 [0294] Se encontró que una muestra del compuesto B3 (bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina) en forma sólida estaba sustancialmente reducida incluso después de 2 años en almacenamiento. [0295] Una vez los compuestos de DAPTZ se disuelven en agua (es decir, en forma de una disolución acuosa), se oxidan lentamente (dando la disolución un color azul), normalmente durante un periodo de 1 a 3 horas. [0296] Se estudió la estabilidad de dos compuestos de DAPTZ de la presente invención, específicamente B3 (bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil10H-fenotiazina-3,7-diamina) y B6 (bis(yoduro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil10H-fenotiazina-3,7-diamina). MTC se usó como patrón. [0297] Los compuestos se pesaron en recipientes universales. Se añadió suficiente agua dando una disolución 1 mM, y la mezcla se agitó para disolver el sólido. La absorbancia se determinó a 610 nm y 665 nm para muestras de 50 μl (por triplicado) de cada una de las disoluciones a diversos momentos. El momento de tiempo inicial considerado fue 10 minutos ya que los compuestos necesitaron tiempo para disolverse completamente. También se registró un espectro de UV/visible en los momentos de tiempo 20 minutos, 3 horas y 18 horas. [0298] La forma reducida en porcentaje (%) se calculó asumiendo que la lectura de 10 minutos para MTC representó el 0% reducido, y que un blanco representó el 100% reducido (incoloro).
La Figura 1 es una gráfica de la forma reducida en porcentaje (%) frente al tiempo (minutos) para cada uno de los tres compuestos, B1, B3 y B6, como se determina usando absorbancia a 665 nm. La Figura 2 es una gráfica de la forma reducida en porcentaje (%) frente al tiempo (minutos) para cada uno de los tres compuestos, B1, B3 y B6, como se determina usando absorbancia a 610 nm. Las Figuras 3A, 3B y 3C muestran los espectros de absorción UV/visible para muestras acuosas de cada uno de los tres compuestos, B1 (círculos abiertos), B3 (cuadrados abiertos) y B6 (triángulos abiertos), después de 20 minutos (Figura 3A), 3 horas (Figura 3B) y 18 horas (Figura 3C).
[0299] Estos datos demuestran que los compuestos de DAPTZ (formas reducidas estabilizadas) permanecen sustancialmente estables (>50%) durante al menos 1 hora, y que el compuesto B6 permanece sustancialmente estable (>50%) durante casi 3 horas. Sin embargo, después de aproximadamente 18 horas, los compuestos no son significativamente diferentes de MTC. Véase, por ejemplo, la Figura 3C, en la que los espectros son casi indistinguibles.
[0300] Adicionalmente, se encontró que la tasa de autoxidación era más lenta para el compuesto de "yoduro" (Compuesto B6) con respecto al compuesto de "cloruro" (Compuesto B3), sugiriendo que la tasa de autoxidación depende del contraión. Aunque la diferencia en la tasa era pequeña, puede ser significativa en la formulación de fármacos. Otras sales pueden ser más estables a la oxidación. [0301] Un lote de bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10Hfenotiazina-3,7-diamina se preparó el abril de 2006 y se analizó por RMN. Después de 10 meses de almacenamiento en la oscuridad a temperatura ambiente, el material sólido se analizó una vez más y se encontró que los datos de RMN eran idénticos. El color del sólido permaneció invariable con el tiempo. Parece que la molécula, en esta forma, es estable bajo estas condiciones durante este periodo de tiempo.
Estudios biológicos Procedimientos: Ensayo in vitro para establecer B50
[0302] Estos procedimientos se describen en detalle en el documento WO 96/30766. Brevemente, un fragmento de tau correspondiente al dominio de repetición del núcleo, que había sido adsorbido a un sustrato de fase sólida, puede capturar tau de longitud completa soluble y unirse a tau con alta afinidad. Esta asociación confiere estabilidad contra la digestión proteolítica de las moléculas tau agregadas. El procedimiento es autopropagante y puede bloquearse selectivamente por agentes farmacéuticos prototipo. [0303] Más específicamente, tau truncada (residuos 297-390; dGA) diluida en tampón carbonato (pH 9,6) se unió a la placa de ensayo y la tau de longitud completa (T40) se añadió en la fase acuosa. El tampón de unión a fase acuosa contuvo Tween-20 al 0,05% y gelatina al 1% en solución salina tamponada con fosfato (pH 7,4). La tau unida se detectó usando mAb 499 que reconoce un epítope del extremo N dentro de la tau de longitud completa en la fase acuosa, pero que fracasa al reconocer el fragmento de tau truncado unido a la fase sólida. [0304] La concentración de compuesto requerida para inhibir la unión tau-tau al 50% se denomina en lo sucesivo el valor B50.
Procedimientos: Ensayo basado en células para establecer CE50
[0305] Estos procedimientos se describen en más detalle en el documento WO 02/055720. Brevemente, células de fibroblasto (3T6) expresan tau de longitud completa ("T40") bajo el control de un promotor inducible, y bajos niveles constitutivos del fragmento de tau del núcleo de PHF (fragmento de 12 kD). Si se induce la expresión de T40, experimenta una truncación dependiente de la agregación
dentro de la célula, en el extremo N a aa 295 y en el extremo C a aa 390, produciéndose así mayores niveles del fragmento del dominio de núcleo de PHF de 12 kD. La producción del fragmento de 12 kD puede bloquearse de un modo dependiente de la dosis por inhibidores de la agregación de tau. De hecho, la cuantificación de la 5 actividad inhibitoria de compuestos con respecto a la generación proteolítica del fragmento de 12 kD dentro de células puede describirse completamente en términos de los mismos parámetros que describen la inhibición de la unión tau-tau in vitro. Es decir, el grado de generación proteolítica del fragmento de 12 kD dentro de las células se determina completamente por el grado de la unión tau-tau por el dominio de
10 repetición. La disponibilidad de las proteasas relevantes dentro de la célula es no limitante. [0306] Los resultados se expresan como la concentración a la que hay un 50% de inhibición de la generación del fragmento de 12 kD. Esto se denomina en lo sucesivo el valor CE50.
15 Procedimientos: Toxicidad en células (LD50) e índice terapéutico (Rxl)
[0307] La toxicidad de los compuestos descritos en este documento se evaluó en el ensayo basado en células usado para evaluar CE50. La toxicidad se midió por números de células determinados después de 24 horas de exposición al compuesto usando un kit de ensayo de lactato deshidrogenasa TOX-7 (Sigma Biosciences) según
20 las instrucciones del fabricante después de la lisis de las células restantes. Alternativamente se usó un kit de Promega UK (CytoTox 96), de nuevo según las instrucciones del fabricante. [0308] El índice terapéutico (Rxl) se calculó como: Rxl = LD50 / CE50. [0309] Los datos se resumen en la siguiente tabla.
Datos biológicos
Compuesto
B50 CE50 LD50 Rxl
B3
57,3 0,50 44,0 88
B4
23,5 2,23 - -
B6
494 0,38 115 303
MTC
218 0,59 65,0 110
B3: Bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7diamina. B4: Bis(cloruro de hidrógeno) de 10H-fenotiazina-3,7-diamina. B6: Bis(yoduro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7
diamina. MTC: Cloruro de metiltioninio.
Estudios del coeficiente de reparto
[0310] Es muy conocido que el coeficiente de reparto para un fármaco en una sistema de fase orgánica/agua (normalmente un sistema de n-octanol/agua), normalmente referido como el logaritmo (es decir, log10P), es un buen indicador de la 5 actividad biológica de ese fármaco. Véanse, por ejemplo, Hansch, C., y col., 1964, J. Am. Chem. Soc., vol. 86, pág. 1616-1626; Kubinyi, H., 1977, J. Med. Chem., vol. 20, pág. 625-629. Se cree que esto es porque la absorción de un compuesto depende de su reparto entre la membrana biológica y la fase acuosa. Los coeficientes de reparto también son útiles en técnicas de separación y en la predicción de la solubilidad de
10 fármacos. [0311] En el contexto de sustancias similares a fármacos, la hidrofobia está relacionada con la absorción, biodisponibilidad, interacciones hidrófobas fármaco-receptor, metabolismo y toxicidad. [0312] Bajas hidrofilias y, por tanto, altos valores de log10P, pueden producir una
15 pobre absorción o permeación. Se ha mostrado que para que los compuestos tengan una razonable probabilidad de ser bien absorbidos, su valor de log10P no debe ser superior a 5,0. La distribución de valores de log10P calculados de más de 3000 fármacos en el mercado hace hincapié en este hecho. [0313] Se conocen muchos procedimientos para determinar los coeficientes de
20 reparto. En este estudio, disoluciones acuosas de compuestos seleccionados se agitaron con n-octanol y las concentraciones de alícuotas en cada fase se determinaron por espectrofotometría visible. Entonces, el log10P se calculó para cada compuesto usando la siguiente fórmula:
log10P = log10[Fármaco]octanol – log10[Fármaco]agua = log10 ([Fármaco]octanol /
25 log10[Fármaco]agua) [0314] Los datos se resumen en la siguiente tabla. Se encontró que los compuestos de DAPTZ de la presente invención tenían valores de log10P esperados para moléculas similares a fármacos.
Datos de coeficientes de reparto
Compuesto
λmáx (octanol / agua) Absorbancia para la fase de noctanol Absorbancia para la fase de agua log10P
MTC
665 / 660 0,217 4,83 -1,35
B3
664 / 660 0,083 0,111 -0,13
B6
658,4 / 662,4 0,179 0,563 -0,498
B3: Bis(cloruro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina. B6: Bis(yoduro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina. MTC: Cloruro de metiltioninio.
Estructura cristalina
[0315] La Figura 4 muestra la estructura cristalina de bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina. La estructura cristalina muestra
5 tres iones bromuro cristalográficamente distintos. Br1 y Br2 ocupan posiciones especiales con simetría duplicada, mientras que la molécula principal orgánica y Br3 ocupan posiciones generales. Por tanto, la estequiometría global es C16H21N3SBr2. [0316] La Figura 5 muestra la vista de perfil de bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina y revela la no planitud; el ángulo
10 diédrico entre los anillos de benceno externos es 11,0 (3) grados. [0317] La Figura 6 muestra parte de una columna helicoidal de moléculas de bis(bromuro de hidrógeno) de N,N,N',N'-tetrametil-10H-fenotiazina-3,7-diamina en el cristal.
REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN
Esta lista de referencias citadas por el solicitante está prevista únicamente para ayudar al lector y no forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha puesto el máximo cuidado en su realización, no se pueden excluir errores u omisiones y la OEP declina cualquier responsabilidad al respecto.
Documentos de patente citados en la descripción
•
US 60786690 B [0001]
•
WO 9630766 A [0007] [0304]
•
WO 02055720 A [0007] [0174] [0307]
•
US 60786700 B [0174]
•
WO 02075318 A [0202]
•
WO 2005030676 A [0202]
Documentos no procedentes de patentes citados en la descripción
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Claims (36)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto seleccionado de compuestos de la siguiente fórmula y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos:
    imagen1
    en la que: cada uno de R1 y R9 se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de R3NA y R3NB se selecciona independientemente de: -H, alquilo
    10 C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de R7NA y R7NB se selecciona independientemente de: -H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 y alquilo C1-4 halogenado; cada uno de HX1 y HX2 es independientemente un ácido prótico.
    15 2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que cada uno de R1 y R9 es independientemente -H, -Me o -Et.
  2. 3. Un compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que R1 y R9 son iguales.
    20
  3. 4.
    Un compuesto según la reivindicación 1, en el que cada uno de R1 y R9 es independientemente -H.
  4. 5.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que
    25 cada uno de R3NA y R3NB y cada uno de R7NA y R7NB es independientemente -Me, -Et, nPr, -nBu, -CH2-CH=CH2 o -CF3.
  5. 6.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R3NA y R3NB son iguales y/o R7NA y R7NB son iguales.
  6. 7.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, con la
    condición de que: al menos uno de R3NA y R3NB y R7NA y R7NB sea distinto de -Et.
  7. 8.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, con la
    condición de que: si: cada uno de R1 y R9 es -H; entonces: R3NA y R3NB y R7NA y R7NB no son cada uno -Et.
  8. 9.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) se selecciona independientemente de: -NMe2, -NEt2, -N(nPr)2, -N(Bu)2, -NMeEt, -NMe(nPr) y N(CH2CH=CH2)2.
  9. 10.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) son iguales y se seleccionan de: -NMe2 y -NEt2.
  10. 11.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, 8 y 9, en el que los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) son iguales.
  11. 12.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 8 a 9, con la condición de que: cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7HB) sea distinto de -NEt2.
  12. 13.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 8 a 9, en el que los grupos -N(R3NA)(R3NB) y -N(R7NA)(R7NB) son iguales y se seleccionan de: -NMe2, -N(nPr)2, -N(Bu)2, -NMeEt, -NMe(nPr) y -N(CH2CH=CH2)2.
  13. 14.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que cada uno de los grupos -N(R3NA)(R3AB) y -N(R7NA)(R7NB) es: -NMe2.
  14. 15.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que cada uno de HX1 y HX2 es independientemente un ácido monoprótico.
  15. 16.
    Un compuesto según la reivindicación 15, en el que cada uno de HX1 y HX2 es independientemente un hidrácido.
    5 17. Un compuesto según la reivindicación 16, en el que HX1 y HX2 son cada uno HCl.
  16. 18.
    Un compuesto según la reivindicación 16, en el que HX1 y HX2 son cada uno HBr.
  17. 19.
    Un compuesto según la reivindicación 1 seleccionado de compuestos de la siguiente fórmula, y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos:
  18. 20.
    Un compuesto según la reivindicación 1 seleccionado de compuestos de la siguiente fórmula, y sales, solvatos e hidratos farmacéuticamente aceptables de los mismos:
  19. 21.
    Un compuesto según la reivindicación 1, de la siguiente fórmula:
  20. 22.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21 en forma sustancialmente purificada.
  21. 23.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, en el que uno o más de los átomos de carbono del compuesto es 11C.
  22. 24.
    Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
  23. 25.
    Un procedimiento de preparación de una composición farmacéutica que comprende mezclar un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
  24. 26.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 para uso en un procedimiento de tratamiento o profilaxis del cuerpo humano o animal por terapia.
  25. 27.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 para uso en un procedimiento de tratamiento o profilaxis de una enfermedad de agregación de proteínas.
  26. 28.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 para uso en un procedimiento de tratamiento o profilaxis de una tauopatía.
  27. 29.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 para uso en un procedimiento de tratamiento o profilaxis de una tauopatía neurodegenerativa.
  28. 30.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 para uso en un procedimiento de tratamiento o profilaxis de enfermedad de Alzheimer.
  29. 31.
    Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 para uso en un procedimiento de tratamiento o profilaxis de: cáncer de piel o melanoma; un estado de enfermedad bacteriana o protozoica; un estado de enfermedad vírica que puede ser opcionalmente: hepatitis C, VIH o virus del Nilo Occidental; malaria.
  30. 32.
    Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad de agregación de proteínas.
  31. 33.
    Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento o la profilaxis de una tauopatía.
  32. 34.
    Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento o la profilaxis de una tauopatía neurodegenerativa.
  33. 35.
    Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento o la profilaxis de enfermedad de Alzheimer.
  34. 36.
    Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 en la preparación de un medicamento para uso en el tratamiento o la profilaxis de cáncer de piel o melanoma; un estado de enfermedad bacteriana o protozoica; un estado de enfermedad vírica que puede opcionalmente ser: hepatitis C, VIH o virus del Nilo Occidental; malaria.
  35. 37.
    Un procedimiento para invertir y/o inhibir la agregación de una proteína que comprende poner en contacto la proteína in vitro con una cantidad eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22.
  36. 38.
    Un procedimiento para inactivar un patógeno en una muestra que
    10
    imagen2
    15
    imagen2
    imagen2
    comprende las etapas de introducir un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22 en la muestra, y luego exponer la muestra a la luz.
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